CN105385749B - 检测样品中霉菌和酵母菌含量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提出了一种检测样品中霉菌和酵母菌含量的方法，所述样品为胶类或果酱类物质。本发明所提出的检测样品中霉菌和酵母菌含量的方法中，利用均质袋实现了培养基与样品的均匀混合，扩大了培养面积有利于菌落观察与计数。通过本发明所提出的检测样品中霉菌和酵母菌含量的方法，能够检测到溶解后集结成块的样品中的霉菌和酵母菌的含量，显著提高了样品中霉菌和酵母菌的检出率，提高了检测结果的准确性降低了质量安全风险。

Description

检测样品中霉菌和酵母菌含量的方法

技术领域

本发明涉及食品领域，具体地，本发明涉及一种检测样品中霉菌和酵母菌含量的方法。

背景技术

应用GB4789.15-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验霉菌和酵母菌计数》规定的方法检测胶类或果酱类原料中霉菌和酵母菌的含量，检测过程中样品会聚集成块，无法检测到样品中的霉菌和酵母菌的含量。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明提出了一种能够检测到溶解后集结成块的样品中的霉菌和酵母菌的含量，能够提高样品中霉菌和酵母菌的检出率。

在本发明的第一方面，本发明提出了一种检测样品中霉菌和酵母菌含量的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：

(1)将25g待测样品置于225ml生理盐水中，所述生理盐水预先盛装在第一无菌均质袋中，并将所述待测样品在转速为10000r/min的条件下进行第一均质处理1分钟；(2)将取步骤(1)所得第一均质处理后样品10g置于第二无菌均质袋中，并向第二无菌均质袋中加入15ml孟加拉红培养基，并对所述第一均质处理后样品在转速为8000r/min的条件下进行第二均质处理1分钟；以及(3)将步骤(2)所得的第二均质处理后样品进行刮涂处理,并在27～29摄氏度下培养5天，以便对所述待测样品中霉菌和酵母菌的含量进行测定，其中，所述样品为胶类或果酱类物质。根据本发明的实施例，上述检测样品中霉菌和酵母菌含量的方法中，利用均质袋实现了培养基与样品的均匀混合，扩大了培养面积有利于菌落观察与计数。通过上述检测样品中霉菌和酵母菌含量的方法，能够检测到溶解后集结成块的样品中的霉菌和酵母菌的含量，显著提高了样品中霉菌和酵母菌的检出率，提高了检测结果的准确性降低了质量安全风险。

在本发明的第二方面，本发明提出了一种检测样品中霉菌和酵母菌含量的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：(1)将待测样品置于生理盐水中，所述生理盐水预先盛装在第一无菌均质袋中，并将所述待测样品进行第一均质处理；(2)将步骤(1)所得第一均质处理后样品置于第二无菌均质袋中，并向第二无菌均质袋中加入孟加拉红培养基，并对所述第一均质处理后样品进行第二均质处理；以及(3)将步骤(2)所得的第二均质处理后样品进行刮涂处理和培养，以便对所述待测样品中霉菌和酵母菌的含量进行测定。根据本发明的实施例，在步骤(3)中的刮涂处理是指利用载玻片将样品刮匀并使样品均匀充满整个均质袋。根据本发明的实施例，上述检测样品中霉菌和酵母菌含量的方法中，利用均质袋实现了培养基与样品的均匀混合，扩大了培养面积有利于菌落观察与计数；同时上述方法能够检测到溶解后集结成块的样品中的霉菌和酵母菌的含量，显著提高了样品中霉菌和酵母菌的检出率提高了检测结果的准确性降低了质量安全风险。

根据本发明的实施例，上述检测样品中霉菌和酵母菌含量的方法还可以进一步包括如下附加技术特征之一：

根据本发明的实施例，所述样品为胶类或果酱类物质。根据本发明的实施例，上述方法能够检测到溶解后集结成块的胶类或果酱类物质中的霉菌和酵母菌的含量，显著提高了胶类或果酱类物质中霉菌和酵母菌的检出率。

根据本发明的实施例，在步骤(1)中，所述第一均质处理是在转速为1000r/min的条件下进行1～2min，所述待测样品在所述生理盐水中的含量为10重量％；在步骤(2)中，所述第二均质处理是在转速为8000r/min的条件下进行1min，所述步骤(1)所得第一均质处理后样品与所述孟加拉红培养基的用量比是10g:15ml。在上述均质处理、用量的条件下，胶类或果酱类物质中霉菌和酵母菌的检出率进一步提高。

根据本发明的实施例，步骤(3)包括：将刮涂处理后的样品在27～29摄氏度下培养5天，以便对所述待测样品中霉菌和酵母菌的含量进行测定。根据本发明的实施例，在27摄氏度下培养5天后，单菌落形态变大，形态分明，以方便本领域技术人员对菌落进行计数。在步骤(2)中，本领域技术人员可将步骤(1)中所得的第二均质处理后样品，取相同量的样品至于2个均质袋中，继而在步骤(3)中，对菌落进行计数则可计算2个均质袋中菌落的平均数，计数结果更加接近实际值，准确度更高。

需要说明的是，本发明的技术方案是发明人通过大量的筛选试验而获得的，发明人曾经尝试过其他的检测方案，并未获得有效的检测结果。例如，发明人采用过下列检测步骤：(1)将待测胶类或果酱类物质用生理盐水梯度稀释100倍，得到稀释液；(2)取稀释液与培养基在均质袋中混合，并静置培养，通过计数菌落数以确定待测胶类或果酱类物质中霉菌和酵母菌的含量。将待测胶类或果酱类物质稀释100倍得到的稀释液与培养基混合静置时，由于胶类或果酱类物质中霉菌和酵母菌的含量较少，容易导致每次吸取的稀释液中菌数不同，造成误差。另外，还将使检测限升高。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1

检测胶类或果酱类物质中霉菌和酵母菌的含量的仪器、材料和操作方法如下所述：

1、实验仪器

恒温培养箱：28℃±1℃；

冰箱：2℃～5℃；

天平：感量为0.1g；

均质器。

2、实验试剂与材料

无菌吸管：1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头；

无菌锥形瓶：容量250mL、500mL；

无菌均质：直径90mm pH计或pH比色管或精密pH试纸；

无菌均质袋：32cm*24cm；

载玻片。

3、培养基的配制

称取孟加拉红培养基36.6g于1000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121℃高压灭菌15分钟备用。

4、操作过程

(1)称取25g样品置盛有225mL无菌水的无菌均质袋中，10000r/min均质1min制成1：10的均匀样品(稀释液)；

(2)称取10g上述1:10的均匀样品(稀释液)置于无菌均质袋中,加入15ml孟加拉红培养基，在均质机上8000r/min均质1min，然后用载玻片将其刮匀并充满整个均质袋中；

(3)将步骤(2)所得到的含有培养基的无菌均质袋置于28℃±1℃培养5d。

对比例1

检测胶类或果酱类物质中霉菌和酵母菌的含量的仪器、材料和操作方法如下所述：

1、实验仪器

恒温培养箱：28℃±1℃；

冰箱：2℃～5℃；

天平：感量为0.1g；

均质器。

2、实验试剂与材料

无菌吸管：1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头；

无菌锥形瓶：容量250mL、500mL；

无菌平皿：直径90mm pH计或pH比色管或精密pH试纸。

3、培养基的配制

称取孟加拉红培养基36.6g于1000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121℃高压灭菌15分钟备用。

4、操作过程

按照实施例1的方法检测样品中菌体含量，区别在于，

在步骤(2)中：称取10克稀释液置于无菌平皿内，然后及时将15mL～20mL冷却至46℃左右的孟加拉红培养基倾注平皿，摇匀；

在步骤(3)中，将步骤(2)所得到的含有培养基的平皿置于28℃±1℃培养5d。

实施例2

在该实施例中对实施例1和对比例1进行菌落计数和报告。

表1给出了实施例1和对比例1的方法检出的菌落数。结果发现，对比例1的方法不能完全检出所有菌体，原因主要是待检测胶类或果酱物质类与培养基在平皿中混合不均匀，待检测胶类或果酱物质聚集成大量块状物，其中的菌体无法接触培养基，以致无法生长，导致不能检出。实施例1的方法能够充分检出待检测胶类或果酱物质中菌体。

实施例1与对比例1的检测结果如表1所示，

表1：实施例1和对比例1的菌落总数

综合表1结果可以看出，本发明所提出的方法，能够检测到溶解后集结成块的样品中的霉菌和酵母菌的含量，样品中霉菌和酵母菌的检出率显著提高，是满足原料质量标准要求的检测方法。

对比例2

按照实施例1的方法检测待测胶类或果酱物质中霉菌和酵母菌的含量，区别在于，

步骤(1)进一步包括：取1毫升1:10的稀释液置于盛有10mL生理盐水中的无菌均质袋中，10000r/min均质2min，制成1：100的稀释液，

步骤(2)称取1:100的稀释液进行试验。

实施例3

每个待测样品分别独立地按照实施例1和对比例2的方法进行10次，测定其霉菌和酵母菌含量。结果发现，按照实施例1的方法进行检测时，各次得到的结果之间的相对偏差较小，而按照对比例2的方法进行检测时，各次得到的结果之间偏差较大，准确性较差。

实施例4

在该实施例中，按照下列步骤分别测定实施例1和对比例1方法的检出率

(1)通过向无菌样品中添加已知菌落数的目标菌，得到待测样；

(2)分别按照实施例1和对比例1的方法测定待测样的菌落数；以及

(3)分别计算实施例1和对比例1方法的检出率，其中检出率(％)＝(待测样检测出的菌落数/已知目标菌的菌落数)×100％。

表2给出了实施例1和对比例1的方法的检出率

表2

由表2可以看出本发明实施例提出的方法检出率较高，可以用于样品中的霉菌和酵母菌菌落数的更加准确地检测。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (1)

1.一种检测样品中霉菌和酵母菌含量的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)将25g待测样品置于225ml生理盐水中，所述生理盐水预先盛装在第一无菌均质袋中，并将所述待测样品在转速为10000r/min的条件下进行第一均质处理1分钟；

(2)取步骤(1)所得第一均质处理后样品10g置于第二无菌均质袋中，并向第二无菌均质袋中加入15ml孟加拉红培养基，并对所述第一均质处理后样品在转速为8000r/min的条件下进行第二均质处理1分钟；以及

(3)将步骤(2)所得的第二均质处理后样品进行刮涂处理， 并在27～29摄氏度下培养5天，以便对所述待测样品中霉菌和酵母菌的含量进行测定，

其中，所述样品为胶类或果酱类物质。