CN101461543B - 一种鹿血深加工方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及动物血液处理，具体地说是一种鹿血深加工方法，本发明以传统保健滋补品鹿血为原料，结合中医传统中有关鹿血的滋补功效，建立了具有抗氧化、抗衰老功能的超氧化歧化酶(superoxide dismutase，简称SOD)、补血功能的血红素和降血压、增强免疫力功能的活性肽的制备方法，其以新鲜的鹿血为原料，首先取1～2升鹿血，在4℃、3000～15000转/分钟转速下离心0.1～2小时，沉淀血细胞用于制备SOD和血红素、上清为鹿血血浆蛋白用于制备活性肽；本发明将几种活性组分提取和制备工艺集成，保留并提高了鹿血所有已知和未知的活性组分，与传统鹿血全血直接食用相比，功能明确的鹿血活性组分更具有应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及动物血液处理，具体地说是一种鹿血深加工方法。
背景技术
鹿血自古以来一直是珍贵的滋补品，中国历代的《本草纲目》、《本草新编》等本草书籍都有鹿血药用价值的记载。鹿血用于健身最早见于宋代《清波杂志》，明朝李时珍的《本草纲目》对鹿血的医疗作用作了详细记载：“主阳痿、补虚、止腰痛、跌伤、狂犬伤，和酒服制肺痿吐血，及崩中带下，诸气痛欲危者饮之立愈。大补虚损，益精血、解痘毒、药毒。我国古代早至宋朝起，皇宫贵族就养鹿取血生饮，但这种食用方式限制了鹿血的食用人群，亟待开发出食用方便、功效明确的鹿血保健品，使鹿血这一皇室滋补品走入寻常百姓家庭。
鹿血的主要成分血浆和血细胞，血浆中除水外还含有蛋白质、无机盐、葡萄糖及激素等组分。鹿血中含有丰富的蛋白质，含量达到13％。与人血清数据相比鹿血中锌和铁的含量显著提高(参考文献1：宋胜利，葛志广，梅花鹿血液微量元素与蛋白组分，中药材，1999，22(8)：382-383)，锌的含量是人血的两倍以上。锌是人体所必需的重要微量元素，参与人体免疫功能，不仅显著影响免疫功能还影响胰岛素、生长素和性激素等人体重要激素的分泌，鹿血的益精血等活性与其高含量的锌密切相关。锌还是超氧化歧化酶(superoxide dismutase，简称SOD)的金属配基，鹿血中含量丰富的锌元素预示着其SOD含量也很丰富。SOD是目前应用较广泛的一种生物酶，它的主要功能是特异性地清除体内生成过多的强氧化性物质和致衰老因子-超氧自由基，调节体内的氧化代谢和抗衰老功能。此外超氧化歧化酶具有抗辐射污染和消炎作用，且极易透过皮肤被吸收，它对酪氨酸酶诱发的黑色素有重要的抑制作用，对老年斑、雀斑、面部黄褐斑等皮肤色素沉积症有显著疗效，因此超氧化歧化酶是目前化妆品行业中研究最多、应用最广的一种生物酶。SOD作为一种药用酶，在医药界、生物界和食品界和化妆品行业中具有广阔的应用前景，临床上的应用主要集中在抗辐射、抗肿瘤、抗衰老及自身免疫性疾病等方面。
鹿血中铁含量是人血的十倍。鹿血中的铁以有机铁的形式存在，易于为人体所吸收，鹿血的补血活性与其高含量的有机铁相关，鹿血血红素将是很好的补血良药血红素也叫铁卟啉、血红素铁或氯化血红素，动物血来源的血红素是用于防治缺铁性贫血的，具有吸收好副作用小的优点，是纯天然的生物铁剂，广泛应用于药品及保健品。
鹿血中蛋白质含量占13％以上，是鹿血中的主要成分。蛋白质是由肽组成的，具有生理作用的肽类化合物称为功能肽或生物活性肽，活性肽具有抗氧化、降血压、提高免疫力、抗肿瘤、促进矿物质吸收等活性，用不同来源的蛋白质制备具有各种功能的活性肽已成为该领域的研究热点。具有保健功能的鹿血中丰富的蛋白质是非常理想的制备活性肽原料。
发明内容
本发明的目的是提供一种鹿血深加工方法，本发明是一个多技术的集成，SOD、血红素和活性肽的提取制备相互不影响，可同时获得三种活性组分，所获得的三种活性组分又与中草药书中有关鹿血的功效相对应。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明通过离心的方法首先将具有免疫功能的血浆蛋白分离，这样既可利用血浆蛋白制备活性肽，又使后续SOD、血红素的分离纯化更方便、更容易，所得到的产品纯度更高。
一种鹿血深加工方法，具体过程为：
以新鲜的鹿血为原料，首先取1～2升鹿血，在4℃、3000～15000转/分钟转速下离心0.1～2小时，沉淀血细胞用于制备SOD和血红素、上清为鹿血血浆蛋白用于制备活性肽；
(1)SOD和血红素的制备
①沉淀的血细胞中加入鹿血等体积的去离子水静置过夜，再加入0.5～2倍去离子水体积的体积比为1∶2-4的乙醇/氯仿混合液搅拌10～50分钟后静置，并以1000～10000转/分钟的转速离心10分钟，上清在50～80℃加热10～50分钟后离心10分钟，上清即为SOD粗品，沉淀为血红素粗品；
②SOD粗品加入2倍鹿血体积的丙酮并搅拌后静置5-10分钟过滤，沉淀加入丙酮等体积的蒸馏水溶解后，于2000～10000转/分钟的转速离心10～50分钟，上清冷冻干燥后用0.05～1M、pH＝6～9的磷酸缓冲液溶解，上Sephadex G-75(进口，北京金欧亚科技发展有限公司分装)凝胶柱纯化，得到精制的鹿血SOD组分；
③血红素粗品加入与沉淀血细胞等体积的NaHSO3溶液，NaHSO3溶液的终质量浓度为0.1～1％，搅拌均匀后加入1～5倍NaHSO3溶液体积的丙酮用0.1-1M盐酸调pH至1～4，过滤，滤液中加入质量浓度5-50％氨水调pH至4.5～8，沉淀水洗后冷冻干燥为精制鹿血血红素；
(2)活性肽的制备
将鹿血血浆蛋白经化学或热变性、冷冻干燥后，用pH2～9的磷酸缓冲液溶解配成重量浓度1～50％的溶液加入蛋白水解酶，干燥的血浆蛋白与酶的重量比为10～500∶1，在20～80℃温度下酶解0.5～24小时，再冷冻干燥得到粉末状鹿血活性肽；活性肽检测具有血管紧张素转化酶抑制活性和免疫增强活性。
所述化学变性过程为：于鹿血血浆蛋白中加入尿素至终浓度为8-10mol/L，搅拌10-20分钟；
所述热变性过程为：将鹿血血浆蛋白加热至60-100℃10-60分钟。
所述蛋白水解酶为胃蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶或中性蛋白酶。
本发明具有如下优点：
1.溶血前将血浆蛋白分离。本发明将新鲜鹿血通过离心将血细胞和血将进行分离，血浆蛋白是制备活性肽良好的蛋白质源；除去血浆蛋白的血细胞用于制备SOD和血红素，使SOD、血红素的分离分离纯化更容易，所得产品纯度更高。
2.多组分提取制备技术集成。本发明将鹿血SOD、血红素和活性肽的几个组分的提取制备工艺集成，通过该工艺可同时获得具有抗氧化、抗衰老的SOD、补血的血红素和降血压、增强免疫力的活性肽物质。
3.反应条件温和、方法简便可行。本发明通过活性肽的制备是通过酶解的方法，反应条件温和，既可制备活性肽又可保留鹿血中原有的活性组分，反应方法简单可行。
4.具有良好的应用前景。本发明按照传统滋补保健品鹿血的功效，将鹿血按照功能活性进行了组分精制，与直接食用鹿血相比，通过本工艺制得的活性成分更容易被人体吸收、食用更方便，因此作为保健食品具有广泛的应用前景。
具体实施方式
本发明将鹿血直接进行分离，制备成具有不同功能的活性组分：(1)抗氧化、抗衰老组分的鹿血SOD；(2)具有补血功能的鹿血血红素；(3)具有降血压、增强免疫力功能的鹿血活性肽。该工艺保留并提高了鹿血中固有的活性功能，按照功能活性进行分离纯化使各组分的应用对象更为明确，并将几种提取方法的优化集成。
实施例1
以新鲜鹿血为原料，按照以下工艺制备鹿血多肽：
取1升新鲜鹿血，在4℃、3000转/分钟转速下离心2小时，沉淀血细胞用于制备SOD和血红素、上清为鹿血血浆蛋白用于制备活性肽。
(1)SOD和血红素的制备
血细胞中加入1升去离子水静置过夜，再加入0.5升去离子体积的体积比为1∶3的乙醇/氯仿混合液搅拌10分钟后静置，并以1000转/分钟的转速离心10分钟，上清在80℃加热10分钟后离心10分钟，上清为SOD粗品，沉淀为血红素粗品。
SOD粗品加入2升丙酮并搅拌后静置5分钟过滤，沉淀加入2升蒸馏水溶解后以2000转/分钟的转速离心50分钟，上清冷冻干燥后用0.05M、pH＝6的磷酸缓冲液溶解，上Sephadex G-75凝胶柱纯化，得到精制的鹿血SOD组分，SOD活性为1万单位/毫克。
血红素粗品加入1升的质量浓度0.1％的NaHSO3溶液搅拌均匀后加入1升丙酮用1M盐酸调pH至1，过滤，滤液加入质量浓度10％氨水调pH至4.5，沉淀水洗后冷冻干燥为精制鹿血血红素。
(2)活性肽的制备
将鹿血血浆蛋白加热至60-100℃10-60分钟热变性、并冷冻干燥后，用pH＝8的磷酸缓冲液溶解配成重量浓度8％的水溶液加入胃蛋白酶，干燥的鹿血上清与酶的重量比为30∶1，60℃酶解24小时，再冷冻干燥得到粉末状鹿血活性肽；活性肽检测具有血管紧张素转化酶抑制活性和免疫增强活性。
实施例2
取1升新鲜鹿血，在4℃、15000转/分钟转速下离心0.1小时，沉淀血细胞用于制备SOD和血红素、上清为鹿血血浆蛋白用于制备活性肽。
(1)SOD和血红素的制备
血细胞中加入1升去离子水静置过夜，再加入0.5升的体积比为1∶4的乙醇/氯仿混合液搅拌50分钟后静置，并以10000转/分钟的转速离心10分钟，上清在50℃加热50分钟后离心10分钟，上清为SOD粗品，沉淀为血红素粗品。
SOD粗品加入2升丙酮并搅拌后静置5分钟过滤，沉淀加入2升蒸馏水溶解后10000转/分钟离心10分钟，上清冷冻干燥后用1M、pH＝9的磷酸缓冲液溶解，上Sephadex G-75凝胶柱纯化，得到精制的鹿血SOD组分，SOD活性为5万单位/毫克。
血红素粗品加入1升的质量浓度0.1％的NaHSO3溶液搅拌均匀后加入5升丙酮用1M盐酸调pH至1，过滤，滤液加入质量浓度10％氨水调pH至8，沉淀水洗后冷冻干燥为精制鹿血血红素，血红素纯度为80％。
(2)活性肽的制备
将鹿血血浆蛋白中加入尿素至终浓度为8-10mol/L，搅拌10-20分钟化学变性、并冷冻干燥后，用pH＝3的磷酸缓冲液溶解配成重量浓度40％的水溶液加入风味蛋白酶，干燥的鹿血血浆蛋白与酶的重量比为500∶1，30℃酶解0.5小时，再冷冻干燥得到粉末状鹿血活性肽；活性肽检测具有血管紧张素转化酶抑制活性和免疫增强活性。
本发明以传统保健滋补品鹿血为原料，结合中医传统中有关鹿血的滋补功效，建立了具有抗氧化、抗衰老功能的超氧化歧化酶(superoxidedismutase，简称SOD)、补血功能的血红素和降血压、增强免疫力功能的活性肽的制备方法，本发明将几种活性组分提取和制备工艺集成，保留并提高了鹿血所有已知和未知的活性组分，与传统鹿血全血直接食用相比，功能明确的鹿血活性组分更具有应用前景。
Claims (3)
1.一种鹿血深加工方法，其特征在于：
以新鲜的鹿血为原料，首先取1～2升鹿血，在4℃、3000～15000转/分钟转速下离心0.1～2小时，沉淀血细胞用于制备SOD和血红素、上清为鹿血血浆蛋白用于制备活性肽；
(1)SOD和血红素的制备
①沉淀的血细胞中加入鹿血等体积的去离子水静置过夜，再加入0.5～2倍去离子水体积的体积比为1∶2-4的乙醇/氯仿混合液搅拌10～50分钟后，静置并以1000～10000转/分钟的转速离心10分钟，上清在50～80℃加热10～50分钟后离心10分钟，上清即为SOD粗品，沉淀为血红素粗品；
②SOD粗品加入2倍鹿血体积的丙酮并搅拌后静置5-10分钟，过滤，沉淀加入丙酮等体积的蒸馏水溶解后，于2000～10000转/分钟的转速离心10～50分钟，上清冷冻干燥后用0.05～1M、pH＝6～9的磷酸缓冲液溶解，上SephadexG-75凝胶柱纯化，得到精制的鹿血SOD组分；
③血红素粗品加入与沉淀血细胞等体积的NaHSO3溶液，NaHSO3溶液的终质量浓度为0.1～1％，搅拌均匀后加入1～5倍NaHSO3溶液体积的丙酮，用0.1-1M盐酸调pH至1～4，过滤，滤液中加入质量浓度5-50％氨水调pH至4.5～8，沉淀水洗后冷冻干燥为精制鹿血血红素；
(2)活性肽的制备
将鹿血上清经化学或热变性、冷冻干燥后，用pH2～9的磷酸缓冲液溶解配成重量浓度1～50％的溶液加入蛋白水解酶，干燥的血浆蛋白与酶的重量比为10～500∶1，在20～80℃温度下酶解0.5～24小时，再冷冻干燥得到粉末状鹿血活性肽；活性肽检测具有血管紧张素转化酶抑制活性和免疫增强活性。
2.按照权利要求1所述鹿血深加工方法，其特征在于：
所述化学变性过程为：于鹿血上清中加入尿素至终浓度为8-10mol/L，搅拌10-20分钟；
所述热变性过程为：将鹿血上清加热至60-100℃，10-60分钟。
3.按照权利要求1所述鹿血深加工方法，其特征在于：所述蛋白水解酶为胃蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶或中性蛋白酶。
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