CN101259131A - 用于细胞增殖性障碍的二氢吲哚酮与化疗剂的联合给药 - Google Patents

用于细胞增殖性障碍的二氢吲哚酮与化疗剂的联合给药 Download PDF

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Abstract

本发明涉及用于细胞增殖性障碍的二氢吲哚酮化合物与化疗剂的组合给药。通式(I)的二氢吲哚酮化合物与化疗剂的组合对治疗癌症患者提供了增强的作用。

Description

用于细胞增殖性障碍的二氢吲哚酮与化疗剂的联合给药
本发明是申请日为2003年11月14日的中国专利申请200380103225.X的分案申请，原申请的发明名称为“用于细胞增殖性障碍的二氢吲哚酮与化疗剂的联合给药”。
发明领域
本发明涉及治疗细胞增殖性障碍、诸如癌症的方法，通过给予二氢吲哚酮化合物与另一种化疗剂的组合来进行。通式I的二氢吲哚酮化合物与另一种化疗剂的组合对治疗某些类型的癌症患者提供了增强的作用。
发明背景
乳腺癌是乳腺组织中的细胞不加控制地分裂和生长的癌症类型。大约80％的乳腺癌病例在乳腺导管中发生，而大约20％的病例在小叶中产生。当来自小叶内侧或导管的正常细胞暴发进入周围组织时，侵害性乳腺癌发生。不过，该术语并不一定指的是在乳腺外的任何处发现的转移瘤。当侵害性癌症一般在其最能够治疗时，诸如当肿瘤相对较小且尚未扩散至淋巴结时，将前看作″早期阶段″。当该疾病更为严重且几乎不能成功治疗时，诸如当肿瘤极大或已经扩散至其它器官(如肝、肺和骨)时，将其看作″晚期阶段″。
当异常细胞在小叶或输乳管内生长、而没有已经扩散至周围组织或其它处的征兆时，称该疾病为原位癌。原位癌存在两种主要类型：原位导管癌和原位小叶癌。
乳腺导管一般是中空的，由此流体可以通过它们。就原位导管癌(DCIS)而言，与侵害性癌细胞极为相似的过量细胞在导管内生长。DCIS并非侵害性癌症，但它与乳腺癌的危险性增加有关且将其视为最终可能发展成侵害性癌症的癌前期情况。
与输乳管相似，乳腺组织的小叶内部具有开放的空间。当大量异常细胞在小叶内生长时，将该疾病称作原位小叶癌(LCIS)。LCIS是非侵害性癌症和且它不是直接的癌前体，即在小叶内发现的异常细胞随后不可能转化成癌症。然而，LCIS是侵害性癌症的危险因素。
通过联用手术、放疗和/或除手术和放疗外指定的辅助系统性疗法治疗患有1或2期乳腺癌的大部分女性以便消除可能扩散至其它部位的肿瘤。存在两种类型，即化疗和激素疗法。
30种以上不同的药物常用于化疗。这些药物中最有效的称作一线药物的为多柔比星、表柔比星、甲氨蝶呤、环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、多西他赛和紫杉醇。尽管这些药物各自表现出其自身的一定功效，但是申请人已经证实联用不同的药物进一步增加了其杀伤癌细胞的能力。目前可得到的用于辅助疗法的化疗组合中的某些为：
1.环磷酰胺和多柔比星(阿霉素)的组合。
2.环磷酰胺、甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶的组合。
3.CAF(FAC)；环磷酰胺、多柔比星(阿霉素)5-氟尿嘧啶的组合。
4.环磷酰胺、多柔比星(阿霉素)和紫杉醇(泰素)的组合。
5.环磷酰胺、多柔比星(阿霉素)和泰索帝(多西他赛)的组合。
结肠癌包括结肠或直肠衬层内异常或恶性细胞生长。大部分结肠癌因称作腺瘤的非恶性肿瘤生长而产生。在某些情况中，腺瘤具有增加大小且在细胞内发生一系列改变的能力，导致它们在功能、结构和性状上变异常。这通常称作恶性肿瘤或癌症。目前结肠癌的治疗方案包括手术摘除肿瘤、放疗和化疗。对结肠癌指定的化疗通常由有关两种药物方案氟尿嘧啶(5-FU)和左旋咪唑和5-FU和亚叶酸的变化形式组成。
小细胞肺癌(SCLC)不同于其它类型的肺癌(发现时已经存在转移瘤)且每年总计大约有110,000位的癌症诊断病例。1982年在小细胞肺癌细胞系中首次观察到染色体3中的部分缺失。正如其它癌症一样，观察到控制细胞生长和分裂的各种分子(癌基因和肿瘤抑制基因)中发生突变且没有一种突变能够导致癌生长。常用三种类型的疗法：手术、放疗和化疗。尽管认为没有单一化疗方案被认为是标准的，但是已经表现出活性的包括口服依托泊苷、依托泊苷/顺铂、环磷酰胺/多柔比星/长春新碱(CAV)、洛莫司汀/甲氨蝶呤和托泊替康和及其组合。
非小细胞肺癌(NSCLC)是包括也称作表皮样癌的鳞状细胞癌、腺癌、腺鳞癌(adenosquamous)、大细胞癌和未分化的细胞癌的一类肺癌。
肾细胞癌(也称作肾癌或肾腺癌)是在肾的某些组织中发现癌(恶性)细胞的疾病
胃肠间质瘤(GIST)是通常在胃肠道壁上的细胞中开始发生的肿瘤类型。它可以是良性或恶性的。
甲状腺癌包括甲状腺的恶性肿瘤。
肉瘤包括骨、软骨、脂肪、肌肉、血管或其它结缔组织或支持组织的任何癌症。
神经内分泌瘤指的是肿瘤从非该肿瘤的位置生长的细胞类型。神经内分泌细胞产生激素或调节蛋白且这些细胞瘤由此通常具有与它们所产生特定激素相关的症状。
总之，因癌症对化疗剂产生耐受性而存在许多已知化疗剂无法根除的癌症的情况。申请人已经确定可以以低于目前标准的剂量给予通式I的化合物与另一种化疗剂的组合，而仍然可以提供有益的功效且可能会降低化疗剂对患者的毒性。
发明概述
本发明的一个实施方案涉及治疗癌症的方法，包括给予有此需要的患者有效量的通式的I化合物或其药物上可接受的盐、水合物或溶剂合物与至少一种化疗剂的组合的步骤，其中通式I化合物的结构式如下：
Figure A20081008142200051
其中：
每个R各自独立为氢、羟基、烷基、芳基、环烷基、杂芳基、烷氧基、杂环或氨基；
每个R1各自独立为烷基、卤素、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基、杂环、羟基、-C(O)-R8、-NR9R10、-NR9C(O)-R12或-C(O)NR9R10；
每个R2各自独立为烷基、芳基、杂芳基、-C(O)-R8或SO2R″，其中R″为烷基、芳基、杂芳基、NR9N10或烷氧基；
每个R5各自独立为氢、烷基、芳基、卤代烷基、环烷基，杂芳基、杂环、羟基、-C(O)-R8或(CHR)rR11；
X为O或S；
j为0或1；
p为0、1、2或3；
q为0、1或2；
r为0、1、2或3；
R8为羟基、烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷基或杂环；
R9和R10独立为氢、烷基、芳基、氨基烷基、杂芳基、环烷基和杂环或R9和R10与N一起形成环，其中环原子选自C、N、O和S；
R11为羟基、氨基、单取代的氨基、二取代的氨基、烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷基或杂环；
R12为烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、环烷基或杂环；且
Z为羟基、-O-烷基和-NR3R4，其中R3和R4独立为氢、烷基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环或R3和R4可以与N连接形成：
环，其中环原子选自CH2、N、O和S；
或
Figure A20081008142200061
其中Y独立为CH2、O、N或S，Q为C或N，n独立为0、1、2、3或4，且m为0、1、2或3；
其中所述的至少一种化疗剂选自微管干扰剂、拓扑异构酶抑制剂、烷化剂、胸苷酸合酶抑制剂、不可逆甾类芳香酶灭活剂、抗代谢药、嘧啶拮抗剂、嘌呤拮抗剂、核糖核苷酸还原酶抑制剂和激酶抑制剂。通式I化合物及其制备方法描述在WO 02/066463和美国专利US6,573,293中，将这两篇文献的全部内容引入本文作为参考。
在另一个实施方案中，R1为卤素，优选F或Cl，且p为1。
在另一个实施方案中，Z为-NR3R4，其中R3和R4为低级烷基或形成吗啉环。
在另一个实施方案中，Z为：
Figure A20081008142200071
其中每个Y各自为CH2，每个n各自为2，m为0且R3和R4形成吗啉环。
在另一个实施方案中，R2为甲基且q为2，其中甲基连接在3位和5位上。
在另一个实施方案中，通式I的化合物选自下列化合物及其药物上可接受的盐、溶剂合物和水合物：
Figure A20081008142200072
Figure A20081008142200081
在另一个实施方案中，通式I的化合物选自下列化合物及其药物上可接受的盐、水合物和溶剂合物：
Figure A20081008142200082
Figure A20081008142200091
在另一个实施方案中，所述的化合物为如下化合物或其药物上可接受的盐、水合物或溶剂合物：
Figure A20081008142200092
在该实施方案的优选方面中，所述的盐为苹果酸盐，优选L-苹果酸盐。
在任意上述实施方案的优选方面中，所述的至少一种化疗剂选自紫杉醇、多西他赛、长春碱、长春新碱、长春地辛、依立替康、多柔比星、表柔比星、亚叶酸、依托泊苷(etopside)、替尼泊苷、伊达比星、吉西他滨、柔红霉素、卡铂、顺铂、奥沙利铂、苯丁酸氮芥、美法仑、环磷酰胺、异环磷酰胺、替莫唑胺、塞替派、丝裂霉素C、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、5-氟尿嘧啶、卡培他滨、AROMASINTM(依西美坦)、甲氨蝶呤、三甲曲沙、氟尿嘧啶、氟脱氧尿苷、氮胞苷、巯嘌呤、硫鸟嘌呤、喷司他丁、阿糖胞苷、氟达拉滨、羟基脲、AVASTINTM(贝伐单抗)、西妥昔单抗、IRESSATM(gefitinib)和GLEEVECTM(伊马替尼(imatinib))组成的组。
在另一个实施方案中，使用至少两种另外的化疗剂与通式I化合物的组合。
在另一个实施方案中，使用至少三种另外的化疗剂与通式I化合物的组合。
在本发明的一个实施方案中，可以在本发明方法中给予另一种活性剂与通式I的化合物。所述的另一种活性剂本身并非为化疗剂，而是具有治疗作用，例如为一种可以改善因常规化疗导致的副作用(如恶病质)的营养制品。
附图简述
附图1是表示与单一疗法相比给予化合物1与5mg/kg/天多西他赛的组合产生肿瘤生长延缓的结果的示意图。
附图2是表示与单一疗法相比给予化合物1与10mg/kg/天多西他赛的组合产生肿瘤生长延缓的结果的示意图。
附图3是表示与单一疗法相比给予化合物1与15mg/kg/天多西他赛的组合产生肿瘤生长延缓的结果的示意图。
附图4是表示与单一疗法相比给予化合物1和5、10和15mg/kg/天多西他赛的组合产生肿瘤生长延缓的结果的示意图。
附图5是表示与单一疗法相比给予化合物1与5-FU的组合产生肿瘤生长延缓的结果的示意图。
附图6是表示与单一疗法相比给予化合物1和多柔比星的组合产生肿瘤生长延缓的结果的示意图。
附图7是表示与单一疗法相比给予化合物1与顺铂的组合产生肿瘤生长延缓的结果的示意图。
  与下列情况相比组合导致肿瘤生长的延缓   延缓的天数   p值
  化合物1顺铂   3023   0.00050.0009
皮下接种入无胸腺小鼠(n＝10只/组)的NCI-H526细胞，当肿瘤约为250nm3时，开始口服给予40mg/kg/天的化合物1，160mg/kg/BID的STI-571或载体对照。
附图8是表示与单一疗法相比给予20mg/kg/天和40mg/kg/天化合物1与CPT-11的组合产生肿瘤生长延缓的结果的示意图。
优选实施方案的详细描述
通式I的化合物用于治疗患有癌症的患者。因本发明通式I化合物作为受体酪氨酸激酶(RTK)抑制剂的活性而使它们特别用于治疗癌症患者。通式I的化合物为KIT和FLT3以及VEGF和PDGF受体抑制剂。通式I的化合物阻断直接在肿瘤细胞中表达的RTKs和在内皮或基质细胞中表达的RTKs，从而使它们具有抑制肿瘤生长的能力。
所关注的与通式I的二氢吲哚酮化合物一起给予的化疗剂包括、但不限于微管干扰剂、拓扑异构酶抑制剂、烷化剂、胸苷酸合酶抑制剂、不可逆甾类芳香酶灭活剂、抗代谢药、嘧啶拮抗剂、嘌呤拮抗剂、核糖核苷酸还原酶抑制剂，和激酶抑制剂。
微管干扰剂是那些破坏组织微管形成、终止有丝分裂和DNA合成的活性剂且包括：紫杉烷类，例如紫杉醇和多西他赛；长春花属生物碱(vinca alkyloids)，诸如长春碱、长春新碱和长春地辛。
通过打断DNA起作用的拓扑异构酶抑制剂包括两种类型，即拓扑异构酶I和拓扑异构酶II抑制剂。拓扑异构酶I抑制剂包括、但不限于依立替康(CPT-11)。拓扑异构酶II抑制包括：例如多柔比星和表柔比星。用于本发明的其它拓扑异构酶抑制剂包括、但不限于依托泊苷(etopside)、替尼泊苷、伊达比星和柔红霉素。
已经证实通过破坏DNA起作用的烷化剂、诸如苯丁酸氮芥、美法仑、环磷酰胺、异环磷酰胺、替莫唑胺、塞替派、丝裂霉素C、白消安、卡莫司汀(BCNU)和洛莫司汀(CCNU)为有用的化疗剂。烷化剂还包括已经证实为有用化疗剂的铂类，诸如卡铂和顺铂，不过它们不是烷化剂，而是通过共价结合DNA起作用。
通过代谢成DNA和RNA的错误碱基干扰转录的胸苷酸合酶抑制剂包括：例如5-氟尿嘧啶和卡培他滨。
作为芳香酶错误底物的不可逆甾类芳香酶抑制剂包括、但不限于
已经发现抗代谢药、诸如叶酸拮抗剂、甲氨蝶呤和三甲曲沙(Alimta)可用作化疗剂。
已经发现嘧啶拮抗剂、诸如氟尿嘧啶、氟脱氧尿苷和氮胞苷(azacytidine)用作化疗剂。
已经发现嘌呤拮抗剂用作化疗剂且包括诸如巯嘌呤、硫鸟嘌呤和喷司他丁这类活性剂。也用作化疗剂的糖修饰的类似物包括阿糖胞苷和氟达拉滨。
已经发现核糖核苷酸还原酶抑制剂用作化疗剂且包括诸如羟基脲这类活性剂。
除上述常用化疗剂外，还可以将通式I的化合物与其它激酶抑制剂联用，诸如AVASTITNTM(贝伐单抗)、西妥昔单抗、IRESSATM(gefitinib)和GLEEVECTM(伊马替尼)。
在本发明优选的实施方案中，与通式I化合物联合给予的另一种化疗剂为紫杉烷，更优选紫杉醇或多西他赛。
在本发明优选的实施方案中，与通式I化合物联合给予的另一种化疗剂为拓扑异构酶抑制剂，更优选拓扑异构酶I或拓扑异构酶II抑制剂，更优选蒽环霉素且更优选多柔比星或表柔比星及其组合。
在本发明优选的实施方案中，与通式I化合物联合给予的另一种化疗剂为胸苷基合酶抑制剂(inhibitore)，更优选5-氟尿嘧啶(5-FU)或卡培他滨，更优选5-FU。
在本发明优选的实施方案中，与通式I化合物联合给予的用于小细胞肺癌的另一种化疗剂为烷化剂，更优选顺铂。
在本发明优选的实施方案中，与通式I化合物联合给予的另一种化疗剂为不可逆甾类芳香酶灭活剂，诸如AROMASINTM(依西美坦)。
在优选的实施方案中，对需要这类联合疗法的患者给予的通式I的化合物选自下列化合物组成的组：
5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-二乙氨基-乙基)-酰胺；
5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-吡咯烷-1-基-乙基)-酰胺；
5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-吗啉-4-基-乙基)-酰胺；
(S)-5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-羟基-3-吗啉-4-基-丙基)-酰胺；
(R)-5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-羟基-3-吗啉-4-基-丙基)-酰胺；
5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-羟基-3-吗啉-4-基-丙基)-酰胺；
5-(5-氯-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-羟基-3-吗啉-4-基-丙基)-酰胺；
5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-乙氨基-乙基)-酰胺；和
3-[3，5-二甲基-4-(4-吗啉-4-基-哌啶-1-羰基)-1H-吡咯-2-亚甲基]-5-氟-1，3-二氢-吲哚-2-酮。
为了清楚地列举用于本发明方法的通式I的化合物，提供了如下定义。
″烷基″指的是饱和脂族烃基，包括1-20个碳原子的直链和支链基团(无论本文所述的数值范围如何，例如″1-20″，就烷基而言，它的含义均为可以含有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等，至多且包括20个碳原子)。含有1-4个碳原子的烷基称作低级烷基。当所述的低级烷基不含取代基时，将它们称作未被取代的低级烷基。更优选烷基为含有1-10个碳原子的中等大小的烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基等。最优选它为含有1-4个碳原子的低级烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基或叔丁基等。烷基可以是取代或未被取代的。当取代时，取代基优选为一个或多个、更优选1-3个、甚至更优选1个或2个取代基，其独立地选自下列基团：卤素；羟基；未被取代的低级烷氧基；任选被一个或多个基团、优选1个、2个或3个基团取代的芳基，所述的基团彼此独立为卤素、羟基、未被取代的低级烷基或未被取代的低级烷氧基；任选被一个或多个基团、优选1个、2个或3个基团取代的芳氧基，所述的基团彼此独立为卤素、羟基、未被取代的低级烷基或未被取代的低级烷氧基；环上含有1-3个氮原子的6-元杂芳基，环上的碳任选被一个或多个基团、优选1个、2个或3个基团取代，所述的基团彼此独立为卤素、羟基、未被取代的低级烷基或未被取代的低级烷氧基；含有1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的5-元杂芳基，基团上的碳和氮原子任选被一个或多个基团、优选1个、2个或3个基团取代，所述的基团彼此独立为卤素、羟基、未被取代的低级烷基或未被取代的低级烷氧基；含有1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的5-或6-元杂环，基团上的碳和氮原子(如果存在)任选被一个或多个基团、优选1个、2个或3个基团取代，所述的基团彼此独立为：卤素；羟基；未被取代的低级烷基或未被取代的低级烷氧基；巯基；(未被取代的低级烷基)硫代；任选被一个或多个基团、优选1个、2个或3个基团取代的芳硫基，所述的基团彼此独立为卤素、羟基、未被取代的低级烷基或烷氧基；氰基；酰基；硫代酰基；O-氨基甲酰基；N-氨基甲酰基；O-硫代氨基甲酰基；N-硫代氨基甲酰基；C-酰氨基；N-酰氨基；硝基；N-磺酰氨基(sulfonamido)；S-磺酰氨基；RS(O)-；RS(O)2-；-C(O)OR；RC(O)O-和-NR13R14，其中R13和R14独立地选自氢、未被取代的低级烷基、三卤代甲基、环烷基、杂环和芳基，其任选被一个或多个基团、优选1个、2个或3个基团取代，所述的基团彼此独立为卤素、羟基、未被取代的低级烷基或未被取代的低级烷氧基。
优选烷基被一个或两个取代基取代，所述的取代基独立地选自下列基团：羟基；含有1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的5-或6-元杂环，基团上的碳和氮(如果存在)原子任选被一个或多个基团、优选1个、2个或3个基团取代，所述的基团彼此独立为卤素、羟基、未被取代的低级烷基或未被取代的低级烷氧基；含有1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的5-元杂芳基，基团上的碳和氮原子任选被一个或多个基团、优选1个、2个或3个基团取代，所述的基团彼此独立为卤素、羟基、未被取代的低级烷基或未被取代的低级烷氧基；环上含有1-3个氮原子的6-元杂芳基，环上的碳任选被一个或多个基团、优选1个、2个或3个基团取代，所述的基团彼此独立为卤素、羟基、未被取代的低级烷基或未被取代的低级烷氧基或-NR13R14，其中R13和R14独立地选自氢和烷基。甚至更优选烷基被一个或两个取代基取代，所述的取代基彼此独立为羟基、二甲氨基、乙氨基、二乙氨基、二丙氨基、吡咯烷基、哌啶子基、吗啉基、哌嗪基、4-低级烷基哌嗪基、苯基、咪唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、噁唑基、三嗪基等。
″环烷基″指的是3-8元全碳单环、全碳5-元/6-元或6-元/6-元稠合双环或多环稠合环(″稠合″环系指的是系统上的每个环与该系统上的其它环共有相邻的碳原子对)基团，其中环中的一个或多个可以含有一个或多个双键，但没有一个环带有完全轭合的pi-电子系统。
环烷基的实例为环丙烷、环丁烷、环戊烷、环戊烯、环己烷、环己二烯、金刚烷、环庚烷、环庚三烯等，但不限于它们。环烷基可以是取代或未被取代的。当取代时，取代基优选一个或多个、更优选1个或2个取代基，其独立地选自：未被取代的低级烷基；三卤代烷基；卤素；羟基；未被取代的低级烷氧基；任选被一个或多个、优选1个或个基团取代的芳基，所述的基团彼此独立为卤素、羟基、未被取代的低级烷基或未被取代的低级烷氧基；任选被一个或多个、优选1个或个基团取代的芳氧基，所述的基团彼此独立为卤素、羟基、未被取代的低级烷基或未被取代的低级烷氧基；环上含有1-3个氮原子的6-元杂芳基，环上的碳任选被一个或多个、优选1个或2个基团取代，所述的基团彼此独立为卤素、羟基、未被取代的低级烷基或未被取代的低级烷氧基；含有1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的5-元杂芳基，基团上的碳和氮原子任选被一个或多个、优选1个或2个基团取代，所述的基团彼此独立为卤素、羟基、未被取代的低级烷基或未被取代的低级烷氧基；含有1-3个选自氮、氧和硫的杂原子的5-或6-元杂环，基团上的碳和氮(如果存在)原子任选被一个或多个、优选1个或2个基团取代，所述的基团彼此独立为卤素、羟基、未被取代的低级烷基或未被取代的低级烷氧基；巯基；(未被取代的低级烷基)硫代；任选被一个或多个、优选1个或2个基团取代的芳硫基，所述的基团彼此独立为卤素、羟基、未被取代的低级烷基或未被取代的低级烷氧基；氰基；酰基；硫代酰基；O-氨基甲酰基；N-氨基甲酰基；O-硫代氨基甲酰基；N-硫代氨基甲酰基；C-酰氨基；N-酰氨基；硝基；N-磺酰氨基；S-磺酰氨基；RS(O)-；RS(O)2-；-C(O)OR；RC(O)O-；和如上述所定义的-NR13R14。
″链烯基″指的是如本文定义的由至少两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的低级烷基。有代表性的实例包括、但不限于乙烯基，1-丙烯基，2-丙烯基，1-，2-，或3-丁烯基等。
″炔基″指的是如本文定义的由至少两个碳原子和至少一个碳-碳三键组成的低级烷基。有代表性的实例包括、但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-、2-或3-丁炔基等。
″芳基″指的是含有完全轭合的pi-电子系统的1-12个碳原子的全碳单环或稠合环多环(即环共有相邻的碳原子对)基团。芳基的实例为苯基、萘基和蒽基，但不限于它们。芳基可以是取代或未被取代的。当取代时，取代基优选为一个或多个、更优选1个、2个或3个、甚至更优选1个或2个，其独立地选自未被取代的低级烷基、三卤代烷基、卤素、羟基、未被取代的低级烷氧基、巯基、(未被取代的低级烷基)硫代、氰基、酰基、硫代酰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、硝基、N-磺酰氨基、S-磺酰氨基、RS(O)-、RS(O)2-、-C(O)OR、RC(O)O-和-NR13R14，其中R13和R14如上述所定义。优选芳基任选被一个或两个取代基取代，所述的取代基独立地选自卤素、未被取代的低级烷基、三卤代烷基、羟基、巯基、氰基、N-酰氨基、一或二烷氨基、羧基或N-磺酰氨基。
″杂芳基″指的是5-12个环原子的单环或稠合环(即环共有相邻的原子对)，它含有1个、2个或3个选自N、O或S的杂原子、剩余的环原子为C且另外合有完全轭合的pi-电子系统。未被取代的杂芳基的实例为吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、吡啶、嘧啶、喹啉、异喹啉、嘌呤和咔唑，但不限于它们。杂芳基可以是取代或未被取代的。当取代时，取代基优选为一个或多个、更优选1个、2个或3个、甚至更优选1个或2个，其独立地选自未被取代的低级烷基、三卤代烷基、卤素、羟基、未被取代的低级烷氧基、巯基、(未被取代的低级烷基)硫代、氰基、酰基、硫代酰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、硝基、N-磺酰氨基、S-磺酰氨基、RS(O)-、RS(O)2-、-C(O)OR、RC(O)O-和-NR13R14，其中R13和R14如上述所定义。优选杂芳基任选被1个或2个取代基取代基，所述的取代基独立地选自卤素、未被取代的低级烷基、三卤代烷基、羟基、巯基、氰基、N-酰氨基、一或二烷氨基、羧基或N-磺酰氨基。
″杂环″指的是含有5-9个环原子的单环或稠合环基团，其中一个或两个环原子为选自N、O或S(O)n的杂原子(其中n为0-2的整数)，剩余的环原子为C。这些环还可以带有一个或多个双键。不过，这些环不带有完全轭合的pi-电子系统。未被取代的杂环的实例为吡咯烷基、哌啶子基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等，但不限于它们。杂环可以是取代或未被取代的。当取代时取代基优选为一个或多个、更优选1个、2个或3个、甚至更优选1个或2个，其独立地选自未被取代的低级烷基、三卤代烷基、卤素、羟基、未被取代的低级烷氧基、巯基、(未被取代的低级烷基)硫代、氰基、酰基、硫代酰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、硝基、N-磺酰氨基、S-磺酰氨基、RS(O)-、RS(O)2-、-C(O)OR、RC(O)O-和-NR13R14，其中R13和R14如上述所定义。优选杂环基任选被一个或两个取代基取代，所述的取代基独立地选自卤素、未被取代的低级烷基、三卤代烷基、羟基、巯基、氰基、N-酰氨基、一或二烷氨基、羧基或N-磺酰氨基。
优选杂环基任选被一个或两个取代基取代，所述的取代基独立地选自卤素、未被取代的低级烷基、三卤代烷基、羟基、巯基、氰基、N-酰氨基、一或二烷氨基、羧基或N-磺酰氨基。
″羟基″指的是-OH基团。
″烷氧基″指的是-O-(未被取代的烷基)和-O-(未被取代的环烷基)。有代表性的实例包括、但不限于：例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。
″芳氧基″指的是如上述所定义的-O-芳基和-O-杂芳基。有代表性的实例包括、但不限苯氧基、吡啶氧基、呋喃氧基、噻吩氧基、嘧啶氧基、吡嗪氧基等及其衍生物。
″巯基″指的是-SH基团。
″烷硫基″指的是-S-(未被取代的烷基)和-S-(未被取代的环烷基)。有代表性的实例包括、但不限于：例如甲硫基、乙硫基、丙硫基、丁硫基、环丙硫基、环丁硫基、环戊硫基、环己硫基等。
″芳硫基″指的是如上述所定义的-S-芳基和-S-杂芳基。有代表性的实例包括、但不限于苯硫基、吡啶硫基、呋喃硫基、噻吩硫基、嘧啶硫基等及其衍生物。
″酰基″指的是-C(O)-R″基团，其中R″选自下列基团组成的组：氢；未被取代的低级烷基；三卤素甲基；未被取代的环烷基；任选被一个或多个、优选1个、2个或3个取代基取代的芳基，所述的取代基选自未被取代的低级烷基、三卤素甲基、未被取代的低级烷氧基、卤素和-NR13R14，其中R13和R14如上述所定义(通过环碳连接)，其任选被一个或多个、优选1个、2个或3个取代基取代，所述的取代基选自未被取代的低级烷基、三卤代烷基、未被取代的低级烷氧基、卤素和-NR13R14；和杂环(通过环碳连接)，其任选被一个或多个、优选1个、2个或3个取代基取代，所述的取代基选自未被取代的低级烷基、三卤代烷基、未被取代的低级烷氧基、卤素和NR13R14。有代表性的酰基包括、但不限于乙酰基、三氟乙酰基、苯甲酰基等。
″醛″指的是R″为氢的酰基。
″硫代酰基″指的是-C(S)-R″，其中R″如本文所定义。
″酯″指的是-C(O)O-R″，其中R″如本文所定义，但R″不能为氢。
″乙酰基″指的是-C(O)CH3。
″卤素″指的是氟、氯、溴或碘，优选氟或氯。
″三卤代甲基″指的是-CX3基团，其中X为如本文所定义的卤素。
″亚甲二氧基″指的是-OCH2O-，其中两个氧原子与相邻碳原子连接。
″亚乙二氧基″指的是-OCH2CH2O-，其中两个氧原子与相邻碳原子连接。
″S-磺酰氨基″指的是-S(O)2NR13R14， 其中R13和R14如本文所定义。
″N-磺酰氨基″指的是-NR13S(O)2R，其中R13和R如本文所定义。
″O-氨基甲酰基″指的是-OC(O)NR13R14，其中R13和R14如本文所定义。
″N-氨基甲酰基″指的是ROC(O)NR14-，其中R和R14如本文所定义。
″O-硫代氨基甲酰基″指的是-OC(S)NR13R14，其中R13和R14如本文所定义。
″N-硫代氨基甲酰基″指的是ROC(S)NR14-，其中R和R14如本文所定义。
″氨基″指的是-NR13R14基团，其中R13和R14均为氢。
″C-酰氨基″指的是-C(O)NR13R14，其中R13和R14如本文所定义。
″N-酰氨基″指的是RC(O)NR14-，其中R和R14如本文所定义。
″硝基″指的是-NO2基团。
″卤代烷基″指的是被一个或多个相同或不同的卤原子取代的如上述所定义的未被取代的烷基、优选未被取代的低级烷基，例如-CH2CI、-CF3、-CH2CF3、-CH2CCl3等。
″芳烷基″指的是被如上述所定义的芳基取代的如上述所定义的未被取代的烷基、优选未被取代的低级烷基，例如-CH2苯基、-(CH2)2苯基、-(CH2)3苯基、CH 3CH(CH3)CH2苯基等及其衍生物。
″杂芳烷基″指的是被杂芳基取代的如上述所定义的未被取代的烷基、优选未被取代的低级烷基，例如-CH2吡啶基、-(CH2)2嘧啶基、-(CH2)3咪唑基等及其衍生物。
″一烷氨基″指的是基团-NHR′，其中R′为如上述所定义的未被取代的烷基或未被取代的烷基，例如甲氨基、(1-甲基乙基)氨基、环己氨基等。
″二烷氨基″指的是基团-NR′R′，其中R′各自独立为如上述所定义的未被取代的烷基或未被取代的环烷基，例如二甲氨基、二乙氨基、(1-甲基乙基)-乙氨基、环己基甲氨基、环戊基甲氨基等。
″氰基烷基″指的是被1个或2个氰基取代的如上述所定义的未被取代的烷基、优选未被取代的低级烷基。
″任选(Optional)″或″任选(optionally)″指的是随后所述的结果或情况可以、但不一定发生且这种描述包括结果或情况发生的情况和不发生的情况。例如，″任选被烷基取代的杂环基″指的是烷基可以、但不一定存在且这种描述包括杂环基被烷基取代的情况和杂环基不被烷基取代的情况。
″药物组合物″指的是本文所述化合物中的一种或多种或其生理/药物上可接受的盐或前体药物与其它化学成分、诸如生理/药物上可接受的载体和赋形剂的混合物。药物组合物的目的在于有助于对生物体给予化合物。
通式(I)的化合物还可以作为前体药物使用。″前体药物″指的是在体内被转化成母体药物的活性剂。在某些情况中通常使用前体药物，因为它们被母体药物更便于给药。例如，通过口服给药，它们可以具有生物适合性，而母体药物则没有。在药物组合物中的前体药物还具有超过母体药物的改善的溶解度。前体药物的实例可以为作为酯(″前体药物″)给药的本发明化合物，一旦进入水溶性有利的细胞内，它有利于跨过细胞膜，其中水溶性对移动有害而随后被代谢水解成活性本体羧酸。
前体药物的另一个实例可以为短的多肽，例如、但不限于通过末端氨基与本发明化合物的羧基连接的2-10个氨基酸的多肽，其中该多肽在体内被水解或代谢以释放活性分子。通式(I)化合物的前体药物属于本发明的范围。
另外关注通式(I)的化合物可以被生物体、诸如人体内的酶代谢而产生可以调节蛋白激酶活性的代谢物。这类代谢物属于本发明的范围。
本文所用的″生理上/药物上可接受的载体″指的是不会对生物体产生明显刺激且不会消除给予化合物的生物活性和特性的载体或稀释剂。
″药物上可接受的赋形剂″指的是加入到药物组合物中以进一步有利于化合物给药的惰性物质。赋形剂的实例包括碳酸钙、磷酸钙、各种糖和不同类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇类，但不限于它们。
本文所用的术语″药物上可接受的盐″指的是保留母体化合物的生物有效性和特性的那些盐。这类盐包括：
(i)通过使母体化合物的游离碱与无机酸或与有机酸反应得到的酸加成的盐，所述的无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸和高氯酸等，所述的有机酸诸如乙酸、草酸、(D)或(L)苹果酸、马来酸、甲磺酸、乙磺酸、对-甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸等，优选盐酸或(L)-苹果酸，诸如5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢吲哚-3-亚基甲基)-2，4-甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-二乙氨基乙基)酰胺的L-苹果酸盐；或
(2)当母体化合物上存在的酸性质子被例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子这类金属离子取代时形成的盐；或与诸如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等这类有机碱形成的配位化合物。
″方法″指的是完成指定任务的方式、手段、技术和步骤，包括、但不限于化学、生物、生化和药物领域技术人员已知或易于由他们根据已知方式、手段、技术和步骤研发的那些方式、手段、技术和步骤。
″体内″指的是在活生物体、诸如、但不限于小鼠或家兔体内进行的步骤。
″治疗(Treat)″、″治疗(treating)″和″治疗(treatment)″指的是可以通过给予通式(I)化合物与另一种化疗剂的组合治疗的减轻或消除癌症的方法。术语″治疗″单纯指的是患有癌症的个体的生命预期得到增加或该疾病的一种或多种症状得到减轻。
″癌症″指的是所有形式的癌症，特别是结肠癌、小细胞肺癌和乳腺癌，包括其所有形式。
″患者″指的是由至少一种细胞组成的任何活体。例如，活生物体可以简单至单一真核细胞或复杂至哺乳动物，包括人。
″治疗有效量″指的是将所治疗疾病的一种或多种症状预防、缓解、改善或减轻至一定程度所给予的化合物(通式I和另一种化疗剂)用量。就治疗癌症而言，治疗有效量指的是具有如下作用的用量：
(1)减小肿瘤的大小；
(2)抑制肿瘤转移(即减缓至一定程度，优选使其停止)；
(3)将肿瘤生长抑制到一定程度即减缓至一定程度，优选使其停止)；
(4)减少母细胞的计数；和/或
(5)将与癌症相关的一种或多种症状减轻至一定程度(或优选将其消除)。
增强的治疗作用指的是超过各自单一药物作用的组合作用。
给药和药物组合物
要求保护的方法包括对人给予通式I化合物或其药物上可接受的盐与另一种化疗剂的组合。另一方面，可以以药物组合物的形式给予通式I化合物与另一种化疗剂的组合，其中将上述物质与适宜的载体或赋形剂混合。用于配制和给药的技术可以在最新版《Remington氏药物科学》(″Remington′s Pharmacologocal Sciences″)MackPublishing Co.，Easton，PA.中找到。
本文所用的″给予″或″给药″指的是对生物体递送本发明的通式(I)的化合物或其药物上可接受的盐与另一种化疗剂的组合或含有通式(I)化合物与另一种化疗剂的组合或其药物上可接受的盐的药物组合物以便治疗癌症。就另一种化疗剂而言，给药剂量和方式包括本领域技术人员可以理解和实施的标准方案。
给药途径可以包括、但不限于口服、直肠、透膜或肠内给药或肌内、皮下、骨髓内、鞘内、直接心室内、静脉内、玻璃体内、腹膜内、鼻内或眼内注射。优选的给药途径为口服和非肠道。
另一方面，可以通过局部而非全身方式给予所述化合物，例如通常以长效制剂或缓释制剂的形式通过将化合物直接注入实体瘤进行给药。
此外，可以以例如包被了肿瘤特异性抗体的脂质体形式的这类靶向释药系统给药。可以使脂质体靶向至肿瘤且选择性地被肿瘤吸收。
例如通过常规混合、溶解、制粒、制锭、研磨、乳化、包囊、截留或冻干方法这类本领域众所周知的方法可以制备本发明的药物组合物。
可以使用一种或多种生理上可接受的载体、按照常规方式配制用于本发明的药物组合物，所述的载体包括赋形剂和助剂，它们有利于将活性化合物加工成可以在药物上使用的制剂。合适的制剂取决于选择的给药途径。
为了进行注射，可以将本发明的化合物配制成水溶液，优选在生理上相容的缓冲液中，诸如Hanks′溶液、林格液或生理盐水缓冲液。为了进行透膜给药，将适于透过屏障的渗透剂用于制剂中。这类渗透剂是本领域中一般公知的。
为了口服给药，可以通过将活性化合物与本领域众所周知的药物上可接受的载体合并配制所述化合物。这类载体能够将本发明的化合物配制成片剂、丸剂、糖锭、锭剂、胶囊、液体、凝胶、糖浆剂、结晶浆液、混悬剂等以便由患者口服摄入。可以使用固体赋形剂、任选研磨所得混合物并在如果需要加入其它适宜助剂后将颗粒混合物加工成片芯或锭芯来制备口服应用的药物制剂。有用的赋形剂特别为：填充剂，诸如糖类，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨醇；纤维素制品，诸如玉米淀粉、小麦淀粉和马铃薯淀粉；和其它物质，诸如明胶、黄耆树胶、甲基纤维素、羟丙基甲基-纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯-吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以加入崩解剂，诸如交联聚乙烯吡咯烷酮或藻酸。还可以使用诸如藻酸钠这类盐。
给锭芯上涂布适宜的包衣层。为了这一目的，可以使用浓糖溶液，它可以任选含有阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和适宜的有机溶剂或溶剂混合物。可以向片剂或锭剂包衣层中加入染料或色素以便鉴别或表征活性化合物剂量的不同组合。
可以口服使用的药物组合物包括由明胶制成的推入嵌合胶囊以及由明胶和增塑剂、诸如甘油或山梨醇制成的软密封胶囊。推入嵌合胶囊可以含有活性组分与填充剂、诸如乳糖、粘合剂、诸如淀粉和/或润滑剂、诸如滑石或硬脂酸镁和任选的稳定剂的混合物。在软胶囊中，可以将活性化合物溶于或悬浮于合适的液体中，诸如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇类。还可以在这些制剂中加入稳定剂。
还可以使用的药物组合物包括硬胶囊。作为非限制性实例，口服药物制剂产品中的化合物1可以为50和200mg剂量浓度。可以通过填充入不同大小硬胶囊由相同颗粒制成两种剂量浓度，3号用50mg胶囊和0号用于200mg胶囊。联合疗法方案的确定也属于临床医师技术人员的范围且根据特定的疾病状态和患者情况以及患者接受的化疗方案来决定。
可以将胶囊包装入棕色玻璃瓶或塑料瓶以使活性化合物避光。必须将含有活性化合物胶囊剂的容器保存在受控室温下(15-30℃)。
为了通过吸入给药，便利的是以使用加压包或喷雾器和适宜抛射剂的气溶胶喷雾剂的形式递送用于本发明的化合物，所述的抛射剂例如，但不限于二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷或二氧化碳。就加压气溶胶而言，可以通过安装递送经计量的量的阀门来控制剂量单位。例如，可以配制用于吸入器或吹入器的明胶胶囊和药筒，它们含有所述化合物与适宜粉末基质、诸如乳糖或淀粉的粉末混合物。
例如，还可以配制通过一次性推注或连续输注进行非肠道给药的化合物。可以将注射用制剂制成单位剂型，例如带有添加的防腐剂的安瓿或多剂量容器。这些组合物可以采用诸如在油或水载体中的混悬液、溶液或乳剂剂型且可以含有诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂这类配制物质。
非肠道给药用药物组合物包括水溶性形式的水溶液，诸如、但不限于活性化合物的盐。另外，可以用亲油性载体制备活性化合物的混悬液。合适的亲油性载体包括：脂肪油，诸如芝麻油；合成脂肪酸酯类，诸如油酸乙酯和甘油三酯类；或诸如脂质体这类物质。含水注射混悬液可以含有增加该混悬液粘度的物质，诸如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。该混悬液还任选含有合适的稳定剂和/或增加化合物溶解度的试剂以便制备高浓溶液。
另一方面，活性组分可以为在使用前用适宜载体、例如无菌无致热原的水配制的粉末形式。
还可以使用例如常用栓剂基质、诸如可可脂或其它甘油酯类将化合物制成直肠组合物，诸如栓剂或滞留型灌肠剂。
除上述制剂外，还可以将化合物制成储库制剂。可以通过植入(例如经皮下或肌内)或通过肌内注射给予这类长效制剂。可以使用适宜的聚合物或疏水材料(例如在溶剂中用药物上可接受的油)、使用离子交换树脂或如难溶性衍生物、诸如、但不限于难溶性盐配制本发明的化合物以便这一给药目的。
用于本发明疏水化合物的药物载体的非限制性实例为包括苄醇、非极性表面活性剂、与水溶混的有机聚合物和水相的共溶剂系统，诸如VPD共溶剂系统。VPD是由3％w/v苄醇、8％w/v非极性表面活性剂聚山梨醇酯80和65％w/v聚乙二醇300、用无水乙醇加至一定体积制成的溶液。VPD共溶剂系统(VPD:D5W)由用5％葡萄糖水溶液按1∶1稀释的VPD组成。该共溶剂系统充分溶解疏水化合物且在全身给药时其自身产生的毒性较低。一般可以在不破坏其溶解度和毒性特征的情况下显著改变这类共溶剂系统的比例。此外，可以改变各共溶剂成分：例如，可以使用其它低毒性非极性表面活性剂而不是聚山梨醇酯80，可以改变聚乙二醇的部分的大小，其它生物相容性聚合物可以取代聚乙二醇，例如聚乙烯吡咯烷酮，且其它糖类或多糖类可以取代葡萄糖。
另一方面，可以使用其它用于疏水药物化合物的递送系统。脂质体和乳剂是疏水药物递送媒介物或载体的众所周知的实例。此外，还可以使用某些有机溶剂，诸如二甲亚砜，不过，通常要以较高的毒性为代价。
另外，可以使用缓释系统递送化合物，诸如含有治疗剂的固体疏水聚合物的半透性基质。已经确立了不同的缓释材料且它们是本领域技术人员众所周知的。随化学性质的不同，缓释胶囊可以将所述化合物释放达几周至超过100天。随治疗试剂的化学性质和生物稳定性的不同，可以使用其它使蛋白质稳定的策略。
本文的药物组合物还可以包括合适的固体或凝胶态载体或赋形剂。这类载体或赋形剂的实例包括、但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖类、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物，诸如聚乙二醇类。
可以将通式I的许多化合物作为生理上可接受的盐提供，其中该化合物可以形成带负电荷或正电荷的种类。化合物形成带正电荷的部分的盐的实例包括、但不限于：季铵；诸如盐酸盐、硫酸盐、碳酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐这类盐；其中季铵基团的氮原子为选择的与适宜酸反应的本发明化合物的氮。本发明化合物形成带负电荷的种类的盐包括、但不限于通过使化合物上的羧酸基团与适宜碱(例如氢氧化钠(NaOH)、氢氧化钾(KOH)、氢氧化钙(Ca(OH)2)等)反应形成的钠盐、钾盐、钙盐和镁盐。
适用于本发明的药物组合物包括含有足以实现所需目的、例如治疗癌症患者的用量的活性组分的组合物。
更具体的说，″治疗有效量″指的是有效预防、缓解或改善所治疗对象的癌症症状或延长其存活的化合物用量。
确定治疗有效量也属于本领域技术人员的能力范围，尤其是根据本文提供的详细公开内容。
就用于本发明方法的任意化合物而言，开始可以根据细胞培养物试验估计治疗有效量或剂量。然后可以配制用于动物模型的剂量以达到包括作为细胞培养物中测定的IC50的循环浓度范围(即对靶受体酪氨酸激酶磷酸化达到半数最大抑制的测试化合物浓度)。随后可以将这类信息用于更精确地测定人体内的有用剂量。
可以通过在细胞培养物或实验动物中的标准药物步骤、例如通过测定IC50和LD50来确定本文所述化合物的毒性和治疗功效，其中LD50是对主题化合物而言，使致死率达到半数最大抑制的测试化合物浓度。从这些细胞培养物试验和动物研究中获得的数据可以用于配制用于人体的剂量范围。该剂量可以随所用剂型和所用给药途径的不同而改变各临床医师可以根据患者情况选择确切的制剂、给药途径和剂量。(例如，参见Fingl等，1975，《治疗剂的药理学基础》(″ThePharmacological Basis of Therapeutics″)Ch.1p.1)。
可以分别调整剂量和间隔以提供足以维持调节激酶作用的活性剂种类的血浆水平。这些血浆水平称作最低有效浓度(MECs)。针对每种化合物，MEC可以改变，但可以根据体外数据估计，例如，可以使用本文所述的试验确定实现50-90％激酶抑制所必需的浓度。达到MEC所必需的剂量取决于各个特征和给药途径。HPLC试验或生物试验可以用于测定血浆浓度。
还可以使用MEC值测定剂量间隔。应使用将血浆水平维持在MEC以上10-90％的时间、优选30-90％和最优选50-90％的时间的方案给予化合物。
目前，通式(I)化合物的治疗有效量可以在约25mg/m2-1500mg/m2/天的范围；优选约3mg/m2/天。甚至更优选50mg/qm qd-400mg/qd。可以基于制造商的建议对患者给予另一种化疗剂的治疗有效量。然而，联用的两种活性剂要求所给予的另一种化疗剂的剂量较低。
就局部给药或选择吸收而言，药物的有效局部浓度可能与血浆浓度无关且可以将本领域中公知的其它步骤用于测定正确的剂量和间隔。
当然，给予组合物的量取决于所治疗的受试者、疾病的严重程度、开据处方的临床医师的判断等。
关注本发明的方法可以与其它癌症疗法、即骨髓移植和激素疗法联用。
最后，关注本发明的联合用药物可以进一步与例如抗血管发生剂联用，诸如、但不限于环加氧酶抑制，诸如塞来考昔。
一般合成步骤
可以将下列一般方法用于制备本发明的化合物。
将适当取代的2-羟吲哚(1当量)、适当取代的醛(1.2当量)和碱(0.1当量)在溶剂(1-2mL/mmol 2-羟吲哚)中混合且然后将该混合物加热约2-约12小时。冷却后，过滤形成的沉淀、用冷乙醇或乙醚洗涤并真空干燥至达到固体产物。如果不形成沉淀，那么浓缩该反应混合物并将残余物与二氯甲烷/乙醚一起研制，通过过滤收集产生的固体且然后干燥。可以任选通过色谱法纯化产物。
所述的碱可以为有机碱或无机碱。如果使用有机碱，优选其为氮碱。有机氮碱的实例包括、但不限于二异丙胺、三甲胺、三乙胺、苯胺、吡啶、1，8-二氮杂双环[5.4.1]十一-7-烯、吡咯烷和哌啶。
无机碱的实例为、但不限于氨、碱金属或碱土金属氢氧化物、磷酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐和酰胺类。碱金属包括锂、钠和钾，而碱土金属包括钙、镁和钡。
在目前优选的本发明实施方案中，当溶剂为质子溶剂时，诸如水或醇，所述的碱为碱金属或碱土金属无机碱，优选碱金属或碱土金属氢氧化物。
基于有机合成的公知一般原理和本文公开的内容，所述的碱对关注的反应而言是最合适的，这对本领域技术人员而言是显而易见的。
进行反应的溶剂可以为质子或质子惰性溶剂，优选为质子溶剂。″质子溶剂″是带有与氧或氮原子共价结合的氢以使氢原子具有适宜的酸性且由此能够通过氢键合与溶质″共有″的溶剂。质子溶剂的实例包括、但不限于水和醇类。
″质子惰性溶剂″可以为极性或非极性的，但在各自情况中，它不含酸性氢且由此不能与溶质氢键合。非极性质子惰性溶剂为、但不限于戊烷、己烷、苯、甲苯、二氯甲烷和四氯化碳。极性质子惰性溶剂的实例为氯仿、四氢呋喃、二甲亚砜和二甲基甲酰胺。
在目前优选的本发明实施方案中，溶剂为质子溶剂，优选水或醇，诸如乙醇。
反应在高于室温的温度下进行。该温度一般在约30℃-约150℃，优选约80℃-约100℃，最优选约75℃-约85℃，约为乙醇的沸点。所谓″约″指的是温度范围优选在指定温度的10摄氏度内，更优选在指定温度的5摄氏度内，最优选在指定温度的2摄氏度内。因此，例如，所谓″约75℃″指的是75℃±10℃、优选75℃±5℃且最优选75℃±2℃。
易于使用化学领域众所周知的技术合成2-羟吲哚类和醛类。本领域技术人员可以理解可以利用形成本发明化合物的其它合成途经且下面是通过实施例提供的途经，但并不限于它们。
可以按照下列方法且如下列文献中所述制备本发明的化合物：例如美国专利US 6,573,293；WO 01/60814；WO 00/08202；美国专利公开号2003/0069298；WO 03/016305；2003年2月14日提交的美国专利申请顺序号10/367,008；美国专利US 6,642,232；和2002年2月15日提交的美国专利申请顺序号10/076,140，将所有这些文献的全部内容引入作为参考。
优选制剂描述在2003年9月10日提交的美国专利申请号10/658,801中，将该文献的公开内容引入本文作为参考。
合成方法
方法A：吡咯类的甲酰化
在-10℃下将POCl3(1.1当量)滴加到二甲基甲酰胺(3当量)中，随后添加溶于二甲基甲酰胺的适宜吡咯。在搅拌2小时后，用H2O稀释该反应混合物并用10N KOH碱化至pH 11。通过过滤收集形成的沉淀、用H2O洗涤并在真空烘箱内干燥至得到所需醛。
方法B：吡咯甲酸酯类的皂化
将吡咯甲酸酯与KOH(2-4当量)在EtOH中的混合物回流至通过薄层色谱法(TLC)显示反应完全。用1N HCl将冷却的反应混合物酸化至pH3。通过过滤收集形成的沉淀、用H2O洗涤并在真空烘箱内干燥至得到所需吡咯甲酸。
方法C：酰胺化
向搅拌的吡咯甲酸溶于二甲基甲酰胺(0.3M)所得到的溶液中加入1-乙基-3-(3-二甲氨基-丙基)碳化二亚胺(1.2当量)、1-羟基苯并三唑(1.2当量)和三乙胺(2当量)。加入适当的胺(1当量)并将该反应搅拌至通过TLC证实完全。然后向该反应混合物中加入乙酸乙酯并用饱和NaHCO3和盐水(含有其它盐)洗涤该溶液、用无水MgSO4干燥并浓缩至得到所需酰胺。
方法D：含有羧酸取代基的醛类和羟吲哚类的缩合
在90-100℃下将羟吲哚(1当量)、1当量醛和1-3当量哌啶(或吡咯烷)在乙醇(0.4M)中的混合物搅拌至通过TLC证实反应完全。然后浓缩该混合物并用2N HCl酸化残余物。用H2O和EtOH洗涤形成的沉淀且然后在真空烘箱内干燥至得到产物。
方法E：不含羧酸取代基的醛类和羟吲哚类的缩合
在90-100℃下将羟吲哚(1当量)、1当量醛和1-3当量哌啶(或吡咯烷)在乙醇(0.4M)中的混合物搅拌至通过TLC证实反应完全。将该混合物冷却至室温并通过真空过滤收集形成的固体、用乙醇洗涤并干燥至得到产物。如果在冷却反应混合物时不形成沉淀，那么浓缩该混合物并通过柱色谱法纯化。
下面的实施例用于解释本发明。不过，应理解本发明并不限于这些实施例中所述的具体条件或详细内容。在本说明书全文中，特别将任何和所有对公众而言是可得到的对比文件的参考文献引入本专利申请作为参考。
合成实施例
实施例1
(3Z)-3-{[3，5-二甲基-4-(吗啉-4-基)哌啶-1-基羰基]-1H-吡咯-2-基亚甲基(ylmethylidene)}-5-氟-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮(化合物9)的合成
步骤1：
在60分钟内向在50℃下加热的4-氨基-1-苄基哌啶(Aldrich，1.53mL，7.5mmol)、K2CO3(2.28g，16.5mmol)和DMF(15mL)的搅拌混合物中加入双(2-溴乙基)醚(Aldrich，tech.90％，0.962mL，7.65mmol)。在80℃下搅拌6小时后，TLC(90∶10∶1氯仿/MeOH/浓NH4OH水溶液)显示形成了新的斑点。持续加热，此时通过在2小时内吹入氮气流蒸发溶剂。该粗物质相对较纯，使其上相对短的硅胶柱(1％-6％梯度的9∶1的在氯仿中的MeOH/NH4OH水溶液)。蒸发纯级分得到～1.7g二胺4-(吗啉-4-基)-1-苄基哌啶，为蜡样固体。
1HNMR(400MHz，d6-DMSO)δ7.31(m，4H)，7.26(m，1H)，3.72(t，J＝4.7Hz，4H)，3.49(s，2H)，2.94(br d，J＝5.9Hz，2H)，2.54(t，J＝4.7Hz，4H)，2.19(tt，J＝11.5，3.9Hz，1H)，1.96(td，J＝11.7，2.2Hz，2H)，1.78(br d，J＝12.5Hz，2H)，1.55(m，2H).
步骤2：
通过使用氮气囊向容器内充气(flushing)(～20s)并通过油起泡器吸出将在氮气环境中的Pd(OH)2(20％/碳(＜50％湿)，390mg，25wt％)、甲醇(50mL)和≤1.7M HCl(3eq，～10.6mL-包括稍后在观察到ppt时加入的水)的搅拌混合物交换至1atm.氢气。20分钟后，将在氢气环境中的反应混合物加热至50℃并在30分钟内滴加在甲醇(8mL)中的4-(吗啉-4-基)-1-苄基哌啶(1.56g，6.0mmol)。10小时后，tlc显示所有原料胺消耗至产生更具极性的斑点(水合茚三酮活性)。然后通过C盐过滤该反应混合物并蒸发至得到4-(吗啉-4-基)哌啶二盐酸盐，为灰白色固体。使用过量碱性树脂(＞16g，Bio-RadLaboratories，AG1-X8，20-50目，氢氧化物形式，甲醇洗涤两次)和胺盐酸盐的甲醇混合物使该物质基于游离(free-basing)。与树脂涡动30分钟后，倾析甲醇溶液并蒸发至得到932mg的4-(吗啉-4-基)哌啶游离碱，为蜡样结晶固体。
1HNMR(400MHz，d6-DMSO)δ3.53(br s，4H)，3.30(v br s，1H(+H2O))，2.92(br d，J＝11.7Hz，1H)，2.41(s，4H)，2.35(～obscd t，J＝11.7Hz，2H)，2.12(br t，1H)，1.65(brd，J＝11.7Hz，2H)，1.18(br q，J＝10.9Hz，2H)；LCMS-APCI m/z 171[M+1]+.
步骤3：
将如PCT申请01/60814中所述制备的(3Z)-3-(3，5-二甲基-4-羧基-1H-吡咯-2-基亚甲基)-5-氟-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮(120mg，0.40mmol)和BOP(221mg，0.50mmol)悬浮于DMF(5mL)中，同时在室温下充分搅拌并加入三乙胺(134μL，0.96mmol)。10-15分钟后，向该均匀反应混合物中一次加入全部4-(吗啉-4-基)哌啶(85mg，0.50mmol)。将该反应混合物搅拌48小时(可以在更早时间进行)，然后将其转入含有氯仿-异丙醇(5/1)和5％LiCl水溶液的漏斗中。分离浑浊的橙色有机相、再用5％LiCl水溶液(2X)、1M NaOH水溶液(3X)、饱和NaCl水溶液(1X)洗涤且然后干燥(Na2SO4)并蒸发至得到粗产物(96.3％纯；通过1HNMR证实存在痕量HMPA)。然后通过使该粗产物通过极短(3cm)的硅胶柱进一步纯化它(5-15％梯度的在DCM中的MeOH)，其中除去了痕量较快移动的3E-异构体。蒸发纯级分并使其从用Et2O(～3-倍)稀释并在0℃下冷却的饱和EtOAc溶液中重结晶过夜。倾析母液，在完全真空下处理后得到所需化合物，为橙色结晶(153mg85％)。
1HNMR(400MHz，d6-DMSO)δ13.60(s，1H)，10.87(s，1H)，7.72(dd，J＝9.4，2.7Hz，1H)，7.68(s，1H)，6.91(td，J＝9.3，2.6Hz，1H)，6.82(dd，J＝8.6，4.7Hz，1H)，3.54(app br t，J＝4.3Hz，4H)，3.31(2x s，3H+3H)，2.43(brs，4H)，2.36(m，1H)，2.25(br m，6H)，1.79(br s，2H)，1.22(brs，2H)；LCMSm/z 453[M+1]+.
如实施例1中所述进行，但用(3Z)-3-(3，5-二甲基-4-羧基-1H-吡咯-2-基亚甲基)-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮取代(3Z)-3-(3，5-二甲基-4-羧基-1H-吡咯-2-基亚甲基)-5-氟-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮而得到(3Z)-3-{[3，5-二甲基-4-(吗啉-4-基)哌啶-1-基羰基]-1H-吡咯-2-基亚甲基}-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮。
1HNMR(400MHz，d6-DMSO)δ13.55(s，1H)，10.87(s，1H)，7.74(d，J＝7.6Hz，1H)，7.59(s，1H)，7.11(t，J＝7.6Hz，1H)，6.97(t，J＝7.6Hz，1H)，6.86(d，J＝7.4Hz，1H)，3.54(app br t，J＝4.3Hz，4H)，3.31(2x s，3H+3H)，2.43(br s，4H)，2.35(m，1H)，2.28(br m，6H)，1.79(br s，2H)，1.22(brs，2H)；LCMS m/z 435[M+1]+.
如实施例1中所述进行，但用(3Z)-3-(3，5-二甲基-4-羧基-1H-吡咯-2-基亚甲基)-5-氯-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮取代(3Z)-3-(3，5-二甲基-4-羧基-1H-吡咯-2-基亚甲基)-5-氟-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮而得到(3Z)-3-{[3，5-二甲基-4-(吗啉-4-基)哌啶-1-基羰基]-1H-吡咯-2-基亚甲基}-5-氯-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮。
1HNMR(400MHz，d6-DMSO)δ13.56(s，1H)，10.97(s，1H)，7.95(d，J＝2.0Hz，1H)，7.74(s，1H)，7.11(dd，J＝8.2，2.0Hz，1H)，6.85(d，J＝8.2Hz，1H)，3.54(app br t，J＝～4Hz，4H)，3.31(2x s，3H+3H)，2.43(br s，4H)，2.37(m，1H)，2.25(brm，6H)，1.79(br s，2H)，1.23(br s，2H)；LCMS m/z 470[M+1]+.
如实施例1中所述进行，但用商购4-(1-吡咯烷基)-哌啶取代4-(吗啉-4-基)-哌啶而得到(3Z)-3-{[3，5-二甲基-4-[4-(吡咯烷-1-基)哌啶-1-基羰基]-1H-吡咯-2-基)亚甲基]-5-氟-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮。
1HNMR(400MHz，d6-DMSO)δE/Z异构体混合物；LCMS m/z 437[M+1]+。
可以按照美国专利2003/0130280中的步骤合成上述上述实施例，将该文献的全部内容引入作为参考。
实施例2
(3Z)-3-{[3，5-二甲基-4-(吗啉-4-基)氮杂环丁烷-1-基羰基]-1H-吡咯-2-基亚甲基}-5-氟-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮的合成
步骤1：
在0℃下将按照《四面体通讯》(Tetrahedron Letters)40(1999)3761-64中所述的已知步骤由2，3-二溴丙胺氢溴酸盐(58.8mmol)制备的1-氮杂双环[1.1.0]丁烷溶液缓慢加入到吗啉(15.7mL；180mmol)和硫酸(3.3g的96％溶液)在无水非变性乙醇(250mL)中的溶液中。将该反应混合物在冰浴上搅拌30分钟，然后在室温下搅拌8小时。加入氢氧化钙(5.5g)和100mL水并将所得淤浆搅拌1小时，然后通过C盐垫过滤。浓缩滤液并在减压下(20mmHg)蒸馏以除去水和过量的吗啉。使用Kugelrohr蒸馏器重新蒸馏蒸馏残余物而得到纯的4-(氮杂环丁烷-3-基)吗啉，产率为33％(2.759g)，为无色油状液体。
13C-NMR(CDCl3，100MHz)：66.71(2C)，59.37(1C)，51.46(2C)，49.95(2C)1H(CDCl3，400MHz)：3.727(t，J＝4.4Hz，4H)，3.619(t，J＝8Hz，2H)，3.566(t，J＝8Hz，2H)，3.227(m，J＝7Hz，1H)，2.895(br s，1H)，2.329(br s，4H)
步骤2：
(3Z)-3-({3，5-二甲基-4-羧基}1-H-吡咯-2-基)亚甲基)-5-氟-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮(0.5mmol，210mg)的1-(8-氮杂苯并三唑基)-酯[通过在有Hunig碱(3.0mmol，0.525mL)存在下的DMF(5mL)中用HATU试剂(570mg，1.5mmol)活化(3Z)-3-(3，3-二甲基-4-羧基-1-H-吡咯-2-基亚甲基)-5-氟-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮(480mg；1.6mmol)制备并通过用氯仿(5mL)沉淀且在高度真空中干燥分离纯化形式，产率92％(579mg)]悬浮于无水DMA(1.0mL)中。一次性加入4-(氮杂环丁烷-3-基)-吗啉(142.5mg，1mmol)在无水DMA(1.0mL)中的溶液并将所得溶液在室温下搅拌20分钟。在室温下使用油泵蒸发该反应混合物，用6mL甲醇与二乙胺的混合物(20∶1；v/v)稀释浓稠残余物、以机械方式注入并放入冷藏箱(+3℃)内8小时。过滤沉淀(用冰冷甲醇简单洗涤)并在高度真空中干燥至得到所需产物。产率71.5％(152mg橙色固体)。
LC/MS：+APCI：M+1＝425；-APCI：M-1＝423.
19F-NMR(d-DMSO，376.5MHz)：-122.94(m，1F).
1H(d-DMSO，400MHz)：13.651(s，1H)，10.907(s，1H)，7.754(dd，J＝9.4Hz，J＝2.4Hz，1H)，7.700(s，1H)，6.935(dt，J＝8.2Hz，J＝2.4Hz，1H)，6.841(dd，J＝8.6Hz，J＝3.9Hz；1H)，3.963(br s，2H)，3.793(br s，2H)，3.581(brt，J＝4.3Hz，4H)，3.133(m，1H)，2.367(s，3H)，2.340(s，3H)，2.295(br s，4H).
如实施例2中所述进行，但用(3Z)-3-(3，5-二甲基-4-羧基-1H-吡咯-2-基亚甲基)-5-氯-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮取代(3Z)-3-(3，5-二甲基-4-羧基-1H-吡咯-2-基亚甲基)-5-氟-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮而得到(3Z)-3-[3，5-二甲基-4-(吗啉-4-基)氮杂环丁烷-1-基羰基]-1H-吡咯-2-基亚甲基}-5-氯-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮，为橙色固体。
LC/MS：+APCI：M+1＝441；-APCI：M-1＝440，441.
1H(d-DMSO，400MHz)：13.607(s，1H)，11.006(s，1H)，7.976(d，J＝2.0Hz，1H)，7.756(s，1H)，7.136(dd，J＝8.2Hz，J＝2.0Hz，1H)，6.869(d，J＝8.2Hz，1H)，3.964(br s，2H)，3.793(br s，2H)，3.582(br t，J＝4.3Hz，4H)，3.134(m，1H)，2.369(s，3H)，2.347(s，3H)，2.296(br s，4H).
如实施例2中所述进行，但用4-(氮杂环丁烷-3-基)-顺式-3，5-二甲基吗啉(按照与制备4-(氮杂环丁烷-3-基)-吗啉所述类似的方式制备，但使用顺式-3，5-二甲基吗啉(20.7g；180mmol)替代吗啉)取代4-(氮杂环丁烷-3-基)吗啉而得到(3Z)-3-{[3，5-二甲基-4-(2，5-二甲基吗啉-4-基)氮杂环丁烷-1-基羰基]-1H-吡咯-2-基亚甲基}-5-氟-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮，为橙色固体。
LC/MS：+APCI：M+1＝453；-APCI：M-1＝451.
19F-NMR(d-DMSO，376.5MHz)：-122.94(m，1F).
1H(d-DMSO，400MHz)：13.651(s，1H)，10.907(s；1H)，7.758(dd，J＝9.4Hz，J＝2.3Hz；1H)，7.700(s，1H)，6.935(dt，J＝8.6Hz，J＝2.7Hz，1H)，6.842(dd，J＝8.2Hz，J＝4.3Hz，1H)，3.961(br s，2H)，3.790(br s，2H)，3.546(br m，2H)，3.092(m，1H)，2.690(br s；2H)，2.364(s，3H)，2.338(s，3H)，1.492(br m，2H)，1.038(br s，6H).
如实施例2中所述进行，但用(3Z)-3-(3，5-二甲基-4-羧基-1H-吡咯-2-基亚甲基)-5-氯-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮取代(3Z)-3-(3，5-二甲基-4-羧基-1H-吡咯-2-基亚甲基)-5-氟-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮并用4-(氮杂环丁烷-3-基)-顺式-3，5-二甲基吗啉取代4-(氮杂环丁烷-3-基)吗啉而得到(3Z)-3-{[3，5-二甲基-4-(3，5-二甲基吗啉-4-基)氮杂环丁烷-1-基羰基]-1H-吡咯-2-基亚甲基}-5-氯-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮，为橙色固体。
LC/MS：+APCI：M+1＝469，470；-APCI：M-1＝468，469.
1H(d-DMSO，400MHz)：13.606(s，1H)，11.008(s，1H)，7.979(d，J＝2.0Hz，1H)，7.758(s，1H)，7.138(dd，J＝8.2Hz，J＝2.0Hz，1H)，6.870(d，J＝8.2Hz，1H)，3.964(br s，2H)，3.790(br s，2H)，3.547(br m，2H)，3.095(m，1H)，2.691(br s，2H)，2.366(s，3H)，2.345(s，3H)，1.494(br m，2H)，1.039(br s，6H).
如实施例1中所述进行，但用如下所述制备的2-(R)-吡咯烷-1-基甲基吡咯烷取代4-(吗啉-4-基)-哌啶而得到(3Z)-3-{[3，5-二甲基-2R-(吡咯烷-1-基甲基)吡咯烷-1-基羰基]-1H-吡咯-2-基亚甲基}-5-氟-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮。
2(R)-吡咯烷-1-基甲基吡咯烷的合成
步骤1：
向(+)-苄酯基(carbobenzyloxy)-D-脯氨酸(1.5g，6.0mmol)、EDC(2.3g，12.0mmol)和HOBt(800mg，12.9mmol)在DMF(20mL)中的溶液中加入三乙胺(1.5mL)和吡咯烷(1.0mL，12.0mmol)。将该体系在室温下搅拌18小时。加入饱和NaHCO3，用CH2Cl2提取该体系(3次)。分离有机层并用Na2SO4干燥。除去溶剂并通过硅胶色谱法(EtOAc)纯化残余物而得到1-(R)-[N-(苄氧羰基)-吡咯基]吡咯烷，为白色固体(94％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3，所有的旋转异构体)δ1.57-1.66(m，1H)，1.71-2.02(m，5H)，2.04-2.19(m，2H)，3.26-3.43(m，3H)，3.44-3.78(m，3H)，4.41(dd，J＝4.5，7.6Hz，0.5H)，4.52(dd，J＝3.7，7.6Hz，0.5H)，4.99(d，J＝12.1Hz，0.5H)，5.05(d，J＝12.5Hz，0.5H)，5.13(d，J＝12.1Hz，0.5H)，5.20(d，J＝12.5Hz，0.5H)，7.27-7.38(m，5H).
步骤2：
在氢气环境中将1-(R)-[N-(苄氧羰基)吡咯基]吡咯烷(2.7g，8.9mmol)和5％Pd-C催化剂(270mg)在甲醇(15mL)中的混合物搅拌20小时。将该反应混合物通过C盐过滤并除去溶剂而得到2(R)-吡咯基吡咯烷，为粘性油状物(80％)，不经进一步纯化而将其用于下一步。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ1.52-1.78(m，5H)，1.82-1.89(m，2H)，1.97-2.04(m，1H)，2.63-2.71(m，1H)，2.97-3.02(m，1H)，3.22-3.35(m，3H)，3.48-3.54(m，1H)，3.72(dd，J＝6.1，8.0Hz，1H).
步骤3：
将2-(R)-吡咯基吡咯烷(1.2g，7.1mmol)溶于THF(10mL)。将该反应混合物冷却至0℃并在0℃下滴加1M在THF(10mL，10mmol)中的BH3。将该反应混合物回流16小时，加入3M HCl(4.7mL)。加入2M NaOH溶液至达到pH 10。用5％在CH2Cl2中的MeOH提取产物(三次)。用Na2SO4干燥有机层并除去溶剂而得到标题化合物，为淡黄色液体(73％)，不经进一步纯化而将其用于下一步。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ1.22-1.30(m，1H)，1.55-1.69(m，6H)，1.71-1.79(m，1H)，2.26-2.30(m，1H)，2.33-2.38(m，1H)，2.40-2.45(m，4H)，2.65-2.71(m，1H)，2.78-2.84(m，1H)，3.02-3.09(m，1H).
如实施例1中所述进行，但用2-(S)-吡咯烷-1-基甲基吡咯烷(如上所述制备，但用苄酯基-1-脯氨酸取代(+)-苄酯基-D-脯氨酸)取代4-(吗啉-4-基)-哌啶而得到(3Z)-3-{[3，5-二甲基-2S-(吡咯烷-1-基甲基)吡咯烷-1-基羰基]-1H-吡咯-2-基亚甲基}-5-氟-1，3-二氢-2H-吲哚-2-酮。
实施例3：
5-[5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基-甲基(ylidene-methyl)]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸的合成
步骤1：
通过搅拌在冰浴上冷却二甲基甲酰胺(25mL，3eq.)。向其中加入POCl3(1.1eq.，10.8mL)。30分钟后，向该反应体系中加入3，5-二甲基-4-乙酯吡咯(17.7g，105.8mmo l)在DMF(2M，40mL)中的溶液并持续搅拌。2小时后，用水(250mL)稀释该反应体系并用1N NaOH水溶液碱化至pH＝11。通过过滤取出白色固体、用水冲洗且然后用己烷冲洗并干燥至得到5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸乙酯(19.75g，95％)，为黄褐色固体。
1H NMR(360MHz，DMSO-d6)δ12.11(br s，1H，NH)，9.59(s，1H，CHO)，4.17(q，J＝6.7Hz，2H，OCH2CH3)，2.44(s，3H，CH3)，2.40(s，3H，CH3)，1.26(d，J＝6.7Hz，3H，OCH2CH3).
步骤2：
将5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸乙酯(2g，10mmol)加入到氢氧化钾(3g，53mmol)溶于甲醇(3mL)和水(10mL)所得到的溶液中。将该混合物回流3小时、冷却至室温并用6N盐酸酸化至pH 3。通过过滤收集固体、用水洗涤并在真空烘箱内干燥过夜而得到5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(1.6g，93％)。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.09(s，br，2H，NH&COOH)，9.59(s，1H，CHO)，2.44(s，3H，CH3)，2.40(s，3H，CH3).
步骤3：
将5-氟靛红(8.2g，49.7mmol)溶于50mL肼水合物并回流1小时。然后将该反应混合物倾入冰水。然后过滤沉淀、用水洗涤并在真空烘箱内干燥至得到5-氟-2-羟吲哚(7.5g)。
步骤4：
将5-氟羟吲哚(100mg，0.66mmol)、5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(133mg，0.79mmol)和10滴哌啶在乙醇(3mL)中的反应混合物在60℃下搅拌过夜并过滤。用1M盐酸水溶液、水洗涤固体并干燥至得到5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(201mg，定量)，为黄色固体。MS m/z(相对强度，％)299([M-1]+，100)。
实施例4：
5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基-甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(3-二乙氨基-2-羟基-丙基)-酰胺的合成
步骤1：
在30℃下向2-氯甲基环氧乙烷(95g，1.03mole)中加入水(3.08g，0.17mole)和二乙胺(106.2mL，1.03mole)的混合物。然后将该反应混合物在28-35℃下搅拌6小时并冷却至20-25℃而得到1-氯-3-二乙氨基-丙-2-醇。
步骤2：
将氢氧化钠(47.9g，1.2mole)在78mL水中的溶液加入到1-氯-3-二乙氨基-丙-2-醇中。将所得体系在20-25℃下搅拌1小时、用178mL水稀释并用乙醚提取两次。用固体氢氧化钾干燥合并的乙醚溶液并蒸发至得到135g粗产物，将其通过分馏纯化而得到纯的缩水甘油基二乙胺(98g，76％)，为油状物。
步骤3：
在10分钟内向冰冷的25％(w/w)氢氧化铵(25mL，159mmole)中滴加缩水甘油基二乙胺(3.2g，24.8mmol)。将该反应混合物在0-5℃下搅拌1小时且然后在室温下搅拌14小时。蒸发所得反应混合物并蒸馏(84-90℃，在500-600mT下)而得到1-氨基-3-二乙氨基-丙-2-醇(3.3g，92％)。MSm/z 147([M+1]+)。
步骤4：
向5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(100mg，0.43mmol)、EDC(122.7mg，0.64mmol)和HOBt(86.5mg，0.64mmol)在1.0mL DMF中的溶液中加入1-氨基-3-二乙氨基-丙-2-醇(93.2mg，0.64mmol)。将所得反应溶液在室温下搅拌过夜并蒸发。将残余物悬浮于10mL水中并过滤。用饱和碳酸氢钠和水洗涤固体并在高度真空烘箱内干燥至得到粗产物，将其用柱色谱法纯化，用含有三乙胺的6％甲醇-二氯甲烷(2滴/100mL 6％甲醇-二氯甲烷)洗脱而得到5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(3-二乙氨基-2-羟基-丙基)-酰胺(62mg，34％)，为黄色固体。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.70(s，1H，NH-1’)，10.90(s，1H，NH-1)，7.76(dd，J＝2.38，9.33Hz，1H，H-4)，7.72(s，1H，vinyl-H)，7.60(m，br.，1H，CONHCH2CH(OH)-CH2N(C2H5)2-4’)，6.93(dt，J＝2.38，8.99Hz，1H，H-5)，6.85(dd，J＝4.55，8.99Hz，1H，H-6)，3.83(m，br，1H，OH)，3.33(m，4H)，2.67(m，br，5H)，2.46(s，3H，CH3)，2.44(s，3H，CH3)，1.04(m，br，6H，CH3x2).MS m/z(相对强度，％)427([M+1]+，100).
实施例5：
5-[5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基-甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-羟基-3-吗啉-4-基-丙基)-酰胺(R)、(S)和(R/S)(化合物4、5和6)的合成
步骤1：
将吗啉(2.6mL，30mmol)和表氯醇(2.35mL，30mmol)在乙醇(50mL)中的混合物在70℃下搅拌过夜。在除去溶剂后，用二氯甲烷(50mL)稀释残余物。通过真空过滤收集沉淀的澄清固体而得到1-氯-3-吗啉-4-基-丙-2-醇(2.0g，37％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ3.49(t，J＝4.8Hz，2H)，3.60(t，J＝4.6Hz，2H)，3.75(m，4H，2xCH2)，4.20(dd，J＝5.2，12Hz，2H)，4.54(m，2H)，4.62(m，1H，CH)，6.64(d，J＝6.4Hz，1H，OH).MS(m/z)180.2(M+1).
步骤2：
在室温下用NH3在甲醇中的溶液(25％重量，20mL)处理1-氯-3-吗啉-4-基-丙-2-醇(2.0g，11mmol)。使氮气进入反应混合物发泡以除去氨。蒸发溶剂而得到1-氨基-3-吗啉-4-基-丙-2-醇的盐酸盐(2.0g，91％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.30(d，J＝6.0Hz，2H)，2.36(m，4H，NCH2)，2.65(dd，J＝8.4，12.8Hz，1H)，2.91(dd，J＝3.6，12.8Hz，1H)，3.52(m，4H，OCH2)，3.87(m，1H，CH)，5.32(s，1H，OH)，8.02(brs.，3H，NH3 +).MS(m/z)161.1(M+1).
步骤3：
使5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(120mg，0.4mmol)与1-氨基-3-吗啉-4-基-丙-2-醇(74mg，0.48mmol)缩合以沉淀5-[5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-羟基-3-吗啉-4-基-丙基)-酰胺(65mg，36％)。蒸发母液至干并通过急骤色谱法纯化残余物，又得到2N(70mg，39％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.28(m，1H)，2.32(m，1H)，2.40(m，4H)，2.40，2.42(2xs，6H，2xCH3)，3.15(s，1H)，3.31(m，1H)，3.55(m，4H)，3.78(m，1H)，4.73(brs，1H，OH)，6.82(dd，J＝4.5，8.4Hz，1H)，6.90(td，2J＝2.8，3J＝10.0Hz，1H)，7.53(m，1H)，7.70(s，1H)，7.74(dd，J＝2.0，9.6Hz，1H)(芳香基和乙烯基)，10.87(s，1H，CONH)，13.66(s，1H，NH).LC-MS(m/z)441.4(M-1).
2-羟基-7-氧杂-4-氮鎓螺[3.5]壬烷氯化物的合成
Figure A20081008142200421
向安装了热电偶、氮气入口和250mL加液漏斗的1L 3-颈圆底烧瓶中加入吗啉(91.5g，91.5mL，1.05mole，1.0eq.)和100mL乙醇。将该溶液快速搅拌，同时在约30分钟内从加液漏斗中加入表氯醇(100g，84.5mL，1.08mole，1.03eq.)。监测温度且当罐温达到27℃时，用冰水浴冷却该反应体系。通过GC检测反应(将5滴反应混合物稀释入1mL乙醇并注射在15m DB-5毛细管GC柱上，其中使用如下试验参数：注射器250℃，检测器250℃，起始烘箱温度28℃，以每分钟10℃的速度温热至250℃)。反应完全，遗留低于3％的吗啉。在完全室内真空和50℃下通过旋转蒸发浓缩反应体系至不再有蒸馏物可以被缩合为止。将所得油状物储存在室温下24-48小时或直到观察到大量结晶为止(种晶会加速该过程)。用250mL丙酮稀释该淤浆并过滤。在60℃下用真空烘箱将固体干燥18-24小时。该步骤得到84g结晶产物。可以浓缩母液并重复结晶过程以增加收率。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ6.55(d，1H)，4.64(m，1H)，4.53(m，2H)，4.18(m，2H)，3.74(m，4H)，3.60(m，2H)，3.48(m，2H).13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ70.9，61.39，61.04，60.25，58.54，57.80.
1-氨基-3-(4-吗啉基)-2-丙醇(外消旋物)的合成
向带有磁搅拌器的3L 1-颈圆底烧瓶中加入2-羟基-7-氧杂-4-氮鎓螺[3.5]壬烷氯化物(150g，835mmole)，随后加入23wt.％在甲醇(2120mL)中的无水氨。用塞子塞紧烧瓶并将所得澄清溶液在20-23℃下搅拌18小时。在上述条件下的GC显示没有遗留原料。除去塞子并使氨通过该溶液发泡溢出30分钟。然后将烧瓶转入旋转蒸发状态并通过使用45℃浴和完全室内(house)真空浓缩至得到白色固体。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.57(dd，2H)，3.3-3.5(m，6H)，2.59(m，2H)，2.2-2.4(m，6H)；13C NMR(100MHz DMSO-d6)δ70.8，67.1，60.1，53.8，48.1.
按照实施例3中所述的步骤进行，但用如下所述制备的2-(S)-1-氨基-3-吗啉-4-基-丙-2-醇取代2-(RS)-1-氨基-3-吗啉-4-基-丙-2-醇而得到所需的化合物5-[5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-(S)-羟基-3-吗啉-4-基-丙基)-酰胺。
1-氨基-3-(4-吗啉基)-2-丙醇(非外消旋物)的合成
向安装了机械搅拌器、热电偶和加液漏斗的1L 3-颈圆底烧瓶中加入吗啉(91.5g，91.5mL，1.05mole，1.0eq.)和45mL叔丁醇。将该溶液快速搅拌，同时在约30分钟内从加液漏斗中加入R-表氯醇(100g，84.5mL，1.08mole.1.03eq.)。监测温度并在当罐温达到27℃时，用冰水浴冷却该反应体系。将澄清溶液搅拌18小时。通过GC检测反应(将5滴反应混合物稀释入1mL乙醇并注射在15m DB-5毛细管GC柱上，其中使用如下试验参数：注射器250℃，检测器250℃，起始烘箱温度28℃，以每分钟10℃的速度温热至250℃)。反应完全，遗留低于3％的吗啉。将该溶液冷却至10℃并滴加20wt％叔丁醇钾在THF(576g)中的溶液，保持温度低于15℃。将所得白色淤浆在10-15℃下搅拌2小时并通过使用上述条件的GC检测。没有观察到氯乙醇。在完全室内真空和50℃下通过旋转蒸发浓缩该混合物。用水(500mL)和二氯甲烷稀释所得混合物。分离各相并用二氯甲烷(500mL)洗涤水相。用硫酸钠干燥合并的有机层并浓缩至得到澄清无色油状物。该步骤得到145g、产率为97％的环氧化物。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.3(dd，4H)，3.1(m，1H)，2.6(dd，1H)，2.5(dd，1H)，2.4(m，4H)，2.2dd，2H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ65.4，60.1，53.1，48.9，43.4.
将上述环氧化物粗品加入到带有磁搅拌棒的3L1-颈圆底烧瓶中。加入在甲醇中的无水氨(24％w/w 2.5L)，用塞子塞紧烧瓶并将该混合物在室温下搅拌24小时。上述条件下的GC显示没有遗留原料。除去塞子并使氨通过该溶液发泡溢出30分钟。然后将烧瓶转入旋转蒸发状态并通过使用45℃浴和完全室内真空浓缩至得到澄清无色油状物。该步骤得到124g产物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.57(dd，2H)，3.3-3.5(m，6H)，2.59(m，2H)，2.2-2.4(m，6H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ70.8，67.1，60.1，53.8，48.1.
1-氨基-3-(4-吗啉基)-2-(S)-丙醇的合成
向安装了磁搅拌器、热电偶和加液漏斗的1L 3-颈圆底烧瓶中加入吗啉(91.5g，91.5mL，1.05mole，1.0eq.)和200mL甲醇。将该溶液快速搅拌，同时在约30分钟内从加液漏斗中加入R-表氯醇(100g，84.5mL，1.08mole.1.03eq.)。监测温度并在当罐温达到27℃时，用冰水浴冷却该反应体系。将澄清溶液搅拌18小时。通过GC检测反应(将5滴反应混合物稀释入1mL乙醇并注射在15m DB-5毛细管GC柱上，其中使用如下试验参数：注射器250℃，检测器250℃，起始烘箱温度28℃，以每分钟10℃的速度温热至250℃)。反应完全，遗留低于3％的吗啉。将该溶液冷却至10℃并滴加25wt％甲醇钠在甲醇中的溶液(233g，1.08mole，247mL)，保持温度低于15℃。将所得白色淤浆在10-15℃下搅拌2小时并通过使用上述条件的GC检测。没有观察到氯乙醇。在完全室内真空和50℃下通过旋转蒸发浓缩该混合物。用水(500mL)和二氯甲烷稀释所得混合物。分离各相并用二氯甲烷(500mL)洗涤水相。用硫酸钠干燥合并的有机层并浓缩至得到澄清无色油状物。该步骤得到145g、产率为97％的1，2-环氧-3-吗啉-4-基丙烷。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.3(dd，4H)，3.1(m，1H)，2.6(dd，1H)，2.5(dd，1H)，2.4(m，4H)，2.2(dd，2H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ65.4，60.1，53.1，48.9，43.4.
将上述1，2-环氧-3-吗啉-4-基丙烷粗品加入到带有磁搅拌棒的3L1-颈圆底烧瓶中。加入在甲醇中的无水氨(24％w/w 2.5L)，用塞子塞紧烧瓶并将该混合物在室温下搅拌24小时。上述条件下的GC显示没有遗留原料。除去塞子并使氨通过该溶液发泡溢出30分钟。然后将烧瓶转入旋转蒸发状态并通过使用45℃浴和完全室内真空浓缩至得到澄清无色油状物。该步骤得到124g 1-氨基-3-(4-吗啉基)-2-(S)-丙醇。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.57(dd，2H)，3.3-3.5(m，6H)，2.59(m，2H)，2.2-2.4(m，6H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ70.8，67.1，60.1，53.8，48.1.
Figure A20081008142200461
混合咪唑酰胺(7.0g，32.3mmol)、胺(15.0g，64.6mmol)、5-氟羟吲哚(4.93g，32.6mmol)、三乙胺(9.79g，96.9mmol)和THF(88mL)并加热至60℃。形成棕色溶液。在60℃下搅拌24小时后，将黄色淤浆冷却至rt(室温)并过滤。用80mL THF洗涤滤饼并在50℃的室内真空中干燥过夜。得到棕色固体(23.2g)。将该固体在rt下350mL水中搅拌成淤浆5小时并过滤。用100mL水洗涤滤饼并在50℃下室内真空中干燥过夜。得到8.31g，化学产率为56％。
Figure A20081008142200462
向安装了温度计、冷凝器、磁搅拌器和氮气入口的0.25L烧瓶中加入4.92g 5-氟羟吲哚、7.0g咪唑酰胺、15.5g(R)-1-氨基-3-(4-吗啉基)-2-丙醇、9.78g三乙胺和88mL四氢呋喃。将该混合物加热至60℃下16.5小时。将该反应体系冷却至环境温度并过。将所得固体在乙腈中以11mL/g连续搅拌(3)三次而成为淤浆、在真空中干燥至得到3.6g(25.25％)。[HPLC，Hypersil BDS，C-18，5μ，(6∶4)，乙腈：0.1M氯化铵，PHA-571437＝4.05分钟]。
H1NMR(DMSO)：δ10.86(1H，bs)；7.75(1H，d)；7.70(1H，s)；7.50(1H，m)；6.88(2H，m)；4.72(1H，bs)；3.78(1H，bs)；3.56(4H，m)；3.32(6H，m)；3.15(1H，m)；2.43(8H，bm).
实施例6：
2，4-二甲基-5-[2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基甲基]-1H-吡咯-3-甲酸(2-羟基-3-吗啉-4-基-丙基)-酰胺的合成
使5-(2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(113mg，0.4mmol)与1-氨基-3-吗啉-4-基-丙-2-醇(74mg，0.48mmol)缩合以沉淀2，4-二甲基-5-[2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基甲基]-1H-吡咯-3-甲酸(2-羟基-3-吗啉-4-基-丙基)-酰胺(77mg，45.3％)。
1H NMR (DMSO-d6)δ2.27(m，1H)，2.32(m，1H)，2.40(m，4H)，2.40，2.42(2xs，6H，2xCH3)，3.15(s，1H)，3.32(m，1H)，3.55(m，4H)，3.77(m，1H)，4.74(d，J＝4.8Hz，1H，OH)，6.86(d，J＝7.6Hz，1H)，6.96(t，J＝7.2Hz，1H)，7.10(t，J＝7.6Hz，1H)，7.49(t，J＝5.6Hz，1H)，7.61(s，1H)，7.77(d，J＝8.0Hz，1H)(芳香基和乙烯基)，10.88(s，1H，CONH)，13.62(s，1H，NH).LC-MS(m/z)425.4(M+1).
实施例7：
5-[5-氯-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基-甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-羟基-3-吗啉-4-基-丙基)-酰胺(化合物7)的合成
使5-(5-氯-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(126.6mg，0.4mmol)与1-氨基-3-吗啉-4-基-丙-2-醇(74mg，0.48mmol)缩合以沉淀5-[5-氯-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-羟基-3-吗啉-4-基-丙基)-酰胺(107mg，58％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.29(m，1H)，2.33(m，1H)，2.39(m，4H)，2.40，2.42(2xs，6H，2xCH3)，3.15(s，1H)，3.37(m，1H)，3.55(m，4H)，3.77(m，1H)，4.74(d，J＝4.8Hz，1H，OH)，6.85(d，J＝8.4Hz，1H)，7.11(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.53(t，J＝5.6Hz，1H)，7.75(s，1H)，7.97(d，J＝2.0Hz，1H)(芳香基和乙烯基)，10.99(s，1H，CONH)，13.62(s，1H，NH).LC-MS(m/z)457.4(M-1).
实施例：
5-[5-溴-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基-甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-羟基-3-吗啉-4-基-丙基)-酰胺的8-合成
使5-(5-溴-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(72.2mg，0.2mmol)与1-氨基-3-吗啉-4-基-丙-2-醇(38mg，0.24mmol)缩合以沉淀5-[5-溴-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-羟基-3-吗啉-4-基-丙基)-酰胺(55mg，55％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.27(m，1H)，2.32(m，1H)，2.39(m，4H)，2.41，2.42(2xs，6H，2xCH3)，3.13(s，1H)，3.35(m，1H)，3.55(m，4H)，3.77(m，1H)，4.74(d，J＝4.4Hz，1H，OH)，6.80(d，J＝g.4Hz，1H)，7.24(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.51(t，J＝5.6Hz，1H)，7.76(s，1H)，8.09(d，J＝2.0Hz，1H)(芳香基和乙烯基)，10.99(s，1H，CONH)，13.62(s，1H，NH).LC-MS(m/z)503.4(M-1).
实施例9：
2，4-二甲基-5-[2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基-甲基]-1H-吡咯-3-甲酸(2-羟基-3-[1，2，3]三唑-1-基-丙基)-酰胺的合成
步骤1：
将3-[1，2，3]三唑(2.0g，29mmol)、表氯醇(3.4mL，43.5mmol)和N，N-二异丙基-乙胺(2.6mL，15mmol)在乙醇(50mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。在除去溶剂后，通过急骤色谱法纯化残余物(CH2Cl2/CH3OH＝100/1-100/2-100/4)而得到：1-氯-3-(1，2，3)-三唑-2-基丙-2-醇(2.1g，45％)1HNMR(CDCl3)δ3.52(m，2H，OH and CH2)，3.60(dd，J＝5.2，11.2Hz，1H)，4.36(m，1H，CH)，4.68(m，2H)，7.67(s，2H).MS(m/z)162.1(M+1)；和1-氯-3-(1，2，3)三唑-1-基丙-2-醇(2.3g，49％)。
1H NMR(CDCl3)δ3.56(s，1H)，3.57(s，1H)，4.35(m，1H)，4.53(dd，J＝7.2，14Hz，1H)，4.67(dd，J＝3.8，14Hz，1H)，7.67(s，1H)，7.71(s，1H).MS(m/z)162.1(M+1).
步骤2：
在60℃下和密封压力容器内用NH3在甲醇中的溶液(25％重量，20mL)将1-氯-3(1，2，3)三唑-1-基丙-2-醇(2.3g，13mmol)处理过夜。在冷却至室温后，使氮气进入反应混合物发泡以除去氨。蒸发溶剂而得到1-氨基-3-(1，2，3)三唑-1-基丙-2-醇的盐酸盐(2.57g，100％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.68(dd，J＝8.8，12.8Hz，1H)，2.97(dd，J＝3.6，12.8Hz，1H)，4.15(m，1H)，4.44(dd，J＝6.4，14Hz，1H)，4.57(dd，J＝4.6，14Hz，1H)，5.95(d，J＝5.2Hz，1H，OH)，7.77(s，1H)，8.01(brs.，3H，NH3 +)，8.12(s，1H).MS(m/z)143.1(M+1).
步骤3：
使5-(2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(113mg，0.4mmol)与1-氨基-3(1，2，3)三唑-1-基-丙-2-醇(85mg，0.48mmol)缩合以沉淀2，4-二甲基-5-[2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基甲基]-1H-吡咯-3-甲酸(2-羟基-3-[1，2，3]三唑-1-基-丙基)-酰胺(70mg，41％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.45，2.48(2xs，6H，2xCH3)，3.35(m，2H)，4.02(m，1H)，4.32(dd，J＝7.6，14Hz，1H)，4.53(dd，J＝3.4，14Hz，1H)，5.43(d，J＝5.6Hz，1H，OH)，6.91(d，J＝7.6Hz，1H)，7.01(t，J＝7.6Hz，1H)，7.15(t，J＝8.0Hz，1H)，7.66(s，1H)，7.12(t，J＝5.6Hz，1H)，7.74(s，1H)，7.77(d，J＝7.6Hz，1H)，8.11(s，1H)，10.93(s，1H，CONH)，13.68(s，1H，NH).LC-MS(m/z)405.4(M-1).
实施例10：
5-[5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基-甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-羟基-3-[1，2，3]三唑-1-基-丙基)-酰胺的合成
使5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(120mg，0.4mmol)与1-氨基-3(1，2，3)三唑-1-基-丙-2-醇(85mg，0.48mmol)缩合以沉淀5-[5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-羟基-3-[1，2，3]三唑-1-基-丙基)-酰胺(100mg，62％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.42，2.44(2xs，6H，2xCH3)，3.27(m，2H)，3.98(m，1H)，4.27(dd，J＝7.6，14Hz，1H)，4.50(dd，J＝3.4，13.6Hz，1H)，5.38(d，J＝5.6Hz，1H，OH)，6.82(dd，J＝4.4，8.4Hz，1H)，6.91(td，2J＝2.4，3J＝9.0Hz，1H)，7.70(m，3H)，7.75(dd，J＝2.4，9.2Hz，1H)，8.11(s.1H)，10.93(s，1H，CONH)，13.73(s，1H，NH).LC-MS(m/z)423.4M-1).
实施例11：
5-[5-氯-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基-甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-羟基-3-[1，2，3]三唑-1-基-丙基)-酰胺的合成
使5-(5-氯-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(126.6mg，0.4mmol)与1-氨基-3(1，2，3)三唑-1-基-丙-2-醇(85mg，0.48mmol)缩合以沉淀5-[5-氯-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-羟基-3-[1，2，3]三唑-1-基-丙基)-酰胺(48mg，27％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.42，2.44(2xs，6H，2xCH3)，3.27(m，2H)，3.99(m，1H)，4.28(dd，J＝7.8，14Hz，1H)，4.51(dd，J＝3.2，14Hz，1H)，5.39(d，J＝6.0Hz，1H，OH)，6.85(d，J＝8.4Hz，1H)，7.12(dd，J＝2.0，8.2Hz，1H)，7.70(m，2H)，7.74(s，1H)，7.97(d，J＝2.0Hz，1H)，8.07(s，1H)，10.99(s，1H，CONH)，13.65(s，1H，NH).LC-MS(m/z)439.4(M-1).
实施例12：
5-[5-溴-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基-甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-羟基-3-[1，2，3]三唑-1-基-丙基)-酰胺的合成
使5-(5-溴-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(144.4mg，0.4mmol)与1-氨基-3(1，2，3)三唑-1-基-丙-2-醇(85mg，0.48mmol)缩合以沉淀5-[5-溴-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-羟基-3-[1，2，3]三唑-1-基-丙基)-酰胺(130mg，67％)。
1H N/R(DMSO-d6)δ2.41，2.44(2xs，6H，2xCH3)，3.27(m，2H)，3.99(m，1H)，4.28(dd，J＝7.6，14Hz，1H)，4.50(dd，J＝3.6，14Hz，1H)，5.40(d，J＝5.6Hz，1H，OH)，6.81(d，J＝8.4Hz，1H)，7.24(dd，J＝2.0，8.0Hz，1H)，7.70(m，2H)，7.77(s，1H)，8.07(s.1H)，8.10(d，J＝1.6Hz，1H)，11.0(s，1H，CONH)，13.64(s，1H，NH).LC-MS(m/z)485.4(M-1).
实施例13：
5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-二乙氨基-乙基)酰胺(化合物1)的合成
使5-氟-1，3-二氢吲哚-2-酮(0.54g，3.8mmol)与5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-二乙氨基乙基)酰胺缩合而得到0.83g(55％)的标题化合物，为黄绿色固体。
1HNMR(360MHz，DMSO-d6)δ13.66(s，1H，NH)，10.83(s，br，1H，NH)7.73(dd，J＝2.5&9.4Hz，1H)，7.69(s，1H，乙烯基)，7.37(t，1H，CONHCH2CH2)，6.91(m，1H)，6.81-6.85(m，1H)，3.27(m，2H，CH2)，2.51(m，6H，3xCH2)，2.43(s，3H，CH3)，2.41(s，3H，CH3)，0.96(t，J＝6.9Hz，6H，N(CH2CH3)2).MS-EI m/z 398[M+].
5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-二乙氨基-乙基)酰胺的另一种合成方法
将肼水合物(55％，3000mL)和5-氟靛红(300g)加热至100℃。在120分钟内分部分(100g)再加入5-氟-靛红(500g)，同时搅拌。将该混合物加热至110℃并搅拌4小时。将该混合物冷却至室温并通过真空过滤收集固体而得到(2-氨基-5-氟-苯基)-乙酸酰肼(748g)。将酰肼悬浮于水(700mL)中并用12N盐酸将该混合物的pH调节至＜pH3。将该混合物在室温下搅拌12小时。通过真空过滤收集固体并用水洗涤两次。在真空中干燥产物而得到5-氟-1，3-二氢-吲哚-2-酮(600g，产率73％)，为棕色粉末。
1H-NMR(二甲亚砜-d6)δ3.46(s，2H，CH2)，6.75，6.95，7.05(3x m，3H，芳香基)，10.35(s，1H，NH).MS m/z 152[M+1].
剧烈搅拌3，5-二甲基-1H-吡咯-2，4-二甲酸2-叔丁酯4-乙酯(2600g)和乙醇(7800mL)，同时缓慢加入10N盐酸(3650mL)。温度从25℃升至35℃且开始放出气体。将该混合物温至54℃并在进一步加热的同时搅拌1小时，此时温度为67℃。将该混合物冷却至5℃并在搅拌的同时缓慢加入32L冰水。通过真空过滤收集固体并用水洗涤三次。使固体风干至恒重而得到2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸乙酯(1418g，产率87％)，为浅粉红色固体。
1H-NMR(二甲亚砜-d6)δ2.10，2.35(2xs，2x3H，2xCH3)，4.13(q，2H，CH2)，6.37(s，1H，CH)，10.85(s，1H，NH).MSm/z 167[M+1].
用冰浴将二甲基甲酰胺(322g)和二氯甲烷(3700mL)冷却至4℃并在搅拌的同时加入磷酰氯(684g)。在15分钟内分等分部分缓慢加入固体2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸乙酯(670g)。达到的最高温度为18℃。将该混合物加热至回流1小时、用冰浴冷却至10℃并在剧烈搅拌的同时快速加入1.6L冰水。温度增加至15℃。在剧烈搅拌的同时加入10N盐酸(1.6L)。温度增加至22℃。使该混合物稳定30分钟并使各层分离。温度达到40℃的最高温度。用10N氢氧化钾(3.8L)将水层调节至pH 12-13，在添加过程中的添加速率使温度达到并保持在55℃。在添加完成后，将该混合物冷却至10℃并搅拌1小时。通过真空过滤收集固体并用水洗涤四次而得到5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸乙酯(778g，产率100％)，为黄色固体。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.25(t，3H，CH3)，2.44，2.48(2xs，2x3H，2xCH3)，4.16(q，2H，CH2)，9.59(s，1H，CHO)，12.15(br s，1H，NH).MS m/z195[M+1].
将5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸乙酯(806g)、氢氧化钾(548g)、水(2400mL)和甲醇(300mL)回流2小时，同时搅拌且然后冷却至8℃。用二氯甲烷将该混合物提取两次。用1000mL的10N盐酸将水层调节至pH 4，保持温度低于15℃。加入水以有利于搅拌。通过真空过滤收集固体、用水洗涤三次并在50℃下和真空中干燥而得到5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(645g，产率93.5％)，为黄色固体。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.40，2.43(2xs，2x3H，2xCH3)，9.57(s，1H，CHO)，12.07(br s，2H，NH+COOH).MS m/z 168[M+1].
在室温下搅拌5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-比咯-3-甲酸(1204g)和6020mL二甲基甲酰胺，同时加入1-(3-二甲氨基丙基-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(2071g)、羟基苯并三唑(1460g)、三乙胺(2016mL)和二乙基乙二胺1215mL)。将该混合物在室温下搅拌20小时。用3000mL水、2000mL盐水和3000mL饱和碳酸氢钠溶液稀释该混合物并用10N氢氧化钠将pH调节至大于10。用10％在二氯甲烷中的甲醇将该混合物提取两次，每次使用5000mL并合并提取物、用无水硫酸镁干燥并旋转蒸发至干。用1950mL甲苯稀释该混合物并再次旋转蒸发至干。将残余物与3∶1己烷∶乙醚(4000mL)一起研磨。通过真空过滤收集固体、用400mL乙酸乙酯洗涤两次并在34℃下真空中干燥21小时而得到5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-二乙氨基-乙基)-酰胺(819g，产率43％)，为淡棕色固体。1H-NMR(二甲亚砜-d6)δ0.96(t，6H，2xCH3)，2.31，2.38(2xs，2x CH3)，2.51(m，6H3xCH2)，3.28(m，2H，CH2)，734(m，1H，酰胺NH)，9.56(s，1H，CHO)，11.86(s，1H，吡咯NH).MS m/z 266[M+1].
将5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-二乙氨基乙基)-酰胺(809g)、5-氟-1，3-二氢-吲哚-2-酮(438g)、乙醇(8000mL)和吡咯烷(13mL)在78℃下加热3小时。将该混合物冷却至室温并通过真空过滤收集固体且用乙醇洗涤。将该固体与乙醇(5900mL)一起在72℃下搅拌30分钟。将该混合物冷却至室温。通过真空过滤收集固体、用乙醇洗涤并在54℃下和真空中干燥130小时而得到5-[5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-二乙氨基-乙基)-酰胺(1013g，产率88％)，为橙色固体。
1H-NMR(二甲亚砜-d6)δ0.98(t，6H，2xCH3)，2.43，2.44(2xs，6H，2xCH3)，2.50(m，6H，3xCH2)，3.28(q，2H，CH2)，6.84，6.92，7.42，7.71，7.50(5xm，5H，芳香基，乙烯基，CONH)，10.88(s，1H，CONH)，13.68(s，1H，吡咯NH).MS m/z397[M-1].
可以按照美国专利公开号2003/0069298和WO 03/016305中公开的技术方案制备5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-二乙氨基-乙基)酰胺的苹果酸盐，将这两篇文献的全部公开内容引入作为参考。
如美国专利US6,573,293中所述合成5-(5-溴-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸、5-(5-氯-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸和5-(2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸，将该文献的全部公开内容引入本文作为参考。
实施例14：
5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-吡咯烷-1-基-乙基)-酰胺(化合物2)的合成
使5-氟-1，3-二氢-二氢吲哚-2-酮与5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-吡咯烷-1-基-乙基)-酰胺缩合而得到标题化合物。MS+ve APCI 397[M+1]。
实施例15：
5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-乙基氨基-乙基)-酰胺(化合物8)
将5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-乙氨基-乙基)-酰胺(99g)、乙醇(400mL)、5-氟-2-羟吲哚(32g)和吡咯烷(1.5g)在搅拌的同时回流3小时。将该混合物冷却至室温并通过真空过滤收集固体。在60℃下将该固体在乙醇中搅拌、冷却至室温并通过真空过滤收集。在真空中干燥产物而得到5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-(3Z)-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-乙氨基-乙基)-酰胺(75g，产率95％)。1H-NMR(二甲亚砜-d6)δ1.03(t，3H，CH3)，2.42，2.44(2xs，6H，2xCH3)，2.56(q，2H，CH2)，2.70，3.30(2xt，4H，2xCH2)，6.85，6.92，7.58，7.72，7.76(5xm，5H，芳香基，乙烯基，和CONH)，10.90(br s，1H，CONH)，13.65(br s，1H，吡咯NH).MS m/z 369[M-1].
实施例16：
5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-吗啉-4-基-乙基)-酰胺(化合物3)
使5-氟-1，3-二氢-吲哚-2-酮与5-甲酰基-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-吗啉-1-基-乙基)-酰胺缩合而得到标题化合物。
生物实施例
用于MX1人乳腺癌模型的方法
小鼠/饲养：使雌性nu/nu小鼠(Harlan)，13周龄(成对交配，第1天)自由饮水和经照射的标准啮齿动物膳食。使小鼠寄居在12小时光照周期的静态微量分离室内。动物的护理和使用程序特别按照实验室动物护理和使用指南中有关规定、饲养、手术步骤、饲料和流体规章的建议进行且兽医护理得到AAALAC认可。
肿瘤植入：给小鼠侧腹经皮下植入1mm3MX-1人乳腺癌部分。开始每周监测两次肿瘤且然后当瘤达到约100mg的所需大小时每天监测两次。当癌达到62-180mg大小的经计算的肿瘤重量时，使动物成对交配成不同的治疗组(组的平均肿瘤重量在99-101mg的范围)。使用下列公式计算估计的肿瘤重量：
肿瘤重量(mg)＝w2xL除以2
其中w＝宽，并且L＝以mm计的MX-1癌的长。
用于MDA-MB-435人乳腺癌模型的方法
将1x105MDA-MB-435肿瘤细胞注入雌性nu/nu小鼠(n＝10)的左心室。监测小鼠的重量减轻(＞20％)和后肢麻痹作为骨髓定居(colonization)的指示剂。
用于MDA-MB-435人小细胞肺癌模型的方法
将1x105-1x106肿瘤细胞注入雌性nu/nu小鼠(n＝10)的后胁腹皮下区。每周通过用测径器测量监测两次肿瘤生长，持续2-4周。用于LS174t人结肠癌模型的方法
将1x105-1x106肿瘤细胞注入雌性nu/nu小鼠(n＝10)的后胁腹皮下区。每周通过用测径器测量监测两次肿瘤生长，持续2-4周。用于HT-29人结肠癌模型的方法
将1x105-1x106肿瘤细胞注入雌性nu/nu小鼠(n＝10)的后胁腹皮下区。每周通过用测径器测量监测两次肿瘤生长，持续2-4周。
实施例1：化合物1与多西他赛组合在MX-1人乳腺癌皮下肿瘤模型中增强的抗肿瘤功效的测定
本实施例表示化合物1与多西他赛的组合疗法对人乳腺癌模型的功效和毒性的作用的评价。
在给药前使肿瘤生长至约100mm3的体积。表1是使用该模型获得的数据汇总(也参见附图1-3)。
表1
  Rte   化合物   剂量(mg/kg)/方案   天   抑制％   P值*   天   抑制％   P值*
  P0   CMC   QD至结束   --   --   --   --   --   --
  IV   盐水   QWK x 3   --   --   --   --   --   --
  PO   化合物1   40QD至结束   20   53   0.02   --   --   --
  IV   多西他赛   5QWK x 3   16   0   NS   --   --   --
  IV   多西他赛   10QWK x 3   16   60   0.005   --   --   --
  IV   多西他赛   15QWK x 3   16   95   ＜0.0001   --   --   --
  P0/IV   化合物1/多西他赛   40QD至结束/5QWK x 3   16   Vs化合物1∶75Vs多西他赛：82   0.01＜0.0001   27   Vs化合物1∶55   0.04
  PO/IV   化合物1/多西他赛   40QD/至结束/10QWK x 3   20   Vs化合物1∶78Vs多西他赛：62   0.010.04   37   Vs多西他赛：77   0.005
  PO/IV   化合物1/多西他赛   40QD至结束/15QWK x 3   57   Vs多西他赛：82   0.008 -- -- --
CMC＝羧甲基纤维素
QD＝每天
QWK＝每周一次
N/A＝未应用；NS＝没有显著性
*Student′s t-检验比较
在MX-1人乳腺癌皮下肿瘤模型中，当以40mg/kg/天作为单一疗法口服给药时，化合物1的治疗在第20天时产生52％抑制作用(p＝0.02)。多西他赛治疗产生剂量反应作用，在给药后16天以5mg/kg没有功效，在10mg/kg时产生60％抑制作用(p＝0.005)且在15mg/kg时产生95％抑制作用(p＜0.0001)。在10和15mg/kg治疗组给予多西他赛完成后，肿瘤重新生长，其斜率与载体对照组的斜率相似。
将每天给予的化合物1与5mg/kg多西他赛每周给药一次、持续3周的组合与无效的5mg/kg多西他赛和40mg/kg/天的化合物1相比对肿瘤生长产生了显著增强的抑制作用(第27天：55％抑制作用，p＝0.04)。
将每天给予的化合物1与10mg/kg多西他赛每周给药一次、持续3周的组合对肿瘤生长的抑制作用显著强于单独的多西他赛(第20天：62％抑制作用，p＝0.04；第37天：77％抑制作用，p＝0.005)或单独的化合物1(第20天：78％抑制作用，p＝0.01)。
维持模型：化合物1与15mg/kg多西他赛每周一次、持续3周联用与单独使用多西他赛治疗的小鼠的肿瘤重新生长相比，使停止给予多西他赛后的肿瘤生长减缓显著增加(第57天：82％抑制作用，p＝0.008)。
化合物1与多西他赛的组合在这些研究中被充分耐受。
实施例2：MX-1乳腺癌功效研究(化合物1&多西他赛)的研究-化合物1与多西他赛组合在MX-1人乳腺癌皮下模型中增强的抗肿瘤功效的测定
本实施例评价化合物1与多西他赛的组合疗法对人乳腺癌模型的功效和毒性的作用。在给药前使肿瘤生长至约100mm3的体积。表2是使用该模型获得的数据汇总(也参见附图4)。
表2
  Rte   化合物   剂量(mg/kg)/方案   天   抑制％   P值*
  PO/IV   CMC盐水   QD至结束qwkx3   N/A   N/A   N/A
  PO   化合物1   40QD至结束   17   63   ＜0.0001
  IV   多西他赛   5QWKx 3   17   NS   NS
  IV   多西他赛   10QWKx 3   14   36   NS
  IV   多西他赛   15QWK x 3   17   90   ＜0.0001
  PO/IV   化合物1/多西他赛   40QD至结束/5QWKx 3   2821   Vs化合物1∶43vs多西他赛：75   0.08(NS)＜0.0001
  PO/IV   化合物1/多西他赛   40QD至结束/10QWK x 3   2814   Vs化合物1∶77vs多西他赛：72   0.0020.10(NS)
  PO/IV   化合物1/多西他赛   40QD至结束/15QWK x 3   52   Vs多西他赛&化合物1∶100   ＜0.0001
QD＝每天
QWK＝每周一次
N/A＝未应用；NS＝没有显著性
*Student′s t-检验比较
在MX-1人乳腺癌sc肿瘤模型中，当以40mg/kg/天作为单一疗法口服给药时，化合物1的治疗在第17天时产生63％抑制作用(p＜0.0001)。多西他赛治疗产生剂量反应作用，在给药后17天以5mg/kg没有功效，在10mg/kg时产生36％抑制作用(第14天)且在15mg/kg时产生90％抑制作用(p＜0.0001)。在15mg/kg治疗组给予多西他赛完成后，肿瘤重新生长，其斜率与载体对照组的斜率相似。
将每天给予的化合物1与5mg/kg多西他赛的组合每周给药一次、持续3周与无效的5mg/kg多西他赛和40mg/kg/天的化合物1相比对肿瘤生长产生了显著增强的抑制作用(第28天：43％抑制作用，p＝0.08-趋于显著)。
将每天给予的化合物1与10mg/kg多西他赛的组合每周给药一次、持续3周对肿瘤生长的抑制作用显著强于单独的多西他赛或单独的化合物1(第28天：77％抑制作用，p＝0.002)。
维持模型：化合物1与15mg/kg多西他赛联用每周一次、持续3周与单独使用多西他赛治疗的小鼠的肿瘤重新生长相比使肿瘤显著退化(第52天：100％抑制作用，p＜0.0001)。化合物1与多西他赛的组合在这些研究中被充分耐受。
实施例3：MX-1乳腺癌功效研究(化合物1&5-氟尿嘧啶)-化合物1与5-氟尿嘧啶(5-FU)组合在MX-1人乳腺癌皮下模型中增强的抗肿瘤功效的测定
本实施例评价化合物1与5-FU的组合疗法对人乳腺癌模型的功效和毒性的作用。在给药前使肿瘤生长至约100mm3的体积。表3表示使用该模型获得的结果(参见附图5)。
表3
  Rte   化合物   剂量(mg/kg)/方案   天   抑制％   P值*
  PO/IV   CMC   QD至结束QWK x 3   N/A   N/A   N/A
  PO   化合物1   40QD至结束   15   57   0.01
  IV   5-FU   100QWK x 3   15   45   0.02
  PO/IV   化合物1/5-FU   40QD至结束/QWK x 3   22   Vs化合物1∶78vs 5-FU：76   0.0060.01
QD＝每天
QWK＝每周一次
N/A＝未应用；NS＝没有显著性
*Student′s t-检验比较
口服给予40mg/kg/天的化合物1与每周一次、持续3周的100mg/kg腹膜内给予的化疗药5-氟尿嘧啶(5-FU)的联合疗法与给予的各活性剂作为单一疗法相比使肿瘤生长得到显著抑制：在第22天时与单独的化合物1相比产生78％的抑制作用(p＝0.006)且在第22天时与单独的5-FU相比产生76％的抑制作用(p＝0.01)。临床上将5-FU作为前体药物卡培他滨口服给予。
实施例4：MX-1乳腺癌功效研究(化合物1&盐酸多柔比星)-化合物1与盐酸多柔比星组合在MX-1人乳腺癌皮下模型中增强的抗肿瘤功效的测定
本实施例评价化合物1与盐酸多柔比星的组合疗法对人乳腺癌模型的功效和毒性的作用。在给药前使肿瘤生长至约100mm3的体积。
表4表示使用该模型获得的结果(参见附图6)。
表4
  Rte   化合物   剂量(mg/kg)/方案   天   抑制％   P值*
  PO   CMC   QD至结束   N/A   N/A   N/A
  PO   化合物1   40QD至结束   14   62   0.03
  IV   盐酸多柔比星   40QOD x 3   14   48   0.07(NS)
  PO/IV   化合物1/盐酸多柔比星   40QD至结束/4QOD x 3   31   Vs化合物1∶60vs多西他赛：81   0.010.001
QD＝每天
QOD＝每隔一天
N/A＝未应用；NS＝没有显著性
*Student′s t-检验比较
口服给予40mg/kg/天的化合物1与隔天一次、持续3次剂量的4mg/kg腹膜内给予的化疗药盐酸多柔比星的联合疗法与给予的各活性剂作为单一疗法相比使肿瘤生长得到显著抑制：在第31天时与单独的化合物1相比产生60％的抑制作用(p＝0.01)且在第31天时与单独的5-FU相比产生81％的抑制作用(p＝0.001)。
实施例5：NCI-H526小细胞肺癌的功效研究(化合物1&顺铂)
使用标准技术在补充了10％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠(Life Technologies Inc.，Gai thersburg，MD)的RPMI 1640中培养NCI-H526SCLC细胞并维持在常规的37℃和5％二氧化碳的湿润室内。
从在指数生长期中的细胞培养瓶内收集将要植入小鼠的细胞、用无菌磷酸缓冲盐水(PBS)洗涤一次、计数并重新悬浮于PBS中至合适的浓度，此后植入。
所有的动物研究菌在AAALAC国际认可的动物设备中且按照Institute of Laboratory Animal Research(National Institutesof Health，Bethe sda，MD)实验室动物护理和应用指南进行。使用购自Charles River Laboratories(Wilmington，MA)的9-12周龄雌性无胸腺nu/nu小鼠。
小鼠在第0天在后胁腹接受皮下注入5X106 NCI-H526细胞。用化合物1经PO治疗带有皮下肿瘤的无胸腺小鼠(250-300mm3肿瘤体积)，每天一次，直到研究结束，在前5天用顺铂经腹膜内给药，每天一次，或给予两种药物的组合。用0.9％盐水制备顺铂。如表5中所示给予化合物或其载体。当在植入细胞后的第18天开始给药时，建立了250-300mm3肿瘤。在治疗期限中使用Vernier测径器测量肿瘤生长，每周两次。将肿瘤体积计算为长x宽x高的乘积，就所有研究而言，使用双侧Student′s t检验计算p-值。表5表示使用该模型获得的结果(参见附图7)。
表5
  E#/途经   化合物   剂量(mg/kg)   方案   肿瘤达到900mm3的天数   P值*
  2958/PO   化合物1   40   QD   41   0.0005
  IP   顺铂   1.5   QD x 5   48   0.0009
  PO/IP   化合物1顺铂   401.5   QDQDx5   70   ＜0.00010.004
  PO   载体   N/A   QD   30   N/A
*双侧Student′s t检验
N/A＝未应用
QD ＝每天
在KIT-阳性NCI-H526SCLC肿瘤异种移植模型中，每天口服给予40mg/kg化合物1与前5天经腹膜内给予1.5mg/kg顺铂的组合与化合物1的单一疗法相比使肿瘤生长达到900mm3的天数延长了29天，而与顺铂单一疗法相比延长了22天(分别为p＜0.0001和p＝0.004)。
实施例6：MDA-MB-435乳腺癌功效研究(化合物1&多西他赛)-化合物1与多西他赛组合在MDA-MB-435常位人乳腺癌骨髓定居模型中增强的抗肿瘤功效的测定
本实施例评价化合物1与多西他赛的组合疗法对人乳腺癌模型的功效和毒性的作用。依次根据改善的存活情况、因肿瘤细胞的骨髓定居所致后肢麻痹或重量减轻(＞20％)证实功效。
将肿瘤细胞注入雌性nu/nu小鼠的乳腺脂垫并监测重量减轻(＞20％)和后肢麻痹作为肿瘤细胞骨髓定居的指示剂。
将肿瘤细胞注入雌性nu/nu小鼠的左心室并监测重量减轻(＞20％)和后肢麻痹作为肿瘤细胞骨髓定居的指示剂。
表6
  Rte   化合物   剂量(mg/kg)/方案   平均存活   统计学分析的天数   P值*
  PO   CMC   QD至结束   46   55   N/A
  PO   化合物1   40QD至结束   52   55   0.03
  IP   多西他赛   5QWK x 3   52   55   0.3(NS)
  PO/IV   化合物1/多西他赛   40QD至结束/5QWK x 3   60   55   0.017(Vs化合物1)0.0006(vs多西他赛)
QD＝每天
QWK＝每周一次
N/A＝未应用；NS＝没有显著性
*Student′s t-检验比较
在MDA-MB-435常位人乳腺癌肿瘤模型中，当作为单一疗法以40mg/kg/天给予化合物1时，其治疗与单独的载体治疗相比使小鼠存活情况显著改善(52v s.46天，p＝0.03)。作为单一疗法用5mg/kg/周多西他赛治疗与载体治疗的小鼠相比没有显著改善存活情况(52vs.46天，p＝0.3)。
40mg/kg/天的化合物1与5mg/kg/周、持续3周的多西他赛的组合与作为单一疗法的化合物1相比(平均存活60vs.52天，p＝0.017)或与多西他赛相比(平均存活60v s.52天，p＝0.0006)使存活天数显著增加。
实施例7：LS174t结肠癌功效研究(化合物1&CPT-11)-化合物1与CPT-11(依立替康)组合在LS174t人结肠癌皮下肿瘤模型中增强的抗肿瘤功效的测定
本实施例评价化合物1与CPT-11(依立替康)的组合疗法对人结肠癌模型的功效和毒性的作用。在给药前使肿瘤生长至约100mm3的体积。表7表示使用该模型获得的结果。
表7
  Rte   化合物   剂量(mg/kg)/方案   天   抑制％   P值*
  PO   CMC   QD至结束   23   N/A   N/A
  IP   D5W   QWK x 3   23   N/A   N/A
  PO/IP   CMC/D5W   QD至结束/QWK x 3   23   N/A   N/A
  PO   化合物1   20QD至结束   23   34.9   0.19(NS)
  PO   化合物1   40QD至结束   23   67.9   0.004
  IP   CPT-11   100QWKx 3   23   63.6   0.008
  PO/IV   化合物1/CPT-11   20QD至结束/QWK x 3   23   vs载体：82.7vs化合物1：73.4vs CPT-11：50.9   0.00030.0140.06(NS)
  PO/IV   化合物1/CPT-11   40QD至结束/QWK x 3   23   vs载体：88.7vs化合物1：64.6vs CPT-11：67.9   0.000020.07(NS)0.02
QD＝每天
QWK＝每周一次
D5W＝5％葡萄糖水溶液
N/A＝未应用；NS＝没有显著性
*Student′s t-检验比较
在LS174t人结肠癌皮下肿瘤模型中，当作为单一疗法以40mg/kg/天给予化合物1时，其治疗对肿瘤生长产生显著(23天时68％)抑制作用。作为单一疗法用20mg/kg/天化合物1治疗在该模型中没有产生对生长的显著抑制作用。作为单一疗法用100mg/kg/周CPT-11(依立替康(Ironotecan))治疗3周也使肿瘤生长显著抑制(23天时为64％)。在该研究期限中，作为单一疗法用40mg/kg/天的化合物1显著抑制了肿瘤生长，而用20mg/kg/天化合物1治疗或100mg/kg/周的CPT-11治疗3周的肿瘤的生长速率稍慢于用载体治疗的对照组。
以20或40mg/kg/天的化合物1与100mg/kg/周的CPT-11的组合持续3周与作为研究前3周内的单一疗法的化合物1或CPT-11相比对肿瘤生长的抑制作用增强。20mg/kg/天的次佳剂量化合物1和100mg/kg/周的CPT-11的组合持续3周与单独的化合物1或CPT-11相比使肿瘤生长抑制增强(第23天：化合物1：74％抑制，p＝0.014；和CPT-11 51％抑制；p＝0.06-趋于显著)。此外，40mg/kg/天的化合物1与100mg/kg/周的CPT-11组合持续3周与单独的化合物1或CPT-1相比使肿瘤生长抑制增强(第23天：化合物1：65％抑制作用，p＝0.07；CPT-11：68％抑制作用，p＝0.02)。化合物1与CPT-11的组合在这些研究中被充分耐受。
实施例8：HT-29结肠癌功效研究(化合物1&CPT-11)-化合物1与CPT-11(依立替康)组合在HT-29人结肠癌皮下肿瘤模型中增强的抗肿瘤功效的测定
本实施例评价化合物1与CPT-11(依立替康)的组合疗法对另一种人结肠癌模型的功效和毒性的作用。在给药前使肿瘤生长至约100mm3的体积。表8表示使用该模型获得的结果。
表8
  Rte   化合物   剂量(mg/kg)/方案   天   抑制％   P值*
  PO   CMC   QD至结束   38   N/A   N/A
  IP   D5W   QWK X 3   38   N/A   N/A
  PO/IP   CMC/D5W   QD至结束/QWK X 3   38   N/A   N/A
  PO   化合物1   20QD至结束   38   77.8   0.002
  IP   CPT-11   100QWK x 3   38   43.6   0.18(NS)
  PO/IV   化合物1/CPT-11   20QD至结束/QWK x 3   38   vs载体：87.4vs化合物1：42.4vs CPT-11：71.4   0.0010.040.02
QD＝每天
QWK＝每周一次
D5W＝5％葡萄糖水溶液
N/A＝未应用；NS＝没有显著性
*Student′s t-检验比较
在HT-29人结肠癌皮下肿瘤模型中，当作为单一疗法以20mg/kg/天给予化合物1时，其治疗对肿瘤生长产生显著(38天时78％)抑制作用。作为单一疗法用100mg/kg/周CPT-11(依立替康(Ironotecan))治疗3周显示出使肿瘤生长趋于抑制，但生长抑制不显著。在该研究期限中，化合物1与CPT-11各自表现出使作为单一疗法中的肿瘤生长减缓的总体趋势。
20mg/kg/天的化合物1与100mg/kg/周的CPT-11的组合持续3周与作为单一疗法的化合物1(第38天：42％抑制作用，p＝0.04)或CPT-11(第38天：71％抑制作用，p＝0.02)相比对肿瘤生长的抑制载体显著增强。此外，在研究期限内化合物1与CPT-11的组合与各单一疗法相比表现出以生长抑制和存活状况具优势为特点的趋势。化合物1与CPT-11的组合在这些研究中被充分耐受。
本领域技术人员显然可以对本发明的方法和组合物进行各种修改和改变而不会脱离本发明的实质或范围。因此，本发明的意图在于涵盖本发明提供的这些修改和改变，它们属于待批权利要求及其等同技术方案的范围。

Claims (5)

1.化合物5-(5-氟-2-氧代-1，2-二氢-吲哚-3-亚基甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酸(2-二乙氨基-乙基)-酰胺或其药物上可接受的盐、水合物或溶剂合物与至少一种选自5-氟尿嘧啶、多柔比星、顺铂和依立替康的化疗剂的组合用于制备治疗癌症的药物的用途。
2.权利要求1所述的用途，其中所述的癌症为乳腺癌、小细胞肺癌或结肠癌。
3.权利要求1所述的用途，其中所述的癌症为乳腺癌，且所述的至少一种化疗剂为5-氟尿嘧啶或多柔比星。
4.权利要求1所述的用途，其中所述的癌症为小细胞肺癌，且所述的至少一种化疗剂为顺铂。
5.权利要求1所述的用途，其中所述的癌症为结肠癌，且所述的至少一种化疗剂为依立替康。
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