CN104988205A - 一种大肠杆菌的检测方法 - Google Patents
一种大肠杆菌的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104988205A CN104988205A CN201510382606.0A CN201510382606A CN104988205A CN 104988205 A CN104988205 A CN 104988205A CN 201510382606 A CN201510382606 A CN 201510382606A CN 104988205 A CN104988205 A CN 104988205A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- parts
- diluent
- detection method
- substratum
- described step
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Abstract
本发明涉及一种大肠杆菌的检测方法，属于生物检测技术领域，包括以下步骤：(1)样品的准备：a.将样品用生理盐水溶解，过滤，将滤液分装至五个无菌容器内；b.将五个无菌容器内的滤液进行稀释，五个稀释液分别为a1、a2、a3、a4和a5；(2)乳糖发酵试验：c.取出三份1mL的稀释液a1，分别移至培养基上培养；取出三份1mL的稀释液a2，分别移至培养基上培养；取出三份1mL的稀释液a3，分别移至培养基上培养；取出三份1mL的稀释液a4，分别移至培养基上培养；取出三份1mL的稀释液a5，分别移至培养基上培养；d.观察所述步骤c中的培养基有无气体产生。本发明方便、快捷，成本低，灵敏度高，便于操作。
Description
技术领域
本发明属于生物检测技术领域，尤其是一种大肠杆菌的检测方法。
背景技术
大肠杆菌(Escherichia coli)，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，与人类疾病有关的大肠杆菌一般包括五种，即肠毒素性大肠杆菌(ETEC)，致病性大肠杆菌(SPEC)、出血性大肠杆菌(EHEC)，侵袭性大肠杆菌(EIEC)和粘附性大肠杆菌(EAEC)。大肠杆菌常随粪便从人及动物体排出，广泛散播于自然界中，所以一旦检出大肠杆菌，即意味着直接或间接地被粪便污染，在卫生学上被用于饮水，牛奶或食品等的粪源性污染卫生细菌学指标；并且由于大肠杆菌在外界存活时间与一些主要肠道病原菌相近，它的出现也可能预示着某些肠道病原菌的存在，因此该细菌是国际上公认的卫生监测指示菌。现有技术，一般采用无菌操作，将食品检样经过相应的处理后，做一定的倍比稀释，然后在一定条件下培养(如培养基成分、培养温度和时间、PH值、需氧性质等)，最后在电镜、显微镜下观察，根据菌落的颜色、形态等生化指标进行分辨，并计算平板的菌落数。该方法成本低，特别是对检测实验室的硬件设备要求低，曾一度被认为是微生物检测的经典方法，也是后来各种检测方法的基础平台，在各个国家都被认可，该标准在我国一直沿续至今，特别是一些病原细菌的检测。但是，该方法非常繁琐，需要耗费大量的人力物力，而且检测周期长、灵敏度低，难以满足目前国内外对食品安全检测的要求。
发明内容
本发明要解决的问题是：克服现有技术的不足，提供一种方便、快捷，成本低，灵敏度高，便于操作的大肠杆菌的检测方法。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种大肠杆菌的检测方法，包括以下步骤：
(1)样品的准备
a.在无菌条件下，将样品用生理盐水溶解，再用过滤膜进行多膜离心过滤，所述过滤膜为2-5层，过滤后得滤液，将滤液分装至五个无菌容器内；
b.在无菌条件下，将步骤a中的五个无菌容器内的滤液分别进行稀释，依次做成1：5梯度的稀释液，所述五个稀释液分别为a1、a2、a3、a4和a5；
(2)乳糖发酵试验
c.在无菌条件下，取出三份1mL的稀释液a1，分别移至培养基上培养；取出三份1mL的稀释液a2，分别移至培养基上培养；取出三份1mL的稀释液a3，分别移至培养基上培养；取出三份1mL的稀释液a4，分别移至培养基上培养；取出三份1mL的稀释液a5，分别移至培养基上培养；
d.观察所述步骤c中的培养基有无气体产生，若无气体产生，则为大肠杆菌阴性；
若有气体产生，则将培养基上的菌落进行革兰氏染色，同时接种在乳糖发酵管中培养，观察菌落，若乳糖发酵管中产气，革兰氏染色为阴性无芽孢杆菌，即为大肠杆菌阳性。
进一步地，所述步骤a中多膜离心过滤的离心速率为5000-8000r/min。
进一步地，所述步骤a中过滤膜的厚度为0.2-0.44μm。
进一步地，所述步骤c中三份稀释液a1的培养温度为30-34℃，培养时间为15-20h。
进一步地，所述步骤c中三份稀释液a2的培养温度为30-34℃，培养时间为15-20h。
进一步地，所述步骤c中三份稀释液a3的培养温度为30-34℃，培养时间为15-20h。
进一步地，所述步骤c中三份稀释液a4的培养温度为30-34℃，培养时间为15-20h。
进一步地，所述步骤c中三份稀释液a5的培养温度为30-34℃，培养时间为15-20h。
本发明具有的优点和积极效果是：
本发明方便、快捷，成本低，灵敏度高，便于操作。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。
一种大肠杆菌的检测方法，包括以下步骤：
(1)样品的准备
a.在无菌条件下，将样品用生理盐水溶解，再用过滤膜进行多膜离心过滤，过滤膜为4层，过滤膜的厚度为0.3μm，多膜离心过滤的离心速率为6000r/min，过滤后得滤液，将滤液分装至五个无菌容器内；
b.在无菌条件下，将步骤a中的五个无菌容器内的滤液分别进行稀释，依次做成1：5梯度的稀释液，所述五个稀释液分别为a1、a2、a3、a4和a5；
(2)乳糖发酵试验
c.在无菌条件下，取出三份1mL的稀释液a1，分别移至培养基上，32℃下培养18h；取出三份1mL的稀释液a2，分别移至培养基上培养，32℃下培养18h；取出三份1mL的稀释液a3，分别移至培养基上培养，32℃下培养18h；取出三份1mL的稀释液a4，分别移至培养基上，32℃下培养18h；取出三份1mL的稀释液a5，分别移至培养基上，32℃下培养18h；
d.观察所述步骤c中的培养基有无气体产生，若无气体产生，则为大肠杆菌阴性；
若有气体产生，则将培养基上的菌落进行革兰氏染色，同时接种在乳糖发酵管中培养，观察菌落，若乳糖发酵管中产气，革兰氏染色为阴性无芽孢杆菌，即为大肠杆菌阳性。
以上所述，仅为本发明的较佳实例，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定的范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种大肠杆菌的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)样品的准备
a.在无菌条件下，将样品用生理盐水溶解，再用过滤膜进行多膜离心过滤，所述过滤膜为2-5层，过滤后得滤液，将滤液分装至五个无菌容器内；
b.在无菌条件下，将步骤a中的五个无菌容器内的滤液分别进行稀释，依次做成1：5梯度的稀释液，所述五个稀释液分别为a1、a2、a3、a4和a5；
(2)乳糖发酵试验
c.在无菌条件下，取出三份1mL的稀释液a1，分别移至培养基上培养；取出三份1mL的稀释液a2，分别移至培养基上培养；取出三份1mL的稀释液a3，分别移至培养基上培养；取出三份1mL的稀释液a4，分别移至培养基上培养；取出三份1mL的稀释液a5，分别移至培养基上培养；
d.观察所述步骤c中的培养基有无气体产生，若无气体产生，则为大肠杆菌阴性；
若有气体产生，则将培养基上的菌落进行革兰氏染色，同时接种在乳糖发酵管中培养，观察菌落，若乳糖发酵管中产气，革兰氏染色为阴性无芽孢杆菌，即为大肠杆菌阳性。
2.根据权利要求1所述的大肠杆菌的检测方法，其特征在于：所述步骤a中多膜离心过滤的离心速率为5000-8000r/min。
3.根据权利要求1或2所述的大肠杆菌的检测方法，其特征在于：所述步骤a中过滤膜的厚度为0.2-0.44μm。
4.根据权利要求1所述的大肠杆菌的检测方法，其特征在于：所述步骤c中三份稀释液a1的培养温度为30-34℃，培养时间为15-20h。
5.根据权利要求1所述的大肠杆菌的检测方法，其特征在于：所述步骤c中三份稀释液a2的培养温度为30-34℃，培养时间为15-20h。
6.根据权利要求1所述的大肠杆菌的检测方法，其特征在于：所述步骤c中三份稀释液a3的培养温度为30-34℃，培养时间为15-20h。
7.根据权利要求1所述的大肠杆菌的检测方法，其特征在于：所述步骤c中三份稀释液a4的培养温度为30-34℃，培养时间为15-20h。
8.根据权利要求1所述的大肠杆菌的检测方法，其特征在于：所述步骤c中三份稀释液a5的培养温度为30-34℃，培养时间为15-20h。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510382606.0A CN104988205A (zh) | 2015-07-02 | 2015-07-02 | 一种大肠杆菌的检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510382606.0A CN104988205A (zh) | 2015-07-02 | 2015-07-02 | 一种大肠杆菌的检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104988205A true CN104988205A (zh) | 2015-10-21 |
Family
ID=54300098
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510382606.0A Pending CN104988205A (zh) | 2015-07-02 | 2015-07-02 | 一种大肠杆菌的检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104988205A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108841915A (zh) * | 2018-07-12 | 2018-11-20 | 成都科美迪检验检测有限公司 | 一种食品中大肠杆菌的检验检测方法 |
| CN112695065A (zh) * | 2020-12-29 | 2021-04-23 | 陕西唐王天洋制药有限公司 | 快速检测大肠杆菌试验方法 |
-
2015
- 2015-07-02 CN CN201510382606.0A patent/CN104988205A/zh active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108841915A (zh) * | 2018-07-12 | 2018-11-20 | 成都科美迪检验检测有限公司 | 一种食品中大肠杆菌的检验检测方法 |
| CN112695065A (zh) * | 2020-12-29 | 2021-04-23 | 陕西唐王天洋制药有限公司 | 快速检测大肠杆菌试验方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8778629B2 (en) | Sterility test method and totally enclosed bacterial ampoule incubator used by it | |
| CN104611403A (zh) | 食品和餐饮具中大肠菌群快速检测纸片的制备与应用 | |
| CN105132519B (zh) | 一种用于大肠杆菌定量检测的选择性培养基及大肠杆菌定量检测方法 | |
| CN107523604A (zh) | 一种细菌粘附细胞的快速检测方法及应用 | |
| Szermer-Olearnik et al. | Comparison of microbiological and physicochemical methods for enumeration of microorganisms | |
| JP2008136440A (ja) | シリンジ型微生物培養デバイス | |
| CN104988205A (zh) | 一种大肠杆菌的检测方法 | |
| CN105779564A (zh) | 一种食品中大肠杆菌的快速检测方法 | |
| CN101413872B (zh) | 一种微生物活菌数快速检测方法 | |
| CN106544436B (zh) | 一种检测纺织品中沙门氏菌的方法 | |
| CN104789637A (zh) | 一种快速检测纺织品中大肠菌群的方法 | |
| CN103060186B (zh) | 一种水产迟钝爱德华氏菌快速药敏检测试剂盒 | |
| RU2531236C1 (ru) | Способ обнаружения микроорганизма вида vibrio parahaemolyticus | |
| CN104593476A (zh) | 近海岸大肠杆菌检测方法 | |
| CN103614453A (zh) | 医学微生物学实验胃肠道细菌检测方法 | |
| CN102304585A (zh) | 金黄色葡萄球菌免疫捕捉pcr的检测试剂盒和试剂盒使用方法 | |
| Whittemore | Research note: a modified most probable number technique to enumerate total aerobes, enterobacteriaceae, and Salmonella on poultry carcasses after the whole carcass rinse procedure | |
| Negretti et al. | Methods to study Campylobacter jejuni adherence to and invasion of host epithelial cells | |
| CN107201400A (zh) | 禽大肠杆菌、鸡伤寒沙门菌、鸡白痢沙门菌等的五重pcr检测方法及检测试剂盒 | |
| CN111961704A (zh) | 一种食品中金黄色葡萄球菌定量检测方法 | |
| CN108841915A (zh) | 一种食品中大肠杆菌的检验检测方法 | |
| Odumeru et al. | Evaluation of the MicroFoss system for enumeration of total viable count, Escherichia coli and coliforms in ground beef | |
| CN207877751U (zh) | 一种新型用于检测大肠埃希菌的定量计数鉴定培养皿 | |
| CN206671203U (zh) | 一种用于检测食品中多种微生物的检测盒 | |
| CN104745706A (zh) | 鲍曼不动杆菌携带qacE*1-sull基因的检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20151021 |
|
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |