CN105779564A - 一种食品中大肠杆菌的快速检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种食品中大肠杆菌的快速检测方法，包括：处理待检测食品、稀释样品液、培养、染色等步骤，本发明检测方法适用于食品中大肠杆菌的快速检测，本方法通过特制的培养基，使食品中其他的细菌如金黄色葡萄球菌，沙门氏菌，无乳链球菌，单增李斯特氏菌等无法在培养基中生存，大肠杆菌通过革兰氏染色判断是否存在，本方法方便、快捷、成本低、灵敏度高、实用，能够专一性的应用到食品中大肠杆菌的检测。

Description

一种食品中大肠杆菌的快速检测方法
技术领域
本发明涉及一种食品中大肠杆菌的快速检测方法,属于生物技术领域。
背景技术
大肠杆菌是水体污染程度的重要指示菌，是肠道中最普遍、数量最多的一类细菌，近年来，由于大肠杆菌引发的食品安全事件层出不穷，每年由大肠杆菌引发的病例多达6.4亿，在我国，大肠杆菌是引起我国居民腹泻的首要病源，环境中的大肠杆菌己经成为人类病原存在的一个重要指标,成为环境保护、食品卫生、饮水卫生和流行性病学领域中最重要的研究对象之一。饮用水或食物中的大肠杆菌可引发霍乱、伤寒、痢疾等肠道疾病。因此快速准确的检测大肠杆菌的数量在环境水质监测与食品安全中有着重大的意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种食品中大肠杆菌的快速检测方法,本发明检测方法适用于食品中大肠杆菌的快速检测，本方法通过特制的培养基，使食品中其他的细菌如金黄色葡萄球菌，沙门氏菌，无乳链球菌，单增李斯特氏菌等无法在培养基中生存，大肠杆菌通过革兰氏染色判断是否存在，本方法方便、快捷、成本低、灵敏度高、实用，能够专一性的应用到食品中大肠杆菌的检测。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种食品中大肠杆菌的快速检测方法，包括：
1)处理待检测食品
如果待检测食品为固体，在无菌条件下，称取食品，研碎，加入生理盐水，充分混匀，10000r/min离心30s，离心后使用0.22μm孔径滤膜过滤，得样品液；
如果待检测食品为液体，在无菌条件下，称取食品，加入生理盐水，充分混匀，10000r/min离心30s，离心后使用0.22μm孔径滤膜过滤，得样品液；
2)稀释样品液
取步骤1)得到的样品液，加入10倍质量的蒸馏水稀释，再倒入无菌试管中，在37℃的培养箱中放置1小时；
3)培养、染色
从无菌试管中吸取1ml样品液加入到1L培养基上，无氧条件下36℃培养8h，将培养基上的菌落进行革兰氏染色，革兰氏染色为阴性，即含有大肠杆菌。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
进一步，在1)中，所述食品与生理盐水的质量比为1:6。
进一步，在3)中，所述培养基由如下原料组成：
乳糖10～26g/L，琼脂15～20g/L，胆盐1～7g/L，氯化钠2～7g/L，亚碲酸钾2.5～7.5g/L,山梨醇10～20g/L，肌醇4～7g/L，
所述培养基由如下方法制备：
按配方量取乳糖、琼脂、牛胆盐、氯化钠、亚碲酸钾、山梨醇和肌醇，加热溶解后，加去离子水定容至1L，混匀，150-250℃灭菌1-5min，即得。
采用上述进一步方案的有益效果是本发明所用培养基为特异性培养基，可抑制样品中部分革兰氏阴性杆菌如大肠菌群以及容易扩散生长的变型杆菌，还可使食品中常见致病菌如金黄色葡萄球菌，沙门氏菌，无乳链球菌，单增李斯特氏菌等都无法在该培养基上生长，能够专一性的应用到食品中大肠杆菌的检测。
进一步，所述胆盐为牛胆盐、猪胆盐、三号胆盐、去氧胆酸钠、混合胆盐中的一种或几种的混合物，优选为牛胆盐。
采用上述进一步方案的有益效果是利用牛胆盐对革兰氏阳性菌具有良好的抑制作用，使培养基的大肠杆菌选择性更好。
本发明的有益效果是：
1)本发明食品样品处理不用多次离心，不用多次膜过滤，只需离心一次，过滤一次，省时省力，就能达到现有技术多次过滤的效果。
2)本发明提供特异性培养基，大肠杆菌在无氧条件下，把乳糖分解成乳酸等酸性物质，抑制除大肠杆菌以外其他细菌的生长。
3)本检测方法灵敏度高，特异性好，直接根据菌落颜色就能判断出是否含有大肠杆菌，检测周期短、可操作性强、适用于处理大通量的样本、易于产业化生产，可对食品中大肠杆菌进行初步鉴定，为微生物快速检测提供了新的途径。
具体实施方式
以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1
1)处理待检测食品
待检测食品为饼干，在无菌条件下，称取食品，研碎，加入生理盐水，所述食品与生理盐水的质量比为1:6，充分混匀，10000r/min离心30s，离心后使用0.22μm孔径滤膜过滤，得样品液；
2)稀释样品液
取步骤1)得到的样品液，加入10倍质量的蒸馏水稀释，再倒入无菌试管中，在37℃的培养箱中放置1小时；
3)培养、染色
从无菌试管中吸取1ml样品液加入到1L培养基上，无氧条件下36℃培养8h，将培养基上的菌落进行革兰氏染色，革兰氏染色为阴性，含有大肠杆菌，其中，所述培养基由如下原料组成：
乳糖26g/L，琼脂20g/L，牛胆盐5g/L，氯化钠6g/L，亚碲酸钾5g/L,山梨醇12g/L，肌醇7g/L，
所述培养基由如下方法制备：
按配方量取乳糖、琼脂、牛胆盐、氯化钠、亚碲酸钾、山梨醇和肌醇，加热溶解后，加去离子水定容至1L，混匀，250℃灭菌5min，即得。
重复3组上述实验，结果相同，均含有大肠杆菌。
采用CN201310122478公开的一种检测食品中大肠杆菌的酶联免疫方法，对本实施例的样品进行检测，检测结果和本方法鉴别结果一致。
实施例2
1)处理待检测食品
待检测食品为饮料，在无菌条件下，称取食品，加入生理盐水，所述食品与生理盐水的质量比为1:6，充分混匀，10000r/min离心30s，离心后使用0.22μm孔径滤膜过滤，得样品液；
2)稀释样品液
取步骤1)得到的样品液，加入10倍质量的蒸馏水稀释，再倒入无菌试管中，在37℃的培养箱中放置1小时；
3)培养、染色
从无菌试管中吸取1ml样品液加入到1L培养基上，无氧条件下36℃培养8h，将培养基上的菌落进行革兰氏染色，革兰氏染色为阴性，含有大肠杆菌，其中，所述培养基由如下原料组成：
乳糖20g/L，琼脂20g/L，牛胆盐6g/L，氯化钠5g/L，亚碲酸钾2.5g/L,山梨醇20g/L，肌醇5g/L，
所述培养基由如下方法制备：
按配方量取乳糖、琼脂、牛胆盐、氯化钠、亚碲酸钾、山梨醇和肌醇，加热溶解后，加去离子水定容至1L，混匀，250℃灭菌5min，即得。
重复3组上述实验，结果相同，均含有大肠杆菌。
采用CN201310122478公开的一种检测食品中大肠杆菌的酶联免疫方法，对本实施例的样品进行检测，检测结果和本方法鉴别结果一致。
上述实施例说明本方法方便、快捷、成本低、灵敏度高、实用，能够专一性的应用到食品中大肠杆菌的检测。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种食品中大肠杆菌的快速检测方法，其特征在于，包括：
1)处理待检测食品
如果待检测食品为固体，在无菌条件下，称取食品，研碎，加入生理盐水，充分混匀，10000r/min离心30s，离心后使用0.22μm孔径滤膜过滤，得样品液；
如果待检测食品为液体，在无菌条件下，称取食品，加入生理盐水，充分混匀，10000r/min离心30s，离心后使用0.22μm孔径滤膜过滤，得样品液；
2)稀释样品液
取步骤1)得到的样品液，加入10倍质量的蒸馏水稀释，再倒入无菌试管中，在37℃的培养箱中放置1小时；
3)培养、染色
从无菌试管中吸取1ml样品液加入到1L培养基上，无氧条件下36℃培养8h，将培养基上的菌落进行革兰氏染色，革兰氏染色为阴性，即含有大肠杆菌。
2.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于，在1)中，所述食品与生理盐水的质量比为1:6。
3.根据权利要求1所述的快速检测方法，其特征在于，在3)中，所述培养基由如下原料组成：
乳糖10～26g/L，琼脂15～20g/L，胆盐1～7g/L，氯化钠2～7g/L，亚碲酸钾2.5～7.5g/L,山梨醇10～20g/L，肌醇4～7g/L，
所述培养基由如下方法制备：
按配方量取乳糖、琼脂、牛胆盐、氯化钠、亚碲酸钾、山梨醇和肌醇，加热溶解后，加去离子水定容至1L，混匀，150-250℃灭菌1-5min，即得。
4.根据权利要求3所述的快速检测方法，其特征在于，所述胆盐为牛胆盐、猪胆盐、三号胆盐、去氧胆酸钠、混合胆盐中的一种或几种的混合物。
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