CN101128210B - 熟地黄和五加皮的草药混合物提取物以及用于预防和治疗骨质疏松症的包含其的组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及熟地黄和五加皮的草药混合物提取物和含有所述草药混合物提取物的用于预防和治疗骨质疏松症的组合物。本发明的草药混合物提取物增加成骨细胞中护骨蛋白(OPG)的表达,并且有效抑制破骨细胞的增殖和活化,以便该草药混合物提取物可以有效地用于骨质疏松症的预防和治疗。
Description
技术领域
本发明涉及熟地黄(Rehmanniae Radix Preparata)和五加皮(Acanthopanacis Cortex)的草药混合物提取物和含有所述草药混合物提取物作为活性成分的用于预防和治疗骨质疏松症的组合物。
背景技术
骨是连接至肌肉的钙化结缔组织,其具有硬和厚的钙化表面,实现通过保持平衡而支撑身体的功能,以及保护器官。内骨髓是在钙的新陈代谢中扮演关键角色的骨髓组织。骨是由有机物质例如胶原、骨钙蛋白和骨粘连蛋白;无机物质例如钙、磷和氟和水组成的。骨形成和骨吸收是体内必要的日常过程。骨形成是由低剂量的甲状旁腺激素、雄激素、雌激素、氟、磷等刺激的,而骨吸收是由身体减压、失重、高剂量的甲状旁腺素和肾上腺皮质类固醇等刺激的。因此,骨的新陈代谢是由骨形成和骨吸收之间的平衡调节的。
骨质疏松症是由骨形成和骨吸收之间的不平衡引起的。精确地,当骨吸收超过骨形成时,骨质疏松症发展。伴随骨质疏松症,钙化的骨组织密度减小,因而骨的紧密物质逐渐损失,导致了骨髓腔的扩展。随着表示骨损失正在增加的症状的发展,甚至最小的冲击也常常产生骨折。骨组织是动态组织,该组织设计用于重复完成通过成骨细胞的骨形成,以及通过破骨细胞的破坏和骨吸收。
骨吸收通过破骨细胞进行,并且NF-B受体的受体活化剂(RANKL)对于破骨细胞的增殖和活化是至关重要的。RANKL存在于成骨细胞和间充质细胞中,并且结合至NF-B受体的受体活化剂(RANK)[Hofbauer L.C.,Khosla S.,Dunstan C.R.,Lacey D.L.,Boyle W.J.,Riggs B.L., The roles ofosteoprotegerin and osteoprotegerin ligand in the paracrine regulation of boneresorpti
骨质疏松症分为原发性和继发性类型;原发性骨质疏松症举例说明为老年性骨质疏松症和绝经期后骨质疏松症,而继发性骨质疏松症可以发展为甲状腺功能亢进、甲状旁腺功能亢进、肾上腺皮质功能亢进、妊娠、长期固定(例如,石膏模型固定)、营养不良、药物、癌症或其它慢性疾病的并发症。
还没有公开主要骨质疏松症的起因,但是似乎涉及多种因素。据推测,骨质疏松症是由于衰老、钙缺乏、过多的甲状旁腺激素、降钙素缺乏、活性维生素D缺乏、雌激素缺乏、不足的锻炼等骨的新陈代谢的不平衡而发展的。影响钙的新陈代谢的因素为甲状旁腺激素(PTH)、降钙素(CT)和1,25-(OH)2D3等。涉及钙新陈代谢的甲状旁腺激素与甲状腺的滤泡旁细胞-C细胞中分泌的降钙素产生相反的效果。作为多肽,具有3,500~4,000的分子量的降钙素介导骨中的钙盐沉积。即,降钙素减少了血钙和镁,以及尿中的磷酸盐和羟脯氨酸。甲状旁腺激素(PTH)也是具有8447的分子量的多肽。甲状旁腺激素活化破骨细胞,导致骨吸收和小肠黏膜中维生素D3活性的增加。因而,PTH增加血钙和镁,和尿中的羟脯氨酸和磷酸盐(PO4 3-)。在卵巢中分泌的类固醇雌二醇活化骨中的成骨细胞,由此抑制骨吸收。
绝经以后的女性表现更低水平的雌激素,并且因此减少了肾中的血降钙素以及1,25-(OH)2D3合成的水平,同时提高了PTH的水平。因此,促进了白介素6(IL-6)和前列腺素的产生,导致了小肠中的钙吸收的减少和由于活性破骨细胞介导的骨吸收的骨损失的增加。结果,产生了骨质疏松症。通常,当骨吸收超过骨形成时,可以观察到关节功能异常、渐进椎骨畸形、椎骨和其它区域中的微小骨折、由于疼痛的降低的活动性(特别是腰背(lumbo-dorsal)疼痛)和由于脊柱后凸而收缩的肾。
骨质疏松症的特征不仅在于其症状,还在于导致骨折的在数量上的骨减少,所述骨折包括股骨骨折或椎骨骨折,并且已经成为了一个长期限制公众活动性的公众健康问题。因此,老年人死亡原因的15%归因于骨质疏松症。骨密度是由遗传因素、营养、激素改变、锻炼和习惯影响的。衰老、不足的锻炼、低体重、吸烟、低钙饮食、绝经和卵巢切除被认为是骨质疏松症的主要原因。
同时,已知的是黑人表现比白人更低的骨吸收水平,意味着黑人具有更大的骨质量。发现峰值骨质量在年龄14至18之间,然后每年减少1%。特别地,在女性中,从30岁骨就不断减少,并且在绝经以后通过激素变化而迅速减少。
骨质疏松症在老年人,特别是在后绝经的女性中或多或少是不可避免的,因此随着发达国家中老龄人口的增长,骨质疏松症和它的治疗药剂已经处于了我们关注的中心。
骨疾病的治疗在整个世界形成了约1300亿美元的市场,该市场据推测将进一步扩大。因此,许多的研究组和药物公司已经投资开发用于骨疾病的治疗药剂和用于骨吸收的抑制剂。
迄今为止,骨质疏松症相关的研究集中在骨中的无机物质上,具体而言在钙和磷的新陈代谢上。然而,至今还没有公开具体的致病机理。
现今使用的用于骨质疏松症的治疗药剂举例说明为双膦酸盐产品(阿仑膦酸盐(alendronate)、依替膦酸盐(etidronate))、激素产物(雷洛昔芬(raloxifene))、维生素D产品、降钙素产品和钙产品等。然而,双膦酸盐产品具有低吸收速率、麻烦的给药方法和诱导食道炎的问题。激素产品需要终身给药,具有带有副作用例如乳腺癌、子宫癌、胆石病和血栓形成等可能性。维生素D产品昂贵但不太有效。降钙素产品同样具有高成本和难以给药的问题。钙产品具有较少副作用,但是限于预防而非治疗。
短期给药对于骨质疏松症的治疗并非非常有效,因此药物的长期给药是不可避免的。因此,需要一种用于长期给药的具有较少副作用但更多药效的新颖的药剂。
因而,本发明人研究了熟地黄和五加皮的各种生理活性。并且本发明人通过确定以下内容完成了本发明:熟地黄和五加皮的草药混合物提取物没有毒性;增强了作为抑制破骨细胞的增殖与活化的蛋白质的护骨蛋白的表达;以及抑制了破骨细胞的增殖,使得该混合物可以有效地用于骨质疏松症的预防与治疗。
公开内容
技术问题
本发明的一个目的是提供熟地黄和五加皮的草药混合物提取物,所述草药混合物提取物具有促进成骨细胞中护骨蛋白(OPG)表达以及抑制破骨细胞增殖的活性。
本发明的另一个目的是提供用于预防和治疗骨质疏松症的组合物,所述组合物包含所述草药混合物提取物作为有效组分。
技术解决方案
为了实现以上目的,本发明提供了熟地黄和五加皮的草药混合物提取物,所述草药混合物提取物具有促进成骨细胞中护骨蛋白(OPG)表达以及抑制破骨细胞增殖的活性。
同样,本发明提供了用于预防和治疗骨质疏松症的包含所述草药混合物提取物作为有效组分的组合物。
附图描述
通过参考附图来最好地理解本发明的优选实施方案的应用,其中:
图1是表示由ELISA检测的OPG在用根据本发明实施方案实施例的草药混合物提取物处理的成骨细胞系MG63中表达的图,
图2是表示由根据本发明的实施方案实施例的草药混合物提取物对破骨细胞增殖的抑制的图。
最佳方式
以下详细描述本发明。
本发明提供了一种熟地黄和五加皮的草药混合物提取物,所述草药混合物提取物具有促进成骨细胞中护骨蛋白(OPG)表达以及抑制破骨细胞增殖的活性。
熟地黄是一类属于玄参科(Scrophulariaceae)的药物植物,其在汽蒸和干燥以后用作常规中药(oriental medicine)。粗熟地黄称为Rehmanniae radixcrudus Libosch,而干燥的熟地黄称为Rehmanniae Radix Libosch。特别是,在9次浸入到醇中以后经过汽蒸-干燥过程的熟地黄称为“Gujihwang”,已知其药效是最好的。它同时具有甜和苦的味道,并且具有致暖的性质,它通过该性质可以补充血液和能量(对于生命(life)和生命(vital)活性必要的一种基本物质),以致它除使头发乌黑和健康以外,还可以帮助治疗膝和下背的寒冷以及月经紊乱。熟地黄是Samultang的主要成分之一,并且将其施用而用于缓解发烧、喉干和善渴、虚弱症状。此外,在偏方(folk remedies)中已知的是,当将熟地黄与猪肉汤(pork soup)一起给药时,熟地黄在便秘上可以表现疗效。
五加皮是属于五加科(Araliaceae)的灌木,仅在北半球的亚洲远东发现。特别是,五加皮在韩国分类为受保护的野生植物,处于灭绝的边缘。五加皮分为刺五加(Acanthopanax senticosus)、五加属(Acanthopanax)和韩国五加(Acanthopanax koreanum)。已经将五加皮的根和皮用作顶级药物,因为它们迄今未显示任何毒性或副作用。五加皮的叶含有具有药用效果的chiisanoside。五加皮的根不仅含有五加皮糖苷,而且含有丁香苷和香豆素糖苷。五加皮含有作为五加皮糖苷的无梗五加苷B和D,以及增加免疫性的水溶性多糖。它的味道是苦和辣的,并且它具有致暖的性质。已知其除去肝和神经系统中的痛风,滋补身体并增长元气。其已经药用于这样的疾病诸如Oro(由五脏器官虚弱所引起的疲劳)、Chilsang(由身体虚弱所引起的男子中显示的七种典型症状)和难以移动腿。五加皮的长期给药增加能量,保护胃,使精力充沛,净化心灵,增加意志力,防止衰老,帮助具有轻松的心脏并且净化身体中的血液。所以,五加皮已经用于治疗这样的症状如脊椎疼痛、男性阳痿、阴囊湿疹、女性闭经等。
本发明的熟地黄和五加皮的草药混合物提取物是采用熟地黄和五加皮与水、C1~C4醇或水和C1~C4醇的混合物,并且更优选使用水的混合溶液来提取的。该草药混合物提取物的制备如下。
将熟地黄和五加皮用水彻底清洗并且在阴暗处干燥。将它们放入到提取容器中,向其添加溶剂,随后提取。在室温下使提取物冷却,随后用滤纸过滤。然后,通过使用真空旋转蒸发器在减压下将该提取物浓缩,随后冷冻干燥。结果,分别制备了粉末类型的熟地黄和五加皮的提取物。将熟地黄和五加皮的两个提取物混合以制备草药混合物提取物。
提取可以通过使用适当的溶剂,通过常规方法例如浸渍(maceration)、浸泡(infusion)和热提取来完成,并且特别地,在100℃热水提取4小时是优选的。
并且,对于该草药混合物提取物优选的是,熟地黄提取物和五加皮提取物以15.0∶0.5~0.15∶5.0的重量比混合,并且更优选的是以8∶1~1∶4的比率混合。最优选的是将熟地黄提取物和五加皮提取物以4∶1~1∶1的重量比混合。
本发明的草药混合物提取物增强抑制破骨细胞的增殖和活化的护骨蛋白的表达(图1)。
本发明的草药混合物提取物具有抑制破骨细胞增殖的作用(图2)。
当熟地黄提取物和五加皮的草药混合物提取物是以8∶1~1∶4的重量比,并且更优选以4∶1~1∶1的重量比制备时,可以观察到对成骨细胞中护骨蛋白表达的显著促进效果,和对破骨细胞增殖的抑制效果。当将两种组分一起混合时,以上影响比独自使用各个提取物更大。
本发明的草药混合物提取物具有增强护骨蛋白抑制破骨细胞的增殖与活化的表达以及抑制破骨细胞增殖的活性,以致其可以有效地用作预防和治疗骨质疏松症的组合物。
将本发明的草药混合物提取物经口给药于大鼠以研究毒性。结果,它被评价为安全物质,因为它在大鼠中的估计LD50值(50%致死剂量)比1g/kg大得多。
本发明还提供了一种用于预防和治疗骨质疏松症的包含以上草药混合物提取物作为有效成分的组合物。
除草药混合物提取物以外,本发明的组合物可以另外包含一种或多种具有与本发明的提取物相同或类似功能的有效成分。
本发明的草药混合物提取物可以经口或肠胃外给药,并且可以以药物制剂的一般形式使用。
本发明的草药混合物提取物可以通过与通常使用的填料、补充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、稀释剂例如表面活性剂或赋形剂混合,以为了经口或肠胃外给药而制备。经口给药用固体制剂为片剂、丸剂、扑粉(dustingpowders)、颗粒剂和胶囊。这些固体制剂是通过混合一种或多种适宜的赋形剂例如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖、凝胶等来制备的。除简单的赋形剂以外,可以使用润滑剂,例如硬脂酸镁、滑石等。经口给药用液体制剂为混悬剂、溶液、乳剂和糖浆剂,并且除通常使用的简单稀释剂例如水和液体石蜡以外,上述制剂还可以包含各种赋形剂,例如润湿剂、甜味剂、芳香剂和防腐剂。肠胃外给药用制剂为灭菌水溶液、水溶性赋形剂、混悬剂、乳剂和栓剂。除一种或多种活性化合物以外,水溶性赋形剂和混悬剂还可以包含丙二醇、聚乙二醇、植物油例如橄榄油、可注射酯例如油酸乙酯(ethylolate)等。除一种或多种活性化合物以外,栓剂还可以包含witepsol、聚乙二醇、吐温61、可可脂、月桂油(laurin butter)、甘油明胶等。另外,可以包含钙或维生素D3以增强对骨质疏松症的预防和治疗效果。
组合物的有效剂量可以根据重量、年龄、性别、健康状况、饮食、给药频率、给药方法、排泄和疾病的严重程度来确定。组合物的剂量为每天1~1000mg/kg,并且优选每天300~700mg/kg。更优选地,所述剂量为每天150~450mg/kg。给药频率为一天1~6次。
本发明的组合物可以单独给药,或随同外科手术、激素治疗、化学疗法和生物反应调节剂一起治疗,以预防和治疗骨质疏松症。
本发明的组合物可以包含于用于缓解骨质疏松症症状的目的的健康食品中。此时,本发明的草药混合物提取物可以根据常规方法原样,或在与其它的食品或成分混合以后添加。有效成分的混合比率是由使用目的(预防、健康或治疗处理)决定的。
在可应用的食品中不存在限制,可以例举肉类、香肠类、面包、巧克力、糖果、小吃、饼干、比萨饼、ramyun、面条、包括冰激凌的奶制产品、汤、饮料、茶、饮料(drinks)、酒精饮料和维生素复合物等,并且事实上一般生产的每种健康食品全部包括在内。
类似于其它饮料,含有本发明组合物的健康饮料可以另外包括多种香料或天然糖类等。上面的天然糖类可以是单糖诸如葡萄糖和果糖,二糖诸如麦芽糖和蔗糖,多糖诸如糊精和环糊精,和糖醇诸如木糖醇、山梨糖醇和赤藻糖醇其中之一。作为甜味剂,可以使用天然甜味剂诸如奇甜蛋白和甜菊(stevia)提取物或人造增甜剂诸如糖精和阿司帕坦。天然糖类对本发明组合物的比率优选是0.01~0.04g比100ml,更优选0.02~0.03g比100ml。
除上述成分之外,本发明的组合物可以包括多种营养物、维生素类、电解质类、增香剂、着色剂、果胶酸及其盐、藻酸(arginic acid)及其盐、有机酸、保护性胶体增粘剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇类、用于加入到碳酸水的碳酸化剂(carbonators)等。本发明的组合物还可以包括天然果汁、果汁饮料和/或可加入到蔬菜饮料的果肉。全部提到的成分可以单独或一起添加。事实上那些成分的混合比无关紧要,但是通常,各自可以添加0.01~0.1重量份/100重量份的本发明组合物。
实施方式
如下列实施例所示说明本发明的实际的和目前优选的实施方案。
然而,本领域技术人员在考虑公开内容上应当理解,在本发明的实质和范围之内可以进行修改和改进。
<实施例1>草本植物提取物的制备
栽植的熟地黄和五加皮是从批发干草药店购买的。
<1-1>熟地黄提取物的制备
将熟地黄用清水洗涤并且在在阴暗处干燥。将100g的干燥的熟地黄放置在3l的提取容器中,向其中加入1l的蒸馏水,随后在100℃热水提取4小时。将该过程重复三次,并且在室温下将产生的溶液冷却,随后用滤纸过滤。在40℃,通过使用真空旋转蒸发器在减压下将该提取物浓缩。结果,获得了熟地黄提取物(收率:42%)。
<1-2>五加皮提取物的制备
将五加皮用清水洗涤并且在阴暗处干燥。将100g干燥的五加皮放置在3l的提取容器中,向其中加入1l的蒸馏水,随后在100℃热水提取4小时。将该过程重复三次,并且在室温下将产生的溶液冷却,随后用滤纸过滤。在40℃,通过使用真空旋转蒸发器在减压下将该提取物浓缩,随后冷冻干燥。结果,获得了五加皮的粉末提取物(收率:5.8%)。
<1-3>草药混合物提取物的制备
将实施例1-1中获得的0.15~15.0重量份的熟地黄提取物与实施例<1-2>中获得的0.5~5.0重量份的五加皮提取物以适当的比例混合,并且将该草药混合物提取物稀释在细胞培养基中,以用于进一步的实验。<实验例1>本发明的草药混合物提取物对成骨细胞中护骨蛋白表达的影响
进行下列实验以研究本发明的草药混合物提取物对成骨细胞中护骨蛋白表达的影响。
<1-1>成骨细胞的培养
为了评价本发明的草药混合物提取物对成骨细胞中护骨蛋白的表达的影响,从ATCC(美国典型培养物保藏中心(American Type CultureCollection),罗克维尔,美国)商购人类骨肉瘤细胞系MG-63和HOS。将所述细胞在具有95%湿度的37℃ CO2的培养箱中,在补充有10%胎牛血清(FBS)的DMEM(Dulbecco′s modified Eagle′s medium)中培养。
<1-2>对抑制破骨细胞增殖的护骨蛋白表达的测量
本发明人研究了通过实施例1中的提取物处理成骨细胞的培养物是否提高OPG的水平。
将以上实验例<1-1>中制备的MG-63细胞在96-孔板中培养直至汇合。用2ml以多种浓度含有草药混合物提取物的无血清的DMEM处理所述板,随后进一步培养16小时。获得上清液。通过ELISA测量OPG的水平。通过使用Dynatech MR-7000(Dynatech Laboratorie)在450nm测量光密度(O.D.),并且根据下面的数学公式1,通过仅用培养基处理的对照的百分数来计算分泌的OPG的量。
<数学公式1>
OPG释放的增加率(%)=(1-实验组的O.D.450/对照组的O.D.450)100
(在式中,O.D.450是指在450nm的光密度)
如表1中所示,采用3和6mg/ml的<实施例1>的熟地黄提取物的处理将抑制破骨细胞增殖的蛋白OPG的表达分别增加了200%和221%,并且采用1.25mg/ml的五加皮的处理也将OPG的表达增大至194%,表明两个单独的草药提取物剂量依赖地增加OPG表达。同时,当将草本植物提取物作为混合物使用时,OPG水平增加120~130%(表1、图1)。与加入6mg/ml的熟地黄时相比,当将分别具有3mg/ml和1.25mg/ml的熟地黄提取物和五加皮提取物混合时可以显著地增强该草药混合物提取物的OPG表达诱导效应。以上结果表明,草药混合物制备中的熟地黄提取物和五加皮提取物的混合比率对于增强OPG的表达是重要的。
【表1】
OPG分泌率(%)
由以上结果,可以确定的是,本发明的草药混合物提取物增加了抑制破骨细胞增殖的蛋白OPG的表达,并由此抑制了破骨细胞的增殖。
<实验例2>本发明的草药混合物提取物的破骨细胞增殖抑制活性
为了检测本发明的草药混合物提取物对破骨细胞的增殖和活性的影响,将破骨细胞前体细胞在磷酸钙涂敷的平板(OAAS,Oscotec Inc.)中培养,随后研究破骨细胞标记TRAP(耐酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistantacid phosphatase))的活性。
<2-1>破骨细胞前体细胞的分离和破骨细胞前体细胞分化成成熟破骨细胞
为了分离小鼠骨髓细胞,通过折裂颈部处死7-9周龄的雄性小鼠,然后在无菌条件下提取股骨和胫骨。除去软组织并切掉骨的两端。通过利用26G针,将1ml含有0.1%胶原酶(Gibco)、0.05%胰蛋白酶和0.5mMEDTA(Gibco)的酶溶液冲洗(flush)到髓腔的一端中。取出骨髓,接着搅拌30分钟。回收骨髓细胞并在补充有10%FBS的α-MEM(α-极限必需培养基)中预培养24小时。获得独立的细胞。将所述独立的细胞,破骨细胞前体细胞,接种到平板中(2×105细胞/孔),接着培养。将本发明的草药混合物提取物在8天培养期间处理含有20ng/ml巨噬细胞-集落刺激因子(M-CSF,Peprotech,美国)和30ng/ml的RANKL(Peprotech,美国)的α-MEM。在培养完成后,固定细胞并进行TRAP染色以检验破骨细胞的增殖。
<2-2>TRAP(+)多核细胞(MNCs)的形成
为了检测破骨细胞的增殖,将破骨细胞前体细胞在磷酸钙涂敷的平板中培养,然后计数TRAP(+)MNCs。
具体地,在完成细胞培养的时候,用PBS清洗贴壁细胞并用柠檬酸盐-乙酸盐-甲醛固定5分钟。将细胞在37℃的含有萘酚AS-BI磷酸盐、坚牢(fast)Garnet GBC溶液和7mM酒石酸盐缓冲液(pH 5)的乙酸盐缓冲液(pH5.0)中进一步培养一小时,接着用TRAP染色。具有超过3个核的TRAP(+)多核细胞被认为是破骨细胞。将实施例1中制备的草药混合物提取物和各个单独的提取物处理所述细胞。在培养8天以后,再次计数TRAP(+)多核细胞,并且由此根据以下数学公式2计算破骨细胞增殖抑制率。
<数学公式2>
TRAP(+)多核细胞增殖抑制率(%)=100-(实验组的TRAP(+)多核细胞的数目/对照组的TRAP(+)多核细胞的数目)×100
【表2】
破骨细胞增殖抑制率(%)
如表2和图2中所示,认为没有经提取物处理的对照组的破骨细胞增殖抑制率为0,并且基于此,比较用具有不同浓度的不同提取物处理的每个实验组的破骨细胞增殖抑制率。当独自用熟地黄提取物处理时,在0.125、0.25、0.5、1和2mg/ml的浓度的TRAP(+)多核细胞增殖抑制率分别为12.43、12.68、40.10、49.01和81.75%。同时,当独自用五加皮提取物处理时,在0.125、0.25、0.5和1mg/ml的浓度受到抑制的破骨细胞的增殖和活化分别为12.77、19.28、61.61和99.74%,表明各个草药提取物的独自处理剂量依赖地抑制TRAP(+)多核细胞的增殖。
虽然熟地黄提取物在高达0.5mg/ml的浓度,或者甚至通过增加浓度也没有表现出大于50%的抑制效果,但是熟地黄提取物与五加皮提取物的共处理甚至在低浓度下也显示了100%的抑制效果。当熟地黄提取物和五加皮提取物各自以超过0.25mg/ml混合,特别是当包含超过20重量%的熟地黄提取物和超过10重量%的五加皮提取物,更优选当包含超过50重量%的熟地黄提取物和超过25重量%的五加皮提取物时,显著抑制破骨细胞的形成。当这些提取物的含量低于以上范围时,不那么多地抑制破骨细胞的增殖。
因此,可以确定的是,本发明的草药混合物提取物比熟地黄提取物和五加皮提取物的各自独立的草药提取物更好地抑制破骨细胞的增殖和活化。
<实验例3>通过经口给药测试的大鼠中的急性毒性
进行以下实验以了解本发明的草药混合物提取物在大鼠中是否具有急性毒性。
将6-周龄的无特殊病原(SPF)的SD大鼠用于急性毒性的测试中。将本发明的草药混合物提取物悬浮在0.5%的甲基纤维素溶液中,并且以1g/kg/ml的剂量一次经口给药于每组2只大鼠。观测大鼠中的死亡、临床症状和重量变化,进行血液的血液学测试和生化测试,并且在尸体解剖期间用眼睛检查胸和腹的胃肠器官中的任何异常病征。
结果表明,本发明的草药混合物提取物在大鼠中没有导致任何特定的临床症状、重量变化或死亡。在血液的血液学测试、生化测试以及尸体解剖中没有观察到变化。
因此,将该实验中使用的草药混合物提取物评价为安全物质,因为它在大鼠中高达1g/kg的水平没有导致任何的毒性变化,并且它在小鼠中的估计LD50值比1g/kg大得多。
以下描述本发明的组合物的制备例。
<制备例1>药物制剂的制备
<1-1>散剂的制备
本发明的草药混合物提取物 2g
乳糖 1g
通过混合全部以上组分制备散剂并用它们填充气密袋。
<1-2>片剂的制备
本发明的草药混合物提取物 100mg
玉米淀粉 100mg
乳糖 100mg
硬脂酸镁 2mg
通过用制备片剂的常规方法混合全部以上组分制备片剂。
<1-3>胶囊的制备
本发明的草药混合物提取物 100mg
玉米淀粉 100mg
乳糖 100mg
硬脂酸镁 2mg
根据用于胶囊的常规方法,通过混合以上组分制备胶囊并用它们填充明胶胶囊。
<制备例2>食品的制备
含有本发明草药混合物提取物的食品制备如下。
<2-1>面粉食品的制备
通过将本发明的草药混合物提取物以0.5~5.0重量%添加到小麦粉,然后将所述面粉制成面包、蛋糕、饼干、薄脆饼干和面条而制备改善健康的面粉食品。
<2-2>乳制品的制备
将本发明的草药混合物提取物以5~10重量%添加到乳以制备改善健康乳制品诸如黄油、冰淇淋等。
<2-3>Sunsik的制备
通过常规方法将糙米、大麦、糯米和薏苡(coix)(job′s tear)胶质化,接着干燥。将干燥的混合物分散并磨碎,得到60-筛目尺寸的颗粒粉末。
将黑豆、黑芝麻和紫苏通过常规方法蒸煮并干燥。将干燥的混合物分散并磨碎,得到60-筛目尺寸的颗粒粉末。
将本发明的草药混合物提取物利用真空浓缩器在减压下真空浓缩,然后将其用热风干燥器喷雾干燥。用研磨器将干燥物质磨碎,产生60-筛目尺寸的颗粒粉末。
将制备的谷物、种子和干燥的草药混合物提取物粉末全部以下列比率混合。
谷物(糙米30重量%,薏苡15重量%,大麦20重量%),
种子(紫苏7重量%,黑豆8重量%,黑芝麻7重量%),
草药混合物提取物的干燥粉末(3重量%),
灵芝(Ganoderma lucidum)(0.5重量%),
地黄(Rehmannia glutinosa)(0.5重量%)
<制备例3>饮料的制备
<3-1>充碳酸气饮料的制备
将糖(5~10%)、柠檬酸(0.05~0.3%)、焦糖(0.005~0.02%)和维生素C(0.1~1%)混合,向其添加纯化水(79~94%)以制造糖浆。将制备的糖浆在85~98℃灭菌20~180秒,然后用冷却水以1∶4的比率混合。然后,将二氧化碳气(0.5~0.82%)给予所述混合物以制备含有本发明草药混合物提取物的充碳酸气饮料。
<3-2>保健饮料的制备
将酸性果糖(0.5%)、寡糖(2%)、糖(2%)、盐(0.5%)和水(75%)全部与本发明的草药混合物提取物均匀混合,接着灭菌。将所述混合物放在小容器诸如玻璃瓶或小瓶(pat bottle)中,产生保健饮料。
<3-3>蔬菜汁的制备
将5g本发明的草药混合物提取物添加到1,000ml的番茄或胡萝卜汁以制备保健蔬菜汁。
<3-4>果汁的制备
将1g本发明的草药混合物提取物添加到1,000ml的苹果或葡萄汁以产生保健果汁。
【工业应用性】
如上所述,本发明的熟地黄和五加皮的草药混合物提取物通过增加成骨细胞中护骨蛋白表达和抑制破骨细胞的增殖,由此具有抑制破骨细胞的增殖和活化的效果。特别是,与用各个提取物独自处理相比较,当混合物包含超过20重量%的熟地黄提取物和超过10重量%的五加皮提取物,更优选当混合物包含超过50重量%的熟地黄提取物和超过25重量%的五加皮提取物时,抑制效果显著增加。因而,由于它的协同效应,本发明的草药混合物提取物可以有效地作为药物制剂和健康食品用于骨质疏松症的预防和治疗。
本领域技术人员将理解,可以将上述说明中公开的概念和具体实施方案容易地用作修改或设计其它用于实施本发明相同用途的实施方案的基础。本领域技术人员也将理解,这样的等价实施方案不背离如后附权利要求中陈述的本发明的实质和范围。
Claims (5)
1.一种熟地黄和五加皮的草药混合物提取物作为有效成分在制备用于预防和治疗骨质疏松症的药物中的应用,其中熟地黄和五加皮以8∶1~1∶4的重量比混合,所述熟地黄提取物是利用熟地黄用水、C1~C4醇或它们的混合物提取的,并且所述五加皮提取物是利用五加皮用水、C1~C4醇或它们的混合物提取的。
2.如权利要求1中所述的草药混合物提取物作为有效成分在制备用于预防和治疗骨质疏松症的药物中的应用,其中所述熟地黄提取物和所述五加皮提取物以4∶1~1∶1的重量比混合。
3.如权利要求1所述的草药混合物提取物作为有效成分在制备用于预防和治疗骨质疏松症的健康食品中的应用。
4.熟地黄和五加皮的草药混合物提取物作为有效成分在制备成骨细胞中护骨蛋白(OPG)表达的促进剂中的用途,其中熟地黄和五加皮以8∶1~1∶4的重量比混合,所述熟地黄提取物是利用熟地黄用水、C1~C4醇或它们的混合物提取的,并且所述五加皮提取物是利用五加皮用水、C1~C4醇或它们的混合物提取的。
5.熟地黄和五加皮的草药混合物提取物作为有效成分在制备破骨细胞增殖的抑制剂中的用途,其中熟地黄和五加皮以8∶1~1∶4的重量比混合,所述熟地黄提取物是利用熟地黄用水、C1~C4醇或它们的混合物提取的,并且所述五加皮提取物是利用五加皮用水、C1~C4醇或它们的混合物提取的。
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Kwi-Ok Oh et al..Effect of Rehmannia glutinosa Libosch extracts onbonemetabolism.Clinica Chimica Acta334 1-2.2003,334(1-2),第185-195页. |
Kwi-Ok Oh et al..Effect of Rehmannia glutinosa Libosch extracts onbonemetabolism.Clinica Chimica Acta334 1-2.2003,334(1-2),第185-195页. * |
殷军.绵萆薢中抗骨质疏松活性成分的研究.中国优秀博硕士学位论文全文数据库(博士)医药卫生科技辑 3.2003,(3),第12页第1节-第17页最后一段. |
殷军.绵萆薢中抗骨质疏松活性成分的研究.中国优秀博硕士学位论文全文数据库(博士)医药卫生科技辑 3.2003,(3),第12页第1节-第17页最后一段. * |
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