KR101250067B1 - 경질 표면 방오 처리를 위한 하이드로포빈의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은, 특히 경질 표면의 세정과 병행되는 경질 표면의 방오 처리를 위한 하이드로포빈의 용도, 경질 표면의 방오 처리 방법, 경질 표면용 세정제 및 하이드로포빈 함유 방오 코팅을 포함하는 경질 표면에 관한 것이다.

Description

경질 표면 방오 처리를 위한 하이드로포빈의 용도{USE OF HYDROPHOBIN FOR HARD SURFACE SOIL-REPELLENT TREATMENT}
본 발명은, 특히 경질 표면의 세정과 병행되는 경질 표면의 방오 처리를 위한 하이드로포빈의 용도, 경질 표면의 방오 처리 방법, 경질 표면용 세정제와, 또한, 하이드로포빈 함유 방오 코팅을 포함하는 경질 표면에 관한 것이다.
방오 코팅을 포함하는 경질 표면, 예를 들어 유리, 세라믹 또는 바닥을 제공하는 방법은 공지되어 있다. 이러한 마감 처리는 오물 부착의 저감시키고, 표면의 오염을 억제하며, 후속 세정을 용이하게 한다. 예를 들어, 지방, 오일 또는 석회 잔재물의 제거를 더 용이하게 하거나 물이 흘러가서 생기는 마른 물자국의 발생을 방지할 수 있다.
상기 코팅은 영구 방오 코팅, 예를 들어 로터스 효과(lotus effect)를 지닌 코팅일 수 있다.
상기 코팅은 임시 코팅일 수도 있다. 이러한 임시 방오 효과는, 예를 들어 표면을 세정하는 과정에 도포되는 세정제 중의 물질을 통해 발휘될 수 있다. 이러한 세정제의 중요한 사용 분야로는 부엌 또는 위생실용 세정제 등의 가정 분야뿐 아니라, 예를 들어 세차용 세정제 등의 산업 분야가 있다.
EP-A 467 472는 추후의 세정 단계에서 세정이 용이해질 수 있도록, 경질 표면, 예를 들어 가정용 표면의 소수성을 증가시키기 위한 조성물을 개시한다. 상기 조성물은 수용성, 이온 또는 비이온 중합체, 예를 들어 4 차화 암모늄 알킬 메타크릴레이트 단위를 갖는 양이온 중합체를 포함한다. 개시된 세정제 조성물은 상기 중합체를 0.02∼5 중량%로 포함한다.
WO　03/002620은 경질 표면, 예를 들어 파인 스톤(fine stone) 바닥 또는 스테인레스 스틸 표면에 대한 오염 제거용 중합체로서의 디알킬아미노알킬 (메트)아크릴레이트의 용도를 개시한다. 개시된 세정제 조성물은 상기 중합체를 0.1∼5 중량%로 포함한다.
DE-A　100　61　897은 재오염을 감소시킴과 동시에 오염 제거성을 개선시키는, 실리케이트 함유 친수성 입자를 포함하는 세정 조성물을 개시한다. 상기 입자는 세정하고자 하는 기재의 표면에 흡착됨으로써, 표면의 특성에 영향을 준다.
하이드로포빈은 필라멘트형 진균류, 예를 들어 스키조필럼 커뮨(Schizophyllum commune)의 특징인 약 100개 내지 150개의 아미노산으로 이루어진 소형 단백질이다. 이 단백질은 일반적으로 8개의 시스테인 단위를 포함한다.
하이드로포빈은 계면에 대해 현저한 친화력을 보유하며, 따라서 표면의 코팅에 유용하다. 예를 들어, 테플론(Teflon)을 하이드로포빈으로 코팅하여 친수성 표면으로 만들 수 있다.
하이드로포빈은 천연 공급원으로부터 분리할 수 있다. 그러나, 화학적 및/또는 생물공학적 제조 방법을 이용하여 비천연 하이드로포빈을 합성하는 것도 가능하 다. 본 출원인의 이전 출원 DE　102005007480.4는 자연에 존재하지 않는 하이드로포빈을 제조하는 방법을 개시한다.
선행 기술은 다양한 분야에 있어서의 하이드로포빈의 용도를 제안하고 있다.
WO　96/41882는 소수성 표면에 친수성을 제공하기 위해, 친수성 기재의 방수성을 향상시키기 위해, 수중유 에멀션 또는 유중수 에멀션을 제조하기 위해, 하이드로포빈을 유화제, 증점제 또는 계면활성제로서 사용하는 용도를 제안한다. 그 밖에도, 약학 분야, 예컨대 연고 또는 크림의 제조, 또, 미용 분야, 예컨대 피부 보호, 또는 샴푸 또는 컨디셔너의 제조에 있어서의 용도도 제안되었다.
EP-A　1　252　516은 30∼80℃에서 창문, 콘텍트 렌즈, 바이오센서, 의료 장치, 분석 수행용 또는 저장용 용기, 선각, 고체 입자 또는 승용차의 프레임 또는 동체를 하이드로포빈 함유 용액으로 코팅하는 방법을 개시한다.
WO　03/53383은 미용 분야에서 케라틴 물질을 처리하기 위한 하이드로포빈의 용도를 개시한다.
WO　03/10331은 추가 물질, 예를 들어 전기 활성 물질, 항체 또는 효소가 비공유 결합으로 결합되어 있는 하이드로포빈 코팅 센서(예를 들어 측정용 전극)를 개시한다.
그러나 인용된 참고 문헌 중 어느 것도 경질 표면의 방오 처리를 위한 하이드로포빈의 용도는 개시하고 있지 않다.
본 발명의 목적은 새로운 방오 기법을 제공하는 것이다.
본 발명자들은 경질 표면의 방오 처리에 하이드로포빈을 사용하는 것에 의해 상기 목적이 달성됨을 발견하였다. 본 발명의 바람직한 제1 양태에서, 상기 방오 처리는 표면의 세정과 함께 이루어진다.
제2 양태에서, 본 발명은 1종 이상의 하이드로포빈과 1종 이상의 용매를 포함하는 조성물을 경질 표면과 접촉시키는 단계를 포함하는, 경질 표면의 방오 처리 방법을 제공한다.
제3 양태에서, 본 발명은 1종 이상의 하이드로포빈, 1종 이상의 계면활성제와 1종 이상의 용매를 포함하는 경질 표면용 세정제를 제공한다.
제4 양태에서, 본 발명은 하이드로포빈 함유 방오 코팅을 포함하는 경질 표면에 관한 것이다.
본 발명자들은 놀랍게도 극소량의 하이드로포빈이라도 경질 표면의 효과적인 방오 처리에 충분하다는 사실을 발견하였다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
"경질 표면"이란 용어는 당업자에게 공지되어 있다. 경질 표면은 압착이 가능하다고 해도 최소한으로만 가능한 표면, 특히 평활한 표면으로서, 예를 들어 유리, 세라믹, 금속(예를 들어, 스테인레스 스틸 또는 황동), 에나멜, 플라스틱 및/또는 래커칠한 표면이 있다. 래커칠한 표면의 예로는 래커칠한 자동차 동체의 표면 또는 가전 제품의 표면을 포함한다. 경질 표면은 특히 전형적인 가정용 표면, 예를 들어 타일, 바닥, 비품, 세면기(대야), 샤워실, 욕조, 변기, 샤워 캐빈, 욕실 가구, 부엌 가구, 예컨대 식탁, 의자, 식기장, 작업대 표면 또는 기타 가구, 거울, 창문, 식기류, 식탁용 날붙이, 유리 제품, 자기 제품의 표면, 또는 세탁기, 식기 세척기, 조리기 또는 배기 후드 등의 가전 제품의 표면을 포함할 수 있다.
"방오(성)"란 용어는 당업자에게 공지되어 있다. 표면의 방오 처리는 표면의 오염을 억제하고/하거나 표면으로부터 오물의 제거를 용이하게 한다. 오물은, 알려진 바와 같이, 고체 및/또는 액체 물질에 의한 경질 표면의 바람직하지 않은 임의의 유형의 오염을 포함한다. 오물의 예로는 지방, 오일, 단백질, 음식 찌꺼기, 먼지 또는 때를 포함한다. 오염은 또한 석회 퇴적물, 예를 들어 물의 경도로 인해 형성되는 마른 물자국을 포함할 수 있다. 그 밖의 예로는 개인 관리용 세정제 또는 케어제의 잔류물 또는 물의 경도와 관련하여 상기 세정제 및 케어제로부터 형성될 수 있고, 예를 들어 세면기, 샤워 인클로저 또는 욕조와 같은 경질 표면 상에 퇴적될 수 있는 불용성 석회 비누의 잔류물을 포함한다.
본 발명에 따르면, 경질 표면의 방오 처리에 1종 이상의 하이드로포빈이 사용된다. 단 1종의 하이드로포빈이 사용될 수도 있고 복수의 상이한 하이드로포빈으로 된 혼합물이 사용될 수도 있다.
이하에서, 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "하이드로포빈(hydrophobin)"이란 용어는 하기 일반 구조식 (I)의 폴리펩티드를 의미한다.
Xn-C1-X1-50-C2-X0-5-C3-X1-100-C4-X1-100-C5-X1-50-C6-X0-5-C7-X1-50-C8-Xm (I)
상기 식에서, X는 20개의 천연 아미노산(Phe, Leu, Ser, Tyr, Cys, Trp, Pro, His, Gln, Arg, Ile, Met, Thr, Asn, Lys, Val, Ala, Asp, Glu, Gly) 중 어느 하나일 수 있다. 각각의 X는 동일하거나 상이할 수 있다. X 다음에 표시된 지수는 각 경우에 아미노산의 수를 나타내며, C는 시스테인, 알라닌, 세린, 글리신, 메티오닌 또는 트레오닌을 나타내고, 단, C로 표시되는 아미노산 중 적어도 4개는 시스테인이며, 지수 n 및 m은 독립적으로 0∼500, 바람직하게는 15∼300 범위의 자연수이다.
일반식 (I)의 폴리펩티드는, (유리 표면의 코팅 후) 비코팅 유리 표면 상에 동일한 크기의 물방울에 의해 형성된 접촉각에 비해, 물방울의 접촉각을 20˚ 이상, 바람직하게는 25˚이상, 더 바람직하게는 30˚이상, 가장 바람직하게는 35˚이상 증가시키는 특성(각각의 측정은 실온에서 이루어짐)을 갖는 것을 추가 특징으로 한다.
C1 내지 C8로 표시되는 아미노산은 시스테인인 것이 바람직하나; 이들은 또한 유사한 부피의 다른 아미노산, 바람직하게는 알라닌, 세린, 트레오닌, 메티오닌 또는 글리신으로 치환될 수도 있다. 그러나, C1 내지 C8 위치 중 4개 이상, 바람직하게는 5개 이상, 더 바람직하게는 6개 이상, 특히 7개 이상이 시스테인으로 구성된다. 본 발명에 따라 사용되는 단백질의 시스테인은 환원형으로 존재하거나 서로 디설파이드 가교 결합을 형성할 수 있다. 특히 1개 이상, 바람직하게는 2개, 더 바람직하게는 3개, 가장 바람직하게는 4개의 분자내 디설파이드 가교 결합을 포함하는, C-C 가교 결합의 분자내 형성이 특히 바람직하다. 전술한 바와 같이 시스테인이 유사한 부피의 아미노산으로 치환되는 경우, 상기 C 위치가 쌍대 치환에 관여하는 것이 바람직한데, 그 이유는 서로 간에 분자내 디설파이드 가교 결합이 형성될 수 있기 때문이다.
시스테인, 세린, 알라닌, 글리신, 메티오닌 또는 트레오닌이 X로 표시된 위치에 이용될 경우, 상기 일반식에 있어서 개개의 C 위치의 넘버링은 그에 따라 변경될 수 있다.
하기 일반식 (II)의 하이드로포빈을 사용하는 것이 바람직하다.
Xn-C1-X3-25-C2-X0-2-C3-X5-50-C4-X2-35-C5-X2-15-C6-X0-2-C7-X3-35-C8-Xm (II)
상기 식에서, X, C와, X 다음에 표시된 지수는 각각 상기에 정의된 바와 같고, 지수 n 및 m은 0∼300 범위의 수를 나타내며, 상기 단백질은 전술한 접촉각 변화가 추가 특징이다.
하기 일반식 (III)의 하이드로포빈을 사용하는 것이 바람직하다.
Xn-C1-X5-9-C2-C3-X11-39-C4-X2-23-C5-X5-9-C6-C7-X6-18-C8-Xm (III)
상기 식에서, X, C와, X 다음에 표시된 지수는 각각 상기에 정의된 바와 같고, 지수 n 및 m은 0∼200 범위의 수를 나타내며, 상기 단백질은 전술한 접촉각 변화가 추가 특징이고, 또한 C로 표시된 아미노산 중 적어도 6개는 시스테인이다. C로 표시된 아미노산 전부가 시스테인인 것이 특히 바람직하다.
잔기 Xn 및 Xm은 하이드로포빈에 자연적으로 연결될 수 있는 펩티드 서열일 수 있다. 그러나, 잔기 Xn 및 Xm 중 어느 하나 또는 둘 다 하이드로포빈에 자연적으로 연결되지 않는 펩티드 서열일 수 있다. 이것은 또한, 하이드로포빈에 자연적으로 존재하는 펩티드 서열이 하이드로포빈에 자연적으로 존재하지 않는 펩티드 서열에 의해 연장된 Xn 및/또는 Xm 잔기를 포함한다.
Xn 및/또는 Xm이 하이드로포빈에 자연적으로 존재하지 않는 펩티드 서열일 경우, 그러한 서열의 길이는 일반적으로 20개 이상의 아미노산, 바람직하게는 35개 이상의 아미노산, 더 바람직하게는 50개 이상의 아미노산, 가장 바람직하게는 100개 이상의 아미노산이다. 하이드로포빈에 자연적으로 연결되지 않는 이러한 유형의 잔기는 이하에서 융합 파트너 부분으로 칭해지기도 한다. 이것은 상기 단백질이 자연에서는 이러한 형태로 함께 존재하지 않는 융합 파트너 부분과 하이드로포빈 부분 1개로 구성된다는 사실을 분명하게 표현하기 위한 것이다.
상기 융합 파트너 부분은 다수의 단백질로부터 선택될 수 있다. 다수의 융합 파트너 부분을 하나의 하이드로포빈 부분에, 예를 들어 하이드로포빈 부분의 아미노 말단(Xn) 또는 카르복시 말단(Xm)에 연결시키는 것도 가능하다. 그러나, 예를 들어, 2개의 융합 파트너 부분을 본 발명에 따라 사용되는 단백질의 한 위치(Xn 또는 Xm)에 연결시키는 것도 가능하다.
특히 적절한 융합 파트너 부분은 미생물, 특히 이. 콜라이(E. coli) 또는 바실러스 섭틸리스(Bacillus subtilis)에 자연적으로 존재하는 폴리펩티드이다. 그러한 융합 파트너 부분의 예로는 서열 yaad(서열 번호 15 및 16), yaae(서열 번호 17 및 18) 및 티오레독신이 있다. 상기 서열의 단지 일부분, 바람직하게는 70%∼99%, 더 바람직하게는 80%∼98%를 포함하거나, 상기 서열과 비교하여 각각의 아미노산 또는 뉴클레오티드가 변경된, 상기 서열의 단편 또는 유도체 역시 매우 적합하다.
본 발명에 따라 사용되는 단백질은, 예를 들어 글리코실화, 아세틸화, 또는 예를 들어 글루타르알데히드에 의한 화학적 가교 결합에 의해 그 폴리펩티드 서열이 추가로 변형될 수 있다.
본 발명에 따라 사용되는 단백질의 특성 중 하나는 표면을 이 단백질로 코팅할 경우 표면 특성이 변화된다는 것이다. 표면 특성에 있어서의 변화는 표면을 단백질로 코팅하기 전과 후에 물방울의 접촉각을 측정하고 두 측정값 간의 차이를 측정하여 실험적으로 측정할 수 있다.
당업자라면 기본적으로 접촉각 측정 방법을 알고 있을 것이다. 접촉각 측정을 위한 정확한 실험 조건은 실험 부분에서 기술한다. 그 부분에 기재된 조건 하에, 본 발명에 따라 사용되는 단백질은 유리 표면 상에서의 물방울의 접촉각을 20˚ 이상, 바람직하게는 25˚ 이상, 더 바람직하게는 30˚ 이상 증가시키는 특성을 보유한다.
지금까지 알려진 하이드로포빈의 하이드로포빈 부분에 있어서의 극성 및 비극성 아미노산의 위치는 보존되어 있어서, 특징적인 소수성 플롯을 형성한다. 생물물리학적 특성 및 소수성에 있어서의 차이에 기인하여, 지금까지 알려진 하이드로포빈은 두 가지 부류, 즉 I형 및 II형으로 분류되어 있다(Wessels et al., Ann. Rev. Phytopathol., 1994, 32, 413-437).
I형 하이드로포빈의 조립된 막은 고온에서 소듐 n-도데실 설페이트(SDS)의 1 중량% 수용액에서도 극도의 불용성을 나타내며, 진한 트리플루오로아세트산(TFA) 또는 포름산을 사용해야만 다시 해리시킬 수 있다. 이와는 달리, II형 하이드로포빈의 조립형은 안정성이 더 적다. 이들은 단지 60 중량%의 에탄올 또는 1 중량%의 SDS(실온에서)를 사용해서 다시 용해시킬 수 있다.
아미노산 서열의 비교는 시스테인 C3과 시스테인 C4 사이의 영역의 길이가 I형 하이드로포빈에서보다 II형 하이드로포빈에서 확실히 더 짧다는 사실을 보여준다. 또한, II형 하이드로포빈은 I형 하이드로포빈보다 하전된 아미노산을 더 많이 보유한다.
본 발명을 구현하는 데 있어서 특히 바람직한 하이드로포빈은 유형 dewA, rodA, hypA, hypB, sc3, basf1, basf2의 것이며, 이들은 하기 서열 목록에서 구조적 특징이 제시된다. 이들은 단지 그 일부분 또는 유도체일 수도 있다. 동일하거나 상이한 구조의 다수의 하이드로포빈, 바람직하게는 2개 또는 3개의 하이드로포빈을 서로, 또, 하이드로포빈에 자연적으로 연결되지 않는 적절한 해당 폴리펩티드 서열에 연결하는 것도 가능하다.
그 밖에도 본 발명을 실시함에 있어서 특히 적합한 것은 서열 번호 20, 22, 24에 제시된 폴리펩티드 서열을 가지는 융합 단백질과, 또한 이것을 코딩하는 핵산 서열, 구체적으로 서열 번호 19, 21, 23에 따른 서열이다. 특히 바람직한 실시형태는, 서열 번호 22, 22 또는 24에 제시된 폴리펩티드 서열로부터 출발하여, 전체 아미노산 중 1개 이상, 최대 10개, 바람직하게는 5개, 더 바람직하게는 5%가 치환, 삽입 또는 결실되어 있으나 여전히 출발 단백질의 생물학적 특성의 50% 이상을 보유하는 단백질을 더 포함한다. 본 명세서에서 본 발명에 따라 사용된 단백질의 생물학적 특성은 상기 접촉각의 변화가 20˚ 이상인 것을 의미하는 것으로 이해되어야 한다.
본 발명에 따라 사용되는 폴리펩티드는 통상의 펩티드 합성 기법, 예를 들어 메리필드(Merrifield) 고상 합성법으로 화학적으로 제조할 수 있다.
천연 하이드로포빈은 적절한 방법을 이용하여 천연 공급원으로부터 분리할 수 있다. 이에 관해서는 예를 들어 문헌[Woesten et al., Eur. J. Cell Bio. 63, 122-129 (1994)] 또는 WO 96/41882를 참조할 수 있다.
바람직하게는 융합 단백질은, 융합 파트너를 코딩하는 1개의 핵산 서열, 특히 DNA 서열과, 하이드로포빈 부분을 코딩하는 1개의 핵산 서열, 특히 DNA 서열을 조합하여, 조합된 핵산 서열의 유전자 발현에 의해 숙주 유기체에서 원하는 단백질이 생성되도록 하는 유전 공학 기법으로 제조할 수 있다. 이러한 제조 방법은 본 출원인의 선행 출원 DE 102005007480.4에 개시되어 있다.
전술한 제조 방법에 적합한 숙주 유기체 또는 생산 유기체로는 원핵 생물(고세균 포함) 또는 진핵 생물, 특히 호염성 박테리아 및 메탄 생성균(methanococci)을 비롯한 박테리아, 진균류, 곤충 세포, 식물 세포 및 포유동물 세포, 더 바람직하게는 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli), 바실러스 섭틸리스, 바실러스 메가테륨(Bacillus megaterium), 아스퍼질러스 오리지(Aspergillus oryzea), 아스퍼질러스 니둘란스(Aspergillus nidulans), 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger), 피치아 파스토리스(Pichia pastoris), 슈도모나스(Pseudomonas) 종, 락토바실러스(lactobacilli), 한세눌라 폴리모파(Hansenula polymorpha), 트리코더마 레세이(Trichoderma reesei), SF9(또는 관련 세포) 등을 들 수 있다.
본 발명을 위해, 조절 핵산 서열의 유전적 제어 하에, 본 발명에 따라 사용되는 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함하도록 구성된 발현 구성체와, 또한, 상기 발현 구성체 중 적어도 하나를 포함하는 벡터를 하이드로포빈을 제조하는 데 사용할 수 있다.
사용된 발현 구성체는 특정 코딩 서열의 5'쪽 상류의 프로모터와 특정 코딩 서열의 3'쪽 하류의 종결 서열과, 또한 경우에 따라, 각각 코딩 서열에 작동 가능하게 연결된 통상적인 추가 조절 요소를 포함하는 것이 바람직하다.
"작동 가능한 연결(operative linkage)"이란 각각의 조절 요소가 코딩 서열을 발현하는 데 필요한 기능을 충족할 수 있도록, 프로모터, 코딩 서열, 종결 서열과, 경우에 따라, 추가 조절 요소가 순차적으로 배열되어 있는 것을 의미한다.
작동 가능하게 연결할 수 있는 서열의 예로는 표적화 서열과, 또 인핸서, 폴리아데닐화 신호 등이 있다. 그 밖의 조절 요소는 선별 마커, 증폭 신호, 복제 기점 등을 포함한다. 적절한 조절 서열에 관해서는, 예를 들어 문헌[Goeddel, Gene Expression Technology : Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990)]에 기재되어 있다.
상기 조절 서열 이외에도, 실제적 구조 유전자의 상류에 상기 서열의 천연 조절 요소가 존재할 수도 있으며, 경우에 따라, 천연 조절 요소가 차단되어 유전자의 발현이 증대될 수 있도록 천연 조절 요소를 유전적으로 변형시킬 수 있다.
바람직한 핵산 구성체는 또한 프로모터에 기능적으로 연결되어 있고 핵산 서열의 발현을 증대시킬 수 있는 하나 또는 그 이상의 전술한 인핸서 서열을 포함할 수 있다. 추가적인 조절 요소 또는 종결 서열 등의 유용한 추가 서열을 DNA 서열의 3' 말단에 삽입시킬 수도 있다.
핵산 서열은 1 카피 이상이 구성체 내에 존재할 수 있다. 상기 구성체는 또한, 경우에 따라 상기 구성체의 선별을 목적으로, 추가적인 마커, 예컨대 항생제 내성 또는 영양 요구성 보완 유전자를 포함할 수 있다.
본 방법에 유용한 조절 서열은, 예를 들어 cos, tac, trp, tet, trp-tet, Ipp, lac, Ipp-lac, laclq-T7, T5, T3, gal, trc, ara, rhaP(rhaPBAD) SP6, 람다-PR 또는 임람다-P 프로모터 등의 프로모터에 존재하며, 상기 프로모터는 그램 음성 박테리아에 유용하게 사용된다. 그 밖의 유용한 조절 서열은, 예를 들어 그램 양성 프로모터 amy 및 SP02, 효모 또는 진균류 프로모터 ADC1, MF알파, AC, P-60, CYC1, GAPDH, TEF, rp28, ADH에 존재한다.
조절을 위해 인공 프로모터를 사용하는 것도 가능하다.
숙주 유기체에서 핵산 구성체를 발현시키기 위해, 숙주에서의 유전자의 최적 발현을 가능하게 하는 벡터, 예를 들어 플라스미드 또는 파지에 핵산 구성체를 삽입시키는 것이 바람직하다. 벡터는, 플라스미드 및 파지뿐 아니라 그 자체로서 공지되어 있는 다른 모든 벡터, 예를 들어 SV40, CMV, 배큘로바이러스 및 아데노바이러스와 같은 바이러스, 트랜스포존, IS 엘리먼트, 파지미드, 코스미드 및 선형 또는 원형 DNA와, 또한 아그로박테리아 시스템을 더 포함한다.
이러한 벡터는 숙주 유기체에서 자율적으로 또는 염색체를 통해 복제할 수 있다. 이러한 벡터는 본 발명의 추가 양태를 구성한다. 적절한 플라스미드의 예로는 이. 콜라이용 플라스미드, 즉 pLG338, pACYC184, pBR322, pUC18, pUC19, pKC30, pRep4, pHS1, pKK223-3, pDHE19.2, pHS2, pPLc236, pMBL24, pLG200, pUR290, pIN-III"3-B1, tgt11 또는 pBdCI, 스트렙토마이세스용 플라스미드, 즉 plJ101, plJ364, plJ702 또는 plJ361, 바실러스용 플라스미드, 즉 pUB110, pC194 또는 pBD214, 코리네박테리아용 플라스미드, 즉 pSA77 또는 pAJ667, 진균류용 플라스미드, 즉 pALS1, plL2 또는 pBB116, 효모용 플라스미드, 즉 2알파, pAG-1, YEp6, YEp13 또는 pEMBLYe23, 또는 식물용 플라스미드, 즉 pLGV23, pGHlac+, pBIN19, pAK2004 또는 pDH51이 있다. 상기 플라스미드는 가능한 플라스미드 중 선택된 일부에 해당된다. 그 밖의 플라스미드도 그 자체로서 공지되어 있으며, 예를 들어 문헌[Cloning Vectors (Eds. Pouwels P. H. et al. Elsevier, Amsterdam-New York-Oxford, 1985, ISBN　0 444 904018)]에서 찾아볼 수 있다.
핵산 구성체는, 존재하는 다른 유전자를 발현시키기 위해, 숙주 유기체 및 유전자(들)의 선택에 따라 최적 발현을 위해 선택되는, 발현 증대를 위한 3' 말단 및/또는 5' 말단의 조절 서열을 추가로 포함하는 것이 바람직하다.
이러한 조절 서열들은 유전자 및 단백질 발현이 특이적으로 일어나도록 하기 위한 것이다. 숙주 유기체에 따라, 이것은, 예를 들어 유전자가 유도 후에만 발현 또는 과발현되는 것, 또는 유전자가 즉시 발현 및/또는 과발현되는 것을 의미할 수 있다.
도입된 유전자의 발현은 조절 서열 또는 인자에 의해 긍정적으로 영향을 받아서 증대될 수 있는 것이 바람직하다. 따라서 조절 요소는 프로모터 및/또는 인핸서 등의 강력한 전사 신호를 이용하여 전사 수준을 증대시키는 것이 바람직할 수 있다. 그러나, 이 외에도, 예를 들어 mRNA의 안정성을 향상시킴으로써 번역을 증대시키는 것도 가능하다.
또 다른 형태의 벡터로서, 핵산 구성체 또는 핵산을 포함하는 벡터를 선형 DNA의 형태로 미생물에 도입하여 이종성 또는 상동성 재조합에 의해 숙주 유기체의 게놈으로 통합되도록 하는 것이 바람직할 수도 있다. 상기 선형 DNA는 플라스미드와 같은 선형화된 벡터로 구성되거나 핵산 구성체 또는 핵산으로만 구성될 수 있다.
유기체에서의 이종성 유전자의 최적 발현을 위해서는, 그 유기체에서 이용되는 특정 코돈 이용 방식에 따라 핵산 서열을 변형시키는 것이 바람직하다. 코돈 이용 방식은 해당 유기체의 다른 공지 유전자의 컴퓨터 분석을 이용하여 용이하게 결정할 수 있다.
적절한 코딩 뉴클레오티드 서열 및 종결 또는 폴리아데닐화 신호에 적절한 프로모터를 융합하여 발현 카세트를 제조한다. 예를 들어 문헌[T. Maniatis, E.　F. Fritsch and J. Sambrook, Molecular Cloning : A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1989)], 문헌[T. J. Silhavy, M.　L.　Berman and L. W. Enquist, Experiments with Gene Fusions, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1984)] 및 문헌[Ausubel, F. M. et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience (1987)]에 기재된 바와 같은 통상적인 재조합 및 클로닝 기법을 상기 목적에 이용한다.
적절한 숙주 유기체에서의 발현을 위해서는, 재조합 핵산 구성체 또는 유전자 구성체를, 그 숙주에서의 유전자의 최적 발현을 가능하게 하는 숙주 특이적 벡터에 삽입시키는 것이 바람직하다. 벡터는 그 자체로 공지되어 있으며, 예를 들어 문헌["Cloning Vectors" (Pouwels P. H. et al., Eds, Elsevier, Amsterdam-New York-Oxford, 1985)]으로부터 정보를 입수할 수 있다.
벡터를 이용하여, 예를 들어 적어도 하나의 벡터로 형질전환되고 본 발명에 따라 사용되는 폴리펩티드의 제조에 이용될 수 있는 재조합 미생물을 제조할 수 있다. 전술한 재조합 구성체는 적절한 숙주 시스템에 도입하여 발현시키는 것이 바람직하다. 이와 관련하여, 상기 핵산이 특정 발현 시스템에서 발현되도록 하기 위해, 당업자에게 공지된 통상의 클로닝법 및 형질감염법, 예를 들어 공침전법, 원형질 융합법, 전기천공법, 레트로바이러스 형질감염법 등을 이용하는 것이 바람직하다. 적절한 시스템은, 예를 들어 문헌[Current Protocols in Molecular Biology, F.　Ausubel et al., Eds., Wiley Interscience, New York 1997] 또는 문헌[Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd edition, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989]에 기재되어 있다.
상동성 재조합 미생물을 제조하는 것도 가능하다. 이를 위해, 본 발명에 따라 사용될 수 있는 유전자의 적어도 일부분, 또는 서열을 변형시키기 위해, 예를 들어 기능을 파괴하기 위해(넉아웃 벡터), 경우에 따라 하나 이상의 아미노산 결실, 아미노산 추가 또는 아미노산 치환이 도입된 코딩 서열의 적어도 일부분을 포함하는 벡터를 제조한다. 도입된 서열은, 예를 들어 관련 미생물 유래의 상동체이거나, 포유동물, 효모 또는 곤충 기원에서 유래된 것일 수도 있다. 대안으로, 상동성 재조합에 사용되는 벡터는, 상동성 재조합의 경우, 내인성 유전자가 돌연변이되거나 다른 방식으로 변경되지만, 여전히 기능성 단백질을 코딩하도록 디자인될 수 있다(예를 들어, 내인성 단백질의 발현이 변화되도록 상류 조절 영역을 변경할 수 있다). 본 발명에 따라 사용되는 유전자의 변경된 부분은 상동성 재조합 벡터 내에 존재한다. 상동성 재조합에 적합한 벡터의 구성에 대해서는, 예를 들어 문헌[Thomas, K.R. and Capecchi, M.R. (1987) Cell 51:503]에 기재되어 있다.
본 발명에 따라 사용되는 핵산 또는 핵산 구성체에 적합한 재조합 숙주 유기체는 기본적으로 어떠한 원핵 또는 진핵 유기체도 될 수 있다. 박테리아, 진균류 또는 효모 등의 미생물이 숙주 유기체로서 사용되는 것이 바람직하다. 그램 양성 또는 그램 음성 박테리아, 바람직하게는 장내세균(Enterobacteriaceae) 과, 슈도모나스과(Pseudomonadaceae) 과, 리조비아(Rhizobiaceae) 과, 스트렙토마이세스(Streptomycetaceae) 과 또는 노카디아(Nocardiaceae) 과 박테리아를 사용하는 것이 바람직하고, 에스케리키아 속, 슈도모나스 속, 스트렙토마이세스 속, 노카디아 속, 부르크홀더리아(Burkholderia) 속, 살모넬라(Salmonella) 속, 아그로박테리아(Agrobacterium) 속 또는 로도코쿠스(Rhodococcus) 속의 박테리아를 사용하는 것이 특히 바람직하다.
융합 단백질의 제조 방법에 사용되는 유기체는, 숙주 유기체에 따라, 당업자에게 공지된 방법으로 생육 또는 배양한다. 미생물은 통상, 일반적으로 당 형태의 탄소원, 일반적으로 유기 질소원 형태의 질소원, 예컨대 효모 추출물 또는 염(예컨대, 황산암모늄염, 미량 원소의 염, 예컨대 철염, 망간염 및 마그네슘염)과, 경우에 따라 비타민을 포함하는 액상 배지에서, 산소를 공급하면서, 0℃∼100℃, 바람직하게는 10℃∼60℃의 온도에서 배양한다. 이와 관련하여, 영양 배지액의 pH는 고정값으로 유지할 수 있으며, 즉, 배양 도중에 조절할 수 있고 조절하지 않을 수도 있다. 배양은 회분식, 반회분식 또는 연속식으로 수행할 수 있다. 영양분은 발효 초반부에 초기에 공급하거나 반연속식 또는 연속식으로 추후에 공급할 수 있다. 효소는 실시예에 기재된 방법으로 유기체로부터 분리하거나, 미정제 추출물로서 반응에 사용할 수 있다.
폴리펩티드 생산 미생물을 배양하고, 경우에 따라 폴리펩티드의 발현을 유도하며, 상기 폴리펩티드를 배양액으로부터 분리하여, 폴리펩티드 또는 생물학적 활성을 갖는 이의 기능성 단편을 재조합 방식으로 제조하는 방법 역시 적합하다. 폴리펩티드는 상기 방식으로 필요에 따라 산업적 규모로 제조할 수도 있다. 재조합 미생물은 공지의 방법으로 배양하고 발효시킬 수 있다. 박테리아는, 예를 들어 TB 배지 또는 LB 배지에서 온도 20∼40℃ 및 pH 6∼9에서 증폭시킬 수 있다. 적절한 배양 조건에 대해서는, 예를 들어 문헌[T. Maniatis, E.F. Fritsch and J. Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1989)]에 상세히 기재되어 있다.
폴리펩티드가 배양 배지로 분비되지 않는다면, 세포를 파괴하고, 공지된 단백질 분리 방법으로 용해물로부터 생성물을 얻는다. 세포는, 필요에 따라 고주파 초음파를 이용하거나, 예를 들어 프렌치(French) 압력 셀에서와 같이 고압을 이용하거나, 삼투압 분해를 이용하거나, 계면활성제, 용해성 효소 또는 유기 용매의 작용에 의하거나, 균질화기를 이용하거나, 또는 상기 방법 중 2 이상의 방법을 병용하여 파괴할 수 있다.
폴리펩티드는 분자체 크로마토그래피(겔 여과), 예컨대 Q 세파로스 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피 및 소수성 크로마토그래피 등의 공지된 크로마토그래피법을 이용하고, 또한, 한외 여과, 결정화, 염석, 투석 및 네이티브(native) 겔 전기영동 등의 다른 통상적인 방법을 이용하여 정제할 수 있다. 적합한 방법은, 예를 들어 문헌[Cooper, F. G., Biochemische Arbeitsmethoden, Verlag Walter de Gruyter, Berlin, New York] 또는 문헌[Scopes, R., Protein Purification, Springer Verlag, New York, Heidelberg, Berlin]에 기재되어 있다.
cDNA를 특정 뉴클레오티드 서열만큼 연장함으로써, 변경된 폴리펩티드 또는 융합 단백질(이것은 예를 들어 정제를 간소화하는 데 이용됨)을 코딩하는 벡터 시스템 또는 올리고뉴클레오티드를 이용하여 재조합 단백질을 분리하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 유형의 적절한 변형의 예로는 앵커로서 작용하는 "태그", 예컨대 6-히스티딘 앵커로서 알려진 변형, 또는 항체에 의해 항원으로서 인식될 수 있는 에피토프가 있다[참고 문헌: Harlow, E. and Lane, D., 1988, Antibodies: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor(N.Y.) Press]. 적절한 다른 태그로는, 예를 들어 HA, 칼모듈린-BD, GST, MBD; 키틴-BD, 스트렙타비딘-BD-아비-태그, 플래그(Flag)-태그, T7 등이 있다. 이러한 앵커들은, 예를 들어 크로마토그래피 컬럼에 패킹될 수 있거나 미량적정 평판 또는 다른 지지체 상에서 이용될 수 있는, 중합체 매트릭스 등의 고체 지지체에 단백질을 부착시키는 데 이용될 수 있다. 해당 정제 프로토콜은 시판되는 친화성 태그 공급업자로부터 입수할 수 있다.
전술한 바와 같이 제조된 단백질은 융합 단백질로서 바로 이용할 수 있거나, 또는 융합 파트너 부분을 절단 및 제거한 후, "순수한" 하이드로포빈으로서 이용할 수 있다.
융합 파트너 부분을 제거하고자 한다면, 하이드로포빈 부분과 융합 파트너 부분 간의 융합 단백질에 잠재적 절단 부위(프로테아제에 대한 특이적 인식 부위)를 포함시키는 것이 바람직하다. 적절한 절단 부위로는 특히, 생물정보학 도구를 이용하여 쉽게 결정할 수 있는 것과 같은, 하이드로포빈 부분에도 융합 파트너 부분에도 존재하지 않는 펩티드 서열을 포함한다. 예를 들어, 메티오닌에 대한 BrCN 절단, 또는 Xa 인자, 엔테로키나제 절단, 트롬빈, TEV(담배 식각 바이러스 프로테아제) 절단을 이용한 프로테아제 매개 절단이 특히 적절하다.
본 발명에 따라 경질 표면의 방오 처리에 하이드로포빈을 이용할 경우, 하이드로포빈은 물질로 이용할 수 있다. 그러나 상기 하이드로포빈은 1종 이상의 적절한 용매 중의 제제 또는 조성물로서 이용되는 것이 바람직하다.
본 발명의 구현하기 위해 사용되는 하이드로포빈의 선택은 제한되지 않는다. 1종의 하이드로포빈 또는 복수의 상이한 하이드로포빈을 사용할 수 있다. 당업자라면, 적절한 선택을 할 수 있을 것이다. 예를 들어, yaad-Xa-dewA-his(서열 번호 19) 또는 yaad-Xa-rodA-his(서열 번호 21)과 같은 융합 단백질을 사용하는 것도 가능하다.
제제용 용매는 물 및/또는 유기 용매를 포함할 수 있다. 용매 혼합물 역시 사용될 수 있다. 용매의 본질은 하이드로포빈에 따라 달라지며, 처리하고자 하는 표면의 본질과 그 용도 역시 당업자가 적절히 선택할 수 있다. 일반적으로, 가정 분야에 있어서는 물 또는 수성 제제가 바람직하다. 산업 분야에는 수성 제제, 주로 수성인 제제 및 비수성 제제가 적합하다.
용매는 바람직하게는 물 또는 물과 수혼화성 유기 용매의 혼합물을 포함한다. 상기 유기 용매의 예로는 수혼화성 1가 또는 다가 알코올, 예를 들어 메탄올, 에탄올, n-프로판올, i-프로판올, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 또는 글리세롤을 포함한다. 에테르 알코올 역시 사용될 수 있다. 그 예로는 (폴리)에틸렌 또는 (폴리)프로필렌 글리콜의 모노알킬 에테르, 예컨대 에틸렌 글리콜 모노부틸 에테르를 들 수 있다. 수용성 용매 및 유기 용매의 본질 및 함량은 당업자가 선택할 수 있다. 수성 혼합물은 용매 전체의 총량을 기준으로 80 중량% 이상의 물을 포함하는 것이 바람직하다. 물 이외에도 알코올이 바람직한 용매이다.
본 발명에 따라 사용되는 조성물을 제조하기 위해서는, 합성된 그 상태, 분리 및/또는 정제된 그 상태의 하이드로포빈 수용액을 이용하는 것이 바람직할 수 있다. 이것은 그 순도에 따라 합성에 기인한 보조제의 잔류물을 더 포함할 수 있다. 그러나, 예를 들어 동결 건조에 의해, 초기 단계에서 하이드로포빈을 물질로서 분리한 후 이것만을 제2 단계에서 제제화하는 것도 가능하다.
제제 중 하이드로포빈의 함량은 표면의 본질 및/또는 계획된 용도에 따라 당업자가 결정할 수 있다. 그러나 비교적 소량만으로도 방오 효과를 달성하기에 충분하다. 제제의 모든 구성 성분들의 총량을 기준으로 0.0001∼1 중량%의 양이면 충분한 것으로 확인되었으나, 본 발명이 상기 범위에 한정되는 것은 아니다. 그 함량이 0.0005∼0.5 중량% 범위인 것이 바람직하고, 0.001∼0.1 중량% 범위인 것이 더 바람직하다.
바람직하게는, 사용된 조성물은 세정제, 예를 들어 유리 세정제, 바닥 세정제, 다목적 세정제, 욕실 세정제, 헹굼 보조제, 식기류의 손 세척 또는 기계 세척을 위한 식기 세정제, 기계 세정제, 금속 탈지제, 고압 세정제, 알칼리 세정제, 산 세정제, 포인트 탈지제 또는 낙농업용 세정제를 포함한다. 본 발명의 세정제는 용매 및 1종 이상의 하이드로포빈뿐 아니라 기본적으로 알려진 바와 같이 1종 이상의 계면활성제를 유효량으로 포함한다.
상기 조성물은 또한 경질 표면, 특히 유리, 세라믹 또는 바닥용 사전 또는 사후 처리제를 포함할 수 있다.
계면활성제는 음이온, 비이온, 양쪽성 및/또는 양이온 계면활성제를 포함할 수 있다. 상기 계면활성제와 그 바람직한 개개의 용도는 기본적으로 당업자에게 공지되어 있다.
음이온 계면활성제의 예로는 지방 알코올 설페이트, 알킬 에테르 설페이트, 알칸설포네이트, 알킬벤젠설포네이트 또는 알킬 포스페이트를 들 수 있다. 유리 산 또는 그 염도 사용될 수 있다.
비이온 계면활성제의 예로는 알콕시화 C8-C22 알코올, 예컨대 지방 알코올 알콕실레이트 또는 옥소 공정 알코올 알콕실레이트, C6-C14　알킬 사슬 및 5∼30 mol의 에틸렌 옥시드 단위를 갖는 알킬페놀 에톡실레이트, 알킬 사슬에 8∼22를 갖는 알킬폴리글루코시드, 알킬아민 알콕실레이트 또는 알킬아미드 에톡실레이트를 포함한다.
양쪽성 계면활성제의 예로는 알킬베타인, 알킬아미드베타인, 아미노프로피오네이트, 아미노글리시네이트 또는 양쪽성 이미다졸륨 화합물을 들 수 있다.
양이온 계면활성제의 예로는 치환 또는 비치환, 직쇄 또는 분지쇄의 4차 암모늄염, 예를 들어 장쇄 알킬 라디칼을 갖는 이미다졸륨염, 디알콕시디메틸암모늄 할라이드 또는 C8-6 디알킬디메틸암모늄 할라이드를 포함한다.
계면활성제의 그 밖의 예는 DE-A　101　60　993의 섹션 [0056] 내지 [0073]에 기재되어 있다.
당업자라면 계면활성제의 유형 및 함량을 적절히 선택할 수 있을 것이다. 제제의 모든 성분들의 총량을 기준으로 0.01∼30 중량%의 양이 충분한 것으로 확인되었다.
상기 제제는 경우에 따라 추가 성분들, 예를 들어 첨가물 및/또는 보조제를 더 포함할 수 있다. 상기 성분들의 예로는 산 또는 염기, 예를 들어 카르복실산 또는 암모니아, 완충제 시스템, 중합체, 무기 입자, 예컨대 SiO2 또는 실리케이트, 염료, 방향제 또는 살생물제를 포함한다. 첨가물의 또 다른 예는 DE-A　101　60　993에, 특히 섹션 [0074] 내지 [0131]에 기재되어 있다. 당업자라면 용도에 따라 추가 성분들의 유형과 함량을 적절히 선택할 수 있을 것이다.
본 발명에 따르면, 1종 이상의 하이드로포빈과 1종 이상의 용매를 포함하는 조성물과 경질 표면을 접촉시켜 경질 표면을 방오 처리한다.
접촉 방식은 물품의 유형에 따라 정해진다. 예를 들어, 물품의 표면에 조성물을 분무하거나, 조성물로 헹구거나 닦거나, 또는 물품 전체를 제제에 침지하여 접촉을 행할 수 있다. 후자의 방법은 본질적으로 설치되지 않은 물품의 경우에만 가능하다. 처리 시간은 당업자에 의해 결정된다. 몇 초 내지 몇 시간이 걸릴 수 있다. 처리 후 표면을, 예를 들어 물로 헹구어 과잉 처리액을 제거할 수 있다.
방오 처리는 세정과 병행하여, 즉, 실제 세정 과정 중에 수행하는 것이 특히 유리할 수 있다. 이 처리는 전술한 바와 같은 1종 이상의 하이드로포빈, 1종 이상의 계면활성제 및 1종 이상의 용매를 포함하는 세정 조성물을 사용하여 수행한다.
처리는 실온 이하의 온도, 실온 또는 고온, 예를 들어 20∼100℃, 바람직하게는 20∼60℃에서 수행할 수 있다. 처리는 30℃ 이하의 온도, 특히 20∼30℃의 온도에서 수행하는 것이 바람직하다.
조성물로 처리한 후 처리된 표면은 건조시킨다. 처리된 표면의 건조는 실온에서 스스로 일어날 수도 있고, 또는 고온에서 건조를 행할 수도 있다.
표면의 처리와, 경우에 따라 건조에 이어, 고온에서, 예를 들어 최대 120℃의 온도에서 표면의 후열처리를 실시할 수 있다. 상기 후열처리는 건조를 행하면서 수행할 수도 있다. 후열처리 온도는 30∼100℃ 범위가 바람직하고, 40∼80℃ 범위, 예를 들어 50∼70℃ 범위가 더 바람직하다. 처리 시간은 당업자가 결정하며, 예를 들어 1분 내지 10　시간의 범위일 수 있다.
본 발명의 방법은 1종 이상의 하이드로포빈 함유 방오 코팅을 포함하는 경질 표면을 제공한다. 상기 코팅은 일반적으로 표면 상에 적어도 하이드로포빈의 단일 분자층을 포함한다.
방오 효과는, 예를 들어 하이드로포빈 처리 표면과 비처리 표면을 물로 헹구어 오물의 제거성을 서로 비교함으로써, 원칙적으로 공지된 방법으로 측정할 수 있다.
하이드로포빈은 소량으로도 현저한 효과를 발휘한다. 단지 0.01 중량%의 하이드로포빈을 함유하는 조성물을 사용한 처리도 현저히 개선된 방오 효과를 산출한다.
본 발명에 따른 방오 처리는 세라믹 표면, 예를 들어 타일에 특히 유용하다. 여기서, 상기 방오 처리를 통해 방오 효과뿐 아니라 표면의 현저한 소수성화를 실현할 수 있다. 이것은 특히 함습실, 예를 들어 욕실에서 큰 이점을 발휘한다.
이하에서는 하기 실시예를 통해 본 발명을 설명하고자 한다.
파트 　A:
본 발명에 따라 사용되는 하이드로포빈의 제조 및 테스트
실시예 1
yaad-His 6 /yaaE-His 6 의 클로닝을 위한 예비 작업
올리고뉴클레오티드 Hal570 및 Hal571(Hal 572/Hal 573)을 이용하여 폴리머라제 연쇄 반응을 수행하였다. 이용된 주형 DNA는 박테리아 바실러스 섭틸리스의 게놈 DNA였다. 얻어진 PCR 단편은 바실러스 섭틸리스 yaaD/yaaE 유전자의 코딩 서열과, 각각의 경우에 그 말단에 위치한 NcoI 및 BglII 제한 절단 부위를 포함하였다. 상기 PCR 단편을 정제하여 제한 엔도뉴클레아제 NcoI 및 BglII로 절단하였다. 이 DNA 단편을 삽입체로 사용하여, 퀴아젠으로부터 입수하여 제한 엔도뉴클레아제 NcoI 및 BglII로 미리 선형화한 벡터 pQE60으로 클로닝하였다. 이와 같이 하여 얻은 벡터 pQE60YAAD#2/pQE60YaaE#5를 각각 YAAD::HIS6 및 YAAE::HIS6로 구성된 단백질을 발현시키는 데 사용할 수 있다.
Hal570: gcgcgcccatggctcaaacaggtactga
Hal571: gcagatctccagccgcgttcttgcatac
Hal572: ggccatgggattaacaataggtgtactagg
Hal573: gcagatcttacaagtgccttttgcttatattcc
실시예 2
yaad 하이드로포빈 DewA-His 6 의 클로닝
올리고뉴클레오티드 KaM 416 및 KaM 417을 이용하여 폴리머라제 연쇄 반응을 수행하였다. 이용된 주형 DNA는 사상균 아스퍼질러스 니둘란스의 게놈 DNA였다. 얻어진 PCR 단편은 하이드로포빈 유전자 dewA의 코딩 서열 및 N-말단의 Xa 인자 프로테인아제 절단 부위를 포함하였다. 이 PCR 단편을 정제하여 제한 엔도뉴클레아제 BamHI으로 절단하였다. 이 DNA 단편을 삽입체로 사용하여, 제한 엔도뉴클레아제 BglII로 미리 선형화한 pQE60YAAD#2 벡터로 클로닝하였다.
이와 같이 하여 얻은 벡터 #508은 YAAD::Xa::dewA::HIS6로 구성된 융합 단백질을 발현시키는 데 사용할 수 있다.
KaM416: GCAGCCCATCAGGGATCCCTCAGCCTTGGTACCAGCGC
KaM417: CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCGTCTCCGC
실시예 3
yaad 하이드로포빈 RodA-His 6 의 클로닝
올리고뉴클레오티드 KaM 434 및 KaM 435를 이용하여, 플라스미드 #513을 플라스미드 #508과 유사하게 클로닝하였다.
KaM434: GCTAAGCGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCATTGCTGC
KaM435: CCAATGGGGATCCGAGGATGGAGCCAAGGG
실시예 4
yaad 하이드로포빈 BASF1-His 6 의 클로닝
올리고뉴클레오티드 KaM 417 및 KaM 418을 이용하여, 플라스미드 #507을 플라스미드 #508과 유사하게 클로닝하였다. 이용된 주형 DNA는 인공적으로 합성된 DNA 서열 - 하이드로포빈 BASF1(첨부물 참조)이었다.
KaM417:
CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCGTCTCCGC
KaM418: CTGCCATTCAGGGGATCCCATATGGAGGAGGGAGACAG
실시예 5
yaad 하이드로포빈 BASF2-His 6 의 클로닝
올리고뉴클레오티드 KaM 417 및 KaM 418을 이용하여, 플라스미드 #506을 플라스미드 #508과 유사하게 클로닝하였다. 이용된 주형 DNA는 인공적으로 합성된 DNA 서열 - 하이드로포빈 BASF2(첨부물 참조)였다.
KaM417:
CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCGTCTCCGC
KaM418: CTGCCATTCAGGGGATCCCATATGGAGGAGGGAGACAG
실시예 6
yaad 하이드로포빈 SC3-His 6 의 클로닝
올리고뉴클레오티드 KaM464 및 KaM465를 이용하여, 플라스미드 #526을 플라스미드 #508과 유사하게 클로닝하였다.
이용된 주형 DNA는 스키조필럼 커뮨 cDNA(첨부물 참조)였다.
KaM464: CGTTAAGGATCCGAGGATGTTGATGGGGGTGC
KaM465: GCTAACAGATCTATGTTCGCCCGTCTCCCCGTCGT
실시예 7
재조합 이. 콜라이 균주 yaad 하이드로포빈 DewA-His 6 의 발효
15 ㎖ 그라이너 튜브에서, LB 액상 배지 3 ㎖에, yaad 하이드로포빈 DewA-His6를 발현하는 이. 콜라이 균주를 접종하였다. 37℃, 200 rpm의 진탕기에서 8 시간 동안 배양하였다. 각 경우, 배플이 구비되어 있고 LB 배지(100 ㎍/㎖의 암피실린 함유) 250 ㎖를 포함한 2개의 1 ℓ 에를렌마이어(Erlenmeyer) 플라스크에, 사전 배양물 1 ㎖를 접종하여, 37℃, 180 rpm의 진탕기에서 9 시간 동안 배양하였다. 20 ℓ 용량의 발효기에서, LB 배지(100 ㎍/㎖의 암피실린 함유) 13.5 ℓ에, 사전 배양물 0.5 ℓ(OD600 nm 1:10, H2O에 대하여 측정)를 접종하였다. OD60 nm 약 3.5에서 100 mM IPTG 140 ㎖를 첨가하였다. 3 시간 후, 발효기를 10℃로 냉각시키고, 원심분리로 발효액을 제거하였다. 세포 펠릿을 추가 정제에 사용하였다.
실시예 8
재조합 하이드로포빈 융합 단백질의 정제
(C-말단 His 6 태그를 보유하는 하이드로포빈 융합 단백질의 정제)
세포 펠릿 100 g(하이드로포빈 100∼500 mg)에, 총 부피 200 ㎖가 되도록 50 mM 인산나트륨 완충액(pH 7.5)을 첨가하여 재현탁시켰다. 이 현탁액을 울트라투락스(Ultraturrax) 타입 T25(Janke and Kunkel; IKA-Labortechnik)로 10분 동안 처리 하고, 이어서 핵산의 분해를 위해, 벤조나제(Merck, Darmstadt; 주문 번호 1.01697.0001) 500 유닛과 함께 실온에서 1 시간 동안 항온처리하였다. 세포를 파괴하기 전에, 유리 카트리지(P1)를 사용하여 여과를 행하였다. 세포 파괴와 잔류 게놈 DNA의 전단을 위해, 1500　바에서 균질화기를 이용한 처리를 2회 행하였다(Microfluidizer M-110EH; Microfluidics Corp.). 균질물을 원심분리하고(Sorvall RC-5B, GSA 로터, 250 ㎖ 원심분리용 비커, 60분, 4℃, 12,000 rpm, 23,000　g), 상청액을 얼음 위에 놓고, 펠릿을 인산나트륨 완충액(pH 7.5) 100 ㎖에 재현탁시켰다. 원심분리 및 재현탁은 3회 반복하였으며, 3 회차에 사용된 인산나트륨 완충액은 1% SDS를 포함하였다. 재현탁 후, 상기 용액을 1 시간 동안 교반하고, 이어서 최종 원심분리(Sorvall RC-5B, GSA 로터, 250 ㎖ 원심분리용 비커, 60분, 4℃, 12,000 rpm, 23,000 g)를 행하였다. SDS-PAGE 분석에 의하면, 하이드로포빈은 최종 원심분리 후 상청액에 존재하였다(도 1). 이 실험은 하이드로포빈이 해당 이. 콜라이 세포 내에 아마도 봉입체 형태로 존재함을 보여준다. 하이드로포빈 함유 상청액 50 ㎖를, 50 mM Tris-Cl 완충액(pH 8.0)으로 평형화시킨 50　㎖ 니켈-세파로스 고성능 17-5268-02 컬럼(Amersham)에 적용하였다. 이 컬럼을 50　mM Tris-Cl 완충액(pH 8.0)으로 세척하고, 그 후 하이드로포빈을 200 mM 이미다졸을 함유하는 50 mM Tris-Cl 완충액(pH 8.0)으로 용출시켰다. 이미다졸의 제거를 위해, 용액을 50 mM Tris-Cl 완충액(pH 8.0)에 대해 투석하였다.
도 1은 제조된 하이드로포빈의 정제 상태를 도시한다:
레인 1: 니켈-세파로스 컬럼에 적용된 용액(1:10 희석)
레인 2: 통과액(flow-through) = 세척 단계의 용출액
레인 3∼5: 용출 분획의 OD280 피크
도 1의 하이드로포빈은 분자량이 약 53 kD이었다. 작은 밴드 중 몇 개는 하이드로포빈의 분해 생성물을 나타낸다.
실시예 9
성능 테스트: 유리 위 물방울의 접촉각 변화에 의한 하이드로포빈의 특성 분석
기재:
유리(창문 유리, 독일 만하임 소재의 Sueddeutsche Glas):
하이드로포빈 농도: 100 ㎍/㎖
50 mM 아세트산나트륨(pH 4) + 0.1 중량%의 Tween 20 중에서, 유리 슬라이드를 밤새 항온처리하고(온도 80℃), 이어서 하이드로포빈 코팅을 포함하는 유리 슬라이드를 증류수로 세척하고, 이어서 80℃에서 증류수 중의 1 중량% 소듐 n-도데실 설페이트(SDS) 수용액 중에서 10분 동안 항온처리한 후 증류수로 세척하였다.
샘플을 (실온에서) 공기 건조시키고, 실온에서 5 ㎕ 물방울의 접촉각(단위: ˚)을 측정하였다.
접촉각 측정은 Dataphysics Contact Angle System OCA 15+에서 소프트웨어 SCA 20.2.0.(2002년 11월)을 사용하여 행하였다. 측정은 제조업자의 설명서에 따라 행하였다.
미처리 유리의 경우 접촉각이 30±5˚였고, 실시예 8의 기능성 하이드로포빈(yaad-dewA-his6)으로 코팅된 유리의 경우 접촉각이 75±5˚였다.
파트 B:
경질 표면 상의 방오 코팅을 위한 하이드로포빈의 용도
사용된 용액:
성능 테스트는 실시예 8에 따라 제조된 융합 단백질 yaad-Xa-dewA-his(서열 번호 19)의 수용액을 이용하여 수행하였다. 용액 중 하이드로포빈의 농도는 100　㎍/㎖(0.01 중량%)였다.
사용된 경질 표면:
에탄올 및 물로 닦아 낸, 세라믹 타일[샤이니 화이트, 10　cm × 15　cm(Novocker 제품)]
사용된 오염:
이 테스트는 IKW 밸러스트 흙을 이용하여 수행하였다(Seifen, Fette, Oele, Wachse(SOEFW) - Journal, Volume　124, 14/98, 1029면에 의거함).
처리 방법
100　㎍/㎖ 농도의 상기 하이드로포빈 수용액 2 g을 타일 표면 위에 적하하고(cm2당 하이드로포빈 1.3 ㎛), 천을 사용하여 표면 전체에 부드럽게 분배하였다. 그 후 이 타일을 공기 중에 방치하여 24 시간 동안 공기 건조시켰다.
이어서, 상기 타일을 물로 헹구고, 물을 함유한 유리 비커에서 10분 동안 3 차례 정치하였다. 매회 헹굼시마다 새로운 물을 사용하였다. 그 후 타일을 똑바로 세워서 공기 중에서 건조시켰다.
접촉각 측정 및 방오 효과
처리된 타일은 물방울에 대한 접촉각 측정값(5 ㎕, 전술한 바와 같은 방법)이 56˚(10회 측정값의 평균)였다. 비교를 위한 미처리 타일은 접촉각이 20˚였다. 이와 같이, 처리된 타일은 분명히 소수성화되었다.
처리된 타일과, 비교를 위한 미처리 타일에, 트랜스퍼 피펫을 이용하여 각각 50 ㎍, 100 ㎍ 및 200　㎍의 IKW 밸러스트 흙을 점적하고, 실온에서 1 시간 동안 정치하여 건조시켰다.
그 후, 타일을 매회 500 ㎖의 물로 3회 헹구었다. 미처리 표면으로부터는 상기 헹굼 작업으로 흙을 제거할 수 없었으나, 하이드로포빈으로 전처리한 타일의 경우에는 흙이 부분적으로 제거된 것이 관찰되었다.
이와 같이, 하이드로포빈을 사용한 전처리는 타일 표면 상의 오물 부착을 감소시켰다.
SEQUENCE LISTING <110> BASF Aktiengesellschaft <120> Use of hydrophobins for soil-repellent treatment of hard surfaces <130> PF 56486 <140> PCT/EP2006/061069 <141> 27/03/2006 <150> DE 102005014844.1 DE 102005036341.5 <151> 30/03/2005 29/07/2005 <160> 24 <170> PatentIn version 3.1 <210> SEQ ID NO:1 <211> 405 <212> DNA <213> Aspergillus nidulans <220> <221> CDS <222> (1)..(405) <223> <400> 1 atg cgc ttc atc gtc tct ctc ctc gcc ttc act gcc gcg gcc acc gcg 48 Met Arg Phe Ile Val Ser Leu Leu Ala Phe Thr Ala Ala Ala Thr Ala 1 5 10 15 acc gcc ctc ccg gcc tct gcc gca aag aac gcg aag ctg gcc acc tcg 96 Thr Ala Leu Pro Ala Ser Ala Ala Lys Asn Ala Lys Leu Ala Thr Ser 20 25 30 gcg gcc ttc gcc aag cag gct gaa ggc acc acc tgc aat gtc ggc tcg 144 Ala Ala Phe Ala Lys Gln Ala Glu Gly Thr Thr Cys Asn Val Gly Ser 35 40 45 atc gct tgc tgc aac tcc ccc gct gag acc aac aac gac agt ctg ttg 192 Ile Ala Cys Cys Asn Ser Pro Ala Glu Thr Asn Asn Asp Ser Leu Leu 50 55 60 agc ggt ctg ctc ggt gct ggc ctt ctc aac ggg 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cta gaa cgt gtg 144 Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ala Val Met Ala Leu Glu Arg Val 35 40 45 cca gca gat att cgc gcg gct gga gga gtt gcc cgt atg gct gac cct 192 Pro Ala Asp Ile Arg Ala Ala Gly Gly Val Ala Arg Met Ala Asp Pro 50 55 60 aca atc gtg gaa gaa gta atg aat gca gta tct atc ccg gta atg gca 240 Thr Ile Val Glu Glu Val Met Asn Ala Val Ser Ile Pro Val Met Ala 65 70 75 80 aaa gcg cgt atc gga cat att gtt gaa gcg cgt gtg ctt gaa gct atg 288 Lys Ala Arg Ile Gly His Ile Val Glu Ala Arg Val Leu Glu Ala Met 85 90 95 ggt gtt gac tat att gat gaa agt gaa gtt ctg acg ccg gct gac gaa 336 Gly Val Asp Tyr Ile Asp Glu Ser Glu Val Leu Thr Pro Ala Asp Glu 100 105 110 gaa ttt cat tta aat aaa aat gaa tac aca gtt cct ttt gtc tgt ggc 384 Glu Phe His Leu Asn Lys Asn Glu Tyr Thr Val Pro Phe Val Cys Gly 115 120 125 tgc cgt gat ctt ggt gaa gca aca cgc cgt att gcg gaa ggt gct tct 432 Cys Arg Asp Leu Gly Glu Ala Thr Arg Arg Ile Ala Glu Gly Ala Ser 130 135 140 atg ctt cgc aca aaa ggt gag cct gga aca ggt aat att gtt gag gct 480 Met Leu Arg Thr Lys Gly Glu Pro Gly Thr Gly Asn Ile Val Glu Ala 145 150 155 160 gtt cgc cat atg cgt aaa gtt aac gct caa gtg cgc aaa gta gtt gcg 528 Val Arg His Met Arg Lys Val Asn Ala Gln Val Arg Lys Val Val Ala 165 170 175 atg agt gag gat gag cta atg aca gaa gcg aaa aac cta ggt gct cct 576 Met Ser Glu Asp Glu Leu Met Thr Glu Ala Lys Asn Leu Gly Ala Pro 180 185 190 tac gag ctt ctt ctt caa att aaa aaa gac ggc aag ctt cct gtc gtt 624 Tyr Glu Leu Leu Leu Gln Ile Lys Lys Asp Gly Lys Leu Pro Val Val 195 200 205 aac ttt gcc gct ggc ggc gta gca act cca gct gat gct gct ctc atg 672 Asn Phe Ala Ala Gly Gly Val Ala Thr Pro Ala Asp Ala Ala Leu Met 210 215 220 atg cag ctt ggt gct gac gga gta ttt gtt ggt tct ggt att ttt aaa 720 Met Gln Leu Gly Ala Asp Gly Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys 225 230 235 240 tca gac aac cct gct aaa ttt gcg aaa gca att gtg gaa gca aca act 768 Ser Asp Asn Pro Ala Lys Phe Ala Lys Ala Ile Val Glu Ala Thr Thr 245 250 255 cac ttt act gat tac aaa tta atc gct gag ttg tca aaa gag ctt ggt 816 His Phe Thr Asp Tyr Lys Leu Ile Ala Glu Leu Ser Lys Glu Leu Gly 260 265 270 act gca atg aaa ggg att gaa atc tca aac tta ctt cca gaa cag cgt 864 Thr Ala Met Lys Gly Ile Glu Ile Ser Asn Leu Leu Pro Glu Gln Arg 275 280 285 atg caa gaa cgc ggc tgg aga tct att gaa ggc cgc atg aag ttc tcc 912 Met Gln Glu Arg Gly Trp Arg Ser Ile Glu Gly Arg Met Lys Phe Ser 290 295 300 att gct gcc gct gtc gtt gct ttc gcc gcc tcc gtc gcg gcc ctc cct 960 Ile Ala Ala Ala Val Val Ala Phe Ala Ala Ser Val Ala Ala Leu Pro 305 310 315 320 cct gcc cat gat tcc cag ttc gct ggc aat ggt gtt ggc aac aag ggc 1008 Pro Ala His Asp Ser Gln Phe Ala Gly Asn Gly Val Gly Asn Lys Gly 325 330 335 aac agc aac gtc aag ttc cct gtc ccc gaa aac gtg acc gtc aag cag 1056 Asn Ser Asn Val Lys Phe Pro Val Pro Glu Asn Val Thr Val Lys Gln 340 345 350 gcc tcc gac aag tgc ggt gac cag gcc cag ctc tct tgc tgc aac aag 1104 Ala Ser Asp Lys Cys Gly Asp Gln Ala Gln Leu Ser Cys Cys Asn Lys 355 360 365 gcc acg tac gcc ggt gac acc aca acc gtt gat gag ggt ctt ctg tct 1152 Ala Thr Tyr Ala Gly Asp Thr Thr Thr Val Asp Glu Gly Leu Leu Ser 370 375 380 ggt gcc ctc agc ggc ctc atc ggc gcc ggg tct ggt gcc gaa ggt ctt 1200 Gly Ala Leu Ser Gly Leu Ile Gly Ala Gly Ser Gly Ala Glu Gly Leu 385 390 395 400 ggt ctc ttc gat cag tgc tcc aag ctt gat gtt gct gtc ctc att ggc 1248 Gly Leu Phe Asp Gln Cys Ser Lys Leu Asp Val Ala Val Leu Ile Gly 405 410 415 atc caa gat ctt gtc aac cag aag tgc aag caa aac att gcc tgc tgc 1296 Ile Gln Asp Leu Val Asn Gln Lys Cys Lys Gln Asn Ile Ala Cys Cys 420 425 430 cag aac tcc ccc tcc agc gcg gat ggc aac ctt att ggt gtc ggt ctc 1344 Gln Asn Ser Pro Ser Ser Ala Asp Gly Asn Leu Ile Gly Val Gly Leu 435 440 445 cct tgc gtt gcc ctt ggc tcc atc ctc gga tct cat cac cat cac cat 1392 Pro Cys Val Ala Leu Gly Ser Ile Leu Gly Ser His His His His His 450 455 460 cac 1395 His 465 <210> SEQ ID NO:22 <211> 465 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> fusion protein <400> 22 Met Ala Gln Thr Gly Thr 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Asp Ala Ala Leu Met 210 215 220 Met Gln Leu Gly Ala Asp Gly Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys 225 230 235 240 Ser Asp Asn Pro Ala Lys Phe Ala Lys Ala Ile Val Glu Ala Thr Thr 245 250 255 His Phe Thr Asp Tyr Lys Leu Ile Ala Glu Leu Ser Lys Glu Leu Gly 260 265 270 Thr Ala Met Lys Gly Ile Glu Ile Ser Asn Leu Leu Pro Glu Gln Arg 275 280 285 Met Gln Glu Arg Gly Trp Arg Ser Ile Glu Gly Arg Met Lys Phe Ser 290 295 300 Ile Ala Ala Ala Val Val Ala Phe Ala Ala Ser Val Ala Ala Leu Pro 305 310 315 320 Pro Ala His Asp Ser Gln Phe Ala Gly Asn Gly Val Gly Asn Lys Gly 325 330 335 Asn Ser Asn Val Lys Phe Pro Val Pro Glu Asn Val Thr Val Lys Gln 340 345 350 Ala Ser Asp Lys Cys Gly Asp Gln Ala Gln Leu Ser Cys Cys Asn Lys 355 360 365 Ala Thr Tyr Ala Gly Asp Thr Thr Thr Val Asp Glu Gly Leu Leu Ser 370 375 380 Gly Ala Leu Ser Gly Leu Ile Gly Ala Gly Ser Gly Ala Glu Gly Leu 385 390 395 400 Gly Leu Phe Asp Gln Cys Ser Lys Leu Asp Val Ala Val Leu Ile Gly 405 410 415 Ile Gln Asp Leu Val Asn Gln Lys Cys Lys Gln Asn Ile Ala Cys Cys 420 425 430 Gln Asn Ser Pro Ser Ser Ala Asp Gly Asn Leu Ile Gly Val Gly Leu 435 440 445 Pro Cys Val Ala Leu Gly Ser Ile Leu Gly Ser His His His His His 450 455 460 His 465 <210> SEQ ID NO:23 <211> 1407 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> CDS <221> CDS <222> (1)..(1407) <223> fusion protein <400> 23 atg gct caa aca ggt act gaa cgt gta aaa cgc gga atg gca gaa atg 48 Met Ala Gln Thr Gly Thr Glu Arg Val Lys Arg Gly Met Ala Glu Met 1 5 10 15 caa aaa ggc ggc gtc atc atg gac gtc atc aat gcg gaa caa gcg aaa 96 Gln Lys Gly Gly Val Ile Met Asp Val Ile Asn Ala Glu Gln Ala Lys 20 25 30 atc gct gaa gaa gct gga gct gtc gct gta atg gcg cta gaa cgt gtg 144 Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ala Val Met Ala Leu Glu Arg Val 35 40 45 cca gca gat att cgc gcg gct gga gga gtt gcc cgt atg gct gac cct 192 Pro Ala Asp Ile Arg Ala Ala Gly Gly Val Ala Arg Met Ala Asp Pro 50 55 60 aca atc gtg gaa gaa gta atg aat gca gta tct atc ccg gta atg gca 240 Thr Ile Val Glu Glu Val Met Asn Ala Val Ser Ile Pro Val Met Ala 65 70 75 80 aaa gcg cgt atc gga cat att gtt gaa gcg cgt gtg ctt gaa gct atg 288 Lys Ala Arg Ile Gly His Ile Val Glu Ala Arg Val Leu Glu Ala Met 85 90 95 ggt gtt gac tat att gat gaa agt gaa gtt ctg acg ccg gct gac gaa 336 Gly Val Asp Tyr Ile Asp Glu Ser Glu Val Leu Thr Pro Ala Asp Glu 100 105 110 gaa ttt cat tta aat aaa aat gaa tac aca gtt cct ttt gtc tgt ggc 384 Glu Phe His Leu Asn Lys Asn Glu Tyr Thr Val Pro Phe Val Cys Gly 115 120 125 tgc cgt gat ctt ggt gaa gca aca cgc cgt att gcg gaa ggt gct tct 432 Cys Arg Asp Leu Gly Glu Ala Thr Arg Arg Ile Ala Glu Gly Ala Ser 130 135 140 atg ctt cgc aca aaa ggt gag cct gga aca ggt aat att gtt gag gct 480 Met Leu Arg Thr Lys Gly Glu Pro Gly Thr Gly Asn Ile Val Glu Ala 145 150 155 160 gtt cgc cat atg cgt aaa gtt aac gct caa gtg cgc aaa gta gtt gcg 528 Val Arg His Met Arg Lys Val Asn Ala Gln Val Arg Lys Val Val Ala 165 170 175 atg agt gag gat gag cta atg aca gaa gcg aaa aac cta ggt gct cct 576 Met Ser Glu Asp Glu Leu Met Thr Glu Ala Lys Asn Leu Gly Ala Pro 180 185 190 tac gag ctt ctt ctt caa att aaa aaa gac ggc aag ctt cct gtc gtt 624 Tyr Glu Leu Leu Leu Gln Ile Lys Lys Asp Gly Lys Leu Pro Val Val 195 200 205 aac ttt gcc gct ggc ggc gta gca act cca gct gat gct gct ctc atg 672 Asn Phe Ala Ala Gly Gly Val Ala Thr Pro Ala Asp Ala Ala Leu Met 210 215 220 atg cag ctt ggt gct gac gga gta ttt gtt ggt tct ggt att ttt aaa 720 Met Gln Leu Gly Ala Asp Gly Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys 225 230 235 240 tca gac aac cct gct aaa ttt gcg aaa gca att gtg gaa gca aca act 768 Ser Asp Asn Pro Ala Lys Phe Ala Lys Ala Ile Val Glu Ala Thr Thr 245 250 255 cac ttt act gat tac aaa tta atc gct gag ttg tca aaa gag ctt ggt 816 His Phe Thr Asp Tyr Lys Leu Ile Ala Glu Leu Ser Lys Glu Leu Gly 260 265 270 act gca atg aaa ggg att gaa atc tca aac tta ctt cca gaa cag cgt 864 Thr Ala Met Lys Gly Ile Glu Ile Ser Asn Leu Leu Pro Glu Gln Arg 275 280 285 atg caa gaa cgc ggc tgg aga tct att gaa ggc cgc atg aag ttc tcc 912 Met Gln Glu Arg Gly Trp Arg Ser Ile Glu Gly Arg Met Lys Phe Ser 290 295 300 gtc tcc gcc gcc gtc ctc gcc ttc gcc gcc tcc gtc gcc gcc ctc cct 960 Val Ser Ala Ala Val Leu Ala Phe Ala Ala Ser Val Ala Ala Leu Pro 305 310 315 320 cag cac gac tcc gcc gcc ggc aac ggc aac ggc gtc ggc aac aag ttc 1008 Gln His Asp Ser Ala Ala Gly Asn Gly Asn Gly Val Gly Asn Lys Phe 325 330 335 cct gtc cct gac gac gtc acc gtc aag cag gcc acc gac aag tgc ggc 1056 Pro Val Pro Asp Asp Val Thr Val Lys Gln Ala Thr Asp Lys Cys Gly 340 345 350 gac cag gcc cag ctc tcc tgc tgc aac aag gcc acc tac gcc ggc gac 1104 Asp Gln Ala Gln Leu Ser Cys Cys Asn Lys Ala Thr Tyr Ala Gly Asp 355 360 365 gtc ctc acc gac atc gac gag ggc atc ctc gcc ggc ctc ctc aag aac 1152 Val Leu Thr Asp Ile Asp Glu Gly Ile Leu Ala Gly Leu Leu Lys Asn 370 375 380 ctc atc ggc ggc ggc tcc ggc tcc gag ggc ctc ggc ctc ttc gac cag 1200 Leu Ile Gly Gly Gly Ser Gly Ser Glu Gly Leu Gly Leu Phe Asp Gln 385 390 395 400 tgc gtc aag ctc gac ctc cag atc tcc gtc atc ggc atc cct atc cag 1248 Cys Val Lys Leu Asp Leu Gln Ile Ser Val Ile Gly Ile Pro Ile Gln 405 410 415 gac ctc ctc aac cag gtc aac aag cag tgc aag cag aac atc gcc tgc 1296 Asp Leu Leu Asn Gln Val Asn Lys Gln Cys Lys Gln Asn Ile Ala Cys 420 425 430 tgc cag aac tcc cct tcc gac gcc acc ggc tcc ctc gtc aac ctc ggc 1344 Cys Gln Asn Ser Pro Ser Asp Ala Thr Gly Ser Leu Val Asn Leu Gly 435 440 445 ctc ggc aac cct tgc atc cct gtc tcc ctc ctc cat atg gga tct cat 1392 Leu Gly Asn Pro Cys Ile Pro Val Ser Leu Leu His Met Gly Ser His 450 455 460 cac cat cac cat cac 1407 His His His His His 465 <210> SEQ ID NO:24 <211> 469 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> fusion protein <400> 24 Met Ala Gln Thr Gly Thr Glu Arg Val Lys Arg Gly Met Ala Glu Met 1 5 10 15 Gln Lys Gly Gly Val Ile Met Asp Val Ile Asn Ala Glu Gln Ala Lys 20 25 30 Ile Ala Glu Glu Ala Gly Ala Val Ala Val Met Ala Leu Glu Arg Val 35 40 45 Pro Ala Asp Ile Arg Ala Ala Gly Gly Val Ala Arg Met Ala Asp Pro 50 55 60 Thr Ile Val Glu Glu Val Met Asn Ala Val Ser Ile Pro Val Met Ala 65 70 75 80 Lys Ala Arg Ile Gly His Ile Val Glu Ala Arg Val Leu Glu Ala Met 85 90 95 Gly Val Asp Tyr Ile Asp Glu Ser Glu Val Leu Thr Pro Ala Asp Glu 100 105 110 Glu Phe His Leu Asn Lys Asn Glu Tyr Thr Val Pro Phe Val Cys Gly 115 120 125 Cys Arg Asp Leu Gly Glu Ala Thr Arg Arg Ile Ala Glu Gly Ala Ser 130 135 140 Met Leu Arg Thr Lys Gly Glu Pro Gly Thr Gly Asn Ile Val Glu Ala 145 150 155 160 Val Arg His Met Arg Lys Val Asn Ala Gln Val Arg Lys Val Val Ala 165 170 175 Met Ser Glu Asp Glu Leu Met Thr Glu Ala Lys Asn Leu Gly Ala Pro 180 185 190 Tyr Glu Leu Leu Leu Gln Ile Lys Lys Asp Gly Lys Leu Pro Val Val 195 200 205 Asn Phe Ala Ala Gly Gly Val Ala Thr Pro Ala Asp Ala Ala Leu Met 210 215 220 Met Gln Leu Gly Ala Asp Gly Val Phe Val Gly Ser Gly Ile Phe Lys 225 230 235 240 Ser Asp Asn Pro Ala Lys Phe Ala Lys Ala Ile Val Glu Ala Thr Thr 245 250 255 His Phe Thr Asp Tyr Lys Leu Ile Ala Glu Leu Ser Lys Glu Leu Gly 260 265 270 Thr Ala Met Lys Gly Ile Glu Ile Ser Asn Leu Leu Pro Glu Gln Arg 275 280 285 Met Gln Glu Arg Gly Trp Arg Ser Ile Glu Gly Arg Met Lys Phe Ser 290 295 300 Val Ser Ala Ala Val Leu Ala Phe Ala Ala Ser Val Ala Ala Leu Pro 305 310 315 320 Gln His Asp Ser Ala Ala Gly Asn Gly Asn Gly Val Gly Asn Lys Phe 325 330 335 Pro Val Pro Asp Asp Val Thr Val Lys Gln Ala Thr Asp Lys Cys Gly 340 345 350 Asp Gln Ala Gln Leu Ser Cys Cys Asn Lys Ala Thr Tyr Ala Gly Asp 355 360 365 Val Leu Thr Asp Ile Asp Glu Gly Ile Leu Ala Gly Leu Leu Lys Asn 370 375 380 Leu Ile Gly Gly Gly Ser Gly Ser Glu Gly Leu Gly Leu Phe Asp Gln 385 390 395 400 Cys Val Lys Leu Asp Leu Gln Ile Ser Val Ile Gly Ile Pro Ile Gln 405 410 415 Asp Leu Leu Asn Gln Val Asn Lys Gln Cys Lys Gln Asn Ile Ala Cys 420 425 430 Cys Gln Asn Ser Pro Ser Asp Ala Thr Gly Ser Leu Val Asn Leu Gly 435 440 445 Leu Gly Asn Pro Cys Ile Pro Val Ser Leu Leu His Met Gly Ser His 450 455 460 His His His His His 465

Claims (18)

  1. 하이드로포빈을 사용하여 경질 표면을 방오 처리하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 방오 처리는 상기 표면의 세정과 병행하는 것인 방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 처리는 1종 이상의 하이드로포빈, 계면활성제 및 용매를 포함하는 세정제를 사용하여 수행하는 것인 방법.
  4. 경질 표면을 방오 처리하는 방법으로서, 1종 이상의 하이드로포빈 및 용매를 포함하는 조성물과 상기 표면을 접촉시키는 단계를 포함하는 방법.
  5. 제4항에 있어서, 상기 조성물은 1종 이상의 하이드로포빈, 계면활성제 및 용매를 포함하는 세정제를 포함하는 것인 방법.
  6. 제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 조성물 중 하이드로포빈의 함량은 상기 조성물의 모든 구성 성분의 총량을 기준으로 0.0001∼1 중량%의 범위인 방법.
  7. 제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 처리는 30℃ 이하의 온도에서 수행하는 것인 방법.
  8. 제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 하이드로포빈은 1종 이상의 융합 하이드로포빈을 포함하는 것인 방법.
  9. 제4항 또는 제5항에 있어서, 상기 표면은 가정용 표면을 포함하는 것인 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 경질 표면은 타일, 바닥, 비품, 세면기, 샤워실, 욕조, 변기, 샤워 캐빈, 욕실 가구, 가구류, 거울, 식기류, 식탁용 날붙이, 유리 제품, 자기 제품의 표면 또는 가전 제품의 표면으로 구성된 군에서 선택되는 경질 표면을 포함하는 것인 방법.
  11. 1종 이상의 하이드로포빈, 1종 이상의 계면활성제 및 용매를 포함하는, 경질 표면용 세정제.
  12. 제11항에 있어서, 1종 이상의 용매가 물을 포함하는 것인 세정제.
  13. 제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 하이드로포빈의 함량은 세정제의 모든 구성 성분의 총량을 기준으로 0.0001∼1 중량%의 범위인 세정제.
  14. 제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 하이드로포빈의 함량은 세정제의 모든 구성 성분의 총량을 기준으로 0.001∼0.1 중량%의 범위인 세정제.
  15. 제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 하이드로포빈이 1종 이상의 융합 하이드로포빈을 포함하는 것인 세정제.
  16. 1종 이상의 하이드로포빈을 포함하는 방오 코팅을 포함하는 경질 표면으로서, 상기 경질 표면은 타일, 바닥, 비품, 세면기, 샤워실, 욕조, 변기, 샤워 캐빈, 욕실 가구, 가구류, 거울, 식기류, 식탁용 날붙이, 유리 제품, 자기 제품의 표면 또는 가전 제품의 표면으로 구성된 군에서 선택되는 경질 표면인 경질 표면.
  17. 제16항에 있어서, 제4항 또는 제5항의 방법으로 얻을 수 있는 것인 경질 표면.
  18. 제11항에 있어서, 유리 세정제, 바닥 세정제, 다목적 세정제, 욕실 세정제, 헹굼 보조제, 식기류의 손 세척 또는 기계 세척을 위한 식기 세정제, 기계 세정제, 금속 탈지제, 고압 세정제, 알칼리 세정제, 산 세정제, 포인트 탈지제 및 낙농업용 세정제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 세정제.
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Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2596661C (en) 2005-02-07 2013-12-10 Basf Aktiengesellschaft Novel hydrophobin fusion products, production and use thereof
US8859106B2 (en) * 2005-03-31 2014-10-14 Basf Se Use of polypeptides in the form of adhesive agents
EP1868700A2 (de) 2005-04-01 2007-12-26 Basf Aktiengesellschaft Verwendung von hydrophobin als phasen-stabilisator
DK1869138T3 (da) 2005-04-01 2010-03-01 Basf Se Borevæske indeholdende hydrophobin
DE102005027139A1 (de) 2005-06-10 2006-12-28 Basf Ag Neue Cystein-verarmte Hydrophobinfusionsproteine, deren Herstellung und Verwendung
DE102005033002A1 (de) * 2005-07-14 2007-01-18 Basf Ag Wässrige Monomeremulsionen enthaltend Hydrophobin
JP5105441B2 (ja) * 2005-08-01 2012-12-26 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 界面活性非酵素タンパク質の織布洗浄への利用
DE102005048720A1 (de) 2005-10-12 2007-04-19 Basf Ag Verwendung von Proteinen als Antischaum-Komponente in Kraftstoffen
ES2374320T3 (es) 2006-08-15 2012-02-15 Basf Se Procedimiento para la producción de preparaciones de hidrofobina secas de flujo libre.
US8173716B2 (en) 2007-03-06 2012-05-08 Basf Se Open-cell foam modified with hydrophobines
US8455107B2 (en) 2007-03-12 2013-06-04 Basf Se Method of treating cellulosic materials with hydrophobins
CN101679063A (zh) * 2007-05-24 2010-03-24 巴斯夫欧洲公司 疏水蛋白在固体结晶中作为添加剂的用途
WO2009037061A2 (de) * 2007-09-13 2009-03-26 Basf Se Verwendung von hydrophobin-polypeptiden als penetrationsverstärker
EP2042155A1 (de) * 2007-09-28 2009-04-01 Basf Se Verfahren zum Entfernen von wasserunlöslichen Substanzen von Substratoberflächen
WO2010072665A1 (de) 2008-12-23 2010-07-01 Basf Se Modifizierung von nano- oder mesofasern oder textilen flächengebilden hergestellt mittels elektrospinnen mit amphiphilen proteinen
KR20110137301A (ko) 2009-03-09 2011-12-22 바스프 에스이 수성상 증점을 위한 수용성 중합체 및 하이드로포빈의 상승 혼합물의 용도
WO2011015530A2 (en) 2009-08-03 2011-02-10 Basf Se Process for deposition of thin layers of metal oxides
US8993743B2 (en) 2010-02-18 2015-03-31 B.R.A.I.N. Biotechnology Research And Information Network Ag Chimeric surface active proteins
EP2371844A1 (en) 2010-03-25 2011-10-05 B.R.A.I.N. Biotechnology Research and Information Network AG Chimeric surface active proteins
EP2552506A1 (en) 2010-03-31 2013-02-06 Basf Se Coated stents and process for coating with protein
WO2012004255A1 (de) 2010-07-07 2012-01-12 Basf Se Zusammensetzung enthaltend ein hydrophobin und verfahren zum reinigen von hydrophoben oberflächen
WO2012049250A2 (de) 2010-10-13 2012-04-19 Basf Se Verfahren zum immobilisieren kationischer wirkstoffe auf oberflächen
EP3243894A1 (en) * 2016-05-10 2017-11-15 The Procter and Gamble Company Cleaning composition

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001057066A2 (en) * 2000-02-04 2001-08-09 Applied Nanosystems B.V. Method of stabilizing a hydrophobin-containing solution and a method of coating a surface with a hydrophobin
WO2003053383A2 (fr) * 2001-12-14 2003-07-03 L'oreal Utilisation cosmetique d’au moins une hydrophobine pour le traitement des matieres keratiniques
JP2003521367A (ja) 2000-02-04 2003-07-15 アプライド ナノシステムズ ベー．フェー． ハイドロホビン含有溶液による物体表面の処理法

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2399161A (en) * 1942-06-30 1946-04-30 Claude R Wickard Process for producing glues and adhesives from keratin protein materials
GB1278924A (en) * 1970-02-06 1972-06-21 Ici Ltd Improvements in synthetic film materials
DE2609104A1 (de) * 1976-03-05 1977-09-15 Basf Ag Verfahren zur herstellung von styrol-suspensionspolymerisaten
DE2638839A1 (de) * 1976-08-28 1978-03-02 Basf Ag Verfahren zur herstellung von styrol-suspensionspolymerisaten
US5049504A (en) * 1986-11-24 1991-09-17 Genex Corporation Bioadhesive coding sequences
JPS6323670A (ja) * 1986-04-25 1988-01-30 バイオ−ポリマ−ズ　インコ−ポレ−テツド 接着・被覆組成物とその使用方法
DE4024871A1 (de) * 1990-08-06 1992-02-13 Basf Ag Perlfoermige antistatische expandierbare styrolpolymerisate
DE10131371A1 (de) * 2001-06-28 2003-01-16 Clariant Gmbh Verwendung von quaternierten (Meth)Acrylsäuredialkylaminoalkylestern als Soil Release Polymere für harte Oberflächen, sowie ein Verfahen zu deren Herstellung
DE4220225A1 (de) * 1992-06-20 1993-12-23 Basf Ag Verfahren zur Herstellung von perlförmigen expandierbaren Styrolpolymerisaten
IL110938A (en) * 1994-09-12 2001-01-28 Haber Meir Adhesive proteins isolated from mature macro and microalgae
WO1996041882A1 (en) * 1995-06-12 1996-12-27 Proefstation Voor De Champignoncultuur Hydrophobins from edible fungi, genes, nucleotide sequences and dna-fragments encoding for said hydrophobins, and expression thereof
DE19956802A1 (de) * 1999-11-25 2001-06-13 Cognis Deutschland Gmbh Waschmitteltabletten
WO2002020651A2 (en) * 2000-09-06 2002-03-14 Zymogenetics, Inc. Human phermone polypeptide
DE10061897A1 (de) * 2000-12-12 2002-06-13 Clariant Gmbh Wasch- und Reinigungsmittel, enthaltend mikrodisperse silikathaltige Partikel
EP1279742A1 (en) * 2001-07-23 2003-01-29 Applied NanoSystems B.V. Method of binding a compound to a sensor surface using hydrophobin
DE10342794A1 (de) * 2003-09-16 2005-04-21 Basf Ag Sekretion von Proteinen aus Hefen
CN1909979A (zh) * 2004-01-16 2007-02-07 应用超微系统股份有限公司 在低温下用疏水蛋白涂覆物体的方法
US7241734B2 (en) * 2004-08-18 2007-07-10 E. I. Du Pont De Nemours And Company Thermophilic hydrophobin proteins and applications for surface modification
KR101250105B1 (ko) * 2005-03-30 2013-04-03 바스프 에스이 경화 광물 건축 재료, 천연석, 인조석 및 세라믹의 표면처리를 위한 하이드로포빈의 용도

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001057066A2 (en) * 2000-02-04 2001-08-09 Applied Nanosystems B.V. Method of stabilizing a hydrophobin-containing solution and a method of coating a surface with a hydrophobin
JP2003521367A (ja) 2000-02-04 2003-07-15 アプライド ナノシステムズ ベー．フェー． ハイドロホビン含有溶液による物体表面の処理法
US20030134042A1 (en) * 2000-02-04 2003-07-17 De Vocht Marcel Leo Method of treating a surface of an object with a hydrophobin-containing solution
WO2003053383A2 (fr) * 2001-12-14 2003-07-03 L'oreal Utilisation cosmetique d’au moins une hydrophobine pour le traitement des matieres keratiniques

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