JP2003171262A - 経口投与のためのリポソーム組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ペプチド性化合物の消化管での安定性に優れ
吸収性の高い経口投与製剤を提供する。 【解決手段】レシチン及びステロールを含み、生理活性
物質を封入したリポソームであって、硫酸基含有多糖類
でコーティングされたリポソームを含有することを特徴
とする食品組成物及び経口投与用医薬組成物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、リポソームを含む
食品組成物及び経口投与用医薬組成物を提供することに
関する。

【０００２】

【従来の技術】ペプチド性化合物を経口投与した場合、
胃酸や消化管内のタンパク分解酵素の作用により分解さ
れ容易に不活化されてしまう。また、ペプチド性化合物
は水溶性である場合が多く、その分子量も大きいため消
化管粘膜からの膜透過性が悪いために、消化管からほと
んど吸収されない。現在、ペプチド性化合物の吸収を上
げるためには、主にタンパク分解酵素阻害剤を併用する
方法と剤型修飾を施す方法とが検討されている。タンパ
ク質分解酵素阻害剤の具体例としてはアプロチニンやバ
シトラシンなどが応用されている。一方、剤型修飾を施
す方法としてはペプチドが胃酸によって分解されるのを
防止するために腸溶性コーティングを施した製剤などが
利用されている。しかし、腸溶剤は、固形製剤に限ら
れ、液体製剤などの種々の形態とすることができず、特
に食品に配合することが困難である。近年、剤型修飾を
施す方法の一つとして微粒子製剤を薬物キャリアーとし
て利用する研究が精力的になされており、その中の一つ
として、リポソームを経口投与の薬物キャリアーとして
利用する検討も過去になされてきている。例示すれば、
通常経口投与では無効とされていたインスリンを修飾し
たリポソームに封入することによって経口投与時のイン
スリンのバイオアベイラビリティーが増加することが認
められている[(Takeuchi H et al. Pharam. Res. 13, 8
96, 1996)、(Muramatsu K et al. Biol. Pharam. Bull.
19, 1055, 1996)、(Iwanaga K et al. J.Pharm. Sci.
88, 248, 1999)]。また、エリスロポエチンをリポソー
ムに封入することによりそのバイオアベイラビリティー
が上昇することも報告されている。[(Maitani Y et al.
J. Pharam. Sci. 85, 440, 1996)]。しかしながら、こ
れらのペプチド性化合物封入リポソームは注射に比べて
高投与量が必要であることや吸収が変動し易いこと等の
難点があり、現在においてまだ完全な実用化に至ってお
らず、ペプチド性化合物は臨床では注射剤として利用さ
れているのが現状である。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、ペプチド性
化合物の消化管での安定性に優れた経口投与製剤を提供
することを課題とする。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明は、上記課題を解
決するために脂質膜微小運搬体であるリポソームにペプ
チド性化合物を封入し、更にリポソーム表面を硫酸基含
有多糖類でコーティングすることによってペプチド性化
合物の消化管内での安定性を高め、ペプチド性化合物を
消化管から効率良く吸収できる経口リポソーム製剤とし
たものである。

【０００５】即ち、本発明は、下記の各項に係る発明を
提供するものである。 項１ レシチン及びステロールを含み，生理活性物質を
封入したリポソームであって、硫酸基含有多糖類でコー
ティングされたリポソームを含有することを特徴とする
食品組成物。 項２ レシチンが、卵黄レシチン及び大豆レシチンから
なる群より選ばれる少なくとも１種である項１に記載の
食品組成物。 項３ ステロールが、コレステロール及びフィトステロ
ールからなる群より選ばれる少なくとも１種である項１
又は２に記載の食品組成物。 項４ レシチンとステロールのモル比が、５：５〜９：
１である項１〜３のいずれかに記載の食品組成物。 項５ レシチンとステロールのモル比が、６：４〜８：
２である項４に記載の食品組成物。 項６ 硫酸基含有多糖類が、フコイダン、カラギーナン
及び寒天からなる群より選ばれる少なくとも１種である
項１〜５のいずれかに記載の食品組成物。 項７ 硫酸基含有多糖類が、フコイダンである項６に記
載の食品組成物。 項８ 生理活性物質が、生理活性ペプチドである項１〜
７のいずれかに記載の食品組成物。 項９ 生理活性ペプチドが、ラクトフェリン、トランス
フェリン、インターフェロン、インターロイキン及びリ
ゾチームからなる群より選ばれる少なくとも１種である
項８に記載の食品組成物。 項１０ 生理活性ペプチドが、ラクトフェリンである項
９に記載の食品組成物。 項１１ レシチン及びステロールを含み、生理活性物質
を封入したリポソームであって、硫酸基含有多糖類でコ
ーティングされたリポソームを含有することを特徴とす
る経口投与用医薬組成物。

【０００６】

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。

【０００７】リポソームはリン脂質を主体とした脂質を
十分量の水で水和することにより形成される二分子膜を
有する脂質小胞体である。現在、リポソームは脂質二重
層の数に基づいて分類され、多重膜リポソーム(ＭＬＶ)
と一枚膜リポソームに分類される。一枚膜リポソーム
は、そのサイズに応じて、更にＳＵＶ（small unilamel
la vesicle）、ＬＵＶ(large unilamella vesicle)、Ｇ
ＵＶ(giant unilamellavesicle)に分類される。本発明
のリポソームは、これらのいずれであってもよい。

【０００８】本発明のリポソームのサイズとしては、５
０〜１０００ｎｍ程度が好ましく、１００〜５００ｎｍ
程度がより好ましい。

【０００９】リポソームは水溶性薬物をその内水層に、
脂溶性薬物を脂質二重層へ取り込むことができ、薬物の
ターゲティング、徐放化、副作用の軽減などを目的にＤ
ＤＳ製剤の薬物運搬体としてその応用が試みられてい
る。また、リポソームは生体膜の成分から構成されてい
るため安全性が高いことも知られている。

【００１０】本発明では、レシチンとして、卵黄レシチ
ン、大豆レシチン、ナタネレシチン、コーンレシチン、
ひまわりレシチン、ピーナッツレシチンなどが挙げられ
る。本発明では、これらの水素添加物を用いることもで
きる。本発明のレシチンとしては、これらの中でも、卵
黄レシチン及び大豆レシチンが好ましい。

【００１１】ステロールとしては、コレステロール、ラ
ノステロール、ジヒドロラノステロール、デスモステロ
ール、ジヒドロコレステロールなどの動物由来のステロ
ール；スチグマステロール、シトステロール、カンペス
テロール、ブラシカステロールなどの植物由来のステロ
ール（フィトステロール）；チモステロール、エルゴス
テロールなどの微生物由来のステロール等が挙げられ
る。これらの中でも、コレステロール又はフィトステロ
ールが好ましく用いられる。

【００１２】リポソームにおけるレシチンとステロール
のモル比は、５：５〜９：１程度が好ましく、６：４〜
８：２程度がより好ましい。

【００１３】本発明のリポソームに封入する生理活性物
質としては、消化管内で分解されやすく、吸収を期待さ
れるようなものであればよく、生理活性を有するペプチ
ド性化合物、アミド結合を有する化合物、配糖体などが
例示される。

【００１４】生理活性を有するペプチド性化合物は、分
子量１,０００〜２００,０００程度のものを好ましく用
いることができる。具体的には、ラクトフェリン、トラ
ンスフェリン、インターフェロン、インターロイキン、
リゾチームなどの生理活性蛋白；インスリン、グルカゴ
ン、カルシトニン、黄体形成ホルモン、カリクレイン、
ガストリン、セクレチン、成長ホルモン、エリスロポエ
チンなどのペプチドホルモン；インフルエンザワクチ
ン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、百日咳ワク
チンなどのワクチン類が挙げられる。これらの中でも、
特にラクトフェリン、トランスフェリン、インターフェ
ロン、インターロイキン、リゾチームなどの生理活性蛋
白が好ましく、ラクトフェリンが更に好ましい。

【００１５】生理活性物質の配合割合は、レシチン１０
０重量部に対して、２０〜１０００重量部程度、１００
〜５００重量部程度が好ましい。

【００１６】生理活性物質を封入したリポソームは、従
来の方法により製造することができる。例えば、所定量
のレシチン及びステロールを、例えばエタノールなどの
適当な有機溶媒で可溶化し、減圧下に溶媒を除去し、膜
脂質を作成後、これに上記生理活性物質を含む水溶液を
添加して、例えば、１０００〜３０００rpm程度で２〜
５分間程度撹拌して、リポソーム懸濁液を調製すること
により得ることができる。

【００１７】得られた懸濁液に対しては、必要に応じ
て、リポソーム外液中の生理活性物質を除去する操作、
例えば懸濁液を濾過後，得られた濾液を透析する操作、
を行ってもよい。

【００１８】得られたリポソームの表面は、硫酸基を含
有する多糖類でコーティングされる。

【００１９】硫酸基含有多糖類としては、フコイダン、
カラギーナン、寒天、ヘパリンなどが挙げられる。ま
た、本発明の硫酸基含有多糖類としては、硫酸基を含ま
ない多糖を硫酸化したものであってもよく、例えば、コ
ンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸などであってもよ
い。

【００２０】本発明の硫酸基含有多糖類としては、分子
量が５,０００〜３００,０００程度のものが好ましく用
いられる。

【００２１】本発明においては、これらの中でもフコイ
ダン及びカラギーナンを好ましく用いることができ、特
にフコイダンが好ましい。

【００２２】硫酸基含有多糖類の使用量は、例えば、リ
ポソームに含有されるレシチン１００重量部に対して、
１０〜５００重量部程度が好ましく、２０〜２００重量
部程度がより好ましい。

【００２３】コーティングは、例えば、生理活性物質を
封入したリポソームを含む懸濁液に、硫酸基含有多糖類
を加え、１０００〜３０００rpm程度で２〜５分間程度
撹拌することにより行うことができる。なお、１つのコ
ーティング膜の中に複数のリポソームが含まれていても
よい。

【００２４】リポソームが硫酸基含有多糖類でコーティ
ングされたことは、例えば、リポソーム溶液のゼータ電
位が、硫酸基含有多糖類を添加して撹拌することにより
変化することにより確認できる。

【００２５】かくして得られたリポソームの懸濁液は、
液状のまま、あるいは凍結乾燥した乾燥物を、飲料など
の液状の食品、錠剤、顆粒、チュアブルタブレットなど
の固形の食品に利用することができる。また、ヨーグル
トなどの半固形の食品にも利用することができる。食品
の形態とする場合には、必要に応じて、その食品の形態
に応じた食品素材、食品添加物などと組み合わせて、通
常の方法により調製することができる。本発明の硫酸基
含有多糖類でコーティングしたリポソームを含む食品
は、リポソームに封入した生理活性物質の種類に応じた
健康食品、機能性食品、特定保健用食品、病者用食品等
の用途に用いることができる。例えば、ラクトフェリン
を封入した場合、Ｃ型肝炎の予防・治療、飲酒頻度の高
い人の健康維持、免疫機能の正常化、感染予防、アレル
ギーの予防、鼻炎の改善、アトピー性皮膚炎の改善、癌
の予防、整腸、便通・便性の改善などの作用を期待して
摂取することができる。

【００２６】また、リポソームの懸濁液は液剤として、
あるいは凍結乾燥した乾燥物を錠剤、顆粒剤などの固形
剤として、必要に応じて適当な賦形剤、希釈剤、その他
の添加剤を共に用いて、経口投与の医薬品に利用するこ
とができる。医薬品の用途は、封入した生理活性物質の
種類に応じて種々のものがあり、例えば、ラクトフェリ
ンを封入した場合、免疫調整剤、抗菌剤、抗ウイルス
剤、抗ガン剤、抗炎症剤、抗酸化剤などの用途に用いる
ことができる。

【００２７】

【実施例】以下に実施例及び試験例を示して、本発明を
より詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定さ
れるものではない。

【００２８】実施例１ 製剤の調製 薄膜水和法により、ラクトフェリンを封入し、フコイダ
ンによりコーティングしたリポソーム製剤を調製した。
卵黄レシチン[日本油脂(株)製]とフィトステロール[タ
マ生化学(株)製]をモル比が７：３となるように量りと
り(卵黄レシチン６３．０ｍｇ、フィトステロール １
４．５５ｍｇ)、エタノール ６ｍｌを加えて溶解した。
この溶液からロータリーエバポレーターにて溶媒留去
し、薄膜を形成させた。この薄膜にラクトフェリン１８
０ｍｇを溶解させたクエン酸緩衝液(ｐＨ ６．６９)の
６ｍｌを加え、ボルテックスミキサーにより２０００rp
mにて３分間程度撹拌を行い、リポソーム懸濁液を得
た。この懸濁液を０．４μｍの孔径のポリカーボネート
膜を用いて濾過し、得られた濾液をセルロースエステル
膜(ＭＷＣＯ ３００，０００)を用いて透析することに
よりリポソーム外液中のラクトフェリンを除去し、ラク
トフェリン封入リポソームを得た。得られたラクトフェ
リンリポソームの懸濁液 ６ｍｌに３６ｍｇのフコイダ
ン[宝酒造(株)製]を加え、ボルテックスミキサーにより
強く撹拌し、目的のフコイダンでコーティングしたラク
トフェリン封入リポソームを得た。

【００２９】リポソームがフコイダンでコーティングさ
れたことは、フコイダンを加える前には０付近であった
リポソーム溶液のゼータ電位が、フコイダンを加えて撹
拌した後、負の方向にシフトしたことにより確認した。

【００３０】実施例２ 薄膜水和法により、インスリンを封入し、カラギーナン
によりコーティングしたリポソーム製剤を調整した。卵
黄レシチン[日本油脂(株)製]とフィトステロール[タマ
生化学(株)製]をモル比が７：３となるように量りとり
(卵黄レシチン ６３．０ｍｇ、フィトステロール １
４．５５ｍｇ)、エタノール ６ｍｌを加えて溶解した。
この溶液からロータリーエバポレーターにて溶媒留去
し、薄膜を形成させた。この薄膜にインスリン１２．０
ｍｇを溶解させた酢酸緩衝液[０．０１Ｎ ＨＣｌと酢酸
緩衝液（ｐＨ＝４．０）の等量の混液]の６ｍｌを加
え、ボルテックスミキサーにより２０００rpmにて３分
間程度十分撹拌を行い、リポソーム懸濁液を得た。この
懸濁液を０．４μｍの孔径のポリカーボネート膜を用い
て濾過し、得られた濾液をセルロースエステル膜(ＭＷ
ＣＯ １０，０００)を用いて透析することによりリポソ
ーム外液中のインスリンを除去し、インスリン封入リポ
ソームを得た。得られたインスリンリポソームの懸濁液
６ｍｌに３０ｍｇのカラギーナン[新田ゼラチン(株)
製]を加え、ボルテックスミキサーにより強く撹拌し、
目的のカラギーナンでコーティングしたインスリン封入
リポソームを得た。

【００３１】リポソームがカラギーナンでコーティング
されたことは、カラギーナンを加える前には０付近であ
ったリポソーム溶液のゼータ電位が、カラギーナンを加
えて撹拌した後、負の方向にシフトしたことにより確認
した。

【００３２】試験例１ ラクトフェリン溶液(ｐＨ６．６９のクエン酸緩衝液に
３０ｍｇ/ｍｌの濃度で溶解)及びラクトフェリン封入リ
ポソーム懸濁液及びフコイダンでコーティングしたラク
トフェリン封入リポソーム懸濁液の人工胃液による消化
試験。

【００３３】ラクトフェリン溶液(ｐＨ６．６９のクエ
ン酸緩衝液に３０ｍｇ/ｍｌの濃度で溶解)及びラクトフ
ェリン封入リポソーム懸濁液及びフコイダンでコーティ
ングしたラクトフェリン封入リポソーム懸濁液（実施例
１で得られた懸濁液）の各０．２ｍｌを、それぞれ０．
０２５ｍｇのペプシンを含むｐＨ ２のＨＣｌ水溶液中
に添加し、３７℃で１時間撹拌した。１時間後、ペプス
タチン ０．７５μｇを添加してペプシンを不活化し、
ＮａＯＨ溶液を用いて中和して各サンプルの人工消化液
を得た。得られた消化液中のラクトフェリン濃度をＥＬ
ＩＳＡサンドイッチ法にて測定し、ラクトフェリンの残
存率を算出した。その結果、ラクトフェリン溶液を消化
した場合、その残存率は０．０４±０．０１％であった
が、ラクトフェリン封入リポソーム懸濁液ではその残存
率は１．９８±０．１３％、更にフコイダンで表面コー
ティングしたラクトフェリン封入リポソーム懸濁液にお
いてはその残存率は３９．５５±１．３９％であった。
ラクトフェリンをリポソームに封入し、更にそのリポソ
ームの表面をフコイダンでコーティングすることによっ
て、ラクトフェリンの消化管内での安定性が高まること
が明らかとなった。

【００３４】

【表１】

【００３５】試験例２ ラクトフェリン溶液(ｐＨ６．６９のクエン酸緩衝液に
３０ｍｇ/ｍｌの濃度で溶解)、ラクトフェリン封入リポ
ソーム懸濁液及びフコイダンでコーティングしたラクト
フェリン封入リポソーム懸濁液を用いて人工腸液による
消化試験を行った。

【００３６】ラクトフェリン溶液(ｐＨ６．６９のクエ
ン酸緩衝液に３０ｍｇ/ｍｌの濃度で溶解)、ラクトフェ
リン封入リポソーム懸濁液及びフコイダンでコーティン
グしたラクトフェリン封入リポソーム懸濁液（実施例１
で得られた溶液）の各０．６ｍｌをそれぞれＵＳＰ（米
国薬局方）２４局に掲載されている人工腸液に添加し、
３７℃で４時間撹拌する。４時間後、トリクロロ酢酸を
添加し消化酵素を不活化し各サンプルの人工消化液を得
る。得られた消化液中のラクトフェリン濃度をＥＬＩＳ
Ａサンドイッチ法にて測定し、ラクトフェリンの残存率
を算出した。その結果、ラクトフェリン溶液を消化した
場合、その残存率は１５．９±０．２％であったが、ラ
クトフェリン封入リポソーム懸濁液ではその残存率は２
６．１±０．２％、更にフコイダンで表面コーティング
したラクトフェリン封入リポソーム懸濁液においてはそ
の残存率は３３．７±０．８％であった。ラクトフェリ
ンをリポソームに封入し、更にそのリポソームの表面を
フコイダンでコーティングすることによって、ラクトフ
ェリンの人工腸液に対する安定性が高まることが明らか
となった。

【００３７】

【表２】

【００３８】ラクトフェリンが腸管により吸収されるこ
とは知られているので、胃や腸で分解されないラクトフ
ェリンの割合が高くなれば、腸管で吸収されるラクトフ
ェリンの割合が高くなることが予想される。

【００３９】

【発明の効果】生理活性のあるペプチド性化合物を経口
投与したとき、胃酸や胃内、小腸内のタンパク分解酵素
によって分解され生理活性が不活化されてしまうが、ペ
プチド性化合物を、硫酸基を含有する多糖類でコーティ
ングしたリポソーム製剤とすることにより、ペプチド性
化合物の消化管タンパク分解酵素に対する安定性を高め
ることができた。また、小腸粘膜へ吸着しやすいので消
化管での滞留性の向上が期待でき、さらに上皮細胞から
の吸収促進が期待できる。従って、ペプチド性化合物を
経口投与した際の消化管からの吸収を高めることが期待
できる。

【００４０】本発明ではラクトフェリンをリポソーム製
剤であるので、固形製剤のみに限られず、液体製剤など
とすることも可能である。また、様々な形態の食品に配
合することができ、例えば、飲料、ヨーグルトなど種々
の形態としてラクトフェリンを摂取することも可能であ
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 38/21 Ａ６１Ｋ 47/24 38/46 47/28 45/00 47/36 47/24 Ａ６１Ｐ 1/00 47/28 43/00 １１１ 47/36 Ａ６１Ｋ 37/02 Ａ６１Ｐ 1/00 37/54 43/00 １１１ 37/66 Ｈ (72)発明者 牧野 武利 大阪府摂津市千里丘東４−６−８−416 Ｆターム(参考） 4B018 MD07 MD20 MD33 MD46 ME14 MF08 4B035 LC06 LE07 LG04 LG13 LG15 LG20 LG51 LP26 4C076 AA19 AA45 BB04 BB05 CC16 CC29 CC40 DD63A DD70A EE30J FF25 4C084 AA02 AA17 DA12 DA21 DC22 DC50 MA24 MA52 NA14 ZA661

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 レシチン及びステロールを含み，生理活
   性物質を封入したリポソームであって、硫酸基含有多糖
   類でコーティングされたリポソームを含有することを特
   徴とする食品組成物。
2. 【請求項２】 レシチンが、卵黄レシチン及び大豆レシ
   チンからなる群より選ばれる少なくとも１種である請求
   項１に記載の食品組成物。
3. 【請求項３】 ステロールが、コレステロール及びフィ
   トステロールからなる群より選ばれる少なくとも１種で
   ある請求項１又は２に記載の食品組成物。
4. 【請求項４】 レシチンとステロールのモル比が、５：
   ５〜９：１である請求項１〜３のいずれかに記載の食品
   組成物。
5. 【請求項５】 レシチンとステロールのモル比が、６：
   ４〜８：２である請求項４に記載の食品組成物。
6. 【請求項６】 硫酸基含有多糖類が、フコイダン、カラ
   ギーナン及び寒天からなる群より選ばれる少なくとも１
   種である請求項１〜５のいずれかに記載の食品組成物。
7. 【請求項７】 硫酸基含有多糖類が、フコイダンである
   請求項６に記載の食品組成物。
8. 【請求項８】 生理活性物質が、生理活性ペプチドであ
   る請求項１〜７のいずれかに記載の食品組成物。
9. 【請求項９】 生理活性ペプチドが、ラクトフェリン、
   トランスフェリン、インターフェロン、インターロイキ
   ン及びリゾチームからなる群より選ばれる少なくとも１
   種である請求項８に記載の食品組成物。
10. 【請求項１０】 生理活性ペプチドが、ラクトフェリン
    である請求項９に記載の食品組成物。
11. 【請求項１１】 レシチン及びステロールを含み、生理
    活性物質を封入したリポソームであって、硫酸基含有多
    糖類でコーティングされたリポソームを含有することを
    特徴とする経口投与用医薬組成物。