CN103800418B - 一种活血止痛组合物及胶囊制备工艺和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种活血止痛组合物及胶囊制备工艺和应用，其特征在于，组合物选用原料的重量份为当归35-55份、三七6-11份、醋制乳香7-12份、冰片1.5-3.5份、土鳖虫17-27份、煅自然铜9-13份，微晶纤维素6-9份、淀粉4-6份；其中，当归采用超临界流体萃取后药渣用乙醇提取水沉淀；三七粉碎后乙醇提取、大孔树脂纯化；乳香醋制后超临界流体萃取；冰片用环糊精包合；自然铜煅制后水煎煮；土鳖虫水煎煮乙醇沉淀。

Description

一种活血止痛组合物及胶囊制备工艺和应用

技术领域

本发明属于中药制药领域，具体涉及一种具有活血散瘀、消肿止痛作用，用于跌打损伤、淤血消肿的药物组合物的制备方法。

背景技术

活血止痛胶囊是经典中成药，该处方源自孙思邈《千金方》中的活血止痛散，现收载于《中国药典》2010版第二增补本。该药主要用于外伤疼痛。方中当归虽为妇科圣药，但却有明显扩张外周血管，降低血管阻力，增加循环血流量作用。并有补血活血，抗血小板聚集，抗血栓形成，增强免疫功能，抗炎、消肿、镇痛等作用。三七为金创要药，具有明显镇痛和抗炎作用，多用于瘀血阻滞，跌打损伤等。两药在同一复方里，达到既活血又可防止出血的效果，可谓相得益彰。乳香具有止痛作用。冰片常用于许多复方中，在局部有一定的止痛及温和的反腐作用，内服则可消炎止痛和扩张血管，改善微循环功效。另两味药土鳖虫和自然铜都有促进骨折愈合，散瘀止痛之效，合用于活血止痛胶囊中，对治疗跌打损伤不无裨益。该药方组方合理、临床反应较好，为治疗跌打损伤、淤血肿痛的首选药物。但是，目前药典中关于该活血止痛胶囊以原药材粉碎后简单装胶囊入药，该制法存在以下缺点：1、砷盐严重超标。该药由矿物药自然铜等组成，自然铜的砷盐含量为500-700ppm，该药在方中的组成比例为13.33%，故原剂型的砷盐含量在60-80ppm，大大超过现行10ppm的安全标准。2、微生物含量易超标，难以达到卫生学要求。由于原剂型含有虫类药物（土鳖虫）等药材，由其原药材粉末分装的制剂往往达不到卫生学指标，并影响其质量及稳定性。3、制剂稳定性差。冰片的成分很容易升华损失，原药材粉末直接灌装均易导致制剂不稳定。4、生物利用度低。各药材均直接粉碎入药，没有很好地根据各原料药的特点进行加工、提取、纯化等，使得各原药材的功效没有充分利用，从而导致生物利用度低。

超临界流体萃取技术（SFE）是20世纪兴起的一种提取、分离技术。兼具气、液两者的特点，密度接近于液体，粘度和扩散系数接近于气体，不仅具有与液体溶剂相当的溶解能力，而且具有优良的传质性能。影响超临界提取的因素有SFE的流体比，CO₂流量、压力、时间、温度、粉碎粉粒度等。压力是SFE中最重要的参数。一定温度下，随着压力的增大，流体密度显著增加，溶质的溶解度增大，萃取效率提高。但过高的压力使生产成本明显提高，其萃取率增加有限。在SFE过程中，温度增加，加强了其扩散能力，使得被萃取物在超临界CO₂中溶解度增加，有利于萃取。但随着温度的增加，杂质的溶解度也增加，使精制过程负责化，从而降低产品的收率。同时，温度增加，CO₂流体的密度降低，使得对溶质的溶解力下降，降低产品收率。萃取时间增加，有利于超临界流体与溶质中有效成分的溶解平衡，增加萃取的时间就增加萃取得率。由于萃取一定时间后，随着溶质中有效成分的减少，再增加萃取时间，萃取得率增加缓慢，能耗增加，而且有些无效成分也更多地被萃取出来，直接影响产品的质量。

大孔吸附树脂是一种不溶于酸、碱及各种有机溶剂的有机高分子聚合物，孔径与比表面积都比较大，在树脂内部具有三维空间立体孔结构，具有物理化学稳定性高、比表面积大、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、节省费用、提高分离率等诸多优点，改变了传统中药制剂的粗、黑、大现象，有利于中药制剂剂型的升级换代，促进中药现代化眼睛的发展。

包合物技术可使药物在体内的达峰时间缩短，促进药物在体内的吸收、达峰浓度升高，提高生物利用度，并使药物在体内的滞留时间缩短，消除半衰期缩短，消除迅速，使药物在达到治病疗效的同时不会在体内滞留很长时间，减少副作用。

ZL200610096420.X公开了一种活血止痛胶囊的制备方法，该专利将超临界萃取技术、包合技术及超微粉碎技术应用于活血止痛胶囊制备工艺，具体步骤是将当归与乳香粉碎后超临界萃取、包合，后药渣乙醇提取，冰片用环糊精包合，自然铜与土鳖虫水煎煮，三七超微粉碎，再将包合物、提取浸膏、三七粉混合制粒装胶囊。该制备方法较药典的简单粉碎技术有了较大提高，但仍存在一些不足，如乳香、当归合并提取，土鳖虫和自然铜合并提取，这些药味各成分间相互作用复杂，影响有效成分的充分提取；并且，提取条件各有最适合的，合并提取难以对各药味的单独提取条件做最适合的筛选。同时，该制备方法没有对三七进行提取精制，不能有效富集药效成分，从而降低了生物利用度等。

发明内容

本发明的目的是提供一种活血止痛组合物及胶囊制备工艺和应用。

本发明的目的是通过下列技术方案实施的：

一种活血止痛组合物，选用原料的重量份为当归35-55份、三七6-11份、醋制乳香7-12份、冰片1.5-3.5份、土鳖虫17-27份、煅自然铜9-13份，微晶纤维素6-9份、淀粉4-6份；其中，当归采用超临界流体萃取后药渣用乙醇提取；三七粉碎后乙醇提取、大孔树脂纯化；乳香醋制后超临界流体萃取后药渣采用乙醇回流提取；冰片用环糊精包合；自然铜煅制后水煎煮；土鳖虫水煎煮。

本发明所提供的另一种技术方案是；

一种活血止痛组合物胶囊的制备方法：

其中，选用原料的重量份为当归35-40份、三七8-10份、醋制乳香7-9份、冰片1.5-2.5份、土鳖虫18-21份、煅自然铜10-12份，微晶纤维素3-4份、淀粉5-6份；

（1）按重量份配比称取原料药当归、三七、醋制乳香、冰片、土鳖虫、煅自然铜，备用；

（2） 取当归粉碎成颗粒，于CO₂超临界萃取釜中萃取挥发油，其中压力为30-35Mpa，萃取釜温度为45-55℃，CO₂流速为15-25L/h，萃取时间为1.0-2.5小时，收集当归挥发油（Ⅰ）备用；剩余药渣用5-7倍量的浓度为75-85%的乙醇回流提取2-3次，每次2-3小时，收集回流液过滤，回收乙醇至无醇味，加原药材2倍用量的热水，慢加搅拌溶解，静置沉淀，过滤去除沉淀，浓缩至相对密度为1.05-1.15的清膏Ⅰ，备用；

（3）取三七粉碎成颗粒，用7-9倍量60-70%乙醇回流提取2-3次，每次1-2小时，收集回流液过滤，回收乙醇至提取液含生药0.1-0.3g/mL，滤过，将该醇提液以1-5BV/h的流速加入AB-8型大孔吸附树脂柱中吸附，静置3-5小时，然后用6-8倍柱体积的水溶液以4-6BV/h的流速进行清洗，再用30-80%乙醇溶液以3-5BV/h的流速洗脱，乙醇洗脱倍数为8-12倍，树脂用量与上柱的药材量比为5-7：1，树脂柱径高比为1:5-8,收集乙醇洗脱液，浓缩成60℃时相对密度为1.20的清膏（Ⅱ）；

（4）取醋制乳香粉碎成颗粒，于CO₂超临界萃取釜中萃取挥发油，其中压力为20-40Mpa，萃取釜温度为50-60℃，CO₂流速为10-20L/h，萃取时间为2.0-3.5小时，收集乳香挥发油（Ⅱ）备用；

（5）取煅自然铜粉用布袋包裹，以6-10倍量的水提取1-2次，每次2-3小时，合并提取液，静置，取上清液，滤过，滤液减压浓缩至70℃时1.05-1.20的清膏(Ⅲ)；

（6）取土鳖虫，以4-6倍量水提取2-3次，每次0.5-1小时，合并提取液，浓缩合并提取液至相对密度为1.15的清膏，再加入95%乙醇使乙醇浓度为70-85%，静置24h，分离除去沉淀，回收乙醇得清膏Ⅳ；

（7）取冰片，用20倍量的乙醇溶解，另取冰片用量6-10倍的β-环糊精，溶解于水中，再将冰片溶液缓缓滴入β-环糊精溶液中，滴完后继续搅拌30分钟，放置冰箱中24-48小时，抽滤，蒸馏水洗涤，干燥即得冰片包合物；

（8）取当归挥发油Ⅰ和乳香挥发油Ⅱ混合后以少量乙醇溶解，另取两种挥发油总量20-30倍量的β-环糊精,加入β-环糊精重量3-6倍量的水研匀，再在其中加入当归挥发油Ⅰ和乳香挥发油Ⅱ乙醇溶解液，研磨成糊状，低温干燥后，用乙醇溶液洗净，干燥即得当归和乳香挥发油包合物；

（9）取清膏Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别减压真空干燥得干膏，粉碎成细粉，再混合均匀，加入当归、乳香挥发油包合物、微晶纤维素以及淀粉混合，以60-80%乙醇为粘合剂制成软材，制粒、干燥、整粒，加入冰片包合物，混匀，装胶囊。

更优选的技术方案是：

一种活血止痛组合物胶囊的制备方法：

其中，选用原料的重量份为当归40份、三七8份、醋制乳香8份、冰片2份、土鳖虫20份、煅自然铜12份，微晶纤维素6份、淀粉5份；

（1）按重量份配比称取原料药当归、三七、醋制乳香、冰片、土鳖虫、煅自然铜，备用；

（2） 取当归粉碎成颗粒，于CO₂超临界萃取釜中萃取挥发油，其中压力为35Mpa，萃取釜温度为50℃，CO₂流速为18L/h，萃取时间为2小时，收集当归挥发油（Ⅰ）备用；剩余药渣用6倍量的浓度为80%的乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，收集回流液过滤，回收乙醇至无醇味，加原药材2倍用量的热水，慢加搅拌溶解，静置沉淀，过滤去除沉淀，浓缩至相对密度为1.10的清膏Ⅰ，备用；

（3）取三七粉碎成颗粒，用9倍量70%乙醇回流提取3次，每次2小时，收集回流液过滤，回收乙醇至提取液含生药0.2g/mL^-1，滤过，将该醇提液以3BV/h的流速加入AB-8型大孔吸附树脂柱中吸附，静置5小时，然后用7倍柱体积的水溶液以4BV/h的流速进行清洗，再用70%乙醇溶液以3BV/h的流速洗脱，乙醇洗脱倍数为10倍，树脂用量与上柱的药材量比为6：1，树脂柱径高比为1:7,收集乙醇洗脱液，浓缩成60℃时相对密度为1.20的清膏（Ⅱ）；

（4）取醋制乳香粉碎成颗粒，于CO₂超临界萃取釜中萃取挥发油，其中压力为40Mpa，萃取釜温度为60℃，CO₂流速为15L/h，萃取时间为3小时，收集乳香挥发油（Ⅱ）备用；

（5）取煅自然铜粉用布袋包裹，以8倍量的水提取1次，提取3小时，静置，取上清液，滤过，滤液减压浓缩至70℃时1.10的清膏(Ⅲ)；

（6）取土鳖虫，以5倍量水提取2次，第一次1小时，第二次0.5小时，合并提取液，浓缩至相对密度为1.15的清膏，再加入95%乙醇使乙醇浓度为75%，静置24h，分离除去沉淀，回收乙醇得清膏Ⅳ；

（7）取冰片，用20倍量的乙醇溶解，另取冰片用量7倍的β-环糊精，溶解于水中，再将冰片溶液缓缓滴入β-环糊精溶液中，滴完后继续搅拌30分钟，放置冰箱中48小时，抽滤，蒸馏水洗涤，干燥即得冰片包合物；

（8）取当归挥发油Ⅰ和乳香挥发油Ⅱ混合后以少量乙醇溶解，另取两种挥发油总量25倍量的β-环糊精,加入β-环糊精重量4倍量的水研匀，再在其中加入当归挥发油Ⅰ和乳香挥发油Ⅱ乙醇溶解液，研磨成糊状，低温干燥后，用乙醇溶液洗净，干燥即得当归和乳香挥发油包合物；

（9）取清膏Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别减压真空干燥得干膏，粉碎成细粉，再混合均匀，加入当归、乳香挥发油包合物、微晶纤维素以及淀粉混合，以75%乙醇为粘合剂制成软材，制粒、干燥、整粒，加入冰片包合物，混匀，装胶囊。

本发明的活血止痛胶囊制备方法具有如下有益效果：

1. 对药典中简单粉碎混合装胶囊步骤进行工艺改进，提取各原料药有效成分，降低砷盐等重金属含量，提高制剂稳定性。

2. 各原料药的提取方法经过大量工艺条件筛选，用单因素分析、方差分析等数理统计方法确定最适合工艺条件，从而保证产品技术效果，并有效提高生物利用度。

3. 对三七进行乙醇提取、大孔树脂精制，提高其中有效成分三七总皂苷类成分含量；乳香、当归挥发油以及自然铜、土鳖虫分开提取，避免相互之间的干扰因素，选择各原料药最佳提取工艺，提高有效成分含量；省去乳香挥发油药渣乙醇提取步骤，减少工艺步骤，节省生产成本，并且不会对终产品的药效带来影响。

本发明的活血止痛软胶囊是纯天然药品，具有活血散瘀、消肿止痛的功效， 主要用于治疗跌打损伤，瘀血肿痛，通过临床验证，并且可以应用于骨折，腰腿 疼，肩周炎，关节炎，深部瘀血肿痛，心脑血管等疾病。

通过以上工艺条件的改进组合而成的活血止痛胶囊产品的治疗效果较原产品有很大提高，稳定性也相对提高。

下面对部分工艺条件筛选步骤实验进行举例：

三七提取纯化工艺研究

1. 用正交试验法确定三七提取方法

影响醇提工艺的主要因素有乙醇浓度、溶剂倍量、回流时间和提取次数。上述4个因素各取3个水平进行L₉(3⁴)正交试验，取三七粗粉20g，以干膏得率、三七总皂苷为评价指标，筛选最佳提取工艺，实验安排及结果见表1

表1 因素水平表

以干膏得率为指标，极差分析结果：A>D>B>C。即影响醇提效果的因素顺序为乙醇浓度>提取次数>溶剂倍量>提取时间。最佳工艺条件为A₃B₃C₂D₃,即70%乙醇，9倍量，每次2小时，提取3次。以C因素为误差项进一步方差分析，乙醇浓度对醇提结果有显著影响。

以三七总皂苷为指标，极差分析结果：A>D>B>C。即影响醇提效果的因素顺序为乙醇浓度>提取次数>溶剂倍量>提取时间。最佳工艺条件为A₃B₃C₂D₃,即70%乙醇，9倍量，每次2小时，提取3次。以C因素为误差项进一步方差分析，乙醇浓度对醇提结果有显著影响。

2. 三七提取液大孔树脂精制工艺优化

2.1树脂类型的优选

    采用静态吸附法，通过测定吸附残液和解吸液的指标成分含量筛选最适树脂。

选择3种树脂类型D101、HPD300、AB-8进行测定，检测其中三七总皂苷的吸附量和解吸量，计算各树脂室温下的比吸附量（mg/ml）和解吸率（%）。

比吸附量＝（吸附前浓度-吸附后浓度）×吸附液体积/树脂体积

       

结果见表2

表2 静态吸附解吸附效果比较

注：吸附解吸结果＝吸附量×解吸量

试验结果表明，AB-8型树脂对三七总皂苷吸附解析效果较其他树脂类型有显著差异。

2.2最大上样体积确定

分别量取已离心药液150、180、210ml（分别为相当于药材量的5倍、6倍、7倍）加至已处理好的30ml树脂柱上，用7BV水洗至近无色，用60%乙醇洗脱，收集洗脱液测定其中栀子苷含量，结果见表3。

表3  最大上样体积及洗脱溶剂确定

上表可以看出，最大上样体积影响无显著差异，但210ml上样量后的纯度最高，故选择210ml上样量为最大上样量，即7BV。

2.3径高比确定

将已处理好的湿体积为13ml、20ml、26ml的树脂分别装于3根相同规格的柱上，使树脂径高比分别为1/5、1/7、1/8，取药液分别上样，以1BV/h （0.3ml/min）速度进行动态吸附，薄层TLC显示吸附终点，用7BV水洗脱至近无色，再分别用60%乙醇洗脱，测定三七总皂苷的比吸附量、洗脱率，结果见表4。

表4   径高比确定数据

根据试验结果确定用径高比为1/7进行试验，径高比1/7较其他径高比洗脱率有显著性差异。

2.4 吸附流速确定

取药液分别上样于已处理好的湿体积为20ml的3根树脂柱，上样140ml，分别以1、3、5BV/h的流速进行动态吸附，以薄层指示吸附终点，用7BV水洗脱至近无色，再分别用60%乙醇洗脱，测定洗脱下来的三七总皂苷含量，结果见表5。

表5  吸附流速确定

分析所测数据和上表看出吸附流速应选择3BV/h。

2.5 解吸速度确定

取药液分别上样于已处理好的湿体积为20ml的3根树脂柱，上样140ml，以3BV/h的速度吸附，用7BV水洗脱，再用60%乙醇分别以6、8、10BV/h的流速进行解吸附，测定栀子苷洗脱率，结果见表6。

表6 解吸速度确定

由上表可以看出解吸流速对三七总皂苷纯度的影响较大，以3BV/h最佳，故选3BV/h作为解吸流速。

2.6 乙醇洗脱体积考察

取处理好的树脂20ml，装于层析柱中，使径高比为1/7，精密吸取0.1g浸膏/ml的药液140ml，，以3BV/h的流速进行动态吸附后，以8BV/h的流速进行洗脱，首先用水洗7BV，再用30%乙醇洗脱，每20ml收集一份，共收集10份，测定各流份中栀子苷的含量，绘制洗脱曲线，以确定30%乙醇的最佳洗脱体积。结果见表7。

表7 乙醇洗脱体积的考察

由上表可知，三七总皂苷洗脱10BV时已基本全部洗脱下来，洗脱率可达98%以上，因此确定乙醇洗脱体积为10BV。

小结：选用AB-8型树脂富集纯化三七的有效成分；树脂径高比为1/7；上样液浓度为0.1g/ml；树脂用量与上柱的药材量比为6：1；吸附速度为3BV/h；洗脱速度为3BV/h；水洗脱体积为7BV；洗脱溶剂为70%乙醇，用量为10BV。

2.7 验证实验

按上述大孔吸附树脂富集纯化工艺制备3批样品，测定三七总皂苷的含量。结果见表8。

表8  验证试验

结果：由上表三七总皂苷含量看出，该纯化工艺稳定可行。    

本发明的药效学实验

本实验研究活血止痛胶囊（新工艺）（按实施例2制得，下同）的镇痛、抗炎、抗凝血和抗血栓几方面的作用，证实其主要药效学功效。

1. 活血止痛胶囊（新工艺）抗凝血作用试验

（1）. 实验动物

ICR小鼠（雌雄各半）

（2）. 试验药物

实施例2获得的药物，按照原工艺1（收载于《中国药典》2010版第二增补本）和原工艺2（ZL200610096420.X公开的一种活血止痛胶囊的制备方法）分别获得的药物。

（3）. 动物模型的建立与实验方法

（3.1） 动物分组

根据受试药物分组，每组10只，设定为空白组（0.5 % CMC-Na ）、对照组1（原工艺1）、对照组2（原工艺2）、受试药物组（本发明中药组合物实施例2）。

（3.2） 采用毛细管法测定小鼠凝血时间试验

动物连续灌胃给药6 天，末次给药前禁食12 小时，第7 天给药lh 后，摘眼球取血至内径为lmm 的玻璃毛细管，开始计时，至毛细管血柱达5cm ，前lmin 每隔30s折断毛细管一段，超过1 min 每隔10s 折断毛细管一段，检查有无出现凝血丝。计算毛细管采血到出现血凝丝时间，即为凝血时间，各实验组凝血时间均值与对照组比较并进行t 检验，结果见表9。

（3.3） 实验结果与分析

表9 毛细血管法测定小鼠凝血时间

药物	给药剂量（生药量g/Kg）	动物数量	凝血时间（S）
				空白组	0	10	108.5±20.9
对照组1	1.0	10	161.6±10.5*
				对照组2	1.0	10	202.9±16.3△
受试药物组	1.0	10	290.8±27.4*△☆
				受试药物组	0.75	10	259.3±15.3*△

*/△/☆:P<0.01,具有显著性差异。

实验结果表明本发明制备方法制得的活血止痛胶囊剂凝血时间与对照组比较有极显著差异，具有更好的凝血镇痛效果 (P＜0.01)，说明活血止痛胶囊(新工艺)能明显延长小鼠凝血时间。

2. 活血止痛胶囊（新工艺）抗炎试验

（1）. 实验动物

ICR小鼠（雌雄各半）

（2）. 试验药物

实施例2获得的药物，按照原工艺1（收载于《中国药典》2010版第二增补本）和原工艺2（ZL200610096420.X公开的一种活血止痛胶囊的制备方法）分别获得的药物。

（3）. 动物模型的建立与实验方法

（3.1） 动物分组

根据受试药物分组，每组15只，设定为空白组（0.5 % CMC-Na ）、对照组1（原工艺1）、对照组2（原工艺2）、受试药物组（本发明中药组合物实施例2）。

（3.2）二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用试验

取小鼠，按体重随机分组，连续灌胃给药6天，禁食12小时过夜，第7天再给药一次，末次给药1小时后，在小鼠右耳的前后两面均匀涂布二甲苯0.05mL，左耳 不做任何处理。各组分别于致炎后60分钟脱颈椎处死小鼠，剪下双耳用7mm直径打 孔器分别在双耳相同部位打下圆耳片，电子天平称质量。计算肿胀度及肿胀抑制率，比 较给药组与对照组差异情况，统计学采用组间t-student检验，结果见表10.

表10 二甲苯致小鼠耳肿胀的抑制作用试验结果

☆: P＜0.01，与空白组比较(t检验)

*/△：P＜0.05，与原工艺组比较

试验结果表明，活血止痛胶囊(新工艺)高、低剂量组的耳廓肿胀度与对照组比较有极显著差异(P＜0.01)，说明活血止痛胶囊(新工艺)对二甲苯致小鼠耳肿胀有极显著的抑制作用。与活血止痛胶囊(原工艺)比较，同等给药量下抗炎作用疗效更好(P＜0.05)。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进行进一步描述。以下实施例仅为本发明的几个具体实施例，但本发明的设计构思并不局限于此，凡利用此构思对本发明进行非实质性的改动，均应属于侵犯本发明保护范围的行为。

实施例1

当归35份、三七8份、醋制乳香7份、冰片1.5份、土鳖虫18份、煅自然铜10份，微晶纤维素3份、淀粉6份；

（1）按重量份配比称取原料药当归、三七、醋制乳香、冰片、土鳖虫、煅自然铜，备用；

（2） 取当归粉碎成颗粒，于CO₂超临界萃取釜中萃取挥发油，其中压力为35Mpa，萃取釜温度为55℃，CO₂流速为15L/h，萃取时间为1.0小时，收集当归挥发油（Ⅰ）备用；剩余药渣用7倍量的浓度为75%的乙醇回流提取2次，每次2小时，收集回流液过滤，回收乙醇至无醇味，加原药材2倍用量的热水，慢加搅拌溶解，静置沉淀，过滤去除沉淀，浓缩至相对密度为1.05-的清膏Ⅰ，备用；

（3）取三七粉碎成颗粒，用9倍量60%乙醇回流提取3次，每次1小时，收集回流液过滤，回收乙醇至提取液含生药0.1g/mL，滤过，将该醇提液以2BV/h的流速加入AB-8型大孔吸附树脂柱中吸附，静置3小时，然后用6倍柱体积的水溶液以4BV/h的流速进行清洗，再用50%乙醇溶液以3BV/h的流速洗脱，乙醇洗脱倍数为8倍，树脂用量与上柱的药材量比为5：1，树脂柱径高比为1: 8,收集乙醇洗脱液，浓缩成60℃时相对密度为1.20的清膏（Ⅱ）；

（4）取醋制乳香粉碎成颗粒，于CO₂超临界萃取釜中萃取挥发油，其中压力为25Mpa，萃取釜温度为60℃，CO₂流速为16L/h，萃取时间为2.0小时，收集乳香挥发油（Ⅱ）备用；

（5）取煅自然铜粉用布袋包裹，以6倍量的水提取1次， 3小时，合并提取液，静置，取上清液，滤过，滤液减压浓缩至70℃时1.15的清膏(Ⅲ)；

（6）取土鳖虫，以5倍量水提取2次，每次0.5小时，合并提取液，浓缩合并提取液至相对密度为1.15的清膏，再加入95%乙醇使乙醇浓度为80%，静置24h，分离除去沉淀，回收乙醇得清膏Ⅳ；

（7）取冰片，用20倍量的乙醇溶解，另取冰片用量9倍的β-环糊精，溶解于水中，再将冰片溶液缓缓滴入β-环糊精溶液中，滴完后继续搅拌30分钟，放置冰箱中24小时，抽滤，蒸馏水洗涤，干燥即得冰片包合物；

（8）取当归挥发油Ⅰ和乳香挥发油Ⅱ混合后以少量乙醇溶解，另取两种挥发油总量30倍量的β-环糊精,加入β-环糊精重量6倍量的水研匀，再在其中加入当归挥发油Ⅰ和乳香挥发油Ⅱ乙醇溶解液，研磨成糊状，低温干燥后，用乙醇溶液洗净，干燥即得当归和乳香挥发油包合物；

（9）取清膏Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别减压真空干燥得干膏，粉碎成细粉，再混合均匀，加入当归、乳香挥发油包合物、微晶纤维素以及淀粉混合，以60%乙醇为粘合剂制成软材，制粒、干燥、整粒，加入冰片包合物，混匀，装胶囊。

实施例2

其中，选用原料的重量份为当归40份、三七8份、醋制乳香8份、冰片2份、土鳖虫20份、煅自然铜12份，微晶纤维素6份、淀粉5份；

（1）按重量份配比称取原料药当归、三七、醋制乳香、冰片、土鳖虫、煅自然铜，备用；

（2） 取当归粉碎成颗粒，于CO₂超临界萃取釜中萃取挥发油，其中压力为35Mpa，萃取釜温度为50℃，CO₂流速为18L/h，萃取时间为2小时，收集当归挥发油（Ⅰ）备用；剩余药渣用6倍量的浓度为80%的乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，收集回流液过滤，回收乙醇至无醇味，加原药材2倍用量的热水，慢加搅拌溶解，静置沉淀，过滤去除沉淀，浓缩至相对密度为1.10的清膏Ⅰ，备用；

（3）取三七粉碎成颗粒，用9倍量70%乙醇回流提取3次，每次2小时，收集回流液过滤，回收乙醇至提取液含生药0.2g/mL^-1，滤过，将该醇提液以3BV/h的流速加入AB-8型大孔吸附树脂柱中吸附，静置5小时，然后用7倍柱体积的水溶液以4BV/h的流速进行清洗，再用70%乙醇溶液以3BV/h的流速洗脱，乙醇洗脱倍数为10倍，树脂用量与上柱的药材量比为6：1，树脂柱径高比为1:7,收集乙醇洗脱液，浓缩成60℃时相对密度为1.20的清膏（Ⅱ）；

（4）取醋制乳香粉碎成颗粒，于CO₂超临界萃取釜中萃取挥发油，其中压力为40Mpa，萃取釜温度为60℃，CO₂流速为15L/h，萃取时间为3小时，收集乳香挥发油（Ⅱ）备用；

（5）取煅自然铜粉用布袋包裹，以8倍量的水提取1次，提取3小时，静置，取上清液，滤过，滤液减压浓缩至70℃时1.10的清膏(Ⅲ)；

（6）取土鳖虫，以5倍量水提取2次，第一次1小时，第二次0.5小时，合并提取液，浓缩至相对密度为1.15的清膏，再加入95%乙醇使乙醇浓度为75%，静置24h，分离除去沉淀，回收乙醇得清膏Ⅳ；

（7）取冰片，用20倍量的乙醇溶解，另取冰片用量7倍的β-环糊精，溶解于水中，再将冰片溶液缓缓滴入β-环糊精溶液中，滴完后继续搅拌30分钟，放置冰箱中48小时，抽滤，蒸馏水洗涤，干燥即得冰片包合物；

（8）取当归挥发油Ⅰ和乳香挥发油Ⅱ混合后以少量乙醇溶解，另取两种挥发油总量25倍量的β-环糊精,加入β-环糊精重量4倍量的水研匀，再在其中加入当归挥发油Ⅰ和乳香挥发油Ⅱ乙醇溶解液，研磨成糊状，低温干燥后，用乙醇溶液洗净，干燥即得当归和乳香挥发油包合物；

（9）取清膏Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别减压真空干燥得干膏，粉碎成细粉，再混合均匀，加入当归、乳香挥发油包合物、微晶纤维素以及淀粉混合，以75%乙醇为粘合剂制成软材，制粒、干燥、整粒，加入冰片包合物，混匀，装胶囊。

Claims (2)

1..一种活血止痛组合物胶囊的制备方法，其特征在于，其中，选用原料的重量份为当归40份、三七8份、醋制乳香8份、冰片2份、土鳖虫20份、煅自然铜12份，微晶纤维素6份、淀粉5份；

（1）按重量份配比称取原料药当归、三七、醋制乳香、冰片、土鳖虫、煅自然铜，备用；

（2） 取当归粉碎成颗粒，于CO₂超临界萃取釜中萃取挥发油，其中压力为35Mpa，萃取釜温度为50℃，CO₂流速为18L/h，萃取时间为2小时，收集当归挥发油（Ⅰ）备用；剩余药渣用6倍量的浓度为80%的乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，收集回流液过滤，回收乙醇至无醇味，加原药材2倍用量的热水，慢加搅拌溶解，静置沉淀，过滤去除沉淀，浓缩至相对密度为1.10的清膏Ⅰ，备用；

（3）取三七粉碎成颗粒，用9倍量70%乙醇回流提取3次，每次2小时，收集回流液过滤，回收乙醇至提取液含生药0.2g/mL^-1，滤过，将该醇提液以3BV/h的流速加入AB-8型大孔吸附树脂柱中吸附，静置5小时，然后用7倍柱体积的水溶液以4BV/h的流速进行清洗，再用70%乙醇溶液以3BV/h的流速洗脱，乙醇洗脱倍数为10倍，树脂用量与上柱的药材量比为6：1，树脂柱径高比为1:7,收集乙醇洗脱液，浓缩成60℃时相对密度为1.20的清膏（Ⅱ）；

（4）取醋制乳香粉碎成颗粒，于CO₂超临界萃取釜中萃取挥发油，其中压力为40Mpa，萃取釜温度为60℃，CO₂流速为15L/h，萃取时间为3小时，收集乳香挥发油（Ⅱ）备用；

（5）取煅自然铜粉用布袋包裹，以8倍量的水提取1次，提取3小时，静置，取上清液，滤过，滤液减压浓缩至70℃时1.10的清膏(Ⅲ)；

（6）取土鳖虫，以5倍量水提取2次，第一次1小时，第二次0.5小时，合并提取液，浓缩至相对密度为1.15的清膏，再加入95%乙醇使乙醇浓度为75%，静置24h，分离除去沉淀，回收乙醇得清膏Ⅳ；

（7）取冰片，用20倍量的乙醇溶解，另取冰片用量7倍的β-环糊精，溶解于水中，再将冰片溶液缓缓滴入β-环糊精溶液中，滴完后继续搅拌30分钟，放置冰箱中48小时，抽滤，蒸馏水洗涤，干燥即得冰片包合物；

（8）取当归挥发油Ⅰ和乳香挥发油Ⅱ混合后以少量乙醇溶解，另取两种挥发油总量25倍量的β-环糊精,加入β-环糊精重量4倍量的水研匀，再在其中加入当归挥发油Ⅰ和乳香挥发油Ⅱ乙醇溶解液，研磨成糊状，低温干燥后，用乙醇溶液洗净，干燥即得当归和乳香挥发油包合物；

（9）取清膏Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别减压真空干燥得干膏，粉碎成细粉，再混合均匀，加入当归、乳香挥发油包合物、微晶纤维素以及淀粉混合，以75%乙醇为粘合剂制成软材，制粒、干燥、整粒，加入冰片包合物，混匀，装胶囊。

2.权利要求1所述的一种活血止痛组合物胶囊的制备方法制备的活血止痛胶囊。

    3. 权利要求1所述的一种活血止痛组合物胶囊的制备方法制备的活血止痛组合物在制备活血止痛药物中的应用。

4.权利要求1所述的一种活血止痛组合物胶囊的制备方法制备胶囊在制备用于治疗跌打损伤，瘀血肿痛，骨折，腰腿 疼，肩周炎，关节炎，深部瘀血肿痛，心脑血管疾病的药物中的应用。