CN103290094B - 一种金黄色葡萄球菌显色培养基及其测试片 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种金黄色葡萄球菌显色培养基及其测试片，显色培养基含有胰蛋白胨、酵母浸粉、牛肉浸粉、葡萄糖、丙酮酸钠、甘氨酸、氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、抑菌剂混合物和两种特异性酶显色底物。本发明显色培养基及用其制作的测试片，可用于对大通量样本中的金黄色葡萄球菌的快速检测，阳性结果显色明显、检测结果准确、特异性强、灵敏度高、检测周期短、操作简单方便，对检测环境和检测人员的要求不高，在对金黄色葡萄球菌进行定性检测的同时，还可进行定量分析，因此非常适合基层监督部门和企业使用，具有广泛的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于微生物检验及食品安全监测领域，特别涉及一种用于快速检测金黄色葡萄球菌的显色培养基及用显色培养基制作的测试片。
背景技术
金黄色葡萄球菌广泛分布于自然界，是食品卫生质量的重要指标之一，是一种重要的食源性致病菌，其产生的耐热肠毒素可引起食物中毒，由此造成的危害仅次于沙门氏菌和副溶血性弧菌。金黄色葡萄球菌还是人类感染的最常见的致病菌之一，能产生凝固酶等多种致病物质，可引起化脓性炎症、葡萄球菌性肠炎等疾病，近年临床上分离的金黄色葡萄球菌几乎都为难以抑制的耐药株，因此该菌与肝炎、艾滋病一起并称为世界上三大难治传染性顽症。为确保食品安全，保护人民身体健康，世界各国对不同食品中的金黄色葡萄球菌均做出明确规定，我国明确规定食品中不得检出金黄色葡萄球菌。
为有效控制病原的发生和扩散，准确及时的检测手段是预防和控制金黄色葡萄球菌传播的关键。目前国标方法GB4789.10中检测金黄色葡萄球菌需要分离培养、镜检观察、凝固酶试验鉴定确认等多个步骤，试验前期需要做大量的准备工作，试验后也有大量的处理和清洗工作，浪费人力物力，而且检测效率不高，一个样品要3-5d才能出报告，已不能满足食品中病原菌快速检测的现实需要，特别是检测大通量和杂菌污染较为严重的样品时，更为突出。近年来也建立了一些以免疫学和分子生物学为基础的快速检验方法，已在不断得到扩大应用，使金黄色葡萄球菌的快速检测有了很大发展。但这些技术也存在一定的缺陷，如技术要求高，设备操作复杂，需要专业的技术人员进行操作，检测费用高等，一般只是在实验室中应用较多，在食品卫生实际检验工作中应用较少。
目前生物梅里埃等公司已开发出金黄色葡萄球菌显色培养基，市场上还有美国petrifilm测试片法，该测试片内含有经改良的Baird-Parker培养基，对于金黄色葡萄球菌的生长具有很强的选择性，在测试片上显示为暗紫红色菌落。但是如果有其他颜色的菌落出现，则需要用含有显色剂及去氧核糖核酸的确认反应片来辨认，利用金黄色葡萄球菌生长过程中产生的去氧核糖核酸酶与显色底物反应而显色。但这些进口显色培养基和测试片价格昂贵，导致检测成本高，不便在国内一般基层单位和企业推广使用。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中存在的缺陷，提供一种金黄色葡萄球菌显色培养基及其测试片，以达到检测时间短，检测成本低，简单便捷的目的。
本发明所采取的技术方案是：
一种金黄色葡萄球菌显色培养基，每1000ml培养基中含有胰蛋白胨5～50g，酵母浸粉1～25g，牛肉浸粉2～30g，葡萄糖1～25g，丙酮酸钠1～20g，甘氨酸2～30g，氯化钠1～20g，磷酸二氢钾0.05～4g，磷酸氢二钠1～15g，抑菌剂混合物1～10g，特异性酶显色底物0.05～5g。
优选的，每1000ml培养基中含有胰蛋白胨5～25g，酵母浸粉1～12.5g，牛肉浸粉2.5～10g，葡萄糖1.5～9g，丙酮酸钠1～10g，甘氨酸3～15g，氯化钠2.5～10g，磷酸二氢钾0.8～3g，磷酸氢二钠3～10g，抑菌剂混合物1.5～8g，特异性酶显色底物0.05～2.5g。
优选的，所述抑菌剂混合物由叠氮钠、氨曲南、去铁胺、氯化锂组成。
优选的，叠氮钠、氨曲南、去铁胺、氯化锂的质量比为（2～4）：1：（4～8）：（10～15）。
优选的，所述特异性酶显色底物为用于检测金黄色葡萄球菌的β-葡糖苷酶和磷酸酶两种酶活性的底物。
优选的，所述特异性酶显色底物为5-溴-6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯和5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃葡糖苷。
优选的，5-溴-6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯和5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃葡糖苷的质量比为（1～3）：1。
一种金黄色葡萄球菌测试片，其结构由下至上依次为：底片、吸水保湿层、培养基层、盖膜，其特征在于：培养基层上吸附有上述培养基。
优选的，所述培养基层由吸附有培养基的吸水滤纸构成。
优选的，所述吸水保湿层含有瓜尔胶、卡拉胶、琼脂粉、聚丙烯酸树脂、聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠、辛烯酸琥珀酸树脂、海藻酸钠中的一种或者几种组合物。
本发明的有益效果是：
本发明金黄色葡萄球菌显色培养基，能有效抑制杂菌的生长，对金黄色葡萄球菌的选择性强；本发明使用两种不同的酶显色底物，提高了检测的准确度和效率；本发明阳性结果显色明显，检测结果准确。本发明在对金黄色葡萄球菌进行定性检测的同时，还可进行定量分析，金黄色葡萄球菌的定量检测对食品在生产、保存和运输过程的安全性评估和其含有金黄色葡萄球菌耐热肠毒素的风险评估都有非常重要的意义。
本发明用金黄色葡萄球菌显色培养基制作的测试片，将传统的多步培养鉴定过程简化到一步完成，特别适用于对大通量样本中的金黄色葡萄球菌的准确快速检测和监控，特异性强、灵敏度高、检测周期短、操作简单方便，对检测环境和检测人员的要求不高，相对于倾注平板的方法，每张测试片上只需要较少的培养基，试验后所产生的垃圾也仅仅只是纸片，可以大大降低检测成本和废物处理成本，因此非常适合基层监督部门和企业使用，可以广泛应用到食品卫生微生物检测领域，具有广泛的应用前景。
附图说明
图1是金黄色葡萄球菌测试片的结构示意图；
图2是本发明金黄色葡萄球菌显色培养基平板的检测图；
图3是本发明金黄色葡萄球菌测试片的检测图；
图4是科玛嘉金黄色葡萄球菌显色培养基平板的检测图。
具体实施方式
本发明所采取的技术方案是：
一种金黄色葡萄球菌显色培养基，每1000ml培养基中含有胰蛋白胨5～50g，酵母浸粉1～25g，牛肉浸粉2～30g，葡萄糖1～25g，丙酮酸钠1～20g，甘氨酸2～30g，氯化钠1～20g，磷酸二氢钾0.05～4g，磷酸氢二钠1～15g，抑菌剂混合物1～10g，特异性酶显色底物0.05～5g。
优选的，每1000ml培养基中含有胰蛋白胨5～25g，酵母浸粉1～12.5g，牛肉浸粉2.5～10g，葡萄糖1.5～9g，丙酮酸钠1～10g，甘氨酸3～15g，氯化钠2.5～10g，磷酸二氢钾0.8～3g，磷酸氢二钠3～10g，抑菌剂混合物1.5～8g，特异性酶显色底物0.05～2.5g。
优选的，所述抑菌剂混合物由叠氮钠、氨曲南、去铁胺、氯化锂组成。
优选的，叠氮钠、氨曲南、去铁胺、氯化锂的质量比为（2～4）：1：（4～8）：（10～15）。更优选的，叠氮钠、氨曲南、去铁胺、氯化锂的质量比为2:1:5:12。
优选的，所述特异性酶显色底物为用于检测金黄色葡萄球菌的β-葡糖苷酶和磷酸酶两种酶活性的底物。
优选的，所述特异性酶显色底物为5-溴-6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯和5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃葡糖苷。
优选的，5-溴-6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯和5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃葡糖苷的质量比为（1～3）：1。更优选的，5-溴-6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯和5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃葡糖苷的质量比为3:2。
一种金黄色葡萄球菌测试片，其结构如图1所示：由下至上依次为底片5、吸水保湿层4、培养基层3、盖膜2、标签1。底片5上涂有一层不干胶，将吸水保湿层4粘附在底片5上，吸水保湿层4上方粘连培养基层3，培养基层3上方盖有一张盖膜2，盖膜2通过标签1与底片5连在一起。其中，培养基层上吸附有上述的培养基。
优选的，所述培养基层由吸附有培养基的吸水滤纸构成。
优选的，所述吸水保湿层含有瓜尔胶、卡拉胶、琼脂粉、聚丙烯酸树脂、聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠、辛烯酸琥珀酸树脂、海藻酸钠中的一种或者几种组合物。更优选的，所述吸水保湿层由瓜尔胶、聚丙烯酸树脂、聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠组成，其质量比为5：25：5：65。
优选的，所述底片由合成纸或聚酯材料制成，所述盖膜由聚酯、聚丙烯或聚苯乙烯膜材料制成。
下面结合实施例，进一步阐述本发明内容。
实施例1
每1000ml培养基中含有胰蛋白胨5g，酵母浸粉25g，牛肉浸粉2g，葡萄糖25g，丙酮酸钠1g，甘氨酸30g，氯化钠1g，磷酸二氢钾0.05g，磷酸氢二钠1g，抑菌剂混合物10g，特异性酶显色底物0.05g。其中，抑菌剂混合物由质量比为2:1:5:12的叠氮钠、氨曲南、去铁胺和氯化锂组成；特异性酶显色底物为质量比3:2的5-溴-6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯和5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃葡糖苷。
将上述成分溶于1000mL水中，加热煮沸，121℃灭菌15min，即可使用。
实施例2
每1000ml培养基中含有胰蛋白胨50g，酵母浸粉1g，牛肉浸粉30g，葡萄糖1g，丙酮酸钠20g，甘氨酸2g，氯化钠20g，磷酸二氢钾4g，磷酸氢二钠15g，抑菌剂混合物1g，特异性酶显色底物5g。其中，抑菌剂混合物由质量比为3:1：4:10的叠氮钠、氨曲南、去铁胺和氯化锂组成；特异性酶显色底物为质量比1:1的5-溴-6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯和5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃葡糖苷。
将上述成分溶于1000mL水中，加热煮沸，121℃灭菌15min，即可使用。
实施例3
每1000ml培养基中含有胰蛋白胨5g，酵母浸粉12.5g，牛肉浸粉2.5g，葡萄糖9g，丙酮酸钠1g，甘氨酸15g，氯化钠2.5g，磷酸二氢钾3g，磷酸氢二钠3g，抑菌剂混合物8g，特异性酶显色底物0.1g。其中，抑菌剂混合物由质量比为4:1:8:15的叠氮钠、氨曲南、去铁胺和氯化锂组成；特异性酶显色底物为质量比2:1的5-溴-6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯和5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃葡糖苷。
将上述成分溶于1000mL水中，加热煮沸，121℃灭菌15min，即可使用。
实施例4
每1000ml培养基中含有胰蛋白胨25g，酵母浸粉4g，牛肉浸粉10g，葡萄糖1.5g，丙酮酸钠3g，甘氨酸5g，氯化钠10g，磷酸二氢钾1.5g，磷酸氢二钠7.5g，抑菌剂混合物1.5g，特异性酶显色底物0.2g。其中，抑菌剂混合物由质量比为2.5:1:6:13的叠氮钠、氨曲南、去铁胺和氯化锂组成；特异性酶显色底物为质量比3:1的5-溴-6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯和5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃葡糖苷。
将上述成分溶于1000mL水中，加热煮沸，121℃灭菌15min，即可使用。
实施例5
每1000ml培养基中含有胰蛋白胨10g，酵母浸粉15g，牛肉浸粉5.5g，葡萄糖7.8g，丙酮酸钠5g，甘氨酸10g，氯化钠7.5g，磷酸二氢钾2.5g，磷酸氢二钠4.5g，抑菌剂混合物6g，特异性酶显色底物2.5g。其中，抑菌剂混合物由质量比为3:1：6:12的叠氮钠、氨曲南、去铁胺和氯化锂组成；特异性酶显色底物为质量比3:2的5-溴-6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯和5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃葡糖苷。
将上述成分溶于1000mL水中，加热煮沸，121℃灭菌15min，即可使用。
实施例6
每1000ml培养基中含有胰蛋白胨15g，酵母浸粉8g，牛肉浸粉15g，葡萄糖4g，丙酮酸钠15g，甘氨酸7.5g，氯化钠5g，磷酸二氢钾1.8g，磷酸氢二钠10g，抑菌剂混合物2g，特异性酶显色底物1.5g。其中，抑菌剂混合物由质量比为2:1:5:12的叠氮钠、氨曲南、去铁胺和氯化锂组成；特异性酶显色底物为质量比3:2的5-溴-6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯和5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃葡糖苷。
将上述成分溶于1000mL水中，加热煮沸，121℃灭菌15min，即可使用。
实施例7
每1000ml培养基中含有胰蛋白胨20g，酵母浸粉10g，牛肉浸粉20g，葡萄糖15g，丙酮酸钠8g，甘氨酸20g，氯化钠15g，磷酸二氢钾3.5g，磷酸氢二钠12.8g，抑菌剂混合物4g，特异性酶显色底物4g。其中，抑菌剂混合物由质量比为2:1:5:12的叠氮钠、氨曲南、去铁胺和氯化锂组成；特异性酶显色底物为质量比3:2的5-溴-6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯和5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃葡糖苷。
将上述成分溶于1000mL水中，加热煮沸，121℃灭菌15min，即可使用。
实施例8
金黄色葡萄球菌测试片，包括底片、吸水保湿层、培养基层、盖膜。其中，底片材料为聚酯；吸水保湿层由质量比为5：25：5：65的瓜尔胶、聚丙烯酸树脂、聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠等粉碎混合均匀制成；培养基层的吸水滤纸材料为天然纤维素，其均匀地吸附有实施例1配制的金黄色葡萄球菌显色培养基；盖膜材料为聚丙烯。
实施例9
金黄色葡萄球菌测试片，底片为合成纸，吸水保湿层由瓜尔胶粉碎制成，培养基层的吸水滤纸由半合成材料制成，其均匀地吸附有实施例2配制的金黄色葡萄球菌显色培养基，盖膜材料为聚酯。
实施例10
金黄色葡萄球菌测试片，底片材料为聚酯，吸水保湿层由聚丙烯酸树脂、琼脂粉、辛烯酸琥珀酸树脂等粉碎混合均匀制成；培养基层的吸水滤纸材料为天然纤维素，其均匀地吸附有实施例3配制的金黄色葡萄球菌显色培养基，盖膜材料为聚苯乙烯膜。
实施例11
金黄色葡萄球菌测试片，底片为合成纸，吸水保湿层由瓜尔胶、卡拉胶、海藻酸钠等粉碎混合均匀制成，培养基层的吸水滤纸由全合成材料制成，其均匀地吸附有实施例4配制的金黄色葡萄球菌显色培养基，盖膜材料为聚丙烯。
实施例12
金黄色葡萄球菌测试片，底片材料为聚酯，吸水保湿层由瓜尔胶、海藻酸钠等粉碎混合均匀制成，培养基层的吸水滤纸材料为天然纤维素，其均匀地吸附有实施例5配制的金黄色葡萄球菌显色培养基，盖膜材料为聚丙烯。
实施例1～7中的金黄色葡萄球菌显色培养基平板，配制时按照上述配方再加入1.2%的琼脂粉作为凝固剂，加样后需培养18～24h，观察结果；测试片，加样后培养15～24h就可以观察结果。显色平板或者测试片上出现紫红色的菌点即为阳性菌落。
特异性实验：
将金黄色葡萄球菌ATCC25923、金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003、表皮葡萄球菌CMCC（B）26069、粪链球菌ATCC29212、铜绿假单胞杆菌ATCC15442、大肠埃希氏菌ATCC25922、大肠杆菌O157NCTC12900、鼠伤寒沙门氏菌CMCC（B）50115、阴沟肠杆菌CMCC（B）45301、产气肠杆菌ATCC13048、肠炎沙门氏菌CMCC(B)50041、副溶血性弧菌ATCC17802、蜡样芽胞杆菌CMCC（B）63301、弗氏柠檬酸杆菌ATCC43864、阪崎肠杆菌ATCC29522、宋氏志贺氏菌CMCC（B）51592、白色假丝酵母ATCC10231等17种标准菌株分别活化后制成适当浓度的标准菌悬液（浓度为100～102cfu/mL），每种菌分别用NA平板或者PDA平板，实施例8的金黄色葡萄球菌测试片，实施例1的金黄色葡萄球菌显色培养基三种方式进行检测。每种方式均从以上17种菌悬液中分别吸取1mL菌液接种，37℃培养18～24h。检测结果见表1，“+”表示阳性结果，有紫红色菌点出现；“-”表示阴性结果，无菌点生长或者只有蓝色菌点出现。
表117种标准菌株特异性实验
由表1可知，各种标准菌株在本发明所述的金黄色葡萄球菌测试片检测结果和金黄色葡萄球菌显色培养基结果完全一致，特异性好，大部分的菌株在测试片上和显色平皿上均被抑制生长，只有粪链球菌有菌落长出，为蓝色的菌点，明显区别于阳性的紫红色菌点，选择性强，可以用于金黄色葡萄球菌的检测和计数。
灵敏度实验：
将金黄色葡萄球菌（ATCC25923）标准菌株用营养肉汤复苏24h后，接种环挑取1环，加入到10mL无菌生理盐水中配成菌悬液（菌液浓度为108～109cfu/mL），然后进行10倍梯度稀释，取10-6～10-8浓度菌液各1mL，分别接种到实施例2的金黄色葡萄球菌显色培养基平板、实施例9的金黄色葡萄球菌测试片、科玛嘉显色平板和BP平板上，37℃培养24h。
将金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、粪大肠菌和志贺氏菌制成混合菌悬液，进行10倍梯度稀释，选取三个适宜梯度的混合菌液，分别接种到所述的显色培养基和测试片上，37℃培养24h。
金黄色葡萄球菌培养结果见表2，对各个梯度的菌落数目进行方差分析，表明本发明所述的金黄色葡萄球菌显色培养基和测试片与科玛嘉公司生产的金黄色葡萄球菌显色培养基、BP培养基检出率没有显著差异（P>0.05），可以达到相同的检测限。
表2金黄色葡萄球菌培养后的菌落数（均值+Sd）
混合菌液接种的显色培养基平板和测试片上，金黄色葡萄球菌仍呈现特殊的紫红色菌落，其他菌显示为白色的菌点或被抑制生长，表明其他杂菌不影响金黄色葡萄球菌的检测，本发明所述的显色培养基和测试片的特异性高。
最低检出限实验：
将金黄色葡萄球菌（ATCC25923）菌株活化后制成菌悬液（初始菌液浓度为108～109cfu/mL），按10倍系列梯度稀释成菌悬液后用来接种本发明所述的金黄色葡萄球菌测试片和金黄色葡萄球菌显色平板，从10-6稀释浓度开始接种，一直接种到10-11浓度，每个梯度接种3片测试片，同时接种BP平板用来计数各个梯度中的菌落数目。
分别用实施例3～5的金黄色葡萄球菌显色培养基和实施例10～12的金黄色葡萄球菌测试片进行检测，实施例3的显色培养基和实施例10的测试片的检测结果如表3，实施例4的显色培养基和实施例11的测试片的检测结果如表4，实施例5的显色培养基和实施例12的测试片的检测结果如表5。
表3金黄色葡萄球菌最低检测限实验
| 稀释梯度 | 10-6 | 10-7 | 10-8 | 10-9 | 10-10 | 10-11 |
| 显色培养基检测数（cfu） | 208，171 | 48，34 | 13，17 | 3，1 | 1 | 0 |
| 测试片检测数（cfu） | 143，135 | 17，8 | 0，2 | 1 | 0 | 0 |
| BP平板检测数（cfu） | 176，169 | 18，7 | 1，2 | 1 | 0 | 0 |
表4金黄色葡萄球菌最低检测限实验
| 稀释梯度 | 10-6 | 10-7 | 10-8 | 10-9 | 10-10 | 10-11 |
| 显色培养基检测数（cfu） | 多不可计 | 438，423 | 40，29 | 10，7 | 1，2 | 0 |
| 测试片检测数（cfu） | 多不可计 | 387，395 | 34，38 | 5，3 | 1，0 | 0 |
| BP平板检测数（cfu） | 多不可计 | 506，508 | 44，52 | 12，8 | 2，3 | 0 |
表5金黄色葡萄球菌最低检测限实验
| 稀释梯度 | 10-6 | 10-7 | 10-8 | 10-9 | 10-10 | 10-11 |
| 显色培养基检测数（cfu） | 多不可计 | 236，222 | 18，30 | 1，2 | 0 | 0 |
| 测试片检测数（cfu） | 多不可计 | 223，216 | 22，20 | 2，3 | 0 | 0 |
| BP平板检测数（cfu） | 多不可计 | 236，238 | 21，32 | 2，5 | 0 | 0 |
从表3～5可以看出，本发明所述的金黄色葡萄球菌显色培养基和测试片的最低检测限均能达到1cfu/mL。
自然样品中金黄色葡萄球菌检测的模拟试验：
将经过国标方法检测为金黄色葡萄球菌阴性的样品，无菌操作称取25g（或mL），加入到装有225mL无菌生理盐水的样品罐中，充分摇匀做成样品液。将金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、粪大肠菌、沙门氏菌和志贺氏菌活化后，分别挑取少量菌苔充分混匀，做成混合菌悬液，吸取1mL混合菌悬液加入到样品液中，做成人工污染样品，放置4～5h后，按10倍系列梯度稀释成不同的稀释度，挑取3个适宜的稀释度，来接种本发明实施例2的金黄色葡萄球菌显色培养基平板、实施例9的金黄色葡萄球菌测试片、科玛嘉金黄色葡萄球菌显色培养基平板，37℃培养24h。
结果如表6：
表6自然样品中金黄色葡萄球菌检测的模拟实验
由表6中可以看出，本发明所述的金黄色葡萄球菌显色培养基和测试片与科玛嘉公司生产的金黄色葡萄球菌显色培养基的检测平均符合率均可达到90%以上，可见其对样品的检测效果很好，可以用于对样品中金黄色葡萄球菌的检测。
金黄色葡萄球菌检测实验：
分别取100～102cfu/mL金黄色葡萄球菌（ATCC25923）标准菌株菌悬液1mL接种到本发明实施例2的显色培养基制作的平板、本发明实施例9的测试片、科玛嘉公司生产的金黄色葡萄球菌显色培养基平板上，37℃培养24h后金黄色葡萄球菌的检测图如图2～4。
图2是本发明金黄色葡萄球菌显色培养基平板的检测图；图3是本发明金黄色葡萄球菌测试片的检测图；图4是科玛嘉金黄色葡萄球菌显色培养基平板的检测图。可见，图2和图3中菌落的颜色及出点数目均与图4上的菌落差别不大，说明本发明显色培养基和测试片灵敏度高，可以准确的辨别金黄色葡萄球菌。
本发明根据酶促反应显色原理，提供一种金黄色葡萄球菌显色培养基及其测试片对食品及食品原材料中的金黄色葡萄球菌进行快速检测，在培养基成分中添加了丙酮酸钠与甘氨酸，能促进金黄色葡萄球菌生长，有增进选择性的作用，并补偿可能由抑制剂引起的细胞损伤作用；筛选的几种抑菌剂组合起来，能有效的抑制其他杂菌的生长，降低检测过程中样品中的其他杂菌对目标菌的干扰作用；使用两种不同的酶显色底物，分别用于检测金黄色葡萄球菌的不同的酶活性，提高了检测的准确度和效率。本发明在对样品中的金黄色葡萄球菌进行定性检测的同时，还可进行定量分析，阳性结果显色明显，检测结果准确。金黄色葡萄球菌的定量检测对食品在生产、保存和运输过程的安全性评估和其含有金黄色葡萄球菌耐热肠毒素的风险评估都有非常重要的意义。
本发明用金黄色葡萄球菌显色培养基制作的测试片，将传统的多步培养鉴定过程简化到一步完成，特别适用于对大通量样本中的金黄色葡萄球菌的准确快速检测和监控，特异性强、灵敏度高、检测周期短、操作简单方便，对检测环境和检测人员的要求不高，相对于倾注平板的方法，每张测试片上只需要较少的培养基，试验后所产生的垃圾也仅仅只是纸片，可以大大降低检测成本和废物处理成本，因此非常适合基层监督部门和企业使用，可以广泛应用到食品卫生微生物检测领域，具有广泛的应用前景。
Claims (4)
1.一种金黄色葡萄球菌显色培养基，每1000ml培养基中含有胰蛋白胨5～25g，酵母浸粉1～12.5g，牛肉浸粉2.5～10g，葡萄糖1.5～9g，丙酮酸钠1～10g，甘氨酸3～15g，氯化钠2.5～10g，磷酸二氢钾0.8～3g，磷酸氢二钠3～10g，抑菌剂混合物1.5～8g，特异性酶显色底物0.05～2.5g，余量为水；
所述抑菌剂混合物由叠氮钠、氨曲南、去铁胺、氯化锂组成，叠氮钠、氨曲南、去铁胺、氯化锂的质量比为（2～4）：1：（4～8）：（10～15）；
所述特异性酶显色底物为5-溴-6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯和5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃葡糖苷，5-溴-6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯和5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-β-D-吡喃葡糖苷的质量比为（1～3）：1。
2.一种金黄色葡萄球菌测试片，其结构由下至上依次为：底片、吸水保湿层、培养基层、盖膜，其特征在于：培养基层上吸附有权利要求1所述的培养基。
3.根据权利要求2所述的测试片，其特征在于：所述培养基层由吸附有培养基的吸水滤纸构成。
4.根据权利要求2所述的测试片，其特征在于：所述吸水保湿层含有瓜尔胶、卡拉胶、琼脂粉、聚丙烯酸树脂、聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠、辛烯酸琥珀酸树脂、海藻酸钠中的一种或者几种组合物。
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