CN101319248A - 利用商品培养基干粉直接制作微生物测试片的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种利用商品培养基干粉直接制作微生物测试片的方法，涉及微生物快速检验技术领域。本发明通过下述技术方案予以实现：将商品培养基干粉，加入一定比例的吸水凝胶干粉、增粘剂、稳定剂、酸碱调节剂和吸附有专一性酶显色剂的多糖类干粉，均匀涂布到白色合成纸载体上，然后覆盖一层吸水滤纸，最上层用透明聚酯膜及标签固定，若干片装入一个透明自封袋中，用气体消毒器进行消毒灭菌，封口后放入避光密封容器低温(冷藏)保存备用。用本发明生产的微生物测试片产品，完全可以取代传统的配制培养基、蒸汽灭菌和加热培养基倒平板这一系列繁琐的准备工作，随用随取，可大大提高微生物检验人员的工作效率；由于加入了专一性酶显色剂，使原来需要几步培养的检验过程简化为一步，出结果更快；本发明培养基用量仅为传统方法的十分之一，大大节约培养基用量，特别对于一些成本昂贵的培养基，优势更加明显；本发明还可以减少检验结束以后有害生物垃圾的处理费用。

Description

利用商品培养基干粉直接制作微生物测试片的方法

(一)技术领域

本发明涉及一种利用商品培养基干粉直接制作微生物测试片的方法，所属的技术领域是微生物快速检验技术领域。

(二)背景技术

本发明提出的方法主要用于制作一种食品有害微生物含量快速检验的产品。

对食品有害微生物的检验，是卫生防疫部门的一项重要工作，也是食品生产厂家对产品自检的重要指标之一。而测定食品微生物的污染的传统方法是平皿倾注法，依靠培养目标微生物的方法来确定食品是否合格。在此过程中，首先要进行培养基成分的配制，然后用蒸汽高压灭菌，用时再将培养基加热溶解和倒平板等一系列培养基制作步骤，其操作繁琐、费时、费工，且每个平板的制作至少需要10-15mL的培养基，浪费较大；接着进行微生物接种、培养，培养时间少则2-3天，多则数周，且由于通过目视计算菌落数量，不仅费力耗时，误差也比较大，检验质量不易控制。同时，这些检验必须有专门的实验室，由专业技术人员在无菌条件下操作才能完成。这对于中小型食品生产和加工企业而言，很难普及推广，食品卫生质量难以得到保证。

发展快速、准确、方便的微生物检验方法越来越受到人们的重视，目前大概可以分为两大类，一类是利用现代分子生物学技术和自动化分析仪器结合建立起来的微生物快速检验方法，如利用阻抗法建立起来的细菌计数系统，利用ATP荧光酶的生物发光快速检测仪，利用生化鉴定方法的全自动细菌自动鉴别系统，以及自动酶联荧光免疫(VIDAS)分析法、金标免疫分析方法(GLISA)、DNA探针和荧光定量PCR分析仪等，这一类技术和方法所需仪器设备都比较昂贵，需要专门的实验室和专业技术操作人员，因此，难以普及推广。另一类发展起来的微生物快速检验方法是把传统的培养方法与专一性酶显色反应相结合，并做成随时可用的一次性产品。在选择性培养基的基础上再加入目标微生物所特有的某种酶(如大肠杆菌的葡萄糖醛酸酶、大肠菌群的半乳糖苷酶和沙门氏菌的辛酯酶等)的显色剂，可以大大提高检测的专一性，原来需要几步的培养鉴定简化为一步完成，法国的科玛嘉(CHROMagar)和生物梅里埃(bioMERIOUX)等公司都研发出了相关的系列产品，但这些产品成本较高，需要检验人员加热消毒培养基和倒平板。美国的3M公司、日本的CHISSO株式会社、广州天河绿洲生物化学研究中心(ZL 03226094.6)和卢新(ZL 032747152)等研制出了一次性快速检验产品，这些产品的生产过程和技术都还比较复杂，例如卢新的“霉菌和酵母菌的快速检验纸片”需要将有关培养成分先配成液体，用滤纸吸附后再晾干，这个过程至少要几个到十几小时，生产条件要求严格，很容易受到污染。

本发明是直接利用目前商品培养基干粉，根据不同的目标微生物，制作成微生物测试片，制作过程简单，产品稳定，检测效果理想。而目前国内并没有类似本发明提供的方法。

(三)发明内容

1、本发明所要解决的技术问题：

为了解决背景技术中所述对微生物检验传统方法所存在的问题，本发明提供一种利用商品培养基干粉直接制作微生物测试片的方法，省去微生物检验的前期准备工作和后期的有害生物垃圾处理工作，大大地缩短检验时间和周期，减少培养基的用量。本发明同时也为大批量、标准化、低成本地生产微生物快速检验产品提供了可能。

2、本发明采用的技术方案：

本发明通过下述技术方案予以实现：将商品培养基干粉，加入一定比例的吸水凝胶干粉、增粘剂、稳定剂、酸碱调节剂和吸附有专一性酶显色剂的多糖类干粉，均匀涂布到白色合成纸载体上，然后覆盖一层吸水滤纸，最上层用透明聚酯膜及标签固定，若干片装入一个透明自封袋中，用气体消毒器进行消毒灭菌，封口后放入避光密封容器低温(冷藏)保存备用。

商品培养基干粉与吸水凝胶干粉、增粘剂、稳定剂、酸碱调节剂和吸附有专一性酶显色剂的多糖类干粉的比例为3∶3-5∶0.6-0.8∶0.1-0.2∶0.5-0.9∶0-1.5。

专一性酶显色剂包括脱氢酶、磷酸酯酶、辛酯酶、半乳糖苷酶和葡萄糖醛酸酶的专一性显色剂，含量为0.05-0.3％，以吸附剂计算。

载体基片用白色合成纸或白色塑料薄片。

吸水滤纸为天然纤维素材料、半合成材料或全合成材料，形状可以是方形或圆形。

测试片最上层用透明聚酯膜或BOPP膜，厚度为50-100um，膜上印刷方格以便进行计数。

消毒灭菌最好选用气体消毒器，温度为40-55℃，消毒的时间可根据不同培养基调节，6-20个小时。

为了使技术方案有效实施，最好在制片前对生产场所进行空气消毒，同时，最好对操作人员的双手进行酒精消毒。

本发明的有益效果：

1.用本发明生产的微生物测试片产品，完全可以取代传统的配制培养基、蒸汽灭菌和加热培养基倒平板这一系列繁琐的准备工作，随用随取，可大大提高微生物检验人员的工作效率；

2.由于加入了专一性酶显色剂，使原来需要几步培养的检验过程简化为一步，出结果更快；

3.本发明培养基用量仅为传统方法的十分之一，大大节约培养基用量，特别对于一些成本昂贵的培养基，优势更加明显；

4.本发明还可以减少检验结束以后有害生物垃圾的处理费用。

(四)具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的描述。

实施例1：大肠杆菌测试片的制作方法

取商品化的大肠杆菌显色培养基30克，加入瓜尔胶50克、聚丙烯酸增稠剂8克、稳定剂1.5克、无水磷酸二氢钾磷酸氢二钠复合物8克，混合均匀；在白色PP合成纸(6.5厘米*7.5厘米)上先涂胶水，然后将培养基干粉均匀涂布在上面，涂布面积为4.5厘米见方，上覆一片滤纸，用机器压平实，最后贴上透明聚酯膜，每12片装入自封袋中，先不要封口，放入气体消毒器中45℃进行灭菌4个小时，封好口放入避光容器中保存。

用几种有代表性的致病菌稀释液接种到大肠杆菌测试片上，接种量为1毫升，37℃培养20小时，大肠杆菌显蓝色点，而大肠菌群、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌均不显色。

实施例2：沙门氏菌测试片的制作方法

取商品化的沙门氏菌显色培养基33克，加入黄原胶45克、聚丙烯酸增稠剂6.5克、稳定剂1.5克、无水磷酸二氢钾磷酸氢二钠复合物6克，混合均匀；在白色PP合成纸(6.5厘米*7.5厘米)上先涂胶水，然后将培养基干粉均匀涂布在上面，涂布面积为4.5厘米见方，上覆一片合成滤布，用机器压平实，最后贴上透明聚酯膜，每12片装入自封袋中，先不要封口，放入气体消毒器中45℃进行灭菌5个小时，封好口放入避光容器中保存。

用几种有代表性的致病菌稀释液接种到沙门菌测试片上，接种量为1毫升，37℃培养20小时，沙门氏菌显红色点，大肠杆菌显蓝色点，而单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌不显色。

(五)附图

图1是根据本发明提出的一种型式(当掀开盖膜时)的侧观示意图。

图2是本发明的剖视图。

参照附图，本实施例由下列各部分组成：

1——代表标签，

2——代表盖膜，

3——代表吸水滤纸，

4——代表培养基粉，

5——代表载体。

本实施例中：盖膜2是透明聚酯膜，它的长×宽的尺寸是75毫米×65毫米；吸水滤纸3覆盖在培养基粉上，长×宽的尺寸是45毫米×45毫米；培养基粉4涂布在载体5上；载体5是白色PP合成纸。标签1、盖膜2和载体5用胶贴在一起。

Claims (6)

1、本发明公开了一种利用商品培养基干粉直接制作微生物测试片的方法，涉及微生物快速检验技术领域。本发明通过下述技术方案予以实现：将商品培养基干粉，加入一定比例的吸水凝胶干粉、增粘剂、稳定剂、酸碱调节剂和吸附有专一性酶显色剂的多糖类干粉，均匀涂布到白色合成纸载体上，然后覆盖一层吸水滤纸，最上层用透明聚酯膜及标签固定，若干片装入一个透明自封袋中，用气体消毒器进行消毒灭菌，封口后放入避光密封容器低温(冷藏)保存备用。

2、根据权利要求1所述的利用商品培养基干粉直接制作微生物测试片的方法，其特征是，所述的商品培养基干粉与吸水凝胶干粉、增粘剂、稳定剂、酸碱调节剂和吸附有专一性酶显色剂的多糖类干粉的比例为3∶3-5∶0.6-0.8∶0.1-0.2∶0.5-0.9∶0-1.5。

3、根据权利要求1所述的利用商品培养基干粉直接制作微生物测试片的方法，其特征是，专一性酶显色剂包括脱氢酶、磷酸酯酶、辛酯酶、半乳糖苷酶和葡萄糖醛酸酶的专一性显色剂，含量为0.05-0.3％，以吸附剂计算。

4、根据权利要求1所述的利用商品培养基干粉直接制作微生物测试片的方法，其特征是，所述载体基片为白色合成纸或白色塑料薄片。

5、根据权利要求1所述的利用商品培养基干粉直接制作微生物测试片的方法，其特征是，所述的吸水滤纸为天然纤维素材料、半合成材料或全合成材料，形状为方形或圆形。

6、根据权利要求1所述的利用商品培养基干粉直接制作微生物测试片的方法，其特征是测试片最上层用透明聚酯膜或BOPP膜，厚度为50-100um，膜上印刷方格。

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