CN102177249A - 用于金黄色葡萄球菌的反应培养基 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于检测和/或鉴定金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的反应培养基，其包含α-葡糖苷酶的两种酶底物的组合。

Description

用于金黄色葡萄球菌的反应培养基
本发明涉及用于检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的培养基。本发明也涉及这种培养基的用途并且涉及用于鉴定金黄色葡萄球菌的方法。
在2008年，葡萄球菌属(Staphylococcus)包括41个种和24个亚种，其中至少17个已经在人类中发现。大部分的这些菌种是人的机会致病菌，如果因创伤或因直接植入医疗产品导致皮肤损伤则显示高风险。另外，金黄色葡萄球菌是在必须接受涉及如注射器或导管的装置的医院护理的患者中经常找到的细菌。因此，检测越来越多牵涉医院感染症的这种病原性细菌的存在有着巨大的益处。
在葡萄球菌当中，金黄色葡萄球菌毫无疑问地是毒力最强的菌种，因为它产生大量的毒素和胞外酶。它可能导致众多和各异的病症，范围从简单的瘭疽至最严重的感染(如败血病、心内膜炎、肺病或骨关节感染)，其预后可能不很乐观。
此外，只有5个菌种：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、溶血性葡萄球菌(Staphylococcus haemolyticus)、腐生性葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)和人葡萄球菌(Staphylococcus hominis)代表至少1％在临床中心分离的病原性菌株，并且这5个菌种代表超过98％的最常遇到的葡萄球菌菌株。其余菌种是罕有遇到的并且没有很强病原性。
在细菌学中，将特征在于产生凝固酶的金黄色葡萄球菌种与其余“凝固酶阴性”菌种对比是常规操作。
用于从葡萄球菌中区分金黄色葡萄球菌与非金黄色葡萄球菌的常规方法基于搜索游离的凝固酶和搜索DNA酶并基于在乳胶上获得凝集反应，所述的方法旨在展示纤维蛋白原亲和因子、蛋白A和荚膜抗原的存在。
应当清楚其他的潜在致病性葡萄球菌菌种能够表达凝固酶。
凝固酶阳性菌种如下：金黄色葡萄球菌、中间葡萄球菌(Staphylococcus intermedius)、猪葡萄球菌(Staphylococcus hyicus)、Staphylococcus delphinis、Staphylococcus lutrae和施氏葡萄球菌(Staphylococcus schleiferi)。
存在在选择性培养基上的培养技术，使得可以评价金黄色葡萄球菌的存在。涉及的培养基如下：
●高盐Chapman培养基(含有75％NaCl)通常对水解甘露醇的金黄色葡萄球菌和葡萄球菌有选择性。这些细菌引起培养基从红色变成黄色。某些微生物和尤其D组肠球菌可以在该培养基上产生相同的反应；因此随后必需验证过氧化氢酶(链球菌属阴性)。
●Baird-Parker卵黄培养基(含有亚碲酸钾和氯化锂作为选择剂)用于分离和计数食品中的凝固酶阳性葡萄球菌并能够展示卵磷脂酶活性。在这种培养基上，出现的金黄色葡萄球菌的菌落和其他凝固酶阳性菌种的菌落具有以不透明菌晕包围的黑色中心。其他微生物可以在这种培养基上生长。这些微生物原则上是以下组：
■革兰氏阳性球菌：肠球菌属(Enterococcus)和李斯特菌属(Listeria)，
■革兰氏阴性杆菌：变形菌属(Proteus)和假单胞菌属(Pseudomonas)。
●Baird-Parker培养基+RPF(兔血浆+牛纤维蛋白原)用于分离和计数食品中的凝固酶阳性葡萄球菌，用作符合ISO标准6888-1和6888-2的参比培养基，并能够展示凝固酶活性。在这种培养基上，出现的金黄色葡萄球菌菌落和其他凝固酶阳性种菌落具有以不透明菌晕包围的黑色中心。
实际上，使用Chapman高盐培养基技术对金黄色葡萄球菌的检测(reveal)缺少灵敏度(检测以少量存在于生物学试样中的正在查找的菌种的能力)并且尤其缺少特异性(在含有其他种的生物学试样中检测正在查找的菌种的能力)。
类似地，使用Baird-Parker卵黄培养基技术对金黄色葡萄球菌的检测缺少灵敏度和特异性。因此，不属于金黄色葡萄球菌、尤其不属于施氏葡萄球菌和腐生性葡萄球菌的一些菌株也可以产生被较浅菌晕包围的菌落。金黄色葡萄球菌的某些菌株也可能不表现正在查找的酶促活性或不在该培养基上生长，因为它们可能以太小的量存在于生物学样品中和/或可以被具有太强选择性的培养基组分抑制。
在Baird-Parker+RPF培养基的情况下，普遍地观察到一定数目的缺点。首先，存在判读和灵敏度方面的困难：由于金黄色葡萄球菌的某些菌株不在这种培养基上生长或显示极微弱和极迟的凝固酶而出现假阴性结果，导致假设存在凝固酶阴性葡萄球菌。进一步地，也可以因基质干扰而观察到假阴性结果；尤其对低水平金黄色葡萄球菌污染计数，样品被进行最低稀释(1/10)，由于存在基质化合物(例如乳和/或乳产品的样品：酪蛋白的白颜色掩蔽检测凝固酶的菌晕)引起判读菌晕困难。Baird-Parker+RPF培养基要求组合凝血酶源和组合纤维蛋白溶酶原源。这些来源从动物血液获得，这带来供应可靠性(质量、数量等)的问题。此外，不可能判读培养液(液体培养基)中的菌晕，并且菌晕与培养基之间的反差可能小。最后，在汇合菌落的情况下，与不产生菌晕的那些菌落相比，确定产生菌晕的那些菌落是困难的。
其次，也可能存在特异性问题：在丰富的次生菌丛(例如，芽胞杆菌属(Bacillus spp))存在下，这种类型的培养基可能出现假阳性结果。即是，例如，在对使用木糖葡萄球菌作为酵素的某些肉制品(干香肠)和乳制品(Munster型乳酪)中的金黄色葡萄球菌计数时的情况。因此，在Baird-Parker+RPF培养基上出现被菌晕包围的黑色菌落，这些出现的菌落通常是金黄色葡萄球菌在这种培养基上的特征，但是实际上是木糖葡萄球菌(产生无菌晕的黑色菌落)和具有凝固酶的芽胞杆菌属某些菌株(产生菌晕)在琼脂上持续生长的结果。
因此可以理解，采用Baird-Parker、Baird-Parker+RPF和Chapman培养基的这种检测仅给出假定性判断结果并且需要其他证明试验。然而，鉴定金黄色葡萄球菌所需的额外处理增加了分析的持续时间和成本。它们需要许多试剂和合格人员的参与。
也可能使用基于酶底物的培养基。
O.Gaillot等的一篇文章(″Evaluation of CHROMagar Staph.aureus，a new chromogenic medium，for isolation and presumptive identification of S.aureus from human clinical specimens.″O.Gaillot et al.2000.J.Clin.Microbiol.38，4，1587 1591)描述并评价了用于分离葡萄球菌并鉴定金黄色葡萄球菌(使用使金黄色葡萄球菌给出淡紫染色的生色底物)的生色培养基，金黄色葡萄球菌CHROMagar(注册商标)。理论上，相同属的其他菌种随后因是蓝颜色或无色被检测。β-葡糖苷酶、β-葡糖醛酸糖苷酶、β-半乳糖苷酶和磷酸酶活性基本上连同抑制剂去铁胺一起使用，其中所述的去铁胺能够区分金黄色葡萄球菌与表皮葡萄球菌。然而，在金黄色葡萄球菌与表皮葡萄球菌之间的区分是困难的，因为这两个菌种在HROMagar(注册商标)培养基上产生相同颜色的菌落。这归因于对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌均为阳性的磷酸酶底物缺少特异性，并归因于去铁胺仅部分地抑制表皮葡萄球菌的事实。
也可以提到申请WO02079486，该申请描述α-葡糖苷底物用于鉴定多种葡萄球菌的用途，所述α-葡糖苷底物可以与另一种酶促活性的底物组合。然而，在某些条件下，如在例如菌株具有弱α-葡糖苷酶活性并少量存在(2至50个菌落形成单位)情况下，活性的检测可能延迟并且需要超过24小时的孵育。
本发明建议通过提供一种用于分离和鉴定金黄色葡萄球菌的新的、灵敏的、特异的和快速的培养基解决现有技术的空白。
在进一步继续之前，无论如何不是限制性的以下定义将能够更清晰地理解本发明。
出于本发明的目的，术语反应培养基意指包含微生物(如金黄色葡萄球菌)存活和/或生长所需之全部要素的培养基。
这种反应培养基可以仅充当检测培养基，或可以充当培养和检测培养基。在第一种情况下，在接种之前培养微生物，并且在第二种情况下，反应培养基也构成该培养培养基。
反应培养基可以是固体、半固体或液体。术语“固体培养基”意指例如凝胶化的培养基。优选地，本发明的培养基是凝胶化的培养基。琼脂是微生物学中用于培养微生物的常规凝胶剂，但是可以使用明胶或琼脂糖。若干制品是市售的，例如Colombia琼脂、胰酪胨大豆琼脂、Mac Conkey琼脂、Sabouraud琼脂或更常见的是那些在《微生物学培养基手册》(CRC Press)中描述的琼脂。
本发明的反应培养基可以含有其他可能的添加剂，例如：蛋白胨、一种或多种生长因子、碳水化合物、一种或多种选择剂、缓冲溶液、一种或多种凝胶剂等。这种反应培养基可以是能立即使用(即能立即用于在管或烧瓶中或在培养皿上接种)的液体或凝胶形式。当这种培养基以烧瓶中的凝胶形式提供时，该培养基优选在倾入培养皿之前再生出来(使其经历100℃)。
优选地，本发明的培养基是选择性培养基，即包含有利于金黄色葡萄球菌生长的抑制剂的培养基。可以特别提到氯化锂(LiCl)、叠氮化钠(NaN3)、粘菌素、两性霉素、氨曲南、结肠霉素、氯化钠(NaCl)、去铁胺和弧菌抑制化合物O/129。
这种培养基也可以适用于检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)并且可以包含MRSA对其具有抗性的一种或多种抗生素，如头孢菌素或碳青霉烯，其优选选自：
●第一代头孢菌素，如头孢氨苄、头孢噻啶、头孢噻吩、头孢唑啉、头孢羟氨苄、头孢西酮、头孢曲秦、头孢匹林、头孢拉定、头孢乙睛、头孢沙定、头孢替唑；
●第二代头孢菌素，如头孢西丁、头孢呋辛、头孢孟多、头孢克洛、头孢替坦、头孢尼西、头孢替安、氯碳头孢、头孢美唑、头孢丙烯、头孢雷特；
●第三代头孢菌素，如头孢噻肟、头孢他啶、头孢磺啶、头孢曲松、头孢甲肟、拉氧头孢、头孢唑肟、头孢克肟、头孢地泰、头孢他美、头孢匹胺、头孢哌酮、头孢泊肟、头孢布烯、头孢地尼、头孢托仑、头孢曲松、头孢哌酮；
●第四代头孢菌素，如头孢吡肟、头孢匹罗；
●美罗培南、厄他培南、亚胺培南。
出于本发明的目的，酶促活性的底物(或酶底物)选自可以被水解以产生以下产物的任意底物，其中所述的产物能够直接或间接检测α-葡糖苷酶酶促活性。
该底物可以是天然或合成的底物。该底物的代谢引起反应培养基或生物细胞的物理化学特性变化。这种变化可以由操作员目视方式或使用光谱测定仪、电仪器、磁仪器等仪器通过物理化学方法、尤其光学方法检测。优选地，它是光学特性变化，如吸收、荧光或化学发光的修饰。
作为生色底物，可以特别提到基于吲哚酚、黄酮、茜素、萘酚苯、硝基酚、萘酚、儿茶酚、羟喹或香豆素的底物。优选地，本发明中使用的底物是基于吲哚酚的。
作为荧光底物，可以特别提到基于伞形酮或基于香豆素，基于9-羟基异吩噻唑、吩噁嗪、萘酚、萘胺或2′-羟苯基-杂环或还基于荧光素的底物。
作为α-葡糖苷酶酶促活性的底物，可以更特别地提到以下底物：5-溴-6-氯-3-吲哚氧基-α-葡糖苷、二羟黄酮-α-葡糖苷、3，4-环己酮七叶苷-α-葡糖苷、8-羟喹-α-葡糖苷、5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-葡糖苷、5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-N-甲基-α-葡糖苷、6-氯-3-吲哚氧基-α-葡糖苷、5-溴-3-吲哚氧基-α-葡糖苷、5-碘-3-吲哚氧基-α-葡糖苷、6-氟-3-吲哚氧基-α-葡糖苷、茜素-α-葡糖苷、硝基苯基-α-葡糖苷、4-甲基伞花基-α-葡糖苷、萘酚苯-α-葡糖苷、吲哚氧基-N-甲基-α-葡糖苷、萘基-α-葡糖苷、氨基苯基-α-葡糖苷、二氯氨基苯基-α-葡糖苷、9-羟基异吩噻唑-α-葡糖苷。
优选地，本发明中使用的底物是与5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-N-甲基-α-葡糖苷组合的5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-葡糖苷。
本发明的底物可以在宽pH范围内、尤其在pH 5.5至10之间、优选在pH 6.5至10之间使用。
底物的浓度优选在0.01g/l至2g/l之间，甚至更优选在0.02g/l至0.2g/l之间，并且有利地是0.1g/l。这是因为在这个底物浓度上，获得更好的着色反差。
术语生物学样品意指从支气管、气管或肺吸气样品或胸水样品，从支气管-肺泡灌洗液，从咳痰，从血液或从肺活组织检查，从关节液或心包液、生物学流体衍生的临床样品，或意指从任何类型的食物衍生的食物样品。该样品可以因而是液体或固体并且以非限制性方式可以提到来自血液、血浆、尿或粪便的临床样品或来自从鼻、会阴、喉、皮肤、伤口或脑脊液取得的样品的临床样品，或可以提到食物样品。
在这个方面，本发明涉及用于检测和/或鉴定金黄色葡萄球菌的反应培养基，其包含α-葡糖苷酶的两种酶底物的组合。
根据本发明的一个优选实施方案，两种底物之一是吲哚氧基-α-葡糖苷底物，优选是5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-N-甲基-α-葡糖苷(X-N-甲基-α-葡糖苷)或5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-葡糖苷(X-α-葡糖苷)。
优选地，所述的吲哚氧基-α-葡糖苷底物以0.01g/l至2g/l之间、优选0.05g/l至0.3g/l之间的浓度存在于该培养基中。
优选地，α-葡糖苷酶的所述两种酶底物的组合包含5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-N-甲基-α-葡糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-葡糖苷。
根据本发明的一个优选实施方案、所述的培养基也包含有利于金黄色葡萄球菌生长的抑制剂混合物，优选包含氯化锂(LiCl)、叠氮化钠(NaN3)、粘菌素、O/129弧菌抑制化合物、氨曲南、两性霉素、结肠霉素、氯化钠(NaCl)和去铁胺。
根据本发明的一个优选实施方案、所述的培养基也包含有利于葡萄球菌属细菌生长的包含4种抑制剂的抑制剂混合物，所述抑制剂是LiCI、O/129弧菌抑制化合物、氨曲南和两性霉素。
本发明也涉及如上文定义的反应培养基用于分离和鉴定金黄色葡萄球菌的体外用途。
最后，本发明涉及用于检测和/或鉴定生物学样品中金黄色葡萄球菌的方法，包括：
a)在如上文定义的反应培养基上接种可能含有金黄色葡萄球菌的生物学样品；
b)孵育；
c)鉴定金黄色葡萄球菌菌落；
d)鉴定MRSA菌落。
孵育优选在30℃至42℃之间的温度实施。借助能够获得有色或荧光菌落的特异的α-葡糖苷酶活性检测金黄色葡萄球菌。其余葡萄球菌属的种显示无色或具有与金黄色葡萄球菌菌落不同的颜色或荧光。
本发明也涉及用于检测和/或鉴定MRSA细菌的反应培养基，包含α-葡糖苷酶的两种酶底物的组合和MRSA对其具有抗性的抗生素，优选是头孢菌素，如头孢西丁。该抗生素可以与另一种抗生素组合。这样的组合优选选自头孢西丁/头孢噻肟或头孢西丁/厄他培南。这样的培养基特别地适用于检测MRSA。
根据本发明的一个优选实施方案，两种底物之一是吲哚氧基-α-葡糖苷底物，优选是5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-N-甲基-α-葡糖苷(X-N-甲基-α-葡糖苷)或5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-葡糖苷(X-α-葡糖苷)。
优选地，所述的吲哚氧基-α-葡糖苷底物以0.01g/l至2g/l之间、优选0.05g/l至0.3g/l之间的浓度存在于该培养基中。
优选地，α-葡糖苷酶的所述两种酶底物的组合包含5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-N-甲基-α-葡糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-葡糖苷。
根据本发明的一个优选实施方案、所述的培养基也包含有利于金黄色葡萄球菌生长的抑制剂混合物，优选包含氯化锂(LiCl)、叠氮化钠(NaN3)、粘菌素、O/129弧菌抑制化合物、氨曲南、两性霉素、结肠霉素、氯化钠(NaCl)和去铁胺。
本发明也涉及如上文定义的反应培养基用于分离和鉴定MRSA细菌的体外用途。
最后，本发明涉及用于检测和/或鉴定生物学样品中MRSA细菌的方法，包括：
a)在如上文定义的反应培养基上接种可能含有MRSA细菌的生物学样品；
b)孵育；
c)鉴定MRSA菌落。
孵育优选在30℃至42℃之间的温度实施。
借助能够获得有色或荧光菌落的特异的α-葡糖苷酶活性检测MRSA。其余种显示无色或具有与MRSA菌落不同的颜色或荧光。
以下实施例以说明的方式提供且本质上无论如何不是限制性的。它们将使得能够更清晰地理解本发明。
1.制备本发明的培养基
以下实验中测试的培养基是包含chromID MRSA培养基(bioMérieux参考号43451)作为基础培养基且包含以下要素的培养基：
培养基T：chromID MRSA对照培养基(参考号43451)，其特别包含浓度0.1g/l的X-N-甲基-α-葡糖苷底物和4mg/l的头孢西丁。
培养基S：培养基T，还包含浓度25、37、45或50mg/l的X-α-葡糖苷底物。
培养基F：培养基S(X-α-葡糖苷浓度：45mg/l)，头孢西丁替换为以下浓度的头孢西丁/头孢噻肟：
  [头孢西丁]mg/l   0.5   0.5   1   1
  [头孢噻肟]mg/l   0.5   1   0.5   1
培养基G：培养基S(X-α-葡糖苷浓度：45mg/l)，头孢西丁替换为以下浓度的头孢西丁/头孢曲松组合：
  [头孢西丁]mg/l   0.5   0.5   1   1
  [头孢曲松]mg/l   0.5   1   0.5   1
培养基H：培养基S(X-α-葡糖苷浓度：45mg/l)，头孢西丁替换为以下浓度的头孢西丁/厄他培南组合：
  [头孢西丁]mg/l   0.5   0.5   0.5   0.5   0.75   0.75   0.75   0.75
  [厄他培南]mg/l   0.25   0.5   0.75   1   0.25   0.5   0.75   1
培养基I：培养基S(X-α-葡糖苷浓度：45mg/l)，头孢西丁替换为以下浓度的头孢西丁/头孢泊肟组合：
  [头孢西丁]mg/l   0.5   0.5   0.5   0.5   0.75   0.75   0.75   0.75
  [头孢泊肟]mg/l   0.5   1   1.5   2   0.5   1   1.5   2
培养基J：培养基S(X-α-葡糖苷浓度：45mg/l)，头孢西丁替换为以下浓度的头孢西丁/头孢哌酮组合：
  [头孢西丁]mg/l   0.5   0.5   0.5   0.5   0.75   0.75   0.75   0.75
  [头孢哌酮]mg/l   0.5   0.75   1   1.5   0.5   0.75   1   1.5
培养基K：培养基S(X-α-葡糖苷浓度：45mg/l)，头孢西丁替换为以下浓度的头孢西丁/头孢噻肟组合，还包含不属于葡萄球菌属的微生物的抑制剂混合物，其有利于金黄色葡萄球菌的生长。
  [头孢西丁]mg/l   0.75   0.75   0.75   0.75   0.75   0.75
  [头孢噻肟]mg/l   0.5   0.55   0.6   0.65   0.7   0.75
2.接种和判读培养基
接种悬浮于生理盐水中的多组细菌菌株(均来自申请人的收藏物)，使得在培养基上产生分离的菌落。所述培养皿在37℃孵育48小时。在18小时或24小时孵育后目视检查形成的菌落。根据0至4的标度(0：无着色，4：极强烈着色)观察着色强度。
检测到的菌株对应于培养基上形成有色菌落的菌株。
3.结果：
3.1包含两种α-葡糖苷酶底物的用于检测MRSA的培养基
在表1中给出在使用一种或两种α-葡糖苷酶底物期间获得的结果。
表1使用两种α-葡糖苷酶底物期间菌落的着色强度
添加第二种α-葡糖苷酶底物能够强烈地强化菌落的着色，因而能够实现更好地突出MRSA菌落。
3.2用于检测MRSA的培养基，其包含两种α-葡糖苷酶底物和选自以下对的抗生素组合：头孢西丁/头孢曲松、头孢西丁/头孢噻肟、头孢西丁/厄他培南、头孢西丁/头孢哌酮或头孢西丁/头孢泊肟
表2中给出当使用抗生素的组合时获得的结果。
Figure BPA00001347165300111
以上的抗生素组合能够获得比仅具有4mg/l的头孢西丁的培养基更好的性能水平。
3.3用于检测MRSA的培养基，其包含头孢西丁/头孢噻肟抗生素组合和有利于金黄色葡萄球菌生长的抑制剂混合物。
表3中给出当使用抗生素的组合时获得的结果。
表3当使用头孢西丁/头孢噻肟抗生素组合和抑制剂混合物时MRSA菌落的检测结果(检测结果表述为检测到的菌株数/总菌株数)
Figure BPA00001347165300121
与有利于金黄色葡萄球菌生长的抑制剂混合物组合的头孢西丁/头孢噻肟抗生素组合能够获得优异的特异性和灵敏度，特别当使用浓度0.75mg/l的头孢西丁和头孢噻肟时。

Claims (15)

1.用于检测和/或鉴定金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的反应培养基，其包含α-葡糖苷酶的两种酶底物的组合。
2.权利要求1的反应培养基，其特征在于所述两种底物之一是吲哚氧基-α-葡糖苷底物，优选地是5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-N-甲基-α-葡糖苷或5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-葡糖苷。
3.权利要求2的反应培养基，其特征在于所述的吲哚氧基-α-葡糖苷底物以0.01g/l至2g/l之间、优选地0.05g/l至0.3g/l之间的浓度存在于所述培养基中。
4.权利要求1至3中任一项的反应培养基，其特征在于α-葡糖苷酶的所述两种酶底物组合包含5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-N-甲基-α-葡糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-葡糖苷。
5.权利要求1至4中任一项的反应培养基，其特征在于它还包含促进金黄色葡萄球菌生长的抑制剂混合物。
6.权利要求1至5中任一项的反应培养基的体外用途，其用于分离和鉴定金黄色葡萄球菌。
7.用于检测和/或鉴定生物学样品中的金黄色葡萄球菌的方法，其包括：
a)在如上文定义的反应培养基上接种可能含有金黄色葡萄球菌的生物学样品；
b)孵育；
c)鉴定金黄色葡萄球菌菌落。
8.用于检测和/或鉴定MRSA细菌的反应培养基，其包含α-葡糖苷酶的两种酶底物的组合和MRSA对其具有抗性的抗生素，优选地是头孢菌素，如头孢西丁。
9.权利要求8的反应培养基，其特征在于它包含MRSA对其具有抗性的第二抗生素。
10.权利要求8或9的反应培养基，其特征在于两种底物之一是吲哚氧基-α-葡糖苷底物，优选地是5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-N-甲基-α-葡糖苷或5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-葡糖苷。
11.权利要求10的反应培养基，其特征在于所述吲哚氧基-α-葡糖苷底物以0.01g/l至2g/l之间、优选地0.02g/l至0.3g/l之间的浓度存在于所述培养基中。
12.权利要求8至11中任一项的反应培养基，其特征在于α-葡糖苷酶的所述两种酶底物的组合包含5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-N-甲基-α-葡糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-葡糖苷。
13.权利要求8至12中任一项的反应培养基，其特征在于它还包含促进金黄色葡萄球菌生长的抑制剂混合物，优选地包含LiCl、O/129弧菌抑制化合物、氨曲南和两性霉素。
14.权利要求8至13中任一项的反应培养基的体外用途，其用于分离和鉴定MRSA细菌。
15.用于检测和/或鉴定生物学样品中MRSA细菌的方法，其包括：
a)在如权利要求8至13中定义的反应培养基上接种可能含有MRSA细菌的生物学样品；
b)孵育；
c)鉴定MRSA菌落。
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