CN101743010A - 含有前列腺素e1的稳定的脂肪乳剂 - Google Patents

Abstract

一种包含具有前列腺素E₁活性的化合物的脂肪乳剂，该脂肪乳剂是密封在玻璃制容器中后，加热杀菌，在5℃下保存16个月后，前列腺素E₁活性的残留量是开始保存时的65％以上，100％以下。

Description

含有前列腺素E1的稳定的脂肪乳剂

技术领域

本发明涉及含有前列腺素E₁的稳定的脂肪乳剂。

背景技术

前列腺素E₁(以下，有时也简称为“PGE₁”)一般的名称是前列地尔(Alprostadil)具有强力的血管扩张作用和抑制血小板凝聚作用，对改善慢性动脉闭塞症(伯格(Buerger)病、闭塞性动脉固化症)时的四肢溃疡以及安静时的疼痛、改善行动性全身固化病等时的皮肤溃疡、改善糖尿病时的皮肤溃疡等有效，从而在临床中使用。作为含有前列腺素E₁的制剂，已知的有需要在微细脂肪粒子中溶解PGE₁的所谓的脂化制剂(例如，“Liple注射液”，田边三菱制药株式会社制造和销售)。该制剂是利用了用作药物载体的脂肪粒子特别容易成为障碍分布在血管中的性质，通过考虑药物传输系统(DDS)，在病变部位有效地聚集PGE₁，而且在生物体内的有效成分难以产生失活的制剂，含有作为添加剂的精制大豆油、高度精制蛋黄卵磷脂、油酸、浓甘油以及氢氧化钠，pH从4.5调节为6.0。

然而，上述PGE₁的脂化制剂由于作为有效成分的PGE₁容易在溶液中分解，所以为了避免冻结，必须在5℃下避光保存，有效时间比普通的制剂更短，稳定在1年期间。这种制剂导致流通阶段和临床现场中的药剂管理成本增加，所以期望开发出与降低药剂管理成本有关的有效时间长的药剂。另外，通过脂肪乳剂抑制前列腺素E₁过肺失活的方法在日本特开昭58-222014号公报(专利文献1)中公开，通过脂肪乳剂改善化学稳定性的方法在日本特开昭60-149524号公报(专利文献2)中公开，作为脂肪乳剂制备的血管造影助剂在日本特开平4-66540号公报(专利文献3)中公开。另外，pH对脂肪乳剂中的PGE₁的影响已知的是在pH5.0附近最稳定，在这之上或之下的pH下不稳定(Pharmaceutical Research，6，pp.210-215，1989；非专利文献1)。

【专利文献1】特开昭58-222014号公报

【专利文献2】特开昭60-149524号公报

【专利文献3】特开平4-66540号公报

【非专利文献1】Pharmaceutical Research，6，pp.210-215，1989

发明内容

发明解决的课题

本发明的课题在于提供具有更长有效时间、包含具有前列腺素E₁活性的化合物的制剂。更具体地，提供延长作为含前列腺素E₁的制剂的市售脂化制剂(例如，“Liple注射液”等)有效时间的方法。

解决课题的手段

本发明人为了解决上述问题，进行了认真研究，从而发现在制剂制造工序的最后阶段中，将密封在玻璃安瓿中的制剂(填充时，将pH调节到约5.0)用高压锅(125℃)加热杀菌，则从玻璃安瓿的内部表面溶出碱性成分，使得制剂的pH比杀菌前高。基于该发现，本发明人继续进一步研究，从而发现杀菌时通过采用抑制碱性成分从玻璃安瓿溶出的手段，可以不受玻璃安瓿的性质(材料)的影响，容易地制造、提供长时间稳定的脂化制剂。

即，根据本发明提供一种包含具有前列腺素E₁活性的化合物的脂肪乳剂，该乳剂密封在玻璃制容器中后，加热杀菌，在5℃下保存16个月后，前列腺素E₁活性的残留量是开始保存时的65％以上，100％以下。

根据上述发明的优选的方案，提供在开始保存时，含有5μg以上的具有前列腺素E₁活性的化合物，在5℃下保存16个月后，具有前列腺素E₁活性的化合物的残留量为4μg以上的上述脂肪乳剂；在开始保存时，含有10μg以上具有前列腺素E₁活性的化合物，在5℃下保存16个月后，具有前列腺素E₁活性的化合物的残留量为8μg以上的上述脂肪乳剂。另外，提供加热杀菌后、开始保存时的pH为4.9到5.3的范围的上述脂肪乳剂。

根据更优选的方案，提供上述的脂肪乳剂，其中玻璃制容器是内部表面进行涂敷保护膜的容器；提供上述脂肪乳剂，其中玻璃制容器是在内部表面涂敷保护膜的玻璃安瓿；提供上述脂肪乳剂，其中涂敷保护膜是氧化硅保护膜；提供上述脂肪乳剂，其中玻璃制容器是通过化学处理除去玻璃表面的碱成分的容器；提供上述脂肪乳剂，其中玻璃制容器是通过化学处理除去玻璃表面的碱成分的玻璃安瓿。另外，提供相对于脂肪乳剂的全部量，含有5～50w/v％的植物油的上述脂肪乳剂。

从另一观点出发，根据本发明提供一种制造含有具有前列腺素E₁活性的化合物的脂肪乳剂的方法，该方法包含加热灭菌的工序，该工序是将含有具有前列腺素E₁活性的化合物，pH调节到4.8到5.2的范围的脂肪乳剂密封到玻璃制容器中，加热灭菌；优选的是该容器具有抑制加热灭菌后的该脂肪乳剂的pH上升的手段。

根据上述发明的优选的方案，提供上述的方法，其中该玻璃制容器是玻璃安瓿，抑制pH上升的上述手段是玻璃安瓿内部表面的保护膜，优选为氧化硅保护膜；以及提供上述的方法，其中该玻璃制容器是玻璃安瓿，抑制pH上升的上述手段通过化学处理除去玻璃表面的碱成分。另外，提供的上述方法，加热杀菌后的脂肪乳剂的pH为4.9到5.3的范围；以及提供的上述方法，其中加热杀菌后，各玻璃安瓿中的该脂肪乳剂中残留的具有PGE₁活性的化合物的量的相对标准偏差为1.0％以下。另外，其中所述的具有PGE₁活性的化合物的量在含有“PGE₁”作为有效成分的脂肪乳剂中，是指作为有效成分的“PGE₁”的量；含有“PGE₁以外的具有PEG₁活性的化合物”作为有效成分的脂肪乳剂中，是指作为有效成分的“PEG₁以外的具有PGE₁活性的化合物”的量。

发明的效果

本发明的脂肪乳剂的特征是：与现有的脂肪乳剂相比，具有前列腺素E₁活性的化合物的稳定性更高，即使长时间保存，有效成分也不会降低。另外，本发明的制造方法的特征在于可以提供杀菌后的PGE₁量不受到(难以受到)玻璃制容器的性质(材料)的影响的产品。

具体实施方式

本发明的脂肪乳剂是包含具有前列腺素E₁活性的化合物的脂肪乳剂，特征为密封在容器中后，加热杀菌，在5℃保存16个月后，PGE₁活性的残留量是开始保存时的65％以上，100％以下。作为具有PGE₁活性的化合物，可以使用具有PGE₁活性，适合作为药物的有效成分的任意化合物。例如，适合使用特开昭59-206349号公报以及特开昭59-216820号公报等中公开的PGE₁衍生物。它们之中，特别优选例如7-{(1R，2R，3R)-3-羟基-2-[(1E，3S)-3-羟基辛-1-烯-1-基]-5-氧代环戊基}庚酸(通常称作“前列地尔(Alprostadil)”)。

作为本发明的具有前列腺素E₁活性的化合物特别优选的是如前所述的7-{(1R，2R，3R)-3-羟基-2-[(1E，3S)-3-羟基辛-1-烯-1-基]-5-氧代环戊基}庚酸(前列地尔)，该化合物容易通过脱水反应转变为7-{(1R，2S)-2-[(S，E)-3-羟基辛-1-烯基]-5-氧代环戊-3-烯基}庚酸(前列腺素A1)。可以认为通过转变为前列腺素A1，本发明的脂肪乳剂的药理活性降低。在本发明中，5℃下保存16个月后的1ml本发明的脂肪乳剂中的前列腺素A1的量希望是3.0μg以下。特别希望是0μg以上，1.5μg以下。

包含具有PGE₁活性的化合物的脂肪乳剂例如在特开昭58-222014号公报、特开昭60-149524号公报以及特开平4-66540号公报等中记载，本领域技术人员可以容易地调配脂肪乳剂。例如可以调配为包含植物油、磷脂、水以及具有PGE₁活性的化合物的脂肪乳剂。此外，根据需要，还可以制备添加乳化助剂、稳定剂、高分子物质、等渗剂等的脂肪乳剂。

脂肪乳剂可以通过各种方法调配，例如可以通过下述方法制造。将规定量的植物油(优选为大豆油)、磷脂、具有PGE₁活性的化合物以及其它前述的添加剂等混合，根据需要加热后，使用常用的均化器(例如，加压喷射型均化器、超声波均化器等)，进行均质处理，调配油包水型分散液，接着，在该分散液中加入必要量的水，通过均化器，均化，改变为水包油型乳剂，可以制造脂肪乳剂。可以调配脂肪乳剂后，再加入稳定剂以及等渗剂等添加剂。脂肪乳剂在加热杀菌前，将pH调节为4.8到5.2的范围。调节pH可以适量使用氢氧化钠等碱性物质。渗透压比可以调节为相对于生理盐水的比约为1。

本发明的脂肪乳剂的平均粒径使用以动态光散射法为原理的粒径测定装置进行测定。本发明的脂肪乳剂的优选的平均粒径为0.1μm以上，0.4μm以下。

本发明的脂肪乳剂例如可以将上述调配的脂肪乳剂密封在玻璃容器中后，通过加热杀菌处理制造。作为玻璃制容器，只要是适合密封，而且在加热杀菌处理中，填充到内部的脂肪乳剂中，不会溶出碱性成分，可以使用具有这种性质的任意玻璃制容器，例如优选为具有抑制加热杀菌后的该脂肪乳剂的pH上升手段的玻璃制容器，特别优选具有上述手段的玻璃安瓿。

抑制加热杀菌后的该脂肪乳剂的pH上升的手段没有特别的限定，可以采用例如在加热杀菌时，防止脂肪乳剂中溶出碱性成分的手段，或者在加热杀菌时，使脂肪乳剂中的酸性成分溶出的手段等，优选在加热杀菌时，防止脂肪乳剂中溶出碱性成分的手段。作为在加热杀菌时，防止脂肪乳剂中溶出碱性成分的手段，可以列举出例如在容器内部表面施以保护膜的手段。优选采用在玻璃安瓿的内部表面形成氧化硅保护膜的手段。或者，作为抑制pH上升的手段，还可以采用通过化学处理除去玻璃表面的碱成分的手段。这种技术例如在特开平2-175630号公报等中记载，本领域技术人员可以容易地采用。

本发明的脂肪乳剂可以通过将pH调节为4.8到5.2的范围的上述脂肪乳剂密封在容器中，加热杀菌来制备。加热杀菌例如在高压锅中，在125℃下进行几分钟到10分钟，温度和时间没有特别的限定，只要是能充分杀菌的处理，就可以采用任意的处理。加热杀菌后的脂肪乳剂的pH优选为4.9到5.3。加热杀菌前后的pH上升优选小于0.3，更优选为小于0.2，特别优选小于0.1。另外，对于杀菌后的PGE₁量来说，各安瓿的偏差希望是PGE₁量(μg)的相对标准偏差为1.0％以下，更希望是0.5％以下。

本发明提供包含具有前列腺素E1活性的化合物的脂肪乳剂，例如形成含有5μg或10μg具有前列腺素E1活性的化合物的制剂，填充到安瓿中。在本发明中，在填充了5μg的安瓿中，希望填充其量的80％～125％重量的该化合物。即，是指在安瓿中该化合物填充4μg以上，6.25μg以下。或者，在本发明中，填充了10μg的安瓿中，希望填充其量的80％～125％重量的该化合物。即，是指安瓿中该化合物填充8μg以上，12.5μg以下。

另外，本发明的脂肪乳剂的适用疾病以及使用方法等例如在“Liple注射液5μg”的附带文件(田边三菱制药株式会社，2008年4月修订，第16版)中具体且详细地记载。

实施例

以下，通过实施例对本发明进行更具体地说明，但是本发明的范围并不受到下述实施例的限定。

例1

在精制大豆油中溶解前列地尔(PGE₁)、油酸以及除去磷脂酰乙醇胺(PE)的蛋黄卵磷脂，添加另外准备的甘油和注射用蒸馏水的混合物，用均化器搅拌，调配悬浊液。所得的悬浊液通过Manton-Gaulin型乳化器(Manton-Gaulin制造)乳化，使用氢氧化钠和盐酸，将pH调节为4.90。调配的乳化物填充到Silicoat安瓿(不二硝子制造，安瓿内部施以厚度70～100

的氧化硅保护膜的玻璃制安瓿)中，安瓿的空隙部分用氮取代，通过熔封密封。所得的安瓿使用高压蒸汽杀菌器，在125℃下杀菌2.2分钟，得到本发明的脂肪乳剂。

例2

通过和例1同样的方法调配乳化物，使用氢氧化钠将pH调节为5.01后，和例1同样地，填充和密封到Silicoat安瓿中，杀菌，得到本发明的脂肪乳剂。

例3

通过和例1同样的方法调配乳化物，使用氢氧化钠将pH调节为5.15后，和例1同样地，填充和密封到Silicoat安瓿中，杀菌，得到本发明的脂肪乳剂。

例4(比较例)

例1调配的乳化物填充到普通的玻璃安瓿(不进行氧化硅保护膜的玻璃制安瓿)中，氮气置换安瓿的空隙部分，熔封密封。所得的安瓿使用高压蒸汽杀菌器，在125℃杀菌2.2分钟，得到脂肪乳剂。

例5

通过和例1同样的方法调配乳化物，使用氢氧化钠将pH从5.09调节为5.15后，和例1同样地，填充和密封到Silicoat安瓿中，制造9例样品，杀菌，得到本发明的脂肪乳剂。

例6(比较例)

通过和例5相同的方法，填充到普通的玻璃安瓿中，制造10例样品，通过和例5相同的方法杀菌，得到脂肪乳剂。

在表1中表示改变加热杀菌前的pH得到的脂肪乳剂在25℃保存时，PGE₁的稳定性实验的结果。PGE₁的残留率利用柱后反应通过高效液相色谱测定(根据日本药监局论坛(JP Forum)，15(3)，pp.233-235，2006中记载的方法测定)。表2中表示30℃和40℃下保存时的PGE₁稳定性实验的结果。如该结果表明，在30℃和40℃下保存时，密封填充到Silicoat安瓿中的本发明的脂肪乳剂的PGE₁的稳定性比密封到普通的玻璃安瓿中的例5的脂肪乳剂更优异。使用上述结果，使用阿伦尼乌斯图计算使用调配为pH5.0附近的脂肪乳剂时的5℃的PGE₁稳定性。如表3所示，密封填充到Silicoat安瓿中的本发明的脂肪乳剂在第16个月，相对于开始时，可以维持65％以上的含量。

表4中表示杀菌后的各安瓿中残留的PGE₁量和它们的平均值、标准偏差值以及相对标准偏差值。密封填充到Silicoat安瓿中的本发明的脂肪乳剂的剩余量比密封填充到普通的玻璃安瓿中的例7的脂肪乳剂量的相对标准偏差值更小，表示是各安瓿的偏差小的均匀的产品。

[表1]

[表2]

[表3]

[表4]

例7

采集1ml和例2同样的方法调配的乳化物，加入1ml的内标准溶液(50mg的1-萘酚溶解到20ml的99.5％乙醇中，在3ml该溶解液中加入移动相，调节为100ml的物质)混合，作为试样溶液。另外，用干燥器干燥前列地尔标准溶液，准确称取10mg，用99.5％乙醇中溶解至100ml，作为标准原液(E1)。另外，前列腺素A1标准溶液使用干燥器干燥，称取10mg，用99.5％乙醇溶解至100ml，形成标准原液(A1)。E1和A1各采集2.5ml，加入移动相至50ml，取1ml该混合液，与1ml内标溶液混合，形成标准溶液。分别对40μl试样溶液和标准溶液，进行液相色谱分析。

求得前列腺素A1的峰面积相对于内标准物质的峰面积的比值。以试样溶液中的前列腺素A1的面积比为QT，以标准溶液中的前列腺素A1的面积比为QS。使用这些面积比，通过下式求得换算为前列地尔中前列腺素A1的量。

前列腺素A1的量(μg)＝(前列腺素A1的准确称取量(mg))×QT/QS×0.5×1.054

对于和例2同样的方法制备的乳化剂来说，前列腺素A1的准确称量10.05mg，前列腺素A1的峰面积相对于试样溶液的内标准物质的比(QT)为0.180931，前列腺素A1的峰面积相对于标准溶液的内标准物质的峰面积比(QT)为0.778099。将其应用于上式计算时，该乳化物中的前列腺素A1的量为1.23μg。

工业实用性

本发明的脂肪乳剂与现有的脂肪乳剂相比，具有前列腺素E₁活性的化合物的稳定性更高，即使长时间保存，有效成分的含量一不会降低，所以作为含有前列腺素E₁的制剂极为有用。

Claims (17)

1.一种包含具有前列腺素E₁活性的化合物的脂肪乳剂，该脂肪乳剂是密封在玻璃制容器中后，加热杀菌，在5℃下保存16个月后，前列腺素E₁活性的残留量是开始保存时的65％以上，100％以下。

2.根据权利要求1记载的脂肪乳剂，其中在开始保存时，含有5μg以上具有前列腺素E₁活性的化合物，在5℃下保存16个月后，具有前列腺素E₁活性的化合物的残留量为4μg以上。

3.根据权利要求1记载的脂肪乳剂，其中在开始保存时，含有10μg以上具有前列腺素E₁活性的化合物，在5℃下保存16个月后，具有前列腺素E₁活性的化合物的残留量为8μg以上。

4.根据权利要求2或3记载的脂肪乳剂，其中在5℃下保存16个月后，残留具有前列腺素E₁活性的化合物，该具有前列腺素E₁活性的化合物相当于5μg或10μg具有前列腺素E₁活性的化合物的80.0～125.0％。

5.根据权利要求1～4任一项记载的脂肪乳剂，其中加热杀菌后，开始保存时的pH为4.9到5.3的范围。

6.根据权利要求1～5任一项记载的脂肪乳剂，其中玻璃制容器是内部表面进行涂敷保护膜的容器。

7.根据权利要求6记载的脂肪乳剂，其中玻璃制容器是玻璃安瓿。

8.根据权利要求6或7记载的脂肪乳剂，其中保护膜是氧化硅保护膜。

9.根据权利要求1～5任一项记载的脂肪乳剂，其中玻璃制容器是通过化学处理除去玻璃表面的碱成分的容器。

10.根据权利要求9记载的脂肪乳剂，其中玻璃制容器是玻璃安瓿。

11.根据权利要求1～10任一项记载的脂肪乳剂，其中相对于脂肪乳剂的全部量，含有5～50w/v％的植物油。

12.根据权利要求1～11任一项记载的脂肪乳剂，其中在1mL的脂肪乳剂中含有5μg具有前列腺素E₁活性的化合物、100mg精制大豆油、18mg高度精制蛋黄卵磷脂、2.4mg油酸以及22.1mg浓甘油。

13.根据权利要求1～11任一项记载的脂肪乳剂，其中在2mL的脂肪乳剂中含有10μg具有前列腺素E₁活性的化合物、200mg精制大豆油、36mg高度精制蛋黄卵磷脂、4.8mg油酸以及44.2mg浓甘油。

14.根据权利要求1～13任一项记载的脂肪乳剂，其中前列腺素E₁活性的化合物是7-{(1R，2R，3R)-3-羟基-2-[(1E，3S)-3-羟基辛-1-烯-1-基]-5-氧代环戊基}庚酸。

15.一种权利要求1～14任一项记载的脂肪乳剂的制造方法，该方法包括加热灭菌的工序，该工序是将含有具有前列腺素E₁活性的化合物的pH调节到4.8到5.2的范围，将调节后的脂肪乳剂密封到玻璃制容器中，加热杀菌。

16.根据权利要求15记载的方法，其中该容器是具有抑制加热杀菌后的该脂肪乳剂的pH上升的手段的容器。

17.根据权利要求15记载的方法，其中加热杀菌后，各玻璃安瓿中的该脂肪乳剂中残留的具有前列腺素E₁活性的化合物的量的相对标准偏差为1.0％以下。