CN101233220B - 表面活性非酶促蛋白质用于织物洗涤的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及表面活性非酶促蛋白质在织物洗涤中的用途、用于织物洗涤的包括界面活性非酶促蛋白质的去污剂，以及使用所述蛋白质的洗涤方法。

Description

表面活性非酶促蛋白质用于织物洗涤的应用
本发明涉及界面活性非酶促蛋白质在织物洗涤中的应用。本发明还涉及用于织物洗涤的含有界面活性非酶促蛋白质的洗涤组合物，以及利用此类蛋白质洗涤的方法。
目前，织物洗涤只能在相对高的温度下使污垢，特别是疏水性的污渍的清除达到令人满意的程度。在中等温度特别是室温下，对于改善洗涤性能仍然有巨大的需求。根据现有技术，特别是用表面活性剂和脂解酶可以实现疏水性污渍的清除。
原则上已知使用酶促蛋白质作为洗涤组合物的添加剂。特别是蛋白酶被用于洗涤组合物，而且使用淀粉酶、纤维素酶或脂肪酶的使用也是已知的。更详细的细节参见，例如，R
Figure 200680028317X_0
mpp Chemie-Lexikon，在线版，2.6版，Georg-Thieme-Verlag，Stuttgart，New York，2005年2月中的“Waschmittel-酶”[洗涤组合物酶]。
还已知蛋白质可以用于将洗涤助剂(例如固定剂、UV保护剂、加香物质或污垢分离助剂)固定在纤维上。为此目的，WO 98/00500公开了纤维素酶、纤维素酶衍生物或纤维素样蛋白质的用途，为此目的WO 01/46357公开了具有纤维素结合位点和其它化合物结合位点的融合蛋白。
界面活性蛋白质在原则上是已知的。一类具有特别强表面活性的蛋白质是即所谓的“疏水蛋白”。疏水蛋白具有显著的界面亲和力，因此适合用于包被表面。例如，通过用疏水蛋白包被特氟隆(Teflon)的表面，可以使特氟隆亲水化。
疏水蛋白是有约100-150个氨基酸的小蛋白质，其特征是丝状真菌，例如裂褶菌(Schizophyllum commune)。它们通常具有8个半胱氨酸单元。
疏水蛋白可以首先从天然来源分离。但是，它们也可以通过遗传工程的方法获得。我们的在先申请PCT/EP2006/050719公开了疏水蛋白的此类制备过程。
现有技术已经提出了疏水蛋白用于多种用途中的应用。
WO 96/41882提出疏水蛋白的以下用途，其作为乳化剂、增稠剂、表面活性物质，用于使疏水表面亲水化、改善亲水底物的防水性、制备水包油乳状液或油包水乳状液。此外，提出了例如生产软膏剂或乳膏剂的制药用途，和例如皮肤保护或生产洗发香波或洗发液的化妆品用途。
EP 1252516公开了使用含有疏水蛋白的溶液在30℃-80℃的温度下包被窗户、隐形眼镜、生物传感器、医疗设备、用于进行测试或储存的容器、船体、固体颗粒或交通工具的框架或底盘。
WO 03/53383公开了疏水蛋白在化妆品用途中用于处理角蛋白材料的应用。
WO 03/10331公开了疏水蛋白包被的传感器(例如检测电极)，其上以非共价的方式结合其它物质，例如电活性物质、抗体或酶。
到目前为止，还没有关于界面活性非酶促蛋白质，特别是疏水蛋白，作为洗涤组合物的污垢分离添加剂用途的描述。
本发明的目标是提供改良的洗涤组合物和改良的织物洗涤的方法。特别对于低温洗涤的情形中洗涤性能的改善是显著的。
因此，已经发现了界面活性非酶促蛋白质用于织物洗涤中的应用。
在本发明的第二个方面，发现了包含界面活性非酶促蛋白质的洗涤组合物。
在本发明的第三个方面，发现了在包含界面活性非酶促蛋白质的洗涤液中洗涤的方法。在该方法的特定实施方案中，洗涤在不超过60℃的温度下进行。
在发明的特别优选的实施方案中，界面活性非酶促蛋白质在每种情形中是疏水蛋白。
已经令人惊奇的发现，洗涤液中添加界面活性非酶促蛋白质显著增强了洗涤作用。特别令人惊奇的是，甚至在低的洗涤温度而且甚至在使用非常少量的蛋白质的情况下，仍然具有这一效应。例如，发现即使在洗涤液中蛋白质浓度仅仅约2.5ppm，结合常规洗涤组合物，在仅25℃的洗涤温度下，洗涤作用仍增强了高达8％。
除了增强污垢分离作用以外，还观察到对有色油污的防变灰作用(graying-inhibiting)。在洗涤过程中可以从织物上脱离的疏水性污渍会以细小的分离形式重新沉积到衣物上，导致因此变灰或变色。基于白色或淡色织物的性质，该效应在所述白色或淡色织物中特别显著。特别是当表面活性剂和助洗剂系统处于低剂量时会出现该问题。与不添加界面活性非酶促蛋白质洗涤的织物相比，本发明的添加所述蛋白质降低了这一再沉积，因此改善了洗涤的织物的白度。
发明的具体细节如下：
为了进行本发明，使用了界面活性非酶促蛋白质。术语“非酶促”用来表示优选的不具有或至少没有明显的酶促作用的蛋白质。
术语“界面活性”用来表示使用的蛋白质具有影响界面性质的能力。所讨论界面可以是固体-固体、固体-液体、固体-气体、液体-液体或液体-气体界面。特别的，它们可以是固体-液体或液体-液体界面。
对于固体-液体界面的情况，所述性质可以是，例如，固体界面的亲水性或疏水性，其会在使用的蛋白质的影响下发生改变。亲水性或疏水性的改变可以以已知的方式，通过测量在包被和未包被表面上水滴的接触角来测量。其它的界面性质是液体表面张力的改变，可以通过已知方法测量。
为了进行本发明，优先使用即使在低浓度下也是界面活性的蛋白质。合适的蛋白质特别是那些即使在0.05至50ppm浓度下也具有显著界面活性性质的蛋白质。
在本发明优选的实施方案中，使用的蛋白质的特征是在室温下用于玻璃表面后，与水滴和未包被的玻璃表面的接触角相比，具有导致等大水滴(5μl)的接触角增加至少20°的性质。优选使用接触角增加了至少25°(更优选至少30°)的蛋白质。对接触角的测量是本领域技术人员原则上已知的。例如适用于测量接触角的方法的确切实验条件详细的叙述在实验部分中。
在本发明特别优选的实施方案中，使用的蛋白质是疏水蛋白。
在本发明的上下文中，术语“疏水蛋白”在下文中表示具有通用结构式(I)的多肽：
Xn-C1-X1-50-C2-X0-5-C3-X1-100-C4-X1-100-C5-X1-50-C6-X0-5-C7-X1-50-C8-Xm    (I)
其中X可以是20个天然存在的氨基酸(Phe，Leu，Ser，Tyr，Cys，Trp，Pro，His，Gln，Arg，Ile，Met，Thr，Asn，Lys，Val，Ala，Asp，Glu，Gly)中的任一个。在式中，X基团可以各自是相同或不同的。X旁边的指数是各自特定部分序列X的氨基酸数目，C是半胱氨酸、丙氨酸、丝氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸或苏氨酸，其中至少四个C标注的残基是半胱氨酸，指数n和m各自独立为0至500之间自然数，优选的在15至300之间。
式(I)的多肽的特征在于以下性质：即分别与水滴和未包被的玻璃表面的接触角相比，在室温下包被玻璃表面后，所述肽使等大水滴的接触角增加至少20°，优选的至少25°，更优选的30°。
用C1至C8标注的氨基酸优选的是半胱氨酸；但是，它们也可以用其他有相似空间充满(space-filling)的氨基酸代替，优选的是丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甲硫氨酸或甘氨酸。但是，在C1至C8的位置中的至少4个，优选的至少5个，更优选的至少6个和特别是至少7个应该由半胱氨酸组成。在发明的蛋白质中，半胱氨酸或者以还原的形式存在，或者与另一个形成二硫键。特别优选的是导致C-C桥的分子内形成，特别是其具有至少1个分子内二硫键，优选2个，更优选3个和最优选4个分子内二硫键。在上述将半胱氨酸换成具有相似空间充满的氨基酸的情况下，此类C位置有利地成对更换，它们可以彼此形成分子内二硫键。
如果在X标注的位置也使用半胱氨酸、丝氨酸、丙氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸或苏氨酸，在通式的各个C位置的编号方式可以相应的改变。
优先的使用通式(II)的疏水蛋白来进行本发明：
Xn-C1-X3-25-C2-X0-2-C3-X5-50-C4-X2-35-C5-X2-15-C6-X0-2-C7-X3-35-C8-Xm    (II)
其中X、C和在X和C旁边的指数各自如上定义，指数n和m各自为0至350之间的数，优选从15至300，此外，蛋白质还具有上文说明过的改变接触角的特征，并且另外至少6个用C标注的残基是半胱氨酸。更优选的，所有的C残基都是半胱氨酸。
特别优选的是使用通式(III)的疏水蛋白：
Xn-C1-X5-9-C2-C3-X11-39-C4-X2-23-C5-X5-9-C6-C7-X6-18-C8-Xm    (III)
其中X、C和X旁边的指数各自定义如上，指数n和m各自为0至200之间的数，此外，蛋白质还具有上文说明过的改变接触角的特征，并且至少6个用C标注的残基是半胱氨酸。更优选的，所有的C残基都是半胱氨酸。
Xn和Xm残基可以是还天然连接了疏水蛋白的肽序列。但是，所述残基之一或二者也可以是天然没有连接疏水蛋白的肽序列。这也理解为表示那些Xn和/或Xm残基，其中在疏水蛋白中天然存在的肽序列由疏水蛋白中非天然存在的肽序列延长。
如果Xn和Xm是没有天然结合疏水蛋白的肽序列，上述序列通常长为至少20，优选至少35，更优选至少50以及，例如至少100个氨基酸。序列可以是，例如从20至500，优选从30至400和更优选的从35至100个氨基酸的序列。此类没有天然结合疏水蛋白的残基在下文中也是指融合配偶体(fusion partner)。这用于表示蛋白质可以由至少一个疏水蛋白部分和融合配偶体部分组成，而二者不以该形式天然共存。
融合配偶体部分可以选自多种蛋白质。还可以只有单个融合配偶体与疏水蛋白部分结合，或者还可以有多个融合配偶体与一个疏水蛋白部分结合，例如在疏水蛋白部分的氨基端(Xn)和羧基端(Xm)。但是，还可以，例如，两个融合配偶体与本发明蛋白质的一个位置(Xn或Xm)连接。
特别合适的融合配偶体是在微生物(特别是在大肠杆菌(E.coli)或枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)中天然存在的蛋白质。此类融合配偶体的实例是序列yaad(SEQ ID NO：15和16)，yaae(SEQ ID NO：17和18)，以及硫氧还蛋白。非常合适的还有这些序列的片段或衍生物，其包括仅一部分(例如70至99％，优选的5至50％和更优选的10至40％)的上述序列，或其中与所述序列相比改变了单个氨基酸或核苷酸，在这种情况下百分比各自基于氨基酸的数目。
在更优选的实施例中，融合疏水蛋白，以及上述的融合配偶体，作为Xn或Xm基团或作为此类基团的末端成分，也具有所谓的亲和结构域(亲和标记物/亲和尾部)。在原则上已知的方式中，这包括可以与特定互补基团相互作用和可以用于更简单的蛋白质操作和纯化的锚定基团。此类亲和结构域的实例包括(His)k、(Arg)k、(Asp)k、(Phe)k或(Cys)k基团，其中k通常是从1至10的自然数。优选是(His)k基团，其中k是从4到6。在上述情况下，Xn和/或Xm基团可以仅由此类亲和结构域组成，或者天然或非天然结合了疏水蛋白的Xn或Xm基团由末端亲和结构域延长。
根据本发明用作疏水蛋白或其衍生物的蛋白质也可以在其多肽序列中被修饰，例如通过糖基化、乙酰化或者通过化学交联，例如用戊二醛。
根据发明使用的疏水蛋白及其衍生物的一个性质是当用所述蛋白质包被表面时表面性质的改变。表面性质的改变可以被实验测定，例如，通过测量用蛋白质包被表面前后水滴的接触角，并且测定两次测量的差异。
进行接触角测量是本领域技术人员原则上已知的。测量基于室温，5μl的水滴，并使用玻璃板作为底物。用于测量接触角的合适方法的实例的确切实验条件在实验部分给出。在其提及的条件下，根据发明使用的融合蛋白质具有以下性质：即在每种情形中与等大水滴和未包被的玻璃表面的接触角分别相比，将接触角增加至少20°，优选的至少25°，更优选的至少30°。
用于进行本发明的特别优选的疏水蛋白是疏水蛋白的dewA、rodA、hypA、hypB、sc3、basf1、basf2类型，其结构特征是下面列出的序列。它们也可以只是所述蛋白质的部分或其衍生物。还可以是多种疏水蛋白部分，优选的是2或3个相同或不同的结构，它们彼此结合且与天然不结合疏水蛋白的对应的适当多肽序列结合。
根据发明还特别合适的是融合蛋白质yaad-Xa-dewA-his(SEQ ID NO：20)、yaad-Xa-rodA-his(SEQ ID NO：22)或yaad-Xa-basf1-his(SEQ ID NO：24)(其中多肽序列在括号中说明)，以及编码其的核酸序列，特别是根据SEQ ID NO：19、21、23的序列；更优选的，可以使用yaad-Xa-dewA-his(SEQ ID NO：20)。从SEQ ID NO.20、22或24显示的肽序列开始，通过交换、插入或删除至少1个到10个，优选5个氨基酸，更优选的所有氨基酸的5％而产生的，但仍具有起始蛋白质至少50％程度的生物学性质的蛋白质，也是特别优选的实施方案。蛋白质的生物学性质在本文理解为表示接触角改变至少20°，其在前文已做描述。
特别适合进行本发明的衍生物是从yaad-Xa-dewA-his(SEQ ID NO：20)、yaad-Xa-rodA-his(SEQ ID NO：22)或yaad-Xa-basf1-his(SEQ ID NO：24)，通过截短yaad融合配偶体衍生的残基。使用截短的yaad残基，而非完整的具有294个氨基酸的yaad融合配偶体(SEQ ID NO：16)，是有利的。但是截短的残基应该包含至少20个，更优选的至少35个氨基酸。例如，可以使用的截短的基团具有从20至293，优选的从25至250，更优选的从35至150以及，例如从35至100个氨基酸。此类蛋白质的一个实例是yaad40-Xa-dewA-his(SEQ ID NO：26)，其具有截短至40个氨基酸的yaad残基。
可以利用在疏水蛋白与一个或多个融合配偶体之间的裂解位点，来释放纯的、非衍生形式的疏水蛋白(例如，通过在甲硫氨酸上的BrCN裂解、Xa因子裂解、肠激酶裂解、凝血酶裂解、TEV裂解，等)。
还可以从一个融合配偶体(例如yaad或yaae)接连产生融合蛋白质，以及大量的疏水蛋白(甚至是不同的序列的疏水蛋白)，例如DewA-RodA或Sc3-DewA，Sc3-RodA。同样可以使用疏水蛋白片段(例如N-或C-端截短)或具有达70％同源性的突变蛋白质。在每种情况下根据特定的应用，即待分离的液相，选择最佳构建体。
根据发明使用的用于织物洗涤的疏水蛋白，可以通过已知的肽合成的方法化学制备，例如通过Merrifield固相合成。
天然存在的疏水蛋白可以通过合适的方法从天然来源中分离。例如参考Wsten等人，Eur.J Cell Bio.63，122-129(1994)或WO 96/41882。
不用融合配偶体从嗜热踝节菌(Talaromyces thermophilus)产生疏水蛋白的遗传工程产生方法描述在US 2006/0040349中。
融合蛋白质可以通过遗传工程方法优选的制备，其中以这样的方式结合编码融合配偶体的一个核酸序列(特别是DNA序列)和编码疏水蛋白部分的一个核酸序列，即通过所述方式使得宿主生物中生成由于结合的核酸序列基因表达而产生的所需蛋白质。此类制备过程在例如PCT/EP2006/050719中公开。
用于上述制备方法的合适的宿主生物(生产生物)可以是原核生物(包括古细菌)或真核生物，特别是细菌(包括嗜盐菌(halobacteria)和甲烷球菌(methanococci))、真菌、昆虫细胞、植物细胞和哺乳动物细胞，更优选是大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、米曲霉(Aspergillus oryzea)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、黑曲霉(Aspergillus niger)、巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)、假单胞菌属物种(Pseudomonas spec.)、乳酸杆菌属(lactobacilli)、多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、里氏木霉(Trichoderma reesei)、SF9(或相关细胞)等等。
发明还提供了表达构建体的用途，以及包含至少一种这些表达构建体载体，所述表达构建体在调节核酸序列的遗传控制下包含编码根据本发明使用的多肽的核酸序列。
使用的构建体优选包括，特定编码序列的5’上游、启动子和3’下游，终止子序列，以及根据需要，其它常规调控元件，它们各自与编码序列有效连接。
在本发明的上下文中，“有效连接”理解为表示启动子、编码序列、终止子以及(根据需要)其它调节元件的顺序排列，从而使得每个调节元件都可以实现其在编码序列表达中所希望的功能。
有效连接的序列实例是标签序列，还有增强子、多聚腺苷酸化信号等。其它调节元件包括选择性标记、扩增信号、复制起点等。合适的调节序列是，例如，描述在Goeddel，Gene Expression Technology：Methods inEnzymology 185，Academic Press，San Diego，CA(1990)中。
除了这些调节序列，这些序列的天然调节还可以出现在实际的结构基因的上游，以及根据需要，被遗传修饰从而关闭天然调节，并增加基因的表达。
优选的核酸构建体还有利的包含一个或多个所谓的“增强子”序列，其功能性的连接到启动子上，能够增加核酸序列的表达。同样在DNA序列的3’端，还可以插入额外的有利序列，例如其它调节元件或终止子。
构建体中出现的核酸可以是一个或多个拷贝。根据选择构建体需要，还可以有其它标记例如抗生素抗性或补充营养缺陷型的基因。
存在用于制备的有利的调节序列，例如，在启动子例如cos、tac、trp、tet、trp-tet、Ipp、lac、Ipp-lac、laclq-T7、T5、T3、gal、trc、ara、rhaP(rhaPBAD)SP6、λ-PR或imlambda-P启动子中，发现所述启动子利于在革兰氏阴性细菌中使用。其它有利的调节序列出现在，例如，革兰氏阳性启动子amy和SP02，以及酵母或真菌启动子ADC1、MFα、AC、P-60、CYC1、GAPDH、TEF、rp28、ADH。
还可以使用合成的启动子进行调节。
为了在宿主生物中表达，将核酸构建体有利的插入到载体中，例如使得基因在宿主中最优表达的质粒或噬菌体。除了质粒和噬菌体，载体还理解为表示所有本领域技术人员已知的其它载体，例如病毒如SV40、CMV、杆状病毒和腺病毒、转座子、IS元件、噬粒、黏粒和线性或环状DNA，以及还有农杆菌属(Agrobacterium)系统。
这些载体可以在宿主生物中自主复制或染色体复制。合适的质粒是，例如，在大肠杆菌中的pLG338、pACYC184、pBR322、pUC18、pUC19、pKC30、pRep4、pHS1、pKK223-3、pDHE19.2、pHS2、pPLc236、pMBL24、pLG200、pUR290、pIN-III″3-B1、tgt11或pBdCI，在链霉菌属(Streptomyces)中的plJ101、pIJ364、plJ702或plJ361，在芽孢杆菌属(Bacillus)中的pUB110、pC194或pBD214，在棒状杆菌属(Corynebacterium)中的pSA77或pAJ667，在真菌中的pALS1、plL2或pBB116，在酵母中的2α、pAG-1、YEp6、YEp13或pEMBLYe23或者在植物中的pLGV23、pGHIac+、pBIN19、pAK2004或pDH51。上述质粒构成了可行质粒的一小部分选择。其它质粒也是本领域技术人员已知的，并且例如，可以取自书本Cloning Vectors(编著Pouwels P.H等人，Elsevier，Amsterdam-New York-Oxford，1985，ISBN 0 444 904018)。
有利地，为了表达其它存在的基因，核酸构建体还额外的包含用于增强表达的3’-和/或5’-端的调节序列，其根据宿主生物和所选的一或多个基因为了最优表达而被选择。
这些调节序列意图使得能够控制基因表达和蛋白质表达。根据宿主生物，这可以表示，例如，基因只有在诱导之后才表达或过表达，或者立即表达和/或过表达。
调节序列或因子优选的可以正向影响，从而增加所导入基因的基因表达。因此，调节元件的扩增可以有利地在转录水平通过使用强转录信号例如启动子和/或增强子被影响。此外，还可以通过例如，改善mRNA的稳定性，来增强翻译。
在载体的另一个实施方案中，包含核酸构建体或者核酸的载体可以以线性DNA的形式有利的导入微生物，并通过异源或同源重组整合到宿主生物的基因组中。该线性DNA可以由线性化的载体例如质粒或仅由核酸构建体或核酸构成。
为了在生物中异源基因的最优表达，根据在生物中使用的特定“密码子选择”改变核酸序列是有利的。“密码子选择”可以参考所讨论生物的其它已知基因的计算机评估来简单的测定。
通过将合适的启动子与合适的编码核苷酸序列和终止子信号或多聚腺苷酸化信号融合，制备表达盒。为此，使用常规重组和克隆技术，描述在，例如T.Maniatis，E.F.Fritsch和J.Sambrook，Molecular Cloning：ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor，NY(1989)和在T.J.Silhavy，M.L.Berman和L.W.Enquist，Experimentswith Gene Fusions，Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor，NY(1984)以及在Ausubel，F. M.等人，Current Protocols in MolecularBiology，Greene Publishing Assoc.and Wiley Interscience(1987)中。
为了在合适的宿主生物中表达，重组的核酸构建体或基因构建体被有利的插入到宿主特异性载体中，所述载体使得基因在宿主中最优表达。载体是本领域技术人员普遍已知的并且可以取自例如″Cloning Vectors″(Pouwels P.H等人，编著，Elsevier，Amsterdam-New York-Oxford，1985)。
在载体的辅助下，可以制备重组微生物，所述微生物已经被转化了例如至少一个载体并可以用于生产根据发明使用的疏水蛋白或其衍生物。有利的，上述重组构建体被引入合适的宿主系统并表达。优选的使用本领域技术人员熟悉的克隆和转染方法，例如共沉淀、原生质体融合、电穿孔、逆转录病毒转染等，从而在特定表达系统中引起所述核酸的表达。合适的系统描述在，例如Current Protocols in Molecular Biology，F.Ausubel等人编著，Wiley Interscience，New York 1997，或者Sambrook等人，MolecularCloning：A Laboratory Manual，第2版，Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，1989。
还可以制备同源重组的微生物。为此，制备载体，其包括待使用的基因或编码序列的至少一部分，其中，根据需要，引入了至少一个氨基酸缺失、添加或取代，从而改变(例如功能性破坏)所述序列(“敲除”载体)。待引入的序列也可以，例如是来自相关微生物的同源物，或来自哺乳动物、酵母或昆虫来源。可以备选的配置用于同源重组的载体，使同源重组的内源基因被以另一方式突变或改变，但仍编码功能性蛋白质(例如，可以改变上游调节区从而改变内源蛋白质的表达)。根据发明使用的基因的改变部分位于同源重组载体内。用于同源重组的合适载体的构建描述在，例如，Thomas，K.R.和Capecchi，M.R.(1987)Cell 51：503。
原则上，所有的原核或真核生物都可以作为此类核酸或此类核酸构建体的重组宿主生物。有利的，使用的宿主生物是微生物，例如细菌，真菌或酵母。有利的，使用革兰氏阳性或革兰氏阴性菌，优选肠杆菌科(Enterobacteriaceae)、假单胞菌科(Pseudomonadaceae)、根瘤菌科(Rhizobiaceae)、链霉菌科(Streptomycetaceae)或诺卡氏菌科(Nocardiaceae)的细菌，更优选使用的细菌为埃希氏菌属(Escherichia)、假单胞菌属(Pseudomonas)、链酶菌属(Streptomyces)、诺卡氏菌属(Nocardia)、伯克霍尔德菌属(Burkholderia)、沙门氏菌属(Salmonella)、农杆菌属(Agrobacterium)或红球菌属(Rhodococcus)的细菌
刚刚描述的在制备所述融合蛋白质的过程中使用的微生物取决于以本领域技术人员已知的方法生长或培养的宿主生物。微生物通常生长在液体培养基中，温度为0至100℃之间，优选的10至60℃之间，有氧气喷射，所述液体培养基包括碳源(一般是糖的形式)，氮源(通常是有机氮源的形式例如酵母提取物或盐类如硫酸铵)，痕量元素(例如铁盐、锰盐和镁盐)，以及根据需要，维生素。营养液的pH可以维持在固定值，即在生长过程中可调节或不调节。培养可以是分批培养、半分批培养或连续培养。营养物可以在发酵起始加入，或以半连续或连续的方式补充。可以通过实施例中描述的方法从生物中分离酶，或作为粗提取物用于反应。
根据发明使用的疏水蛋白，或其功能性、生物学活性的片段，可以通过重组制备方法制备，其中培养生产多肽的微生物，根据需要诱导蛋白质表达，并将它们从培养物中分离。如果需要，蛋白质也可以以工业规模以这样的方式生产。可以用已知方法培养并发酵重组微生物。细菌在例如TB或LB培养基，温度为20至40℃和pH为6至9中增殖。合适的培养条件具体描述在，例如T.Maniatis，E.F. Fritsch和J.Sambrook，MolecularCloning：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory，ColdSpring Harbor，NY(1989)。
融合配偶体可以极大的方便疏水蛋白的制备。生产融合疏水蛋白比没有融合配偶体的疏水蛋白有显著更高的产量。
如果蛋白质没有被分泌到培养基中，就破坏细胞并通过已知的蛋白质分离方法从裂解物中获得所述产物。根据需要，可以通过高频超声、通过高压(如弗氏细胞压碎器(French pressure cell))、通过渗透溶解、通过去污剂、水解酶或有机溶剂的作用、通过匀浆器或通过组合多种所列方法来破坏细胞。
可以用已知的色谱方法纯化蛋白质，例如分子筛色谱(凝胶过滤)，如Q琼脂糖色谱、离子交换色谱和疏水色谱，以及其他常用方法如超滤、结晶、盐析、透析和非变性凝胶电泳。合适的方法描述在，例如，Cooper，F.G.，Biochemische Arbeitsmethoden[Biochemical Techniques]，VerlagWalter de Gruyter，Berlin，New York，或在Scopes，R.，Protein Purification，Springer Verlag，New York，Heidelberg，Berlin。
通过为融合疏水蛋白提供特异性锚定基团，可以特别有利于简化融合疏水蛋白的分离和纯化，所述基团可以结合固体支持物(特别是合适的聚合物)上相应的互补基团。此类固体支持物可以作为，例如，色谱柱的填充料，并且以这一方式一般可以显著增加分离的效率。亲和色谱也是已知的此类分离方法。为了掺入锚定基团，在蛋白质的制备中可以使用载体系统或寡核苷酸，所述寡核苷酸用特定的核苷酸序列延长了cDNA，从而编码改变的蛋白质或融合蛋白质。为了简化纯化，修饰的蛋白质包括所谓的作为锚起作用的“标签”，例如已知的六组氨酸锚的修饰。用组氨酸锚修饰的融合疏水蛋白可以用色谱纯化，例如，用镍-琼脂糖(nickel-Sepharose)作为柱填充料。然后，通过合适的洗脱剂例如咪唑溶液将融合疏水蛋白再次从柱上洗脱。
在简化的纯化方法中，可以省略色谱纯化。为此，首先通过合适的方法从发酵肉汤中去掉细胞，例如通过微量过滤或离心。然后，通过合适的方法破坏细胞，例如通过上文已经提及的方法，将细胞碎片可以与内含体分离。后者可以有利的通过离心实现。最后，以原则上已知的方式破坏内含体，从而释放融合疏水蛋白。这可以通过例如酸、碱和/或去污剂实现。具有根据发明使用的融合疏水蛋白的内含体通常可以甚至用0.1M NaOH在约1小时内完全溶解。通过该简化的方法获得的融合疏水蛋白的纯度一般是所有蛋白质量的60至80％(重量)。
通过所述简化的纯化方法获得的溶液可以用来实施本发明，而不需要其他纯化。但是，融合疏水蛋白也可以作为固体从溶液中分离。例如，这可以以原则上已知的方式，通过冷冻干燥或喷雾干燥来实现。
在发明的优选的实施方案中，可以通过喷雾干燥的方法分离。喷雾干燥可以使用色谱纯化的溶液，也可以优选的使用通过制备内含体在简化的纯化方法后获得的溶液。
为了实施喷雾干燥，根据需要可以中和溶液。发现pH7至9的范围是特别有利的。
通常还建议将初始溶液略微浓缩。发现在初始溶液中有用的固体浓度达30％(重量)。一般固体含量＞5％可以产生精细产品粉末。随后，溶液可以用原则上已知的方式喷雾干燥。喷雾干燥合适的装置是商业可购的。最优喷雾干燥条件随单位类型和所需产量变化。已经发现输入温度为130至180℃，输出温度为50至80℃时对疏水蛋白溶液是有利的。任选的，喷雾干燥可以使用助剂，例如糖类、甘露糖醇、葡聚糖(dextran)或麦芽糖糊精。发现上述助剂的有用量是基于疏水蛋白的0至30％(重量)，优选5至20％(重量)的此类助剂。
按所述制备的疏水蛋白可以直接作为融合蛋白质使用，或在分离和移除融合配偶体后，作为“纯“疏水蛋白使用。
当需要移除融合配偶体时，建议在疏水蛋白部分和融合配偶体部分之间的融合蛋白质中掺入潜在的裂解位点(蛋白酶的特异性识别位点)。合适的裂解位点特别是那些在疏水蛋白部分和融合配偶体部分都不存在的肽序列，所述序列可以用生物信息学工具容易的确定。特别合适的实例是甲硫氨酸的BrCN裂解，或蛋白酶介导的用因子Xa裂解的裂解、肠激酶裂解、凝血酶裂解或TEV裂解(烟草蚀纹病毒)。
对于织物洗涤的本发明用途，界面活性非酶促蛋白质可以首先作为洗涤组合物的成分使用，并以这一形式加入洗涤液中。而且，还可以分别向洗涤液中加入界面活性非酶促蛋白质，并使用不含界面活性非酶促蛋白质的洗涤组合物。分别的添加可以通过添加固体形式的蛋白质进行，作为溶液或作为适当的制剂。要理解两种添加方法也可以组合。
本领域技术人员根据所需效果确定洗涤液中界面活性非酶促蛋白质的量。发现有效量一般是0.05至50ppm，优选的0.1至30ppm，更优选的0.2至20ppm，甚至更优选的0.5至10ppm以及，例如1至6ppm。
发明的洗涤组合物包括至少一种洗涤活性物质和至少一种界面活性非酶促蛋白质。
至少一种界面活性非酶促蛋白质优选的是导致如开始所述的接触角改变的蛋白质，更优选的至少一种疏水蛋白。要理解也可以使用不同蛋白质的混合物。
如果使用疏水蛋白，它们可以作为“纯“疏水蛋白或另外以上述融合蛋白质的形式使用。发现实施本发明的有用实例是yaad-Xa-dewA-his型(SEQID NO：20)、yaad-Xa-rodA-his型(SEQ ID NO：22)或yaad-Xa-basf1-his型(SEQ ID NO：24)融合蛋白质。发现特别有用的实例是具有完整yaad融合配偶体或具有截短的融合配偶体(例如yaad40-Xa-dewA-his(SEQ ID NO：26))的yaad-Xa-dewA-his(SEQ ID NO：20)。
术语“用于织物洗涤的洗涤组合物“是同时不言自明且限制性的。用于洗涤织物的洗涤组合物以例如，粉末、颗粒、粒状沉淀、糊状、片状、凝胶或液体形式，一般是以含水溶液(洗涤液)的形式来使用。它们的作用由化学和物理化学过程的相对复杂的相互作用组成。洗涤组合物包括至少一种洗涤活性物质，但是一般包含多种不同洗涤活性物质，它们相互作用产生最优的洗涤结果。洗涤组合物的重要洗涤活性成分特别是表面活性剂，还有助洗剂，辅助助洗剂(cobuilder)、漂白系统和洗涤组合物酶。还可以另外使用典型的添加剂，例如芳香剂、缓蚀剂、染料传递抑制剂、抑泡剂或荧光增白剂作为洗涤组合物的成分。
表面活性剂可以是阴离子、非离子、阳离子或两性表面活性剂。
合适的非离子表面活性剂特别是：
-烷氧基化C8-C22-醇，例如脂肪醇烷氧基化物、羰基合成醇烷氧基化物(oxo alcohol alkoxylate)和格尔伯特醇(Guerbet alcohol)乙氧基化物：可以使用环氧乙烷、氧化丙烯和/或环氧丁烷进行烷氧基化作用。可以存在嵌段共聚物或随机共聚物。每摩尔醇，通常包括2至50mol，优选的3至20mol至少一种烯基氧化物。优选的烯化氧是环氧乙烷。醇类优选具有10至18个碳原子。
-烷基酚烷氧基化物，特别是烷基酚乙氧基化物，其包括C6-C14-烷基链和5至30mol的烯化氧/摩。
-烷基多葡糖苷，其包括C8-C22-，优选的C10-C18-烷基链和一般1至20，优选的1.1至5个葡糖苷单元。
-N-烷基葡萄糖酰胺(N-alkylglucamide)、脂肪酸酰胺烷氧基化物、脂肪酸链烷醇酰胺烷基氧化物，和环氧乙烷、氧化丙烯和/或环氧丁烷的嵌段共聚物。
合适的阴离子表面活性剂是，例如：
-(脂肪)醇硫酸盐，其具有8至22，优选的10至18个碳原子，特别是C9-C11-醇硫酸盐，C12-C14-醇硫酸盐，C12-C18-醇硫酸盐、硫酸月桂盐、十六烷基硫酸盐、肉豆蔻基硫酸盐、棕榈酰硫酸盐(palmityl sulfate)、硬脂酰硫酸盐和动物脂肪酸硫酸盐。
-硫酸化烷氧基化C8-C22-醇(烷基醚硫酸盐)：通过以下制备该类型的化合物：例如，首先烷氧基化C8-C22-，优选的C10-C18-醇，如脂肪醇，然后硫酸化该烷氧基化产物。对于烷氧基化作用，优选的使用环氧乙烷。
-线性C8-C20-烷基苯磺酸盐(LAS)，优选的线性C9-C13-烷基苯磺酸盐和C9-C13-烷基甲苯磺酸盐。
-链烷磺酸盐，特别是C8-C24-，，优选的C10-C18-链烷磺酸盐。
-皂类，例如C8-C24-羧酸的钠盐和钾盐。
将阴离子表面活性剂优选的以盐的形式加入洗涤组合物。合适的盐是，例如，碱金属盐如钠盐、钾盐和锂盐，铵盐如羟乙基铵盐、二(羟乙基)-铵盐和三(羟乙基)铵盐。
合适的阳离子表面活性剂包括：
-C7-C25-烷基胺；
-N，N-二甲基-N-(C2-C4-羟烷基)(C7-C25-烷基)铵盐；
-用烷化剂季铵化的单-和二(C7-C25-烷基)二甲基铵化合物；
-酯季铵化物(ester quats)，特别是被C8-C22-羧酸酯化的季铵化酯化单-、二-和三链烷醇胺。
-咪唑啉季铵化物(imidazoline quats)，特别是通式II或III的1-烷基咪唑啉盐(1-alkylimidazolinium salt)，
其中变量定义如下：
R3  是C1-C25-烷基或C2-C25-链烯基；
R4  是C1-C4-烷基或羟基-C1-C4-烷基；
R5  是C1-C4-烷基、羟基-C1-C4-烷基或R1-(CO)-X-(CH2)m-基团
(X：-O-或-NH-；m：2或3)，
其中至少一个R3基团是C7-C22-烷基。
合适的两性表面活性剂是，例如烷基甜菜碱、烷基酰胺甜菜碱、氨基丙酸盐、氨基甘氨酸盐和两性咪唑
Figure 200680028317X_3
盐化合物。
在洗涤过程中，助洗剂(也已知不均匀无机助洗剂，HIB)作用为软化水。它们通过其碱度支持洗涤作用，并从污垢和纤维桥中滤去钙离子和镁离子，并且促进色素污垢分散在洗涤液中。
合适的无机助洗剂特别是：
-具有离子交换性质的晶体和无定形铝硅酸盐，特别是沸石：多种类型的沸石是合适的，特别是沸石A、X、B、P、MAP和HS，所述沸石为Na形式或其中Na已经被其他阳离子例如Li、K、Ca、Mg或铵部分替换的形式。
-晶体硅酸盐，特别是二硅酸盐和片状硅酸盐，例如δ-和β-Na2Si2O5。可以以其碱金属、碱土金属或铵盐的形式使用硅酸盐；优选给出的为硅酸钠、硅酸锂和硅酸镁。
-无定形硅酸盐，例如硅酸钠和无定形二硅酸盐。
-碳酸盐和碳酸氢盐：可以以它们的碱金属、碱土金属或铵盐的形式使用它们。优选给出了碳酸钠、碳酸锂和碳酸镁以及碳酸氢钠、碳酸氢锂和碳酸氢镁，特别是碳酸钠和/或碳酸氢钠。
-聚磷酸盐，例如三聚磷酸钠。
辅助助洗剂与助洗剂协同作用，例如通过作为一类备用品(store)，其比助洗剂更迅速的吸收钙离子或镁离子，并将它们传递给助洗剂。此外，它们可以通过吸附在晶种上阻止其生长。
合适的有机辅助助洗剂特别是：
-低分子量羧酸例如柠檬酸，疏水修饰的柠檬酸，例如松蕈酸、苹果酸、酒石酸、葡糖酸、戊二酸、琥珀酸、亚胺二琥珀酸、氧二琥珀酸(oxydisuccinic acid)、丙三羧酸、丁烷四甲酸、环戊烷甲酸、烷基琥珀酸和链烯基琥珀酸和氨基多羧酸，例如氨三乙酸、β-丙氨酸双乙酸、乙二胺四乙酸、丝氨酸双乙酸、异丝氨酸双乙酸、N-(2-羟乙基)亚氨乙酸、乙二胺二琥珀酸，以及甲基甘氨酸双乙酸和乙基甘氨酸双乙酸。
-低聚和多聚羧酸，例如丙烯酸和天冬氨酸均聚物、低聚马来酸、马来酸和丙烯酸、异丁烯酸或C2-C22-烯烃的共聚物，例如，异丁烯或长链α-烯烃、乙烯基C1-C8-烷基醚、乙烯基乙酸酯、乙烯基丙酸酯、C1-C8-醇的(甲基)丙烯酸酯和苯乙烯。优选给出了丙烯酸的均聚物和丙烯酸与马来酸的共聚物。低聚和多聚碳酸以酸的形式或作为钠盐的形式使用。
合适的漂白剂是，例如过氧化氢和无机盐的加合物，如过硼酸钠一水合物、过硼酸钠四水合物和碳酸钠过氧化氢合物，以及过羧酸如苯二酰亚氨基过己酸。
合适的漂白活化物是，例如N，N，N′，N′-四乙酰基乙二胺(TAED)、对-壬酰氧苯磺酸钠和N-甲基吗啉基乙腈硫酸甲酯盐(N-methylmorpholinioacetonitrile methylsulfate)。
在洗涤组合物中优选使用的酶是蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶、氧化酶和过氧化物酶。
合适的染料传递抑制剂是1-乙烯基吡咯烷酮，1-乙烯基咪唑，4-乙烯基吡啶N-氧化物的均聚物、共聚物和接枝聚合物，或者与氯乙酸反应过的4-乙烯吡啶的均聚物和共聚物。
使用的成分的类型和量由本领域技术人员根据洗涤组合物的所需最终用途来确定。例如，漂白剂一般在强力洗涤组合物中使用，而不用于温和洗涤组合物。洗涤组合物的组成和洗涤组合物的成分的进一步详述见，例如，”Waschmittel″[Washing compositions]in R
Figure 200680028317X_4
mpp Chemie-Lexikon，在线编辑，2.6版，Georg-Thieme-Verlag，Stuttgart，New York，Febr.2005，或者″Detergents″ in Ullmann’s Encyclopedia of Industrial Chemistry，第6版，2000，Electronic Release，Wiley-VCH-Verlag，Weinheim，2000。
实施本发明的优选的表面活性剂是阴离子表面活性剂和/或非离子表面活性剂。
根据发明使用的界面活性非酶促蛋白质，特别是疏水蛋白，可以特别有利的与线性烷基苯磺酸盐或脂肪醇硫酸盐与烷基醚硫酸盐或烷基烷氧基化物的组合一起使用。
可以特别有利的使用基于C8-C18-醇和/或其烷氧基化产物的阴离子和/或非离子表面活性剂，任选的与其他表面活性剂混合。烷氧基优选的是主要包含环氧乙烷单元和/或氧化丙烯单元，优选的环氧乙烷单元。它们可以是，例如，1至25个环氧乙烷单元(优选的3至20个，且更优选的5至15个单元)的基团，或者包含环氧乙烷和氧化丙烯单元的基团，其中后者在各种情况下应该包含基于所有烷氧基单位的总数的至少50摩尔％，优选的60摩尔％的环氧乙烷单元。
优选的表面活性剂的实例包括烷氧基化C8-C18-醇，例如脂肪醇烷氧基化物、羰基合成醇烷氧基化物、格尔伯特醇烷氧基化物、C8-C18-醇的硫酸盐、硫酸化烷氧基化C8-C18-醇(烷基醚硫酸盐)或线性C8-C18-烷基苯磺酸盐(LAS)，优选的线性C9-C13-烷基苯磺酸盐和C9-C13-烷基甲苯磺酸盐。
特别优选的是2-丙基庚醇和十三醇的烷氧基化产物及其硫酸酯。
洗涤组合物中的界面活性非酶促蛋白质的量是由本领域技术人员根据对洗涤组合物的所需性质判断的。在此背景中，有利的选择该量，使得在按照说明的洗涤组合物剂量的情况下，获得界面活性非酶促蛋白质的上述特定的浓度。
发现有用量是占洗涤组合物所有成分总量的0.002至2.5％(界面活性非酶促蛋白质的重量)。该量优选为从0.01至1.5％(重量)，更优选为从0.025至1.0％(重量)，甚至更优选的从0.05至0.5％(重量)，例如，0.1至0.3％(重量)。
在优选的实施方案中，发明的洗涤组合物包括0.01至1.5％(重量)的界面活性非酶促蛋白质，0.5至40％(重量)的表面活性剂，优选为阴离子和/或非离子表面活性剂，59至99.45％(重量)的其它洗涤活性添加剂或配制助剂。
使用的成分(c)可以优选的是脂肪酶和/或无定形聚合物，例如环氧乙烷-氧化丙烯嵌段共聚物。
发明的洗涤组合物可以用本领域技术人员原则上已知的方法生产。洗涤组合物的生产方法细节在，例如，上文引用过的″RmppChemie-Lexikon″或″Ullmann’s″文献中给出。
可以使用溶液的或固体的界面活性非酶促蛋白质生产洗涤组合物。固体蛋白质可以通过本领域技术人员已知的方法起始从蛋白质溶液开始获得，例如喷雾干燥或冷冻干燥。
在洗涤组合物的生产中，应该保证对界面活性非酶促蛋白质的热应力不过高。该限制当然是由蛋白质的类型所指导的。在使用疏水蛋白的情况下，已经发现不超过120℃的产物温度是有用的。过程温度(即，例如喷雾干燥器中气流的温度)当然也可以更高，条件是产物温度不超过临界极限。
向洗涤组合物中温和掺入成分的技术是本领域技术人员已知的。例如，制备粉状洗涤组合物可以通过，第一步，通过喷雾干燥从洗涤组合物的热稳定成分的含水浆中生产粗产品，将该粗产品在第二步中在温和条件下与热敏感成分混合。通常建议在上述第二步中引入根据本发明使用的界面活性非酶促蛋白质，但并没有意图将发明局限于此。
根据本发明，洗涤织物材料的方法至少包括步骤：
将待洗的织物材料和含水洗涤液填充到洗涤用具中，
对织物材料和洗涤液的混合物应用机械力，
移除含水洗涤液并任选的漂洗织物材料，干燥织物材料。
所用的洗涤用具可以是任何种类的洗衣机。但是，该术语还包括那些在手洗中通常使用的容器，例如洗澡盆或洗脸盆。在步骤(a)，洗涤用具首先用织物和含水洗涤液填充，填充顺序不重要。
以原则上已知的方式，洗涤液包括至少一种洗涤活性物质。根据本发明，含水洗涤液还包括至少一种界面活性非酶促蛋白质。已经论述过优选的蛋白质。界面活性非酶促蛋白质的添加可以通过洗涤组合物进行，或者单独进行。优选的在洗涤循环开始时进行，但是当然也可以在随后时间进行。
步骤(b)中的洗涤操作是通过机械力作用于织物材料和洗涤液的混合物而以已知方式进行的。可以通过洗衣机输入机械力，例如通过滚筒，或在手洗的情况下，通过手和/或其它辅助手段。
在洗涤操作过程中的温度由本领域技术人员根据情况选择。例如，温度可以是5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100℃。发明的特别优势非常特别体现在中温或低温洗涤的情况中。在本发明的优选实施方案中，洗涤操作在不超过60℃，尤其在不超过50℃的温度下进行。根据发明进行洗涤过程的特别有利的温度范围是5至45℃，非常特别优选的15至35℃，例如20至30℃。
在洗涤操作过程中界面活性非酶促蛋白质的浓度由本领域技术人员选择。优选的浓度范围已经在前文论述。
如果添加通过发明的洗涤组合物实现，它们通常的使用量是0.05至25g/l，优选的0.25至15g/l，更优选的0.5至10g/l，甚至更优选的1至6g/l，例如1.5至4g/l，在每种情况中基于洗涤液。
在实际的洗涤操作后，洗涤液以原则上已知的方法移除。一般的，织物材料随后通过一次或多次漂洗操作漂洗，并最终干燥(步骤(d)和(e))。在漂洗过程中，织物柔软剂(softner)可以作为添加剂使用。
根据发明的方法适合于清洁所有类型的织物材料。这些可以是织物纤维、半成品的和成品的织物及用其生产的成品衣服。这些可以是惯用的衣服织物，或者家庭纺织品，例如地毯、窗帘、桌布和作为技术目的起作用的织物结构。这些还包括不定型的结构例如羊毛状物(fleece)，线状结构例如细绳(twine)、线、纱线、线(line)、绳(string)、饰带、编织物(knit)、绳索，还有三维结构例如毡、机织织物、非机织织物和填絮。织物材料可以由天然来源的材料组成，例如棉花、羊毛或亚麻，或由合成材料组成，例如聚丙烯腈、聚酰胺或聚酯。可以理解它们还可以是混合织物，例如棉/聚酯或棉/聚酰胺。
下列实施例意在进一步举例说明本发明：
A部分：
制备和检测根据发明使用的疏水蛋白
实施例1
克隆yaad-His6/yaaE-His6的制备
借助于寡核苷酸Hal570和Hal571(Hal 572/Hal 573)进行聚合酶链式反应。使用的模版DNA是细菌枯草芽孢杆菌的基因组DNA。得到的PCR片段包括枯草芽胞杆菌yaaD/yaaE基因的编码序列，在每一端上分别都有NcoI和BglII限制性切割位点。将PCR片段纯化并用限制性内切酶NcoI和BglII切割。将该DNA片段用作插入片段并克隆到Qiagen的载体pQE60中，所述载体已经用限制性内切酶NcoI和BglII预先线性化。因此形成的载体pQE60YAAD#2/pQE60YaaE#5可以用于表达由YAAD::HIS6或YAAE::HIS6组成的蛋白质。
Hal570：gcgcgcccatggctcaaacaggtactga
Hal571：gcagatctccagccgcgttcttgcatac
Hal572：ggccatgggattaacaataggtgtactagg
Hal573：gcagatcttacaagtgccttttgcttatattcc
实施例2
yaad疏水蛋白DewA-His6的克隆
借助于寡核苷酸KaM 416和KaM 417进行聚合酶链式反应。使用的模版DNA是霉菌构巢曲霉的基因组DNA。得到的PCR片段包括疏水蛋白基因dewA的编码序列以及N端的因子Xa蛋白酶切割位点。将PCR片段纯化并用限制性内切酶BamHI切割。将该DNA片段用作插入片段并克隆到已经用限制性内切酶BglII预先线性化的载体pQE60YAAD#2中。
由此形成的载体#508可以用于表达由YAAD::Xa::dewA::HIS6组成的融合蛋白。
KaM416：GCAGCCCATCAGGGATCCCTCAGCCTTGGTACCAGCGC
KaM417：CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCAT-
GAAGTTCTCCGTCTCCGC
实施例3
yaad疏水蛋白RodA-His6的克隆
使用寡核苷酸KaM 434和KaM 435，与质粒#508类似的克隆质粒#513。
KaM434：GCTAAGCGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCATTGCTGC
KaM435：CCAATGGGGATCCGAGGATGGAGCCAAGGG
实施例4
yaad疏水蛋白HypA-His6的克隆
在pQE60(#522)中HypA的克隆
使用寡核苷酸KaM449/KaM450进行PCR。使用的模版DNA是Nadicom生产的质粒pCR2.1中的HypA。得到的片段包括疏水蛋白HypA基因的没有起始和终止密码子的编码序列。将PCR片段用凝胶电泳纯化并用限制性内切酶NcoI和BamHI切割。将该片段用作插入片段并连接到用NcoI和BgIII预先切割的载体pQE60中。
KaM449：GTTACCCCATGGCGATCTCTCGCGTCCTTGTCGCT
KaM450：GCCTGAGGATCCGAGGTTGACATTGACAGGAGAGC
Figure S200680028317XD00241
在pQE60+YAAD(#523)中的HypA的克隆
用寡核苷酸KaM451/KaM452进行PCR。使用的模版DNA是Nadicom生产的质粒pCR2.1中的HypA。得到的片段包括疏水蛋白HypA基因的没有起始和终止密码子的编码序列。将PCR片段用凝胶电泳纯化并用限制性内切酶BglII和BamHI切割。将该片段用作插入片段并连接到已经用BglII预先切割的载体pQE60+YAAD中。
KaM451：CGTAGTAGATCTATGATCTCTCGCGTCCTTGTCGCTGC
KaM452：CGACTAGGATCCGAGGTTGACATTGACAGGAGAGC
Figure S200680028317XD00251
实施例5
yaad疏水蛋白HypA-His6的克隆
在pQE60(#524)中的HypB的克隆
用寡核苷酸KaM453/KaM454进行PCR。使用的模版DNA是Nadicom生产的质粒puC19中的HypB。得到的片段包括疏水蛋白HypB基因的没有起始和终止密码子的编码序列。将PCR片段用凝胶电泳纯化并用限制性内切酶NcoI和BamHI切割。将该片段用作插入片段并连接到已经用NcoI和BglII预先切割的载体pQE60中。
KaM453：GCTTATCCATGGCGGTCAGCACGTTCATCACTGTCG
KaM454：GCTATAGGATCCCACATTGGCATTAATGGGAGTGC
Figure S200680028317XD00261
pQE60+YAAD(#525)中的HypB的克隆
用寡核苷酸KaM455/KaM456进行PCR。使用的模版DNA是Nadicom生产的质粒puc19中的HypB。得到的片段包括疏水蛋白HypB基因的没有起始和终止密码子的编码序列。将PCR片段用凝胶电泳纯化并用限制性内切酶BglII和BamHI切割。将该片段用作插入片段并连接到已经用BglII预先切割的载体pQE60+YAAD中。
KaM455：GCTAACAGATCTATGGTCAGCACGTTCATCACTGTC
KaM456：CTATGAGGATCCCACATTGGCATTAATGGGAGTGC
实施例6
yaad疏水蛋白BASF1-His6的克隆
使用寡核苷酸KaM 417和KaM 418，与质粒#508类似的克隆质粒#507。
使用的模版DNA是合成的DNA序列-疏水蛋白BASF1(见附录)。
KaM417：CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCAT-
GAAGTTCTCCGTCTCCGC
KaM418：CTGCCATTCAGGGGATCCCATATGGAGGAGGGAGACAG
实施例7
yaad疏水蛋白BASF2-His6的克隆
使用寡核苷酸KaM 417和KaM 418，与质粒#508类似的克隆质粒#506，。
使用的模版DNA是合成的DNA序列-疏水蛋白BASF2(见附录)。
KaM417：CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCAT-
GAAGTTCTCCGTCTCCGC
KaM418：CTGCCATTCAGGGGATCCCATATGGAGGAGGGAGACAG
实施例8
yaad疏水蛋白SC3-His6的克隆
使用寡核苷酸KaM 464和KaM 465，与质粒#508类似的克隆质粒#526。
使用的模版DNA是来自裂褶菌的cDNA(见附录)。
KaM464：CGTTAAGGATCCGAGGATGTTGATGGGGGTGC
KaM465：GCTAACAGATCTATGTTCGCCCGTCTCCCCGTCGT
实施例9
重组大肠杆菌菌株yaad疏水蛋白DewA-His6的发酵
用表达yaad疏水蛋白DewA-His6的大肠杆菌菌株在15ml Greiner管中接种3ml LB液体培养基。在200转/分钟摇动器上，37℃孵育8小时。在每种情形下，用1ml预培养物分别接种两个带挡板的1l锥形瓶和250mlLB培养基(+100μg/ml氨苄青霉素)，并在180转/分钟摇动器上37℃孵育9小时。
在20 l发酵罐中用0.5 l预培养物(OD600nm 1∶10，对H2O测量的)接种13.5l LB培养基(+100μg/ml氨苄青霉素)。在OD60nm约3.5时，加入140ml100mM IPTG。3小时后，冷却发酵罐到10℃并离心去掉发酵肉汤。使用细胞粒状沉淀进行进一步的纯化。
实施例10
重组疏水蛋白融合蛋白的纯化
(带有C端His6标签的疏水蛋白融合蛋白的纯化)
100g细胞粒状沉淀(100-500mg疏水蛋白)加入50mM pH7.5的磷酸钠缓冲液至总体积200ml，并且重悬。悬液用Ultraturrax型T25(Janke和Kunkel；IKA-Labortechnik)处理10分钟，然后与500单位的Benzonase(Merck，Darmstadt；货号：1.01697.0001)一起在室温下孵育1小时，以降解核酸。在细胞破坏前，用玻璃柱(cartridge)(P1)实现过滤。为了破坏细胞和剪切剩余的基因组DNA，在1500bar(Microfluidizer M-110EH；Microfluidics Corp.)进行两个匀浆器循环。离心匀浆(Sorvall RC-5B、GSA转子、250ml离心杯、60分钟、4℃、12000转/分钟、23000g)，将上清液放置在冰上并且将粒状沉淀重悬在100ml pH7.5的磷酸钠缓冲液中。离心和重悬重复3次，在第三次重复中磷酸钠缓冲液包含1％的SDS。重悬后，将混合物搅拌1小时并进行最终离心(Sorvall RC-5B，GSA转子，250ml离心杯，60分钟，4℃，12 000转/分钟，23 000g)。根据SDS-PAGE分析，在最终离心后疏水蛋白存在于上清液中(图1)。实验显示了疏水蛋白可能以内含体的形式存在于相应的大肠杆菌细胞中。将50ml含有疏水蛋白的上清液用于50ml镍琼脂糖高精确性(nickel Sepharose High Performance)17-5268-02柱(Amersham)上，所述柱已经用50mM Tris-ClpH 8.0缓冲液平衡。用50mM Tris-Cl pH 8.0缓冲液洗涤柱子，然后用含有200mM咪唑的50mM Tris-Cl pH 8.0缓冲液洗脱疏水蛋白。为了移除掉咪唑，溶液用50mM Tris-Cl pH 8.0缓冲液透析。
图1显示了制备的疏水蛋白的纯化：
泳道1：应用于镍-琼脂糖柱(1∶10稀释)
泳道2：流通液(Flow-through)＝洗涤步骤洗脱物
泳道3-5：OD 280最大值的分级级分
图1的疏水蛋白分子量是约53kD。一些更小的条带代表疏水蛋白的降解产物。
实施例11
性能检测；通过水滴在玻璃上的接触角改变表征疏水蛋白
底物：玻璃(窗玻璃，Siiddeutsche Glas，Mannheim)
使用实施例10中的融合疏水蛋白。
疏水蛋白浓度：在水溶液中100μg/ml；添加剂：50mM乙酸钠pH 4+0.1％聚氧乙烯(20)-失水山梨糖醇单月桂酸酯(Tween
Figure 200680028317X_6
20)。
-孵育玻璃板过夜(温度80℃)，然后在蒸馏水中洗涤包被，
-然后孵育10分钟/80℃/在蒸馏水中的1％十二烷基硫酸钠(SDS)溶液，
-在蒸馏水中洗涤
样品在空气中干燥，在室温下测定5μl水的水滴的接触角(以角度)。
在Dataphysics OCA 15+接触角系统上、软件SCA 20.2.0.(2002年11月)测量接触角。测量是根据制造商的说明实现的。
未处理的玻璃产生的接触角是30±5°；用根据实施例8的功能性疏水蛋白(yaad-dewA-his6)包被的玻璃产生的接触角为75±5°。
B部分：
界面活性非酶促蛋白质用于织物洗涤的应用
一般检测描述：
为了检测作用，在商业购买的检测装置(Launder-o-meter，，来自Atlas，美国)中进行洗涤检测。在洗涤液中添加和未添加蛋白质的各种情况下进行检测。
检测使用了可商业购买的检测织物和家庭产生的检测织物。
Figure 200680028317XA00800011
7 - 棉布上为染色的油酸甘油酯     家庭自产
8 - 棉布上为染色的橄榄油     家庭自产
洗涤检测的实施：
从上述每种检测织物上截下30×30mm的片，并缝在编织的未染色的漂白棉布上。
对于商业的检测织物的情形中，每种情形中将2条(50mm×200mm)与5g白色棉/聚酯混合织物一起在给定条件下洗涤，所述白色棉/聚酯混合织物上带有4块(对于织物1-4)(每种情形中)，或2块(在织物5和6的情形中)(每种情形中)不同的缝好的检测织物。
在自产的检测织物的情形中， 在0.1g染色的脂肪或油的每个情形中的2个污点滴在棉条上(50mm×200mm编织的未染色的漂白棉布)，并在50℃处理30分钟。用苏丹红染色。
在洗涤后，织物在250ml自来水中漂洗5分钟，然后干燥。
通过洗涤前后在420nm处的反射度测量评估洗涤作用。
每种情况进行一次添加界面活性非酶促蛋白质的检测，以及在相当的条件下，进行没有此类添加剂但条件完全相同的检测。
在结果表格中列出的百分比表明，与没有蛋白质添加的检测相比，有蛋白质添加的检测中洗涤作用增加，根据下列公式计算：
洗涤作用的增加[％]＝(IE-I0E)/(I白-IA)×100
在各种情况下，IE在此表示检测织物在检测洗涤后的反射度，IA表示在检测洗涤进行前的反射度。0表示没有添加发明的蛋白质的比较检测。I白表示没有着色的干净织物的反射度。
在添加和未添加蛋白质检测的各种情况中，污垢的再沉积也相应的通过比较没有着色的干净白色织物在洗涤前后的反射度来评估。
实施例12
检测参数：
使用的蛋白质      疏水蛋白融合蛋白质yaad-Xa-dew
                  A-his(SEQ ID NO：19)
蛋白质的浓度：    见表1
洗涤组合物        可商业购买的粉状洗涤组合物
                  (White Cat(白猫)，中国，2003)
洗涤液的量        每罐250ml
洗涤组合物的剂    2.0g/l
量
液体比例          20∶1
水硬度            2.5mmol/l(摩尔Ca∶Mg比＝3∶1)
洗涤温度          25℃
洗涤时间          30分钟
蛋白质作为稀释水溶液添加。根据上文给出的一般描述进行并评估检测洗涤。结果汇集在表1中。
实施例13
检测参数：
使用的蛋白质    疏水蛋白融合蛋白质yaad-Xa-dew
                A-his(SEQ ID NO：19)
蛋白质的浓度：见表1
洗涤组合物       可商业购买的粉状洗涤组合物
                 (Ariel，中国，2004，来自Procter&
                 Gamble)
洗涤液的量       每罐250ml
洗涤组合物的剂   2.0g/l
量
液体比例          20∶1
水硬度            2.5mmol/l(摩尔比Ca∶Mg＝3∶1)
洗涤温度          25℃
洗涤时间          30分钟
根据上文给出的一般描述进行并评估检测洗涤。结果汇集在表1中。
表1：检测洗涤的结果
Figure 200680028317XA00800022
在所有检测中，都实现了洗涤作用的显著增强。
实施例14：
对于下列检测洗涤，每种情况下使用由阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂和助洗剂组成的洗涤组合物的模式配方。
检测参数：
使用的蛋白质      疏水蛋白融合蛋白yaad40-Xa-dew
                  A-his(SEQ ID NO：26)
蛋白质的浓度  见表2
阴离子表面活性               400ppm的C12/14-脂肪醇硫酸钠剂
非离子辅助表面               在每种情况下30ppm的C13/15-羰基
活性剂                       合成醇乙氧基化物，烷氧基(alkoxylate
                             radical)类型见表2
助洗剂                       250ppm的碳酸钠
洗涤液的量                   每罐250ml
液体比例                     20∶1
水硬度                       2.5mmol/l(摩尔比Ca∶Mg＝3∶1)
洗涤温度                     25℃
洗涤时间                     30分钟
根据上文给出的一般描述进行并评估检测洗涤。结果汇集在表2中。
Figure 200680028317XA00800032
Figure 200680028317XA00800041
表2检测洗涤的结果
EO＝环氧乙烷，PO＝氧化丙烯
实施例15
对于下列洗涤检测，各种情况中使用由阴离子表面活性剂，非离子表面活性剂和助洗剂组成的洗涤组合物的模式配方。
检测参数：
使用的蛋白质           蛋白质A：
                       疏水蛋白融合蛋白质yaad-Xa-dew
                       A-his(SEQ ID NO：19)
                       蛋白质B：
                       疏水蛋白融合蛋白质yaad40-Xa-dew
                       A-his(SEQ ID NO：26)
蛋白质浓度：           见表3
阴离子表面活性         400ppm的N-十二烷基苯磺酸钠剂
辅助表面活性剂                在各种情况下30ppm，类型见表3
助洗剂                        250ppm的碳酸钠
洗涤液的量                    每罐250ml
液体比例                      20∶1
水硬度                        2.5mmol/l(摩尔比Ca∶Mg＝3∶1)
洗涤温度                      25℃
洗涤时间                     30分钟
根据上文给出的一般描述进行并评估检测洗涤。结果总结在表3中。
Figure 200680028317XA00800052
表3检测洗涤的结果
EO＝环氧乙烷，PO＝氧化丙烯
在所有的检测中，每种情形中都实现了洗涤作用的增强。在每种情形中，带有截短的yaad融合配偶体(B)(40个氨基酸)的融合疏水蛋白比带有全长yaad融合配偶体(294个氨基酸)的融合疏水蛋白(A)获得了更好的结果。
序列表中DNA和多肽序列的序列名称的排列
Figure 200680028317XA00800071
序列表
<110>巴斯福股份公司(BASF Aktiengesellschaft)
<120>表面活性非酶促性蛋白质用于织物洗涤的应用
<130>PF 56973
<150>DE 10 2005 036 586.8
<151>01/08/2005
<160>26
<170>PatentIn版本3.1
<210>SEQ ID NO：1
<211>405
<212>DNA
<213>构巢曲霉(Aspergillus nidulans)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(405)
<223>
<400>1
atg cgc ttc atc gtc tct ctc ctc gcc ttc act gcc gcg gcc acc gcg    48
Met Arg Phe Ile Val Ser Leu Leu Ala Phe Thr Ala Ala Ala Thr Ala
1               5                   10                  15
acc gcc ctc ccg gcc tct gcc gca aag aac gcg aag ctg gcc acc tcg    96
Thr Ala Leu Pro Ala Ser Ala Ala Lys Asn Ala Lys Leu Ala Thr Ser
            20                  25                  30
gcg gcc ttc gcc aag cag gct gaa ggc acc acc tgc aat gtc ggc tcg    144
Ala Ala Phe Ala Lys Gln Ala Glu Gly Thr Thr Cys Asn Val Gly Ser
        35                  40                  45
atc gct tgc tgc aac tcc ccc gct gag acc aac aac gac agt ctg ttg    192
Ile Ala Cys Cys Asn Ser Pro Ala Glu Thr Asn Asn Asp Ser Leu Leu
    50                  55                  60
agc ggt ctg ctc ggt gct ggc ctt ctc aac ggg ctc tcg ggc aac act    240
Ser Gly Leu Leu Gly Ala Gly Leu Leu Asn Gly Leu Ser Gly Asn Thr
65                  70                  75                  80
ggc agc gcc tgc gcc aag gcg agc ttg att gac cag ctg ggt ctg ctc    288
Gly Ser Ala Cys Ala Lys Ala Ser Leu Ile Asp Gln Leu Gly Leu Leu
                85                  90                  95
gct ctc gtc gac cac act gag gaa ggc ccc gtc tgc aag aac atc gtc    336
Ala Leu Val Asp His Thr Glu Glu Gly Pro Val Cys Lys Asn Ile Val
            100                 105                 110
gct tgc tgc cct gag gga acc acc aac tgt gtt gcc gtc gac aac gct    384
Ala Cys Cys Pro Glu Gly Thr Thr Asn Cys Val Ala Val Asp Asn Ala
        115                 120                 125
ggc gct ggt acc aag gct gag                                        405
Gly Ala Gly Thr Lys Ala Glu
    130                 135
<210>SEQ ID NO：2
<211>135
<212>PRT
<213>构巢曲霉
<400>2
Met Arg Phe Ile Val Ser Leu Leu Ala Phe Thr Ala Ala Ala Thr Ala
1               5                   10                  15
Thr Ala Leu Pro Ala Ser Ala Ala Lys Asn Ala Lys Leu Ala Thr Ser
            20                  25                  30
Ala Ala Phe Ala Lys Gln Ala Glu Gly Thr Thr Cys Asn Val Gly Ser
        35                  40                  45
Ile Ala Cys Cys Asn Ser Pro Ala Glu Thr Asn Asn Asp Ser Leu Leu
    50                  55                  60
Ser Gly Leu Leu Gly Ala Gly Leu Leu Asn Gly Leu Ser Gly Asn Thr
65                  70                  75                  80
Gly Ser Ala Cys Ala Lys Ala Ser Leu Ile Asp Gln Leu Gly Leu Leu
                85                  90                  95
Ala Leu Val Asp His Thr Glu Glu Gly Pro Val Cys Lys Asn Ile Val
            100                 105                 110
Ala Cys Cys Pro Glu Gly Thr Thr Asn Cys Val Ala Val Asp Asn Ala
        115                 120                 125
Gly Ala Gly Thr Lys Ala Glu
    130                 135
<210>SEQ ID NO：3
<211>471
<212>DNA
<213>构巢曲霉
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(471)
<223>
<400>3
atg aag ttc tcc att gct gcc gct gtc gtt gct ttc gcc gcc tcc gtc    48
Met Lys Phe Ser Ile Ala Ala Ala Val Val Ala Phe Ala Ala Ser Val
1               5                   10                  15
gcg gcc ctc cct cct gcc cat gat tcc cag ttc gct ggc aat ggt gtt    96
Ala Ala Leu Pro Pro Ala His Asp Ser Gln Phe Ala Gly Asn Gly Val
            20                  25                  30
ggc aac aag ggc aac agc aac gtc aag ttc cct gtc ccc gaa aac gtg    144
Gly Asn Lys Gly Asn Ser Asn Val Lys Phe Pro Val Pro Glu Asn Val
        35                  40                  45
acc gtc aag cag gcc tcc gac aag tgc ggt gac cag gcc cag ctc tct    192
Thr Val Lys Gln Ala Ser Asp Lys Cys Gly Asp Gln Ala Gln Leu Ser
    50                  55                  60
tgc tgc aac aag gcc acg tac gcc ggt gac acc aca acc gtt gat gag    240
Cys Cys Asn Lys Ala Thr Tyr Ala Gly Asp Thr Thr Thr Val Asp Glu
65                  70                  75                  80
ggt ctt ctg tct ggt gcc ctc agc ggc ctc atc ggc gcc ggg tct ggt    288
Gly Leu Leu Ser Gly Ala Leu Ser Gly Leu Ile Gly Ala Gly Ser Gly
                85                  90                  95
gcc gaa ggt ctt ggt ctc ttc gat cag tgc tcc aag ctt gat gtt gct    336
Ala Glu Gly Leu Gly Leu Phe Asp Gln Cys Ser Lys Leu Asp Val Ala
            100                 105                 110
gtc ctc att ggc atc caa gat ctt gtc aac cag aag tgc aag caa aac    384
Val Leu Ile Gly Ile Gln Asp Leu Val Asn Gln Lys Cys Lys Gln Asn
        115                 120                 125
att gcc tgc tgc cag aac tcc ccc tcc agc gcg gat ggc aac ctt att    432
Ile Ala Cys Cys Gln Asn Ser Pro Ser Ser Ala Asp Gly Asn Leu Ile
    130                 135                 140
ggt gtc ggt ctc cct tgc gtt gcc ctt ggc tcc atc ctc                471
Gly Val Gly Leu Pro Cys Val Ala Leu Gly Ser Ile Leu
145                 150                 155
<210>SEQ ID NO：4
<211>157
<212>PRT
<213>构巢曲霉
<400>4
Met Lys Phe Ser Ile Ala Ala Ala Val Val Ala Phe Ala Ala Ser Val
1               5                   10                  15
Ala Ala Leu Pro Pro Ala His Asp Ser Gln Phe Ala Gly Asn Gly Val
            20                  25                  30
Gly Asn Lys Gly Asn Ser Asn Val Lys Phe Pro Val Pro Glu Asn Val
        35                  40                  45
Thr Val Lys Gln Ala Ser Asp Lys Cys Gly Asp Gln Ala Gln Leu Ser
    50                  55                  60
Cys Cys Asn Lys Ala Thr Tyr Ala Gly Asp Thr Thr Thr Val Asp Glu
65                  70                  75                  80
Gly Leu Leu Ser Gly Ala Leu Ser Gly Leu Ile Gly Ala Gly Ser Gly
                85                  90                  95
Ala Glu Gly Leu Gly Leu Phe Asp Gln Cys Ser Lys Leu Asp Val Ala
            100                 105                 110
Val Leu Ile Gly Ile Gln Asp Leu Val Asn Gln Lys Cys Lys Gln Asn
        115                 120                 125
Ile Ala Cys Cys Gln Asn Ser Pro Ser Ser Ala Asp Gly Asn Leu Ile
    130                 135                 140
Gly Val Gly Leu Pro Cys Val Ala Leu Gly Ser Ile Leu
145                 150                 155
<210>SEQ ID NO：5
<211>336
<212>DNA
<213>二孢蘑菇(Agaricus bisporus)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(336)
<223>
<400>5
atg atc tct cgc gtc ctt gtc gct gct ctc gtc gct ctc ccc gct ctt    48
Met Ile Ser Arg Val Leu Val Ala Ala Leu Val Ala Leu Pro Ala Leu
1               5                   10                  15
gtt act gca act cct gct ccc gga aag cct aaa gcc agc agt cag tgc    96
Val Thr Ala Thr Pro Ala Pro Gly Lys Pro Lys Ala Ser Ser Gln Cys
            20                  25                  30
gac gtc ggt gaa atc cat tgc tgt gac act cag cag act ccc gac cac    144
Asp Val Gly Glu Ile His Cys Cys Asp Thr Gln Gln Thr Pro Asp His
        35                  40                  45
acc agc gcc gcc gcg tct ggt ttg ctt ggt gtt ccc atc aac ctt ggt    192
Thr Ser Ala Ala Ala Ser Gly Leu Leu Gly Val Pro Ile Asn Leu Gly
    50                  55                  60
gct ttc ctc ggt ttc gac tgt acc ccc att tcc gtc ctt ggc gtc ggt    240
Ala Phe Leu Gly Phe Asp Cys Thr Pro Ile Ser Val Leu Gly Val Gly
65                  70                  75                  80
ggc aac aac tgt gct gct cag cct gtc tgc tgc aca gga aat caa ttc    288
Gly Asn Asn Cys Ala Ala Gln Pro Val Cys Cys Thr Gly Asn Gln Phe
                85                  90                  95
acc gca ttg att aac gct ctt gac tgc tct cct gtc aat gtc aac ctc    336
Thr Ala Leu Ile Asn Ala Leu Asp Cys Ser Pro Val Asn Val Asn Leu
            100                 105                 110
<210>SEQ ID NO：6
<211>112
<212>PRT
<213>二孢蘑菇
<400>6
Met Ile Ser Arg Val Leu Val Ala Ala Leu Val Ala Leu Pro Ala Leu
1               5                   10                  15
Val Thr Ala Thr Pro Ala Pro Gly Lys Pro Lys Ala Ser Ser Gln Cys
            20                  25                  30
Asp Val Gly Glu Ile His Cys Cys Asp Thr Gln Gln Thr Pro Asp His
        35                  40                  45
Thr Ser Ala Ala Ala Ser Gly Leu Leu Gly Val Pro Ile Asn Leu Gly
    50                  55                  60
Ala Phe Leu Gly Phe Asp Cys Thr Pro Ile Ser Val Leu Gly Val Gly
65                  70                  75                  80
Gly Asn Asn Cys Ala Ala Gln Pro Val Cys Cys Thr Gly Asn Gln Phe
                85                  90                  95
Thr Ala Leu Ile Asn Ala Leu Asp Cys Ser Pro Val Asn Val Asn Leu
            100                 105                 110
<210>SEQ ID NO：7
<211>357
<212>DNA
<213>二孢蘑菇
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(357)
<223>
<400>7
atg gtc agc acg ttc atc act gtc gca aag acc ctt ctc gtc gcg ctc    48
Met Val Ser Thr Phe Ile Thr Val Ala Lys Thr Leu Leu Val Ala Leu
1               5                   10                  15
ctc ttc gtc aat atc aat atc gtc gtt ggt act gca act acc ggc aag    96
Leu Phe Val Asn Ile Asn Ile Val Val Gly Thr Ala Thr Thr Gly Lys
            20                  25                  30
cat tgt agc acc ggt cct atc gag tgc tgc aag cag gtc atg gat tct    144
His Cys Ser Thr Gly Pro Ile Glu Cys Cys Lys Gln Val Met Asp Ser
        35                  40                  45
aag agc cct cag gct acg gag ctt ctt acg aag aat ggc ctt ggc ctg    192
Lys Ser Pro Gln Ala Thr Glu Leu Leu Thr Lys Asn Gly Leu Gly Leu
    50                  55                  60
ggt gtc ctt gct ggc gtg aag ggt ctt gtt ggc gcg aat tgc agc cct    240
Gly Val Leu Ala Gly Val Lys Gly Leu Val Gly Ala Asn Cys Ser Pro
65                  70                  75                  80
atc acg gca att ggt att ggc tcc ggc agc caa tgc tct ggc cag acc    288
Ile Thr Ala Ile Gly Ile Gly Ser Gly Ser Gln Cys Ser Gly Gln Thr
                85                  90                  95
gtt tgc tgc cag aat aat aat ttc aac ggt gtt gtc gct att ggt tgc    336
Val Cys Cys Gln Asn Asn Asn Phe Asn Gly Val Val Ala Ile Gly Cys
            100                 105                 110
act ccc att aat gcc aat gtg                                        357
Thr Pro Ile Asn Ala Asn Val
        115
<210>SEQ ID NO：8
<211>119
<212>PRT
<213>二孢蘑菇
<400>8
Met Val Ser Thr Phe Ile Thr Val Ala Lys Thr Leu Leu Val Ala Leu
1               5                   10                  15
Leu Phe Val Asn Ile Asn Ile Val Val Gly Thr Ala Thr Thr Gly Lys
            20                  25                  30
His Cys Ser Thr Gly Pro Ile Glu Cys Cys Lys Gln Val Met Asp Ser
        35                  40                  45
Lys Ser Pro Gln Ala Thr Glu Leu Leu Thr Lys Asn Gly Leu Gly Leu
    50                  55                  60
Gly Val Leu Ala Gly Val Lys Gly Leu Val Gly Ala Asn Cys Ser Pro
65                  70                  75                  80
Ile Thr Ala Ile Gly Ile Gly Ser Gly Ser Gln Cys Ser Gly Gln Thr
                85                  90                  95
Val Cys Cys Gln Asn Asn Asn Phe Asn Gly Val Val Ala Ile Gly Cys
            100                 105                 110
Thr Pro Ile Asn Ala Asn Val
        115
<210>SEQ ID NO：9
<211>408
<212>DNA
<213>裂褶菌(Schizophyllum commune)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(408)
<223>
<400>9
atg ttc gcc cgt ctc ccc gtc gtg ttc ctc tac gcc ttc gtc gcg ttc    48
Met Phe Ala Arg Leu Pro Val Val Phe Leu Tyr Ala Phe Val Ala Phe
1               5                   10                  15
ggc gcc ctc gtc gct gcc ctc cca ggt ggc cac ccg ggc acg acc acg    96
Gly Ala Leu Val Ala Ala Leu Pro Gly Gly His Pro Gly Thr Thr Thr
            20                  25                  30
ccg ccg gtt acg acg acg gtg acg gtg acc acg ccg ccc tcg acg acg    144
Pro Pro Val Thr Thr Thr Val Thr Val Thr Thr Pro Pro Ser Thr Thr
        35                  40                  45
acc atc gcc gcc ggt ggc acg tgt act acg ggg tcg ctc tct tgc tgc    192
Thr Ile Ala Ala Gly Gly Thr Cys Thr Thr Gly Ser Leu Ser Cys Cys
    50                  55                  60
aac cag gtt caa tcg gcg agc agc agc cct gtt acc gcc ctc ctc ggc    240
Asn Gln Val Gln Ser Ala Ser Ser Ser Pro Val Thr Ala Leu Leu Gly
65                  70                  75                  80
ctg ctc ggc att gtc ctc agc gac ctc aac gtt ctc gtt ggc atc agc    288
Leu Leu Gly Ile Val Leu Ser Asp Leu Asn Val Leu Val Gly Ile Ser
                85                  90                  95
tgc tct ccc ctc act gtc atc ggt gtc gga ggc agc ggc tgt tcg gcg    336
Cys Ser Pro Leu Thr Val Ile Gly Val Gly Gly Ser Gly Cys Ser Ala
            100                 105                 110
cag acc gtc tgc tgc gaa aac acc caa ttc aac ggg ctg atc aac atc    384
Gln Thr Val Cys Cys Glu Asn Thr Gln Phe Asn Gly Leu Ile Asn Ile
        115                 120                 125
ggt tgc acc ccc atc aac atc ctc                                    408
Gly Cys Thr Pro Ile Asn Ile Leu
    130                 135
<210>SEQ ID NO：10
<211>136
<212>PRT
<213>裂褶菌
<400>10
Met Phe Ala Arg Leu Pro Val Val Phe Leu Tyr Ala Phe Val Ala Phe
1               5                   10                  15
Gly Ala Leu Val Ala Ala Leu Pro Gly Gly His Pro Gly Thr Thr Thr
            20                  25                  30
Pro Pro Val Thr Thr Thr Val Thr Val Thr Thr Pro Pro Ser Thr Thr
        35                  40                  45
Thr Ile Ala Ala Gly Gly Thr Cys Thr Thr Gly Ser Leu Ser Cys Cys
    50                  55                  60
Asn Gln Val Gln Ser Ala Ser Ser Ser Pro Val Thr Ala Leu Leu Gly
65                  70                  75                  80
Leu Leu Gly Ile Val Leu Ser Asp Leu Asn Val Leu Val Gly Ile Ser
                85                  90                  95
Cys Ser Pro Leu Thr Val Ile Gly Val Gly Gly Ser Gly Cys Ser Ala
            100                 105                 110
Gln Thr Val Cys Cys Glu Asn Thr Gln Phe Asn Gly Leu Ile Asn Ile
        115                 120                 125
Gly Cys Thr Pro Ile Asn Ile Leu
    130                 135
<210>SEQ ID NO：11
<211>483
<212>DNA
<213>人工序列
<220>CDS
<221>CDS
<222>(1)..(483)
<223>具有特征性半胱氨酸模式的人工疏水蛋白序列
<400>11
atg aag ttc tcc gtc tcc gcc gcc gtc ctc gcc ttc gcc gcc tcc gtc    48
Met Lys Phe Ser Val Ser Ala Ala Val Leu Ala Phe Ala Ala Ser Val
1               5                   10                  15
gcc gcc ctc cct cag cac gac tcc gcc gcc ggc aac ggc aac ggc gtc    96
Ala Ala Leu Pro Gln His Asp Ser Ala Ala Gly Asn Gly Asn Gly Val
            20                  25                  30
ggc aac aag ttc cct gtc cct gac gac gtc acc gtc aag cag gcc acc    144
Gly Asn Lys Phe Pro Val Pro Asp Asp Val Thr Val Lys Gln Ala Thr
        35                  40                  45
gac aag tgc ggc gac cag gcc cag ctc tcc tgc tgc aac aag gcc acc    192
Asp Lys Cys Gly Asp Gln Ala Gln Leu Ser Cys Cys Asn Lys Ala Thr
    50                  55                  60
tac gcc ggc gac gtc ctc acc gac atc gac gag ggc atc ctc gcc ggc    240
Tyr Ala Gly Asp Val Leu Thr Asp Ile Asp Glu Gly Ile Leu Ala Gly
65                  70                  75                  80
ctc ctc aag aac ctc atc ggc ggc ggc tcc ggc tcc gag ggc ctc ggc    288
Leu Leu Lys Ash Leu Ile Gly Gly Gly Ser Gly Ser Glu Gly Leu Gly
                85                  90                  95
ctc ttc gac cag tgc gtc aag ctc gac ctc cag atc tcc gtc atc ggc    336
Leu Phe Asp Gln Cys Val Lys Leu Asp Leu Gln Ile Ser Val Ile Gly
            100                 105                 110
atc cct atc cag gac ctc ctc aac cag gtc aac aag cag tgc aag cag    384
Ile Pro Ile Gln Asp Leu Leu Asn Gln Val Asn Lys Gln Cys Lys Gln
        115                 120                 125
aac atc gcc tgc tgc cag aac tcc cct tcc gac gcc acc ggc tcc ctc    432
Asn Ile Ala Cys Cys Gln Asn Ser Pro Ser Asp Ala Thr Gly Ser Leu
    130                 135                 140
gtc aac ctc ggc ctc ggc aac cct tgc atc cct gtc tcc ctc ctc cat    480
Val Asn Leu Gly Leu Gly Asn Pro Cys Ile Pro Val Ser Leu Leu His
145                 150                 155                 160
atg                                                                483
Met
<210>SEQ ID NO：12
<211>161
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>具有特征性半胱氨酸模式的人工疏水蛋白序列
<400>12
Met Lys Phe Ser Val Ser Ala Ala Val Leu Ala Phe Ala Ala Ser Val
1               5                   10                  15
Ala Ala Leu Pro Gln His Asp Ser Ala Ala Gly Asn Gly Asn Gly Val
            20                  25                  30
Gly Asn Lys Phe Pro Val Pro Asp Asp Val Thr Val Lys Gln Ala Thr
        35                  40                  45
Asp Lys Cys Gly Asp Gln Ala Gln Leu Ser Cys Cys Asn Lys Ala Thr
    50                  55                  60
Tyr Ala Gly Asp Val Leu Thr Asp Ile Asp Glu Gly Ile Leu Ala Gly
65                  70                  75                  80
Leu Leu Lys Asn Leu Ile Gly Gly Gly Ser Gly Ser Glu Gly Leu Gly
                85                  90                  95
Leu Phe Asp Gln Cys Val Lys Leu Asp Leu Gln Ile Ser Val Ile Gly
            100                 105                 110
Ile Pro Ile Gln Asp Leu Leu Asn Gln Val Asn Lys Gln Cys Lys Gln
        115                 120                 125
Asn Ile Ala Cys Cys Gln Asn Ser Pro Ser Asp Ala Thr Gly Ser Leu
    130                 135                 140
Val Asn Leu Gly Leu Gly Asn Pro Cys Ile Pro Val Ser Leu Leu His
145                 150                 155                 160
Met
<210>SEQ ID NO：13
<211>465
<212>DNA
<213>人工序列
<220>CDS
<221>CDS
<222>(1)..(465)
<223>具有特征性半胱氨酸模式的人工疏水蛋白序列
<400>13
atg aag ttc tcc gtc tcc gcc gcc gtc ctc gcc ttc gcc gcc tcc gtc    48
Met Lys Phe Ser Val Ser Ala Ala Val Leu Ala Phe Ala Ala Ser Val
1               5                   10                  15
gcc gcc ctc cct cag cac gac tcc gcc gcc ggc aac ggc aac ggc gtc    96
Ala Ala Leu Pro Gln His Asp Ser Ala Ala Gly Asn Gly Asn Gly Val
            20                  25                  30
ggc aac aag ttc cct gtc cct gac gac gtc acc gtc aag cag gcc acc    144
Gly Asn Lys Phe Pro Val Pro Asp Asp Val Thr Val Lys Gln Ala Thr
        35                  40                  45
gac aag tgc ggc gac cag gcc cag ctc tcc tgc tgc aac aag gcc acc    192
Asp Lys Cys Gly Asp Gln Ala Gln Leu Ser Cys Cys Asn Lys Ala Thr
    50                  55                  60
tac gcc ggc gac gtc acc gac atc gac gag ggc atc ctc gcc ggc ctc    240
Tyr Ala Gly Asp Val Thr Asp Ile Asp Glu Gly Ile Leu Ala Gly Leu
65                  70                  75                  80
ctc aag aac ctc atc ggc ggc ggc tcc ggc tcc gag ggc ctc ggc ctc    288
Leu Lys Asn Leu Ile Gly Gly Gly Ser Gly Ser Glu Gly Leu Gly Leu
                85                  90                  95
ttc gac cag tgc gtc aag ctc gac ctc cag atc tcc gtc atc ggc atc    336
Phe Asp Gln Cys Val Lys Leu Asp Leu Gln Ile Ser Val Ile Gly Ile
            100                 105                 110
cct atc cag gac ctc ctc aac cag cag tgc aag cag aac atc gcc tgc    384
Pro Ile Gln Asp Leu Leu Asn Gln Gln Cys Lys Gln Asn Ile Ala Cys
        115                 120                 125
tgc cag aac tcc cct tcc gac gcc acc ggc tcc ctc gtc aac ctc ggc    432
Cys Gln Asn Ser Pro Ser Asp Ala Thr Gly Ser Leu Val Asn Leu Gly
    130                 135                 140
aac cct tgc atc cct gtc tcc ctc ctc cat atg    465
Asn Pro Cys Ile Pro Val Ser Leu Leu His Met
145                 150                 155
<210>SEQ ID NO：14
<211>155
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>具有特征性半胱氨酸模式的人工疏水蛋白序列
<400>14
Met Lys Phe Ser Val Ser Ala Ala Val Leu Ala Phe Ala Ala Ser Val
1               5                   10                  15
Ala Ala Leu Pro Gln His Asp Ser Ala Ala Gly Asn Gly Asn Gly Val
            20                  25                  30
Gly Asn Lys Phe Pro Val Pro Asp Asp Val Thr Val Lys Gln Ala Thr
        35                  40                  45
Asp Lys Cys Gly Asp Gln Ala Gln Leu Ser Cys Cys Asn Lys Ala Thr
    50                  55                  60
Tyr Ala Gly Asp Val Thr Asp Ile Asp Glu Gly Ile Leu Ala Gly Leu
65                  70                  75                  80
Leu Lys Asn Leu Ile Gly Gly Gly Ser Gly Ser Glu Gly Leu Gly Leu
                85                  90                  95
Phe Asp Gln Cys Val Lys Leu Asp Leu Gln Ile Ser Val Ile Gly Ile
            100                 105                 110
Pro Ile Gln Asp Leu Leu Asn Gln Gln Cys Lys Gln Asn Ile Ala Cys
        115                 120                 125
Cys Gln Asn Ser Pro Ser Asp Ala Thr Gly Ser Leu Val Asn Leu Gly
    130                 135                 140
Asn Pro Cys Ile Pro Val Ser Leu Leu His Met
145                 150                 155
<210>SEQ ID NO：15
<211>882
<212>DNA
<213>枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(882)
<223>
<400>15
atg gct caa aca ggt act gaa cgt gta aaa cgc gga atg gca gaa atg    48
Met Ala Gln Thr Gly Thr Glu Arg Val Lys Arg Gly Met Ala Glu Met
1               5                   10                  15
caa aaa ggc ggc gtc atc atg gac gtc atc aat gcg gaa caa gcg aaa    96
Gln Lys Gly Gly Val Ile Met Asp Val Ile Asn Ala Glu Gln Ala Lys
            20                  25                  30
atc gct gaa gaa gct gga gct gtc gct gta atg gcg cta gaa cgt gtg    144
Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ala Val Met Ala Leu Glu Arg Val
        35                  40                  45
cca gca gat att cgc gcg gct gga gga gtt gcc cgt atg gct gac cct    192
Pro Ala Asp Ile Arg Ala Ala Gly Gly Val Ala Arg Met Ala Asp Pro
    50                  55                  60
aca atc gtg gaa gaa gta atg aat gca gta tct atc ccg gta atg gca    240
Thr Ile Val Glu Glu Val Met Asn Ala Val Ser Ile Pro Val Met Ala
65                  70                  75                  80
aaa gcg cgt atc gga cat att gtt gaa gcg cgt gtg ctt gaa gct atg    288
Lys Ala Arg Ile Gly His Ile Val Glu Ala Arg Val Leu Glu Ala Met
                85                  90                  95
ggt gtt gac tat att gat gaa agt gaa gtt ctg acg ccg gct gac gaa    336
Gly Val Asp Tyr Ile Asp Glu Ser Glu Val Leu Thr Pro Ala Asp Glu
            100                 105                 110
gaa ttt cat tta aat aaa aat gaa tac aca gtt cct ttt gtc tgt ggc    384
Glu Phe His Leu Asn Lys Asn Glu Tyr Thr Val Pro Phe Val Cys Gly
        115                 120                 125
tgc cgt gat ctt ggt gaa gca aca cgc cgt att gcg gaa ggt gct tct    432
Cys Arg Asp Leu Gly Glu Ala Thr Arg Arg Ile Ala Glu Gly Ala Ser
    130                 135                 140
atg ctt cgc aca aaa ggt gag cct gga aca ggt aat att gtt gag gct    480
Met Leu Arg Thr Lys Gly Glu Pro Gly Thr Gly Asn Ile Val Glu Ala
145                 150                 155                 160
gtt cgc cat atg cgt aaa gtt aac gct caa gtg cgc aaa gta gtt gcg    528
Val Arg His Met Arg Lys Val Asn Ala Gln Val Arg Lys Val Val Ala
                165                 170                 175
atg agt gag gat gag cta atg aca gaa gcg aaa aac cta ggt gct cct    576
Met Ser Glu Asp Glu Leu Met Thr Glu Ala Lys Asn Leu Gly Ala Pro
            180                 185                 190
tac gag ctt ctt ctt caa att aaa aaa gac ggc aag ctt cct gtc gtt    624
Tyr Glu Leu Leu Leu Gln Ile Lys Lys Asp Gly Lys Leu Pro Val Val
        195                 200                 205
aac ttt gcc gct ggc ggc gta gca act cca gct gat gct gct ctc atg    672
Asn Phe Ala Ala Gly Gly Val Ala Thr Pro Ala Asp Ala Ala Leu Met
    210                 215                 220
atg cag ctt ggt gct gac gga gta ttt gtt ggt tct ggt att ttt aaa    720
Met Gln Leu Gly Ala Asp Gly Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys
225                 230                 235                 240
tca gac aac cct gct aaa ttt gcg aaa gca att gtg gaa gca aca act    768
Ser Asp Asn Pro Ala Lys Phe Ala Lys Ala Ile Val Glu Ala Thr Thr
                245                 250                 255
cac ttt act gat tac aaa tta atc gct gag ttg tca aaa gag ctt ggt    816
His Phe Thr Asp Tyr Lys Leu Ile Ala Glu Leu Ser Lys Glu Leu Gly
            260                 265                 270
act gca atg aaa ggg att gaa atc tca aac tta ctt cca gaa cag cgt    864
Thr Ala Met Lys GlyIle Glu Ile Ser Asn Leu Leu Pro Glu Gln Arg
        275                 280                 285
atg caa gaa cgc ggc tgg                                            882
Met Gln Glu Arg Gly Trp
    290
<210>SEQ ID NO：16
<211>294
<212>PRT
<213>枯草芽孢杆菌
<400>16
Met Ala Gln Thr Gly Thr Glu Arg Val Lys Arg Gly Met Ala Glu Met
1               5                   10                  15
Gln Lys Gly Gly Val Ile Met Asp Val Ile Asn Ala Glu Gln Ala Lys
            20                  25                  30
Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ala Val Met Ala Leu Glu Arg Val
        35                  40                  45
Pro Ala Asp Ile Arg Ala Ala Gly Gly Val Ala Arg Met Ala Asp Pro
    50                  55                  60
Thr Ile Val Glu Glu Val Met Asn Ala Val Ser Ile Pro Val Met Ala
65                  70                  75                  80
Lys Ala Arg Ile Gly His Ile Val Glu Ala Arg Val Leu Glu Ala Met
                85                  90                  95
Gly Val Asp Tyr Ile Asp Glu Ser Glu Val Leu Thr Pro Ala Asp Glu
            100                 105                 110
Glu Phe His Leu Asn Lys Asn Glu Tyr Thr Val Pro Phe Val Cys Gly
        115                 120                 125
Cys Arg Asp Leu Gly Glu Ala Thr Arg Arg Ile Ala Glu Gly Ala Ser
    130                 135                 140
Met Leu Arg Thr Lys Gly Glu Pro Gly Thr Gly Asn Ile Val Glu Ala
145                 150                 155                 160
Val Arg His Met Arg Lys Val Asn Ala Gln Val Arg Lys Val Val Ala
                165                 170                 175
Met Ser Glu Asp Glu Leu Met Thr Glu Ala Lys Asn Leu Gly Ala Pro
            180                 185                 190
Tyr Glu Leu Leu Leu Gln Ile Lys Lys Asp Gly Lys Leu Pro Val Val
        195                 200                 205
Asn Phe Ala Ala Gly Gly Val Ala Thr Pro Ala Asp Ala Ala Leu Met
    210                 215                 220
Met Gln Leu Gly Ala Asp Gly Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys
225                 230                 235                 240
Ser Asp Asn Pro Ala Lys Phe Ala Lys Ala Ile Val Glu Ala Thr Thr
                245                 250                 255
His Phe Thr Asp Tyr Lys Leu Ile Ala Glu Leu Ser Lys Glu Leu Gly
            260                 265                 270
Thr Ala Met Lys Gly Ile Glu Ile Ser Asn Leu Leu Pro Glu Gln Arg
        275                 280                 285
Met Gln Glu Arg Gly Trp
    290
<210>SEQ ID NO：17
<211>591
<212>DNA
<213>枯草芽孢杆菌
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(591)
<223>
<400>17
atg gga tta aca ata ggt gta cta gga ctt caa gga gca gtt aga gag  48
Met Gly Leu Thr Ile Gly Val Leu Gly Leu Gln Gly Ala Val Arg Glu
1               5                   10                  15
cac atc cat gcg att gaa gca tgc ggc gcg gct ggt ctt gtc gta aaa    96
His Ile His Ala Ile Glu Ala Cys Gly Ala Ala Gly Leu Val Val Lys
            20                  25                  30
cgt ccg gag cag ctg aac gaa gtt gac ggg ttg att ttg ccg ggc ggt    144
Arg Pro Glu Gln Leu Asn Glu Val Asp Gly Leu Ile Leu Pro Gly Gly
        35                  40                  45
gag agc acg acg atg cgc cgt ttg atc gat acg tat caa ttc atg gag    192
Glu Ser Thr Thr Met Arg Arg Leu Ile Asp Thr Tyr Gln Phe Met Glu
    50                  55                  60
ccg ctt cgt gaa ttc gct gct cag ggc aaa ccg atg ttt gga aca tgt    240
Pro Leu Arg Glu Phe Ala Ala Gln Gly Lys Pro Met Phe Gly Thr Cys
65                  70                  75                  80
gcc gga tta att ata tta gca aaa gaa att gcc ggt tca gat aat cct    288
Ala Gly Leu Ile Ile Leu Ala Lys Glu Ile Ala Gly Ser Asp Asn Pro
                85                  90                  95
cat tta ggt ctt ctg aat gtg gtt gta gaa cgt aat tca ttt ggc cgg    336
His Leu Gly Leu Leu Asn Val Val Val Glu Arg Asn Ser Phe Gly Arg
            100                 105                 110
cag gtt gac agc ttt gaa gct gat tta aca att aaa ggc ttg gac gag    384
Gln Val Asp Ser Phe Glu Ala Asp Leu Thr Ile Lys Gly Leu Asp Glu
        115                 120                 125
cct ttt act ggg gta ttc atc cgt gct ccg cat att tta gaa gct ggt    432
Pro Phe Thr Gly Val Phe Ile Arg Ala Pro His Ile Leu Glu Ala Gly
    130                 135                 140
gaa aat gtt gaa gtt cta tcg gag cat aat ggt cgt att gta gcc gcg    480
Glu Asn Val Glu Val Leu Ser Glu His Asn Gly Arg Ile Val Ala Ala
145                 150                 155                 160
aaa cag ggg caa ttc ctt ggc tgc tca ttc cat ccg gag ctg aca gaa    528
Lys Gln Gly Gln Phe Leu Gly Cys Ser Phe His Pro Glu Leu Thr Glu
                165                 170                 175
gat cac cga gtg acg cag ctg ttt gtt gaa atg gtt gag gaa tat aag    576
Asp His Arg Val Thr Gln Leu Phe Val Glu Met Val Glu Glu Tyr Lys
            180                 185                 190
caa aag gca ctt gta                                        591
Gln Lys Ala Leu Val
        195
<210>SEQ ID NO：18
<211>197
<212>PRT
<213>枯草芽孢杆菌
<400>18
Met Gly Leu Thr Ile Gly Val Leu Gly Leu Gln Gly Ala Val Arg Glu
1               5                   10                  15
His Ile His Ala Ile Glu Ala Cys Gly Ala Ala Gly Leu Val Val Lys
            20                  25                  30
Arg Pro Glu Gln Leu Asn Glu Val Asp Gly Leu Ile Leu Pro Gly Gly
        35                  40                  45
Glu Ser Thr Thr Met Arg Arg Leu Ile Asp Thr Tyr Gln Phe Met Glu
    50                  55                  60
Pro Leu Arg Glu Phe Ala Ala Gln Gly Lys Pro Met Phe Gly Thr Cys
65                  70                  75                  80
Ala Gly Leu Ile Ile Leu Ala Lys Glu Ile Ala Gly Ser Asp Asn Pro
                85                  90                  95
His Leu Gly Leu Leu Asn Val Val Val Glu Arg Asn Ser Phe Gly Arg
            100                 105                 110
Gln Val Asp Ser Phe Glu Ala Asp Leu Thr Ile Lys Gly Leu Asp Glu
        115                 120                 125
Pro Phe Thr Gly Val Phe Ile Arg Ala Pro His Ile Leu Glu Ala Gly
    130                 135                 140
Glu Asn Val Glu Val Leu Ser Glu His Asn Gly Arg Ile Val Ala Ala
145                 150                 155                 160
Lys Gln Gly Gln Phe Leu Gly Cys Ser Phe His Pro Glu Leu Thr Glu
                165                 170                 175
Asp His Arg Val Thr Gln Leu Phe Val Glu Met Val Glu Glu Tyr Lys
            180                 185                 190
Gln Lys Ala Leu Val
        195
<210>SEQ ID NO：19
<211>1329
<212>DNA
<213>人工序列
<220>CDS
<221>CDS
<222>(1)..(1329)
<223>融合蛋白质
<400>19
atg gct caa aca ggt act gaa cgt gta aaa cgc gga atg gca gaa atg    48
Met Ala Gln Thr Gly Thr Glu Arg Val Lys Arg Gly Met Ala Glu Met
1               5                   10                  15
caa aaa ggc ggc gtc atc atg gac gtc atc aat gcg gaa caa gcg aaa    96
Gln Lys Gly Gly Val Ile Met Asp Val Ile Asn Ala Glu Gln Ala Lys
            20                  25                  30
atc gct gaa gaa gct gga gct gtc gct gta atg gcg cta gaa cgt gtg    144
Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ala Val Met Ala Leu Glu Arg Val
        35                  40                  45
cca gca gat att cgc gcg gct gga gga gtt gcc cgt atg gct gac cct    192
Pro Ala Asp Ile Arg Ala Ala Gly Gly Val Ala Arg Met Ala Asp Pro
    50                  55                  60
aca atc gtg gaa gaa gta atg aat gca gta tct atc ccg gta atg gca    240
Thr Ile Val Glu Glu Val Met Asn Ala Val Ser Ile Pro Val Met Ala
65                  70                  75                  80
aaa gcg cgt atc gga cat att gtt gaa gcg cgt gtg ctt gaa gct atg    288
Lys Ala Arg Ile Gly His Ile Val Glu Ala Arg Val Leu Glu Ala Met
                85                  90                  95
ggt gtt gac tat att gat gaa agt gaa gtt ctg acg ccg gct gac gaa    336
Gly Val Asp Tyr Ile Asp Glu Ser Glu Val Leu Thr Pro Ala Asp Glu
            100                 105                 110
gaa ttt cat tta aat aaa aat gaa tac aca gtt cct ttt gtc tgt ggc    384
Glu Phe His Leu Asn Lys Asn Glu Tyr Thr Val Pro Phe Val Cys Gly
        115                 120                 125
tgc cgt gat ctt ggt gaa gca aca cgc cgt att gcg gaa ggt gct tct    432
Cys Arg Asp Leu Gly Glu Ala Thr Arg Arg Ile Ala Glu Gly Ala Ser
    130                 135                 140
atg ctt cgc aca aaa ggt gag cct gga aca ggt aat att gtt gag gct    480
Met Leu Arg Thr Lys Gly Glu Pro Gly Thr Gly Asn Ile Val Glu Ala
145                 150                 155                 160
gtt cgc cat atg cgt aaa gtt aac gct caa gtg cgc aaa gta gtt gcg    528
Val Arg His Met Arg Lys Val Asn Ala Gln Val Arg Lys Val Val Ala
                165                 170                 175
atg agt gag gat gag cta atg aca gaa gcg aaa aac cta ggt gct cct    576
Met Ser Glu Asp Glu Leu Met Thr Glu Ala Lys Asn Leu Gly Ala Pro
            180                 185                 190
tac gag ctt ctt ctt caa att aaa aaa gac ggc aag ctt cct gtc gtt    624
Tyr Glu Leu Leu Leu Gln Ile Lys Lys Asp Gly Lys Leu Pro Val Val
        195                 200                 205
aac ttt gcc gct ggc ggc gta gca act cca gct gat gct gct ctc atg    672
Asn Phe Ala Ala Gly Gly Val Ala Thr Pro Ala Asp Ala Ala Leu Met
    210                 215                 220
atg cag ctt ggt gct gac gga gta ttt gtt ggt tct ggt att ttt aaa    720
Met Gln Leu Gly Ala Asp Gly Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys
225                 230                 235                 240
tca gac aac cct gct aaa ttt gcg aaa gca att gtg gaa gca aca act    768
Ser Asp Asn Pro Ala Lys Phe Ala Lys Ala Ile Val Glu Ala Thr Thr
                245                 250                 255
cac ttt act gat tac aaa tta atc gct gag ttg tca aaa gag ctt ggt    816
His Phe Thr Asp Tyr Lys Leu Ile Ala Glu Leu Ser Lys Glu Leu Gly
            260                 265                 270
act gca atg aaa ggg att gaa atc tca aac tta ctt cca gaa cag cgt    864
Thr Ala Met Lys Gly Ile Glu Ile Ser Asn Leu Leu Pro Glu Gln Arg
        275                 280                 285
atg caa gaa cgc ggc tgg aga tcc att gaa ggc cgc atg cgc ttc atc    912
Met Gln Glu Arg Gly Trp Arg Ser Ile Glu Gly Arg Met Arg Phe Ile
    290                 295                 300
gtc tct ctc ctc gcc ttc act gcc gcg gcc acc gcg acc gcc ctc ccg    960
Val Ser Leu Leu Ala Phe Thr Ala Ala Ala Thr Ala Thr Ala Leu Pro
305                 310                 315                 320
gcc tct gcc gca aag aac gcg aag ctg gcc acc tcg gcg gcc ttc gcc    1008
Ala Ser Ala Ala Lys Asn Ala Lys Leu Ala Thr Ser Ala Ala Phe Ala
                325                 330                 335
aag cag gct gaa ggc acc acc tgc aat gtc ggc tcg atc gct tgc tgc    1056
Lys Gln Ala Glu Gly Thr Thr Cys Asn Val Gly Ser Ile Ala Cys Cys
            340                 345                 350
aac tcc ccc gct gag acc aac aac gac agt ctg ttg agc ggt ctg ctc    1104
Asn Ser Pro Ala Glu Thr Asn Asn Asp Ser Leu Leu Ser Gly Leu Leu
        355                 360                 365
ggt gct ggc ctt ctc aac ggg ctc tcg ggc aac act ggc agc gcc tgc    1152
Gly Ala Gly Leu Leu Asn Gly Leu Ser Gly Asn Thr Gly Ser Ala Cys
    370                 375                 380
gcc aag gcg agc ttg att gac cag ctg ggt ctg ctc gct ctc gtc gac    1200
Ala Lys Ala Ser Leu Ile Asp Gln Leu Gly Leu Leu Ala Leu Val Asp
385                 390                 395                 400
cac act gag gaa ggc ccc gtc tgc aag aac atc gtc gct tgc tgc cct    1248
His Thr Glu Glu Gly Pro Val Cys Lys Asn Ile Val Ala Cys Cys Pro
                405                 410                 415
gag gga acc acc aac tgt gtt gcc gtc gac aac gct ggc gct ggt acc    1296
Glu Gly Thr Thr Asn Cys Val Ala Val Asp Asn Ala Gly Ala Gly Thr
            420                 425                 430
aag gct gag gga tct cat cac cat cac cat cac                  1329
Lys Ala Glu Gly Ser His His His His His His
    435                 440
<210>SEQ ID NO：20
<211>443
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>融合蛋白质
<400>20
Met Ala Gln Thr Gly Thr Glu Arg Val Lys Arg Gly Met Ala Glu Met
1               5                   10                  15
Gln Lys Gly Gly Val Ile Met Asp Val Ile Asn Ala Glu Gln Ala Lys
            20                  25                  30
Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ala Val Met Ala Leu Glu Arg Val
        35                  40                  45
Pro Ala Asp Ile Arg Ala Ala Gly Gly Val Ala Arg Met Ala Asp Pro
    50                  55                  60
Thr Ile Val Glu Glu Val Met Asn Ala Val Ser Ile Pro Val Met Ala
65                  70                  75                  80
Lys Ala Arg Ile Gly His Ile Val Glu Ala Arg Val Leu Glu Ala Met
                85                  90                  95
Gly Val Asp Tyr Ile Asp Glu Ser Glu Val Leu Thr Pro Ala Asp Glu
            100                 105                 110
Glu Phe His Leu Asn Lys Asn Glu Tyr Thr Val Pro Phe Val Cys Gly
        115                 120                 125
Cys Arg Asp Leu Gly Glu Ala Thr Arg Arg Ile Ala Glu Gly Ala Ser
    130                 135                 140
Met Leu Arg Thr Lys Gly Glu Pro Gly Thr Gly Asn Ile Val Glu Ala
145                 150                 155                 160
Val Arg His Met Arg Lys Val Asn Ala Gln Val Arg Lys Val Val Ala
                165                 170                 175
Met Ser Glu Asp Glu Leu Met Thr Glu Ala Lys Asn Leu Gly Ala Pro
            180                 185                 190
Tyr Glu Leu Leu Leu Gln Ile Lys Lys Asp Gly Lys Leu Pro Val Val
        195                 200                 205
Asn Phe Ala Ala Gly Gly Val Ala Thr Pro Ala Asp Ala Ala Leu Met
    210                 215                 220
Met Gln Leu Gly Ala Asp Gly Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys
225                 230                 235                 240
Ser Asp Asn Pro Ala Lys Phe Ala Lys Ala Ile Val Glu Ala Thr Thr
                245                 250                 255
His Phe Thr Asp Tyr Lys Leu Ile Ala Glu Leu Ser Lys Glu Leu Gly
            260                 265                 270
Thr Ala Met Lys Gly Ile Glu Ile Ser Asn Leu Leu Pro Glu Gln Arg
        275                 280                 285
Met Gln Glu Arg Gly Trp Arg Ser Ile Glu Gly Arg Met Arg Phe Ile
    290                 295                 300
Val Ser Leu Leu Ala Phe Thr Ala Ala Ala Thr Ala Thr Ala Leu Pro
305                 310                 315                 320
Ala Ser Ala Ala Lys Asn Ala Lys Leu Ala Thr Ser Ala Ala Phe Ala
                325                 330                 335
Lys Gln Ala Glu Gly Thr Thr Cys Asn Val Gly Ser Ile Ala Cys Cys
            340                 345                 350
Asn Ser Pro Ala Glu Thr Asn Asn Asp Ser Leu Leu Ser Gly Leu Leu
        355                 360                 365
Gly Ala Gly Leu Leu Asn Gly Leu Ser Gly Asn Thr Gly Ser Ala Cys
    370                 375                 380
Ala Lys Ala Ser Leu Ile Asp Gln Leu Gly Leu Leu Ala Leu Val Asp
385                 390                 395                 400
His Thr Glu Glu Gly Pro Val Cys Lys Asn Ile Val Ala Cys Cys Pro
                405                 410                 415
Glu Gly Thr Thr Asn Cys Val Ala Val Asp Asn Ala Gly Ala Gly Thr
            420                 425                 430
Lys Ala Glu Gly Ser His His His His His His
        435                 440
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>CDS
<221>CDS
<222>(1)..(1395)
<223>融合蛋白质
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atg gct caa aca ggt act gaa cgt gta aaa cgc gga atg gca gaa atg    48
Met Ala Gln Thr Gly Thr Glu Arg Val Lys Arg Gly Met Ala Glu Met
1               5                   10                  15
caa aaa ggc ggc gtc atc atg gac gtc atc aat gcg gaa caa gcg aaa    96
Gln Lys Gly Gly Val Ile Met Asp Val Ile Asn Ala Glu Gln Ala Lys
            20                  25                  30
atc gct gaa gaa gct gga gct gtc gct gta atg gcg cta gaa cgt gtg    144
Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ala Val Met Ala Leu Glu Arg Val
        35                  40                  45
cca gca gat att cgc gcg gct gga gga gtt gcc cgt atg gct gac cct    192
Pro Ala Asp Ile Arg Ala Ala Gly Gly Val Ala Arg Met Ala Asp Pro
    50                  55                  60
aca atc gtg gaa gaa gta atg aat gca gta tct atc ccg gta atg gca    240
Thr Ile Val Glu Glu Val Met Asn Ala Val Ser Ile Pro Val Met Ala
65                  70                  75                  80
aaa gcg cgt atc gga cat att gtt gaa gcg cgt gtg ctt gaa gct atg    288
Lys Ala Arg Ile Gly His Ile Val Glu Ala Arg Val Leu Glu Ala Met
                85                  90                  95
ggt gtt gac tat att gat gaa agt gaa gtt ctg acg ccg gct gac gaa    336
Gly Val Asp Tyr Ile Asp Glu Ser Glu Val Leu Thr Pro Ala Asp Glu
            100                 105                 110
gaa ttt cat tta aat aaa aat gaa tac aca gtt cct ttt gtc tgt ggc    384
Glu Phe His Leu Asn Lys Asn Glu Tyr Thr Val Pro Phe Val Cys Gly
        115                 120                 125
tgc cgt gat ctt ggt gaa gca aca cgc cgt att gcg gaa ggt gct tct    432
Cys Arg Asp Leu Gly Glu Ala Thr Arg Arg Ile Ala Glu Gly Ala Ser
    130                 135                 140
atg ctt cgc aca aaa ggt gag cct gga aca ggt aat att gtt gag gct    480
Met Leu Arg Thr Lys Gly Glu Pro Gly Thr Gly Asn Ile Val Glu Ala
145                 150                 155                 160
gtt cgc cat atg cgt aaa gtt aac gct caa gtg cgc aaa gta gtt gcg    528
Val Arg His Met Arg Lys Val Asn Ala Gln Val Arg Lys Val Val Ala
                165                 170                 175
atg agt gag gat gag cta atg aca gaa gcg aaa aac cta ggt gct cct    576
Met Ser Glu Asp Glu Leu Met Thr Glu Ala Lys Asn Leu Gly Ala Pro
            180                 185                 190
tac gag ctt ctt ctt caa att aaa aaa gac ggc aag ctt cct gtc gtt    624
Tyr Glu Leu Leu Leu Gln Ile Lys Lys Asp Gly Lys Leu Pro Val Val
        195                 200                 205
aac ttt gcc gct ggc ggc gta gca act cca gct gat gct gct ctc atg    672
Asn Phe Ala Ala Gly Gly Val Ala Thr Pro Ala Asp Ala Ala Leu Met
    210                 215                 220
atg cag ctt ggt gct gac gga gta ttt gtt ggt tct ggt att ttt aaa    720
Met Gln Leu Gly Ala Asp Gly Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys
225                 230                 235                 240
tca gac aac cct gct aaa ttt gcg aaa gca att gtg gaa gca aca act    768
Ser Asp Asn Pro Ala Lys Phe Ala Lys Ala Ile Val Glu Ala Thr Thr
                245                 250                 255
cac ttt act gat tac aaa tta atc gct gag ttg tca aaa gag ctt ggt    816
His Phe Thr Asp Tyr Lys Leu Ile Ala Glu Leu Ser Lys Glu Leu Gly
            260                 265                 270
act gca atg aaa ggg att gaa atc tca aac tta ctt cca gaa cag cgt    864
Thr Ala Met Lys Gly Ile Glu Ile Ser Asn Leu Leu Pro Glu Gln Arg
        275                 280                 285
atg caa gaa cgc ggc tgg aga tct att gaa ggc cgc atg aag ttc tcc    912
Met Gln Glu Arg Gly Trp Arg Ser Ile Glu Gly Arg Met Lys Phe Ser
    290                 295                 300
att gct gcc gct gtc gtt gct ttc gcc gcc tcc gtc gcg gcc ctc cct    960
Ile Ala Ala Ala Val Val Ala Phe Ala Ala Ser Val Ala Ala Leu Pro
305                 310                 315                 320
cct gcc cat gat tcc cag ttc gct ggc aat ggt gtt ggc aac aag ggc    1008
Pro Ala His Asp Ser Gln Phe Ala Gly Asn Gly Val Gly Asn Lys Gly
                325                 330                 335
aac agc aac gtc aag ttc cct gtc ccc gaa aac gtg acc gtc aag cag    1056
Asn Ser Asn Val Lys Phe Pro Val Pro Glu Asn Val Thr Val Lys Gln
            340                 345                 350
gcc tcc gac aag tgc ggt gac cag gcc cag ctc tct tgc tgc aac aag    1104
Ala Ser Asp Lys Cys Gly Asp Gln Ala Gln Leu Ser Cys Cys Asn Lys
        355                 360                 365
gcc acg tac gcc ggt gac acc aca acc gtt gat gag ggt ctt ctg tct    1152
Ala Thr Tyr Ala Gly Asp Thr Thr Thr Val Asp Glu Gly Leu Leu Ser
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ggt gcc ctc agc ggc ctc atc ggc gcc ggg tct ggt gcc gaa ggt ctt    1200
Gly Ala Leu Ser Gly Leu Ile Gly Ala Gly Ser Gly Ala Glu Gly Leu
385                 390                 395                 400
ggt ctc ttc gat cag tgc tcc aag ctt gat gtt gct gtc ctc att ggc    1248
Gly Leu Phe Asp Gln Cys Ser Lys Leu Asp Val Ala Val Leu Ile Gly
                405                 410                 415
atc caa gat ctt gtc aac cag aag tgc aag caa aac att gcc tgc tgc    1296
Ile Gln Asp Leu Val Asn Gln Lys Cys Lys Gln Asn Ile Ala Cys Cys
            420                 425                 430
cag aac tcc ccc tcc agc gcg gat ggc aac ctt att ggt gtc ggt ctc    1344
Gln Asn Ser Pro Ser Ser Ala Asp Gly Asn Leu Ile Gly Val Gly Leu
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cct tgc gtt gcc ctt ggc tcc atc ctc gga tct cat cac cat cac cat    1392
Pro Cys Val Ala Leu Gly Ser Ile Leu Gly Ser His His His His His
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cac                                                                1395
His
465
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<211>465
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>融合蛋白质
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Met Ala Gln Thr Gly Thr Glu Arg Val Lys Arg Gly Met Ala Glu Met
1               5                   10                  15
Gln Lys Gly Gly Val Ile Met Asp Val Ile Asn Ala Glu Gln Ala Lys
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Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ala Val Met Ala Leu Glu Arg Val
        35                  40                  45
Pro Ala Asp Ile Arg Ala Ala Gly Gly Val Ala Arg Met Ala Asp Pro
    50                  55                  60
Thr Ile Val Glu Glu Val Met Asn Ala Val Ser Ile Pro Val Met Ala
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Lys Ala Arg Ile Gly His Ile Val Glu Ala Arg Val Leu Glu Ala Met
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Gly Val Asp Tyr Ile Asp Glu Ser Glu Val Leu Thr Pro Ala Asp Glu
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Glu Phe His Leu Asn Lys Asn Glu Tyr Thr Val Pro Phe Val Cys Gly
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Cys Arg Asp Leu Gly Glu Ala Thr Arg Arg Ile Ala Glu Gly Ala Ser
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Met Leu Arg Thr Lys Gly Glu Pro Gly Thr Gly Asn Ile Val Glu Ala
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Val Arg His Met Arg Lys Val Asn Ala Gln Val Arg Lys Val Val Ala
                165                 170                 175
Met Ser Glu Asp Glu Leu Met Thr Glu Ala Lys Asn Leu Gly Ala Pro
            180                 185                 190
Tyr Glu Leu Leu Leu Gln Ile Lys Lys Asp Gly Lys Leu Pro Val Val
        195                 200                 205
Asn Phe Ala Ala Gly Gly Val Ala Thr Pro Ala Asp Ala Ala Leu Met
    210                 215                 220
Met Gln Leu Gly Ala Asp Gly Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys
225                 230                 235                 240
Ser Asp Asn Pro Ala Lys Phe Ala Lys Ala Ile Val Glu Ala Thr Thr
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Thr Ala Met Lys Gly Ile Glu Ile Ser Asn Leu Leu Pro Glu Gln Arg
        275                 280                 285
Met Gln Glu Arg Gly Trp Arg Ser Ile Glu Gly Arg Met Lys Phe Ser
    290                 295                 300
Ile Ala Ala Ala Val Val Ala Phe Ala Ala Ser Val Ala Ala Leu Pro
305                 310                 315                 320
Pro Ala His Asp Ser Gln Phe Ala Gly Asn Gly Val Gly Asn Lys Gly
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Asn Ser Asn Val Lys Phe Pro Val Pro Glu Asn Val Thr Val Lys Gln
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Ala Ser Asp Lys Cys Gly Asp Gln Ala Gln Leu Ser Cys Cys Asn Lys
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Ala Thr Tyr Ala Gly Asp Thr Thr Thr Val Asp Glu Gly Leu Leu Ser
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Gly Ala Leu Ser Gly Leu Ile Gly Ala Gly Ser Gly Ala Glu Gly Leu
385                 390                 395                 400
Gly Leu Phe Asp Gln Cys Ser Lys Leu Asp Val Ala Val Leu Ile Gly
                405                 410                 415
Ile Gln Asp Leu Val Asn Gln Lys Cys Lys Gln Asn Ile Ala Cys Cys
            420                 425                 430
Gln Asn Ser Pro Ser Ser Ala Asp Gly Asn Leu Ile Gly Val Gly Leu
        435                 440                 445
Pro Cys Val Ala Leu Gly Ser Ile Leu Gly Ser His His His His His
    450                 455                 460
His
465
<210>SEQ ID NO：23
<211>1407
<212>DNA
<213>人工序列
<220>CDS
<221>CDS
<222>(1)..(1407)
<223>融合蛋白质
<400>23
atg gct caa aca ggt act gaa cgt gta aaa cgc gga atg gca gaa atg    48
Met Ala Gln Thr Gly Thr Glu Arg Val Lys Arg Gly Met Ala Glu Met
1               5                   10                  15
caa aaa ggc ggc gtc atc atg gac gtc atc aat gcg gaa caa gcg aaa    96
Gln Lys Gly Gly Val Ile Met Asp Val Ile Asn Ala Glu Gln Ala Lys
            20                  25                  30
atc gct gaa gaa gct gga gct gtc gct gta atg gcg cta gaa cgt gtg    144
Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ala Val Met Ala Leu Glu Arg Val
        35                  40                  45
cca gca gat att cgc gcg gct gga gga gtt gcc cgt atg gct gac cct    192
Pro Ala Asp Ile Arg Ala Ala Gly Gly Val Ala Arg Met Ala Asp Pro
    50                  55                  60
aca atc gtg gaa gaa gta atg aat gca gta tct atc ccg gta atg gca    240
Thr Ile Val Glu Glu Val Met Asn Ala Val Ser Ile Pro Val Met Ala
65                  70                  75                  80
aaa gcg cgt atc gga cat att gtt gaa gcg cgt gtg ctt gaa gct atg    288
Lys Ala Arg Ile Gly His Ile Val Glu Ala Arg Val Leu Glu Ala Met
                85                  90                  95
ggt gtt gac tat att gat gaa agt gaa gtt ctg acg ccg gct gac gaa    336
Gly Val Asp Tyr Ile Asp Glu Ser Glu Val Leu Thr Pro Ala Asp Glu
            100                 105                 110
gaa ttt cat tta aat aaa aat gaa tac aca gtt cct ttt gtc tgt ggc    384
Glu Phe His Leu Asn Lys Asn Glu Tyr Thr Val Pro Phe Val Cys Gly
        115                 120                 125
tgc cgt gat ctt ggt gaa gca aca cgc cgt att gcg gaa ggt gct tct    432
Cys Arg Asp Leu Gly Glu Ala Thr Arg Arg Ile Ala Glu Gly Ala Ser
    130                 135                 140
atg ctt cgc aca aaa ggt gag cct gga aca ggt aat att gtt gag gct    480
Met Leu Arg Thr Lys Gly Glu Pro Gly Thr Gly Asn Ile Val Glu Ala
145                 150                 155                 160
gtt cgc cat atg cgt aaa gtt aac gct caa gtg cgc aaa gta gtt gcg    528
Val Arg His Met Arg Lys Val Asn Ala Gln Val Arg Lys Val Val Ala
                165                 170                 175
atg agt gag gat gag cta atg aca gaa gcg aaa aac cta ggt gct cct    576
Met Ser Glu Asp Glu Leu Met Thr Glu Ala Lys Asn Leu Gly Ala Pro
            180                 185                 190
tac gag ctt ctt ctt caa att aaa aaa gac ggc aag ctt cct gtc gtt    624
Tyr Glu Leu Leu Leu Gln Ile Lys Lys Asp Gly Lys Leu Pro Val Val
        195                 200                 205
aac ttt gcc gct ggc ggc gta gca act cca gct gat gct gct ctc atg    672
Asn Phe Ala Ala Gly Gly Val Ala Thr Pro Ala Asp Ala Ala Leu Met
    210                 215                 220
atg cag ctt ggt gct gac gga gta ttt gtt ggt tct ggt att ttt aaa    720
Met Gln Leu Gly Ala Asp Gly Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys
225                 230                 235                 240
tca gac aac cct gct aaa ttt gcg aaa gca att gtg gaa gca aca act    768
Ser Asp Asn Pro Ala Lys Phe Ala Lys Ala Ile Val Glu Ala Thr Thr
                245                 250                 255
cac ttt act gat tac aaa tta atc gct gag ttg tca aaa gag ctt ggt    816
His Phe Thr Asp Tyr Lys Leu Ile Ala Glu Leu Ser Lys Glu Leu Gly
            260                 265                 270
act gca atg aaa ggg att gaa atc tca aac tta ctt cca gaa cag cgt    864
Thr Ala Met Lys Gly Ile Glu Ile Ser Asn Leu Leu Pro Glu Gln Arg
        275                 280                 285
atg caa gaa cgc ggc tgg aga tct att gaa ggc cgc atg aag ttc tcc    912
Met Gln Glu Arg Gly Trp Arg Ser Ile Glu Gly Arg Met Lys Phe Ser
     290                 295                 300
gtc tcc gcc gcc gtc ctc gcc ttc gcc gcc tcc gtc gcc gcc ctc cct    960
Val Ser Ala Ala Val Leu Ala Phe Ala Ala Ser Val Ala Ala Leu Pro
305                 310                 315                 320
cag cac gac tcc gcc gcc ggc aac ggc aac ggc gtc ggc aac aag ttc    1008
Gln His Asp Ser Ala Ala Gly Asn Gly Asn Gly Val Gly Asn Lys Phe
                325                 330                 335
cct gtc cct gac gac gtc acc gtc aag cag gcc acc gac aag tgc ggc    1056
Pro Val Pro Asp Asp Val Thr Val Lys Gln Ala Thr Asp Lys Cys Gly
            340                 345                 350
gac cag gcc cag ctc tcc tgc tgc aac aag gcc acc tac gcc ggc gac    1104
Asp Gln Ala Gln Leu Ser Cys Cys Asn Lys Ala Thr Tyr Ala Gly Asp
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gtc ctc acc gac atc gac gag ggc atc ctc gcc ggc ctc ctc aag aac    1152
Val Leu Thr Asp Ile Asp Glu Gly Ile Leu Ala Gly Leu Leu Lys Asn
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ctc atc ggc ggc ggc tcc ggc tcc gag ggc ctc ggc ctc ttc gac cag    1200
Leu Ile Gly Gly Gly Ser Gly Ser Glu Gly Leu Gly Leu Phe Asp Gln
385                 390                 395                 400
tgc gtc aag ctc gac ctc cag atc tcc gtc atc ggc atc cct atc cag    1248
Cys Val Lys Leu Asp Leu Gln Ile Ser Val Ile Gly Ile Pro Ile Gln
                405                 410                 415
gac ctc ctc aac cag gtc aac aag cag tgc aag cag aac atc gcc tgc    1296
Asp Leu Leu Asn Gln Val Asn Lys Gln Cys Lys Gln Asn Ile Ala Cys
            420                 425                 430
tgc cag aac tcc cct tcc gac gcc acc ggc tcc ctc gtc aac ctc ggc    1344
Cys Gln Asn Ser Pro Ser Asp Ala Thr Gly Ser Leu Val Asn Leu Gly
        435                 440                 445
ctc ggc aac cct tgc atc cct gtc tcc ctc ctc cat atg gga tct cat    1392
Leu Gly Asn Pro Cys Ile Pro Val Ser Leu Leu His Met Gly Ser His
    450                 455                 460
cac cat cac cat cac    1407
His His His His His
465
<210>SEQ ID NO：24
<211>469
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>融合蛋白质
<400>24
Met Ala Gln Thr Gly Thr Glu Arg Val Lys Arg Gly Met Ala Glu Met
1               5                   10                  15
Gln Lys Gly Gly Val Ile Met Asp Val Ile Asn Ala Glu Gln Ala Lys
            20                  25                  30
Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ala Val Met Ala Leu Glu Arg Val
        35                  40                  45
Pro Ala Asp Ile Arg Ala Ala Gly Gly Val Ala Arg Met Ala Asp Pro
    50                  55                  60
Thr Ile Val Glu Glu Val Met Asn Ala Val Ser Ile Pro Val Met Ala
65                  70                  75                  80
Lys Ala Arg Ile Gly His Ile Val Glu Ala Arg Val Leu Glu Ala Met
                85                  90                  95
Gly Val Asp Tyr Ile Asp Glu Ser Glu Val Leu Thr Pro Ala Asp Glu
            100                 105                 110
Glu Phe His Leu Asn Lys Asn Glu Tyr Thr Val Pro Phe Val Cys Gly
        115                 120                 125
Cys Arg Asp Leu Gly Glu Ala Thr Arg Arg Ile Ala Glu Gly Ala Ser
    130                 135                 140
Met Leu Arg Thr Lys Gly Glu Pro Gly Thr Gly Asn Ile Val Glu Ala
145                 150                 155                 160
Val Arg His Met Arg Lys Val Asn Ala Gln Val Arg Lys Val Val Ala
                165                 170                 175
Met Ser Glu Asp Glu Leu Met Thr Glu Ala Lys Asn Leu Gly Ala Pro
            180                 185                 190
Tyr Glu Leu Leu Leu Gln Ile Lys Lys Asp Gly Lys Leu Pro Val Val
        195                 200                 205
Asn Phe Ala Ala Gly Gly Val Ala Thr Pro Ala Asp Ala Ala Leu Met
    210                 215                 220
Met Gln Leu Gly Ala Asp Gly Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys
225                 230                 235                 240
Ser Asp Asn Pro Ala Lys Phe Ala Lys Ala Ile Val Glu Ala Thr Thr
                245                 250                 255
His Phe Thr Asp Tyr Lys Leu Ile Ala Glu Leu Ser Lys Glu Leu Gly
            260                 265                 270
Thr Ala Met Lys Gly Ile Glu Ile Ser Asn Leu Leu Pro Glu Gln Arg
        275                 280                 285
Met Gln Glu Arg Gly Trp Arg Ser Ile Glu Gly Arg Met Lys Phe Ser
    290                 295                 300
Val Ser Ala Ala Val Leu Ala Phe Ala Ala Ser Val Ala Ala Leu Pro
305                 310                 315                 320
Gln His Asp Ser Ala Ala Gly Asn Gly Asn Gly Val Gly Asn Lys Phe
                325                 330                 335
Pro Val Pro Asp Asp Val Thr Val Lys Gln Ala Thr Asp Lys Cys Gly
            340                 345                 350
Asp Gln Ala Gln Leu Ser Cys Cys Asn Lys Ala Thr Tyr Ala Gly Asp
        355                 360                 365
Val Leu Thr Asp Ile Asp Glu Gly Ile Leu Ala Gly Leu Leu Lys Asn
    370                 375                 380
Leu Ile Gly Gly Gly Ser Gly Ser Glu Gly Leu Gly Leu Phe Asp Gln
385                 390                 395                 400
Cys Val Lys Leu Asp Leu Gln Ile Ser Val Ile Gly Ile Pro Ile Gln
                405                 410                 415
Asp Leu Leu Asn Gln Val Asn Lys Gln Cys Lys Gln Asn Ile Ala Cys
            420                 425                 430
Cys Gln Asn Ser Pro Ser Asp Ala Thr Gly Ser Leu Val Asn Leu Gly
        435                 440                 445
Leu Gly Asn Pro Cys Ile Pro Val Ser Leu Leu His Met Gly Ser His
    450                 455                 460
His His His His His
465
<210>SEQ ID NO：25
<211>561
<212>DNA
<213>人工序列
<220>CDS
<221>CDS
<222>(1)..(561)
<223>融合蛋白质
<400>25
atg gct caa aca ggt act gaa cgt gta aaa cgc gga atg gca gaa atg    48
Met Ala Gln Thr Gly Thr Glu Arg Val Lys Arg Gly Met Ala Glu Met
1               5                   10                  15
caa aaa ggc ggc gtc atc atg gac gtc atc aat gcg gaa caa gcg aaa    96
Gln Lys Gly Gly Val Ile Met Asp Val Ile Asn Ala Glu Gln Ala Lys
            20                  25                  30
atc gct gaa gaa gct gga gct gtc att gaa ggc cgc atg cgc ttc atc    144
Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ile Glu Gly Arg Met Arg Phe Ile
        35                  40                  45
gtc tct ctc ctc gcc ttc act gcc gcg gcc acc gcg acc gcc ctc ccg    192
Val Ser Leu Leu Ala Phe Thr Ala Ala Ala Thr Ala Thr Ala Leu Pro
    50                  55                  60
gcc tct gcc gca aag aac gcg aag ctg gcc acc tcg gcg gcc ttc gcc    240
Ala Ser Ala Ala Lys Asn Ala Lys Leu Ala Thr Ser Ala Ala Phe Ala
65                  70                  75                  80
aag cag gct gaa ggc acc acc tgc aat gtc ggc tcg atc gct tgc tgc    288
Lys Gln Ala Glu Gly Thr Thr Cys Asn Val Gly Ser Ile Ala Cys Cys
                85                  90                  95
aac tcc ccc gct gag acc aac aac gac agt ctg ttg agc ggt ctg ctc    336
Asn Ser Pro Ala Glu Thr Asn Asn Asp Ser Leu Leu Ser Gly Leu Leu
            100                 105                 110
ggt gct ggc ctt ctc aac ggg ctc tcg ggc aac act ggc agc gcc tgc    384
Gly Ala Gly Leu Leu Asn Gly Leu Ser Gly Asn Thr Gly Ser Ala Cys
        115                 120                 125
gcc aag gcg agc ttg att gac cag ctg ggt ctg ctc gct ctc gtc gac    432
Ala Lys Ala Ser Leu Ile Asp Gln Leu Gly Leu Leu Ala Leu Val Asp
    130                 135                 140
cac act gag gaa ggc ccc gtc tgc aag aac atc gtc gct tgc tgc cct    480
His Thr Glu Glu Gly Pro Val Cys Lys Asn Ile Val Ala Cys Cys Pro
145                 150                 155                 160
gag gga acc acc aac tgt gtt gcc gtc gac aac gct ggc gct ggt acc    528
Glu Gly Thr Thr Asn Cys Val Ala Val Asp Asn Ala Gly Ala Gly Thr
                165                 170                 175
aag gct gag gga tct cat cac cat cac cat cac                        561
Lys Ala Glu Gly Ser His His His His His His
            180                 185
<210>SEQ ID NO：26
<211>187
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>融合蛋白质
<400>26
Met Ala Gln Thr Gly Thr Glu Arg Val Lys Arg Gly Met Ala Glu Met
1               5                   10                  15
Gln Lys Gly Gly Val Ile Met Asp Val Ile Asn Ala Glu Gln Ala Lys
            20                  25                  30
Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ile Glu Gly Arg Met Arg Phe Ile
        35                  40                  45
Val Ser Leu Leu Ala Phe Thr Ala Ala Ala Thr Ala Thr Ala Leu Pro
    50                  55                  60
Ala Ser Ala Ala Lys Asn Ala Lys Leu Ala Thr Ser Ala Ala Phe Ala
65                  70                  75                  80
Lys Gln Ala Glu Gly Thr Thr Cys Asn Val Gly Ser Ile Ala Cys Cys
                85                  90                  95
Asn Ser Pro Ala Glu Thr Asn Asn Asp Ser Leu Leu Ser Gly Leu Leu
            100                 105                 110
Gly Ala Gly Leu Leu Asn Gly Leu Ser Gly Asn Thr Gly Ser Ala Cys
        115                 120                 125
Ala Lys Ala Ser Leu Ile Asp Gln Leu Gly Leu Leu Ala Leu Val Asp
    130                 135                 140
His Thr Glu Glu Gly Pro Val Cys Lys Asn Ile Val Ala Cys Cys Pro
145                 150                 155                 160
Glu Gly Thr Thr Asn Cys Val Ala Val Asp Asn Ala Gly Ala Gly Thr
                165                 170                 175
Lys Ala Glu Gly Ser His His His His His His
            180                 185

Claims (11)

1.疏水蛋白用于织物洗涤的应用，其中所述疏水蛋白是至少一种选自如SEQ ID NO：20所表示的yaad-Xa-dewA-his蛋白质、如SEQ ID NO：22所表示的yaad-Xa-rodA-his蛋白质或如SEQ ID NO：24所表示的yaad-Xa-basf1-his蛋白质的疏水蛋白，其中的限制性条件是在每种情形中yaad也可以是具有20至293个氨基酸的截短的yaad融合配偶体。
2.根据权利要求1的应用，其中所述疏水蛋白在洗涤液中以0.05至50ppm的浓度使用。
3.根据权利要求1或2的应用，其中所述蛋白质与阴离子和/或非离子表面活性剂联合使用，所述表面活性剂包括线性烷基苯磺酸盐与烷基醚硫酸盐的组合、脂肪醇硫酸盐与烷基醚硫酸盐的组合、线性烷基苯磺酸盐与烷基烷氧基化物的组合，或脂肪醇硫酸盐与烷基烷氧基化物的组合。
4.以粉末、颗粒、粒状沉淀、糊状、片状、凝胶或液体形式的用于织物洗涤的洗涤组合物，其包含至少一种选自表面活性剂，助洗剂，辅助助洗剂、漂白系统和洗涤组合物酶的洗涤活性物质，其中洗涤组合物还包含至少一种疏水蛋白，其中的限制性条件是洗涤组合物包含
(a)0.01至1.5％(重量)的疏水蛋白，
(b)0.5至40％(重量)的阴离子和/域非离子表面活性剂，和
(c)59至99.45％(重量)的其它洗涤活性添加剂或配制助剂；
其中疏水蛋白是至少一种选自如SEQ ID NO：20所表示的yaad-Xa-dewA-his蛋白质、如SEQ ID NO：22所表示的yaad-Xa-rodA-his蛋白质或如SEQ ID NO：24所表示的yaad-Xa-basf1-his蛋白质的疏水蛋白，其中的限制性条件是在每种情形中yaad也可以是具有20至293个氨基酸的截短的yaad融合配偶体。
5.根据权利要求4的洗涤组合物，其中表面活性剂是线性烷基苯磺酸盐与烷基醚硫酸盐的组合、脂肪醇硫酸盐与烷基醚硫酸盐的组合、线性烷基苯磺酸盐与烷基烷氧基化物的组合，或脂肪醇硫酸盐与烷基烷氧基化物的组合。
6.用于洗涤织物材料的方法，其至少包括以下步骤：
(a)用待洗的织物材料和含水洗涤液装填洗涤用具，
(b)将机械力用于织物材料和洗涤液的混合物，
(c)移除含水洗涤液以及任选的漂洗织物材料，以及
(d)干燥织物材料，
其中，含水的洗涤液包含至少一种疏水蛋白，其中疏水蛋白是至少一种选自如SEQ ID NO：20所表示的yaad-Xa-dewA-his蛋白质、如SEQ ID NO：22所表示的yaad-Xa-rodA-his蛋白质或如SEQ ID NO：24所表示的yaad-Xa-basf1-his蛋白质的疏水蛋白，其中的限制性条件是在每种情形中yaad也可以是具有20至293个氨基酸的截短的yaad融合配偶体。
7.根据权利要求6的方法，其中蛋白质与阴离子和/或非离子表面活性剂联合使用，所述表面活性剂包括线性烷基苯磺酸盐与烷基醚硫酸盐的组合、脂肪醇硫酸盐与烷基醚硫酸盐的组合、线性烷基苯磺酸盐与烷基烷氧基化物的组合，或脂肪醇硫酸盐与烷基烷氧基化物的组合。
8.根据权利要求6或7的方法，其中洗涤操作在不超过60℃的温度下进行。
9.根据权利要求6或7的方法，其中洗涤操作在5至45℃的温度下进行。
10.根据权利要求6或7的方法，其中洗涤操作在15至35℃的温度下进行。
11.根据权利要求6或7的方法，其中所述蛋白质在洗涤液中以0.05至50ppm的浓度使用。
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