CN101820899A - 治疗肺癌、特别是非小肺癌(nsclc)的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及活性(免疫刺激性)组合物，其包括至少一种RNA，优选mRNA，其编码至少两种(优选不同的)能够在哺乳动物中引发(适应性)免疫反应的抗原。本发明还涉及包括所述活性(免疫刺激性)组合物的疫苗，涉及所述活性(免疫刺激性)组合物(用于制备疫苗)的应用和/或所述疫苗用于引发(适应性)免疫反应以用于治疗肺癌、特别是非小细胞肺癌(NSCLC)、或与其相关的病症的应用，所述肺癌优选选自三种主要亚型的鳞状细胞肺癌、腺癌和大细胞肺癌。最后，本发明涉及包含所述活性(免疫刺激性)组合物和/或所述疫苗的试剂盒，特别是多部件的试剂盒。

Description

治疗肺癌、特别是非小肺癌(NSCLC)的组合物
本发明涉及活性(免疫刺激性)组合物，其包括至少一种RNA，优选mRNA，其编码至少两种(优选不同的)能够在哺乳动物中引发(适应性)免疫反应的抗原。本发明还涉及包括所述活性(免疫刺激性)组合物的疫苗，涉及所述活性(免疫刺激性)组合物(用于制备疫苗)的应用和/或所述疫苗用于引发(适应性)免疫反应以用于治疗肺癌、特别是非小细胞肺癌(NSCLC)、或与其相关的病症的应用，所述肺癌优选选自三种主要亚型的鳞状细胞肺癌、腺癌和大细胞肺癌。最后，本发明涉及包含所述活性(免疫刺激性)组合物和/或所述疫苗的试剂盒，特别是多部件的试剂盒。
在所有的恶性肿瘤中，有25％为支气管癌(肺癌)。在全世界范围内，这是男性中最常见的癌症相关的死亡原因，女性中第二常见的癌症相关的死亡原因。在德国，它是排在前列腺癌(carcinoma of the prostata)和结肠直肠癌之后的第三大类最多的癌症。它每年在世界范围内引起130万例死亡。在中欧，发病率为约60人/100.000名居民，并且最近诊断患有肺癌的人数稳步上升(在德国，目前为约50.000/年)，当诊断患有肺癌时，平均总共5年的存活率仅为5％。此外，每名个别患者的生命预期完全取决于疾病阶段(TMN分类)和患有的癌症(肺癌)的亚型(见下文)。
由在显微镜下鉴定的恶性细胞的尺寸和外观分类的肺癌的主要亚型为小细胞肺癌(20％)和非小细胞肺癌(NSCLC)(80％)。尽管是基于单纯的组织学标准，但是这种分类对于疾病的临床管理和预后具有非常重要的意义，其中小细胞肺癌通常通过化疗进行治疗，而非小细胞肺癌主要进行手术作为一线治疗。
非小细胞肺癌(NSCLC)分组在一起，是因为它们的预后和管理大致相同。存在三种主要的亚型：鳞状细胞肺癌，腺癌和大细胞肺癌。手术是主要的治疗，然而，仅有四分之一的患者进行了成功的切除，具有50％的复发率。晚期疾病的治疗方法包括----在手术后----辅助的化疗和/或辅助的放疗，而化疗作为单一治疗(一线治疗)似乎是与相对较差的结果相关的方法。在四种常用的组合化疗方案的比较中，没有一种是优越的。响应率从15％到22％变化，1年的存活率为31％-36％(参见，例如，O′Mahony，D.，S.Kummar，等.(2005).″Non-small-cell lung cancer vaccine therapy：aconcise review.(非小细胞肺癌疫苗治疗：简短综述)″J Clin Oncol(临床肿瘤学杂志)23(35)：9022-8)。因此，即使手术前的化疗似乎尚未导致生命预期的延长，但是辅助的化疗----还包括如果与放疗组合----没有显示出生命预期的显著增加。
当前所用的一种化疗方法是组合基于铂的物质与例如吉西他滨(Gemcitabin)甚至作为一线治疗，而例如培美曲塞用作二线治疗。
用于NSCLC治疗的另一选择是所谓的“靶向治疗”，其试图通过在分子水平上影响肿瘤特异性靶标结构而提高经典细胞毒性化疗的成功性。所用的物质包括贝伐单抗(血管生成抑制剂)或厄洛替尼，其目的在于表皮生长因子受体(EGFR)的酪氨酸激酶。
即使无疑在当前的肺癌、特别是NSCLC的治疗方法处理中存在一些提高，但是由于高死亡率，对于其它、备选的或改进的治疗方法的强烈需求仍然是一场艰难的战斗。
因此，本文建议在NSCLC治疗方法中应用免疫系统。免疫系统在多种疾病的治疗和预防中起着重要的作用。按照目前的知识水平，哺乳动物提供了多种机制通过识别和杀死例如肿瘤细胞来保护生物体。这些肿瘤细胞必须检测到并且与生物体的正常细胞和组织区别开来。
脊椎动物如人的免疫系统由多种类型的蛋白、细胞、器官、和组织组成，其以精细的和动态的网络相互作用。作为该种更复杂的免疫反应的部分，脊椎动物系统随时间适应更有效地识别特定病原体或肿瘤细胞。适应过程产生免疫学记忆，并且允许在将来相遇过程中甚至更有效的保护。该适应性或获得性免疫性过程形成接种策略的基础。
适应性免疫系统是抗原特异性的，并且需要在称为抗原呈递的过程中识别特定的“自体”或“非自体”抗原。抗原特异性允许产生专门针对特定病原体或病原体-感染细胞或肿瘤细胞的反应。固定这些专门反应的能力在体内通过所谓的“记忆细胞”保持。如果病原体不止一次感染机体，则这些特异性记忆细胞用来快速清除其。因此，适应性免疫系统允许更强的免疫反应以及允许免疫学记忆，其中每种病原体或肿瘤细胞被一种或多种特征抗原“记住”。
脊椎动物中适应性免疫系统的主要成分在细胞水平主要包括淋巴细胞，在分子水平主要包括抗体。淋巴细胞作为适应性免疫系统的细胞成分包括B细胞和T细胞，其来源于骨髓中的造血干细胞。B细胞参与体液反应，而T细胞参与细胞介导的免疫反应。B细胞和T细胞携带识别特定靶标的受体分子。仅在抗原(例如，病原体的小片段)已经被处理且与称为主要组织相容性复合体(MHC)分子的“自我”受体组合呈递后，T细胞识别“非自我”靶标，如致病性靶标结构。相反，B细胞抗原特异性受体是在B细胞表面上的抗体分子，并且当其表面上的抗体与特异性外源抗原结合时，识别这样的病原体。该抗原/抗体复合体被B细胞吸收，并且通过蛋白质水解作用处理成肽。然后，B细胞在其表面II类MHC分子上展示这些抗原肽。MHC和抗原的这种组合吸引匹配的辅助T细胞，其释放淋巴因子并且激活B细胞。因为活化的B细胞然后开始分化，其后代分泌数百万拷贝的识别该抗原的抗体。这些抗体在血浆和淋巴中循环，结合病原体或表达所述抗原的肿瘤细胞，并且将它们标记，用以通过补体激活进行分解或用以通过吞噬细胞吸收和分解。
作为适应性免疫系统的细胞成分，细胞毒性T细胞(CD8+)可以形成CTL-反应。细胞毒性T细胞(CD8+)可以识别来自内源性病原体的肽和由I型MHC分子结合的自体抗原。CD8+-T细胞通过在细胞中释放细胞毒性蛋白而行使它们的杀伤功能。
免疫系统机制形成有疗效的治疗的靶标。适当的方法典型地基于施用佐剂，以引发先天性免疫反应，或者基于施用抗原或免疫原，以激发适应性免疫反应。由于抗原典型地是基于病原体(例如，表面蛋白)或其片段的特定成分，所以还考虑向患者施用核酸然后其表达需要的多肽、蛋白或抗原。
迄今为止引发免疫反应，免疫或接种的常规方法是基于DNA分子的应用，以将需要的遗传信息结合到细胞中。已经开发了多种方法，用以将DNA引入到细胞中，如磷酸钙转染，聚戊二烯转染、原生质体融合，电穿孔，显微注射和脂质转染法，已经特别证明脂质转染法是合适的方法。DNA病毒可以同样用作DNA赋形剂。由于它们的感染特性，所述病毒实现非常高的转染率。所用的病毒以这样的方式进行遗传修饰，以致在转染细胞中不形成功能性感染颗粒。然而，尽管有这些防范，不可能排除所引入的基因和病毒基因的不可控的繁殖的风险，这是例如由于潜在的重组事件引起。这还伴随着例如通过重组DNA被插入到宿主细胞基因组的完整基因中的危险，产生这样的后果，即，该基因可能突变，并且因此完全或部分失活，或者可能产生错误信息。换言之，对细胞至关重要的基因产物的合成完全被抑制，或者备选地表达修饰的或错误的基因产物。如果DNA整合到参与细胞生长调控的基因中，则发生一种特别的危险。在该情形中，宿主细胞可能变成退化的，并且导致癌症或肿瘤形成。此外，如果引入到细胞中的DNA将被表达，则相对应的DNA赋形剂需要包含强启动子，如病毒CMV启动子。所述启动子整合到治疗的细胞的基因组中可以在细胞中导致基因表达调控的不需要的改变。使用DNA作为诱导免疫反应的试剂(例如，作为疫苗)的另一种危险是在已经引入了外源DNA的患者中诱导致病性抗-DNA抗体，因此导致(可能致死性)的免疫反应。
因此，综上所述，对于有效的系统存在空间和需求，所述有效的系统可以用来有效地刺激免疫系统，以允许治疗肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)，同时避免由于基于DNA的组合物引起的所引入的基因的不可控增殖的问题。
因此，本发明的目的是提供一种组合物，其a)允许通过刺激免疫系统治疗肺癌，同时b)避免上述提及的缺点。
这一目的由本发明的主题解决，特别是由活性(免疫刺激性)组合物解决，所述活性(免疫刺激性)组合物包括至少一种RNA，其编码选自包括下列抗原的组的至少两种(优选不同的)抗原：
·hTERT，
·WT1，
·MAGE-A2，
·5T4，
·MAGE-A3，
·MUC1，
·Her-2/neu，
·NY-ESO-1，
·CEA，
·存活蛋白，
·MAGE-C1，和/或
·MAGE-C2。
令人吃惊地，已经发现前文提及的组的至少两种抗原、抗原性蛋白或抗原性肽的特定组合，被包含在本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物中，能够有效地刺激(适应性)免疫系统，以允许治疗肺癌，特别是非小细胞肺癌(NSCLC)。在本文中，术语抗原、抗原性蛋白或抗原性肽可以同义使用。在本发明的上下文中，本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物还应该理解为一种组合物，其能够引发免疫反应，优选是本文定义的适应性免疫反应，这是由于所述活性(免疫刺激性)组合物的成分所包含或所编码的成分之一引起，优选是由编码至少两种(优选不同的)抗原的至少一种RNA，优选是(m)RNA引起。
所述活性(免疫刺激性)组合物的至少一种RNA可以编码hTERT。在本发明的上下文中，“hTERT”是人端粒末端转移酶反转录酶，并且编码“hTERT”的RNA、优选mRNA的优选序列----如果用于本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物中----显示在图7中(SEQ ID NO：7)，并且----甚至更优选地，显示在图8中(SEQ ID NO：8)。Minev，Hipp等.(2000)描述了端粒末端转移酶是一种核糖核蛋白酶，其已经与人细胞中的恶性转化相联系(Minev，B.，J.Hipp，等，(2000).″Cytotoxic T cell immunity againsttelomerase reverse transcriptase in humans.(针对人中端粒末端转移酶反转录酶的细胞毒性T细胞免疫性)″Proc Natl Acad Sci USA(美国国家科学院学报)97(9)：4796-801)。在非常大部分的人肿瘤中，端粒末端转移酶活性升高，使得其基因产物成为所有人肿瘤最常见的分子。因此，内源性加工的与I类MHC分子结合的端粒末端转移酶肽的产生可能使细胞毒性T淋巴细胞(CTL)靶向不同来源的肿瘤。因此，根据它们，这可能促进针对癌症的疫苗治疗，条件是在正常成人和癌症患者中识别端粒末端转移酶肽的前体CTL可以通过免疫扩充。他们还证明，在体外针对来自端粒末端转移酶反转录酶(hTRT)的两种HLA-A2.1限制性肽免疫的大部分正常个体和患有前列腺癌的患者发展了hTRT-特异性的CTL。Carpenter和Vonderheide(2006)(Carpenter，E.L.和R.H.Vonderheide(2006)；″Telomerase-based immunotherapy of cancer(基于端粒末端转移酶的癌症免疫治疗).″Expert Opin Biol Ther(生物学治疗的专家观点)6(10)：1031-9)报道了从1997年克隆人端粒末端转移酶反转录酶(hTERT)到hTERT作为抗肿瘤免疫治疗靶标的第一次临床试验的进展已经是迅速的。hTERT在大部分人癌症中是过量表达的，而其在正常的成人组织中具有有限的表达。其在肿瘤形成中起着重要作用，并且可以由癌症干细胞表达。然而，尽管是自体抗原，hTERT在体外和体内均是免疫原性的。已经在患有乳腺癌、前列腺癌、肺癌和其它癌症的患者中完成了一些I期hTERT免疫治疗研究，并且临床和免疫学结果是令人鼓舞的。在不存在临床毒性的条件下，免疫治疗诱导患者中的功能性抗肿瘤T细胞。对于基于hTERT的治疗，还可以考虑作为免疫预防策略而接种个体的时机。Nair，S.K.和Heiser等，(2000)描述了在用转导了鼠TERT RNA的树突细胞接种的小鼠中诱导了抗鼠TERT免疫性(参见Nair，S.K.，A.Heiser，等，(2000).″Induction of cytotoxic T cell responses and tumor immunity against unrelatedtumors using telomerase reverse transcriptase RNA transfected dendritic cells.(使用端粒末端转移酶反转录酶RNA转染的树突细胞诱导细胞毒性T细胞反应和针对不相关的肿瘤的肿瘤免疫性)″Nat Med(自然医学)6(9)：1011-7.)。按照优选实施方案，因此，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以编码选自如图7所示(SEQ ID NO：7)，且----更优选地图8所示(SEQ ID NO：8)的序列的hTERT抗原。按照更优选的实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以备选地或另外编码选自下列各项的hTERT抗原：如图7所示(SEQ ID NO：7)，且----更优选地图8所示(SEQ ID NO：8)的hTERT序列的片段、变体或表位。
所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA还可以编码WT1。在本发明的上下文中，“WT1”是维尔姆斯瘤1，并且优选的编码“WT1”的RNA序列、优选mRNA序列----如果用在本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物中----显示在图9中(SEQ ID NO：9)，更优选显示在图10中(SEQ ID NO：10)，并且-甚至更优选地-显示在图11中(SEQ ID NO：11)。Oka，Y.A.和Tsuboi等，(2004)发现维尔姆斯瘤蛋白在肺癌中过量表达(参见Oka，Y.，A.Tsuboi，等，(2004).″Induction of WT1(Wilms′tumorgene)-specific cytotoxic T lymphocytes by WT1 peptide vaccine and theresultant cancer regression.(通过WT1肽疫苗诱导WT1(维尔姆斯瘤基因)-特异性细胞毒性T淋巴细胞和所获得的癌症衰退)″Proc Natl Acad Sci USA(美国国家科学院学报)101(38)：13885-90)。Oka等，(2004，同前所述)用来源于WT1的肽接种了10名肺癌患者。他们可表明，临床反应与抗肿瘤CD8+T细胞活性相关。维尔姆斯瘤基因WT1在白血病和多种类型的实体瘤中过量表达，并且证明WT1蛋白是针对这些恶性肿瘤的免疫治疗的令人感兴趣的靶标抗原。Oka等，(2004，同前所述)报道了基于WT1肽的免疫治疗用于患有乳腺癌或肺癌、脊髓发育不良综合征、或急性骨髓性白血病的患者的I期临床研究的结果。对于可以评估WT1接种功效的20名患者中有12名表现出临床响应，如白血病母细胞或肿瘤尺寸和/或肿瘤标记的减少。在WT1接种后的WT1-特异性细胞毒性T淋巴细胞的频率和临床响应的增加之间观察到明显的相关性。因此，证明WT1接种可能诱导WT1-特异性细胞毒性T淋巴细胞，并且导致癌症衰退，而不损伤正常组织。按照优选实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以因此编码选自如图9(SEQ ID NO：9)所示，且-更优选地，如图10(SEQ ID NO：10)所示且甚至更优选地如图11(SEQ ID NO：11)所示的序列的WT1抗原。按照更优选的实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以备选地或另外地编码选自下列各项的WT1抗原：如图9(SEQ ID NO：9)所示，且-更优选地，如图10(SEQ ID NO：10)所示，且甚至更优选地如图11(SEQ ID NO：11)所示的WT1序列的片段、变体或表位。
所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA还可以编码MAGE-A2。在本发明上下文中，“MAGE-A2”是黑素瘤抗原家族A，2B，并且优选的编码“MAGE-A2”的RNA序列、优选是mRNA序列----如果用在本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物中----显示在图14(SEQ ID NO：14)中，且-甚至更优选地-显示在图15(SEQ ID NO：15)中。Gillespie和Coleman(1999)(Gillespie，A.M.和R.E.Coleman(1999).″The potentialof melanoma antigen expression in cancer therapy.(黑素瘤抗原表达在癌症治疗中的潜力)″Cancer Treat Rev(癌症治疗综述)25(4)：219-27)报道了在膀胱癌、乳腺癌、结肠直肠癌、胃癌、头颈癌、肺癌、上颌骨癌、黑素瘤、食管癌、骨肉瘤、和卵巢癌中的表达。按照优选实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以因此编码选自如图14(SEQ ID NO：14)所示，且-更优选地，如图15(SEQ ID NO：15)所示的序列的MAGE-A2抗原。按照更优选的实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以另外或者备选地编码选自下列各项的MAGE-A2抗原：如图14(SEQ ID NO：14)所示，且-更优选地，如图15(SEQ ID NO：15)所示的MAGE-A2序列的片段、变体或表位。
所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA还可以编码5T4。在本发明的上下文中，“5T4”是滋养层糖蛋白，并且优选的编码“5T4”的RNA序列，优选是mRNA序列--------如果用在本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物中----显示在图3(SEQ ID NO：3)中，且-甚至更优选地-显示在图4(SEQ ID NO：4)中。Harrop，Connolly等，(2006)报道了人癌胚抗原5T4是一种72-kDa的富含亮氨酸的膜糖蛋白，其以高水平表达在胎盘上，并且还表达在宽范围的人癌症上，包括结肠直肠癌、胃癌、肾癌、和卵巢癌，但是在正常组织中很少表达(参见Harrop，R.，N.Connolly，等，(2006).″Vaccination of colorectal cancer patients with modified VacciniaAnkara delivering the tumor antigen 5T4(TroVax)induces immune responseswhich correlate with disease control：a phase I/II trial.(用递送肿瘤抗原5T4(TroVax)的改良安卡拉疫苗(Vaccinia Ankara)接种结肠直肠癌患者诱导与疾病控制相关的免疫反应：I/II期试验)″Clin Cancer Res(临床癌症研究)12(11 Pt1)：3416-24)。5T4的过量表达与患有结肠直肠癌、胃癌和卵巢癌的患者的较差的预后相关。尽管所述组合因素，在TroVax免疫后，在大部分患者(17名中有16名；94％)中诱导了5T4-特异性细胞和/或体液免疫反应，与多种其它癌症免疫治疗实验相比较，认为其是令人鼓舞的。总之，他们证明了通过i.m.和i.d.施用途径递送的TroVax的安全性和免疫原性。Zhao和Wang(2007)(Zhao，Y.和Y.Wang(2007).″5T4oncotrophoblast glycoprotein：janus molecule in life and a novel potentialtarget against tumors.(5T4癌滋养层糖蛋白：在生命和新型潜在的抗肿瘤靶标中的两面分子)″Cell Mol Immunol(细胞分子免疫学)4(2)：99-104)报道了5T4癌滋养层糖蛋白是一种表达在胚胎组织和多种恶性肿瘤细胞表面上的跨膜蛋白。它在多种生物学和病理学过程中起着至关重要的作用，包括在胚胎形成过程中的大量细胞迁移，与植入相关的细胞侵入，和肿瘤发生进展中的肿瘤转移。按照Kopreski，Benko等，(2001)，5T4是通常在上皮恶性肿瘤中过量表达的滋养层糖蛋白，其为癌症治疗提供了潜在的靶标(参见Kopreski，M.S.，F.A.Benko，等，(2001).″Circulating RNA asa tumor marker：detection of 5T4 mRNA in breast and lung cancer patientserum.(循环的RNA作为肿瘤标记：在乳腺癌和肺癌患者血清中检测5T4mRNA)″Ann NY Acad Sci(纽约科学学会年刊)945：172-8)。血清收集自19名患有晚期乳腺癌(5名患者)或非小细胞肺癌(14名患者)患者，和25名具有扩增RNA的正常对照志愿者。将由所述血清提取的RNA用半巢式、两阶段反应进行RT-PCR扩增，产物通过凝胶电泳检测。5T4mRNA在8/19(42％)癌症患者血清中可重复检测到，其中包括2/5乳腺癌患者血清和6/14肺癌患者血清，但是仅在3/25(12％)正常对照血清中可重复检测到(p＝0.035)。按照优选实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以因此编码选自如图3(SEQ ID NO：3)所示，且-更优选地，如图4(SEQ ID NO：4)所示的序列的5T4抗原。按照更优选的实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以备选地或另外地编码选自下列各项的5T4抗原：如图3(SEQ ID NO：3)所示，且-更优选地，如图4(SEQ ID NO：4)所示的5T4序列的片段、变体或表位。
所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA还可以编码MAGE-A3。在本发明的上下文中，“MAGE-A3”是黑素瘤抗原家族A，3，并且优选的编码“MAGE-A3”的RNA序列，优选是mRNA序列，----如果用在本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物中----显示在图16(SEQ ID NO：16)中，且-甚至更优选地-显示在图17(SEQ ID NO：17)中。Gillespie和Coleman(1999)(Gillespie，A.M.和R.E.Coleman(1999).″The potentialof melanoma antigen expression in cancer therapy.(黑素瘤抗原表达在癌症治疗中的潜力)″Cancer Treat Rev(癌症治疗综述)25(4)：219-27)报道了在膀胱癌、乳腺癌、结肠直肠癌、胃癌、神经胶质瘤、头颈癌、肺癌、上颌骨癌、黑素瘤、成神经细胞瘤、食管癌和卵巢癌中的表达。Sienel，Varwark等，(2004)描述了为确定在早期非小细胞肺癌(NSCLC)中的MAGE-A3表达率进行的研究(参见Sienel，W.，C.Varwerk，等，(2004).″Melanomaassociated antigen(MAGE)-A3 expression in Stages I and II non-small celllung cancer：results of a multi-center study.(在I和II期非小细胞肺癌中的黑素瘤相关的抗原(MAGE)-A3的表达：多中心研究的结果)″Eur J Cardiothorac Surg(欧洲心肺手术杂志)25(1)：131-4)。收集来自204名具有手术临床I和II期NSCLC的患者的原发性肿瘤样品，并且确定病理学阶段。通过使用反转录酶聚合酶链式反应检测MAGE-A3转录物而分析来自组织样品的MAGE-A3表达。在204份检验的I-II期原发性肿瘤中的80份(39.2％)中观察到MAGE-A3表达。Atanackovic，Altorki等，(2004)描述了MAGE-A3，最初在黑素瘤中鉴定的一种肿瘤相关抗原，还在非小细胞肺肿瘤中发现(参见Atanackovic，D.，N.K.Altorki，等，(2004).″Vaccine-induced CD4+T cell responses to MAGE-3 protein in lung cancerpatients.(在肺癌患者中疫苗诱导的针对MAGE-3蛋白的CD4+T细胞反应)″J Immunol(免疫学杂志)172(5)：3289-96)。在临床试验中，9名NSCLC患者接种该蛋白；3名发展了抗体反应。接受与佐剂ASO2B组合的MAGE-A3的8名患者中有7名产生了针对MAGE-A3的抗体。这些患者中的一些还发展了针对该蛋白的T细胞反应。按照优选实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以因此编码选自如图16(SEQ ID NO：16)所示，且-更优选地，如图17(SEQ ID NO：17)所示的序列的MAGE-A3抗原。按照更优选的实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以备选地或另外地编码选自下列各项的MAGE-A3抗原：如图16(SEQ ID NO：16)，所示，且-更优选地，如图17(SEQ ID NO：17)所示的MAGE-A3序列的片段、变体或表位。
所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA还可以编码MUC1。在本发明的上下文中，“MUC1”是黏蛋白1，并且优选的编码“MUC1”的RNA序列、优选是mRNA序列----如果用在本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物中----显示在图1(SEQ ID NO：1)中，且-甚至更优选地-显示在图2(SEQ ID NO：2)中。癌症相关的黏蛋白是用于免疫治疗的潜在的靶标。认为这些分子通过促进恶性细胞黏附到内皮细胞表面而促进转移。按照Denda-Nagai和Irimura(2000)(Denda-Nagai，K.和T.Irimura(2000).″MUC1 in carcinoma-host interactions.(癌症-宿主相互作用中的MUC1)″Glycoconj J17(7-9)：649-58)，MUC-1在90％的所有腺癌中过量表达，包括乳腺癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、结肠癌和卵巢癌。Kontani，Taguchi等，(2001)发现，已经发现MUC-1在60％的肺癌中表达(参见Kontani，K.，O.Taguchi，等，(2001).″Modulation of MUC1mucin as an escape mechanism of breast cancer cells from autologouscytotoxic T-lymphocytes.(MUC1黏蛋白的调控作为乳腺癌细胞逃离自体细胞毒性T淋巴细胞的逃逸机制)″Br J Cancer(英国癌症杂志)84(9)：1258-64)，而Kontani，Taguchi等，(2003)在分析使用MUC1抗原脉冲的DCs来在MUC1阳性癌症中引发细胞免疫性的研究中发现，临床上9名MUC-1阳性患者中有7名响应该治疗，具有肿瘤标记水平的下降或恶性胸膜渗出的消失(参见Kontani，K.，O.Taguchi，等，(2003).″Dendritic cellvaccine immunotherapy of cancer targeting MUC1 mucin.(靶向MUC1黏蛋白的树突细胞疫苗癌症免疫治疗)″Int J Mol Med(国际分子医学杂志)12(4)：493-502)。这些响应的患者中有三名患有NSCLC。Palmer，Parker等，(2001)报道了在III/IV期NSCLC中使用MUC1肽的I期临床试验中，确定了该试剂的安全性和耐受性(参见Palmer，M.，J.Parker，等，(2001).″Phase I study of the BLP25(MUC1 peptide)liposomal vaccine for activespecific immunotherapy in stage IIIB/IV non-small-cell lung cancer(在IIIB/IV期非小细胞肺癌中用于活性特异性免疫治疗的BLP25(MUC1肽)脂质体疫苗的I期研究).″Clin Lung Cancer(临床肺癌)3(1)：49-57；讨论58)。12名患者中有5名(42％)具有免疫学响应，并且12名患者中有4名(33％)达到了稳定疾病。Wierecky，Mueller等，(2006)还鉴定了TAAMUC1的两种HLA-A2结合的新型9-mer肽，其在多种血液学和上皮恶性肿瘤上过量表达(参见Wierecky，J.，M.Mueller，等，(2006).″Dendriticcell-based cancer immunotherapy targeting MUC-1.(靶向MUC-1的基于树突细胞的癌症免疫治疗)″Cancer Immunol Immunother(癌症免疫学免疫治疗)55(1)：63-7)。在用这些肽脉冲DC后产生的细胞毒性T细胞能够以抗原-特异性和HLA-限制性方式诱导表达MUC1的肿瘤细胞裂解。在两个临床研究中，表明用MUC1衍生的肽脉冲的DCs接种患有晚期癌症的患者是很好耐受的，没有严重的副作用，并且能够诱导免疫学反应。在20名患有转移性肾细胞癌的患者中，6名患者表现出转移的衰退，3名具有客观的响应(1CR，2PR)。按照优选实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以因此编码选自如图1(SEQ ID NO：1)所示，且-更优选地，如图2(SEQ ID NO：2)所示的序列的MUC1抗原。按照其它优选的实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以备选地或另外地编码选自下列各项的MUC1抗原：如图1(SEQID NO：1)中所示，且-更优选地，如图2(SEQ ID NO：2)中所示的MUC1序列的片段、变体或表位。
所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA还可以编码Her-2/neu。在本发明的上下文中，“Her-2/neu”是v-erb-b2成红血细胞白血病病毒癌基因同源物2，并且优选的编码“Her-2/neu”的RNA序列、优选是mRNA序列----如果用在本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物中----显示在图5(SEQ ID NO：5)中，且-甚至更优选地-显示在图6(SEQ IDNO：6)中。按照Baxevanis，Sotiropolou等，(2004)，HER-2/neu(还已知为HER2或c-erb-B2)是一种具有酪氨酸激酶活性和广泛的针对表皮生长因子(EGF)受体的同源性的185-kDa蛋白受体(参见Baxevanis，C.N.，P.A.Sotiropoulou，等，(2004).″Immunobiology of HER-2/neu oncoprotein and itspotential application in cancer immunotherapy.(HER-2/neu癌蛋白的免疫生物学及其在癌症免疫治疗中潜在的应用)″Cancer Immunol Immunother(癌症免疫学和免疫治疗)53(3)：166-75)。HER-2/neu在多种上皮肿瘤中表达，并且已知在约20-25％的所有的卵巢癌和乳腺癌、35-45％的所有的胰腺癌、和多至90％的结肠直肠癌中过量表达。HER-2/neu过量表达代表较差的预后的标记。已经在乳腺、卵巢、胰腺、结肠、肺和其它组织的恶性肿瘤中观察到Her-2的过量表达。正常情况下，Her-2以低水平在多种人组织(皮肤，消化道上皮，乳腺，卵巢，肝细胞)中表达。Bernhard，Salazar(2002)在他们的结论中报道，针对HER-2/neu主动免疫癌症患者的临床试验的早期结果表明可能产生免疫性，并且免疫反应持续一段时间(参见Bernhard，H.，Salazar L.，等，(2002).″Vaccination against the HER-2/neuoncogenic protein.(针对HER-2/neu致瘤蛋白的接种)″Endocr Relat Cancer(内分泌相关癌症)9(1)：33-44)。当前的疫苗试验完全集中于基于表位或基于肽的疫苗的使用，主要是由于这样的观察，即，在啮齿动物模型中肽疫苗策略可能回避neu-特异性耐受性。按照Bernhard等，(2002，同前所述)的下一代疫苗方法将可能包括基于蛋白的疫苗，负载在DC上的HER-2/neu抗原制备物，和基于核酸的制剂。在啮齿动物模型中在临床前水平研究这些策略的研究是有希望的。因此，在主动免疫后离体扩增HER-2/neu-特异性T-细胞或用表达HER-2/neu的DC在体外培养被认为是治疗晚期过度表达HER-2/neu的肿瘤的治疗选择。Baxevanis，Sotiridou等，(2006)发现，在人类中，尽管已经检测到针对用于接种的肽的免疫学反应，但是尚没有记述临床响应(参见Baxevanis，C.N.，N.N.Sotiriadou，等，(2006).″Immunogenic HER-2/neu peptides as tumor vaccines.(作为肿瘤疫苗的免疫原性HER-2/neu肽)″Cancer Immunol Immunother(癌症免疫学免疫治疗)55(1)：85-95)。按照Disis，Gooley等，(2002)，Her-2/neu是EGFR家族的一员(参见Disis，M.L.，T.A.Gooley，等，(2002).″Generation ofT-cell immunity to the HER-2/neu protein after active immunization withHER-2/neu peptide-based vaccines.(用基于HER-2/neu肽的疫苗主动免疫后产生针对HER-2/neu蛋白的T细胞免疫性)″J Clin Oncol(临床肿瘤学杂志)20(11)：2624-32)。它通常在乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、结肠癌和肺癌中过量表达。在I期临床试验中，38名患者(2名患有NSCLC)用Her-2/neu肽接种。92％的患者发展了针对Her-2/neu的T-细胞免疫性。按照优选实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以因此编码选自如图5(SEQ ID NO：5)所示，且-更优选地，如图6(SEQ ID NO：6)所示的序列Her-2/neu抗原。按照更优选的实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以备选地或另外地编码选自下列各项的Her-2/neu抗原：如图5(SEQ ID NO：5)所示，且-更优选地，如图6(SEQ ID NO：6)所示的Her-2/neu序列的片段、变体或表位。
所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA还可以编码NY-ESO-1。在本发明的上下文中，“NY-ESO-1”是癌症/睾丸抗原1B，并且优选的编码“NY-ESO-1”的RNA序列、优选是mRNA序列----如果用在本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物中----显示在图20(SEQ ID NO：20)中，且-甚至更优选地-显示在图21(SEQ ID NO：21)中。Chen，Scanlan等，(1997)报道了通过RT-PCR发现NY-ESO-1在多种人肿瘤中的mRNA表达，黑素瘤23/67，卵巢癌2/8，乳腺癌10/33，甲状腺癌2/5，前列腺癌4/16，膀胱癌4/5，结肠癌0/16，伯基特淋巴瘤1/2，神经胶质瘤0/15，基底细胞癌0/2，胃癌0/12，平滑肌肉瘤0/2，肺癌2/12，其它肉瘤0/2，肾癌0/10，胰腺癌0/2，淋巴瘤0/10，精原细胞瘤0/1，肝细胞瘤2/7，脊髓瘤0/1(参见Chen，Y.T.，M.J.Scanlan，等，(1997).″A testicular antigenaberrantly expressed in human cancers detected by autologous antibodyscreening.(通过自体抗体筛查检测到在人癌症中异常表达的睾丸抗原)″Proc Natl Acad Sci USA(美国国家科学院学报)94(5)：1914-8)。Jager，Karbach等，(2006)报道了NY-ESO-1是在宽范围人恶性肿瘤中表达的癌症/睾丸抗原，并且正在开发多种靶向NY-ESO-1的疫苗策略(参见Jager，E.，J.Karbach，等，(2006).″Recombinant vaccinia/fowlpox NY-ESO-1vaccines induce both humoral and cellular NY-ESO-1-specific immuneresponses in cancer patients.(重组痘苗/禽痘NY-ESO-1疫苗在癌症患者中诱导体液和细胞NY-ESO-1-特异性免疫反应)″Proc Natl Acad Sci USA(美国国家科学院学报)103(39)：14453-8)。在本研究中，在一系列具有一定范围的不同肿瘤类型的36名患者中分析重组痘苗-NY-ESO-1和重组禽痘-NY-ESO-1的安全性和免疫原性。每种构建体首先以两种不同的剂量水平检测，然后用重组痘苗-NY-ESO-1之后是重组禽痘-NY-ESO-1的引发-加强设定。所述疫苗不论是单独的还是一起的很好耐受。通过以每月一次的时间间隔至少4次接种的过程，在高比例的患者中诱导了针对宽范围的NY-ESO-1表位的NY-ESO-1-特异性抗体反应和/或特异性CD8和CD4T细胞反应。源自5名接种的患者的CD8T细胞克隆表现出裂解表达NY-ESO-1的黑素瘤靶细胞。在数名患有黑素瘤的患者中，存在强烈的印象，即，疾病的自然过程有利地被接种影响。Davis，Chen等，(2004)报道了皮内注射的HLA-A2-限制性NY-ESO-1肽表现出是安全和免疫原性的(Davis，I.D.，W.Chen，等，(2004).″Recombinant NY-ESO-1 protein withISCOMATRIX adjuvant induces broad integrated antibody and CD4(+)andCD8(+)T cell responses in humans.(重组NY-ESO-1蛋白与ISCOMATRIX佐剂在人中诱导广泛整合的抗体和CD4(+)与CD8(+)T细胞反应)″ProcNatl Acad Sci USA(美国国家科学院学报)101(29)：10697-702)。尽管设计这些试验仅是为了确定安全性和免疫原性，但是一些患者表现出肿瘤衰退或疾病的稳定。Jager，Gnjatic等，(2000)进一步表示，在具有切除的表达NY-ESO-1的黑素瘤的患者中用重组NY-ESO-1蛋白组合ISCOMATRIX佐剂(CSL Ltd.，Parkville，Victoria，澳大利亚)免疫后，观察到广泛的NY-ESO-1-特异性免疫反应，包括抗体和CD4与CD8T细胞反应(参见Jager，E.，S.Gnjatic，等，(2000).″Induction of primary NY-ESO-1immunity：CD8+T lymphocyte and antibody responses in peptide-vaccinatedpatients with NY-ESO-1+cancers.(诱导一级NY-ESO-1免疫性：在肽-接种的NY-ESO-1+癌患者中的CD8+T淋巴细胞和抗体反应)″Proc NatlAcad Sci USA(美国国家科学院学报)97(22)：12198-203)。这种针对疫苗的免疫反应似乎与长久的无疾病存活相关。此外，Odunsi，Qian等，(2007)报道用NY-ESO-1肽接种在卵巢癌中诱导整合的体液和T细胞反应(参见Odunsi，K.，F.Qian，等，(2007).″Vaccination with an NY-ESO-1peptide of HLA class I/II specificities induces integrated humoral and T cellresponses in ovarian cancer.(用HLA I/II类特异性NY-ESO-1肽接种诱导整合的体液和T细胞反应)″Proc Natl Acad Sci USA(美国国家科学院学报)104(31)：12837-42)。按照优选实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以因此编码选自如图20(SEQ ID NO：20)所示序列，且-更优选地，如图21(SEQ ID NO：21)所示的序列的NY-ESO-1抗原。按照更优选的实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以备选地或另外地编码选自下列各项的NY-ESO-1抗原：如图20(SEQ ID NO：20)所示，且-更优选地，如图21(SEQ ID NO：21)所示的NY-ESO-1序列的片段、变体或表位。
所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA还可以编码CEA。在本发明的上下文中，“CEA”是癌胚抗原(CECAM5＝癌胚抗原-相关细胞黏附分子5)，并且优选的编码“CEA”的RNA序列、优选是mRNA序列----如果用在本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物中----显示在图12(SEQ ID NO：12)中，且-甚至更优选地-显示在图13(SEQID NO：13)中。按照Hammarstrom(1999)，CEA是一种180kDa的作用为黏附分子的胎性癌糖蛋白，并且在70％的NSCLC中过量表达(Hammarstrom，S.(1999).″The carcinoembryonic antigen(CEA)family：structures，suggested functions and expression in normal and malignant tissues.(癌胚抗原(CEA)家族：结构、提议的功能和在正常和恶性组织中的表达)″Semin Cancer Biol(癌症生物学研讨会)9(2)：67-81)。Berinstein(2002)报道了CEA具有作为抗癌主动接种方法的靶标的多种令人感兴趣的特征(Berinstein，N.L.(2002).″Carcinoembryonic antigen as a target fortherapeutic anticancer vaccines：a review.(癌胚抗原作为治疗性抗癌疫苗的靶标：综述)″J Clin Oncol(临床肿瘤学杂志)20(8)：2197-207)。它具有有利的表达模式，并且在多于50％的所有人类癌症中表达。它自身可能在肿瘤发生过程中起作用，并且因此在整个癌症进展过程中其表达可以被选择和保守的。已经充分证明，CEA在多种1类MHC分子上加工和呈递。此外，针对CEA的免疫学耐受性不是绝对的。存在大量的数据证明人T细胞可以识别、变成激活的、并且裂解表达CEA的癌细胞。已经评估了一些使用CEA作为靶抗原的不同的治疗性接种方法。已经确定了这些方法的安全性。另外，已经证明了针对CEA的体液和/或细胞反应。尽管Berinstein(2002，同前所述)描述的为这些研究所选的大部分患者患有非常晚期和难以治愈的转移性结肠癌，但是已经记录了一些临床活性证据，在一些患者中发生的疾病稳定性和甚至是客观的响应。用激动剂CEAI类MHC结合肽(CAP1-6D)和有或无共刺激分子的结合CEA的基于痘病毒的载体脉冲的树突细胞似乎在激活CD8 T-细胞反应中最活跃。不幸的是，树突细胞方法可能受到获得患者-特异性的树突细胞制备物的后勤(logistic)困难的限制。报道了使用金丝雀痘载体系统靶向CEA的四次I期研究。这些试验表明所述方法是安全的，具有主要局限在注射部位的轻微的1级和2级毒性。此外，所述试验表明在大部分患者中可以激活针对CEA的特异性细胞T细胞反应。这些反应可以通过在所述载体中包含B7.1共刺激分子或通过在注射部位加入重组GM-CSF而增强。尽管没有报道客观的临床响应，但是在这些I期研究中的显著比例的患者已经经历了疾病稳定性。进一步增强识别CEA的T细胞频率的接种策略认为是对这些疫苗的临床活性的进一步加强。存在数据表明至少一些疫苗可能在最小的疾病状态更有效。Ueda，Itoh等(2004)描述了一次研究，其中用CEA-衍生的肽脉冲的自体树突细胞治疗18名患有转移胃肠癌或肺癌的患者(参见Ueda，Y.，T.Itoh，等，(2004).″Dendritic cell-based immunotherapy ofcancer with carcinoembryonic antigen-derived，HLA-A24-restricted CTLepitope：Clinical outcomes of 18 patients with metastatic gastrointestinal orlung adenocarcinomas.(使用癌胚抗原-衍生的、HLA-A24-限制性CTL表位的基于树突细胞的癌症免疫治疗：18名转移胃肠癌或肺腺癌患者的临床结果)″Int J Oncol(国际肿瘤学杂志)24(4)：909-17)。在大部分患者中观察到通过皮肤测试和体外T细胞测定法测量的免疫反应。尽管没有报道客观临床响应，但是一些患者在接受该种免疫治疗时具有稳定的疾病。按照优选实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以因此编码选自如图12(SEQ ID NO：12)所示，且-更优选地，如图13(SEQ ID NO：13)所示的序列的CEA抗原。按照更优选的实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以备选地或另外地编码选自下列各项的CEA抗原：如图12(SEQ ID NO：12)所示，且-更优选地，如图13(SEQ ID NO：13)中所示的CEA序列的片段、变体或表位。
所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA还可以编码存活蛋白。在本发明的上下文中，“存活蛋白”是杆状病毒IAP重复-包含5(存活蛋白)，并且优选的编码“存活蛋白”的RNA序列、优选是mRNA序列----如果用在本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物中----显示在图18(SEQ ID NO：18)中，且-甚至更优选地-显示在图19(SEQ ID NO：19)中。Grube，Moritz等，(2007)描述了存活蛋白(参见Grube，M.，S.Moritz，等，(2007).″CD8+T cells reactive to survivin antigen in patients withmultiple myeloma.(在患有多发性骨髓瘤的患者中与存活蛋白抗原反应的CD8+T细胞)″Clin Cancer Res(临床癌症研究)13(3)：1053-60)。存活蛋白是程序性细胞死亡家族抑制剂中的一员，并且在不同类型的恶性肿瘤中过量表达。可以在体外和通过对患有白血病、乳腺癌、和黑素瘤的患者接种而引发识别存活蛋白表位的细胞毒性T细胞。研究了存活蛋白-特异性CD8+T细胞是否在多发性骨髓瘤患者中存在，并且在23名患者中的9名中和21名健康志愿者中的1名中检测到识别HLA-A2.1-结合存活蛋白肽的T细胞。存活蛋白-反应性T细胞鉴定为终末分化的效应器T细胞(CD8+，CD45RA+，和CCR7-)。在11名患者中的7名中表现出在骨髓样品中骨髓瘤细胞的阳性存活蛋白表达。存活蛋白在大部分上皮和造血来源的人癌细胞中高度表达，并且过量表达与癌症进展、极差的预后、抗性、和短的患者存活相关。Duffy，O’Donovan(2007)描述了存活蛋白是一种在几乎所有的恶性肿瘤中过量表达但是很少在正常分化的成人组织中检测到的16.5kDa蛋白(参见Duffy，M.J.，N.O′Donovan，等，(2007).″Survivin：a promising tumor biomarker.(存活蛋白：有希望的肿瘤生物标记)″CancerLett(癌症通信)249(1)：49-60)。功能上，存活蛋白已经表现出抑制程序性细胞死亡，促进细胞增殖和增强血管形成。与其在这些过程中的作用一致，描述存活蛋白在癌症进展中起着重要的作用。由于在正常和恶性组织之间表达的巨大差异及其在癌症进展中的因果作用，目前正对存活蛋白进行作为潜在的肿瘤标记的强化研究。出现的数据表明存活蛋白的测量可以辅助膀胱癌的早期诊断，确定多种癌症类型的预后，和预测对各种抗癌治疗的响应。Zeis，Siegel等，(2003)证明通过用转染了存活蛋白-RNA的自体树突细胞刺激由PBMC产生的人存活蛋白-特异性CTLs对于一系列的造血恶性细胞系和由急性骨髓性白血病患者分离的原代肿瘤细胞是细胞毒性的(参见Zeis，M.，S.Siegel，等，(2003).″Generation of cytotoxicresponses in mice and human individuals against hematological malignanciesusing survivin-RNA-transfected dendritic cells.(使用存活蛋白-RNA-转染的树突细胞在小鼠和人个体中产生针对造血恶性肿瘤的细胞毒性反应)″JImmunol(免疫学杂志)170(11)：5391-7)。还表明用存活蛋白-RNA-转染的树突细胞接种小鼠导致对表达存活蛋白的淋巴瘤刺激的长期抗性，这证明存活蛋白作为肿瘤排斥性Ag的潜力。提供了存活蛋白用作抗造血性肿瘤的免疫治疗策略的靶标结构的证据。按照优选实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以因此编码选自如图18(SEQID NO：18)所示，且-更优选地，如图19(SEQ ID NO：19)所示的序列的存活蛋白抗原。按照更优选的实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以备选地或另外地编码选自下列各项的存活蛋白抗原：如图18(SEQ ID NO：18)中所示，且-更优选地，如图19(SEQID NO：19)中所示的存活蛋白序列的片段、变体或表位。
所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA还可以编码MAGE-C1。在本发明的上下文中，“MAGE-C1”是黑素瘤抗原家族C，1，并且优选的编码“MAGE-C1”的RNA序列、优选是mRNA序列----如果用在本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物中----显示在图22(SEQ IDNO：22)中，更优选地显示在图23(SEQ ID NO：23)中，且-甚至更优选地-显示在图24(SEQ ID NO：24)中。Lucas，De Smet等，(1998)最近通过进行RDA鉴定了MAGE-C1(参见Lucas，S.，C.De Smet，等，(1998).″Identification of a new MAGE gene with tumor-specific expression byrepresentational difference analysis.(通过代表性差异分析鉴定具有肿瘤-特异性表达的新MAGE基因)″Cancer Res(癌症研究)58(4)：743-52)。除了睾丸之外，MAGE-C1不在所检测的一组正常组织中表达。在肿瘤样品中，MAGE-C1通常在精原细胞瘤、黑素瘤、和膀胱癌中表达。它还在显著部分的头颈癌、乳腺癌、非小肺癌、前列腺腺癌和肉瘤中表达。Jungbluth，Chen等，(2002)描述了在乳腺癌、卵巢癌、肝癌、睾丸癌、膀胱癌、黑素瘤和非小细胞肺癌(39％)中的表达(参见Jungbluth，A.A.，Y.T.Chen，等，(2002).″CT7(MAGE-C1)antigen expression in normal andneoplastic tissues.(CT7(MAGE-C1)抗原在正常和肿瘤组织中的表达)″IntJ Cancer(国际癌症杂志)99(6)：839-45)。Gure，Chua等，(2005)分析了来自523名非小细胞肺癌(NSCLC)患者的肿瘤，分析其癌性睾丸抗原的表达(参见Gure，A.O.，R.Chua，等，(2005).″Cancer-testis genes are coordinatelyexpressed and are markers of poor outcome in non-small cell lung cancer(在非小细胞肺癌中，癌性睾丸基因协同表达并且是极差结果的标记).″ClinCancer Res(临床癌症研究)11(22)：8055-62)。MAGE-C1在18名中存在，为8％。Scanlan，Altorki等，(2000)还报道了CT抗原在33例非小细胞肺癌中的表达：MAGE-C1：30％(参见Scanlan，M.J.，N.K.Altorki，等，(2000).″Expression of cancer-testis antigens in lung cancer：definition ofbromodomain testis-specific gene(BRDT)as a new CT gene，CT9.(癌性睾丸抗原在肺癌中的表达：溴结构域(bromodomain)睾丸-特异性基因(BRDT)作为新CT基因CT9的定义)″Cancer Lett(癌症通信)150(2)：155-64)。按照优选实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以因此编码选自如图22(SEQ ID NO：22)所示，且-更优选地，如图23(SEQ ID NO：23)中所示，且甚至更优选地如图24(SEQ ID NO：24)中所示的序列的MAGE-C1抗原。按照更优选的实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以备选地或另外地编码选自下列各项的MAGE-C1抗原：如图22(SEQ ID NO：22)中所示，且-更优选地，如图23(SEQ ID NO：23)中所示，且甚至更优选地如图24(SEQ ID NO：24)中所示的MAGE-C1序列的片段、变体或表位。
所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA还可以编码MAGE-C2。在本发明的上下文中，“MAGE-C2”是黑素瘤抗原家族C2，并且优选的编码“MAGE-C2”的RNA序列、优选是mRNA序列----如果用在本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物中----显示在图25(SEQ IDNO：25)中，且-甚至更优选地-显示在图26(SEQ ID NO：26)中。Lucas，De Plaen等，(2000)最近通过进行RDA在黑素瘤细胞系上鉴定了MAGE-C2(参见Lucas，S.，E.De Plaen，等，(2000).″MAGE-B5，MAGE-B6，MAGE-C2，and MAGE-C3：four new members of the MAGE family withtumor-specific expression.(MAGE-B5，MAGE-B6，MAGE-C2，和MAGE-C3：四种具有肿瘤特异性表达的MAGE家族新成员)″Iht J Cancer(国际癌症杂志)87(1)：55-60)。除了睾丸之外，MAGE-C2不在所检测的一组正常组织中表达。在肿瘤样品中，MAGE-C2通常在精原细胞瘤、黑素瘤、和膀胱癌中表达。它还在显著部分的头颈癌、乳腺癌、非小肺癌和肉瘤中表达。Scanlan，Altorki等，(2000)报道了CT抗原在33例非小细胞肺癌中的表达：MAGE-C2：30％(参见Scanlan，M.J.，N.K.Altorki，等，(2000).″Expression of cancer-testis antigens in lung cancer：definition ofbromodomain testis-specific gene(BRDT)as a new CT gene，CT9.(癌性睾丸抗原在肺癌中的表达：溴结构域(bromodomain)睾丸-特异性基因(BRDT)作为新CT基因CT9的定义)″Cancer Lett(癌症通信)150(2)：155-64)。按照优选实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以因此编码选自如图25(SEQ ID NO：25)所示，且-更优选地，如图26(SEQ ID NO：26)所示的序列的MAGE-C2抗原。按照更优选的实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以备选地或另外地编码选自下列各项的MAGE-C2抗原：如图25(SEQ ID NO：25)中所示，且-更优选地，如图26(SEQ ID NO：26)中所示的MAGE-C2序列的片段、变体或表位。
上述定义的可以由本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA编码的抗原、抗原蛋白或抗原肽，可以包括那些序列的片段或变体。所述片段或变体可以典型地包括与上文提及的抗原、抗原蛋白或抗原肽或序列或它们的编码核酸序列之一具有至少5％，10％，20％，30％，40％，50％，60％，优选地至少70％，更优选地至少80％，等价地更优选地至少85％，甚至更优选地至少90％且最优选地至少95％或甚至97％，至完整的野生型序列的序列同源性的序列，不管是在核酸水平还是在氨基酸水平上。
在本发明的上下文中，抗原、抗原蛋白或抗原肽的“片段”可以包括如上文定义的抗原、抗原蛋白或抗原肽的序列，关于其氨基酸序列(或编码其的核酸序列)，与原始(天然)蛋白的氨基酸序列(或编码其的核酸序列)相比较，其是N端、C端和/或序列内部截短的。所述截短可以因此发生在氨基酸水平或者相对应的发生在核酸水平上。因此，关于如上文定义的所述片段的序列同源性可以优选地是指如上文定义的完整的抗原、抗原蛋白或抗原肽或所述抗原、抗原蛋白或抗原肽的完整(编码)核酸序列。
在本发明的上下文中，抗原、抗原蛋白或抗原肽的片段还可以包括如上述定义的抗原、抗原蛋白或抗原肽的序列，其具有约6-约20个或甚至更多个氨基酸的长度，例如，由I类MHC分子处理和呈递的片段，优选地具有约8-约10个氨基酸的长度，例如，8，9，或10个，(或者甚至6，7，11，或12个氨基酸)，或由II类MHC分子处理和呈递的片段，优选地具有约13个以上的氨基酸的长度，例如，13，14，15，16，17，18，19，20个或甚至更多个氨基酸，其中这些片段可以选自所述氨基酸序列的任一部分。这些片段典型地以由所述肽片段和MHC分子组成的复合体形式被T细胞识别，即，所述片段典型地不以它们的天然形式被识别。
如本文定义的抗原、抗原蛋白或抗原肽的片段还可以包括那些抗原、抗原蛋白或抗原肽的表位。在本发明的上下文中，表位(还称为“抗原决定簇”)典型地是位于本文定义的(天然)抗原、抗原蛋白或抗原肽的外表面的片段，优选地具有5-15个氨基酸，更优选地具有5-12个氨基酸，甚至更优选地具有6-9个氨基酸，其可以被抗体或B细胞受体识别，即，以它们的天然形式被识别。抗原、抗原蛋白或抗原肽的所述表位还可以选自本文提及的所述抗原、抗原蛋白或抗原肽的变体的任一种。在该情形中，抗原决定簇可以是构象或不连续的表位，其由本文定义的抗原、抗原蛋白或抗原肽的片段组成，所述片段在本文定义的抗原、抗原蛋白或抗原肽的氨基酸序列中是不连续的，但是在三维结构中是在一起的或是由单一多肽链组成的连续的或线性表位。
如上文定义的抗原、抗原蛋白或抗原肽的“变体”可以由本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA编码，其中编码如上文定义的抗原、抗原蛋白或抗原肽的所述至少一种(m)RNA的核酸是交换的。由此，可以产生具有在一个或多个突变，如一个或多个取代的、插入的和/或删除的氨基酸而与原始序列不同的氨基酸序列的抗原、抗原蛋白或抗原肽。优选地，与全长天然抗原或抗原蛋白相比较，这些片段和/或变体具有相同的生物学功能或特异性活性，例如，其特异性抗原特性。
本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA还可以编码上文定义的抗原或抗原蛋白，其中与其生理学序列相比较，所编码的氨基酸序列包括保守氨基酸取代。那些编码的氨基酸序列以及它们的编码核苷酸序列特别落入如上文定义的术语变体中。来源于相同种类的氨基酸与另一种交换的取代称为保守取代。特别地，这些是具有脂肪族侧链、带正电荷或负电荷的侧链、在侧链中具有芳香族基团的氨基酸，或其侧链可以进入氢桥的氨基酸，例如，具有羟基官能的侧链。这意味着，例如，具有极性侧链的氨基酸被具有同样极性侧链的另一种氨基酸替换，或者例如，以疏水侧链为特征的氨基酸被具有同样的疏水侧链的另一种氨基酸取代(例如，丝氨酸(苏氨酸)被苏氨酸(丝氨酸)置换或亮氨酸(异亮氨酸)被异亮氨酸(亮氨酸)置换)。插入和取代是可能的，特别是在对三维结构没有引起修饰或不影响结合区的那些序列位置上。插入或删除对三维结构的修饰可以容易地确定，例如，使用CD光谱确定(圆二色谱)(Urry，1985，Absorption，Circular Dichroism and ORD of Polypeptides(多肽的吸附、圆二色性和ORD)，在：Modern Physical Methods in Biochemistry(生物化学的现代物理方法)中，Neuberger等，(ed.)，Elsevier，阿姆斯特丹)。
此外，如上文定义的抗原、抗原蛋白或抗原肽的变体，其可以由本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA编码，还可以包括那些序列，其中所述至少一种(m)RNA的核酸按照遗传密码的简并性进行交换，不导致所述抗原、抗原蛋白或抗原肽的各自氨基酸序列的改变，即，所述氨基酸序列或至少其部分可以以在上述意义内的一个或多个突变而并不在原始序列上不同。
为了确定两个序列(核酸序列，例如，如本文定义的RNA或mRNA序列，或氨基酸序列，优选地它们编码的氨基酸序列，例如，如上文定义的抗原、抗原蛋白或抗原肽的氨基酸序列)相同的百分比，可以比对序列，以随后与另一种进行比较。因此，例如，可以在第一序列的序列中插入缺口，并且可以比较在第二序列的相对应位置处的成分。如果在第一序列中的位置由与在第二序列中位置处的情形相同的成分占据，则这两个序列在该位置处是相同的。两个序列相同的百分比是相同的位置数目除以位置总数的函数。两个序列相同的百分比可以使用数学算法确定。可以应用的数学算法的一个优选的但非限制性的实例是Karlin 等，(1993)，PNAS USA，90：5873-5877或Altschul 等，(1997)，Nucleic Acids Res.(核酸研究)，25：3389-3402的算法。这样的算法结合在BLAST程序中。可以通过该程序鉴定与本发明的序列在某种程度上相同的序列。
本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物包括，如上文定义，至少一种RNA，其编码选自上述组的任意抗原的至少两种(优选不同的)抗原，原因在于按照本发明，前文提及的组的至少两种(优选不同的)抗原的特定组合能够有效刺激(适应性)免疫系统，以允许治疗肺癌，尤其是非小细胞肺癌(NSCLC)。然而，本发明还可以提供这样的活性(免疫刺激性)组合物，其包括编码选自上述组任意抗原的三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种、十一种或甚至十二种(优选不同的)抗原的至少一种RNA，其中这些抗原的任意组合是可能的和被考虑的。
按照特别优选的实施方案，本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以编码至少两种(优选不同的)抗原，所述抗原选自包括下述抗原的亚组的任意抗原：
·hTERT，
·WT1，
·5T4，
·NY-ESO-1，
·存活蛋白，和/或
·MAGE-C2.
更优选地，本发明还可以提供包括至少一种RNA的活性(免疫刺激性)组合物，所述至少一种RNA编码选自上述组或亚组的任意抗原的至少三种、四种、五种或六种(优选不同的)抗原，其中这些抗原的任意组合是可能的。
因此，由于另一个特别优选的实施方案，本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以编码至少两种(优选不同的)抗原，所述抗原选自上文提及的包括(至少)任一种下述抗原组合的组或亚组的任意抗原：
·hTERT和WT1，或
·hTERT和5T4，或
·hTERT和NY-ESO-1，或
·hTERT和存活蛋白，或
·hTERT和MAGE-C2，或
·WT1和5T4，或
·WT1和NY-ESO-1，或
·WT1和存活蛋白，或
·WT1和MAGE-C2，或
·5T4和NY-ESO-1，或
·5T4和存活蛋白，或
·5T4和MAGE-C2，或
·NY-ESO-1和存活蛋白，或
·NY-ESO-1和MAGE-C2，或
·存活蛋白和MAGE-C2，
或
·hTERT，WT1和5T4，或
·hTERT，WT1和NY-ESO-1，或
·hTERT，WT1和存活蛋白，或
·hTERT，WT1和MAGE-C2，或
·hTERT，5T4，和NY-ESO-1，或
·hTERT，5T4，和存活蛋白，或
·hTERT，5T4，和MAGE-C2，或
·hTERT，NY-ESO-1和存活蛋白，或
·hTERT，NY-ESO-1和MAGE-C2，或
·hTERT，存活蛋白和MAGE-C2，或
·WT1，5T4和NY-ESO-1，或
·WT1，5T4和存活蛋白，或
·WT1，5T4和MAGE-C2，或
·WT1，NY-ESO-1和存活蛋白，或
·WT1，NY-ESO-1和MAGE-C2，或
·WT1，存活蛋白和MAGE-C2，或
·5T4，NY-ESO-1和存活蛋白，或
·5T4，NY-ESO-1和MAGE-C2，或
·5T4，存活蛋白和MAGE-C2，或
·NY-ESO-1，存活蛋白，和MAGE-C2，
或
·hTERT，WT1，5T4和NY-ESO-1，或
·hTERT，WT1，5T4和存活蛋白，或
·hTERT，WT1，5T4和MAGE-C2，或
·hTERT，5T4，NY-ESO-1和存活蛋白，或
·hTERT，5T4，NY-ESO-1和MAGE-C2，或
·hTERT，NY-ESO-1，存活蛋白和MAGE-C2，或
·WT1，5T4，NY-ESO-1，和存活蛋白，或
·WT1，5T4，NY-ESO-1，和MAGE-C2，或
·WT1，5T4，存活蛋白，和MAGE-C2，或
·5T4，NY-ESO-1，存活蛋白，和MAGE-C2，
或
·hTERT，WT1，5T4，NY-ESO-1和存活蛋白，或
·hTERT，WT1，5T4，NY-ESO-1和MAGE-C2，或
·WT1，5T4，NY-ESO-1，存活蛋白和MAGE-C2，
或
·hTERT，WT1，5T4，NY-ESO-1，存活蛋白，和MAGE-C2。
更优选地，本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以编码专门选自上文提及的组或亚组的任意抗原的至少两种(优选不同的)抗原，所述组或亚组包括(至少)任一种下述抗原组合：
·hTERT和WT1，或
·hTERT和5T4，或
·hTERT和NY-ESO-1，或
·hTERT和存活蛋白，或
·hTERT和MAGE-C2，或
·WT1和5T4，或
·WT1和NY-ESO-1，或
·WT1和存活蛋白，或
·WT1和MAGE-C2，或
·5T4和NY-ESO-1，或
·5T4和存活蛋白，或
·5T4和MAGE-C2，或
·NY-ESO-1和存活蛋白，或
·NY-ESO-1和MAGE-C2，或
·存活蛋白和MAGE-C2，
或
·hTERT，WT1和5T4，或
·hTERT，WT1和NY-ESO-1，或
·hTERT，WT1和存活蛋白，或
·hTERT，WT1和MAGE-C2，或
·hTERT，5T4，和NY-ESO-1，或
·hTERT，5T4，和存活蛋白，或
·hTERT，5T4，和MAGE-C2，或
·hTERT，NY-ESO-1和存活蛋白，或
·hTERT，NY-ESO-1和MAGE-C2，或
·hTERT，存活蛋白和MAGE-C2，或
·WT1，5T4和NY-ESO-1，或
·WT1，5T4和存活蛋白，或
·WT1，5T4和MAGE-C2，或
·WT1，NY-ESO-1和存活蛋白，或
·WT1，NY-ESO-1和MAGE-C2，或
·WT1，存活蛋白和MAGE-C2，或
·5T4，NY-ESO-1和存活蛋白，或
·5T4，NY-ESO-1和MAGE-C2，或
·5T4，存活蛋白和MAGE-C2，或
·NY-ESO-1，存活蛋白，和MAGE-C2，
或
·hTERT，WT1，5T4和NY-ESO-1，或
·hTERT，WT1，5T4和存活蛋白，或
·hTERT，WT1，5T4和MAGE-C2，或
·hTERT，5T4，NY-ESO-1和存活蛋白，或
·hTERT，5T4，NY-ESO-1和MAGE-C2，或
·hTERT，NY-ESO-1，存活蛋白和MAGE-C2，或
·WT1，5T4，NY-ESO-1，和存活蛋白，或
·WT1，5T4，NY-ESO-1，和MAGE-C2，或
·WT1，5T4，存活蛋白，和MAGE-C2，或
·5T4，NY-ESO-1，存活蛋白，和MAGE-C2，
或
·hTERT，WT1，5T4，NY-ESO-1和存活蛋白，或
·hTERT，WT1，5T4，NY-ESO-1和MAGE-C2，或
·WT1，5T4，NY-ESO-1，存活蛋白和MAGE-C2，
或
·hTERT，WT1，5T4，NY-ESO-1，存活蛋白，和MAGE-C2.
按照更优选的实施方案，本发明提供包括编码至少两种(优选不同的)抗原的至少一种RNA的活性(免疫刺激性)组合物，
a)其中这些至少两种抗原的至少一种、优选地至少两种、三种、四种、五种、或甚至六种选自：
·5T4
·NY-ESO-1，
·MAGE-A2，
·MAGE-A3，
·MAGE-C1，和/或
·MAGE-C2，和
b)其中其它抗原选自本文定义的至少一种抗原，优选地在任意本文提及的抗原组合、组或亚组中，例如，所述其它抗原选自，例如：
·hTERT，
·WT1，
·MAGE-A2，
·5T4，
·MAGE-A3，
·MUC1，
·Her-2/neu，
·NY-ESO-1，
·CEA，
·存活蛋白，
·MAGE-C1，和/或
·MAGE-C2。
按照更优选的实施方案，按照a)的所述至少一种抗原选自：
·NY-ESO-1，
·MAGE-C1，和/或
·MAGE-C2。
按照另一个优选实施方案，按照a)的所述至少一种抗原选自：
·MAGE-C1，和/或
·MAGE-C2。
按照另一个优选实施方案，按照b)的所述至少一种抗原选自在下述组合之一中定义的一种抗原(多种抗原)：
·hTERT和WT1；或
·hTERT和MAGE-A2；或
·hTERT和5T4；或
·hTERT和MAGE-A3；或
·hTERT和MUC1；或
·hTERT和Her-2/neu；或
·hTERT和NY-ESO-1；或
·hTERT和CEA；或
·hTERT和存活蛋白；或
·hTERT和MAGE-C1；或
·hTERT和MAGE-C2；或
·WT1和MAGE-A2；或
·WT1和5T4；或
·WT1和MAGE-A3；或
·WT1和MUC1；或
·WT1和Her-2/neu；或
·WT1和NY-ESO-1；或
·WT1和CEA；或
·WT1和存活蛋白；或
·WT1和MAGE-C1；或
·WT1和MAGE-C2；或
·MAGE-A2和5T4；或
·MAGE-A2和MAGE-A3；或
·MAGE-A2和MUC1；或
·MAGE-A2和Her-2/neu；或
·MAGE-A2和NY-ESO-1；或
·MAGE-A2和CEA；或
·MAGE-A2和存活蛋白；或
·MAGE-A2和MAGE-C1；或
·MAGE-A2和MAGE-C2；或
·5T4和MAGE-A3；或
·5T4和MUC1；或
·5T4和Her-2/neu；或
·5T4和NY-ESO-1；或
·5T4和CEA；或
·5T4和存活蛋白；或
·5T4和MAGE-C1；或
·5T4和MAGE-C2；或
·MAGE-A3和MUC1；或
·MAGE-A3和Her-2/neu；或
·MAGE-A3和NY-ESO-1；或
·MAGE-A3和CEA；或
·MAGE-A3和存活蛋白；或
·MAGE-A3和MAGE-C1
·MAGE-A3和MAGE-C2
·MUC1和Her-2/neu；或
·MUC1和NY-ESO-1；或
·MUC1和CEA；或
·MUC1和存活蛋白；或
·MUC1和MAGE-C1；或
·MUC1和MAGE-C2；或
·HER-2/NEU和NY-ESO-1；或
·HER-2/NEU和CEA；或
·HER-2/NEU和存活蛋白；或
·HER-2/NEU和MAGE-C1；或
·HER-2/NEU和MAGE-C2；或
·NY-ESO-1和CEA；或
·NY-ESO-1和存活蛋白；或
·NY-ESO-1和MAGE-C1；或
·NY-ESO-1和MAGE-C2；或
·CEA和存活蛋白；或
·CEA和MAGE-C1；或
·CEA和MAGE-C2；或
·存活蛋白和MAGE-C1；或
·存活蛋白和MAGE-C2；或
·MAGE-C 1和MAGE-C2；
或
·hTERT，WT1和MAGE-A2；或
·hTERT，WT1和5T4；或
·hTERT，WT1和MAGE-A3；或
·hTERT，WT1和MUC1；或
·hTERT，WT1和Her-2/neu；或
·hTERT，WT1和NY-ESO-1；或
·hTERT，WT1和CEA；或
·hTERT，WT1和存活蛋白；或
·hTERT，WT1和MAGE-C1；或
·hTERT，WT1和MAGE-C2；或
·WT1，MAGE-A2和5T4；或
·WT1，MAGE-A2和MAGE-A3；或
·WT1，MAGE-A2和MUC1；或
·WT1，MAGE-A2和Her-2/neu；或
·WT1，MAGE-A2和NY-ESO-1；或
·WT1，MAGE-A2和CEA；或
·WT1，MAGE-A2和存活蛋白；或
·WT1，MAGE-A2和MAGE-C1；或
·WT1，MAGE-A2和MAGE-C2；或
·MAGE-A2，5T4和MAGE-A3；或
·MAGE-A2，5T4和MUC1；或
·MAGE-A2，5T4和Her-2/neu；或
·MAGE-A2，5T4和NY-ESO-1；或
·MAGE-A2，5T4和CEA；或
·MAGE-A2，5T4和存活蛋白；或
·MAGE-A2，5T4和MAGE-C1；或
·MAGE-A2，5T4和MAGE-C2；或
·5T4，MAGE-A3和MUC1；或
·5T4，MAGE-A3和Her-2/neu；或
·5T4，MAGE-A3和NY-ESO-1；或
·5T4，MAGE-A3和CEA；或
·5T4，MAGE-A3和存活蛋白；或
·5T4，MAGE-A3和MAGE-C1；或
·5T4，MAGE-A3和MAGE-C2；或
·MAGE-A3，MUC1和Her-2/neu；或
·MAGE-A3，MUC1和NY-ESO-1；或
·MAGE-A3，MUC1和CEA；或
·MAGE-A3，MUC1和存活蛋白；或
·MAGE-A3，MUC1和MAGE-C1；或
·MAGE-A3，MUC1和MAGE-C2；或
·MUC1，Her-2/neu和NY-ESO-1；或
·MUC1，Her-2/neu和CEA；或
·MUC1，Her-2/neu和存活蛋白；或
·MUC1，Her-2/neu和MAGE-C1；或
·MUC1，Her-2/neu和MAGE-C2；或
·HER-2/NEU，NY-ESO-1和CEA；或
·HER-2/NEU，NY-ESO-1和存活蛋白；或
·HER-2/NEU，NY-ESO-1和MAGE-C1；或
·HER-2/NEU，NY-ESO-1和MAGE-C2；或
·NY-ESO-1，CEA和存活蛋白；或
·NY-ESO-1，CEA和MAGE-C1；或
·NY-ESO-1，CEA和MAGE-C2；或
·CEA，存活蛋白和MAGE-C1；或
·CEA，存活蛋白和MAGE-C2；或
·存活蛋白，MAGE-C1和MAGE-C2；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2和5T4；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2和MAGE-A3；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2和MUC1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2和Her-2/neu；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2和NY-ESO-1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2和CEA；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2和存活蛋白；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2和MAGE-C1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2和MAGE-C2；或
·WT1，MAGE-A2，5T4和MAGE-A3；或
·WT1，MAGE-A2，5T4和MUC1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4和Her-2/neu；或
·WT1，MAGE-A2，5T4和NY-ESO-1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4和CEA；或
·WT1，MAGE-A2，5T4和存活蛋白；或
·WT1，MAGE-A2，5T4和MAGE-C1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4和MAGE-C2；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和MUC1；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和Her-2/neu；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和NY-ESO-1；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和CEA；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和存活蛋白；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和MAGE-C1；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和MAGE-C2；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，和Her-2/neu；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1和NY-ESO-1；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1和CEA；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1和存活蛋白；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1和MAGE-C1；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1和MAGE-C2；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和NY-ESO-1；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和CEA；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和存活蛋白；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和MAGE-C1；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和MAGE-C2；或
·MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和CEA；或
·MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和存活蛋白；或
·MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C1；或
·MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C2；或
·HER-2/NEU，NY-ESO-1，CEA和存活蛋白；或
·HER-2/NEU，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C1；或
·HER-2/NEU，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C2；或
·NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C1；或
·NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C2；或
·CEA，存活蛋白，MAGE-C1和MAGE-C2；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4和MAGE-A3；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4和MUC1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4和Her-2/neu；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4和NY-ESO-1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4和CEA；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4和存活蛋白；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4和MAGE-C1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4和MAGE-C2；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和MUC1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和Her-2/neu；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和NY-ESO-1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和CEA；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和存活蛋白；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和MAGE-C1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和MAGE-C2；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和Her-2/neu；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和NY-ESO-1；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和CEA；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和存活蛋白；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和MAGE-C1；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和MAGE-C2；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和NY-ESO-1；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和CEA；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和存活蛋白；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和MAGE-C1；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和MAGE-C2；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和CEA；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和存活蛋白；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C1；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C2；或
·MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和存活蛋白；或
·MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C1；或
·MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C2；或
·HER-2/NEU，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C1；或
·HER-2/NEU，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C2；或
·NY-ESO-1，CEA，存活蛋白，MAGE-C1和MAGE-C2；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和MUC1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和Her-2/neu；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和NY-ESO-1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和CEA；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和存活蛋白；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和MAGE-C1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和MAGE-C2；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC 1和Her-2/neu；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和NY-ESO-1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和CEA；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和存活蛋白；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和MAGE-C1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和MAGE-C2；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和NY-ESO-1；
或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和CEA；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和存活蛋白；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和MAGE-C1；
或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和MAGE-C2；
或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和CEA；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和存活蛋白；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C1；
或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C2；
或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和存活蛋白；
或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C1；
或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C2；
或
·MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C1；或
·MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C2；或
·HER-2/NEU，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白，MAGE-C1和MAGE-C2；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和Her-2/neu；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和NY-ESO-1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和CEA；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC 1和存活蛋白；
 或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和MAGE-C1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和MAGE-C2；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和NY-ESO-1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和CEA；
或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和存活蛋白；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu  和MAGE-C1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和MAGE-C2；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和CEA；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和存活蛋白；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C1；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C2；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和存活蛋白；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C1；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C2；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C1；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C2；或
·MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白，MAGE-C1和MAGE-C2；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和NY-ESO-1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和CEA；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和存活蛋白；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和MAGE-C1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和MAGE-C2；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和CEA；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和存活蛋白；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C2；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和存活蛋白；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C1；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C2；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C1；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C2；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白，MAGE-C1和MAGE-C2；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和CEA；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和存活蛋白；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C2；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和存活蛋白；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C2；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C1；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C2；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白，MAGE-C1和MAGE-C2；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和存活蛋白；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C2；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C2；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白，MAGE-C1和MAGE-C2；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C2；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白，MAGE-C1和MAGE-C2；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白，MAGE-C1和MAGE-C2.
按照另一个特别优选的实施方案，按照b)的所述至少一个抗原选自下述如上文定义的特定的抗原组合：
·存活蛋白和5T4
本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA典型地是任意RNA，优选地，但不限于此，编码RNA，环形或线性RNA，单链或双链RNA(其还可以视为是由于两个单链RNA的非共价缔合形成的RNA)或部分双链或部分单链的RNA，其至少部分是自身互补性的(这些部分双链或部分单链的RNA分子二者典型地由更长和更短的单链RNA分子形成，或者由两个单链RNA分子形成，其在长度上大约相等，其中一个单链RNA分子部分与另一而单链RNA分子互补，并且因此二者在该区域形成双链RNA，即，相对于完整的RNA序列部分是双链或部分是单链的RNA)。更优选地，本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA是单链RNA，甚至更优选地是线性RNA。最优选地，本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA是信使RNA(mRNA)。在该情形中，信使RNA(mRNA)典型地是这样的RNA，其由(至少)一些结构元件组成，例如，任选的5’-UTR区，位于上游的核糖体结合位点，之后是编码区，任选的3’-UTR区，其可以后接聚腺苷酸尾(和/或聚胞苷酸尾)。
由于一个特别优选的实施方案，本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少两种(优选不同的)抗原的每一种，可以由一种(单顺反子)RNA编码，优选地一种(单顺反子)mRNA编码。换言之，本发明的活性(免疫刺激性)组合物可以包含至少两种(单顺反子)RNAs，优选mRNAs，其中这些至少两种(单顺反子)RNAs、优选mRNAs的每一种可以仅编码一种(优选不同的)抗原，所述抗原选自上文提及的组或亚组之一，优选地以上文提及的组合之一。
按照另一个特别优选的实施方案，本发明的活性(免疫刺激性)组合物可以包括(至少)一种双顺反子或者甚至多顺反子RNA，优选mRNA，即，携带至少两种(优选不同的)抗原的两种或甚至多种编码序列的(至少)一种RNA，所述抗原选自上文提及的组或亚组之一，优选地在上文提及的组合之一中。所述(至少)一种双顺反子或甚至多顺反子RNA的至少两种(优选不同的)抗原的所述编码序列可以由至少一个下文定义的IRES(内部核糖体进入位点)序列分开。因此，术语“编码至少两种(优选不同的)抗原”可以意指，但不限于，所述(至少)一种(双顺反子或甚至多顺反子)RNA，优选mRNA，可以编码上文提及的抗原组的至少两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种、十一种或十二种(优选不同的)抗原或在它们上述定义内的片段或变体。更优选地，但不限于此，所述(至少)一种(双顺反子或甚至多顺反子)RNA，优选mRNA，可以编码，例如，上文提及的抗原亚组的至少两种、三种、四种、五种或六种(优选不同的)抗原或它们在上述定义内的片段或变体。在该情形中，如上文定义的所谓的IRES(内部核糖体进入位点)序列可以作为唯一的核糖体结合位点行使功能，但是它还可以作用为提供如上文定义的编码几种蛋白的双顺反子或甚至多顺反子RNA，所述蛋白将由彼此独立的核糖体翻译。按照本发明可以使用的IRES序列的实例是选自小RNA病毒(例如FMDV)，鼠疫病毒(CFFV)，脊髓灰质炎病毒(PV)，脑心肌炎病毒(ECMV)，口蹄疫病毒(FMDV)，丙型肝炎病毒(HCV)，猪霍乱病毒(CSFV)，小鼠淋巴瘤病毒(MLV)，猿猴免疫缺陷病毒(SIV)或蟋蟀麻痹病毒(CrPV)的那些。
按照另一个特别优选的实施方案，本发明的活性(免疫刺激性)组合物可以包括如上文定义的至少一种单顺反子RNA、优选mRNA和如上述定义的至少一种双顺反子或甚至多顺反子RNA、优选mRNA的混合物。所述至少一种单顺反子RNA和/或所述至少一种双顺反子或甚至多顺反子RNA优选地编码不同的抗原或它们在上述定义内的片段或变体，所述抗原优选地选自上文提及的抗原组或亚组之一，更优选地在上文提及的组合之一中。然而，所述至少一种单顺反子RNA和所述至少一种双顺反子或甚至多顺反子RNA可以优选地还编码选自上文提及的抗原组或亚组之一的(部分)相同的抗原，优选地在上文提及的组合之一中，条件是本发明的活性(免疫刺激性)组合物完全提供如上文定义的至少两种(优选不同的)抗原。这样的实施方案可以有利的用于，例如交错的，例如时间依赖性的向需要其的患者施用本发明的活性(免疫刺激性)组合物。本发明的所述活性(免疫刺激性)组合物的成分，特别是编码所述至少两种(优选不同的)抗原的不同RNAs，可以，例如，包含在部分组合物试剂盒(的不同部分)中，或者可以，例如，作为本发明所述的不同活性(免疫刺激性)组合物的成分分开施用。
优选地，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA，其编码选自上文定义的抗原组或亚组、更优选地在上述组合中的至少两种(优选不同的)抗原，典型地包括约50-约20000个，或100-约20000个核苷酸的长度，优选地约250-约20000个核苷酸，更优选地约500-约10000个，甚至更优选地约500-约5000个核苷酸长度。
按照一个实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA，其编码选自上文定义的抗原组或亚组、更优选地在上述组合中的至少两种(优选不同的)抗原，可以采用修饰的RNA的形式，其中如本文定义的任何修饰可以引入到所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA中。如本文定义的修饰优选地导致本发明的活性(免疫刺激性)组合物的稳定的至少一种RNA。
按照第一实施方案，本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以因此提供为“稳定的RNA”，优选稳定的mRNA，也就是说，作为基本上抗体内降解(例如，由外切-或内切-核酸酶进行)的(m)RNA。所述稳定可以，例如，通过本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一个(m)RNA的修饰的磷酸酯骨架实现。关于本发明的骨架修饰是其中化学修饰RNA中包含的核苷酸骨架的磷酸酯的修饰。可以优选地用在该情形中的核苷酸包含，例如，硫代磷酸酯-修饰的磷酸酯骨架，优选地磷酸酯骨架中所包含的至少一个磷酸氧被硫原子取代。稳定的(m)RNAs还可以包括，例如：非离子磷酸酯类似物，诸如例如，烷基和芳基磷酸酯，其中带电荷的磷酸酯氧被烷基或芳基替换，或磷酸二酯和烷基磷酸三酯，其中带电荷的氧残基以烷基化形式存在。所述骨架修饰典型地包括，但不暗示任何限制，来自由下列各项组成的组的修饰：甲基膦酸酯，磷酰胺和硫代硫酸酯(例如，胞苷-5′-O-(1-硫代磷酸))。
本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以另外或备选地还包含糖修饰。与本发明有关的糖修饰是对所述至少一种RNA的核苷酸的糖的化学修饰，并且典型地包括，不暗示任何限制，选自由下列各项组成的组的糖修饰：2′-脱氧-2′-氟-寡核糖核苷酸(2′-氟-2′-脱氧胞苷-5′-三磷酸，2′-氟-2′-脱氧尿苷-5′-三磷酸)，2′-脱氧-2′-脱氨寡核糖核苷酸(2′-氨基-2′-脱氧胞苷-5′-三磷酸，2′-氨基-2′-脱氧尿苷-5′-三磷酸)，′-O-烷基寡核糖核苷酸，2′-脱氧-2′-C-烷基寡核糖核苷酸(2′-O-甲基胞苷-5′-三磷酸，2′-甲基尿苷-5′-三磷酸)，′-C-烷基寡核糖核苷酸，和它们的异构体(2′-阿糖胞苷(aracytidine)-5′-三磷酸，2′-阿糖尿苷(arauridine)-5′-三磷酸)，或叠氮三磷酸(2′-叠氮-2′-脱氧胞苷-5′-三磷酸，2′-叠氮-2′-脱氧尿苷-5′-三磷酸)。
本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以另外或备选地还包含至少一种碱基修饰，与未改变的、即天然(natural)(＝天然(native))RNA序列相比较，其优选地适于显著增加由所述至少一种RNA序列编码的蛋白的表达。在这种情形中，显著性意指与天然RNA序列的表达相比，蛋白表达增加至少20％，优选地至少30％，40％，50％或60％，更优选地至少70％，80％，90％或甚至100％，并且最优选地至少150％，200％或者甚至300％以上。关于本发明，具有这样的碱基修饰的核苷酸优选地选自由下列各项组成的碱基-修饰的核苷酸组：2-氨基-6-氯嘌呤核苷-5′-三磷酸，2-氨基腺苷-5′-三磷酸，2-硫胞苷-5′-三磷酸，2-硫尿苷-5′-三磷酸，4-硫尿苷-5′-三磷酸，5-氨基烯丙基胞苷-5′-三磷酸，5-氨基烯丙基尿苷-5′-三磷酸，5-溴胞苷-5′-三磷酸，5-溴尿苷-5′-三磷酸，5-碘胞苷-5′-三磷酸，5-碘尿苷-5′-三磷酸，5-甲基胞苷-5′-三磷酸，5-甲基尿苷-5′-三磷酸，6-氮胞苷-5′-三磷酸，6-氮尿苷-5′-三磷酸，6-氯嘌呤核苷-5′-三磷酸，7-脱氮腺苷-5′-三磷酸，7-脱氮鸟苷-5′-三磷酸，8-氮杂腺苷-5′-三磷酸，8-叠氮腺苷-5′-三磷酸，苯并咪唑-核苷-5′-三磷酸，N1-甲基腺苷-5′-三磷酸，N1-甲基鸟苷-5′-三磷酸，N6-甲基腺苷-5′-三磷酸，O6-甲基鸟苷-5′-三磷酸，假尿苷-5′-三磷酸，或嘌呤霉素-5′-三磷酸，黄苷-5′-三磷酸。对于碱基修饰特别优选的核苷酸选自由下列各项组成的碱基-修饰的核苷酸组：5-甲基胞苷-5′-三磷酸，7-脱氮鸟苷-5′-三磷酸，5-溴胞苷-5′-三磷酸，和假尿苷-5′-三磷酸。
按照另一个实施方案，本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA同样可以通过引入进一步修饰的核苷酸进行修饰(且优选地进行稳定)，所述进一步修饰的核苷酸包含它们的核糖或碱基结构部分的修饰。通常，本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种(m)RNA可以包含任何天然的(＝天然存在的)核苷酸，例如，鸟苷，尿嘧啶，腺苷，和/或胞嘧啶或它们的类似物。在该情形中，核苷酸类似物定义为天然存在的核苷酸的非天然存在的变体。因此，类似物是化学衍生的具有非天然存在的官能团的核苷酸，所述非天然存在的官能团优选地添加或由天然存在的核苷酸删除，或其取代核苷酸的天然存在的官能团。因此，天然存在的核苷酸的每个成分可以进行修饰，即，形成RNA序列的骨架(见上文)的碱基成分、糖(核糖)成分和/或磷酸酯成分。鸟苷、尿嘧啶、腺苷和胞嘧啶的类似物包括，不暗示任何限制，已经化学改变的任何天然存在的或非天然存在的鸟苷、尿嘧啶、腺苷、胸苷或胞嘧啶，例如，通过乙酰化、甲基化、羟基化等化学改变，其包括1-甲基-腺苷，1-甲基-鸟苷，1-甲基-肌苷，2，2-二甲基-鸟苷，2，6-二氨基嘌呤，2′-氨基-2′-脱氧腺苷，2′-氨基-2′-脱氧胞苷，2′-氨基-2′-脱氧鸟苷，2′-氨基-2′-脱氧尿苷，2-氨基-6-氯嘌呤核苷，2-氨基嘌呤-核苷，2′-阿糖腺苷(Araadenosine)，2′-阿糖胞苷(Aracytidine)，2′-阿糖尿苷(Arauridine)，2′-叠氮-2′-脱氧腺苷，2′-叠氮-2′-脱氧胞苷，2′-叠氮-2′-脱氧鸟苷，2′-叠氮-2′-脱氧尿苷，2-氯腺苷，2′-氟-2′-脱氧腺苷，2′-氟-2′-脱氧胞苷，2′-氟-2′-脱氧鸟苷，2′-氟-2′-脱氧尿苷，2′-氟胸苷，2-甲基-腺苷，2-甲基-鸟苷，2-甲基-硫-N6-异戊烯基(isopenenyl)-腺苷，2′-O-甲基-2-氨基腺苷，2′-O-甲基-2′-脱氧腺苷，2′-O-甲基-2′-脱氧胞苷，2′-O-甲基-2′-脱氧鸟苷，2′-O-甲基-2′-脱氧尿苷，2′-O-甲基-5-甲基尿苷，2′-O-甲基肌苷，2′-O-甲基假尿苷，2-硫代胞苷，2-硫代-胞嘧啶，3-甲基-胞嘧啶，4-乙酰基-胞嘧啶，4-硫尿苷，5-(羧基羟甲基)-尿嘧啶，5，6-二氢尿苷，5-氨基烯丙基胞苷，5-氨基烯丙基-脱氧-尿苷，5-溴尿苷，5-羧甲基氨基甲基-2-硫代-尿嘧啶，5-羧甲基氨基甲基-尿嘧啶，5-氯-阿糖胞苷，5-氟-尿苷，5-碘尿苷，5-甲氧基羰基甲基-尿苷，5-甲氧基-尿苷，5-甲基-2-硫代-尿苷，6-氮胞苷，6-氮尿苷，6-氯-7-脱氮-鸟苷，6-氯嘌呤核苷，6-巯基-鸟苷，6-甲基-巯基嘌呤-核苷，7-脱氮-2′-脱氧-鸟苷，7-脱氮腺苷，7-甲基-鸟苷，8-氮腺苷，8-溴-腺苷，8-溴-鸟苷，8-巯基-鸟苷，8-氧代鸟苷，苯并咪唑-核苷，β-D-甘露糖基-辫苷((β-D-mannosyl-queosine)，二氢-尿嘧啶，肌苷，N1-甲基腺苷，N6-([6-氨基己基]氨基甲酰基甲基)-腺苷，N6-异戊烯基-腺苷，N6-甲基-腺苷，N7-甲基-黄苷，N-尿嘧啶-5-羟基乙酸甲酯，嘌呤霉素，辫苷(Queosine)，尿嘧啶-5-羟基乙酸，尿嘧啶-5-羟基乙酸甲酯，Wybutoxosine，黄苷，和木-腺苷。所述类似物的制备是本领域的技术人员已知的，例如，由美国专利4,373,071，US 4,401,796，US 4,415,732，US 4,458,066，US 4,500,707，US4,668,777，US 4,973,679，US 5,047,524，US 5,132,418，US 5,153,319，US5,262,530和5,700,642可知。在上述类似物的情形中，按照本发明可以特别优选增加本发明活性(免疫刺激性)组合物的RNA的免疫原性和/或不干扰已经引入的RNA进一步修饰的那些类似物。
按照特别的实施方案，本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以包含脂质修饰。所述脂质-修饰的RNA典型地包括如本文定义的RNA，其编码选自上述定义的抗原组或亚组的、优选在上述组合中的至少两种抗原。所述脂质-修饰的RNA典型地进一步包含与所述RNA共价连接的至少一个连接体，和与各自的连接体共价连接的至少一个脂质。备选地，所述脂质-修饰的RNA包括如本文定义的至少一个RNA和与所述RNA共价连接(无连接体)的至少一个(双官能性)脂质。按照第三备选方案，所述脂质-修饰的RNA包括如本文定义的RNA，与所述RNA共价连接的至少一个连接体，和与各自的连接体共价连接的至少一个脂质，和与所述RNA共价连接(无连接体)的至少一个(双官能性)脂质。
在本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA中包含的脂质(与其复合或共价结合)典型地是脂质或优选自身是生物活性的亲脂残基。所述脂质优选地包括天然物质或化合物，诸如例如，维生素，例如，α-生育酚(维生素E)，包括RRR-α-生育酚(以前为D-α-生育酚)，L-α-生育酚，外消旋D，L-α-生育酚，维生素E琥珀酸酯(VES)，或维生素A及其衍生物，例如视黄酸，视黄醇，维生素D及其衍生物，例如维生素D以及其麦角固醇前体，维生素E及其衍生物，维生素K及其衍生物，例如维生素K和相关的醌或植醇化合物，或类固醇，如胆汁酸，例如胆酸，脱氧胆酸，脱氢胆酸，可的松，洋地黄毒苷(digoxygenin)，睾酮，胆固醇或硫代胆固醇。在本发明范围内的其它脂质或亲脂残基包括，不暗示任何限制，聚二醇(Oberhauser 等，，Nucl.Acids Res.(核酸研究)，1992，20，533)，脂肪族基团，诸如例如，C1-C20-链烷，C1-C20-链烯或C1-C20-链烷醇化合物，等等，诸如例如，十二烷二醇，十六醇或十一烷基残基(Saison-Behmoaras 等，，EMBO J，1991，10，111；Kabanov 等，，FEBS Lett.(FEBS通信)，1990，259，327；Svinarchuk 等，，Biochimie，1993，75，49)，磷脂，诸如例如，磷脂酰甘油，二酰基磷脂酰甘油，磷脂酰胆碱，二棕榈酰磷脂酰胆碱，二硬脂酰磷脂酰胆碱，磷脂酰丝氨酸，磷脂酰乙醇胺，双十六烷基-外消旋-甘油(di-hexadecyl-rac-glycerol)，鞘脂，脑苷脂，神经节苷脂，或三乙基铵1，2-二-O-十六烷基-外消旋-甘油-3-H-膦酸酯(Manoharan 等，，Tetrahedron Lett.(四面体通信)，1995，36，3651；Shea 等，，Nucl.Acids Res.(核酸研究)，1990，18，3777)，聚胺或聚二醇，诸如例如，聚乙二醇(PEG)(Manoharan 等，，Nucleosides&Nucleotides(核苷和核苷酸)，1995，14，969)，六甘醇(HEG)，棕榈酸甘油酯或棕榈基残基(Mishra等，，Biochim.Biophys.Acta(生物化学生物物理学报)，1995，1264，229)，十八胺或己基氨基-羰基-羟胆固醇残基(Crooke 等，，J.Pharmacol.Exp.Ther.(药理学实验治疗杂志)，1996，277，923)，以及蜡，萜烯，脂环烃，饱和的和单-或多-不饱和脂肪酸残基，等等。
本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以同样进行稳定，以防止RNA在体内被各种途径降解。在本领域已知mRNA或RNA的体内不稳定性和(快速)降解通常可以在基于RNA的组合物应用中代表这严重的问题。这种RNA不稳定性典型地是由于RNA-降解酶“RNA酶”(核糖核酸酶)引起，其中所述核糖核酸酶的污染有时可以完全降解溶液中的RNA。因此，在细胞的细胞质中的天然mRNA降解非常精细地调控，并且RNA酶污染通常可以通过在使用所述组合物之前进行专门的处理而去除，特别是用焦碳酸二乙酯(DEPC)处理。在现有技术中，在该情形中，可以使用的多种天然降解机制是已知的。例如，在体内，末端结构典型地对于mRNA是至关重要的。例如，在天然存在的mRNAs的5′末端通常存在所谓的“帽结构”(修饰的鸟苷核苷酸)，且在3′末端典型地是多至200个腺苷的核苷酸的序列(所谓的聚腺苷酸尾)。
本发明活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA，特别是如果作为mRNA提供，因此可以通过添加所谓的“5′帽”结构而抗RNA酶降解被稳定。在这种情形中，特别优选m7G(5′)ppp(5′(A，G(5′)ppp(5′)A或G(5′)ppp(5′)G作为“5′帽”结构。然而，仅在如果还没有在本发明的免疫刺激性组合物的(m)RNA 5′末端引入修饰如脂质修饰时或者如果所述修饰不干扰所述(未修饰的或化学修饰的)(m)RNA的免疫原性特性时引入这样的修饰。
按照更优选的实施方案，本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA，特别是如果所述RNA采用mRNA形式时，可以在3′末端包含典型地约10-200个腺苷核苷酸、优选约10-100个腺苷核苷酸、更优选约20-100个腺苷核苷酸或甚至更优选地约40-80个腺苷核苷酸的聚腺苷酸尾。
按照更优选的实施方案，本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA，特别是如果所述RNA采用mRNA形式时，可以在3′末端包含典型地约10-200个胞嘧啶核苷酸、优选地约10-100个胞嘧啶核苷酸、更优选地约20-70个胞嘧啶核苷酸或甚至更优选地约20-60个或甚至10-40个胞嘧啶核苷酸的聚胞苷酸尾。
按照另一个实施方案，本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以进行修饰，并且因此被稳定，特别是如果所述RNA采用mRNA形式时，通过修饰所述RNA的G/C含量，优选是至少一种RNA的编码区的G/C含量进行。
在本发明的特别优选的实施方案中，与其具体的野生型(m)RNA，即未修饰的(m)RNA编码区的G/C含量相比较，本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种(m)RNA的编码区的G/C含量被修饰，特别是增加。与具体的野生型(m)RNA所编码的氨基酸序列相比较，所述至少一种(m)RNA所编码的氨基酸序列优选不被修饰。
本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种(m)RNA的这种修饰是基于要翻译的任意(m)RNA区序列对于所述(m)RNA的有效翻译是重要的事实。因此，多种核苷酸的组成和序列是重要的。特别地，具有增加的G(鸟苷)/C(胞嘧啶)含量的序列比具有增加的A(腺苷)/U(尿嘧啶)含量的序列更稳定。按照本发明，因此与其野生型(m)RNA相比较，所述(m)RNA的密码子不同，同时保留所翻译的氨基酸序列，以致它们包括增加量的G/C核苷酸。关于一些密码子编码一种和相同的氨基酸的事实(所谓的遗传密码简并性)，可以确定对稳定性最有利的密码子(所谓的备选密码子应用)。
取决于由所述至少一种(m)RNA编码的氨基酸，与其野生型序列相比较，对于所述至少一种(m)RNA序列的修饰存在多种可能性。在由专门包含G或C核苷酸的密码子编码的氨基酸的情形中，不需要密码子的修饰。因此，对于Pro(CCC或CCG)，Arg(CGC或CGG)，Ala(GCC或GCG)和Gly(GGC或GGG)的密码子不需要修饰，因为不存在A或U。
相反，包含A和/或U核苷酸的密码子可以通过编码相同的氨基酸但是不含有A和/或U的其它密码子的取代而进行修饰。这些的实例如下：
Pro的密码子可以由CCU或CCA修饰为CCC或CCG；
Arg的密码子可以由CGU或CGA或AGA或AGG修饰为CGC或CGG；
Ala的密码子可以由GCU或GCA修饰为GCC或GCG；
Gly的密码子可以由GGU或GGA修饰为GGC或GGG。
在其它情形中，尽管不从所述密码子中去除A或U核苷酸，然而，可以通过使用含有较低的A和/或U核苷酸含量的密码子而降低A和U含量。这些的实例如下：
Phe的密码子可以由UUU修饰为UUC；
Leu的密码子可以由UUA，UUG，CUU或CUA修饰为CUC或CUG；
Ser的密码子可以由UCU或UCA或AGU修饰为UCC，UCG或AGC；
Tyr的密码子可以由UAU修饰为UAC；
Cys的密码子可以由UGU修饰为UGC；
His的密码子可以由CAU修饰为CAC；
Gln的密码子可以由CAA修饰为CAG；
Ile的密码子可以由AUU或AUA修饰为AUC；
Thr的密码子可以由ACU或ACA修饰为ACC或ACG；
Asn的密码子可以由AAU修饰为AAC；
Lys的密码子可以由AAA修饰为AAG；
Val的密码子可以由GUU或GUA修饰为GUC或GUG；
Asp的密码子可以由GAU修饰为GAC；
Glu的密码子可以由GAA修饰为GAG；
终止密码子UAA可以修饰为UAG或UGA。
另一方面，在Met(AUG)和Trp(UGG)的密码子的情形中，不存在序列修饰的可能性。
上文列出的取代可以单独的或以所有可能的组合使用，以在与其具体的野生型(m)RNA(即，原始序列)相比较时，提高本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种(m)RNA的G/C含量。因此，例如，在野生型序列中存在的所有Thr密码子可以修饰为ACC(或ACG)。然而，优选地，例如，使用上述取代可能性的组合：
将原始序列(野生型(m)RNA)中编码Thr的所有密码子取代为ACC(或ACG)和
将原始编码Ser的所有密码子取代为UCC(或UCG或AGC)；
将原始序列中编码Ile的所有密码子取代为AUC和
将原始编码Lys的所有密码子取代为AAG和
将原始编码Tyr的所有密码子取代为UAC；
将原始序列中编码Val的所有密码子取代为GUC(或GUG)和
将原始编码Glu的所有密码子取代为GAG和
将原始编码Ala的所有密码子取代为GCC(或GCG)和
将原始编码Arg的所有密码子取代为CGC(或CGG)；
将原始序列中编码Val的所有密码子取代为GUC(或GUG)和
将原始编码Glu的所有密码子取代为GAG和
将原始编码Ala的所有密码子取代为GCC(或GCG)和
将原始编码Gly的所有密码子取代为GGC(或GGG)和
将原始编码Asn的所有密码子取代为AAC；
将原始序列中编码Val的所有密码子取代为GUC(或GUG)和
将原始编码Phe的所有密码子取代为UUC和
将原始编码Cys的所有密码子取代为UGC和
将原始编码Leu的所有密码子取代为CUG(或CUC)和
将原始编码Gln的所有密码子取代为CAG和
将原始编码Pro的所有密码子取代为CCC(或CCG)；等等。
优选地，与编码本文定义的抗原、抗原蛋白或抗原肽或其片段或变体的野生型(m)RNA的G/C含量相比较，本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种(m)RNA的编码区的G/C含量增加至少7％，更优选地至少15％，特别优选地至少20％。按照具体实施方案，在编码本文定义的抗原、抗原蛋白或抗原肽或其片段或变体的区域中或野生型(m)RNA序列的完整序列中至少5％，10％，20％，30％，40％，50％，60％，更优选地至少70％，甚至更优选地至少80％和最优选地至少90％，95％或者甚至100％的可取代的密码子被取代，由此增加所述序列的GC/含量。
在该情形中，与野生型序列相比较，特别优选将本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种(m)RNA的G/C含量增加至最大值(即，可取代的密码子100％被取代)，特别是在编码蛋白的区域中。
按照本发明，本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种(m)RNA的另一种优选修饰基于这样的发现，即翻译效率也通过细胞中tRNA出现的不同频率确定。因此，如果在本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种(m)RNA中存在所谓的“罕用密码子”达到增多的程度，则相应修饰的至少一种(m)RNA序列被翻译至比其中存在编码相对“频繁”tRNA的密码子的情形显著更差的程度。
按照本发明，在本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述修饰的至少一种(m)RNA中，编码辅助蛋白的区域与野生型(m)RNA的相应区域相比被修饰，以致编码细胞中相对稀有的tRNA的野生型序列的至少一个密码子交换成编码细胞中相对频繁的tRNA的密码子并携带与相对稀有tRNA相同的氨基酸。通过该变化，改变本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种(m)RNA的序列，从而插入可以获得频繁出现的tRNA的密码子。换言之，按照本发明，在各种情形中，通过该变化，野生型序列的编码细胞中相对稀有的tRNA的所有密码子可以交换成编码细胞中相对频繁的tRNA的密码子，并且其，在各种情形中，携带与相对稀有tRNA相同的氨基酸。
哪些tRNA在细胞中相对频繁出现和相反地哪些相对罕见出现是本领域中技术人员已知的，cf.例如Akashi，Curr.Opin.Genet.Dev.(当前遗传发育观点)2001，11(6)：660-666。特别优选对于特定氨基酸，使用最频繁出现的tRNA的密码子，例如Gly密码子，其使用在(人)细胞中最频繁出现的tRNA。
按照本发明，特别优选的是将本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述修饰的至少一种(m)RNA中增加的特别是最大化的序列G/C含量与不改变由所述(m)RNA编码区编码的蛋白的氨基酸序列的“频繁”密码子相连。这个优选的实施方案容许提供本发明的活性(免疫刺激性)组合物的特别有效翻译和稳定(修饰)的至少一种(m)RNA。
如上述的本发明的活性(免疫刺激性)组合物的修饰的至少一种(m)RNA的确定(增加的G/C含量；tRNA的交换)可以利用WO 02/098443中解释的计算机程序进行——其公开内容全文包括在本发明中。利用该计算机程序，任何所需的(m)RNA的核苷酸序列可以借助于遗传密码或其简并性质来修饰，由此最大G/C含量结果，与使用编码细胞中尽可能频繁出现的tRNA的密码子相结合，导致由所述修饰的至少一种(m)RNA编码的氨基酸序列与未修饰的序列相比，优选不被改变。备选地，与原始序列相比，还可能仅改变G/C含量或仅改变密码子的使用。Visual Basic(视觉基础)6.0(使用的开发环境：具有Servicepack3的Microsoft Visual StudioEnterprise6.0)中的源码也记述在WO 02/098443中。
在本发明的另一个优选实施方案中，本发明的活性(免疫刺激性)组合物的至少一种(m)RNA的核糖体结合位点环境中的A/U含量与其特定野生型(m)RNA的核糖体结合位点环境中A/U含量相比是增加的。该修饰(在核糖体结合位点周围增加的A/U含量)增加核糖体结合所述至少一种(m)RNA的效率。核糖体与核糖体结合位点(Kozak序列：GCCGCCACCAUGG(SEQ ID NO：27)，AUG形成起始密码子)的有效结合又具有有效翻译所述至少一种(m)RNA的作用。
按照本发明的另一个实施方案，本发明的活性(免疫刺激性)组合物的至少一种(m)RNA可以关于潜在地促降解序列元件(destabilizingsequence elements)而被修饰。具体地，所述至少一种(m)RNA的编码区和/或5’和/或3’非翻译区与特定野生型(m)RNA相比可以被修饰，从而不包含促降解序列元件，所修饰的至少一种(m)RNA的编码氨基酸序列与其特定野生型(m)RNA相比优选不被修饰。已知，例如，在真核生物的RNA序列中存在促降解序列元件(DSE)，信号蛋白与其结合并在体内调节RNA的酶降解。为了进一步稳定所修饰的至少一种(m)RNA，任选地在编码本文定义的抗原、抗原蛋白或抗原肽的区域内，可以因此进行与野生型(m)RNA的相应区域相比的一种或多种这样的修饰，从而使其中不含有或基本上不含有促降解序列元件。按照本发明，也可以通过所述修饰，从本发明的活性(免疫刺激性)组合物的至少一种(m)RNA中除去非翻译区(3′-和/或5′-UTR)中存在的DSE。
所述促降解序列是例如富含AU的序列(AURES)，其存在于许多不稳定RNA的3′-UTR部分(Caput等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(美国国家科学院学报)1986，83：1670-1674)。因此按照本发明的活性(免疫刺激性)组合物的至少一种(m)RNA与野生型(m)RNA相比，优选被修饰使得该所述至少一种(m)RNA不含有所述促降解序列。这还应用于那些由可能的核酸内切酶识别的序列基序，例如序列GAACAAG，其包含在编码转铁蛋白受体的基因的3′-UTR片段中(Binder等，EMBO J.(EMBO杂志)1994，13：1969-1980)。在本发明的活性(免疫刺激性)组合物的至少一种(m)RNA中，这些序列基序优选地被去除。
按照本发明还优选地，本发明的活性(免疫刺激性)组合物的至少一种(m)RNA，以修饰的形式，具有如上文定义的以修饰形式存在的至少一个IRES和/或至少一个5′和/或3′稳定序列，例如，以增强核糖体结合或允许位于本发明的活性(免疫刺激性)组合物的至少一种(双-或甚至是多顺反子)RNA上的不同编码的抗原的表达。
按照本发明，本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种(m)RNA还更优选地具有至少一个5′和/或3′稳定序列。这些位于5’和/或3’非翻译区的稳定序列具有增长所述至少一种(m)RNA在细胞溶胶中半衰期的作用。这些稳定序列可以与在病毒、细菌和真核生物中存在的天然存在序列具有100％序列同源性，但也可以是部分或完全合成的。例如来自智人(Homo sapiens)或非洲爪蟾(Xenopus laevis)的珠蛋白基因的不翻译序列(UTR)可以作为可以在本发明中关于稳定的RNA使用的稳定序列的实例提及。稳定序列的另一个实例具有通式(C/U)CCANxCCC(U/A)PyxUC(C/U)CC(SEQ ID NO：28)，其包含在编码珠蛋白，α(I)-胶原蛋白，15-脂加氧酶或编码酪氨酸羟化酶的非常稳定的RNA的3’UTR中(参见Holcik等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(美国国家科学院学报)1997，94：2410-2414)。所述稳定序列当然可以单独或彼此组合使用，并且还与本领域中技术人员已知的其他稳定序列组合使用。本发明的活性(免疫刺激性)组合物的至少一种(m)RNA因此优选表示为珠蛋白UTR(非翻译区)-稳定的RNA，特别地表示为珠蛋白UTR-稳定的RNA。
然而，关于本发明的活性(免疫刺激性)组合物的至少一种RNA优选地进行碱基的置换、添加或去除，其利用用来制备本发明的活性(免疫刺激性)组合物的至少一种RNA的DNA基质使用公知的基因定点诱变或寡核苷酸连接策略技术进行(参见例如Maniatis等，Molecular Cloning：ALaboratory Manual(分子克隆：实验室手册)，Cold Spring Harbor LaboratoryPress(冷泉港实验室出版社)，第三版，Cold Spring Harbor(冷泉港)，纽约，2001)。在该过程中，为了制备所述至少一种(m)RNA，可以在体外转录相应的DNA分子。该DNA基质优选地包括合适的启动子，例如T7或SP6启动子，以用于体外转录，其后是待制备的所述至少一种RNA的理想核苷酸序列和体外转录的终止信号。形成至少一种目的RNA基质的DNA分子可以通过发酵增殖和随后分离为可以在细菌内复制的质粒的一部分来制备。可以作为适合于本发明提及的质粒是例如质粒pT7Ts(GenBank编号U26404；Lai等，Development(发育)1995，121：2349-2360)，
Figure GPA00001091526200561
系列，例如(GenBank编号X65300；来自Promega)和pSP64(GenBank编号X65327)；还参考：Mezei和Storts，Purification of PCRProducts(PCR产物的纯化)，在：Griffin和Griffin(编)，PCR Technology：Current Innovation(PCR技术：当前改革)中，CRC Press(CRC出版社)，Boca Raton，FL，2001。
本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA的稳定可以同样通过将所述至少一种RNA与阳离子化合物缔合或复合、或与其结合而进行，所述阳离子化合物特别是聚阳离子化合物，例如，(聚)阳离子肽或蛋白。特别地，使用鱼精蛋白、核仁蛋白(nucleoline)、精胺(spermin)或亚精胺作为聚阳离子，针对RNA的核苷酸结合蛋白是特别有效的。此外，同样可以使用其它阳离子肽或蛋白，诸如聚-L-赖氨酸或组蛋白。用于稳定RNA的这一方法记述在EP-A-1083232中，其公开内容通过引用完全结合在本发明中。可以用于稳定本发明的活性(免疫刺激性)组合物的RNA的其它优选的阳离子物质包括阳离子多糖，例如，脱乙酰壳多糖、polybrene、聚氮丙啶(PEI)或聚-L-赖氨酸(PLL)等。本发明活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA与阳离子化合物(例如，作为基于脂质的复合剂的阳离子蛋白或阳离子脂质，例如，oligofectamine)的缔合或复合优选地增加作为药物活性成分存在的所述至少一种RNA向待治疗的细胞或待治疗的生物体内的转运。关于通过复合稳定本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA的稳定作用，还参考本文的公开内容，其也支持RNA的稳定。
按照另一个特别优选的实施方案，所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA可以另外或备选地编码分泌信号肽。所述信号肽是这样的序列，其典型地表现出约15-30个氨基酸的长度，且优选地位于所编码的肽的N端，并不限于此。如本文定义的信号肽优选地允许由所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA编码的抗原、抗原蛋白或抗原肽转运到限定的细胞区室中，优选地转运到细胞表面、内质网(ER)或内体-溶酶体区室中。如本文定义的分泌信号肽序列的实例包括，但不限于此，经典或非经典MHC-分子的信号序列(例如，MHC I和II分子的信号序列，例如，I类MHC分子HLA-A*0201的信号序列)，如本文定义的细胞因子或免疫球蛋白的信号序列，如本文定义的免疫球蛋白或抗体的不变链的信号序列，Lamp1、Tapasin、Erp57、Calretikulin、钙联蛋白(Calnexin)、和其它膜缔合蛋白或与内质网(ER)或内体-溶酶体区室缔合的蛋白的信号序列。特别优选地，按照本发明可以使用I类MHC分子HLA-A*0201的信号序列。
任何上述修饰可以应用于本发明的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA上，并且还应用于在本发明的情形中所使用的任意(m)RNA上，并且可以，如果合适或需要，以任意组合彼此组合，条件是这些修饰组合在各自的至少一种RNA中彼此互不干扰。本领域技术人员能够因此进行他的选择。
按照另一个实施方案，本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物可以包括佐剂。在该情形中，佐剂可以理解为适于支持本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物的施用和递送的任何化合物。此外，所述佐剂可以，不限于此，起始或增加先天免疫系统的免疫反应，即，非特异性免疫反应。换言之，当施用时，本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物典型地由于由包含在本发明的活性(免疫刺激性)组合物中的至少一种RNA编码的至少两种抗原而起始适应性免疫反应。另外，本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物可以由于加入如本文为本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物限定的佐剂而产生(支持性)先天性免疫反应。所述佐剂可以选自本领域技术人员已知的和适用于本情形的任何佐剂，即，支持在哺乳动物中诱导免疫反应的任何佐剂。优选地，所述佐剂可以选自由下列各项组成的组，但不限于此：TDM，MDP，胞壁酰二肽，泊洛沙姆(pluronics)，明矾溶液，氢氧化铝，ADJUMERTM(聚磷腈)；磷酸铝凝胶；源自藻类的葡聚糖；algammulin；氢氧化铝凝胶(明矾)；高蛋白吸附性氢氧化铝凝胶；低粘性氢氧化铝凝胶；AF或SPT(角鲨烷乳状液(5％)，吐温80(0.2％)，泊洛沙姆L121(1.25％)，磷酸盐缓冲液，pH 7.4)；AVRIDINETM(丙烷二胺)；BAYR1005TM((N-(2-脱氧-2-L-亮氨酰氨基-b-D-吡喃葡糖基)-N-十八烷基-十二烷酰-酰胺氢化乙酸(hydroacetate))；CALCITRIOLTM(1-α，25-二羟基-维生素D3)；磷酸钙凝胶；CAPTM(磷酸钙纳米颗粒)；霍乱全毒素，霍乱-毒素-A1-蛋白-A-D-片段融合蛋白，霍乱毒素的B亚基；CRL 1005(嵌段共聚物P1205)；包含细胞因子的脂质体；DDA(二甲基二-十八烷基溴化铵)；DHEA(脱氢表雄酮)；DMPC(二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱)；DMPG(二肉豆蔻酰磷脂酰甘油)；DOC/明矾复合物(脱氧胆酸钠盐)；弗氏完全佐剂；弗氏不完全佐剂；γ菊粉；Gerbu佐剂(下列各项的混合物：i)N-乙酰葡糖胺基-(P 1-4)-N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰基-D-谷氨酰胺(GMDP)，ii)二甲基双十八烷基氯化铵(DDA)，iii)锌-L-脯氨酸盐复合物(ZnPro-8)；GM-CSF)；GMDP(N-乙酰葡糖胺基-(b1-4)-N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰基-D-异谷氨酰胺)；咪喹莫特(1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺)；ImmTherTM(N-乙酰葡糖胺基-N-乙酰胞壁酰-L-Ala-D-异Glu-L-Ala-二棕榈酸甘油酯)；DRVs(由脱水-再水合小泡制备的免疫脂质体)；干扰素-γ；白介素-1β；白介素-2；白介素-7；白介素-12；ISCOMSTM；ISCOPREP 7.0.3.TM；脂质体；LOXORIBINETM(7-烯丙基-8-氧代鸟苷)；LT口服佐剂(大肠杆菌(E.coli)易变肠毒素-前毒素)；任意组成的微球体和微粒；MF59TM；(角鲨烯-水乳状液)；MONTANIDE ISA 51TM(纯化的不完全弗氏佐剂)；MONTANIDEISA 720TM(可代谢的油佐剂)；MPLTM(3-Q-去酰基-4′-单磷酰基脂质A)；MTP-PE和MTP-PE脂质体((N-乙酰基-L-丙氨酰基-D-异谷氨酰基-L-丙氨酸-2-(1，2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-(羟基磷酰氧基))-乙基酰胺，一钠盐)；MURAMETIDETM(Nac-Mur-L-Ala-D-Gln-OCH3)；MURAPALMITINETM和D-MURAPALMITINETM(Nac-Mur-L-Thr-D-异GIn-sn-甘油二棕榈酰)；NAGO(唾液酸苷酶-半乳糖氧化酶)；任意组成的纳米球体或纳米颗粒；NISVs(非离子表面活性剂小泡)；PLEURANTM(β-葡聚糖)；PLGA，PGA和PLA(乳酸和乙醇酸的同聚物-和共聚物；微球体/纳米球体)；PLURONICL121TM；PMMA(聚甲基丙烯酸甲酯)；PODDSTM(类蛋白微球体)；聚乙烯氨基甲酸酯衍生物；聚-rA：聚-rU(聚腺苷酸-聚尿苷酸复合物)；聚山梨酸酯80(吐温80)；螺旋状蛋白(Avanti极性脂质公司(Avanti Polar Lipids，Inc.)，Alabaster，AL)；STIMULONTM(QS-21)；Quil-A(Quil-A皂角苷)；S-28463(4-氨基-otec-二甲基-2-乙氧基甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-1-乙醇)；SAF-1TM(″Syntex佐剂制剂″)；Sendai脂蛋白体(proteoliposomes)和包含Sendai的脂质基质；Span-85(失水山梨糖醇三油酸酯)；Specol(Marcol 52，司盘85和吐温85的乳液)；角鲨烯或(2，6，10，15，19，23-六甲基二十四烷和2，6，10，15，19，23--六甲基-2，6，10，14，18，22-二十四烷己烷)；硬脂酰酪氨酸(十八烷基酪氨酸盐酸盐)；
Figure GPA00001091526200592
(N-乙酰葡糖胺基-N-乙酰基胞壁酰-L-Ala-D-异Glu-L-Ala-二棕榈氧基丙酰胺)；Theronyl-MDP(TermurtideTM或[thr 1]-MDP；N-乙酰基胞壁酰-L-threonyl-D-异谷氨酰胺)；Ty颗粒(Ty-VLPs或病毒样颗粒)；Walter-Reed脂质体(包含吸附在氢氧化铝上的脂质A的脂质体)，和脂质肽，其包括Pam3Cys，特别是铝盐，诸如Adju-phos，铝胶(Alhydrogel)，Rehydragel；乳状液，其包括CFA，SAF，IFA，MF59，Provax，TiterMax，Montanide，Vaxfectin；共聚物，其包括Optivax(CRL1005)，L121，Poloaxmer4010)，等；脂质体，其包括Stealth，cochleates，包括BIORAL；植物来源的佐剂，其包括QS21，Quil A，Iscomatrix，ISCOM；适于共刺激的佐剂，其包括番茄素，生物聚合物，其包括PLG，PMM，菊粉；微生物来源的佐剂，其包括罗莫肽，DETOX，MPL，CWS，甘露糖，CpG核酸序列，CpG7909，人TLR 1-10的配体，鼠TLR 1-13的配体，ISS-1018，IC31，咪唑并喹啉，阿普林津，Ribi529，IMOxine，IRIVs，VLPs，霍乱毒素，热变性毒素，Pam3Cys，鞭毛蛋白，GPI锚定子，LNFPIII/LewisX，抗微生物肽，UC-1V150，RSV融合蛋白，cdiGMP；和适合用作拮抗剂的佐剂，包括CGRP神经肽。
合适的佐剂还可以选自阳离子或聚阳离子化合物，其中所述佐剂优选地当本发明的活性(免疫刺激性组合物)的所述至少一种RNA与所述阳离子或聚阳离子化合物复合时制备。所述活性(免疫刺激性)组合物的RNA与本文定义的阳离子或聚阳离子化合物的缔合或复合优选地为佐剂提供特性，并且赋予所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA的稳定作用。特别地，所述优选的阳离子或聚阳离子化合物选自阳离子或聚阳离子肽或蛋白，其包括鱼精蛋白，核仁蛋白，精胺或亚精胺，或其它阳离子肽或蛋白，诸如聚-L-赖氨酸(PLL)，聚-精氨酸，碱性多肽，穿透细胞的肽(CPPs)，其包括HIV-结合肽，Tat，HIV-1Tat(HIV)，Tat-衍生的肽，Penetrain，VP22来源的或类似物肽，HSV VP22(单纯疱疹)，MAP，KALA或蛋白转导结构域(PTDs，PpT620，富含脯氨酸的肽，富含精氨酸的肽，富含赖氨酸的肽，MPG-肽，Pep-1，L-寡聚物，降钙素肽，触角足来源的肽(特别是来自Drosophila antennapedia)，pAntp，pIsl，FGF，乳铁转运蛋白，Transportan，Buforin-2，Bac715-24，SynB，SynB(1)，pVEC，hCT-来源的肽，SAP，鱼精蛋白，精胺，亚精胺，或组蛋白。其它优选的阳离子或聚阳离子化合物可以包括阳离子多糖，例如，脱乙酰壳多糖，polybrene，阳离子聚合物，例如聚氮丙啶(PEI)，阳离子脂质，例如DOTMA：[1-(2，3-sioleyloxy)丙基)]-N，N，N-三甲基氯化铵，DMRIE，二-C14-脒，DOTIM，SAINT，DC-Chol，BGTC，CTAP，DOPC，DODAP，DOPE：二油基磷脂酰乙醇胺，DOSPA，DODAB，DOIC，DMEPC，DOGS：Dioctadecylamidoglicylspermin，DIMRI：二肉豆蔻酰-氧基丙基二甲基羟基乙基溴化铵，DOTAP：二油酰氧基-3-(三甲基氨溶)丙烷，DC-6-14：O，O-双十四烷酰-N-(α-三甲基氨溶乙酰基)二乙醇胺氯，CLIP1：外消旋-[(2，3-双十八烷基氧基丙基)(2-羟基乙基)]-二甲基氯化铵，CLIP6：外消旋-[2(2，3-双十六烷基氧基丙基-羟甲基氧基)乙基]三甲基铵，CLIP9：外消旋-[2(2，3-双十六烷基氧基丙基-羟基琥珀酰氧基)乙基]-三甲基铵，oligofectamine，或阳离子或聚阳离子聚合物，例如改性聚氨基酸，诸如β-氨基酸-聚合物或反转聚酰胺，等，改性聚乙烯，诸如PVP(聚(N-乙基-4-乙烯基溴化吡啶鎓))，等，改性丙烯酸脂，诸如pDMAEMA(聚(二甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯))，等，改性酰氨基胺(Amidoamines)诸如pAMAM(聚(酰氨基胺))，等，改性聚β氨基酯(PBAE)，诸如二胺末端改性的1，4丁二醇二丙烯酸酯-共-5-氨基-1-戊醇聚合物，等，树状聚体，诸如聚丙胺树状聚体或基于pAMAM的树状聚体，等，聚亚胺，诸如PEI：聚(乙烯亚胺)，聚(丙烯亚胺)，等，聚烯丙基胺，基于糖骨架的聚合物，诸如基于环糊精的聚合物，基于葡萄糖的聚合物，脱乙酰壳聚糖，等，基于硅烷(silan)骨架的聚合物，诸如PMOXA-PDMS共聚物，等，嵌段聚合物，其由一个或多个阳离子嵌段(例如，选自如上文提及的阳离子聚合物)的组合和一个或多个亲水-或疏水-嵌段(例如，聚乙二醇)的组合组成；等。
另外，可以通过与所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA复合而用作佐剂的优选的阳离子或聚阳离子蛋白或肽，可以选自具有下述总式(I)的蛋白或肽：(Arg)l；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；(Xaa)x，其中l+m+n+o+x＝8-15，并且l，m，n或o彼此独立地可以是选自0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15的任一数字，条件是Arg，Lys，His和Orn的总含量占该寡肽的所有氨基酸的至少50％；并且Xaa可以是选自除Arg，Lys，His或Orn外的天然(＝天然存在的)或非天然氨基酸的任何氨基酸；并且x可以是选自0，1，2，3或4的任一数字，条件是Xaa的总含量不超过该寡肽所有氨基酸的50％。在该情形中特别优选的低聚精氨酸是，例如，Arg7，Arg8，Arg9，Arg7，H3R9，R9H3，H3R9H3，YS SR9S SY，(RKH)4，Y(RKH)2R，等。
此外，合适的佐剂可以选自具有式(II)的核酸：GlXmGn，其中：G是鸟苷，尿嘧啶或是鸟苷或尿嘧啶的类似物；X是鸟苷、尿嘧啶、腺苷、胸苷、胞嘧啶或上述提及的核苷酸的类似物；l是1-40的整数，其中当l＝1时，G是鸟苷或其类似物，当l＞1时，至少50％的核苷酸是鸟苷或其类似物；m是整数，并且至少为3；其中当m＝3时，X是尿嘧啶或其类似物，当m＞3时，存在至少3个连续的尿嘧啶或其类似物；n是1-40的整数，其中当n＝1时，G是鸟苷或其类似物，当n＞1时，至少50％的核苷酸是鸟苷或其类似物。
其它合适的佐剂还可以选自具有式(III)的核酸：ClXmCn，其中：C是胞嘧啶、尿嘧啶或者是胞嘧啶或尿嘧啶的类似物；X是鸟苷、尿嘧啶、腺苷、胸苷、胞嘧啶或上述提及的核苷酸的类似物；l是1-40的整数，其中当l＝1时，C是胞嘧啶或其类似物，当l＞1时，至少50％的核苷酸是胞嘧啶或其类似物；m是整数，并且至少为3；其中当m＝3时，X是尿嘧啶或其类似物，当m＞3时，存在至少3个连续的尿嘧啶或其类似物；n是1-40的整数，其中当n＝1时，C是胞嘧啶或其类似物，当n＞1时，至少50％的核苷酸是胞嘧啶或其类似物。
按照一个优选实施方案，本发明还可以提供包含本发明所述的活性(免疫刺激性)组合物的疫苗。本发明的疫苗可以另外包含药用载体和/或其它辅助物质和添加剂和/或佐剂。按照特别优选的实施方案，由包含在本发明的疫苗中的所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA编码的抗原选自上述提及的组或亚组。按照甚至更优选的实施方案，蛋白抗原选自下述亚组的任一种抗原，其包括：NY-ESO1[登记号NM_001327]，hTERT[登记号NM_198253]，存活蛋白[登记号AF077350]，5T4[登记号NM_006670]和WT1[登记号NM_000378]，和/或选自下述亚组的任一种抗原，其包括如本文所定义的MAGE-C1和MAGE-C2，和/或选自下述亚组的任一种抗原，其包括如本文所定义的MAGE-A2和MAGE-A3。
本发明的疫苗典型地包括安全和有效量的如上述定义的所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA，其如上述定义编码至少两种抗原，更优选地编码选自上述组或亚组的任一项的至少两种抗原，最优选地以所示组合的任一种。当用于本文时，“安全和有效量”意指如上定义的疫苗中所述活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA的量，所述量足以显著诱导待治疗的肺癌、优选非小细胞肺癌(NSCLC)相关病症、更优选与三种主要亚型的非小细胞肺癌(NSCLC)相关的病症的积极缓和，所述三种主要亚型的非小细胞肺癌(NSCLC)包括但不限于鳞状细胞肺癌、腺癌和大细胞肺癌。然而，同时，“安全和有效量”是足以避免严重副作用的少量，即，足以允许优点和风险之间的合理关系。这些限制的确定典型地在合理的医学判断的范围之内。关于本发明的疫苗，表述“安全和有效的量”优选地意指这样的RNA量(和所编码的至少两种抗原的量)，其适于以这样的方式刺激适应性免疫系统，以致不获得过量的或破坏性的免疫反应，但是，优选地，也没有低于可测量水平的这样的免疫反应。如上文定义的疫苗中活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA的所述“安全和有效量”还可以取决于RNA的类型进行选择，例如，单顺反子、双-或甚至多顺反子RNA，这是因为双-或甚至多顺反子RNA可以导致比使用等量单顺反子RNA显著更高的编码抗原的表达。包含在本发明疫苗中的如上文定义的活性(免疫刺激性)组合物的至少一种RNA的“安全和有效量”，还将与待治疗的特定病症相关而不同，并且还与待治疗的患者的年龄和身体条件、病症的严重性、治疗的持续时间、伴随治疗的性质、所用的特定药用载体、以及类似因素相关，这在陪同医师的知识和经验范围内。按照本发明的疫苗可以按照本发明作为药物组合物或作为疫苗用于人以及用于兽医医学目的。
按照本发明的疫苗典型地包含药用载体。当用于本文时，表述“药用载体”优选地包括基于液体或非液体的本发明的疫苗。如果本发明的疫苗以液体形式提供，则载体典型地是无热原的水；等渗盐水或缓冲的(水性)溶液，例如，磷酸盐-、柠檬酸盐-缓冲溶液，等等。特别地对于本发明疫苗的注射，可以使用水，或者优选地使用缓冲液，更优选地使用水性缓冲液，其包含钠盐，优选至少50mM的钠盐，钙盐，优选至少0,01mM的钙盐，和任选地钾盐，优选至少3mM的钾盐。按照优选实施方案，所述钠、钙和任选地钾盐可以以它们的卤化物形式存在，例如，氯化物、碘化物或溴化物，以它们的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐、或硫酸盐等形式存在。不限于此，钠盐的实例包括，例如NaCl，NaI，NaBr，Na2CO3，NaHCO3，Na2SO4，任选地钾盐的实例包括，例如KCl，KI，KBr，K2CO3，KHCO3，K2SO4，和钙盐的实例包括例如CaCl2，CaI2，CaBr2，CaCO3，CaSO4，Ca(OH)2。此外，缓冲液中可以包含前述阳离子的有机阴离子。按照更优选的实施方案，如上文定义适于注射目的的缓冲液可以包含选自氯化钠(NaCl)，氯化钙(CaCl2)和任选地氯化钾(KCl)的盐，其中除了氯化物之外可以存在其它阴离子。CaCl2也可以被另一种盐如KCl替换。典型地，注射缓冲液中的盐以至少50mM氯化钠(NaCl)，至少3mM氯化钾(KCl)和至少0,01mM氯化钙(CaCl2)的浓度存在。所述注射缓冲液可以相对于特定的参照介质是高渗的、等渗的或低渗的，即，相对于特定的参照介质，所述缓冲液可以具有更高、相等或更低的盐含量，其中优选地可以使用前文提及的盐的所述浓度，其不导致由于渗透或其它浓度影响引起的对细胞的损伤。参照介质为，例如，在“体内”方法中存在的液体，如血液、淋巴、细胞质液体、或其它体液，或者例如可以在“体外”方法中用作参照介质的液体，诸如普通缓冲剂或液体。所述普通缓冲剂或液体是技术人员已知的。林格-乳酸盐溶液特别优选地用作液体基础。
然而，还可以使用适用于施用给人的一种或多种相容的固体或液体填充剂或稀释剂或包封化合物。术语“相容”用在本文意指本发明疫苗的组成能够以在典型的使用条件下不发生显著降低本发明疫苗的药物效用的相互作用的方式与所述活性(免疫刺激性)组合物的、编码如上文定义的至少两种抗原的所述至少一种RNA相混合。当然，药用载体、填充剂和稀释剂必需具有充分高的纯度和充分低的毒性，以使得它们适用于施用给待治疗的人。可以用作药用载体、填充剂或其组分的化合物的一些实例为糖，诸如例如，乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，诸如例如玉米淀粉或马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，诸如例如，羧甲基纤维素钠，乙基纤维素，醋酸纤维素；粉末状黄蓍胶；麦芽；明胶；牛脂；固体助流剂，诸如例如，硬脂酸，硬脂酸镁；硫酸钙；植物油，诸如例如，花生油，棉籽油，芝麻油，橄榄油，玉米油和可可油；多元醇，诸如例如，聚丙二醇，甘油，山梨糖醇，甘露醇和聚乙二醇；海藻酸。
药用载体的选择主要由施用本发明疫苗的方式决定。例如，本发明的疫苗可以系统性或口服施用。系统性施用的途径通常包括，例如，透皮、口服、肠胃外途径，包括皮下、静脉内、肌内、动脉内、皮内和腹膜内注射和/或鼻内施用途径。局部施用途径通常包括，例如，局部施用途径以及皮内、透皮、皮下、或肌内注射或损伤内、颅骨内、肺内、心脏内、和舌下注射。更优选地，疫苗可以通过皮内、皮下、或肌内途径施用。因此，组合物/疫苗优选地配制为液体或固体形式。本发明的疫苗施用的适合量可以通过用动物模型进行常规实验确定。所述模型包括，但不暗示任何限制，兔、绵羊、小鼠、大鼠、狗和非人灵长动物模型。优选的用于注射的单位剂型包括无菌水溶液、生理盐水或它们的混合物。所述溶液的pH应该调节为约7.4。用于注射的合适载体包括水凝胶、可控或延迟释放的装置、聚乳酸和胶原基质。用于局部应用的合适的药用载体包括适合用在洗液、膏剂、凝胶等中的那些。如果本发明的疫苗应该经口施用，片剂、胶囊等是优选的单位剂型。用于制备可以用于口服施用的单位剂型的药用载体在现有技术中是公知的。其选择取决于次要的考虑，如口味、成本和保存性，其对于本发明的目的不是至关重要的，并且可以由本领域的技术人员不费力的确定。
本发明的疫苗可以另外包含一种或多种辅助物质，以进一步增加免疫原性。由此优选地获得如上文定义的活性(免疫刺激性)组合物的所述至少一种RNA和如上文所述还可以任选地包含在本发明疫苗中的辅助物质的协同作用。取决于辅助物质的各种类型，在这一方面可以考虑多种机制。例如，允许树突细胞(DCs)成熟的化合物，例如脂多糖，TNF-α或CD40配体，形成第一类合适的辅助物质。通常，可以使用以“危险信号”(LPS，GP96，等)方式影响免疫系统的任何试剂或以靶向方式允许由本发明所述的免疫刺激佐剂引起的免疫反应被增强和/或被影响的细胞因子如GM-CFS作为辅助物质。特别优选的辅助物质为细胞因子，诸如，单核因子，淋巴因子，白介素或趋化因子，其----除了通过所编码的至少两种抗原诱导适应性免疫反应之外----促进先天性免疫反应，诸如IL-1，IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-7，IL-8，IL-9，IL-10，IL-12，IL-13，IL-14，IL-15，IL-16，IL-17，IL-18，IL-19，IL-20，IL-21，IL-22，IL-23，IL-24，IL-25，IL-26，IL-27，IL-28，IL-29，IL-30，IL-31，IL-32，IL-33，INF-α，IFN-β，INF-γ，GM-CSF，G-CSF，M-CSF，LT-β或TNF-α，生长因子，如hGH。
可以包含在本发明的疫苗中的其它添加剂为乳状液，诸如例如，湿润剂，诸如例如，十二烷基硫酸钠；着色剂；口味赋予剂，药用载体；片剂形成剂；稳定剂；抗氧化剂；防腐剂。
本发明的疫苗还可以另外包含任何其它化合物，已知其由于其针对人Toll-样受体TLR1，TLR2，TLR3，TLR4，TLR5，TLR6，TLR7，TLR8，TLR9，TLR10的结合亲和力(作为配体)、或由于其针对鼠Toll-样受体TLR1，TLR2，TLR3，TLR4，TLR5，TLR6，TLR7，TLR8，TLR9，TLR10，TLR11，TLR12或TLR13的结合亲和力(作为配体)而是免疫刺激性的。
在该情形中，可以添加到本发明疫苗中的另一类化合物可以是CpG核酸，特别是CpG-RNA或CpG-DNA。CpG-RNA或CpG-DNA可以是单链CpG-DNA(ss CpG-DNA)，双链CpG-DNA(dsDNA)，单链CpG-RNA(ss CpG-RNA)或双链CpG-RNA(ds CpG-RNA)。CpG核酸优选地以CpG-RNA形式存在，更优选地以单链CpG-RNA(ss CpG-RNA)形式存在。CpG核酸优选地包含至少一个或多个(促有丝分裂的)胞嘧啶/鸟嘌呤二核苷酸序列(CpG基序)。按照第一个优选的备选方案，包含在这些序列中的至少一个CpG基序，即CpG基序的C(胞嘧啶)和G(鸟嘌呤)，是未甲基化的。任选地包含在这些序列中的所有其它胞嘧啶或鸟嘌呤可以是甲基化的或未甲基化的。然而，按照更优选的备选方案，CpG基序的C(胞嘧啶)和G(鸟嘌呤)还可以以甲基化形式存在。
按照本发明另一个优选的目的，如本文定义的本发明的活性(免疫刺激性)组合物或编码至少两种(优选地)不同的抗原的所述至少一种RNA可以(用于制备)用于治疗肺癌，优选地非小细胞肺癌(NSCLC)相关的病症，更优选地与三种主要亚型的非小细胞肺癌(NSCLC)相关的病症(的本发明所述的疫苗)，所述三种主要亚型的非小细胞肺癌(NSCLC)包括，但不限于，鳞状细胞肺癌、腺癌和大细胞肺癌。
按照本发明的另一个优选目的，本发明的疫苗或如本文定义的编码至少两种(优选地)不同抗原的至少一种RNA可以用于治疗肺癌，优选地非小细胞肺癌(NSCLC相关疾病，更优选地与三种主要亚型的非小细胞肺癌(NSCLC)相关的病症，所述病症包括但不限于，鳞状细胞肺癌，腺癌和大细胞肺癌。
在该情形中，治疗肺癌、优选地非小细胞肺癌(NSCLC)相关的病症、更优选地与三种主要亚型的非小细胞肺癌(NSCLC)相关的病症的方法也包含在本发明中，所述三种主要亚型的非小细胞肺癌(NSCLC)包括，但不限于，鳞状细胞肺癌、腺癌和大细胞肺癌，所述方法通过向需要其的患者施用药物有效量的本发明的疫苗、或药物有效量的本发明的活性(免疫刺激性)组合物进行。所述方法典型地包括制备本发明的活性(免疫刺激性)组合物、或本发明的疫苗的任选的第一步骤，和第二步骤，其包括向需要其的患者施用(药物有效量的)所述本发明的活性(免疫刺激性)组合物或所述本发明的疫苗。需要其的患者典型地选自任何哺乳动物。在本发明的情形中，哺乳动物优选地选自包括但不限于下列各项的组：例如，山羊、牛、猪、狗、猫、猴、猿，啮齿动物如小鼠、仓鼠、兔，以及特别是人，其中所述哺乳动物典型地患有肺癌，优选地非小细胞肺癌(NSCLC)相关的病症，更优选地与三种主要亚型的非小细胞肺癌(NSCLC)相关的病症，所述三种主要亚型的非小细胞肺癌(NSCLC)包括，但不限于，鳞状细胞肺癌、腺癌和大细胞肺癌或与其相关的病症。
本发明还涉及如本文定义的本发明的活性(免疫刺激性)组合物或编码至少两种(优选地)不同抗原的所述至少一种RNA(用于制备本发明的疫苗)、优选地用于在哺乳动物中引发免疫反应、优选地用于治疗肺癌、更优选地用于治疗如本文定义的非小细胞肺癌(NSCLC)相关病症的应用。
类似地，本发明还涉及如本文定义的本发明的疫苗本身或编码至少两种(优选地)不同抗原的所述至少一种RNA用于在哺乳动物中引发适应性免疫反应、优选地用于治疗肺癌、更优选地用于治疗如本文定义的非小细胞肺癌(NSCLC)相关病症的应用。
在需要其的患者中预防或治疗肺癌、优选地如本文定义的非小细胞肺癌(NSCLC)相关病症可以通过一次性或以时间交错方式施用本发明的活性(免疫刺激性)组合物和/或本发明的疫苗而进行，例如，作为多部件的试剂盒，每个部件包含至少一种优选不同的抗原。对于施用，优选地可以使用如上文定义的任何施用途径。例如，人们可以通过基于由本发明活性(免疫刺激性)组合物的至少一种RNA编码的至少两种(特别选择的)抗原诱导或增强适应性免疫反应而治疗肺癌，优选地如本文定义的非小细胞肺癌(NSCLC)相关病症。然后，可以在施用如本文定义的另一种本发明的创造性活性(免疫刺激性)组合物和/或本发明的疫苗之前、同时和/或随后进行施用本发明的活性(免疫刺激性)组合物和/或本发明的疫苗，其中所述另一种本发明的创造性活性(免疫刺激性)组合物和/或本发明的疫苗可以包含编码不同抗原的另一种RNA组合，其中由本发明活性(免疫刺激性)组合物的至少一种RNA编码的每种抗原可以优选地适用于治疗肺癌，更优选地适用于治疗如本文定义的非小细胞肺癌(NSCLC)相关病症。在该情形中，如本文定义的治疗还可以包括与肺癌相关的疾病、优选如本文定义的非小细胞肺癌(NSCLC)相关疾病的调节。
按照另一个实施方案，本发明还包括所述活性(免疫刺激性)组合物(用于制备)用于在哺乳动物中调节、优选诱导或增强如本文定义的免疫反应的、更优选地支持肺癌、特别是如本文定义的NSCLC的治疗(本发明的疫苗的)应用。在该情形中，肺癌，尤其是如本文定义的NSCLC的治疗的支持可以是用于肺癌，尤其是本文定义的NSCLC的常规癌症治疗的任何组合，诸如放射治疗、化疗、质子治疗、激素治疗、抗体治疗、佐剂治疗、包括除本发明疫苗之外的其它疫苗的治疗、包括激酶抑制剂或小核苷酸的治疗等，或者这些中的一些的组合，和使用如本文定义的本发明活性(免疫刺激性)组合物或本发明疫苗的治疗。对肺癌、特别是如本文定义的NSCLC的治疗的支持还可以在本文定义的任意其它实施方案中讨论。
如本文定义的本发明的活性(免疫刺激性)组合物或编码至少两种(优选地)不同的抗原的至少一种RNA或本发明的疫苗的施用可以在时间交错治疗中进行。时间交错的治疗可以是，例如，在治疗肺癌、特别是NSCLC之前、同时和/或随后施用如本文定义的本发明的活性(免疫刺激性)组合物或编码至少两种(优选地)不同的抗原的至少一种RNA或本发明的疫苗，例如，通过在治疗性适于治疗肺癌、特别是如本文定义的NSCLC的治疗或施用之前、同时和/或随后施用本发明的活性(免疫刺激性)组合物或疫苗。所述时间交错的治疗可以使用例如试剂盒、优选如下文定义的多部件的试剂盒进行。
时间交错的治疗可以另外或备选地还包括以这样的形式施用本发明的活性(免疫刺激性)组合物或疫苗、优选地如上述定义的编码至少两种(优选不同的)抗原的至少一种RNA，其中如上文定义的编码至少两种(优选不同的)抗原的至少一种RNA(其优选地形成本发明的活性(免疫刺激性)组合物或疫苗的一部分)与如上文定义的编码至少两种(优选不同的)抗原的另一种至少一种RNA(其优选地形成同一份本发明的活性(免疫刺激性)组合物或疫苗的一部分)平行、在其之前或之后施用。优选地，(所有至少一种RNA的)施用在1小时内、更优选在30分钟内、甚至更优选地在15，10，5，4，3，或2分钟或者甚至1分钟内进行。所述时间交错的治疗可以使用例如试剂盒、优选如下文定义的多部件的试剂盒进行。
按照最后一个实施方案，本发明还提供试剂盒，特别是多部件的试剂盒，其包括所述活性本发明的(免疫刺激性)组合物、和/或本发明的疫苗，和任选地具有所述本发明的活性(免疫刺激性)组合物和/或本发明的疫苗的施用和剂量的信息的技术说明书。所述技术说明书可以包含关于本发明的活性(免疫刺激性)组合物、和/或本发明的疫苗的施用和剂量的信息。所述试剂盒、优选多部件的试剂盒，可以用于，例如，任何上文提及的应用或用途，优选地用于至少一种本发明的活性(免疫刺激性)组合物(用于制备)治疗肺癌、特别是如本文定义的NSCLC(的本发明的疫苗)的应用。所述试剂盒还可以用于至少一种本发明的活性(免疫刺激性)组合物(用于制备)治疗肺癌、优选是如本文定义的NSCLC(的本发明的疫苗)的应用，其中本发明的活性(免疫刺激性)组合物)和/或所述疫苗由于所编码的至少两种抗原可以能够在如上文定义的哺乳动物中诱导或增强免疫反应。所述试剂盒还可以用于至少一种本发明的活性(免疫刺激性)组合物(用于制备)在如上文定义的哺乳动物中调节、优选引发、例如诱导或增强免疫反应、且优选地支持肺癌、特别是NSCLC治疗(的本发明的疫苗)的应用。多部件的试剂盒，作为试剂盒的特殊形式，可以在试剂盒的不同部件中包含一种或多种相同或不同的活性本发明的(免疫刺激)组合物和/或一种或多种相同或不同的本发明的疫苗。多部件的试剂盒还可以在试剂盒的不同部件中包含(例如一种)活性本发明的(免疫刺激性)组合物、(例如一种)本发明的疫苗和/或如上文定义编码至少一种抗原的至少一种RNA，例如，试剂盒的每个部件包含编码优选不同的抗原的至少一种RNA。另外，两种类型的多部件试剂盒的组合是可以的。例如，当考虑时间交错治疗时，例如，当在同一体内治疗过程中使用不同配制和/或增加浓度的活性本发明的(免疫刺激性)组合物、本发明的疫苗和/或如上文定义的编码至少一种抗原的至少一种RNA时，可以使用多部件试剂盒。还可以在考虑本发明活性(免疫刺激性)组合物的不同抗原(例如，在多部件中)的分开的配制或施用时或有此需要时(例如，为了技术原因)，但是例如仍然实现不同抗原在体内的组合存在时，使用多部件试剂盒。特别地，考虑作为特殊形式的试剂盒的多部件试剂盒，其中所述试剂盒的每个部件包含如上文定义的至少一种优选不同的抗原，所述多部件试剂盒的所有部件优选形成如本文定义的所述活性本发明的(免疫刺激性)组合物或本发明的疫苗。所述特殊的多部件试剂盒可以特别是合适的，例如，如果不同抗原作为该试剂盒的不同部分分别配制，但是然后一起一次性或以时间交错方式施用至需要其的哺乳动物。在后一种情形中，所述试剂盒的所有不同部件的施用典型地在短时间限制内施用，以致所有抗原在紧随试剂盒最后部件的施用之后几乎同时存在于哺乳动物中。上述任一种试剂盒可以用作如上文所述的治疗中。
本发明的优点
本发明提供用于治疗肺癌、特别是非小肺癌(NSCLC)的活性(免疫刺激性)组合物，其中所述组合物包括至少一种RNA、优选mRNA，其编码能够在哺乳动物中引发(适应性)免疫反应的至少两种(优选不同的)抗原，其中所述抗原选自由下列各项组成的组：hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白，MAGE-C1，或MAGE-C2。所述活性(免疫刺激性)组合物允许肺癌、特别是非小肺癌(NSCLC)的有效治疗，或者当使用常规治疗时的补充治疗。此外，它通过利用RNA作为医疗方法的途径而避免所引入的DNA序列的不可控增殖的问题。用在本发明的活性(免疫刺激性)组合物的RNA比DNA表达系统具有其它相当多的优点，例如，在免疫反应、免疫或接种中。这些优点特别包括引入到细胞中的RNA不整合到基因组中。这避免该基因的突变的风险，其另外可以完全或部分被灭活或者产生错误信息。它还避免使用DNA作为诱导免疫反应的试剂(例如，作为疫苗)的其它风险，诸如在已经引入外源DNA的患者中诱导病原性抗-DNA抗体，因此导致(可能是致死性的)免疫反应。相反，尚未检测到抗-RNA抗体。
附图
下述附图意欲进一步举例说明本发明。它们不意欲另外限制本发明的主题。
图1：描述编码MUC1(HsMUC1-5xVNTR(野生型序列通常表示40个串联重复。这些----出于克隆原因----减少为5个串联重复))的RNA序列(SEQ ID NO：1)(起始序列基于野生型)。GC含量：61.27％；长度：1668bp)。
图2：描述编码MUC1的(GC)稳定RNA序列(SEQ ID NO：2)(HsMUC1GC-5xVNTR，1.GC最大化，2.密码子应用)GC含量：73.56％；长度1668bp。与基本序列(图1(SEQ ID NO：1))的不同：398/1668个碱基＝23.86％。
图3：描述编码5T4(Hs5T4(滋养层糖蛋白TPBG)的RNA序列(SEQID NO：3)(起始序列基于野生型)；GC含量：61.60％；长度：1263bp。
图4：描述编码5T4的(GC)稳定RNA序列(SEQ ID NO：4)(Hs5T4GC，1.GC-最大化，2.密码子应用)；GC含量：70.47％；长度1263bp。与基本序列(图3(SEQ ID NO：3))的不同：247/1263个碱基＝19.56％。
图5：描述编码Her-2/neu(HsHer2/neu(v-erb-b2成红血细胞白血病病毒癌基因同源物2))的RNA序列(SEQ ID NO：5)(起始序列基于野生型)；GC含量：60.78％；长度：3768bp。
图6：描述编码Her-2/neu的(GC)稳定RNA序列(SEQ ID NO：6)(HsHer2/neu GC，1.GC-最大化，2.密码子应用)；GC含量：70.54％；长度3768bp。与基本序列(图5(SEQ ID NO：5))的不同：772/3768个碱基＝20.49％。
图7：描述编码hTERT(HsTERT(端粒末端转移酶反转录酶)的RNA序列(SEQ ID NO：7)(起始序列基于野生型)；GC含量：66.08％；长度：3399bp。
图8：描述编码hTERT的(GC)稳定RNA序列(SEQ ID NO：8)(HsTERT GC，1.GC-最大化，2.密码子应用)；GC含量：72.96％；长度3399bp，与基本序列(图7(SEQ ID NO：7))的不同：566/3399个碱基＝16.65％。
图9：描述编码WT1(HsWT1(维尔姆斯瘤1))的RNA序列(SEQ IDNO：9)(起始序列基于野生型)；GC含量：61.78％；长度：1554bp。
图10：图10A)描述编码WT1(HsWT1(维尔姆斯瘤1))的RNA序列(SEQ ID NO：10)，其与野生型序列相对应的区域相比较，在所述序列的区域325-408表现出具有减少的GC含量的序列。图10B)，C)和D)显示相对应的区域325-408的比较：在B)中，图9(SEQ ID NO：9)所述的野生型序列，在C)中，图11(SEQ ID NO：11)所述的GC-最大化的序列，和在D)中，图10(SEQ ID NO：10)所述的GC-减少的序列，其均表现出不同的GC-模式。
图11：描述编码WT1的(GC)稳定RNA序列(SEQ ID NO：11)(HsWT1GC，1.GC-最大化，2.密码子应用)；GC含量：72.59％；长度1554bp。与基本序列(图9(SEQ ID NO：9))的不同：322/1554个碱基＝20.72％。
图12：描述编码CEA(CEA(癌胚抗原)HsCEACAM5)的RNA序列(SEQ ID NO：12)(起始序列基于野生型)；GC含量：52.20％；长度：2109bp。
图13：描述编码CEA的(GC)稳定RNA序列(SEQ ID NO：13)(CEACAM5GC，1.GC-最大化，2.密码子应用，已经在适当的位置)；GC含量：66.24％；长度2109bp。与基本序列(图12(SEQ ID NO：12))的不同：495/2109个碱基＝23.47％。
图14：描述编码MAGE-A2(HsMAGE-A2(黑素瘤抗原家族A，2)HsMAGE-A2B)的RNA序列(SEQ ID NO：14)(起始序列基于野生型)。GC含量：55.87％；长度：945bp。
图15：描述编码MAGE-A2的(GC)稳定RNA序列(SEQ ID NO：15)(HsMAGE-A2B GC，1.GC-最大化，2.密码子应用)；GC含量：68.57％；长度945bp。与基本序列(图14(SEQ ID NO：14))的不同：187/945个碱基＝19.79％。
图16：描述编码MAGE-A3(MAGE-A3(黑素瘤抗原家族A，3)MAGE-A3)的RNA序列(SEQ ID NO：16)(起始序列基于野生型)，GC含量：56.30％；长度：945bp。
图17：描述编码MAGE-A3的(GC)稳定RNA序列(SEQ ID NO：17)(MAGE-A3GC，1.GC-最大化，2.密码子应用，已知富含GC的)；GC含量：69.00％；长度945bp。与基本序列(图16(SEQID NO：16))的不同：190/945个碱基＝20.11％。
图18：描述编码存活蛋白(存活蛋白(包含杆状病毒IAP重复5，BIRC5)HsSurvivin(wt))的RNA序列(SEQ ID NO：18)(起始序列基于野生型)；GC含量：52.68％；长度：429bp。
图19：描述编码存活蛋白的(GC)稳定RNA序列(SEQ ID NO：19)(HsSurvivin(GC)，1.GC-最大化，2.密码子应用，已知富含GC的)；GC含量：65.27％；长度：429bp。与基本序列(图18(SEQID NO：18))的不同：72/429个碱基＝16.78％。
图20：描述编码NY-ESO-1(智人(Homo sapiens)NY-ESO-1(NY-ESO-1(wt))的RNA序列(SEQ ID NO：20)(起始序列基于野生型)；GC-含量67.4％。
图21：描述编码NY-ESO-1的(GC)稳定RNA序列(SEQ ID NO：21)(NY-ESO-1(GC)，GC-含量79.56％，(已知富含GC的)；与野生型(图20(SEQ ID NO：20))的不同：112/543个碱基，20.63％。
图22：描述编码MAGE-C1(HsMAGEC1(黑素瘤抗原家族C，1)HsMAGEC1(wt))的RNA序列(SEQ ID NO：22)(起始序列基于野生型)，GC含量：51.86％；长度：3429bp。
图23：描述编码MAGE-C 1的(GC)稳定RNA序列(SEQ ID NO：23)(HsMAGEC1(GC)，1.GC-最大化，2.密码子应用)。GC含量：68.73％；长度3429bp。与基本序列(图22(SEQ ID NO：22))的不同：964/3429个碱基＝28.11％
图24：描述编码截短的MAGE-C1的(GC)稳定RNA序列(SEQ IDNO：24)(HsMAGEC1(GC)，1.GC-最大化，2.密码子应用)。与基本序列(图22(SEQ ID NO：22))相比较，删除重复区，并且按照图24的序列，在最初的起始密码子(ATG)之后，以613个aa的GC-最大化的野生型序列开始(图23(SEQ ID NO：23))。
图25：描述编码MAGE-C2(HsMAGE-C2(黑素瘤抗原家族C，2)HsMAGE-C2)的RNA序列(SEQ ID NO：25)(起始序列基于野生型)；GC含量：50.81％；长度：1122bp。
图26：描述编码MAGE-C2的(GC)稳定RNA序列(SEQ ID NO：26)(HsMAGE-C2GC，1.GC-最大化，2.密码子应用)；GC含量：66.58％；长度1122bp，与基本序列(图25(SEQ ID NO：25))的不同：264/1122个碱基＝23.53％。
图27显示在用由5种成分组成的mRNA疫苗接种的小鼠中对肿瘤抗原NY-ESO-1特异性的IgG1抗体的存在，所述5种成分分别包含与鱼精蛋白以4∶1的质量比例配制的编码一种NSCLC相关抗原(NY-ESO-1，MAGE-C1，MAGE-C2，存活蛋白和5T4)的mRNA。
图28：显示在用由5种成分组成的mRNA疫苗接种的小鼠中对肿瘤抗原NY-ESO-1特异性的IgG2a抗体的存在，所述5种成分分别包含与鱼精蛋白以4∶1的质量比例配制的编码一种NSCLC相关抗原(NY-ESO-1，MAGE-C1，MAGE-C2，存活蛋白和5T4)的mRNA。
图29：显示在用由5种成分组成的mRNA疫苗接种的小鼠中对肿瘤抗原MAGE-C1特异性的IgG1抗体的存在，所述5种成分分别包含与鱼精蛋白以4∶1的质量比例配制的编码一种NSCLC相关抗原(NY-ESO-1，MAGE-C1，MAGE-C2，存活蛋白和5T4)的mRNA。
图30：显示在用由5种成分组成的mRNA疫苗接种的小鼠中对肿瘤抗原MAGE-C1特异性的IgG2a抗体的存在，所述5种成分分别包含与鱼精蛋白以4∶1的质量比例配制的编码一种NSCLC相关抗原(NY-ESO-1，MAGE-C1，MAGE-C2，存活蛋白和5T4)的mRNA。
图31显示在用由5种成分组成的mRNA疫苗接种的小鼠中对肿瘤抗原MAGE-C2特异性的IgG1抗体的存在，所述5种成分分别包含与鱼精蛋白以4∶1的质量比例配制的编码一种NSCLC相关抗原(NY-ESO-1，MAGE-C1，MAGE-C2，存活蛋白和5T4)的mRNA。
图32：显示在用由5种成分组成的mRNA疫苗接种的小鼠中对肿瘤抗原MAGE-C2特异性的IgG2a抗体的存在，所述5种成分分别包含与鱼精蛋白以4∶1的质量比例配制的编码一种NSCLC相关抗原(NY-ESO-1，MAGE-C1，MAGE-C2，存活蛋白和5T4)的mRNA。
图33：显示在用由5种成分组成的mRNA疫苗接种的小鼠中针对肿瘤抗原5T4的抗原特异性T淋巴细胞的诱导，所述5种成分分别包含与鱼精蛋白以4∶1的质量比例配制的编码一种NSCLC相关抗原(NY-ESO-1，MAGE-C1，MAGE-C2，存活蛋白和5T4)的mRNA。
图34：显示在用由5种成分组成的mRNA疫苗接种的小鼠中针对肿瘤抗原NY-ESO-1的抗原特异性T淋巴细胞的诱导，所述5种成分分别包含与鱼精蛋白以4∶1的质量比例配制的编码一种NSCLC相关抗原(NY-ESO-1，MAGE-C1，MAGE-C2，存活蛋白和5T4)的mRNA。
实施例：
下述实施例意欲进一步举例说明本发明。它们不意欲另外限制本发明的主题。
1.制备编码的质粒：
在下述实验中，分别制备对应于编码下述抗原的各自mRNA序列末端的DNA序列：
·hTERT，
·WT1，
·MAGE-A2，
·5T4，
·MAGE-A3，
·MUC1，
·Her-2/neu，
·NY-ESO-1，
·CEA，
·存活蛋白，
·MAGE-C1，或
·MAGE-C2。
并且用于体外转录和转染实验。由此，对应于天然抗原编码mRNA的DNA序列增加GC-含量且是密码子-优化的。然后，将编码序列转移至RNActive构建体(库瑞瓦格有限责任公司，Tübingen，德国)中，其已经用聚腺苷酸标记和聚胞苷酸标记(A70-C30)进行了修饰。
2.体外转录：
基于在实施例1中获得的重组质粒DNA，通过体外转录制备RNA序列。因此，将所述重组质粒DNA线性化，并且随后使用T7RNA聚合酶在体外转录。然后通过DNA酶I消化降解DNA模板，并且通过LiCl沉淀回收RNA，并且通过HPLC提取(
Figure GPA00001091526200771
库瑞瓦格有限责任公司，Tübingen，德国)进一步纯化。
3.与鱼精蛋白复合
为了将所述RNA转染至细胞和生物体中，将通过体外转录获得的RNA优选地复合，更优选地当将所述RNA与鱼精蛋白混合时与鱼精蛋白复合。
4.接种实验
对于接种，将通过如上述体外转录实验获得的RNA(见实验2)转染到小鼠(小鼠：C57 BL/6)中，优选地在与鱼精蛋白复合时进行(见实验3)。转染发生在不同组中，其中每组5只小鼠(C57BL/6)在3周内用本发明的mRNA混合物即与鱼精蛋白复合的mRNA的混合物皮内免疫8次，其中所述RNA编码抗原hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白，MAGE-C1，或MAGE-C2中的至少两种。
5.检测抗原-特异性免疫反应(B-细胞免疫反应)：
抗原-特异性免疫反应(B-细胞免疫反应)的检测通过检测抗原-特异性抗体进行。因此，在最后一次接种后一周从接种的小鼠采集血液样品，并且制备血清。将MaxiSorb板(Nalgene Nunc International)用由所述mRNA-混合物编码的抗原蛋白(0.5μg/孔)包被。在用包含0.05％吐温-20和1％BSA的1×PBS封闭之后，将板用稀释的小鼠血清(1∶30，1∶90，1∶270，1∶810)温育。随后，加入生物素-偶联的二抗(抗-小鼠-IgG2a Pharmingen)。洗涤后，将板用辣根过氧化物酶-链霉抗生物素蛋白温育，并且随后测量ABTS底物(2，2’-连氮基-二(3-乙基-苯噻唑啉-6-磺酸)的转化。
6.通过ELISPOT检测抗原-特异性细胞免疫反应(T细胞免疫反应)：
在最后一次接种后2周，将小鼠处死，去除脾并且分离脾细胞。在存在来自上述抗原的肽(肽文库)的条件下或与由用编码所述抗原的RNA电穿孔的天然同系小鼠的骨髓细胞产生的树突细胞共温育，将所述脾细胞再刺激7天。为了确定抗原-特异性细胞免疫反应，在再刺激后测量INFγ分泌。为了检测INFγ，将包被多筛选平板(Millipore)用包括针对INFγ的抗体(BD Pharmingen，Heidelberg，德国)的包被缓冲液0.1M碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液pH 9.6，10.59g/l Na2CO3，8.4g/l NaHCO3)温育过夜。在所述平板中以1∶20的比例温育刺激和效应细胞24小时。将板用1×PBS洗涤，并且用生物素-偶联的二抗温育。在用1×PBS/0.05％吐温-20洗涤后，向板中加入底物(5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸/氮蓝四唑液体底物系统，来自SigmaAldrich(西格玛奥德里奇)，Taufkirchen，德国)，并且可以视觉检测底物的转化。
7.肿瘤攻击：
免疫：
在最后一次免疫后一周，将1Mio B16黑素瘤细胞或TRAMP-C1细胞皮下注射至小鼠中。分别在2周(B16)或7周(TRAMP-C1)内，确定肿瘤体积。
8.制备mRNA疫苗
按照上述公开内容，在下述制备本发明的活性(免疫刺激性)组合物的特定实例，其包括一些抗原的组合，用作用于治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的疫苗。所述示例性的本发明的活性(免疫刺激性)组合物由5种成分组成，每种成分包含与鱼精蛋白以4∶1的质量比例配制的编码一种NSCLC相关抗原(NY-ESO-1，MAGE-C1，MAGE-C2，存活蛋白和5T4，按照SEQ ID NOs：4，19，21，24和26(富含GC的序列))的mRNA。接种
将C57BL/6小鼠用由5种成分组成的mRNA疫苗皮内接种，每种成分包含编码一种NSCLC相关抗原(NY-ESO-1，MAGE-C1，MAGE-C2，存活蛋白和5T4，按照SEQ ID NOs：4，19，21，24和26(GC-富集的序列))的mRNA，所述抗原用鱼精蛋白配制(64μg/抗原/周期，分成4次注射/周期)。对照接种使用响应总剂量的编码LacZ的RNA(对照mRNA lacZ)进行。接种包括三个免疫周期(第1、3和5周)。组、小鼠数目和小鼠品系显示在下表中：
  组   小鼠品系   小鼠数目
 mRNA疫苗   C57BL/6  10只5只用于Elispot，5只用于通过ELISA检测血清中的抗体
 对照mRNA lacZ   C57BL/6  5只3只用于Elispot，所有5只用于通过ELISA检测血清中的抗体
检测抗原-特异性的抗体
最后一次接种后6天，后眼窝采集血液样品(200μl)，并且使用ELISA分析血清中抗原特异性抗体亚型IgG1和IgG2a的存在。将96-孔ELISA板用重组蛋白(在包被缓冲液中10μg/ml，在37℃温育4小时)包被，并且每孔用200μl封闭缓冲液在4℃封闭过夜。随后，将样品用从每组小鼠收集的血清温育，并且在室温下在1∶3-1∶48范围内的稀释液中滴定4小时。在用针对小鼠IgG1或IgG2a的特异性抗体(在封闭缓冲液中1∶300)温育和用HRP-偶联的二次抗体(在封闭缓冲液中1∶500)温育后，加入TMB-底物。使用ELISA读数仪(Tecan Deutschland GmbH，Crailsheim，德国)在450nm处测量比色反应。
ELISPOT
为了检测细胞毒性T-淋巴细胞(CTL)反应，使用ELISPOT技术，可以在单细胞水平显现响应特定刺激的效应器细胞因子IFN-γ的分泌的分析。
在最后一次接种后6天，分离来自抗原-接种的和对照小鼠的脾细胞，然后转移至用抗-IFN-γ捕捉抗体(10μg/ml)包被的96-孔ELISPOT板中。然后，将细胞在37℃用相关的抗原-来源的肽文库或用HIV-来源的文库或所述肽的溶剂DMSO刺激24小时，或在纯培养基中温育作为对照。所有文库均以1μg/肽/ml的浓度使用。在温育期间之后，从板洗掉细胞，并且使用针对小鼠IFN-γ的生物素酰化的二次抗体(1μg/ml)、然后是链霉抗生物素蛋白-AKP检测由该细胞分泌的IFN-γ。使用BCIP/NBT底物显现点，并且使用自动ELISPOT读数仪(Immunospot Analyzer，CTL AnalyzersLLC)计数。
统计学分析
使用Graph Pad Prism 5.01(GraphPad Software，Inc.(GraphPad软件公司))进行统计学分析。所有结果表示为平均值(或中值)±平均值的标准误差。对于Elispot测定，由于基本活化是强烈的个体依赖性的事实，通过从所有其它数值中减去培养基孔的点数分别进行每只小鼠的背景校正。使用双尾Mann-Whitney检验来分析测试组之间的不同，显著水平为5％。
结果和讨论
小鼠用如上述定义包含5种成分的mRNA疫苗、特别是分别独立地与阳离子肽鱼精蛋白以4∶1的质量比例配制的编码NSCLC-相关抗原NY-ESO-1，MAGE-C2，MAGE-C1，存活蛋白和5T4，(按照SEQ ID NOs：4，19，21，24和26(富含GC的序列))的富含GC的mRNA接种。对照小鼠用与鱼精蛋白以与所述mRNA疫苗相同的比例配制的编码LacZ的不相关的RNA进行处理。
使用分离自采自抗原-接种的和对照小鼠的血液的血清，我们检测了针对所述抗原的特异性抗体的诱导。对于五种分析的蛋白中的三种，即，MAGE-C1，MAGE-C2和NY-ESO-1，我们在用所述mRNA疫苗接种的小鼠血清中检测到抗原特异性抗体，这表明所述mRNA在体内是功能性的和免疫原性的。检测抗体所需要的蛋白在大肠杆菌(E.coli)中生产。因为在大肠杆菌中的蛋白生产可以影响翻译后修饰，并且对于所用的抗原，没有充分描述这些，这可解释对于其余蛋白观察到的响应的缺乏。
然后，分析了响应所述mRNA疫苗的施用的细胞毒性T细胞的激活。IFN-γ是Th1反应的主要调控子，并且由激活的CTL分泌。因此，使用ELISPOT技术，研究抗原-特异性细胞毒性T细胞在来自接种的小鼠的脾细胞中的存在。使用限制性肽文库作为脾细胞的抗原刺激物。因为所用的人抗原针对小鼠MHC(在C57BL/6小鼠中H-2Kb和H-2Db)的独特表位是未知的，所以我们必须使用通过搜索SYFPEITHI数据库由于潜在的结合亲和性所选择的假设的肽选择。从肽文库(15mers，其中11个氨基酸重叠)，淘选蛋白的完整序列，选择那些包含假设最佳表位的15mers，并且合并至最多18个肽。然而，这些选择可能不必需包含正确的表位，以致在这些工具辅助下的免疫反应检测可能容易地产生假阴性结果。然而，用起源于NY-ESO-1和5T4的这些文库中的两种刺激，在来自用所述mRNA疫苗接种的小鼠的脾细胞中导致高IFN-γ分泌，且在来自用编码不相关蛋白β-半乳糖苷酶的mRNA接种的对照小鼠的脾细胞中没有。所述脾细胞没有一种与HIV-来源的对照肽文库反应。仅在培养基中温育的脾细胞的IFN-γ点数表示新鲜分离的细胞的基本激活。由于基本激活是强烈个体依赖性的事实，所以通过从所有其它数值中减去培养基孔的点数而独立进行背景校正。
三次实验的结果显示在图27-34中。
序列表
 
<110>库瑞瓦格有限责任公司
 
<120>NSCLC-混合物
 
<130>CU01P068WO1
 
<150>PCT/EP2007/008770
<151>2007-10-09
 
<160>28
 
<170>PatentIn version 3.3
 
<210>1
<211>1668
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图1)：编码MUC1(HsMUC1-5xVNTR)的RNA序列
     (起始序列基于野生型)
 
<400>1
atgacaccgg gcacccagtc tcctttcttc ctgctgctgc tcctcacagt gcttacagtt     60
gttacaggtt ctggtcatgc aagctctacc ccaggtggag aaaaggagac ttcggctacc    120
cagagaagtt cagtgcccag ctctactgag aagaatgctg tgagtatgac cagcagcgta    180
ctctccagcc acagccccgg ttcaggctcc tccaccactc agggacagga tgtcactctg    240
gccccggcca cggaaccagc ttcaggttca gctgccacct ggggacagga tgtcacctcg    300
gtcccagtca ccaggccagc cctgggctcc accaccccgc cagcccacga tgtcacctca    360
gccccggaca acaagccagc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg    420
gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg    480
gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg    540
gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg    600
gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg    660
gccccggaca ccaggccggc cccgggctcc accgcccccc cagcccacgg tgtcacctcg    720
gccccggaca acaggcccgc cttgggctcc accgcccctc cagtccacaa tgtcacctcg    780
gcctcaggct ctgcatcagg ctcagcttct actctggtgc acaacggcac ctctgccagg    840
gctaccacaa ccccagccag caagagcact ccattctcaa ttcccagcca ccactctgat    900
actcctacca cccttgccag ccatagcacc aagactgatg ccagtagcac tcaccatagc    960
tcggtacctc ctctcacctc ctccaatcac agcacttctc cccagttgtc tactggggtc   1020
tctttctttt tcctgtcttt tcacatttca aacctccagt ttaattcctc tctggaagat   1080
cccagcaccg actactacca agagctgcag agagacattt ctgaaatgtt tttgcagatt   1140
tataaacaag ggggttttct gggcctctcc aatattaagt tcaggccagg atctgtggtg   1200
gtacaattga ctctggcctt ccgagaaggt accatcaatg tccacgacgt ggagacacag   1260
ttcaatcagt ataaaacgga agcagcctct cgatataacc tgacgatctc agacgtcagc   1320
gtgagtgatg tgccatttcc tttctctgcc cagtctgggg ctggggtgcc aggctggggc   1380
atcgcgctgc tggtgctggt ctgtgttctg gttgcgctgg ccattgtcta tctcattgcc   1440
ttggctgtct gtcagtgccg ccgaaagaac tacgggcagc tggacatctt tccagcccgg   1500
gatacctacc atcctatgag cgagtacccc acctaccaca cccatgggcg ctatgtgccc   1560
cctagcagta ccgatcgtag cccctatgag aaggtttctg caggtaacgg tggcagcagc   1620
ctctcttaca caaacccagc agtggcagcc gcttctgcca acttgtag                1668
 
<210>2
<211>1668
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图2)：编码MUC1的(GC)稳定RNA序列(HsMUC1 GC-5xVNTR)
 
<400>2
atgacccccg gcacccagag cccgttcttc ctgctcctgc tgctcacggt gctgaccgtc     60
gtgaccgggt ccggccacgc cagctccacc cccgggggcg agaaggagac gagcgccacc    120
cagcggtcca gcgtgccctc cagcaccgag aagaacgcgg tctccatgac cagctccgtg    180
ctgagctccc acagccccgg gtccggcagc tccacgaccc agggccagga cgtgaccctc    240
gccccggcca ccgagcccgc cagcgggtcc gccgcgacgt ggggccagga cgtcaccagc    300
gtgcccgtga cccgccccgc cctggggagc accacgccgc ccgcccacga cgtcacctcc    360
gcccccgaca acaagcccgc gccgggcagc accgcccccc ccgcccacgg ggtgacctcc    420
gcccccgaca cgcggccggc ccccggcagc accgcgcccc ccgcccacgg cgtgacctcc    480
gccccggaca cccgccccgc ccccgggagc acggccccgc cggcgcacgg cgtcacctcc    540
gcccccgaca cccggcccgc ccccgggagc accgccccgc ccgcccacgg cgtgacgtcc    600
gcgcccgaca cccgcccggc ccccggcagc accgcccccc ccgcccacgg ggtgacctcc    660
gccccggaca cgcggcccgc gcccggcagc accgccccgc cggcccacgg ggtcacctcc    720
gcccccgaca accgccccgc gctgggcagc accgcccccc cggtgcacaa cgtgacgtcc    780
gccagcgggt ccgccagcgg ctccgccagc accctcgtcc acaacggcac cagcgcgcgg    840
gccaccacca cgcccgcctc caagagcacc cccttctcca tccccagcca ccactccgac    900
accccgacca cgctggccag ccactccacc aagaccgacg ccagctccac ccaccacagc    960
tccgtgccgc cgctgacgag ctccaaccac agcacctccc cccagctcag caccggggtg   1020
tccttcttct tcctgagctt ccacatcagc aacctgcagt tcaactccag cctcgaggac   1080
ccgtccaccg actactacca ggagctgcag cgcgacatca gcgagatgtt cctgcagatc   1140
tacaagcagg gcgggttcct cggcctgtcc aacatcaagt tccggcccgg gagcgtcgtg   1200
gtgcagctga cgctcgcgtt ccgcgagggc accatcaacg tccacgacgt ggagacccag   1260
ttcaaccagt acaagaccga ggccgcctcc cggtacaacc tgacgatcag cgacgtctcc   1320
gtgagcgacg tgcccttccc cttctccgcc cagagcggcg ccggggtccc gggctggggg  1380
atcgcgctgc tcgtgctggt gtgcgtcctg gtggccctcg ccatcgtgta cctgatcgcc  1440
ctggcggtct gccagtgccg ccggaagaac tacggccagc tcgacatctt ccccgcccgc  1500
gacacctacc accccatgtc cgagtacccg acctaccaca cccacgggcg gtacgtgccc  1560
cccagctcca cggaccgcag cccctacgag aaggtgtccg ccggcaacgg cgggagctcc  1620
ctgagctaca ccaacccggc cgtcgccgcg gccagcgcca acctgtga               1668
 
<210>3
<211>1263
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图3)：编码5T4(Hs5T4(滋养层糖蛋白TPBG))的RNA序列
    (起始序列基于野生型)
 
<400>3
atgcctgggg ggtgctcccg gggccccgcc gccggggacg ggcgtctgcg gctggcgcga    60
ctagcgctgg tactcctggg ctgggtctcc tcgtcttctc ccacctcctc ggcatcctcc   120
ttctcctcct cggcgccgtt cctggcttcc gccgtgtccg cccagccccc gctgccggac   180
cagtgccccg cgctgtgcga gtgctccgag gcagcgcgca cagtcaagtg cgttaaccgc   240
aatctgaccg aggtgcccac ggacctgccc gcctacgtgc gcaacctctt ccttaccggc   300
aaccagctgg ccgtgctccc tgccggcgcc ttcgcccgcc ggccgccgct ggcggagctg   360
gccgcgctca acctcagcgg cagccgcctg gacgaggtgc gcgcgggcgc cttcgagcat   420
ctgcccagcc tgcgccagct cgacctcagc cacaacccac tggccgacct cagtcccttc   480
gctttctcgg gcagcaatgc cagcgtctcg gcccccagtc cccttgtgga actgatcctg   540
aaccacatcg tgccccctga agatgagcgg cagaaccgga gcttcgaggg catggtggtg   600
gcggccctgc tggcgggccg tgcactgcag gggctccgcc gcttggagct ggccagcaac   660
cacttccttt acctgccgcg ggatgtgctg gcccaactgc ccagcctcag gcacctggac   720
ttaagtaata attcgctggt gagcctgacc tacgtgtcct tccgcaacct gacacatcta   780
gaaagcctcc acctggagga caatgccctc aaggtccttc acaatggcac cctggctgag   840
ttgcaaggtc taccccacat tagggttttc ctggacaaca atccctgggt ctgcgactgc   900
cacatggcag acatggtgac ctggctcaag gaaacagagg tagtgcaggg caaagaccgg   960
ctcacctgtg catatccgga aaaaatgagg aatcgggtcc tcttggaact caacagtgct  1020
gacctggact gtgacccgat tcttccccca tccctgcaaa cctcttatgt cttcctgggt  1080
attgttttag ccctgatagg cgctattttc ctcctggttt tgtatttgaa ccgcaagggg  1140
ataaaaaagt ggatgcataa catcagagat gcctgcaggg atcacatgga agggtatcat  1200
tacagatatg aaatcaatgc ggaccccaga ttaacgaacc tcagttctaa ctcggatgtc  1260
tga                                                                1263
<210>4
<211>1263
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图4)：编码5T4的(GC)稳定RNA序列(Hs5T4GC)
 
<400>4
atgcccggcg ggtgcagccg gggcccggcc gccggggacg gccgcctgcg gctcgcgcgc     60
ctggccctgg tgctcctggg gtgggtctcc agctccagcc ccacctccag cgcctccagc    120
ttctccagct ccgccccctt cctggccagc gcggtgtccg cccagccccc gctccccgac    180
cagtgccccg ccctgtgcga gtgcagcgag gccgcgcgga ccgtgaagtg cgtcaaccgc    240
aacctgacgg aggtgcccac cgacctcccg gcctacgtgc ggaacctgtt cctgaccggc    300
aaccagctcg ccgtcctgcc cgccggcgcc ttcgcgcgcc ggccgcccct ggccgagctc    360
gccgccctga acctgtccgg gagccgcctc gacgaggtgc gggccggcgc gttcgagcac    420
ctgccgtccc tgcgccagct cgacctgagc cacaaccccc tggccgacct ctcccccttc    480
gccttcagcg ggagcaacgc ctccgtgagc gccccctccc cgctggtcga gctgatcctc    540
aaccacatcg tgccccccga ggacgagcgg cagaaccgca gcttcgaggg catggtggtc    600
gcggccctgc tggccgggcg ggccctccag ggcctgcgcc ggctggagct cgcctccaac    660
cacttcctgt acctgccccg cgacgtgctc gcgcagctgc cgagcctgcg gcacctcgac    720
ctgtccaaca acagcctggt gtccctcacc tacgtcagct tccgcaacct gacgcacctg    780
gagtccctcc acctggagga caacgccctg aaggtgctgc acaacggcac cctcgccgag    840
ctgcaggggc tgccccacat ccgggtgttc ctcgacaaca acccctgggt ctgcgactgc    900
cacatggccg acatggtgac ctggctgaag gagaccgagg tggtccaggg caaggaccgc    960
ctgacgtgcg cgtaccccga gaagatgcgg aaccgggtgc tcctggagct gaacagcgcc   1020
gacctcgact gcgacccgat cctgcccccc tccctgcaga ccagctacgt gttcctcggg   1080
atcgtcctgg ccctgatcgg cgccatcttc ctcctggtgc tgtacctcaa ccgcaagggc   1140
atcaagaagt ggatgcacaa catccgggac gcctgccgcg accacatgga ggggtaccac   1200
taccggtacg agatcaacgc ggacccccgc ctgaccaacc tgtccagcaa ctccgacgtc   1260
tga                                                                 1263
 
<210>5
<211>3768
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图5)：编码Her-2/neu(HsHer2/neu(v-erb-b2成红血细胞白血病病毒癌基因同源物2))
     的RNA序列(起始序列基于野生型)
 
<400>5
atggagctgg cggccttgtg ccgctggggg ctcctcctcg ccctcttgcc ccccggagcc    60
gcgagcaccc aagtgtgcac cggcacagac atgaagctgc ggctccctgc cagtcccgag     120
acccacctgg acatgctccg ccacctctac cagggctgcc aggtggtgca gggaaacctg     180
gaactcacct acctgcccac caatgccagc ctgtccttcc tgcaggatat ccaggaggtg     240
cagggctacg tgctcatcgc tcacaaccaa gtgaggcagg tcccactgca gaggctgcgg     300
attgtgcgag gcacccagct ctttgaggac aactatgccc tggccgtgct agacaatgga     360
gacccgctga acaataccac ccctgtcaca ggggcctccc caggaggcct gcgggagctg     420
cagcttcgaa gcctcacaga gatcttgaaa ggaggggtct tgatccagcg gaacccccag     480
ctctgctacc aggacacgat tttgtggaag gacatcttcc acaagaacaa ccagctggct     540
ctcacactga tagacaccaa ccgctctcgg gcctgccacc cctgttctcc gatgtgtaag     600
ggctcccgct gctggggaga gagttctgag gattgtcaga gcctgacgcg cactgtctgt     660
gccggtggct gtgcccgctg caaggggcca ctgcccactg actgctgcca tgagcagtgt     720
gctgccggct gcacgggccc caagcactct gactgcctgg cctgcctcca cttcaaccac     780
agtggcatct gtgagctgca ctgcccagcc ctggtcacct acaacacaga cacgtttgag     840
tccatgccca atcccgaggg ccggtataca ttcggcgcca gctgtgtgac tgcctgtccc     900
tacaactacc tttctacgga cgtgggatcc tgcaccctcg tctgccccct gcacaaccaa     960
gaggtgacag cagaggatgg aacacagcgg tgtgagaagt gcagcaagcc ctgtgcccga    1020
gtgtgctatg gtctgggcat ggagcacttg cgagaggtga gggcagttac cagtgccaat    1080
atccaggagt ttgctggctg caagaagatc tttgggagcc tggcatttct gccggagagc    1140
tttgatgggg acccagcctc caacactgcc ccgctccagc cagagcagct ccaagtgttt    1200
gagactctgg aagagatcac aggttaccta tacatctcag catggccgga cagcctgcct    1260
gacctcagcg tcttccagaa cctgcaagta atccggggac gaattctgca caatggcgcc    1320
tactcgctga ccctgcaagg gctgggcatc agctggctgg ggctgcgctc actgagggaa    1380
ctgggcagtg gactggccct catccaccat aac acccacctctgcttcgt gcacacggtg    1440
ccctgggacc agctctttcg gaacccgcac caagctctgc tccacactgc caaccggcca    1500
gaggacgagt gtgtgggcga gggcctggcc tgccaccagc tgtgcgcccg agggcactgc    1560
tggggtccag ggcccaccca gtgtgtcaac tgcagccagt tccttcgggg ccaggagtgc    1620
gtggaggaat gccgagtact gcaggggctc cccagggagt atgtgaatgc caggcactgt    1680
ttgccgtgcc accctgagtg tcagccccag aatggctcag tgacctgttt tggaccggag    1740
gctgaccagt gtgtggcctg tgcccactat aaggaccctc ccttctgcgt ggcccgctgc    1800
cccagcggtg tgaaacctga cctctcctac atgcccatct ggaagtttcc agatgaggag    1860
ggcgcatgcc agccttgccc catcaactgc acccactcct gtgtggacct ggatgacaag    1920
ggctgccccg ccgagcagag agccagccct ctgacgtcca tcatctctgc ggtggttggc    1980
attctgctgg tcgtggtctt gggggtggtc tttgggatcc tcatcaagcg acggcagcag    2040
aagatccgga agtacacgat gcggagactg ctgcaggaaa cggagctggt ggagccgctg    2100
acacctagcg gagcgatgcc caaccaggcg cagatgcgga tcctgaaaga gacggagctg  2160
aggaaggtga aggtgcttgg atctggcgct tttggcacag tctacaaggg catctggatc  2220
cctgatgggg agaatgtgaa aattccagtg gccatcaaag tgttgaggga aaacacatcc  2280
cccaaagcca acaaagaaat cttagacgaa gcatacgtga tggctggtgt gggctcccca  2340
tatgtctccc gccttctggg catctgcctg acatccacgg tgcagctggt gacacagctt  2400
atgccctatg gctgcctctt agaccatgtc cgggaaaacc gcggacgcct gggctcccag  2460
gacctgctga actggtgtat gcagattgcc aaggggatga gctacctgga ggatgtgcgg  2520
ctcgtacaca gggacttggc cgctcggaac gtgctggtca agagtcccaa ccatgtcaaa  2580
attacagact tcgggctggc tcggctgctg gacattgacg agacagagta ccatgcagat  2640
gggggcaagg tgcccatcaa gtggatggcg ctggagtcca ttctccgccg gcggttcacc  2700
caccagagtg atgtgtggag ttatggtgtg actgtgtggg agctgatgac ttttggggcc  2760
aaaccttacg atgggatccc agcccgggag atccctgacc tgctggaaaa gggggagcgg  2820
ctgccccagc cccccatctg caccattgat gtctacatga tcatggtcaa atgttggatg  2880
attgactctg aatgtcggcc aagattccgg gagttggtgt ctgaattctc ccgcatggcc  2940
agggaccccc agcgctttgt ggtcatccag aatgaggact tgggcccagc cagtcccttg  3000
gacagcacct tctaccgctc actgctggag gacgatgaca tgggggacct ggtggatgct  3060
gaggagtatc tggtacccca gcagggcttc ttctgtccag accctgcccc gggcgctggg  3120
ggcatggtcc accacaggca ccgcagctca tctaccagga gtggcggtgg ggacctgaca  3180
ctagggctgg agccctctga agaggaggcc cccaggtctc cactggcacc ctccgaaggg  3240
gctggctccg atgtatttga tggtgacctg ggaatggggg cagccaaggg gctgcaaagc  3300
ctccccacac atgaccccag ccctctacag cggtacagtg aggaccccac agtacccctg  3360
ccctctgaga ctgatggcta cgttgccccc ctgacctgca gcccccagcc tgaatatgtg  3420
aaccagccag atgttcggcc ccagccccct tcgccccgag agggccctct gcctgctgcc  3480
cgacctgctg gtgccactct ggaaaggccc aagactctct ccccagggaa gaatggggtc  3540
gtcaaagacg tttttgcctt tgggggtgcc gtggagaacc ccgagtactt gacaccccag  3600
ggaggagctg cccctcagcc ccaccctcct cctgccttca gcccagcctt cgacaacctc  3660
tattactggg accaggaccc accagagcgg ggggctccac ccagcacctt caaagggaca  3720
cctacggcag agaacccaga gtacctgggt ctggacgtgc cagtgtga               3768
 
<210>6
<211>3768
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图6)：编码Her-2/neu的(GC)稳定RNA序列(HsHer2/neu GC)
 
<400>6
atggagctgg ccgccctctg ccggtggggc ctgctgctcg cgctgctgcc cccgggggcc      60
gccagcaccc aggtgtgcac cggcacggac atgaagctcc gcctgcccgc ctcccccgag     120
acccacctgg acatgctccg gcacctgtac caggggtgcc aggtcgtgca gggcaacctg     180
gagctcacct acctgcccac caacgccagc ctgtccttcc tccaggacat ccaggaggtg     240
caggggtacg tcctgatcgc gcacaaccag gtgcgccagg tgccgctgca gcggctccgc     300
atcgtccggg gcacgcagct gttcgaggac aactacgccc tggccgtgct cgacaacggc     360
gaccccctga acaacaccac ccccgtgacc ggggccagcc ccggcgggct gcgcgagctc     420
cagctgcggt ccctgacgga gatcctcaag ggcggggtcc tgatccagcg caacccgcag     480
ctgtgctacc aggacaccat cctctggaag gacatcttcc acaagaacaa ccagctggcg     540
ctgaccctca tcgacaccaa ccggagccgc gcctgccacc cctgctcccc catgtgcaag     600
ggcagccggt gctggggcga gtccagcgag gactgccagt ccctgacgcg caccgtgtgc     660
gccgggggct gcgcccggtg caaggggccc ctgccgaccg actgctgcca cgagcagtgc     720
gccgcgggct gcaccggccc caagcacagc gactgcctcg cctgcctgca cttcaaccac     780
tccgggatct gcgagctgca ctgccccgcc ctcgtgacgt acaacaccga caccttcgag     840
agcatgccca acccggaggg ccgctacacc ttcggggcct cctgcgtcac ggcctgcccc     900
tacaactacc tgagcaccga cgtgggctcc tgcaccctgg tgtgccccct ccacaaccag     960
gaggtcaccg cggaggacgg gacgcagcgg tgcgagaagt gcagcaagcc ctgcgcccgc    1020
gtgtgctacg gcctgggcat ggagcacctg cgggaggtgc gcgccgtcac ctccgccaac    1080
atccaggagt tcgccgggtg caagaagatc ttcggcagcc tcgcgttcct gccggagagc    1140
ttcgacgggg accccgcctc caacaccgcc cccctgcagc ccgagcagct gcaggtgttc    1200
gagaccctcg aggagatcac gggctacctg tacatcagcg cctggccgga ctccctgccc    1260
gacctcagcg tgttccagaa cctgcaggtc atccgggggc gcatcctgca caacggcgcc    1320
tactccctca ccctgcaggg cctggggatc agctggctcg gcctgcggtc cctgcgggag    1380
ctcgggagcg gcctggcgct gatccaccac aacacccacc tctgcttcgt gcacaccgtg    1440
ccctgggacc agctgttccg caacccccac caggccctgc tccacacggc caaccggccg    1500
gaggacgagt gcgtcgggga gggcctggcc tgccaccagc tgtgcgcgcg cggccactgc    1560
tgggggcccg gccccaccca gtgcgtgaac tgctcccagt tcctccgggg gcaggagtgc    1620
gtcgaggagt gccgcgtgct gcagggcctg ccgcgggagt acgtgaacgc ccgccactgc    1680
ctcccctgcc accccgagtg ccagccccag aacggcagcg tcacctgctt cgggccggag    1740
gccgaccagt gcgtggcctg cgcccactac aaggacccgc ccttctgcgt ggcgcggtgc    1800
ccctccggcg tcaagccgga cctgagctac atgcccatct ggaagttccc cgacgaggag    1860
ggggcctgcc agccctgccc gatcaactgc acccactcct gcgtggacct ggacgacaag    1920
ggctgccccg ccgagcagcg cgccagcccc ctcacgtcca tcatcagcgc cgtggtcggg    1980
atcctgctgg tggtggtcct cggcgtggtg ttcggcatcc tgatcaagcg gcgccagcag    2040
aagatccgga agtacaccat gcgccggctg ctccaggaga ccgagctggt cgagcccctg  2100
accccgtccg gggcgatgcc caaccaggcc cagatgcgca tcctcaagga gaccgagctg  2160
cggaaggtga aggtgctggg cagcggggcc ttcggcacgg tctacaaggg gatctggatc  2220
cccgacggcg agaacgtgaa gatccccgtg gccatcaagg tcctccgcga gaacacctcc  2280
ccgaaggcca acaaggagat cctggacgag gcgtacgtga tggccggcgt ggggagcccc  2340
tacgtcagcc ggctgctcgg catctgcctg acctccaccg tgcagctggt gacgcagctc  2400
atgccctacg ggtgcctgct ggaccacgtc cgcgagaacc ggggccggct cgggagccag  2460
gacctgctga actggtgcat gcagatcgcc aagggcatgt cctacctcga ggacgtgcgc  2520
ctggtgcacc gggacctggc cgcgcgcaac gtcctcgtga agagccccaa ccacgtgaag  2580
atcaccgact tcggcctggc ccggctgctc gacatcgacg agaccgagta ccacgccgac  2640
gggggcaagg tcccgatcaa gtggatggcc ctggagtcca tcctgcgccg gcgcttcacc  2700
caccagagcg acgtgtggtc ctacggggtg acggtctggg agctcatgac cttcggcgcc  2760
aagccctacg acgggatccc cgcgcgggag atcccggacc tgctggagaa gggcgagcgc  2820
ctcccccagc cccccatctg caccatcgac gtgtacatga tcatggtgaa gtgctggatg  2880
atcgacagcg agtgccggcc gcgcttccgg gagctggtct ccgagttcag ccgcatggcc  2940
cgggaccccc agcgcttcgt ggtgatccag aacgaggacc tgggccccgc ctcccccctc  3000
gacagcacct tctaccggtc cctgctggag gacgacgaca tgggggacct cgtcgacgcc  3060
gaggagtacc tggtgccgca gcagggcttc ttctgccccg accccgcccc cggggcgggc  3120
ggcatggtgc accaccgcca ccggagctcc agcacgcgct ccgggggcgg ggacctgacc  3180
crcggcctgg agccgagcga ggaggaggcc ccgcggagcc ccctggcccc ctccgagggg  3240
gccggcagcg acgtcttcga cggcgacctc gggatgggcg ccgcgaaggg gctgcagtcc  3300
ctgccgaccc acgaccccag ccccctccag cgctactccg aggaccccac cgtgccgctg  3360
cccagcgaga cggacggcta cgtggccccc ctgacctgct ccccgcagcc ggagtacgtc  3420
aaccagcccg acgtgcggcc ccagcccccg agcccccggg aggggcccct cccggccgcc  3480
cgccccgcgg gcgccaccct ggagcggccc aagaccctgt cccccggcaa gaacggggtg  3540
gtcaaggacg tgttcgcctt cggcggggcc gtcgagaacc cggagtacct cacgccccag  3600
ggcggggccg cgccccagcc ccacccgccc cccgccttca gccccgcctt cgacaacctg  3660
tactactggg accaggaccc gccggagcgc ggcgcccccc cctccacctt caagggcacc  3720
ccgaccgccg agaaccccga gtacctgggg ctcgacgtgc ccgtgtga               3768
 
<210>7
<211>3399
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图7)：编码hTERT(HsTERT(端粒末端转移酶反转录酶))的RNA序列
     (起始序列基于野生型)
<400>7
atgccgcgcg ctccccgctg ccgagccgtg cgctccctgc tgcgcagcca ctaccgcgag      60
gtgctgccgc tggccacgtt cgtgcggcgc ctggggcccc agggctggcg gctggtgcag     120
cgcggggacc cggcggcttt ccgcgcgctg gtggcccagt gcctggtgtg cgtgccctgg     180
gacgcacggc cgccccccgc cgccccctcc ttccgccagg tgtcctgcct gaaggagctg     240
gtggcccgag tgctgcagag gctgtgcgag cgcggcgcga agaacgtgct ggccttcggc     300
ttcgcgctgc tggacggggc ccgcgggggc ccccccgagg ccttcaccac cagcgtgcgc     360
agctacctgc ccaacacggt gaccgacgca ctgcggggga gcggggcgtg ggggctgctg     420
ctgcgccgcg tgggcgacga cgtgctggtt cacctgctgg cacgctgcgc gctctttgtg     480
ctggtggctc ccagctgcgc ctaccaggtg tgcgggccgc cgctgtacca gctcggcgct     540
gccactcagg cccggccccc gccacacgct agtggacccc gaaggcgtct gggatgcgaa     600
cgggcctgga accatagcgt cagggaggcc ggggtccccc tgggcctgcc agccccgggt     660
gcgaggaggc gcgggggcag tgccagccga agtctgccgt tgcccaagag gcccaggcgt     720
ggcgctgccc ctgagccgga gcggacgccc gttgggcagg ggtcctgggc ccacccgggc     780
aggacgcgtg gaccgagtga ccgtggtttc tgtgtggtgt cacctgccag acccgccgaa     840
gaagccacct ctttggaggg tgcgctctct ggcacgcgcc actcccaccc atccgtgggc     900
cgccagcacc acgcgggccc cccatccaca tcgcggccac cacgtccctg ggacacgcct     960
tgtcccccgg tgtacgccga gaccaagcac ttcctctact cctcaggcga caaggagcag    1020
ctgcggccct ccttcctact cagctctctg aggcccagcc tgactggcgc tcggaggctc    1080
gtggagacca tctttctggg ttccaggccc tggatgccag ggactccccg caggttgccc    1140
cgcctgcccc agcgctactg gcaaatgcgg cccctgtttc tggagctgct tgggaaccac    1200
gcgcagtgcc cctacggggt gctcctcaag acgcactgcc cgctgcgagc tgcggtcacc    1260
ccagcagccg gtgtctgtgc ccgggagaag ccccagggct ctgtggcggc ccccgaggag    1320
gaggacacag acccccgtcg cctggtgcag ctgctccgcc agcacagcag cccctggcag    1380
gtgtacggct tcgtgcgggc ctgcctgcgc cggctggtgc ccccaggcct ctggggctcc    1440
aggcacaacg aacgccgctt cctcaggaac accaagaagt tcatctccct ggggaagcat    1500
gccaagctct cgctgcagga gctgacgtgg aagatgagcg tgcgggactg cgcttggctg    1560
cgcaggagcc caggggttgg ctgtgttccg gccgcagagc accgtctgcg tgaggagatc    1620
ctggccaagt tcctgcactg gctgatgagt gtgtacgtcg tcgagctgct caggtctttc    1680
ttttatgtca cggagaccac gtttcaaaag aacaggctct ttttctaccg gaagagtgtc    1740
tggagcaagt tgcaaagcat tggaatcaga cagcacttga agagggtgca gctgcgggag    1800
ctgtcggaag cagaggtcag gcagcatcgg gaagccaggc ccgccctgct gacgtccaga    1860
ctccgcttca tccccaagcc tgacgggctg cggccgattg tgaacatgga ctacgtcgtg    1920
ggagccagaa cgttccgcag agaaaagagg gccgagcgtc tcacctcgag ggtgaaggca    1980
ctgttcagcg tgctcaacta cgagcgggcg cggcgccccg gcctcctggg cgcctctgtg  2040
ctgggcctgg acgatatcca cagggcctgg cgcaccttcg tgctgcgtgt gcgggcccag  2100
gacccgccgc ctgagctgta ctttgtcaag gtggatgtga cgggcgcgta cgacaccatc  2160
ccccaggaca ggctcacgga ggtcatcgcc agcatcatca aaccccagaa cacgtactgc  2220
gtgcgtcggt atgccgtggt ccagaaggcc gcccatgggc acgtccgcaa ggccttcaag  2280
agccacgtct ctaccttgac agacctccag ccgtacatgc gacagttcgt ggctcacctg  2340
caggagacca gcccgctgag ggatgccgtc gtcatcgagc agagctcctc cctgaatgag  2400
gccagcagtg gcctcttcga cgtcttccta cgcttcatgt gccaccacgc cgtgcgcatc  2460
aggggcaagt cctacgtcca gtgccagggg atcccgcagg gctccatcct ctccacgctg  2520
ctctgcagcc tgtgctacgg cgacatggag aacaagctgt ttgcggggat tcggcgggac  2580
gggctgctcc tgcgtttggt ggatgatttc ttgttggtga cacctcacct cacccacgcg  2640
aaaaccttcc tcaggaccct ggtccgaggt gtccctgagt atggctgcgt ggtgaacttg  2700
cggaagacag tggtgaactt ccctgtagaa gacgaggccc tgggtggcac ggcttttgtt  2760
cagatgccgg cccacggcct attcccctgg tgcggcctgc tgctggatac ccggaccctg  2820
gaggtgcaga gcgactactc cagctatgcc cggacctcca tcagagccag tctcaccttc  2880
aaccgcggct tcaaggctgg gaggaacatg cgtcgcaaac tctttggggt cttgcggctg  2940
aagtgtcaca gcctgtttct ggatttgcag gtgaacagcc tccagacggt gtgcaccaac  3000
atctacaaga tcctcctgct gcaggcgtac aggtttcacg catgtgtgct gcagctccca  3060
tttcatcagc aagtttggaa gaaccccaca tttttcctgc gcgtcatctc tgacacggcc  3120
tccctctgct actccatcct gaaagccaag aacgcaggga tgtcgctggg ggccaagggc  3180
gccgccggcc ctctgccctc cgaggccgtg cagtggctgt gccaccaagc attcctgctc  3240
aagctgactc gacaccgtgt cacctacgtg ccactcctgg ggtcactcag gacagcccag  3300
acgcagctga gtcggaagct cccggggacg acgctgactg ccctggaggc cgcagccaac  3360
ccggcactgc cctcagactt caagaccatc ctggactga                         3399
 
<210>8
<211>3399
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图8)：编码hTERT的(GC)稳定RNA序列(HsTERT GC)
 
<400>8
atgccccggg ccccgcgctg ccgggccgtg cgcagcctgc tccggtccca ctaccgcgag    60
gtcctgcccc tggcgacctt cgtgcggcgc ctcggccccc aggggtggcg gctggtgcag   120
cgcggcgacc ccgccgcctt ccgggccctg gtcgcccagt gcctcgtgtg cgtgccgtgg   180
gacgcgcgcc ccccgcccgc cgccccgagc ttccggcagg tctcctgcct gaaggagctg   240
gtggcccgcg tgctccagcg gctgtgcgag cgcggggcga agaacgtcct ggccttcggc   300
ttcgccctcc tggacggggc ccggggcggc ccccccgagg ccttcaccac gagcgtgcgc     360
tcctacctgc ccaacaccgt gaccgacgcg ctccggggga gcggcgcctg ggggctgctg     420
ctccgccggg tcggcgacga cgtgctggtg cacctgctcg cccgctgcgc cctgttcgtc     480
ctggtggccc cgtcctgcgc gtaccaggtg tgcgggcccc cgctctacca gctgggcgcc     540
gccacccagg cccggccccc gccccacgcc agcggccccc ggcgccggct ggggtgcgag     600
cgcgcgtgga accactccgt ccgggaggcc ggcgtgcccc tcgggctgcc ggcccccggc     660
gcccgccggc gcggcgggag cgcctcccgg agcctgcccc tccccaagcg cccgcggcgc     720
ggcgcggccc ccgagcccga gcggacgccc gtggggcagg gctcctgggc ccacccgggg     780
cgcacccggg gccccagcga ccgcggcttc tgcgtcgtgt cccccgcccg gccggcggag     840
gaggccacca gcctggaggg ggccctgtcc ggcacccgcc acagccaccc ctccgtgggg     900
cggcagcacc acgccggccc ccccagcacg agccgcccgc cccggccctg ggacaccccc     960
tgcccgcccg tctacgccga gaccaagcac ttcctctact ccagcgggga caaggagcag    1020
ctgcggccct ccttcctgct cagctccctg cgccccagcc tgaccggcgc gcggcgcctc    1080
gtggagacga tcttcctggg ctcccggccg tggatgcccg ggaccccgcg ccggctgccc    1140
cgcctcccgc agcggtactg gcagatgcgc cccctgttcc tggagctcct gggcaaccac    1200
gcccagtgcc cctacggggt cctgctgaag acccactgcc ccctccgggc cgccgtgacc    1260
ccggccgcgg gcgtgtgcgc ccgcgagaag ccccagggga gcgtcgccgc ccccgaggag    1320
gaggacacgg acccccggcg cctggtgcag ctgctccggc agcactccag cccgtggcag    1380
gtgtacggct tcgtccgcgc ctgcctgcgg cgcctggtgc cccccggcct ctgggggtcc    1440
cggcacaacg agcgccggtt cctgcgcaac accaagaagt tcatcagcct gggcaagcac    1500
gcgaagctct ccctgcagga gctgacctgg aagatgagcg tgcgggactg cgcctggctc    1560
cggcgctccc cgggggtcgg ctgcgtgccc gccgccgagc accggctgcg cgaggagatc    1620
ctggcgaagt tcctccactg gctgatgagc gtgtacgtcg tggagctgct ccggtccttc    1680
ttctacgtga ccgagacgac cttccagaag aaccgcctgt tcttctaccg gaagagcgtc    1740
tggtccaagc tgcagagcat cggcatccgc cagcacctca agcgggtgca gctgcgcgag    1800
ctgagcgagg ccgaggtgcg gcagcaccgc gaggcccggc ccgccctcct gacctcccgc    1860
ctgcggttca tccccaagcc ggacgggctc cgccccatcg tcaacatgga ctacgtggtg    1920
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caggagacga gccccctgcg cgacgccgtc gtgatcgagc agtccagctc cctcaacgag    2400
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cagatgcccg cccacgggct gttcccctgg tgcggcctgc tcctggacac ccggacgctg    2820
gaggtccaga gcgactacag ctcctacgcc cgcaccagca tccgggcctc cctcaccttc    2880
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aagtgccaca gcctgttcct ggacctccag gtcaactccc tgcagaccgt gtgcacgaac    3000
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tccctgtgct acagcatcct caaggccaag aacgccggga tgtccctggg cgcgaagggg    3180
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aagctcaccc ggcaccgcgt cacgtacgtg ccgctgctgg gctccctccg gaccgcgcag    3300
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cccgccctgc cctccgactt  caagaccatc ctcgactga                          3399
 
<210>9
<211>1554
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图9)：编码WT1(HsWT1(维尔姆斯瘤1))的RNA序列
     (起始序列基于野生型)
 
<400>9
ctgcaggacc cggcttccac gtgtgtcccg gagccggcgt ctcagcacac gctccgctcc      60
gggcctgggt gcctacagca gccagagcag cagggagtcc gggacccggg cggcatctgg     120
gccaagttag gcgccgccga ggccagcgct gaacgtctcc agggccggag gagccgcggg     180
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ggccccgcgc cgccaccggc tccgccgcca cccccgccgc cgccgcctca ctccttcatc     420
aaacaggagc cgagctgggg cggcgcggag ccgcacgagg agcagtgcct gagcgccttc     480
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accttcgacg ggacgcccag ctacggtcac acgccctcgc accatgcggc gcagttcccc   720
aaccactcat tcaagcatga ggatcccatg ggccagcagg gctcgctggg tgagcagcag   780
tactcggtgc cgcccccggt ctatggctgc cacaccccca ccgacagctg caccggcagc   840
caggctttgc tgctgaggac gccctacagc agtgacaatt tataccaaat gacatcccag   900
cttgaatgca tgacctggaa tcagatgaac ttaggagcca ccttaaaggg agttgctgct   960
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<210>10
<211>1554
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图10)：编码WT1(HsWT1(维尔姆斯瘤1))的RNA序列，
     其与野生型序列相对应的区域相比较，在所述序列的区域325-408表现出
     具有减少的GC含量的序列
 
<400>10
atgcaggacc ccgccagcac ctgcgtgccg gagcccgcct cccagcacac cctccggagc   60
ggccccgggt gcctgcagca gcccgagcag cagggcgtcc gcgacccggg cgggatctgg  120
gcgaagctgg gggccgccga ggcctccgcc gagcggctcc agggccgccg gagccgcggc  180
gcgtccggga gcgagcccca gcagatgggc tccgacgtgc gggacctgaa cgccctgctc  240
cccgccgtgc ccagcctggg cggcgggggc gggtgcgccc tgccggtctc cggggcggcc  300
cagtgggccc ccgtgctcga cttcgctcct ccaggagcta gcgcttacgg atctctggga  360
ggacctgctc ctccacccgc tccgccacct cctccaccac ctccacctca cagcttcatc  420
aagcaggagc cctcctgggg cggcgccgag ccccacgagg agcagtgcct gagcgccttc  480
acggtgcact tctccgggca gttcaccggg accgcggggg cctgccgcta cggccccttc  540
ggcccgcccc ccccgagcca ggcctccagc gggcaggccc ggatgttccc caacgccccc  600
tacctcccct cctgcctgga gagccagccg gcgatccgca accagggcta cagcaccgtc  660
acgttcgacg ggaccccctc ctacggccac acccccagcc accacgccgc ccagttcccc    720
aaccactcct tcaagcacga ggacccgatg gggcagcagg gcagcctggg cgagcagcag    780
tactccgtgc ccccgcccgt gtacgggtgc cacaccccga cggacagctg caccggctcc    840
caggccctcc tgctgcggac cccctacagc tccgacaacc tctaccagat gaccagccag    900
ctggagtgca tgacgtggaa ccagatgaac ctgggggcca ccctcaaggg cgtcgcggcc    960
gggtccagct ccagcgtgaa gtggaccgag ggccagtcca accacagcac cggctacgag   1020
tccgacaacc acacgacccc catcctgtgc ggggcccagt accgcatcca cacccacggc   1080
gtgttccggg ggatccagga cgtccgccgg gtgcccggcg tggccccgac cctggtccgc   1140
agcgcgtccg agacgagcga gaagcggccc ttcatgtgcg cctaccccgg ctgcaacaag   1200
cgctacttca agctcagcca cctgcagatg cactcccgga agcacaccgg ggagaagccc   1260
taccagtgcg acttcaagga ctgcgagcgc cggttcagcc gctccgacca gctgaagcgg   1320
caccagcggc gccacaccgg cgtgaagccg ttccagtgca agacctgcca gcggaagttc   1380
agccgctccg accacctcaa gacgcacacc cggacccaca ccgggaagac gagcgagaag   1440
cccttctcct gccgctggcc cagctgccag aagaagttcg cccggtccga cgagctggtg   1500
cgccaccaca acatgcacca gcggaacatg accaagctgc agctcgccct gtga         1554
 
<210>11
<211>1554
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图11)：编码WT1的(GC)稳定RNA序列(HsWT1GC)
 
<400>11
atgcaggacc ccgccagcac ctgcgtgccg gagcccgcct cccagcacac cctccggagc     60
ggccccgggt gcctgcagca gcccgagcag cagggcgtcc gcgacccggg cgggatctgg    120
gcgaagctgg gggccgccga ggcctccgcc gagcggctcc agggccgccg gagccgcggc    180
gcgtccggga gcgagcccca gcagatgggc tccgacgtgc gggacctgaa cgccctgctc    240
cccgccgtgc ccagcctggg cggcgggggc gggtgcgccc tgccggtctc cggggcggcc    300
cagtgggccc ccgtgctcga cttcgccccc cccggcgcca gcgcgtacgg gtccctgggc    360
ggcccggccc cgccccccgc cccgcccccc ccgccgcccc ccccgccgca cagcttcatc    420
aagcaggagc cctcctgggg cggcgccgag ccccacgagg agcagtgcct gagcgccttc    480
acggtgcact tctccgggca gttcaccggg accgcggggg cctgccgcta cggccccttc    540
ggcccgcccc ccccgagcca ggcctccagc gggcaggccc ggatgttccc caacgccccc    600
tacctcccct cctgcctgga gagccagccg gcgatccgca accagggcta cagcaccgtc    660
acgttcgacg ggaccccctc ctacggccac acccccagcc accacgccgc ccagttcccc    720
aaccactcct tcaagcacga ggacccgatg gggcagcagg gcagcctggg cgagcagcag    780
tactccgtgc ccccgcccgt gtacgggtgc cacaccccga cggacagctg caccggctcc    840
caggccctcc tgctgcggac cccctacagc tccgacaacc tctaccagat gaccagccag   900
ctggagtgca tgacgtggaa ccagatgaac ctgggggcca ccctcaaggg cgtcgcggcc   960
gggtccagct ccagcgtgaa gtggaccgag ggccagtcca accacagcac cggctacgag  1020
tccgacaacc acacgacccc catcctgtgc ggggcccagt accgcatcca cacccacggc  1080
gtgttccggg ggatccagga cgtccgccgg gtgcccggcg tggccccgac cctggtccgc  1140
agcgcgtccg agacgagcga gaagcggccc ttcatgtgcg cctaccccgg ctgcaacaag  1200
cgctacttca agctcagcca cctgcagatg cactcccgga agcacaccgg ggagaagccc  1260
taccagtgcg acttcaagga ctgcgagcgc cggttcagcc gctccgacca gctgaagcgg  1320
caccagcggc gccacaccgg cgtgaagccg ttccagtgca agacctgcca gcggaagttc  1380
agccgctccg accacctcaa gacgcacacc cggacccaca ccgggaagac gagcgagaag  1440
cccttctcct gccgctggcc cagctgccag aagaagttcg cccggtccga cgagctggtg  1500
cgccaccaca acatgcacca gcggaacatg accaagctgc agctcgccct gtga        1554
 
<210>12
<211>2109
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图12)：编码cEA(cEA(癌胚抗原)HscEAcAM5)的RNA序列
     (起始序列基于野生型)
 
<400>12
atggagtctc cctcggcccc tccccacaga tggtgcatcc cctggcagag gctcctgctc    60
acagcctcac ttctaacctt ctggaacccg cccaccactg ccaagctcac tattgaatcc   120
acgccgttca atgtcgcaga ggggaaggag gtgcttctac ttgtccacaa tctgccccag   180
catctttttg gctacagctg gtacaaaggt gaaagagtgg atggcaaccg tcaaattata   240
ggatatgtaa taggaactca acaagctacc ccagggcccg catacagtgg tcgagagata   300
atatacccca atgcatccct gctgatccag aacatcatcc agaatgacac aggattctac   360
accctacacg tcataaagtc agatcttgtg aatgaagaag caactggcca gttccgggta   420
tacccggagc tgcccaagcc ctccatctcc agcaacaact ccaaacccgt ggaggacaag   480
gatgctgtgg ccttcacctg tgaacctgag actcaggacg caacctacct gtggtgggta   540
aacaatcaga gcctcccggt cagtcccagg ctgcagctgt ccaatggcaa caggaccctc   600
actctattca atgtcacaag aaatgacaca gcaagctaca aatgtgaaac ccagaaccca   660
gtgagtgcca ggcgcagtga ttcagtcatc ctgaatgtcc tctatggccc ggatgccccc   720
accatttccc ctctaaacac atcttacaga tcaggggaaa atctgaacct ctcctgccac   780
gcagcctcta acccacctgc acagtactct tggtttgtca atgggacttt ccagcaatcc   840
acccaagagc tctttatccc caacatcact gtgaataata gtggatccta tacgtgccaa   900
gcccataact cagacactgg cctcaatagg accacagtca cgacgatcac agtctatgca   960
gagccaccca aacccttcat caccagcaac aactccaacc ccgtggagga tgaggatgct  1020
gtagccttaa cctgtgaacc tgagattcag aacacaacct acctgtggtg ggtaaataat  1080
cagagcctcc cggtcagtcc caggctgcag ctgtccaatg acaacaggac cctcactcta  1140
ctcagtgtca caaggaatga tgtaggaccc tatgagtgtg gaatccagaa caaattaagt  1200
gttgaccaca gcgacccagt catcctgaat gtcctctatg gcccagacga ccccaccatt  1260
tccccctcat acacctatta ccgtccaggg gtgaacctca gcctctcctg ccatgcagcc  1320
tctaacccac ctgcacagta ttcttggctg attgatggga acatccagca acacacacaa  1380
gagctcttta tctccaacat cactgagaag aacagcggac tctatacctg ccaggccaat  1440
aactcagcca gtggccacag caggactaca gtcaagacaa tcacagtctc tgcggagctg  1500
cccaagccct ccatctccag caacaactcc aaacccgtgg aggacaagga tgctgtggcc  1560
ttcacctgtg aacctgaggc tcagaacaca acctacctgt ggtgggtaaa tggtcagagc  1620
ctcccagtca gtcccaggct gcagctgtcc aatggcaaca ggaccctcac tctattcaat  1680
gtcacaagaa atgacgcaag agcctatgta tgtggaatcc agaactcagt gagtgcaaac  1740
cgcagtgacc cagtcaccct ggatgtcctc tatgggccgg acacccccat catttccccc  1800
ccagactcgt cttacctttc gggagcgaac ctcaacctct cctgccactc ggcctctaac  1860
ccatccccgc agtattcttg gcgtatcaat gggataccgc agcaacacac acaagttctc  1920
tttatcgcca aaatcacgcc aaataataac gggacctatg cctgttttgt ctctaacttg  1980
gctactggcc gcaataattc catagtcaag agcatcacag tctctgcatc tggaacttct  2040
cctggtctct cagctggggc cactgtcggc atcatgattg gagtgctggt tggggttgct  2100
ctgatatag                                                          2109
 
<210>13
<211>2109
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图13)：编码CEA的(GC)稳定RNA序列(CEACAM5GC)
 
<400>13
atggagagcc cgtcggcccc gccgcaccgg tggtgcatcc cctggcagcg cctgctcctg    60
accgcgagcc tgctgacgtt ctggaacccg ccgaccaccg ccaagctgac catcgagagc   120
accccgttca acgtggccga gggcaaggag gtcctgctcc tggtgcacaa cctgccccag   180
cacctgttcg ggtacagctg gtacaagggc gagcgggtgg acggcaaccg gcagatcatc   240
ggctacgtga tcggcaccca gcaggccacg ccgggcccgg cctacagcgg gcgggagatc   300
atctacccga acgccagcct gctgatccag aacatcatcc agaacgacac cggcttctac   360
accctccacg tgatcaagtc ggacctggtg aacgaggagg cgaccggcca gttccgggtc   420
tacccggagc tgccgaagcc cagcatcagc agcaacaaca gcaagccggt ggaggacaag   480
gacgccgtgg ccttcacctg cgagccggag acccaggacg ccacgtacct gtggtgggtg   540
aacaaccaga gcctgccggt gtcgccgcgg ctgcagctca gcaacggcaa ccgcaccctg   600
accctgttca acgtgacccg gaacgacacc gccagctaca agtgcgagac ccagaacccg   660
gtcagcgccc ggcggagcga cagcgtgatc ctgaacgtgc tgtacggccc cgacgcgccg   720
acgatctcgc cgctgaacac cagctaccgg agcggcgaga acctcaacct gagctgccac   780
gccgccagca acccgccggc ccagtacagc tggttcgtga acgggacctt ccagcagtcg   840
acccaggagc tgttcatccc gaacatcacc gtgaacaaca gcggcagcta cacctgccag   900
gcccacaaca gcgacacggg cctgaaccgg accaccgtga ccaccatcac cgtctacgcc   960
gagcccccga agccgttcat cacgagcaac aacagcaacc cggtggagga cgaggacgcg  1020
gtggccctga cctgcgagcc ggagatccag aacaccacct acctgtggtg ggtgaacaac  1080
cagtcgctcc cggtgagccc ccgcctgcag ctgagcaacg acaaccggac cctgaccctg  1140
ctgagcgtga cgcggaacga cgtcggcccg tacgagtgcg gcatccagaa cgagctcagc  1200
gtggaccaca gcgacccggt gatcctgaac gtgctgtacg gcccggacga cccgaccatc  1260
tcgccgagct acacctacta ccggcccggg gtgaacctga gcctgagctg ccacgccgcc  1320
agcaacccgc cggcccagta cagctggctg atcgacggca acatccagca gcacacccag  1380
gagctcttca tctcgaacat caccgagaag aacagcggcc tgtacacctg ccaggccaac  1440
aacagcgcga gcggccacag ccggacgacc gtgaagacca tcaccgtcag cgccgagctg  1500
ccgaagccgt cgatcagcag caacaacagc aagccggtgg aggacaagga cgccgtggcc  1560
ttcacctgcg agcccgaggc ccagaacacc acgtacctgt ggtgggtgaa cggccagagc  1620
ctgccggtga gcccgcggct gcagctctcg aacggcaacc gcaccctgac cctgttcaac  1680
gtgacccgga acgacgcccg ggcgtacgtc tgcgggatcc agaacagcgt gagcgccaac  1740
cggagcgacc cggtgaccct ggacgtgctg tacggcccgg acaccccgat catcagcccc  1800
ccggacagct cgtacctgag cggcgccaac ctcaacctga gctgccacag cgccagcaac  1860
ccgagcccgc agtactcgtg gcggatcaac ggcatcccgc agcagcacac gcaggtgctg  1920
ttcatcgcca agatcacccc gaacaacaac ggcacctacg cctgcttcgt gagcaacctg  1980
gcgaccggcc ggaacaacag catcgtcaag agcatcaccg tgagcgccag cgggacctcg  2040
cccggcctga gcgccggcgc cacggtgggc atcatgatcg gcgtgctggt gggcgtggcc  2100
ctcatctga                                                          2109
 
<210>14
<211>945
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图14)：编码MAGE-A2(HsMAGE-A2(黑素瘤抗原家族A，2)
     HsMAGE-A2B)的RNA序列(起始序列基于野生型).
 
<400>14
atgcctcttg agcagaggag tcagcactgc aagcctgaag aaggccttga ggcccgagga     60
gaggccctgg gcctggtggg tgcgcaggct cctgctactg aggagcagca gaccgcttct    120
tcctcttcta ctctagtgga agttaccctg ggggaggtgc ctgctgccga ctcaccgagt    180
cctccccaca gtcctcaggg agcctccagc ttctcgacta ccatcaacta cactctttgg    240
agacaatccg atgagggctc cagcaaccaa gaagaggagg ggccaagaat gtttcccgac    300
ctggagtccg agttccaagc agcaatcagt aggaagatgg ttgagttggt tcattttctg    360
ctcctcaagt atcgagccag ggagccggtc acaaaggcag aaatgctgga gagtgtcctc    420
agaaattgcc aggacttctt tcccgtgatc ttcagcaaag cctccgagta cttgcagctg    480
gtctttggca tcgaggtggt ggaagtggtc cccatcagcc acttgtacat ccttgtcacc    540
tgcctgggcc tctcctacga tggcctgctg ggcgacaatc aggtcatgcc caagacaggc    600
ctcctgataa tcgtcctggc cataatcgca atagagggcg actgtgcccc tgaggagaaa    660
atctgggagg agctgagtat gttggaggtg tttgagggga gggaggacag tgtcttcgca    720
catcccagga agctgctcat gcaagatctg gtgcaggaaa actacctgga gtaccggcag    780
gtgcccggca gtgatcctgc atgctacgag ttcctgtggg gtccaagggc cctcattgaa    840
accagctatg tgaaagtcct gcaccataca ctaaagatcg gtggagaacc tcacatttcc    900
tacccacccc tgcatgaacg ggctttgaga gagggagaag agtga                    945
 
<210>15
<211>945
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图15)：编码MAGE-A2的(GC)稳定RNA序列(HsMAGE-A2B GC)
 
<400>15
atgcccctgg agcagcggag ccagcactgc aagccggagg agggcctcga ggcccgcggg     60
gaggccctgg gcctggtggg ggcgcaggcc cccgccaccg aggagcagca gaccgcctcc    120
agctccagca cgctcgtcga ggtgaccctg ggcgaggtgc ccgccgcgga ctcccccagc    180
ccgccccact ccccccaggg ggccagctcc ttcagcacca ccatcaacta cacgctgtgg    240
cggcagtccg acgagggcag ctccaaccag gaggaggagg gcccccgcat gttcccggac    300
ctcgagagcg agttccaggc cgccatctcc cggaagatgg tcgagctggt gcacttcctg    360
ctcctgaagt accgcgcgcg ggagcccgtg accaaggccg agatgctgga gagcgtcctc    420
cgcaactgcc aggacttctt ccccgtgatc ttctccaagg ccagcgagta cctgcagctg    480
gtgttcggga tcgaggtcgt ggaggtggtc cccatctccc acctctacat cctggtgacc    540
tgcctgggcc tcagctacga cgggctgctg ggcgacaacc aggtgatgcc gaagaccggg    600
ctcctgatca tcgtcctggc catcatcgcc atcgagggcg actgcgcgcc cgaggagaag    660
atctgggagg agctcagcat gctggaggtg ttcgagggcc gggaggactc cgtgttcgcc    720
cacccccgca agctgctcat gcaggacctg gtccaggaga actacctgga gtaccggcag    780
gtgcccggga gcgacccggc ctgctacgag ttcctctggg gcccccgcgc cctgatcgag  840
acgtcctacg tgaaggtcct gcaccacacc ctcaagatcg ggggcgagcc ccacatcagc  900
tacccgccgc tgcacgagcg ggccctgcgc gagggcgagg agtga                  945
 
<210>16
<211>945
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图16)：编码MAGE-A3(MAGE-A3(黑素瘤抗原家族A，3)
     MAGE-A3)的RNA序列(起始序列基于野生型)
 
<400>16
atgcctcttg agcagaggag tcagcactgc aagcctgaag aaggccttga ggcccgagga   60
gaggccctgg gcctggtggg tgcgcaggct cctgctactg aggagcagga ggctgcctcc  120
tcctcttcta ctctagttga agtcaccctg ggggaggtgc ctgctgccga gtcaccagat  180
cctccccaga gtcctcaggg agcctccagc ctccccacta ccatgaacta ccctctctgg  240
agccaatcct atgaggactc cagcaaccaa gaagaggagg ggccaagcac cttccctgac  300
ctggagtccg agttccaagc agcactcagt aggaaggtgg ccgagttggt tcattttctg  360
ctcctcaagt atcgagccag ggagccggtc acaaaggcag aaatgctggg gagtgtcgtc  420
ggaaattggc agtatttctt tcctgtgatc ttcagcaaag cttccagttc cttgcagctg  480
gtctttggca tcgagctgat ggaagtggac cccatcggcc acttgtacat ctttgccacc  540
tgcctgggcc tctcctacga tggcctgctg ggtgacaatc agatcatgcc caaggcaggc  600
ctcctgataa tcgtcctggc cataatcgca agagagggcg actgtgcccc tgaggagaaa  660
atctgggagg agctgagtgt gttagaggtg tttgagggga gggaagacag tatcttgggg  720
gatcccaaga agctgctcac ccaacatttc gtgcaggaaa actacctgga gtaccggcag  780
gtccccggca gtgatcctgc atgttatgaa ttcctgtggg gtccaagggc cctcgttgaa  840
accagctatg tgaaagtcct gcaccatatg gtaaagatca gtggaggacc tcacatttcc  900
tacccacccc tgcatgagtg ggttttgaga gagggggaag agtga                  945
 
<210>17
<211>945
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图17)：编码MAGE-A3的(GC)稳定RNA序列(MAGE-A3 GC)
 
<400>17
atgcccctgg agcagcgctc gcagcactgc aagccggagg agggcctcga ggcccggggc   60
gaggccctgg gcctggtggg cgcgcaggcc ccggccaccg aggagcagga ggccgccagc  120
agcagcagca ccctggtgga ggtgaccctg ggcgaggtgc cggccgcgga gagcccggac  180
ccgccccagt cgccgcaggg ggccagcagc ctgccgacca cgatgaacta cccgctctgg  240
agccagagct acgaggacag ctcgaaccag gaggaggagg gcccgagcac cttcccggac  300
ctggagagcg agttccaggc cgccctgagc cggaaggtgg ccgagctggt ccacttcctg  360
ctgctcaagt accgggcccg ggagcccgtg accaaggcgg agatgctggg cagcgtggtg  420
ggcaactggc agtacttctt cccggtgatc ttcagcaagg cctcgagcag cctgcagctg  480
gtgttcggca tcgagctgat ggaggtcgac ccgatcggcc acctgtacat cttcgccacc  540
tgcctcgggc tgagctacga cggcctgctg ggcgacaacc agatcatgcc gaaggccggc  600
ctgctgatca tcgtgctcgc catcatcgcc cgggagggcg actgcgcgcc ggaggagaag  660
atctgggagg agctgagcgt gctggaggtg ttcgagggcc gcgaggacag catcctgggg  720
gacccgaaga agctgctgac ccagcacttc gtgcaggaga actacctcga gtaccggcag  780
gtgcccggct cggacccggc ctgctacgag ttcctgtggg gcccgcgggc cctggtcgag  840
accagctacg tgaaggtgct gcaccacatg gtgaagatca gcggcggccc gcacatcagc  900
tacccgccgc tgcacgagtg ggtgctgcgg gagggcgagg agtga                  945
 
<210>18
<211>429
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图18)：编码存活蛋白(存活蛋白(包含杆状病毒IAP重复5，BIRC5)
     HsSurvivin(wt))的RNA序列(起始序列基于野生型)
 
<400>18
atgggtgccc cgacgttgcc ccctgcctgg cagccctttc tcaaggacca ccgcatctct   60
acattcaaga actggccctt cttggagggc tgcgcctgca ccccggagcg gatggccgag  120
gctggcttca tccactgccc cactgagaac gagccagact tggcccagtg tttcttctgc  180
ttcaaggagc tggaaggctg ggagccagat gacgacccca tagaggaaca taaaaagcat  240
tcgtccggtt gcgctttcct ttctgtcaag aagcagtttg aagaattaac ccttggtgaa  300
tttttgaaac tggacagaga aagagccaag aacaaaattg caaaggaaac caacaataag  360
aagaaagaat ttgaggaaac tgcgaagaaa gtgcgccgtg ccatcgagca gctggctgcc  420
atggattga                                                          429
 
<210>19
<211>429
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图19)：编码存活蛋白的(GC)稳定RNA序列(HsSurvivin(GC)
 
<400>19
atgggcgccc ccaccctgcc gccggcctgg cagccgttcc tcaaggacca ccgcatctcg   60
accttcaaga actggccgtt cctggagggc tgcgcgtgca ccccggagcg gatggccgag  120
gccggcttca tccactgccc caccgagaac gagccggacc tggcccagtg cttcttctgc    180
ttcaaggagc tggagggctg ggagccggac gacgacccga tcgaggagca caagaagcac    240
agcagcggct gcgccttcct gagcgtgaag aagcagttcg aggagctgac gctcggggag    300
ttcctgaagc tggaccggga gcgggccaag aacaagatcg cgaaggagac caacaacaag    360
aagaaggagt tcgaggagac cgccaagaag gtgcggcggg ccatcgagca gctggccgcc    420
atggactga                                                            429
 
<210>20
<211>543
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图20)：编码NY-ESO-1(智人(Homo sapiens)NY-ESO-1(NY-ESO-1(wt))
     的RNA序列(起始序列基于野生型)
 
<400>20
atgcaggccg aaggccgggg cacagggggt tcgacgggcg atgctgatgg cccaggaggc     60
cctggcattc ctgatggccc agggggcaat gctggcggcc caggagaggc gggtgccacg    120
ggcggcagag gtccccgggg cgcaggggca gcaagggcct cggggccggg aggaggcgcc    180
ccgcggggtc cgcatggcgg cgcggcttca gggctgaatg gatgctgcag atgcggggcc    240
agggggccgg agagccgcct gcttgagttc tacctcgcca tgcctttcgc gacacccatg    300
gaagcagagc tggcccgcag gagcctggcc caggatgccc caccgcttcc cgtgccaggg    360
gtgcttctga aggagttcac tgtgtccggc aacatactga ctatccgact gactgctgca    420
gaccaccgcc aactgcagct ctccatcagc tcctgtctcc agcagctttc cctgttgatg    480
tggatcacgc agtgctttct gcccgtgttt ttggctcagc ctccctcagg gcagaggcgc    540
taa                                                                  543
 
<210>21
<211>543
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图21)：编码NY-ESO-1的(GC)稳定RNA序列(NY-ESO-1(GC))
 
<400>21
atgcaggccg agggccgcgg caccggcggc tcgaccggcg acgccgacgg gcccggcggc     60
ccgggcatcc cggacggccc gggcgggaac gcgggcggcc cgggcgaggc cggcgccacc    120
ggcgggcggg gcccgcgggg cgccggcgcc gcccgggcga gcggccccgg cgggggcgcc    180
ccgcggggcc cgcacggcgg cgccgccagc ggcctgaacg ggtgctgccg gtgcggcgcc    240
cgcggcccgg agagccggct cctggagttc tacctggcca tgccgttcgc gaccccgatg    300
gaggccgagc tggcccggcg gagcctggcc caggacgccc cgccgctgcc cgtgccgggc    360
gtgctcctga aggagttcac ggtgagcggc aacatcctga ccatccggct gaccgccgcg    420
gaccaccggc agctgcagct gtcgatcagc agctgcctcc agcagctgag cctgctgatg    480
tggatcaccc agtgcttcct gccggtgttc ctggcccagc cgcccagcgg ccagcgccgg    540
tga                                                                  543
 
<210>22
<211>3429
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图22)：编码MAGE-C1(HsMAGEC1(黑素瘤抗原家族C，1)
     HsMAGEC1(wt))的RNA序列(起始序列基于野生型)
 
<400>22
atgggggaca aggatatgcc tactgctggg atgccgagtc ttctccagag ttcctctgag     60
agtcctcaga gttgtcctga gggggaggac tcccagtctc ctctccagat tccccagagt    120
tctcctgaga gcgacgacac cctgtatcct ctccagagtc ctcagagtcg ttctgagggg    180
gaggactcct cggatcctct ccagagacct cctgagggga aggactccca gtctcctctc    240
cagattcccc agagttctcc tgagggcgac gacacccagt ctcctctcca gaattctcag    300
agttctcctg aggggaagga ctccctgtct cctctagaga tttctcagag ccctcctgag    360
ggtgaggatg tccagtctcc tctgcagaat cctgcgagtt ccttcttctc ctctgcttta    420
ttgagtattt tccagagttc ccctgagagt actcaaagtc cttttgaggg ttttccccag    480
tctgttctcc agattcctgt gagcgccgcc tcctcctcca ctttagtgag tattttccag    540
agttcccctg agagtactca aagtcctttt gagggttttc cccagtctcc actccagatt    600
cctgtgagcc gctccttctc ctccacttta ttgagtattt tccagagttc ccctgagaga    660
actcagagta cttttgaggg ttttgcccag tctcctctcc agattcctgt gagcccctcc    720
tcctcctcca ctttactgag tcttttccag agtttctctg agagaactca gagtactttt    780
gagggttttg cccagtcttc tctccagatt cctgtgagcc cctccttctc ctccacttta    840
gtgagtcttt tccagagttc ccctgagaga actcagagta cttttgaggg ttttccccag    900
tctcctctcc agattcctgt gagctcctcc tcctcctcca ctttattgag tcttttccag    960
agttcccctg agagaactca cagtactttt gagggttttc cccagtctct tctccagatt   1020
cctatgacct cctccttctc ctctacttta ttgagtattt tccagagttc tcctgagagt   1080
gctcaaagta cttttgaggg ttttccccag tctcctctcc agattcctgg gagcccctcc   1140
ttctcctcca ctttactgag tcttttccag agttcccctg agagaactca cagtactttt   1200
gagggttttc cccagtctcc tctccagatt cctatgacct cctccttctc ctctacttta   1260
ttgagtattt tacagagttc tcctgagagt gctcaaagtg cttttgaggg ttttccccag   1320
tctcctctcc agattcctgt gagctcctct ttctcctaca ctttattgag tcttttccag   1380
agttcccctg agagaactca cagtactttt gagggttttc cccagtctcc tctccagatt   1440
cctgtgagct cctcctcctc ctcctccact ttattgagtc ttttccagag ttcccctgag    1500
tgtactcaaa gtacttttga gggttttccc cagtctcctc tccagattcc tcagagtcct    1560
cctgaagggg agaataccca ttctcctctc cagattgttc caagtcttcc tgagtgggag    1620
gactccctgt ctcctcacta ctttcctcag agccctcctc agggggagga ctccctatct    1680
cctcactact ttcctcagag ccctcctcag ggggaggact ccctgtctcc tcactacttt    1740
cctcagagcc ctcaggggga ggactccctg tctcctcact actttcctca gagccctcct    1800
cagggggagg actccatgtc tcctctctac tttcctcaga gtcctcttca gggggaggaa    1860
ttccagtctt ctctccagag ccctgtgagc atctgctcct cctccactcc atccagtctt    1920
ccccagagtt tccctgagag ttctcagagt cctcctgagg ggcctgtcca gtctcctctc    1980
catagtcctc agagccctcc tgaggggatg cactcccaat ctcctctcca gagtcctgag    2040
agtgctcctg agggggagga ttccctgtct cctctccaaa ttcctcagag tcctcttgag    2100
ggagaggact ccctgtcttc tctccatttt cctcagagtc ctcctgagtg ggaggactcc    2160
ctctctcctc tccactttcc tcagtttcct cctcaggggg aggacttcca gtcttctctc    2220
cagagtcctg tgagtatctg ctcctcctcc acttctttga gtcttcccca gagtttccct    2280
gagagtcctc agagtcctcc tgaggggcct gctcagtctc ctctccagag acctgtcagc    2340
tccttcttct cctacacttt agcgagtctt ctccaaagtt cccatgagag tcctcagagt    2400
cctcctgagg ggcctgccca gtctcctctc cagagtcctg tgagctcctt cccctcctcc    2460
acttcatcga gtctttccca gagttctcct gtgagctcct tcccctcctc cacttcatcg    2520
agtctttcca agagttcccc tgagagtcct ctccagagtc ctgtgatctc cttctcctcc    2580
tccacttcat tgagcccatt cagtgaagag tccagcagcc cagtagatga atatacaagt    2640
tcctcagaca ccttgctaga gagtgattcc ttgacagaca gcgagtcctt gatagagagc    2700
gagcccttgt tcacttatac actggatgaa aaggtggacg agttggcgcg gtttcttctc    2760
ctcaaatatc aagtgaagca gcctatcaca aaggcagaga tgctgacgaa tgtcatcagc    2820
aggtacacgg gctactttcc tgtgatcttc aggaaagccc gtgagttcat agagatactt    2880
tttggcattt ccctgagaga agtggaccct gatgactcct atgtctttgt aaacacatta    2940
gacctcacct ctgaggggtg tctgagtgat gagcagggca tgtcccagaa ccgcctcctg    3000
attcttattc tgagtatcat cttcataaag ggcacctatg cctctgagga ggtcatctgg    3060
gatgtgctga gtggaatagg ggtgcgtgct gggagggagc actttgcctt tggggagccc    3120
agggagctcc tcactaaagt ttgggtgcag gaacattacc tagagtaccg ggaggtgccc    3180
aactcttctc ctcctcgtta cgaattcctg tggggtccaa gagctcattc agaagtcatt    3240
aagaggaaag tagtagagtt tttggccatg ctaaagaata ccgtccctat tacctttcca    3300
tcctcttaca aggatgcttt gaaagatgtg gaagagagag cccaggccat aattgacacc    3360
acagatgatt cgactgccac agaaagtgca agctccagtg tcatgtcccc cagcttctct    3420
tctgagtga                                                            3429
<210>23
<211>3429
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图23)：编码MAGE-C1的(GC)稳定RNA序列(HsMAGEC1(GC)
 
<400>23
atgggcgaca aggacatgcc caccgccggg atgccgagcc tgctccagtc cagctccgag     60
agcccccagt cctgccccga gggcgaggac agccagtccc ccctgcagat cccgcagagc    120
tcccccgaga gcgacgacac cctgtacccc ctccagtccc cgcagagccg gtccgagggg    180
gaggacagct ccgacccgct gcagcgcccc cccgagggca aggacagcca gtccccgctg    240
cagatcccgc agagctcccc cgagggggac gacacgcaga gccccctcca gaacagccag    300
tccagccccg agggcaagga ctccctgagc ccgctggaga tctcccagag cccccccgag    360
ggcgaggacg tgcagtcccc gctccagaac ccggccagct ccttcttcag ctccgcgctg    420
ctgagcatct tccagtccag ccccgagtcc acccagagcc ccttcgaggg gttcccccag    480
tccgtcctcc agatcccggt gagcgccgcc tccagcagca ccctggtgtc catcttccag    540
agctcccccg agagcaccca gtcccccttc gagggcttcc cccagagccc gctgcagatc    600
cccgtgtccc ggagcttctc cagcacgctc ctgtccatct tccagagctc ccccgagcgc    660
acccagagca ccttcgaggg gttcgcccag tccccgctgc agatccccgt gagcccctcc    720
agcagctcca ccctcctgag cctgttccag tccttcagcg agcggacgca gtccaccttc    780
gagggcttcg cccagagctc cctccagatc cccgtgagcc cgtccttcag ctccaccctg    840
gtcagcctgt tccagtccag ccccgagcgc acccagtcca cgttcgaggg gttcccccag    900
agccccctcc agatcccggt gtccagctcc agcagctcca ccctgctgag cctcttccag    960
tccagccccg agcggaccca ctccaccttc gagggcttcc cccagagcct gctgcagatc   1020
cccatgacgt ccagcttctc cagcaccctc ctgtccatct tccagagctc cccggagagc   1080
gcgcagtcca ccttcgaggg cttcccccag agccccctgc agatccccgg gtccccgagc   1140
ttctccagca ccctcctgag cctgttccag tccagccccg agcgcacgca ctccaccttc   1200
gagggcttcc cccagagccc cctccagatc ccgatgacct ccagcttctc cagcaccctg   1260
ctgtccatcc tccagagctc ccccgagagc gcccagtccg ccttcgaggg gttcccccag   1320
agccccctgc agatcccggt gtccagctcc ttcagctaca cgctgctctc cctgttccag   1380
agcagccccg agcggaccca ctccaccttc gagggcttcc cccagagccc gctgcagatc   1440
cccgtgtcca gctccagctc cagctccacc ctcctgagcc tgttccagtc cagccccgag   1500
tgcacgcagt ccaccttcga gggcttcccc cagagcccgc tgcagatccc ccagtccccc   1560
cccgaggggg agaacaccca cagcccgctc cagatcgtgc cctccctgcc cgagtgggag   1620
gacagcctgt ccccgcacta cttcccgcag agccccccgc agggcgagga cagcctctcc   1680
ccccactact tcccgcagag cccgccccag ggggaggact ccctgagccc ccactacttc   1740
ccgcagtccc cccagggcga ggacagcctg tccccgcact acttccccca gagcccgccc  1800
cagggggagg actccatgag ccccctctac ttcccccagt ccccgctgca gggcgaggag  1860
ttccagagct ccctgcagag ccccgtgtcc atctgcagct ccagcacccc ctccagcctc  1920
ccgcagagct tccccgagtc cagccagtcc ccccccgagg gcccggtcca gagccccctg  1980
cactccccgc agagcccccc ggaggggatg cactcccaga gccccctgca gtcccccgag  2040
agcgcccccg agggcgagga ctccctcagc ccgctgcaga tcccccagtc cccgctggag  2100
ggggaggaca gcctctccag cctgcacttc ccccagtccc cgcccgagtg ggaggacagc  2160
ctgagccccc tccacttccc ccagttcccg ccccagggcg aggacttcca gtccagcctg  2220
cagtcccccg tgagcatctg ctccagctcc acgagcctgt ccctccccca gagcttcccg  2280
gagtcccccc agagcccgcc cgaggggccg gcgcagtccc ccctgcagcg ccccgtgagc  2340
tccttcttca gctacaccct ggcctccctc ctgcagagct cccacgagag cccgcagagc  2400
ccgcccgagg gccccgccca gtccccgctg cagagccccg tgtccagctt cccctccagc  2460
acctccagct ccctcagcca gtccagcccc gtgtccagct tcccgtccag cacctccagc  2520
tccctgagca agagctcccc cgagagcccc ctgcagtccc ccgtgatcag cttctccagc  2580
tccacgagcc tctccccgtt cagcgaggag tccagctccc ccgtcgacga gtacaccagc  2640
tccagcgaca ccctgctgga gtccgacagc ctcaccgact ccgagagcct gatcgagagc  2700
gagcccctgt tcacctacac gctcgacgag aaggtggacg agctggcccg gttcctgctc  2760
ctgaagtacc aggtgaagca gcccatcacc aaggccgaga tgctgaccaa cgtcatctcc  2820
cgctacaccg gctacttccc ggtgatcttc cggaaggcgc gcgagttcat cgagatcctc  2880
ttcgggatca gcctgcggga ggtggacccc gacgactcct acgtcttcgt gaacacgctg  2940
gacctcacca gcgagggctg cctgtccgac gagcagggga tgagccagaa ccgcctgctc  3000
atcctgatcc tgtccatcat cttcatcaag ggcacctacg ccagcgagga ggtcatctgg  3060
gacgtgctct ccgggatcgg cgtgcgggcc ggccgcgagc acttcgcctt cggggagccc  3120
cgggagctgc tgaccaaggt ctgggtgcag gagcactacc tcgagtaccg cgaggtgccc  3180
aacagctccc cgccccggta cgagttcctg tggggccccc gcgcccacag cgaggtcatc  3240
aagcggaagg tggtggagtt cctggcgatg ctcaagaaca cggtccccat caccttcccg  3300
tccagctaca aggacgccct gaaggacgtg gaggagcggg cccaggccat catcgacacc  3360
accgacgact ccacggccac cgagagcgcg tccagctccg tgatgagccc cagcttctcc  3420
agcgagtga                                                          3429
 
<210>24
<211>1596
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图24)：编码截短的MAGE-C1的(GC)稳定RNA序列(HsMAGEC1(GC)，
<400>24
atgcagtccc cgctgcaggg cgaggagttc cagagctccc tgcagagccc cgtgtccatc     60
tgcagctcca gcaccccctc cagcctcccg cagagcttcc ccgagtccag ccagtccccc    120
cccgagggcc cggtccagag ccccctgcac tccccgcaga gccccccgga ggggatgcac    180
tcccagagcc ccctgcagtc ccccgagagc gcccccgagg gcgaggactc cctcagcccg    240
ctgcagatcc cccagtcccc gctggagggg gaggacagcc tctccagcct gcacttcccc    300
cagtccccgc ccgagtggga ggacagcctg agccccctcc acttccccca gttcccgccc    360
cagggcgagg acttccagtc cagcctgcag tcccccgtga gcatctgctc cagctccacg    420
agcctgtccc tcccccagag cttcccggag tccccccaga gcccgcccga ggggccggcg    480
cagtcccccc tgcagcgccc cgtgagctcc ttcttcagct acaccctggc ctccctcctg    540
cagagctccc acgagagccc gcagagcccg cccgagggcc ccgcccagtc cccgctgcag    600
agccccgtgt ccagcttccc ctccagcacc tccagctccc tcagccagtc cagccccgtg    660
tccagcttcc cgtccagcac ctccagctcc ctgagcaaga gctcccccga gagccccctg    720
cagtcccccg tgatcagctt ctccagctcc acgagcctct ccccgttcag cgaggagtcc    780
agctcccccg tcgacgagta caccagctcc agcgacaccc tgctggagtc cgacagcctc    840
accgactccg agagcctgat cgagagcgag cccctgttca cctacacgct cgacgagaag    900
gtggacgagc tggcccggtt cctgctcctg aagtaccagg tgaagcagcc catcaccaag    960
gccgagatgc tgaccaacgt catctcccgc tacaccggct acttcccggt gatcttccgg   1020
aaggcgcgcg agttcatcga gatcctcttc gggatcagcc tgcgggaggt ggaccccgac   1080
gactcctacg tcttcgtgaa cacgctggac ctcaccagcg agggctgcct gtccgacgag   1140
caggggatga gccagaaccg cctgctcatc ctgatcctgt ccatcatctt catcaagggc   1200
acctacgcca gcgaggaggt catctgggac gtgctctccg ggatcggcgt gcgggccggc   1260
cgcgagcact tcgccttcgg ggagccccgg gagctgctga ccaaggtctg ggtgcaggag   1320
cactacctcg agtaccgcga ggtgcccaac agctccccgc cccggtacga gttcctgtgg   1380
ggcccccgcg cccacagcga ggtcatcaag cggaaggtgg tggagttcct ggcgatgctc   1440
aagaacacgg tccccatcac cttcccgtcc agctacaagg acgccctgaa ggacgtggag   1500
gagcgggccc aggccatcat cgacaccacc gacgactcca cggccaccga gagcgcgtcc   1560
agctccgtga tgagccccag cttctccagc gagtga                             1596
 
<210>25
<211>1122
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图25)：编码MAGE-C2(HsMAGE-C2(黑素瘤抗原家族C，2)HsMAGE-C2)的
     RNA序列(起始序列基于野生型)
 
<400>25
atgcctcccg ttccaggcgt tccattccgc aacgttgaca acgactcccc gacctcagtt     60
gagttagaag actgggtaga tgcacagcat cccacagatg aggaagagga ggaagcctcc    120
tccgcctctt ccactttgta cttagtattt tccccctctt ctttctccac atcctcttct    180
ctgattcttg gtggtcctga ggaggaggag gtgccctctg gtgtgatacc aaatcttacc    240
gagagcattc ccagtagtcc tccacagggt cctccacagg gtccttccca gagtcctctg    300
agctcctgct gctcctcttt ttcatggagc tcattcagtg aggagtccag cagccagaaa    360
ggggaggata caggcacctg tcagggcctg ccagacagtg agtcctcttt cacatataca    420
ctagatgaaa aggtggccga gttagtggag ttcctgctcc tcaaatacga agcagaggag    480
cctgtaacag aggcagagat gctgatgatt gtcatcaagt acaaagatta ctttcctgtg    540
atactcaaga gagcccgtga gttcatggag cttctttttg gccttgccct gatagaagtg    600
ggccctgacc acttctgtgt gtttgcaaac acagtaggcc tcaccgatga gggtagtgat    660
gatgagggca tgcccgagaa cagcctcctg attattattc tgagtgtgat cttcataaag    720
ggcaactgtg cctctgagga ggtcatctgg gaagtgctga atgcagtagg ggtatatgct    780
gggagggagc acttcgtcta tggggagcct agggagctcc tcactaaagt ttgggtgcag    840
ggacattacc tggagtatcg ggaggtgccc cacagttctc ctccatatta tgaattcctg    900
tggggtccaa gagcccattc agaaagcatc aagaagaaag tactagagtt tttagccaag    960
ctgaacaaca ctgttcctag ttcctttcca tcctggtaca aggatgcttt gaaagatgtg   1020
gaagagagag tccaggccac aattgatacc gcagatgatg ccactgtcat ggccagtgaa   1080
agcctcagtg tcatgtccag caacgtctcc ttttctgagt ga                      1122
 
<210>26
<211>1122
<212>DNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述(见图26)：编码MAGE-C2的(GC)稳定RNA序列(HsMAGE-C2GC)
 
<400>26
atgcccccgg tgcccggcgt ccccttccgg aacgtggaca acgacagccc cacctccgtg     60
gagctggagg actgggtcga cgcccagcac ccgaccgacg aggaggagga ggaggccagc    120
tccgcgagct ccacgctcta cctggtgttc agcccctcca gcttctccac cagctccagc    180
ctgatcctcg ggggccccga ggaggaggag gtgccctccg gggtcatccc gaacctgacc    240
gagagcatcc cctccagccc cccgcagggc ccgccccagg ggccctccca gagccccctg    300
tccagctgct gcagctcctt cagctggtcc agcttctccg aggagagctc cagccagaag    360
ggcgaggaca ccggcacgtg ccaggggctc ccggactccg agagctcctt cacctacacc    420
ctggacgaga aggtggccga gctggtggag ttcctcctgc tgaagtacga ggccgaggag    480
cccgtcaccg aggccgagat gctcatgatc gtgatcaagt acaaggacta cttccccgtg    540
atcctgaagc gcgcccggga gttcatggag ctgctcttcg gcctggcgct gatcgaggtc    600
gggcccgacc acttctgcgt gttcgccaac acggtgggcc tcaccgacga ggggagcgac   660
gacgagggca tgccggagaa ctccctgctg atcatcatcc tcagcgtcat cttcatcaag   720
ggcaactgcg cctccgagga ggtgatctgg gaggtgctga acgccgtcgg ggtgtacgcg   780
ggccgcgagc acttcgtgta cggggagccc cgggagctgc tcaccaaggt ctgggtgcag   840
ggccactacc tggagtaccg cgaggtgccg cacagctccc ccccgtacta cgagttcctg   900
tggggccccc gggcccacag cgagtccatc aagaagaagg tcctcgagtt cctggccaag   960
ctgaacaaca ccgtgcccag cagcttcccc tcctggtaca aggacgccct caaggacgtc  1020
gaggagcgcg tgcaggccac gatcgacacc gcggacgacg ccaccgtgat ggccagcgag  1080
tccctgagcg tcatgtccag caacgtgtcc ttcagcgagt ga                     1122
 
<210>27
<211>13
<212>RNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述：Koszak-序列(见说明书第36页)
 
<400>27
gccgccacca ugg                                                      13
 
<210>28
<211>15
<212>RNA
<213>人工的
 
<220>
<223>序列描述：通用稳定序列(见说明书第36页)
 
<220>
<221>变异
<222>(1)..(1)
<223>/替换＝″胞嘧啶″
 
     /替换＝″尿嘧啶″
 
<220>
<221>变异
<222>(5)..(5)
<223>/替换＝″胞嘧啶″
 
     /替换＝″尿嘧啶″
 
     /替换＝″鸟苷″
 
     /替换＝″腺苷″，和任意其它核酸
 
<220>
<221>重复单位
<222>(5)..(5)
<223>x＝任意数字
 
<220>
<221>变异
<222>(9)..(9)
<223>/替换＝″尿嘧啶″
     /替换＝″腺苷″
 
<220>
<221>重复单位
<222>(10)..(10)
<223>x＝任意数字
 
<220>
<221>变异
<222>(10)..(10)
<223>/替换＝″嘧啶″
 
<220>
<221>变异
<222>(13)..(13)
<223>/替换＝″胞嘧啶″
 
     /替换＝″尿嘧啶″
 
<400>28
nccancccnn ucncc    15

Claims (24)

1.活性(免疫刺激性)组合物，其包括编码至少两种不同抗原的至少一种RNA，
a)其中所述至少两种抗原中的至少一种选自：
·NY-ESO-1，
·MAGE-C1，和/或
·MAGE-C2；和
b)其中其它抗原选自这样的至少一种抗原，所述至少一种抗原选自下述组：
·hTERT，
·WT1，
·MAGE-A2，
·5T4，
·MAGE-A3，
·MUC1，
·Her-2/neu，
·NY-ESO-1，
·CEA，
·存活蛋白，
·MAGE-C1，和/或
·MAGE-C2。
2.按照权利要求1的活性(免疫刺激性)组合物，其中按照a)的所述至少两种不同的抗原中的至少一种选自
·MAGE-C1，和/或
·MAGE-C2。
3.按照权利要求1或2的活性(免疫刺激性)组合物，其中按照b)的所述其它抗原专一地选自下述抗原组合：
·hTERT和WT1；或
·hTERT和MAGE-A2；或
·hTERT和5T4；或
·hTERT和MAGE-A3；或
·hTERT和MUC1；或
·hTERT和Her-2/neu；或
·hTERT和NY-ESO-1；或
·hTERT和CEA；或
·hTERT和存活蛋白；或
·hTERT和MAGE-C1；或
·hTERT和MAGE-C2；或
·WT1和MAGE-A2；或
·WT1和5T4；或
·WT1和MAGE-A3；或
·WT1和MUC1；或
·WT1和Her-2/neu；或
·WT1和NY-ESO-1；或
·WT1和CEA；或
·WT1和存活蛋白；或
·WT1和MAGE-C1；或
·WT1和MAGE-C2；或
·MAGE-A2和5T4；或
·MAGE-A2和MAGE-A3；或
·MAGE-A2和MUC1；或
·MAGE-A2和Her-2/neu；或
·MAGE-A2和NY-ESO-1；或
·MAGE-A2和CEA；或
·MAGE-A2和存活蛋白；或
·MAGE-A2和MAGE-C1；或
·MAGE-A2和MAGE-C2；或
·5T4和MAGE-A3；或
·5T4和MUC1；或
·5T4和Her-2/neu；或
·5T4和NY-ESO-1；或
·5T4和CEA；或
·5T4和存活蛋白；或
·5T4和MAGE-C1；或
·5T4和MAGE-C2；或
·MAGE-A3和MUC1；或
·MAGE-A3和Her-2/neu；或
·MAGE-A3和NY-ESO-1；或
·MAGE-A3和CEA；或
·MAGE-A3和存活蛋白；或
·MAGE-A3和MAGE-C1
·MAGE-A3和MAGE-C2
·MUC1和Her-2/neu；或
·MUC1和NY-ESO-1；或
·MUC1和CEA；或
·MUC1和存活蛋白；或
·MUC1和MAGE-C1；或
·MUC1和MAGE-C2；或
·HER-2/NEU和NY-ESO-1；或
·HER-2/NEU和CEA；或
·HER-2/NEU和存活蛋白；或
·HER-2/NEU和MAGE-C1；或
·HER-2/NEU和MAGE-C2；或
·NY-ESO-1和CEA；或
·NY-ESO-1和存活蛋白；或
·NY-ESO-1和MAGE-C1；或
·NY-ESO-1和MAGE-C2；或
·CEA和存活蛋白；或
·CEA和MAGE-C1；或
·CEA和MAGE-C2；或
·存活蛋白和MAGE-C1；或
·存活蛋白和MAGE-C2；或
·MAGE-C1和MAGE-C2；
或
·hTERT，WT1和MAGE-A2；或
·hTERT，WT1和5T4；或
·hTERT，WT1和MAGE-A3；或
·hTERT，WT1和MUC1；或
·hTERT，WT1和Her-2/neu；或
·hTERT，WT1和NY-ESO-1；或
·hTERT，WT1和CEA；或
·hTERT，WT1和存活蛋白；或
·hTERT，WT1和MAGE-C1；或
·hTERT，WT1和MAGE-C2；或
·WT1，MAGE-A2和5T4；或
·WT1，MAGE-A2和MAGE-A3；或
·WT1，MAGE-A2和MUC1；或
·WT1，MAGE-A2和Her-2/neu；或
·WT1，MAGE-A2和NY-ESO-1；或
·WT1，MAGE-A2和CEA；或
·WT1，MAGE-A2和存活蛋白；或
·WT1，MAGE-A2和MAGE-C1；或
·WT1，MAGE-A2和MAGE-C2；或
·MAGE-A2，5T4和MAGE-A3；或
·MAGE-A2，5T4和MUC1；或
·MAGE-A2，5T4和Her-2/neu；或
·MAGE-A2，5T4和NY-ESO-1；或
·MAGE-A2，5T4和CEA；或
·MAGE-A2，5T4和存活蛋白；或
·MAGE-A2，5T4和MAGE-C1；或
·MAGE-A2，5T4和MAGE-C2；或
·5T4，MAGE-A3和MUC1；或
·5T4，MAGE-A3和Her-2/neu；或
·5T4，MAGE-A3和NY-ESO-1；或
·5T4，MAGE-A3和CEA；或
·5T4，MAGE-A3和存活蛋白；或
·5T4，MAGE-A3和MAGE-C1；或
·5T4，MAGE-A3和MAGE-C2；或
·MAGE-A3，MUC1和Her-2/neu；或
·MAGE-A3，MUC1和NY-ESO-1；或
·MAGE-A3，MUC1和CEA；或
·MAGE-A3，MUC1和存活蛋白；或
·MAGE-A3，MUC1和MAGE-C1；或
·MAGE-A3，MUC1和MAGE-C2；或
·MUC1，Her-2/neu和NY-ESO-1；或
·MUC1，Her-2/neu和CEA；或
·MUC1，Her-2/neu和存活蛋白；或
·MUC1，Her-2/neu和MAGE-C1；或
·MUC1，Her-2/neu和MAGE-C2；或
·HER-2/NEU，NY-ESO-1和CEA；或
·HER-2/NEU，NY-ESO-1和存活蛋白；或
·HER-2/NEU，NY-ESO-1和MAGE-C1；或
·HER-2/NEU，NY-ESO-1和MAGE-C2；或
·NY-ESO-1，CEA和存活蛋白；或
·NY-ESO-1，CEA和MAGE-C1；或
·NY-ESO-1，CEA和MAGE-C2；或
·CEA，存活蛋白和MAGE-C1；或
·CEA，存活蛋白和MAGE-C2；或
·存活蛋白，MAGE-C1和MAGE-C2；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2和5T4；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2和MAGE-A3；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2和MUC1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2和Her-2/neu；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2和NY-ESO-1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2和CEA；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2和存活蛋白；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2和MAGE-C1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2和MAGE-C2；或
·WT1，MAGE-A2，5T4和MAGE-A3；或
·WT1，MAGE-A2，5T4和MUC1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4和Her-2/neu；或
·WT1，MAGE-A2，5T4和NY-ESO-1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4和CEA；或
·WT1，MAGE-A2，5T4和存活蛋白；或
·WT1，MAGE-A2，5T4和MAGE-C1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4和MAGE-C2；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和MUC1；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和Her-2/neu；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和NY-ESO-1；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和CEA；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和存活蛋白；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和MAGE-C1；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和MAGE-C2；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，和Her-2/neu；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1和NY-ESO-1；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1和CEA；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1和存活蛋白；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1和MAGE-C1；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1和MAGE-C2；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和NY-ESO-1；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和CEA；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和存活蛋白；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和MAGE-C1；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和MAGE-C2；或
·MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和CEA；或
·MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和存活蛋白；或
·MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C1；或
·MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C2；或
·HER-2/NEU，NY-ESO-1，CEA和存活蛋白；或
·HER-2/NEU，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C1；或
·HER-2/NEU，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C2；或
·NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C1；或
·NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C2；或
·CEA，存活蛋白，MAGE-C1和MAGE-C2；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4和MAGE-A3；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4和MUC1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4和Her-2/neu；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4和NY-ESO-1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4和CEA；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4和存活蛋白；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4和MAGE-C1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4和MAGE-C2；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和MUC1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和Her-2/neu；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和NY-ESO-1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和CEA；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和存活蛋白；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和MAGE-C1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和MAGE-C2；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和Her-2/neu；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和NY-ESO-1；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和CEA；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和存活蛋白；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和MAGE-C1；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和MAGE-C2；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和NY-ESO-1；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和CEA；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和存活蛋白；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和MAGE-C1；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和MAGE-C2；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和CEA；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和存活蛋白；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C1；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C2；或
·MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和存活蛋白；或
·MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C1；或
·MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C2；或
·HER-2/NEU，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C1；或
·HER-2/NEU，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C2；或
·NY-ESO-1，CEA，存活蛋白，MAGE-C1和MAGE-C2；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和MUC1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和Her-2/neu；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和NY-ESO-1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和CEA；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和存活蛋白；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和MAGE-C1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3和MAGE-C2；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和Her-2/neu；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和NY-ESO-1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和CEA；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和存活蛋白；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和MAGE-C1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和MAGE-C2；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和NY-ESO-1；
或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和CEA；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和存活蛋白；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和MAGE-C1；
或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和MAGE-C2；
或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和CEA；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和存活蛋白；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C1；
或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C2；
或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和存活蛋白；
或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C1；
或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C2；
或
·MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C1；或
·MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C2；或
·HER-2/NEU，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白，MAGE-C1和MAGE-C2；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和Her-2/neu；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和NY-ESO-1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和CEA；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和存活蛋白；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和MAGE-C1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1和MAGE-C2；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和NY-ESO-1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和CEA；
或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和存活蛋白；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和MAGE-C1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和MAGE-C2；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和CEA；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和存活蛋白；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C1；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C2；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和存活蛋白；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C1；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C2；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C1；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C2；或
·MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白，MAGE-C1和MAGE-C2；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和NY-ESO-1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和CEA；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和存活蛋白；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和MAGE-C1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu和MAGE-C2；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和CEA；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和存活蛋白；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C2；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和存活蛋白；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C1；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C2；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C1；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C2；或
·MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白，MAGE-C1和MAGE-C2；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和CEA；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和存活蛋白；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1和MAGE-C2；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和存活蛋白；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C2；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C1；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C2；或
·5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白，MAGE-C1和MAGE-C2；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和存活蛋白；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA和MAGE-C2；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C1；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C2；或
·MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白，MAGE-C1和MAGE-C2；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C1；或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白和MAGE-C2；或
·WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白，MAGE-C1和MAGE-C2；
或
·hTERT，WT1，MAGE-A2，5T4，MAGE-A3，MUC1，Her-2/neu，NY-ESO-1，CEA，存活蛋白，MAGE-C1和MAGE-C2。
4.按照权利要求1-3中任一项的活性(免疫刺激性)组合物，其中所述至少一种RNA包括250-20000个核苷酸的长度。
5.按照权利要求1-4中任一项的活性(免疫刺激性)组合物，其中所述至少一种RNA为mRNA。
6.按照权利要求1-5中任一项的活性(免疫刺激性)组合物，其中所述至少一种RNA为单顺反子、双顺反子或甚至是多顺反子RNA。
7.按照权利要求5的活性(免疫刺激性)组合物，其中所述至少两种抗原每种由单顺反子RNA编码。
8.按照权利要求6的活性(免疫刺激性)组合物，其中所述至少两种抗原由单顺反子、双顺反子和/或甚至多顺反子RNAs的混合物编码。
9.按照权利要求1-8中任一项的活性(免疫刺激性)组合物，其中所述至少一种RNA包括选自编码权利要求1-3中任一项定义的抗原的片段、变体或表位的RNA。
10.按照权利要求1-9中任一项的活性(免疫刺激性)组合物，其中所述至少一种RNA包括选自与按照SEQ ID NOs：1，3，5，7，9，12，14，16，18，20，22或25的RNA序列相同或至少5％，10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，或80％相同的RNA的RNA。
11.按照权利要求1-10中任一项的活性(免疫刺激性)组合物，其中所述至少一种RNA是修饰的RNA，特别是稳定的mRNA。
12.按照权利要求11的活性(免疫刺激性)组合物，其中所述至少一种RNA编码区的G/C含量与野生型RNA编码区的G/C含量相比增加，与野生型RNA编码的氨基酸序列相比较，所述至少一种RNA编码的氨基酸序列优选地不被改变。
13.按照权利要求11-12中任一项的活性(免疫刺激性)组合物，其中所述至少一种RNA的核糖体结合位点环境中的A/U含量与野生型RNA的核糖体结合位点环境中的A/U含量相比较增加。
14.按照权利要求11-13中任一项的活性(免疫刺激性)组合物，其中所述修饰的mRNA的编码区和/或5′和/或3′非翻译区与野生型RNA相比较被修饰，以致其不包含促降解序列元件，与野生型RNA相比较，所述修饰的mRNA编码的氨基酸序列优选地不被改变。
15.按照权利要求11-14中任一项的活性(免疫刺激性)组合物，其中所述修饰的mRNA具有5′帽结构和/或聚腺苷酸尾，优选地为10-200个腺苷核苷酸，和/或聚胞苷酸尾，优选地为10-200个胞嘧啶核苷酸，和/或至少一个IRES和/或至少一个5′和/或3′稳定序列。
16.按照权利要求1-15中任一项的活性(免疫刺激性)组合物，其中所述至少一种RNA，优选所有mRNAs，包括选自与按照SEQ ID NOs：2，4，6，8，10，11，13，15，17，19，21，23，24或26的RNA序列相同或至少80％相同的RNA的RNA。
17.按照权利要求1-16中任一项的活性(免疫刺激性)组合物，其中所述至少一种RNA与一种或多种聚阳离子复合，优选地与鱼精蛋白或oligofectamine、最优选与鱼精蛋白复合。
18.按照权利要求1-17中任一项的活性(免疫刺激性)组合物，其中所述活性组合物另外包括至少一种佐剂。
19.按照权利要求18的活性(免疫刺激性)组合物，其中所述至少一种佐剂选自由下列各项组成的组：
阳离子或聚阳离子化合物，其包括阳离子或聚阳离子肽或蛋白，包括鱼精蛋白，核仁蛋白，精胺或亚精胺，聚-L-赖氨酸(PLL)，聚-精氨酸，碱性多肽，穿透细胞的肽(CPPs)，其包括HIV-结合肽，Tat，HIV-1 Tat(HIV)，Tat-衍生的肽，Penetratin，VP22来源的或类似物肽，HSV VP22(单纯疱疹)，MAP，KALA或蛋白转导结构域(PTDs，PpT620，富含脯氨酸的肽，富含精氨酸的肽，富含赖氨酸的肽，MPG-肽，Pep-1，L-寡聚物，降钙素肽，触角足来源的肽(特别是来自Drosophila antennapedia)，pAntp，pIsl，FGF，乳铁转运蛋白，Transportan，Buforin-2，Bac715-24，SynB，SynB(1)，pVEC，hCT-来源的肽，SAP，鱼精蛋白，精胺，亚精胺，或组蛋白，阳离子多糖，其包括脱乙酰壳多糖，polybrene，阳离子聚合物，其包括聚氮丙啶(PEI)，阳离子脂质，其包括DOTMA：[1-(2，3-sioleyloxy)丙基)]-N，N，N-三甲基氯化铵，DMRIE，二-C14-脒，DOTIM，SAINT，DC-Chol，BGTC，CTAP，DOPC，DODAP，DOPE：二油基磷脂酰乙醇胺，DOSPA，DODAB，DOIC，DMEPC，DOGS：Dioctadecylamidoglicylspermin，DIMRI：二肉豆蔻酰-氧基丙基二甲基羟基乙基溴化铵，DOTAP：二油酰氧基-3-(三甲基氨溶)丙烷，DC-6-14：O，O-双十四烷酰-N-(α-三甲基氨溶乙酰基)二乙醇胺氯化物，CLIP1：外消旋-[(2，3-双十八烷基氧基丙基)(2-羟基乙基)]-二甲基氯化铵，CLIP6：外消旋-[2(2，3-双十六烷基氧基丙基-羟甲基氧基)乙基]三甲基铵，CLIP9：外消旋-[2(2，3-双十六烷基氧基丙基-羟基琥珀酰氧基)乙基]-三甲基铵，oligofectamine，或阳离子或聚阳离子聚合物，其包括改性聚氨基酸，包括β-氨基酸-聚合物或反转聚酰胺，改性聚乙烯，包括PVP(聚(N-乙基-4-乙烯基溴化吡啶鎓))，改性丙烯酸脂，包括pDMAEMA(聚(二甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯))，改性酰氨基胺(Amidoamines)，包括pAMAM(聚(酰氨基胺))，改性聚β氨基酯(PBAE)，包括二胺末端改性的1，4丁二醇二丙烯酸酯-共-5-氨基-1-戊醇聚合物，树状聚体，包括聚丙胺树状聚体或基于pAMAM的树状聚体，聚亚胺，包括PEI：聚(乙烯亚胺)，聚(丙烯亚胺)，聚烯丙基胺，基于糖骨架的聚合物，包括基于环糊精的聚合物，基于葡萄糖的聚合物，脱乙酰壳多糖，等，基于硅烷(silan)骨架的聚合物，诸如PMOXA-PDMS共聚物，等，嵌段聚合物，其由选自如前文提及的阳离子聚合物的一个或多个阳离子嵌段的组合与一个或多个亲水-或疏水嵌段(例如，聚乙二醇)的组合组成；
或
阳离子或聚阳离子蛋白或肽，其选自具有下述总式(I)的蛋白或肽：(Arg)l；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；(Xaa)x，其中l+m+n+o+x＝8-15，并且l，m，n或o彼此独立地可以是选自0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15的任一数字，条件是Arg，Lys，His和Orn的总含量占该寡肽的所有氨基酸的至少50％；并且Xaa可以是选自除Arg，Lys，His或Orn外的天然(＝天然存在的)或非天然氨基酸的任何氨基酸；并且x可以是选自0，1，2，3或4的任一数字，条件是Xaa的总含量不超过该寡肽所有氨基酸的50％；
或
具有式(II)的核酸：GlXmGn，其中：G是鸟苷，尿嘧啶或是鸟苷或尿嘧啶的类似物；X是鸟苷、尿嘧啶、腺苷、胸苷、胞嘧啶或上述提及的核苷酸的类似物；l是1-40的整数，其中当l＝1时，G是鸟苷或其类似物，当l＞1时，至少50％的核苷酸是鸟苷或其类似物；m是整数，并且至少为3；其中当m＝3时，X是尿嘧啶或其类似物，当m＞3时，存在至少3个连续的尿嘧啶或尿嘧啶类似物；n是1-40的整数，其中当n＝1时，G是鸟苷或其类似物，当n＞1时，至少50％的核苷酸是鸟苷或其类似物；或具有式(III)的核酸：ClXmCn，其中：C是胞嘧啶、尿嘧啶或者是胞嘧啶或尿嘧啶的类似物；X是鸟苷、尿嘧啶、腺苷、胸苷、胞嘧啶或上述提及的核苷酸的类似物；l是1-40的整数，其中当l＝1时，C是胞嘧啶或其类似物，当l＞1时，至少50％的核苷酸是胞嘧啶或其类似物；m是整数，并且至少为3；其中当m＝3时，X是尿嘧啶或其类似物，当m＞3时，存在至少3个连续的尿嘧啶或尿嘧啶类似物；n是1-40的整数，其中当n＝1时，C是胞嘧啶或其类似物，当n＞1时，至少50％的核苷酸是胞嘧啶或其类似物。
20.疫苗，其包括按照权利要求1-19中任一项的活性(免疫刺激性)组合物。
21.按照权利要求20的疫苗，其中按照要求1-19中任一项的活性(免疫刺激性)组合物引发适应性免疫反应。
22.按照权利要求20和21中任一项的疫苗，其中所述疫苗还包括药用载体。
23.按照权利要求1-19中任一项的活性(免疫刺激性)组合物用于制备疫苗的应用，所述疫苗用于治疗肺癌、优选非小细胞肺癌(NSCLC)相关病症、更优选与三种主要亚型的非小细胞肺癌(NSCLC)相关的病症，所述三种主要亚型的非小细胞肺癌(NSCLC)包括鳞状细胞肺癌、腺癌和大细胞肺癌。
24.试剂盒，优选多部件的试剂盒，其包括按照权利要求1-19中任一项的活性(免疫刺激性)组合物，和/或按照权利要求20-22中任一项的疫苗，和任选地具有所述活性(免疫刺激性)组合物和/或所述疫苗的施用和剂量的信息的技术说明书。
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