JPH11116499A - 生理活性ペプチドを含有した経口投与用ナノスフェア - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 経口投与用ナノスフェアであり、生理活性ペ
プチドの吸収性の改善および吸収の持続化により、医療
上有用な効果を有する生理活性ペプチド含有経口投与用
ナノスフェアを提供する。 【解決手段】 生理活性ペプチドを含有した生体内分解
性ポリマーの核部分を消化管粘膜付着性高分子、必要に
応じてポリビニルアルコールとともに被覆した経口投与
用ナノスフェア。 【効果】 生理活性ペプチドの良好な吸収率と吸収の持
続性を持った生理活性ペプチドの経口投与用製剤が提供
でき、このことにより、これまで注射などでしか投与で
きなかった生理活性ペプチドが経口でも投与可能とな
り、患者のＱＯＬの改善につながる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、生理活性ペプチド
を含有した生体内分解性ポリマーの核部分を消化管粘膜
付着性の高分子で被覆した、経口投与用ナノスフェアに
関するものであり、生理活性ペプチドの吸収性の改善お
よび吸収の持続化により、医療上有用な効果を有する生
理活性ペプチド含有経口投与用ナノスフェアを提供する
技術に関する。

【０００２】

【従来の技術】医薬の研究の進歩、また遺伝子工学の進
歩により、カルシトニン類やインスリンをはじめとする
生理活性ペプチドの医薬品としての有用性が示され、ま
た、医療の場での使用頻度が高まって来ている。しかし
ながら、一般にペプチドは水溶性が高く、分子量が大き
いため消化管からの吸収がきわめて低く、また、消化管
内での酵素による加水分解を受けやすいために、経口投
与によるバイオアベイラビリティーはきわめて低い。

【０００３】このため、カルシトニン類やインスリンを
はじめとするペプチド性医薬品は、現在臨床ではほとん
どの場合、注射剤として使用されている。しかし、注射
は投与時に疼痛が伴い、また、これらペプチド性医薬品
は一般に血中半減期が短いために頻回投与が必要である
こと、さらには、多くの場合入院や通院が必要であるこ
とが、患者のＱＯＬ（生活の質）を低下させている。こ
のため、ペプチド性医薬品の投与経路の変更として、経
口投与製剤、経鼻投与製剤、坐剤、経腟剤、経肺投与製
剤、点眼剤、およびイオントフォレーシスなどの経皮投
与製剤、などを目指した研究が数多くなされている。

【０００４】特に、投薬がもっとも簡便で一般的な、経
口投与製剤化を目指し、多くの研究がなされている。
〔Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．，ｖｏｌ．８６，２３９−
２４６，（１９９２））、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，ｖｏ
ｌ．１３，Ｎｏ．１２，１８３８−１８４５，（１９９
６）〕。しかしながら、経口投与においては何れも十分
な吸収性を得られるには至っておらず、また、持続化も
なされていない。

【０００５】また、近年医薬品の製剤技術に関する研究
領域において、生体内分解性高分子を基剤としたコント
ロールリリース製剤などの研究が数多くなされている。
そのうち、すでにかなりの技術が積み重ねられているも
のに、マイクロカプセル、マイクロスフェアと称される
ものがあり、注射剤や経口剤などでの利用が試みられて
いる。

【０００６】これらのなかには、薬物として、黄体形成
ホルモン放出ホルモン（ＬＨ−ＲＨ）の誘導体である酢
酸リュープロレリンを含み、高分子として乳酸・グリコ
ール酸共重合体を用いたもので〔Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒ
ｍ．Ｂｕｌｌ．，ｖｏｌ．３６，１０９５−１１０３，
（１９８８）〕、既に医薬品として利用されているもの
もある。また最近、ナノカプセル、ナノスフェアと称さ
れるものについての研究も進められている。通常のマイ
クロカプセル、マイクロスフェアの粒径は、約５〜５０
０マイクロメートルであるのに対し、ナノカプセル、ナ
ノスフェアは粒径が、通常約１０００ナノメートル以下
のものであり、下限としては５０ナノメートル程度であ
るが特に下限を限定するものではない。

【０００７】各種のマイクロカプセル、マイクロスフェ
アの製造法については、すでに数多くの開示があり〔特
開平１−２１６９１８号公報〕、また、ナノスフェア、
ナノカプセルの製造法についても、既にいくつかの技術
が開示されている〔特開平５−５８８８２号公報〕。一
方、天然の高分子であるキチンや、その脱エステル化体
であるキトサンについて、近年幅広い分野でその利用に
ついての検討がなされており、医薬の分野においても、
創傷の治癒に関する効果や、製剤の基剤としての利用に
ついて、研究がなされている。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明は生理活性ペプ
チドの経口投与用製剤として消化管からの吸収性が良
く、また持続性を付与した、有用な生理活性ペプチドの
経口投与用ナノスフェアを提供しようとするものであ
る。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明者らはこれまで、
生体内分解性ポリマーである乳酸・グリコール酸共重合
体やポリ乳酸などを用いたナノスフェアについて、その
製造法や医薬品としての有用性について研究を重ねてき
ている。また一方で、天然の高分子であり、いくつかの
興味深い性質を有するキトサンについて、製剤分野での
利用について、種々検討を重ねてきている。

【００１０】今回、生理活性ペプチドであるエルカトニ
ンを含有し、生体内分解性ポリマーである乳酸・グリコ
ール酸共重合体からなるナノスフェアを核部分とし、こ
れに消化管粘膜付着性高分子の一つであるキトサンで被
覆することにより、経口投与時の消化管からの吸収が向
上し、また持続化した経口投与用ナノスフェアが得られ
ることを見いだし、さらに消化管粘膜付着性高分子とと
もにポリビニルアルコールで被覆することにより好適な
経口投与用ナノスフェアが得られることを見いだした。

【００１１】本発明は上記の知見に基づいて完成された
もので、生理活性ペプチドを含有した生体内分解性ポリ
マーの核部分を消化管粘膜付着性高分子で被覆した経口
投与用ナノスフェア、生理活性ペプチドを含有した生体
内分解性ポリマーの核部分を消化管粘膜付着性高分子及
びポリビニルアルコールで被覆した経口投与用ナノスフ
ェアを提供するものである。

【００１２】本発明に用いられる生体内分解性ポリマー
とは、生体内で分解・消失する性質を有する高分子であ
り、生理活性を持たないポリマーであればどのようなも
のであってもよい。このようなポリマーとしては、例え
ば、乳酸、リンゴ酸、ヒドロキシ酢酸、グリコール酸な
どのホモポリマー（重合体）、並びにこれらのコポリマ
ー（共重合体）が挙げられる。好ましくは、ポリ乳酸、
ポリグリコール酸、乳酸・グリコール酸共重合体であ
り、さらに好ましくは、乳酸・グリコール酸共重合体で
ある。

【００１３】ポリ乳酸としては、分子量約２０００〜２
０００００、好ましくは２０００〜１０００００、さら
に好ましくは５０００〜５００００のものが挙げられ
る。ポリグリコール酸としては、分子量約２０００〜２
０００００、好ましくは１００００〜１５００００、さ
らに好ましくは３００００〜１０００００のものが挙げ
られる。乳酸・グリコール酸共重合体としては、乳酸と
グリコール酸を約０．０１：１〜１：０．０１、好まし
くは１：５〜１０：１、さらに好ましくは１：１〜６：
１の比率で含む、分子量約２０００〜２０００００、好
ましくは５０００〜１５００００、さらに好ましくは１
００００〜１０００００の共重合体である。これらはた
とえば、乳酸とグリコール酸をイオン交換樹脂を触媒と
して弱い減圧下に加熱し、縮合重合させることにより製
造される。また適当な市販品も存在する。本発明におい
ては、これらを単独で用いてもよく、また、数種類を混
合して用いてもよい。

【００１４】本発明にいう消化管粘膜付着性高分子と
は、ヒトを含む哺乳動物の胃、小腸、大腸などの消化管
のいずれかの部分の内腔側の粘膜に付着する性質を有す
る高分子であればよく、この付着性は、例えばラットの
腸管を用いた実験などにより容易に確認することがで
き、例えばキトサン、ポリアクリル酸およびキトサン誘
導体からなる群より選ばれた１種または２種以上のもの
が挙げられる。好ましくは、キトサンまたはポリアクリ
ル酸であり、さらに好ましくはキトサンである。

【００１５】キトサンは、生体適合性に優れ、生体内分
解性を有する天然高分子であり、その面からも好適であ
る。ここでいうキトサンとは、完全に脱エステル化され
たキチンを示すものではなく、一部もしくは全てが脱エ
ステル化されたキチンを示す。本発明に用いられるポリ
アクリル酸としては、分子量約１０００〜１００００の
ものが挙げられ、好ましくは２０００〜５０００であ
る。

【００１６】本発明に用いられるキトサンとしては、分
子量約５０００〜２０００００のものが挙げられ、２０
０００〜１０００００が好ましく、３００００〜７００
００がさらに好ましい。また、その脱エステル化度は約
５０〜１００％のものが挙げられ、７０〜１００％が好
ましく、８０％〜１００％がさらに好ましい。キトサン
は、通常、精製キチンを原料として、３０〜６０％の強
アルカリ溶液中で、加熱加水分解することによって調製
することができる。また既に適当な市販品も存在する。

【００１７】キトサンの誘導体としては、カルボキシメ
チル化キトサン、カルボキシエチル化キトサン、ヒドロ
キシエチル化キトサン、ジヒドロキシプロピル化キトサ
ンなどが挙げられる。また、本発明に用いられるポリビ
ニルアルコールとしては、重合度約１００〜５０００の
ものが挙げられ、好ましくは１００〜３０００、さらに
好ましくは２００〜２０００のものが挙げられる。ま
た、そのけん化度は、約７０〜１００のものが挙げら
れ、好ましくは７５〜９５、さらに好ましくは７５〜９
０のものが挙げられる。このようなポリビニルアルコー
ルは、ポリ酢酸ビニルの部分もしくは完全加水分解によ
り製造することもできるが、適当な市販品も存在する。

【００１８】さらに、本発明に用いられる生理活性ペプ
チドとしては、３個以上のアミノ酸から構成される生理
活性を持つペプチドが用いられる。その分子量としては
約３００〜１００００のものが好ましい対象として挙げ
られる。例えば、カルシトニン類、インスリン、副甲状
腺ホルモン（ＰＴＨ）類、カルシトニン遺伝子関連ペプ
チド（ＣＧＲＰ）、アンギオテンシンII、バソプレシ
ン、酢酸デスモプレシン、酢酸ブセレリン、酢酸ゴセレ
リン、酢酸ナファレリン、酢酸リュープロレリン、ソマ
トスタチン、グルカゴン、オキシトシン、セクレチン、
黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨ−ＲＨ）、副腎皮
質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、甲状腺ホルモン放出ホル
モン（ＴＲＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、心房
ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）およびこれらの合成
品および半合成品を含む誘導体などが挙げられる。この
うち、カルシトニン類としては、ウナギカルシトニン、
サケカルシトニン、ヒトカルシトニン、ブタカルシトニ
ン、ニワトリカルシトニンなどの天然型カルシトニンお
よびＡＳＵ^1-7 ウナギカルシトニン（エルカトニン）、
ＡＳＵ^1-7 ニワトリカルシトニンなどの半合成カルシト
ニンが挙げられる。また、インスリンとしては、ヒトイ
ンスリン、ブタインスリン、ウシインスリン、およびこ
れらの誘導体が挙げられる。さらに、副甲状腺ホルモン
（ＰＴＨ）類としては、ヒトＰＴＨ（１−８４）、ヒト
ＰＴＨ（１−３８）、ヒトＰＨＴ（１−３４）およびこ
れらの誘導体などが挙げられる。好ましくは、カルシト
ニン類、インスリン及び副甲状腺ホルモン類であり、さ
らに好ましくはカルシトニン類であり、特に好ましくは
エルカトニンである。

【００１９】本発明で用いられるナノスフェアの大きさ
は、平均粒子径として、２０００ナノメートル以下であ
り、好ましくは１０００ナノメートル以下であり、さら
に好ましくは８００ナノメートル以下であり、下限とし
ては５０ナノメートル程度であるが、特に下限は限定さ
れるものではない。消化管粘膜付着性高分子のコーティ
ング量は、ナノスフェア全量の０．００１〜２０％（Ｗ
／Ｗ）であり、好ましくは０．００５〜５％（Ｗ／Ｗ）
である。また、ポリビニルアルコールのコーティング量
は、ナノスフェア全量の０．０１〜２０％（Ｗ／Ｗ）で
あり、好ましくは０．１〜１０％（Ｗ／Ｗ）である。

【００２０】本発明のナノスフェアは、生理活性ペプチ
ドを含有する生体内分解性ポリマーのナノスフェアの核
部分を公知の方法により調製し、これに消化管粘膜付着
性高分子をコーティングしてもよく、核部分のナノスフ
ェアの調製時に、同時に消化管粘膜付着性高分子でコー
ティングされるような方法により調製してもよい。本発
明のナノスフェアの製造工程のうち、消化管粘膜付着性
高分子によるコーティングを行う工程においては、凍結
乾燥時のナノスフェアの凝集を抑制し、また凍結乾燥後
の再分散性の優れたナノスフェアを得る目的から必要に
応じポリビニルアルコールなどの高分子を併用してもよ
く、好ましくは消化管粘膜付着性高分子とポリビニルア
ルコールを併用して同時にコーティングした方がよい。

【００２１】本発明のナノスフェアの基本的な調製法の
例として、「油中溶媒拡散法」と「水中溶媒拡散法」の
概略を以下に示すが、本発明はナノスフェアーの調製法
として、この２つの方法のみにとらわれるものではな
い。「油中溶媒拡散法」では、まず、脂肪酸グリセリド
などの脂質、ｎ−ヘキサンなどの第１の有機溶媒、及び
第１の乳化剤を混合し、溶解した外相＜Ａ＞を調製す
る。一方、生体内分解性ポリマー、生理活性ペプチド、
及び第２の乳化剤を第２の有機溶媒に溶解した内相＜Ｂ
＞を調製する。外相＜Ａ＞中に攪拌下、内相＜Ｂ＞をペ
リスターポンプなどを用いて、ゆっくりと滴下する。次
に、加温減圧下、数時間にわたり攪拌を続け、ナノスフ
ェアを生成させる。得られたナノスフェアの懸濁液につ
いて、必要に応じ第１の有機溶媒を加えたのち、遠心分
離を行い、上澄み液を除去する。さらに必要に応じ、粒
子表面の脂質を除去するために第１の有機溶媒を加えて
再懸濁し、遠心分離後、上澄み液を除去する操作を繰り
返す。

【００２２】得られたペレットを乾燥し、これを消化管
粘膜付着性高分子、および必要に応じポリビニルアルコ
ールを併せて溶解した水系溶液（水溶液、各種の緩衝液
溶液）中に分散させる。その後、遠心分離、上澄み液を
除去後、ペレットを水に再懸濁する。得られた懸濁液を
凍結乾燥することにより、生理活性ペプチドを封入し、
かつ消化管粘膜付着性高分子で、または消化管粘膜付着
性高分子とポリビニルアルコールでコーティングしたナ
ノスフェアを得ることができる。

【００２３】外相＜Ａ＞に用いる脂質とは、生体内分解
性ポリマー及び生理活性ペプチドを溶かしにくい性質を
持つ単純脂質であり、例としては、大豆油、ゴマ油、ヒ
マシ油、コーン油、綿実油などの植物油、脂肪酸グリセ
リドなどが挙げられ、これらの２種以上を混合して用い
てもよい。また、これらの脂質の代わりに、流動パラフ
ィンやシリコーンオイルを用いてもよい。

【００２４】第１の有機溶媒は、用いる脂質を溶かしや
すく、且つ生体内分解性ポリマー及び生理活性ペプチド
を溶かしにくい溶媒であり、例えばｎ−ヘキサン、ｎ−
ヘプタンなどである。外相＜Ａ＞は、上記の脂質または
第１の有機溶媒を単独で用いてもよいが、好ましくは、
脂質と第１の有機溶媒を混合して用いた方がよく、さら
に好ましくは、中鎖脂肪酸トリグリセリドとｎ−ヘキサ
ンなどを混合して用いるのがよい。

【００２５】内相＜Ｂ＞に用いる第２の有機溶媒は、生
体内分解性ポリマーおよび生理活性ペプチドを溶かしや
すく、第１の有機溶媒に溶け込む性質を持ち、且つ第１
の有機溶媒より低沸点の有機溶媒である。溶媒の沸点と
しては、約１２０℃以下、好ましくは１００℃以下、さ
らに好ましくは約３０〜８０℃である。例としては、ア
セトン、メタノール、エタノール、プロパノール、イソ
プロパノール、アセチルアセトン、テトラヒドロフラ
ン、ジオキサン等であり、またこれらの２種以上の混合
溶媒であってもよい。

【００２６】第１及び第２の乳化剤は、それぞれの溶媒
に溶解するものの中から、適当なものを選ぶことができ
る。第１の乳化剤は、条件によっては無くてもよい。乳
化剤の例としては、ステアリン酸ナトリウム、ラウリル
硫酸ナトリウムなどのアニオン性界面活性剤、ソルビタ
ン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪
酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキ
シエチレンヒマシ油誘導体などの非イオン性界面活性
剤、レシチンなどが挙げられる。これらの乳化剤は２種
以上を混合して用いてもよい。好ましくは、それぞれ非
イオン性界面活性剤を用いるのがよい。

【００２７】外相＜Ａ＞と内相＜Ｂ＞の混合比率は、内
相＜Ｂ＞１重量部当たり、外相＜Ａ＞０．５〜１０００
重量部、好ましくは１〜１００重量部である。また、生
体内分解性ポリマーの内相＜Ｂ＞中の濃度は、ポリマー
の種類や分子量、第２の有機溶媒の種類によって異なる
が、通常０．０１〜５０％（ｗ／ｗ）、好ましくは０．
１〜２０％（ｗ／ｗ）である。また、生理活性ペプチド
の生体内分解性ポリマーに対する割合は、ペプチドの種
類や目的とする吸収量及び持続時間により異なるが、例
えば、０．０００５〜５０％（ｗ／ｗ）、好ましくは
０．０５〜２０％（ｗ／ｗ）である。また、消化管粘膜
付着性高分子の水系溶液中の濃度は、高分子の種類や分
子量によっても異なるが、通常０．００５〜１％（ｗ／
ｗ）であり、キトサンの場合、好ましくは０．０１〜
０．５％（ｗ／ｗ）であり、さらに好ましくは０．０２
〜０．１％（ｗ／ｗ）である。また、ポリビニルアルコ
ールの水系溶液中の濃度は、通常０．０５〜５％（ｗ／
ｗ）であり、好ましくは０．３〜３％（ｗ／ｗ）であ
る。また、乳化剤の使用の際の濃度は、通常０．０１〜
２０％（ｗ／ｗ）であり、好ましくは０．０５〜１０％
（ｗ／ｗ）である。

【００２８】攪拌は、通常マグネティックスターラーな
ど緩和な条件で行うが、必要ならば高速ホモジナイザー
などを用いてもよい。また、調製したナノスフェアの単
離は、上記に示したような凍結乾燥の他、超遠心分離や
透析などにより行うことができる。また、上記に示した
内相＜Ｂ＞に代えて、例えばＷ／Ｏ型エマルジョンを内
相＜Ｂ＞として用いてナノスフェアを調製してもよい。
即ち、生体内分解性ポリマーと乳化剤をクロロホルム、
ジクロロメタン、ジクロロエタン、トリクロロエタンな
どの揮発性有機溶媒に溶解し、これに、生理活性ペプチ
ドを、例えば水溶液、各種緩衝液などの水系溶媒に溶解
したものを加え、ホモジナイザーなどを用いてＷ／Ｏ型
エマルジョンを調製し、これを上記の内相＜Ｂ＞として
用いてもよい。

【００２９】「水中溶媒拡散法」では、消化管粘膜付着
性高分子、および必要に応じポリビニルアルコールを併
せて溶解した水系溶液（水溶液、各種の緩衝液溶液）を
外相＜Ｃ＞として調製する。一方、生体内分解性ポリマ
ー及び生理活性ペプチドを有機溶媒に溶解した内相＜Ｄ
＞を調製する。なお、内相＜Ｄ＞には、必要に応じて、
適当な乳化剤を添加してもよい。外相＜Ｃ＞中に攪拌
下、内相＜Ｄ＞をペリスターポンプなどを用いて、ゆっ
くりと滴下する。必要に応じ、加温減圧下、数時間にわ
たり攪拌を続け、ナノスフェアを生成させる。得られた
ナノスフェアの懸濁液を遠心分離し、上澄み液を除去、
さらに必要に応じ洗浄操作を加えた後、得られたペレッ
トを水に再懸濁させ、これを凍結乾燥することにより、
生理活性ペプチドを封入し、かつ消化管粘膜付着性高分
子で、または消化管粘膜付着性高分子とポリビニルアル
コールでコーティングした、ナノスフェアを得ることが
できる。

【００３０】内相＜Ｄ＞に用いる有機溶媒は、生体内分
解性ポリマーおよび生理活性ペプチドを溶かしやすく、
揮発性かつ水混和性の有機溶媒である。水に対する溶解
度は約８０％以上であり、９０％以上が好ましく、完全
混和性のものがさらに好ましい。溶媒の沸点は、約１２
０℃以下であり、１００℃以下が好ましく、約３０〜８
０℃がさらに好ましい。例としては、アセトン、メタノ
ール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、
アセチルアセトン、テトラヒドロフラン、ジオキサン等
であり、またこれらの２種以上の混合溶媒であってもよ
い。

【００３１】外相＜Ｃ＞と内相＜Ｄ＞の混合比率は、内
相＜Ｄ＞１重量部当たり、外相＜Ｃ＞０．５〜１０００
重量部、好ましくは１〜１００重量部である。また、生
体内分解性ポリマーの内相＜Ｄ＞中の濃度は、ポリマー
の種類や分子量、有機溶媒の種類によって異なるが、通
常０．０１〜５０％（ｗ／ｗ）、好ましくは０．１〜２
０％（ｗ／ｗ）である。また、生理活性ペプチドの生体
内分解性ポリマーに対する割合は、ペプチドの種類や目
的とする吸収量及び持続時間により異なるが、例えば、
０．０００５〜５０％（ｗ／ｗ）、好ましくは０．０５
〜２０％（ｗ／ｗ）である。また、消化管粘膜付着性高
分子の外相＜Ｃ＞中の濃度は、高分子の種類や分子量に
よっても異なるが、通常０．１〜５％（ｗ／ｗ）であ
り、キトサンの場合、好ましくは０．１〜２％（ｗ／
ｗ）であり、さらに好ましくは０．２〜０．６％（ｗ／
ｗ）である。また、ポリビニルアルコールの外相＜Ｃ＞
中の濃度は、通常０．５〜５％（ｗ／ｗ）であり、好ま
しくは１〜３％（ｗ／ｗ）である。

【００３２】内相＜Ｄ＞に必要に応じて添加してもよい
乳化剤の例としては、ステアリン酸ナトリウム、ラウリ
ル硫酸ナトリウムなどのアニオン性界面活性剤、ソルビ
タン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂
肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオ
キシエチレンヒマシ油誘導体などの非イオン性界面活性
剤、レシチンなどが挙げられる。これらの乳化剤は２種
以上を混合して用いてもよい。好ましくは、非イオン性
界面活性剤を用いるのがよい。また、乳化剤の使用の際
の濃度は、通常０．０１〜２０％（ｗ／ｗ）であり、
０．０５〜１０％（ｗ／ｗ）が好ましい。

【００３３】攪拌は、通常マグネティックスターラーな
ど緩和な条件で行うが、必要ならば高速ホモジナイザー
などを用いてもよい。また、調製したナノスフェアの単
離は、上記に示したような凍結乾燥の他、超遠心分離や
透析などにより行うことができる。本発明のナノスフェ
アは、その含有する生理活性ペプチドを薬効成分とした
経口投与型の医薬品として利用できる。その際、本発明
のナノスフェアのみで散剤として用いることもできる
が、一般的に医薬品の製造に用いられている各種の添加
剤を加えて、散剤、顆粒剤、カプセル剤、軟カプセル
剤、錠剤、懸濁型のシロップ剤やドライシロップ剤、な
どに製剤化して用いてもよい。添加剤としては、賦形
剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定化剤、ｐＨ調整剤な
どを必要に応じて用いることができ、また必要によって
は腸溶性などのコーティング剤や徐放化剤を用いてもよ
い。

【００３４】本発明によるナノスフェアの経口投与にお
ける、生理活性ペプチドの消化管からの吸収改善、及び
または、吸収の持続化のメカニズムは以下のように推測
される。但し本発明は、下記に示すメカニズムによって
限定されるものではない。キトサンなどの消化管粘膜付
着性高分子でナノスフェアをコーティングすることによ
り、ナノスフェアが消化管粘膜に付着しやすくなる。こ
のため、ナノスフェアから溶出する生理活性ペプチド
が、その吸収部位である消化管上皮細胞のごく近傍に高
濃度で、かつ長時間にわたり存在することになり、吸収
量が増大し、また吸収が持続化する。さらに別の要因と
しては、溶出した生理活性ペプチドの近傍にキトサンな
どが存在し、これが生理活性ペプチドの、消化管内に存
在するペプチド分解酵素による分解を阻害しているとい
う可能性もある。

【００３５】

【発明の実施の形態】以下に、実施例、参考例を挙げて
本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらに限
定されるものではない。更に実験例を挙げて、本発明製
剤の効果を具体的に示す。なお、以下の実施例におい
て、乳酸・グリコール酸共重合体はＰＬＧＡと略す。ま
た、ポリ乳酸はＰＬＡと略す。

【００３６】

【実施例１】 （キトサンでコーティングしたエルカトニン封入ＰＬＧ
Ａ（７５：２５）ナノスフェアの調製）ポリリシノール
酸ヘキサグリセリル（Ｈｅｘａｇｌｙｎ ＰＲ−１５；
日光ケミカルズ社製）を２％含有するトリ（カプリル・
カプリン酸）グリセリル（トリエスターＦ８１０；日光
ケミカルズ社製）６０ｍｌを調製し、さらにｎ−ヘキサ
ン４０ｍｌを混合溶解し外相を調製した。次に、ソルビ
タンモノオレート（Ｓｐａｎ８０：キシダ化学社製）１
００ｍｇ、ＰＬＧＡ（平均分子量２００００、乳酸：グ
リコール酸重合比＝７５：２５、和光純薬工業社製）１
００ｍｇ、エルカトニン（旭化成工業社製）２ｍｇをア
セトン３ｍｌとメタノール２ｍｌの混合溶媒中に溶解し
た溶液を外相溶液の撹拌下、ペリスターポンプを用いて
２ｍｌ／ｍｉｎの速度で滴下した。

【００３７】ついで３５℃にて減圧下３時間撹拌を続
け、得られた懸濁液にｎ−ヘキサン 20 ｍｌを加え、遠
心操作（２００００ｒｐｍ、４℃、１０分間）を行っ
た。遠心操作後、上清を除去し、ｎ−ヘキサンを加えて
再懸濁させ、再度遠心操作を行った。遠心操作後、上清
を除去し、沈殿物を乾燥し、これを１％ポリビニルアル
コール（ＰＶＡー４０３、クラレ社製）の水溶液２０ｍ
ｌと１％キトサン（平均分子量５００００、板角社製）
溶液（溶媒：０．０５Ｍ酢酸緩衝液、ｐＨ４．４）１ｍ
ｌを混合した溶液中に分散させた。分散後、遠心操作を
行い、上清を除去した後、沈殿物を精製水に再懸濁させ
た。得られた懸濁液を凍結乾燥し、キトサンでコーティ
ングしたエルカトニン封入ＰＬＧＡ（７５：２５）ナノ
スフェア粉末８９．９ｍｇ（エルカトニン含有量１．４
６ｍｇ）を得た。

【００３８】

【実施例２】 （キトサンでコーティングしたエルカトニン封入ＰＬＧ
Ａ（５０：５０）ナノスフェアの調製）実施例１におい
て、ＰＬＧＡ（平均分子量２００００、乳酸：グリコー
ル酸重合比＝７５：２５、和光純薬工業社製）の代わり
にＰＬＧＡ（平均分子量２００００、乳酸：グリコール
酸重合比＝５０：５０、和光純薬工業社製）を用いた以
外は同様にして、キトサンでコーティングしたエルカト
ニン封入ＰＬＧＡ（５０：５０）ナノスフェア粉末９
０．１ｍｇ（エルカトニン含有量１．５２ｍｇ）を得
た。

【００３９】

【実施例３】 （キトサンでコーティングしたエルカトニン封入ＰＬＡ
ナノスフェアの調製）実施例１において、ＰＬＧＡ（平
均分子量２００００、乳酸：グリコール酸重合比＝７
５：２５、和光純薬工業社製）の代わりにＰＬＡ（平均
分子量２００００、和光純薬工業社製）を用いた以外は
同様にして、キトサンでコーティングしたエルカトニン
封入ＰＬＡナノスフェア粉末８８．３ｍｇ（エルカトニ
ン含有量１．０７ｍｇ）を得た。

【００４０】

【実施例４】 （キトサンでコーティングしたインスリン封入ＰＬＧＡ
（７５：２５）ナノスフェアの調製）ウシインスリン
（Ｓｉｇｍａ社製）１ｍｇを０．０１Ｍ塩酸０．１ｍｌ
と０．０１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．４）０．１ｍｌを混
合した溶液に溶解し、これをＰＬＧＡ（平均分子量２０
０００、乳酸：グリコール酸重合比＝７５：２５、和光
純薬工業社製）１００ｍｇとソルビタンモノオレート
（Ｓｐａｎ８０：キシダ化学社製）１００ｍｇを溶解し
たジクロロメタン溶液１５ｍｌ中に加え、ホモジナイザ
ーで３分間攪拌し、内相溶液となるエマルジョンを調製
した。

【００４１】一方、ポリリシノール酸ヘキサグリセリル
（Ｈｅｘａｇｌｙｎ ＰＲ−１５；日光ケミカルズ社
製）を２％含有するトリ（カプリル・カプリン酸）グリ
セリル（トリエスターＦ８１０；日光ケミカルズ社製）
３０ｍｌを調製し、さらにｎ−ヘキサン２０ｍｌを混合
溶解し外相溶液を調製した。上記の内相溶液を外相溶液
に攪拌下、ペリスターポンプを用いて４ｍｌ／ｍｉｎの
速度で滴下した。ついで３５℃にて減圧下３時間撹拌を
続け、得られた懸濁液にｎ−ヘキサン２０ｍｌを加え、
遠心操作（２００００ｒｐｍ、４℃、１０分間）を行っ
た。遠心操作後、上清を除去し、ｎ−ヘキサンを加えて
再懸濁させ、再度遠心操作を行った。遠心操作後、上清
を除去し、沈殿物を乾燥し、これを１％ポリビニルアル
コール（ＰＶＡー４０３、クラレ社製）の水溶液２０ｍ
ｌと１％キトサン（平均分子量５００００、板角社製）
溶液（溶媒：０．０５Ｍ酢酸緩衝液、ｐＨ４．４）１ｍ
ｌを混合した溶液中に分散させた。分散後、遠心操作を
行い、上清を除去した後、沈殿物を精製水に再懸濁させ
た。得られた懸濁液を凍結乾燥し、キトサンでコーティ
ングしたインスリン封入ＰＬＧＡ（７５：２５）ナノス
フェア粉末７７．５ｍｇ（インスリン含有量０．４１５
ｍｇ）を得た。

【００４２】

【参考例１】 （エルカトニンを封入したＰＬＧＡ（７５：２５）ナノ
スフェアの調製）実施例１において、キトサンを除いた
以外同様にして、エルカトニン封入ＰＬＧＡ（７５：２
５）ナノスフェア粉末７９．９ｍｇ（エルカトニン含有
量１．３８ｍｇ）を得た。

【００４３】

【参考例２】 （ＦＩＴＣ−ＰＬＧＡ（７５：２５）ナノスフェアの調
製）ＰＬＧＡ（平均分子量２００００、乳酸：グリコー
ル酸重合比＝７５：２５、和光純薬工業社製）にフルオ
レセインイソチオシアネート（以下ＦＩＴＣと略す）を
結合させたＦＩＴＣ−ＰＬＧＡを次の方法により合成し
た。ＰＬＧＡ８００ｍｇとＦＩＴＣ０．８ｍｇをアセト
ン８ｍｌに溶解した溶液を還流下３時間反応させた。そ
の後、エタノール３０ｍｌを加え、２００００ｒｐｍ、
１０分間遠心分離した。上澄みを除去し、沈澱物を３ｍ
ｌのアセトンで溶解し、３０ｍｌのエタノールを加えて
ＦＩＴＣ−ＰＬＧＡを析出させ、２００００ｒｐｍ、１
０分間遠心分離した。この操作を４回繰り返し、最終的
に得られた沈澱物を６ｍｌのアセトンで溶解した後２０
ｍｌの精製水を加え、減圧下３５℃で２時間攪拌した。
この懸濁液を凍結乾燥してＦＩＴＣ−ＰＬＧＡを得た。

【００４４】ポリマーとしてポリビニルアルコール（Ｐ
ＶＡー４０３、クラレ社製）１ｇを使用し、蒸留水５０
ｍｌに溶解した溶液を外相とし、この外相を４００ｒｐ
ｍで撹拌下、ＦＩＴＣ−ＰＬＧＡ２００ｍｇをアセトン
３ｍｌとメタノール２ｍｌの混合溶媒中に溶解した溶液
をペリスターポンプを用いて２ｍｌ／ｍｉｎの速度で滴
下した。得られた懸濁液中のポリマーを取り除く操作と
して、懸濁液を遠心（２００００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ）
し、沈殿物を精製水により洗浄した。さらに、ポリマー
を取り除く操作を２回繰り返した。最終的に得られた懸
濁液を凍結乾燥し、ＦＩＴＣ−ＰＬＧＡ（７５：２５）
ナノスフェア粉末１８３．８ｍｇを得た。

【００４５】

【参考例３】 （キトサンでコーティングしたＦＩＴＣ−ＰＬＧＡ（７
５：２５）ナノスフェアの調製）参考例２の外相中のポ
リマーとして、ポリビニルアルコール（ＰＶＡー４０
３、クラレ社製）１ｇとキトサン（平均分子量５０００
０、板角社製）０．５ｇを併せて用い、それらの溶解液
として精製水の代わりに０．０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ
４．４）を用いた以外、同様にして、キトサンでコーテ
ィングしたＦＩＴＣ−ＰＬＧＡ（７５：２５）ナノスフ
ェア粉末１６７．０ｍｇを得た。

【００４６】

【参考例４】 （ポリアクリル酸でコーティングしたＦＩＴＣ−ＰＬＧ
Ａ（７５：２５）ナノスフェアの調製）参考例２の外相
中のポリマーとしてポリビニルアルコール（ＰＶＡー４
０３、クラレ社製）１ｇとポリアクリル酸（平均分子量
２０００、Aldrich 社製）０．５ｇを併せて用いた以
外、同様にして、ポリアクリル酸でコーティングしたＦ
ＩＴＣ−ＰＬＧＡ（７５：２５）ナノスフェア粉末１８
１．２ｍｇを得た。

【００４７】

【参考例５】 （アルギン酸ナトリウムでコーティングしたＦＩＴＣ−
ＰＬＧＡ（７５：２５）ナノスフェアの調製）参考例２
の外相中のポリマーとしてポリビニルアルコール（ＰＶ
Ａー４０３、クラレ社製）１ｇとポリアルギン酸ナトリ
ウム（平均分子量２２８０００、紀文フードケミファ社
製）０．２５ｇを併せて用いた以外、同様にして、アル
ギン酸ナトリウムでコーティングしたＦＩＴＣ−ＰＬＧ
Ａ（７５：２５）ナノスフェア粉末１３８ｍｇを得た。

【００４８】

【試験例１】 （ナノスフェアの粒子径の測定）実施例１、実施例２、
実施例３及び参考例１で調製したナノスフェア粉末を精
製水中に再懸濁させて、動的光散乱法（ＬＰＡ３１０
０、大塚電子社製）により粒子径を測定した。また、実
施例１で調製したナノスフェアを走査型電子顕微鏡によ
り観察した。

【００４９】動的光散乱法により測定した重量平均粒子
径を下記表１に示た。表１に結果を示した通り、実施例
１、実施例２、実施例３及び参考例１で調製したナノス
フェアの重量平均粒子径は、５００ｎｍ〜７００ｎｍで
あった。また、電子顕微鏡で観察したところ、実施例１
のナノスフェアは、球状であり、１０００ｎｍ以下の粒
子径であった。

【００５０】表１ 動的光散乱法により測定したナノス
フェアの重量平均粒子径

【００５１】

【表１】

【００５２】

【試験例２】 （ナノスフェアのゼータ電位の測定）実施例１及び参考
例１で調製したナノスフェアを蒸留水に懸濁させた後、
溶媒（０．１Ｍの塩酸と０．１Ｍの水酸化カリウム水溶
液を混合して調整した各ｐＨの溶液）に分散させ、ナノ
スフェア粒子表面のゼータ電位をゼータ電位計（Zetama
ster、Malvern Instruments 社製）により測定した。

【００５３】結果は図１に示した通り、参考例１のナノ
スフェアに比較して、実施例１のナノスフェアは、ゼー
タ電位が酸性領域で正の値を示した。このことは実施例
１のナノスフェア表面が酸性領域で正の電荷を持つキト
サンによってコーティングされていることを示してい
る。

【００５４】

【試験例３】 （ナノスフェアの粘膜付着性評価）参考例２、参考例
３、参考例４及び参考例５で調製したＦＩＴＣ−ＰＬＧ
Ａナノスフェアを生理食塩水中に分散させて、常法によ
り摘出したラット反転腸管（十二指腸、空腸、回腸）に
一定時間浸した。その後、腸管に付着したＦＩＴＣ−Ｐ
ＬＧＡナノスフェアを抽出し、ナノスフェアの粘膜への
付着量を蛍光光度計を用いて測定した。ナノスフェア付
着量と仕込んだナノスフェア量から付着率を求め、粘膜
付着性の指標とした。

【００５５】結果は図２に示した通り、参考例２に比較
して、参考例５のアルギン酸ナトリウムをコーティング
したナノスフェアは、腸管粘膜との付着性に大きな違い
は認められなかった。一方、参考例３及び参考例４のキ
トサン及びポリアクリル酸でコーティングしたナノスフ
ェアは、参考例２に比較して、粘膜付着性が増加した。
特に、参考例３のキトサンでコーティングしたナノスフ
ェアは、最も高い粘膜付着性を示した。キトサンをコー
ティングしたナノスフェアが強い粘膜付着性を示した理
由は、ナノスフェアの表面電位がキトサンの持つアミノ
基により正に荷電しており、負に荷電している腸管粘膜
との間に電気的相互作用が働くためではないかと推察す
るが、それ以外の要因として粘膜成分との絡み合いなど
も考えられる。実際に、参考例３のキトサンの代わりに
分子量１５００のキトサンオリゴ糖を用いたナノスフェ
アでは、参考例３で調製したナノスフェアが示すような
粘膜付着性は得られない。

【００５６】

【試験例４】 （エルカトニン封入ナノスフェアの経口吸収性試験）Wi
star系雄性ラット（９週令、１８０〜２１０ｇ）を使用
し、実施例１及び参考例１で調製したナノスフェアを生
理食塩水で溶解した溶液、また、対照としてエルカトニ
ンを生理食塩水で溶解した溶液を５００ＩＵ／Ｋｇの投
与量で各３匹に経口投与した。投与後、経時的にラット
頚静脈から採血し、カルシウムＣ−テストワコー（和光
純薬工業社製）にて血漿中カルシウム濃度を測定した。
投与５分前の血漿中カシウム濃度を100としてカルシウ
ム低下率を算出した。

【００５７】結果は図３に示した通りである。エルカト
ニン溶液投与群及び参考例１投与群に比較して、実施例
１投与群は、投与８時間後７６％までカルシウム濃度が
低下し、強い血漿中カルシウム低下作用を示した。ま
た、投与後３６時間においても有意に血漿中カルシウム
低下作用が持続した。すなわち、キトサンをコーティン
グしたナノスフェアが消化管粘膜上に付着し、消化管内
移動速度が遅延したためと推測された。これらの結果か
ら、本発明のキトサンをコーティングしたエルカトニン
含有ナノスフェア製剤は、経口投与で消化管からエルカ
トニンの吸収性が改善され、かつ、持続性を有すること
を示している。

【００５８】

【発明の効果】本発明により、生理活性ペプチドの良好
な吸収率と吸収の持続性を持った、生理活性ペプチド含
有ナノスフェアが提供でき、さらには生理活性ペプチド
の経口投与用製剤が提供できる。このことにより、これ
まで注射などでしか投与できなかった生理活性ペプチド
が経口でも投与可能となり、患者のＱＯＬの改善につな
がる。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、ナノスフェアのゼータ電位のｐＨプロ
ファイルを示すものである。

【図２】図２は、各種ポリマーでコーティングしたナノ
スフェアの腸管粘膜付着性を示すものである。

【図３】図３は、エルカトニン封入ナノスフェアの経口
投与後の血漿中カルシウム低下のプロファイルを示すも
のである。

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 生理活性ペプチドを含有した生体内分解
   性ポリマーの核部分を消化管粘膜付着性高分子で被覆し
   た経口投与用ナノスフェア。
2. 【請求項２】 消化管粘膜付着性高分子が、キトサン、
   ポリアクリル酸およびキトサン誘導体からなる群より選
   ばれた１種または２種以上である請求項１記載の経口投
   与用ナノスフェア。
3. 【請求項３】 生理活性ペプチドが、カルシトニン類ま
   たはインスリンである請求項１記載の経口投与用ナノス
   フェア。
4. 【請求項４】 生体内分解性ポリマーが、乳酸・グリコ
   ール酸共重合体またはポリ乳酸である請求項１記載の経
   口投与用ナノスフェア。
5. 【請求項５】 生理活性ペプチドを含有した生体内分解
   性ポリマーの核部分を消化管粘膜付着性高分子及びポリ
   ビニルアルコールで被覆した経口投与用ナノスフェア。
6. 【請求項６】 消化管粘膜付着性高分子が、キトサン、
   ポリアクリル酸およびキトサン誘導体からなる群より選
   ばれた１種または２種以上である請求項５記載の経口投
   与用ナノスフェア。
7. 【請求項７】 生理活性ペプチドが、カルシトニン類ま
   たはインスリンである請求項５記載の経口投与用ナノス
   フェア。
8. 【請求項８】 生体内分解性ポリマーが、乳酸・グリコ
   ール酸共重合体またはポリ乳酸である請求項５記載の経
   口投与用ナノスフェア。