WO2004000363A1

WO2004000363A1 - 徐放性組成物の製造方法

Info

Publication number: WO2004000363A1
Application number: PCT/JP2003/007950
Authority: WO
Inventors: Kazumichi Yamamoto; Kazuhiro Saito; Tetsuo Hoshino
Original assignee: Takeda Pharmaceutical Company Limited
Priority date: 2002-06-25
Filing date: 2003-06-24
Publication date: 2003-12-31
Also published as: CA2490351A1; KR101041767B1; CN1662260A; EP1532985A4; EP1532985A1; CN1662260B; EP1532985B1; PT1532985T; US20050214330A1; CA2490351C; KR20050023334A; US8088726B2; DK1532985T3; ES2605402T3; KR20110050744A; KR101139112B1; AU2003244157A1

Abstract

生理活性物質および当該生理活性物質の1.5倍モル以上の酸または塩基を含む水溶液と生体内分解性ポリマーの溶解液とを混合し、次いで当該混合液を乾燥する徐放性組成物の製造方法などを提供する。

Description

明細書

徐放性組成物の製造方法技術分野

本発明は、生理活性物質と生体内分解性ポリマーからなる徐放性組成物の製造法とその方法で製造された徐放性組成物などに関する。背景技術

生体内分解性ポリマーを用い、 W/0型乳化物から徐放性マイクロカプセルを製造する方法は、例えば特開昭 5 7 - 1 1 8 5 1 2号公報、特開昭 5 7 - 1 5 0 6 0 9号公報および特開平 6— 1 4 5 0 4 6号公報などに記載されている。

また、徐放性を有する生体内分解性ポリマーは、例えば生理活性物質を内包させるためのマイクロカプセル等の基材として有用である。この様な生体内分解性ポリマ一として、ポリ乳酸、乳酸とグリコール酸との共重合体を含むもの等（特開平 1 1一 2 6 9 0 9 4号公報等）が有用であることが知られている。

特開平 7— 9 7 3 3 4号公報には、生理活性べプチドまたはその塩と末端カルポキシル基を有する生体内分解性ポリマ一とからなる徐放性製剤およびその製造法が開示されている。

本発明は、 W/0エマルシヨンを安定に形成させる徐放性組成物の製造方法と、この方法により製造された徐放性組成物などを提供することを目的とする。発明の開示

このような事情に鑑み、本発明者らは、 WQ エマルシヨンを安定に形成させ、る徐放性組成物の製造方法を開発する目的で、鋭意研究を行った結果、生理活性物質に対し過剰量の酸または塩基を含む水溶液を使用することにより 0ェマルションを安定化させることができることを見出した。これに基づいてさらに研究した結果、本発明を完成した。

すなわち本発明は、

( 1 ) 生理活性物質および当該生理活性物質の約 1. 5倍モル以上の酸または塩基を含む水溶液と生体内分解性ポリマーの溶解液とを混合し、次いで当該混合液を乾燥する徐放性組成物の製造方法；

(2) 水溶液が、生理活性物質と酸または塩基との塩を用いて得られる水溶液である前記（1) 記載の方法；

( 3 )徐放性組成物における生理活性物質の重量比が約 0.001〜約 50重量％である前記（1) 記載の方法；

(4) 生理活性物質の約 1.5倍モル以上の酸または塩基を含有せしめることを特徵とする、生理活性物質を含む水溶液と生体内分解性ポリマーの溶解液との混合液の安定化方法；

(5) 生理活性物質の約 1.5倍モル以上の酸または塩基を含有せしめることを特徴とする、生理活性物質を含む水溶液と生体内分解性ポリマーの溶解液との混合液の粘度を約 3000 c p以下にする方法；

(6) 生理活性物質が生理活性ペプチドである前記（1)、（4) または（5) 記載の方法；

(7) 生理活性ペプチドが LH-RH誘導体である前記（6) 記載の方法；

(8) LH- RH誘導体が一般式

5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z

〔式中、 Yは DLetu DAI a, DT卬、 DSer(tBu)、 D2Nalまたは DHis (ImBzl)を示し、 Z は NH- C₂ または Gly- NH₂を示す。〕で表される化合物である前記（7) 記載の方法；

(9) 生理活性物質に対する酸または塩基の量が約 1. 5〜約 5倍モルである前記（1)、（4) または（5) 記載の方法；

(10)生理活性物質に対する酸または塩基の量が約 1.65〜約 3倍モルである前記（1)、 (4) または（5) 記載の方法；

(11) 酸が有機酸である前記（1)、 (4) または（5) 記載の方法；

(12) 有機酸が脂肪酸である前記（11) 記載の方法；

(13) 脂肪酸が酢酸である前記（12) 記載の方法；

(1 ) 生体内分解性ポリマーがひーヒドロキシカルボン酸重合体である前記 (1)、（4) または（5) 記載の方法； (15) α—ヒドロキシカルボン酸重合体が乳酸ーグリコール酸重合体である前記（14) 記載の方法；

(16) 乳酸—ダリコール酸重合体の乳酸とダリコール酸の組成モル比が 100 対 0〜50対 50である前記（15) 記載の方法；

(17) 乳酸—グリコール酸重合体の乳酸とグリコール酸の組成モル比が 100 対 0である前記（16) 記載の方法；

(18) 乳酸一ダリコール酸重合体の重量平均分子量が 5000〜 50000である前記（15) 記載の方法；

(19) 乳酸—ダリコール酸重合体の重量平均分子量が 17000〜 30000 である前記（15) 記載の方法；

(20) 生体内分解性ポリマーが重量平均分子量 5000以下の重合体含有量が約 5重量％以下である、重量平均分子量 15000〜 50000の乳酸重合体である前記（1) 記載の方法；

(21) 生体内分解性ポリマーの末端力ルポキシル基量が重合体の単位質量（グラム）あたり約 20〜約 lOOO mol (マイクロモル）の乳酸-グリコール酸重合体である前記（1) 記載の方法；

(22) 生体内分解性ポリマ一の末端力ルポキシル基量が生理活性物質に対して約 0.1〜約 5倍モルである前記（ 1 ) 記載の方法；

(23) 生体内分解性ポリマーの溶解液が、水難溶性の有機溶媒を用いた溶解液である前記（1)、（4) または（5) 記載の方法；

(24) 水難溶性の有機溶媒がジクロロメタンである前記（23) 記載の方法；

(25) 混合液が均一に混合されている前記（1)、（4) または（5) 記載の方法；

(26) 均一に混合された液がエマルシヨンである前記（25) 記載の方法； (27) エマルシヨンが W/0型である前記（26) 記載の方法；

(28) W/0エマルシヨンのサイズが微細である前記（27) 記載の方法； (29) 混合液の乾燥が水中乾燥である前記（1) 記載の方法； ' (30) 水中乾燥の外水相に浸透圧調節剤の水溶液を用いる前記（29) 記載の方法； (31) 浸透圧調節剤がマンニトールである前記（30) 記載の方法；

(32) 徐放性組成物の形態が微粒子である前記（1) 記載の方法；

(33)微粒子がマイクロスフェアあるいはマイクロカプセルである前記（32) 記載の方法；

(34) 1) 生理活性物質おょぴ 2) 水溶液に対して約 0.1〜約 20重量％の酸または塩基を含む水溶液と、生体内分解性ポリマーの溶解液とを混合し、次いで当該混合液を乾燥する徐放性組成物の製造方法；

(35) 水溶液が、生理活性物質と酸または塩基との塩を用いて得られる水溶液である前記（34) 記載の方法；

(36) 前記（1) 記載の方法を用いて製造された徐放性組成物；および

(37) 生理活性物質を含有する徐放性製剤の製造のための、当該生理活性物質および当該生理活性物質の約 1.5倍モル以上の酸または塩基を含む水溶液の使用などを提供するものである。図面の簡単な説明 ,

図 1は実験例 2で作成した W/0エマルションの様子を表す写真である。下記の数字は酢酸と薬物のモル比を表す数値である。

図 2は実験例 6における、ペプチド Aに対して 1. 5倍モル以上の酢酸を使用した場合の、乳化時間と W/0エマルシヨン粘度の関係を示す図である。左から順に、酢酸 Z薬物モル比が 1.4、 1.6、 1.8、 2.3および 2.8の例を示す。本発明で用いられる生理活性物質は、薬理学的に有用なものであれば特に限定されず、非ペプチド化合物でもペプチド化合物でもよい。非ペプチド化合物としては、ァゴニスト、アンタゴニスト、酵素阻害作用を有する化合物などが用いられる。また、ペプチド化合物としては、ァゴニストでもアン夕ゴニストでもよく、例えば、生理活性ペプチドが好ましく、分子量約 300〜約 40， 000、好ましくは約 400〜約 30， 000、さらに好ましくは約 500〜約 20， 000 の生理活性べプチドなどが好適である

本発明の組成物における生理活性物質の重量比は、生理活性物質の種類、所望の薬理効果および効果の持続期間などによって異なり特に限定されないが、組成物全体に対して、約 0. 001〜約50重量％、好ましくは約 0. 02〜約 40 重量％、より好ましくは約 0. 1〜約 30重量％、さらに好ましくは約 0. 1〜約 24重量％、最も好ましくは約 5〜約 24重量％である。

該生理活性物質としては、特に限定されず、生理活性ペプチド、抗腫瘍剤、抗生物質、解熱，鎮痛，消炎剤、鎮咳去痰剤、鎮静剤、筋弛緩剤、抗てんかん剤、抗潰瘍剤、抗うつ剤、抗アレルギー剤、強心剤、不整脈治療剤、血管拡張剤、降圧利尿剤、糖尿病治療剤、抗凝血剤、止血剤、抗結核剤、ホルモン剤、麻薬拮钪剤、骨吸収抑制剤、血管新生抑制剤などが用いられる。

該生理活性ペプチドとしては、例えば、黄体形成ホルモン放出ホルモン（LH 一 RH)、インスリン、ソマトス夕チン、成長ホルモン、成長ホルモン放出ホルモン（GH— RH)、プロラクチン、エリスロポイエチン、副腎皮質ホルモン、メラノサイト刺激ホルモン、甲状腺ホルモン放出ホルモン（TRH)、甲状腺刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、卵胞刺激ホルモン、バソプレシン、ォキシトシン、力ルシトニン、ガストリン、セクレチン、パンクレオザィミン、コレシストキニン、アンジォテンシン、ヒト胎盤ラクトーゲン、ヒト絨毛性ゴナドトロピン、エンケフアリン、エンドルフィン、キヨウトルフィン、タフトシン、サイモポイエチン、サイモシン、サイモチムリン、胸腺液性因子、血中胸腺因子、腫瘍壊死因子、コロニー誘導因子、モチリン、ディノルフィン、ボンべシン、ニューロテンシン、セルレイン、ブラジキニン、心房性ナトリウム排泄増加因子、神経成長因子、細胞増殖因子、神経栄養因子、エンドセリン拮抗作用を有するペプチド類などおよびその誘導体、さらにはこれらのフラグメントまたはフラグメントの誘導体などが用いられる。

また、生理活性を有するペプチドとしては、 LH— RH拮抗物質（米国特許第 4， 086, 219号，同第 4， 124， 577号，同第 4， 253, 997号，同第 4, 317, 815号参照）が用いられる。

また、さらに生理活性を有するペプチドとしては、たとえばインスリン，ソマトス夕チン，ソマトス夕チン誘導体（米国特許第 4， 087, 390号，同第 4, 0 93, 574号，同第 4, 100, 117号，同第 4， 253 , 998号参照)，成長ホルモン，プロラクチン，副腎皮質刺激ホルモン（ACTH)，メラノサイト刺激ホルモン（MSH), 甲状腺ホルモン放出ホルモン〔(Pyr)Glu- His_ProNH2 の構造式で表わされ、以下 T RHと略記することもある〕その塩およびその誘導体（特開昭 50— 121273号，特開昭 52— 116465号公報参照)，甲状腺刺激ホルモン（TSH), 黄体形成ホルモン（LH), 卵胞剌激ホルモン（FSH), バソプレシン，バソプレシン誘導体 {デスモプレシン〔日本内分泌学会雑誌，第 5 4巻第 5号第 676〜 691頁（1978 )〕参照 }，ォキシトシン，カルシトニン，副甲状腺ホルモン，グルカゴン，ガストリン，セクレチン，パンクレオザィミン，コレシストキニン，アンジォテンシン，ヒト胎盤ラクトーゲン，ヒト絨毛性ゴナドトロピン（HCG)，エンケフアリン，エンケフアリン誘導体〔米国特許第 4， 277, 394号，ヨーロッパ特許出願公開第 31567号公報参照〕，エンドルフィン，キヨウトルフィン，インターフェロン類（例、ひ型， β型, 7"型等），ィンターロイキン類 (例、 I , II, III 等），タフトシン，サイモポイエチン，サィモシン，サイモスチムリン，胸腺液性因子（THF), 血中胸腺因子（FTS) およびその誘導体（米国特許第 4, 229, 438号参照），およびその他の胸腺因子〔医学のあゆみ，第 125巻，第 10号， 835— 843頁（1983年)〕，腫瘍壊死因子（TNF), コロニー誘発因子（CSF)，モチリン，ダイノルフィン，ボムべシン，ニューロテンシン，セルレイン，ブラジキニン，ゥロキナーゼ，ァスパラギナーゼ，カリクレイン，サブスタンス P,神経成長因子，細胞増殖因子，神経栄養因子，血液凝固因子の第 VIII因子，第 IX因子，塩化リゾチーム，ポリミキシン B，コリスチン，ダラミシジン，バシトラシンおよびエリスロポエチン（ E PO),エンドセリン拮抗作用を有するペプチド類（ヨーロッパ特許公開第 436 189号，同第 457195号，同第 496452号，特開平 3— 94692号，同 3— 130299号公報参照）などが用いられる。

前記抗腫瘍剤としては、ブレオマイシン，メソトレキセー卜，ァクチノマイシン D, マイトマイシン C，硫酸ビンブラスチン，硫酸ビンクリスチン，ダウノルビシン，アドリアマイシン，ネオカルチノスタチン，シトシンァラピノシド，フルォロウラシル，テトラヒドロフリル— 5—フルォロウラシル，クレスチン，ピシバニール，レンチナン，レバミゾール，べスタチン，アジメキソン，ダリチルリチン，ポリ I ： C，ポリ A： U, ポリ I C L Cなどが用いられる。

前記抗生物質としては、例えばゲンタマイシン，ジべカシン，カネンドマイシン，リビドマイシン，トブラマイシン，アミカシン，フラジオマイシン，シソマイシン，塩酸テトラサイクリン，塩酸ォキシテトラサイクリン，ロリテトラサイクリン，塩酸ドキシサイクリン，アンピシリン，ピぺラシリン，チカルシリン，セファロチン，セファロリジン，セフォチアム，セフスロジン，セフメノキシム，セフメタゾ一ル，セファゾリン，セフォタキシム，セフオペラゾン，セフチゾキシム，モキサラクタム，チェナマイシン，スルファゼシン，ァズスレオナムなどが用いられる。

前記の解熱，鎮痛，消炎剤としては、サリチル酸；スルピリン，フルフエナム酸，ジクロフエナック，インドメタシン，モルヒネ，塩酸ペチジン，酒石酸レポルファノール，ォキシモルフォンなどが用いられる。

鎮咳去痰剤としては、塩酸エフェドリン，塩酸メチルエフェドリン，塩酸ノス力ピン，リン酸コディン，リン酸ジヒドロコディン，塩酸ァロクラマイド，塩酸クロフエダノール，塩酸ピコペリダミン，クロペラスチン，塩酸プロトキロール，塩酸イソプロテレノール，硫酸サルブ夕モール，硫酸テルブタリンなどが用いられる。

鎮静剤としては、クロルプロマジン，プロクロルペラジン，トリフロペラジン，硫酸アト口ピン，臭化メチルスコポラミンなどが用いられる。

筋弛緩剤としては、メタンスルホン酸プリジノール，塩化ッポクラリン，臭化パンクロニゥムなどが用いられる。

抗てんかん剤としては、フエニトイン，エトサクシミド，ァセタゾラミドナトリゥム，クロルジァゼポキシドなどが用いられる.。

抗漬瘍剤としては、メトクロプロミド，塩酸ヒスチジンなどが用いられる。抗うつ剤としては、イミブラミン，クロミプラミン，ノキシプチリン，硫酸フェネルジンなどが用いられる。

抗アレルギー剤としては、塩酸ジフェンヒドラミン，マレイン酸クロルフエ二ラミン，塩酸トリべレナミン，塩酸メトジラジン，塩酸クレミゾール，塩酸ジフェニルピラリン，塩酸メトキシフエナミンなどが用いられる。強心剤としては、卜ランスパイォキソカンファー，テオフィロール，アミノフィリン，塩酸ェチレフリンなどが用いられる。

不整脈洽療剤としては、プロブラノール，アルプレノロール，プフエトロール，ォキシプレノロールなどが用いられる。

血管拡張剤としては、塩酸ォキシフエドリン，ジルチアゼム，塩酸トラゾリン，へキソベンジン，硫酸バメタンなどが用いられる。

降圧利尿剤としては、へキサメトニゥムブ口ミド，ペントリ二ゥム，塩酸メカミルァミン，塩酸ェカラジン，クロ二ジンなどが用いられる。

糖尿病治療剤としては、グリミジンナトリウム，グリピザイド，塩酸フェンフオルミン，塩酸プフォルミン，メトフオルミンなどが用いられる。

抗凝血剤としては、へパリンナトリウム，クェン酸ナトリウムなどが用いられる。

止血剤としては、トロンポプラスチン，トロンビン，メナジオン亜硫酸水素ナトリウム，ァセトメナフトン， ε —アミノカプロン酸，トラネキサム酸，力ルバゾクロムスルホン酸ナトリゥム， 7ドレノクロムモノアミノグァ二ジンメタンスルホン酸塩などが用いられる。 '

抗結核剤としては、イソ二アジド，エタンプトール，パラアミノサリチル酸などが用いられる。

ホルモン剤としては、プレドニゾロン，リン酸ナトリウムプレドニゾロン，デキサメタゾン硫酸ナトリウム，ベタメタゾンリン酸ナトリウム，リン酸へキセストロ一ル，酢酸へキセストロール，メチマゾ一ルなどが用いられる。

麻薬拮抗剤としては、酒石酸レバロルフアン，塩酸ナロルフイン，塩酸ナロキソンなどが用いられる。

骨吸収抑制剤としては、（硫黄含有アルキル）アミノメチレンビスフォスフォン酸などが用いられる。

血管新生抑制剤としては、血管新生抑制ステロイド〔サイエンス（Science)第 2 2 1卷 7 1 9頁（1 9 8 3年）参照〕，フマギリン（ヨーロッパ特許公開第 3 2 5 1 9 9号公報参照），フマギロール誘導体（ヨーロッパ特許公開第 3 5 7 0 6 1 号，同第 3 5 9 0 3 6号，同第 3 8 6 6 6 7号，同第 4 1 5 2 9 4号公報参照〉などが用いられる。

該生理活性ペプチドの好ましい例としては、 LH— RH誘導体であって、ホルモン依存性疾患、特に性ホルモン依存性癌（例、前立腺癌、子宮癌、乳癌、下垂体腫瘍など)、前立腺肥大症、子宮内膜症、子宮筋腫、思春期早発症、月経困難症、無月経症、月経前症候群、多房性卵巣症候群等の性ホルモン依存性の疾患および避妊（もしくは、その休薬後のリバウンド効果を利用した場合には、不妊症)、閉経前乳癌術後再発予防またはアルツハイマー病や免疫不全等の疾患に有効な LH 一 RH誘導体またはその塩が用いられる。さらに性ホルモン非依存性であるが L H-R H感受性である良性または悪性腫瘍などに有効な L H— R H誘導体も用いられる。

LH— RH誘導体の具体例としては、例えば、トリートメントウイズ Gn RH アナログ：コントラバーシスアンドパースペクティブ（Treatment with GnRH analogs: Controversies and perspectives; [ノレテノンノ^フリッシンクグループ (株) (The Parthenon Publishing Group Ltd.)発行 1996年]、特表平 3 - 503165号公報、特開平 3— 101695号、同 7— 97334号および同 8— 259460号公報などに記載されているペプチド類が用いられる。

LH— RH誘導体としては、 LH— RHァゴニストまたは LH— RHアン夕ゴ二ストが用いられるが、 LH- RHアンタゴニストとしては、例えば、一般式〔I〕 X-D2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-A-B-Leu-C-Pro-DAlaNH₂

〔式中、 Xは N(4¾- furoyDGly または NAc を、 Aは NMeTyr、 Tyr、 Aph(Atz)ゝ NMeAph(Atz)から選ばれる残基を、 Bは DLys(Nic)、 DCit、 DLys (AzaglyNic) , DLys(AzaglyFur), DhArg(E ）、 DAph(Atz)および DhCi から選ばれる残基を、 C は Lys(Nisp；)、 Argまたは Mrg(Et₂)をそれぞれ示す〕で表わされるペプチド、ァノレリックス、デガレリックス、アンタレリックス、イツレリックス、オルンタイド、セトロレリックスもしくはガニレリックスまたはその塩などが用いられる。また、非ぺプチド性の LH-皿アンタゴニストとしては、 W095/28405号公報（特開平 8-295693号）、 W0 97/14697号公報（特開平 9-169767号）、 W0 97/14682 号公報（特開平 9-169735号）、 W0 96/24597号公報（特開平 9- 169768号）、チエノピリジン系化合物『例、 3-(N-Benzyl-N-methylaminomethyl)4, 7 - dihydro-5 - isobutyryト 7 - (2， 6-dif luoro benzy 1) -2- [4- [(l-hydroxycyclopropyl)carbonyl amino] henyl] -4-oxo thieno [2, 3- b] pyridine等』を記載した WO 00/00493号公報、チエノピリミジン系化合物『例、 5- (N-b enzy 1 -N-me t hy 1 am i nome t hy 1 ) -ト (2， 6-dif luorobenzyl) - 6 - [4- (3-methoxyu re i do) phenyl] -3-pheny lthieno[2, 3-d] pyrimid ine-2, 4 (1H, 3H) -d i one等』を記載した TO 00/56739 号、

5- [(3, 5， 5， 8， 8-pentamethyl-5, 6, 7, 8-tetrahydro-2-naphthalenyl)methyl]-N-(2 , 4, 6-trimethoxyp enyl)-2-furamide (アメリカ癌学会（AACR)、 2002.4.6-10) などが用いられる。

LH- RHァゴニストとしては、例えば、一般式〔II〕

5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z

〔式中、 Yは DLeu、 DAI a, DTrp、 DSer(tBu), D2Nalおよび DHis (ImBzl)から選ばれる残基を、 Zは NH- C₂H₅または Gly- M₂をそれぞれ示す〕で表わされる生理活性ペプチドなどが用いられる。特に、 Yが DLeuで、 Zが NH-C₂ であるペプチドまたはその塩（即ち、 5- (no- Pro- His- T卬- Ser- Tyr- DLeu- Leu-Arg- Pro- NH- C₂¾で表されるペプチド [以下「ペプチド A」ともいう] またはその塩、特にその酢酸塩 (酢酸リュープロレリン））などが好適である。

LH-RH ァゴニストとして、前記のリュープロレリンの他に好ましい具体例としては、例えば、

(1) ブセレリン（Buserelin)

(米国特許 No. 4, 024, 248、ドイツ特許第 2438352号，特開昭和 51— 41359号）、

(2) Ο ヽ CO-His— Trp-Ser-Tyr-Trp- Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂

H

(米国特開第 4010125号，特開昭 52 - 31073号）、

(3) ナファレリン (Nafarelin)

(米国特開第 4234571号，特開昭 55 64663号，同昭 63— 26 4498号，同昭 64— 25794号）、

(4) ヒス卜レリン (Histrelin)

H

(5) デスロレリン（Deslorelin)

(米国特開第 4569967号，同 4218439号）、

(6) メテレリン（Meterelin)

H

-Leu-Arg-Pro-NH-CH₂ - CH₃

(PCT WO 91/18016) 、

(7) ゴナドレリン（Gonadrelin)

H

(ドイツ特許第 2213737号）、

(8) ゴセレリン（Goserelin)

H

(米国特開第 4100274号，特開昭 52— 136172号）

(9) レシレリン (Lecirelin)

〔ベルギー特許第 897455号、特開昭 59- 59654号〕など、またはそれらの塩などが用いられる。

本明細書中で使用される略号の意味は次のとおりである。

略号名称

N(4H₂-furoyl)Gly： N-テトラヒドロフロイルグリシン残基

NAc ： N-ァセチル基

D2Nal ： D- 3- (2-ナフチル）ァラニン残基 D4ClPhe ： D-3- (4-クロ口）フエ二ルァラニン残基

D3Pal ： D- 3- (3-ピリジル）ァラニン残基

NMeTyr ： N-メチルチロシン残基

Aph(Atz) ： Ν-[5'- (3' -ァミノ- ΓΗ- ，2',4'-トリァゾリル)]フエ二ルァラニン残基

N eAph(Atz) _メチル-[5'-(3'-ァミノ-1'11- 2'，4'-トリァゾリル)] フエ二ルァラニン残基

DLys(Nic) D- (e- Ν-二コチノィル）リシン残基

Dcit D-シトルリン残基

DLys (AzaglyNic) D- (ァザグリシルニコチノィル)リシン残基

DLys (AzaglyFur) D -（ァザダリシルフラニル）リシン残基

DhArg(Et₂) ： D- (Ν,Ν'-ジェチル）ホモアルギニン残基

DAph(Atz) ： D-N- [5'— (3，ーァミノ— Γ Η— Γ， 2' —トリァゾリル)]

フエ二ルァラニン残基

DDhhCCii ： D-ホモシトルリン残基

Lys (Nisp) ： (e- N-ィソプ口ピル）リシン残基

hArg(Et₂) (N, N' -ジェチル）ホモアルギニン残基

その他アミノ酸に関し、略号で表示する場合、 IUPAC- IUBコミツション ·ォブ · ノィオケミカ^ · ノーメンクレーチユア一 (Commission on Biochemical Nomenclature) (ョ一口ピアン'ジャーナル'ォブ 'バイオケミストリー（European Journal of Biochemistry)第 138巻、 9〜37頁（1984年）による略号または該当分野における慣用略号に基づくものとし、また、アミノ酸に関して光学異性体がありうる場合は、特に明示しなければ L体を示すものとする。

本発明において、「生理活性物質および当該生理活性物質の約 1.5倍モル以上の酸または塩基を含む水溶液」および「水溶液に対して約 0.1〜約 20重量％の酸または塩基」の「酸または塩基」としては一般に製造上用いられているものであれば特に限定されないが、無機酸、有機酸、無機塩基、有機塩基、酸性または塩基性アミノ酸等を用いることができる。好ましくは酸であり、より好ましくは有機酸である。無機酸の好適な例としては、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸等が用いられる。有機酸の好適な例としては、例えばメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、 p—トルエンスルホン酸等のスルホン酸類；ギ酸、酢酸、プロピオン酸等の脂肪酸；シユウ酸、マロン酸、コハク酸などの脂肪族ジカルボン酸；ァクリル酸、フマル酸、マレイン酸などの不飽和脂肪酸；フ夕ル酸、イソフタル酸、テレフタル酸などの炭素環カルボン酸；その他、トリフルォロ酢酸、酒石酸、クェン酸、リンゴ酸、乳酸、グリコール酸等の置換カルボン酸が用いられ、より好適には脂肪酸、乳酸、ダリコール酸が用いられ、特に好適には酢酸が用いられる。酸性アミノ酸の好適な例としては、例えばァスパラギン酸、グルタミン酸等が用いられ、塩基性アミノ酸の好適な例としては、例えばアルギニン、リジン、オル二チン等が用いられる。無機塩基の好適な例としては、例えばナトリウム、カリゥム等のアルカリ金属；カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属；水素化リチウム、水素化カリウム、水素化ナトリウム等の水素化アルカリ金属類；酸化リチウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム等の無機水酸化物；炭酸ナトリゥム、炭酸力リゥム、炭酸水素ナトリゥム等の炭酸の塩等、並びにアルミニウム、アンモニゥム等が用いられる。有機塩基の好適な例としては、例えばリチウムエトキシド、リチウム _ t er t—ブトキシド、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウム— ter t—ブトキシド等の炭素数 1ない • し 6の金属アルコキシド類；カリウムフエノキシド、ナトリウムフエノキシド等の金属フエノキシド類；酢酸ナトリゥム、酢酸力リゥム等の酢酸の塩； n-ブチルリチウム、 t -ブチルリチウム、ジェチルァミノリチウム等の有機リチウム塩；フェニルヒドラジン、 P-トリルヒドラジン等のヒドラジン類；アミジン類；水酸化第四アンモニゥム類；スルホニゥム塩基類；トリメチルァミン、トリェチルアミン、ピリジン、ピコリン、 2， 6ールチジン、エタノールァミン、ジエタノールァミン、トリエタノールァミン、シクロへキシルァミン、ジシクロへキシルアミン、 N , N，一ジベンジルエチレンジァミン等のアミン類等を用いることができる。

酸が「有機酸」である場合、その pKaは特に限定されないが、例えば、好ましくは約 0. 1〜約 6. 0であり、より好ましくは約 1. 0〜約 6. 0であり、さらに好ましくは約 3. 5〜約 6. 0である。

本発明において、当該「酸と塩基」は、生理活性物質と独立して酸または塩基を水溶液に含有せしめてもよいし、または生理活性物質の酸または塩基との塩の形で水溶液に含有せしめてもよく、さらに生理活性物質の酸または塩基との塩および、それとは独立した酸または塩基を水溶液に含有せしめてもよい。

このように本発明で用いられる生理活性物質はそれ自身であっても、薬理学的に許容される塩であってもよい。

このような塩としては、該生理活性物質がアミノ基等の塩基性基を有する場合、無機酸（無機の遊離酸とも称する）（例、炭酸、重炭酸、塩酸、硫酸、硝酸、ホウ酸等)、有機酸（有機の遊離酸とも称する）（例、コ八ク酸、酢酸、プロピオン酸、トリフルォロ酢酸等）など酸との塩が用いられる。該生理活性物質が L H R H誘導体の場合、特に酢酸を添加することが好ましく、たとえば酢酸リュープロレリンなどが好ましい。

生理活性物質が力ルポキシル基等の酸性基を有する場合、無機塩基（無機の遊離塩基とも称する）（例、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属など）や有機塩基（有機の遊離塩基とも称する）（例、トリェチルァミン等の有機アミン類、アルギニン等の塩基性アミノ酸類等)など塩基との塩が用いられる。また、生理活性べプチドは金属錯体化合物 (例、銅錯体、亜鉛錯体等）を形成していてもよい。

これらの化合物またはその塩は、前記文献あるいは公報記載の方法あるいはこれに準じる方法で製造することができる。

ここで「生理活性物質」に対する「酸または塩基」の使用量としては、生理活性物質 1モルに対して、約 1. 5モル倍以上使用することができ、好ましくは約 1. 5 倍モル以上約 5倍モル以下であり、より好ましくは約 1. 65倍モル以上約 3倍モル以下である。

また、本発明において「水溶液」に対する「酸または塩基」の使用量（重量％) としては、本願発明の効果を発揮すればよく特に限定されないが、水溶液に対して約 0. 1〜約 20 %が好ましく、より好ましくは約 1〜約 15 %、さらに好ましくは約 3〜約 10 %である。前記で述べたように、この「酸または塩基」は、水溶液に外部から独立して含有せしめてもよいし、生理活性物質の塩の形で水溶液に含有せしめてもよく、さらに外部から独立して含有せしめる方法と生理活性物質の塩の形で水溶液に含有せしめる方法を組み合わせてもよい。

本発明における生体内分解性ポリマーとしては、例えば、生体内分解性の高分子重合物が好ましく、例えば脂肪族ポリエステル〔例えば Q!—ヒドロキシ酸類 (例、グリコール酸、乳酸、 2—ヒドロキシ酪酸、 2—ヒドロキシ吉草酸、 2—ヒドロキシ一 3—メチル酪酸、 2—ヒドロキシカプロン酸、 2—ヒドロキシイソ力プロン酸、 2—ヒドロキシカプリル酸等)、ーヒドロキシ酸の環状二量体類（例、グリコリド、ラクチド等)、ヒドロキシジカルボン酸類（例、リンゴ酸)、ヒドロキシトリカルボン酸（例、クェン酸）等の単独重合体（例、乳酸重合体等）または 2種以上の共重合体（例えば、乳酸/ダリコール酸共重合体， 2—ヒドロキシ酪酸 Zグリコ一ル酸共重合体等)、あるいはこれら単独重合体および Zまたは共重合体の混合物（例、乳酸重合体と 2—ヒドロキシ酪酸 Zグリコール酸共重合体との混合物等)〕、ポリ—α _シァノアクリル酸エステル、ポリアミノ酸（例、ポリ一ァ—ベンジルー L一グルタミン酸，ポリ—Lーァラニン，ポリーア一メチル—L 一グルタミン酸等)、無水マレイン酸系共重合体（例、スチレンマレイン酸共重合体等）等が用いられる。これらの中で脂肪族ポリエステル、ポリ _ —シァノアクリル酸エステルが好ましい。さらに、脂肪族ポリエステルが特に好ましい。脂肪族ポリエステルの中でひ—ヒドロキシモノカルボン酸類 (例、ダリコール酸、乳酸等）、 α—ヒドロキシジカルボン酸類（例、リンゴ酸）、ひーヒドロキシトリカルボン酸（例、クェン酸）等のひ—ヒドロキシカルボン酸類の 1種以上から合成され、遊離の末端力ルポキシル基を有する重合体、共重合体、またはこれらの混合物；ポリ（ひ—シァノアクリル酸エステル）；ポリアミノ酸（例、ポリ（ァ一ベンジル— L—グルタミン酸）等）；無水マレイン酸系共重合体（例、スチレン一マレイン酸共重合体等）などが用いられる。

モノマーの結合様式としては、ランダム、ブロック、グラフトのいずれでもよレ^ また、前記《—ヒドロキシモノカルボン酸類、ーヒドロキシジカルボン酸類、 α—ヒドロキシトリカルボン酸類が分子内に光学活性中心を有する場合、 D 一、 L一、 DL—体のいずれを用いてもよい。これらの中でも、乳酸ーグリコール酸重合体（以下、ポリ（ラクチドー c o—グリコリド）、ポリ（乳酸— C O— グリコール酸）あるいは乳酸ーグリコール酸共重合体と称することもあり、特に明示しない限り、乳酸、グリコール酸のホモポリマ一（重合体）及びコポリマー (共重合体）を総称する。また乳酸ホモポリマーは乳酸重合体、ポリ乳酸、ポリラクチドなどと、またグリコール酸ホモポリマーはグリコ一ル酸重合体、ポリグリコール酸、ポリグリコリドなどと称される場合がある）、ポリ（α—シァノアクリル酸エステル）などが好ましい。さらに好ましくは、乳酸一グリコ一ル酸重合体であり、より好ましくは、遊離の末端力ルポキシル基を有する乳酸ーグリコ —ル酸重合体である。

生体内分解性ポリマーは塩であってもよい。塩としては、例えば、無機塩基 (例、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属、カルシウム、マグネシウム等のアル力リ土類金属など）や有機塩基（例、トリェチルァミン等の有機アミン類、アルギニン等の塩基性アミノ酸類等）などとの塩、または遷移金属（例，亜鉛，鉄，銅など）との塩および錯塩などが用いられる。

生体内分解性ポリマ一として乳酸ーグリコール酸重合体を用いる場合、その組成比（モル％) は 100Ζ0〜約 40/60が好ましく、 100/0〜約 50Ζ 50がより好ましい。また、 2力月以上にわたって生理活性物質を放出する長期徐放型マイクロカプセルの場合、組成比が 100 Ζ 0である乳酸重合体も好ましく用いられる。 '

該「乳酸—グリコール酸重合体」の最小繰り返し単位の一つである乳酸の光学異性体比は、 D—体/ L—体（モル Ζモル％) が約 75Ζ25〜約 25/75の範囲のものが好ましい。この D—体 ZL—体（モル/モル％) は、特に約 60Ζ 40〜約 30/70の範囲のものが汎用される。

該「乳酸ーグリコール酸重合体」の重量平均分子量は、通常、約 3000〜約 100000、好ましくは約 5000〜約 50000、より好ましくは約 800 0〜約 30000、さにら好ましくは約 17000〜約 30000のものが用いられる。

また、分散度（重量平均分子量 Ζ数平均分子量）は、通常約 1. 1〜約 4. 0 が好ましく、さらには約 1. 2〜約 3. 5が好ましい。なお、本明細書で用いられる重量平均分子量および分散度は、ゲル浸透クロマトグラフィー（GPC) で測定した値を意味する。重量平均分子量及び各重合体含有量は、単分散ポリスチレンを基準物質としてゲルパーミエーシヨンクロマトグラフィー（GPC) で測定したポリスチレン換算の重量平均分子量及びそれらから算出した各重合体含有量である。また、測定は全て高速 GPC装置（東ソ一 (株)製； HLC— 8120 GPC)で行い、カラムは SuperH4000X 2及び SuperH2000(何れも東ソー（株)製）を使用し、移動相としてテトラヒドロフランを流速 0.6mL/minで使用した。尚、検出方法は示差屈折率によるものである。

該「乳酸ーグリコール酸重合体」の遊離の末端カルボキシル基量は、重合体の単位質量（グラム）あたり通常約 20〜約 1000 mol (マイクロモル）が好ましく、さらには約 40〜約 300 mol (マイクロモル）が特に好ましい。

本発明において、「生理活性物質」に対する生体内分解性ポリマーの遊離の末端力ルポキシル基量は約 0.1〜約 5倍モルが好ましく、より好ましくは約 0.2〜約 4倍モル、さらに好ましくは約 0.3〜約 3.5倍モルである。

前記の遊離の末端力ルポキシル基量とはラベル化法により求めたもの（以下、「ラベル化法による力ルポキシル基量」と称する）をいう。具体的にポリ乳酸の場合について述べると、ポリ乳酸 Wmgを 5N塩酸 Zァセトニトリル (v/v = 4Z96) 混液 2m 1に溶解し、 0. 01M o—二トロフエニルヒドラジン塩酸塩（ON PH) 溶液（5 N塩酸 Zァセトニトリル Zエタノール =1. 02/ 35/15) 2mlと 0. 15M 1ーェチルー 3— (3—ジメチルァミノプロピル） —カルポジイミド塩酸塩溶液（ピリジンエタノール =4 vZ96 V) 2 m 1を加えて 4 で 30分反応させた後溶媒を留去する。残滓を水洗（4回）した後、ァセトニトリル 2mlで溶解し、 0. 5 mo 1 / 1のエタノール性水酸化カリウム溶液 lm 1を加えて 60°Cで 30分反応させる。反応液を 1. 5 N水酸化ナトリゥム水溶液で希釈して Ym 1とし、 1. 5 N水酸化ナトリゥム水溶液を対象として 544 nm吸光度 A (/cm) を測定する。一方、 DL—乳酸水溶 ' 液を基準物質として、その遊離力ルポキシル基量 Cmo 1ZLをアルカリ滴定で求め、また ONPHラベル化法で DL—乳酸ヒドラジドとしたときの 54 n m吸光度を B (/cm) とするとき、重合体の単位質量（グラム）あたりの遊離の末端カルボキシル基のモル量は以下の数式で求められる。

[COOH] (mo 1 /g) = (AYC) / (WB)

また、該「カルボキシル基量」は生体内分解性ポリマーをトルエン一アセトン —メタノール混合溶媒に溶解し、フエノールフタレインを指示薬としてこの溶液をアルコール性水酸化力リゥ厶溶液でカルボキシル基を滴定して求めることもできる（以下、この方法によって求めた値を「アルカリ滴定法による力ルポキシル基量」と称する)が、滴定中にポリエステル主鎖の加水分解反応を競合する結果、滴定終点が不明確になる可能性があり前記ラベル化法で定量するのが望ましい。該「乳酸ーグリコール酸重合体」は、例えば、乳酸とグリコール酸からの無触媒脱水重縮合（特開昭 61—28521号）あるいはラクチドとグリコリド等の環状ジエステル化合物からの触媒を用いた開環重合（Encyclopedic Handbook of Biomaterials and Bioengineering Part A: Materials, Volume 2, Marcel Dekker, Inc. 1995 年）） ) で製造できる。前記の公知の開環重合方法によって得られる重合体は、末端に遊離のカルボキシル基を有しているとは限らないが、例えば、 EP-A- 0839525号に記載の加水分解反応に付すことにより、単位質量当たりにある程度の力ルポキシル基量を有する重合体に改変することができ、これを用いることもできる。

前記の「遊離の末端カルボキシル基を有する乳酸ーグリコ一ル酸重合体」は公知の製造法（例えば無触媒脱水重縮合法、特開昭 61— 28521号公報参照）と同様の方法またはそれに準じた方法により製造できる。

なかでも、本発明に用いられる高分子重合物としては乳酸重合体（以下、本発明の乳酸重合体と略記する場合がある）が好ましく、例えば、乳酸のみから成る重合体、或いは乳酸とその他のモノマー（例えばグリコール酸等）との共重合体を含み、特に限定されないが、通常重量平均分子量 5000以下の重合体含有量が約 10重量％以下、好ましくは重量平均分子量 5000以下の重合体含有量が約 5重量％以下のものが用いられる。

また、本発明の乳酸重合体の重量平均分子量は通常 15000〜 50000、好ましくは 15000〜 40000、より好ましくは 17000〜 30000である。

本発明の乳酸重合体の原料となる高分子量の乳酸重合体は、市販品でも公知の方法で重合したものでもよく、その重量平均分子量は通常 1 5 0 0 0〜 5 0 0 0 0 0、好ましくは 2 0 0 0 0〜 1 0 0 0 0 0である。公知の重合方法としては、例えば、乳酸及び要すればグリコール酸とを縮合重合させる方法、例えばラクチドを、要すればグリコリドと共に、例えばジェチル亜鉛、トリェチルアルミニゥム、ォクチル酸スズ等のルイス酸又は金属塩等の触媒を用いて開環重合させる方法、前記方法に更にカルボキシル基が保護されたヒドロキシカルボン酸誘導体を存在させてラクチドを開環重合させる方法 (例えば特許国際公開 TO00/35990等)、その他ラクチドに加熱下で触媒を添加して開環重合させる方法（例えば J . Med. Chei, 16， (1973)等）、例えばラクチドとグリコリドとを共重合させる方法等が用いられる。

重合形態としては、ラクチド等を溶融させて重合反応に付すバルク重合、ラクチド等を適当な溶媒に溶解して重合反応に付す溶液重合が用いられるが、中でも溶液重合によって得られる重合体を本発明の乳酸重合体の原料として使用することが工業生産上好ましい。

溶液重合においてラクチドを溶解する溶媒としては、例えばベンゼン，トルェン，キシレン等の芳香族炭化水素類、デカリン、ジメチルホルムアミド等が用いられる。

前記の如くして得られた高分子量の乳酸重合体を加水分解するには、自体公知の加水分解方法が用いられ、例えば該高分子量の乳酸重合体を適当な溶媒に溶解した後、水及び要すれば酸を加えて反応させればよい。

高分子量の乳酸重合体を溶解する溶媒としては、具体的には、例えばクロロホルム，ジクロロメタン等のハロゲン化炭化水素、例えばトルエン， o—キシレン， m—キシレン， p—キシレン等の芳香族炭化水素、例えばテトラヒドロフラン等の環状エーテル、アセトン、 N, N—ジメチルホルムアミド等が用いられる。尚、高分子量の乳酸重合体の重合時に、高分子量の乳酸重合体の加水分解で使用できる溶媒を用いた場合には、重合した高分子量の乳酸重合体を単離せず、重合及び加水分解の操作を連続して行うことができる。高分子量乳酸重合体を溶解する溶媒の使用量は、溶質である乳酸重合体に対して通常約 0. 1〜約 100倍、好ましくは約 1〜約 10倍である。

添加する水の量は、高分子量乳酸重合体に対して通常約 0. 001〜約1倍重量、好ましくは約 0. 01〜約0. 1倍重量である。

必要に応じて添加する酸としては、例えば塩酸，硫酸，硝酸等の無機酸、例えば乳酸，酢酸，トリフルォロ酢酸等の有機酸等が挙げられ、好ましくはトリフルォロ酢酸が用いられる。

添加する酸の量は、高分子量乳酸重合体に対して通常 0〜約 10倍重量、好ましくは約 0. 1〜約 1倍重量である

加水分解反応温度は、通常約 0〜約 150 °C、好ましくは約 20.〜約 80でである。

加水分解反応時間は、高分子量の乳酸重合体の重量平均分子量及び反応温度によっても異なり、通常約 10分〜約 100時間、好ましくは約 1〜約 20時間である。

加水分解処理の終了時期は、加水分解生成物の重量平均分子量に基づいて判断する。即ち、加水分解処理中に適宜サンプリングを行い、サンプル中の加水分解生成物の重量平均分子量をゲルパーミエーションクロマトグラフィー（GPC) により測定し、当該分子量が約 15000〜約 50000、好ましくは約 150 00〜約 40000、より好ましくは約 17000〜約 30000となっていることが確認できたら加水分解処理を停止させる。

前記の如く高分子量の乳酸重合体を加水分解する操作に付すことにより得られる、加水分解生成物を含有する溶液から、そこに含有される目的の乳酸重合体を析出させる方法としては、該加水分解生成物含有溶液を、そこに含有される目的の乳酸重合体を析出させ得る溶媒と接触させる方法等が用いられる。

加水分解生成物含有溶液の好ましい態様としては、例えばクロ口ホルム，ジクロロメタン等のハロゲン化炭化水素、例えばトルエン， o—キシレン, m—キシレン， p—キシレン等の芳香族炭化水素、例えばテトラヒドロフラン等の環状ェ一テル、アセトン、 N, N—ジメチルホルムアミド等ジクロロメタンゃキシレン等の高分子量乳酸重合体を溶解する溶媒に、重量平均分子量 15000〜 500 0 0、好ましくは 1 5 0 0 0〜 4 0 0 0 0、より好ましくは 1 7 0 0 0〜 3 0 0 0 0の乳酸重合体が約 1 0〜約 5 O w t %溶解しているもの等が用いられる。加水分解生成物含有溶液中に含有される目的の乳酸重合体を析出させ得る溶媒としては、例えばメタノール，エタノール等のアルコール類、例えばイソプロピルエーテル等の鎖状エーテル類、例えばへキサン等の脂肪族炭化水素、水等が用いられる。

目的とする乳酸重合体を析出させ得る溶媒の使用量は、加水分解生成物含有溶液の溶媒に対して通常約 0 . 1〜約 1 0 0倍重量、好ましくは約 1〜約 1 0倍重量である。

この様な各溶媒の種類と使用量の組み合わせの好ましい具体例としては、例えば溶質の約 1〜約 5倍重量のジクロロメタンを溶媒として用いられている加水分解生成物含有溶液に、溶解度を低下させる溶媒としてィソプロピルエーテルを、該ジク口ロメタンに対して約 2〜約 1 0倍重量使用する態様等が用いられる。目的の乳酸重合体溶質を析出させ得る溶媒を加水分解生成物含有溶液に接触させる際の、溶媒の温度は、通常約一 2 0〜約 6 0 ° (、好ましくは約 0〜約 4 0 °C であり、加水分解生成物含有溶液の温度は通常約 0〜約 4 0 °C、好ましくは約 1 0〜約 3 0 である。

溶媒と加水分解生成物含有溶液とを接触させる方法としては、加水分解生成物含有溶液を溶媒中に一度に加える方法、加水分解生成物含有溶液を溶媒中に滴下する方法、溶媒を加水分解生成物含有溶液中に一度に加える方法、或いは溶媒を加水分解生成物含有溶液中に滴下する方法等が用いられる。

前記のようにして得られた本発明の乳酸重合体は、末端力ルポキシル基量が徐放性製剤用基材として好ましい範囲にあるため、徐放性製剤用基材として好ましいものである。さらに、生体適合性の高分子重合物としては、例えば、ポリスチレン、ポリメタアクリル酸、アクリル酸とメタアクリル酸との共重合体、ポリアミノ酸、デキストランステアレート、ェチルセルロース、ァセチルセルロース、ニトロセルロース、無水マレイン酸系共重合物、エチレンピニルアセテート系共重合物、ポリビニルアセテート、ポリアクリルアミドなどが用いられる。

これらの高分子重合物は 1種でもよく、また 2種以上の共重合物あるいは単なる混合物でもよく、またその塩でもよい。

以下に、本発明の生理活性物質またはその塩および本発明の乳酸重合体またはその塩を含有する徐放性組成物（例えば、マイクロカプセル）の製造法を例示する以下の製造工程中、必要に応じて、以下のものを自体公知の方法により添加してもよい。

( 1 ) 薬物保持剤

アルブミン、ゼラチン、クェン酸、サリチル酸、エチレンジァミン四酢酸ナトリウム、デキストリン、亜硫酸水素ナトリウム、ポリエチレングリコ一ルなどのポリオ一ル化合物、寒天、アルギン酸、ポリビニルアルコール、塩基性アミノ酸など。

( 2 ) 生理活性物質またはその塩の安定性、溶解性を保っための p H調整剤炭酸、酢酸、シユウ酸、クェン酸、リン酸、塩酸、水酸化ナトリウム、アルギニン、リジンおよびそれらの塩など。

( 3 ) 生理活性物質またはその塩の安定化剤

アルブミン、ゼラチン、クェン酸、エチレンジァミン四酢酸ナトリウム、デキストリン、亜硫酸水素ナトリウム、ポリエチレングリコールなどのポリオール化合物など。

( 4 ) 保存剤

パラォキシ安息香酸エステル類（メチルパラベン、プロピルパラベンなど）、ベンジルアルコール、クロロブタノ一ル、チメロサールなど

( I ) WZO/W法

本方法においては、まず高分子重合物である生体内分解性ポリマーの溶解液 (好ましくは有機溶媒溶液であり、より好ましくは水難溶性の有機溶媒である）を作製する。本発明の徐放性組成物（微粒子（マイクロパーティクル）の形態であることが好ましく、より好ましくはマイクロスフェアあるいはマイクロカプセルである）の製造の際に使用する溶解液は水難溶性の有機溶媒であり、沸点が約 1 2 o :以下であることが好ましい。

該有機溶媒としては、例えば、ハロゲン化炭化水素（例、ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロェタン、トリクロ口エタン、四塩化炭素等）、エーテル類 (例、ェチルエーテル、イソプロピルエーテル等)、脂肪酸エステル (例、酢酸ェチル、酢酸ブチル等)、芳香族炭化水素（例、ベンゼン、トルエン、キシレン等)、アルコール類（例えば、エタノール、メタノール等)、ァセトニトリルなどが用いられる。なかでもハロゲン化炭化水素が好ましぐ特にジクロロメタンが好適である。また、これらは適宜の割合で混合して用いてもよい。その場合は、ハロゲン化炭化水素とアルコール類との混液が好ましく、特にジクロロメタンとエタノールとの混液が好適である。

生体内分解性ポリマ一の溶解液中の濃度は、生体内分解性ポリマーの分子量、溶解液の種類によって異なるが、例えば、ジクロロメタンを溶解液として用いた場合、一般的には約 0 . 5〜約 7 0重量％、より好ましくは約 1〜約 6 0重量％、特に好ましくは約 2〜約 5 0重量％から選ばれる。

また、ジクロロメタンとの混有機溶媒としてエタノ一ルを用いた場合の両者の比率は，一般的には約 0 . 0 1〜約 5 0 % (v/v)、より好ましくは約 0 . 0 5〜約 4 0 % (v/v)、特に好ましくは約 0 . 1〜約 3 0 % (v/v)から選ばれる。

次に生理活性物質は、既に記載したように当該生理活性物質の約 1. 5倍モル以上の酸または塩基を含む水溶液あるいは約 0. 1〜約 20重量％の濃度の酸または塩基の水溶液に溶解する。生理活性物質は適当な酸あるいは塩基との塩として溶解する場合もあり、さらにはその水溶液が水、水とアルコール類（例、メタノール、エタノール等）などとの混液を溶媒として用いることもある。

生理活性物質またはその塩の添加濃度は一般的には約 0 . 0 0 1 m g/m 1〜約 1 0 g /m 1、より好ましくは約 0 . l m g /m 1〜約 5 g /m 1で更に好ましくは約 1 O m g /m 1〜約 3 gZm 1である。

溶解補助剤、安定化剤として公知のものを用いてもよい。生理活性物質や添加剤の溶解あるいは分散には活性が失われない程度に加熱、振とう、撹拌などを行つてもよく、そうして得られた水溶液を内水相と称する。

前記により得られた内水相と油相とをホモジナイザーまたは超音波等の公知の方法で乳化し、 W/0エマルシヨンを形成させる。

ここで混合する生体内分解性ポリマーと生理活性物質の混合比率として、生体内分解性ポリマ一の単位質量（グラム）あたりの末端力ルポキシル基量が生理活性物質に対して通常約 0.01〜約 10倍モル、好ましくは約 0.1〜約 5倍モルである。

混合する油相の重量は内水相の重量に対し、約 1〜約 1000倍、好ましくは約 2〜約 100倍、より好ましくは約 3〜約 30倍である。

得られた W/0エマルシヨンの粘度範囲は一般的には約 12〜約 25 °Cで、約 1 0〜約 10, O O O c pで、好ましくは約 100〜約 5， 000 c pであり、より好ましくは約 200〜約 3, O O O c pであり、さらに好ましくは約 300〜約 2， 000 c pである。

本発明方法を工業的に実施する場合、 W/0エマルシヨンの粘度範囲は一般的には約 12〜約 25°Cで、約 3， 000 c p以下が好ましく、より好ましくは約 2， O O O c p以下であり、さらに好ましくは、約 300〜約 2， 000 c pである。次いで、得られた W/0エマルシヨンを水相中に加え、 W (内水相） /0 (油相） /W

(外水相）エマルシヨンを形成させた後、油相中の溶媒を揮散ないしは外水相中に拡散させ、マイクロカプセルを調製する。この際の外水相重量は一般的には油相重量の約 1倍〜約 10, 000倍、より好ましくは約 5倍〜約 5， 000倍、さらに好ましくは約 10倍〜約 2， 000倍、特に好ましくは約 20倍〜約 50 0倍から選ばれる。

前記の外水相中には乳化剤を加えてもよい。該乳化剤は、一般に安定な W/0/W エマルシヨンを形成できるものであればいずれでもよい。具体的には、例えば、ァニオン性界面活性剤（ォレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウムなど)、非イオン性界面活性剤（ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル〔ツイ一ン（Tween)80、ツイーン（Tween) 60、アトラスパウダ一社〕、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体〔HC0— 60、 HC0-50, 日光ケミカルズ〕など）、ポリビニルピロリドン、ボリビニルアルコール、カルボキシメチルセル口 —ス、レシチン、ゼラチン、ヒアルロン酸など力用いられる。これらの中の 1種類か、いくつかを組み合わせて使用してもよい。使用の際の濃度は、好ましくは約 0. 01〜約 10重量％の範囲で、さらに好ましくは約 0. 05〜約5重量％の範囲で用いられる。

前記の外水相中には浸透圧調節剤を加えてもよい。該浸透圧調節剤としては、水溶液とした場合に浸透圧を示すものであればよい。

該浸透圧調節剤としては、例えば、多価アルコール類、一価アルコール類、単糖類、二糖類、オリゴ糖およびアミノ酸類またはそれらの誘導体などが用いられる。

前記の多価アルコール類としては、例えば、グリセリン等の三価アルコール類、ァラビトール，キシリトール，アド二トール等の五価アルコール類、マンニトール，ソルビトール，ズルシトール等の六価アルコール類などが用いられる。なかでも、六価アルコール類が好ましく、特にマンニトールが好適である。

前記の一価アルコール類としては、例えば、メタノール、エタノール、イソプ口ピルアルコールなどが挙げられ、このうちエタノールが好ましい。

前記の単糖類としては、例えば、ァラビノース，キシロース，リポース， 2— デォキシリポース等の五炭糖類、ブドウ糖，果糖，ガラクトース，マンオース，ソルポース，ラムノース，フコース等の六炭糖類が用いられ、このうち六炭糖類が好ましい。

' 前記のオリゴ糖としては、例えば、マルトトリオ一ス，ラフイノース糖等の三糖類、スタキオース等の四糖類などが用いられ、このうち三糖類が好ましい。前記の単糖類、二糖類およびオリゴ糖の誘導体としては、例えば、ダルコサミン、ガラクトサミン、グルクロン酸、ガラクッロン酸などが用いられる。

前記のアミノ酸類としては、 L—体のものであればいずれも用いることができ、例えば、グリシン、ロイシン、アルギニンなどが用いられる。このうち L—アルギニンが好ましい。

これらの浸透圧調節剤は単独で使用しても、混合して使用してもよい。これらの浸透圧調節剤は、外水相の浸透圧が生理食塩水の浸透圧の約 1 / 5 0〜約 5倍、好ましくは約 1ノ2 5〜約 3倍となる濃度で用いられる。浸透圧調節剤としてマンニトールを用いた場合、約 0 . 5 %〜約 1 . 5 %の濃度が好ましい。

有機溶媒を除去する方法としては、自体公知の方法あるいはそれに準じる方法が用いられる。例えば、プロペラ型撹挣機またはマグネチックスターラーなどで撹拌しながら常圧もしくは徐々に減圧にして有機溶媒を蒸発させる方法、ロータリーェヴアポレ一夕一などを用いて真空度を調節しながら有機溶媒を蒸発させる方法などが用いられる。

このようにして得られたマイクロ力プセルは遠心分離または濾過して分取した後、マイクロカプセルの表面に付着している遊離の生理活性物質、乳化剤、浸透圧調節剤などを蒸留水で数回繰り返し洗浄し、再び蒸留水などに分散して凍結乾燥する。

製造工程中、粒子同士の凝集を防ぐために凝集防止剤を加えてもよい。該凝集防止剤としては、例えば、マンニトール，ラク卜ース，ブドウ糖，デンプン類（例、コーンスターチ等）などの水溶性多糖、グリシンなどのアミノ酸、フイブリン，コラーゲンなどのタンパク質などが用いられる。なかでも、マンニ 1 ^一ルが好適 ·である。

マンニトール等の凝集防止剤の添加量は、マイクロカプセル全体に対して、通常 0〜約 2 4重量％である。

また、凍結乾燥後、必要であれば、減圧下マイクロカプセル同士が融着しない条件下で加温してマイクロカプセル中の水分および有機溶媒の除去を行ってもよい。好ましくは、毎分約 1 0〜約 2 0 °Cの昇温速度の条件下、示差走査熱量計で求めたマイクロカプセルの中間点ガラス転移温度付近あるいは若干高い温度で加温ずる。より好ましくはマイクロカプセルの中間点ガラス転移温度付近あるいはこれより約 3 0 °C高い温度範囲内で加温する。とりわけ，生体内分解性ポリマーとして乳酸-グリコール酸重合体を用いる場合には好ましくはマイクロカプセルの中間点ガラス転移温度付近から中間点ガラス転移温度より約 1 0で高い温度範囲，さらに好ましくは、中間点ガラス転移温度付近から中間点ガラス転移温度より約 5 °C高い温度範囲で加温する。

加温時間はマイクロ力プセルの量などによつて異なるものの、一般的にはマイクロカプセル自体が所定の温度に達した後、約 1 2時間〜約 1 6 8時間、好ましくは約 2 4時間〜約 1 2 0時間、特に好ましくは約 4 8時間〜約 9 6時間である。加温方法は、マイク口カプセルの集合が均一に加温できる方法であれば特に限定されない。

該加温乾燥方法としては、例えば、恒温槽、流動槽、移動槽またはキルン中で加温乾燥する方法、マイクロ波で加温乾燥する方法などが用いられる。なかでも恒温槽中で加温乾燥する方法が好ましい。

(I I) 相分離法

本法によってマイクロカプセルを製造する場合には，前記（I ) の水中乾燥法に記載した生理活性物質及び本発明の生体内分解性ポリマーから成る組成物を含む W/0乳化液にコアセルべーション剤を撹拌下徐々に加えてマイク口カプセルを析出，固化させる。該コアセルべ一シヨン剤は油相体積の約 0 . 0 1〜約1， 0 0 0倍、好ましくは約 0 . 0 5〜約 5 0 0倍、特に好ましくは約 0 . 1〜約 2 0 0倍から選ばれる。

コアセルべーシヨン剤としては、有機溶媒と混和する高分子系，鉱物油系または植物油系の化合物等で本発明の生体内分解性ポリマーを溶解しないものであれば特に限定はされない。具体的には、例えば、シリコン油，ゴマ油，大豆油，コーン油，綿実油，ココナッツ油，アマ二油，鉱物油， n-へキサン， n-ヘプタンなどが用いられる。これらは 2種類以上混合して使用してもよい。

このようにして得られたマイクロカプセルを分取した後、ヘプタン等で繰り返し洗浄して生理活性物質及び本発明の生体内分解性ポリマーからなる組成物以外のコアセルべーシヨン剤等を除去し、減圧乾燥する。もしくは、前記（I ) ( i ) の水中乾燥法で記載と同様の方法で洗浄を行った後に凍結乾燥、さらには加温乾燥する。

(I I I) 噴霧乾燥法

本法によってマイクロカプセルを製造する場合には，前記（I ) の水中乾燥法に記載した生理活性物質及び本発明の生体内分解性ポリマーから成る組成物を含有する W/0乳化液をノズルを用いてスプレードライヤー（噴霧乾燥器）の乾燥室内に噴霧し、極めて短時間内に微粒化液滴内の有機溶媒を揮発させ、マイクロ力プセルを調製する。該ノズルとしては、例えば、二流体ノズル型,圧力ノズル型，回転ディスク型等がある。この後、必要であれば、前記（I ) の水中乾燥法で記載と同様の方法で洗浄を行った後に凍結乾燥、さらには加温乾燥してもよい。上述のマイクロカプセル以外の剤形としてマイクロカプセルの製造法（I ) の水中乾燥法に記載した生理活性物質及び本発明の生体内分解性ポリマーから成る組成物を含む有機溶媒溶液または分散液を、例えば、ロータリーェヴアポレー夕 —などを用いて真空度を調節しながら有機溶媒および水を蒸発させて乾固した後、ジェットミルなどで粉碎して微粒子 (マイクロパーティクル) としてもよい。さらには、粉碎した微粒子をマイクロカプセルの製造法（I ) の水中乾燥法で記載と同様の方法で洗浄を行った後に凍結乾燥、さらには加温乾燥してもよい。本発明において、生理活性物質に対して約 1. 5〜約 5倍モルの酸または塩基を使用することが好ましい。

生理活性物質が一般式

5 - 0X0 - Pro - Hi s-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z

〔式中、各記号は前記と同意義を示す。〕で表される化合物である場合、当該物質に対して約 1. 5〜約 5倍モルの酸を使用することが好ましい。当該酸としては有機酸が好ましく、特に酢酸などが用いられる。

生体内分解性ポリマーとしては乳酸一ダリコ一ル酸重合体が好ましく、その組成モル比は 1 0 0対 0〜約 5 0対 5 0のものが好ましく、特に 1 0 0対 0の重合体も好適に用いられ、重量平均分子量 5 0 0 0以下の重合体含有量が約 5重量％以下である、重量平均分子量 1 5 0 0 0〜 5 0 0 0 0の乳酸重合体が好ましい。生体内分解性ポリマーの溶解液としては、水難溶性の有機溶媒が好ましく、特にジクロロメタンが好ましい。

本発明において、 1 ) 生理活性物質と酸または塩基を含む水溶液と、 2 ) 生体内分解性ポリマーの溶解液とを混合した混合液は均一に混合されていることが好ましく、この混合液はエマルシヨンであることが好ましい。

さらに好ましくはエマルションが W/0型であり、そのエマルシ aンサイズが微細なものである。

混合液の乾燥は水中乾燥法で行うことが好ましく、特に水中乾燥の外水相に浸透圧調節剤を用いることが好ましい。

浸透圧調節剤としてはマンニトールが好ましい。

本発明の徐放性組成物は、そのまままたはこれらを原料物質として種々の剤形に製剤化し、筋肉内、皮下、臓器などへの注射剤または埋め込み剤、鼻腔、直腸、子宮などへの経粘膜剤、経口剤（例、カプセル剤（例、硬カプセル剤、軟カプセル剤等)、顆粒剤、散剤等の固形製剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤等の液剤等）な' どとして投与することができる。

例えば、本発明の徐放性組成物を注射剤とするには、これらを分散剤（例、ッィ一ン（Tween) 80, HC0_ 60等の界面活性剤、ヒアルロン酸ナトリウム，力ルポキシメチルセルロース，アルギン酸ナトリウム等の多糖類など）、保存剤（例、メチルパラベン、プロピルパラベンなど）、等張化剤（例、塩化ナトリウム，マンニトール，ソルビトール，ブドウ糖，プロリンなど）等の分散媒と共に水性懸濁剤とするか、ゴマ油、コーン油などの植物油等の分散媒と共に分散して油性懸濁剤として実際に使用できる徐放性注射剤とすることができる。

本発明の徐放性組成物の粒子径は、懸濁注射剤として使用する場合には、その分散度、通針性を満足する範囲であればよく、例えば、平均粒子径として約 0 . 1〜約 3 0 0 m、好ましくは約 0 .. 5〜約 1 5 0 mの範囲、さらに好ましくは約 1から約 1 0 0 mの範囲である。

本発明の徐放性組成物を無菌製剤にするには、製造全工程を無菌にする方法、ガンマ線で滅菌する方法、防腐剤を添加する方法等が用いられるが、特に限定されない。

さらに、前記の徐放性組成物の徐放性注射剤は、懸濁剤として、前記の組成以外に、賦形剤（たとえば、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、ブドウ糖など）を加えて、再分散した後、凍結乾燥もしくは噴霧乾燥して固型化し、用時に、注射用蒸留水あるいは適当な分散媒を加えると、より安定した徐放性注射剤が得られる。，

徐放性組成物の徐放性注射剤にマンニトール等の賦形剤を添加する場合、賦形剤の含有量は注射剤全体に対して、 0〜約 5 0重量％、好ましくは約 1〜約 2 0 重量％である。

徐放性組成物の徐放性注射剤を用時、注射用蒸留水あるいは適当な分散媒に分散させる場合、徐放性組成物の含有量は分散媒と徐放性組成物の総量に対して、約 1〜約 8 0重量％、好ましくは約 1 0〜約 6 0重量％である。

本発明の徐放性組成物を経口投与製剤にするには、自体公知の方法に従い、本発明の徐放性組成物を例えば賦形剤（例、乳糖、白糖、デンプンなど）、崩壊剤（例、炭酸カルシウムなど)、結合剤（例、デンプン、アラビアゴム、力ルポ W

31 キシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロースなど）または滑沢剤（例、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール 6 0 0 0など）などを添加して圧縮成形し、次いで必要により、味のマスキング，腸溶性あるいは持続性の目的のため自体公知の方法でコ一ティングすることにより経口投与製剤とすることができる。そのコーティング剤としては、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロース，ェチルセルロース，ヒドロキシメチルセルロース，ヒドロキシプロピルセルロース，ポリオキシエチレングリコール，ツイーン 8 0，ブル口ニック F 6 8 , セルロースアセテートフタレート，ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート，ヒドロキシメチルセルロースァセテ一トサクシネート，オイドラギット（ローム社製，西ドイツ，メタアクリル酸-アクリル酸共重合）および酸化チタン，ベンガラ等の色素が用いられる。本発明の徐放性組成物を経鼻投与製剤とするには、自体公知の方法に従い、本発明方法により製造された徐放性組成物を固状、半固状または液状の経鼻投与剤とすることができる。たとえば、前記固状のものとしては、該徐放性組成物をそのまま、あるいは賦形剤（例、グルコース、マンニトール、デンプン、微結晶セルロースなど）、増粘剤（例、天然ガム類、セルロース誘導体、アクリル酸重合体など）などを添加、混合して粉状の組成物とする。前記液状のものとしては、注射剤の場合とほとんど同様で、油性あるいは水性懸濁剤とする。半固状の場合は、水性または油性のゲル剤、あるいは軟膏状のものがよい。また、これらはいずれも、 p H調整剤（例、炭酸、リン酸、クェン酸、塩酸、水酸化ナトリウムなど）、防腐剤（例、パラォキシ安息香酸エステル類、クロロブ夕ノール、塩化べンザルコニゥムなど）などを加えてもよい。

本発明の徐放性組成物を坐剤とするには、自体公知の方法に従い、本発明方法により製造された徐放性組成物を油性または水性の固状、半固状あるいは液状の座剤とすることができる。前記組成物に用いる油性基剤としては、マイクロカブセルを溶解しないものであればよく、たとえば高級脂肪酸のグリセリド〔例、力カオ脂、ウイテプゾル類（ダイナマイトノーベル社）など〕、中級脂肪酸〔例、ミグリオール類（ダイナマイトノーベル社）など〕、あるいは植物油（例、ゴマ油、大豆油、綿実油など）などが用いられる。また、水性基剤としては、たとえばポリエチレングリコール類、プロピレングリコール、水性ゲル基剤としては、たとえば天然ガム類、セルロース誘導体、ビニール重合体、アクリル酸重合体などが用いられる。

本発明の徐放性組成物は、注射剤として用いることが好ましい。

本発明の徐放性組成物は、低毒性であるので、哺乳動物（例、ヒト、牛、豚、犬、ネコ、マウス、ラット、ゥサギ等）に対して安全な医薬などとして用いることができる。

本発明の徐放性組成物またはその徐放性組成物の投与量は、主薬である生理活性物質またはその塩の種類と含量、剤形、生理活性物質またはその塩放出の持続時間、対率疾病、対象動物などによって種々異なるが、生理活性物質またはその塩の有効量であればよい。主薬である生理活性物質またはその塩の 1回当たりの投与量としては、例えば、徐放性組成物が 6力月製剤である場合、好ましくは、成人 1人当たり約 0. 0 lmg〜約 1 OmgZk g体重の範囲，さらに好ましくは約 0. 05mg〜約 5mg/kg体重の範囲から適宜選ぶことができる。

1 回当たりの徐放性組成物の投与量は、成人 1人当たり好ましくは、約 0. 0 5mg〜約 5 OmgZk g体重の範囲、さらに好ましくは約 0. lmg〜約 30 m g Z k g体重の範囲から適宜選ぶことができる。

投与回数は、数週間に 1回、 1か月に 1回、または数か月（例、 3力月、 4力月、 6力月など）に 1回等、主薬である生理活性物質またはその塩の種類と含量、剤形、生理活性物質またはその塩放出の持続時間、対象疾病、対象動物などによつて適宜選ぶことができる。

本発明の徐放性組成物またはその徐放性組成物は、含有する生理活性物質またはその塩の種類に応じて、種々の疾患などの予防 ·治療剤として用いることができるが、例えば、生理活性物質またはその塩が LH— RH誘導体である場合には、ホルモン依存性疾患、特に性ホルモン依存性癌（例、前立腺癌、子宮癌、乳癌、下垂体腫瘍など）、前立腺肥大症、子宮内膜症、子宮筋腫、思春期早発症、月経困難症、無月経症、月経前症候群、多房性卵巣症候群等の性ホルモン依存性の疾患の予防'治療剤および避妊（もしくは、その休薬後のリバウンド効果を利用した場合には、不妊症の予防'治療）剤、アルツハイマー病や免疫不全等の疾患の予防 ·治療剤などとして用いることができる。さらに、性ホルモン非依存性であるが L H—R H感受性である良性または悪性腫瘍などの予防 ·治療剤としても用いることができる。

乳癌細胞にはホルモン感受性があり、エストロゲンにより増殖する乳癌細胞があるため、酢酸リュープロレ.リンをはじめとするホルモン療法薬剤を閉経前の術後再発予防剤として用いることは困難であると考えられていたが、前記の公知の方法またはそれに準じた方法により製造された LH-RHァゴニストまたはアン夕ゴ二スト（好ましくは、リュープロレリンまたはその塩、より好ましくは酢酸リュープロレリン）を含有してなる剤（好ましくは、リュープロレリンまたはその塩 (好ましくは酢酸リュープロレリン）を含有してなる徐放型マイクロカプセルを含有してなる剤）は、予想外にも、閉経前乳癌の術後再発予防剤または再発抑制剤として用いることができる。

前記の LH-RHァゴニストまたはアンタゴニスト（好ましくは、リュープロレリンまたはその塩、より好ましくは酢酸リュープロレリン）を含有してなる剤（好ましくは、リュープロレリンまたはその塩（好ましくは酢酸リュープロレリン）を含有してなる徐放型マイク口カプセルを含有してなる剤）を含有する徐放性組成物は、そのまま皮下、筋肉内、血管など（好ましくは皮下など）に容易に注射剤および埋め込み剤など (好ましくは注射剤など）として投与することができる。また、その他前記の種々の製剤に成形して投与することもでき、そのような製剤を製造する際の原料物質としても使用され得る。

また、前記 LH-皿ァゴニストまたはアンタゴニストを含有する徐放性組成物の投与量は、対象疾患、 LH-RHァゴニストまたはアン夕ゴニスト（好ましくは、リュ一プロレリンまたはその塩、より好ましくは酢酸リュープロレリン）の含量、剤形、 LH-RHァゴニストまたはアンタゴニスト（好ましくは、リュープロレリンまたはその塩、より好ましくは酢酸リュ一プロレリン）の持続時間、投与対象動物 [例、温血哺乳動物 (例、ヒト、.マウス、ラット、ゥサギ、ヒッジ、ブ夕、ゥシ、ゥマなど) ]により種々異なるが、該 LH-RHァゴニストまたはアンタゴニスト（好 'ましくは、リュープロレリンまたはその塩、より好ましくは酢酸リュープロレリン）の有効量であればよい。たとえば、前記温血哺乳動物に 1回あたり投与量として、約 0 . 0 l mgないし約 1 0 O mgZkg体重、好ましくは約 0 . 0 2 mgないし約 5 O mgZkg体重、さらに好ましくは約 0 . 0 5 m gないし約 2 O m g Zkg体重の範囲から適宜選ぶことができる。

また、前記 LH- RHァゴニストまたはァンタゴニストを含有する徐放性組成物を注射剤として投与する場合、成人患者（体重 6 O k gに対し）においては、一月あたり LH-RHァゴニストまたはアンタゴニスト（好ましくは、リュープロレリンまたはその塩、より好ましくは酢酸リュープロレリン）を通常約 0 . 0 1から約 5 O m g程度、好ましくは約 0 . 1から約 2 O m g程度、より好ましくは約 0 . 1から約 1 5 m g程度を皮下あるいは筋肉内に投与すればよい。

LH-RHァゴニストまたはアン夕ゴニスト（好ましくは、リュープロレリンまたはその塩、より好ましくは酢酸リュープロレリン）を含有してなる剤（好ましくは、リュープロレリンまたはその塩（好ましくは酢酸リュープロレリン）を含有してなる徐放型マイクロカプセルを含有してなる剤）の投与期間は、特に限定されないが、通常約 1〜約 5年、好ましくは約 2年である。

他の動物の場合も、体重 6 0 k g当たりに換算した量を投与することができる。また、前記の LH- RH ァゴニストまたはアン夕ゴニスト（好ましくは、式 5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C₂H₅で表されるペプチドまたはその塩（以下、単に「リユープロレリンまたはその塩」と称する場合がある） )、より好ましくは酢酸リュープロレリンは、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カブセル剤、エリキシル剤、徐放性製剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液剤、徐放性製剤（特に徐放型マイクロカプセル）などの注射剤、埋め込み剤（生体内分解性ポリマーを基材として成型されたもの、チタンなどの生体内適合性金属の筒に封入され、一定速度で活性成分を放出するもの）、生体に投与可能な有機溶媒に生体内分解性ポリマーおよび薬物を溶解あるいは分散した注射剤、または溶液、懸濁液剤などの経鼻投与製剤の形で非経口的に投与できるが、好ましくは徐放性製剤として、特に好ましくは徐放性注射剤として投与される。また、徐放性製剤が徐放型マイクロカプセルである場合、約 2力月以上にわたって LH-RHァゴニストあるいはァンタゴニストを放出する長期徐放型マイク口カプセルであることが好ましい。 W

35 リュープロレリンまたはその塩、より好ましくは酢酸リュ一プロレリンを生理学的に認められる公知の担体、香味剤、賦形剤、べヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で混和することによつて前記製剤を製造することができる。

錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えばゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セル口ースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨ィ匕剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、ァカモノ油またはチェリ一のような香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合には、前記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。注射のための無菌組成物は注射用水のようなべヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って処方することができる。注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、 D—ソルビトール、 D—マンニトール、塩化ナトリウムなど）などが用いられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール（例、ェタノール）、ポリアルコール（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤（例、ポリソルベート 8 0 (TM) 、 H C O - 5 0 ) などと併用してもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ、溶解補助剤である安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどと併用してもよい。

また、前記製剤は、例えば、緩衝剤（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液など）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニゥム、塩酸プロ力インなど）、安定剤 (例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチレングリコールなど) 、保存剤（例えば、ベンジルアルコール、フエノールなど）、酸化防止剤などと配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプル、バイアルなどの密封容器に充填される。実施例 W 200

36 以下に実施例を挙げて、本発明をさらに具体的に説明する。

実施例 1

DL—乳酸重合体（重量平均分子量 21, 900) 206. 6 gをジクロロメタン 354. 8 gで溶解した溶液を約 30°Cに温調した。この溶液 381. 5 g を量り取り、酢酸リュープロレリン 15. 8 gを 16. 6 gの酢酸水溶液（氷酢酸 0. 6 gを蒸留水 31. 75 gに溶解）に溶解して約 55でに加温した水溶液と混合し、ミニミキサー（特殊機化製）を用いて乳化し W/0乳化物を形成した（回転数約 10， 000 r pm)。次いでこの W/0乳化物を約 18°Cに冷却後、予め約 18 °Cに温調しておいた 0. 1% (w/w)ポリビニルアルコール（EG— 40、日本合成化学製） + 1 %マンニトール水溶液 25リットル中に注入し、 HOM OMI C L INE FLOW (特殊機化製）を用いて二次季 I化し W/0/W乳化物とした（夕一ビン回転数約 7, 000 r pm、循環ポンプ回転数約 2000 r p m)。この W/0/W乳化物を約 3時間水中乾燥し、 75 mの標準篩を用いて篩過し、次いで遠心機（H— 600 S, 国産遠心器製）を用いて連続的にマイクロスフエアを沈降させて捕集した（回転数約 2， 000 r pm、流量約 60 OmlZm i n)o捕集されたマイクロスフェアは少量の蒸留水に再分散し、 90； mの標準篩を用いて篩過した後、マンニトール 18. 9 gを添加し、凍結乾燥機（TR I OMASTER, 共和真空製）で凍結乾燥して粉末（マイクロマイクロスフエア末）を得た。得られたマイクロスフェアの酢酸リュ一プロレリン含量は 8.2%であり、回収率も約 75%であった。

酢酸の添加により良好に W/0エマルションを得ることができ、外水相にマンニトールを添加することにより、得られたマイクロスフェアの分散性を改善することができる。

実験例 1

DL—乳酸重合体（重量平均分子量 21, 900) 151. 3 gをジクロロメタン 259. 9 gで溶解した溶液を約 3 Ot:に温調した。この溶液 373. 7 g を量り取り、酢酸リュープロレリン 15. 5 gを 16. 2 gの酢酸水溶液（氷酢酸 0. 6 gを蒸留水 31. 7 gに溶解）に溶解して約 55 °Cに加温した水溶液と混合し、ミニミキサー（特殊機化製）を用いて乳化し W/0乳化物を形成した（回転数約 10， 000 r pm)o乳化開始 2, 5, 8分後に W/0エマルシヨンを一部回収し、粘度測定（振動粘度測定計）し、その結果を表 1に示した。

[表 1]

' 安定な W/0エマルションが得られ、乳化時間 8分ではやや粘度が高いものの、 5 分乳化でも製造上問題となるような粘度の上昇はなかった。

比較例 1

DL—乳酸重合体（重量平均分子量 21， 900) 151. l gをジクロロメタン 259. 8 gで溶解した^液を約 30°Cに温調した。この溶液 374. 6 gを量り取り、酢酸リュープロレリン 15. 5 gを 1 5. 9 gの蒸留水に溶解して約 55 °Cに加温した水溶液と混合し、ミニミキサー（特殊機化製）を用いて乳化し W/0乳化物を形成した（回転数約 10， 000 r pm)。乳化開始 2, 4分後に W/0 エマルシヨンを一部回収し、粘度測定（振動粘度測定計）し、その結果を表 2に示した。

2]

4分で W/0エマルションの粘度が上昇した。酢酸添加系で行った実験例 1と比較して、 W/0エマルションの粘度上昇が顕著であった。

実験例 2

酢酸リュープロレリン（薬物含量 97. 4 %、酢酸含量 6. 0%) 0. 206 1 gを酢酸濃度の異なる酢酸水溶液 0. 21 16 gに溶解し、 DL—乳酸重合体

(重量平均分子量 21， 900) 1. 82 gをジクロロメタン 3. 15 gで溶解した溶液を添加後、ポルテックスミキサーで約 30秒間攪拌することにより W/0 エマルシヨンを作製した。 W/0 エマルシヨンの様子を比較した。その結果を図 1 に示す。酢酸量が薬物に対して約 1. 8倍モルの場合小さなエマルシヨン粒子が形成されているようであった。 1.4倍モルでは薬物がゲル化、 1.6倍モルではややゲル化傾向が認められた。 1.8、 2.3、 2.8倍モルでは均一なエマルシヨンが得られたが、 1.8倍モルのエマルシヨンは青みがかったほぼ透明色であるのに対し、 2.3倍モル以上はやや白っぽいエマルション色であった。また約 1.7倍モルにおいても青みのある透明色を呈したことを確認した。このことから青みのある透明色を呈した 1.7〜1.8倍モル力最も微細なエマルシヨン粒子を形成したと考えられた。

実験例 3

酢酸リュープロレリン（薬物含量 97. 4%、酢酸含量 6. 0 %) 0. 2 gを酢酸濃度の異なる酢酸水溶液 0. 2116 gに溶解し、乳酸グリコール酸共重合体 (重量平均分子量 10500 ) 1. 82 gをジクロロメタン 3. 15gで溶解した溶液を添加後、ポルテックスミキサ一で約 30秒間攪拌することにより W/0ェマルシヨンを作製した。 W/0エマルシヨンの様子を比較したところ、酢酸量が薬物に対して約 1.8倍モルの場合均一なエマルション粒子が形成されているようであった。 1.3、 1.4倍モルでは油相と内水相の分離が認められた。

実験例 4

酢酸リュープロレリン（薬物含量 97. 4%、酢酸含量 6. 0%) 0. 2 gを酢酸濃度の異なる酢酸水溶液 0. 2116 gに溶解し、 DL—乳酸重合体（重量平均分子量 14500) 1. 82 gをジクロロメタン 3. 15 gで溶解した溶液を添加後、ポルテックスミキサ一で約 30秒間攪拌することにより W/0エマルションを作製した。 W/0エマルシヨンの様子を比較したところ、酢酸量が薬物に対して約 1.8倍モルの場合均一なエマルション粒子が形成されているようであった。 1.3、 1.4倍モルでは油相と内水相の分離が認められた。

実験例 5

実施例 1で得られたマイクロスフェア約 11 Omgを 0.3mlの分散媒（0. 15mgのカルポキシメチルセルロース， 0. 3mgのポリソルベート 80， 1 5mgのマンニトールを溶解した蒸留水）に分散して 7週齢雄性 SDラッ卜の背部皮下に 22 G注射針で投与した。投与から所定時間後にラットを屠殺して投与部位に残存するマイクロスフェアを取り出し、この中のペプチド Aを定量してその初期含量で除して求めた残存率を表 3に示す。

〔表 3〕残存率：ペプチド A 残存率：ペプチド A

1曰 96. 6 % 16週 44. 3%

2週 89. 8 % 20週 18. 9 %

4週 84. 1 % 26週 3. 1%

8週 73. 6 % 28週 2. 8%

12週 56. 4%

表 3から明らかなように、ペプチド Aのみを処方して製造した実施例 1のマイクロスフェアは、生理活性物質を高いトラップ効率で含むことができ、分散性も良好であり、生理活' f生物質の初期の過剰放出も抑止した。また、このマイクロスフェアは非常に長期にわたって生理活性物質を一定速度で放出している。

実験例 6

ペプチド A酢酸塩 0. Bgを 2wt%酢酸水溶液 0.65gに溶解した（ぺプチド Aに対して 1.5倍モル以上）。これにポリ乳酸（重量平均分子量 21， 000)5.4gをジクロロメタン 9.45gで溶解した溶液を添加し、手で軽く分散させた後ポリトロン（キネマティ力社製)で所定時間乳化し W/0エマルションを作製した。乳化時間を変え、 W/0エマルシヨンの粘度を測定した。その結果を図 2に示す。

同様にして、ぺプチド AO.6gを 2wt%酢酸水溶液 0.635gに溶解した（ぺプチド A に対して 1.5 倍モル未満)。これにポリ乳酸 (重量平均分子量 21, 000)5. g をジクロロメタン 9.45gで溶解した溶液を添加し、手で軽く分散させた後ポリトロン（キネマティ力社製)で所定時間乳ィ匕し W/0エマルションを作製した。

ぺプチ Aに対して 1.5倍モル未満の酢酸を使用したものは比較的短い乳化時間で W/0ェマルションの粘度が上昇することがあつたが、ぺプチド Aに対して 1.5 倍モル以上の酢酸を使用したものは W/0エマルシヨンが安定で、囪 2に示されるように短時間で粘度が上昇したりすることもなく容易に W/0エマルションを製造することができた。以上の実験結果から、薬物に対して約 1. 5倍モル以上の酢酸共存によりェマルションが安定ィ匕し、約 1. 65倍モル以上では比較的微細なエマルシヨンが得られることがわかった。 0相のポリマーとしては乳酸重合体や乳酸グリコール酸重合体で確認できており、最終製剤の製造性も改善できた。産業上の利用可能性

本発明の徐放性組成物の製造方法により、 W/0エマルションを安定に形成させ、製造中の薬物リークを抑制することができ、徐放性組成物の製造性が向上し、また薬物を高含量で取り込め、安定した薬物放出をする徐放性組成物を得ることが可能となる。さらに本発明方法を用いて製造された徐放性組成物は薬物を高含量で保持し、安定した薬物の放出特性を示し、医薬品として有用である。 ' 本発明方法により、生理活性物質を含む水溶液と生体内分解性ポリマーの溶解液の混合液を安定化することができ、通常条件においてその混合液の粘度を 3 0 0 0 c p以下にすることができる。本発明は、日本で出願された特願 2 0 0 2 - 1 8 5 3 5 2を基礎としており、その内容は本明細書に総て包含されるものである。

Claims

請求の範囲

1 . 生理活性物質および当該生理活性物質の約 1. 5倍モル以上の酸または塩基を含む水溶液と生体内分解性ポリマ一の溶解液とを混合し、次いで当該混合液を乾燥する徐放性組成物の製造方法。

2 . 水溶液が、生理活性物質と酸または塩基との塩を用いて得られる水溶液である請求項 1記載の方法。

3 . 徐放性組成物における生理活性物質の重量比が約 0 . 0 0 1〜約 5 0重量％である請求項 1記載の方法。

4. 生理活性物質の約 1. 5倍モル以上の酸または塩基を含有せしめることを特徴とする、生理活性物質を含む水溶液と生体内分解性ポリマーの溶解液との混合液の安定化方法。

5 . 生理活性物質の約 1. 5倍モル以上の酸または塩基を含有せしめることを特徴とする、生理活性物質を含む水溶液と生体内分解性ポリマーの溶解液との混合液の粘度を約 3 0 0 0 c p以下にする方法。

6 .生理活性物質が生理活性べプチドである請求項 1、 4または 5項記載の方法。

7 . 生理活性べプチドが LH- RH誘導体である請求項 6記載の方法。

8 . LH-RH誘導体が一般式

5 - 0X0 - Pro - Hi s-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z

〔式中、 Yは DLeu、 DAI , DT卬、 DSer (tBu) , D2Nalまたは DHis (ImBzl)を示し、 Z は NH- C₂H₅または Gly- NH₂を示す。〕で表される化合物である請求項 7記載の方法。

9 . 生理活性物質に対する酸または塩基の量が約 1 . 5〜約 5倍モルである請求項 1、 4または 5項記載の方法。

1 0 .生理活性物質に対する酸または塩基の量が約 1. 6 5〜約 3倍モルである請求項 1、 4または 5項記載の方法。

1 1 . 酸が有機酸である請求項 1、 4または 5項記載の方法。

1 . 有機酸が脂肪酸である請求項 1 1記載の方法。

1 3 . 脂肪酸が酢酸である請求項 1 2記載の方法。

1 4.生体内分解性ポリマーが α—ヒドロキシカルボン酸重合体である請求項 1、 4または 5項記載の方法。

15. α—ヒドロキシカルボン酸重合体が乳酸ーグリコール酸重合体である請求項 14記載の方法。

16. 乳酸ーグリコール酸重合体の乳酸とグリコール酸の組成モル比が 100対 0〜50対 50である請求項 15記載の方法。

17. 乳酸ーグリコ一ル酸重合体の乳酸とグリコール酸の組成モル比が 100対 0である請求項 16記載の方法。

18. 乳酸—ダリコール酸重合体の重量平均分子量が 5000〜 50000である請求項 15記載の方法。

19. 乳酸—グリコール酸重合体の重量平均分子量が 17000〜 30000である請求項 15記載の方法。

20. 生体内分解性ポリマーが重量平均分子量 5000以下の重合体含有量が約 5重量％以下である、重量平均分子量 15000〜 50000の乳酸重合体である請求項 1記載の方法。

21. 生体内分解性ポリマーの末端力ルポキシル基量が重合体の単位質量（ダラム）あたり約 20〜約 1000 mo 1 (マイクロモル）の乳酸-ダリコール酸重合体である請求項 1記載の方法。

22. 生体内分解性ポリマ一の末端カルボキシル基量が生理活性物質に対して約 0.1〜約 5倍モルである請求項 1記載の方法。

23. 生体内分解性ポリマーの溶解液が、水難溶性の有機溶媒を用いた溶解液である請求項 1、 4または 5項記載の方法。

24. 水難溶性の有機溶媒がジクロロメタンである請求項 23記載の方法。

25. 混合液が均一に混合されている請求項 1、 4または 5項記載の方法。

26. 均一に混合された液がエマルシヨンである請求項 25記載の方法。

27. エマルションが W/0型である請求項 26記載の方法。

28. W/0エマルシヨンのサイズが微細である請求項 27記載の方法。

29. 混合液の乾燥が水中乾燥である請求瑱 1記載の方法。

30.水中乾燥の外水相に浸透圧調節剤の水溶液を用いる請求項 29記載の方法。

31. 浸透圧調節剤がマンニトールである請求項 30記載の方法。

32. 徐放性組成物の形態が微粒子である請求項 1記載の方法。

3 3 . 微粒子がマイクロスフェアあるいはマイクロカプセルである請求項 3 2記載の方法。

3 4 . 1 ) 生理活性物質および 2 ) 水溶液に対して約 0. 1〜約 20重量％の酸または塩基を含む水溶液と、生体内分解性ポリマーの溶解液とを混合し、次いで当該混合液を乾燥する徐放性組成物の製造方法。

3 5 . 水溶液が、生理活性物質と酸または塩基との塩を用いて得られる水溶液である請求項 3 4記載の方法。

3 6 . 請求項 1記載の方法を用いて製造された徐放性組成物。

3 7 . 生理活性物質を含有する徐放性製剤の製造のための、当該生理活性物質および当該生理活性物質の約 1. 5倍モル以上の酸または塩基を含む水溶液の使用。