CN101037468A - 一种牡蛎活性肽的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种利用酶法水解牡蛎蛋白及利用柱层析技术分离纯化牡蛎活性肽的方法。将牡蛎剥壳、清洗、匀浆、加入蒸馏水得到牡蛎浆液在低温下提取；絮凝、离心去渣，取上清液，将上清液冻干后，用Sephacryl s－100 HR柱分离或将牡蛎浆液酶解、灭酶、离心去渣、冻干得到粗提物，粗提物进行凝胶柱层析；收集各峰，再用离子交换柱层析进行分离纯化，收集有活性的各峰，冻干后，用凝胶柱脱盐，得到牡蛎天然活性多肽纯品。通过本发明的制备方法得到的牡蛎活性多肽纯度较高，具有抗肿瘤活性，而且该活性肽是天然提取的物质，提取过程中对其生物活性进行了有效的保护，可以作为药品加以开发利用。

Description

一种牡蛎活性肽的制备方法

技术领域：

本发明涉及一种牡蛎活性肽的制备方法，具体地说是利用酶法水解牡蛎蛋白及利用超滤及柱层析技术分离纯化牡蛎活性肽的方法，属于海洋天然产物与医药技术领域。

背景技术：

牡蛎(Oyster)是一种海产贝类。牡蛎在分类上属于软体动物门，瓣鳃纲，异柱目，牡蛎超科，牡蛎科，它是一种食药两用的双壳贝海产品。在我国南北沿海均有养殖，特别是广东省近几年来发展较快，牡蛎肉质乳白、细嫩、营养丰富，除含有丰富的蛋白质、维生素和糖类等营养成分外，还含有人体必需的十多种氨基酸、矿物质营养成分等。现研究还证明，牡蛎中含有丰富的糖原，是人体内细胞进行代谢能源，可改善心脏及血液循环功能，并能增进肝脏的功能，具有保肝作用。糖原可直接为机体吸收利用，从而减轻胰腺负担，对糖尿病的防治十分有利。牡蛎提取物有抗菌作用，对脊髓灰质炎病毒和流感病毒有抑制作用，其水溶性成分尚可提高动物机体免疫力等等。牡蛎中含有丰富的生物活性物质，具有显著的医疗保健功效。

从牡蛎中提取活性物质的研究早有报道，并且具有显著医疗保健作用的牡蛎保健食品已经有大量销售。如深圳海王集团在牡蛎相关产品的开发研究中，已经取得了显著的经济效益和社会效益，为了进一步推进该项目的产业化发展，正在努力研发高效的牡蛎保健食品和药品。专利文献“一种牡蛎活性肽的制备方法”，是以太平洋牡蛎为原料，采用酶法水解-纳滤脱盐浓缩工艺制备牡蛎活性肽的方法，属于食品生物技术领域，并未涉及到医药领域。近年来，欧洲、日本、美国等发达国家对牡蛎中生物活性物质的研究日益增多，但是真正从牡蛎中找到具有显著生物活性的物质，并作为药品进行开发的并未见报道。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种来源于牡蛎中的具有生物活性的多肽蛋白类物质的制备方法。通过本发明的制备方法得到的牡蛎活性多肽纯度较高，而且该活性肽是天然提取的物质，未经过任何化学修饰，提取过程中对其生物活性进行了有效的保护，可以作为药品成分加以开发利用。

为了实现上述发明目的，本发明是通过如下技术方案实现的：

将牡蛎剥壳、清洗、匀浆、加入蒸馏水得到牡蛎浆液在10℃以下低温提取；再絮凝、离心去渣，取上清液，将上清液冻干后，用葡聚糖凝胶(Sephacryl)s-100 HR柱分离(PH值为7.4的NH₄HCO₃缓冲液洗脱)，分别收集各峰后取有生物活性的峰再进行离子交换柱层析，收集有活性的各峰，冻干后，用凝胶柱脱盐，得到牡蛎天然活性多肽纯品，是未经任何化学修饰的天然提取的活性物质；或将牡蛎浆液酶解、灭酶、离心去渣、冻干得到粗提物，粗提物用葡聚糖凝胶Sephadex G25进行凝胶柱层析，分别收集各峰后取有生物活性的峰再进行离子交换柱层析进行分离纯化，收集有活性的各峰，冻干后，用凝胶柱脱盐，得到牡蛎天然活性多肽纯品，是天然提取的活性物质，属于分子量较小的寡肽。

本发明由于在提取过程对其提取成份的生物活性进行了有效的保护，使所得天然活性物质经体外抗肿瘤实验表明本发明提取的天然活性多肽具有抗肿瘤活性，有可能成为一种新型的抗肿瘤药物。

具体实施方式：

下面结合实施例对本发明做进一步的描述。

实施例1：

将牡蛎剥壳，取牡蛎肉，用4℃水清洗后，匀浆，按照1∶1的重量比例加入蒸馏水低温(4℃)提取2小时后，絮凝，离心去渣，取上清液，将上清液冻干后，用Sephacryl s-100 HR柱分离(0.03mol/lNH₄HCO₃缓冲液洗脱)，分别收集各峰后，取有生物活性的峰再用阴离子琼脂糖凝胶DEAE-Sepharose-FF离子交换柱层析(PH8.5Tris-HCl缓冲液，0～0.3mol/lNaCl梯度洗脱)，收集有活性的各峰，冻干后，用葡聚糖凝胶Sephadex G15凝胶柱脱盐，得到牡蛎天然活性多肽纯品。

实施例2：

将牡蛎剥壳、清洗、匀浆、按照1∶1的重量比例加入蒸馏水，并按照底物2％重量比加入胰蛋白酶，45℃酶解4小时、灭酶、离心去渣、冻干得到酶解粗提物，粗提物用葡聚糖凝胶Sephadex G25进行凝胶柱层析，收集各峰，再用阴离子琼脂糖凝胶DEAE-Sepharose-FF离子交换柱层析进行分离纯化(PH8.5Tris-HCl缓冲液，0～0.3mol/lNaCl梯度洗脱)，收集有活性的各峰，冻干后，用Sephadex G15凝胶柱脱盐，得到牡蛎天然活性多肽纯品。该活性肽是天然提取的物质，属于分子量较小的寡肽，提取过程对其生物活性进行了有效的保护。

Claims (3)

1、一种牡蛎活性肽的制备方法，其特征在于按照以下步骤制备：将牡蛎剥壳、清洗、匀浆、加入蒸馏水得到牡蛎浆液在10℃以下低温提取；再絮凝、离心去渣，取上清液，将上清液冻干后，经柱分离，NH₄HCO₃缓冲液洗脱或将牡蛎浆液酶解、灭酶、离心去渣、冻干得到粗提物，粗提物进行凝胶柱层析；分别收集各峰后取有生物活性的峰再进行离子交换柱层析，收集有活性的各峰，冻干后，用凝胶柱脱盐，得到牡蛎天然活性多肽纯品。

2、根据权利要求1所述的一种牡蛎活性肽的制备方法，其特征在于将牡蛎剥壳，取牡蛎肉，用4℃水清洗后，匀浆，按照1∶1的重量比例加入蒸馏水在4℃下提取2小时。

3、根据权利要求1所述的一种牡蛎活性肽的制备方法，其特征在于牡蛎匀浆上清液经柱分离，PH值为7.4的NH₄HCO₃缓冲液洗脱或酶解粗提物凝胶柱层析收集各峰后，取有生物活性的峰再用离子交换柱层析，用PH8.5Tris-HCl缓冲液，0～0.3mol/lNaCl梯度洗脱，收集有活性的各峰，冻干后，凝胶柱脱盐。