CN117990869A - 一种盐酸莫西沙星注射剂细菌内毒素检查方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种盐酸莫西沙星注射剂细菌内毒素检查方法，该方法通过确定细菌内毒素限制，进行干扰试验，确定供试品用细菌内毒素检查用水稀释后的浓度下无干扰作用，盐酸莫西沙星注射剂对不同厂家生产的鲎试剂均不存在干扰作用，可以使用本发明的细菌内毒素检查法对盐酸莫西沙星注射剂进行日常检验及质量控制。
Description
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种盐酸莫西沙星注射剂细菌内毒素检查方法。
背景技术
细菌内毒素是革兰氏隐形细菌所产生的具有各种生物活性的大分子物质，其主要成分是脂多糖，具很强的热原活性，当细菌内毒素通过消化道进入人体时并不产生危害，但内毒素通过注射等方式进入血液时，则可导致不同程度的内毒素血症，因此，对于注射剂及其生产中所用的原辅料都应进行细菌内毒素的控制，，。
细菌内毒素的检测常用方法是家兔热原法和鲎试剂法，目前运用较多的是鲎试剂法，鲎试剂法是利用鲎试剂与内毒素发生凝集反应的机理，以定性或定量检测药品或机体血液中的感染细菌内毒素的一种体外检测方法，采用该方法进行细菌内毒素检测之前，须进行干扰实验，排除供试品对鲎试剂实验的干扰，确保该方法的准确度。
盐酸莫西沙星注射剂是第四代喹诺酮类抗菌药，莫西沙星在体外显示出对革兰阳性菌、革兰阴性菌、厌氧菌、抗酸菌和非典型微生物如支原体、衣原体和军
团菌有广谱抗菌活性,为了保证患者注射药物后不会导致发热等不良反应，需对盐酸莫西沙星注射剂中细菌内毒素含量进行严格的控制，以保证产品安全性。
本发明公开了采用鲎试剂法检查盐酸莫西沙星注射剂细菌内毒素的方法，对盐酸莫西沙星注射剂的细菌内毒素检查进行了研究，为盐酸莫西沙星注射剂的质量控制提供方法学依据。
发明内容
本发明提供一种采用鲎试剂法测定盐酸莫西沙星注射剂中细菌内毒素的检查方法，该方法通过确定细菌内毒素限制，进行干扰试验，确定供试品用细菌内毒素检查用水稀释后的浓度下无干扰作用，盐酸莫西沙星注射剂对不同厂家生产的鲎试剂均不存在干扰作用，可以使用本发明的细菌内毒素检查法对盐酸莫西沙星注射剂进行日常检验及质量控制。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种盐酸莫西沙星注射剂细菌内毒素检查方法，所述检查方法包括以下步骤：
(1)鲎试剂灵敏度复核，确保鲎试剂灵敏度结果在0.25λ～2.0λ之间；
(2)确定细菌内毒素限值：每1mg盐酸莫西沙星中含内毒素的量应小于0.6EU；
(3)进行干扰实验：取灵敏度λ为0.03EU/ml的鲎试剂进行干扰试验；
(4)盐酸莫西沙星注射剂细菌内毒素检查：将盐酸莫西沙星注射剂配置成供试品溶液，根据鲎试剂的灵敏度值，将细菌内毒素国家标准品或工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，分别用细菌内毒素检查用水和供试品溶液制成2λ的内毒素标准溶液和供试品阳性对照溶液，将试管中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37±1℃适宜恒温器中，保温60±2分钟，将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180°时，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性；形成的凝胶不坚实、变形或从管壁滑脱者为阴性。
进一步的，所述步骤(3)的具体方法为：将盐酸莫西沙星注射剂配置成供试品溶液，根据鲎试剂的灵敏度值，将细菌内毒素国家标准品或工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，分别用细菌内毒素检查用水和供试品溶液分别制成2λ、λ、0.5λ、0.25λ系列浓度的内毒素标准溶液和供试品阳性对照溶液，细菌内毒素标准溶液每一浓度做2管，供试品阳性对照溶液每一浓度做4管，取两个不同厂家生产的相同灵敏度的鲎试剂进行3次独立的平行试验。
进一步的，所述步骤(3) 和(4)中，供试品溶液的配制方法为：取盐酸莫西沙星10mg，加入1ml细菌内毒素检查用水溶解，然后用细菌内毒素检查用水稀释80倍后，既得供试品溶液。
本发明公开了盐酸莫西沙星注射剂中细菌内毒素的检查方法，可以使用本发明的细菌内毒素检查法对盐酸莫西沙星注射剂进行日常检验及质量控制，以确保产品质量，保障用药安全。
具体实施方式
以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。
实施例1：
（1）试验所用仪器及设备：电热恒温水浴锅、旋涡混合器、数显电热鼓风干燥箱、电子分析天平、数字移液器
（2）试验用试剂
鲎试剂: 灵敏度λ为0.03EU/ml，规格: 0.1ml/支，湛江安度斯生物有限公司；灵敏度λ为0.03EU/ml，规格: 0.1ml/支，湛江博康海洋生物有限公司；
细菌内毒素检查用水：规格: 5ml/支，湛江安度斯生物有限公司；
细菌内毒素工作标准品：效价: 80EU/支，中国食品药品检定研究院；
（3）干扰试验
本验证试验取两个不同厂家生产的相同灵敏度的鲎试剂进行3次独立的平行试验。
细菌内毒素限值：每1mg盐酸莫西沙星中含内毒素的量应小于0.6EU。
干扰试验用溶液的制备：取盐酸莫西沙星10mg，加入1ml细菌内毒素检查用水溶解，然后用细菌内毒素检查用水稀释80倍后，作为供试品溶液，取灵敏度λ为0.03EU/ml的鲎试剂进行试验。
根据鲎试剂的灵敏度值，将细菌内毒素国家标准品或工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，分别用细菌内毒素检查用水和供试品溶液分别制成2λ、λ、0.5λ、0.25λ系列浓度的内毒素标准溶液和供试品阳性对照溶液（每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30秒钟）。按下表制备试验溶液。
注：A为供试品溶液；B为干扰试验系列；C为鲎试剂标示灵敏度的对照系列；D为阴性对照
干扰试验结果：
本试验详细的试验结果见下表。由试验结果可知，Et在0.5λ-2λ(包括0.5λ和2λ)及Et在0.5Es-2 Es(包括0.5 Es和2Es)范围内，干扰试验通过，即供试品用细菌内毒素检查用水稀释80倍的浓度下无干扰作用。
实施例2：样品检测
取盐酸莫西沙星10mg，加入1ml细菌内毒素检查用水溶解，然后用细菌内毒素检查用水稀释80倍后，作为供试品溶液，取灵敏度λ为0.03EU/ml的鲎试剂进行试验。
根据鲎试剂的灵敏度值，将细菌内毒素国家标准品或工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，分别用细菌内毒素检查用水和供试品溶液制成2λ的内毒素标准溶液和供试品阳性对照溶液（每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30秒钟）。按下表制备试验溶液。
注：A为供试品溶液；B为供试品阳性对照；C为阳性对照；D为阴性对照
供试品溶液为日常细菌内毒素检查的供试溶液
将试管中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37℃±1℃适宜恒温器中，保温60分钟±2分钟。将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180°时，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性；形成的凝胶不坚实、变形或从管壁滑脱者为阴性。保温和拿取试管过程应避免受到振动造成假阴性结果。
Claims (3)
1.一种盐酸莫西沙星注射剂细菌内毒素检查方法，其特征在于，所述检查方法包括以下步骤：
(1)鲎试剂灵敏度复核，确保鲎试剂灵敏度结果在0.25λ～2.0λ之间；
(2)确定细菌内毒素限值：每1mg盐酸莫西沙星中含内毒素的量应小于0.6EU；
(3)进行干扰实验：取灵敏度λ为0.03EU/ml的鲎试剂进行干扰试验；
(4)盐酸莫西沙星注射剂细菌内毒素检查：将盐酸莫西沙星注射剂配置成供试品溶液，根据鲎试剂的灵敏度值，将细菌内毒素国家标准品或工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，分别用细菌内毒素检查用水和供试品溶液制成2λ的内毒素标准溶液和供试品阳性对照溶液，将试管中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37±1℃适宜恒温器中，保温60±2分钟，将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180°时，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性；形成的凝胶不坚实、变形或从管壁滑脱者为阴性。
2.根据权利要求1所述的盐酸莫西沙星注射剂细菌内毒素的检查方法，其特征在于，所述步骤(3)的具体方法为：将盐酸莫西沙星注射剂配置成供试品溶液，根据鲎试剂的灵敏度值，将细菌内毒素国家标准品或工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟，分别用细菌内毒素检查用水和供试品溶液分别制成2λ、λ、0.5λ、0.25λ系列浓度的内毒素标准溶液和供试品阳性对照溶液，细菌内毒素标准溶液每一浓度做2管，供试品阳性对照溶液每一浓度做4管，取两个不同厂家生产的相同灵敏度的鲎试剂进行3次独立的平行试验。
3.根据权利要求2所述的盐酸莫西沙星注射剂细菌内毒素的检查方法，其特征在于，所述步骤(3) 和(4)中，供试品溶液的配制方法为：取盐酸莫西沙星10mg，加入1ml细菌内毒素检查用水溶解，然后用细菌内毒素检查用水稀释80倍后，既得供试品溶液。
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