CN101085767A - 模拟移动床色谱法从芦蒿中分离纯化黄酮的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了模拟移动床色谱法从芦蒿中分离纯化黄酮的方法，首先称取0.7－1.0kg干燥粉碎的芦蒿于85－95℃恒温下加入10－15kg的80％乙醇进行水浴回流提取，过滤、合并滤液；反复提取两次，洗涤残渣，合并洗涤液，并以石油醚脱脂，减压浓缩，得芦蒿黄酮粗提物；将芦蒿黄酮粗提物制成进样液到模拟移动床分离纯化；甲醇溶解芦蒿黄酮粗提物，0.45μm有机系滤膜过滤得浓度100－300mg/ml的模拟移动床的进料液；洗脱液为甲醇与水的混合物，甲醇与水的体积比为40∶60；将模拟移动床的萃取液浓缩至饱和后，逐渐降温至零下4－10℃，结晶5－6小时，过滤，水洗晶体，结晶两次，真空烘干得芦蒿黄酮纯品。本发明方法提高了生产的自动化水平，工作效率、生产环境得到极大的改善。
Description
技术领域
本发明涉及天然药物的分离提纯方法，具体涉及一种模拟移动床色谱法从芦蒿中分离纯化黄酮的方法。
背景技术
芦蒿，又名藜蒿、水蒿、蒌蒿等，为菊科多年生宿根性草本植物、全国各地均有分布，为一风味野菜。芦蒿的药用价值早在我国古代就有记载，药用有清热、去风湿、开胃等功效，含挥发油、黄酮等成分，民间也有用治疗急、慢性传染性肝炎、效果很好。目前提取芦蒿中黄酮的方法是浸泡、过滤、提取得到粗产品，但是要达到药用要求必须进一步纯化，目前常用的纯化方法是以中性氧化铝作为填料的柱层析法。柱层析是药物与食品工业中常用的精制手段，设备简单成本低，但此法分离的效率低、产量低、成本高，对于成分较复杂的物质不适合分离。
70年代以来，美国UOP公司开发了模拟移动床(SMB)原理的色谱技术，该技术使吸附剂颗粒装填后不在移动，由原料进出口和产品液流进出口不断切换的方法，形成吸附剂颗粒和液流相对逆流运动来模拟固定相的移动。近年来利用模拟移动床色谱分离药物技术得到了快速的发展。美国的一些专利文献报道了模拟移动床色谱分离手性药物如光学异构体、外消旋物质和对映体，以及石油化学品的分离。但是，对于使用模拟移动床色谱对芦蒿中黄酮进行分离提纯的方法仍未见公开报道。
发明内容
本发明的目的在于：提供一种模拟移动床色谱法从芦蒿中分离纯化黄酮的方法，工艺化连续生产，提高产品的纯度和收率，降低生产成品。
本发明的目的的实现包括以下步骤：
a、称取0.7-1kg干燥粉碎的芦蒿于85-95℃恒温下加入10-15kg的80％乙醇进行水浴回流提取，过滤、合并滤液；
b、反复提取两次，洗涤残渣，合并洗涤液，并以石油醚脱脂，减压浓缩，得芦蒿黄酮粗提物；
c、将芦蒿黄酮粗提物制成进样液到模拟移动床分离纯化；甲醇溶解芦蒿黄酮粗提物，0.45μm有机系滤膜过滤得浓度100-300mg/ml的模拟移动床的进料液；洗脱液为甲醇与水的混合物，甲醇与水的体积比为40∶60；
d、将模拟移动床的萃取液浓缩至饱和后，逐渐降温至零下4-10℃，结晶5-6小时，过滤，水洗晶体，结晶两次，真空烘干得芦蒿黄酮纯品。
本发明方法中的模拟移动床色谱(SMBC)分离系统由洗脱泵、进样泵、萃取泵、色谱柱、电磁阀、信号采集器、系统控制器和计算机连接组成，洗脱泵流量10-1000ml/min，压力2-10Mpa；进样泵流量1-50ml/min，压力2-10Mpa；萃取泵流量10-500ml/min，压力2-10Mpa；工作温度15-25℃；色谱柱填料为十八烷基硅烷键硅胶，填料粒度10-50μm。
本发明方法中的模拟移动床有4-16支色谱柱组成，经电磁阀切换改变进料口、出料口位置，色谱柱分4个区域，每区由1-4支色谱柱串联组成；进样液流速为1-50ml/min，洗脱液流速为10-1000ml/min，萃取液流速为10-500ml/min，提余液流速为10-300ml/min；阀切换时间为4-30min。
本发明方法与目前精提芦蒿黄酮的柱层析法比较，收率高，生产每千克芦蒿黄酮产品可节省溶剂16050L，节省填料680.6Kg，产品纯度达到96％以上，模拟移动床是连续化生产，柱层析方法是间歇的，模拟移动床色谱的引入提高了生产的自动化水平，工作效率、生产环境得到极大的改善，实现了清洁生产。
具体实施方式
实例1：依以下步骤在江苏汉邦科技有限公司的模拟移动床色谱法从芦蒿中分离纯化黄酮：
a、称取0.7kg干燥粉碎的芦蒿于85℃恒温下加入10kg的80％乙醇进行水浴回流提取，过滤、合并滤液；
b、反复提取两次，洗涤残渣，合并洗涤液，并以石油醚脱脂，减压浓缩，得芦蒿黄酮粗提物；
c、将芦蒿黄酮粗提物制成进样液到模拟移动床分离纯化；甲醇溶解芦蒿黄酮粗提物，0.45μm有机系滤膜过滤得浓度100mg/ml的模拟移动床的进料液；洗脱液为甲醇与水的混合物，甲醇与水的体积比为40∶60；
d、将模拟移动床的萃取液浓缩至饱和后，逐渐降温至零下4℃，结晶5小时，过滤，水洗晶体，结晶两次，真空烘干得芦蒿黄酮纯品。
本发明方法中的模拟移动床色谱(SMBC)分离系统由洗脱泵、进样泵、萃取泵、色谱柱、电磁阀、信号采集器、系统控制器和计算机连接组成，洗脱泵流量10ml/min，压力2Mpa；进样泵流量1ml/min，压力2Mpa；萃取泵流量10ml/min，压力2Mpa；移动床工作温度15℃；色谱柱填料为十八烷基硅烷键硅胶，填料粒度10μm。
本发明方法中的模拟移动床有4支色谱柱组成，经电磁阀切换改变进料口、出料口位置，4支色谱柱分4个区域；进样液流速为1ml/min，洗脱液流速为10ml/min，萃取液流速为10ml/min，提余液流速为10ml/min；阀切换时间为4min。
成品HPLC法检测：PerkinElmer Series 200高效液相色谱系统，二极管阵列检测器，Hedera ODS-34.6mm×250mm分析柱，填料粒径5μm，流动相甲醇/0.2％磷酸水溶液(v/v)＝80/20，流速1ml/mim，进样浓度0.500mg/ml，进样量20μl，检测温度25℃，使用外标法测定成品芦蒿黄酮含量96％。
实例2：
依以下步骤在江苏汉邦科技有限公司的模拟移动床色谱法从芦蒿中分离纯化黄酮：
a、称取0.9kg干燥粉碎的芦蒿于90℃恒温下加入12kg的80％乙醇进行水浴回流提取，过滤、合并滤液；
b、反复提取两次，洗涤残渣，合并洗涤液，并以石油醚脱脂，减压浓缩，得芦蒿黄酮粗提物；
c、将芦蒿黄酮粗提物制成进样液到模拟移动床分离纯化；甲醇溶解芦蒿黄酮粗提物，0.45μm有机系滤膜过滤得浓度200mg/ml的模拟移动床的进料液；洗脱液为甲醇与水的混合物，甲醇与水的体积比为40∶60；
d、将模拟移动床的萃取液浓缩至饱和后，逐渐降温至零下7℃，结晶5.5小时，过滤，水洗晶体，结晶两次，真空烘干得芦蒿黄酮纯品。
本发明方法中的模拟移动床色谱(SMBC)分离系统由洗脱泵、进样泵、提取泵、色谱柱、电磁阀、信号采集器、系统控制器和计算机连接组成，洗脱泵流量500ml/min，压力5Mpa；进样泵流量30ml/min，压力5Mpa；萃取泵流量250ml/min，压力5Mpa；移动床工作温度20℃；色谱柱填料为十八烷基硅烷键硅胶，填料粒度30μm。
本发明方法中的模拟移动床有12支色谱柱组成，经电磁阀切换改变进料口、出料口位置，12支色谱柱分4个区域，每区由3支相同的色谱柱串联组成；进样液流速为30ml/min，洗脱液流速为500ml/min，萃取液流速为250ml/min，提余液流速为250ml/min；阀切换时间为18min。
成品HPLC法检测：PerkinElmer Series 200高效液相色谱系统，二极管阵列检测器，Hedera ODS-34.6mm×250mm分析柱，填料粒径5μm，流动相甲醇/0.2％磷酸水溶液(v/v)＝80/20，流速1ml/mim，进样浓度0.500mg/ml，进样量20μl，检测温度25℃，使用外标法测定成品芦蒿黄酮含量97％。
实例3：
依以下步骤在江苏汉邦科技有限公司的模拟移动床色谱法从芦蒿中分离纯化黄酮：
a、称取1kg干燥粉碎的芦蒿于95℃恒温下加入15kg的80％乙醇进行水浴回流提取，过滤、合并滤液；
b、反复提取两次，洗涤残渣，合并洗涤液，并以石油醚脱脂，减压浓缩，得芦蒿黄酮粗提物；
c、将芦蒿黄酮粗提物制成进样液到模拟移动床分离纯化；甲醇溶解芦蒿黄酮粗提物，0.45μm有机系滤膜过滤得浓度100-300mg/ml的模拟移动床的进料液；洗脱液为甲醇与水的混合物，甲醇与水的体积比为40∶60；
d、将模拟移动床的提取液浓缩至饱和后，逐渐降温至零下10℃，结晶6小时，过滤，水洗晶体，结晶两次，真空烘干得芦蒿黄酮纯品。
本发明方法中的模拟移动床色谱(SMBC)分离系统由洗脱泵、进样泵、提取泵、色谱柱、电磁阀、信号采集器、系统控制器和计算机连接组成，洗脱泵流量1000ml/min，压力10Mpa；进样泵流量50ml/min，压力10Mpa；萃取泵流量500ml/min，压力10Mpa；工作温度25℃；色谱柱填料为十八烷基硅烷键硅胶，填料粒度50μm。
本发明方法中的模拟移动床由16支色谱柱组成，经电磁阀切换改变进料口、出料口位置，16支色谱柱分4个区域，每区由1-4支相同的色谱柱串联组成；进样液流速为50ml/min，洗脱液流速为1000ml/min，萃取液流速为500ml/min，提余液流速为300ml/min；阀切换时间为30min。
成品HPLC法检测：PerkinElmer Series 200高效液相色谱系统，二极管阵列检测器，Hedera ODS-34.6mm×250mm分析柱，填料粒径5μm，流动相甲醇/0.2％磷酸水溶液(v/v)＝80/20，流速1ml/mim，进样浓度0.500mg/ml，进样量20μl，检测温度25℃，使用外标法测定成品芦蒿黄酮含量98％。
Claims (3)
1.模拟移动床色谱法从芦蒿中分离纯化黄酮的方法，具体步骤：
a、称取0.7kg-1kg干燥粉碎的芦蒿于85-95℃恒温下加入10-15kg的80％乙醇进行水浴回流提取，过滤、合并滤液；
b、反复提取两次，洗涤残渣，合并洗涤液，并以石油醚脱脂，减压浓缩，得芦蒿黄酮粗提物；
c、将芦蒿黄酮粗提物制成进样液到模拟移动床分离纯化；甲醇溶解芦蒿黄酮粗提物，0.45μm有机系滤膜过滤得浓度100-300mg/ml的模拟移动床的进料液；洗脱液为甲醇与水的混合物，甲醇与水的体积比为40∶60；
d、将模拟移动床的萃取液浓缩至饱和后，逐渐降温至零下4-10℃，结晶5-6小时，过滤，水洗晶体，结晶两次，真空烘干得芦蒿黄酮纯品。
2.根据权利要求1所述的模拟移动床色谱法从芦蒿中分离纯化黄酮的方法中的模拟移动床，其特征在于：模拟移动床由洗脱泵、进样泵、提取泵、色谱柱、电磁阀、信号采集器、系统控制器和计算机连接组成，洗脱泵流量10-1000ml/min，压力2-10Mpa；进样泵流量1-50ml/min，压力2-10Mpa；萃取泵流量10-500ml/min，压力2-10Mpa；工作温度15-25℃；色谱柱填料为十八烷基硅烷键硅胶，填料粒度10-50μm。
3.根据权利要求1所述的模拟移动床色谱法从芦蒿中分离纯化黄酮的方法中的模拟移动床，其特征在于：模拟移动床有4-16支色谱柱组成，色谱柱分4个区域，每区由1-4支相同的色谱柱串联；进样液流速为1-50ml/min，洗脱液流速为10-1000ml/min，萃取液流速为10-500ml/min，提余液流速为10-300ml/min；阀切换时间为4-30min。
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