CN101166977A - 稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的免疫学分析方法 - Google Patents

稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的免疫学分析方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101166977A
CN101166977A CNA2006800147353A CN200680014735A CN101166977A CN 101166977 A CN101166977 A CN 101166977A CN A2006800147353 A CNA2006800147353 A CN A2006800147353A CN 200680014735 A CN200680014735 A CN 200680014735A CN 101166977 A CN101166977 A CN 101166977A
Authority
CN
China
Prior art keywords
monoclonal antibody
stabilization
fibrinolysin
analyte
fibrinous
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CNA2006800147353A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101166977B (zh
Inventor
松屋毅
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Pu Heji
Original Assignee
Mitsubishi Kagaku Medical Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Mitsubishi Kagaku Medical Inc filed Critical Mitsubishi Kagaku Medical Inc
Publication of CN101166977A publication Critical patent/CN101166977A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101166977B publication Critical patent/CN101166977B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G01N33/54326—Magnetic particles
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/745—Assays involving non-enzymic blood coagulation factors
    • G01N2333/75—Fibrin; Fibrinogen
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/968—Plasmin, i.e. fibrinolysin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/12—Pulmonary diseases
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/22—Haematology
    • G01N2800/226—Thrombotic disorders, i.e. thrombo-embolism irrespective of location/organ involved, e.g. renal vein thrombosis, venous thrombosis
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/81—Packaged device or kit
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/975—Kit

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

本发明公开了对稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物进行免疫学分析的方法，其特征在于，使用(a)与稳定化纤维蛋白、纤维蛋白原、和纤维蛋白原的纤维蛋白溶酶分解物不反应、但与因稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解而出现的D结构域的新抗原反应的单克隆抗体、和(b)通过与上述单克隆抗体(a)相比识别不同的部位、而与稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物发生特异性反应的单克隆抗体的组合，其中上述单克隆抗体(a)或者(b)的一方结合在磁性粒子上，另一方单克隆抗体被酶标记，使用化学发光底物作为上述酶的底物。

Description

稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的免疫学分析方法
技术领域
本发明涉及稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的免疫学分析方法，更具体地，涉及利用化学发光进行的稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的高灵敏度测定方法。
对于本说明书中的用语“分析”，包含判断有无分析对象物质存在的“检测”、和定量或半定量地决定分析对象物质的量或活性的“测定”。
背景技术
人稳定化纤维蛋白利用各种蛋白酶分解的分解物在临床诊断法中作为诊断标记来使用。例如，人稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物、即、作为基本单元的p-DD/E、以及其聚合物或者低聚物(作为别称，例如称作“D-D二聚物”或者“DD/E复合物”)被广泛用于播散性血管内凝血综合征(DIC)的诊断标记。对于在生物样品中含有的稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的测定，一般使用由敏化胶乳引起的凝聚反应来进行，所述敏化胶乳使用了对于稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物是特异性的单克隆抗体。
另一方面，下肢深部静脉血栓症(DVT)近年来受到重视。这种病症在日本国内不太受到重视，但随着生活方式的欧美化，其成为逐渐增多的疾病。诊断或者预测血栓症的状态或血栓的有无是极其困难的，在DVT诊断中最可靠的方法是检查稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物(非专利文献1和2)。通过凝固过程而得到的交联(crosslink)的稳定化纤维蛋白在受到纤维蛋白溶酶分解时，形成以p-DD/E作为基本单元的p-DD/E的聚合物或低聚物、进而形成p-DD/E，因此通过检测p-DD/E或者其聚合物或低聚物，可以知道血栓形成和二次纤溶的动态过程。因此，测定稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物在确认血栓存在方面是极其有用的。
近年来，作为经济舱综合征所知的肺血栓栓塞症(PE)正在接近人们的生活。PE大多由于深部静脉血栓(DVT)通过下大静脉、心脏右心系统到达肺动脉、使血流阻断而导致发病。测定稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物在对包括DVT的PE患者进行评价时是有用的(非专利文献3，4)。
作为可特异性检测稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的公知的单克隆抗体，已知有单克隆抗体JIF-23(非专利文献5)。已知该抗体可以识别D1结构域(domain)的N末端的立体结构，所述D1结构域是当在人稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的D1A结构域中的γ链N末端的氨基酸序列63-85游离时所暴露出的区域。通过使用该JIF-23抗体、和可对在生物样品中存在的稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物进行特异性分析的测定方法，能够容易地知道血栓形成和二次纤溶的动态过程。这样的测定方法没有特别地限定，可以列举例如胶乳凝聚法或ELISA法。
作为使用了目前在临床上广泛使用的JIF-23抗体的、测定稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的方法，已知有胶乳凝聚法。对于稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的值，根据非专利文献6，健康人为0.4μg/mL FEU，根据非专利文献7，DIC患者为15.2±18.5μg/mL。因此，即使对于使用了JIF-23抗体的胶乳凝聚反应(检测灵敏度＝约45ng/mL)，也能充分地进行检测，从而在实际临床上被普遍应用。另一方面，DVT情况下的临床截断值在非专利文献8中报道为0.5μg/mLFEU。因此，与DIC诊断相比，需要识别与健康人的值相比所具有的微小变动，期望开发一种具有更高灵敏度的测定法，其可以正确地对正常值域的稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物进行定量。
作为使用抗体的ELISA法，例如有公知的ミニヴアイダス(ビメリユ一社)，所述抗体可识别稳定化纤维蛋白分解物的D结构域的新抗原(非专利文献8，11)。根据非专利文献9，报道了ELISA的灵敏度比胶乳凝聚法高，因此在DVT诊断中是有用的。作为稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的测定方法，可进行高灵敏度测定的ELISA法正在被人们接受。例如，上述ミニヴアイダス的检测灵敏度约为45ng/mLFEU。
并且，上述各数值和单位是基于各非专利文献的记述的数值和单位，单位“μg/mL FEU”和“μg/mL”可以利用下述换算式：
1μg/mL＝2μg/mL FEU
相互变换(但是，上述数值“2”为估算值)(非专利文献10)。
非专利文献1：Thrombosis and Haemostasis，德国，1994年，71卷，p.1-6
非专利文献2：Quality Journal of Medicine，英国，1997年，90卷，p.437-442
非专利文献3：Thrombosis and Haemostasis，德国，1999年，81卷，p.493-497
非专利文献4：Thrombosis and Haemostasis，德国，2000年，83卷，191-198
非专利文献5：Excepta Medica，Amsterdam，オランダ，1990年，p.43-48
非专利文献6：U.K.National External Quality Assessment Scheme forBlood Coagulation，Report on Survey 142，英国，2004年5月
非专利文献7：ANNALES DE BIOLOGIE CLINIQUE，法国，1988年，46卷，p.730-733
非专利文献8：Biomerieux Vidas D-Dimer Package Insert，美国，2003年9月，008120-4
非专利文献9：Annals of Internal Medicine，美国，2004年，p.589-602
非专利文献10：Journal of Thrombosis and Haemostasis，英国，2005年，p.377-384
非专利文献11：British Journal of Haematology，英国，2004年，p.15-25
发明内容
本发明的课题在于提供更高灵敏度的、稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的分析方法。通过与目前的高灵敏度分析法相比进而高灵敏度化，也可以缩短分析时间。
根据本发明，上述课题可以利用对稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物进行免疫学分析的方法来解决，所述方法的特征在于，使用(a)与稳定化纤维蛋白、纤维蛋白原、和纤维蛋白原的纤维蛋白溶酶分解物不反应、但与因稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解而出现的D结构域的新抗原反应的单克隆抗体、和(b)通过与上述单克隆抗体(a)相比识别不同的部位、而与稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物发生特异性反应的单克隆抗体的组合，上述单克隆抗体(a)或者(b)的一方方结合在磁性粒子上，另一方方单克隆抗体被酶标记，且使用化学发光底物作为上述酶的底物。
根据本发明的免疫学分析方法优选的方式，上述单克隆抗体(b)是与稳定化纤维蛋白、纤维蛋白原、和纤维蛋白原的纤维蛋白溶酶分解物不反应、但与因稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解而出现的E结构域的新抗原反应的单克隆抗体。
根据本发明的免疫学分析方法的其他优选方式，包含以下的工序，即，(1)使可能含有稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的检验样品、与上述单克隆抗体(a)、上述单克隆抗体(b)接触的工序、(2)将通过稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物与磁性粒子结合单克隆抗体形成了免疫复合物的酶标记单克隆抗体、与不形成上述免疫复合物的酶标记单克隆抗体进行分离的工序、(3)在用上述工序分离的磁性粒子结合单克隆抗体-稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物-酶标记单克隆抗体免疫复合物中，添加化学发光底物、使其发光的工序、以及(4)对得到的发光信号进行分析的工序。
根据本发明的免疫学分析方法的进而其他的优选方式，化学发光底物是1，2-二氧环丁烷。
根据本发明的免疫学分析方法的进而其他的优选方式，标记酶是碱性磷酸酶。
本发明涉及稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的免疫学分析用试剂盒，其特征在于，含有(a)与稳定化纤维蛋白、纤维蛋白原、和纤维蛋白原的纤维蛋白溶酶分解物不反应、但与因稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解而出现的D结构域的新抗原反应的单克隆抗体、(b)通过与上述单克隆抗体(a)相比识别不同的部位、而与稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物发生特异性反应的单克隆抗体、以及(c)化学发光底物，上述单克隆抗体(a)或者(b)的一方结合在磁性粒子上，另一方单克隆抗体用以上述化学发光底物为底物的酶进行标记。
本发明涉及下肢深部静脉血栓症和/或肺栓塞症的检测方法(诊断方法)，其特征在于，通过上述免疫学分析方法、或者上述免疫学分析用试剂盒，来分析在检验样品中含有的稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物。
发明效果
根据本发明的免疫学分析方法，可以高灵敏度以及高特异性地分析稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物，不仅可适用于目前的DIC的诊断，还适用于DVT和/或肺栓塞症的诊断。
附图的简单说明
[图1]是表示在2种测定体系中测定稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的一系列稀释液的结果的曲线图，所述2种测定体系包括利用了JIF-23抗体固定化磁性粒子与碱性磷酸酶标记No.36-1抗体的组合的本申请发明的测定方法(黑圆)、和利用了JIF-23抗体固定化磁性粒子与碱性磷酸酶标记JIF-23抗体的组合的比较用测定方法(白圆)。
[图2]是表示在3种测定体系中测定稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的一系列稀释液的结果的曲线图，所述3种测定体系包括利用了JIF-23抗体固定化磁性粒子与碱性磷酸酶标记No.36-1抗体的组合的本申请发明的测定方法(黑圆)、利用了JIF-23抗体固定化磁性粒子与碱性磷酸酶标记No.1-1抗体的组合的本申请发明的测定方法(白方块)、和利用了JIF-23抗体固定化磁性粒子与碱性磷酸酶标记No.5-4抗体的组合的本申请发明的测定方法(白三角)。
具体实施方式
在本说明书中，用语“稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物”是指通过使用纤维蛋白溶酶将稳定化纤维蛋白进行消化而生成的分解物，是基本上由1个或者多个基本单元“p-DD/E”形成的分解物。在“稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物”中，例如包含由1个上述基本单元构成的p-DD/E、或者由多个上述基本单元构成的p-DD/E的聚合物或低聚物。作为“稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物”的别称，例如可以使用“D-D二聚物”或者“DD/E复合物”
并且，在本说明书中，对于利用纤维蛋白溶酶消化而生成的分解物，通过在该分解物的名称前面附加“p-”来表示。同样，对于利用颗粒球弹性蛋白酶消化而生成的分解物，通过在该分解物的名称前面附加“e-”来表示。
在本发明(含有本发明的免疫学分析方法和本发明的免疫学分析用试剂盒)中，作为单克隆抗体，使用抗原决定部位(表位)不同的2种单克隆抗体。并且，在本说明书的用语“抗体”中，不仅包含抗体自身，还包含其抗体片断。上述抗体片断可以使用例如Fab、Fab′、F(ab′)2、或者Fv。作为用于通过夹心免疫测定来特异性检测稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的抗体，具有下述的特征是必须的条件，所述特征包括与稳定化纤维蛋白、纤维蛋白原、或者纤维蛋白原的纤维蛋白溶酶分解产物不形成夹心免疫复合物，但以在稳定化纤维蛋白通过纤维蛋白溶酶消化而成的纤维蛋白分解产物中出现的部位(即、新抗原)作为抗原决定部位，可以形成夹心免疫复合物。
在本发明中，作为一方单克隆抗体，使用与稳定化纤维蛋白、纤维蛋白原、和纤维蛋白原的纤维蛋白溶酶分解物不反应、但与因稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解而出现的D结构域的新抗原反应的单克隆抗体(以下，称作第1抗体或者抗D结构域新抗原抗体)，作为另一方单克隆抗体，使用通过与上述第1抗体相比识别不同的部位、而与稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物发生特异性反应的单克隆抗体(以下，称作第2抗体)。
在本发明中使用的第1抗体、即、抗D结构域新抗原抗体，只要是可识别通过稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解而出现的D结构域的新抗原的单克隆抗体即可，没有特别地限定，例如可以使用识别当通过稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解、使包含由γ链的N末端起第63号～第85号的氨基酸序列的片断从γ链游离时所出现的D结构域的新抗原的单克隆抗体(例如单克隆抗体JIF-23)。
JIF-23是众所周知的可对稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物进行特异性检测的单克隆抗体  (例如，Matsuda，M.，Terukina，S.，Yamazumi，K.，Maekawa，H.，Soe，G.，A monoclonal antibody thatrecognizes the NH2-terminal conformation of fragment D，Excerpta Medica，Amsterdam；1990，43-38)。另外，JIF-23抗体不仅与稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物反应，还与稳定化纤维蛋白的颗粒球弹性蛋白酶分解物(即、作为基本单元的e-DD/E、以及其聚合物或者低聚物)反应。在作为稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物基本单元的p-DD/E的分子内，存在2处JIF-23抗体的抗原决定部位，因此单独使用JIF-23抗体可特异性地检测稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物，使用了JIF-23抗体的稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物测定用胶乳试剂在临床上被广泛应用。
在本发明中，将与第1抗体(例如，JIF-23抗体)相比识别不同部位的第2抗体、与第1抗体组合来构建稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的检测体系。作为上述第2抗体，只要是特异性识别通过稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶消化而新暴露出的氨基酸序列或者其立体结构的抗体即可，没有特别地限定，可以使用例如，特异性识别E结构域的新抗原的抗体(例如，单克隆抗体No.36-1、No.1-1、No.5-4)、单克隆抗体DD3B6/22(American Diagnostica；Thrombosis Research，1983年，31卷，p87-96或者Drug Coagulation&Fibrinolysis，1979年，8卷，p87-96)、单克隆抗体MA8D3(IL等；Thrombosis and Haemostasis，1989年，58卷，p.1024-1029)、单克隆抗体P10B5E12C9(Biomerieux；ClinicalChemistry，1996年，42卷，p410-415)、单克隆抗体P2C5A10(Biomerieux；Clinical Chemistry，1996年，42卷，p410-415)。
可作为第2抗体使用的、特异性识别E结构域的新抗原的抗体(以下，称作抗E结构域新抗原抗体)，只要是与稳定化纤维蛋白、纤维蛋白原、和纤维蛋白原的纤维蛋白溶酶分解物不反应、但与因稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解而出现的E结构域的新抗原反应的单克隆抗体即可，没有特别地限定，例如可以使用在参考实施例1的表1中记述的具有反应特异性的抗体(例如，单克隆抗体No.36-1、No.1-1、No.5-4)。No.36-1抗体与稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物反应，但与稳定化纤维蛋白的颗粒球弹性蛋白酶分解物不反应。
在本发明中，以与磁性粒子结合的状态使用单克隆抗体的一方，另一方的单克隆抗体以酶标记的状态使用。在本发明中使用的磁性粒子只要具有磁力、可作为免疫反应的固相载体使用即可，没有特别地限定，可以使用例如以下的磁性粒子。粒子的组成可以由浸渍了可磁化物质的聚合物来构成。对于粒子的表面结构，只要可使抗体固定化即可，没有特别地限定，当通过物理吸附使抗体固定化时，优选粒子表面的特性为疏水性，当通过化学键使抗体固定化时，优选在粒子表面引入官能团(例如，羧基、琥珀酰亚氨基、异硫氰酸酯基、氯磺酰基、马来酰亚氨基、酰肼基、氨基、或者SH基等)的结构。磁性粒子的粒径可以使用例如0.1～10μm，优选使用1～5μm。
将抗体结合在磁性粒子上的方法可以应用公知的技术。例如可以通过利用了疏水性相互作用的物理吸附法或者化学结合法来进行。当通过化学结合法结合抗体时，可以利用例如羧基、琥珀酰亚氨基、异硫氰酸酯基、氯磺酰基、马来酰亚氨基、酰肼基、或者氨基。对于上述羧基的情况，可以使用碳二亚胺使羧基活化、并使其与抗体的氨基结合。上述琥珀酰亚氨基、异硫氰酸酯基、或者氯磺酰基可以与抗体的氨基直接反应。上述马来酰亚氨基例如可以与SH基反应，可以使用SH基引入试剂将SH基引入抗体、或者将抗体还原而利用其铰合部位的SH基而使其结合。上述的酰肼基可以与抗体的糖链反应。上述氨基可以使用戊二醛将粒子上的氨基变换为醛基，从而使其与抗体的氨基反应。
在本发明中，对于标记单克隆抗体所使用的酶，只要是可应用化学发光的酶即可，没有特别地限定，可以进行高灵敏度的分析。例如，当底物为鲁米诺时，可以使用过氧化物酶作为标记酶，当底物为ルミゲン PPD时，可以使用碱性磷酸酶作为标记酶。特别地，当使用碱性磷酸酶作为酶、使用1，2-二氧环丁烷[更具体地，CDP-Star(トロピツクス社)]作为底物时，从S/N比的方面考虑是有用的，因而是优选的。报道了CDP-Star与AMPPD或CSPD同样、利用碱性磷酸酶进行水解，通过中间体发光，但其发光强度与AMPPD或CSPD相比非常强[Bronstein，I.，Edwards，B.，Voyta，J.C.，1，2-Dioxetanes：NovelChemiluminescent Enzyme Substrates.Application to Immunoassays，Journal ofBioluminescence and Chemiluminescence；4，99-111(1989)；Beck，S.，Koster，H.，Applications of Dioxetane Chemiluminescent Probes to MolecularBiology，Analytical Chemistry；62，2258-2270(1990)；Tizard，R.，Cate，R.L.，Ramachandran，K.L.，Wysk，M.，Voyta，J.C.，Murphy，O.J.，Bronstein，I.，Imaging of DNA Sequences with Chemiluminescence，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.；8 7，
4514-4518(1990)；或Bronstein，I.，Voyta，J.C.，Lazzari，K.G.，Murphy，O.，Edwards，B.，Kricka，L.J.，Rapid and Sensitive Detection of DNA in SouthernBlots with Chemiluminescence，BioTechniques；8，310-314(1990)]。
另外，由CDP-Star引起的化学发光的上升比AMPPD或CSPD快，且该发光持续24小时以上，因此优选作为使用了碱性磷酸酶的高灵敏度分析法的底物。
对抗体的酶标记可以使用公知的方法。可以列举例如，使用戊二醛将酶的氨基与抗体的氨基进行交联的方法、通过酶的氨基引入可与氨基结合的官能团(例如琥珀酰亚氨基、异硫氰酸酯基等)、使其与抗体的氨基结合的方法、通过酶的氨基引入马来酰亚氨基、利用抗体铰合部位的SH基等使其结合的方法、当酶是西洋芥末过氧化物酶等的糖蛋白时、利用高碘酸将糖链变换为醛基，使其与抗体的氨基结合的方法等。
本发明的免疫学分析方法除了使用特定的单克隆抗体的组合以外，可以与目前公知的免疫学分析方法一样、使用例如人工(手动)或者自动化系统来进行。例如，使检验样品或者标准样品、与结合在磁性粒子上的单克隆抗体、酶标记了的单克隆抗体在反应管内接触，接着在规定的温度下(例如30～40℃)进行温育。通过使磁铁与上述反应管的外壁接触，而将抗体结合磁性粒子捕获在反应管的内壁上，在该状态下对反应管内进行任选的洗涤，接着，在反应管内添加化学发光底物使其发光。检测得到的信号，分析在检验样品或者标准样品中存在的稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的量。通过使用磁性粒子，在温育后使用磁铁准确地进行其与样品液的分离、以及与洗涤液的分离，因此在空白的降低等方面也是有利的。作为利用本发明可进行分析的检验样品，可以列举有可能含有稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的生物样品，例如有血液、血浆、血清、或者尿等。
本发明人分别使用JIF-23抗体作为第1抗体、No.36-1抗体(识别通过纤维蛋白溶酶消化而暴露出的E结构域的结构的抗体)作为第2抗体，通过人血浆中稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的测定来评价其与目前的胶乳试剂的相关性。对于(1)“单独用JIF-23抗体构建的胶乳凝聚法”和“使用了单独用JIF-23抗体构建的抗体固定化磁性粒子和碱性磷酸酶标记抗体的测定体系”、以及(2)“单独用JIF-23抗体构建的胶乳凝聚法”和“使用了JIF-23抗体固定化磁性粒子和识别纤维蛋白溶酶消化后的E结构域的单克隆抗体的碱性磷酸酶标记物的测定体系”，在使用含有稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的人血浆(50个样本)作为样本组的相关试验中，回归直线的斜率、截距、和相关系数没有发现明显的差异，因此，对于将识别通过纤维蛋白溶酶消化暴露出的E结构域结构的抗体与JIF-23抗体进行组合而构建的测定体系，其特异性相对于单独用JIF-23抗体构建的测定体系，在测定血浆中的稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物方面没有差异。
根据Francis等的报道，推测在体内，由于血流和α2纤维蛋白溶酶抑制剂的作用，稳定化纤维蛋白利用纤维蛋白溶酶的分解没有进行至阶段4[分解进行至基本单元DD/E、或者片断D二聚体(DD)和片断E的状态]、而止于阶段3(基本单元DD/E的聚合物或者低聚物)，徐等报道了证实该推测的数据[Francis，C.W.，Marder，V.J.，Barlow，G.H.，Plasmic degradation of crosslinked fibrin，Journal of Clinical investigation；66，1033-1043，1980；徐吉夫、河野功、樱井锭治、松田道生，使用了识别片断D的氨基末端结构的单克隆抗体(JIF-23)的纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解产物的解析，血栓止血学会志，5，105-113，1994]。这些报道强烈暗示了上述相关试验(1)和(2)的相关性没有差异这一结果。
实施例
以下，通过实施例具体地说明本发明，但这些实施例不限定本发明的范围。
《实施例1：利用自动化系统进行的稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的测定》
(1)抗D结构域新抗原单克隆抗体JIF-23固定化磁性粒子的制作
JIF-23抗体利用胃蛋白酶消化的F(ab′)2组分的制作按照松屋等的报道(Matsuya，T.，Tashiro，S.，Hoshino，N.，Shibata，N.，Nagasaki，Y.，Kataoka，K.，A core-shell-type fluorescent nanosphere possessing reactive PEGtethered chains on the surface for zeptomole detection of protein in time-resolved fluorometric immunoassay；Anal.Chem.，75，6124-6132，2003)来进行。
向悬浊液(10mL)中添加100mg/mL的碳二亚胺水溶液(1mL)，在室温下颠倒混合1小时，所述悬浊液是JSR社制的引入羧基的磁性粒子(粒径2.5μM)在50mmol/L-MES缓冲液(pH6.5)中的1％悬浊液。在14000rpm的转速下进行15分钟离心分离来回收磁性粒子，用50mmol/L-MES缓冲液(pH6.5)洗涤2次。将用50mmol/L-MES缓冲液(pH6.5)制备的JIF-23抗体F(ab′)2溶液(200μg/10mL)、与上述磁性粒子混合，在室温下颠倒混合1小时。之后，在14000rpm的转速下进行1 5分钟离心分离来除去未反应的抗体溶液，添加使用0.1mol/L-Tris-HCl(pH8.0)制备的0.3％牛血清白蛋白溶液(10mL)，在室温下颠倒混合30分钟。在14000rpm的转速下进行15分钟离心分离来除去牛血清白蛋白溶液，用含有0.01％吐温-20的10mmol/L-Tris-HCl(pH8.0)缓冲液将抗体固定化磁性粒子进行洗涤后，供以后的实验使用。
(2)抗E结构域新抗原单克隆抗体No.36-1、No.1-1、或者No.5-4的碱性磷酸酶标记物的制作
识别胃蛋白酶消化后的E结构域的No.36-1抗体、No.1-1抗体、或者No.5-4抗体的Fab′组分的制作，按照松屋等的报道(Matsuya，T.，Tashiro，S.，Hoshino，N.，Shibata，N.，Nagasaki，Y.，Kataoka，K.，A core-shell-type fluorescent nanosphere possessing reactive PEG tethered chains on thesurface for zeptomole detection of protein in time-resolved fluorometricimmunoassay；Anal.Chem.，75，6124-6132，2003)来进行。单克隆抗体No.36-1、No.1-1、No.5-4的反应性如下述参考实施例1所示的那样。
对得到的单克隆抗体No.36-1、No.1-1、或者No.5-4的Fab′组分用碱性磷酸酶进行标记按照石川等的报道(Ishikawa，E.，Imagawa，M.，Hashida，S.，Yoshitake，S.，Hamaguchi，Y.，&Ueno，T.，Enzyme-labelingof antibodies and their fragments for enzyme immunoassay andimmunohistochemical staining；J.Immunoassay，4，209-327，1983和Ishikawa，E.，Hashida，S.，Kohno，T.&Tanaka，K.，Methods for enzyme-labeling ofantigens，antibodies and their fragments；In：Nonisotopic Immunoassay，T.T.Ngo(ed.)，p27-55，Plenum Publishing Corporation，New York，1988)来进行。
另外，作为比较用的碱性磷酸酶标记抗体，除了使用JIF-23抗体以外，通过重复上述操作，制备单克隆抗体JIF-23的Fab′组分的碱性磷酸酶标记物。
(3)稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的制备
稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的制备按照Olexa等的报道[Olexa，S.A.，Budzynski，A.Z.，Primary soluble plasmic degradation productof human cross-linked fibrin.Isolation and stoichiometry of the(DD)Ecomplex；Biochemistry，18，991-995，1979]来进行。另外，稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物进而分解生成的片断D和片断E按照Masci等的报道[Masci，P.P.，Whitaker，A.N.Winzor，D.J.，A simple chromatographicprocedure for the purification of the D dimmer fragment from crosslinkedfibrin；Analytical Biochemistry，147，128-135，1985]来进行制备。
(4)使用了抗体固定化磁性粒子和碱性磷酸酶标记抗体的稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的测定
使用稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的一系列稀释液作为样品，所述稀释液使用含有3％牛血清白蛋白的20mmol/L-Tris-HCl(pH7.0)的缓冲液来配制。首先，将样品(50μL)、No.36-1抗体、No.1-1抗体、或者No.5-4抗体Fab′组分的碱性磷酸酶标记物(50μL)、和JIF-23抗体F(ab′)2组分固定化磁性粒子(1％磁性粒子、50μL)进行混合，在37℃下使其反应5分钟。接着，使用以Triton X-100作为主成分的洗涤液，除去无助于免疫反应的样品成分、或剩余的标记抗体后，将结合了免疫复合物的磁性粒子与作为化学发光底物的CDP-Star(トロピツクス社)(100μL)混合，利用光电倍增管计测1分钟后的发光。
另外，作为比较例，除了使用JIF-23抗体Fab′组分的碱性磷酸酶标记物来代替No.36-抗体Fab′组分的碱性磷酸酶标记物以外，其他重复上述操作。
(5)稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的测定结果
图1表示在2种测定体系中，对稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的一系列稀释液进行测定的结果，所述2种测定体系包括利用了JIF-23抗体固定化磁性粒子与碱性磷酸酶标记No.36-1抗体的组合的本申请发明的测定方法(图1中的黑圆)、和利用了JIF-23抗体固定化磁性粒子与碱性磷酸酶标记JIF-23抗体的组合的比较用测定方法(图1中的白圆)。
通过使用识别的抗原决定部位不同的2种单克隆抗体(JIF-23抗体和No.36-1抗体)，与单独用JIF-23抗体构建的测定体系相比，对于稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的反应性提高约6倍。其检测灵敏度在约17分钟的分析时间下为0.005μg/mL FEU，相对于使用了识别稳定化纤维蛋白分解物的D结构域的新抗原的抗体的目前的ELISA法(ビメリユ一社ミニヴアイダス：大约35分钟的分析时间)(非专利文献8，11)的检测灵敏度45ng/mL FEU，提高约9倍，通过高灵敏度化、同时实现了分析时间的缩短。
图2表示在本发明3种测定方法中，对稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的一系列稀释浓度进行测定的结果，包括利用了JIF-23抗体固定化磁性粒子与碱性磷酸酶标记No.36-1抗体的组合的本申请发明的测定方法(图2中的黑圆)、利用了JIF-23抗体固定化磁性粒子与碱性磷酸酶标记No.1-1抗体的组合的本申请发明的测定方法(图2中的白方块)、和利用了JIF-23抗体固定化磁性粒子与碱性磷酸酶标记No.5-4抗体的组合的本申请发明的测定方法(图2中的白三角)。
对于任何一种抗体的组合，通过对碱性磷酸酶标记抗体使用识别稳定化纤维蛋白的E结构域的新抗原的抗体，可以得到与No.36-1同等程度的反应性，对于用于碱性磷酸酶标记抗体的、识别稳定化纤维蛋白分解物E结构域的新抗原的抗体的使用，显示高的普遍性。
《参考实施例1：单克隆抗体No.36-1、No.1-1、和No.5-4的识别部位的确定》
单克隆抗体No.36-1、No.1-l、和No.5-4的反应特异性通过如特公平5-48119号公报的实施5中所述的方法来确定。即，根据バイオラツド社的Zeta-Probe Blotting Mewbraues Instruction Manual，利用蛋白质印迹法来确定。
其大致内容是在Ca2+或者EGTA的存在下对纤维蛋白原进行纤维蛋白溶酶处理，将30分钟、60分钟、和24小时反应后的纤维蛋白原分解物在二硫苏糖醇(DTT)存在下或不存在下进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，实施使用了No.36-1抗体的蛋白质印迹法。另外，代替上述纤维蛋白原分解物，对于稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物、片段D和片段E重复上述操作。
结果示于表1。在表1中，记号“(-)”表示没有结合反应性，记号“(+)”表示具有结合反应性。根据表1的结果，判明No.36-1抗体、No.1-1抗体、和No.5-4抗体与利用稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解而出现的E结构域的新抗原进行反应。
[表1]
 抗原   反应性
 纤维蛋白原XY片断D二聚体(DD)Eearly DDcateDegtaA αBβγγ-γ1γ5E1，E2E3     (-)(-)(+)(-)(+)(-)(-)(-)(-)(-)(-)(-)(-)(+)(+)
产业利用可能性
本发明的免疫学分析方法可以适用于各种诊断、例如DIC、DVT、肺栓塞症的诊断的用途。
以上，通过特定的方式说明本发明，但对于本行业者是显而易见的变形或改良也包含在本发明的范围内。

Claims (7)

1.对稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物进行免疫学分析的方法，其特征在于，使用(a)与稳定化纤维蛋白、纤维蛋白原、和纤维蛋白原的纤维蛋白溶酶分解物不反应而与因稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解而出现的D结构域的新抗原反应的单克隆抗体、和(b)通过识别与上述单克隆抗体(a)相比不同的部位、而与稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物发生特异性反应的单克隆抗体的组合，其中上述单克隆抗体(a)或者(b)的一方结合在磁性粒子上，另一方单克隆抗体被酶标记，并且使用化学发光底物作为上述酶的底物。
2.如权利要求1所述的免疫学分析方法，上述单克隆抗体(b)与稳定化纤维蛋白、纤维蛋白原、和纤维蛋白原的纤维蛋白溶酶分解物不反应而与因稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解而出现的E结构域的新抗原反应。
3.如权利要求1或者2所述的免疫学分析方法，含有下述的工序：
(1)使可能含有稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的检验样品、与上述单克隆抗体(a)、上述单克隆抗体(b)接触的工序、
(2)将通过稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物与磁性粒子结合单克隆抗体形成了免疫复合物的酶标记单克隆抗体、与不形成上述免疫复合物的酶标记单克隆抗体进行分离的工序、
(3)在用上述工序分离的磁性粒子结合单克隆抗体-稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物-酶标记单克隆抗体免疫复合物中，添加化学发光底物、使其发光的工序、和
(4)对得到的发光信号进行分析的工序。
4.如权利要求1～3中任意一项所述的免疫学分析方法，化学发光底物是1，2-二氧环丁烷。
5.如权利要求1～4中任意一项所述的免疫学分析方法，标记酶是碱性磷酸酶。
6.稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的免疫学分析用试剂盒，其特征在于，含有(a)与稳定化纤维蛋白、纤维蛋白原、和纤维蛋白原的纤维蛋白溶酶分解物不反应而与因稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解而出现的D结构域的新抗原反应的单克隆抗体、
(b)通过识别与上述单克隆抗体(a)相比不同的部位、而与稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物发生特异性反应的单克隆抗体、以及
(c)化学发光底物，
其中上述单克隆抗体(a)或者(b)的一方结合在磁性粒子上，另一方单克隆抗体用以上述化学发光底物作为底物的酶标记。
7.下肢深部静脉血栓症和/或肺栓塞症的检测方法，其特征在于，利用如权利要求1～5中任意一项所述的免疫学分析方法、或者如权利要求6所述的免疫学分析用试剂盒，对在检验样品中含有的稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物进行分析。
CN2006800147353A 2005-04-28 2006-04-27 稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的免疫学分析方法 Active CN101166977B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2005132444 2005-04-28
JP132444/2005 2005-04-28
PCT/JP2006/308840 WO2006118195A1 (ja) 2005-04-28 2006-04-27 安定化フィブリンのプラスミン分解物の免疫学的分析方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101166977A true CN101166977A (zh) 2008-04-23
CN101166977B CN101166977B (zh) 2012-09-05

Family

ID=37307993

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2006800147353A Active CN101166977B (zh) 2005-04-28 2006-04-27 稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的免疫学分析方法

Country Status (7)

Country Link
US (1) US7888057B2 (zh)
EP (1) EP1887358B8 (zh)
JP (1) JP4772786B2 (zh)
CN (1) CN101166977B (zh)
CA (1) CA2606169A1 (zh)
ES (1) ES2366043T3 (zh)
WO (1) WO2006118195A1 (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102213724A (zh) * 2010-04-09 2011-10-12 中国科学院电子学研究所 一种基于化学发光的痕量蛋白快速检测方法
CN106290864A (zh) * 2016-08-12 2017-01-04 江苏泽成生物技术有限公司 一种人类免疫缺陷病毒抗原及抗体测定试剂盒及制备方法
CN107602698A (zh) * 2010-04-01 2018-01-19 美迪恩斯生命科技株式会社 新的单克隆抗体以及d二聚体的免疫学测定方法
CN109521004A (zh) * 2018-11-21 2019-03-26 北京利德曼生化股份有限公司 用于检测胶质纤维酸性蛋白(gfap)的磁微粒分离化学发光免疫测定法
CN114181102A (zh) * 2021-11-10 2022-03-15 深圳市检验检疫科学研究院 己雷琐辛半抗原、人工抗原、抗体及其合成方法和应用

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102007026153A1 (de) * 2007-06-04 2008-12-11 Dade Behring Marburg Gmbh Stabile D-Dimer Flüssigzubereitung
GB0820786D0 (en) * 2008-11-13 2008-12-24 Nordic Bioscience As Assessment of protein degradation by measurement of collagen fragments
JP5709425B2 (ja) 2010-07-27 2015-04-30 シスメックス株式会社 Ｄダイマー測定用試薬
CN108700570B (zh) * 2016-02-22 2022-03-11 美迪恩斯生命科技株式会社 交联纤维蛋白分解产物的测定试剂及测定方法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6379900A (ja) 1986-09-22 1988-04-09 Yatoron:Kk モノクロ−ナル抗体と検出方法
IE67430B1 (en) * 1988-06-24 1996-04-03 Res Corp Technologies Inc Assay for soluble crosslinked fibrin polymers
ATE385506T1 (de) * 1993-11-02 2008-02-15 Mitsubishi Kagaku Iatron Inc Antikörper gegen menschliches lösliches fibrin, hybridome, die sie produzieren und immunmessverfahren
JP2001249079A (ja) * 1999-12-28 2001-09-14 Fujirebio Inc 発光量調節剤を用いた化学発光測定方法及び酵素免疫測定方法
JP3983593B2 (ja) 2002-04-26 2007-09-26 プレシジョン・システム・サイエンス株式会社 磁性粒子懸濁液測定装置

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107602698A (zh) * 2010-04-01 2018-01-19 美迪恩斯生命科技株式会社 新的单克隆抗体以及d二聚体的免疫学测定方法
CN102213724A (zh) * 2010-04-09 2011-10-12 中国科学院电子学研究所 一种基于化学发光的痕量蛋白快速检测方法
CN106290864A (zh) * 2016-08-12 2017-01-04 江苏泽成生物技术有限公司 一种人类免疫缺陷病毒抗原及抗体测定试剂盒及制备方法
CN109521004A (zh) * 2018-11-21 2019-03-26 北京利德曼生化股份有限公司 用于检测胶质纤维酸性蛋白(gfap)的磁微粒分离化学发光免疫测定法
CN114181102A (zh) * 2021-11-10 2022-03-15 深圳市检验检疫科学研究院 己雷琐辛半抗原、人工抗原、抗体及其合成方法和应用
CN114181102B (zh) * 2021-11-10 2023-06-23 深圳市检验检疫科学研究院 己雷琐辛半抗原、人工抗原、抗体及其合成方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
EP1887358A4 (en) 2009-04-01
ES2366043T3 (es) 2011-10-14
US7888057B2 (en) 2011-02-15
CN101166977B (zh) 2012-09-05
EP1887358A1 (en) 2008-02-13
EP1887358B1 (en) 2011-06-29
JPWO2006118195A1 (ja) 2008-12-18
EP1887358B8 (en) 2012-02-22
US20090068682A1 (en) 2009-03-12
JP4772786B2 (ja) 2011-09-14
CA2606169A1 (en) 2006-11-09
WO2006118195A1 (ja) 2006-11-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101166977B (zh) 稳定化纤维蛋白的纤维蛋白溶酶分解物的免疫学分析方法
CN102901810B (zh) 包被有前列腺特异性抗原抗体的胶乳颗粒的制备方法及psa胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒
CN108318680B (zh) 一种抗药抗体的检测方法及检测试剂盒
CN103941021B (zh) 一种检测白细胞介素‑6的试剂盒以及非诊断目的检测白细胞介素‑6的方法
JPH0720127A (ja) 各種ｐｉｖｋａの測定方法および測定試薬
JPWO2010064435A1 (ja) ヒト体液中のシスタチンｃ測定方法
CN108139392A (zh) Pivka-ii的测定方法及pivka-ii免疫测定试剂或试剂盒的制造方法
JPWO2006123789A1 (ja) 酵素分析方法
CN102656457A (zh) 用于诊断前列腺癌的试剂盒和方法
WO2002079782A1 (fr) Reactif et procede pour l'immunoanalyse de l'elastase 1, et procede de detection de pathologie pancreatique
US20020119582A1 (en) Signal enhancement of bispecific antibody-polymer probe for immunoassay use
JP6578119B2 (ja) 前立腺特異抗原の測定方法及び測定キット
WO2017204295A1 (ja) 消化器癌の判定方法
CN110133270A (zh) 一种增强免疫抑制比浊抗体筛选试剂及其制作和使用方法
CN109444431A (zh) 一种心脏肌球蛋白结合蛋白c的定量检测方法及检测试剂盒
US5707878A (en) Method for detecting blood component using conidiobolus hemagglutinin
JP2714562B2 (ja) 可溶性フイブリンの測定方法
CN115598344B (zh) 一种粪胰弹性蛋白酶1的检测试剂盒及其制备方法
CN115541891B (zh) 一种过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒及其制备方法
US20240133904A1 (en) Monoclonal antibody against d-dimer and diagnosis agent for detecting d-dimer, crosslinked fibrin and its derivatives containing d-dimer by using the antibody
Chi et al. Comparative sensitivity of two hemagglutination inhibition immunoassays for fibrinolytic degradation products in human serum
US20030224462A1 (en) Immunoassay for cancer
JP2520465B2 (ja) 多標識抗体
US20190383816A1 (en) Method and composition for detection of proteolytic products and diagnosis of malignant neoplastic disease
US20220187303A1 (en) Method and composition for detection of proteolytic products and diagnosis of malignant neoplastic disease

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: MITSUBISHI CHEMICAL SAFETY INSTITUTE LTD.

Free format text: FORMER OWNER: MITSUBISHI KAGAKU MEDICAL, INC

Effective date: 20101222

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20101222

Address after: Tokyo, Japan

Applicant after: Mitsubishi Chemical Medience Corp.

Address before: Tokyo, Japan

Applicant before: MITSUBISHI KAGAKU IATRON, Inc.

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C56 Change in the name or address of the patentee

Owner name: MEIDI ENSI LIFE TECHNOLOGY CO., LTD.

Free format text: FORMER NAME: MITSUBISHI CHEMICAL SAFETY INSTITUTE LTD.

CP01 Change in the name or title of a patent holder

Address after: Tokyo, Japan

Patentee after: LSI MEDIENCE Corp.

Address before: Tokyo, Japan

Patentee before: Mitsubishi Chemical Medience Corp.

TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20240313

Address after: Ehime Prefecture, Japan

Patentee after: Pu Heji

Country or region after: Japan

Address before: Tokyo, Japan

Patentee before: LSI MEDIENCE Corp.

Country or region before: Japan