CN110467652B - 用于预测牡蛎捕捞时间的内源性多肽 - Google Patents

用于预测牡蛎捕捞时间的内源性多肽 Download PDF

Info

Publication number
CN110467652B
CN110467652B CN201910721295.4A CN201910721295A CN110467652B CN 110467652 B CN110467652 B CN 110467652B CN 201910721295 A CN201910721295 A CN 201910721295A CN 110467652 B CN110467652 B CN 110467652B
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
oyster
peptide fragment
predicting
endogenous polypeptide
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201910721295.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110467652A (zh
Inventor
陈李品
李兆杰
张鸿伟
张晓梅
于繁千惠
孙中恺
薛长湖
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ocean University of China
Original Assignee
Ocean University of China
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ocean University of China filed Critical Ocean University of China
Priority to CN201910721295.4A priority Critical patent/CN110467652B/zh
Publication of CN110467652A publication Critical patent/CN110467652A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110467652B publication Critical patent/CN110467652B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
    • Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明提供了用于预测活品牡蛎捕捞时间的内源性多肽，所述的内源性多肽序列为：肽段1：SEQ ID NO.1：SSSTGEVGTYSGTTN或肽段2：SEQ ID NO.2：TARNEANVNI或肽段3：SEQ ID NO.3：TARNEANVNIY。本发明提供了用来预测活品牡蛎捕捞时间的内源性多肽，经过具体试验验证，能够证明牡蛎捕捞时间与上述肽段具有紧密的相关性，呈绝对的负相关。本发明能够进一步完善活品牡蛎流通的监测体系。

Description

用于预测牡蛎捕捞时间的内源性多肽
技术领域
本发明属于食品科学领域，具体涉及一组用于预测牡蛎捕捞时间的内源性多肽。
背景技术
牡蛎是一种重要的海洋水产资源，其营养丰富、肉质鲜嫩，深受消费者的喜爱。随着世界上贝类海产品的产品结构发生变化，鲜活牡蛎在国内外市场上最受青睐，尤其是随着人们消费水平的提高，一些内陆地区对活品牡蛎的需求以及对活品牡蛎的品质要求也越来越高。而牡蛎的捕捞时间对于活品牡蛎的品质有着非常大的影响，和所有海产品一样，一上岸，牡蛎的生命力就在慢慢消耗，而且牡蛎捕捞后一般就不再进食，想要维持鲜活的状态，牡蛎必须消耗自身存储的能量，即上岸天数越长，牡蛎消耗越“瘦”。所以消费者对于牡蛎的捕捞时间十分重视。但目前没有任何指标去监测牡蛎的捕捞时间，只能依靠感官评价去猜测捕捞时间，且因为生鲜供应链的复杂，存在多级销售商，所以对于捕捞时间的评估存在一定的困难。
随着检测技术与分析技术的进步，组学技术已成为品质评价重要的一部分，尤其是近些年提出的食品组学技术。不仅可以解决食品基质复杂的难题，更能从整体生物学角度去分析品质。因此，组学分析已经成为食品领域研究的技术前沿，为解决使用传统技术方法无法解决的研究难点提供了新的思路。多肽种类繁多，几乎参与生物体的生长、发育、免疫、新陈代谢等各个环节。肽组学是一个来源于蛋白质组学的新兴领域，研究生物样本中的所有内源性多肽，可以缩小蛋白组与代谢组的代沟。
目前尚未有通过检测内源性肽段来预测活品牡蛎的捕捞时间，海产品的捕捞时间业内研究为空白，但是捕捞时间与海产品的生物特性变化、鲜活程度等品质变化密切相关，且能够影响整个供应链，因此研究海产品捕捞时间具有较为实际的应用价值。
发明内容
本发明的技术目的是提供新筛选出的用于预测活品牡蛎捕捞时间的内源性多肽，以弥补牡蛎捕捞时间评估的空白。
为达到上述目的，本发明采取的具体技术方案为：
用于预测活品牡蛎捕捞时间的内源性多肽，所述的内源性多肽序列为：
肽段1：SEQ ID NO.1：SSSTGEVGTYSGTTN或
肽段2：SEQ ID NO.2：TARNEANVNI或
肽段3：SEQ ID NO.3：TARNEANVNIY。
上述内源性多肽的m/z为：SEQ ID NO.1：724.3；SEQ ID NO.2：551.3；SEQ IDNO.3：632.8。
上述内源性多肽是利用超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF)结合化学计量学方法，分析筛选出不同捕捞时间活品牡蛎的差异内源性多肽；其中，上述肽段SEQ ID NO.1、2、3相对含量随着牡蛎捕捞时间延长而下降。
所述的内源性多肽能够用于预测牡蛎的捕捞时间，具体应用方法为：针对筛选出的差异肽段，使用液相色谱-三重四级杆质谱建立多反应监测分析方法。根据肽组学技术提取不同捕捞时间的牡蛎的内源多肽滤液，使用上述的多反应监测分析方法进行检测，观察上述多肽标志物的表达强度，从而得出上述肽段不同捕捞时间的关系。
随捕捞时间的延长，内源性多肽SEQ ID NO.1、2、3的表达强度均显著下降，分别呈现绝对的负相关，且牡蛎的捕捞时间是一个相对独立的指标，所以内源性多肽SEQ IDNO.1、2、3均可单独用于预测牡蛎的捕捞时间。
本发明的技术效果和优点
本发明提供了用来预测活品牡蛎捕捞时间的内源性多肽，经过具体试验验证，能够证明牡蛎捕捞时间与上述肽段具有紧密的相关性，呈绝对的负相关，且所述的内源性多肽能够单独用于捕捞时间的评价。本发明能够进一步完善活品牡蛎流通的监测体系。
附图说明
图1,SSSTGEVGTYSGTTN合成肽段质谱图。
图2,SSSTGEVGTYSGTTN在牡蛎样品中质谱图。
图3,SSSTGEVGTYSGTTN在牡蛎保活期间样品含量变化趋势图。
图4,TARNEANVNI合成肽段质谱图。
图5,TARNEANVNI在牡蛎样品中质谱图。
图6,TARNEANVNI在牡蛎保活期间样品含量变化趋势图。
图7,TARNEANVNIY合成肽段质谱图。
图8,TARNEANVNIY在牡蛎样品中质谱图。
图9,TARNEANVNIY在牡蛎保活期间样品含量变化趋势图。
具体实施方式
以下通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步描述。
实施例1内源性多肽标志物的筛选：
(一)样品信息：
牡蛎采集于山东省荣成市某养殖场，分别选取捕捞后第1d和第9d的牡蛎。(二)样本前处理步骤：
(1)对上述牡蛎去壳取可食部位进行液氮速冻后均质，称取均质成粉末状态的牡蛎样品20g，95℃加热灭酶10min，加入20ml的碳酸氢铵溶液4℃15000r/min离心15min，收集上清，得肽粗提液；
(2)取1mol/L的二硫基苏糖醇(Dithiothreotol，DTT)100μL加入到上述蛋白溶液中，60℃水浴振摇反应30min，然后冷却至室温；
(3)取1mol/L现配的碘代乙酰胺(Iodoacetamide，IAA)溶液1000μL，室温避光反应1h；
(4)将上述溶液使用固相萃取小柱除盐；
(5)对除盐后的溶液进行冻干处理；
(6)对冻干后粉末复溶到200μL；
(7)在进一步上机分析之前，将反应液转移到配有10kDa超滤膜的离心管中，室温8000r/min超滤离心20min，收集下层的肽段滤液，待上机检测；
(三)上机检测：
采用AB SCIEX
Figure GDA0003511880390000042
5600检测，
流动相A：0.1％甲酸-水，流动相B：0.1％甲酸-乙腈，流速：0.25mL/min，
梯度洗脱：
Figure GDA0003511880390000041
TOF扫描范围：350-1500Da，
正离子反应模式，GS1：35，GS2：45，Curtain Gas：35，ISVF：5500，TEM：500，DP：100，CE：10。
(四)数据处理：
(1)标志物的筛选：通过精确相对分子质量和二级质谱裂解碎片鉴定检测到的化合物并对采集到的第1、9d的数据分别进行正交偏最小二乘判别分析
(OPLS-DA)，筛选出内源多肽标志物；
(2)肽段鉴定：使用ProteinPilot软件，检索NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov)牡蛎的蛋白数据库。主要鉴定参数设置如下：半胱氨酸(Cys)烷基化试剂：Iodoacetic acid；水解酶：None；允许生物学修饰和氨基酸替代；搜索设置：Thorough ID；可信阈值：Unused Protscore(Conf)＞1.3(95％)；假阳性错误率(FalseDiscovery Rate，FDR)：＜1％。
对应所筛选出的标志性肽段：
SEQ ID NO.1：SSSTGEVGTYSGTTN；SEQ IDNO.2：TARNEANVNI；SEQ ID NO.3：TARNEANVNIY。
实施例2合成肽段质谱检测步骤：
(一)经第三方公司合成上述肽段，待用；以及所述多肽标志物的m/z以及子
离子分别见下表：
SEQ ID NO.1：SSSTGEVGTYSGTTN；
SEQ IDNO.2：TARNEANVNI；
SEQ ID NO.3：TARNEANVNIY。
表1.多肽标志物SEQ ID NO.1-3的m/z以及子离子
Figure GDA0003511880390000051
将肽段复溶，在进一步上机分析之前，将反应液转移到配有10kDa超滤膜的离心管中，室温8000r/min超滤离心20min，收集下层的肽段滤液，待上机检测；
(二)上机检测：
采用AB SCIEX 5500三重四级杆检测，
流动相A：0.1％甲酸-水，流动相B：0.1％甲酸-乙腈，流速：0.35mL/min，梯度洗脱：
Figure GDA0003511880390000052
电喷雾离子源，正离子反应模式，检测方式：MRM，喷雾电压：5500V，离子传输管温度：475℃；鞘气压力：40；辅助气压力：6。
经过质谱分析，牡蛎样品中多肽质谱分析结果如图2，5，8。图2是多肽SSSTGEVGTYSGTTN在牡蛎样品中质谱图；图5是多肽TARNEANVNI在牡蛎样品中质谱图；图8是多肽TARNEANVNIY在牡蛎样品中质谱图。
经过质谱分析，合成多肽质谱分析结果如图1，4，7。图1是合成多肽SSSTGEVGTYSGTTN质谱图；图4是合成多肽TARNEANVNI质谱图；图7是合成多肽TARNEANVNIY质谱图。
经进一步鉴定，将待测样品的质谱结果对比所述合成多肽的标准质谱谱图，可以看出合成肽段与样品中上述肽段保留时间、离子比率均位于鉴定分析的容许范围内，可以说明该肽段的序列鉴定结果的正确性。
实施例3实际样品验证步骤：
(一)样本前处理步骤：
(1)将捕捞1，3，5，7，9，11，13，15d后的牡蛎分别去壳取可食部位进行液氮速冻后均质，称取均质成粉末状态的牡蛎样品20g，95℃加热灭酶10min，加入20ml的碳酸氢铵溶液4℃15000r/min离心15min，收集上清，得肽粗提液；
(2)取1mol/L的二硫基苏糖醇(Dithiothreotol，DTT)100μL加入到上述蛋白溶液中，60℃水浴振摇反应30min，然后冷却至室温；
(3)取1mol/L现配的碘代乙酰胺(Iodoacetamide，IAA)溶液1000μL，室温避光反应1h；
(4)将上述溶液使用固相萃取小柱除盐；
(5)对除盐后的溶液进行冻干处理；
(6)对冻干后粉末复溶到200μL；
(7)在进一步上机分析之前，将反应液转移到配有10kDa超滤膜的离心管中，室温8000r/min超滤离心20min，收集下层的肽段滤液，待上机检测；
(二)上机检测：
采用AB SCIEX 5500三重四级杆检测，
流动相A：0.1％甲酸-水，流动相B：0.1％甲酸-乙腈，流速：0.35mL/min，梯度洗脱：
Figure GDA0003511880390000071
电喷雾离子源，正离子反应模式，检测方式：MRM，喷雾电压：5500V，离子传输管温度：475℃；鞘气压力：40；辅助气压力：6。
经过质谱分析，多肽质谱分析结果如图3，6，9。图3是多肽SSSTGEVGTYSGTTN在捕捞1，3，5，7，9，11，13，15d后的牡蛎样品中的表达强度图，可以看出该肽段的表达随捕捞时间的延长而明显下降；图6是多肽TARNEANVNI在捕捞1，3，5，7，9，11，13，15d后的牡蛎样品中的表达强度图，可以看出该肽段的表达随捕捞时间的延长而明显下降；图9是多肽TARNEANVNIY在捕捞1，3，5，7，9，11，13，15d后的牡蛎样品中的表达强度图，可以看出该肽段的表达随捕捞时间的延长而明显下降。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。
序列表
<110> 中国海洋大学
<120> 用于预测牡蛎捕捞时间的内源性多肽
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 15
<212> PRT
<213> 牡蛎(Concha Ostreae )
<400> 1
Ser Ser Ser Thr Gly Glu Val Gly Thr Tyr Ser Gly Thr Thr Asn
1 5 10 15
<210> 2
<211> 10
<212> PRT
<213> 牡蛎(Concha Ostreae )
<400> 2
Thr Ala Arg Asn Glu Ala Asn Val Asn Ile
1 5 10
<210> 3
<211> 11
<212> PRT
<213> 牡蛎(Concha Ostreae )
<400> 3
Thr Ala Arg Asn Glu Ala Asn Val Asn Ile Tyr
1 5 10

Claims (4)

1.肽段1：SEQ ID NO.1 ：SSSTGEVGTYSGTTN或肽段2：SEQ ID NO.2 ：TARNEANVNI或肽段3：SEQ ID NO.3 ：TARNEANVNIY在预测牡蛎的捕捞时间上的应用。
2.用于预测活品牡蛎捕捞时间的内源性多肽，其特征在于，所述的内源性多肽序列为：
肽段1：SEQ ID NO.1 ：SSSTGEVGTYSGTTN或
肽段2：SEQ ID NO.2 ：TARNEANVNI或。
3.如权利要2所述的内源性多肽，其特征在于，上述内源性多肽是利用超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱结合化学计量学方法，分析筛选出不同捕捞时间活品牡蛎的差异多肽。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肽段SEQ ID NO.1、2、3相对含量随着牡蛎捕捞时间延长而下降。
CN201910721295.4A 2019-08-06 2019-08-06 用于预测牡蛎捕捞时间的内源性多肽 Active CN110467652B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910721295.4A CN110467652B (zh) 2019-08-06 2019-08-06 用于预测牡蛎捕捞时间的内源性多肽

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910721295.4A CN110467652B (zh) 2019-08-06 2019-08-06 用于预测牡蛎捕捞时间的内源性多肽

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110467652A CN110467652A (zh) 2019-11-19
CN110467652B true CN110467652B (zh) 2022-08-16

Family

ID=68511335

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910721295.4A Active CN110467652B (zh) 2019-08-06 2019-08-06 用于预测牡蛎捕捞时间的内源性多肽

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110467652B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002077024A1 (en) * 2001-03-27 2002-10-03 The Horticulture And Food Research Institute Of New Zealand Ltd. Shellfish protein
CN101037468A (zh) * 2006-03-16 2007-09-19 中国海洋大学 一种牡蛎活性肽的制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002077024A1 (en) * 2001-03-27 2002-10-03 The Horticulture And Food Research Institute Of New Zealand Ltd. Shellfish protein
CN101037468A (zh) * 2006-03-16 2007-09-19 中国海洋大学 一种牡蛎活性肽的制备方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A comprehensive review of oyster peptides: Preparation, characterisation and bioactivities;Lili Hao等;《Early View》;20210624;1-19 *
Evidence in oyster of a plasma extracellular superoxide dismutase which binds LPS;Marcelo Gonzalez等;《Biochemical and Biophysical Research Communications》;20051021;第338卷(第2期);1089-1097 *
Identification and inhibitory activity against α-thrombin of a novel anticoagulant peptide derived from oyster (Crassostrea gigas) protein;Shuzhen Cheng等;《Food Function》;20181031;第9卷(第12期);第3.2节 *
Identification of potential peptide markers for the shelf-life of Pacific oysters (Crassostrea gigas) during anhydrous preservation via mass spectrometry-based peptidomics;Li-pinChen等;《LWT - Food Science and Technology》;20200723;第134卷;1-8 *
Marine Antithrombotics;Rohini Dwivedi等;《Marine Drugs》;20201013;第18卷(第10期);1-26 *
太平洋牡蛎在活品流通过程中的质谱-肽组学分析;陈李品等;《分析化学》;20191111;第47卷(第12期);1893-1900 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN110467652A (zh) 2019-11-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ortea et al. Review on proteomics for food authentication
Wang et al. Tandem mass tag-labeled quantitative proteomic analysis of tenderloins between Tibetan and Yorkshire pigs
D'Alessandro et al. Love me tender: An Omics window on the bovine meat tenderness network
Verrez-Bagnis et al. Methods for seafood authenticity testing in Europe
CN110346479B (zh) 一种牡蛎内源肽的提取和鉴定方法
CN110283234B (zh) 一种源于牦牛血的抗氧化肽及其制剂和应用
CN105238794A (zh) 一种鸡枞菌的dna条形码标准基因及其应用
Wang et al. Super-fast seafood authenticity analysis by One-step pretreatment and comparison of mass spectral patterns
Chen et al. Molecular mechanism of protein dynamic change in Pacific oyster (Crassostrea gigas) during depuration at different salinities uncovered by mass spectrometry-based proteomics combined with bioinformatics
CN110467652B (zh) 用于预测牡蛎捕捞时间的内源性多肽
Liu et al. Differential proteomic analysis using a tandem-mass-tag-based strategy to identify proteins associated with the quality indicators of Penaeus vannamei after high-pressure treatment
Jianlei et al. Differential expression of proteins in Datong Yak and Chaidamu yellow cattle longissimus lumborum muscles and relation to meat water holding capacity
CN110467651B (zh) 一组用于评价活品牡蛎品质的多肽标志物
Zhang et al. Snapshot of peptidomics of the red tide forming species Noctiluca scintillans
CN111122756B (zh) 检测可食用肉的特征多肽及方法
CN111122755B (zh) 从可食用肉中检测非可食用肉的特征多肽及方法
Piñeiro et al. Proteomics and food analysis: Principles, techniques and applications
CN108037199B (zh) 一种相对定量分析肉鸡热休克蛋白hspa5的方法
CN108802232B (zh) 一种基于特征性肽段鉴别鹅源性成分的液相质谱方法
CN114539377A (zh) 一种使用液相色谱-质谱检测十足目水产过敏原的方法
CN110734485A (zh) 一种曼氏无针乌贼衰老过程中的蛋白生物标志物
Liang et al. The establishment of goat semen protein profile using a tandem mass tag-based proteomics approach
CN109820032A (zh) Ube2抑制剂作为食物低温保鲜剂的用途
Bendixen et al. Proteomics, an approach towards understanding the biology of meat quality
Ortea et al. Review on proteomics for food authentication

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Chen Lipin

Inventor after: Li Zhaojie

Inventor after: Zhang Hongwei

Inventor after: Zhang Xiaomei

Inventor after: Yu Fanqianhui

Inventor after: Sun Zhongkai

Inventor after: Xue Changhu

Inventor before: Li Zhaojie

Inventor before: Chen Lipin

Inventor before: Zhang Hongwei

Inventor before: Zhang Xiaomei

Inventor before: Yu Fanqianhui

Inventor before: Sun Zhongkai

Inventor before: Xue Changhu

CB03 Change of inventor or designer information
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant