CN103058978A

CN103058978A - 从镰形棘豆中同步制备乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的工艺方法

Info

Publication number: CN103058978A
Application number: CN2012105786581A
Authority: CN
Inventors: 师彦平; 陈娟; 李波
Original assignee: Gansu Qizheng Tibetan Medicine Co Ltd
Current assignee: Gansu Qizheng Tibetan Medicine Co Ltd
Priority date: 2012-12-27
Filing date: 2012-12-27
Publication date: 2013-04-24
Anticipated expiration: 2032-12-27
Also published as: CN103058978B

Abstract

本发明提供了一种从镰形棘豆中同步制备乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的方法，以藏药镰形棘豆为原料，通过乙醇加热提取、乙酸乙酯萃取、石油醚沉淀、普通硅胶和反相硅胶柱层析等步骤同时得到高纯度的乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮。使用本发明方法制备的乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮纯度均大于98%，而且二者的产率和提取率均较高，乔松素的产率和提取率分别为0.08%和67.5%，2’,4’-二羟基查尔酮的产率和提取率分别可达0.24%和88.9%。

Description

从镰形棘豆中同步制备乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的工艺方法

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种从镰形棘豆中提取黄酮类活性物质的方法。

背景技术

镰形棘豆(Oxytropis falcata Bunge)系豆科棘豆属的多年生无茎草本植物，藏药称“莪大夏”、“大夏”、“达夏”，广泛分布于西藏、青海、甘肃南部、四川西部及新疆等地。具有抗炎止痛、清热解毒及止血等功效，内服可治流感、扁桃体炎、高烧、喉炎、气管炎、出血、便秘、炭疽等症以及藏医的黄水病，外敷治疗疮疖肿痛、创伤、骨伤疼痛。由于其突出的抗炎疗效，是藏医的“三大抗炎药”，并享有“草药之王”的美誉。在临床上使用广泛，是六味镰形棘豆散、九味青鹏散、十八味欧曲丸、棘豆消氧洗剂、青鹏膏剂、流感丸、奇正藏贴、奇正消痛贴等多种复方或成药的主要药味，是一味非常具有研究和开发价值的天然抗炎药物。

黄酮是镰形棘豆的主要活性成分之一，其生物活性主要集中于抗肿瘤、抗炎、抗氧化、镇痛、防治心血管疾病等方面，其中特别突出的是其显著的抗炎活性。通过系统的化学成分研究，目前已从镰形棘豆中发现黄酮类化合物60余种。乔松素（化学名5,7-二羟基二氢黄酮）和2’,4’-二羟基查尔酮是镰形棘豆中黄酮类的主要成分，在药材中的含量分别占到0.12%和0.27%，同时，这两种化合物也是医药、保健品的重要原料。

现有从镰形棘豆中制备黄酮的方法，工业生产上多是针对总黄酮，如采用水提取-盐酸水解工艺制备总黄酮苷元，采用大孔吸附树脂富集镰形棘豆水提取物中的总黄酮，所得产品中黄酮单体的含量低。制备黄酮单体的方法多是实验室方法，步骤繁琐，制备量低，多是毫克级。中国专利申请号NO.200910264515.1提供了一种制备黄酮单体2’,4’-二羟基查尔酮的方法，但该方法需要使用二氯甲烷有毒试剂，柱层析洗脱溶剂系统组成复杂，还需用特殊设备高效液相制备色谱仪进行纯化，且制备量低，难以实现规模化生产。

发明内容

为了克服现在技术的不足，本发明的目的是提供一种简单易行、安全可靠且适合工业化生产的同步制备高纯度乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的方法，以特色藏药镰形棘豆为原料，通过乙醇加热提取、乙酸乙酯萃取、石油醚沉淀、普通硅胶和反相硅胶柱层析等步骤同时得到高纯度的乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮。所述方法无需应用二氯甲烷等有毒试剂，无需复杂的柱层析洗脱溶剂系统，也不需要高效液相制备色谱仪等设备。

为了达到上述目的，本发明的技术方案为：

一种从镰形棘豆中同步制备乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）取镰形棘豆，粉碎，用乙醇回流提取2～4次，各次提取液过滤，滤液经减压浓缩得总浸膏；

（2）总浸膏用水混悬，依次用石油醚萃取2～3次，乙酸乙酯萃取5～7次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物；

（3）乙酸乙酯萃取物用硅胶柱色谱分离，先用体积比20:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，弃去该洗脱液，再用体积比10:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，通过薄层层析法检测流出液，收集含有乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的流出液，减压浓缩至干，得浓缩物；

（4）浓缩物用少量乙酸乙酯溶解，加入4～7倍石油醚，边加边搅拌，静置，沉淀抽滤，用石油醚洗涤3～5次，干燥，得乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮混合物；

（5）混合物用反相硅胶柱色谱分离，甲醇洗脱，通过薄层层析法检测流出液，分别收集含有乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的流出液，减压浓缩至干，分别获得乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮。

进一步地，上述方法中步骤（1）所述的乙醇为浓度为80~95%的乙醇。

进一步地，上述方法中步骤（5）所述的反相硅胶为C₁₈反相硅胶，甲醇为70～80%甲醇。

使用本发明方法制备的乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮纯度均大于98%（高效液相色谱法测定），而且二者的产率和提取率均较高，乔松素的产率和提取率分别为0.08%和67.5%，2’,4’-二羟基查尔酮的产率和提取率分别可达0.24%和88.9%。本发明提出的方法工艺简单，且稳定可行，适合工业大生产。

本发明的有益效果在于：（1）可同时制备乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮，节省了生产原料，起到了综合利用的作用。（2）制备的产品纯度高，且产率和提取率也较高，适合工业生产应用。（3）整个制备过程，无需特殊设备，且避免了有毒试剂的使用。

具体实施方式

通过以下具体的实施例可以进一步理解本发明，所提供的实施例仅是对本发明方法的举例说明，而不以任何方式限制本发明揭示的其余内容。

以下实施例中使用的试剂和仪器，除特别说明以外，均为普通市售。

【实施例1】从镰形棘豆中同步制备乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮

取镰形棘豆6kg，粉碎，用48L90%乙醇回流提取3次，各次提取液过滤，滤液减压浓缩得总浸膏720g。将总浸膏混悬于2000mL水中，依次用1000mL石油醚萃取2次，1000mL乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物200g。取乙酸乙酯萃取物，用200g200-300目硅胶拌样，挥干溶剂，另取1700g200-300目硅胶，用体积比20:1的石油醚-乙酸乙酯湿法上普通玻璃层析柱，加样，先用18L（4倍柱体积）体积比20:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，弃去该洗脱液，再用体积比10:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，通过薄层层析法检测流出液，收集含有乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的流出液，减压浓缩至干，得浓缩物24g。将浓缩物用100mL乙酸乙酯溶解，加入600mL石油醚，边加边搅拌，静置，沉淀抽滤，用石油醚洗涤4次，干燥，得乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮混合物18g。将混合物用100mL甲醇溶解，取2500g200-300目的C₁₈反相硅胶，用75%甲醇湿法上普通玻璃层析柱，加样，用75%甲醇洗脱，通过薄层层析法检测流出液，分别收集含有乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的流分，减压浓缩至干，得乔松素4.3g和2’,4’-二羟基查尔酮12.8g。

【实施例2】从镰形棘豆中同步制备乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮

取镰形棘豆kg，粉碎，用10L90%乙醇回流提取3次，各次提取液过滤，滤液减压浓缩得总浸膏125g。将总浸膏混悬于500mL水中，依次用500mL石油醚萃取3次，500mL乙酸乙酯萃取7次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物35g。取乙酸乙酯萃取物，用35g200-300目硅胶拌样，挥干溶剂，另取350g200-300目硅胶，用体积比20:1的石油醚-乙酸乙酯湿法上普通玻璃层析柱，加样，先用4.8L（5倍柱体积）体积比20:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，弃去该洗脱液，再用体积比10:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，通过薄层层析法检测流出液，收集含有乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的流出液，减压浓缩至干，得浓缩物5g。将浓缩物用20mL乙酸乙酯溶解，加入140mL石油醚，边加边搅拌，静置，沉淀抽滤，用石油醚洗涤5次，干燥，得乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮混合物3.8g。将混合物用15mL甲醇溶解，取570g200-300目的C₁₈反相硅胶，用75%甲醇湿法上普通玻璃层析柱，加样，用75%甲醇洗脱，通过薄层层析法检测流出液，分别收集含有乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的流分，减压浓缩至干，得乔松素0.81g和2’,4’-二羟基查尔酮2.40g。

【实施例3】从镰形棘豆中同步制备乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮

取镰形棘豆1kg，粉碎，用6L95%乙醇回流提取4次，各次提取液过滤，滤液减压浓缩得总浸膏123g。将总浸膏混悬于250mL水中，依次用500mL石油醚萃取2次，500mL乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物33g。取乙酸乙酯萃取物，用33g200-300目硅胶拌样，挥干溶剂，另取200g200-300目硅胶，用体积比20:1的石油醚-乙酸乙酯湿法上普通玻璃层析柱，加样，先用3.3L（6倍柱体积）体积比20:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，弃去该洗脱液，再用体积比10:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，通过薄层层析法检测流出液，收集含有乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的流出液，减压浓缩至干，得浓缩物4.8g。将浓缩物用15mL乙酸乙酯溶解，加入90mL石油醚，边加边搅拌，静置，沉淀抽滤，用石油醚洗涤3次，干燥，得乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮混合物3.6g。将混合物用18mL甲醇溶解，取360g200-300目的C₁₈反相硅胶，用70%甲醇湿法上普通玻璃层析柱，加样，用70%甲醇洗脱，通过薄层层析法检测流出液，分别收集含有乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的流分，减压浓缩至干，得乔松素0.78g和2’,4’-二羟基查尔酮2.36g。

【实施例4】本发明制备乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的方法与现有技术的比较

将本发明的方法与中国专利申请为NO.200910264515.1的方法、文献1（姚淑英，马云保，唐亚，陈纪军，张雪梅.镰形棘豆的化学成分研究.中国中药杂志，2008,33(12):1418-1421）以及文献2（杨欢，王栋，童丽，蔡宝昌.镰形棘豆的化学成分研究（I）.中国药学杂志，2008,43(5):338-340）中记载的方法进行比较。

方法及结果如下：

按中国专利申请为NO.200910264515.1的方法：取镰形棘豆药材500g，粉碎，用95%乙醇浸泡3周，每日振摇，3周后，取出浸提液，过滤，滤液经旋转蒸发仪减压浓缩至浸膏状，备用。取浸膏置于500mL烧杯中，加入200mL石油醚超声萃取，每20min更换1次石油醚，萃取2h后，弃去石油醚，保留剩余浸膏，将剩余浸膏加200mL二氯甲烷超声萃取，每20min更换1次二氯甲烷，萃取3h后，合并所有收集的二氯甲烷萃取液，经旋转蒸发仪浓缩，并在60℃烘箱中烘干，得到二氯甲烷提取物10g。取二氯甲烷提取物用甲醇溶解，加入等量的200-300目硅胶，搅拌均匀，挥干甲醇，上硅胶柱，用体积比100:25:0.1的石油醚-乙酸乙酯-甲酸洗脱，收集流份，点薄层板检测，合并含有2’,4’-二羟基查尔酮的流份，备用；然后再用体积比100:13.5:0.3的石油醚-乙酸乙酯-甲酸洗脱，薄层检测，合并含有2’,4’-二羟基查尔酮的流份，备用；最后用体积比100:20:0.25的石油醚-丙酮-甲酸洗脱，薄层检测，合并含有2’,4’-二羟基查尔酮的流份，备用；合并以上3种洗脱系统分离得到的含有2’,4’-二羟基查尔酮的流份，减压浓缩至浸膏状，得柱层析提取物5g。将柱层析提取物溶于少量的甲醇中，每次抽取1mL溶液注入高效液相制备色谱仪中纯化，弃去杂质峰流份，收集含有2’,4’-二羟基查尔酮的流份，置于50-60℃水浴锅上，浓缩至干，得2’,4’-二羟基查尔酮0.5g。

按文献1的方法：取镰形棘豆3.2kg，粉碎，用6倍量90%乙醇冷浸提取3次，每次2d，浸出液回收溶剂得浸膏200g。浸膏上200-300目硅胶柱色谱分离，依次用体积比97:3，95:5，90:10，80:20，70:30，60:40，0:100的氯仿-甲醇洗脱，得8个流份Fr.1-8。流份Fr.4（39g）上200-300目硅胶柱色谱分离，依次用体积比95:5，9:1，8:2的氯仿-丙酮梯度洗脱，得5个组分Fr.4.1-4.5。组分Fr.4.2上200-300目硅胶柱色谱分离，依次用体积比95:5，9:1，8:2的氯仿-丙酮梯度洗脱，得4个组分Fr.4.2.1-4.2.4。组分Fr.4.2.3经200-300目硅胶柱色谱（体积比8:2的石油醚-丙酮洗脱）及Sephadex LH-20凝胶柱色谱（甲醇洗脱）分离，得2’,4’-二羟基查尔酮0.15g。

按文献2的方法：取镰形棘豆2kg,粉碎，用95%乙醇冷浸提取3次，每次3d，减压抽滤，药渣再用50%乙醇冷浸提取3次，每次3d，减压抽滤,合并提取液,减压浓缩成浸膏后，加适量水搅拌悬浮，依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇萃取,得到氯仿萃取物47g，经反复200-300目硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯为溶剂进行梯度洗脱，得到乔松素0.011g。

本发明制备方法：按实施例1和实施例2记载的方法。

结果：如表1所示，表明按本发明方法制备的产品产率及提取率均优于现有技术。

表1本发明方法与专利方法、文献方法的比较

Claims

1.一种从镰形棘豆中同步制备乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（4）浓缩物用少量乙酸乙酯溶解，加入4～7倍体积的石油醚，边加边搅拌，静置，沉淀抽滤，用石油醚洗涤3～5次，干燥，得乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮混合物；

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）所述乙醇为浓度为80~95%的乙醇。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（5）所述反相硅胶为C₁₈反相硅胶，甲醇为70～80%甲醇。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）取镰形棘豆1重量份，用6-10倍体积份的80~95%乙醇回流提取2-4次，各次提取液过滤，滤液减压浓缩得总浸膏；

（2）将总浸膏混悬于2-4倍体积份的水中，依次用0.5-2倍水体积量的石油醚萃取2-3次，0.5-2倍水体积量的乙酸乙酯萃取5-7次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物；

（3）取乙酸乙酯萃取物，用等重量的200-300目硅胶拌样，挥干溶剂，另取6-10倍乙酸乙酯重量的200-300目硅胶，用体积比20:1的石油醚-乙酸乙酯湿法上普通玻璃层析柱，加样，先用3-6倍柱体积的体积比20:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，弃去该洗脱液，再用体积比10:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，通过薄层层析法检测流出液，收集含有乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的流出液，减压浓缩至干，得浓缩物；

（4）将浓缩物用3-5倍体积的乙酸乙酯溶解，加入4-7倍乙酸乙酯体积量的石油醚，边加边搅拌，静置，沉淀抽滤，用石油醚洗涤3-5次，干燥，得乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮混合物；

（5）将混合物用4-6倍体积份的甲醇溶解，另取100-150倍混合物重量的200-300目C₁₈反相硅胶，用70～80%甲醇湿法上普通玻璃层析柱，加样，用70～80%甲醇洗脱，通过薄层层析法检测流出液，分别收集含有乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的流分，减压浓缩至干，分别获得乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）取镰形棘豆1重量份，用8倍体积份的90%乙醇回流提取3次，各次提取液过滤，滤液减压浓缩得总浸膏；

（2）将总浸膏混悬于4倍体积份的水中，依次用1倍水体积量的石油醚萃取3次，1倍水体积量的乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯萃取液，减压回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物；

（3）取乙酸乙酯萃取物，用等重量的200-300目硅胶拌样，挥干溶剂，另取8倍乙酸乙酯萃取物重量的200-300目硅胶，用体积比20:1的石油醚-乙酸乙酯湿法上普通玻璃层析柱，加样，先用4倍柱体积的体积比20:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，弃去该洗脱液，再用体积比10:1的石油醚-乙酸乙酯洗脱，通过薄层层析法检测流出液，收集含有乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的流出液，减压浓缩至干，得浓缩物；

（4）将浓缩物用3倍体积的乙酸乙酯溶解，加入7倍乙酸乙酯体积量的石油醚，边加边搅拌，静置，沉淀抽滤，用石油醚洗涤4次，干燥，得乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮混合物；

（5）将混合物用5倍体积的甲醇溶解，另取130倍混合物重量的200-300目C₁₈反相硅胶，用75%甲醇湿法上普通玻璃层析柱，加样，用75%甲醇洗脱，通过薄层层析法检测流出液，分别收集含有乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮的流分，减压浓缩至干，得乔松素和2’,4’-二羟基查尔酮。