CN114081963A - 一种提高活性肽生物利用度的纳米载体及其制备与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及纳米技术领域，尤其是涉及一种提高活性肽生物利用度的纳米载体及其制备与应用。首先将大豆卵磷脂、L‑抗坏血酸棕榈酸酯溶解在无水乙醇中，通过梯度减压蒸发成膜后加入溶解了活性肽的溶液进行水化，包埋活性肽；再通过循环低温超声‑高速离心获得L‑抗坏血酸棕榈酸酯‑活性肽‑脂质体；最后将壳聚糖通过静电作用吸附包裹在L‑抗坏血酸棕榈酸酯‑活性肽‑脂质体表面，形成壳聚糖包裹的L‑抗坏血酸棕榈酸酯‑活性肽‑脂质体纳米载体(一种提高活性肽生物利用度的纳米载体)。本发明提供的一种提高活性肽生物利用度的纳米载体对活性肽有持续稳定缓释效果，增加了活性肽在胃肠环境下的稳定性，极大提高了肠道对活性肽的吸收。

Description

一种提高活性肽生物利用度的纳米载体及其制备与应用
技术领域
本发明涉及纳米技术领域，尤其是涉及一种提高活性肽生物利用度的纳米载体及其制备与应用。
背景技术
食源性活性肽因其独特的生理活性功能受到广泛关注，是目前功能食品领域的研究热点，已被证明是一种能帮助人体抵抗多种疾病的健康促进剂。但是口服活性肽的生物利用度往往很低(＜1-2％)，其原因在于活性肽口服后在胃肠道内稳定性差，易被胃酸、胃蛋白酶、胰蛋白酶、多种肽酶等分解；以及吸收性差，小肠上皮细胞对活性肽的吸收能力有限，且小肠上皮细胞内存在溶酶体，溶酶体内存在的多种蛋白酶和肽酶均会对活性肽造成降解。这些因素会降低活性肽的口服生物利用度。较低的生物利用度严重影响活性肽健康功效的发挥。因此，在生物活性肽领域急需一种有效技术手段以提高活性肽的吸收和生物利用度。
当前已有利用纳米载体提高活性肽在胃肠环境中的稳定性的研究。例如，专利CN107183308A提供了一种包埋蛋清活性肽的纳米颗粒及其制备方法，以解决蛋清源活性肽在体内胃肠道消化系统中极易被降解而不能以完整形式被吸收的问题，该发明采用了离子凝胶的方式，以壳聚糖和三聚磷酸钠为纳米包材，对蛋清源活性肽进行包埋。专利CN112439050 A公布了一种提高蛋清ACE抑制肽稳定性和生物利用度的方法，该方法利用多孔四氧化三锰纳米载体，通过非共价键作用负载蛋清ACE抑制肽，宣称可提高ACE肽在胃肠环境中的稳定性。这些专利技术帮助解决了活性肽经口服摄入后在胃肠道中稳定性差这一问题，但都忽视了如何提高活性肽的小肠吸收这一难题。
发明内容
为了提高活性肽的生物利用度，本发明的目的是提供一种提高活性肽生物利用度的纳米载体及其制备与应用。本发明中一种提高活性肽生物利用度的纳米载体也即一种壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体。
本发明制备了壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体，同时解决活性肽经口服后稳定性差和吸收低下这两个问题。小肠上皮细胞中的钠依赖维生素C转运体1在整个小肠部位均有大量表达。钠依赖维生素C转运体1能够高效大量的介导抗坏血酸以及经抗坏血酸修饰的纳米载体的转运，并且转运的纳米载体可以避免进入溶酶体，从而轻松实现溶酶体逃逸，大大减少纳米载体包埋物质与溶酶体的接触，进而降低了被包埋物质被溶酶体内多种酶的降解。因此，靶向钠依赖维生素C转运体1的纳米载体有望实现活性肽的高效肠道吸收和转运。
脂质体在胃液中存在稳定性差这一问题，壳聚糖可保护脂质体在胃液中的稳定性。针对L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体在胃液中不稳定这一问题，利用L-抗坏血酸棕榈酸酯在中性和偏碱性环境下带负电，而壳聚糖带正电这一特性，将壳聚糖通过静电作用吸附包裹在L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体表面，形成壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体，可提高L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体的稳定性。
本发明的壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体所用壁材生物相容性好、安全性高，制备方法简便、易于控制和操作、无有毒有机溶剂残留，可同时提高活性肽经口服后在胃肠道中的稳定性和小肠吸收，进而提高活性肽的生物利用度，在活性肽领域具有重要的应用前景。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
本发明的第一个目的是提供一种壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体，包括活性肽、大豆卵磷脂、L-抗坏血酸棕榈酸酯、壳聚糖；
所述大豆卵磷脂将亲水性的活性肽包裹在大豆卵磷脂亲水内核中，L-抗坏血酸棕榈酸酯将疏水尾嵌合在大豆卵磷脂表面，壳聚糖以静电相互作用包裹在最外层。
在本发明的一个实施方式中，所述活性肽、大豆卵磷脂、L-抗坏血酸棕榈酸酯、壳聚糖质量比为1：(10-50)：(2-10)：(0.01-0.1)。
在本发明的一个实施方式中，所述活性肽的相对分子质量小于1000。
本发明的第二个目的是提供一种上述壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体的制备方法，包括以下步骤：
(1)将大豆卵磷脂和L-抗坏血酸棕榈酸酯在无水乙醇中混匀，离心后取上清液；
(2)将步骤(1)得到的上清液在梯度减压条件下旋蒸除去无水乙醇，形成薄膜；
(3)将活性肽溶解后离心，取上清液与步骤(2)得到的薄膜水化，得到混合物；
(4)将步骤(3)得到的混合物破碎后离心，留上清液；沉淀重复多次破碎并离心，得到L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体悬液；
(5)将步骤(4)得到的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体悬液加入壳聚糖溶液中，得到壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体。
在本发明的一个实施方式中，步骤(2)中，梯度减压过程为首先在真空度为0.09-0.1MPa的条件下迅速蒸发3/4无水乙醇，然后将真空度降为0.06-0.07MPa继续缓慢蒸发掉剩余无水乙醇；旋蒸温度为41-45℃。
在本发明的一个实施方式中，步骤(3)中，活性肽溶解于去离子水或者生理盐水中。
在本发明的一个实施方式中，步骤(3)中，通过震荡水浴将上清液与薄膜水化，所述震荡水浴温度为37-45℃，震荡频率为50-160转/分钟。
在本发明的一个实施方式中，步骤(4)中，混合物在低温冰浴下进行探头超声破碎，超声破碎时间为2-12min，功率为300-450W；
离心过程中离心力为6000-12000g，离心时间为5-30min，沉淀重复破碎、离心5-10次。
在本发明的一个实施方式中，步骤(5)中，壳聚糖溶液浓度为0.1-1％(w/v)，pH为6。
本发明的第三个目的是提供一种上述壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体在制备提高活性肽吸收或口服生物利用度药物的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明的壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体，同时解决活性肽经口服后稳定性差和吸收低下这两个问题提高活性肽的生物利用度。
(2)本发明的壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体所用壁材生物相容性好、安全性高，制备方法简便、易于控制和操作、无有毒有机溶剂残留，可同时提高活性肽经口服后在胃肠道中的稳定性和小肠吸收，进而提高活性肽的生物利用度，在活性肽领域具有重要的应用前景。
附图说明
图1为实施例1制备得到的壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体的粒径分布图；
图2为实施例2制备得到的壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体的电势分布图；
图3为实施例2制备得到的壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体透射电镜(TEM)图；
图4为游离肽、壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体在胃肠道中的释放曲线示意图；
图5为游离肽和壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体在模拟胃肠消化过程中小分子肽的稳定性实验结果示意图；
图6为游离肽溶液、壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体在大鼠小肠中的离体渗透实验结果示意图。
具体实施方式
本发明提供一种壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体，包括活性肽、大豆卵磷脂、L-抗坏血酸棕榈酸酯、壳聚糖；
所述大豆卵磷脂将亲水性的活性肽包裹在大豆卵磷脂亲水内核中，L-抗坏血酸棕榈酸酯将疏水尾嵌合在大豆卵磷脂表面，壳聚糖以静电相互作用包裹在最外层。
在本发明的一个实施方式中，所述活性肽、大豆卵磷脂、L-抗坏血酸棕榈酸酯、壳聚糖质量比为1：(10-50)：(2-10)：(0.01-0.1)。
在本发明的一个实施方式中，所述活性肽的相对分子质量小于1000。
本发明提供一种上述壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体的制备方法，包括以下步骤：
(1)将大豆卵磷脂和L-抗坏血酸棕榈酸酯在无水乙醇中混匀，离心后取上清液；
(2)将步骤(1)得到的上清液在梯度减压条件下旋蒸除去无水乙醇，形成薄膜；
(3)将活性肽溶解后离心，取上清液与步骤(2)得到的薄膜水化，得到混合物；
(4)将步骤(3)得到的混合物破碎后离心，留上清液；沉淀重复多次破碎并离心，得到L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体悬液；
(5)将步骤(4)得到的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体悬液加入壳聚糖溶液中，得到壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体。
在本发明的一个实施方式中，步骤(2)中，梯度减压过程为首先在真空度为0.09-0.1MPa的条件下迅速蒸发3/4无水乙醇，然后将真空度降为0.06-0.07MPa继续缓慢蒸发掉剩余无水乙醇；旋蒸温度为41-45℃。
在本发明的一个实施方式中，步骤(3)中，活性肽溶解于去离子水或者生理盐水中。
在本发明的一个实施方式中，步骤(3)中，通过震荡水浴将上清液与薄膜水化，所述震荡水浴温度为37-45℃，震荡频率为50-160转/分钟。
在本发明的一个实施方式中，步骤(4)中，混合物在低温冰浴下进行探头超声破碎，超声破碎时间为2-12min，功率为300-450W；
离心过程中离心力为6000-12000g，离心时间为5-30min，沉淀重复破碎、离心5-10次。
在本发明的一个实施方式中，步骤(5)中，壳聚糖溶液浓度为0.1-1％(w/v)，pH为6。
本发明提供一种上述壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体在制备提高活性肽吸收或口服生物利用度药物的应用。
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
本实施例提供一种壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体。
将大豆卵磷脂120mg，L-抗坏血酸棕榈酸酯30mg溶于40mL无水乙醇中，室温下搅拌1小时，然后5000g离心10分钟，取上清液。将上清液转入旋转蒸发瓶中，先在真空度为0.095MPa的条件下迅速蒸发乙醇，然后待溶剂剩余约10mL时将真空度降为0.07MPa继续缓慢蒸发掉剩余乙醇，旋蒸温度为41℃，旋转蒸发成膜，除去溶剂。另外，取活性肽AHLL 10mg加入15mL去离子水中，然后将溶解有活性肽的溶液加入到旋转成膜的烧瓶中，37℃下旋转震荡水化1h，震荡频率为90转/分钟，将所得产物冰浴超声分散，冰浴超声时间为5min，超声功率为300w，超声频率(间隔)为超声3s，停2s。将超声后的产物8000g离心，离心时间10min，收集上清液，沉淀部分加入5mL去离子水继续低温超声-高速离心操作，低温超声-高速离心循环8次，合并上清液次得到表面修饰有L-抗坏血酸棕榈酸酯的活性肽脂质体。将所得脂质体悬液缓慢滴加进0.3％壳聚糖溶液中，边滴边搅拌，搅拌速度为100转/分钟，得到壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体。用激光粒度分析仪测定壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体的粒径，平均粒径为158.95±3.21nm，见图1所示。用马尔韦纳米粒度电位仪测定Zeta电势为21.54±1.17V。通过高效液相色谱进行测定活性肽纳米载体的包封率为82.33±2.373％。
实施例2
本实施例提供一种壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体。
将大豆卵磷脂100mg，L-抗坏血酸棕榈酸酯20mg溶于60mL无水乙醇中，室温下搅拌1小时，然后5000g离心10分钟，取上清液。将上清液转入旋转蒸发瓶中，先在真空度为0.09MPa的条件下迅速蒸发乙醇，然后待溶剂剩余约15mL时将真空度降为0.06MPa继续缓慢蒸发掉剩余乙醇，旋蒸温度为45℃，旋转蒸发成膜，除去溶剂。另外，取活性肽AHLL 10mg加入10mL去离子水中，然后将溶解有小分子肽的溶液加入到旋转成膜的烧瓶中，45℃下旋转震荡水化1h，震荡频率为160转/分钟，将所得产物冰浴超声分散，冰浴超声时间为12min，超声功率为350w，超声频率(间隔)为超声3s，停2s。将超声后的产物12000g离心，离心时间5min，收集上清液，沉淀部分加入2mL生理盐水继续低温超声-高速离心操作，低温超声-高速离心循环5次，合并上清液次得到表面修饰有L-抗坏血酸棕榈酸酯的小分子肽脂质体。将所得脂质体悬液缓慢滴加进1％壳聚糖溶液中，边滴边搅拌，搅拌速度为160转/分钟，得到壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体。用激光粒度分析仪测定壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体的平均粒径为183.43±3.77nm。用马尔韦纳米粒度电位仪测定纳米载体的Zeta电势为24.51±3.36V，如图2所示。通过高效液相色谱活性肽纳米载体的包封率为80.94±3.03％。
实施例3
本实施例提供一种壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体。
将大豆卵磷脂500mg，L-抗坏血酸棕榈酸酯100mg溶于40mL无水乙醇中，室温下搅拌1小时，然后5000g离心10分钟，取上清液。将上清液转入旋转蒸发瓶中，先在真空度为0.1MPa的条件下迅速蒸发乙醇，然后待溶剂剩余约10mL时将真空度降为0.065MPa继续缓慢蒸发掉剩余乙醇，旋蒸温度为43℃，旋转蒸发成膜，除去溶剂。另外，取活性肽AHLL 10mg加入15mL去离子水中，然后将溶解有活性肽的溶液加入到旋转成膜的烧瓶中，40℃下旋转震荡水化1h，震荡频率为50转/分钟，将所得产物冰浴超声分散，冰浴超声时间为2min，超声功率为450w，超声频率(间隔)为超声3s，停2s。将超声后的产物6000g离心，离心时间30min，收集上清液，沉淀部分加入5mL去离子水继续低温超声-高速离心操作，低温超声-高速离心循环8次，合并上清液得到表面修饰有L-抗坏血酸棕榈酸酯的活性肽脂质体。将所得脂质体悬液缓慢滴加进0.1％壳聚糖溶液中，边滴边搅拌，搅拌速度为100转/分钟，得到壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体。用激光粒度分析仪测定壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体的粒径，平均粒径为161.20±5.39nm。用马尔韦纳米粒度电位仪测定Zeta电势为22.41±2.83V。通过高效液相色谱进行测定活性肽纳米载体的包封率为79.09±2.67％。用透射电镜扫描观察活性肽纳米载体形貌，可见纳米载体外貌呈球状，结构清晰，如图3所示。
实施例4
壳聚糖包裹的表面修饰有L-抗坏血酸棕榈酸酯的脂质体在胃肠液中的释放考察
所制备的载肽纳米脂质体最终将被用于口服给药，因此，纳米脂质体在胃肠液中的释放曲线是点考察指标之一。胃肠道模拟液配方如下：
胃液储备液(SGF)：取2g NaCl溶于800mL去离子水中，用1mol/mL HCL调节pH至2.0，定容至1L，4℃储存备用。肠液储备液(SIF)：取6.8g KH2PO4溶于800mL去离子水中，用0.1mol/L NaOH调节pH至7.0，定容至1L，4℃储备备用。胃蛋白酶(80mg/mL)和胰酶(160mg/mL)分别用胃肠储备液溶解。分别制备2mL浓度为0.5mg/mL的游离肽溶液(AHLL)、壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体(AHLL肽纳米载体)，并将其置于透析袋(MWCO：8000～12000Da)中。前2h，透析袋均浸没于20mL的37℃的模拟胃液(pH 1.2)中；然后将透析袋转移至模拟肠液(pH 7.4)中，孵育12h，在预定时间点，于释放介质中取0.5mL，并补加相同体积的新鲜释放介质。高效液相色谱法测定游离浓度，并计算其累积释放曲线。结果如图4所示，壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体具有明显的缓释效果，可以减少活性肽与胃肠道液体的接触。
实施例5
将适量壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体的悬浮液与SGF按比例1:1(v/v)混合，在37℃恒温水浴条件下缓慢搅拌，孵育2h。然后，将胃消化产物与SIF按比例1:1(v/v)混合，37℃恒温水浴条件下缓慢搅拌，继续孵育2h。在适当的时间间隔，取一定量的混合物到10mL离心管中，加入5倍体积的乙醇，用超声的方法使脂质体破乳。破乳后的液体经3K的超滤管离心，收集滤出液，采用HPLC方法测定小分子肽含量。HPLC洗脱溶液为A相纯乙腈，B相为0.1％三氟乙酸水溶液，条件为0-5min，5％A；5-15min，5-45％A，15-25min，90％A，检测波长214nm,进样量10μL。结果如图5所示，壳聚糖包覆的表面修饰有L-抗坏血酸棕榈酸酯的脂质体在模拟胃肠消化过程中小分子肽AHLL的残留量始终高于未经包埋的AHLL，说明壳聚糖包裹的壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体在胃肠消化过程中可以降低胃肠道环境和消化酶对活性肽的降解。
实施例6
壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体在大鼠离体小肠内的渗透性研究
取十二只SD大鼠过夜禁食，实验当天腹腔注射过量水合氯醛处死，打开腹腔后各剪取5cm的十二指肠、空肠和回肠并两端结扎。然后分别向肠腔内注入0.4mL的游离肽溶液、壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体。接着将肠段置于10mL充氧的KR缓冲液中于37℃以100rpm振摇。于0.5、1、1.5和2小时分别取出500μL的缓冲液用于测定活性肽AHLL的含量，然后加入等体积的新鲜缓冲液以保证体积恒定。结果如图6所示，不同制剂的游离肽都呈现时间依赖性，时间越长，渗透量越高，在同一肠段孵育时，活性肽的渗透量为：壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体始终高于游离肽溶液，这表明壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体可以更好的经过肠道渗透进入血液，提高活性肽生物利用度。
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体，其特征在于，包括活性肽、大豆卵磷脂、L-抗坏血酸棕榈酸酯、壳聚糖；
所述大豆卵磷脂将亲水性的活性肽包裹在大豆卵磷脂亲水内核中，L-抗坏血酸棕榈酸酯将疏水尾嵌合在大豆卵磷脂表面，壳聚糖以静电相互作用包裹在最外层。
2.根据权利要求1所述的一种壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体，其特征在于，所述活性肽、大豆卵磷脂、L-抗坏血酸棕榈酸酯、壳聚糖质量比为1：(10-50)：(2-10)：(0.01-0.1)。
3.根据权利要求1所述的一种壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体，其特征在于，所述活性肽的相对分子质量小于1000。
4.一种如权利要求1所述的壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将大豆卵磷脂和L-抗坏血酸棕榈酸酯在无水乙醇中混匀，离心后取上清液；
(2)将步骤(1)得到的上清液在梯度减压条件下旋蒸除去无水乙醇，形成薄膜；
(3)将活性肽溶解后离心，取上清液与步骤(2)得到的薄膜水化，得到混合物；
(4)将步骤(3)得到的混合物破碎后离心，留上清液；沉淀重复多次破碎并离心，得到L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体悬液；
(5)将步骤(4)得到的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体悬液加入壳聚糖溶液中，得到壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体。
5.根据权利要求4所述的一种壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，梯度减压过程为首先在真空度为0.09-0.1MPa的条件下迅速蒸发3/4无水乙醇，然后将真空度降为0.06-0.07MPa继续缓慢蒸发掉剩余无水乙醇；旋蒸温度为41-45℃。
6.根据权利要求4所述的一种壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，活性肽溶解于去离子水或者生理盐水中。
7.根据权利要求4所述的一种壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，通过震荡水浴将上清液与薄膜水化，所述震荡水浴温度为37-45℃，震荡频率为50-160转/分钟。
8.根据权利要求4所述的一种壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，混合物在低温冰浴下进行探头超声破碎，超声破碎时间为2-12min，功率为300-450W；
离心过程中离心力为6000-12000g，离心时间为5-30min，沉淀重复破碎、离心5-10次。
9.根据权利要求4所述的一种壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，壳聚糖溶液浓度为0.1-1％(w/v)，pH为6。
10.一种如权利要求1所述的壳聚糖包裹的L-抗坏血酸棕榈酸酯-活性肽-脂质体纳米载体在制备提高活性肽吸收或口服生物利用度药物的应用。
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