JP5175017B2

JP5175017B2 - 有効成分の経口吸収を改善するための粒子状担体

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Publication number: JP5175017B2
Application number: JP2002508415A
Authority: JP
Inventors: マンサン，フィリップ; ユブリッシュ，ナタリー; ビニュロン，クロード
Original assignee: マンサン，フィリップ; ユブリッシュ，ナタリー; ビニュロン，クロード
Priority date: 2000-07-07
Filing date: 2001-07-05
Publication date: 2013-04-03
Anticipated expiration: 2021-07-05
Also published as: MXPA03000193A; ES2305121T3; WO2002003960A1; CN1440277A; US20050013866A1; CA2415414A1; US8052998B2; ATE395906T1; AU2002218745A1; EP1313453A1; FR2811227A1; EP1313453B1; KR20030038655A; CA2415414C; BRPI0112080B1; BR0112080A; DE60134147D1; DK1313453T3; RU2003103596A; JP2004502720A

Description

【０００１】
本発明は、ヒトまたは動物で経口投与後に有効成分の吸収を改善するための粒子状担体関する。
【０００２】
現在、今後30年間に用いられるだろう有効成分の大部分がまだ発見されていないと考えられている。しかもどの未来予測においても、将来使用されるこれら有効成分の大部分はバイオテクノロジーによるもので、それがペプチドおよび／またはタンパク質であるだろうということに意見が一致している。新規なこれら医薬品は、マイクログラムまたはそれ以下の投与量で非常に大きな効果をもたらすであろう。主としてペプチドからなるいくつかの医薬品が、すでに北アメリカやヨーロッパで市販されている（ＬＨ／ＲＨのアナローグ、成長ホルモン、ストレプトキナーゼ、抗体など）。100種類を超えるペプチドやタンパク質について、今、ヒトを対象とした臨床試験が行なわれている。
【０００３】
現在市販されているペプチドやタンパク質にはいくつか欠点があるため、ヒトでの使用が制限される。その欠点とは以下のものである：
【０００４】
− 唯一の投与経路が非経口投与（静脈内、皮下注射、筋肉内）であること、
− 生体内での排泄半減期が短いため、複数回投与する必要があること。
【０００５】
現在のところ、ペプチドやタンパク質を経口投与できる形態にした医薬品は存在していないが、非経口投与用の多粒子形態のものは数年前から市販されている（武田薬品のエナントーン（Enantone、登録商標）、ノバルティス社のサンドスタチン（Sandostatin、登録商標））。
【０００６】
経口投与に適した形態のものが存在していないのは、ペプチドやタンパク質が消化液に対して敏感であるため、タンパク質からなる薬が食物のタンパク質と同様に消化液によって分解されるからということで説明される。その結果、ペプチドやタンパク質は最初に分解されてしまうため、まったくと言っていいほど吸収されないことになる。経口投与はヒトにおいて最も一般的で最も受け入れられやすい投与法であるため、ペプチドやタンパク質が消化液によって不活化されることから保護できると同時に、胃腸での吸収が可能な形態を完成させることができれば、医療における今世紀初頭の大きな進歩となろう。
【０００７】
胃腸管に存在するタンパク質分解酵素によるこの不活化が理由で、51個のアミノ酸からなるペプチドであるインスリンは、ほぼ80年間にわたって非経口投与されている。経口投与したペプチドやタンパク質の吸収状態を改善する試みがいくつかなされた。例えば、ポリ（イソブチルシアノアクリレート）からなるナノカプセルの中にインスリンを入れることにより、経口投与したインスリンの吸収を増大させるという研究が、いくつかの文献に記載されている（MICHEL C.他、J. Pharm. Pharmacol.、第43巻、1-5ページ、1991年；DAMGE C.他、Diabetes、第37巻、246-251ページ、1988年）。ナノカプセルは、その1つ1つが非常に薄いポリマー膜に囲まれたナノサイズの油滴に対応する小胞構造を有する。しかし選択されたポリマーは細胞レベルで毒性を有することが知られているため、何年にもわたって繰り返し投与することは考えられない。また、ナノカプセルの中心に油が存在していることで、長期的には、投与部位において毒性の問題が出て来る可能性がある。そのためインスリンのナノカプセルを市場に出すことは考えられない。他方、血糖低下効果は、2日後にならないと現われない。これは、おそらく、腸の粘膜を通過する粒子の数が非常に限られていることと、インスリンの放出が遅いことに起因しているのであろう。同じポリマー（ポリアルキルシアノアクリレート）を用いてインスリンのナノカプセルを調製して経口投与したところ、まったく血糖低下作用を示さなかった（COUVREUR P.他、Acta Pharm. Technol.、第26巻、220-222ページ、1980年）。
【０００８】
同様に、シクロスポリンは、マイクロエマルションの形態になった薬が完成している（ノバルティス社のネオーラル（Neoral、登録商標））にもかかわらず、経口投与した場合には効果が不確実で非常に不安定である。シクロスポリンのナノ粒子が完成しているが、現在のところ経口投与による生体利用率は5％未満という低い値に留まり、その数値を向上させることはできていない（FORD J.他、Int. J. Pharm.、第183巻、3-6ページ、1999年）。
【０００９】
ヘパリンは、過去50年間ほどにわたって血栓塞栓症の予防と治療に使われてきたが、非常に出血を起こさせやすく、生物学的にも臨床上も厳しく監視する必要があるという欠点がある。止血に関する機能異常により過度の血液凝固状態になる（抗トロンビンIII、補因子II、プロテインC、プロテインS）ケースは別にしても、血栓塞栓症を起こすさまざまな危険因子が存在している。なお血栓塞栓症は、止血に関する一連の問題によってフィブリンの塊または血小板の栓が血管の開口部に形成される病気であると定義される。
【００１０】
危険因子には以下のものがある。
・年齢：この病気になる50％以上の人は年齢が40歳を超えている
・性別：40歳未満の女性に多く、特に妊娠中の女性に多い
・肥満
・エストロゲン〜プロゲステロンの服用
・喫煙
・動脈性高血圧
・糖尿病
・高コレステロール血症
・寝込んでうっ血しやすくなること
・静脈瘤
・心不全
・手術：手術後にこの病気の頻度が増える。
【００１１】
ヘパリンは、D-グルコサミンとグルクロン酸またはイズロン酸とからなるグリコシド単位で構成されていて硫酸基を含む陰イオン性の天然ムコ多糖であり、マスト細胞により合成される。工業的には、ウシの肺またはブタの腸から抽出される。グルコサミンとウロン酸は硫酸基またはアセチル基で置換することができるため、異なる10種ほどのグリコシド単位が存在する。これらグリコシド単位は、非常に整然とした分布をしており、分子内で3つの領域を規定している。そのうちの1つは五糖構造であり、そこが、ヘパリンと抗トロンビンIIIの作用部位となっている。ヘパリンは、抗トロンビンIIIと結合し、いくつかの凝固因子、トロンビン、Xa因子を特に不活化する。その結果、セファリン活性化時間として測定される凝固時間が長くなる。ヘパリンは、実際には非常に多彩な構成要素からなる物質である。というのも、糖鎖を有する分子量が2,500〜40,000ダルトンの複数分子のモザイクを含んでいるからである。天然ヘパリンの多糖鎖は、さまざまな方法で断片化することができる（クロマトグラフィ、化学的手段による加水分解、酵素による加水分解）。その結果として独自の性質を有する低分子量ヘパリン（LMWH）が得られるため、断片化されていないヘパリンとの識別が可能になる。臨床医にとって最も重要な性質は、半減期が約2倍に延びること、抗凝固効果が弱まるか、なくなること、皮下投与が極めて容易になること、局所的な受容性が向上すること、出血能が弱まること、薬物代謝時間が長くなることである。
【００１２】
ヘパリンは、現在のところ非経口投与であり、静脈内投与または皮下投与されている。しかしこのタイプの投与法には制約があるため、患者がその方法を遵守せねばならないという問題が発生する可能性がある。さらに、静脈内注射されたヘパリンは、血液循環から素早く排泄されるため、有効な抗凝血作用を得るには規則的な間隔で大量に投与する必要がある。その結果、異常出血や合併症（例えば血小板減少症）がしばしば伴うことになる。
【００１３】
そのため、ヘパリンを経口投与できれば、心臓血管分野の多数の臨床例において実際に大きなインパクトがあろう。
【００１４】
ところでヘパリンは、構造上、高分子量で電荷密度が大きい分子となっている。したがって経口投与後に消化器の壁を越えるのは容易でない。
【００１５】
そのため、経口投与されたヘパリンは胃腸管レベルでは吸収されず、酸性環境で抗凝固活性が失われる（Morton他、Int. J. Pharm.、第9巻、321-335ページ、1981年；Doutremepuich他、Seminars in Thrombosis and Hemostasis、第11巻（3）、323-325ページ、1985年）。それゆえに採用された方法は、吸収／抗凝固活性の不足を投与量を多くすることで補うというものであった。
【００１６】
例えば以前の研究により、溶液状のヘパリンを大量に（40,000IU、すなわち2時間ごとに静脈内投与する従来量の10〜17倍）ヒトに経口投与しても、消化器レベルではわずかな量しか吸収されず、血液中にもわずかな量しか分布しないことが明らかにされた。さらに、セファリン活性化時間（CAT）試験により測定される抗凝固活性は、非常に弱い（Baughman他、Circulation、第16巻、1610-1615ページ、1998年）。同様に、ヒトに低分子量ヘパリン（LMWH）を経口投与しても、血漿中ではいかなる活性も観測されなかった（Dryjski他、Br. J. Clin. Pharmacol.、第2巻、188-192ページ、1989年）。
【００１７】
ヘパリンを経口投与した後の生体利用率を大きくするため、ヘパリンを化学的に修飾する多くの方法やさまざまな製剤調製法が試みられた。
【００１８】
その第1は、ヘパリンの構造を変化させる研究であった（ある程度断片化された異なる起源のヘパリンから低分子量ヘパリンを生み出す）。
【００１９】
イオン化するヘパリンを減らすため、ヘパリンをリシン、スペルミン、グリシンなどのアジュバントと組み合わせた溶液が調製された。この溶液を経口投与したが、ヘパリンの吸収は少なかった（Tidball他、Proc. Soc. Exp. Biol. Med.、第111巻、713-715ページ、1962年）。
【００２０】
ヘパリンの酸性塩溶液も調製された。そのためには、ヘパリンにエチレンジアミン四酢酸のナトリウム塩を組み合わせるか、あるいは胆汁酸塩を組み合わせる（Morton他、Int. J. Pharm.、第9巻、321-335ページ、1981年）。
【００２１】
ヘパリンの吸収を増やすため、モノオレイン塩の水中油エマルション（O/W型）またはミセル溶液も考えられた（Taniguchi他、Int. J. Pharm.、第4巻、219-228ページ、1980年）。
【００２２】
ヘパリンと、芳香族アミノ酸（4-アミノフェニルブチル酸）のアセチル化誘導体化合物とを含むプロピレングリコール溶液をラットとサルに経口投与すると、胃腸におけるヘパリンの吸収とヘパリンの生体利用率が上昇することがわかった（Leone-Bay他、J. Controlled Red.、第50巻、41-49ページ、1998年）。
【００２３】
さまざまなこれらヘパリン溶液（Tidball他、Proc. Soc. Exp. Biol. Med.、第111巻、713-715ページ、1962年；Morton他、Int. J. Pharm.、第9巻、321-335ページ、1981年；Taniguchi他、Int. J. Pharm.、第4巻、219-228ページ、1980年；Leone-Bay他、J. Controlled Red.、第50巻、41-49ページ、1998年）によって多くの場合に胃腸におけるヘパリンの吸収が改善されたとはいえ、皮下投与した場合と比べると、はるかに多い薬量であるにもかかわらず、観測された抗凝固効果ははるかに弱く、その持続時間も短かった。さらに、使用する吸収促進剤と添加剤に関する毒物薬理学の規約があるため、これら製剤の成功が危ぶまれる。
【００２４】
胃での耐性を有するゼラチンカプセルにしたヘパリンをウサギに投与したところ、1〜4時間後に弱い抗Xa血漿活性（0.15IU/ml）が観測された。しかしこの場合にも、極めて大量のヘパリン（15,000IUの抗Xa/kg）を投与している（Doutremepuich他、Therapie、第39巻、147-152ページ、1984年）。
【００２５】
他の研究は、ヘパリンの吸収を最適化して望む治療効果を得ることを目的としたものであった。この新しい方法は、薬剤投与系としてリポソームやマイクロ粒子などを製造することを特徴としていた。その結果、ヘパリンをカプセル化することが可能になった。酵素、薬剤、ホルモンで利用されているカプセル化という方法を用いると、これら分子は、自由状態にあるときよりも長い時間にわたって血液循環系の中に留まることになる。それは、これら分子がポリマー系から徐々に放出されるだけでなく、ポリマー系がこれら分子を酵素による分解から護っているからである（Couvreur他、Drug Del. Rev.、第10巻、141-162ページ、1993年）。
【００２６】
リポソームを調製してイヌに投与することも行なわれた。すると有効成分が腸で吸収されることが観測されたが、ヘパリンの投与量が極めて多い（500,000IU）にもかかわらず、弱い生物活性しか検出できなかった（Ueno他、Chem. Pharm. Bull.、第30巻（6）、2245-2247ページ、1982年）。
【００２７】
最後に、熱圧縮したアミノ酸からなる微粒子も開発された（Santiago他、Proceed. Intern. Symp. Control. Rel. Mater.、第19巻、514-515ページ、1992年；Santiago他、Proceed. Intern. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater.、第20巻、300-301ページ、1993年）。この場合、得られた微粒子はサイズが0.5〜10μmであり、プロテイノイドと呼ばれている。ラットとサルにこの微粒子を経口投与したところ、ヘパリンが腸で吸収されることが結論づけられた。しかしこの有望な結果には大きな障害が3つある。その第1は、ヘパリンが最大で90分間しか生物活性を示さないことである。しかもラットでの生物活性は、ヒトで非経口投与した場合の10倍を超える投与量にして得られたものである。要するに、経口投与によって免疫化するという現在非常に多く行なわれている研究は、抗原を充填したサイズが1〜10μmのマイクロ粒子をパイエル板で捕獲する現象に基づいている。その場合には、使用するプロテイノイドによって免疫アレルギー反応が誘起される可能性があるため、この微粒子を繰り返して投与することは危険である。
【００２８】
ポリマー系も多く研究されてきた。例えばヤングら（J. Control. Rel.、第60巻、269-277ページ、1999年）は、インビトロの研究において、血管の平滑筋細胞の増殖抑制を目的として、乳酸とグリコール酸のポリマー（PLGA）だけに基づいてヘパリンのマイクロ粒子を調製した（J. Control. Rel.、第60巻、269-277ページ、1999年）。スプレー乾燥法で製造したマイクロ粒子はサイズが非常に小さい（3〜9μm）。インビトロでのヘパリンの放出は非常にゆっくりとしているため（10〜40日）、通過時間が24〜48時間の程度である経口投与には適していない。
【００２９】
ところでこれらのどの試みにおいても、ヒトの治療に通常用いられるよりは非常に多い投与量にしている。そのため、経口投与後に有効成分（特にヘパリン）の吸収を増やすとともに、その有効成分の濃度があまり高くならないようにして好ましくない副作用を減らすことのできる投与系を患者が利用できるようにすることが、相変わらず必要とされている。
【００３０】
ところで発明者は、大きな分子が胃腸の壁を越えて浸透するという驚くべき、そして予想に反する事実に基づき、非腸溶性の生物分解性ポリマーと非腸溶性のポリカチオン性ポリマーからなる混合物をベースとしたポリマー・マトリックスを含む粒子状担体により、非経口経路で従来投与していたのと同程度の量の有効成分（特にヘパリン）を経口投与できることを明らかにした。
【００３１】
また、本発明は、経口投与した有効成分の吸収を改善するため、少なくとも1つの生物分解性ポリマーと少なくとも1つのポリカチオン性ポリマーを含むポリマー・マトリックスからなる粒子状担体を提供することも目的とする。
【００３２】
本発明において、生物分解性ポリマーとポリカチオン性ポリマーは、胃での抵抗性が（腸溶性で）あってもなくてもよい。
【００３３】
本発明の別の特別な実施態様では、ポリマー・マトリックスにおける生物分解性ポリマーに対するポリカチオン性ポリマーの割合が1〜99％となっている。
本発明の別の特別な実施態様では、生物分解性ポリマーとポリカチオン性ポリマーが同じ量含まれている。
【００３４】
非腸溶性の生物分解性ポリマーは、ポリエステル（中でも乳酸ポリマー）、乳酸とグリコール酸のコポリマー（PLGA）、ポリ-ε-カプロラクトン（PCL）、ポリ無水物、ポリ（アミド）、ポリ（ウレタン）、ポリ（カーボネート）、ポリ（アセタール）、ポリ（オルトエステル）、天然ポリマー（コラーゲン、多糖など）からなるグループの中から選択することが望ましい。
【００３５】
ポリカチオン性ポリマーは、セルロース誘導体、レーム社からオイドラギット（Eudragit（登録商標））の名称で市販されているアクリル酸エステルとメタクリル酸エステルのコポリマー（さらに特定するならば、トリメチルアンモニオエチルメタクリレートの塩化物がわずかに含まれたメタクリル酸ポリエステル（オイドラギット（登録商標）RS）、またはトリメチルアンモニオエチルメタクリレートの塩化物がそれよりも多く含まれたメタクリル酸ポリエステル（オイドラギット（登録商標）RL））、キトサンとその誘導体、ポリリシンからなるグループの中から選択することが望ましい。
【００３６】
本発明の特に好ましい実施態様では、生物分解性ポリマーはPCLまたはPLGAであり、そのポリマーの分子量は2,000〜100,000の範囲である。
【００３７】
本発明の特に好ましい実施態様では、粒子状担体は、直径が50〜1000nm、好ましくは200〜400nmのナノ粒子の形態、あるいは直径が1〜1000μm、好ましくは50〜200μmのマイクロ粒子の形態である。
【００３８】
本発明によれば、ポリマー・マトリックスはさらに、腸溶性ポリマー、界面活性剤、水溶性または油溶性の物質からなるグループの中から選択した1つまたは複数の物質を含むことができる。
【００３９】
本発明の特別な実施態様では、有効成分は、ヘパリンおよびその類似物、低分子ヘパリン（LMWH）とその類似物、ペプチドおよびタンパク質（中でもインスリン、シクロスポリン）、アンチセンス・オリゴヌクレオチド、DNA、成長ホルモンからなるグループの中から選択する。
【００４０】
本発明の別の特別な実施態様では、粒子状担体により、1日に2,000IU〜20,000IUの投与量の標準ヘパリンと、1日に600IU〜4,200IUの投与量のLMWHを注入することができる。
【００４１】
本発明は、上記の粒子状担体と、薬理学的に受容可能な任意の添加剤とを含む医薬組成物を提供することも目的としている。
【００４２】
この組成物は、経口投与に適した任意の形態（特にゼラチンカプセル、錠剤、袋入り、凍結乾燥品の形態）で、1日に1回または複数回使用することができる。
【００４３】
本発明の組成物により、有効成分を、非経口投与による投与量の約1〜10倍を投与することができる。このような担体により、非経口投与の欠点（薬剤の殺菌、注射箇所の痛み、患者の不安、感染のリスク、注射回数の制限）をなくすことができる。さらに、非常に多い量の有効成分を投与することが経口投与においてはしばしばあるが、この組成物により、そのような事態を避けることができる。というのも、有効成分は非経口で従来投与されていたのと同じかそれよりもほんのわずかに多い投与量（最大で10倍、好ましくは1〜3倍）が使用されるからである。
【００４４】
他方、生体適合性があると考えられる（生物分解性および／または非生物分解性の）ポリマーを使用することで、上記粒子に毒性のないことが保証される。
【００４５】
経口投与だと、胃腸管に滞在すること（胃の酸性pH、酵素、さまざまな分泌物、肝臓初回通過など）によって有効成分の損失が起こるため、活性をもたらすのに静脈内投与の場合よりも投与量をしばしばはるかに多くせねばならないことが知られているにもかかわらず、本発明の粒子状担体により、同じ投与量を溶液として静脈内投与した場合よりも作用時間を長くできるという予想外なことも起こった。
【００４６】
本発明によれば、粒子状担体は、当業者に公知の任意の方法で調製することができる。例えばアレックスら（J. Microencapsulation、第7巻（3）、347-355ページ、1990年）が記載しているように、エマルション化した後に溶媒を蒸発させるという調製法を挙げることができる。他の方法を用いることもできる。その中では、特にスプレー乾燥法、コーティング法、押し出し法が挙げられる。
【００４７】
以下に示す実施例と図面は本発明を説明するものであるが、本発明がこれら実施例と図面に限定されることはない。
【実施例】
【００４８】
実施例 1 ：ヘパリンを含む粒子状担体の調製（マイクロ粒子）
標準ヘパリンまたは低分子量ヘパリンの溶液（1ml、5,000IU）を、ポリマーまたはポリマー混合物（250mg）を含むジクロロメタン溶液（10ml）に入れ、3分間（500rpm）にわたって磁気撹拌することにより乳化させる。次に、この第1のエマルション（水／油）を、界面活性剤とポリビニルアルコール（0.1％、加水分解率88％）を含む水（1500ml）の中に入れ、機械的に撹拌（2000回／分）することにより、第2のエマルション（水／油／水）が得られる。2時間撹拌した後、溶媒を蒸発させると液滴が分散した沈殿物が得られる。次に、このようにして得られたポリマーのマイクロ粒子を濾過して分離する。粒子の平均サイズは150μmである。
【００４９】
実施例 2 ：ヘパリンとゼラチンAを含む粒子状担体の調製（マイクロ粒子）
ゼラチンA（0.5％）をヘパリン溶液に添加し、実施例1の操作を行なう。
【００５０】
実施例 3 ：ヘパリンと塩化ナトリウムを含む粒子状担体の調製（マイクロ粒子）
塩化ナトリウム（0.2％）をヘパリン溶液に添加し、実施例1の操作を行なう。
【００５１】
実施例 4 ：ヘパリンを含む粒子状担体の調製（ナノ粒子）
標準ヘパリンまたは低分子量ヘパリンの溶液（1ml、5,000IU）を、ポリマーまたはポリマー混合物（250mg）を含むジクロロメタン溶液（10ml）に入れ、3分間にわたって超音波を利用することにより乳化させる。次に、この第1の溶液（水／油）を、界面活性剤とポリビニルアルコール（0.1％）を含む水（200ml）の中に入れ、加圧下でホモジェネートにすることにより（押し出し式ホモジナイザー）、第2のエマルション（水／油／水）が得られる。3分間にわたって破砕した後、撹拌を止め、減圧した蒸発器の中でコロイド状懸濁液から溶媒を蒸発させる。すると水中にポリマーのナノ粒子が形成される。ナノ粒子を含むこの懸濁液を遠心分離（25000g）により3回洗浄する。この懸濁液は、そのままで、あるいは凍結乾燥させて使用することができる。ナノ粒子の平均サイズは250nmである。
【００５２】
実施例 5 ：ヘパリンとゼラチンAを含む粒子状担体の調製（ナノ粒子）
ゼラチンA（0.5％）をヘパリン溶液に添加し、実施例4の操作を行なう。
【００５３】
実施例 6 ：ヘパリンと塩化ナトリウムを含む粒子状担体の調製（ナノ粒子）
塩化ナトリウム（0.2％）をヘパリン溶液に添加し、実施例4の操作を行なう。
【００５４】
実施例 7 ：粒子の物理化学的キャラクテリゼーション
マイクロ粒子とナノ粒子を実施例1〜6の操作法に従って調製する。これら粒子は、ポリマーまたはポリマー混合物を合計で0.25g含んでいる。
【００５５】
マイクロ粒子の特性は、表1にまとめてある。数値は3回行なった実験の平均である（平均±標準偏差）。
【００５６】
ナノ粒子の特性は、表2にまとめてある。数値は4回行なった実験の平均である（平均±標準偏差）。
【００５７】
粒子内および／または粒子上の有効成分の量（割合（％）と、ポリマー１gに含まれるヘパリンのIUで表示）は、断片化していない標準ヘパリンの場合にはアズールII溶液を用いた比色法で決定し、LMWH（低分子量ヘパリン）の場合には比濁法によって決定した。
【００５８】
マイクロ粒子とナノ粒子の直径は、当業者に従来から知られている光の回折／散乱法により得られた。
ナノ粒子の表面電位は、電気泳動レーザーによって測定した。
【００５９】
結果から、上記製造方法の再現性が非常によいことがわかる。
生分解性ポリマーだけを用いて調製したマイクロ粒子とナノ粒子では、ヘパリンの混入率が小さい。そのため、たとえ一部しか吸収されないと仮定しても、（たった1回の投与で数グラムのオーダーという）多過ぎて生体には不適な量の粒子を投与することが要求されよう。
【００６０】
逆に、本発明のマイクロ粒子の混入率は十分大きいため、生体に適した量を投与することができる。
【００６１】
【表１】

【表２】

【００６２】
実施例 8 ：インビトロで放出されたヘパリンの量
実施例1〜6に従って調製した微粒子をカプセル化した後に開放されたヘパリンの生物活性を、比色法（CAT、セファリン活性化時間；C.K.プレスト（Prest、登録商標）キット、ディアノスティカ・スタゴ社）と発色法（抗Xa活性；スタクロム（Stachrom、登録商標）ヘパリン・キット、ディアノスティカ・スタゴ社）を製造者の指示に従って行なうことによって測定した。
得られた結果から、放出されたヘパリンの量が2つの方法で同じであることがわかった。これは、ヘパリンが、カプセル化後にも生物活性を維持していることを裏付けている。
【００６３】
実施例 9 ：ウサギに経口投与した後のインビボでの研究
結果を図1と図2に示してある。
250mgのポリマーまたはポリマー混合物をもとにして実施例1〜6に従って調製したヘパリンのポリマー粒子を含むゼラチンカプセルを、12時間食事を与えていない状態のウサギに投与した。投与量は、標準ヘパリンを2,000IU、LMWHを600IUの一通りだけである。時刻T₀以降、定期的に耳の外静脈から血液を採取した（500μl）。それぞれのサンプルを7,000gで8分間にわたって遠心分離した後、セファリン活性化時間または抗Xa活性を実施例8のようにして測定した。
【００６４】
有効成分を従来用いられている濃度の1/20〜1/250にして経口投与するという本発明独自の方法を実施したところ（ヘパリンを2,000IUにした。しかし公知の研究結果によると、投与量は、8時間ごとに40,000、60,000〜90,000IUを5日間（Baughman他、Proceed. Intern. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater.、第26巻、4ページ、1999年）から、500,000IU（Ueno他、Chem. Pharm. Bull.、第30巻（6）、2245-2247ページ、1982年）までとなっている）、本発明に従って調製したヘパリン粒子によりヘパリンが有意に増加し、血液凝固時間が長くなるという予想外のことが起こった。
【００６５】
逆に、生物分解性ポリマー（PLGA、PCLなど）だけで調製したマイクロ粒子またはナノ粒子を経口投与した場合には、標準ヘパリンの吸収はまったく確認できなかった。非生物分解性ポリマー（オイドラギット（登録商標）RL、オイドラギット（登録商標）RS）のみで調製したマイクロ粒子またはナノ粒子を投与した場合にも、標準ヘパリンの吸収はまったく観測できなかった。
したがって本発明によるヘパリンの粒子状担体を用いると、現在ヒトに静脈内投与または皮下投与しているのとほぼ同じ量を経口投与でき、しかも有効成分の効果を長持ちさせることができる。
【００６６】
実施例 10 ：インスリンを含む粒子状担体の調製（ナノ粒子）
ポリマー混合物（250mg）を含むジクロロメタン溶液中で30秒間にわたって超音波を用いることにより、インスリン溶液をエマルション化した。
次に、この第1のエマルション（水／油）を、界面活性剤とポリビニルアルコール（0.1％）を含む水（40ml）の中に入れ、1分間にわたって超音波を利用することにより、乳化させる。すると、第2のエマルション（水／油／水）が得られる。
【００６７】
次に、減圧した蒸発器の中で有機溶媒を蒸発させる。するとナノ粒子が形成される。このコロイド状懸濁液を30分間にわたって遠心分離（42,000g）し、上清を除去し、ナノ粒子を再び水中に分散させ、その状態で使用する。ナノ粒子の平均サイズは350nmである。
【００６８】
実施例 11 ：糖尿病ラットにインスリン・ナノ粒子を投与した後のインビボでの研究
結果を図3と図4に示してある。
【００６９】
実施例10に従って調製したインスリン・ナノ粒子の懸濁液を、ストレプトゾトシンの投与によって糖尿病にした上で12時間食事を与えていない状態にしたラットに、経口投与（投与量は100IU/kgの一通りだけ）した。このナノ粒子を経口投与してから4時間後と8時間後にブドウ糖負荷試験（2gのブドウ糖を経口投与）を行なった。時刻T₀以降、定期的に尾の静脈から血液を採取した。血糖値とインスリン値をそれぞれの血液サンプルについて測定した。
本発明に従って調製したインスリン粒子を経口投与するという本発明独自の方法を実施した後は、血糖値が有意に低下するという予想外のことが起こった。
それと並行して、インスリン値の増加が観測された。
【図面の簡単な説明】
【図１】図1は、ヘパリンの生物活性を示すグラフである。ヘパリンの生物活性は、ヘパリンのマイクロ粒子を経口投与した後のセファリン活性化時間から決定される。なおヘパリンのマイクロ粒子は、実施例1の操作法に従ってオイドラギット（登録商標）RS／PLGAを1：1の割合で混合したポリマー混合物をもとにして調製し、投与は、実施例9の操作法に従って行なった。
【図２】図2は、ヘパリンのナノ粒子を経口投与した後のヘパリン吸収量を示すグラフである。なおヘパリンのナノ粒子は、実施例1の操作法に従ってオイドラギット（登録商標）RL／PCLを1：1の割合で混合したポリマー混合物から調製し、投与は、実施例9の操作法に従って行なった。
【図３】図3は、血糖値の変化を示すグラフである（治療なし=治療していないラット；インスリン=本発明のナノ粒子で治療したラット）。この変化は、実施例10の操作法に従って調製したインスリンのナノ粒子を経口投与した4時間後にブドウ糖2gを経口投与することによって誘起された。
【図４】図4は、血糖値の変化を示すグラフである（治療なし=治療していないラット；インスリン=本発明のナノ粒子で治療したラット）。この変化は、実施例10の操作法に従って調製したインスリンのナノ粒子を経口投与した8時間後にブドウ糖2gを経口投与することによって誘起された。

Claims

ポリマーマトリックス及び有効成分を含有する経口用粒子状担体組成物であって、該有効成分は、ヘパリン又はインスリンであり、該ポリマーマトリックスは、ポリカチオン性ポリマーと混合された生物分解性ポリマーを含み、該生物分解性ポリマーと該ポリカチオン性ポリマーは、等量で存在し、該生物分解性ポリマーは、PCL又はPLGAのいずれかであり、該生物分解性ポリマーの分子量は、2,000〜100,000の間にあり、そして該ポリカチオン性ポリマーは、セルロース誘導体、アクリル酸エステルとメタクリル酸エステルのコポリマー、キトサン、及びポリリジンから成る群から選択される、前記粒子状担体組成物。
ナノ粒子又はマイクロ粒子の形態にある、請求項１に記載の粒子状担体組成物。
直径50〜1,000ｎｍの間のナノ粒子の形態にある、請求項２に記載の粒子状担体組成物。
直径200〜400ｎｍの間のナノ粒子の形態にある、請求項３に記載の粒子状担体組成物。
直径1〜1,000μｍの間のマイクロ粒子の形態にある、請求項２に記載の粒子状担体組成物。
直径50〜200μｍの間のマイクロ粒子の形態にある、請求項５に記載の粒子状担体組成物。
腸溶性ポリマー、水溶性又は油溶性の物質から成る群から選択される１つ又は複数の物質をさらに含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の粒子状担体組成物。
請求項１〜７のいずれか１項に記載の少なくとも1つの粒子状担体と薬理学的に許容される添加剤とを含む医薬組成物。
経口投与用形態に調製されている、請求項８に記載の医薬組成物。
ジェルカプセル、錠剤、顆粒、サシェ又は凍結乾燥物の形態に調製されている、請求項９に記載の医薬組成物。