CN101654428B

CN101654428B - 天然产物中提取分离高纯1-脱氧野尻霉素的方法

Info

Publication number: CN101654428B
Application number: CN2009101676025A
Authority: CN
Inventors: 杨茹; 卢朝华
Original assignee: CHENGDU GOLD DOCTOR TECHNOLOGY HEALTH INDUSTRY Co Ltd
Current assignee: CHENGDU GOLD DOCTOR TECHNOLOGY HEALTH INDUSTRY Co Ltd
Priority date: 2009-09-11
Filing date: 2009-09-11
Publication date: 2012-05-23
Anticipated expiration: 2029-09-11
Also published as: CN101654428A

Abstract

本发明涉及中药领域，从天然产物，包括桑叶、桑枝、桑白皮、桑椹、蚕沙，提取分离纯度高于98％的1-脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin，DNJ)，同时制备1-脱氧野尻霉素粗品(纯度35％以上)、蛋白饲料、粗黄酮及精制多糖(纯度90％以上)的方法，主要包括以下步骤：原料干粉用亲水溶剂提取，提取液酸化、浓缩后以阴离子交换树脂浸泡，流出液和水洗液浓缩后用阳离子交换柱层析、有机溶剂萃取、重结晶、凝胶柱层析纯化，所得产物中1-脱氧野尻霉素含量不少于98％，具体实施已进入中试。

Description

天然产物中提取分离高纯1-脱氧野尻霉素的方法

技术领域

本发明涉及中药领域，即从天然产物中提取分离高纯1-脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin，DNJ)及制备高附加值的副产物的方法。

背景技术

1-脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin，DNJ)是一种哌啶生物碱，化学名称为3，4，5-三羟基-2-羟甲基四氢吡啶(结构式1)，CAS号19130-96-2，分子式为C₆H₁₃NO₄，分子量为163。DNJ具有高效的生理活性，可用于治疗糖尿病、肥胖症、病毒感染等疾病，可抑制肿瘤，对a-葡萄糖淀粉酶有抑制作用，并可作为载体用于高纯度麦芽糖的酶合成。

结构式1 1-脱氧野尻霉素的化学结构

Ficture 1The chemical constitution of 1-DNJ

现有专利中，CN101195602A介绍了以D-葡萄糖为原料进行DNJ全合成的方法；部分专利涉及较低纯度1-脱氧野尻霉素的提取或桑叶生物总碱制备，包括：CN1471934A、CN1175818C、CN1240407C、CN1250246C、CN1762428A、CN1259915C、CN101020655、CN101314586A、CN100464764C；另有部分专利涉及本发明中单一或混合副产物的制备，包括：CN1159343C、CN1317272C、CN101209284A、CN101214279A、CN101244124A、CN101412703A、CN101491579A。对于从天然产物中提取分离高纯(98％以上)1-脱氧野尻霉素及同时制备1-脱氧野尻霉素粗品(纯度35％以上)、蛋白饲料、粗黄酮及精制多糖(90％以上)的方法，在现有专利中还未见报道。另外，本发明已进行了中试(投料500kg)，在现有制备1-脱氧野尻霉素及相关副产物的专利中，未见已进入中试的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于采用更为合理的提取和分离水溶性生物碱的方法，从天然产物中提取分离高纯1-脱氧野尻霉素，同时制备高附加值的副产物。

本发明公开的是原料干粉用亲水溶剂提取，提取液酸化、浓缩后以阴离子交换树脂浸泡，流出液和水洗液浓缩后用阳离子交换柱层析、有机溶剂萃取、重结晶、凝胶柱层析纯化，所得产物中1-脱氧野尻霉素含量不少于98％。

本发明所述原料包括天然产物桑叶、桑枝、桑白皮、桑椹、蚕沙；采用烘箱干燥、真空干燥、冷冻干燥或喷雾干燥；采用减压浓缩或常压浓缩；采用自然沉降、离心分离、膜分离、絮凝、常压或减压过滤；采用单独粉碎或混合粉碎；采用超声提取、微波提取、加热回流提取、煎煮、渗漉或浸提，优选超声提取。

本发明所要解决的另一技术问题是公开在提取上述高纯目标产物的同时制备高附加值的副产物的方法。

本发明公开的从天然产物中提取分离高纯1-脱氧野尻霉素及制备高附加值的副产物的方法包括以下步骤：

1.从天然产物中提取分离高纯1-脱氧野尻霉素

1)制备原料粉

原料除去杂质，干燥后粉碎、过筛、称重，得原料粉末；原料包括桑叶、桑枝、桑白皮、桑椹、蚕沙等；干燥温度不超过70℃；粉碎后原料粉末过40目筛。

2)提取

原料粉末用亲水溶剂提取，分离固液相；亲水溶剂为水、低级醇、低级醇水溶液及低级醇或水混合液。

3)酸化、浓缩

向2)的提取液中加入稀酸，调节pH＝2～5，提取液浓缩至小体积，分离固液相：加入的酸为盐酸、硫酸。

4)阴离子交换树脂浸泡

将3)的液相通过阴离子交换树脂纯化：直接将3)的浓缩液浸泡阴离子交换树脂6～10小时，流出液加入原阴离子树脂，重复2～5次，水洗，收集最后一次的流出液和水洗液，浓缩至小体积；阴离子交换树脂型号为701、717、D201、D301，优选717；上样液体积与树脂重量之比为1∶3～1∶8；洗脱用水量为树脂体积的1～5倍。

5)阳离子交换树脂柱层析

将4)的浓缩液通过阳离子交换树脂纯化：上样后，以纯水洗至流出液无色后以氨水洗脱，收集pH＝9～12段洗脱液，浓缩至小体积；阳离子交换树脂型号为732、724、D152，优选732；上样液体积与树脂重量之比为1∶1～1∶8；所用氨水浓度低于2.5mol/L。

6)有机溶剂萃取

将5)的浓缩液加入酸调节pH＝6.5～7.5，以氯仿萃取，保留水相；加入的酸为盐酸、硫酸、冰醋酸；浓缩液与氯仿体积比为3∶1～1∶1，萃取次数1～3次。将所得水相以正丁醇萃取，保留正丁醇相，浓缩至小体积，收集析出的固相；浓缩液与正丁醇体积比为1∶1～3∶1，萃取次数3～5次。

7)重结晶

将6)的干品加入无水乙醇重结晶；重结晶的次数为1～3次。

8)凝胶柱层析纯化

将7)的产品溶于少量纯水，通过凝胶柱层析，以标准品对照，收集薄层色谱Rf值和斑点颜色均一致部分，浓缩至干，得成品。其中目标产物1-脱氧野尻霉素含量不少于98％。凝胶柱层析柱采用Superose、Sephdex LH-20、HiTrap SP等，优选Sephdex LH-20，纯水洗脱；1-脱氧野尻霉素标准品纯度不低于99％；薄层层析采用层析硅胶G，显色剂为茚三酮。

2.同时制备高附加值的副产物的方法

1)1-脱氧野尻霉素粗品的制备

合并步骤1-6)中水相与正丁醇未浓缩至干部分，以活性炭脱色、无水乙醇重结晶后浓缩、干燥，得1-脱氧野尻霉素粗品，其中目标产物1-脱氧野尻霉素含量不少于35％。

2)黄酮粗品的制备

用60％～90％低级醇水溶液洗脱步骤1-4)中的阴离子树脂，洗脱液浓缩至干，合并步骤1-3)中得到的固相，得到黄酮粗品。

3)蛋白饲料的制备

将步骤1-2)中得到的固相以超声波水提(400～3000HZ，60～100℃，固液比1∶4～1∶12，10～60min/次×1～5次)，过滤，滤渣可作为蛋白饲料。

4)多糖的制备

将步骤1-3)中滤液浓缩至近干，加入有机溶剂(乙醇、甲醇、异丙醇、丙酮、丁醇、二甲基甲酰胺或二甲亚砜)萃取，除去脂溶性部分，保留水相；将水相加入有机溶剂(乙酸乙酯、乙酸丁酯、苯、甲苯或沸程为60～90℃的石油醚)萃取，除去叶绿素，保留水相；所得水相与步骤1-7)中水洗液及pH＜9段氨水洗脱液浓缩后合并，加95％乙醇使含醇量达80％，于冰箱放置48h，取出抽滤，将沉淀加水溶解，除蛋白(4℃加入三氯乙酸使三氯乙酸浓度为20％，15min后沉降离心3000～4000r/m 30min，保留液相)，得样液。

A.将样液过大孔吸附树脂(AB-8、LSA-5B、HPD100、D941、D101，优选AB-8)，固液比5∶1～1∶1，用蒸馏水洗至在洗脱液中加入95％乙醇无沉淀为止)，洗脱液浓缩，加10％量的活性炭或双氧水脱色处理，加入95％乙醇使含醇量达75％以上醇沉，放置48h后，取出抽滤，沉淀用无水乙醇、丙酮各洗3次，干燥，得到白色无定形粉末，其多糖含量不低于80％；

B.将样液以透析袋(分子量10000以上)透析，干燥，得到白色无定形粉末，其多糖含量不低于90％。

本发明弥补了从天然产物中提取分离高纯(98％以上)1-脱氧野尻霉素及同时制备1-脱氧野尻霉素粗品(纯度35％以上)、蛋白饲料、粗黄酮及精制多糖(90％以上)的技术空白，本发明公开的相关方法有利于蚕桑行业的深度开发利用，经济效益明显；绿色环保，溶剂经回收后几乎无废弃物排出；所需原料、设备成本较低，适宜普遍推广；本发明已进行中试，技术较为成熟，对大规模投产有指导性意义。

附图说明

图1高纯1-脱氧野尻霉素及副产物提取工艺总图

图21-脱氧野尻霉素标准品HPLC图谱

图3本发明高纯1-脱氧野尻霉素产物HPLC图谱

图4本发明中试高纯1-脱氧野尻霉素产物HPLC图谱

具体实施方式

实施例1从桑叶中提取高纯1-脱氧野尻霉素及制备副产物

A.高纯1-脱氧野尻霉素的提取分离：

桑叶经洗涤烘干后粉碎，过40目筛。称取桑叶粉50kg，加入400L 65％乙醇，60℃800HZ超声提取30min，过滤，滤渣加入200L 65％乙醇，60℃800HZ超声提取30min，过滤，合并滤液，滤渣待用。

将1)中的滤液加入2mol/L盐酸，调节pH＝2，减压浓缩至20L，抽滤，滤渣待用。将滤液加入100kg717阴离子交换树脂，搅拌15min，闷置6h后将放出液体，流出液加入原阴离子树脂，重复3次，加入300L水洗脱，收集流出液和洗水，浓缩至20L。

将2)中浓缩液以300kg732阳离子交换树脂柱层析纯化：上样后，纯水洗至洗水无色，以0.5mol/L氨水洗脱，收集pH＝9～12段洗脱液，膜浓缩至10L。加入2mol/L盐酸，调节pH＝7。分3次加入3L氯仿萃取，保留水相、减压浓缩至6L，分5次加入10L正丁醇液萃取。

将3)中的正丁醇相浓缩至1L，抽滤，滤渣以无水乙醇重结晶，析出物溶于100mL纯水，通过Sephdex LH-20凝胶柱层析，纯水洗脱，以99％1-脱氧野尻霉素标准品对照，收集薄层色谱Rf值和斑点颜色均一致部分，浓缩至干，得成品31.82g，其中目标产物1-脱氧野尻霉素1-Deoxynojirimycin含量为98.68％。

B.副产物的制备

1)1-脱氧野尻霉素粗品的制备：

将A3)中正丁醇萃取后的水相与A4)中正丁醇未浓缩至干部分，以700g活性炭脱色、2L无水乙醇重结晶后浓缩、干燥，得1-脱氧野尻霉素粗品109.78g，其1-脱氧野尻霉素1-Deoxynojirimycin含量为42.74％。

2)桑叶粗黄酮的制备：

用300L90％乙醇水溶液洗A2)中的阴离子树脂，洗脱液浓缩至干，合并A2)中得到的滤渣，干燥，得到桑叶黄酮粗品243.78g，桑叶黄酮的重量含量为37％。

3)桑叶多糖及蛋白饲料的制备：

将A1)中的滤渣干燥，超声波水提(1000HZ，80℃，固液比1∶6，15min×3次)，过滤，滤渣可作为蛋白饲料。滤液浓缩至干，分3次加入3L丙酮萃取，除去脂溶性部分，保留水相；将水相分3次加入3L乙酸丁酯萃取，除去叶绿素，保留水相；所得水相与A3)中水洗液及pH＜9段氨水洗脱液浓缩后合并，加95％乙醇使含醇量达80％，于冰箱放置48h，取出抽滤，将沉淀加1L水溶解，除蛋白(4℃加入三氯乙酸使三氯乙酸浓度为20％，15min后沉降离心3000r/m 30min，保留液相)，所得样液过大孔吸附树脂(AB-8，固液比3∶1，用蒸馏水洗至在洗脱液中加入95％乙醇无沉淀为止)，洗脱液浓缩至10L，加1Kg活性炭脱色处理，加入95％乙醇40L，静置48h，抽滤，沉淀用500mL无水乙醇、500mL丙酮各洗3次，干燥，得到浅黄白色无定形粉末96.94g，其多糖含量为88.71％。

实施例2从蚕沙中提取高纯1-脱氧野尻霉素及制备副产物

A.高纯1-脱氧野尻霉素的提取分离：

1)取5龄蚕沙烘干后粉碎，过40目筛。称取蚕沙粉400g，加入4000mL 65％乙醇，60℃1500HZ超声提取25min，过滤，滤渣加入2400mL 65％乙醇，60℃1500HZ超声提取25min，过滤，合并滤液，滤渣待用。

将1)中的滤液加入2mol/L盐酸，调节pH＝3，减压浓缩至200mL，抽滤，滤渣待用。将滤液加入1kg717阴离子交换树脂，搅拌15min，闷置6h后将放出液体，流出液加入原阴离子树脂，重复3次，缓慢加入3L水洗脱，收集第三次的流出液和洗水，浓缩至100mL。

将2)中浓缩液以1kg732阳离子交换树脂柱层析纯化：上样后，纯水洗脱至无色，以0.5mol/L氨水洗脱，收集pH＝9～12段洗脱液，减压浓缩至100mL。加入2mol/L盐酸，调节pH＝7。分3次加入100mL氯仿萃取，保留水相，分5次加入150mL正丁醇液萃取。

将3)中的正丁醇相浓缩至10mL，抽滤，滤渣以无水乙醇重结晶，析出物溶于10mL纯水，通过Sephdex LH-20凝胶柱层析，纯水洗脱，以99％1-脱氧野尻霉素标准品对照，收集共薄层色谱Rf值和斑点颜色均一致部分，浓缩至干，得成品0.12g，其中目标产物1-脱氧野尻霉素1-Deoxynojirimycin含量为98.79％。

B.副产物的制备

1)1-脱氧野尻霉素粗品的制备：

将A3)中正丁醇萃取后的水相与A4)中正丁醇未浓缩至干部分，以10g活性炭脱色、40mL无水乙醇重结晶后浓缩、干燥，得1-脱氧野尻霉素粗品0.88g，其1-脱氧野尻霉素1-Deoxynojirimycin含量为39.45％。

2)粗黄酮的制备：

用3L85％乙醇水溶液洗A2)中的阴离子树脂，洗脱液浓缩至干，合并A2)中得到的滤渣，干燥，得到黄酮粗品8.17g，其黄酮的重量含量为42％。

3)多糖及蛋白饲料的制备：

将A1)中的滤渣干燥，超声波水提(1500HZ，78℃，固液比1∶8，20min×3次)，过滤，滤渣可作为蛋白饲料。滤液浓缩至干，分3次加入100mL二甲基甲酰胺萃取，除去脂溶性部分，保留水相；将水相分3次加入100mL乙酸乙酯萃取，除去叶绿素，保留水相；所得水相与A3)中水洗液及pH＜9段氨水洗脱液浓缩后合并，加95％乙醇使含醇量达80％，于冰箱放置48h，取出抽滤，将沉淀加50mL水溶解，除蛋白(4℃加入三氯乙酸使三氯乙酸浓度为20％，15min后沉降离心4000r/m 30min，保留液相)，所得样液过大孔吸附树脂(D101，固液比4∶1，用蒸馏水洗至在洗脱液中加入95％乙醇无沉淀为止)，洗脱液浓缩至100mL，加10g活性炭脱色处理，加入95％乙醇400mL，静置48h，抽滤，沉淀50mL无水乙醇、50mL丙酮洗涤，干燥，得到白色无定形粉末0.32g，其多糖含量为90.14％。

实施例3从桑椹中提取高纯1-脱氧野尻霉素：

1)桑椹烘干后粉碎，过40目筛。称取桑椹粉2kg，加入15L 80％甲醇，70℃1200HZ超声提取20min，过滤，滤渣加入10L 80％甲醇，70℃1200HZ超声提取20min，过滤，合并滤液，滤渣待用。

2)将1)中的滤液加入2mol/L硫酸，调节pH＝3，减压浓缩至1L，抽滤，滤渣待用。将滤液加入5kg701阴离子交换树脂，搅拌均匀，闷置10h后将放出液体，流出液加入原阴离子树脂，重复3次，加入20L水洗脱，收集第三次流出液和洗水，浓缩至1L。

将2)中浓缩液以5kg732阳离子交换树脂柱层析纯化：上样后，纯水洗至洗水无色，以0.25mol/L氨水洗脱，收集pH＝9～12段洗脱液，减压浓缩至1L。加入2mol/L盐酸，调节pH＝7。分3次加入1L氯仿萃取，保留水相、减压浓缩至1L，分5次加入1L正丁醇液萃取。

将3)中的正丁醇相浓缩至100mL，抽滤，滤渣以无水乙醇重结晶，析出物溶于20mL纯水，通过HiTrap SP凝胶柱层析，纯水洗脱，以99％1-脱氧野尻霉素标准品对照，收集共薄层色谱Rf值和斑点颜色均一致部分，浓缩至干，得成品0.88g，其中目标产物1-脱氧野尻霉素1-Deoxynojirimycin含量为98.26％。

实施例4从桑叶、桑枝、桑白皮、桑椹、蚕沙混合物中提取

高纯1-脱氧野尻霉素及制备副产物：

A.高纯1-脱氧野尻霉素的提取分离：

1)取等重桑叶、桑枝、桑白皮、桑椹、蚕沙混合均匀，烘干后粉碎，过40目筛。称取原料粉20kg，加入160L 70％乙醇，68℃2000HZ超声提取35min，过滤，滤渣加入120L 70％乙醇，68℃2000HZ超声提取35min，过滤，合并滤液，滤渣待用。

2)将1)中的滤液加入2mol/L盐酸，调节pH＝2.5，减压浓缩至5L，抽滤，滤渣待用。将滤液加入30kg717阴离子交换树脂，搅拌均匀，闷置10h后将放出液体，流出液加入原阴离子树脂，重复3次，加入20L水洗脱，收集第三次流出液和洗水，浓缩至1L。

将2)中浓缩液以5kg732阳离子交换树脂柱层析纯化：上样后，纯水洗至洗水无色，以0.5mol/L氨水洗脱，收集pH＝9～12段洗脱液，减压浓缩至5L。加入2mol/L盐酸，调节pH＝6.5。分3次加入2L氯仿萃取，保留水相、减压浓缩至1.5L，分5次加入2L正丁醇液萃取。

将3)中的正丁醇相浓缩至200mL，抽滤，滤渣以无水乙醇重结晶，析出物溶于100mL纯水，通过Sephdex LH-20凝胶柱层析，纯水洗脱，以99％1-脱氧野尻霉素标准品对照，收集共薄层色谱Rf值和斑点颜色均一致部分，浓缩至干，得成品10.30g，其中目标产物1-脱氧野尻霉素1-Deoxynojirimycin含量为98.416％(见附图3)。

B.副产物的制备

1)1-脱氧野尻霉素粗品的制备：

将A3)中正丁醇萃取后的水相与A4)中正丁醇未浓缩至干部分，以150g活性炭脱色、5L无水乙醇加热回流1h，重结晶后浓缩、干燥，得1-脱氧野尻霉素粗品50.72g，其1-脱氧野尻霉素1-Deoxynojirimycin含量为36.59％。

2)粗黄酮的制备：

用100L85％乙醇水溶液洗A2)中的阴离子树脂，洗脱液浓缩至干，合并A2)中得到的滤渣，干燥，得到桑叶黄酮粗品155.32g，黄酮的重量含量为27％。

3)多糖及蛋白饲料的制备：

将A1)中的滤渣干燥，超声波水提(1000HZ，85℃，固液比1∶8，15min×4次)，过滤，滤渣可作为蛋白饲料。滤液浓缩至干，分3次加入10L丙酮萃取，除去脂溶性部分，保留水相；将水相分3次加入10L乙酸丁酯萃取，除去叶绿素，保留水相；所得水相与A3)中水洗液及pH＜9段氨水洗脱液浓缩后合并，加95％乙醇使含醇量达80％，于冰箱放置48h，取出抽滤，将沉淀加1L水溶解，除蛋白(4℃加入三氯乙酸使三氯乙酸浓度为20％，15min后沉降离心3500r/m 40min，保留液相)，所得样液用截留分子量大于10000的透析袋透析，以纯水作溶剂，12h/次×6次，截留样干燥，得到白色无定形粉末32.77g，其多糖含量为95.21％。

实施例5从桑叶中提取高纯1-脱氧野尻霉素及制备副产物中试

A.高纯1-脱氧野尻霉素的提取分离：

桑叶经洗涤烘干后粉碎，过40目筛。称取桑叶粉500kg，加入5000L 70％乙醇，68℃2000HZ超声提取40min，过滤，滤渣加入2000L 70％乙醇，68℃2000HZ超声提取40min，过滤，合并滤液，滤渣待用。

将1)中的滤液加入2mol/L盐酸，调节pH＝2，减压浓缩至50L，抽滤，滤渣待用。将滤液加入400kg717阴离子交换树脂，搅拌15min，闷置8h后将放出液体，流出液加入原阴离子树脂，重复3次，加入1000L水洗脱，收集流出液和洗水，浓缩至50L。

将2)中浓缩液以400kg732阳离子交换树脂柱层析纯化：上样后，纯水洗至洗水无色，以0.5mol/L氨水洗脱，收集pH＝9～12段洗脱液，膜浓缩至20L。加入2mol/L盐酸，调节pH＝7。分3次加入20L氯仿萃取，保留水相、减压浓缩至6L，回收有机相；水相分5次加入25L正丁醇液萃取。

将3)中的正丁醇相浓缩至2L，抽滤，滤渣以无水乙醇重结晶，析出物溶于100mL纯水，通过Sephdex LH-20凝胶柱层析，纯水洗脱，以99％1-脱氧野尻霉素标准品对照，收集薄层色谱Rf值和斑点颜色均一致部分，浓缩至干，得成品324.9g，其中目标产物1-脱氧野尻霉素1-Deoxynojirimycin含量为98.402％(见附图4)。

B.副产物的制备

1)1-脱氧野尻霉素粗品的制备：

将A3)中正丁醇萃取后的水相与A4)中正丁醇未浓缩至干部分，以500g活性炭脱色、8L无水乙醇重结晶后浓缩、干燥，得1-脱氧野尻霉素粗品957.4g，其1-脱氧野尻霉素1-Deoxynojirimycin含量为40.65％。

2)桑叶粗黄酮的制备：

用3000L90％乙醇水溶液洗A2)中的阴离子树脂，洗脱液浓缩至干，合并A2)中得到的滤渣，干燥，得到桑叶黄酮粗品2417.2g，桑叶黄酮的重量含量为38％。

3)桑叶多糖及蛋白饲料的制备：

将A1)中的滤渣干燥，超声波水提(1000HZ，80℃，固液比1∶6，15min×3次)，过滤，滤渣可作为蛋白饲料。滤液浓缩至干，分3次加入20L丙酮萃取，除去脂溶性部分，保留水相，回收有机溶剂；将水相分3次加入20L乙酸丁酯萃取，除去叶绿素，保留水相，回收有机溶剂；所得水相与A3)中水洗液及pH＜9段氨水洗脱液浓缩后合并，加95％乙醇使含醇量达80％，于冰箱放置48h，取出抽滤，将沉淀加5L水溶解，除蛋白(4℃加入三氯乙酸使三氯乙酸浓度为20％，15min后沉降离心4000r/m 30min，保留液相)，所得样液过大孔吸附树脂(AB-8，固液比3∶1，用蒸馏水洗至在洗脱液中加入95％乙醇无沉淀为止)，洗脱液浓缩至10L，加1500g活性炭脱色处理，加入95％乙醇40L，静置48h，抽滤，沉淀用1000mL无水乙醇、1000mL丙酮各洗3次，干燥，得到浅黄白色无定形粉末1012.98g，其多糖含量为85.06％。

Claims

1.一种从天然产物中提取分离高纯1-脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin，DNJ)的方法，其特征在于包括以下过程：

1)原料除去杂质，干燥后粉碎、过筛、称重，得原料粉末；所述原料选自桑叶、桑枝、桑白皮、桑椹、蚕沙；

2)原料粉末用亲水溶剂提取，分离固液相；

3)向2)的提取液中加入稀酸，调节pH＝2～5，提取液浓缩至小体积，分离固液相；

4)将3)的液相通过阴离子交换树脂纯化：直接将3)的浓缩液浸泡阴离子交换树脂6～10小时，流出液加入原阴离子交换树脂，重复2～5次，水洗，收集最后一次的流出液和水洗液，浓缩至小体积；

5)将4)的浓缩液通过阳离子交换树脂纯化：上样后，以纯水洗至流出液无色后以氨水洗脱，收集pH＝9～12段洗脱液，浓缩至小体积；

6)将5)的浓缩液加入酸调节pH＝6.5～7.5，以氯仿萃取，保留水相；

7)将6)中的水相以正丁醇萃取，保留正丁醇相，浓缩至小体积，收集析出的固相；

8)将7)的干品加入无水乙醇重结晶；

9)将8)的产品溶于少量纯水，通过凝胶柱层析，以标准品对照，收集薄层色谱Rf值和斑点颜色均一致部分，浓缩至干，得成品，其中目标产物1-脱氧野尻霉素含量不少于98％。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于所述1)中的干燥温度不超过70℃；粉碎后原料粉末过40目筛。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于所述3)中加入的稀酸为盐酸、硫酸、冰醋酸，浓度低于3mol/L。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于所述6)中加入的酸为盐酸、硫酸、冰醋酸；浓缩液与氯仿体积比为3∶1～1∶1，萃取次数1～3次。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于所述7)中浓缩液与正丁醇体积比为1∶1～3∶1，萃取次数3～5次。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于所述8)中重结晶的次数为1～3次。

7.根据权利要求1所述方法，其特征在于所述9)中凝胶柱层析柱采用Superose、HiTrapSP，纯水洗脱；1-脱氧野尻霉素标准品纯度不低于99％；薄层层析采用层析硅胶G，显色剂为茚三酮。

8.根据权利要求1所述方法，其特征在于：采用烘箱干燥、真空干燥、冷冻干燥或喷雾干燥；采用减压浓缩或常压浓缩工艺；采用自然沉降、离心分离、膜分离、絮凝、常压或减压过滤进行析出物与液体分离；采用单独粉碎或混合粉碎；采用超声提取、微波提取、加热回流提取、渗漉或浸提。