CN108434118A - 胰高血糖素样肽-1类似物缓释微球及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种胰高血糖素样肽‑1类似物缓释微球及其制备方法与应用,主要包含胰高血糖素样肽‑1类似物与聚乳酸‑羟基乙酸共聚物，其中，胰高血糖素样肽‑1类似物为1‑10重量份,聚乳酸‑羟基乙酸共聚物为90‑99重量份，缓释微球的平均粒径范围为0.5‑100μm。本发明还公开了缓释微球的制备方法与应用，并对所制备微球的形貌，粒径，体外释放以及体内药效学实验进行了考察。本发明制备的载GLP‑1类似物的缓释微球具有粒径均一的特点，对糖尿病有显著的治疗作用，可以有效控制血糖达14天，起到缓效制剂的效果，大大减少给药频次，增加患者的顺应性，同时还可抑制进食。本发明工艺简单，条件温和，对多肽活性影响小。

Description

胰高血糖素样肽-1类似物缓释微球及其制备方法
技术领域
本发明属于药物制剂领域，涉及一种胰高血糖素样肽-1类似物的缓释制剂及其制备方法，该缓释制剂能够长效释放药物，起到控制血糖的作用。
背景技术
糖尿病是一组由遗传和环境等多种病因引起以慢性高血糖为特征的代谢性疾病群。据统计2007年全球大约有2.46亿糖尿病患者，2025年将达到3.8 亿，因此，糖尿病是一种严重威胁人类健康的疾病。目前临床治疗中主要是通过注射胰岛素以及口服降糖药来控制血糖，然而这些治疗药物或是降糖效果不明显，或是易产生较大的副作用和病人顺应性差等缺点。随着医学的进步，一种新型内源性激素-胰高糖素样肽-1(GLP-1)的发现，让糖尿病的治疗又有了新的选择。
胰高血糖素样肽(glucagon-like peptide-1,GLP-1)是一种由小肠L细胞分泌，来维持血糖的重要激素。GLP-1是一种血糖响应型激素，伴随着血糖的升高，能够促进胰岛素的分泌，从而起到控制血糖的作用，且不会引起低血糖症等副作用。除此之外，GLP-1还有抑制胰高血糖素的分泌，减缓胃排空，降低食欲以及刺激β细胞增殖的作用，因此是一种较为理想的控制血糖的内源性物质。然而由于GLP-1多肽在体内容易被二氨基肽基肽酶4(DPP-Ⅳ)切割，导致其失去生物活性，因此也限制了它在临床上的应用。
到目前为止，已有许多方法用于延长GLP-1多肽的半衰期，例如白蛋白融合、脂肪链修饰、Fc融合蛋白、化学修饰等手段已经被应用在GLP-1多肽的修饰上。目前上市的GLP-1类似物利拉鲁肽就是基于天然GLP-1进行修饰的，在Lys26处添加了16碳的脂肪酸侧链，脂肪酸侧链能够与白蛋白结合，延长了多肽在体内的半衰期。而阿必鲁肽则是通过将“双重”拷贝DPP-Ⅳ抗性 GLP-1类似物与人白蛋白共价结合来起到延长半衰期效果。基于酶的降解位点，设计出了如下结构多肽，能够显著增长多肽的半衰期而不影响多肽活性。
然而化学修饰后的多肽只能延长半衰期到几个小时，因此要获得更长效的治疗效果，则需要其他缓释手段。如将半衰期较短的药物包裹在微球中，依靠材料的缓慢降解使微球内部包裹的药物能够缓慢释放，从而起到延长药物治疗时间的效果。虽然微球上市的产品很多，然而对于目前微球的工艺方面还是存在以下几种问题：(1)由于在制备过程中会接触到有机溶剂且乳化过程中具有较强的剪切力，很容易就会导致包载的多肽发生降解失活，从而影响制剂的治疗效果。(2)微球的突释是目前微球在临床应用上面临的最重要的问题，一般来说多肽的有效治疗剂量都很小，然而很多体内外的实验都证明PLGA缓释微球第一天的释放都会具有较大的突释，这种突释不但会造成血药浓度猛然增高带来一定副作用，而且会造成一段时间的释放平台期，使微球无法达到持续的释放效果，影响制剂的疗效。(3)微球制剂的粒径及粒径分布不仅关系着是否能够采用注射途径给药，并且也会影响最后的释放行为，因此得到一个粒径均一的微球制剂是微球制备的关键。
发明内容
本发明旨在提供一种具有缓释治疗效果的胰高血糖素样肽-1类似物缓释微球，属于GLP-1类似物缓释微球组合物，该制剂使用生物相容性的高分子材料聚乳酸聚羟基乙酸(PLGA)，并在制备过程中添加了特定的保护剂用来保护多肽的活性。所制备的微球具有粒径均一，不影响多肽药物活性等优点，使药物在体内体外都能达到一定的缓慢释放药物的效果，减少给药次数，提高患者顺应性。
本发明缓释微球制备过程中对多肽的活性几乎没有影响，制备过程温和，制备过程能够较好保持多肽的活性。
本发明所提供的缓释微球具有粒径均一，球体表面光滑且多孔的特点，在体外释放实验中突释较小，且能够匀速平稳释放多肽药物。在体内药效学实验中多肽缓释微球具有两周以上的控制血糖的效果，在体内表现出良好的缓释治疗的效果。
本发明所述的多肽缓释微球还有一定抑制摄食,控制食欲的作用。
本发明提供的粒径均一的缓释微球制剂其平均粒径范围为0.5μm-100μm，且代表粒径分布的SD值在3以内，优选在1.5以内。
上式中Dv,90％，Dv,50％和Dv,10％分别代表大于90％，50％和10％的粒子的粒径大小。
本发明提供的缓释微球制剂能够有效控制血糖达两周时间，并具有控制食欲减少食物摄入的作用。避免了频繁给药的缺点，实现了缓释的治疗效果。
本发明的目的是通过以下方式实现的：
本发明所提供的胰高血糖素样肽-1类似物缓释微球主要是由胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物以及聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)组成，其中，胰高血糖素样肽-1类似物为1-10重量份,聚乳酸-羟基乙酸共聚物为90-99重量份，缓释微球的平均粒径范围为0.5-100μm，优选缓释微球的平均粒径范围为1-30μm。
本发明所提供的多肽缓释微球所采用的高分子聚乳酸-羟基乙酸共聚物是由乙交酯和丙交酯按照一定比例共聚而成，其末端基团由是否经过酯化而分为羧基末端、酯基末端。本发明所述的高分子共聚物中聚乳酸与羟基乙酸重量比例为20:80-85:25优选为50:50-75:25，更优选的为50:50，聚乳酸-羟基乙酸共聚物的分子量为0.5kDa-100kDa，优选为10kDa-60kDa.
上述胰高血糖素样肽-1类似物缓释微球的制备方法包括制备初乳、制备复乳、固化及离心洗涤干燥过程，其中，
制备初乳步骤如下：将胰高血糖素样肽-1类似物溶于水得到内水相，将聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶于有机溶剂即为油相，将内水相或直接将胰高血糖素样肽-1类似物冻干粉与油相混合并进行乳化得到初乳；
制备复乳步骤如下：将初乳在压力作用下通过膜孔加入到外水相中，形成复乳或将初乳滴加到外水相中，经过进一步乳化制备得到复乳；
固化过程如下：将复乳倒入水中进行固化，挥发有机溶剂，使乳滴中微球析出；
离心洗涤干燥过程如下：将微球离心收集并进行冷冻干燥处理。
本发明制备过程所选择的有机溶剂为二氯甲烷，乙酸乙酯，氯仿，丙酮，乙酸甲酯、二氧六环、乙醚中的一种或任意几种混合溶剂，优选为二氯甲烷。油相中聚乳酸-羟基乙酸共聚物在有机溶剂中的浓度为50mg/ml-200mg/ml，优选为75mg/ml-160mg/ml。
本发明制备过程中内水相中胰高血糖素样肽-1类似物的浓度为 10-50mg/ml,优选20-30mg/ml(水包油包水法)。胰高血糖素样肽-1类似物冻干粉在溶有聚乳酸-羟基乙酸共聚物的有机溶剂中的含量为0.5-10mg/ml，优选 3.5-6mg/ml(固包油包水法)。
上述乳化方法包括均质乳化法，超声乳化法，膜乳化法，搅拌乳化法，优选为超声乳化法以及均质乳化法。
上述方法中可以在内水相加入保护剂，保护剂选自人血清白蛋白，蔗糖，明胶，葡聚糖，聚乙二醇，海藻糖，甘露醇，赖氨酸，碳酸镁，醋酸锌和氯化锌中的一种或几种，优选为乙酸锌。添加保护剂的质量分数为0.1％-10％。 (以总质量为100％计)。
本发明提供的一个优选药物组合物中，活性成分GLP-1类似物的质量分数为3.58％，高分子材料PLGA的质量分数96.42％，选择的PLGA材料乙交酯和丙交酯的比例为50:50，相对分子质量为17kDa.
本发明提供的另一个优选药物组合物中，活性成分GLP-1类似物的质量分数为3.44％，保护剂PEG的质量含量为8.74％，高分子材料PLGA的质量分数为87.82％，选择的PLGA材料乙交酯和丙交酯的比例为50:50，相对分子质量为54kDa。
本发明提供的另一个优选药物组合物中，活性成分GLP-1类似物的质量分数为3.14％，保护剂碳酸镁的质量含量为3％，高分子材料PLGA的质量分数为93.86％，选择的PLGA材料乙交酯和丙交酯的比例为50:50，相对分子质量为17kDa。
所述的外水相为添加表面活性剂以及氯化钠的水溶液，所选择的表面活性剂选自聚乙烯醇，十二烷基硫酸钠，聚山梨酯，司盘，硬脂酸钠中的一种或几种，优选的为聚乙烯醇，表面活性剂在外水相的质量分数为0.1％-5％，优选为1.5％-2.5％。
本发明制备过程中内水相和油相的比例为1:1-1:10.更优选为1:5。油相与外水相的比例为1:5-1:35，更优选为1:20。
胰高血糖素样肽(GLP-1)作为一种体内激素，有极好的控制血糖的效果，然而半衰期较短的问题使其无法通过制备成PLGA微球的方法实现缓释。虽然目前已经上市了一些GLP-1类似物，并实现这些类似物包载在微球中(如 Lily上市的艾塞那肽微球)，然而艾塞那肽与天然GLP-1具有较低的同源性，本发明所包载的GLP-1类似物是基于酶的降解位点所设计的，因此与天然 GLP-1具有极高的同源性，其治疗效果也有一定的优势。
为解决微球的突释，我们将水溶性多肽与醋酸锌络合形成水不相溶的锌离子-多肽的络合物，之后将这种络合物通过以上两种制备方法进行包载，形成 PLGA缓释微球。水溶性的GLP-1类似物在微球制备过程中很容易向外水相扩散，导致药物蓄积在微球表面造成突释。而改变了内容物的亲疏水性，水不溶的锌离子-多肽络合物却可以实现在微球中的均匀分布(见图4)，从而大大降低了在生理环境下(pH7.4)药物的突释。并且研究也表明锌离子对稳定多肽也具有一定积极作用。
在制备及释放过程中，为稳定多肽，聚乙二醇，明胶，血清白蛋白等多肽稳定剂加入到了内水相，从而对多肽起到一定保护作用，使多肽保持结构完整，避免降解。在释放过程中，包载材料PLGA会降解得到乳酸，这些小分子酸会使微球内部的微环境pH显著降低，酸环境不利于多肽的稳定，加入碳酸镁等会中和降解得到的乳酸，防止pH的持续降低，从而抑制多肽降解。
粒径均一是微球制剂所面临的一个关键问题，本发明利用膜乳化法可以得到粒径均一的微球制剂(见图5)，在压力作用下使液滴较大的初乳快速通过亲水性SPG膜挤出进入外水相伴随着搅拌形成小液滴，得到粒径均一的微球，粒径分布系数Span-value小于1.5。在利用w/o/w法制备微球时，为了得到粒径均一的微球，本发明将均质得到的初乳液通过25G注射器滴加到外水相中，这时会形成大小均一的大乳滴，之后将大乳滴进一步均质成小液滴，避免了由于剪切过程中造成剪切不均，使最后得到的粒径分布差。
本发明使用的检测方法如下:
1、多肽缓释微球的粒径的测定
将缓释微球冻干粉重新混悬在水中，并且伴随超声的条件在激光微米粒径仪Mastersizer 2000进行粒径的检测。
2、多肽缓释微球载药量的测定
准确称量5mg载多肽微球，加入200μl乙腈，将PLGA溶解并将微球破碎，之后加入800μl 0.2％的盐酸溶液，涡旋1分钟，将多肽萃取出来，并将混合溶液在10000rpm转速下离心2分钟，取上清液加入到高效液相色谱中进行分析。多肽缓释微球中多肽的稳定性
准确称量20mg载多肽微球，加入200μl乙腈将PLGA溶解并将微球破碎，之后加入800μl 0.2％的盐酸溶液，涡旋1分钟，将多肽萃取出来，并将混合溶液在10000rpm转速下离心2分钟，收集上清液并利用圆二色谱仪(Jasco J-810 spectrometer,Jasco)对多肽的二级结构进行分析。
3、多肽缓释微球体外释放的测定
微球在体内外的释放行为是制备微球的关键指标。药物在体内外能够达到缓慢长效的释放药物是本课题追求的目标。体外释放是将微球置于一定体积的释放液当中，在特定的时间点进行取样分析药物的释放量。将10mg载药微球混悬在1ml pH7.4/pH5.6/pH2的磷酸缓冲盐中置于37℃的摇床中以 200rpm的震荡速度进行释放实验。并于特定的时间取出释放液，并补充等量的新鲜释放液。释放溶液浓度利用高效液相色谱进行检测。
本发明所述的缓释微球具有以下优势：
(1)能够起到2周的缓释作用，有效控制血糖，减少患者的给药次数，提高患者顺应性。
(2)制备的微球大小均一，易混悬，且球体表面多孔结构，为内部药物的释放提供了条件。
(3)缓释微球的制备过程不会影响多肽的二级结构，对多肽活性的影响有限。
(4)微球突释较小，在体外能达到一定时间的快速释放，药物释放平稳，持续。
(5)制备过程简便，条件温和，制备重复性较好，可实现工业大生产。
附图说明
图1实施例1包载GLP-1类似物的缓释微球扫描电镜图片。
图中可以观察到由实例方法所制备得到的微球呈较规则的球体形状，且表面光滑并存在一些较小的孔隙。
图2实施例4包载锌离子-GLP-1类似物的缓释微球扫描电镜图片。
图中，由实施例方法所制备得到的微球具有较规则的球体形状，且表面粗糙并具有较多孔隙。
图3实施例1所制备的GLP-1类似物缓释微球的粒径图。
图中，由实施例所制备的微球的粒径分布较为均匀，且平均粒径为23.7μm。
图4实施例4所制备的GLP-1类似物缓释微球的粒径图。
图中，由实施例所制备的微球的粒径分布较为均匀，且平均粒径为14μm。
图5实施例5所制备的GLP-1类似物缓释微球的粒径图。
图中，由实施例所制备的微球的粒径分布较为均匀，且平均粒径为6.76μm。
图6从微球内部萃取的多肽与多肽溶液圆二色谱对照图。
图中，从微球内部萃取得到的多肽的圆二色谱图谱和纯多肽溶液的图谱差别不大，说明实施例所述的制备过程对多肽二级结构影响不大。
图7实施例1所制备的GLP-1类似物缓释微球制剂的体外累积释放曲线。
图中，分别为实施例所制备微球在pH2，pH5.6和pH7.4条件下的释放行为。
图8实施例4所制备的锌离子-GLP-1类似物缓释微球制剂的体外累积释放曲线。
图中，分别为实施例所制备微球在pH2，pH5.6和pH7.4条件下的释放行为。
图9实施例1所制备的GLP-1类似物缓释微球药物分布。
图中，可以观察到显示荧光的位置即为多肽的分布，图中可以看到多肽主要分布在微球表面，形成一个较亮的圆环。
图10实施例4所制备的锌离子-GLP-1类似物缓释微球药物分布。
图中，可以观察到显示荧光的位置即为多肽的分布，图中可以看到多肽均匀的分布在微球内部。
图11对糖尿病模型小鼠皮下注射载实施例GLP-1类似物缓释微球的血糖浓度曲线。
图中，通过注射实施例所制备的微球治疗六周后，模型小鼠的血糖相较于对照组有了显著的降低。
图12为糖尿病模型小鼠皮下注射载实施例GLP-1类似物缓释微球的摄食量。
图中，通过注射实施例所制备的微球治疗六周后，模型小鼠的摄食量相较于对照组有了明显的下降。
具体实施方式
以下通过具体实施例对本发明进行进一步说明：
实施例一
准确称取6mg GLP-1类似物溶于200μl水中，配置成浓度为30mg/ml的内水相溶液，将内水相加入到1ml浓度为160mg/ml的聚乳酸聚羟基乙酸 (LA:GA＝50：50Mw＝17kDa)的二氯甲烷溶液中(油相)，内水相与油相的体积比为1:5。内水相与油相混合并在冰水浴中采用探头超声的方法以50W功率超声3分钟，得到W/O乳液。将得到的初乳用25G注射器缓慢注射到20ml 含有2％聚乙烯醇和2.5％氯化钠的外水相中，并采用均质机以3000rpm的转速乳化1分钟，形成W/O/W复乳。将上述复乳加入到200ml含0.1％的聚乙烯醇水溶液中，固化4小时，待有机溶剂挥发完全后，将混悬液在3000rpm 转速条件下离心五分钟，用清水洗涤五遍后在0.12MPa，-40℃条件下进行冷冻干燥。得到的微球平均粒径为23.7μm，载药量为4.59％。
实施例二
将4mg多肽冻干粉(S)撒入含有1ml浓度为100mg/ml乳酸聚羟基乙酸 (LA:GA＝50：50Mw＝17kDa)的乙酸乙酯溶液中(O)，混合并在冰水浴中采用探头超声以50W超声3分钟，得到S/O混悬液。将S/O混悬液用25G注射器缓慢注射到20ml含有2％十二烷基硫酸钠和2.5％氯化钠的外水相中，并采用均质机以3000rpm乳化1分钟，形成S/O/W乳液。将上述乳液倒入200ml含 0.1％PVA的水溶液中，固化4小时后，待有机溶剂挥发完全后，将混悬液在8000rpm条件下离心五分钟，用清水洗涤五遍后在0.12MPa，-40℃条件下进行冷冻干燥。得到的微球平均粒径为3.68μm，载药量为1.5％。
实施例三
准确称取6mg GLP-1类似物溶于200μl含有保护剂10％PEG的水中，配置成多肽浓度为30mg/ml的内水相溶液，将内水相加入到1ml浓度为100mg/ml 聚乳酸聚羟基乙酸(LA:GA＝50：50Mw＝17kDa)的氯仿溶液中(油相)，内水相与油相的比例为1:5。内水相与油相混合并在冰水浴中采用探头超声的方法以 50W功率超声3分钟，得到W/O乳液。将得到的初乳用25G注射器缓慢注射到20ml含有2.5％聚山梨酯和2.5％氯化钠的外水相中，并采用均质机以 3000rpm的转速乳化一分钟，形成W/O/W复乳。将上述复乳倾倒如200ml含 0.1％的聚乙烯醇水溶液中，固化4小时，待有机溶剂挥发完全后，将混悬液在3000rpm转速条件下离心五分钟，用清水洗涤五遍后在0.12MPa，-40℃条件下进行冷冻干燥。得到的微球平均粒径为20.2μm，载药量为5.78％。
实施例四
现将4mg GLP-1类似物与20mg醋酸锌溶于1ml水中并在冰浴中孵育24 小时形成锌-肽络合物，在0.12mPa，-40℃条件下进行冻干得到粉末。将上述粉末混悬在100μl水中，加入到含有100mg聚乳酸聚羟基乙酸(LA:GA＝50： 50Mw＝17kDa)的1ml二氯化碳溶液中(O),混合并在冰水浴中采用探头超声以50W超声3分钟，得到W/O乳液。将初乳用25G注射器缓慢滴加到20ml 含有2％聚乙烯醇和2.5％氯化钠的外水相中，并采用均质机以6000rpm乳化1 分钟，形成W/O/W复乳。将上述复乳倒入200ml含0.1％PVA的水溶液中，固化4小时后，待有机溶剂挥发完全后，将混悬液在3000rpm转速条件下离心五分钟，用清水洗涤五遍后在0.12MPa，-40℃条件下进行冷冻干燥。得到的微球平均粒径为14μm，载药量为3.66％。
实施例五
将4mg GLP-1类似物溶于100μl水中(W1)，配置成浓度为40mg/ml的内水相。将内水相加入到1ml浓度为160mg/ml的聚乳酸聚羟基乙酸(LA:GA＝50： 50Mw＝17kDa)的二氯甲烷溶液中(油相),内水相和油相的比例为1:10。内水相与油相混合并在冰水浴中采用探头超声以50W超声3分钟，得到W/O初乳液。将初乳以注射方式通过30μm的亲水性SPG膜加入到20ml含有2％聚乙烯醇和2.5％氯化钠的外水相中，行成W/O/W复乳。将上述复乳倒入200ml含0.1％PVA的水溶液中，固化4小时后，待有机溶剂挥发完全后，将混悬液在3000rpm转速条件下离心五分钟，用清水洗涤五遍后进行冷冻干燥。得到的微球平均粒径为6.76μm，载药量为2.84％。
实施例六
准确称取6mg GLP-1类似物溶于200μl水中，配置成浓度为30mg/ml的内水相溶液，将内水相加入到1.6ml浓度为100mg/ml的聚乳酸聚羟基乙酸 (LA:GA＝50：50Mw＝17kDa)的二氯甲烷溶液中(油相),油相中同时含有质量分数为3％的保护剂碳酸镁，内水相与油相的体积比为1:8。内水相与油相混合并在冰水浴中采用均质机均质的方法以18000rpm的转速均质1分钟，得到 W/O乳液。将得到的初乳用25G注射器缓慢注射到20ml含有1.5％司盘80和2.5％氯化钠的外水相中，并采用均质机以3000rpm的转速乳化一分钟，形成W/O/W复乳。将上述复乳倾倒如200ml含0.1％的聚乙烯醇水溶液中，固化4小时，待有机溶剂挥发完全后，将混悬液在3000rpm转速条件下离心五分钟，用清水洗涤五遍后在0.12MPa，-40℃条件下进行冷冻干燥。得到的微球平均粒径为27.3μm，载药量为3.14％。
动物药效学检测
实验采用糖尿病模型小鼠(链脲佐菌素诱导的C57小鼠)，采用血糖浓度测试试剂盒以葡萄糖氧化酶的方法进行测定。小鼠分为三组，每组八只分别给予(1)皮下注射载多肽的缓释微球，给药量为250mg/kg，每两周进行一次注射给药(2)给予多肽溶液治疗，每天皮下注射两次，给药量为100nmol/kg。 (3)给予生理盐水作为对照组，每只老鼠每日注射两次生理盐水。取血方法采用剪尾取血法，每周用血糖试纸进行血糖的检测。以实施例四所制备的微球作为实验组进行药效学实验的检测。
摄食量检测
实验采用糖尿病模型小鼠(链脲佐菌素诱导的C57小鼠)。将糖尿病模型小鼠分为三组，每组八只分别给予(1)皮下注射载多肽的缓释微球，给药量为5mg/20g小鼠，每两周进行一次注射给药(2)给予多肽溶液治疗，每天皮下注射两次，给药量为100nmol/kg。(3)给予生理盐水作为对照组，每只老鼠每日注射两次生理盐水。给予一定饲料，每三天到四天监控一次小鼠摄食量。以实施例四所制备的微球作为实验组给药，并检测小鼠的摄食量。

Claims (13)

1.一种胰高血糖素样肽-1类似物缓释微球，其特征在于：主要包含胰高血糖素样肽-1类似物与聚乳酸-羟基乙酸共聚物，其中，胰高血糖素样肽-1类似物为1-10重量份,聚乳酸-羟基乙酸共聚物为90-99重量份，缓释微球的平均粒径范围为0.5-100μm，优选缓释微球的平均粒径范围为1-30μm。
2.如权利要求1所述的胰高血糖素样肽-1类似物微球，其特征在于所述的聚乳酸-羟基乙酸共聚物的分子量范围为0.5kDa-100kDa，优选10kDa-60kDa。
3.如权利要求2所述的胰高血糖素样肽-1类似物微球，其特征在于所述的聚乳酸-羟基乙酸共聚物中聚乳酸与羟基乙酸重量比例为20:80-85:25，优选50:50-75:25。
4.一种权利要求1所述的胰高血糖素样肽-1类似物缓释微球的制备方法，其特征在于该方法包括制备初乳、制备复乳、固化及离心洗涤干燥过程，其中，
制备初乳步骤如下：将胰高血糖素样肽-1类似物溶于水得到内水相，将聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶于有机溶剂即为油相，将内水相或直接将胰高血糖素样肽-1类似物冻干粉与油相混合并进行乳化得到初乳；
制备复乳步骤如下：将初乳在压力作用下通过膜孔加入到外水相中，形成复乳或将初乳滴加到外水相中，经过进一步乳化制备得到复乳；
固化过程如下：将复乳倒入水中进行固化，挥发有机溶剂，使乳滴中微球析出；
离心洗涤干燥过程如下：将微球离心收集并进行冷冻干燥处理。
5.如权利要求4所述的胰高血糖素样肽-1类似物微球制备方法，其特征在于内水相中胰高血糖素样肽-1类似物的浓度为10mg/ml-50mg/ml,优选20-30mg/ml；胰高血糖素样肽-1类似物冻干粉在溶有聚乳酸-羟基乙酸共聚物的有机溶剂中的含量为0.5mg/ml-10mg/ml，优选3.5-6mg/ml。
6.如权利要求4所述的胰高血糖素样肽-1类似物微球制备方法，其特征在于油相中聚乳酸-羟基乙酸共聚物在有机溶剂中的浓度为50mg/ml-200mg/ml，优选75mg/ml-160mg/ml。
7.如权利要求4所述的胰高血糖素样肽-1类似物微球制备方法，其特征在于乳化方法包括均质乳化法，超声乳化法，膜乳化法，搅拌乳化法，优选为超声乳化法以及均质乳化法。
8.如权利要求4所述的胰高血糖素样肽-1类似物微球制备方法，其特征在于在内水相加入保护剂。
9.如权利要求8所述的胰高血糖素样肽-1类似物微球制备方法，其特征在于所述的保护剂为人血清白蛋白，蔗糖，明胶，葡聚糖，聚乙二醇，海藻糖，甘露醇，赖氨酸，碳酸镁，醋酸锌和氯化锌中的一种或几种，优选为乙酸锌。
10.如权利要求4所述的胰高血糖素样肽-1类似物微球制备方法，其特征在于所选用的有机溶剂为二氯甲烷，乙酸乙酯，氯仿，丙酮，乙酸甲酯、二氧六环、乙醚中的一种或任意几种混合溶剂，优选为二氯甲烷。
11.如权利要求4所述的胰高血糖素样肽-1类似物微球制备方法，其特征在于内水相和油相的体积比为1:1-1:10，优选为1:5；油相与外水相的体积比为1:5-1:35，优选为1:20。
12.如权利要求4所述的胰高血糖素样肽-1类似物微球制备方法，其特征在于所述的外水相为添加表面活性剂以及氯化钠的水溶液，其中表面活性剂的浓度为0.1％-5％，氯化钠的浓度为0.5％-3.5％。
13.如权利要求4所述的胰高血糖素样肽-1类似物微球制备方法，其特征在于所选择的表面活性剂为聚乙烯醇，十二烷基硫酸钠，聚山梨酯，司盘，硬脂酸钠中的一种或几种，其中优选聚乙烯醇。
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