CN101002785A - 一种抗肿瘤的药物组合物及其制备工艺 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种抗肿瘤的药物组合物及其制备方法。该药物组合物由人参皂苷Rh₂和人参皂苷Rg₃组成。本发明提供了一种低成本、工业化生产人参皂苷Rh₂和人参皂苷Rg₃组合物的制备方法，其生产工艺为：纯化原人参二醇组皂苷，将纯化的原人参二醇组皂苷溶解于有机酸或无机酸的水或醇溶液中，控制反应条件，进行选择性酸水解，然后收集水解产物次生皂苷进行精制纯化，并采用常规制药工艺，制成注射剂、胶囊剂和片剂等药物剂型。本发明药物组合物用于抑制癌细胞的增殖，具有提高肿瘤放化疗的疗效，减轻放化疗的毒副作用，提高机体的免疫功能的作用。

Description

一种抗肿瘤的药物组合物及其制备工艺

技术领域

本发明涉及一种药物组合物及其制备工艺，特别涉及一种抗肿瘤的药物组合物及其制备工艺。

背景技术

癌症是严重危害人类健康的疾病，世界卫生组织公布的统计资料表明：每年全世界癌症发病约1000万人，死亡约700万人。目前临床应用的抗癌药物的毒副作用多较大。因此研究开发安全高效的抗癌药是当务之急，特别是从博大精深的传统中医药中开发新的抗癌药一直是新药研究的热门课题。20世纪80年代，日本学者北川勋等从红参中分离出人参皂苷Rh₂，它的含量非常低，仅为红参的十万分之一，同时日本学者小田岛肃天进行人参皂苷Rh₂的药理学研究，证明人参皂苷Rh₂对多种癌细胞的增殖具有明显的特异性抑制作用，诱导癌细胞凋亡或分化逆转。国内外许多药物研究者对人参皂苷Rh₂的制备和药理进行了极为广泛深入的研究工作。

国内外学者对人参皂苷Rg₃的研究方兴未艾。研究表明，人参皂苷Rg₃能明显提高肿瘤放化疗的疗效，减轻放化疗的毒副作用，提高机体的免疫功能，改善患者的食欲和精神状态，抗疲劳，提高其生存质量。人参皂苷Rg₃可抑制肠胃道肿瘤的微转移。以人参皂苷Rg₃为原料的新药“参一胶囊”已批准上市。

近年来，人参皂苷Rh₂和人参皂苷Rg₃的制备方法报导很多，但都是单独使用各个成分，把人参皂苷Rh₂和人参皂苷Rg₃两个成分的组合物作为药物原料使用未见报导。而且低成本、工业化生产一直是人参皂苷Rh₂和人参皂苷Rg₃广泛应用于临床急待解决的技术难题。

发明内容

本发明的一个目的在于公开一种药物组合物；本发明的另一个目的在于公开一种药物组合物的制备方法；本发明还有一个目的在于公开人参皂苷Rh₂和人参皂苷Rg₃的制备方法；本发明还有一个目的在于公开一种药物组合物的用途。

本药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)：

人参皂苷Rh₂  5-40重量份   人参皂苷Rg₃  10-80重量份。

本药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)：

人参皂苷Rh₂  5-15重量份   人参皂苷Rg₃  60-80重量份。

本药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)：

人参皂苷Rh₂  30-40重量份  人参皂苷Rg₃  10-30重量份。

本药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)：

人参皂苷Rh₂  7重量份      人参皂苷Rg3  75重量份。

本药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)：

人参皂苷Rh₂  15重量份     人参皂苷Rg₃  65重量份。

本药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)：

人参皂苷Rh₂  35重量份     人参皂苷Rg₃  25重量份。

本药物组合物的原料药组成及配比如下(按重量份)：

人参皂苷Rh₂  40重量份     人参皂苷Rg₃  10重量份。

本发明药物组合物中还可以加入其它常规辅料按常规方法制成肌肉注射液、静脉注射液、胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂等临床或药学上可接受的剂型。

本发明原料药人参皂苷Rh₂和人参皂苷Rg₃可以从市面购买，也可按如下方法制备：

取5-15目人参或三七粗粉，用40-100％乙醇回流提取1-4次，每次1-3小时，收集提取液，过滤，滤液回收乙醇，至无乙醇味后，真空浓缩1.5-2小时，浓缩液加入等体积蒸馏水，搅拌均匀，过滤，滤液过大孔吸附树脂柱吸附；用2-4倍量树脂床体积蒸馏水洗去水溶性杂质，吸附人参皂苷的树脂柱备用；将上述吸附树脂柱用20-50％乙醇洗脱，20-50％乙醇用量为1-5倍量树脂床体积，用薄层色谱法跟踪检测，其中的薄层色谱法是：展开剂为30-100∶10-50∶2-20的氯仿∶甲醇∶水下层；显色剂：5-20％硫酸乙醇溶液；当薄层色谱上出现原人参二醇组皂苷斑点后，停止用20-50％乙醇洗脱，改用30-100％乙醇洗脱，并收集洗脱液；洗脱液用0.5-2％活性炭加热回流0.5-2小时脱色，过滤去除活性炭，滤液过大孔阳、阴离子交换柱，进一步脱色脱盐除杂，并用30-100％乙醇洗脱树脂吸附的原人参二醇组皂苷，回收乙醇，真空浓缩，真空干燥，粉碎，得原人参二醇组皂苷；取上述原人参二醇组皂苷粉溶解于30-70％醋酸、20-50％枸橼酸、20-50％草酸、20-50％丙二酸、0.5-2％盐酸、0.5-2％硫酸的水或乙醇溶液中，控制反应条件：水解温度为20℃-100℃，水解时间为0.5小时-10小时，酸水解反应完成后加入与酸水解液等体积蒸馏水，用6％氢氧化钠溶液中和至中性，过滤，收集水解产物次生皂苷的沉淀，用10倍重量蒸馏水，分2-3次洗沉淀，真空干燥，粉碎，得水解产物粗次生皂苷粉，备用；将水解产物粗次生皂苷粉溶解于5-10倍重量50-140％乙醇中，溶解，过滤，滤液用1％活性炭加热回流0.5-2小时脱色，过滤去除活性炭，滤液过大孔阳、阴离子交换柱，进一步脱色脱盐除杂，并用30-100％乙醇洗脱树脂吸附的次生皂苷，回收乙醇至洗脱液总体积的1/4-3/4，冷却，放置结晶，真空抽滤，收集结晶，真空干燥，粉碎；此为纯化处理过的水解产物次生皂苷，备用；

取上述纯化处理过的水解产物次生皂苷80-120重量份，用1∶1氯仿和甲醇溶液溶解后，加入80-100目的硅胶220-270重量份，搅拌均匀，置于50℃-70℃水浴锅上加热，待溶剂挥发后即成样品胶；在底部塞有棉花的硅胶柱里装有300-400目硅胶2500-3000重量份，作为分离胶，保持硅胶柱表面水平，抽真空使之细密均匀，再装入干燥好的样品胶，用2∶2∶4∶1氯仿-甲醇-乙酸乙脂-水作为流动相，以0.04MPa压力，加压使流动相通过硅胶柱，进行硅胶柱层析，以300ml/次分批收集洗脱液，用薄层层析法跟踪检测，薄层层析法：硅胶G预制板；展开剂为2∶2∶4∶1的氯仿∶甲醇∶乙酸乙酯∶水；显色剂为10％硫酸溶液；在薄层层析板上将各批洗脱液和人参皂苷Rh2和Rg3对照品分别点样，展开，显色；将人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3部分分别收集，分别回收溶剂，减压浓缩，真空干燥；再将真空干燥后的人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3部分分别用甲醇溶解，再滴加蒸馏水使结晶析出，放置结晶完全，上述甲醇-水重结晶2-3次；结晶分别进行真空干燥，粉碎，分别得人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3单体，备用。

本发明原料药人参皂苷Rh₂和人参皂苷Rg₃可以从市面购买也可按如下方法制备：

取10目人参或三七粗粉，用70％乙醇回流提取3次，每次2小时，收集提取液，过滤，滤液回收乙醇，至无乙醇味后，真空浓缩2小时，浓缩液加入等体积蒸馏水，搅拌均匀，过滤，滤液过大孔吸附树脂柱吸附；用3倍量树脂床体积蒸馏水洗去水溶性杂质，吸附人参皂苷的树脂柱备用；将上述吸附树脂柱用35％乙醇洗脱，35％乙醇用量为2.5倍量树脂床体积，用薄层色谱法跟踪检测，其中的薄层色谱法是：展开剂为65∶35∶10的氯仿∶甲醇∶水下层；显色剂：10％硫酸乙醇溶液；当薄层色谱上出现原人参二醇组皂苷斑点后，停止用35％乙醇洗脱，改用65％乙醇洗脱，并收集洗脱液；洗脱液用1％活性炭加热回流0.5小时脱色，过滤去除活性炭，滤液过大孔阳、阴离子交换柱，进一步脱色脱盐除杂，并用65％乙醇洗脱树脂吸附的原人参二醇组皂苷，回收乙醇，真空浓缩，真空干燥，粉碎，得原人参二醇组皂苷；取上述原人参二醇组皂苷粉溶解于50％醋酸或1％盐酸中，水解时间：盐酸水解1小时，醋酸水解6小时，水解温度为75℃，酸水解反应完成后加入与酸水解液等体积蒸馏水，用6％氢氧化钠溶液中和至中性，过滤，收集水解产物次生皂苷的沉淀，用10倍重量蒸馏水，分2-3次洗沉淀，真空干燥，粉碎，得水解产物粗次生皂苷粉，备用；将水解产物粗次生皂苷粉溶解于8倍重量95％乙醇中，溶解，过滤，滤液用1％活性炭加热回流0.5小时脱色，过滤去除活性炭，滤液过大孔阳、阴离子交换柱，进一步脱色脱盐除杂，并用95％乙醇洗脱树脂吸附的次生皂苷，回收乙醇至洗脱液总体积的1/2，冷却，放置结晶，真空抽滤，收集结晶，真空干燥，粉碎；

取上述纯化处理过的水解产物次生皂苷100重量份，用1∶1氯仿和甲醇溶液溶解后，加入100目的硅胶250重量份，搅拌均匀，置于60℃水浴锅上加热，待溶剂挥发后即成样品胶；在底部塞有棉花的硅胶柱里装有400目硅胶2800重量份，作为分离胶，保持硅胶柱表面水平，抽真空使之细密均匀，再装入干燥好的样品胶，用2∶2∶4∶1氯仿-甲醇-乙酸乙脂-水作为流动相，以0.04MPa压力，加压使流动相通过硅胶柱，进行硅胶柱层析，以300ml/次分批收集洗脱液，用薄层层析法跟踪检测，薄层层析法：硅胶G预制板；展开剂为2∶2∶4∶1的氯仿∶甲醇∶乙酸乙酯∶水；显色剂为10％硫酸溶液；在薄层层析板上将各批洗脱液和人参皂苷Rh2和Rg3对照品分别点样，展开，显色；将人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3部分分别收集，分别回收溶剂，减压浓缩，真空干燥；再将真空干燥后的人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3部分分别用甲醇溶解，再滴加蒸馏水使结晶析出，放置结晶完全，上述甲醇-水重结晶3次；结晶分别进行真空干燥，粉碎，分别得人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3单体，备用。

本发明解决了低成本、工业化大规模生产人参皂苷Rh₂和人参皂苷Rg₃组合物的技术难题，充分满足临床用药的需要，具有深刻的社会效益；充分发挥人参皂苷Rh₂和人参皂苷Rg₃的协同作用，改变了使用单个成分而把另一个功效成分作为副产物的状况；本发明充分利用功效成分，达到物尽其用的目的，本发明制备的人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3分别用高效液相色谱法检验含量，纯度分别达90％以上。

Rh₂、Rg₃均有不同程度的抗小鼠黑色素瘤(B₁₆)活性。其中，以Rh₂抗肿瘤效应为优，大、中、小剂量组抑瘤率分别为35.5％、30.1％、18.3％，以Rg₃剂量为基准与Rh₂(大、中、小剂量)配伍后的肿瘤抑制率明显提高，分别为44.5％、39.2％与35.3％。Rh₂与Rg₃组合后能够更有效的抑制肿瘤生长，表现为明显的协同加和效应。

下述实验和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

实验例：抑制小鼠黑色素瘤生长实验

1材料

1.1药品与试剂

Rh₂、Rg₃系云南天秀植物科技开发有限公司提供(呈白色粉末)。环磷酰胺(CTX)由上海华联制药有限公司生产(批号050405)，购入北京国药集团公司。

1.2动物与瘤块

雄性C57种小鼠，体重20±2g，购入由北京维通利华实验动物技术有限公司(合格证号：京动许字004049)，并在北京中医药大学第一临床医学院重点实验室的清洁级环境下饲养；小鼠黑色素瘤块由中国医学科学院肿瘤研究所实验中心提供。

2方法

2.1建立模型

按照相关文献建立小鼠黑色素瘤(B₁₆)动物模型。选择荷瘤小鼠，无菌条件下取出瘤块，加PBS用玻璃匀浆器按1∶4稀释制备成单细胞悬液，调整细胞数约为5×10⁶/L，分别取0.2ml接种于C57小鼠右前肢腋窝皮下，接种时间在1h内完成。

2.2分组给药

将接种B₁₆细胞C57小鼠随机分为9组，8只/组。该实验用药是在预实验基础上确定的用药剂量。因Rg₃已经制备抗肿瘤药物，国内有文献报道，此次参考文献设计了一个剂量组，目的在于观察Rh₂与Rg₃组合后的抑瘤效果。其分组与给药剂量如下：①模型对照组以生理盐水10ml/(kg·d)；②CTX组为50mg/(kg·d)；③Rh₂大剂量为2.0mg/(kg·d)；④Rh₂中剂量为1.0mg/(kg·d)；⑤Rh₂小剂量为0.5mg/(kg·d)；⑥Rg₃组为16mg/(kg·d)；⑦Rh₂大剂量+Rg₃组；⑧Rh₂中剂量+Rg₃组；⑨Rh₂小剂量+Rg₃组。除CTX组隔日腹腔注射给药外(共3次)，Rh₂、Rg₃及其组合配伍粉用无水乙醇溶解后，生理盐水稀释配制成所需浓度，每日灌胃1次，共10天，第15天处死小鼠，留制标本待检。

2.3观察指标

实验过程中动态观察小鼠整体状况、体重以及死亡情况。第15天脱颈处死小鼠，剥离肿瘤称重，依据公式计算抑瘤率。计算公式：抑瘤率(％)＝(1一给药组平均瘤重/模型对照组平均瘤重)×100％。

2.4统计处理

所有数据采用SPSS14.0统计软件进行处理，计数资料采用

表示；多组资料均数比较采用单因素方差分析，当户P＜0.05时，表示有统计学意义。

3结果

3.1一般状况

实验前各组小鼠一般状况良好，实验结束后小鼠全部存活。实验过程中发现模型组、CTX组小鼠一般状态逐渐下降，进食量明显减少，鼠体渐消瘦，且毛色逐渐变得缺乏光泽，并有脱毛、行动迟缓等现象，尤以CTX组更为明显。Rh₂、Rg₃及其组合的各剂量组小鼠未见上述现象，整体状况良好。同时，在剥离肿瘤时发现，模型组肿瘤呈浸润性生长，肿瘤血管丰富，包膜不易剥离；其余各组瘤体包膜完整，血管相对较少，易于剥离完整瘤块，尤其以Rh₂及其组合各剂量组明显。

3.2体重变化

给药前实验各组间体重比较，经Anova检验无统计学意义。各组实验前后比较，结果见表1。

表1、各组小鼠平均体重比较

组别	只数	Δ体重(g)	P1值	P2值
					模型对照组CTX对照组Rh2大剂量组Rh2中剂量组Rh2小剂量组Rg3治疗组Rh2大+Rg3组Rh2中+Rg3组Rh2小+Rg3组	888888888	1.25±1.65-1.24±1.452.61±0.753.33±1.043.88±1.053.51±1.383.41±1.56*3.47±1.59*3.55±1.48*	＜0.01-＜0.01＜0.01＜0.01＜0.01＜0.01＜0.01＜0.01	-＜0.01＞0.05＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05＜0.05

注1：采用Anova检验，P₁为CTX组小鼠体重与其它各组小鼠体重比较的P值，P₂为模型组小鼠体重与其它

各组小鼠体重比较的P值

注2：平均体重变化量＝(治疗后体重-治疗前体重)

注3：与Rh₂大剂量组比较，*P＜0.05

从表1可看出，Rh₂大、中、小剂量组、Rg₃及其Rh₂与Rg₃组合的各剂量组均具有明显阻止荷瘤小鼠体重下降效应，体重增长数值与用药剂量无明显相关性；同时，也可以看出Rh₂与Rg₃组合后对小鼠体重亦无明显影响。而模型组、CTX组小鼠体重明显下降。说明增加体重是改善小鼠整体状况之一。

3.3肿瘤抑制率

实验结束后，分别取出肿瘤称重，按照公式计算肿瘤抑制率。实验各组肿瘤抑制率比较见表2。

表2、各实验组肿瘤抑制率比较

组别	只数	平均瘤重(g)	抑瘤率(％)	P值
					模型对照组CTX对照组Rh2大剂量组Rh2中剂量组Rh2小剂量组Rg3治疗组Rh2大+Rg3组Rh2中+Rg3组Rh2小+Rg3组	888888888	3.32±1.240.31±0.372.14±0.672.32±0.762.71±1.042.62±1.111.89±0.872.03±1.052.17±0.98	-90.635.530.118.321.144.539.235.3	-＜0.01＜0.05＜0.05＞0.05＞0.05＜0.05＜0.05＜0.05

注：采用Anova检验，P为各组与模型对照组瘤重比较的P值

从表2可以看出，Rh₂、Rg₃及其组合的各剂量组均能抑制小鼠黑色素瘤生长。以单体成分分析，肿瘤生长抑制率与用药剂量呈正相关性，以Rh₂大剂量组抑瘤率最佳，中剂量次之，小剂量与Rg₃疗效类似；以单体成分组合分析，也显示有良好的剂量依赖关系。

3.4组合效应比较

Rg₃的抗肿瘤研究国内有较多的文献报道，现已制备抗肿瘤新药上市；Rh₂也有明显的抗肿瘤效应，亦有保健食品上市。但Rh₂与Rg₃组合后的抗肿瘤效应国内尚未见到明确的文献报道。该实验目的是观察Rh₂与Rg₃组合效应。因此，我们除对肿瘤抑制率进行表对比外，还进行了单味成分、组合成分的组间比较，结果见表3。

表3、各实验组之间肿瘤抑制率比较

组别	只数	平均瘤重(g)	抑瘤率(％)	P1	P2	P3	P4	P5	P6
										Rh2大剂量组Rh2中剂量组Rh2小剂量组Rg3治疗组Rh2大+Rg3组Rh2中+Rg3组Rh2小+Rg3组	8888888	2.14±0.672.32±0.762.71±1.042.62±1.111.89±0.872.03±1.052.17±0.98	35.530.118.321.144.539.235.3	-＞0.05＜0.01＜0.01＜0.05＞0.05＞0.05	--＜0.01＜0.01＜0.01＜0.05＞0.05	---＞0.05＜0.01＜0.01＜0.01	----＜0.01＜0.01＜0.01	-----＞0.05＜0.05	------＞0.05

注1：P₁为Rh₂大剂量组分别与实验各组比较的p值

注2：P₂为Rh2中剂量组分别与实验各组比较的p值

注3：P₃为Rh2小剂量组分别与实验各组比较的p值

注4：P₄为Rg₃组分别与实验各组比较的p值

注5：P₅为大剂量Rh2与Rg₃组和分别与实验各组比较的p值

注6：P₆为中剂量Rh2与Rg₃组和分别与实验各组比较的p值

从表3分析可以得出：①Rh₂与Rg₃组合大剂量组与Rh₂与各剂量组以及Rg₃组比较，均具有统计学意义(P＜0.05，0.01)；②Rh₂与Rg₃组合中剂量组与Rh₂各剂量组以及Rg₃组比较，除Rh₂大剂量外，均具有统计学意义；③Rh₂与Rg₃组合小剂量组与Rh₂小剂量、Rg₃组比较，具有统计学意义。分析结果认为，Rh₂与Rg₃组合后能够更有效的抑制肿瘤生长，表现为明显的加和效应。

4结果显示：

①Rh₂、Rg₃均有不同程度的抗小鼠黑色素瘤(B₁₆)活性。其中，以Rh₂抗肿瘤效应为优，大、中、小剂量组抑瘤率分别为35.5％、30.1％、18.3％，与对照组比较，有统计学意义(P＜0.05)；②Rg₃组抑瘤作用并不理想，其抑瘤率仅为21.1％，这与多数文献报告基本一致；③以Rg₃剂量为基准与Rh₂大、中、小剂量配伍后的肿瘤抑制率明显增加，分别为44.5％、39.2％与35.3％。分析结果显示：Rh₂与Rg₃组合大剂量组与Rh₂与各剂量组以及Rg₃组比较，均具有统计学意义(P＜0.05，0.01)；Rh₂与Rg₃组合中剂量组与Rh₂各剂量组以及Rg₃组比较，除Rh₂大剂量外，均具有统计学意义；Rh₂与Rg₃组合小剂量组与Rh₂大、中剂量组比较，无统计学意义，与Rh₂小剂量、Rg₃组比较，具有统计学意义。分析结果认为，Rh₂与Rg₃组合后能够更有效的抑制肿瘤生长，表现为明显的加和效应；④CTX组虽然有很高的肿瘤抑制率(90.6％)，但小鼠整体状态很差，生活质量明显下降，这种预期研究结果与临床治疗结局相同，更进一步说明，化疗药物的高肿瘤抑制率并不意味着给患者带来良好的治疗受益；⑤尽管Rh₂、Rg₃单体成分以及相互组合后的肿瘤抑制率不及CTX，但在获抑瘤疗效的同时，能改善小鼠整体状态、提高生活质量，获得良好的治疗受益。其实验结果符合当今在肿瘤中提倡高生活质量的治疗新理念；⑥实验中剥离肿瘤时我们也发现，Rh₂、Rg₃干预组的肿瘤包膜比较完整，易于剥离，而模型对照组肿瘤组织浸润明显，新生血管丰富。提示抗肿瘤浸润以及抑制肿瘤新生血管形成可能是Rh₂、Rg₃作用机制之一。

下述实施例均能实现上述实验例的效果

具体实施方式

实施例1：注射剂的制备

人参皂苷Rh₂ 20kg，人参皂苷Rg₃ 40kg，用240kl注射用蒸馏水，加入吐温-80约3％-5％，搅匀；再加入60kg粉碎成细粉的人参皂苷Rh₂和人参皂苷Rg₃组合物，加热使溶解，过滤，分装于安瓿中，灭菌；制成每毫升含人参皂苷Rh₂ 0.5mg、人参皂苷Rg₃ 1mg的注射剂。

上述人参皂苷Rh₂和人参皂苷Rg₃可以从市面购买也可按如下方法制备：

取10目人参或三七粗粉，用70％乙醇回流提取3次，每次2小时，收集提取液，过滤，滤液回收乙醇，至无乙醇味后，真空浓缩2小时，浓缩液加入等体积蒸馏水，搅拌均匀，过滤，滤液过大孔吸附树脂柱吸附；用3倍量树脂床体积蒸馏水洗去水溶性杂质，吸附人参皂苷的树脂柱备用；将上述吸附树脂柱用35％乙醇洗脱，35％乙醇用量为2.5倍量树脂床体积，用薄层色谱法跟踪检测，其中的薄层色谱法是：展开剂为65∶35∶10的氯仿∶甲醇∶水下层；显色剂：10％硫酸乙醇溶液；当薄层色谱上出现原人参二醇组皂苷斑点后，停止用35％乙醇洗脱，改用65％乙醇洗脱，并收集洗脱液；洗脱液用1％活性炭加热回流0.5小时脱色，过滤去除活性炭，滤液过大孔阳、阴离子交换柱，进一步脱色脱盐除杂，并用65％乙醇洗脱树脂吸附的原人参二醇组皂苷，回收乙醇，真空浓缩，真空干燥，粉碎，得原人参二醇组皂苷；取上述原人参二醇组皂苷粉溶解于50％醋酸或1％盐酸中，水解时间：盐酸水解1小时，醋酸水解6小时，水解温度为75℃，酸水解反应完成后加入与酸水解液等体积蒸馏水，用6％氢氧化钠溶液中和至中性，过滤，收集水解产物次生皂苷的沉淀，用10倍重量蒸馏水，分2-3次洗沉淀，真空干燥，粉碎，得水解产物粗次生皂苷粉，备用；将水解产物粗次生皂苷粉溶解于8倍重量95％乙醇中，溶解，过滤，滤液用1％活性炭加热回流0.5小时脱色，过滤去除活性炭，滤液过大孔阳、阴离子交换柱，进一步脱色脱盐除杂，并用95％乙醇洗脱树脂吸附的次生皂苷，回收乙醇至洗脱液总体积的1/2，冷却，放置结晶，真空抽滤，收集结晶，真空干燥，粉碎；取上述纯化处理过的水解产物次生皂苷100重量份，用1∶1氯仿和甲醇溶液溶解后，加入100目的硅胶250重量份，搅拌均匀，置于60℃水浴锅上加热，待溶剂挥发后即成样品胶；在底部塞有棉花的硅胶柱里装有400目硅胶2800重量份，作为分离胶，保持硅胶柱表面水平，抽真空使之细密均匀，再装入干燥好的样品胶，用2∶2∶4∶1氯仿-甲醇-乙酸乙脂-水作为流动相，以0.04MPa压力，加压使流动相通过硅胶柱，进行硅胶柱层析，以300ml/次分批收集洗脱液，用薄层层析法跟踪检测，薄层层析法：硅胶G预制板；展开剂为2∶2∶4∶1的氯仿∶甲醇∶乙酸乙酯∶水；显色剂为10％硫酸溶液；在薄层层析板上将各批洗脱液和人参皂苷Rh2和Rg3对照品分别点样，展开，显色；将人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3部分分别收集，分别回收溶剂，减压浓缩，真空干燥；再将真空干燥后的人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3部分分别用甲醇溶解，再滴加蒸馏水使结晶析出，放置结晶完全，上述甲醇-水重结晶3次；结晶分别进行真空干燥，粉碎，分别得人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3单体，备用。

实施例2：胶囊剂的制备

人参皂苷Rh₂ 20kg，人参皂苷Rg₃ 80kg，取人参皂苷Rh₂和人参皂苷Rg₃组合物细粉100kg，加微晶纤维素细粉900kg，充分搅拌混合均匀，装入空胶囊中；制成每粒胶囊含人参皂苷Rh₂ 10mg、人参皂苷Rg₃ 20mg的胶囊剂。

实施例3：片剂的制备

人参皂苷Rh₂ 30kg，人参皂苷Rg₃ 70kg，取人参皂苷Rh₂和人参皂苷Rg₃组合物细粉100kg，加微晶纤维素细粉900kg，并加入5％淀粉，充分搅拌混合均匀，用稀淀粉糊制粒，干燥；加适量硬酯酸镁，用40目筛整粒，混合均匀后压片，包薄膜衣，分装；制成每片含人参皂苷Rh₂ 10mg、人参皂苷Rg₃ 20mg的片剂。

实施例4：丸剂的制备

取食用颗粒状蔗糖过筛，收集40目左右的糖芯作为种核，称重后置包衣锅内，以含一定量酒精的糖浆为粘合剂，在滚动下撒入人参皂苷Rh₂和人参皂苷Rg₃组合物细粉(含人参皂苷Rh₂ 10kg，人参皂苷Rg₃ 25kg)，制成组合物药物与糖芯重量比约为1∶1的药芯小丸剂，干燥备用；此含药小丸可以装胶囊、压片等，也可以包缓释衣，制成缓释型小丸剂。

实施例5：缓释剂的制备

人参皂苷Rh₂ 35kg，人参皂苷Rg₃ 25kg，用常规方法将人参皂苷Rh₂和人参皂苷Rg₃组合物细粉，用醋酸纤维等具有控释膜功能的包衣材料，包衣，制成缓释剂型。

实施例6：口服液的制备

人参皂苷Rh₂ 15kg，人参皂苷Rg₃ 65kg，加常规辅料按常规方法制成口服液。

实施例7：肌肉注射剂的制备

人参皂苷Rh₂ 35kg，人参皂苷Rg₃ 75kg，加常规辅料按常规方法制成肌肉注射剂。

实施例8：静脉注射剂的制备

用300KL注射用蒸馏水，加入5％吐温-80，搅匀；再加入750kg粉碎成细粉的人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3组合物(含人参皂苷Rh2 250kg，人参皂苷Rg3 500kg)，加热使溶解，过滤，分装于安瓿中，灭菌；制成每毫升含人参皂苷Rh2 0.5mg、人参皂苷Rg31mg的注射液。

实施例9：冻干粉针剂的制备

人参皂苷Rh₂ 40kg，人参皂苷Rg₃ 10kg，加常规辅料按常规方法制成冻干粉针剂。

Claims (12)

1、一种抗肿瘤的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成：人参皂苷Rh₂  5-40重量份 人参皂苷Rg₃  10-80重量份。

2、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成：人参皂苷Rh₂  5-15重量份  人参皂苷Rg₃60-80重量份。

3、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成：人参皂苷Rh₂  30-40重量份  人参皂苷Rg₃10-30重量份。

4、如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成：人参皂苷Rh₂  7重量份  人参皂苷Rg₃  75重量份。

5、如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成：人参皂苷Rh₂  15重量份  人参皂苷Rg₃  65重量份。

6、如权利要求3所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成：人参皂苷Rh₂  35重量份  人参皂苷Rg₃  25重量份。

7、如权利要求3所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成：人参皂苷Rh₂  40重量份  人参皂苷Rg₃  10重量份。

8、一种药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：取5-15目人参或三七粗粉，用40-100％乙醇回流提取1-4次，每次1-3小时，收集提取液，过滤，滤液回收乙醇，至无乙醇味后，真空浓缩1.5-2小时，浓缩液加入等体积蒸馏水，搅拌均匀，过滤，滤液过大孔吸附树脂柱吸附；用2-4倍量树脂床体积蒸馏水洗去水溶性杂质，吸附人参皂苷的树脂柱备用；将上述吸附树脂柱用20-50％乙醇洗脱，20-50％乙醇用量为1-5倍量树脂床体积，用薄层色谱法跟踪检测，其中的薄层色谱法是：展开剂为30-100∶10-50∶2-20的氯仿∶甲醇∶水下层；显色剂：5-20％硫酸乙醇溶液；当薄层色谱上出现原人参二醇组皂苷斑点后，停止用20-50％乙醇洗脱，改用30-100％乙醇洗脱，并收集洗脱液；洗脱液用0.5-2％活性炭加热回流0.5-2小时脱色，过滤去除活性炭，滤液过大孔阳、阴离子交换柱，进一步脱色脱盐除杂，并用30-100％乙醇洗脱树脂吸附的原人参二醇组皂苷，回收乙醇，真空浓缩，真空干燥，粉碎，得原人参二醇组皂苷；取上述原人参二醇组皂苷粉溶解于30-70％醋酸、20-50％枸橼酸、20-50％草酸、20-50％丙二酸、0.5-2％盐酸、0.5-2％硫酸的水或乙醇溶液中，控制反应条件：水解温度为20℃-100℃，水解时间为0.5小时-10小时，酸水解反应完成后加入与酸水解液等体积蒸馏水，用6％氢氧化钠溶液中和至中性，过滤，收集水解产物次生皂苷的沉淀，用10倍重量蒸馏水，分2-3次洗沉淀，真空干燥，粉碎，得水解产物粗次生皂苷粉，备用；将水解产物粗次生皂苷粉溶解于5-10倍重量50-140％乙醇中，溶解，过滤，滤液用1％活性炭加热回流0.5-2小时脱色，过滤去除活性炭，滤液过大孔阳、阴离子交换柱，进一步脱色脱盐除杂，并用30-100％乙醇洗脱树脂吸附的次生皂苷，回收乙醇至洗脱液总体积的1/4-3/4，冷却，放置结晶，真空抽滤，收集结晶，真空干燥，粉碎；此为纯化处理过的水解产物次生皂苷，备用；取上述纯化处理过的水解产物次生皂苷80-120重量份，用1∶1氯仿和甲醇溶液溶解后，加入80-100目的硅胶220-270重量份，搅拌均匀，置于50℃-70℃水浴锅上加热，待溶剂挥发后即成样品胶；在底部塞有棉花的硅胶柱里装有300-400目硅胶2500-3000重量份，作为分离胶，保持硅胶柱表面水平，抽真空使之细密均匀，再装入干燥好的样品胶，用2∶2∶4∶1氯仿-甲醇-乙酸乙脂-水作为流动相，以0.04MPa压力，加压使流动相通过硅胶柱，进行硅胶柱层析，以300ml/次分批收集洗脱液，用薄层层析法跟踪检测，薄层层析法：硅胶G预制板；展开剂为2∶2∶4∶1的氯仿∶甲醇∶乙酸乙酯∶水；显色剂为10％硫酸溶液；在薄层层析板上将各批洗脱液和人参皂苷Rh2和Rg3对照品分别点样，展开，显色；将人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3部分分别收集，分别回收溶剂，减压浓缩，真空干燥；再将真空干燥后的人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3部分分别用甲醇溶解，再滴加蒸馏水使结晶析出，放置结晶完全，上述甲醇-水重结晶2-3次；结晶分别进行真空干燥，粉碎，分别得人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3单体，备用。

9、如权利要求8所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为：取10目人参或三七粗粉，用70％乙醇回流提取3次，每次2小时，收集提取液，过滤，滤液回收乙醇，至无乙醇味后，真空浓缩2小时，浓缩液加入等体积蒸馏水，搅拌均匀，过滤，滤液过大孔吸附树脂柱吸附；用3倍量树脂床体积蒸馏水洗去水溶性杂质，吸附人参皂苷的树脂柱备用；将上述吸附树脂柱用35％乙醇洗脱，35％乙醇用量为2.5倍量树脂床体积，用薄层色谱法跟踪检测，其中的薄层色谱法是：展开剂为65∶35∶10的氯仿∶甲醇∶水下层；显色剂：10％硫酸乙醇溶液；当薄层色谱上出现原人参二醇组皂苷斑点后，停止用35％乙醇洗脱，改用65％乙醇洗脱，并收集洗脱液；洗脱液用1％活性炭加热回流0.5小时脱色，过滤去除活性炭，滤液过大孔阳、阴离子交换柱，进一步脱色脱盐除杂，并用65％乙醇洗脱树脂吸附的原人参二醇组皂苷，回收乙醇，真空浓缩，真空干燥，粉碎，得原人参二醇组皂苷；取上述原人参二醇组皂苷粉溶解于50％醋酸或1％盐酸中，水解时间：盐酸水解1小时，醋酸水解6小时，水解温度为75℃，酸水解反应完成后加入与酸水解液等体积蒸馏水，用6％氢氧化钠溶液中和至中性，过滤，收集水解产物次生皂苷的沉淀，用10倍重量蒸馏水，分2-3次洗沉淀，真空干燥，粉碎，得水解产物粗次生皂苷粉，备用；将水解产物粗次生皂苷粉溶解于8倍重量95％乙醇中，溶解，过滤，滤液用1％活性炭加热回流0.5小时脱色，过滤去除活性炭，滤液过大孔阳、阴离子交换柱，进一步脱色脱盐除杂，并用95％乙醇洗脱树脂吸附的次生皂苷，回收乙醇至洗脱液总体积的1/2，冷却，放置结晶，真空抽滤，收集结晶，真空干燥，粉碎；取上述纯化处理过的水解产物次生皂苷100重量份，用1∶1氯仿和甲醇溶液溶解后，加入100目的硅胶250重量份，搅拌均匀，置于60℃水浴锅上加热，待溶剂挥发后即成样品胶；在底部塞有棉花的硅胶柱里装有400目硅胶2800重量份，作为分离胶，保持硅胶柱表面水平，抽真空使之细密均匀，再装入干燥好的样品胶，用2∶2∶4∶1氯仿-甲醇-乙酸乙脂-水作为流动相，以0.04MPa压力，加压使流动相通过硅胶柱，进行硅胶柱层析，以300ml/次分批收集洗脱液，用薄层层析法跟踪检测，薄层层析法：硅胶G预制板；展开剂为2∶2∶4∶1的氯仿∶甲醇∶乙酸乙酯∶水；显色剂为10％硫酸溶液；在薄层层析板上将各批洗脱液和人参皂苷Rh2和Rg3对照品分别点样，展开，显色；将人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3部分分别收集，分别回收溶剂，减压浓缩，真空干燥；再将真空干燥后的人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3部分分别用甲醇溶解，再滴加蒸馏水使结晶析出，放置结晶完全，上述甲醇-水重结晶3次；结晶分别进行真空干燥，粉碎，分别得人参皂苷Rh2和人参皂苷Rg3单体，备用。

10、如权利要求1-7所述的任一药物组合物，其特征在于该药物组合物加入常规辅料按常规方法制成肌肉注射液、静脉注射液、胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、缓释剂、口服液体制剂或冻干粉针剂。

11、如权利要求1-7所述的任一药物组合物在制备肿瘤治疗药或辅助用药中的应用。

12、如权利要求10所述的药物组合物在制备肿瘤治疗药或辅助用药中的应用。