CN106552255A

CN106552255A - 一种鹿血肽脂质体的制备方法

Info

Publication number: CN106552255A
Application number: CN201510622731.4A
Authority: CN
Inventors: 邹汉法; 靳艳
Original assignee: Dalian Institute of Chemical Physics of CAS
Current assignee: Dalian Institute of Chemical Physics of CAS
Priority date: 2015-09-25
Filing date: 2015-09-25
Publication date: 2017-04-05

Abstract

本发明涉及一种鹿血肽脂质体，具体地说是一种鹿血肽脂质体的制备方法。将鹿血肽制备成为脂质体，保持鹿血肽的活性功能、抵御消化道酶的降解，使鹿血肽可进入血液系统到达靶标器官发挥功能。本发明解决了鹿血肽口服时易被消化道酶降解失去活性的难题，提高鹿血肽口服的生物利用率，扩大鹿血肽的服用方式，可用于药品、功能性食品、食品添加剂等领域，具有广阔应用前景。

Description

一种鹿血肽脂质体的制备方法

技术领域

本发明涉及鹿血，具体地说是一种鹿血肽脂质体及其制备方法。

背景技术

鹿血自古以来一直是珍贵的滋补品，中国历代的《本草纲目》、《本草新编》等本草书籍都有鹿血药用价值的记载。鹿血用于健身最早见于宋代《清波杂志》，明朝李时珍的《本草纲目》对鹿血的医疗作用作了详细记载：“主阳痿、补虚、止腰痛、跌伤、狂犬伤，和酒服制肺痿吐血，及崩中带下，诸气痛欲危者饮之立愈。大补虚损，益精血、解痘毒、药毒。我国古代早至宋朝起，皇宫贵族就养鹿取血生饮，但这种食用方式限制了鹿血的食用人群，亟待开发出食用方便、功效明确的鹿血保健品，使鹿血这一皇室滋补品走入寻常百姓家庭。

鹿血中蛋白质含量占13％以上，是鹿血中的主要成分。蛋白质是由肽组成的，具有生理作用的肽类化合物称为功能肽或生物活性肽，活性肽具有抗氧化、降血压、提高免疫力、抗肿瘤、促进矿物质吸收等活性，用不同来源的蛋白质制备具有各种功能的活性肽已成为该领域的研究热点。具有保健功能的鹿血中丰富的蛋白质是非常理想的制备活性肽原料。

通过酶法制备的鹿血肽具有抑制血管紧张素转化酶活性、提高免疫力、抗氧化等活性(参考文献2，专利ZL200810012057.8；参考文献2，ZL200710159035.X；参考文献3，200710159029.4)。人体消化系统中存在很多种蛋白质酶，这些酶在人体消化蛋白质类食物中发挥重要作用。当生物活性肽通过口服方式进入人体消化系统时，生物活性肽也同样易于被消化系统蛋白酶所降解，从而失去生物活性。消化道蛋白酶酶解是生物活性肽作为功能食品、保健品以及药品的所面临的最大瓶颈问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种保护鹿血肽包埋技术；其以鹿血肽为活性成分，将鹿血肽制备成为脂质体，鹿血肽脂质体可抵御消化道蛋白酶的降解，使鹿血肽活性组分到达靶标器官发挥作用。本发明通过脂质体的方法将鹿血肽包埋，不影响鹿血肽的生物活性，又能抵御消化道蛋白酶的降解，具有良好的应用前景。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种鹿血肽脂质体的制备方法，以鹿血肽为活性组分，将鹿血肽制备成为脂质体。

鹿血肽脂质体的制备方法，

以新鲜的鹿血为原料，鹿血经离心分离后，取上清，上清经化学或热变性，加入其体积0.5～5倍的pH 2～9的磷酸缓冲液搅拌均匀，加入蛋白质水解酶，酶的加入量为酶：蛋白质(变性后的“上清”中)重量比＝1：10～500，在20～80℃温度下酶解0.5～24小时，再冷冻干燥得到鹿血肽。

取干燥磷脂与胆固醇混合物，磷脂与胆固醇的质量比为1：0.01～1，混合物溶于氯仿中并混合均匀，混合物与氯仿的质量体积比为1:0.1～20(mg：ml)；混合溶液于20～80℃真空旋转蒸发，形成一层脂膜。加入去离子水水化脂膜，磷脂与胆固醇混合物质量与去离子水体积的比例为1：0.1～10(mg：ml)，加入直径0.5～3mm的玻璃珠于30～90℃搅拌3～60分钟，在室温下搅拌5～60分钟，形成脂质体。上述制备的鹿血肽溶于pH 7.4磷酸缓冲液中，制备成为浓度为5～20mg/ml的溶液；取上述制备的鹿血肽溶液加入脂质体溶液中混合均匀，鹿血肽溶液与与脂质体的体积比为1：1～50。混合物分散均匀后冷冻干燥，加入去离子水水化，去离子水体积是鹿血肽物溶液体积的0.5～20倍，并在30～50℃孵育5～30分钟。混合物于4℃、30000g转速下离心120分钟，收集上清即为鹿血肽脂质体。

蛋白质水解酶为胃蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶或中性蛋白酶。

将鹿血肽制备成为脂质体，保持鹿血肽的活性功能、抵御消化道酶的降解，使鹿血肽可进入血液系统到达靶标器官发挥功能。本发明解决了鹿血肽口服时易被消化道酶降解失去活性的难题，提高鹿血肽口服的生物利用率，扩大鹿血肽的服用方式，可用于药品、功能性食品、食品添加剂等领域，具有广阔应用前景。

本发明的特点如下：

1.利用本发明所制备的鹿血肽脂质体，既不影响鹿血肽的生物活性，又使鹿血肽在消化道内免受消化道蛋白酶的降解而保持活性。

2.本发明将鹿血肽制备成为脂质体，保证了口服方式服用鹿血肽的生物活性，使鹿血肽可作为食品添加剂等使用范围，扩大了鹿血肽的应用范围，具有良好的应用前景。

3.本发明方法简单，易于大规模生产。

具体实施方式

实施例1

以新鲜鹿血为原料，按照以下工艺制备鹿血多肽：

取1升新鲜鹿血，在4℃、3000转/分钟转速下离心1小时，取上清在100℃变性1小时，变性后鹿血血浆蛋白加入1升的pH 2的Tris-HCI缓冲溶液，加胃蛋白酶，酶的加入量为酶：蛋白质(血浆蛋白)质量比＝1：100，在20℃温度下水解0.5小时，反应结束后冷冻干燥，得到粉末状鹿血活性肽。

取50mg干燥磷脂与胆固醇混合物，磷脂与胆固醇的质量比为1：0.1，混合物溶于50ml氯仿中并混合均匀，于80℃真空旋转蒸发，形成一层脂膜。用500ml去离子水水化脂膜，加入直径0.5～3mm的玻璃珠于90℃搅拌60分钟，再在室温下搅拌60分钟，形成脂质体。上述制备的鹿血肽溶于pH 7.4磷酸缓冲液中，制备成为浓度为20mg/ml的鹿血肽溶液；取50ml的鹿血肽溶液加入500ml脂质体混合。混合物分散均匀后冷冻干燥，加入1000ml去离子水水化，并在50℃孵育30分钟。混合物于4℃、30000g转速下离心120分钟，收集上清即为鹿血肽脂质体。

实施例2

取1升新鲜鹿血，在4℃、15000转/分钟转速下离心0.1小时，取上清加入尿素480克，变性1小时加入25升的pH 8的磷酸缓冲液，加中性蛋白酶，酶的加入量为酶：蛋白质＝1：500，在80℃温度下水解24小时，反应结束后冷冻干燥，得到粉末状鹿血活性肽。

取50mg干燥磷脂与胆固醇混合物，磷脂与胆固醇的质量比为1：0.01，混合物溶于1000ml氯仿中并混合均匀，于40℃真空旋转蒸发，形成一层脂膜。加入500ml去离子水水化脂膜，加入直径0.5～3mm的玻璃珠于90℃搅拌60分钟，再在室温下搅拌60分钟，形成脂质体。上述制备的鹿血肽溶于pH 7.4磷酸缓冲液中，制备成为浓度为5mg/ml的鹿血肽溶液；取50ml的鹿血肽溶液加入500ml脂质体混合。混合物分散均匀后冷冻干燥，加入1000ml去离子水水化，并在50℃孵育15分钟。混合物于4℃、30000g转速下离心120分钟，收集上清即为鹿血肽脂质体。

Claims

1.一种鹿血肽脂质体的制备方法，其特征在于：

1)以新鲜的鹿血为原料，鹿血经离心分离后，取上清，上清经化学或热变性，加入其体积0.5～5倍的pH 2～9的缓冲液搅拌均匀，加入蛋白质水解酶，酶的加入量为酶：蛋白质重量比＝1：10～500，在20～80℃温度下酶解0.5～24小时，再冷冻干燥得到鹿血肽；

2)取干燥磷脂与胆固醇混合物，磷脂与胆固醇的质量比为1：0.01～1，混合物溶于氯仿中并混合均匀，混合物与氯仿的质量体积比为1:0.1～20(mg：ml)；混合溶液于20～80℃真空旋转蒸发，形成一层脂膜；加入去离子水水化脂膜，磷脂与胆固醇混合物质量与去离子水体积的比例为1：0.1～10(mg：ml)，加入直径0.5～3mm的玻璃珠于30～90℃搅拌3～60分钟，在室温下搅拌5～60分钟，形成脂质体；上述制备的鹿血肽溶于pH 6～8磷酸缓冲液中，制备成为浓度为5～20mg/ml的溶液；取上述制备的鹿血肽溶液加入脂质体溶液中混合均匀，鹿血肽溶液与脂质体的体积比为1：1～50；混合物分散均匀后冷冻干燥，加入去离子水水化，去离子水体积是鹿血肽物溶液体积的0.5～20倍，并在30～50℃孵育5～30分钟；混合物于4℃、10000～30000g转速下离心60～120分钟，收集上清即为鹿血肽脂质体。

2.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：蛋白水解酶为胃蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶或中性蛋白酶中的一种或二种以上。

3.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

所述化学变性过程为：于鹿血上清中加入尿素至终浓度为8-10mol/L，搅拌10-20分钟；

所述热变性过程为：将鹿血上清加热至60-100℃，10-60分钟。

4.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：pH 2～9的缓冲液为磷酸缓冲液、Tris-HCI缓冲液、枸橼酸盐缓冲液或醋酸－醋酸铵缓冲液等。