KR20090011140A - 창이자, 숙지황 및 오가피의 혼합 생약재 추출물을함유하는 관절염 예방 및 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 창이자(Xanthium strumarium Linne), 숙지황(Rehmanniae Radix Preparata) 및 오가피(Acanthopanacis Cortex)의 혼합 생약재 추출물을 함유하는 관절염 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출되는 창이자, 숙지황 및 오가피의 혼합 생약재 추출물은 염증성 물질인 종양괴사인자-알파(TNF-α) 및 프로스타글란딘 E2(PGE2)의 유리를 동시에 억제하여 관절염 예방 또는 치료용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

창이자, 숙지황, 오가피, 종양괴사인자-알파(TNF-α), 프로스타글란딘 E2(PGE2), 관절염

Description

창이자, 숙지황 및 오가피의 혼합 생약재 추출물을 함유하는 관절염 예방 및 치료용 조성물{Composition for prevention and treatment of arthritis comprising Herbal mixture extract of Xanthium strumarium Linne, Rehmanniae Radix Preparata and Acanthopanacis Cortex}

본 발명은 창이자(Xanthium strumarium Linne), 숙지황(Rehmanniae Radix Preparata) 및 오가피(Acanthopanacis Cortex)의 혼합 생약재 추출물을 함유하는 관절염 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

관절염 관련 질환은 전 세계 인구의 약 12 ％가 고통을 격고 있는 대표적인 퇴행성, 난치성 질환으로 국내에도 약 200만 명 이상의 환자가 있다. 관절염은 신체의 근 골격 및 결합 조직에 염증성 변화가 생겨 근 골격계에 전신 증상이 나타나는 것을 총칭하는 병명이다. 상기 질환은 관절, 뼈, 연골 조직 또는 척수에 영향을 주어, 종종 영구적인 조직 손상, 기형, 퇴화 및 장애를 일으키는 만성 염증을 특징으로 한다(Hofbause, L. C., et.al., Arthritis and Rheumatism 44: 253-259, 2001). 관절염은 퇴행성 관절염(골 관절염), 류마티스 관절염, 관절외 류마티즘 또는 콜라겐 질환으로 분류된다.

관절염 질환 중 가장 흔히 나타나는 퇴행성 관절염은 관절 연골이 닳아 없어지면서, 국소적인 퇴행성 변화가 나타나는 질환이다. 퇴행성관절염은 관절을 구성하는 연골세포(chondrocytes)에 노화 등의 퇴행이 발생하여 연골세포에서 관절의 기질물질들인 유형 Ⅱ 콜라겐(type-Ⅱ collagen) 및 프로테오글리칸(proteoglycan) 등의 합성이 저해됨과 동시에 인터루킨-1β(interleukin-1β, IL-1β) 및 종양괴사인자-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α) 등의 염증성 사이토카인(cytokine)이 생성됨에 따라 관절 기질을 분해하는 기질 금속 단백질 분해효소(matrix metalloproteinase, MMP)의 합성 및 활성이 관절 세포에서 증가됨으로 인해 관절조직이 파괴됨으로써 유발되는 질병이다. 또한 관절염은 염증성 사이토카인에 의한 일산화질소(NO)의 생성과 생성된 일산화질소에 의한 자가 증폭적인 사이토카인의 생성으로 더욱 많은 MMP의 합성이 유발되게 되어 관절 기질의 분해가 촉진됨으로써 더욱 악화된다. 이와 동시에 염증성 사이토카인은 지질대사산물인 프로스타글란딘 E2(prostagladin E2, PGE2)의 생성을 증가시켜 관절염에서 염증반응을 유발시킨다. 그 원인은 불확실하나, 노쇠 현상이나 과다한 체중과 관계가 깊은 질환으로 알려져 있으며, 이 질환에서는 일차적으로 관절 연골의 퇴행성 변화가 나타난다. 퇴행성 변화는 관절 연골에서 시작되어 연골 세포가 괴사하게 되고, 기질이 카텝신 B(Cathepsin B), 카텝신 D(Cathepsin D), 콜라게나아제(Collagenase) 등에 의해 파괴된다. 프로테오글리칸(Proteoplycan)과 콜라겐(Collagen)의 생성이 파괴정도를 따라가지 못하며 외력에 대한 연골의 적응 능력은 점점 감소하여 결국 연골 하골 조직에 미세 골절 등의 소견이 생기게 된다. 질환이 진행되면, 연골 하골의 경화, 관절 주변에 골의 과잉형성, 관절의 변형 등이 발생하게 되며, 연골의 표면이 거칠어지게 되고 관절막으로 싸인 관절강 안에 염증 반응이 반복되어 나타나게 된다. 따라서, 반복적인 동통, 관절의 강직감, 관절의 점진적인 운동 장애 등을 일으키게 된다.

관절염 중 류마티스 관절염은 병적 증상이 주로 가동 관절에 대칭적으로 나타나는 전신성, 만성 염증성 질환이며, 면역체계에 이상이 생겨 발생되는, 아직은 그 원인이 정확히 밝혀지지 않은 자가 면역 질환으로 알려져 있다. 상기 질환은 주변 관절의 구조적 기형을 일으키는, 연골 파괴 및 골 침식을 야기하는 지속적인 염증성 활막염을 특징으로 한다. 류마티스성 관절염과 관련된 증상에는 관절 부종, 관절 압통, 염증, 조조경직 및 특히 관절을 구부릴 때의 동통이 포함된다. 관절염이 진행된 단계에 있는 대상체는 골침식과 함께 관절 파괴를 비롯한 구조적 손상이 발생하게 된다(Firestein, G.S., Nature 423: 356-361, 2003). 추가로, 환자는 자가면역 과정과 관련된 맥관염에 기인한 피부, 신장, 심장, 폐, 중추 신경계 및 눈의 손상을 비롯한 각종 장기의 손상 같은 다른 임상적 증상이 있을 수 있다.

관절염과 관련된 다른 증상에는 적혈구 침강 속도의 증가 및 혈청 C-반응성 단백질(CRP) 및(또는) 가용성 IL-2 수용체(IL-2r) 농도의 증가가 포함된다. 적혈구 침강 속도는 활성 류마티스성 관절염에 걸린 거의 모든 환자에서 증가된다. 혈청 C-반응성 단백질의 농도 역시 증가되고 이는 질환 활성도 및 진행성 관절 손상 의 가능성과 관련 있다. 추가로, 활성 류마티스성 관절염에 걸린 환자의 혈청 및 활액에서 T-세포 활성화의 산물인 가용성 IL-2r의 농도도 증가된다(Udagawa, N., et.al., Athritis Research 4: 281-289, 2002).

류마티스성 관절염의 전개와 지속에 Th1 유형의 CD4+ T 세포가 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 즉, CD4+ T 림프구는 인터페론-감마(IFN-r) 및 IL-17 같은 가용성 물질과 CD69 같은 세포 표면 물질에 의한 신호 전달을 통해 대식 세포, 활막 세포들을 자극하여 염증성 사이토카인들(TNF-a, IFN-r, GM-CSF, IL-2, IL-6)과 매트릭스 메탈로프로티나아제(matrix metalloproteinase, MMP)를 분비하게 한다. 이렇게 분비된 사이토카인들은 활막의 증식을 촉진하여 판누스(pannus) 형성하고, MMP와 함께 연골 파괴를 일으킨다. 또한 활성화된 CD4+ T 세포는 CD40L, CD28, a1b2 인테그린(integrin)등이 매개된 세포 표면 접촉을 통해 B 세포를 활성화하여 류마티스성 인자(rheumatoid factor)를 포함한 항체를 생산케 한다. CD4+ T 세포는 활성화됨에 따라 표면에 오스테오프로데거린 리간드(osteoprotegerin ligand, OPGL)를 발현하여 파골 세포 생성(osteoclastogenesis)을 촉진하여 뼈 파괴에 결정적인 역할을 한다(Kong Y.Y., et.al., Nature 402: 304-309, 1999). 활성화된 대식세포, 섬유아세포 등은 VEGF, FGF와 같은 물질을 분비하여 새 혈관 형성을 촉진한다. 활막 조직 내의 활성화된 혈관 내피세포는 IL-8과 같은 케모카인을 분비하고 결합분자(adhesion molecule) 발현을 유도하고 염증성 세포의 침윤을 촉진하여 염증반응의 증폭 사이클을 이룬다. 또한, 류마티스 관절염은 T-림프구와 항원 제시 세포사이의 항원-비특이성 세포간 상호작용과 관련된 T-세포-매개의 자 가 면역 질환이라 생각된다. 일반적으로, T-세포 반응의 크기는 T-세포 표면 분자와 그의 리간드 사이의 상호작용에 의해 유도된 동시 자극 반응에 의해 결정된다. 주된 동시 자극 신호는 T-세포 표면 수용체인 CD28 및 CTLA4와 그의 리간드, 예를 들어 항원 제시 세포 상의 B7-관련 분자 CD80(즉, B7-1) 및 CD86(즉, B7-2) 사이의 상호작용에 의해 제공된다(Linsley, P., et.al., Ann . Rev . Immunol . 11: 191-212, 1993). 동시자극이 없을 때의 T-세포 활성화는 면역 시스템이 자극에 대해 반응하지 않는 무력성(anergic) T-세포 반응을 초래한다(Schwartz, R. H., et.al., Cell 71: 1065-1068, 1992).

골관절염이 유도되면, 관절 내 염증 반응과 함께 통증이 증가하게 되는데, 이러한 통증은 활액 내에서 통증유발과 관련된 중요 인자인 프로스타글란딘 E2(PGE2)의 생성이 증가하기 때문이다. 사이클로 옥시제네이즈 2(cyclooxygenase-2, COX-2)는 통증 유발 물질인 프로스타글란딘 E2를 합성하는 효소이며, 이는 NO(nitric oxide), TNF-α, IL-1β와 같은 염증성 사이토카인이나 기타 다른 자극에 의해 활성이 증가된다. 골관절염이 진행 되면, 연골이 파괴되면서 연골에서 사이토카인(IL-1β, TNF-α), 케모카인, 단백 분해효소 등과 같은 염증 관련 인자들이 분비된다. 이러한 염증 반응은 골관절염의 초기에도 관찰되며, 활액막에 염증이 생겨 혈청 히알루론산(hyaluronic acid, HA) 농도가 상승되기도 한다. 활액막에는 감각신경 섬유가 분포되어 있으며, IL-1β와 TNF-α는 활액막에 분포하는 생체에 손상을 주거나 손상을 줄 수 있는 유해자극을 감지하는 수용체인 유해수용기(nociceptor)를 자극하거나 민감하게 할 수 있다. 이러한 염증성 싸이토카인들 은 연골 세포와 비만세포로부터 PGE2와 히스타민을 유리시키며, 이는 다시 유해수용기를 자극하므로 통증을 느끼게 된다. 골관절염에서는 염증 반응과 함께 연골이 파괴되어 활액 내로 프로테오글리칸이 방출되어 활액량과 활액 내의 프로테오글리칸의 농도가 증가한다. 프로테오글라이칸은 단백질과 당분으로 구성되어 있으며, 콜라겐 섬유와 엉겨 붙어 연골 내에 빽빽하게 밀집된 구조 또는 틀을 형성하여 몸을 굽혔다 폈다 하는 운동을 가능하도록 연골에 탄력성을 부여하는 복합 분자이다. 또한 프로테오글리칸은 연골 조직 내의 수분을 함유할 수 있는 스폰지 기능을 함으로써 연골이 계속적으로 관절 운동을 할 수 있도록 한다. 골관절염이 발생한 연골 조직은 MMP(matrix metalloproteinase)에 의하여 파괴되며, 골관절염이 진행되면 MMP-1, -2, -3, -8, -9, -13 등의 발현과 활성이 증가한다(Wieland HA et al., Nat Rev Drug Discov 4: 331 - 344, 2005).

현재 사용되고 있는 퇴행성 관절염 및 류마티스 관절염의 치료방법은 다음과 같다. 초기 치료에 많이 사용되는 약물은 비스테로이드성 소염제(NSAID: non-steroidal anti-inflammatory drug)로서, 이들 NSAID들은 증세를 약간 호전시키기는 하지만 관절부위 연골 손실이나 질병의 진행을 막을 수는 없으며, 장기간에 걸쳐 투여되고, 장기 복용 시 위장계, 중추 신경계, 조혈 기관, 신장, 간 등에 부작용이 심하게 나타나 이 치료법을 사용하는 환자의 절반 가량이 1년 이내에 치료를 중단해야만 한다(Langenegger, T., et.al., Clin Orthop . 366:22-30, 1999). 다음 단계로는 금을 포함하는 화합물 약제(gold drugs; gold sodium thiomalate, gold sodium thiosulfate)나 페니실아민(penicillamine), 항말라리아제(anti-malarials)와 같은 항관절염 제제(disease modifying anti-rheumatic drugs, DMARDs) 등이 사용된다. 그러나 이 제재들 역시 관절염의 진행을 다소 감소시키지만 심각한 부작용을 동반할 수 있기 때문에 항류마티스제(Disease Modifying Anti-Rheumatic Drug, DMARD)를 이용한 치료법이 시작된 5년 이후에는 5 ~ 15% 환자만이 이 약물을 계속 사용하고 있다. 상기의 치료제가 더 이상 효과를 보이지 않을 경우에는 류마티스가 발생한 관절부위를 외관절 시술에 의해 인공관절로 교체해야만 하는 경우도 있다(Simon L. S., Int . J. Clin . Pract ., 54:243-249, 2000).

창이자(Xanthium strumarium Linne)는 국화(Compositae)과의 일년생 초본으로 높이는 1.5m 정도이며 전국 각지에 분포하며 주로 들이나 길가에서 자란다. 줄기는 곧고 굵으며 잎은 양면에 거친 털이 있다. 8 ~ 9월에 노란색 꽃이 피는데 암꽃과 수꽃이 따로 피는 두상화이다. 수꽃은 다소 둥근 모양이고 많으며 끝에 붙는다. 총포 조각은 고르게 나 있으며 1줄이다. 화관은 통으로 된 곤봉 모양이고 다소 털이 있으며 꽃밥이 있다. 암꽃은 밑부분에 있고 암술은 2개이며 2개의 가시가 있다. 총포에 싸여 있는데 꽃이 핀 후 1 cm 이상이 된다. 총포는 갈고리 같은 가시가 있고 그 안에 열매인 수과가 2개 들어 있다. 수과는 넓은 타원형으로 길이 2 mm 정도이며 바깥쪽에 갈고릴 같은 가시가 있다. 보고된 성분으로는 열매에 배당체인 키산토스트루마린(Xanthostrumarin)이 잘 알려져 있으며 그 밖에 클로로부탄올(Chlorobutanol), 1-옥타데카놀(Otadecanol), 카르복시아트락틸로시 드(Carboxyatractyloside), 카페산(Caffeic acid), 니겔린산(Nigellic acid), 올레인산(Oleic acid), 다우코스테롤(Daucosterol), 캄페스테롤(Campesterol), 스티그마스테롤(Stigmasterol), 에이세니아스테롤(Eisenia sterol), 디하이드록시크산탄 틴(Dihydroxyxanthatin), 디아세톡시크산투민(Deacetoxyxanthumin)와 7각 고리의 아르테카닌(Artecanin), 이소크산타놀(Isoxanthanol), 크산타론긴(Xanthalongin), 크산티닌(Xanthinin), 크산티노신(Xanthinosin), 크산투민(Xanthumin) 등의 화합물이 함유되어 있다. 약리적인 효능 및 효과로 전초는 요오드 함량이 높기 때문에 갑성선 기능저하 때 사용하고, 한방에서는 풍한을 없애는 약재로서 축농증, 비염, 두통, 기침 등에 사용하거나, 열매와 전초로 고약을 만들어 습진, 종기 등 피부에도 사용한다.

숙지황(熟地黃; Rehmanniae Radix Preparata)은 현삼과에 딸린 약용식물의 뿌리를 쪄서 말린 것으로, 한방에서 약재로 사용하고 있으며, 날것을 생지황, 말린 것을 건지황이라 하며, 숙지황 중 특히 술에 담갔다가 쪄서 말리기를 9번 되풀이하여 만든 것은 구지황이라 하여 그 약효를 으뜸으로 친다. 맛은 달면서도 쓴맛이 돌고 따뜻한 성질이 있어 혈을 보(補)하고 정(精: 생명이 발생하고 활동하는 데 기본이 되는 물질)을 보충해서 허리와 무릎이 시리고 아픈 증상이나 월경이상, 어지럼증 등을 치료하고 머리를 검게 하는 효능이 있다. 숙지황은 사물탕(四物湯)의 주요 약재이며 각종 만성병 중 몸이 허약하여 나타나는 내열(內熱), 인후건조(咽喉乾燥), 갈증 등의 증상에 쓰인다. 민간요법에서는 돼지고기를 삶은 국물과 함께 복용하면 습관성 변비에 효과가 있다고 알려져 있다.

오가피(五加皮, Acanthopanacis Cortex)는 두릅나무과(Araliaceae)에 속하는 관목식물로, 북반구 극동아시아에만 분포하며 남한에는 멸종 위기에 있는 야생보호식물이다. 오가피의 종류로는 가시오가피, 일반오가피, 향오가피가 있고, 한방에서 독성과 부작용이 없다는 상약으로 분류하여 뿌리와 껍질을 약재로 사용한다. 잎에는 지사노사이드(Chiisanoside)가 있어 약리적 기능을 갖고 있으며, 뿌리에서는 오가피 배당체 뿐만 아니라 시링긴(Syringin), 쿠마린 배당체 등이 있다. 오가피에는 오가피 배당체인 아칸토사이드(Acanthoside) B, D와 면역성을 높혀 주는 수용성 다당체가 있다. 오가피는 맛이 맵고 쓰며 따뜻한 성질을 갖고 있고, 간경(肝經), 신경(神經)에 작용하여 풍습을 없애고 기를 돋우며 정수를 불러준다고 알려져 있다. 또한 오로(오장이 허약하여 생기는 허로병)와 칠상(남자가 허약해서 생기는 일곱 가지 증상)을 보해 주며 다리를 잘 쓰지 못하는 데에 쓰였으며, 이를 장복하면 신체의 기(氣)를 높여주고 위를 보해 주고 정력을 좋게 해주며 정신을 맑게 하고 의지력을 높게 하며 몸이 가벼워지고 늙는 것을 방지하고 몸 안의 나쁜 피를 맑고 깨끗이 다스려 준다고 알려져 있고, 허리 척추가 쑤시는 통증, 남자 음위증, 낭습, 여자 음양증 등의 여러 가지 증상을 치료해준다고 알려져 있다.

관절염의 현 치료제들이 갖는 한계인 독성과 부작용을 최소화한 새로운 작용 및 골격 구조를 가진 관절염의 예방 및 치료에 효과적인 신물질의 개발이 절실히 요구되고 있다.

숙지황 또는 오가피를 포함하는 혼합생약재가 관절염 또는 골다공증에 효과 가 있다는 보고는 출원번호 10-1999-0037349, 10-2000-0075878, 10-2003-0081309, 10-2001-0072832, 10-2003-0081309, 10-2005-0052513 등에 기재되어 있으며, 상기 숙지황 또는 오가피가 뼈를 튼튼히 하여 연골 및 뼈 파괴 억제에도 효과가 있어 골다공증을 예방할 수 있다는 것은 본 발명자들이 출원한 출원번호 10-2005-0005425에 기재되어 있다. 그러나 관절염의 염증 및 통증을 동시에 억제할 뿐 아니라 연골 및 뼈 파괴 억제에도 효과가 있는 혼합생약재는 지금까지 보고된 바 없다.

이에, 본 발명자들은 창이자(Xanthium strumarium Linne), 숙지황(Rehmanniae Radix Preparata) 및 오가피(Acanthopanacis Cortex)의 다양한 생리활성 연구를 수행하던 중, 창이자, 숙지황 및 오가피의 혼합 생약재 추출물이 다양한 염증성 물질의 유리와 통증 매개 물질의 유리를 동시에 억제시키고, 연골 및 뼈 파괴 억제에도 효과가 있는 관절염 예방 및 치료용 조성물로 유용하게 사용할 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 다양한 염증성 물질 및 통증관련 물질의 유리를 동시에 억제하는 활성을 갖는 창이자, 숙지황 및 오가피의 혼합 생약재 추출물을 함유하는 관절염 예방 및 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 창이자, 숙지황 및 오가피의 혼합 생약재 추출물을 함유하는 관절염 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 창이자, 숙지황 및 오가피의 혼합 생약재 추출물을 함유하는 관절염 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.

본 발명에 의한 창이자, 숙지황 및 오가피 혼합 생약재 추출물은 각각의 생약 추출물에 비하여 관절염의 주원인 중 하나인 염증성 물질 및 통증관련 물질의 유리를 동시에 억제하고, 연골 및 뼈 파괴 억제에도 효과가 있으므로 창이자, 숙지황 및 오가피의 혼합 생약재 추출물은 관절염 치료제 또는 예방제로 사용될 수 있을 뿐만 아니라 건강 식품으로도 널리 유용하게 사용될 수 있다.

이하, 본 발명에 대하여 상세히 설명한다.

본 발명은 창이자, 숙지황 및 오가피의 혼합 생약재 추출물을 함유하는 관절염 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명의 창이자, 숙지황 및 오가피 혼합 생약재 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조된다.

1) 건조한 창이자, 숙지황 및 오가피를 추출용기에 넣은 후 추출용매를 가하여 추출하는 단계;

2) 단계 1)의 추출물을 식힌 후 여과하는 단계; 및

3) 단계 2)의 추출물을 진공회전증발기를 이용하여 감압농축한 후 동결건조하는 단계,

상기 제조방법에 있어서, 단계 1)의 창이자, 숙지황 및 오가피는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한없이 사용할 수 있다. 상기 오가피는 한국에 자생하거나 재배되는 오갈피나무(Acanthopanax sessiliflorus Seeman), 지리산 오갈피나무(Acanthopanax chiisanensis Nakai), 섬 오갈피나무(Acanthopanax koreanum Nakai), 털 오갈피나무(Acanthopanax rufinerve Nakai), 서울 오갈피나무 (Acanthopanax seoulense Nakai), 가시 오갈피나무(Acanthopanax senticosus Harms) 및 오가나무(Acanthopanax sieboldianum Makino)와 중국에서 자생되거나 재배되고 있는 오갈피 속의 나무(Acanthopanax gracilistylus Smith)로부터 유래된 것을 모두 사용할 수 있으며, 이에 한정하는 것은 아니다.

상기 제조방법에 있어서, 단계 1)의 창이자, 숙지황 및 오가피는 각각을 창 이자 30 내지 70 중량부, 숙지황 20 내지 60 중량부 및 오가피 0.5 내지 20 중량부로 구성되는 것이 바람직하며, 창이자 40 내지 60 중량부, 숙지황 30 내지 50 중량부 및 오가피 5 내지 15 중량부로 구성되는 것이 더욱 바람직하며, 창이자 50 중량부, 숙지황 40 중량부 및 오가피 10 중량부로 구성되는 것이 가장 바람직하다.

상기 제조방법에 있어서, 단계 1)의 추출용매는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 한다. 상기 알코올로는 C₁ 내지 C₄ 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직하며, 저급 알코올로는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하다. 상기 추출용매를 건조된 창이자, 숙지황 및 오가피 분량에 5 내지 15배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하며, 10배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하다. 추출온도는 80 ~ 120℃인 것이 바람직하며, 100℃인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 6 ~ 10 시간이 바람직하며, 8 시간이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 아울러, 추출 회수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 4회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 제조방법에 있어서, 단계 3)의 진공회전증발기는 40℃ 이하에서 감압농축하는 것이 바람직하며, 20 ~ 40℃에서 감압농축하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 상기 진공회전증발기는 40 브릭스(brix) 정도로 농축하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 감압농축 후 동결건조는 동결건조기로 수율 27% 상태로 분말화하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

상기 제조방법에 의해 제조된 창이자, 숙지황 및 오가피 혼합 생약재 추출물은 염증성 물질인 종양괴사인자-알파(TNF-α)의 분비를 억제하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 실시예에서는 상기 혼합 생약재 추출물이 사람의 종양괴사인자-알파(TNF-α) 유리에 미치는 영향을 평가하기 위하여 사람에서 유래된 세포주인 THP-1 세포를 배양한 후 지질다당질(lipopolysaccharide, LPS)을 첨가하여 종양괴사인자-알파(TNF-α)가 유리되도록 세포를 활성화시켰다. 활성화된 세포에 창이자, 숙지황 및 오가피 단독의 추출물 및 이들의 혼합 추출물을 다양한 농도로 처리하여 배양한 후 세포 배양액 안의 종양괴사인자-알파의 양을 효소 면역 측정법(ELISA)으로 측정하였다. 그 결과, 단독의 추출물을 첨가한 세포에 비해 혼합 추출물의 경우 증대된 종양괴사인자-알파(TNF-α) 유리 억제 효과를 나타내었다.

상기 제조방법에 의해 제조된 창이자, 숙지황 및 오가피 혼합 생약재 추출물은 염증 및 통증 관련 물질인 프로스타글란딘 E2(PGE2)의 분비를 억제하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 실시예에서는 상기 혼합 생약재 추출물이 프로스타글란딘 E2 (PGE2) 유리에 미치는 영향을 평가하기 위하여 마우스에서 유래된 세포주인 RAW264.7 세포를 배양한 후 지질다당질(LPS)를 첨가하여 프로스타글란딘 E2 (PGE2)가 유리되도록 세포를 활성화시켰다. 숙지황과 오가피에 대한 실험을 하지 않은 이유는 창이자는 문헌에 통증 및 항염증 효능이 있다고 보고되어 있으나, 숙지황과 오가피의 경우에는 없기 때문이다. 활성화된 세포에 창이자 단독의 추출물 및 이들의 혼합 추출물을 다양한 농도로 처리하여 배양한 후 세포 배양액 안의 프로스타글란딘 E2(PGE2) 양을 PGE2 분석 키트(Kit)를 이용하여 측정하였다. 그 결과 PGE2 분비량이 세가지 천연물을 혼합한 경우에도 창이자 추출물을 단독으로 처리한 경우와 유사한 수준으로 유지되었다. 상기 결과를 통해서 혼합 추출물을 제조할 경우, 창이자 추출물의 PGE2 분비 억제 효능이 숙지황과 오가피에 의하여 상쇄되지 않고 우수하게 유지되는 것을 알 수 있었다.

그러므로 본 발명의 창이자, 숙지황 및 오가피 혼합 생약재 추출물은 창이자 추출물, 숙지황 추출물 및 오가피 추출물을 각각 단독으로 처리한 경우에 비해 종양괴사인자-알파(TNF-α) 유리 억제와 프로스타글란딘 E2의 유리 억제 효과에 우수한 활성을 나타내므로 관절염의 예방 또는 치료에 효과적으로 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 상기 혼합 생약재 추출물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.

상기 혼합 생약재 추출물은 임상 투여 시에 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다.

즉, 본 발명의 혼합 생약재 추출물은 실제 임상 투여 시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose) 또는 락토오스(Lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 또한 관절염 예방 또는 치료제로서의 효능 증진을 위해 칼슘, 비타민 D₃, 글루코사민 또는 콘드로이친을 첨가할 수 있다.

본 발명의 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하며, 일일 투여량은 혼합 생약재 추출물의 양을 기준으로 0.1 내지 100 ㎎/㎏이고, 바람직하게는 30 내지 86 ㎎/㎏이고, 더욱 바람직하게는 50 내지 60 mg/kg이며, 하루 1 ~ 6 회 투여될 수 있다.

본 발명의 관절염 예방 및 치료용 조성물은 관절염의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

또한, 본 발명은 창이자, 숙지황 및 오가피의 혼합 생약재 추출물을 함유하는 관절염 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.

본 발명의 혼합 생약재 추출물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 혼합 생약재 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천 연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명을 실시예, 실험예 및 제제예에 의하여 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예, 실험예 및 제제예는 본 발명을 구체적으로 예시하는 것이며, 본 발명의 내용이 실시예, 실험예 및 제제예에 의해 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1> 창이자, 숙지황 및 오가피 혼합 생약재 추출물의 제조

창이자, 숙지황, 오가피는 재배산으로 시중의 건재상에서 구입하여 사용하였다.

<1-1> 창이자, 숙지황 및 오가피 혼합 생약재의 물 추출물의 제조

창이자(50g)는 파쇄기로 잘게 분쇄하고, 숙지황(40g)과 오가피(10g)는 절편하여 준비하였다. 2 ℓ 추출용기에 생약재를 혼합하여 넣고 10배수의 정제수를 넣은 후 100℃에서 8 시간 동안 열수 추출하였다. 상기 가열 추출액을 실온에서 식힌 후 여과하였다. 상기 추출액을 40℃ 이하에서 회전식 진공회전증발기(vacuum rotary evaporator)를 사용하여 진공 감압 농축하고 동결건조하여 혼합 생약 추출 분말 27 g을 얻었다. 이 분말을 120㎖의 증류수에 녹여 하기의 실험에 사용하였다.

<1-2> 창이자, 숙지황 및 오가피 혼합 생약재의 에탄올 추출물의 제조

추출용매로 물 대신 에탄올을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 1-1의 추출방법과 동일하게 추출하였다.

<1-3> 창이자, 숙지황 및 오가피 혼합 생약재의 75% 에탄올 추출물의 제조

추출용매로 에탄올 대신 물 25% 와 에탄올 75%의 혼합용매를 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 1-1의 추출방법과 동일하게 추출하였다.

<1-4> 창이자, 숙지황 및 오가피 혼합 생약재의 메탄올 추출물의 제조

추출용매로 물 대신 메탄올을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 1-1의 추출방법과 동일하게 추출하였다.

< 실시예 2> 창이자 추출물의 제조

창이자를 파쇄기를 이용하여 잘게 절편 후 100 g을 2 ℓ 추출용기에 넣고 정제수 10배수를 가하여 100℃에서 8 시간 동안 추출 여과하였다. 상기 과정을 3회 반복한 후 모아 진공회전증발기를 이용하여 40℃ 이하에서 40 블릭스(brix) 정도로 감압 농축하고 동결 건조하였다(수율: 9 %).

< 실시예 3> 숙지황 추출물의 제조

숙지황을 물로 깨끗이 세척한 후, 그늘에서 건조하였다. 건조한 숙지황 100g을 3ℓ 추출용기에 넣고 증류수 1ℓ를 가하여 100℃에서 4시간 동안 열수 추출하였다. 상기 과정을 3회 반복한 후 얻어진 용액을 실온에서 식힌 후 거름종이로 여과하였다. 상기 추출액은 진공회전증발기를 이용하여 40℃ 이하에서 감압농축하여 숙지황 추출물을 얻었다(수율: 42%).

< 실시예 4> 오가피 추출물의 제조

오가피를 물로 깨끗이 세척한 후, 그늘에서 건조하였다. 건조한 오가피 100g을 3ℓ 추출용기에 넣고 증류수 1ℓ를 가하여 100℃에서 4시간 동안 열수 추출하였다. 상기 과정을 3회 반복한 후 얻어진 용액을 실온에서 식힌 후 거름종이로 여과하였다. 상기 추출액은 진공회전증발기를 이용하여 40℃ 이하에서 감압농축하고 동결건조하여 분말상태의 오가피 추출물을 얻었다(수율: 10%).

< 실시예 5> 숙지황 및 오가피의 혼합 추출물의 제조

숙지황 및 오가피를 물로 깨끗이 세척한 후, 그늘에서 건조하였다. 건조한 숙지황(70g) 및 오가피(30g)는 절편하여 준비한 100g을 3ℓ 추출용기에 넣고 증류수 1ℓ를 가하여 100℃에서 4시간 동안 열수 추출하였다. 상기 과정을 3회 반복한 후 얻어진 용액을 실온에서 식힌 후 거름종이로 여과하였다. 상기 추출액은 진공회전증발기를 이용하여 40℃ 이하에서 감압농축하고 동결건조하여 분말상태의 숙지황 및 오가피의 혼합 추출물을 얻었다(수율: 30%).

< 실험예 1> 생약재 추출물에 의한 종양괴사인자-알파( TNF -α) 유리 억제 효능 분석

본 발명의 생약재 추출물이 인체 단구성 세포주(Human monocytic cell line)인 THP-1 세포에서 유리되는 사이토카인인 종양 괴사인자-알파(TNF-α)의 유리 억제에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험을 실시하였다.

<1-1> 세포의 선별 및 세포 배양

본 발명의 생약재 추출물이 사람의 종양괴사인자-알파(TNF-α) 유리에 미치는 영향을 평가하기 위하여 사람에서 유래된 세포주인 THP-1 세포(ATCC No. TIB-202)는 미국세포주은행(ATCC, USA)에서 구입하였고, 10% FBS(fetal bovine serum) 와 0.05 mM 2-메캅토에탄올(2-mercaptoethanol)을 첨가한 RPMI 1640(Gibco, BRL, USA) 배지로 37℃ CO2 배양기에서 배양하여 실험에 사용하였다.

<1-2> 종양괴사인자-알파( TNF -α)의 유리량 측정

생약재 추출물이 종양괴사인자-알파(TNF-α) 유리에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 상기의 실험예<1-1>에서 기술한 방법으로 준비된 세포를 이용하여 종양 괴사인자-알파(TNF-a)의 유리량을 효소면역 측정법(ELISA)으로 측정하였다. 구체적으로, 96-웰 플레이트(well plate)에 5×10⁵개/well로 세포를 분주하고, 지질다당질(lipopolysaccharide, LPS)을 첨가하여 종양괴사인자-알파(TNF-α)가 유리되도록 세포를 활성화시켰다. LPS와 동시에 시험군에는 상기 실시예 1에서 제조한 생약재 추출물을 다양한 농도로 처리하여 24 시간 동안 배양하였다. 24시간 후 세포 배양액 안의 종양괴사인자-알파의 양을 효소 면역 측정법(ELISA)으로 측정하였다. 효소면역 측정 시 흡광도는 Dynatech MR-7000(Dynatech Laboratorie 사) 기기를 이용하여 450mm에서 측정하였으며, 종양괴사 인자-알파 유리량은 대조군(LPS만 첨가한 군)에 대한 백분율로 계산하였다.

상기 과정에 의한 생약재 추출물의 농도에 따른 종양괴사인자-알파(TNF-α)의 유리량 억제 효과를 표 1, 표 2 및 도 1에 나타내었다.

단독 생약재 추출물의 종양괴사인자-알파( TNF -α)의 유리량

농도(mg/ml)	창이자 추출물	숙지황 추출물	오가피 추출물
0	100.0 ± 1.0	100.0 ± 1.0	100.0 ± 1.0
0.2	99.6 ± 1.3	90.7 ± 1.2	124.3 ± 2.1
0.6	104.9 ± 2.6	84.6 ± 1.3	97.0 ± 1.1
2.0	80.7 ± 1.1	58.1 ± 2.1	80.9 ± 1.2

(대조군에 대한 백분율)

혼합 생약재 추출물의 종양괴사인자-알파( TNF -α)의 유리량

농도(mg/ml)	숙지황/오가피의 혼합 생약제의 물 추출물	창이자/숙지황/오가피 혼합 생약제의 물 추출물	창이자/숙지황/오가피 혼합 생약제의 메탄올 추출물
0	100.0 ± 1.0	100.0 ± 1.0	100.0 ± 1.0
0.2	91.4 ± 1.2	87.3 ± 3.5	84.0 ± 3.2
0.6	80.6 ± 1.3	70.9 ± 2.2	72.4 ± 2.0
2.0	55.4 ± 1.8	43.8 ± 1.0	46.2 ± 1.2

(대조군에 대한 백분율)

표 1, 표 2 및 도 1에 나타난 바와 같이, 본 발명의 혼합 생약재 추출물을 첨가한 세포는 2 mg/ml 농도에서 TNF-α 생성율이 43.8%로 창이자, 숙지황, 오가피 추출물을 단독으로 첨가한 세포 각각의 종양괴사인자-알파(TNF-α) 유리량과 비교하여 증대된 유리 억제 효과를 나타내었다. 따라서, 창이자/숙지황/오가피 혼합 생약재 추출물은 각각의 단일 천연물의 추출물보다 3가지 천연물을 혼합 추출한 경우 항염증 효능이 더 우수하다.

< 실험예 2> 생약재 추출물에 의한 프로스타글란딘 E2 ( PGE2 ) 유리 억제 효능 분석

본 발명의 생약재 추출물이 마우스 대식세포 세포주(Mouse macrophage cell line)인 RAW264.7 세포에서 생성되는 염증 및 통증을 매개하는 물질인 프로스타글란딘 E2(PGE2) 분비에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험을 실시하였다.

<2-1> 세포의 선별 및 세포 배양

본 발명의 생약재 추출물이 프로스타글란딘 E2 (PGE2) 유리에 미치는 영향을 평가하기위하여 마우스에서 유래된 세포주인 RAW264.7 세포(ATCC No. TIB-71)를 미국세포주은행(ATCC, USA)에서 구입하여 10% FBS(fetal bovine serum)를 첨가한 DMEM(Gibco, BRL, USA)배지로 37℃ CO2 배양기에서 배양하여 실험에 사용하였다.

<2-2> 프로스타글란딘 E2 ( PGE2 ) 유리량 측정

생약재 추출물이 프로스타글란딘 E2 (PGE2) 유리에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 상기의 실험예<2-1>에서 기술한 방법으로 준비된 세포를 이용하여 프로스타글란딘 E2 (PGE2) 유리량을 측정하였다. 구체적으로, 96-웰 플레이트(well plate)에 2×10⁵개/well로 세포를 분주하고, 지질다당질(LPS)를 첨가하여 프로스타글란딘 E2(PGE2)가 유리되도록 세포를 활성화시켰다. LPS와 동시에 시험군에는 상기 실시예 1에서 제조한 생약재 추출물을 다양한 농도로 처리하여 20 시간 동안 배양하였다. 20시간 후 세포 배양액 안의 프로스타글란딘 E2(PGE2) 양을 PGE2 분석 Kit( R&D 사)을 이용하여 측정하였다.

상기 과정에 의한 생약재 추출물의 농도에 따른 프로스타글란딘 E2 (PGE2)유리량 억제 효과를 표 3 및 도 2에 나타내었다.

생약재 추출물의 프로스타글란딘 E2 ( PGE2 )의 유리량

농도 (mg/ml)	창이자 추출물	창이자/숙지황/오가피 혼합 생약제의 물 추출물	창이자/숙지황/오가피 혼합 생약제의 메탄올 추출물
0	100.0 ± 1.2	100.0 ± 1.2	100.0 ± 1.2
0.2	88.9 ± 1.9	80.8 ± 2.0	79.4 ± 2.2
0.6	71.6 ± 0.9	60.9 ± 3.4	62.5 ± 3.0
2.0	52.1 ± 0.9	42.4 ± 2.8	44.0 ± 2.4

(대조군에 대한 백분율)

표 3 및 도 2에 나타난 바와 같이, 본 발명의 혼합 생약재 추출물을 첨가한 세포는 0.2 ~ 2mg/ml 농도에서 대조군에 대하여 유리 PGE2 생성율이 80.8 ~ 42.4%로 세가지 천연물을 혼합한 경우의 PGE2 분비량이 창이자 추출물을 단독으로 처리하는 경우보다 낮은 수준으로 유지되었다. 따라서, 창이자/숙지황/오가피 혼합 추출물은 창이자, 숙지황 및 오가피를 혼합하여 혼합 추출물을 제조할 경우, 창이자 추출물의 PGE2 분비 억제 효능이 숙지황과 오가피에 의하여 상쇄되지 않고 더 높게 나타난다.

< 실험예 3> 혼합 생약재 추출물의 실험 동물에서 관절염 병적 진행 억제 효과 분석

본 발명의 혼합 생약재 추출물이 관절염의 병적 진행을 억제할 수 있는지를 확인하기 위하여, 본 발명자들은 다음과 같은 실험을 수행하였다.

<3-1> 관절염 실험 동물 유도

제 2형 콜라겐 유도 관절염 실험동물을 만들기 위하여 5 ~ 6주령의 수컷 DBA1 마우스를 일본의 SCI 사로부터 구입하였으며, 마우스는 온도 21도, 습도 40%의 조건하에서 사육하였다. 소(于)의 제 2형 콜라겐(일본, 콘드렉스 사)을 0.05% 초산에 2 ㎎/㎖의 농도로 용해한 후 소의 제 2형 콜라겐을 동량의 완전 면역반응 항진제(complete adjuvant, 일본, 콘드렉스사)와 섞었다. 얼음으로 냉각하면서 3 ㎖주사기에 연결된 T-연결기를 이용하여 균질한 현탁액을 만들었다. 현탁액이 잘 만들어졌는지를 확인한 후, 마우스의 미근 부분을 알콜솜으로 소독하고 미근부의 피하내에 콜라겐 현탁액 100 ㎕를 주사하였다.

<3-2> 혼합 생약재 추출물의 경구 투여

상기 실시예<3-1>에서 제조한 혼합 생약재 추출물을 물에 녹여서 0.25 uM 필터를 이용하여 여과하여 제조하였다. 제조한 혼합 생약재 추출물을 552 ㎎/kg/day로 매일 1회씩, 3주 동안 1 ㎖ 주사기에 존대를 연결하여 마우스의 입으로 직접 투여하였다.

<3-3> 관절염의 병적 진행 여부 관찰

콜라겐 현탁액을 주사한 마우스의 관절염의 발병은 주사일로부터 30일 경부터 발생하는 것으로 알려져 있다. 관절염 병변의 육안적 관찰은 참고 문헌에 근거하여 다음과 같은 스코어를 사용하여 실시하였다. 0: 종창 및 발적이 없음, 1: 관절의 경미한 발적 및 종창, 2: 관절부 발적 및 종창이 뚜렷함, 3: 지관절을 포함하여 발적, 종창의 정도가 심함, 4: 관절의 전부위에 걸쳐 종창이 극심함. 따라서, 관절병변의 최고 스코어는 마우스 한 마리당 좌우의 전, 후지를 합하여 16이며, 다리 하나 당 스코어는 4가 최고 스코어이다(Courtenay JS et al., Nature 283: 666-668, 1980).

<3-4> 관절염 진행 억제 효과 관찰

상기 과정에 의한 혼합 생약재 추출물을 제 2형 콜라젠 유도 관절염 실험동물에 경구 투여한 후 관절염의 병적 진행을 억제하는 치료 효과를 관찰하였다.

그 결과, 표 4 및 도 3에 나타난 바와 같이, 본 발명의 혼합 생약재 추출물을 투여한 경우 관절염의 병적 진행을 억제하는 효능이 우수함을 확인하였다.

투여일	대조군	창이자/숙지황/오가피 혼합 추출물
0	0.5 ± 0.2	0.4 ± 0.2
3	0.8 ± 0.4	0.7 ± 0.3
6	3.8 ± 1.0	2.7 ± 0.7
9	6.7 ± 1.4	5.3 ± 1.2
12	9.8 ± 1.4	6.4 ± 1.3
15	10.9 ± 1.3	7.4 ± 1.2
18	11.4 ± 1.4	7.8 ± 1.2
21	12.3 ± 1.2	8.3 ± 1.1

< 실험예 4> 혼합 생약재 추출물의 급성 독성실험

본 발명에 이용된 생약재들은 식품원료로 분류되어 있어 혼합 생약재 추출물의 안정성에는 문제가 없을 것으로 판단되나, 본 발명자들은 이를 경구 투여하여 안정성을 확인하고자 하기와 같은 방법으로 급성 독성실험을 하였다. 실험동물로 6주령의 특정병원부재(SPF) 마우스를 사용하여 급성 독성실험을 실시하였다. 군당 10마리씩의 동물에 본 발명의 혼합 생약재 추출물을 0.9% NaCl에 녹여 17 시간 동안 절식시킨 마우스에 2g/㎏, 5g/㎏의 용량으로 단회 경구 투여하였다. 시험물질 투여 후 동물의 폐사 여부, 임상증상, 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 복강장기와 흉강장기의 이상 여부를 관찰하였다.

실험결과, 실험물질을 투여한 모든 동물에서 특이할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다.

이상의 결과 본 발명의 혼합 생약재 추출물은 마우스에서 5 g/㎏까지 독성변화를 나타내지 않으며, 경구 투여 최소치사량(LD50)은 5g/㎏이상인 안전한 물질로 판단되었다.

하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.

< 제제예 1> 약학적 제제의 제조

1. 산제의 제조

혼합 생약재의 물 추출물 2g

유당 1g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

2. 정제의 제조

혼합 생약재의 물 추출물 100㎎

옥수수전분 100㎎

유 당 100㎎

스테아린산 마그네슘 2㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

3. 캡슐제의 제조

혼합 생약재의 물 추출물 100㎎

옥수수전분 100㎎

유 당 100㎎

스테아린산 마그네슘 2㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

4. 환의 제조

혼합 생약재의 물 추출물 1 g

유당 1.5 g

글리세린 1 g

자일리톨 0.5 g

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1 환 당 4 g이 되도록 제조하였다.

5. 과립의 제조

혼합 생약재의 물 추출물 150 ㎎

대두 추출물 50 ㎎

포도당 200 ㎎

전분 600 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 섭씨 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.

< 제제예 2> 식품의 제조

본 발명의 혼합 생약재 추출물을 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.

1. 밀가루 식품의 제조

본 발명의 혼합 생약재의 물 추출물 0.5 ~ 5.0 중량를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.

2. 유제품(dairy products)의 제조

본 발명의 혼합 생약재의 물 추출물 5 ~ 10 중량%를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

3. 선식의 제조

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다. 검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다. 본 발명의 혼합 생약재의 물 추출물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 혼합 생약재 추출물의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.

곡물류(현미 30중량%, 율무 15중량%, 보리 20중량%),

종실류(들깨 7중량%, 검정콩 8중량%, 검정깨 7중량%),

혼합 생약재의 물 추출물의 건조분말(3 중량%),

영지(0.5중량%),

지황(0.5중량%)

< 제제예 3> 음료의 제조

1. 건강음료의 제조

혼합 생약재의 물 추출물 1000 ㎎

구연산 1000 ㎎

올리고당 100 g

매실농축액 2 g

타우린 1 g

정제수를 가하여 전체 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

2. 야채쥬스의 제조

본 발명의 혼합 생약재의 물 추출물 5g을 토마토 또는 당근 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 야채쥬스를 제조하였다.

3. 과일쥬스의 제조

본 발명의 혼합 생약재의 물 추출물 1g을 사과 또는 포도 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 과일쥬스를 제조하였다.

도 1은 본 발명의 혼합 생약재 추출물이 염증성 물질인 종양 괴사인자-알파 (TNF-α)의 유리 억제에 미치는 영향을 나타내는 그래프이고,

도 2는 본 발명의 혼합 생약재 추출물이 염증 및 통증 관련 물질인 프로스타글란딘 E2(PGE2) 유리 억제에 미치는 영향을 나타내는 그래프이고,

도 3은 본 발명의 혼합 생약재 추출물이 투여 후 제2형 콜라젠 유도 관절염 실험동물에서 관절염 진행 억제에 미치는 영향을 나타내는 그래프이다.

Claims (21)

1. 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 창이자(Xanthium strumarium Linne), 숙지황(Rehmanniae Radix Preparata) 및 오가피(Acanthopanacis Cortex)의 혼합 생약재 추출물을 함유하는 관절염 예방 및 치료용 조성물.
2. 제 1항에 있어서, 상기 오가피(Acanthopanacis Cortex)는 한국에 자생하거나 재배되는 오갈피나무(Acanthopanax sessiliflorus Seeman), 지리산 오갈피나무(Acanthopanax chiisanensis Nakai), 섬 오갈피나무(Acanthopanax koreanum Nakai), 털 오갈피나무(Acanthopanax rufinerve Nakai), 서울 오갈피나무 (Acanthopanax seoulense Nakai), 가시 오갈피나무(Acanthopanax senticosus Harms), 오가나무(Acanthopanax sieboldianum Makino) 및 중국에서 자생되거나 재배되고 있는 오갈피 속의 나무(Acanthopanax gracilistylus Smith)로 구성된 군에서 선택된 어느 하나로부터 유래된 것을 특징으로 하는 관절염 예방 및 치료용 조성물.
3. 제 1항에 있어서, 상기 창이자, 숙지황 및 오가피의 혼합 생약재 추출물은 창이자 30 내지 70 중량부, 숙지황 20 내지 60 중량부 및 오가피 0.5 내지 20 중량부로 구성되는 것을 특징으로 하는 관절염 예방 및 치료용 조성물.
4. 제 1항에 있어서, 상기 창이자, 숙지황 및 오가피의 혼합 생약재 추출물은 창이자 40 내지 60 중량부, 숙지황 30 내지 50 중량부 및 오가피 5 내지 15 중량부로 구성되는 것을 특징으로 하는 관절염 예방 및 치료용 조성물.
5. 제 1항에 있어서, 상기 창이자, 숙지황 및 오가피의 혼합 생약재 추출물은 창이자 50 중량부, 숙지황 40 중량부 및 오가피 10 중량부로 구성되는 것을 특징으로 하는 관절염 예방 및 치료용 조성물.
6. 제 1항에 있어서, 알코올은 C₁ 내지 C₄ 저급 알코올인 것을 특징으로 하는 관절염 예방 및 치료용 조성물.
7. 제 6항에 있어서, 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것을 특징으로 하는 관절염 예방 및 치료용 조성물.
8. 제 1항에 있어서, 상기 관절염 예방 및 치료는 종양괴사인자-알파(TNF-α) 분비 억제에 의한 것임을 특징으로 하는 관절염 예방 및 치료용 조성물.
9. 제 1항에 있어서, 상기 관절염 예방 및 치료는 프로스타글란딘 E2E2(PGE2) 분비 억제에 의한 것임을 특징으로 하는 관절염 예방 및 치료용 조성물.
10. 제 1항에 있어서, 상기 관절염은 류마티스 관절염인 것을 특징으로 하는 관절염 예방 및 치료용 조성물.
11. 제 1항에 있어서, 상기 관절염은 퇴행성 관절염인 것을 특징으로 하는 관절염 예방 및 치료용 조성물.
12. 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 창이자, 숙지황 및 오 가피의 혼합 생약재 추출물을 함유하는 관절염 예방 및 개선용 건강식품.
13. 제 12항에 있어서, 상기 창이자, 숙지황 및 오가피의 혼합 생약재 추출물은 창이자 30 내지 70 중량부, 숙지황 20 내지 60 중량부 및 오가피 0.5 내지 20 중량부로 구성되는 것을 특징으로 하는 관절염 예방 및 개선용 건강식품.
14. 제 12항에 있어서, 상기 창이자, 숙지황 및 오가피의 혼합 생약재 추출물은 창이자 40 내지 60 중량부, 숙지황 30 내지 50 중량부 및 오가피 5 내지 15 중량부로 구성되는 것을 특징으로 하는 관절염 예방 및 개선용 건강식품.
15. 제 12항에 있어서, 상기 창이자, 숙지황 및 오가피의 혼합 생약재 추출물은 창이자 50 중량부, 숙지황 40 중량부 및 오가피 10 중량부로 구성되는 것을 특징으로 하는 관절염 예방 및 개선용 건강식품.
16. 제 12항에 있어서, 알코올은 C₁ 내지 C₄ 저급 알코올인 것을 특징으로 하는 관절염 예방 및 개선용 건강식품.
17. 제 16항에 있어서, 저급 알코올은 에탄올인 것을 특징으로 하는 관절염 예방 및 개선용 건강식품.
18. 제 12항에 있어서, 상기 관절염 예방 및 치료는 종양괴사인자-알파(TNF-α) 분비 억제에 의한 것임을 특징으로 하는 관절염 예방 및 개선용 건강식품.
19. 제 12항에 있어서, 상기 관절염 예방 및 치료는 프로스타글란딘 E2(PGE2) 분비 억제에 의한 것임을 특징으로 하는 관절염 예방 및 개선용 건강식품.
20. 제 12항에 있어서, 상기 관절염은 류마티스성 관절염인 것을 특징으로 하는 관절염 예방 및 개선용 건강식품.
21. 제 12항에 있어서, 상기 관절염은 퇴행성 관절염인 것을 특징으로 하는 관절 염 예방 및 개선용 건강식품.

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