JP2001249079A - 発光量調節剤を用いた化学発光測定方法及び酵素免疫測定方法 - Google Patents
発光量調節剤を用いた化学発光測定方法及び酵素免疫測定方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 化学発光増強剤を用いる化学発光測定方法に
おいて、効率的な測定を可能とする化学発光測定方法を
提供することを目的とする。 【解決手段】 本発明は、化学発光増強剤、酵素及び化
学発光基質とを反応させる化学発光測定方法において、
発光量調節剤を添加することにより酵素の濃度に対する
発光量の関係を直線比例的に増加させる系で、効率的な
測定を可能とする化学発光測定方法である。
おいて、効率的な測定を可能とする化学発光測定方法を
提供することを目的とする。 【解決手段】 本発明は、化学発光増強剤、酵素及び化
学発光基質とを反応させる化学発光測定方法において、
発光量調節剤を添加することにより酵素の濃度に対する
発光量の関係を直線比例的に増加させる系で、効率的な
測定を可能とする化学発光測定方法である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、化学発光増強剤、酵素
及び化学発光基質とを反応させる化学発光測定方法にお
いて、発光量調節剤の存在下で測定を行うことを特徴と
する化学発光測定方法及び該測定方法を用いる酵素免疫
測定方法に関する。本発明により、化学発光測定を効率
よく行うことができる。
及び化学発光基質とを反応させる化学発光測定方法にお
いて、発光量調節剤の存在下で測定を行うことを特徴と
する化学発光測定方法及び該測定方法を用いる酵素免疫
測定方法に関する。本発明により、化学発光測定を効率
よく行うことができる。
【０００２】
【従来の技術】化学発光測定は、検体中の測定対象物の
存在又は濃度を、迅速、高感度に測定することができ、
ＨＩＶ、ＨＣＶ等のウィルス、その他生体内微量成分等
を測定するために広く用いられている。
存在又は濃度を、迅速、高感度に測定することができ、
ＨＩＶ、ＨＣＶ等のウィルス、その他生体内微量成分等
を測定するために広く用いられている。
【０００３】その中でも、化学発光物質として１，２−
ジオキセタン類は特に関心を集めている化合物であり、
該化合物を基質として酵素と反応させることにより生じ
る発光を利用した測定において、感度の向上や測定操作
の改善等についてこれまで種々の検討がなされている。
ジオキセタン類は特に関心を集めている化合物であり、
該化合物を基質として酵素と反応させることにより生じ
る発光を利用した測定において、感度の向上や測定操作
の改善等についてこれまで種々の検討がなされている。
【０００４】感度を向上させる検討は特に活発に行われ
ており、１，２−ジオキセタン類を化学発光物質として
用いる化学発光測定方法において、発光量を増大させ測
定感度を上昇させる様々な化学発光増強剤が見いだされ
ている。その一つとしてポリビニルベンジルトリブチル
アンモニウムクロライド（以下、ＴＢＱと称する。）に
極めて高い発光増強効果があることは既に知られており
（特開平４−１２４１８５号公報参照）、さらに、生じ
る発光量をより増加させるための改良方法が種々検討さ
れている（特表平８−５０７６９４号公報参照）。
ており、１，２−ジオキセタン類を化学発光物質として
用いる化学発光測定方法において、発光量を増大させ測
定感度を上昇させる様々な化学発光増強剤が見いだされ
ている。その一つとしてポリビニルベンジルトリブチル
アンモニウムクロライド（以下、ＴＢＱと称する。）に
極めて高い発光増強効果があることは既に知られており
（特開平４−１２４１８５号公報参照）、さらに、生じ
る発光量をより増加させるための改良方法が種々検討さ
れている（特表平８−５０７６９４号公報参照）。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、化学発
光増強剤を用いる測定系において、酵素濃度が低い場合
その発光増強効率は著しく高くなり、また、酵素濃度が
あるレベルを越えると減少していくため、酵素濃度と発
光量の関係を示すグラフは直線的な比例関係にならなか
った。そのため、この標準曲線を測定に用いることが困
難であり、酵素濃度の測定を効率的に安定して行うこと
ができなかった。
光増強剤を用いる測定系において、酵素濃度が低い場合
その発光増強効率は著しく高くなり、また、酵素濃度が
あるレベルを越えると減少していくため、酵素濃度と発
光量の関係を示すグラフは直線的な比例関係にならなか
った。そのため、この標準曲線を測定に用いることが困
難であり、酵素濃度の測定を効率的に安定して行うこと
ができなかった。
【０００６】前記したように、１，２−ジオキセタン類
を用いる化学発光測定系においては、その測定感度の向
上を目的として発光量を増加させる種々の改善が行われ
てきているが、酵素の濃度と発光量との比例関係を改善
する検討はなされていない。そこで、本発明は化学発光
増強剤を用いる化学発光測定において、酵素の濃度に対
する発光量の関係を直線比例的に増加させる系とするこ
とで、効率的な測定を可能とすることを目的とするもの
である。
を用いる化学発光測定系においては、その測定感度の向
上を目的として発光量を増加させる種々の改善が行われ
てきているが、酵素の濃度と発光量との比例関係を改善
する検討はなされていない。そこで、本発明は化学発光
増強剤を用いる化学発光測定において、酵素の濃度に対
する発光量の関係を直線比例的に増加させる系とするこ
とで、効率的な測定を可能とすることを目的とするもの
である。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは前記課題を
解決するため鋭意検討した結果、発光量調節剤を添加す
ることにより、酵素の量に対する発光量が直線比例的に
増加することを見いだし、本発明を完成したものであ
る。すなわち本発明は、化学発光増強剤、酵素及び化学
発光基質とを反応させる化学発光測定方法において、発
光量調節剤の存在下に行うことを特徴とする該化学発光
測定方法、及び該測定方法を用いる酵素免疫測定方法で
ある。
解決するため鋭意検討した結果、発光量調節剤を添加す
ることにより、酵素の量に対する発光量が直線比例的に
増加することを見いだし、本発明を完成したものであ
る。すなわち本発明は、化学発光増強剤、酵素及び化学
発光基質とを反応させる化学発光測定方法において、発
光量調節剤の存在下に行うことを特徴とする該化学発光
測定方法、及び該測定方法を用いる酵素免疫測定方法で
ある。
【０００８】本発明の発光量調節剤としては、ミリスチ
ルトリメチルアンモニウムブロマイド（以下、ＭＴＡＢ
と称する。）、セチルトリメチルアンモニウムブロマイ
ド（以下、ＣＴＡＢと称する。）、ラウリルトリメチル
アンモニウムブロマイド（以下、ＤＴＡＢと称す
る。）、ステアリルトリメチルアンモニウムブロマイド
（以下、ＳＴＡＢと称する。）、ミリスチルトリメチル
アンモニウムクロライド（以下、ＭＴＡＣと称する。）
及びベンジルジメチルテトラデシルアンモニウムクロラ
イド（以下、ＢＤＭＡＣと称する。）が挙げられ、これ
らの化合物の１種を単独で用いてもよいし、２種以上の
化合物を混合して用いてもよい。
ルトリメチルアンモニウムブロマイド（以下、ＭＴＡＢ
と称する。）、セチルトリメチルアンモニウムブロマイ
ド（以下、ＣＴＡＢと称する。）、ラウリルトリメチル
アンモニウムブロマイド（以下、ＤＴＡＢと称す
る。）、ステアリルトリメチルアンモニウムブロマイド
（以下、ＳＴＡＢと称する。）、ミリスチルトリメチル
アンモニウムクロライド（以下、ＭＴＡＣと称する。）
及びベンジルジメチルテトラデシルアンモニウムクロラ
イド（以下、ＢＤＭＡＣと称する。）が挙げられ、これ
らの化合物の１種を単独で用いてもよいし、２種以上の
化合物を混合して用いてもよい。
【０００９】特に、直線比例性を極めて高くすることに
より、測定を効率的に行うことができる点から、発光量
調節剤としてＭＴＡＢを用いることが好ましい。
より、測定を効率的に行うことができる点から、発光量
調節剤としてＭＴＡＢを用いることが好ましい。
【００１０】発光量調節剤の使用量は、酵素の量と化学
発光量の関係が直線関係もしくは直線に近い関係となる
のに必要な量である。発光量調節剤の量が少ない場合に
は、測定に有効な標準曲線を得ることができず、量が多
い場合には、発光増強効率を低下させてしまう。
発光量の関係が直線関係もしくは直線に近い関係となる
のに必要な量である。発光量調節剤の量が少ない場合に
は、測定に有効な標準曲線を得ることができず、量が多
い場合には、発光増強効率を低下させてしまう。
【００１１】従って、その使用量は、ＴＢＱの使用重量
に対して１／４０〜等量の範囲で用いることができる
が、標準曲線の有効性の観点からＴＢＱに対して１／５
〜１／２量であることが好ましい。
に対して１／４０〜等量の範囲で用いることができる
が、標準曲線の有効性の観点からＴＢＱに対して１／５
〜１／２量であることが好ましい。
【００１２】また、本発明の化学発光基質としては、一
般式（ Ｉ ）
般式（ Ｉ ）
【化９】 （式中、Ｒ1は水素原子又はハロゲン原子、Ｒ2は低級ア
ルキル基、Ａｒ1はフェニレン基又はナフチレン基、Ｒ3
は−ＯＰＯ3 2-・２Ｍ+で表わされる基（Ｍは、ナトリウ
ム原子、カリウム原子又はＮＨ4である。）又はガラク
トシル基である。）で表わされる１，２−ジオキセタン
誘導体、又は一般式（ＩＩ ）
ルキル基、Ａｒ1はフェニレン基又はナフチレン基、Ｒ3
は−ＯＰＯ3 2-・２Ｍ+で表わされる基（Ｍは、ナトリウ
ム原子、カリウム原子又はＮＨ4である。）又はガラク
トシル基である。）で表わされる１，２−ジオキセタン
誘導体、又は一般式（ＩＩ ）
【化１０】 （式中、Ｒ4、Ｒ5及びＲ6は低級アルキル基であり、Ａ
ｒ2は式（Ａ）
ｒ2は式（Ａ）
【化１１】 （式中、Ｒ7は−ＯＰＯ3 2-・２Ｍ+で表わされる基（Ｍ
は、ナトリウム原子、カリウム原子又はＮＨ4であ
る。）又はガラクトシル基であり、Ｒ8は水素原子、ア
ルキル基、アリール基、ヒドロキシル基、アルコキシル
基、アリールオキシ基又はアラルキルオキシ基であり、
Ｖは酸素原子又は硫黄原子である。）で表わされる基、
式（Ｂ）
は、ナトリウム原子、カリウム原子又はＮＨ4であ
る。）又はガラクトシル基であり、Ｒ8は水素原子、ア
ルキル基、アリール基、ヒドロキシル基、アルコキシル
基、アリールオキシ基又はアラルキルオキシ基であり、
Ｖは酸素原子又は硫黄原子である。）で表わされる基、
式（Ｂ）
【化１２】 （式中、Ｒ7は前式（Ａ）のＲ7と同じであり、Ｗは窒素
原子又はＣ−Ｒ9（Ｒ9は、水素原子、アルキル基、アリ
ール基、アルコキシル基又はアラルキルオキシ基であ
る。）で表わされる基であり、Ｘは酸素原子又は硫黄原
子である。）で表わされる基、又は式（Ｃ）
原子又はＣ−Ｒ9（Ｒ9は、水素原子、アルキル基、アリ
ール基、アルコキシル基又はアラルキルオキシ基であ
る。）で表わされる基であり、Ｘは酸素原子又は硫黄原
子である。）で表わされる基、又は式（Ｃ）
【化１３】 （式中、Ｒ7は前式（Ａ）のＲ7と同じであり、Ｙは酸素
原子、硫黄原子又はＮ−Ｒ10であり、Ｚは水素原子、ア
ルキル基、アリール基、−ＯＲ11、−ＳＲ12又は式
原子、硫黄原子又はＮ−Ｒ10であり、Ｚは水素原子、ア
ルキル基、アリール基、−ＯＲ11、−ＳＲ12又は式
【化１４】 で表わされる基である。ここで、Ｒ10は水素原子、アル
キル基、アリール基、ヒドロキシル基又はアルコキシル
基であり、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13及びＲ14は水素原子、アル
キル基又はアリール基である。また、Ｒ10とＲ11、Ｒ10
とＲ12、Ｒ10とＲ 13及びＲ13とＲ14は一体となって環を
形成することもでき、この環には２つ以上のヘテロ環を
含んでいてもよい。）で表わされる基である。）で表わ
される１，２−ジオキセタン誘導体を用いるものであ
る。
キル基、アリール基、ヒドロキシル基又はアルコキシル
基であり、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13及びＲ14は水素原子、アル
キル基又はアリール基である。また、Ｒ10とＲ11、Ｒ10
とＲ12、Ｒ10とＲ 13及びＲ13とＲ14は一体となって環を
形成することもでき、この環には２つ以上のヘテロ環を
含んでいてもよい。）で表わされる基である。）で表わ
される１，２−ジオキセタン誘導体を用いるものであ
る。
【００１３】前記一般式（ Ｉ ）で表わされる１，２−
ジオキセタン誘導体のＲ1は、水素原子であってもよ
く、また、クロル原子、ブロム原子、ヨウ素原子等のハ
ロゲン原子であってもよい。また、Ｒ2の「低級アルキ
ル基」としては、炭素数１〜６個のアルキル基をいい、
例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチ
ル、ヘキシルの直鎖状、分枝鎖状又は環状の基を挙げる
ことができる。また、Ａｒ 1はフェニレン基、ナフチレ
ン基等の芳香族炭化水素基を挙げることができる。
ジオキセタン誘導体のＲ1は、水素原子であってもよ
く、また、クロル原子、ブロム原子、ヨウ素原子等のハ
ロゲン原子であってもよい。また、Ｒ2の「低級アルキ
ル基」としては、炭素数１〜６個のアルキル基をいい、
例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチ
ル、ヘキシルの直鎖状、分枝鎖状又は環状の基を挙げる
ことができる。また、Ａｒ 1はフェニレン基、ナフチレ
ン基等の芳香族炭化水素基を挙げることができる。
【００１４】さらに、一般式（ Ｉ ）の化合物を具体的
に例示すれば、３−［４−メトキシスピロ（１，２−ジ
オキセタン−３，２’−トリシクロ［３，３，１，１
3,7］デカン）−４−イル］フェニルリン酸 二ナトリ
ウム塩（以下、ＡＭＰＰＤと称する。）、７−［４−メ
トキシスピロ（１，２−ジオキセタン−３，２’−トリ
シクロ［３，３，１，１3,7］デカン）−４−イル］ナ
フチル−２−イルリン酸二ナトリウム塩、３−［４−メ
トキシスピロ（１，２−ジオキセタン−３，２’−トリ
シクロ［３，３，１，１3,7］デカン）−４−イル］フ
ェニル β−Ｄ−ガラクトピラノース、３−［４−メト
キシスピロ［１，２−ジオキセタン−３，２’−（５’
−クロロ）トリシクロ［３，３，１，１3,7］デカン］
−４−イル］フェニルリン酸 二ナトリウム塩、３−
［４−メトキシスピロ［１，２−ジオキセタン−３，
２’−（５’−クロロ）トリシクロ［３，３，１，１
3,7］デカン］−４−イル］フェニル β−Ｄ−ガラク
トピラノース等を挙げることができる。
に例示すれば、３−［４−メトキシスピロ（１，２−ジ
オキセタン−３，２’−トリシクロ［３，３，１，１
3,7］デカン）−４−イル］フェニルリン酸 二ナトリ
ウム塩（以下、ＡＭＰＰＤと称する。）、７−［４−メ
トキシスピロ（１，２−ジオキセタン−３，２’−トリ
シクロ［３，３，１，１3,7］デカン）−４−イル］ナ
フチル−２−イルリン酸二ナトリウム塩、３−［４−メ
トキシスピロ（１，２−ジオキセタン−３，２’−トリ
シクロ［３，３，１，１3,7］デカン）−４−イル］フ
ェニル β−Ｄ−ガラクトピラノース、３−［４−メト
キシスピロ［１，２−ジオキセタン−３，２’−（５’
−クロロ）トリシクロ［３，３，１，１3,7］デカン］
−４−イル］フェニルリン酸 二ナトリウム塩、３−
［４−メトキシスピロ［１，２−ジオキセタン−３，
２’−（５’−クロロ）トリシクロ［３，３，１，１
3,7］デカン］−４−イル］フェニル β−Ｄ−ガラク
トピラノース等を挙げることができる。
【００１５】特に、臨床検査薬の分野において広く知ら
れ、実用化されている点から、化学発光基質として、Ａ
ＭＰＰＤを用いることが好ましい。
れ、実用化されている点から、化学発光基質として、Ａ
ＭＰＰＤを用いることが好ましい。
【００１６】前記一般式（ ＩＩ ）で表わされる１，２
−ジオキセタン誘導体において、「低級アルキル基」と
は、前記した低級アルキル基と同様の基を挙げることが
でき、さらに、「アルキル基」としては、置換基を有し
ていてもよい炭素数１〜２０個のアルキル基をいい、前
記した「低級アルキル基」の例示に加え、ヘプチル、オ
クチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリ
デシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、
ヘプタデシル、オクタデシル、ノナデシル、イコサニル
の直鎖状、分枝鎖状又は環状の基を挙げることができ
る。
−ジオキセタン誘導体において、「低級アルキル基」と
は、前記した低級アルキル基と同様の基を挙げることが
でき、さらに、「アルキル基」としては、置換基を有し
ていてもよい炭素数１〜２０個のアルキル基をいい、前
記した「低級アルキル基」の例示に加え、ヘプチル、オ
クチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリ
デシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、
ヘプタデシル、オクタデシル、ノナデシル、イコサニル
の直鎖状、分枝鎖状又は環状の基を挙げることができ
る。
【００１７】前記置換してもよい基とは、例えば、ヒド
ロキシル基、アルコキシル基、アリール基等である。そ
のアルコキシル基としては、例えばメトキシ、エトキ
シ、プロポキシ、ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシル
オキシ、メトキシエトキシ、メトキシプロポキシ、エト
キシエトキシ、エトキシプロポキシ、メトキシエトキシ
エトキシ基等の炭素数１〜２０個のアルコキシル基が直
鎖状又は分枝鎖状に１〜５個結合したもの等を挙げるこ
とができる。また、前記アリール基としては、例えば、
フェニル、ナフチル基等の炭素数６〜２０個の芳香族炭
化水素基、及び、フリル、チエニル、ピリジル基等の環
内に１〜５個の窒素原子、酸素原子又は硫黄原子を有す
るヘテロアリール基等を挙げることができる。
ロキシル基、アルコキシル基、アリール基等である。そ
のアルコキシル基としては、例えばメトキシ、エトキ
シ、プロポキシ、ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシル
オキシ、メトキシエトキシ、メトキシプロポキシ、エト
キシエトキシ、エトキシプロポキシ、メトキシエトキシ
エトキシ基等の炭素数１〜２０個のアルコキシル基が直
鎖状又は分枝鎖状に１〜５個結合したもの等を挙げるこ
とができる。また、前記アリール基としては、例えば、
フェニル、ナフチル基等の炭素数６〜２０個の芳香族炭
化水素基、及び、フリル、チエニル、ピリジル基等の環
内に１〜５個の窒素原子、酸素原子又は硫黄原子を有す
るヘテロアリール基等を挙げることができる。
【００１８】また、「アルコキシル基」としては、前記
したアルキル基に置換してもよいアルコキシル基と同じ
ものを挙げることができ、「アリール基」としては、こ
れも前記したアルキル基に置換してもよいアリール基と
同じものを挙げることができる。さらに、「アラルキル
オキシ基」としては、ベンジルオキシ、フェネチルオキ
シ基等の炭素数７〜２０個の基を挙げることができる。
したアルキル基に置換してもよいアルコキシル基と同じ
ものを挙げることができ、「アリール基」としては、こ
れも前記したアルキル基に置換してもよいアリール基と
同じものを挙げることができる。さらに、「アラルキル
オキシ基」としては、ベンジルオキシ、フェネチルオキ
シ基等の炭素数７〜２０個の基を挙げることができる。
【００１９】前記一般式（ ＩＩ ）において、Ａｒ2が
前記式（Ｃ）で表わされる基である場合、Ｙが酸素原子
であり、Ｒ13及びＲ14が一体となって３〜７員環を形成
する基であることが好ましい。より好ましくは、Ｚが
前記式（Ｃ）で表わされる基である場合、Ｙが酸素原子
であり、Ｒ13及びＲ14が一体となって３〜７員環を形成
する基であることが好ましい。より好ましくは、Ｚが
【化１５】 で表わされる基である場合である。
【００２０】また、前記一般式（ ＩＩ ）において、Ａ
ｒ2が前記式（Ｃ）で表わされる基である場合、ＹがＮ
−Ｒ10であり、Ｚが−ＯＲ11であり、Ｒ10とＲ11とが一
体となって３〜７員環を形成するものも好ましい。より
好ましくは、Ｒ10とＲ11とが一体となり
ｒ2が前記式（Ｃ）で表わされる基である場合、ＹがＮ
−Ｒ10であり、Ｚが−ＯＲ11であり、Ｒ10とＲ11とが一
体となって３〜７員環を形成するものも好ましい。より
好ましくは、Ｒ10とＲ11とが一体となり
【化１６】 で表わされる基である場合である。
【００２１】化学発光基質の使用量は、測定の際、測定
溶液に溶解する範囲で使用することが可能であるが、
０．２〜０．８ｍｇ／ｍｌの範囲であることが好まし
い。
溶液に溶解する範囲で使用することが可能であるが、
０．２〜０．８ｍｇ／ｍｌの範囲であることが好まし
い。
【００２２】本発明の化学発光増強剤としては、ＴＢ
Ｑ、ポリビニルベンジルトリメチルアンモニウムクロラ
イド、ポリビニルベンジルベンジルジメチルアンモニウ
ムクロライド、ベンジルジメチルセチルアンモニウムク
ロライド、ポリメタクリルアミドプロピレンメチルアン
モニウムクロライド、ポリビニルピロリドン、１，５−
ジメチル−１，５−ジアゾ−ウンデカメチレンポリメト
ブロマイド、ポリメチレンイミン、ポリ−Ｌ−リジン、
ポリジアリルジメチルアンモニウムクロライド等が挙げ
られるが、この中でも極めて高い発光増強効果があるＴ
ＢＱを用いることが好ましい。ＴＢＱは、１，２−ジオ
キセタン化合物の化学発光増強剤として古くから知られ
ている化合物である。
Ｑ、ポリビニルベンジルトリメチルアンモニウムクロラ
イド、ポリビニルベンジルベンジルジメチルアンモニウ
ムクロライド、ベンジルジメチルセチルアンモニウムク
ロライド、ポリメタクリルアミドプロピレンメチルアン
モニウムクロライド、ポリビニルピロリドン、１，５−
ジメチル−１，５−ジアゾ−ウンデカメチレンポリメト
ブロマイド、ポリメチレンイミン、ポリ−Ｌ−リジン、
ポリジアリルジメチルアンモニウムクロライド等が挙げ
られるが、この中でも極めて高い発光増強効果があるＴ
ＢＱを用いることが好ましい。ＴＢＱは、１，２−ジオ
キセタン化合物の化学発光増強剤として古くから知られ
ている化合物である。
【００２３】化学発光増強剤の使用量は、測定の際、測
定溶液に溶解する範囲で使用することが可能であるが、
０．４〜１．６ｍｇ／ｍｌの範囲であることが好まし
い。
定溶液に溶解する範囲で使用することが可能であるが、
０．４〜１．６ｍｇ／ｍｌの範囲であることが好まし
い。
【００２４】また、酵素としては酸ホスファターゼ、ア
ルカリホスファターゼ、ガラクトシダーゼ等を用いるこ
とができる。アルカリホスファターゼは、動物又は植物
から分離精製することにより入手することもでき、市販
品を購入してもよい。
ルカリホスファターゼ、ガラクトシダーゼ等を用いるこ
とができる。アルカリホスファターゼは、動物又は植物
から分離精製することにより入手することもでき、市販
品を購入してもよい。
【００２５】酵素の測定は、酵素が遊離の状態であって
もよく、抗原、抗体、ハプテン等と結合した状態であっ
てもよい。免疫反応に基づいて行う場合には、通常、抗
原、抗体、ハプテン等と結合させ複合体とし、測定対象
物と該複合体とが免疫反応に基づいて間接的に結合した
状態の酵素を測定することにより、測定対象物の濃度を
算出することができる。
もよく、抗原、抗体、ハプテン等と結合した状態であっ
てもよい。免疫反応に基づいて行う場合には、通常、抗
原、抗体、ハプテン等と結合させ複合体とし、測定対象
物と該複合体とが免疫反応に基づいて間接的に結合した
状態の酵素を測定することにより、測定対象物の濃度を
算出することができる。
【００２６】本発明の化学発光測定は、発光量調節剤の
存在下に測定することを必須の要件とするものである。
発光量調節剤を存在させることにより、化学発光増強剤
による発光の増強効率が酵素の濃度に関わらずほぼ一定
となり、発光量との関係において直線性を与えることが
できる。本発明における発光量調節剤は、化学発光増強
剤のみを用いた発光量と比較した場合、発光量を抑えて
直線比例性を高めるものであり、発光量をさらに増大さ
せるものではない。
存在下に測定することを必須の要件とするものである。
発光量調節剤を存在させることにより、化学発光増強剤
による発光の増強効率が酵素の濃度に関わらずほぼ一定
となり、発光量との関係において直線性を与えることが
できる。本発明における発光量調節剤は、化学発光増強
剤のみを用いた発光量と比較した場合、発光量を抑えて
直線比例性を高めるものであり、発光量をさらに増大さ
せるものではない。
【００２７】本発明は、化学発光を用いた測定であれば
通常行われているものに応用することができ、特に酵素
免疫測定に有効に用いることができる。その場合には、
検体として、血液、血漿、血清、尿、組織液等の測定対
象物を含む可能性の疑われるものを用いることができ
る。
通常行われているものに応用することができ、特に酵素
免疫測定に有効に用いることができる。その場合には、
検体として、血液、血漿、血清、尿、組織液等の測定対
象物を含む可能性の疑われるものを用いることができ
る。
【００２８】酵素免疫測定による測定対象物としては、
前記検体に含まれるホルモン、酵素、蛋白質、サイトカ
イン、細菌、ウィルス等の抗原又はこれらの抗原に対す
る抗体を挙げることができる。
前記検体に含まれるホルモン、酵素、蛋白質、サイトカ
イン、細菌、ウィルス等の抗原又はこれらの抗原に対す
る抗体を挙げることができる。
【００２９】また、酵素免疫測定に抗体を用いる場合、
抗体はポリクローナル抗体でもモノクローナル抗体でも
よいが、特異性の観点からモノクローナル抗体であるこ
とが好ましい。モノクローナル抗体はケーラーとミルシ
ュタインの常法（Nature,256, 495(1975)）に従って調
製することができる。調製した抗体は公知の方法で精製
すればよく、抗体を使用する際には、精製抗体のままで
も抗体フラグメントとしても使用することができる。
抗体はポリクローナル抗体でもモノクローナル抗体でも
よいが、特異性の観点からモノクローナル抗体であるこ
とが好ましい。モノクローナル抗体はケーラーとミルシ
ュタインの常法（Nature,256, 495(1975)）に従って調
製することができる。調製した抗体は公知の方法で精製
すればよく、抗体を使用する際には、精製抗体のままで
も抗体フラグメントとしても使用することができる。
【００３０】
【実施例】以下、参考例及び実施例により、本発明をさ
らに説明する。
らに説明する。
【００３１】（参考例１）抗原としてα−フェトプロテ
イン（ＡＦＰ）、固相としてモノクローナル抗ＡＦＰ抗
体結合磁性粒子、標識抗体としてアルカリホスファター
ゼ（ＡＬＰ）結合モノクローナル抗ＡＦＰ抗体を用いた
ＡＦＰ測定系（２ステップサンドイッチ法）において、
該測定系に用いる基質液として、化学発光基質としてＡ
ＭＰＰＤを０．２ｍｇ／ｍｌ、化学発光増強剤としてポ
リビニルベンジルトリブチルアンモニウムクロライド
（ＴＢＱ）を０．４ｍｇ／ｍｌ、０．１Ｍジエタノール
アミン（ＤＥＡ）、１ｍＭ塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ
2）、０．０５％アジ化ナトリウム（ＮａＮ3）から成る
水溶液（ｐＨ＝１０．０）を調製した。次に、０、１
０、１００、８００、２０００ｎｇ／ｍｌのＡＦＰを含
むサンプルをＢＳＡ溶液で１０倍希釈した。この溶液各
２０μｌをそれぞれ０．０１５％抗ＡＦＰ抗体結合磁性
粒子２５０μｌ中に添加、混合後、反応容器中３７℃で
１０分間反応させた。この後、この反応容器に磁石を接
して粒子を集磁させ上清を除き洗浄を行った。次に０．
１μｇ／ｍｌ ＡＬＰ結合抗ＡＦＰ抗体の溶液を２５０
μｌ添加、混合し、３７℃で１０分間反応させた。反応
後この反応容器に磁石を接して粒子を集磁させ上清を除
き洗浄を行った。この粒子に基質液を２００μｌ添加
し、混合した。３７℃で５分間反応させた後、フォトン
カウンターで発光量を測定した。その結果を図１に示
す。
イン（ＡＦＰ）、固相としてモノクローナル抗ＡＦＰ抗
体結合磁性粒子、標識抗体としてアルカリホスファター
ゼ（ＡＬＰ）結合モノクローナル抗ＡＦＰ抗体を用いた
ＡＦＰ測定系（２ステップサンドイッチ法）において、
該測定系に用いる基質液として、化学発光基質としてＡ
ＭＰＰＤを０．２ｍｇ／ｍｌ、化学発光増強剤としてポ
リビニルベンジルトリブチルアンモニウムクロライド
（ＴＢＱ）を０．４ｍｇ／ｍｌ、０．１Ｍジエタノール
アミン（ＤＥＡ）、１ｍＭ塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ
2）、０．０５％アジ化ナトリウム（ＮａＮ3）から成る
水溶液（ｐＨ＝１０．０）を調製した。次に、０、１
０、１００、８００、２０００ｎｇ／ｍｌのＡＦＰを含
むサンプルをＢＳＡ溶液で１０倍希釈した。この溶液各
２０μｌをそれぞれ０．０１５％抗ＡＦＰ抗体結合磁性
粒子２５０μｌ中に添加、混合後、反応容器中３７℃で
１０分間反応させた。この後、この反応容器に磁石を接
して粒子を集磁させ上清を除き洗浄を行った。次に０．
１μｇ／ｍｌ ＡＬＰ結合抗ＡＦＰ抗体の溶液を２５０
μｌ添加、混合し、３７℃で１０分間反応させた。反応
後この反応容器に磁石を接して粒子を集磁させ上清を除
き洗浄を行った。この粒子に基質液を２００μｌ添加
し、混合した。３７℃で５分間反応させた後、フォトン
カウンターで発光量を測定した。その結果を図１に示
す。
【００３２】（実施例１）参考例１と同じ測定系におい
て、まず、基質液として、化学発光基質としてＡＭＰＰ
Ｄを０．２ｍｇ／ｍｌ、化学発光増強剤としてポリビニ
ルベンジルトリブチルアンモニウムクロライド（ＴＢ
Ｑ）を０．４ｍｇ／ｍｌ、０．１Ｍジエタノールアミン
（ＤＥＡ）、１ｍＭ塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ2）、
０．０５％アジ化ナトリウム（ＮａＮ3）と、さらに発
光量調節剤としてミリスチルトリメチルアンモニウムブ
ロマイド（ＭＴＡＢ）を０．０８ｍｇ／ｍｌ及び０．１
６ｍｇ／ｍｌの濃度で添加した水溶液（ｐＨ＝１０．
０）をそれぞれ調製した。次に、参考例１と同様に、
０、１０、１００、８００、２０００ｎｇ／ｍｌのＡＦ
Ｐを含むサンプルをＢＳＡ溶液で１０倍希釈した。この
溶液各２０μｌをそれぞれ０．０１５％抗ＡＦＰ抗体結
合磁性粒子２５０μｌ中に添加、混合後、反応容器中３
７℃で１０分間反応させた。この後、この反応容器に磁
石を接して粒子を集磁させ上清を除き洗浄を行った。次
に０．１μｇ／ｍｌ ＡＬＰ結合抗ＡＦＰ抗体の溶液を
２５０μｌ添加、混合し、３７℃で１０分間反応させ
た。反応後この反応容器に磁石を接して粒子を集磁させ
上清を除き洗浄を行った。この粒子に基質液を２００μ
ｌ添加し、混合した。３７℃で５分間反応させた後、フ
ォトンカウンターで発光量を測定した。その結果を図２
に示す。また、標準曲線の傾きを図３に示す。
て、まず、基質液として、化学発光基質としてＡＭＰＰ
Ｄを０．２ｍｇ／ｍｌ、化学発光増強剤としてポリビニ
ルベンジルトリブチルアンモニウムクロライド（ＴＢ
Ｑ）を０．４ｍｇ／ｍｌ、０．１Ｍジエタノールアミン
（ＤＥＡ）、１ｍＭ塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ2）、
０．０５％アジ化ナトリウム（ＮａＮ3）と、さらに発
光量調節剤としてミリスチルトリメチルアンモニウムブ
ロマイド（ＭＴＡＢ）を０．０８ｍｇ／ｍｌ及び０．１
６ｍｇ／ｍｌの濃度で添加した水溶液（ｐＨ＝１０．
０）をそれぞれ調製した。次に、参考例１と同様に、
０、１０、１００、８００、２０００ｎｇ／ｍｌのＡＦ
Ｐを含むサンプルをＢＳＡ溶液で１０倍希釈した。この
溶液各２０μｌをそれぞれ０．０１５％抗ＡＦＰ抗体結
合磁性粒子２５０μｌ中に添加、混合後、反応容器中３
７℃で１０分間反応させた。この後、この反応容器に磁
石を接して粒子を集磁させ上清を除き洗浄を行った。次
に０．１μｇ／ｍｌ ＡＬＰ結合抗ＡＦＰ抗体の溶液を
２５０μｌ添加、混合し、３７℃で１０分間反応させ
た。反応後この反応容器に磁石を接して粒子を集磁させ
上清を除き洗浄を行った。この粒子に基質液を２００μ
ｌ添加し、混合した。３７℃で５分間反応させた後、フ
ォトンカウンターで発光量を測定した。その結果を図２
に示す。また、標準曲線の傾きを図３に示す。
【００３３】（実施例２）発光量調節剤として、ミリス
チルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＭＴＡＢ）の
代わりに、ラウリルトリメチルアンモニウムブロマイド
（ＤＴＡＢ）を０．０１ｍｇ／ｍｌの濃度で添加した基
質液を用いて実施例１と同一の操作によりＡＦＰを測定
した。その結果を図４に示す。
チルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＭＴＡＢ）の
代わりに、ラウリルトリメチルアンモニウムブロマイド
（ＤＴＡＢ）を０．０１ｍｇ／ｍｌの濃度で添加した基
質液を用いて実施例１と同一の操作によりＡＦＰを測定
した。その結果を図４に示す。
【００３４】（実施例３）発光量調節剤として、ミリス
チルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＭＴＡＢ）の
代わりに、セチルトリメチルアンモニウムブロマイド
（ＣＴＡＢ）を０．０４ｍｇ／ｍｌの濃度で添加した基
質液を用いて実施例１と同一の操作によりＡＦＰを測定
した。その結果を図５に示す。
チルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＭＴＡＢ）の
代わりに、セチルトリメチルアンモニウムブロマイド
（ＣＴＡＢ）を０．０４ｍｇ／ｍｌの濃度で添加した基
質液を用いて実施例１と同一の操作によりＡＦＰを測定
した。その結果を図５に示す。
【００３５】（実施例４）発光量調節剤として、ミリス
チルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＭＴＡＢ）の
代わりに、ステアリルトリメチルアンモニウムブロマイ
ド（ＳＴＡＢ）を０．０４ｍｇ／ｍｌの濃度で添加した
基質液を用いて実施例１と同一の操作によりＡＦＰを測
定した。その結果を図６に示す。
チルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＭＴＡＢ）の
代わりに、ステアリルトリメチルアンモニウムブロマイ
ド（ＳＴＡＢ）を０．０４ｍｇ／ｍｌの濃度で添加した
基質液を用いて実施例１と同一の操作によりＡＦＰを測
定した。その結果を図６に示す。
【００３６】（実施例５）発光量調節剤として、ミリス
チルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＭＴＡＢ）の
代わりに、ミリスチルトリメチルアンモニウムクロライ
ド（ＭＴＡＣ）を０．０８ｍｇ／ｍｌの濃度で添加した
基質液を用いて実施例１と同一の操作によりＡＦＰを測
定した。その結果を図７に示す。
チルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＭＴＡＢ）の
代わりに、ミリスチルトリメチルアンモニウムクロライ
ド（ＭＴＡＣ）を０．０８ｍｇ／ｍｌの濃度で添加した
基質液を用いて実施例１と同一の操作によりＡＦＰを測
定した。その結果を図７に示す。
【００３７】（実施例６）発光量調節剤として、ミリス
チルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＭＴＡＢ）の
代わりに、ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウム
クロライド（ＢＤＭＡＣ）を０．０８ｍｇ／ｍｌの濃度
で添加した基質液を用いて実施例１と同一の操作により
ＡＦＰを測定した。その結果を図８に示す。
チルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＭＴＡＢ）の
代わりに、ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウム
クロライド（ＢＤＭＡＣ）を０．０８ｍｇ／ｍｌの濃度
で添加した基質液を用いて実施例１と同一の操作により
ＡＦＰを測定した。その結果を図８に示す。
【００３８】（実施例７）発光量調節剤として、ミリス
チルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＭＴＡＢ）を
０．０４ｍｇ／ｍｌの濃度で添加する他に、ラウリルト
リメチルアンモニウムブロマイド（ＤＴＡＢ）を０．０
４ｍｇ／ｍｌの濃度で添加した基質液を用いて実施例１
と同一の操作によりＡＦＰを測定した。その結果を図９
に示す。
チルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＭＴＡＢ）を
０．０４ｍｇ／ｍｌの濃度で添加する他に、ラウリルト
リメチルアンモニウムブロマイド（ＤＴＡＢ）を０．０
４ｍｇ／ｍｌの濃度で添加した基質液を用いて実施例１
と同一の操作によりＡＦＰを測定した。その結果を図９
に示す。
【００３９】（実施例８）発光量調節剤として、ミリス
チルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＭＴＡＢ）を
０．０４ｍｇ／ｍｌの濃度で添加する他に、セチルトリ
メチルアンモニウムブロマイド（ＣＴＡＢ）を０．０４
ｍｇ／ｍｌの濃度で添加した基質液を用いて実施例１と
同一の操作によりＡＦＰを測定した。その結果を図１０
に示す。
チルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＭＴＡＢ）を
０．０４ｍｇ／ｍｌの濃度で添加する他に、セチルトリ
メチルアンモニウムブロマイド（ＣＴＡＢ）を０．０４
ｍｇ／ｍｌの濃度で添加した基質液を用いて実施例１と
同一の操作によりＡＦＰを測定した。その結果を図１０
に示す。
【００４０】（実施例９）発光量調節剤として、ミリス
チルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＭＴＡＢ）を
０．０４ｍｇ／ｍｌの濃度で添加する他に、ベンジルジ
メチルテトラデシルアンモニウムクロライド（ＢＤＭＡ
Ｃ）を０．０４ｍｇ／ｍｌの濃度で添加した基質液を用
いて実施例１と同一の操作によりＡＦＰを測定した。そ
の結果を図１１に示す。
チルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＭＴＡＢ）を
０．０４ｍｇ／ｍｌの濃度で添加する他に、ベンジルジ
メチルテトラデシルアンモニウムクロライド（ＢＤＭＡ
Ｃ）を０．０４ｍｇ／ｍｌの濃度で添加した基質液を用
いて実施例１と同一の操作によりＡＦＰを測定した。そ
の結果を図１１に示す。
【００４１】
【発明の効果】本発明によれば、化学発光増強剤として
ポリビニルベンジルトリブチルアンモニウムクロライド
を用いる化学発光測定方法において、効率的な測定がで
き、従来よりも安定した測定が可能となる。
ポリビニルベンジルトリブチルアンモニウムクロライド
を用いる化学発光測定方法において、効率的な測定がで
き、従来よりも安定した測定が可能となる。
【図１】 発光量調節剤を含有しない測定系における標
準曲線を示す図である。
準曲線を示す図である。
【図２】 発光量調節剤としてＭＴＡＢを含有する測定
系における標準曲線を示す図である。
系における標準曲線を示す図である。
【図３】 発光量調節剤を含有しない測定系と発光量調
節剤としてＭＴＡＢを含有する測定系の標準曲線の傾き
を表す図である。
節剤としてＭＴＡＢを含有する測定系の標準曲線の傾き
を表す図である。
【図４】 発光量調節剤としてＤＴＡＢを含有する測定
系における標準曲線を示す図である。
系における標準曲線を示す図である。
【図５】 発光量調節剤としてＣＴＡＢを含有する測定
系における標準曲線を示す図である。
系における標準曲線を示す図である。
【図６】 発光量調節剤としてＳＴＡＢを含有する測定
系における標準曲線を示す図である。
系における標準曲線を示す図である。
【図７】 発光量調節剤としてＭＴＡＣを含有する測定
系における標準曲線を示す図である。
系における標準曲線を示す図である。
【図８】 発光量調節剤としてＢＤＭＡＣ含有する測定
系における標準曲線を示す図である。
系における標準曲線を示す図である。
【図９】 発光量調節剤としてＭＴＡＢとＤＴＡＢを含
有する測定系における標準曲線を示す図である。
有する測定系における標準曲線を示す図である。
【図１０】 発光量調節剤としてＭＴＡＢとＣＴＡＢを
含有する測定系における標準曲線を示す図である。
含有する測定系における標準曲線を示す図である。
【図１１】 発光量調節剤としてＭＴＡＢとＢＤＭＡＣ
含有する測定系における標準曲線を示す図である。
含有する測定系における標準曲線を示す図である。
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/535 Ｇ０１Ｎ 33/535
Claims (17)
- 【請求項１】 化学発光増強剤、酵素及び化学発光基質
とを反応させる化学発光測定方法において、発光量調節
剤の存在下に行うことを特徴とする該化学発光測定方
法。 - 【請求項２】 発光量調節剤が、ミリスチルトリメチル
アンモニウムブロマイド、セチルトリメチルアンモニウ
ムブロマイド、ラウリルトリメチルアンモニウムブロマ
イド、ステアリルトリメチルアンモニウムブロマイド、
ミリスチルトリメチルアンモニウムクロライド及びベン
ジルジメチルテトラデシルアンモニウムクロライドから
なる群から選ばれる１種又は２種以上の化合物であるこ
とを特徴とする請求項１記載の化学発光測定方法。 - 【請求項３】 発光量調節剤が、ミリスチルトリメチル
アンモニウムブロマイドである請求項２記載の化学発光
測定方法。 - 【請求項４】 化学発光基質の濃度が０．２〜０．８ｍ
ｇ／ｍｌ、化学発光増強剤の濃度が０．４〜１．６ｍｇ
／ｍｌであり、発光量調節剤の使用量が、前記化学発光
増強剤の使用重量に対して１／４０〜等量である請求項
１乃至３記載の化学発光測定方法。 - 【請求項５】 発光量調節剤の使用量が、前記化学発光
増強剤の使用重量に対して１／５〜１／２量である請求
項４記載の化学発光測定方法。 - 【請求項６】 化学発光基質が、一般式 【化１】 で表わされる１，２−ジオキセタン誘導体である請求項
１乃至５記載の化学発光測定方法（式中、Ｒ1は水素原
子又はハロゲン原子、Ｒ2は低級アルキル基、Ａｒ 1はフ
ェニレン基又はナフチレン基、Ｒ3は−ＯＰＯ3 2-・２Ｍ
+で表わされる基（Ｍは、ナトリウム原子、カリウム原
子又はＮＨ4である。）又はガラクトシル基であ
る。）。 - 【請求項７】 Ｒ1は水素原子、Ａｒ1は３−フェニレン
基である請求項６記載の化学発光測定方法。 - 【請求項８】 Ｒ2はメチル基、Ｒ3は−ＯＰＯ3 2-・２
Ｎａ+である請求項７記載の化学発光測定方法。 - 【請求項９】 化学発光基質が、一般式 【化２】 で表わされる１，２−ジオキセタン誘導体である請求項
１乃至５記載の化学発光測定方法（式中、Ｒ４、Ｒ５及
びＲ６は低級アルキル基であり、Ａｒ2は式（Ａ） 【化３】 （式中、Ｒ7は−ＯＰＯ3 2-・２Ｍ+で表わされる基（Ｍ
は、ナトリウム原子、カリウム原子又はＮＨ4であ
る。）又はガラクトシル基であり、Ｒ8は水素原子、ア
ルキル基、アリール基、ヒドロキシル基、アルコキシル
基、アリールオキシ基又はアラルキルオキシ基であり、
Ｖは酸素原子又は硫黄原子である。）で表わされる基、
式（Ｂ） 【化４】 （式中、Ｒ7は前式（Ａ）のＲ7と同じであり、Ｗは窒素
原子又はＣ−Ｒ9（Ｒ9は、水素原子、アルキル基、アリ
ール基、アルコキシル基又はアラルキルオキシ基であ
る。）で表わされる基であり、Ｘは酸素原子又は硫黄原
子である。）で表わされる基、又は式（Ｃ） 【化５】 （式中、Ｒ7は前式（Ａ）のＲ7と同じであり、Ｙは酸素
原子、硫黄原子又はＮ−Ｒ10であり、Ｚは水素原子、ア
ルキル基、アリール基、−ＯＲ11、−ＳＲ12又は式 【化６】 で表わされる基である。ここで、Ｒ10は水素原子、アル
キル基、アリール基、ヒドロキシル基又はアルコキシル
基であり、Ｒ11、Ｒ12、Ｒ13及びＲ14は水素原子、アル
キル基又はアリール基である。また、Ｒ10とＲ11、Ｒ10
とＲ12、Ｒ10とＲ 13及びＲ13とＲ14は一体となって環を
形成することもでき、この環には２つ以上のヘテロ環を
含んでいてもよい。）で表わされる基である。）。 - 【請求項１０】 前式（Ｃ）のＹは酸素原子であり、Ｚ
のＲ13とＲ14とが一体となって３〜７員環を形成するも
のである請求項９記載の化学発光測定方法。 - 【請求項１１】 前式（Ｃ）のＺが、 【化７】 で表わされる基である請求項１０記載の化学発光測定方
法。 - 【請求項１２】 前式（Ｃ）のＹはＮ−Ｒ10、Ｚは−Ｏ
Ｒ11であり、Ｒ10とＲ11とが一体となって３〜７員環を
形成するものである請求項９記載の化学発光測定方法。 - 【請求項１３】 前式（Ｃ）の、Ｒ10とＲ11とが一体と
なって形成する環が、 【化８】 で表わされる基である請求項１２記載の化学発光測定方
法。 - 【請求項１４】 化学発光増強剤が、ポリビニルベンジ
ルトリブチルアンモニウムクロライド、ポリビニルベン
ジルトリメチルアンモニウムクロライド、ポリビニルベ
ンジルベンジルジメチルアンモニウムクロライド、ベン
ジルジメチルセチルアンモニウムクロライド、ポリメタ
クリルアミドプロピレンメチルアンモニウムクロライ
ド、ポリビニルピロリドン、１，５−ジメチル−１，５
−ジアゾ−ウンデカメチレンポリメトブロマイド、ポリ
メチレンイミン、ポリ−Ｌ−リジン又はポリジアリルジ
メチルアンモニウムクロライドである請求項１乃至１３
記載の化学発光測定方法。 - 【請求項１５】 化学発光増強剤が、ポリビニルベンジ
ルトリブチルアンモニウムクロライドである請求項１４
記載の化学発光測定方法。 - 【請求項１６】 酵素が、酸ホスファターゼ、アルカリ
ホスファターゼ又はガラクトシダーゼである請求項１乃
至１５記載の化学発光測定方法。 - 【請求項１７】 請求項１乃至１６記載の化学測定方法
を用いる酵素免疫測定方法。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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