CN100516069C - 制备6-亚烷基青霉烯衍生物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了制备通或I化合物的方法，该化合物用于治疗细菌感染或疾病。

Description

制备6-亚烷基青霉烯衍生物的方法
发明领域
本发明涉及制备6-亚烷基青霉烯衍生物的新方法，该衍生物可与广谱β-内酰胺酶抑制剂和抗菌剂同样重要。
发明背景
β-内酰胺酶是由细菌产生的酶，它可水解β-内酰胺抗生素，同样也是细菌产生抗性的主要原因。青霉素和头孢菌素是临床上使用最频和最广的β-内酰胺抗生素。但是，不同病原菌对β-内酰胺抗生素的抗性增强已经对维持细菌感染的有效治疗产生了破坏性后果。(Coleman，K.Expert Opin.Invest.Drugs 1995，4，693；Sutherland，R.Infection1995，23(4)191；Bush，K，Cur.Pharm.Design 1999，5，839-845)与细菌对β-内酰胺抗生素的抗性发展相关的最重要的公知的机理是产生了A类、B类和C类丝氨酸β-内酰胺酶。上述酶降解了β-内酰胺抗生素，导致了抗菌活性的丧失。A类酶优先水解青霉素，而C类内酰胺酶具有利于头孢菌素水解的底物外形。(Bush，K.；Jacoby，G.A.；Medeiros，A.A.Antimicrob.Agents Chemother.1995，39，1211)。到目前为止，已经报导了超过250种不同的β-内酰胺酶(Payne，D.J，：Du，W和Bateson，J.H.Exp.Opin.Invest.Drugs 2000，247.)，需要新一代的广谱β-内酰胺酶抑制剂。β-内酰胺抗生素与抑制上述酶的化合物结合使用可大大降低细菌对上述抗生素的抗性。
市售的β-内酰胺酶抑制剂如棒酸、舒巴克坦和他巴克坦都对产生A类酶的病原菌有效。对A类β-内酰胺酶(如PCI和TEM-1)的灭活机制已经作了阐述。(Bush，K.；Antimicrob.Agents Chemother.1993，37，851；Yang，Y.；Janota，K.；Tabei，K.；Huang，N.；Seigal，M.M.；Lin，Y.I.；Rasmussen，B.A.和Shalaes，D.M.J.Biol.Chem.2000，35，26674-26682)但是，上述化合物对产生C类酶的微生物没有效果。棒酸与阿莫西林和替卡西林结合使用；类似地，舒巴克坦与氨苄西林，他巴克坦与氧哌嗪西林结合使用。EP0041768A、EP0120613A、EP0150781、EP0210065、WO87/00525、EP0003960B1、GB2042514A、GB2042515A、EP0087792A、EP0115308A、GB2124614B、EP0150984A、EP0087792、EP0115308、EP81301683.9、EP84301255.0、EP85100520.7、EP85100521.5、EP86305585.1、EP86305584、EP88311786.3、EP88311787.1、EP87300193.7、WO93/03042、WO94/10178、WO95/28935和WO95/17184公开了作为β-内酰胺酶抑制剂的6-(取代的亚甲基)青霉烯。EP0232966B1公开了制备6-(取代的亚甲基)青霉烯及其中间体的方法。根据该专利，通式I的化合物可通过四步法来制备，该方法由(5R，6S)6-溴青霉烯-3-甲酸对甲氧基苯甲酯A和醛在引火试剂如正丁基锂/二苯基胺或二(三甲基甲硅烷基)酰胺锂的存在下于-78℃起始(方案1)。该方法的第三步，即还原消除步骤分别得到E和Z化合物异构体D和F，比例为5∶1。
方案1
Figure C0380969500151
发明概述
本发明涉及制备通式I化合物的方法
Figure C0380969500161
其中：
A和B中的一个表示氢，另一个是任选地被一个或两个R2取代的芳基、任选地被一个或两个R2取代的杂芳基、任选地被一个或两个R2取代的稠合双环杂芳基、任选地被一个或两个R2取代的稠合三环杂芳基、任选地被一个或两个R2取代的环烷基、任选地被一个或两个R2取代的烷基、任选地被一个或两个R2取代的链烯基、任选地被一个或两个R2取代的炔基、任选地被一个或两个R2取代的饱和或部分饱和的杂芳基；其中任一所述的含有NH环原子的杂芳基部分可任选地在所述氮上被R1取代。
R5是H、C1-C6烷基、C5-6环烷基、或CHR3OCOC1-C6烷基或其盐；
R1是H、任选的取代的烷基、任选的取代的芳基、任选的取代的杂芳基或单或双环的饱和杂环、任选的取代的环烷基、任选的取代的链烯基、任选的取代的炔基，条件是直接与N相连的碳原子上不存在双键或三键；任选的取代的全氟烷基、-S(O)p任选的取代的烷基或芳基，其中p是0-2、任选的取代的-C＝O杂芳基、任选的取代的-C＝O芳基、任选的取代的-C＝O烷基、任选的取代的-C＝O环烷基、任选的取代的-C＝O单或双环饱和杂环、任选的取代的C1-C6烷基芳基、任选的取代的C1-C6烷基杂芳基、任选的取代的芳基-C1-C6烷基、任选的取代的杂芳基-C1-C6烷基、任选的取代的C1-C6烷基单或双环饱和杂环、任选的取代的8-16碳原子的芳基链烯基、-CONR6R7、-SO2NR6R7、任选的取代的芳基烷氧基烷基、任选的取代的-烷基-O-烷基芳基、任选的取代的-烷基-O-烷基杂芳基、任选的取代的芳氧基烷基、任选的取代的杂芳氧基烷基、任选的取代的芳氧基芳基、任选的取代的芳氧基杂芳基、任选的取代的C1-C6烷基芳氧基芳基、任选的取代的C1-C6烷基芳氧基杂芳基、任选的取代的烷基芳氧基烷基胺、任选的取代的烷氧基羰基、任选的取代的芳氧基羰基、或任选的取代的杂芳氧基羰基；
R2是H、任选的取代的C1-C6烷基、任选的取代的C2-C6链烯基、任选的取代的C2-C6炔基、卤素、氰基、N-R6R7、任选的取代的C1-C6烷氧基、羟基；任选的取代的芳基、任选的取代的杂芳基、COOR6、任选的取代的烷基芳氧基烷基胺、任选的取代的芳氧基、任选的取代的杂芳氧基、任选的取代的C3-C6链烯基氧基、任选的取代的C3-C6炔基氧基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷氧基、烷撑二氧基、任选的取代的芳氧基-C1-C6烷基胺、C1-C6全氟烷基、S(O)q任选的取代的C1-C6烷基、S(O)q任选的取代的芳基，其中q是0、1或2、CONR6R7、胍基或环状胍基、任选的取代的烷基芳基、任选的取代的芳基烷基、任选的取代的C1-C6烷基杂芳基、任选的取代的杂芳基-C1-C6烷基、任选的取代的C1-C6烷基单或双环饱和杂环、任选的取代的8-16碳原子的芳基链烯基、-SO2NR6R7、任选的取代的芳基烷氧基烷基、任选的取代的芳氧基烷基、任选的取代的杂芳氧基烷基、任选的取代的芳氧基芳基、任选的取代的芳氧基杂芳基、任选的取代的杂芳氧基芳基、任选的取代的C1-C6烷基芳氧基芳基、任选的取代的C1-C6烷基芳氧基杂芳基、任选的取代的芳氧基烷基、任选的取代的杂芳氧基烷基、或任选的取代的烷基芳氧基烷基胺；
R3是氢、C1-C6烷基、C5-C6环烷基、任选的取代的芳基、任选的取代的杂芳基；
R6和R7独立的是H、任选的取代的C1-C6烷基、任选的取代的芳基、任选的取代的杂芳基、任选的取代的C1-C6烷基芳基、任选的取代的芳基烷基、任选的取代的杂芳基烷基、任选的取代的C1-C6烷基杂芳基，R6和R7可一起形成3-7元的饱和环系，任选地具有一个或两个杂原子，如N-R1、O、S＝(O)n，n＝0-2；
所述方法包括：
(a)适当取代的醛17
A′-CHO
17
其中A′是当B为氢时上文所定义的A，或当A为氢时上文所定义的B
在路易斯酸和弱碱的存在下与结构16的6-溴青霉烯衍生物缩合
Figure C0380969500181
其中R是对硝基苯甲基，低温下形成中间体羟醛产物18
Figure C0380969500182
其中A′和R如上文所定义；
(b)中间体18与酰基氯或通式(R8)Cl或(R8)2O的酸酐、或与通式C(X1)4的四卤代甲烷，和三苯基膦反应，其中R8是烷基SO2、芳基SO2、烷基CO、或芳基CO；X1是Br、I、或Cl；形成中间体化合物19
其中R9是X1或OR8，其中R8、X1、A′和R如上文所定义；和(c)通过还原消除方法将中间体化合物19转化为所要的通式I化合物，其中R5是氢；如果需要的话转化为制药上可接受的盐或酯，其中R5是C1-C6烷基、C5-C6环烷基、或CHR3OCOC1-C6烷基。
本发明还提供了结构16的6-溴青霉烯衍生物
Figure C0380969500191
其中R是上文步骤(a)中所用的对硝基苯甲基。
本发明还提供了制备通式16的(5R，6S)6-溴青霉烯-3-甲酸-4-硝基苯甲酯的方法，包括下列步骤：
(A)(i)6-氨基青霉烷酸在有机溶剂和水中与氢溴酸反应形成6-溴衍生物21
Figure C0380969500192
21
和(ii)在碱存在的有机溶剂中利用4-硝基苯甲基溴将6-溴青霉烷酸21衍生物转化为6-溴青霉烷酸对硝基苯甲酯22
Figure C0380969500193
其中R是对硝基苯甲基；
(B)氧化6-溴青霉烷酸对硝基苯甲酯22形成6-溴青霉烷酸4-硝基苯甲酯-1-氧化物23
Figure C0380969500201
(C)6-溴青霉烷酸4-硝基苯甲-1-氧化物23与2-巯基苯并噻唑在芳族溶剂中回流形成(2R)-2-[(3S，4R)-4-(苯并噻唑-2-基二硫基)-3-溴-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-3-烯酸-4-硝基苯甲酯24；
(D)(2R)-2-[(3S，4R)-4-(苯并噻唑-2-基二硫基)-3-溴-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-3-烯酸-4-硝基苯甲酯24溶解于有机溶剂中，与有机叔碱反应形成2-[(3S，4R)-4-(苯并噻唑-2-基二硫基)-3-溴-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸-4-硝基苯甲酯25；
(E)在约-10℃至约-30℃，通过在有机酸、乙酸酐/有机叔碱和三烷基或三芳基膦存在的芳族有机溶剂中反应将2-[(3S，4R)-4-(苯并噻唑-2-基二硫基)-3-溴-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸-4-硝基苯甲酯25转化为2-[(3S，4R)-3-溴-4-甲酰基硫基-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸-4-硝基苯甲酯26；
(F)所述的2-[(3S，4R)-3-溴-4-甲酰基硫基-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸-4-硝基苯甲酯26在-70℃至-90℃溶解于有机溶剂中，通过臭氧处理的氧3-4小时，继而利用亚磷酸盐试剂进行分子内环化形成(5R，6S)-6-溴青霉烯-3-甲酸-4-硝基苯甲酯16。
该方法可利用下面的步骤方便地进行：
步骤1：在-10℃至-30℃，6-氨基青霉烷酸20在48％w/w氢溴酸和亚硝酸钠或亚硝酸钾溶液的存在下溶解于有机溶剂(优选甲醇或THF)和水中，形成6-溴衍生物21。该6-溴青霉烷酸21衍生物可分离，或就地在有机碱或无机碱(优选碳酸钠或钾)存在的有机溶剂(优选THF或DMF)中利用4-硝基苯甲基溴转化为6-溴青霉烷酸4-硝基苯甲酯22。
步骤2：通过步骤1所述的方法获得的产物6-溴青霉烷酸4-硝基苯甲酯22可分离或在同一容器中转化为6-溴青霉烷酸-4-硝基苯甲酯-1-氧化物23(即步骤1；连续形成)，利用任一公知的氧化剂如3-氯过苯甲酸(mcpba)或过氧化氢将22氧化为6-溴青霉烷酸-4-硝基苯甲酯-1-氧化物23。
步骤3：步骤2的产物，即6-溴青霉烷酸-4-硝基苯甲酯-1-氧化物23，可通过在芳族溶剂(优选甲苯或二甲苯)中6-溴青霉烷酸-4-硝基苯甲酯-1-氧化物23与2-巯基苯并噻唑回流转化为(2R)-2-[(3S，4R)-4-(苯并噻唑-2-基二硫基)-3-溴-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-3-烯酸-4-硝基苯甲酯24。
步骤4：步骤3的产物，即(2R)-2-[(3S，4R)-4-(苯并噻唑-2-基二硫基)-3-溴-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-3-烯酸-4-硝基苯甲酯24可溶解于有机溶剂(优选甲苯或二甲苯)中，室温与有机叔碱(优选三乙胺)反应得到2-[(3S，4R)-4-(苯并噻唑-2-基二硫基)-3-溴-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸-4-硝基苯甲酯25。
步骤5：步骤4的产物，即2-[(3S，4R)-4-(苯并噻唑-2-基二硫基)-3-溴-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸-4-硝基苯甲酯25，在约-10℃至约-30℃(优选约-15至-20℃)，通过在有机酸(优选甲酸)、乙酸酐/有机叔碱(优选吡啶)和三烷基或三芳基膦(优选三苯基膦)存在的芳族有机溶剂(优选甲苯)中反应转化为2-[(3S，4R)-3-溴-4-甲酰基硫基-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸-4-硝基苯甲酯26。
本发明的一种选择性的实施方案涉及化合物23向26的连续转化，不用分离中间体：
步骤2的产物，即6-溴青霉烷酸-4-硝基苯甲酯-1-氧化物23在回流的芳族有机溶剂(优选甲苯)中与巯基苯并噻唑反应优选1-3小时，并在0至-20℃用三乙胺处理3-4小时。处理之后，该反应混合物在-10℃至-40℃连续加入有机酸(优选甲酸)和酸酐(乙酸酐)，有机叔碱(优选吡啶)和三烷基或三芳基膦。
步骤6：来自步骤5或连续转化的产物2-[(3S，4R)-3-溴-4-甲酰基硫基-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸-4-硝基苯甲酯26在-70℃至-90℃溶解于有机溶剂(优选乙酸乙酯)中，通过臭氧处理的氧3-4小时，继而利用亚磷酸盐试剂(优选三甲基亚磷酸盐)进行分子内环化。由乙酸乙酯∶己烷中结晶出(5R，6S)-6-溴青霉烯-3-甲酸-4-硝基苯甲酯16。
本发明还涉及下面通式(16)所表示的化合物：
Figure C0380969500221
在上述的制备方法中(步骤1到步骤6)，通式16表示的化合物是用于制备通式I的6-(取代的亚甲基)青霉烯的中间体。
通式16表示的化合物是晶体衍生物(X-射线粉末衍射参数如表2所示)。
该中间体的晶体性质赋予了稳定性，从而延长了储存期限。通式16化合物的稳定数据如表1所示。
步骤7：(5R，6S)-6-溴青霉烯-3-甲酸-4-硝基苯甲酯16与适当取代的醛(如上文所定义)反应以完成羟醛缩合步骤，可在路易斯酸(优选无水MgBr2或MgBr2：醚合物)
Figure C0380969500222
和有机叔碱(优选Et3N、吡啶、二甲基氨基吡啶(DMAP)、或二异丙基乙胺三烷基胺)存在的非质子极性有机溶剂(优选THF和/或乙腈)中在-10℃至-40℃进行。通式18的中间体羟醛产物在同一容器中0℃至-10℃被官能团化得到酯离去基团，如与酰基氯或酸酐反应得到乙酸酯，与三氟甲基磺酸酸酐(triflic anhydride)得到三氟甲基磺酸酯(triflate)，或与甲苯磺酰氯得到甲苯磺酸酯；或者，如果分离通式18，它可通过将18与四卤代甲烷和三苯基膦室温在适合的有机溶剂优选CH2Cl2中反应转化为卤素衍生物。
步骤8：最后一步，即得到通式I化合物的还原消除步骤可通过将羟醛产物混合物室温(优选20℃-35℃)溶解在有机溶剂(优选THF/乙腈)，pH6.0-8.5，优选6.5-7，pH磷酸盐缓冲液和活化金属如锌、锡或铝的混合物中来进行。碱金属盐产物可通过反相离子交换树脂柱色谱法进行纯化。
有选择性地，步骤7和步骤8可在同一容器中连续进行，不用分离羟醛中间体。
最后一步，即还原消除步骤可通过将羟醛产物溶解在有机溶剂(如THF或乙腈)和6.5-7.0的磷酸缓冲液中并通过Pd/C在10-100psi(优选40psi)压力下氢化来进行。
有代表性的实例如方案A所示，该方案阐述了本发明。在方案A中列出了适合的反应条件，但是也可使用其它的不违背本发明精神的反应条件。例如，可使用更短或更长的反应时间；通常反应时间越长反应越完全。
Figure C0380969500241
优选方案
本发明提供了制备通式I化合物的方法
其中：
A和B中的一个表示氢，另一个是任选地被一个或两个R2取代的芳基、任选地被一个或两个R2取代的杂芳基、任选地被一个或两个R2取代的稠合三环杂芳基、任选地被一个或两个R2取代的环烷基、任选地被一个或两个R2取代的烷基、任选地被一个或两个R2取代的链烯基、任选地被一个或两个R2取代的炔基、任选地被一个或两个R2取代的饱和或部分饱和的杂芳基。
R5是H、体内可水解的酯，如C1-C6烷基、C5-6环烷基、CHR3OCOC1-C6或盐如Na、K、或Ca。
R1是H、任选的取代的-C1-C6烷基、任选的取代的芳基、任选的取代的杂芳基或单或双环饱和杂环、任选的取代的-C3-C7环烷基、任选的取代的-C3-C6链烯基、任选的取代的-C3-C6炔基，条件是直接与N相连的碳原子上不存在双键或三键；任选的取代的-C1-C6全氟烷基、-S(O)p任选的取代的烷基或芳基，其中p是2、任选的取代的-C＝O杂芳基、任选的取代的-C＝O芳基、任选的取代的-C＝O(C1-C6)烷基、任选的取代的-C＝O(C3-C6)环烷基、任选的取代的-C＝O单或双环饱和杂环、任选的取代的C1-C6烷基芳基、任选的取代的C1-C6烷基杂芳基、任选的取代的芳基-C1-C6烷基、任选的取代的杂芳基-C1-C6烷基、任选的取代的C1-C6烷基单或双环饱和杂环、任选的取代的8-16碳原子的芳基链烯基、-CONR6R7、-SO2NR6R7、任选的取代的芳基烷氧基烷基、任选的取代的-烷基-O-烷基芳基、任选的取代的-烷基-O-烷基杂芳基、任选的取代的芳氧基烷基、任选的取代的杂芳氧基烷基、任选的取代的芳氧基芳基、任选的取代的芳氧基杂芳基、任选的取代的C1-C6烷基芳氧基芳基、任选的取代的C1-C6烷基芳氧基杂芳基、任选的取代的烷基芳氧基烷基胺、任选的取代的烷氧基羰基、任选的取代的芳氧基羰基、任选的取代的杂芳氧基羰基。优选的R1基团是H、任选的取代的烷基、任选的取代的芳基、-C＝O(C1-C6)烷基、C3-C6链烯基、C3-C6炔基、任选的取代的环烷基、SO2烷基、SO2芳基、任选的取代的杂环、-CONR6R7、和任选的取代的杂芳基。
R2是H、任选的取代的C1-C6烷基、任选的取代的具有1-2个双键的C2-C6链烯基、任选的取代的具有1-2个三键的C2-C6炔基、卤素、氰基、N-R6R7、任选的取代的C1-C6烷氧基、羟基；任选的取代的芳基、任选的取代的杂芳基、COOR6、任选的取代的烷基芳氧基烷基胺、任选的取代的芳氧基、任选的取代的杂芳氧基、任选的取代的C3-C6链烯基氧基、任选的取代的C3-C6炔基氧基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷氧基、烷撑二氧基、任选的取代的芳氧基-C1-C6烷基胺、C1-C6全氟烷基、S(O)q任选的取代的C1-C6烷基、S(O)q-任选的取代的芳基，其中q是0、1或2、CONR6R7、胍基或环状胍基、任选的取代的C1-C6烷基芳基、任选的取代的芳基烷基、任选的取代的C1-C6烷基杂芳基、任选的取代的杂芳基-C1-C6烷基、任选的取代的C1-C6烷基单或双环饱和杂环、任选的取代的8-16碳原子的芳基链烯基、SO2NR6R7、任选的取代的芳基烷氧基烷基、任选的取代的芳氧基烷基、任选的取代的杂芳氧基烷基、任选的取代的芳氧基芳基、任选的取代的芳氧基杂芳基、取代的杂芳氧基芳基、任选的取代的C1-C6烷基芳氧基芳基、任选的取代的C1-C6烷基芳氧基杂芳基、任选的取代的芳氧基烷基、任选的取代的杂芳氧基烷基、任选的取代的烷基芳氧基烷基胺。优选的R2基团是H、任选的取代的烷基、任选的取代的烷氧基、任选的取代的杂芳基、卤素、CN、羟基、任选的取代的杂环、-CONR6R7、COOR6、任选的取代的芳基、S(O)q-烷基、和S(O)q-芳基。
R3是氢、C1-C6烷基、C5-C6环烷基、任选的取代的芳基、任选的取代的杂芳基。
R4是H、任选的取代的C1-C6烷基，R4中的一个是OH、C1-6烷氧基、-S-C1-C6烷基、COOR6、-NR6R7、-CONR6R7；或R4R4可一起为＝O，或R4R4可与连结它们的碳一起形成5-8元的螺环系，有或无选自N、O、S＝(O)n(其中n＝0-2)、N-R1的杂原子；
R6和R7独立的是H、任选的取代的C1-C6烷基、任选的取代的芳基、任选的取代的杂芳基、任选的取代的C1-C6烷基芳基、任选的取代的芳基烷基、任选的取代的杂芳基烷基、任选的取代的C1-C6烷基杂芳基，R6和R7可一起形成3-7元的饱和环系，任选的具有一个或两个杂原子，如N-R1、O、S＝(O)n，n＝0-2。
化学定义
术语烷基意思是直链或支链的含有1-12，优选1-6个碳原子的烷基部分。
术语链烯基意思是直链和支链的2-8个碳原子含有至少一个双键的链烯基部分，没有三键，优选具有1或两个双键的链烯基部分。上述链烯基部分可以E或Z构象存在；本发明化合物包括两种构象。在链烯基中，与双键键合的碳原子上不应当存在杂原子如O、S、或N-R1；
术语炔基包括直链和支链的2-6个碳原子含有至少一个三键的炔基，优选炔基部分具有一个或两个三键。在炔基中，与双键或三键键合的碳原子上不应当存在杂原子如O、S、或N-R1；
术语环烷基指具有3-7个碳原子的脂环烃。
此处使用的术语全氟烷基指具有至少一个碳原子和两个或多个氟原子的直链和支链饱和脂肪烃。实例包括CF3、CH2CF3、CF2CF3和CH(CF3)2。
术语卤素定义为Cl、Br、F和I。
如果烷基、链烯基、炔基、或环烷基是“任选的取代的”，下列基团中的一种或两种是可能的取代基：硝基、-芳基、-杂芳基、烷氧基羰基-、-烷氧基、-烷氧基烷基、烷基-O-C2-C4烷基-O-、-氰基、-卤素、-羟基、-N-R6R7、-三氟甲基、-三氟甲氧基、芳基烷基、烷基芳基、R6R7N-烷基-、HO-C1-C6-烷基-、烷氧基烷基-、烷基-S-、-SO2N-R6R7、-SO2NHR6、-CO2H、CONR6R7、芳基-O-、杂芳基-O-、-S(O)s-芳基(其中s＝0-2)、-烷基-O-烷基-NR6R7、-烷基芳基-O-烷基N-R6R7、C1-C6烷基、链烯基、炔基、环烷基、烷氧基烷基-O-、R6R7N-烷基-、和-S(O)，-杂芳基(其中s＝0-2)；烷基、链烯基、炔基和环烷基优选的取代基包括：卤素、硝基、芳基、杂芳基、烷氧基羰基-、烷氧基、-烷氧基烷基、-氰基、羟基、和-N-R6R7。
芳基定义为选自下列基团的芳香烃部分：苯基、α-萘基、β-萘基、联苯基、蒽基、四氢萘基、芴基、茚满基、亚联苯基、苊基。
杂芳基定义为芳杂环系(单环或双环)，其中的杂芳基部分选自：(1)呋喃、噻吩、吲哚、氮杂吲哚、噁唑、噻唑、异噁唑、异噻唑、咪唑、N-甲基咪唑、吡啶、嘧啶、吡嗪、吡咯、N-甲基吡咯、吡唑、N-甲基吡唑、1，3，4-噁二唑、1，2，4-三唑、1-甲基-1，2，4-三唑、1H-四唑、1-甲基四唑、苯并噁唑、苯并噻唑、苯并呋喃、苯并异噁唑、苯并咪唑、N-甲基苯并咪唑、氮杂苯并咪唑、吲唑、喹唑啉、喹啉、和异喹啉；(2)双环芳杂环，其中苯基、吡啶、嘧啶或吡地嗪环是：(a)与具有一个氮原子的6元芳(不饱和)杂环稠合；(b)与具有两个氮原子的5或6元芳(不饱和)杂环稠合；(c)与具有一个氮原子和一个氧原子或一个硫原子的5元芳(不饱和)杂环稠合；或(d)与具有一个选自O、N或S的杂原子的5元芳(不饱和)杂环稠合。
如果芳基或杂芳基是′任选的取代的′，下列基团中的一个或两个是可能的取代基：硝基、-芳基、-杂芳基、烷氧基羰基-、-烷氧基、-烷氧基烷基、烷基-O-C2-C4烷基-O-、-氰基、-卤素、-羟基、-N-R6R7、-三氟甲基、-三氟甲氧基、芳基烷基、烷基芳基、R6R7N-烷基-、HO-C1-C6-烷基-、烷氧基烷基-、烷基-S-、-SO2N-R6R7、-SO2NHR6、-CO2H、CONR6R7、芳基-O-、杂芳基-O-、-S(O)s-芳基(其中s＝0-2)、-烷基-O-烷基-NR6R7、-烷基芳基-O-烷基N-R6R7、C1-C6烷基、链烯基、炔基、环烷基、烷氧基烷基-O-、R6R7N-烷基-、和-S(O)s-杂芳基(其中s＝0-2)；芳基和杂芳基优选的取代基包括：烷基、卤素、-N-R6R7、三氟甲基、-三氟甲氧基、芳基烷基、和烷基芳基。
芳基烷基定义为芳基-C1-C6烷基-；芳基烷基部分包括苄基、1-苯乙基、2-苯乙基、3-苯基丙基、2-苯基丙基等。术语′任选的取代的′指在如上文所定义的芳基或烷基部分未被取代或被1或2个取代基取代。
烷基芳基定义为C1-C6烷基-芳基-。术语′任选的取代的′指在如上文所定义的芳基或烷基部分未被取代或被1或2个取代基取代。
杂芳基-C1-C6-烷基定义为杂芳基取代的烷基部分，其中烷基链是1-6碳原子(直链或支链)的。烷基杂芳基部分包括杂芳基-(CH2)1-6-等。术语′任选的取代的′指在如上文所定义的烷基或杂芳基部分未被取代或被1或2个取代基取代。
C1-C6烷基杂芳基定义为与杂芳基部分连结的含有1-6个碳原子的烷基链(直链或支链)，该杂环部分与分子的其它部分键合。Ex.C1-C6-烷基杂芳基-。术语′任选的取代的′指在如上文所定义的烷基或杂芳基部分未被取代或被1或2个取代基取代；
饱和或部分饱和的杂环基定义为选自下列部分的杂环：吖丙啶基、氮杂环丁烷基、1，4-二噁烷基、六氢氮杂基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、硫代吗啉基、二氢苯并咪唑基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并噁唑基、二氢呋喃基、二氢咪唑基、二氢吲哚基、二氢异噁唑基、二氢异噻唑基、二氢噁二唑基、二氢噁唑基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氢喹啉基、二氢四唑基、二氢噻二唑基、二氢噻唑基、二氢噻吩基、二氢三唑基、二氢氮杂环丁烷基、二氢-1，4-二噁烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢喹啉基和四氢异喹啉基。
C1-C6烷基单或双环饱和或部分饱和的杂环定义为通过碳原子或氮原子与杂环(如前文所定义)相连的C1-C6烷基(直链或支链)，烷基链的另一端与分子的其它部分相连。术语′任选的取代的′指在前文所定义的分子的烷基或杂环部分未被取代或被1或2个取代基所取代；
芳基烷氧基烷基定义为芳基-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基-。术语′任选的取代的′指前文所定义的烷基和/或芳基部分未被取代或被1或2个取代基所取代；
烷氧基烷基定义为C1-C6烷基-O-C1-C6烷基。术语′任选的取代的′指前文所定义的烷基部分未被取代或被1或2个取代基所取代；
芳氧基烷基定义为芳基-O-C1-C6烷基。术语′任选的取代的′指前文所定义的烷基或芳基部分未被取代或被1或2个取代基所取代；
杂芳基烷氧基烷基定义为杂芳基-C1-C6烷基-O-C1-C6烷基。术语′任选的取代的′指前文所定义的烷基或杂芳基部分未被取代或被1或2个取代基所取代；
芳氧基芳基定义为芳基-O-芳基-。术语′任选的取代的′指前文所定义的芳基部分未被取代或被1或2个取代基所取代；
芳氧基杂芳基定义为芳基-O-杂芳基-或-芳基-O-杂芳基；在该定义中，芳基部分或杂芳基部分可与分子的剩余部分相连；术语′任选的取代的′指前文所定义的芳基部分或杂芳基部分未被取代或被1或2个取代基所取代；
烷基芳氧基芳基定义为芳基-O-芳基-C1-C6烷基；术语′任选的取代的′指前文所定义的芳基部分未被取代或被1或2个取代基所取代；
烷基芳氧基杂芳基定义为杂芳基-O-芳基-C1-C6烷基-；术语′任选的取代的′指前文所定义的芳基部分或杂芳基部分未被取代或被1或2个取代基所取代；
烷基芳氧基烷基胺定义为R6R7N-C1-C6烷基-O-芳基-C1C6烷基；术语′任选的取代的′指前文所定义的烷基或芳基部分未被取代或被1或2个取代基所取代；R6和R7如前文所定义；
烷氧基羰基定义为C1-C6烷基-O-C＝O-；术语′任选的取代的′指前文所定义的烷氧基部分的烷基部分未被取代或被1或2个取代基所取代；
芳氧基羰基定义为芳基-O-C＝O-；术语′任选的取代的′指前文所定义的芳基部分未被取代或被1或2个取代基所取代；
杂芳氧基羰基定义为杂芳基-O-C＝O-；术语′任选的取代的′指前文所定义的杂芳基部分未被取代或被1或2个取代基所取代；
烷氧基定义为C1-C6烷基-O-；术语′任选的取代的′指前文所定义的烷基部分未被取代或被1或2个取代基所取代；
芳氧基定义为芳基-O-；术语′任选的取代的′指前文所定义的芳基部分未被取代或被1或2个取代基所取代；
杂芳氧基定义为杂芳基-O-；术语′任选的取代的′指前文所定义的杂芳基部分未被取代或被1或2个取代基所取代；
链烯基氧基定义为C3-C6链烯-O-；实例类似于烯丙基-O-、丁-2-烯-O部分；术语′任选的取代的′指前文所定义的链烯基部分未被取代或被1或2个取代基所取代，条件是与双键相连的碳原子上不存在杂原子如O、S或N-R1；
炔基氧基定义为C3-C6炔烃-O-；实例类似于CH三键C-CH2-O-部分；术语′任选的取代的′指前文所定义的炔烃部分未被取代或被1或2个取代基所取代，条件是与双键或三键相连的碳原子上不存在杂原子如O、S或N-R1；
烷基氨基烷氧基定义为R6R7N-C1-C6-烷基-O-C1-C6-烷基-，其中与氧相连的末端烷基与分子的其它部分相连。术语R6和R7如上文所定义；术语′任选的取代的′指前文所定义的烷基部分未被取代或被1或2个取代基所取代；
亚烷基二氧基定义为-O-(CH2)2-O-；
芳氧基烷基胺定义为R6R7N-C1-C6-烷基-O-芳基-，其中芳基与分子的其它部分相连；术语′任选的取代的′指前文所定义的烷基或芳基部分未被取代或被1或2个取代基所取代；
芳基链烯基定义为芳基-C2-C8链烯烃-，条件是与双键相连的碳原子上不存在杂原子如O、S或N-R1；术语′任选的取代的′指前文所定义的链烯烃或芳基部分未被取代或被1或2个取代基所取代；
杂芳氧基烷基定义为杂芳基-O-C1-C6烷基-；术语′任选的取代的′指前文所定义的杂芳基部分未被取代或被1或2个取代基所取代；
杂芳氧基芳基定义为杂芳基-O-芳基-，其中芳基部分与分子的其它部分相连；术语′任选的取代的′指前文所定义的杂芳基部分或芳基部分未被取代或被1或2个取代基所取代；
烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基烷氧基和烷硫基烷氧基是其中的烷基链具有1-6个碳原子(直链或支链)的部分。芳氧基、杂芳氧基、芳硫基和杂芳硫基是其中的芳基和杂芳基如前文所定义的部分。芳基烷氧基、杂芳基烷氧基、芳基烷硫基和杂芳基烷硫基是其中的芳基和杂芳基如前文所定义和其中的烷基链是1-6个碳原子(直链或支链)的部分。
芳氧基烷基、杂芳氧基烷基、芳氧基烷氧基和杂芳氧基烷氧基是其中的烷基是1-6个碳原子的取代基。术语单烷基氨基和二烷基氨基指具有一个或两个烷基的部分，其中烷基链是1-6个碳原子的，该基团可相同或不同。术语单烷基氨基烷基和二烷基氨基烷基指具有一个或两个烷基(相同或不同)的单烷基氨基和二烷基氨基部分，该烷基键合到连结有含有1-3个碳原子的烷基的氮原子上。
说明书和权利要求书中使用的表述″稠合的三环杂芳基″意思是：含有三个稠合环的基团，其中至少一个环具有芳香特性(即满足休克尔规则(4n+2))。稠合的三环杂芳基含有1-6个选自O、S、N和N-R1的杂原子。稠合的三环杂芳基必须通过一个碳原子，优选至少一个芳环上的一个碳原子与通式I分子的剩余部分键合。稠合的三环杂芳基可含有1-3个芳环和0-2个非芳环。稠合的三环杂芳基中的每个芳环可含有5-7个选自CR2、O、S、N、和N-R1的环原子(包括桥头原子)。稠合的三环杂芳基中的每个芳环可含有0-3个选自O、S、N和N-R1的杂原子。如果有的话，稠合的三环杂芳基中的非芳环可含有5-8个环原子(包括桥头原子)和含有0-4个选自N、N-R1、O或S(O)n的杂原子，其中n是0-2。在稠合的三环杂芳基的每一个非芳环中，非桥头碳原子的一个或两个可彼此任选地被一个或两个R4取代，每个R4可独立地相同或不同。
稠合三环杂芳基的实例包括：
环的大小和排列：(5-5-5)
在通式1-A和1-B中，Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6和Z7独立地选自CR2、N、O、S或N-R1，上述的Z1-Z7中之一是与分子的青霉烯部分相连的碳原子。Y1、Y2、Y3和Y4可独立的是C或N。
环的大小和排列：(5-5-6)
在通式2-A和2-B中，Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7和Z8独立地选自CR2、N、O、S或N-R1，上述的Z1-Z8中之一是与分子的青霉烯部分相连的碳原子。Y1、Y2、Y3和Y4可独立的是C或N。
环的大小和排列：(5-6-5)
Figure C0380969500331
在通式3-A和3-B中，Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7和Z8独立地选自CR2、N、O、S或N-R1，上述的Z1-Z8中之一是与分子的青霉烯部分相连的碳原子。Y1、Y2、Y3和Y4可以是C或N。
环的大小和排列：(5-6-6)
Figure C0380969500332
在通式4-A、4-B和4-C中；Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7和Z8独立地选自CR2、N、O、S或N-R1，上述的Z1-Z8中之一是与分子的青霉烯部分相连的碳原子。Y1、Y2、Y3和Y4独立的是C或N。
环的大小和排列：[5-5-(非芳环)]
Figure C0380969500341
在通式5-A和5-B中，Z1、Z2、Z3和Z4独立地选自CR2、N、O、S或N-R1，上述的Z1-Z4中之一是与分子的青霉烯部分相连的碳原子；Y1、Y2、Y3和Y4独立的是C或N。W1、W2和W3独立地选自CR4R4、S(O)r(r＝0-2)、O、和NR1，条件是没有可形成饱和环的S-S、S-O或O-O键形成；和t＝1-3。
环的大小和排列：[5-6-(非芳环)]
Figure C0380969500342
在通式6-A、6-B和6-C中，Z1、Z2、Z3、Z4和Z5独立地选自CR2、N、O、S或N-R1，上述的Z1-Z5中之一是与分子的青霉烯部分相连的碳原子。Y1和Y2独立的是C或N。W1、W2和W3独立地选自CR4R4、S(O)r(r＝0-2)、O、和NR1，条件是没有可形成饱和环的S-S、S-O或O-O键形成；和t＝1-3。
环的大小和排列：[5-(非芳环)-5]
Figure C0380969500343
在通式7-A和7-B中，Z1、Z2、Z3、Z4、Z5和Z6独立地选自CR2、N、O、S或N-R1，上述的Z1-Z6中之一是与分子的青霉烯部分相连的碳原子。Y1、Y2、Y3和Y4独立的是C或N。W1和W2独立地选自CR4R4、S(O)r(r＝0-2)、O、和NR1，条件是没有可形成饱和环的S-S、S-O或O-O键形成；和t＝1-3。
环的大小和排列：[5-(非芳环)-6]
Figure C0380969500351
在通式8-A和8-B中，Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6和Z7独立地选自CR2、N、O、S或N-R1，上述的Z1-Z7中之一是与分子的青霉烯部分相连的碳原子。Y1、Y2、Y3和Y4独立的是C或N。W1和W2独立地选自CR4R4、S(O)r(r＝0-2)、O、或NR1，条件是没有可形成饱和环的S-S、S-O或O-O键形成；和t＝1-3。
环的大小和排列：[5-(非芳环)-(非芳环)]
Figure C0380969500352
在通式9-A和9-B中，Z1、Z2和Z3独立地选自CR2、N、O、S或N-R1，上述的Z1-Z3中之一是与分子的青霉烯部分相连的碳原子。Y1和Y4独立的是C或N；Y2和Y3独立的是CH或N；W1、W2、W3、W4和W5独立地选自CR4R4、S(O)r(r＝0-2)、O、或NR1，条件是没有可形成饱和环的S-S、S-O或O-O键形成；t＝0-2和u＝1-3。
环的大小和排列：(6-5-6)
Figure C0380969500361
在通式10-A和10-B中，Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8和Z9独立地选自CR2、N、O、S或N-R1，上述的Z1-Z9中之一是与分子的青霉烯部分相连的碳原子。Y1、Y2、Y3和Y4独立的是C或N。
环的大小和排列：(6-6-6)
Figure C0380969500362
在通式11-A、11-B和11-C中，Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9和Z10独立地选自CR2、N、O、S或N-R1，上述的Z1-Z10中之一是与分子的青霉烯部分相连的碳原子。Y1、Y2、Y3和Y4独立的是C或N。
环的大小和排列：[6-5-(非芳环)]
Figure C0380969500371
在通式12-A和12-B中，Z1、Z2、Z3、Z4和Z5独立地选自CR2、N、O、S或N-R1，条件是上述的Z1-Z5中之一是与分子的青霉烯部分相连的碳原子。Y1、Y2、Y3和Y4独立的是C或N。W1、W2、W3独立是O、N-R1、或S(O)r(r＝0-2)，条件是没有可形成饱和环的S-S、S-O或O-O键形成；和t＝1-4。
环的大小和排列：[6-6-(非芳环)]
Figure C0380969500372
在通式13-A、13-B和13-C中，Z1、Z2、Z3、Z4、Z5和Z6独立的是CR2、N、O、S或N-R1，上述的Z1-Z6中之一是与分子的青霉烯部分相连的碳原子。Y1、Y2、Y3和Y4独立的是C或N。W1、W2和W3独立的是CR4R4、S(O)r(r＝0-2)、O、或NR1，条件是没有可形成饱和环的S-S、S-O或O-O键形成；和t＝1-3。
环的大小和排列：[6-(非芳环)-6]
Figure C0380969500381
在通式14-A、14-B和14-C中，Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7和Z8独立的是CR2、N、O、S或N-R1，上述的Z1-Z8中之一是与分子的青霉烯部分相连的碳原子。Y1、Y2、Y3和Y4独立的是C或N。W1、W2和W3独立的是CR4R4、S(O)r(r＝0-2)、O、或NR1，条件是没有可形成饱和环的S-S、S-O或O-O键形成；和t＝1-2。
环的大小和排列：[6-(非芳环)-(非芳环)]
Figure C0380969500382
在通式15-A、15-B和15-C中，Z1、Z2、Z3和Z4独立的是CR2、N、O、S或N-R1，上述的Z1-Z4中之一是与分子的青霉烯部分相连的碳原子。Y1、Y2、Y3和Y4独立的是C或N。W1、W2、W3和W4独立的是CR4R4、S(O)r(r＝0-2)、O、和NR1，条件是没有可形成饱和环的S-S、S-O或O-O键形成；t＝1-3和u＝1-3。
说明书和权利要求书中使用的表述′稠合双环杂芳基′意思是：含有两个稠合环的基团，其中一个环具有芳香性[即休克尔规则(4n+2)]，另一个环是非芳环；
稠合双环杂芳基含有1-6个选自O、S、N、和N-R1的杂原子；
稠合双环杂芳基通过通式I中所示的芳环中的碳原子与分子的剩余部分键合；
稠合双环杂芳基的芳环含有5-6个选自CR2、N、O、S或N-R1的环原子(包括桥头原子)。稠合双环杂芳基中的芳环含有0-3个选自O、S、N、和N-R1的杂原子；
稠合双环杂芳基的非芳环含有5-8个选自CR4R4、N、N-R1、O、S(O)n的环原子(包括桥头原子)，其中n＝0-2。稠合双环杂芳基的非芳环含有0-4个选自N、N-R1、O或S(O)n的杂原子，其中n＝0-2。
稠合双环杂芳基的实例包括：
Figure C0380969500391
在通式16-A中，Z1、Z2和Z3独立的是CR2、N、O、S或N-R1，Z1-Z3中的一个是碳原子，与通式I所示的分子的剩余部分键合。当Z中的一个是CR2时，另两个Z可以是两个N，或一个N和O、S、N-R1的不破坏芳香性的任一组合；当两个Z是CR2时，另一个Z可以任一不破坏芳香性的组合任选地选自N、O、S或N-R1；
W1、W2和W3独立的是CR4R4、S、SO、SO2、O、N-R1、C＝O；条件是没有会形成饱和环系的S-S或O-O或S-O键形成；t＝1-4。
在通式16-B中，Z1、Z2和Z3独立的是CR2、N、O、S或N-R1，Z1-Z3中的一个是碳原子，与通式I所示的分子的剩余部分键合。
当Z中的一个是CR2时，那么另两个Z可以任一不破坏芳香性的组合独立的是CR2、N、O、S或N-R1；
当两个Z是N时，那么环上的另一个碳与通式I所示分子的青霉烯部分键合；
W1、W2和W3独立的是CR4R4、S、SO、SO2、O、N-R、t＝1-4；
Y1和Y2＝N或C；条件是当芳杂环是咪唑时，饱和环不能含有与桥头碳相连的S。
在通式16-C中，Z1、Z2、Z3和Z4独立的是CR2或N，Z1-Z4中的一个是碳原子，与分子的剩余部分键合。
W1、W2和W3独立的是CR4R4、S、SO、SO2、O或N-R1；条件是没有会形成饱和环系的S-S或O-O或S-O键形成；t＝1-4。
Y1和Y2独立的是C或N。
发明方法
在路易斯酸，优选无水卤化镁，更优选MgBr2或MgBr2：醚合物和弱碱如三乙胺、DMAP、或二异丙基乙胺的存在下，在低温优选约-20℃至-40℃，通式I的化合物可以温和容易的方法通过适当取代的醛17与结构16的6-溴青霉烯衍生物缩合来制备。(方案2)中间体羟醛产物18可被酰基氯或酸酐优选地官能团化为乙酸酯、三氟甲基磺酸酯或甲苯磺酸酯19；或者，如果分离通式18，它可通过将18与四卤代甲烷和三苯基膦室温在适合的有机溶剂优选CH2Cl2中反应转化为卤素衍生物。化合物19可顺利地利用金属如活化锌和磷酸盐缓冲液在温和的温度优选约20℃-35℃、pH约6.5-8.0，或通过催化剂优选Pd/C氢化通过还原消除方法转化为所要的产物。应当注意，还原消除步骤应当进行到羧基去保护。如果羧酸酯氧上的保护基是对硝基苯甲基取代基，那么还原消除和去保护可通过一步来完成。但是，如果保护基不是对硝基苯甲基取代基，可根据保护基的性质分两步进行。产物可被分离为游离酸或碱金属盐。上述的两步法可通过不分离中间体19的完整方法在一步中完成。根据收率和经济可行性，该方法是相对简单和非常高效的方法，可用于制备多种化合物。该方法适用于大规模合成，适用于多种醛。
Figure C0380969500411
本发明的一个重要方面涉及稳定的溴代青霉烯中间体16的用途。中间体的稳定性与其中分解被最小化的羟醛缩合步骤有关[也与储藏期稳定性有关]。在本发明中，关键的中间体16，其中R＝对硝基苯甲基，是稳定的和结晶的中间体。在本发明中，已经发现中间体16比中间体Q更稳定。中间体16和Q的对比热稳定性数据如下表所示。(表1)中间体16显著的稳定性提高了化合物的储藏时间和规模扩大可行性。如上文所述，用对硝基苯甲基保护羧基减少了本方法中制备结构I最后化合物的步骤数。通过X-射线衍射研究中间体的晶体性质。表2列出了通式16的X-射线粉末参数。
Figure C0380969500421
Figure C0380969500422
1)通过HPLC分析检验。
温度40℃为固体状态。
HPLC条件：
柱子：Inertsil SIL 100-5 4.6X150mm(GL Science Inc.)
流动相：乙酸乙酯∶正己烷(10∶35vv)
波长：312nM；流速：1.0ml/min@室温。
表2
Figure C0380969500431
有利地是，在本发明的还原消除步骤中，非常优先地形成所要的“Z”异构体(约50∶1)45-55∶1。在反应混合物中没有观察到“E”异构体形成。还原消除步骤也可将中间体19通过10％Pb/C氢化来进行。
本发明中使用的中间体16可由市售的6-氨基青霉烷酸(6-APA)20来制备。(方案3)。它可通过方案3所描述的方法转化为溴代青霉烯16。6-氨基青霉烷酸(6-APA)20通过单容器法转化为溴-PNB衍生物22。该衍生物氧化为亚砜23，再进行开环反应得到24。化合物24通过方案3的方法转化为16。有利地是，在本发明中，化合物23向26的转化可在一个容器中进行，不用分离中间体24和25。如此获得的溴代青霉烯16与醛17(参见方案2)在无水MgRr2或市售MgBr2:O(Et)2的存在下反应。羟醛产物以乙酸酯的形式被收集，溴代乙酸酯19可方便地与活化锌(如新鲜的用0.1NHCl活化的)和磷酸盐缓冲液(6.5pH)室温反应转化为最后的产物I。该产物可方便地通过公知的方法如二价阴离子HP-21柱色谱法纯化。开始可用水洗脱柱子除去无机杂质，然后用10％的MeCN；水洗脱。通过该方法获得的产物纯度为98％，可通过结晶法进一步纯化。利用Et3N/和MgBr2的羟醛缩合反应是非常高效和一般的。本发明可延伸到多种醛来制备通式结构I的最后产物。
本发明涉及制备通式I化合物的方法
Figure C0380969500441
其中
A和B中的一个表示氢，另一个是任选地被一个或两个R2取代的芳基、任选地被一个或两个R2取代的杂芳基、任选地被一个或两个R2取代的稠合双环杂芳基、任选地被一个或两个R2取代的稠合三环杂芳基、任选地被一个或两个R2取代的环烷基、任选地被一个或两个R2取代的烷基、任选地被一个或两个R2取代的链烯基、任选地被一个或两个R2取代的炔基、任选地被一个或两个R2取代的饱和或部分饱和的杂芳基。
R5是H、体内可水解的酯，选自C1-C6烷基、C5-6环烷基、CHR3OCOC1-C6或选自Na、K、和Ca的盐；
R2是H、任选的取代的C1-C6烷基、任选的取代的具有1-2个双键的C2-C6链烯基、任选的取代的具有1-2个三键的C2-C6炔基、卤素、氰基、N-R6R7、任选的取代的C1-C6烷氧基、羟基；任选的取代的芳基、任选的取代的杂芳基、COOR6、任选的取代的烷基芳氧基烷基胺、任选的取代的芳氧基、任选的取代的杂芳氧基、任选的取代的C3-C6链烯基氧基、任选的取代的C3-C6炔基氧基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷氧基、烷撑二氧基、任选的取代的芳氧基-C1-C6烷基胺、C1-C6全氟烷基、S(O)q任选的取代的C1-C6烷基、S(O)q-任选的取代的芳基，其中q是0、1或2、CONR6R7、胍基或环状胍基、任选的取代的C1-C6烷基芳基、任选的取代的芳基烷基、任选的取代的C1-C6烷基杂芳基、任选的取代的杂芳基-C1-C6烷基、任选的取代的C1-C6烷基单或双环饱和杂环、任选的取代的8-16碳原子的芳基链烯基、SO2NR6R7、任选的取代的芳基烷氧基烷基、任选的取代的芳氧基烷基、任选的取代的杂芳氧基烷基、任选的取代的芳氧基芳基、任选的取代的芳氧基杂芳基、取代的杂芳氧基芳基、任选的取代的C1-C6烷基芳氧基芳基、任选的取代的C1-C6烷基芳氧基杂芳基、任选的取代的芳氧基烷基、任选的取代的杂芳氧基烷基、任选的取代的烷基芳氧基烷基胺。优选的R2基团是H、任选的取代的烷基、任选的取代的烷氧基、任选的取代的杂芳基、卤素、CN、羟基、任选的取代的杂环、-CONR6R7、COOR6、任选的取代的芳基、S(O)q-烷基、和S(O)q-芳基。
R3是氢、C1-C6烷基、C5-C6环烷基、任选的取代的芳基、任选的取代的杂芳基。
R6和R7独立的是H、任选的取代的C1-C6烷基、任选的取代的芳基、任选的取代的杂芳基、任选的取代的C1-C6烷基芳基、任选的取代的芳基烷基、任选的取代的杂芳基烷基、任选的取代的C1-C6烷基杂芳基，R6和R7可一起形成3-7元的饱和环系，任选的具有一个或两个杂原子，如N-R1、O、S＝(O)n，n＝0-2。
制备通式I化合物的方法包括
步骤1：在-10℃至-30℃，溶解于有机溶剂(优选甲醇或THF)和水中的6-氨基青霉烷酸20在48％w/w氢溴酸和亚硝酸钠或钾溶液的存在下转化为6-溴衍生物。该6-溴青霉烷酸21衍生物可分离，或就地在有机碱或无机碱(优选碳酸钠或钾)存在的有机溶剂(优选THF或DMF)中利用4-硝基苯甲基溴转化为6-溴青霉烷酸-4-硝基苯甲酯22。
步骤2：通过步骤1所述的方法获得的产物6-溴青霉烷酸-4-硝基苯甲酯22可分离或在同一容器中转化为6-溴青霉烷酸-4-硝基苯甲酯-1-氧化物23(即步骤1；连续形成)，利用氧化剂如3-氯过苯甲酸(mcpba)或过氧化氢将22氧化为6-溴青霉烷酸-4-硝基苯甲酯-1-氧化物23。
步骤3：步骤2的产物，即6-溴青霉烷酸-4-硝基苯甲酯-1-氧化物23，可通过在芳族溶剂(优选甲苯)中6-溴青霉烷酸-4-硝基苯甲酯-1-氧化物23与2-巯基苯并噻唑(HSBT)回流转化为(2R)-2-[(3S，4R)-4-(苯并噻唑-2-基二硫基)-3-溴-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-3-烯酸-4-硝基苯甲酯24。
步骤4：步骤3的产物，即(2R)-2-[(3S，4R)-4-(苯并噻唑-2-基二硫基)-3-溴-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-3-烯酸4-硝基苯甲酯24可溶解于有机溶剂(优选甲苯)中，室温与有机叔碱(优选三乙胺)反应得到2-[(3S，4R)-4-(苯并噻唑-2-基二硫基)-3-溴-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸-4-硝基苯甲酯25。
步骤5：步骤4的产物，即2-[(3S，4R)-4-(苯并噻唑-2-基二硫基)-3-溴-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸-4-硝基苯甲酯25，在约-10℃至约-30℃，通过在有机酸(优选甲酸)、乙酸酐/有机叔碱(优选吡啶)和三烷基或三芳基膦(优选三苯基膦)存在的芳族有机溶剂(优选甲苯)中反应转化为2-[(3S，4R)-3-溴-4-甲酰基硫基-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸-4-硝基苯甲酯26。
不用分离中间体化合物23向26的连续转化：
步骤2的产物，即6-溴青霉烷酸-4-硝基苯甲酯-1-氧化物23在回流的芳族有机溶剂(优选甲苯)中与巯基苯并噻唑反应1-3小时，并在0至-20℃用三乙胺处理3-4小时。处理之后，该反应混合物在-10℃至-40℃连续加入有机酸(优选甲酸)和酸酐(乙酸酐)，有机叔碱(优选吡啶)和三烷基或三芳基膦。
步骤6：来自步骤5或连续转化的产物2-[(3S，4R)-3-溴-4-甲酰基硫基-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸-4-硝基苯甲酯26在-70℃至-90℃溶解于有机溶剂(优选乙酸乙酯)中，通过臭氧处理的氧3-4小时，继而利用亚磷酸盐试剂(优选三甲基亚磷酸盐)进行分子内环化。由乙酸乙酯∶己烷中结晶出(5R，6S)-6-溴青霉烯-3-甲酸-4-硝基苯甲酯16。
用下面通式(16)表示的化合物：
在上述的制备方法(步骤1-步骤6)中，通式16表示的化合物是用于制备通式I的6-(取代的亚甲基)青霉烯的中间体。
通式16表示的化合物是晶体衍生物(X-射线粉末衍射参数如表2所示)。
该中间体的晶体性质给予了稳定性，从而延长了储存期限。通式16化合物的稳定数据如表1所示。
步骤7：(5R，6S)-6-溴青霉烯-3-甲酸-4-硝基苯甲酯16与适当取代的醛(如上文所定义)反应以完成羟醛缩合步骤，可在路易斯酸(优选无水MgBr2或MgBr2：醚合物)
Figure C0380969500472
和有机叔碱(优选三乙胺、DMAP、或二异丙基乙基胺)存在的非质子极性有机溶剂(优选THF和乙腈)中在-10℃至-40℃进行。通式18的中间体羟醛产物在同一容器中0℃至-10℃被官能团化，与酰基氯或酸酐反应得到乙酸酯，与三氟甲基磺酸酸酐得到三氟甲基磺酸酯，或与甲苯磺酰氯得到甲苯磺酸酯；或者，如果分离通式18，它可通过将18与四卤代甲烷和三苯基膦室温在适合的有机溶剂优选CH2Cl2中反应转化为卤素衍生物。
步骤8：最后一步，即得到通式I化合物的还原消除步骤可通过将羟醛产物混合物室温(优选20℃-35℃)溶解在有机溶剂(优选THF/乙腈)，6.5-7.0pH磷酸盐缓冲液和活化金属如锌、锡或铝的混合物中来进行。碱金属盐产物可通过反相树脂柱色谱法进行纯化。
有选择性地，步骤7和步骤8可在同一容器中连续进行，不用分离羟醛中间体。
最后一步，即还原消除步骤可通过将羟醛产物溶解在有机溶剂和6.5-7.0的磷酸缓冲液中并通过Pd/C在10-100psi(优选40psi)压力下氢化来进行。
Figure C0380969500491
实验
实施例1：制备(5R)-(Z)-6-(2，3-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-6-基亚甲基)青 霉烯-3-甲酸钠
步骤1：6-溴青霉烷酸对硝基苯甲酯
在-10℃，6-氨基青霉烷酸(5.0g)加入到甲醇(44mL)、水(14mL)和48％w/w氢溴酸(14mL)的冷却溶液中。加入完成后，混合物冷却至-15℃。亚硝酸钠溶液(2.4g溶解于6.6mL水中)5分钟内加入，所得的溶液不冷却再搅拌30分钟。氯化钠(2.4g)溶解于反应溶液中。反应混合物用二氯甲烷(2x 36mL)萃取。合并后的有机层用盐水(36mL)洗涤，干燥(MgSO4)，并在25℃减压浓缩至20mL。残余的溶液含有6-溴青霉烷酸，用于它的下一反应中。
无水碳酸钾(2.9g)、二甲基甲酰胺(40mL)、和4-硝基苯甲基溴(5.0g)连续地加入到残余溶液中，混合物在35-40℃搅拌1小时。反应溶液倒入到水(33mL)和二氯甲烷(41mL)的混合物中，分出有机层。有机层用水(40mL)和盐水(40mL)洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发。残余物经过硅胶柱色谱法，用乙酸乙酯-己烷(4/1)洗脱，获得题列化合物，无色固体(7.2g，75％)。
1H-NMR(δ，CDCl3：1.41(s，3H)，1.62(s，3H)，4.61(s，1H)，4.83(d，1H，J＝1.5Hz)，5.25 and 5.34(AB，2H，J＝13.0Hz)，5.41(d，1H，J＝1.5Hz)，7.56(d，2H，J＝8.7Hz)，8.26(d，2H，J＝8.7Hz)。
步骤2：6-溴青霉烷酸对硝基苯甲酯-1-氧化物
6-溴青霉烷酸对硝基苯甲酯(1.36g)溶解于二氯甲烷(20mL)中并冷却至0℃。3-氯过苯甲酸(0.56g)加入到溶液中并搅拌10分钟。反应溶液用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)并减压蒸发。残余物经过硅胶柱色谱法，用乙酸乙酯-己烷(1/1)洗脱，获得题列化合物，无色固体(1.4g，定量的)。
1H-NMR(δ，CDCl3)：1.17(s，3H)，1.69(s，3H)，4.60(s，1H)，5.04(d，1H，J＝1.5Hz)，5.10(d，1H，J＝1.5Hz)，5.30 and 5.37(AB，2H，J＝12.9Hz)，7.56(d，2H，J＝8.7Hz)，8.27(d，2H，J＝8.7Hz)。
6-溴青霉烷酸对硝基苯甲酯-1-氧化物的连续制备：
6-氨基青霉烷酸(500g)-10℃加入到甲醇(3.5L)、水(1.36L)、和48％w/w氢溴酸(1.36L)的冷却溶液中。加入完成后，混合物冷却至-15℃。30分钟内加入亚硝酸钠溶液(235g溶解于660mL水中)，所得的溶液不用冷却再搅拌30分钟。氯化钠(240g)溶解于该反应溶液中。反应混合物用二氯甲烷(2x 3L)萃取。合并后的有机层用盐水(3L)洗涤，干燥(MgSO4)，25℃减压浓缩至1.6L。残余溶液含有6-溴青霉烷酸，用于它的下一反应中。
无水碳酸钾(288g)、二甲基甲酰胺(2.8L)和4-硝基苯甲基溴(500g)连续地加入到残余溶液中，混合物35-40℃搅拌1小时。反应溶液倒入到水(2.8L)和二氯甲烷(3.4L)的混合物中，分出有机层。有机层用水(2.8L)和盐水(3L)洗涤并冷却至-2℃。有机层含有6-溴青霉烷酸对硝基苯甲酯，用于它的下一反应中。
3-氯过苯甲酸(355g)15分钟加入到有机层中并搅拌10分钟。反应混合物用乙酸乙酯(4.8L)稀释，并用饱和碳酸氢钠(7.6L)洗涤。分出有机层，用乙酸乙酯(3.9L)再萃取水层。合并后的有机层用水(3.9L)和盐水(3.9L)洗涤，干燥(MgSO4)，30℃减压蒸发。残余固体用乙酸乙酯(1.8L)研制30分钟并在1小时内向该混合物中逐滴地加入己烷(5.4L)。过滤固体，滤饼用乙酸乙酯-己烷(1/4，0.8L)洗涤。固体风干1小时，真空干燥并在室温过夜。获得题列化合物，浅黄色结晶固体(768g，77％)。
Figure C0380969500511
步骤3：(2R)-2-[(3S，4R)-4-(苯并噻唑-2-基二硫基)-3-溴-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-3-烯酸对硝基苯甲酯
6-溴青霉烷酸对硝基苯甲酯-1-氧化物(4.31g)和巯基苯并噻唑(1.67g)在回流的甲苯(14mL)中加热1小时，同时补充共沸分出的水(迪安-斯达克装置)。冷却至室温后，反应溶液减压蒸发。残余物经过硅胶柱色谱法，用乙酸乙酯-己烷(2/5)洗脱，获得题列化合物，浅黄色固体(5.67g，98％)。
1H-NMR(δ，CDCl3)：1.92(s，3H)，4.87(s，1H)，5.05(s，1H)，5.10(d，1H，J＝1.7Hz)，5.21(s，4H)，7.39(t，1H，J＝7.1Hz)，7.41-7.50(m，3H)，7.81(d，1H，J＝8.0Hz)，7.90(d，1H，J＝8.0Hz)，8.20(d，2H，J＝8.8Hz)。
Figure C0380969500521
步骤-4：2-[(3S，4R)-4-(苯并噻唑-2-基二硫基)-3-溴-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸对硝基苯甲酯
(2R)-2-[(3S，4R)-4-(苯并噻唑-2-基二硫基)-3-溴-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-3-烯酸对硝基苯甲酯(5.1g)溶解于甲苯(50mL)中，冷却至0℃，用三乙胺(0.12mL)处理。0℃搅拌2小时后，反应溶液用1M的HCl、水、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，并减压蒸发。残余物经过硅胶柱色谱法，用乙酸乙酯-己烷洗脱(1/3)，获得题列化合物，无色固体(4.16g，81％)。更多的极性馏分(fraction)含有对称的二硫化物，无色固体(0.68g，19％)。
1H-NMR(δ，CDCl3)：2.01(s，3H)，2.24(s，3H)，5.01(d，1H，J＝1.7Hz)，5.24和5.30(AB，2H，J＝13.1Hz)，5.35(d，1H，J＝1.7Hz)，7.34-7.42(m，1H)，7.48-7.57(m，1H)，7.80(d，1H，J＝8.0Hz)，7.90(d，1H，J＝8.0Hz)，8.14(d，3H，J＝8.7Hz)。
对称的二硫化物；1H-NMR(δ，CDCl3)：2.01(s，6H)，2.29(s，6H)，4.73(d，2H，J＝1.7Hz)，5.06(d，2H，J＝1.7Hz)，5.32(s，4H)，7.54(d，4H，J＝8.6Hz)，8.24(d，4H，J＝8.6Hz)。
步骤5：2-[(3S，4R)-3-溴-4-甲酰基硫基-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸对硝基苯甲酯
2-[(3S，4R)-4-(苯并噻唑-2-基二硫基)-3-溴-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸对硝基苯甲酯(3.16g)悬浮在甲苯(20mL)中，冷却至-20℃。连续地加入甲酸(1.10g)、乙酸酐(2.45g)、和吡啶(0.44g)。混合物冷却至-20℃。5分钟内分次地加入三苯基膦(1.45g)。-15～-10℃再搅拌1小时后，所得的悬浮液冷却至-30℃，然后过滤。残余固体用冷(-30℃)甲苯(15mL)冲洗。合并后的滤液连续地用冰-水(8mL)和冰冷盐水(1mL)的混合物、冰-水(7mL)和冰冷盐水(3mL)的混合物、冷的饱和碳酸氢钠(2x 11mL)、和冷盐水(11mL)洗涤。有机层干燥(MgSO4)并蒸发。残余物经过硅胶柱色谱法，用乙酸乙酯-己烷洗脱(1/2)，由冷的异丙醇(10mL)中结晶出题列化合物。过滤出固体，用冷的异丙醇(6mL)洗涤，室温真空干燥过夜。获得题列化合物，无色结晶固体(1.87g，77％)
m.p.104-106℃；1H-NMR(δ，CDCl3)：2.00(s，3H)，2.30(s，3H)，4.82(d，1H，J＝1.9Hz)，5.32 and 5.38(AB，2H，J＝13.3Hz)，5.81(d，1H，J＝1.9Hz)，7.61(d，2H，J＝8.6Hz)，8.25(d，2H，J＝8.6Hz)，10.09(s，1H)。
由6-溴青霉烷酸对硝基苯甲酯-1-氧化物连续制备2-[(3S，4R)-3-溴-4-甲酰基硫基-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸对硝基苯甲酯
6-溴青霉烷酸对硝基苯甲酯-1-氧化物(766g)和巯基苯并噻唑(294g)在回流的甲苯(2.4L)中加热1小时，同时补充共沸分出的水(迪安-斯达克装置)。反应混合物冷却至0℃并用三乙胺(25mL)处理。在0℃搅拌2小时后，所得的悬浮液冷却至-20℃。维持在-10℃以下连续地加入甲酸(360g)、乙酸酐(798g)、和吡啶(145g)。混合物冷却至-20℃。维持在-15℃～-10℃之间10分钟内分次地加入三苯基膦(473g)。-15～-10℃再搅拌1小时后，所得的悬浮液冷却至-30℃，然后过滤。残余固体用冷(-30℃)甲苯(500mL)冲洗。合并后的滤液连续地用冰-水(2mL)和冰冷盐水(0.26L)的混合物、冰-水(1.72L)和冰冷盐水(0.8L)的混合物、冷的饱和碳酸氢钠(2x 2.6L)、和冷盐水(2.6L)洗涤。有机层干燥(MgSO4)并蒸发。残余物经过硅胶(6Kg)柱色谱法，用乙酸乙酯-己烷洗脱(1/2)，由冷的异丙醇(800mL)中结晶出题列化合物。过滤出固体，用冷的异丙醇(400mL)洗涤，风干1小时，室温通过P2O5真空干燥过夜。获得题列化合物，红黄色结晶固体(553g，70％)
Figure C0380969500541
步骤6：(5R，6S)-6-溴青霉烯-3-甲酸对硝基苯甲酯
2-[(3S，4R)-3-溴-4-甲酰基硫基-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸对硝基苯甲酯(300g)溶解于乙酸乙酯(7.5L)中并冷却至-70℃。臭氧化的氧通过剧烈搅拌的溶液大约1.5小时，直到持续为蓝色。该溶液用氮气净化2.5小时，-70℃用三甲基膦(384mL)处理。混合物缓慢升温，室温搅拌17小时。该溶液然后加热至回流，缓慢地维持45分钟。冷却至室温后，混合物用乙酸乙酯(1.25L)稀释，并用水(2x 2.5L)和盐水(2.5L)洗涤。有机层干燥(MgSO4)并在25℃减压蒸发。残余固体用乙酸乙酯(0.6L)研制。50分钟内逐滴地向该混合物中加入己烷(0.45L)。过滤固体，滤饼用乙酸乙酯-己烷(1/1，2x200mL)和乙酸乙酯-己烷(1/2，300mL)洗涤。固体风干1小时，真空干燥在室温过夜。获得题列化合物(109.6g，42％)，无色结晶固体。
m.p.148-151℃；1H-NMR(□，CDCl3)：5.20(d，1H，J＝0.9Hz)，5.29和5.43(AB，2H，J＝13.5Hz)，5.81(d，1H，J＝1.5Hz)，7.37(d，1H，J＝0.9Hz)，7.60(d，2H，J＝8.7Hz)，8.25(d，2H，J＝8.7Hz)。
Figure C0380969500542
步骤7：利用Ph2NLi和MgBr2醚合物制备(5R)-6-[乙酰氧基-(2，3-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-6-基)甲基]-6-溴青霉烯-3-甲酸对硝基苯甲酯
MgBr2醚合物(335mg)在室温氩气下加入到(5R，6S)-6-溴青霉烯-3-甲酸对硝基苯甲酯(385mg)的无水THF(12mL)溶液中。混合物冷却至-78℃。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。-20℃通过向二苯基胺(220mg)的无水THF溶液(4mL)中加入正丁基锂(0.87mL，1.5mol/L的正己烷溶液)制备二苯基酰胺锂，一次性(in one portion)加入到剧烈搅拌的悬浮液中。15-20秒后，该剧烈搅拌的混合物一次性用2，3-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-6-甲醛(170mg)的无水乙腈溶液(5mL)处理。反应混合物-78℃搅拌1小时并用乙酸酐(133mg)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌1小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用水和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并减压浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，用乙酸乙酯-己烷(1/2～1/1)洗脱，获得题列化合物，两种非对映体的混合物(3/1，无色无定形固体，447mg，77％)。
主要非对映体：1H NMR(δ，CDCl3)：2.00(s，3H)，3.76-3.86(m，2H)，4.10-4.21(m，2H)，5.27和5.45(AB，2H，J＝13.6Hz)，6.23(s，1H)，6.30(s，1H)，7.15(s，1H)，7.48(s，1H)，7.59-7.65(m，2H)，8.24(d，2H，J＝8.6Hz)。
次要非对映体：1H NMR(δ，CDCl3)：2.24(s，3H)，3.76-3.86(m，2H)，4.10-4.21(m，2H)，5.27和5.45(AB，2H，J＝13.8Hz)，6.08(s，1H)，6.79(s，1H)，6.91(s，1H)，7.44(s，1H)，7.59-7.65(m，2H)，8.24(d，2H，J＝8.6Hz)。
利用无水MgBr2和Et3N制备(5R)-6-[乙酰氧基-(2，3-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-6-基)-甲基]-6-溴青霉烯-3-甲酸对硝基苯甲酯
2，3-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-6-甲醛(88mg)室温氩气下加入到无水MgBr2(115mg)的无水乙腈(4mL)溶液中。30分钟内无色粉末沉淀。加入(5R，6S)-6-溴青霉烯-3-甲酸对硝基苯甲酯(200mg)的无水THF溶液(4mL)，冷却至-20℃，一次性加入三乙胺(0.18mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌3小时并用乙酸酐(0.99mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌16小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％的柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠、和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)，通过Celite(硅藻土)垫片过滤。该垫片用乙酸乙酯洗涤。滤液减压浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，用乙酸乙酯-己烷(1/2～1/1)洗脱，获得题列化合物，两种非对映体的混合物(10/1，无色无定形固体，286g，90％)。
利用MgBr2醚合物和Et3N制备(5R)-6-[乙酰氧基-(2，3-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-6-基)-甲基]-6-溴青霉烯-3-甲酸对硝基苯甲酯
MgBr2醚合物代替无水MgBr2用于该反应，分离产物，收率84％。
步骤8：(5R)-(Z)-6-(2，3-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-6-基亚甲基]青霉烯-3-甲酸钠
(5R)-6-[乙酰氧基-(2，3-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-6-基)-甲基]-6-溴青霉烯-3-甲酸对硝基苯甲酯(500mg)溶解于THF(7.0mL)和乙腈(3.2mL)中。迅速地加入新鲜活化的锌粉(2.0g)和0.5M的磷酸盐缓冲液(pH6.5，10.2mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。混合物用水稀释，冷却至3℃，加入1M的NaOH将pH调整至8。反应混合物用乙酸乙酯混合并用Celite垫片过滤。该垫片用水洗涤，分出水层。水层通过HPLC分析含有224mg(79％)的题列化合物，35℃高真空浓缩。浓缩物经过Daiaion HP-21(20mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)树脂柱色谱法。吸附后，柱子用水洗脱，然后用10％的乙腈-水洗脱得到题列化合物的纯化活性馏分。合并后的馏分35℃高真空下浓缩，冷冻干燥得到题列化合物，黄色无定形固体(213mg，75％)。无定形固体产物溶解子水(1.9mL)中。丙酮(8mL)加入到溶液中，同时室温搅拌，冷却至3℃，然后搅拌30分钟。在3℃丙酮加入到混合物中，每30分钟2mL，共4小时的时间(共加入16mL丙酮)。3℃搅拌1小时后，固体过滤，滤饼用丙酮(2mL)洗涤。固体在避光下风干1小时，真空干燥室温过夜获得题列化合物(200mg，71％)，黄色结晶固体。
1H NMR(δ，D2O)3.82(d，2H，J＝7.4Hz)，4.14-4.20(m，2H)，6.42(s，1H)，6.82(s，1H)，6.96(s，1H)，7.42(s，1H).
由(5R)-6-[乙酰氧基-(2，3-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-6-基)甲基]-6-溴青霉烯-3-甲酸对硝基苯甲酯连续制备(5R)-(Z)-6-(2，3-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-6-基亚甲基)青霉烯-3-甲酸钠
(5R)-6-[乙酰氧基-(2，3-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-6-基)-甲基]-6-溴青霉烯-3-甲酸对硝基苯甲酯(110.1g)室温氩气下加入到无水MgBr2(143.4g)的无水乙腈(5L)溶液中。30分钟内无色的粉末沉淀。6-溴青霉烷酸对硝基苯甲酯-1-氧化物(250g)的无水THF溶液(5L)通过PTFE管12分钟内在正氩气压力下转移到悬浮液中。反应混合物冷却至-20℃后，一次性加入三乙胺(217mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌3小时并用乙酸酐(133g)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌16小时。混合物用乙酸乙酯(20L)稀释并用5％柠檬酸(10L)水溶液、饱和碳酸氢钠(10L)、和盐水(10L)洗涤。有机层干燥(MgSO4)并用硅藻土垫片过滤。该垫片用乙酸乙酯(1.4L)洗涤。滤液30℃减压浓缩。根据HPLC分析残余的褐色油含有327g(86.7％)的羟醛产物。
残余的褐色油产物用THF(5.4L)和乙腈(2.5L)溶解。迅速地加入新鲜活化的锌粉(1.5Kg)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5，7.9L)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物维持在约35℃剧烈地搅拌2.5小时。混合物冷却至3℃并在3℃以下加入冰冷的1M NaOH(大约1750mL)调整pH至8。混合物用乙酸乙酯(4L)稀释并用硅藻土垫片过滤。该垫片用水(2.5L)洗涤并分出水层。水层，根据HPLC测定，含有137g(64％)，35℃高真空下浓缩至8.85Kg(约8L)。
浓缩物经过Sepabeads SP-207(7L，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)树脂柱色谱法。吸附后，柱子用水(14L)洗脱，然后用20％乙腈-水洗脱得到(5R)-(Z)-6-(2，3-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-6-基亚甲基)青霉烯-3-甲酸钠的纯化的活性馏分。
合并后的馏分35℃高真空下浓缩至1.25Kg(约1L，经HPLC测定含有130g(61％)(5R)-(Z)-6-(2，3-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-6-基亚甲基)青霉烯-3-甲酸钠)。丙酮(2.5L)加入到浓缩物中并室温搅拌。混合物冷却至3℃，然后搅拌30分钟。在3℃，丙酮4小时内每30分钟625mL加入到混合物(共加入丙酮5L)。3℃搅拌1小时后固体过滤，滤饼用丙酮(800mL)洗涤。固体避光下风干1小时，室温真空干燥过夜得到题列化合物(112g，50％来自(5R)-6-[乙酰氧基-(2，3-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-6-基)-甲基]-6-溴青霉烯-3-甲酸对硝基苯甲酯)，黄色结晶固体。利用氢解方法由(5R)-6-[乙酰氧基-(2，3-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-6-基)-甲基]-6-溴青霉烯-3-甲酸对硝基苯甲酯制备(5R)-(Z)-6-(2，3-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-6-基亚甲基)青霉烯-3-甲酸钠：
(5R)-6-[乙酰氧基-(2，3-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-6-基)-甲基]-6-溴青霉烯-3-甲酸-4-硝基苯甲酯(116mg)和10％Pd/C(50％湿的，58mg)加入到THF(4ml)和0.5mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.5，4ml)的混合物中。混合物室温40psi压力的H2下氢化1小时。反应混合物过滤，冷却至3℃，加入1M NaOH调整pH至8.0。混合物再过滤，滤液用乙酸乙酯洗涤。合并后的水层35℃减压下浓缩，经过Diaion HP-21树脂(7ml，Mitsubishi Kasei Co.Ltd)柱色谱法。吸附后，柱子用水洗脱，然后用10％的乙腈；水洗脱。合并后的纯馏分35℃减压下浓缩并冷冻干燥得到题列化合物，黄色无定形固体。
实施例2
Figure C0380969500581
步骤1：3，1′-二甲基-3H，1′H-[2，4′]二咪唑基-4-甲醛
叔丁氧化钾(3.23g)在0℃加入到1H，1′H-[2，4′]二咪唑基-4-甲醛(1.95g)的无水DMF(140mL)溶液和18-冠-6(634mg)的混合物中。反应混合物搅拌10分钟并用碘甲烷(1.85mL)处理。在30℃搅拌后，然后室温搅拌17小时。反应混合物减压下浓缩。残余物用H2O-CHCl3溶解并分离。水层用氯仿萃取。有机层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下蒸发。粗产物用硅胶柱色谱法(氯仿-甲醇＝9/1)纯化。获得题列化合物(887mg，39％)和它的位置异构体1，1′-二甲基-1H，1′H-[2，4′]二咪唑基-4-甲醛(296mg，13％)，浅桃红色固体。
3，1′-二甲基-3H，1′H-[2，4′]二咪唑基-4-甲醛：1H NMR(δ，CDCl3)3.78(s，3H)，4.37(s，3H)，7.51(d，1H，J＝1.0Hz)，7.62(d，1H，J＝1.0Hz)，7.76(s，1H)，9.71(s，1H)。
1，1′-二甲基-1H，1′H-[2，4′]二咪唑基-4-甲醛：1H NMR(δ，CDCl3)3.76(s，3H)，4.10(s，3H)，7.47(d，1H，J＝0.9Hz)，7.57(s，1H)，7.59(d，1H J＝0.9Hz)，9.85(s，1H)。
步骤2：(5R，6RS)-6-[(RS)-乙酰氧基-(3，1′-二甲基-3H，1′H-12，4′]二咪唑基-4-基)-甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯
3，1 ′-二甲基-3H，1′H-[2，4′]二咪唑基-4-甲醛(171mg)室温氮气下加入到无水MgBr2(800mg)无水乙腈(20mL)溶液中。(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(346mg)的无水THF溶液(20mL)加入到该混合物，冷却至-20℃，一次性加入三乙胺(0.768mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌2小时并用4-二甲基氨基吡啶(22mg)和乙酸酐(0.17mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌17小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠、和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后用氯仿-甲醇(9/1)洗脱。获得题列化合物(507.6mg，91.4％)。
1H NMR(δ，CDCl3)2.19(s，3H)，3.75(s，3H)，4.03(s，3H)，5.29(d，1H，J＝13.5Hz)，5.42(d，1H，J＝13.5Hz)，6.03(s，1H)，6.65(s，1H)，7.34(s，1H)，7.48(d，1H，J＝1.2Hz)，7.55(d，1H，J＝1.2Hz)，7.59-7.61(m，3H)，8.23-8.26(m，2H)。
步骤3：(5R)，(6Z)-6-(3，1′-二甲基-3H，1′H-[2，4′]二咪唑基-4-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸钠盐
(5R，6RS)-6-[(RS)-乙酰氧基-(3，1′-二甲基-3H，1′H-[2，4′]二咪唑基-4-基)-甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(596mg)溶解于THF(8.3mL)和乙腈(3.9mL)中。新鲜活化的锌粉(2.38g)和0.5M的磷酸盐缓冲液(pH6.5，12.2mL)加入到该混合物中。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。反应溶液用乙酸乙酯混合并用硅藻土垫片过滤。该垫片用水洗涤并分出水层。水层在35℃高真空下浓缩。浓缩物经过Diaion HP-21(60mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)树脂柱色谱法。吸附后，柱子用水，然后用5％-10％乙腈-水洗脱。合并后的馏分35℃高真空下浓缩，冷冻干燥获得题列化合物，黄色无定形固体(66.3mg，19％)。
Mp 113℃(dec)；1H NMR(δ，D2O)3.31(s，3H)，3.52(s，3H)，5.74(s，1H)，6.43(s，2H)，6.70(s，1H)，7.27(s，1H)，7.46(s 1H)
实施例3
Figure C0380969500591
步骤1：2-苯甲基-1H-咪唑-4-甲醛
2-苯基-乙酰脒(2g)加入到2-溴-3-异丙氧基丙烯醛(2.88g)的CHCl3(30mL)溶液中。反应混合物室温搅拌1小时。然后三乙胺(2.09mL)加入到混合物中并加热至回流6小时。混合物冷却至室温，用CHCl3稀释，并用10％碳酸氢钾和洗涤。有机层干燥(MgSO4)并减压浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后用乙酸乙酯-己烷洗脱(3/1)。粗化合物由乙酸乙酯和正己烷中结晶获得题列化合物(1.10g，40％)。
1H NMR(δ，CDCl3)4.17(s，2H)，7.24-7.36(m，5H)，7.72(brs，1H)，9.60(brs，1H)，10.28(brs，1H)。
步骤2：2-苯甲基-4-甲酰基-咪唑-1-甲酸-4-硝基苯甲酯
2-苯甲基-1H-咪唑-4-甲醛(1g)和碳酸氢钠(1.13g)溶解于二噁烷(30mL)和水(30mL)中。在0℃，48.7％氯甲酸对硝基苯甲酯(PNZCl)的二噁烷(2.62g)溶液加入到该溶液中并搅拌2.5小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释并用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)，减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后用氯仿-丙酮(9/1)洗脱。获得题列化合物，淡褐色油(1.97g，100％)。
1H NMR(δ，CDCl3)4.46(s，2H)，5.42(s，2H)，7.19-7.30(m，5H)，7.44-7.47(m，2H)，8.06(s，1H)，8.21-8.25(m，2H)，9.91(s，1H)。
步骤3：(5R，6RS)-6-{(RS)-乙酰氧基-[2-苯甲基-1-(4-硝基-苯甲氧基羰基)-1H-咪唑-4-基]-甲基}-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯
2-苯甲基-4-甲酰基咪唑-1-甲酸4-硝基苯甲酯(1.9g)的无水乙腈(10mL)溶液室温氮气下加入到无水MgBr2(2.41g)的无水乙腈(50mL)溶液中。(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(2g)的无水THF溶液(60mL)加入到该混合物中，冷却至-20℃，一次性加入三乙胺(1.8mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物在-20℃搅拌2小时，并用4-二甲基氨基吡啶(127mg)和乙酸酐(0.98mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌16小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用H2O、饱和碳酸氢钠、和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并用硅藻土垫片过滤。该垫片用乙酸乙酯洗涤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后用乙酸乙酯-己烷洗脱(2/3～1/1)。获得题列化合物，两种非对映体的混合物(3/2，浅黄色无定形固体，2.8g，70％)。
1H NMR(δ，CDCl3)2.00(s，0.6×3H)，2.26(s，0.4×3H)，4.34-4.37(m，2H)，5.25-5.47(m，4H)，6.02(s，0.4×1H)，6.22(s，0.6×1H)，6.25(s，0.6×1H)，6.85(d，0.4×1H，J＝1.5Hz)，7.14-7.62(m，11H)，8.21-8.25(m，4H)。
步骤4：(5R)，(6Z)-6-(2-苯甲基-1H-咪唑-4-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸钠盐
(5R，6RS)-6-{(RS)-乙酰氧基-[2-苯甲基-1-(4-硝基苯甲氧基羰基)-1H-咪唑-4-基]-甲基}-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(2.5g)溶解于THF(35mL)和乙腈(16.3mL)中。新鲜活化的锌粉(10g)和0.5M的磷酸盐缓冲液(pH6.4，51.3mL)加入到混合物中。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。混合物冷却至9℃，加入1M NaOH水溶液调整pH至7.5。反应溶液用乙酸乙酯混合并用硅藻土垫片过滤。该垫片用水洗涤并分出水层。水层在35℃高真空下浓缩。浓缩物经过Diaion HP-21(250mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)树脂柱色谱法。吸附后，柱子用水，然后用5-10％乙腈-水洗脱。合并后的馏分35℃高真空下浓缩，冷冻干燥获得题列化合物，黄色无定形固体(780mg，67％)。
Mp 146℃(dec)；1H NMR(δ，D2O)3.92(s，2H)，6.39(d，1H，J＝0.8Hz)，6.74(s，1H)，6.89(s，1H)，7.13-7.16(m，3H)，7.21-7.25(m，3H)。
实施例4
Figure C0380969500611
步骤1：4-甲酰基-2-噻唑-2-基咪唑-1-甲酸-4-硝基苯甲酯
2-噻唑-2-基-1H-咪唑-4-甲醛(570mg)溶解于无水CH2Cl2(35mL)中。0℃ N，N′-二异丙基乙胺和48.7％的氯甲酸对硝基苯甲酯(PNZCl)的二噁烷(1.69mL)溶液连续地加入到该溶液中并搅拌2小时。反应混合物用CHCl3稀释并用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)，减压浓缩。残余物由乙酸乙酯和正己烷中结晶得到题列化合物(1.05g，92％)。
1H NMR(δ，CDCl3)5.49(s，2H)，7.50(d，2H，J＝8.6Hz)，7.55(d，1H，J＝3.4Hz)，7.89(d，1H，J＝3.1Hz)，8.19(s，1H)，8.24(dq，2H，J＝8.8，2.0Hz)，9.97(s，1H)。
步骤2：(5R)，(6Z)-6-(2-噻唑-2-基-1H-咪唑-4-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸钠盐
4-甲酰基-2-噻唑-2-基-咪唑-1-甲酸-4-硝基苯甲酯(940mg)室温氮气下加入到无水MgBr2(1.26g)的无水乙腈(35mL)溶液中。(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(1.01g)的无水THF溶液(28mL)加入到该混合物中，冷却至-20℃，一次性加入三乙胺(0.942mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌2.8小时，并一次性用4-二甲基氨基吡啶(64mg)和乙酸酐(0.495mL)处理。反应混合物温热至0℃，在0℃搅拌20小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用0.1M磷酸盐缓冲液(pH7)、饱和碳酸氢钠、和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并用硅藻土垫片过滤。该垫片用乙酸乙酯洗涤。滤液减压下浓缩。残余物用硅胶柱色谱法(乙酸乙酯-己烷＝1/1～只用乙酸乙酯)粗略地提纯，获得粗的(5R，6RS)-6-{(RS)-乙酰氧基-[1-(4-硝基苯甲氧基羰基)-2-噻唑-2-基-1H-咪唑-4-基]-甲基}-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(860mg)。
步骤3：粗的(5R，6RS)-6-{(RS)-乙酰氧基-[1-(4-硝基苯甲氧基羰基)-2-噻唑-2-基-1H-咪唑-4-基]-甲基}-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(860mg)溶解于THF(12mL)和乙腈(5.6mL)中。新鲜活化的锌粉(3.44g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.4，17.6mL)加入到该溶液中。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。混合物用乙酸乙酯混合并用硅藻土垫片过滤。该垫片用水洗涤并分出水层。水层35℃高真空下浓缩。浓缩物经过Diaion HP-21(90mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)树脂柱色谱法。吸附后，柱子用水洗脱，然后用2.5-5％乙腈-水洗脱。合并后的馏分35℃高真空下浓缩，冷冻干燥获得题列化合物，黄色无定形固体(126mg，11％由7而来)。
Mp 145℃(dec)；1H NMR(δ，D2O)6.40(d，1H，J＝0.7Hz)，6.81(s，1H)，6.89(s，1H)，7.38(s，1H)，7.48(d，1H，J＝3.1Hz)，7.71(d，1H，J＝3.3Hz)。
实施例5
Figure C0380969500631
步骤1：1-甲基-2-噻唑-2-基-1H-咪唑-4-甲醛
室温，叔丁氧化钾(494mg)加入到2-噻唑-2-基-1H-咪唑-4-甲醛(717mg)和18-冠-6(106mg)的无水THF(30mL)和无水DMF(10mL)混合溶液中。反应混合物搅拌10分钟并用碘甲烷(0.274mL)处理。室温搅拌17.5小时后，减压浓缩。残余物用乙酸乙酯溶解并过滤。滤液减压蒸发。粗产物硅胶柱色谱法(乙酸乙酯-己烷＝1/1)纯化。获得题列化合物(410mg，53％)和它的位置异构体1-甲基-2-噻唑-2-基-1H-咪唑-5-甲醛(240mg，31％)，白色固体。
1-甲基-2-噻唑-2-基-1H-咪唑-4-甲醛：1H NMR(δ，CDCl3)4.21(s，3H)，7.44(d，1H，J＝3.2Hz)，7.68(s，1H)，7.89(d，1H，J＝3.2Hz)，9.91(s，1H)。
1-甲基-2-噻唑-2-基-1H-咪唑-5-甲醛：1H NMR(δ，CDCl3)4.48(s，3H)，7.51(d，1H，J＝3.1Hz)，7.82(s，1H)，7.97(d，1H，J＝3.1Hz)，9.82(s，1H)。
步骤2：(5R，6RS)-6-[(RS)-乙酰氧基-(1-甲基-2-噻唑-2-基-1H-咪唑-4-基)-甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯
1-甲基-2-噻唑-2-基-1H-咪唑-4-甲醛(380mg)室温氮气下加入到无水MgBr2(1.03g)的无水乙腈(28mL)溶液中。10分钟内沉淀出无色粉末。(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(760mg)的无水THF溶液(28mL)溶液加入到该混合物中，冷却至-20℃，一次性加入三乙胺(0.768mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌2小时并一次性用4-二甲基氨基吡啶(48mg)和乙酸酐(0.371mL)处理。反应混合物升温至0℃，在0℃搅拌22小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠、和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并用硅藻土垫片过滤。该垫片用乙酸乙酯洗涤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后用乙酸乙酯-己烷(3/2)洗脱。获得题列化合物，两种非对映体的混合物(1/1，浅黄色无定形固体，673.4mg，52％)。
1H NMR(δ，CDCl3)2.00(s，0.5×3H)，2.28(s，0.5×3H)，4.12(s，3H)，5.28(d，0.5×1H，J＝13.5Hz)，5.29(d，0.5×1H，J＝13.5Hz)，5.44(d，0.5×1H，J＝13.5Hz)，5.47(d，0.5×1H，J＝13.5Hz)，6.16(s，0.5×1H)，6.30(s，0.5×1H)，6.42(s，0.5×1H)，6.87(d，0.5×1H，J＝0.8Hz)，6.92(d，0.5×1H，J＝0.8Hz)，7.19(s，0.5×1H)，7.34-7.36(m，1H)，7.47(s，0.5×1H)，7.50(s，0.5×1H)，7.60-7.64(m，2H)，7.83-7.85(m，1H)，8.23-8.26(m，1H)。
步骤3：(5R)，(6Z)-6-(1-甲基-2-噻唑-2-基-1H-咪唑-4-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸钠盐
(5R，6RS)-6-[(RS)-乙酰氧基-(1-甲基-2-噻唑-2-基-1H-咪唑-4-基)-甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(604mg)溶解于THF(8.5mL)和乙腈(3.9mL)中。新鲜活化的Zn粉(2.41g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.4，23.6mL)加入到该混合物中。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。反应溶液用乙酸乙酯混合并用用硅藻土垫片过滤。该垫片用水洗涤并分出水层。水层在35℃高真空下浓缩。浓缩物经过Diaion HP-21(60mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)树脂柱色谱法。吸附后，柱子用水洗脱，然后用5％乙腈-水和10％乙腈-水洗脱。合并后的馏分35℃高真空下浓缩，冷冻干燥获得题列化合物，黄色无定形固体(231mg，64％)。
Mp 214℃(dec)；1H NMR(δ，D2O)3.91(s，3H)，6.44(s，1H)，6.84(s，1H)，6.91(s，1H)，7.43(s，1H)，7.60(d，1H，J＝3.3Hz)，7.84(d，1H，J＝3.3Hz)。
实施例6
步骤1：4-甲酰基-2-苯基咪唑-1-甲酸-4-硝基苯甲酯
4-甲酰基-2-苯基咪唑(624mg)和碳酸氢钠(791mg)溶解于二噁烷(3.6mL)、THF(3.6mL)和水(7.2mL)中。室温48.7％的氯甲酸对硝基苯甲酯(PNZCl)的二噁烷(2.08mL)溶液加入到该混合物中并搅拌2.5小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并减压浓缩。残余物由乙酸乙酯和正己烷中结晶得到题列化合物(956mg，75％)。
1H NMR(δ，CDCl3)5.41(s，2H)，7.32(d，2H，J＝8.6Hz)，7.40-7.51(m，3H)，7.56-7.58(m，2H)，8.17-8.20(m，2H)，8.22(s，1H)，9.97(s，1H)。
步骤2：(5R，6RS)-6-{(RS)-乙酰氧基-[1-(4-硝基苯甲氧基羰基)-2-苯基-1H-咪唑-4-基]-甲基}-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯
4-甲酰基-2-苯基咪唑-1-甲酸-4-硝基苯甲酯(568mg)和(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(587mg)的无水THF溶液(15mL)室温氮气下连续地加入到无水MgBr2(622.4mg)的无水乙腈(15mL)溶液中。混合物冷却至-20℃，一次性加入三乙胺(0.494mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌1.5小时，并用乙酸酐(0.277mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌27小时。混合物用乙酸乙酯稀释，并用5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠、和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并用硅藻土垫片过滤。该垫片用乙酸乙酯洗涤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后用乙酸乙酯-己烷(2/3～1/1)洗脱。获得题列化合物，三种非对映体的混合物(6/4/1.5，浅黄色无定形固体，986mg，86％)。
1H NMR(δ，CDCl3)2.04(s，0.35×3H)，2.10(s，0.13×3H)，2.30(s，0.52×3H)，5.25-5.43(m，4H)，6.09(s，0.52×1H)，6.22(s，0.13×1H)，6.31(s，0.35×1H)，6.33(s，0.35×1H)，6.87(s，0.13×1H)，6.92(d，0.52×1H，J＝1.4Hz)，7.31-7.76(m，11H)，8.17-8.25(m，4H)。
步骤3：(5R)，(6Z)-6-(2-苯基-1H-咪唑-4-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸
(5R，6RS)-6-{(RS)-乙酰氧基-[1-(4-硝基苯甲氧基羰基)-2-苯基-1H-咪唑-4-基]甲基}-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(4)(1.15g)溶解于THF(16.1mL)和乙腈(7.5mL)中。新鲜活化的锌粉(4.6g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.4，23.6mL)加入到该混合物中。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。反应溶液用乙酸乙酯混合并用硅藻土垫片过滤。该垫片用水洗涤并分出水层。水层在35℃高真空下浓缩。浓缩物经过Diaion HP-21(100mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)树脂柱色谱法。吸附后，柱子用水洗脱，然后用5-10％乙腈-水洗脱。合并后的馏分高35℃真空下浓缩，冷冻干燥获得题列化合物，黄色无定形固体(322mg，63％)。
Mp 281℃(dec)；1H NMR(δ，D2O)6.32(s，1H)，6.76(s，1H)，6.79(s，1H)，7.22(s，1H)，7.24-7.33(m，3H)，7.60-7.63(m，2H)。
实施例7
Figure C0380969500661
步骤1：(5R，6S)-6-溴-6-[(S)-(2，3-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-6-基)羟基甲 基]-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯
2，3-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-6-甲醛(2.63g)室温氮气下加入到无水MgBr2(3.8g)的无水乙腈(124mL)溶液中。30分钟内沉淀出无色粉末。(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(6.2g)的无水THF溶液(124mL)加入到该混合物中。混合物冷却至-20℃后，一次性加入三乙胺(5.21mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌2.5小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠、和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并用硅藻土垫片过滤。该垫片用乙酸乙酯洗涤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后用乙酸乙酯-己烷洗脱(3/1～只用乙酸乙酯)。获得题列化合物3和它的非对映体的混合物(10/1，淡褐色无定形固体，6.63g，79％)，通过硅胶柱色谱法从混合物中分离出题列化合物(3.20g，38％)。1HNMR(δ，CDCl3)3.80-3.89(m，2H)，4.15-4.25(m，2H)，5.22(s，1H)，5.31(d，1H，J＝13.5Hz)，5.45(d，1H，J＝13.5Hz)，6.12(s，1H)，7.12(s，1H)，7.42(s，1H)，7.62(d，2H，J＝8.6Hz)，8.22-8.25(m，2H)。
步骤2：(5R，6S)-6-[(S)-(2，3-二氢-咪唑[2，1-b]噻唑-6-基)-羟基甲基]-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸
(5R，6S)-6-溴-6-[(S)-(2，3-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-6-基)羟基甲基]-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(2.0g)溶解于THF(28mL)和乙腈(13mL)中。新鲜活化的锌粉(8.0g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.4，41mL)加入到该混合物中。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。混合物冷却至3℃，加入1M NaOH水溶液将pH调整至7.5。反应溶液用乙酸乙酯混合并用硅藻土垫片过滤。该垫片用水洗涤并分出水层。水层在35℃高真空下浓缩。浓缩物经过Diaion HP-21(200mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)树脂柱色谱法。吸附后，柱子用水洗脱，然后用2.5％乙腈-水洗脱。合并后的馏分在35℃高真空下浓缩，冷冻干燥获得题列化合物，浅黄色无定形固体(171mg，13％)。
Mp 152℃；1H NMR(δ，D2O)3.91(t，2H，J＝7.4Hz)，4.23(t，2H，J＝7.4Hz)，4.33-4.35(m，1H)，5.07(d，1H，J＝6.5Hz)，5.70(d，1H，J＝1.6Hz)，7.05(d，1H，J＝1.0Hz)，7.24(s，1H)。
实施例8
制备(5R，6Z)-6-[(5-苯甲基-4，5，6，7-四氢噻吩并[3.2-c]吡啶-2-基)亚甲基]- 7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸
步骤1：5-苯甲酰基-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-甲酸乙酯：
向搅拌的无水DMF(7.3g，100mmol)中，在0℃-5℃之间缓慢地加入POCl3(12.25g，80mmol)。加完后，固化的团块溶解于CH2Cl2(20ml)中并在室温搅拌2小时。温度再冷却至0℃，缓慢地加入1-苯甲酰基-4-哌啶酮的CH2Cl2溶液。加完后，反应混合物室温搅拌2小时，倒入压碎的冰和乙酸钠中。室温搅拌30分钟。用CH2Cl2萃取；水充分洗涤；无水MgSO4干燥并浓缩。粗产物溶解于CH2Cl2中，室温缓慢地加入巯基乙酸乙酯(9.6g，80mmol)/Et3N(10.1g，100mmol)。反应混合物回流2小时并用水停止。CH2Cl2层用水充分洗涤；无水MgSO4干燥；过滤并浓缩。产物用SiO2柱色谱法纯化，用50％乙酸乙酯；己烷洗脱。黄色的油；收率：6.4gms(25％)；M+H316。
步骤2：(5-苯甲基-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲醇：
在0℃向搅拌的LAH(2.0gms)悬浮液中缓慢地加入5-苯甲酰基-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-甲酸乙酯(6.0g，19mmol)的THF溶液。加完后，反应混合物搅拌30分钟，用饱和NH4Cl停止。用CHCl3稀释并过滤。滤液用饱和的盐水溶液洗涤，无水MgSO4干燥。过滤，不用纯化用于下一步中。收率：4.5g，91％。黄色液体。
步骤3：2-甲酰基(5-苯甲基-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶：
向搅拌的(5-苯甲基-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲醇(4.0g，15.4mmol)的CH2Cl2(300ml)溶液中加入活化的MnO2(20g，过量)，室温搅拌18小时。最后，反应混合物通过硅藻土过滤并用CHCl3洗涤。反应混合物用水充分洗涤；干燥并浓缩。发现该产物是纯的，不用纯化用于下一步骤中。收率：3.0g(76％)；(M+H：257)。
步骤4：6-[(乙酰氧基)(5-苯甲基-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯：
室温氩气下，2-甲酰基(5-苯甲基-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶(565mg，2.2mmol)和(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(772mg，2.0mmol)的无水THF溶液(20mL)连续地加入到无水MgBr2:O(Et)2(390mg，1.5mmol)的无水乙腈(15mL)溶液中。冷却至-20℃后，一次性加入Et3N(2.0mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌2小时并用乙酸酐(1.04mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌15小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并通过硅藻土垫片过滤。该垫片用乙酸乙酯洗涤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脱。收集的馏分减压下浓缩，非对映体的混合物用于下一步骤中。浅黄色无定形固体；收率：550mg，40％；M+H 687。
步骤-5：(5R，6Z)-6[(5-苯甲基-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)亚甲基]-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸：
6-[(乙酰氧基)(5-苯甲基-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲基-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(450mg，0.65mmol)溶解于THF(20mL)和乙腈(10mL)中。迅速地加入新鲜活化的锌粉(5.2g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5，28mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。反应混合物过滤，冷却至3℃，加入0.1M NaOH将pH调整至8.5。滤液用乙酸乙酯洗涤并分出水层。水层在35℃高真空下浓缩得到黄色沉淀。产物通过HP21树脂反相柱色谱法纯化。柱子先用去离子水(2升)洗脱，然后用10％CAN∶水洗脱。收集含有产物的馏分，室温减压下浓缩。黄色固体用丙酮洗涤并过滤。干燥。收率：50mg，18％；黄色晶体；mp.198℃；(M+H)411。
1H NMR(DMSO-d6)d 2.7(m，2H)，2.8(bm，2H)，3.4(m，2H)，3.8(s，2H)，6.3(s，1H)，6.5(s，1H)，7.1(s，1H)，7.28(s，1H)，7.4(s，5H)。
实施例9
制备(5R)，(6Z)-6-(7-甲基-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亚甲基)-7- 氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸、钠盐
步骤1：咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲酸乙酯：
溴丙酮酸乙酯(62.9g)室温加入到2-氨基吡嗪(24.8g)的DME(258mL)溶液中并搅拌2.5小时。反应混合物冷却至0℃并搅拌30分钟得到淡褐色沉淀物。沉淀过滤并用Et2O洗涤得到淡褐色晶体。沉淀(66.1g)的EtOH(1.29L)悬浮液回流温度下加热变为澄清的溶液。回流2小时候后，反应混合物减压浓缩，然后与CHCl3和饱和NaHCO3水溶液混合。混合物用硅藻土垫片过滤，分出的有机层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用CHCl3-MeOH(99/1-97/3)洗脱，所收集的馏分减压下浓缩，继而由CHCl3-Et2O中重结晶。获得题列化合物，浅桃红色结晶。收率：10.9g，22％)。
1H NMR(CDCl3)d 1.46(t，3H，J＝7.2Hz)，4.49(q，2H，J＝7.2Hz)，7.96(d，1H，J＝4.7Hz)，8.08(dd，1H，J＝1.2，4.7Hz)，8.26(s，1H)，9.21(d，1H，J＝1.2Hz)。
步骤2：5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲酸乙酯，盐酸盐：
0.46M的HCl-EtOH(169mL)和10％Pd-C(50％湿的)(1.37g)加入到咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲酸乙酯(13.7g)的EtOH(546mL)溶液中。混合物室温40psi的H2下氢化15小时。反应混合物过滤，Pd-C用EtOH洗涤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用CHCl3-MeOH(9/1-2/1)洗脱。获得题列化合物，褐色结晶，收率：10.4g，63％。
1H NMR(CDCl3)d 1.38(t，3H，J＝7.1Hz)，3.90(t，2H，J＝5.7Hz)，4.40(q，2H，J＝7.1Hz)，4.59(t，2H，J＝5.7Hz)，4.80(s，2H)，8.20(s，1H)。
步骤3：7-甲基-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲酸乙酯：
Et3N(3.44mL)、37％HCHO水溶液(2.02mL)和NaBH3CN(1.78g)室温连续地加入到5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲酸乙酯盐酸盐(5.2g)的MeOH(75mL)溶液中，氮气下搅拌3.5小时。混合物用CH2Cl2稀释并用50％K2CO3水溶液洗涤。有机层干燥(K2CO3)并过滤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用CHCl3-丙酮(1/1-1/2)洗脱。获得题列化合物，橙色的油。收率：2.68g，57％)。
1H NMR(CDCl3)d 1.37(t，3H，J＝7.1Hz)，2.50(s，3H)，2.85(t，2H，J ＝5.5Hz)，3.69(s，2H)，4.06(t，2H，J＝5.5Hz)，4.36(t，2H，J＝7.1Hz)，7.52(s，1H)。
步骤4：7-甲基-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲醛：
-78℃氮气下1.01M的DIBAL的甲苯(13.6mL)溶液加入到7-甲基-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲酸乙酯(1.8g)的无水CH2Cl2(86mL)溶液中，并搅拌2小时。混合物用1M HCl停止。反应混合物用硅藻土垫片过滤。滤液用50％K2CO3水溶液洗涤，水层用CH2Cl2萃取三次。合并后的有机层干燥(K2CO3)并过滤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用CHCl3-MeOH(19/1-9/1)洗脱。获得题列化合物5，无色结晶。收率：591mg，42％)。
1H NMR(CDCl3)d 2.51(s，3H)，2.87(t，2H，J＝5.5Hz)，3.70(s，2H)，4.10(t，2H，J＝5.5Hz)，7.53(s，1H)，9.82(d，1H，J＝1.4Hz)。
步骤5：(5R，6RS)-6-[(RS)-乙酰氧基(7-甲基-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(非对映体混合物)：
7-甲基-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲醛是室温氮气下加入到无水MgBr2(4.05g)的无水乙腈(97mL)溶液中。(5R，6S)-6-溴-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(3.32g)的无水THF溶液(97mL)加入到该混合物中，冷却至-20℃，一次性加入Et3N(3.0mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物在-20℃搅拌4.5小时并用乙酸酐(1.36mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌17小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠、和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用CHCl3-丙酮(9/1-2/1)洗脱。获得题列化合物，两种非对映体的混合物。红色的油，收率：1.13g。
1H NMR(CDCl3)d 1.20(s，0.81×3H)，2.24(s，0.19×3H)，2.48(s，3H)，2.80～2.84(m，2H)，3.57～3.67(m，2H)，3.97～4.02(m，2H)，5.27(d，1H，J＝13.6Hz)，5.42(d，0.19×1H，J＝13.6Hz)，5.45(d，0.81×1H，J＝13.6Hz)，6.07(s，0.19×1H)，6.30(s，0.81×2H)，6.79(s，0.19×1H)，6.80(s，0.19×1H)，7.02(s，0.81×1H)，7.44(s，0.19×1H)，7.47(s，0.81×1H)，7.60(d，0.19×2H，J＝8.2Hz)，7.62(d，0.81×2H，J＝8.6Hz)，8.22～8.26(m，2H)。
步骤6：(5R)，(6Z)-6-(7-甲基-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐。
(5R，6RS)-6-[(RS)-乙酰氧基(7-甲基-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(1.11g)溶解于THF(32mL)和乙腈(32mL)中。迅速地加入新鲜活化的锌粉(4.46g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5，48mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。反应混合物用硅藻土垫片过滤，冷却至3℃，加入1M的NaOH将pH调整至7.5.滤液用乙酸乙酯洗涤并分出水层。水层在35℃高真空下浓缩。浓缩物经过Diaion HP-21(20mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)树脂柱色谱法。吸附后，柱子用H2O-MeCN(1/0～95/5)洗脱。合并后的馏分在35℃高真空下浓缩，冷冻干燥获得题列化合物，黄色无定形固体。收率：417mg，65％。
mp 200℃(dec)；1H NMR(D2O)d 2.32(s，3H)，2.79～2.81(m，2H)，3.54(s，2H)，3.95(t，2H，J＝5.6Hz)，6.39(s，1H)，6.85(s，1H)，6.87(s，1H)，7.26(s，1H)。
实施例10
制备(5R)，(6Z)-7-氧代-6-(5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亚甲基)-4- 硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐 2-酮哌嗪
2-酮哌嗪按照Merk组(USP5,629,322)的方法进行制备。
步骤1：4-对硝基苯甲氧基羰基-2-酮哌嗪
0℃48.7％的对硝基苯甲氧基羰基氯的1，4-二噁烷(10.7mL)溶液加入到2-酮哌嗪(2.21g)和二异丙基乙胺(4.6mL)的二氯甲烷(110mL)溶液中并在0℃搅拌0.5小时。水(300mL)加入到反应混合物中，并用二氯甲烷(3x 100mL)萃取。有机层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，用CHCl3-甲醇(30∶1)洗脱，获得题列化合物，白色固体(7.1g，定量的)。
1H NMR(d，CDCl3)3.42-3.45(m，2H)，3.74(t，2H，J＝5.4Hz)，4.19(s，2H)，5.26(s，2H)，6.39(brs，1H)，7.52(d，2H，J＝8.6Hz)，8.24(d，2H，J＝8.6Hz)。
步骤2：5-甲氧基-4-对硝基苯甲氧基羰基-1，2，3，6-四氢吡嗪：
四氟硼酸三甲基氧鎓(97％，3.7g)室温加入到4-对硝基苯甲氧基羰基-2-酮哌嗪(6.7g)的无水二氯甲烷(120mL)溶液中并搅拌17小时。反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液处理，并分出有机层。水层用乙酸乙酯(3x 100mL)萃取，然后合并后的有机层用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压浓缩，获得题列化合物，淡褐色固体。收率；5.7g，80.6。
1H NMR(d，CDCl3)3.48(m，2H)，3.57(m，2H)，3.70(s，3H)，3.97(s，2H)，5.26(s，2H)，7.52(d，2H，J＝8.7Hz)，8.23(d，2H，J＝8.7Hz)。
步骤3：2-亚氨基-4-对硝基苯甲氧基羰基哌嗪：
5-甲氧基-4-对硝基苯甲氧基羰基-1，2，3，6-四氢哌嗪(5.7g)和氯化铵(1.6g)的无水乙醇(100mL)混合物加热至回流4小时。然后反应混合物减压下浓缩。二氯甲烷(100mL)加入到残余物中，并用水(3x50mL)萃取，然后合并后的水层用二氯甲烷洗涤。水层用10％碳酸钾水溶液中和，然后用二氯甲烷(8x 50mL)萃取。合并后的有机层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩，获得题列化合物，白色固体。收率：4.9g，91.2％。
1H NMR(d，CDCl3)3.49(brs，4H)，3.98(brs，2H)，5.26(s，2H)，7，52(d，2H，J＝8.6Hz)，8.23(d，2H，J＝8.6Hz)。
步骤4：7-对硝基苯甲氧基羰基-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲醛(9)和7-对硝基苯甲氧基羰基-5，6，7，8四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-甲醛：
2-溴-3-羟基丙烯醛(2.8g)，对甲苯磺酸一水合物(33mg)和2-丙醇(3.5mL)的环己烷(28mL)混合物共沸直到蒸汽温度升至80℃。反应混合物减压下浓缩。残余物溶解于无水乙腈(30mL)中。室温加入2-亚氨基-4-对硝基苯甲氧基羰基哌嗪(4.7g)的无水乙腈(310mL)溶液。反应混合物室温搅拌3小时，然后真空分出反应溶液。残余物溶解于乙酸乙酯(170mL)中，加入三乙胺(2.4mL)，然后反应混合物加热至回流1.5小时。反应混合物冷却至室温，然后水(170mL)加入到该反应混合物中并分出。水层用二氯甲烷(2x 100mL)萃取。合并后的有机层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，用CHCl3-甲醇(50∶1)洗脱，获得题列化合物，褐色固体，(收率：2.9g，51.6％)和它的位置异构体(橙色无定形固体，收率；0.8g，14.9％)。
1H NMR(d，CDCl3)3.99(t，2H，J＝5.4Hz)，4.14(t，2H，J＝5.4Hz)，4.85(s，2H)，5.29(s，2H)，7.54(d，2H，J＝8.6Hz)，7.57(s，1H)，8.24(d，2H，J＝8.6Hz)，9.85(s，1H)。
位置异构体1H NMR(d，CDCl3)3.95(t，2H，J＝5.4Hz)，4.44(t，2H，J＝5.4Hz)，4.87(s，2H)，5.29(s 2H)，7.54(d，2H，J＝8.7Hz)，7.78(s，1H)，8.24(d，2H，J＝8.7Hz)，9.71(s，1H)。
步骤5：(5R)-6-[乙酰氧基-(7-对硝基苯甲氧基羰基-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基)-甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-对硝基苯甲酯：
室温氮气下7-对硝基苯甲氧基羰基-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲醛(1.6g)的无水乙腈(25mL)溶液加入到MgBr2(2.2g)的无水乙腈(55mL)溶液中，然后混合物搅拌10分钟。加入(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(1.8g)的无水THF(80mL)溶液，混合物冷却至-20℃，然后一次性加入三乙胺(1.6mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌3小时并用4，4-二甲基氨基吡啶(58.3mg)和乙酸酐(0.89mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌15小时。10％柠檬酸水溶液(320mL)加入到该反应混合物中，水层用乙酸乙酯(3x160mL)萃取。有机层用水、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，用CH2Cl2-丙酮(20∶1)洗脱，获得题列化合物，两种非对映体混合物(81∶19，褐色泡沫无定形固体。收率：2.1g，59.9％。
1H NMR(d，CDCl3)2.01(s，2.43H)，2.24(s，0.57H)，3.93-，3.96(m，2H)，4.02-4.05(m，2H)，4.74-4.76(m，2H)，5.28(d，1H，J＝13.5Hz)，5.28(s，2H)，5.45(d，1H，J＝13.5Hz)，6.07(s，0.19H)，6.29(s，0.81H)，6.31(s，0.81H)，6.80(s，0.19H)，6.83(s，0.19H)，7.08(s，0.81H)，7.43(s，0.19H)，7.46(s，0.81H)，7.54(d，2H，J＝8.6Hz)，7.61(d，2H，J＝8.8Hz)，8.24(d.4H，J＝8.3Hz)。
步骤6：(5R)，(6Z)-7-氧代-6-(5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亚甲基)-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐：
(5R)-6-[乙酰氧基-(7-对硝基苯甲氧基羰基-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基)-甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸对硝基苯甲酯(2.0g)溶解于THF(63mL)中。迅速地加入新鲜活化的锌粉(7.9g)和0.5mol/L的磷酸盐缓冲液(pH6.5，63mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。反应溶液通过硅藻土垫片过滤，该垫片用水(150mL)和正丁醇(150mL)洗涤。分出水层，然后有机层用水(2x 50mL)萃取。合并后的水层浓缩至61g并经过Diaion HP-21树脂(80mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)柱色谱法。吸附后，柱子用水，然后用5％乙腈水溶液洗脱。合并后的馏分35℃高真空下浓缩，冷冻干燥获得题列化合物，黄色无定形固体。收率：172mg，20.1％：
mp 150℃(dec)；1HNMR(d，D2O)3.02(t，2H，J＝5.6Hz)，3.82(s，2H)，3.89(d，2H，J＝5.6Hz)，6.38(s，1H)，6.84(s，1H)，6.87(s，1H)，7.24(s，1H)；IR(KBr)
实施例11
制备(5R，6Z)-6-{[5-(4-甲氧基苯甲基)-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2- 基]亚甲基}-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸
步骤1：6，7-二氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2，5(4H)-二甲酸-5-叔丁基-2-乙酯：
6，7-二氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2，5(4H)-二甲酸-5-叔丁基-2-乙酯根据实施例5(步骤1)所述的方法进行制备。由1-哌啶甲酸叔丁酯(9.9g，50mmol)，POCl3(6.3g，40mmol)和DMF(3.8g，50mmol)起始。氯甲酰基中间体与巯基乙酸乙酯(6.0g，50mmol)和Et3N反应。产物通过SiO2柱色谱法纯化并用3∶1己烷∶乙酸乙酯纯化。收率：8.7g，56％；白色液体。(M+H)312。
步骤2：2-(羟基甲基)-6，7-二氢噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯：
2-(羟基甲基)-6，7-二氢噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯根据实施例5(步骤2)所述的方法进行制备。由6，7-二氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2，5(4H)-二甲酸-5-叔丁基-2-乙酯(1-0g，3.21mmol)和LiAIH4(500mg，过量)起始，分离到807mg(92％收率)醇衍生物，白色液体。(M+H)270。
步骤3：2-(甲酰基)-6，7-二氢噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯：
2-(甲酰基)-6，7-二氢噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯根据实施例5(步骤3)所述的方法进行制备。由2-(羟基甲基)-6，7-二氢噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯(1.0g3.7mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液和活化MnO2(5g，过量)起始，分离到800g(81％收率)的醛衍生物，褐色固体。(M+H)268。
步骤4：2-(甲酰基)-6，7-二氢噻吩并[3，2-c]-5(4H)吡啶：
2-(甲酰基)-6，7-二氢噻吩并[3，2-c]-5(4H)吡啶由2-(甲酰基)-6，7-二氢噻吩并[3，2-c]吡啶-5(4H)-甲酸叔丁酯(1.0g3.7mmol)溶解于CH2Cl2(20ml)、MeOH(90％，20ml)和1N.HCl的二噁烷(10ml)中开始制备。反应混合物室温搅拌48小时。最后反应混合物浓缩至干，不用纯化用于下一步骤中。收率：750mg(HCl盐，定量的)；M+H 168。
步骤5：2-甲酰基[5-(4-甲氧基苯甲基)-4，5，6，7-四氢噻吩并][3，2-c]吡啶：
向搅拌的2-(甲酰基)-6，7-二氢噻吩并[3，2-c]-5(4H)吡啶(1.4g，5.2mmol)的DMF(20ml)溶液中，室温加入4-甲氧基苯甲基氯(0.94g，6.2mmol)和N，N-二异丙基乙胺(10ml，过量)。反应混合物搅拌24小时并用水停止。反应混合物用氯仿萃取；用水充分洗涤并通过无水MgSO4干燥。过滤并浓缩。产物通过SiO2柱色谱法纯化，用乙酸乙酯洗脱。浅黄色油。收率：470mg，35％；M+H 288。
步骤6：4-硝基苯甲基-6-[(乙酰氧基)[5(4-甲氧基苯甲基)-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸酯：
室温氩气下，2-甲酰基[5-(4-甲氧基苯甲基)-4，5，6，7-四氢噻吩并][3，2-c]吡啶(574mg，2.0mmol)和(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(772mg，2.0mmol)的无水THF溶液(20mL)连续地加入到无水MgBr2:O(Et)2(390mg，1.5mmol)的无水乙腈(15mL)溶液中。冷却至-20℃后，一次性加入Et3N(2.0mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌2小时，并用乙酸酐(1.04mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌15小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并用硅藻土垫片过滤。该垫片用乙酸乙酯洗涤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脱。所收集的馏分减压浓缩，非对映体的混合物用于下一步骤中。浅黄色无定形固体；收率：550mg，40％；M+H 714和716。
步骤-7：(5R，6Z)-6-{[5-(4-甲氧基苯甲基)-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)]亚甲基}-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸：
4-硝基苯甲基-6-[(乙酰氧基)[5(4-甲氧基苯甲基)-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸酯(300mg，0.42mmol)溶解于THF(20mL)和乙腈(10mL)中。迅速地加入新鲜活化的锌粉(5.2g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5，28mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。反应混合物过滤，冷却至3℃，并加入0.1M的NaOH将pH调整至8.5。滤液用乙酸乙酯洗涤并分出水层。水层35℃高真空下浓缩得到黄色沉淀。产物用HP21树脂反相柱色谱法纯化。柱子先用去离子水(2升)洗脱，然后用10％CAN∶水洗脱。收集含有产物的馏分并在室温减压下浓缩。黄色固体用丙酮洗涤并过滤。干燥。收率：50mg，18％；黄色结晶；mp.127℃；(M+H)441。
1H NMR(DMSO-d6)d 2.7(m，2H)，2.8(bm，2H)，3.4(m，2H)，3.74(s，3H)3.8(s，2H)，6.6(s，1H)，6.88(dd，2H)，7.14(s，1H)，7.24(dd，2H)，7.4(s，1H)，7.59(s，1H)。
实施例12
制备(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氢-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-2-基亚甲基)-7-氧 代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐
步骤1：5-甲硫基-3，6-二氢-2H-[1，4]噻嗪盐酸盐
5-甲硫基-3，6-二氢-2H-[1，4]噻嗪盐酸盐根据USP5,629,322所述的方法进行制备。
步骤2：3-亚氨基硫代吗啉盐酸盐
5-甲硫基-3，6-二氢-2H[1，4]噻嗪氢碘化物(7.1g)溶解于10％K2CO3水溶液(150mL)中，水层用CH2Cl2(5x 70mL)萃取。合并后的有机层干燥(MgSO4)，过滤并减压浓缩。氯化铵(1.7g)加入到获得的残余物的无水乙醇(128mL)中，加热至回流1小时。反应混合物冷却至室温。真空分出反应溶液，获得亚氨基硫代吗啉盐酸盐，褐色固体(4.3g，定量的)。
1H NMR(d，DMSO-d6)3.15(t，2H，J＝5.9Hz)，3.74(t，2H，J＝5.9Hz)，3.83(s，2H)，8.97(brs，1H)，9.38(brs，1H)，9.99(brs，1H)。
步骤3：5，6-二氢-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-2-甲醛和5，6-二氢-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-3-甲醛
2-溴-3-羟基丙烯醛(7，4.3g)、对甲苯磺酸一水合物(52mg)和2-丙醇(5.3mL)的环己烷(43mL)混合物共沸直到蒸汽温度升至80℃。反应混合物减压浓缩。残余物溶解于无水乙醇(28mL)中。室温加入3-亚氨基硫代吗啉盐酸盐(4.3g)的无水乙醇(143mL)和28％甲醇钠的甲醇溶液(5.0mL)混合物。反应混合物室温搅拌1小时，然后真空分出反应溶液。残余物溶解于氯仿(128mL)中，加入三乙胺(3.6mL)，然后反应混合物加热至回流2.5小时。反应混合物冷却至室温，然后减压浓缩。残余物溶解于二氯甲烷(300mL)中并用50％K2CO3水溶液(2x 100mL)洗涤。有机层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，用CHCl3-丙酮(10∶1)洗脱，获得5，6-二氢-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-2-甲醛(褐色固体，445mg，10.3％)和5，6-二氢-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-3-甲醛(褐色固体，872mg，20.2％)。5，6-二氢-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-2-甲醛：1H NMR(d，CDCl3)3.07(t，2H，J＝5.7Hz)，3.95(s，2H)，4.33(t，2H，J＝5.7Hz)，7.55(s，1H)，9.83(s，1H)。5，6-二氢-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-3-甲醛：1H NMR(d，CDCl3)3.05(t，2H，J＝5.7Hz)，3.98(s，2H)，4.61(t，2H，J＝5.7Hz)，7.73(s，1H)，9.69(s，1H)。
步骤4：(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氢-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐：
室温氮气下，5，6-二氢-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-2-甲醛(9，392mg)的无水乙腈(20mL)溶液加入到MgBr2(1.1g)的无水乙腈(20mL)溶液中，然后混合物搅拌10分钟。加入(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(1.0g)的无水THF(40mL)溶液，混合物冷却至-20℃，然后一次性加入三乙胺(0.8mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌3.5小时并用4-二甲基氨基吡啶(30mg)和乙酸酐(0.44mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌14小时。10％柠檬酸水溶液(240mL)加入到反应混合物中，水层用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。合并后的有机层用水、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法粗略地纯化，用CH2Cl2-丙酮(50∶1)洗脱，获得粗的(5R)-6-[乙酰氧基-(5，6-二氢-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸对硝基苯甲酯固体。
以上获得的固体通过SiO2柱色谱法纯化，用505乙酸乙酯∶己烷洗脱。所获得的浅黄色固体溶解于THF(17mL)中。迅速地加入新鲜活化的锌粉(2.2g)和0.5mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.5，17mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。反应溶液通过硅藻土垫片过滤，该垫片用水(40mL)和正丁醇(30mL)洗涤。分出水层，然后有机层用0.5mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.5，2x 10mL)萃取。合并后的水层浓缩至23g，加入1mol/L的NaOH将pH调整至7.25，经过Diaion HP-21树脂(30mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)柱色谱法。吸附后，柱子用水洗脱，然后用10％乙腈水溶液洗脱。合并后的活性馏分在35℃高真空下浓缩，冷冻干燥得到(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氢-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噻嗪-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐，黄色无定形固体(168mg，20.9％)。
mp 135℃(dec)；1H NMR(d，D2O)3.00(t，2H，J＝5.7Hz)，3.80(AB，2H，J＝16.7，18.1Hz)，4.19(t，2H，J＝5.7Hz)，6.44(d，1H，J＝0.8Hz)，6.89(s，1H)，6.93(s，1H)，7.29(s，1H)；M+H＝322。
实施例13
制备(5R)，(6Z)-6-(6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-a]咪唑-2-基亚甲基)-7-氧代-4- 硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐
步骤1：6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-a]咪唑-2-甲醛
28％甲醇钠(5.26g)室温加入到4，5-二氢-3H-吡咯-2-基胺盐酸盐(3.27g)的乙醇(250mL)溶液中。室温搅拌5分钟后，2-溴-3-丙氧基丙烯醛(5.79g)室温加入到该混合物中，然后反应混合物室温搅拌1小时。反应混合物真空蒸发至干。残余物溶解于CHCl3(300mL)中，加入三乙胺(3.8mL)。混合物加热至回流3小时。反应混合物冷却至室温，50％K2CO3洗涤，无水K2CO3干燥，过滤并减压蒸发。残余物经过硅胶柱色谱法，用CHCl3-丙酮(2∶1)洗脱，获得6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-a]咪唑-2-甲醛(41％，1.51g)，浅黄色固体。
1H NMR(d，CDCl3)：2.62-2.7(m，2H)，2.90-2.94(m，2H)，4.07(t，2H，J ＝7.2Hz)，7.59(s，1H)，9.80(s，1H)。
步骤2：(5R)，(6Z)-6-(6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-a]咪唑-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐
室温氩气下，6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-a]咪唑-2-甲醛(1.36g)加入到无水MgBr2(5.64g)的无水乙腈(155mL)溶液中。(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(3.86g)的无水THF溶液(155mL)加入到该混合物中，冷却至-20℃，一次性加入Et3N(4.18mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌3小时，并用乙酸酐(1.89mL)和DMAP(370mg)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌14.5小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用1M柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并过滤。该垫片用乙酸乙酯洗涤。滤液减压下浓缩。残余物溶解于THF(166mL)和乙腈(77mL)中。迅速地加入新鲜活化的锌粉(23.2g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5，243mL)。反应容器熔箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。反应混合物过滤，冷却至3℃，加入1M NaOH将pH调整至8。滤液用乙酸乙酯洗涤并分出水层。向水层中加入1M NaOH再将pH调整至8。所得的混合物35℃高真空下浓缩。浓缩物经过Diaion HP-21(20mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)树脂柱色谱法。吸附后，柱子用H2O-MeCN(1/0-9/1)洗脱得到纯化的活性馏分，(5R)，(6Z)-6-(6，7-二氢-5H-吡咯并[1，2-a]咪唑-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐。合并后的馏分35℃高真空下浓缩，冷冻干燥得到题列化合物，黄色无定形固体(681mg，24％，pH7.8)。
mp 190℃(dec)；1H NMR(d，D2O)：2.48-2.56(m，2H)，2.74-2.79(m，2H)，3.94-3.99(m，2H)，6.47(d，1H，J＝0.7Hz)，6.94(s，1H)，6.95(s，1H)，7.36(s，1H)；(M+H)291。
实施例14
制备(5R，6Z)-6-(咪唑并[2，1-b][1，3]苯并噻唑-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸。
步骤1：咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲酸乙酯：
溴丙酮酸乙酯(9.8g，50mmol)室温逐滴地加入到搅拌的2-氨基苯并噻唑(7.5g，50mmol)的DMF(100ml)溶液中。加入后，反应混合物加热至回流6小时。反应混合物冷却至室温并用冰冷的水停止。水层用NH4OH中和，过滤所分出的固体。用水充分洗涤并干燥。获得的粗产物不用纯化用于下一步骤中。褐色固体；收率：10g，81％；M+H248。mp97℃。
步骤2：咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲醇：
0℃缓慢地向搅拌的LiAlH4(2.0g，过量)的无水THF浆状物中加入咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲酸乙酯(4.9g，20mmol)的THF(100ml)溶液。加入后，反应混合物室温搅拌1小时，并用饱和NH4Cl/NH4OH停止。所分出的固体用氯仿/MeOH(3∶1)稀释并用硅藻土垫片过滤。有机层用饱和NaCl洗涤一次，通过无水MgSO4干燥。过滤并浓缩。获得的褐色固体不用纯化用于下一步骤中。收率：3.8g，93％；M+H 205；mp131℃。
步骤3：2-甲酰基-咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑：
向搅拌的咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲醇(2.04g，10mmol)的二氯甲烷(200ml)溶液中加入活化的MnO2(15g，过量)。反应混合物室温搅拌24小时并用硅藻土垫片过滤。反应混合物浓缩，产物通过硅胶柱色谱法纯化，并用75％乙酸乙酯；己烷洗脱。褐色固体；收率：800mg，40％；M+H 203。
步骤4：4-硝基苯甲酯-6-[(乙酰氧基)(咪唑并[2，1-b][1，3]苯并噻唑-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸：
2-甲酰基咪唑并[2，1-b]苯并噻唑(444mg，2.2mmol)和(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(772mg，2mmol)的无水THF溶液(20mL)室温氩气下连续地加入到无水MgBr2：醚合物(619mg2.4mmol)的无水乙腈(15mL)溶液中。冷却至-20℃后，一次性加入Et3N(2.0mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌2小时并用乙酸酐(1.04mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌15小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％的柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)，用硅藻土垫片过滤。该垫片用乙酸乙酯洗涤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱，然后柱子用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脱。所收集的馏分减压下浓缩，非对映体的混合物用于下一步骤中。浅黄色无定形固体；收率：850mg，67％；mp69℃；M+H630。
步骤-5：(5R)，(6Z)-6-(咪唑并[1，2-b][1，3]苯并噻唑-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸：
4-硝基苯甲基-6-[(乙酰氧基)(咪唑并[2，1-b][1，3]苯并噻唑-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸酯(500mg，0.79mmol)溶解于THF(17mL)和乙腈(36mL)中。迅速地加入新鲜活化的锌粉(5.2g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5，28mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。反应混合物过滤，冷却至3℃，加入1N HCl将pH调整至7.5。滤液用乙酸乙酯洗涤并分出水层。水层在35℃高真空下浓缩得到黄色沉淀。该沉淀物溶解于乙腈中，装载到HP-21反相柱上。用去离子水(2L)然后用10％乙腈∶水洗脱。收率：105mg，35％；黄色结晶；mp233℃；M+H 356。
1H NMR(DMSO-d6)□6.51(s，1H)，6.53(s，1H)，7.09(s，1H)，7.47(t，1H，J＝7.5Hz)，7.54(t，1H，J＝7.5Hz)，8，06(t，1H)，8.62(s，1H)。
实施例15
制备(5R，6Z)-6-[(7-甲氧基咪唑并[2，1-b][1，3]苯并噻唑-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸.
步骤1：7-甲氧基咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲酸乙酯：
7-甲氧基咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲酸乙酯根据实施例1(步骤1)所述的方法制备。由6-甲氧基-2-氨基苯并噻唑(27g，0.15mol)和溴丙酮酸乙酯(39.9g，0.2mol)起始，分离到24g(43％收率)的7-甲氧基咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲酸乙酯，褐色固体。(M+H)277。
步骤2：7-甲氧基咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲醇：
7-甲氧基咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲醇根据实施例1(步骤2)的方法进行制备。由7-甲氧基咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲酸乙酯(12.5g，43.5mmol)和LiAlH4溶液(43.5ml，0.5M的THF溶液)起始，分离到4.0g(40％收率)的醇衍生物，褐色固体。(M+H)235。
步骤3：2-甲酰基-7-甲氧基咪唑并[2，1-b]苯并噻唑：
2-甲酰基-7-甲氧基咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑根据实施例1(步骤3)的方法进行制备。由7-甲氧基咪唑并[2，1-b]苯并噻唑-2-甲醇(4.0g，17mmol)的二氯甲烷/DMF(300mL∶50mL)溶液和活化的MnO2(12g，过量)起始，分离到822mg(21％收率)的醛衍生物，褐色固体。(M+H)233。
步骤4：4-硝基苯甲基-6-[(乙酰氧基)(7-甲氧基咪唑并[2，1-b][1，3]苯并噻唑-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸：
2-甲酰基-7-甲氧基咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑(822mg，3.5mmol)和(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(1.364，3.54mmol)的无水THF溶液(40mL)室温氩气下连续地加入到无水MgBr2：醚合物(1.3g，5mmol)的无水乙腈(15mL)溶液中。冷却至-20℃后，一次性加入Et3N(2.0mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌2小时并用乙酸酐(1.04mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌15小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并用硅藻土垫片过滤。该垫片用乙酸乙酯洗涤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱，然后柱子用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脱。所收集的馏分减压下浓缩，非对映体的混合物用于下一步骤中。浅黄色无定形固体；收率：2.24g，95％；M+H 660。
步骤-5：(5R)，(6Z)-6-[(7-甲氧基咪唑并[1，2-b][1，3]苯并噻唑-2-基亚甲基)]-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸：
4-硝基苯甲基-6-[(乙酰氧基)(7-甲氧基咪唑并[2，1-b][1，3]苯并噻唑-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸酯(659mg，1.0mmol)溶解于THF(17mL)和乙腈(36mL)中。迅速地加入新鲜活化的锌粉(5.2g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5，28mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。反应混合物过滤，冷却至3℃，加入1N HCl将pH调整至7.5。滤液用乙酸乙酯洗涤并分出水层。水层35℃高真空下浓缩得到黄色沉淀。沉淀过滤并用H2O、MeCN、丙酮洗涤得到题列化合物。收率：68mg；23％；黄色晶体；mp284；M+H386。
1H NMR(DMSO-d6)□3.89(s，3H)，6.58(s，1H)，6.64(s，1H)，7.14(s，1H)，7.2(dd，1H，J＝6.0Hz)，7.75(d，1H，J＝3.0Hz)，8.03(d，J＝6.0Hz 1H)，8.62(s，1H)。
实施例16
制备(5R，6Z)-6-[(7-氯咪唑并[2，1-b][1，3]苯并噻唑-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸
步骤1：7-氯咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲酸乙酯：
7-氯咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲酸乙酯根据实施例1(步骤1)所述的方法制备。由6-氯-2-氨基苯并噻唑(9.2g，50mmol)和溴丙酮酸乙酯(11.6g，60mmol)起始，分离到8.5g(60％收率)7-氯咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲酸乙酯，褐色固体。(M+H)281。
步骤2：7-氯咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲醇：
7-氯咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲醇根据实施例1(步骤2)的方法制备。由7-氯咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲酸乙酯(9.0g，32.1mmol)和LiAlH4(4.0g，过量)起始，分离到5.5g(72％收率)醇衍生物，褐色固体。mp166℃(M+H)239。
步骤3：2-甲酰基-7-氯咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑：
2-甲酰基-7-氯咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑根据实施例1(步骤3)的方法制备。由7-氯咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲醇(4.0g16.8mmol)的二氯甲烷/MeOH(300mL∶50mL)溶液和活化MnO2(20g，过量)起始，分离到2.2g(55％收率)的醛衍生物，褐色固体。(M+H)236。
步骤4：4-硝基苯甲基-6-[(乙酰氧基)(7-氯咪唑并[2，1-b][1，3]苯并噻唑-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸：
2-甲酰基-7-氯咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑(270mg，1.14mmol)和(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(500mg，1.14mmol)无水THF溶液(20mL)室温氩气下连续地加入到无水MgBr2:O(Ft)2(390mg，1.5mmol)的无水乙腈(15mL)溶液中。冷却至-20℃后，一次性加入Et3N(2.0mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌2小时，并用乙酸酐(1.04mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌15小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并用硅藻土垫片过滤。该垫片用乙酸乙酯洗涤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脱。所收集的馏分减压下浓缩，非对映体的混合物用于下一步骤中。浅黄色无定形固体；收率：495mg，65％；M+H 665。
步骤-5：(5R)，(6Z)-6-[(7-氯咪唑并[1，2-b][1，3]苯并噻唑-2-基亚甲基)]-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸：
4-硝基苯甲基-6-[(乙酰氧基)(7-氯咪唑并[2，1-b][1，3]苯并噻唑-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸酯(450mg，0.67mmol)溶解于THF(20mL)和乙腈(10mL)中。迅速地加入新鲜活化的锌粉(5.2g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5，28mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。反应混合物过滤，冷却至3℃，加入0.1N NaOH将pH调整至8.5。滤液用乙酸乙酯洗涤并分出水层。水层在35℃高真空下浓缩得到黄色沉淀。产物用HP21树脂反相柱色谱法纯化。柱子先用去离子水(2L)洗脱，后用10％乙腈∶水洗脱。收集合有产物的馏分，室温减压下浓缩。黄色固体用丙酮洗涤，过滤并干燥。收率：80mg，18％；黄色结晶；mp240℃；(M+H+Na)412。
1H NMR(DMSO-d6)□6.6(s，2H)，7.1(s，1H)，7.62(dd，1H)，8.11(d，1H)，8.2(s，1H)，8.6(s，1H)。
实施例17
制备(5R)，(6Z)-6-咪唑并[1，2-a]喹啉-2-基亚甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸
咪唑并[1，2-a]喹啉-2-甲醛
咪唑并[1，2-a]喹啉-2-甲醛(4)根据Westwood及其合作者(J.Med.Chem.1988，31，1098-1115)的方法制备。
步骤1：(5R，6RS)-6-[(RS)-乙酰氧基咪唑并[1，2-a]喹啉-2-基甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯：
咪唑并[1，2-a]喹啉-2-甲醛(1.09g)和(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(2.22g)的无水THF溶液(75.5mL)室温氩气下连续地加入到无水MgBr2(2.5g)的无水乙腈(75.5mL)溶液中。冷却至-20℃后，一次性加入Et3N(1.85mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌2小时并用乙酸酐(1.04mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌15小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％的柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠，和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并通过硅藻土垫片过滤。该垫片用乙酸乙酯洗涤。滤液减压浓缩。残余物经过硅胶柱，然后柱子用CHCl3-丙酮(1/0～95/5)洗脱。所收集的馏分减压浓缩，继而由CHCl3-Et2O中重结晶得到题列化合物的一种异构体。(浅黄色晶体，收率：1.3g，38％)。
1H NMR(CDCl3)□2.37(s，3H)，5.29(d，1H，J＝13.5Hz)，5.45(d，1H，J＝13.5Hz)，6.22(s，1H)，7.14(s，1H)，7.46～7.52(m，3H)，7.56(d，1H，J＝9.6Hz)，7.62(d，2H，J＝8.6Hz)，7.64～7.69(m，1H)，7.83(dd，1H，J＝1.1，7.9Hz)，7.93(d，1H，J＝8.3Hz)，7.99(s，1H)，8.25(d，2H，J＝8.6Hz)。
步骤2：(5R)，(6Z)-6-咪唑并[1，2-a]喹啉-2-基亚甲基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸：
(5R，6RS)-6-[(RS)-乙酰氧基咪唑并[1，2-a]喹啉-2-基甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(1.3g)溶解于THF(17mL)和乙腈(36mL)中。迅速地加入新鲜活化的Zn粉(5.2g)和0.5M磷酸缓冲液(pH6.5，28mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。反应混合物过滤，冷却至3℃，加入1N HCl将pH调整至7.5。滤液用乙酸乙酯洗涤并分出水层。水层在35℃高真空下浓缩得到黄色沉淀。沉淀过滤并用H2O、乙腈和丙酮洗涤得到题列化合物，收率297mg，38％，黄色结晶mp205℃。
1H NMR(D2O)d 6.19(s，1H)，6.36(s，1H)，6.87(s，1H)，6.96(d，1H，J＝9.5Hz)，7.32(d，1H，J＝9.5Hz)，7.33(s，1H)，7.44～7.57m，4H)。
实施例18
制备(5R)，(6Z)-6-(6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸
步骤1：制备6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑-2-甲酸乙酯；
2-氯环戊酮(11.8g，100mmol)和硫脲(8.0g101mmol)的混合物在乙醇∶THF(1∶2)中回流16小时。反应混合物冷却至室温，所分离的白色固体过滤。(9.0g分离出的)固体溶解于无水乙醇(100ml)和甲醇钠(1.9g2.7g，51mmol)中。向该溶液中加入溴丙酮酸乙酯(10.0g)并室温搅拌2小时。然后回流48小时。最后反应混合物冷却至室温并浓缩。残余物用氯仿萃取并用水充分洗涤。产物通过硅胶柱色谱法纯化并用50％乙酸乙酯∶己烷洗脱。红色半固体；收率：3.0g；M+H 237。
该酯用LiAlH4还原，所得的醇用活化的MnO2氧化。所获得的醛用于下一步骤中。
步骤：3制备(6R)-6-[(乙酰氧基)(6，7-二氢-5H-环戊二烯并[b]咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑-2-基)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯：
2-甲酰基-6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑(600mg，3.1mmol)和(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(1.2g，3mmol)d无水THF溶液(20mL)室温氩气下连续地加入到无水MgBr2:O(Et)2(1.2g，3.0mmol)的无水乙腈(15mL)溶液中。冷却至-20℃后，一次性加入Et3N(2.0mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌2小时并用乙酸酐(1.04mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌15小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并用硅藻土垫片过滤。该垫片用乙酸乙酯洗涤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脱。所收集的馏分减压下浓缩，非对映体的混合物用于下一步骤中。浅黄色无定形固体；收率：850mg，45％；M+H 620。
步骤4：制备(5R)，(6Z)-6-(6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸
(5R)-6-[(乙酰氧基)(6，7-二氢-5H-环戊二烯并[d]咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑-2-基)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(850mg，1.37mmol)溶解于THF(20mL)和乙腈(10mL)中。迅速地加入新鲜活化的锌粉(5.2g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5，28mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。反应混合物过滤，冷却至3℃，加入0.1N NaOH将pH调整至8.5。滤液用乙酸乙酯洗涤并分出水层。水层35℃高真空浓缩得到黄色沉淀。产物用HP21树脂反相柱色谱法纯化。柱子先用去离子水(2L)洗脱，后用10％乙腈∶水洗脱。收集含有产物的馏分，室温减压下浓缩。黄色固体用丙酮洗涤，过滤并干燥。收率：138mg，29％；黄色晶体；
mp 192℃；(M+H+Na)346.1H NMR(DMSO-d6)□8.2(s，1H)，7.1(s，1H)，6.55(s，1H)，6.4(s，1H)，3.01(m，2H)，2.51(m，4H)。
实施例19
制备(5R)，(6Z)-6-(咪唑并[1.2-a]喹喔啉-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫代-1-氮 杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐
咪唑并[1，2-a]喹喔啉-2-甲醛
咪唑并[1，2-a]喹喔啉-2-甲醛根据Westwood及其合作者(J.Med.Chem.1998，31，1098-1115)的方法进行制备。
步骤1：(5R，6RS)-6-((RS)-乙酰氧基咪唑并[1，2-a]喹喔啉-2-基甲基)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸对硝基苯甲酯：
咪唑并[1，2-a]喹喔啉-2-甲醛(505mg)的无水乙腈(33mL)溶液室温氮气下加入到MgBr2(1.1g)的无水乙腈(20mL)中，混合物搅拌10分钟。加入(5R，6RS)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(931g)的无水THF(25mL)溶液后，混合物冷却至-20℃，然后一次性加入三乙胺(0.8mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌4小时，并用4，4-二甲基氨基吡啶(58mg)和乙酸酐(0.44mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌16小时。向反应混合物中加入10％的柠檬酸水溶液(200mL)，水层用乙酸乙酯(3x 100mL)萃取。有机层用水、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压浓缩。残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用CH2Cl2-丙酮(50∶1)洗脱，获得题列化合物，非对映体的混合物(78∶22，淡褐色泡沫无定形，1.0g，68.9％)。
1H NMR(CDCl3)□2.07(s，0.66H)，2.38(s，2.34H)，5.30(d，1H，J＝13.5Hz)，5.45(d，0.78H，J＝13.5Hz)，5.48(d，0.22H，J＝13.5Hz)，6.24(s，0.78H)，6.46(s，0.22H)，6.63(s，0.22H)，7.18(s，0.78H)，7.50(s，0.78H)，7.52(s，0.22H)，7.61(d，1.56H，J＝8.7Hz)，7.63(d 0.44H，J＝8.8Hz)，7.64-7.67(m，1H)，7.68-7.73(m，1H)，7.92-7.95(m，1H)，8.08(s，0.78H)，8.13-8.16(m，1H)，8.24(d，1.56H，J＝8.7Hz)，8.25(d，0.44H，J＝8.8Hz)，8.33(s，0.22H)，9.05(s，0.78H)，9.09(s，0.22H)。
步骤2：(5R)，(6Z)-6-(咪唑并[1.2-a]喹喔啉-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐：
(5R，6RS)-6-((RS)-乙酰氧基咪唑并[1，2-a]喹喔啉-2-基甲基)-6-溴-7-氧代-4-硫代-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-对硝基苯甲酯(951mg)和10％Pd-C(50％湿的，477mg)加入到THF(48mL)和0.5mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.5，48mL)的混合物中。混合物室温400kPa下氢化4小时。反应溶液过滤，Pd-C用水和正丁醇洗涤。分出水层，然后有机层用水萃取。合并后的水层浓缩至57g，经过Diaion HP-21树脂(60mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)柱色谱法。吸附后，柱子用水洗脱，然后用5，10，15和20％的乙腈∶水溶液(每种60mL)洗脱。合并后的馏分在35℃高真空下浓缩，冷冻干燥获得题列化合物，黄色无定形固体，收率148mg(26.1％)，mp300℃(分解)。
1H NMR(D2O)□5.92(s，1H)，6.23(s，1H)，6.66(s，1H)，7.11-7.22(m，3H)，7.25(d，1H，J ＝7.9Hz)，7.50(s，1H)，8.03(s，1H)；IR(KBr)3413，1748，1592，1553cm-1；Imax(H2O)340，293，237，218nm。
实施例20
制备(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氢-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噁嗪-2-基亚甲基)-7-氧 代-4-硫代-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐
步骤1：吗啉-3-酮
吗啉-3-酮可根据USP5,349,045的方法制备。
步骤2：吗啉-3-硫酮
吗啉-3-酮(4.7g)和Lawesson试剂(10.3g)的无水THF(94mL)混合物加热至回流1.5小时。反应混合物冷却至室温，真空分出反应溶剂。残余物经过硅胶柱色谱法并用CHCl3-甲醇(50∶1)洗脱获得黄色固体。粗产物由己烷-乙酸乙酯中重结晶得到题列化合物(4.0g，72.2％)，黄色粉末。
1H NMR(CDCl3)δ3.45(t，2H，J＝5.1Hz)，3.91(t，2H，J＝5.1Hz)，4.55(s，2H)。
步骤3：5-甲硫基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪
吗啉-3-硫酮(4.7g)和碘甲烷(13mL)的无水CH2Cl2(140mL)混合物室温搅拌15小时。反应混合物过滤，固体用CH2Cl2洗涤。所获得的固体用50％K2CO3水溶液(150mL)溶解，水层用CH2Cl2(8x 100mL)萃取。合并后的CH2Cl2层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩，获得题列化合物，浅黄色油(3.6g，67.8％)。
1H NMR(CDCl3)δ2.32(s，3H)，3.71-3.74(m，4H)，4.14-4.15(m，2H)。
步骤4：3-亚氨基吗啉盐酸盐
5-甲硫基-3，6-二氢-2H-[1，4]噁嗪(3.6g)和氯化铵(1.5g)的无水乙醇(136mL)混合物加热至回流1小时。反应混合物冷却至室温。真空分出反应溶剂，获得题列化合物，淡褐色固体(3.6g，97.7％)。
1H NMR(DMSO-d6)δ3.34(m，2H)，3.86(t，2H，J ＝5.2Hz)，4.47(s，2H)。
步骤5：5，6-二氢-8H-咪唑并[2.1-c][1.4]噁嗪-2-甲醛(9)和5，6-二氢-8H-咪 唑并[2，1-c][1，4]噁嗪-3-甲醛
2-溴-3-羟基丙烯醛(4.1g)，对甲苯磺酸-水合物(52mg)和2-丙醇(5.2mL)的环己烷(42mL)混合物共沸直到蒸汽温度升至80℃。反应混合物减压浓缩。残余物溶解于无水乙醇(50mL)中。室温加入3-亚氨基吗啉盐酸盐的(3.4g)无水乙醇(200mL)溶液和28％甲醇钠(4.8g)的甲醇溶液的混合物。反应混合物室温搅拌2小时，然后真空分出反应溶剂。残余物溶解于氯仿(125mL)中，加入三乙胺(3.5mL)，然后反应混合物加热至回流2小时。反应混合物冷却至室温，然后减压浓缩。残余物溶解于二氯甲烷(300mL)中，并用50％K2CO3水溶液(2x 100mL)洗涤。有机层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，并用CHCl3-丙酮(4∶1)洗脱获得题列化合物(浅橙色固体，1.4g，36.3％)和另一种位置异构体。(浅橙色固体，609mg，16.1％)。
所要的产物：：1H NMR(CDCl3)δ4.08-4.15(m，4H)，4.88(s，2H)，7.58(s，1H)，9.85(s，1H)。
不想要的位置异构体：1H NMR(CDCl3)δ4.06(t，2H，J＝5.2Hz)，4.40(t，2H，J＝5.2Hz)，4.90(s，2H)，7.75(s，1H)，9.72(s，1H)。
步骤6：(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氢-8H-咪唑并[2.1-c][1.4]噁嗪-2-基亚甲基)-7- 氧代-4-硫代-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐
5，6-二氢-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噁嗪-2-甲醛(1.2g)的无水乙腈(66mL)溶液室温氮气下加入到MgBr2(3.6g)的无水乙腈(66mL)溶液中，然后混合物搅拌10分钟。加入(5R，6S)-6-溴青霉烯-3-甲酸对硝基苯甲酯(3.4g)的无水THF(132mL)溶液，混合物冷却至-20℃，然后一次性加入三乙胺(2.8mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌4小时并用4-二甲基氨基吡啶(100mg)和乙酸酐(1.5mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌18小时。10％柠檬酸水溶液(1L)加入到该反应混合物中，水层用乙酸乙酯(3x500mL)萃取。合并后的有机层用水、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩，获得粗的(5R)-6-[乙酰氧基-(5，6-二氢-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噁嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸对硝基苯甲酯，褐色无定形固体。
向(5R)-6-[乙酰氧基-(5，6-二氢-8H-咪唑并[2，1-c][1，4]噁嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸对硝基苯甲酯的THF(72mL)溶液中迅速地加入新鲜活化的锌粉(14g)和0.5mol/L的磷酸盐缓冲液(pH6.5，72mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2.5小时。反应溶液用硅藻土垫片过滤，该垫片用水(170mL)和正丁醇(170mL)洗涤。分出水层，然后有机层用0.5mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.5，2x 50mL)萃取。合并后的水层浓缩至90g，加入1mol/L NaOH将pH调整至7.5，经过Diaion HP-21树脂(120mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)柱色谱法。吸附后，柱子用水洗脱，然后用5％乙腈水溶液洗脱。合并后的活性馏分35℃高真空浓缩，冷冻干燥得到题列化合物，黄色无定形固体(756mg，29.1％)。
Mp 130℃(dec)；1H NMR(DMSO-d6)δ3.984.01(m，2H)，4.04-4.07(m，2H)，4.74(AB，2H，J＝15.3，22.9Hz)，6.40(d，1H，J＝0.8Hz)，6.55(s，1H)，6.95(d，1H，J＝0.6Hz)，7.54(s，1H)；IR(KBr)3412，1741，1672，1592，1549cm-1；λmax(H2O)304nm。
实施例21
制备(6R)，(6Z)-6-(5，6-二氢-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-基亚甲基)-7-氧代-4- 硫代-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐
步骤1：5，6-二氢-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-甲酸乙酯
根据Ranganathan及其合作者(Indian J.Chem.1991，30B，169-175)相同的方法制备题列化合物。
步骤2：5，6-二氢-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-基)甲醇
MeOH(2.73mL)室温氮气下加入到LiBH4(1.63g)的THF(180mL)溶液中，然后5，6-二氢-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-甲酸乙酯(8.11g)加入到该悬浮液中，在40℃搅拌2小时。混合物用pH1的1mol/L的HCl停止并在室温搅拌1小时。向溶液中加入固体K2CO3到将pH调整至8，混合物用AcOEt萃取。有机层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压浓缩获得题列化合物，褐色晶体(4.87g，78％)。
1H NMR(CDCl3)δ2.44(t，1H，J＝5.8Hz)，2.54-2.62(m，2H)，2.87(t，2H，J＝7.4Hz)，4.10(t，2H，J＝7.2Hz)，4.63(d，2N，J＝5.8Hz)，5.96(s，1H)。
步骤3：5，6-二氢-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-甲醛
MnO2(活化的)(24.4g)加入到(5，6-二氢-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-基)甲醇(4.87g)的CHCl3(350mL)溶液中并在氮气下回流1小时。反应混合物用硅藻土垫片过滤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用正己烷-AcOEt(1/1-1/2)洗脱。获得题列化合物，黄色油(4.35g，91％)。
1H NMR(CDCl3)δ2.63-2.71(m，2H)，2.95(t，2H，J＝7.4Hz)，4.22(t，2H，J＝7.4Hz)，6.52(s，1H)，9.89(s，1H)。
步骤4：(5R)，(6Z)-6-(5，6-二氢-4H-吡咯并[1.2-b]吡唑-2-基亚甲基)-7-氧 代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐
室温氮气下5，6-二氢-4H-吡咯并[1，2-b]吡唑-2-甲醛(1.36g)加入到无水MgBr2(5.52g)的无水乙腈(148mL)溶液中。(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(cont.97％)(3.97g)的无水THF溶液(148mL)加入到该混合物中，冷却至-20℃，一次性加入Et3N(4.18mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌4小时并用乙酸酐(1.89mL)和DMAP(123mg)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌14小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩。
残余物溶解于THF(106mL)和乙腈(49mL)中。迅速地加入新鲜活化的锌粉(22.5g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5，155mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌1.5小时。反应混合物用硅藻土垫片过滤。滤液用乙酸乙酯洗涤并分出水层。水层冷却至3℃，加入1M NaOH将pH调整至8.0。混合物35℃高真空下浓缩。浓缩物经过Diaion HP-21(79mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)树脂柱色谱法。吸附后，柱子用H2O-MeCN(1/0-9/1)洗脱。合并后的馏分在35℃高真空下浓缩，冷冻干燥获得题列化合物，黄色无定形固体(848mg，29％，pH7.1)。
Mp 190℃(dec)；1H NMR(D2O)δ2.49(m，2H)，2.78(t，2H，J＝7.4Hz)，4.02(t，2H，J＝7.4Hz)，6.01(s，1H)，6.29(s，1H)，6.90(s，2H)。
实施例22
制备(5R)(6Z)-7-氧代-6-(4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基亚甲基)-4- 硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐
步骤1：四氢吡啶并[1，2-c][1，2，3]噁二唑酮
0℃氮气下，浓HCl(1.96mL)和NaNO2(2.2g)加入到DL-哌啶酸(3.04g)的H2O(21mL)溶液中并搅拌1小时。该溶液用CH2Cl2萃取，有机层用盐水洗涤。混合物经Na2SO4干燥并减压浓缩得到粗的(2RS)-1-亚硝基哌啶-2-甲酸，浅黄色晶体。
0℃氮气下三氟乙酸酐(1.93g)加入到粗(2RS)-1-亚硝基哌啶-2-甲酸的THF(92mL)溶液中并在0℃搅拌5小时，室温搅拌2小时。该溶液减压浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用正己烷-AcOEt(1/1-0/1)洗脱。获得题列化合物，无色晶体(1.10g，33％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.93-1.99(m，2H)，2.08-2.15(m，2H)，2.65(t，2H，J＝6.5Hz)，4.26(t，2H，J＝6.1Hz)。
步骤2：4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-2-甲酸乙酯：
氮气下，丙炔酸乙酯(804mg)加入到四氢吡啶并[1，2-c][1，2，3]噁二唑酮(1.04g)的邻二甲苯(15mL)溶液中并回流16小时。该溶液减压浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用正己烷-AcOEt(2/1-1/1)洗脱。获得题列化合物，黄色的油(871mg，65％)，和4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-3-甲酸乙酯，黄色的油(345mg，26％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.39(t，3H，J＝7.1Hz)，1.84-1.91(m，2H)，2.02-2.09(m，2H)，2.82(t，2H，J＝6.4Hz)，4.22(t，2H，J＝8.2Hz)，4.39(q，2H，J＝7.1Hz)，6.53(s，1H)。
步骤3：(4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基)甲醇
室温氮气下MeOH(0.29mL)加入到LiBH4(cont.90％)(174mg)的THF(19mL)溶液中，然后4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-2-甲酸乙酯(862mg)加入到该悬浮液中，并在室温搅拌1小时，40℃搅拌1.5小时。混合物用pH1的1mol/L的HCl停止并室温搅拌1小时。固体K2CO3加入到该溶液中将pH调整至8，混合物用AcOEt萃取。有机层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩题列化合物，浅黄色油(691mg，95％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.80-1.87(m，2H)，1.98-2.05(m，2H)，2.77(t，2H，J＝6.4Hz)，2.81-2.84(br，1H)，4.09(t，2H，J＝6.1Hz)，4.62(d，2H，J＝5.3Hz)，5.96(s，1H)。
步骤4：4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-2-甲醛
MnO2(活化的)(3.36g)氮气下加入到(4，5，6，7四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基)甲醇(673mg)的CHCl3(44mL)溶液中并回流1小时。反应混合物用硅藻土垫片过滤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用正己烷-AcOEt(2/1-1/2)洗脱。获得题列化合物，浅黄色油(510mg，77％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.90(m，2H)，2.10(m，2H)，2.84(t，2H，J＝6.4Hz)，4.23(t，2H，J＝6.2Hz)，6.52(s，1H)，9.92(s，1H)。
步骤5：(5R)(6Z)-7-氧代-6-(4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-2-基亚甲基)- 4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐
室温氮气下，4，5，6，7-四氢吡唑并[1，5-a]吡啶-2-甲醛(483mg)加入到无水MgBr2(1.81g)的无水乙腈(48mL)溶液中。(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(cont.97％)(1.28g)的无水THF溶液(48mL)加入到该混合物中，冷却至-20℃，一次性加入Et3N(1.35mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌2小时并用乙酸酐(0.61mL)和DMAP(40mg)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌16小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩。
残余物溶解于THF(35mL)和丙酮(16mL)中。迅速地加入新鲜活化的锌粉(7.43g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5，51mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌1.5小时。反应混合物通过硅藻土垫片过滤。滤液用乙酸乙酯洗涤并分出水层。水层冷却至3℃，加入1M NaOH将pH调整至8.0。混合物35℃高真空下浓缩。浓缩物经过Diaion HP-21(105mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)树脂柱色谱法。吸附后，柱子用H2O-MeCN(1/0-85/15)洗脱。合并后的馏分35℃高真空下浓缩，冷冻干燥获得题列化合物，黄色无定形固体(427mg，41％，pH7.7)。
Mp 190℃(dec)；1H NMR(D2O)δ1.67-1.71(m，2H)，1.85-1.89(m，2H)，2.64(t，2H，J＝6.3Hz)，3.97(t，2H，J＝6.1Hz)，5.97(s，1H)，6.25(s，1H)，6.85(s，1H)，6.88(s，1H)。
实施例23
制备(5R)，(6Z)-6-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亚 甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸钠盐
步骤1：5-甲氧基-1-甲基-3，6-二氢-1H-吡嗪-2-酮
根据S.Rajappa和B.G.Advani(Tetrahedron.1973，29，1299-1302)相同的方法制备题列化合物。
步骤2：5-氨基-1-甲基-3，6-二氢-1H-吡嗪-2-酮
5-甲氧基-1-甲基-3，6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(2.3g)和氯化铵(936mg)的无水乙醇(32mL)混合物室温搅拌1小时，然后回流2小时。反应混合物冷却至室温并减压蒸发。残余物用氯仿在室温研制30分钟。沉淀过滤并真空干燥。获得5-氨基-1-甲基-3，6-二氢-1H-吡嗪-2-酮盐酸盐，淡褐色粉末(1.7g，66％)。
5-氨基-1-甲基-3，6-二氢-1H-吡嗪-2-酮盐酸盐(662mg)的甲醇(10mL)溶液0℃加入10％碳酸钾水溶液，然后在0℃搅拌40分钟。混合物减压下浓缩。在室温残余物用氯仿(18mL)和甲醇(2mL)研制30分钟。沉淀过滤并真空干燥。获得淡褐色粉末化合物(515mg，定量的)。
1H NMR(DMSO-d6)δ2.88(s，3H)，3.94(s，2H)，4.42(s，2H)。
步骤3：7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲醛和7-甲基- 6-氧代-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-甲醛
2-溴-3-异丙氧基丙烯醛(1.3g)的无水乙腈(60mL)溶液室温加入到5-氨基-1-甲基-3，6-二氢-1H-吡嗪-2-酮(782mg)的无水乙腈(60mL)溶液中。反应混合物室温搅拌20小时，加入三乙胺(0.95mL)，然后回流2小时。反应混合物冷却至室温，然后减压蒸发。残余物溶解于氯仿(10mL)中，并用50％K2CO3水溶液(10mL)洗涤。水层用萃取氯仿。有机层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压蒸发。残余物经过硅胶柱色谱法并用CHCl3-MeOH(95∶5)洗脱获得题列化合物，7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢-咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲醛，浅黄色固体(541mg，49.1％)和它的位置异构体7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢-咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-甲醛，浅黄色固体(128mg，11.6％)。
7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢-咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲醛：1HNMR(CDCl3)δ3.17(s，3H)，4.68(s，2H)，4.78(s，2H)，7.66(s，1H)，9.83(s，1H)。
7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢-咪唑并[1，2-a]吡嗪-3-甲醛：1HNMR(CDCl3)δ3.16(s，3H)，4.70(s，2H)，5.03(s，2H)，7.82(s，1H)，9.73(s，1H)。
步骤4：(5R，6RS)-6-[乙酰氧基(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a] 吡嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸 4-硝基苯甲酯
室温氮气下7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢-咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲醛(319mg)加入到无水MgBr2(786mg)的无水乙腈(32mL)溶液中。(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基-苯甲酯(687mg)的无水THF溶液(32mL)溶液加入到该混合物中，冷却至-20℃，一次性加入三乙胺(0.60mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌3小时，并用4-二甲基氨基吡啶(44mg)和乙酸酐(0.35mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌20小时。混合物用乙酸乙酯和H2O稀释。分出有机层后，水层用乙酸乙酯萃取。合并有机层并用5％柠檬酸水溶液和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后用氯仿洗脱。获得题列化合物，非对映体的混合物(黄色无定形固体；410mg，38％)。
1H NMR(δ，CDCl3)2.03(s，0.7×3H)，2.09(s，0.3×3H)，3.15(s，3H)，4.59-4.62(m，2H)，4.66(s，0.3×2H)，4.67(s，0.7×2H)，5.28(d，1H，J＝13.5Hz)，5.43(d，0.3×1H，J＝13.5Hz)，5.45(d，0.7×1H，J＝13.5Hz)，6.07(s，0.3×1H)，6.28(s，0.7×1H)，6.32(s，0.7×1H)，6.83(s，0.3×1H)，6.86(s，0.3×1H)，7.10(s，0.7×1H)，7.44(s，0.3×1H)，7.47(s，0.7×1H)，7.60(d，0.7×2H，J＝8.6Hz)，7.61(d，0.3×2H，J＝8.6Hz)，8.24(d，2H，J＝8.6Hz)。
步骤5：(5R)，(6Z)-6-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基 亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸钠盐和 (5R)，(6E)-6-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亚甲基)- 7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸钠盐
(5R，6RS)-6-[乙酰氧基-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基)-甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基-苯甲酯(481mg)溶解于THF(6.7mL)和乙腈(3.1mL)中。新鲜活化的锌粉(1.92g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5，9.9mL)加入到该混合物中。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。反应溶液用乙酸乙酯混合并用硅藻土垫片过滤。该垫片用水洗涤并分出水层。水层冷却至3℃，加入1M的NaOH将pH调整至8.0。混合物35℃高真空下浓缩，并冷冻干燥。残余物通过制备HPLC(Inertsil ODS-2，GLScience Inc.，10x 250mm，0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.1)∶CH3CN＝93∶7，4.0mL/min.)分离。分离出的馏分(5R)，(6Z)-6-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸钠盐和(5R)，(6E)-6-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸钠盐分别冷却至3℃，加入1MNaOH将pH调整至8.0。每种溶液在35℃高真空下浓缩。每种浓缩物经过Diaion HP-21(60mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)树脂柱色谱法。吸附后，柱子用水洗脱然，然后用5％乙腈-水洗脱。合并后的馏分35℃高真空下浓缩，冷冻干燥分别获得题列化合物(5R)，(6Z)-6-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸钠盐，黄色无定形固体(125mg，44.4％，Mp115-117℃(分解)和化合物(5R)，(6E)-6-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸钠盐，黄色无定形固体(19mg，6.7％)。
化合物(5R)，(6Z)-6-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸钠盐
1HNMR(δ，D2O)2.99(s，3H)，4.54(s，2H)，4.66(s，2H)，6.38(s，1H)，6.85(s，1H)，6.90(s1H)，7.30(s，1H)。
化合物(5R)，(6E)-6-(7-甲基-6-氧代-5，6，7，8-四氢-咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸钠盐
1HNMR(δ，D2O)2.94(s，3H)，4.45(s，2H)，4.56(s，2H)，6.22(s，1H)，6.48(s，1H)，6.94(s，1H)，7.69(s1H)。
实施例24
制备(5R)(6Z)-6-(6，7-二氢-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-基亚甲基)-7-氧 代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐：
步骤1：(3R)-硫代吗啉-3-甲酸
根据Shiraiwa及其合作者(Biosci.Biotechnol.Biochem.1998，62，2382-2387)相同的方法制备题列化合物。
步骤2：3-氧代-3a，4，6，7-四氢-3H-2-氧杂-5-硫杂-1-氮杂-7a- azonionidenide
0℃氮气下，NaNO2(3.14g)加入到(3R)-硫代吗啉-3-甲酸(4.96g)的1mol/L的HCl(33.7mL)溶液中，并搅拌0.5小时。该溶液用CHCl3(5次)萃取，有机层用盐水洗涤。混合物通过MgSO4干燥并减压浓缩得到粗的(3R)-4-亚硝基硫代吗啉-3-甲酸，浅黄色结晶。
0℃氮气下三氟乙酸酐(7.07g)加入到粗的(3R)-4-亚硝基硫代吗啉-3-甲酸的THF(169mL)溶液中并在0℃搅拌3小时，在室温搅拌17小时。该溶液减压浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用正己烷-AcOEt(1/1-0/1)洗脱。获得题列化合物，浅褐色结晶(3.41g，64％)。
1HNMR(CDCl3)δ3.15(t，2H，J＝5.5Hz)，3.71(s，2H)，4.54(t，2H，J＝5.5Hz)。
步骤3：6.7-二氢-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-甲酸乙酯
氮气下丙炔酸乙酯(2.33g)加入到3-氧代-3a，4，6，7-四氢-3H-2-氧杂-5-硫杂-1-氮杂7a-azonioindenide(3.41g)的邻二甲苯(72mL)溶液中并回流15小时。该溶液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用正己烷-AcOEt(2/1-1/1)洗脱。获得题列化合物，黄色的油(3.13g，68％)，和另一种不需要的位置异构体6，7-二氢-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-3-甲酸乙酯，黄色的油(556mg，12％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.31(t，3H，J＝7.1Hz)，3.04(t，2H J＝5.7Hz)，3.81(s，2H)，4.32(q，2H，J＝7.1Hz)，4.40(t，2H，J＝5.7Hz)，6.54(s，1H)。
步骤4：(6，7-二氢-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-基)甲醇
室温氮气下LiBH4(cont.90％)(536mg)和MeOH(0.9mL)加入到6，7-二氢-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-甲酸乙酯(3.13g)的THF(59mL)溶液中并在40℃搅拌3小时。混合物用pH1的1mol/L的HCl停止，并在室温搅拌1小时。向该溶液中加入固体K2CO3，将pH调整至8，混合物用AcOEt萃取。有机层干燥(K2CO3)并过滤。滤液减压下浓缩获得题列化合物，浅黄色油(2.51g，定量的)。
1H NMR(CDCl3)δ2.58(br，1H)，3.07(t，2H，J＝5.7Hz)，3.84(s，2H)，4.33(t，2H，J＝5.7Hz)，4.63(d，2H，J＝3.9Hz)，6.05(s，1H)。
步骤5：6，7-二氢-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-甲醛
MnO2(活化的)(11.46g)加入到(6，7-二氢-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-基)甲醇(2.31g)的CHCl3(135mL)溶液中并在氮气下回流1小时。反应混合物用硅藻土垫片过滤。滤液减压浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用正己烷-AcOEt(1/1)洗脱。获得题列化合物，浅黄色结晶(1.78g，78％)。
1H NMR(CDCl3)δ3.15(t，2H，J＝5.8Hz)，3.90(s，2H)，4.48(t，2H，J＝5.8Hz)，6.58(s，1H)，9.92(s，1H)。
步骤6：(5R)(6Z)-6-(6，7-二氢-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-基亚甲基)-7- 氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐
室温氮气下6，7-二氢-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噻嗪-2-甲醛(841mg)加入到无水MgBr2(1.88g)的无水乙腈(39mL)溶液中。(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸4-硝基苯甲酯(cont.99.7％)(1.93g)的无水THF溶液(39mL)加入到该混合物中，冷却至-20℃，一次性加入Et3N(2.79mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌3小时并用乙酸酐(0.94mL)和DMAP(61mg)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌17小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩。
残余物溶解于THF(83mL)和乙腈(39mL)中。迅速地加入新鲜活化的锌粉(7.72g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5，122mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌1.5小时。反应混合物用硅藻土垫片过滤。滤液用乙酸乙酯洗涤并分出水层。水层冷却至3℃，加入1M NaOH将pH调整至8.0。混合物35℃高真空下浓缩。浓缩物经过Diaion HP-21(150mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)树脂柱色谱法。吸附后，柱子用H2O-MeCN(1/0-85/15)洗脱。合并后的馏分35℃高真空下浓缩，冷冻干燥获得题列化合物，黄色无定形固体(371mg，22％，pH8.0)。
Mp 190℃(dec)；1H NMR(D2O)δ3.03(t，2H，J＝5.7Hz)，3.75(s，2H)，4.22(t，2H，J＝5.7Hz)，6.07(s，1H)，6.27(s，1H)，6.86(s，1H)，6.89(s，1H)。
实施例25
制备(5R)(6Z)-7-氧代-6-(4H-5-硫杂-1，6a-二氮并环戊二烯-2-基亚甲基)- 4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐
步骤1：3-氧代-3a，4-二氢-3H，6H-2-氧杂-5-硫杂-1-氮杂6a-azonio-3a- pentalenide
0℃氮气下，浓HCl(15mL)和NaNO2(16.6g)加入到L-硫代脯氨酸(24.3g)的H2O(166mL)溶液中并搅拌2小时。该溶液用CH2Cl2萃取，有机层通过MgSO4干燥并减压浓缩得到粗的N-亚硝基衍生物，黄色固体。
0℃氮气下三氟乙酸酐(5.0mL)加入到粗的N-亚硝基硫代脯氨酸的THF(350mL)溶液中并在0℃搅拌5小时。该溶液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用正己烷-AcOEt(1∶1)洗脱。获得题列化合物，淡褐色固体(4.0g，15.1％)。
1H NMR(CDCl3)：δ4.04(t，2H，J＝1.7Hz)，5.40(t，2H，J＝1.7Hz)。
步骤2：4H-5-硫杂-1，6a-二氮并环戊二烯-2-甲酸乙酯
丙炔酸乙酯(3.1mL)氮气下加入到3-氧代-3a，4-二氢-3H，6H-2-氧杂-5-硫杂-1-氮杂-6a-azonio-3a-pentalenide(4.0g)的邻二甲苯(130mL)溶液中并回流19小时。该溶液冷却至室温并减压浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用正己烷-AcOEt(4∶1)洗脱。获得题列化合物，黄色固体(2.7g，49.3％)，和4H-5-硫杂-1，6a-二氮并环戊二烯-2-甲酸乙酯，浅黄色结晶(1.2g，21.7％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.40(t，3H，J＝7.1Hz)，4.11(d，2H，J＝2.1Hz)，4.40(q，2H，J＝7.1Hz)，5.24(t，2H，J＝1.6Hz)，6.61(s，1H)。
步骤3：(4H-5-硫杂-1，6a-二氮并环戊二烯-2-基)甲醇
室温氮气下LiBH4(cont.90％)(459mg)加入到4H-5-硫杂-1，6a-二氮并环戊二烯-2-甲酸乙酯(2.5g)和MeOH(0.77mL)的乙醚(126mL)溶液中，然后回流1.5小时。混合物用1mol/L的HCl(25mL)停止，并在室温搅拌1小时。混合物用饱和碳酸氢钠溶液中和并分离。水层用二氯甲烷(10x 25mL)萃取。有机层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用AcOEt洗脱。获得题列化合物，浅黄色固体(1.7g，87.9％)。
1H NMR(CDCl3)δ2.95(t，1H，J＝5.6Hz)，4.07(s，2H)，4.62(d，2H，J＝5.1Hz)，5.13(t，1H，J＝1.6Hz)，6.04(s，1H)。
步骤4：4H-5-硫杂-1，6a-二氮并环戊二烯-2-甲醛
二甲基亚砜(2.2mL)的无水二氯甲烷(8mL)溶液-78℃逐滴地加入到草酰氯(2.0mL)的无水二氯甲烷(110mL)溶液中。反应混合物在相同的温度下搅拌15分钟。(4H-5-硫杂-1，6a-二氮并环戊二烯-2-基)甲醇(1.7g)的无水二氯甲烷(40mL)溶液-78℃逐滴地加入到该反应混合物中，再继续搅拌15分钟。反应混合物升至-45℃并搅拌1小时。逐滴地加入三乙胺(11.3mL)，反应混合物升至0℃。20分钟后，加入饱和氯化铵溶液(50mL)和水(100mL)并分离。水层用AcOEt(3x 150mL)萃取。合并后的有机层用水(200mL)和盐水(200mL)洗涤，干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用己烷-AcOEt(1∶1)洗脱。获得题列化合物，黄色固体(1.7g，定量的)。
1H NMR(CDCl3)δ4.13(s，2H)，5.26(d，2H，J＝1.4Hz)，6.59(s，1H)，9.90(s，1H)。
步骤5：(5R)(6Z)7-氧代-6-(4H-5-硫杂-1，6a-二氮并环戊二烯-2-基亚甲 基)-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐
4H-5-硫杂-1，6a-二氮并环戊二烯-2-甲醛(1.7g)的无水乙腈(92mL)溶液室温氮气下加入到MgBr2(5.0g)的无水乙腈(92mL)溶液中，然后混合物搅拌10分钟。加入(5R，6S)-6-溴青霉烯-3-甲酸对硝基苯甲酯(4.3g)的无水THF(184mL)溶液，混合物冷却至-20℃，然后一次性加入三乙胺(7.4mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌3小时并用4-二甲基氨基吡啶(138mg)和乙酸酐(2.1mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌15小时。1mol/L柠檬酸水溶液(1000mL)加入到该反应混合物中，水层用乙酸乙酯(3x 400mL)萃取。合并后的有机层用水、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩，获得粗的(5R)-6-[乙酰氧基-(4H-5-硫杂-1，6a-二氮并环戊二烯-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸对硝基苯甲酯，褐色无定形固体。
迅速地向粗的(5R)-6-[乙酰氧基-(4H-5-硫杂-1，6a-二氮并环戊二烯-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸对硝基苯甲酯的THF(100mL)溶液中加入新鲜活化的锌粉(19.3g)和0.5mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.5，100mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2.5小时。反应溶液用硅藻土垫片过滤，该垫片用水(200mL)和正丁醇(200mL)洗涤。水层分离，然后有机层用0.5mol/L磷酸盐缓冲液(pH6.5，2x 50mL)萃取。合并后的水层浓缩至90g，加入1mol/L的NaOH将pH调整至8.0并经过Diaion HP-21树脂(180mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)柱色谱法。吸附后，柱子用水洗脱，然后用15％乙腈水溶液洗脱。合并后的活性馏分在35℃高真空下浓缩，冷冻干燥获得题列化合物，黄色无定形固体(634mg，17.4％，pH7.25)。
Mp 150℃(dec)；1H NMR(D2O)δ4.00(s，2H)，5.09(s，2H)，6.14(s，1H)，6.36(s，1H)，6.91(s，1H)，6.92(s，1H)；IR(KBr)3381，1752，1683，1600，1558cm-1；λmax(H2O)292，196nm。
实施例26
制备(5R)(6Z)-6-(7H-咪唑并[1.2-c]噻唑-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1- 氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐
步骤1：噻唑烷-4-酮
根据MarvinM.和AllenR.Harkness.(Tetrahedron Letters.1994，35，6971-6974)相同的方法制备题列化合物。
步骤2：噻唑烷-4-硫酮
Lawesson试剂(33.5g)加入到噻唑烷-4-酮(14.2g)的无水THF(690mL)溶液中，反应混合物回流2小时。混合物冷却至室温并减压蒸发。残余物室温用CHCl3∶MeOH＝7∶3溶液(65mL)研制30分钟。沉淀过滤并用CHCl3∶正己烷＝7∶3溶液(15mL)洗涤并真空干燥。获得噻唑烷-4-硫酮，浅黄色粉末(10.7g，65％)。
1H NMR(CDCl3)δ4.08(s，2H)，4.70(s，2H)。
步骤3：4-甲硫基-2，5-二氢噻唑
碘甲烷(28.4g)加入到沸腾的噻唑烷-4-硫酮(9.5g)的氯仿(400mL)溶液中，反应混合物回流1.5小时。向反应混合物中30-60分钟的间隔分五份再加入碘甲烷(56.8g)。再回流1小时后，反应混合物冷却至室温。然后加入10％碳酸钾水溶液(200mL)并在室温搅拌15分钟。分出有机层后，水层用CHCl3(100mLx3)萃取。有机层合并，干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩并真空干燥。干燥后，获得题列化合物，褐色的油(11.0g，定量的)。
1H NMR(CDCl3)δ2.51(s，3H)，3.91(t，2H，J＝3.5Hz)，5.21(t，2H，J＝3.5Hz)。
步骤4：噻唑烷-4-亚基胺
4-甲硫基-2，5-二氢噻唑(10.7g)和氯化铵(6.4g)的无水乙醇(400mL)混合物回流27.5小时。反应混合物冷却至室温并减压蒸发。残余物溶解于氯仿(300mL)和10％碳酸钾水溶液(200mL)中，然后室温搅拌20分钟。分出有机层后，水层用氯仿(100mL x 5)萃取。有机层合并，干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩并真空干燥获得粗的噻唑烷-4-亚基胺(5.5g)，褐色固体，包括副产物，是乙氧基衍生物，和起始物质4-甲硫基-2，5-二氢噻唑。这三种化合物的比例通过1H-NMR测定分别为61∶34∶5。
1H NMR(CDCl3)δ3.75(t，2H，J＝2.8Hz)，4.97(t，2H，J＝2.9Hz)。
步骤5：7H-咪唑并[1，2-c]噻唑-2-甲醛
2-溴-3-异丙氧基丙烯醛(6.9g)的无水乙腈(326mL)溶液室温加入到粗噻唑烷-4-亚基胺(3.3g)的无水乙腈(326mL)溶液中。反应混合物室温搅拌19.5小时，加入三乙胺(4.9mL)，然后回流2小时。反应混合物冷却至室温，然后减压蒸发。残余物溶解于二氯甲烷(300mL)中并用50％碳酸钾水溶液(20g)洗涤。过滤并分离后，水层用二氯甲烷(50mLx4)萃取。有机层合并，干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压蒸发。残余物经过硅胶柱色谱法，用CHCl3-MeOH(100∶3)洗脱获得粗的7H-咪唑并[1，2-c]噻唑-2-甲醛，褐色固体。
该粗产物在0℃由CHCl3-正己烷(1St∶30∶5，2nd∶30∶60)重结晶两次，得到所需要的醛，浅褐色结晶(收率：1.84g，15％)。
1H NMR(CDCl3)δ4.09(t，2H，J＝1.3Hz)，5.08(t，2H，J＝1.2Hz)，7.63(s，1H)，9.81(s，1H)。
步骤6：(5R)(6Z)-6-(7H-咪唑并[1，2-c]噻唑-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂- 1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐
7H-咪唑并[1，2-c]噻唑-2-甲醛(841mg)室温氮气下加入到无水MgBr2(2.93g)的无水乙腈(116mL)溶液中。(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(cont.99.7％)(2.51g)的无水THF溶液(116mL)加入到该混合物中，冷却至-20℃，一次性加入Et3N(2.20mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌4小时并用乙酸酐(1.26mL)和DMAP(160mg)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌15小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩。
残余物溶解于THF(53mL)和乙腈(25mL)中。新鲜活化的锌粉(15.1g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5，78mL)加入到该混合物中。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌1.5小时。反应混合物用硅藻土垫片过滤。滤液用乙酸乙酯洗涤并分出水层。水层冷却至3℃，加入1M NaOH将pH调整至8.0。混合物35℃高真空下浓缩。浓缩物经过Diaion HP-21(321mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)树脂柱色谱法。吸附后，柱子用H2O-MeCN(1/0-9/1)洗脱。合并后的馏分35℃高真空下浓缩，冷冻干燥获得题列化合物，黄色无定形固体(1.1g，51％，pH7.5)。
Mp 145℃(dec)；1H NMR(D2O)δ3.85(s，2H)，4.88(s，2H)，6.32(s，1H)，6.78(s，1H)，6.85(s，1H)，7.27(s，1H)。
实施例27
制备(5R，6Z)-7-氧代-6-[(4-氧代-6，7-二氢-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2- 基)亚甲基]-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸。
步骤1：1-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1H-吡唑-3，5-二甲 酸二乙酯
氮气下，向3，5-吡唑二甲酸二乙酯(2.17g，10mmol)的乙腈(10ml)溶液中加入碳酸钾(2.07g，15mmol)，和2-溴乙氧基叔丁基二甲基硅烷(2.90g，12mmol)。混合物回流搅拌18小时。然后冷却至室温，用乙酸乙酯(20ml)稀释，并通过酸式硅酸镁过滤。过滤器垫片用2x 10ml乙酸乙酯洗脱，合并后的滤液蒸发。残余物溶解于己烷中，通过硅胶(70g)柱。用己烷(100ml)洗脱后，柱子用乙酸乙酯洗脱。乙酸乙酯洗脱液蒸发得到3.71g无色的油；MS m/e 371(MH+)。
步骤2：1-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1H-吡唑-3，5-二甲 醇
0℃氮气下，向1-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1H-吡唑-3，5-二甲酸二乙酯(0.74g，2mmol)的二氯甲烷(8ml)溶液中加入12ml的1.0M氢化二异丁基铝的二氯甲烷溶液。0℃搅拌0.5小时后，混合物升至室温0.5小时。然后用15ml饱和氯化铵溶液停止并用乙酸乙酯萃取。有机萃取液用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，蒸发得到0.44g白色固体；mp82-83℃；MS m/e 287(MH+)。
步骤3：1-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1H-吡唑-3，5-二甲 醛
向搅拌的1-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1H-吡唑-3，5-二甲醇(1.18g，4mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中加入4-甲基吗啉-N-氧化物(2.89g，24mmol)和分子筛4A(4g)。反应混合物室温搅拌10分钟，然后用过镣酸四丙基铵(0.15g，0.4mmol)处理。继续搅拌2小时。二氯甲烷溶液浓缩，并用乙醚(40ml)稀释。混合物通过硅胶(40g)垫片过滤，过滤器垫片用2x 20ml乙醚洗脱。合并后的洗脱液用1N HCl和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，并蒸发得到0.79g白色固体；mp63-64℃；MSm/e 283(MH+)。
步骤4：4-氧代-6，7-二氢-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-甲醛
0℃向1-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)-1H-吡唑-3，5-二甲醛(1.02g，6.07mmol)的THF(30ml)溶液中加入6.68ml的1.0M氟化四丁基铵的THF溶液。搅拌1小时后，混合物用10ml的饱和氯化铵溶液处理，并用乙酸乙酯萃取。有机溶液用盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，通过酸式硅酸镁过滤并蒸发。粗的胶体用己烷洗涤，真空干燥，然后溶解于二氯甲烷(20ml)中。向该溶液中加入4-甲基吗啉-N-氧化物(2.89g，24mmol)和分子筛4A(6g)。混合物室温搅拌10分钟，然后用用过镣酸四丙基铵(0.11g，0.3mmol)处理。继续搅拌2小时。该二氯甲烷溶液浓缩并用乙酸乙酯(40ml)稀释。混合物通过硅胶(40g)垫片过滤，过滤器垫片用2x 20ml乙酸乙酯洗脱。合并后的洗脱液用1N HCl和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥并蒸发得到0.30g白色固体；mp135-136℃；MS m/e167(MH+)。
步骤5：(5R)-6-[(乙酰氧基)(4-氧代-6，7-二氢-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯
室温氮气下向MgBr2(0.46g，2.52mmol)的乙腈溶液(13ml)加入4-氧代-6，7-二氢-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-甲醛(0.14g，0.84mmol)，同时搅拌。然后加入(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(0.32g，0.84mmole)的THF(13ml)溶液，混合物冷却至-20℃。加入三乙胺(0.35ml，2.52mmol)，混合物-20℃黑暗中搅拌4小时。然后用乙酸酐(0.2ml，2.0mmol)和4-N，N-二甲基氨基吡啶(12mg，0.1mmol)处理，在0℃维持18小时。混合物浓缩，残余物溶解于乙酸乙酯中。乙酸乙酯溶液用5％柠檬酸，饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，并蒸发。粗产物通过硅胶(EtOAc-CH2Cl2/1∶5)色谱法得到0.27g的灰白色固体；mp107-110℃；MS m/e 595(MH+)。
步骤6：(5R，6Z)-7-氧代-6-[(4-氧代-6，7-二氢-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-基)亚甲基]-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸
氮气下向(5R)-6-[(乙酰氧基)(4-氧代-6，7-二氢-4H-吡唑并[5，1-c][1，4]噁嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(0.22g，0.37mmol)的THF(15ml)溶液中加入15ml的磷酸盐缓冲液(0.5M，pH6.5)和80mg的10％Pd/C。混合物在40-50psi下氢化3小时，然后通过硅藻土过滤。过滤器垫片用THF洗涤，滤液用乙酸乙酯萃取。有机萃取液通过无水硫酸镁干燥并蒸发。残余物用乙醚洗涤得到0.07g黄色固体；
MS m/e 320(MH+)；1H NMR(DMSO-d6)δ4.55-4.57(m，2H)，4.76-4.80(m，2H)，6.50(s，1H)，6.63(s，1H)，7.58(s，1H)，7.76(s，1H)。
实施例28
制备6-(6，7-二氢-4H-噻吩并[3，2-c]吡喃-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1- 氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸
步骤1：制备6，7-二氢-4H-噻吩并[3，2-c]吡喃-2-甲醛
POCl3(3.83ml，50mmol)3分钟内逐滴地加入到冰冷的DMF(3.85ml，50mmol)中。加入DCM(20ml)，当反应介质成为糊状时移走浴液。反应保持在23℃2小时。然后再冷却至0℃。然后在3分钟内逐滴地加入4H-吡喃-4-酮(5克，50mmol)的10mlDCM溶液。反应保持在0℃2小时。将混合物倒入到冰和乙酸钠溶液中并用DCM(2x200)萃取。合并后的有机层通过无水硫酸镁干燥。过滤出干燥剂并浓缩得到5.0克产物。该化合物溶解于DCM(200ml)中，加入6.0克的2-6，7-二氢-4H-噻吩并[3，2-c]硫代吡喃-2-甲醛乙酸乙酯和10mlTEA。混合物回流18小时。然后用水洗涤，通过硫酸镁干燥。然后过滤并浓缩，用20乙酸乙酯的己烷溶液进行快速色谱法。所收集的产物溶解于100mlTHF中，注入LAH(150ml，0.5M的THF溶液)，在23℃保持10分钟。然后回流18小时。在23℃通过加入水来停止，最后加入1N HCl使混合物澄清。用乙酸乙酯(2x200ml)萃取，合并后的有机层通过硫酸镁干燥。过滤并浓缩得到2.3克产物。粗产物溶解于DCM(300ml)和二氧化锰(加入15克)中。反应在23℃进行0.5小时。然后2x15克的氧化剂每半小时以后加入。该产物然后用硅藻土垫片过滤并浓缩。快速柱色谱法得到1.206克(14％收率)油状产物。
H-NMR：δ9.84(s，1H)，7.41(s，1H)，4.74(s，2H)，4.00(t，2H，J＝5.6Hz)，2.96(t，2H，J＝5.6Hz)；MS：169.1(M+H)
步骤2：制备6-(6，7-二氢-4H-噻吩并[3，2-c]吡喃-2-基亚甲基)-7-氧代-4- 硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸
6，7-二氢-4H-噻吩并[3，2-c]吡喃-2-甲醛(336mg，2mmol)溶解于20ml乙腈中，然后氮气下加入溴化镁(516mg，2mmol)。混合物23℃搅拌半小时。然后立刻注入6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(770mg，2mmol)的20mlTHF溶液，混合物立即冷却至-20℃，然后注入三乙胺(1ml)，混合物-20℃搅拌3小时。然后注入乙酸酐(0.4ml)，混合物在0℃搅拌18小时。反应介质然后用400ml乙酸乙酯稀释，用100ml的5％柠檬酸、100ml饱和碳酸氢钠和100ml盐水洗涤。有机层然后通过硫酸镁干燥，过滤并浓缩。利用20％乙酸乙酯的己烷溶液通过快速柱色谱法得到491mg(41％)产物。该产物然后溶解于15mlTHF和15ml磷酸盐缓冲水溶液(pH＝6.5)中。混合物然后在0.5克10％Pd/C45psi氢气中氢化1小时。然后用硅藻土垫片过滤并真空浓缩分出大部分THF。该溶液然后冷却至0℃，并用1N氢氧化钠碱化至pH＝8。然后用2升水，再用5％乙腈的水溶液通过反相HPLC纯化。水然后通过真空浓缩分出，收集到100mg(38％)产物；
MP：＞250℃；
H-NMR：δ7.36(s，1H)，7.15(s，1H)，6.55(s，1H)，6.44(s，1H)，4.61(s，2H)，3.88(m，2H)，2.86(m，2H)，2.27(m，2H)，1.43(t，3H)
MS：320.3(M-H)
实施例29
制备6-(6，7-二氢-4H-噻吩并[3，2-c]硫代吡喃-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫 杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸
步骤1：制备6，7-二氢-4H-噻吩并[3，2-c]硫代吡喃-2-甲醛
POCl3(4.02mol，43mmol)3分钟内逐滴地加入到冰冷的DMF(3.34ml，43mmol)中。加入DCM(20mol)，当反应介质成为糊状时移走浴液。反应保持在23℃2小时。然后再冷却至0℃。然后在3分钟内逐滴地加入四氢硫代吡喃-4-酮(5克，43mmol)的10mol DCM溶液。反应保持在0℃2小时。用DCM(250ml)稀释，然后用冰冷200ml饱和乙酸钠水溶液洗涤。有机层通过硫酸钠干燥。过滤出干燥剂并浓缩，利用10％乙酸乙酯的己烷溶液经快速柱色谱法得到1.3克(8mmol)产物。该化合物溶解于DCM(100ml)中并加入1.2ml(11mmol)的2-巯基乙酸乙酯和1ml TEA。混合物回流18小时。然后用水洗涤并通过硫酸镁干燥。过滤、浓缩并用20乙酸乙酯的己烷溶液经快速色谱法得到1.1克(11％收率)产物
H-NMR：δ6.68(s，1H)，4.73(s，2H)，3.68(s，2H)，3.04(t，2H，J＝7.6Hz)，2.91(t，2H，J＝7.6Hz)；MS(El)：185.99(M+)
1.1克(4.8mmol)6，7-二氢-4H-噻吩并[3，2-c]硫代吡喃-2-甲酸乙酯溶解于100ml THF中，注入LAH(40ml，0.5M的DMG溶液)，反应在23℃保持10分钟。然后回流18小时。在23℃用水(10ml)停止。轻轻的倒出有机层，剩余物用20ml DCM洗涤。合并后的有机层硫酸钠干燥。过滤，浓缩并用10-20％乙酸乙酯进行柱色谱法得到940mg粗产物。该粗产物溶解于DCM(40ml)和二氧化锰(加入2克)中。反应在23℃进行半小时。该产物然后用硅藻土垫片过滤浓缩。快速色谱法得到320mg(36％)产物。
H-NMR：δ9.82(s，1H)；7.46(s，1H)，3.56(s，2H)，3.15(t，2H，J＝7.2Hz)，2.95(t，2H，J＝7.2Hz)；MS(EI)：228.02(M+)
步骤2：制备6-(6，7-二氢-4H-噻吩并[3，2-c]硫代吡喃-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸
6，7-二氢-4H-噻吩并[3，2-c]硫代吡喃-2-甲醛(320mg，1.72mmol)溶解于17ml乙腈中，然后氮气下加入溴化镁醚合物(450mg，1.74mmol)。混合物23℃搅拌半小时。然后立刻注入6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基-苯甲酯(660mg，1.72mmol)的17ml THF溶液，混合物立即冷却至-20℃，然后注入三乙胺(1ml)，混合物-20搅拌3小时。然后注入乙酸酐(0.4ml)，混合物在0℃搅拌18小时。反应介质然后用400ml乙酸乙酯稀释并用100ml的5％柠檬酸，100ml饱和碳酸氢钠和100ml盐水洗涤。有机层然后硫酸镁干燥，过滤并浓缩。利用20％乙酸乙酯的己烷溶液进行快速柱色谱法得到461mg(44％)产物。该产物然后溶解于20ml THF和20ml磷酸盐缓冲水溶液(pH＝6.5)中。混合物然后在0.5克10％Pd/C40psi氢气下氢化一个半小时。然后用硅藻土垫片过滤并真空浓缩分出大部分THF。该溶液然后冷却至0℃并用1N氢氧化钠碱化至pH＝8。然后用2升水，再用5％乙腈水溶液通过反相HPLC纯化。水然后通过真空浓缩分出，收集到21mg(8.6％)产物。
MP：＞250℃
H-NMR：7.34(s，1H)，7.18(s，1H)，6.59(s，1H)，6.44(s，1H)，3.71(s，2H)，2.93(s，2H)，2.50(s，2H)；MS：338.0(M+H)
实施例30
制备6-(5-甲基-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸
步骤1：制备(5-甲基-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)-甲醇
6，7-二氢-4H-噻吩并[3，2-c]吡啶-2，5-二甲酸二乙酯(46克，163mmol)溶解于200mlTHF中。在23℃该溶液中注入LAH(1M，THF)300ml。然后在23℃搅拌18小时。反应用10ml水停止，直接通过硫酸钠干燥。过滤并浓缩得到29.3克(160mmol，98％)粗产物。
H-NMR：6.55(s，1H)，4.70(s，2H)，3.41(s，2H)，2.86(t，2H，J＝5.6Hz)，2.73(t，2H，J＝5.6Hz)，2.38(s，3H)；MS：184.0(M+H)
步骤2：制备5-甲基-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-甲醛
DMSO(1.7mol，24mmol)的5mlCH2Cl2溶液冷却至-50-60℃。在50℃，5分钟内加入草酰氯(1ml，11mmol)的20mlDCM溶液。混合物在-50℃保持5分钟，然后在50℃加入1.67克(9mmol)的(5-甲基-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)-甲醇的20ml DCM溶液，混合物在50℃再搅拌15分钟。然后在-50℃加入三乙胺(7ml)，5分钟后移走浴液，混合物自然升温至23℃。用100ml水洗涤并用100ml乙酸乙酯萃取。合并后的有机层经硫酸镁干燥。过滤，浓缩，用0-15％甲醇的乙酸乙酯溶液进行快速柱色谱法得到736mg(45％收率)产物。
H-NMR：9.81(s，1H)，7.42(s，1H)，3.56(s，2H)，3.00(t，2H，J＝5.6Hz)，2.91(t，2H，J＝5.6Hz)，2.51(s，3H)；MS：182.1(M+H)
步骤3：制备6-(5-甲基-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸
2-甲酰基-6，7-二氢-4H-噻吩并[3，2-c]吡啶-5-甲酸乙酯(724mg，4mmol)溶解于40ml乙腈中，然后氮气下加入溴化镁醚合物(1.2克，4.65mmol)。混合物23℃搅拌半小时。然后立刻注入6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(1.54克，4mmol)的40ml THF溶液，混合物立即冷却至-20℃。然后注入三乙胺(2ml)，混合物-20℃搅拌3小时。然后注入乙酸酐(0.66ml)，混合物0℃搅拌48小时。反应介质然后用500ml乙酸乙酯稀释，并用50ml的5％的柠檬酸，50ml饱和碳酸氢钠和50ml盐水洗涤。另外300ml乙酸乙酯用于洗涤每一种水溶液。合并后的有机层然后通过硫酸钠干燥。过滤，浓缩，用20％乙酸乙酯的己烷溶液进行快速柱色谱法得到1.56克(64％收率)产物。该产物然后溶解于20mlTHF和20ml磷酸盐缓冲水溶液(pH＝6.5)中。混合物然后用0.5克10％Pd/C在40psi氢气下氢化2小时。然后用硅藻土垫片过滤，真空浓缩分出大部分THF。该溶液然后冷却至0℃，并用1N氢氧化钠碱化至pH＝8。然后用2升水，再用5％乙腈的水溶液通过反相HPLC纯化。水然后通过真空浓缩分出，收集到112mg(13％)产物。
MP：＞250℃
H-NMR：δ7.48(s，1H)，7.37(s，1H)，7.21(s，1H)，7.10(s，1H)，3.41(s，2H)，2.88(s，2H)，2.68(s，2H)，2.37(s，3H)；MS：335.0(M+H)
实施例31
制备2-(2-羧基-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-6-亚基甲基)-6，7-二氢-4H-噻吩并[3，2-c]吡啶-5-甲酸乙酯
2-甲酰基-6，7-二氢-4H-噻吩并[3，2-c]吡啶-5-甲酸乙酯(480mg，2mmol)溶解于20ml乙腈中，然后氮气下加入溴化镁醚合物(516mg，2mmol)。混合物23℃搅拌半小时。然后立刻注入6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基-苯甲酯(770mg，2mmol)的20ml THF溶液，混合物立即冷却至-20℃。然后注入三乙胺(1ml)，混合物在-20℃搅拌3小时。然后注入乙酸酐(0.4ml)，混合物0℃搅拌48小时。反应介质然后用200ml乙酸乙酯稀释，并连续地用50ml 5％柠檬酸，50ml饱和碳酸氢钠和50ml盐水洗涤。有机层然后通过硫酸钠干燥。过滤，浓缩，用20％乙酸乙酯的己烷溶液通过快速柱色谱法得到690mg(50％，收率)产物。该产物的馏分(456mg，0.69mmol)然后溶解于15mlTHF和15mol磷酸盐缓冲水溶液(pH＝6.5)中。混合物然后用0.5克10％Pd/C在40psi氢气下氢化2小时。然后用硅藻土垫片过滤，真空浓缩分出大部分THF。该溶液然后冷却至0℃，并用1N氢氧化钠碱化至pH＝8。然后用2升水，再用5％乙腈的水溶液通过反相HPLC纯化。水然后通过真空浓缩分出，收集到18mg(5％)产物。
MP：＞250℃
H-NMR：7.35(s，1H)，7.24(s，1H)，6.61(s，1H)，6.45(s，1H)，4.48(s，2H)，4.08(四重峰，2H，J＝7.2Hz)，3.68(m，2H)，2.67(m，2H)，1.20(t，3H，J＝7.2Hz)：MS：393.0(M+H)
实施例32
制备7-氧代-6-(6，7，8，9-四氢-5H-咪唑并[1，2-a]氮杂-2-基亚甲基)-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸
步骤1：制备6，7，8，9-四氢-5H-咪唑并[1，2-a]氮杂-2-甲醛
硫代己内酰胺(6.45克，50mmol)溶解于400ml CH2Cl2中，再加入碘甲烷(16ml，5eq)。混合物氮气下搅拌18小时。然后用100ml碳酸钾(50％，aq.)处理。有机层然后经硫酸镁干燥。过滤并浓缩后获得7.3克产物。该产物溶解于300ml乙醇中，加入2.83克氯化铵。混合物回流1小时。然后真空分出溶剂。一半该产物加入200ml乙醇，然后加入1.35克(25mmol)甲醇钠和4.8克(25mol)2-溴-3-异丙氧基丙烯醛，混合物23℃搅拌2小时。然后分出溶剂，加入200ml氯仿和10ml三乙胺。混合物回流2小时，然后冷却至23℃。反应介质在300ml DCM和2x150碳酸钾(50％)间分配。有机层经硫酸镁干燥。过滤并浓缩后获得2.1克油状产物。
H-NMR：9.62(s，1H)，7.60(s，1H)，6.61(s，1H)，6.45(s，1H)，4.58(s，2H)，2.96(2m，H)，1.90(m，2H)，1.72(m，2H)；MS：164.9(M+H)
步骤2：制备7-氧代-6-(6，7，8，9-四氢-5H-咪唑并[1，2-a]氮杂-2-基亚甲基)-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸
6，7，8，9-四氢-5H-咪唑并[1，2-a]氮杂-2-甲醛(1.312克，8mmol)溶解于80ml乙腈中，然后氮气下加入溴化镁醚合物(2.94克，8mmol)。混合物23℃搅拌半小时。然后立刻注入6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(1.155克，3mmol)的60mlTHF溶液，混合物立即冷却至-20℃。然后注入三乙胺(4ml)，混合物-20℃搅拌4小时。然后注入乙酸酐(1ml)，混合物0℃搅拌20小时。反应介质然后用500ml乙酸乙酯稀释，并用100ml的5％柠檬酸，100ml饱和碳酸氢钠和100ml盐水洗涤。有机层然后经硫酸钠干燥。过滤，浓缩，用20％乙酸乙酯的己烷溶液通过快速柱色谱法得到800mg产物。该产物然后溶解于20mlTHF和20ml磷酸盐缓冲水溶液(pH＝6.5)中。混合物然后用0.5克10％Pd/C在40psi氢气下氢化1小时。然后用硅藻土垫片过滤，真空浓缩分出大部分THF。该溶液然后冷却至0℃，并用1N氢氧化钠碱化至pH＝8。然后用2升水，再用5％乙腈的水溶液通过反相HPLC纯化。水然后通过真空浓缩分出，收集到131mg(31％)产物。
MP：＞250℃
H-NMR：δ7.78(s，1H)，7.02(s，1H)，6.94(s，1H)，6.36(s，1H)，3.92(m，2H)，2.80(m，2H)，1.78(m，2H)，1.61(m，2H)，1.54(m，2H)；MS：318.2(M+H)。
实施例33
(5R)，(6Z)-6-(7-苯甲基-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基亚甲基)-7-氧 代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐
步骤1：7-苯甲基-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲酸乙酯
Et3N(6.27mL)、PhCHO(4.92mL)室温连续地加入到5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲酸乙酯盐酸盐(9.47g)的EtOH(81mL)溶液中，并在氮气下搅拌3小时。然后NaBH3CN(2.97g)加入到该反应混合物中并搅拌19小时。混合物用硅藻土垫片过滤，CH2Cl2稀释，并用50％K2CO3水溶液洗涤。有机层干燥(K2CO3)并过滤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用CHCl3-丙酮(1/0-9/1)和CHCl3-MeOH(19/1-9/1)洗脱。获得题列化合物，浅黄色晶体(4.16g，36％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.36(t，3H，J＝7.1Hz)，2.87(t，2H，J＝5.2Hz)，3.71(s，2H)，3.75(s，2H)，4.01(m，2H)，4.34(q，2H，J＝7.1Hz)，7.25-7.34(m，5H)，7.51(s，1H)。
步骤2：7-苯甲基-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲醛
1.01M DIBAL的甲苯(1mL+0.2mL+0.3mL)溶液-78℃氮气下加入到7-苯甲基-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲酸乙酯(283mg)的无水CH2Cl2(5mL)溶液中并搅拌1.5小时。混合物用1M HCl(5mL)停止。反应混合物用硅藻土垫片过滤。滤液用50％K2CO3水溶液洗涤，水层用CH2Cl2萃取。合并后的有机层干燥(K2CO3)并过滤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用CHCl3-丙酮(9/1-4/1)和CHCl3-MeOH(19/1)洗脱。获得题列化合物，无色结晶(148mg，61％)。
1H NMR(CDCl3)δ2.90(t，2H，J＝5.5Hz)，3.74(s，2H)，3.76(s，2H)，4.06(t，2H，J＝5.5Hz)，7.28～7.35(m，5H)，7.53(s，1H)，9.80(s，1H)。
步骤3：(5R，6RS)-6-[(RS)-乙酰氧基(7-苯甲基-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a] 吡嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸- 4-硝基苯甲酯(非对映体混合物)
7-苯甲基-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-甲醛(139mg)室温氮气下加入到无水MgBr2(325mg)的无水乙腈(8.7mL)溶液中。(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(223mg)的无水THF溶液(8.7mL)加入到该混合物中，冷却至-20℃，一次性加入Et3N(0.24mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌5小时并用乙酸酐(0.11mL)和DMAP(7mg)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌15小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并过滤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用正己烷-AcOEt(3/1-1/1)洗脱。获得题列化合物，两种非对映体的混合物(80/20，紫色无定形固体，233mg，61％)。
1H NMR(CDCl3)δ1.99(s，0.8×3H)，2.23(s，0.2×3H)，2.83～2.89(m，2H)，3.68(d，2H，J＝4.9Hz)，3.71(s，2H)，3.94～4.13(m，2H)，5.27(d，1H，J＝13.6Hz)，5.41(d，0.2×1H，J＝13.6Hz)，5.45(d，0.8×1H，J＝13.6Hz)，6.05(s，0.2×1H)，6.28(s，0.8×1H)，6.31(s，0.8×1H)，6.790(s，0.2×1H)，6.793(s，0.2×1H)，7.01(s，0.8×1H)，7.27～7.36(m，5H)，7.42(s，0.2×1H)，7.46(s，0.8×1H)，7.61(d，2H，J＝8.6Hz)，8.22(d，2H，J＝8.6Hz)。
步骤4：(5R)，(6Z)-6-(7-苯甲基-5，6，7，8-四氢咪唑并[1.2-a]吡嗪-2-基亚甲 基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐
(5R，6RS)-6-[(RS)-乙酰氧基(7-苯甲基-5，6，7，8-四氢咪唑并[1，2-a]吡嗪-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(1.27g)溶解于THF(55mL)和乙腈(25mL)中。迅速地加入新鲜活化的锌粉(5.08g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5，80mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。反应混合物用硅藻土垫片过滤。滤液用乙酸乙酯洗涤并分出水层。水层冷却至3℃，加入1M NaOH将pH调整至8.0。混合物35℃高真空下浓缩。浓缩物经过Diaion HP-21(79mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)树脂柱色谱法。吸附后，柱子用H2O-MeCN(1/0-4/1)洗脱。合并后的馏分在35℃高真空下浓缩，冷冻干燥获得题列化合物，黄色无定形固体(390mg，49％，pH7.7)。
Mp 180℃(dec)；1H NMR(D2O)δ2.84～2.95(m，2H)，3.61(d，2H，J＝7.2Hz)，3.67(s，2H)，3.96(t，2H，J＝5.7Hz)，6.43(s，1H)，6.89(s，1H)，6.93(s，1H)，7.28～7.37(m，6H)。
实施例34
制备(5R，6Z)-7-氧代-6-{[5-(吡啶-3-基甲基)-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡 啶-2-基)]亚甲基}-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸：
步骤1：2-甲酰基[5-(吡啶-3-基甲基)-4，5，6，7-四氢噻吩并][3，2-c]吡啶：
室温向搅拌的2-(甲酰基)-6，7-二氢噻吩并[3，2-c]-5(4H)吡啶(1.05g，5.2mmol)的DMF(20ml)溶液中加入3-吡啶甲基氯盐酸盐(0.852g，5.2mmol)和N，N-二异丙基乙胺(10ml，过量)。反应混合物搅拌24小时并用水停止。反应混合物用氯仿萃取；用水充分洗涤并用无水MgSO4干燥。过滤并浓缩。产物通过SiO2柱色谱法纯化，用乙酸乙酯洗脱。浅黄色半固体。收率；800mg，59％；M+H259。
步骤2：4-硝基苯甲基-6-[(乙酰氧基)[5(吡啶-3-基甲基)-4，5，67-四氢噻吩 并[3，2-c]吡啶-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯 -2-甲酸酯：
2-甲酰基[5-(吡啶-3-基甲基)-4，5，6，7-四氢噻吩并][3，2-c]吡啶(516mg，2.0mmol)和(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(772mg，2.0mmol)的无水THF溶液(20mL)室温氩气下连续地加入到无水MgBr2:O(Et)2(390mg，1.5mmol)的无水乙腈(15mL)溶液中。冷却至-20℃后，一次性加入Et3N(2.0mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌2小时，并用乙酸酐(1.04mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌15小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并用硅藻土垫片过滤。该垫片用乙酸乙酯洗涤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脱。所收集的馏分减压下浓缩，非对映体的混合物用于下一步骤中。浅黄色无定形固体；收率：700mg，51％；M+H 685和687。
步骤-3：(5R，6Z)-6-{[5-(吡啶-3-基甲基)-4，5，6，7-四氢噻吩并[3.2-c]吡啶- 2-基)]亚甲基}-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸：
4-硝基苯甲基-6-[(乙酰氧基)[5(吡啶-3-基甲基)-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸酯(686mg，1.0mmol)溶解于THF(20mL)和乙腈(10mL)中。迅速地加入新鲜活化的锌粉(5.2g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5，28mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。反应混合物过滤，冷却至3℃，加入0.1M NaOH将pH调整至8.5。滤液用乙酸乙酯洗涤并分出水层。水层在35℃高真空下浓缩得到黄色沉淀。产物用HP21树脂反相柱色谱法纯化。开始柱子用去离子水(2升)洗脱，然后用10％CAN∶水洗脱。收集含有产物的馏分并在室温减压浓缩。黄色固体用丙酮洗涤并过滤。干燥。收率：50mg，12％；黄色结晶；mp.134-136℃；(M+H)412。
1H NMR(DMSO-d6)δd2.8(m，2H)，2.92(bm，2H)，3.6(m，2H)，3.86(s，2H)，6.3(s，1H)，6.41(s，1H)，7.17(s，1H)，7.29(s，1H)，7.35(m，1H)，7.7(m，1H)，8.48(d，1H)，8.54(s，1H)。
实施例35
制备(5R，6Z)-7-氧代-6-{[5-(吡啶-3-基羰基)-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡 啶-2-基)]亚甲基}-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸：
步骤1：2-甲酰基[5-(吡啶-3-基羰基)-4，5，6，7-四氢噻吩并][3，2-c]吡啶：
向搅拌的2-(甲酰基)-6，7-二氢噻吩并[3，2-c]-5(4H)吡啶(606mg，3.0mmol)的DMF(20ml)溶液中室温加入烟酰氯盐酸盐(531mg，3.0mmol)和N，N-二异丙基乙胺(10ml，过量)。反应混合物搅拌24小时并用水停止。反应混合物用氯仿萃取；用水充分洗涤并通过无水MgSO4干燥。过滤并浓缩。产物通过SiO2柱色谱法纯化，并用乙酸乙酯洗脱。浅黄色半固体。收率：600mg，73％；M+H 273。
步骤2：4-硝基苯甲基-6-[(乙酰氧基)[5(吡啶-3-基羰基)-4，5，6，7-四氢噻吩 并[3，2-c]吡啶-2-基)羰基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯 -2-甲酸酯：
2-甲酰基[5-(吡啶-3-基羰基)-4，5，6，7-四氢噻吩并][3，2-c]吡啶(400mg，1.4mmol)和(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(772mg，2.0mmol)的无水THF溶液(20mL)室温氩气下连续地加入到无水MgBr2:O(Et)2(619mg，2.4mmol)的无水乙腈(15mL)溶液中。冷却至-20℃后，一次性加入Et3N(2.0mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌2小时并用和乙酸酐(1.04mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌15小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并用硅藻土垫片过滤。该垫片用乙酸乙酯洗涤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脱。所收集的馏分减压下浓缩，非对映体的混合物用于下一步骤中。浅黄色无定形固体；收率：300mg，30％；M.pt.71℃；M+H 701。
步骤-3：(5R，6Z)-6-{[5-(吡啶-3-基羰基)-4，5，6，7-四氢噻吩并[3.2-c]吡啶- 2-基]}亚甲基}-7-氧代-4硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸钠盐：
4-硝基苯甲基-6-[(乙酰氧基)[5(吡啶-3-基羰基)-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸酯(800mg，1.14mmol)溶解于THF(20mL)和乙腈(10mL)中。迅速地加入新鲜活化的锌粉(5.2g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5，28mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时反应混合物过滤，冷却至3℃，加入0.1M NaOH将pH调整至8.5。滤液用乙酸乙酯洗涤并分出水层。水层35℃高真空下浓缩得到黄色沉淀。产物用HP21树脂反相柱色谱法纯化。柱子先用去离子水(2升)洗脱，然后用10％CAN∶水洗脱。收集合有产物的馏分并在室温减压浓缩。黄色固体用丙酮洗涤并过滤。干燥。收率：50mg，12％；黄色结晶；mp.195℃；(M+H)426。
实施例36
制备(5R，6Z)-7-氧代-6-{[5-(苯基乙酰基)-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶 -2-基)]亚甲基}-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸：
步骤1：2-甲酰基[5-(苯基乙酰基)-4，5，6，7-四氢噻吩并][3，2-c]吡啶：
室温向搅拌的2-(甲酰基)-6，7-二氢噻吩并[3，2-c]-5(4H)吡啶(0.41mg，2mmol)的DMF(20ml)溶液中加入苯基乙酰氯(0.35mg，2.2mmol)和N，N-二异丙基乙胺(10ml，过量)。反应混合物搅拌24小时并用水停止。反应混合物用氯仿萃取；用水充分洗涤并通过无水MgSO4干燥。过滤并浓缩。该产物通过SiO2柱色谱法纯化并用乙酸乙酯洗脱。白色固体。收率：510mg，89％；M+H 286。
步骤2：4-硝基苯甲基-6-[(乙酰氧基)[5(苯基乙酰基)-4，5，6，7-四氢噻吩并 [3，2-c]吡啶-2-基]甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2- 甲酸酯：
2-甲酰基[5-(苯基乙酰基)-4，5，6，7-四氢噻吩并][3，2-c]吡啶(340mg，1.2mmol)和(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(390mg，1.0mmol)的无水THF溶液(20mL)室温氩气下连续地加入到无水MgBr2:O(Et)2(310mg，1.2mmol)的无水乙腈(15mL)溶液中。冷却至-20℃后，一次性加入Et3N(2.0mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌2小时并用乙酸酐(1.04mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌15小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并用硅藻土垫片过滤。该垫片用乙酸乙酯洗涤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脱。所收集的馏分减压下浓缩，非对映体的混合物用于下一步骤中。浅黄色无定形固体；收率：360mg，50％；M+H 713。
步骤-3：(5R，6Z)-6-{[5-(苯基乙酰基)-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2- 基)]亚甲基}-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸：
4-硝基苯甲基-6-[(乙酰氧基)[5(苯基乙酰基)-4，5，6，7-四氢噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基]甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸酯(300mg，0.4mmol)溶解于THF(50mL)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5，28mL)中。在10％Pd/C(80mg)存在下，在40psi压力下氢化2小时，最后，反应混合物用硅藻土垫片过滤并浓缩。所分离的黄色固体溶解于乙酸乙酯中并用水充分洗涤。有机层干燥并浓缩。所分离的黄色固体用乙醚研制并过滤。黄色固体用乙醚充分洗涤，发现95％是纯化合物。收率：160mg，91％；黄色固体；mp.166-169℃；(M+H)439。
实施例37
制备(5R，6Z)-6-[(7-甲基咪唑并[2，1-b][1，3]苯并噻唑-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸
步骤1：7-甲基咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲酸乙酯：
7-甲基咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲酸乙酯根据实施例1(步骤1)所述的方法制备。由6-甲基-2-氨基苯并噻唑(3.2g，20mmol)和溴丙酮酸乙酯(4.0g，20.4mmol)起始，分离到3.0g(57％收率)7-甲基咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲酸乙酯，褐色固体。(M+H)261。
步骤2：2-甲酰基-7-甲基咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑：
-78℃向搅拌的7-甲基咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑-2-甲酸乙酯(4.0g，15.38mmol)无水THF溶液中加入DIBAL(1M的甲苯溶液)(16.0ml，16mmol)。反应混合物在-78℃搅拌并缓慢地升至室温。反应混合物室温搅拌30分钟，并用饱和NH4Cl停止。反应混合物用氯仿萃取并用水充分洗涤。有机层通过无水MgSO4干燥；过滤并浓缩。残余物通过SiO2柱色谱法纯化，用氯仿∶甲醇(20∶1)洗脱。褐色固体；(M+H)217；收率：800mg(24％)
步骤3：4-硝基苯甲基-6-[(乙酰氧基)(7-甲基咪唑并[2，1-b][1，3]苯并噻唑-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸酯：
2-甲酰基-7-甲基咪唑并[2，1-b]-苯并噻唑(432mg，2.0mmol)和(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(772mg，2.0mmol)的无水THF溶液(20mL)室温氩气下连续地加入到无水MgBr2:O(Et)2(566mg，2.0mmol)的无水乙腈(15mL)溶液中。冷却至-20℃后，一次性加入Et3N(2.0mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物-20℃搅拌2小时并用乙酸酐(1.04mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌15小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用5％柠檬酸水溶液、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并用硅藻土垫片过滤。该垫片用乙酸乙酯洗涤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后柱子用乙酸乙酯∶己烷(1∶1)洗脱。所收集的馏分减压下浓缩，非对映体的混合物加入到下一步骤中。浅黄色无定形固体；收率：400mg，31％；M+H 645。
步骤-4：(5R)，(6Z)-6-[(7-甲基咪唑并[1，2-b][1，3]苯并噻唑-2-基亚甲基)]-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸：
4-硝基苯甲基-6-[(乙酰氧基)(7-甲基咪唑并[2，1-b][1，3]苯并噻唑-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸酯(350mg，0.54mmol)溶解于THF(20mL)和乙腈(10mL)中。迅速地加入新鲜活化的锌粉(5.2g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5，28mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。反应混合物室温剧烈地搅拌2小时。反应混合物过滤，冷却至3℃，加入0.1N NaOH将pH调整至8.5。滤液用乙酸乙酯洗涤并分出水层。水层在35℃高真空下浓缩得到黄色沉淀。产物用HP21树脂反相柱色谱法纯化。柱子先用去离子水(2L)洗脱再用10％乙腈∶水洗脱。收集含有产物的馏分，室温减压下浓缩。黄色固体用丙酮洗涤，过滤并干燥。收率：110mg，55％；黄色结晶；mp178℃(分解)；(M+H+Na)392。
1H NMR(DMSO-d6)δ8.56(s，1H)，7.93(d，1H)，7.83(s，1H)，7.38(d，1H)，7.07(s，1H)，6.51(s，2H)，2.42(s，3H)。
步骤-4：(5R)，(6Z)-6-[(7-甲基咪唑并[1，2-b][1，3]苯并噻唑-2-基亚甲基)]-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸：(方法B)
4-硝基苯甲基-6-[(乙酰氧基)(7-甲基咪唑并[2，1-b][1，3]苯并噻唑-2-基)甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸酯(350mg，0.54mmol)溶解于THF(40mL)和6.5pH磷酸盐缓冲液(40ml)中，并在室温40psi压力下通过Pd/C(10％，200mg)氢化3小时。最后，反应混合物用硅藻土垫片过滤并用乙腈洗涤。反应混合物浓缩至40ml并冷却至0℃，加入1N NaOH将pH调整至8.5。产物直接装载通过HP21树脂反相柱色谱法。柱子先用去离子水(2L)洗脱，后用10％乙腈∶水洗脱。馏分被浓缩，黄色固体用丙酮洗涤，过滤并干燥。收率：110mg，55％的黄色固体。
实施例38
制备(5R)，(6Z)-6-(4，5，6，7-四氢-1，3a，3b，8-四氮杂环戊二烯并[a]茚-2-基亚 甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸钠盐
步骤1：5，6，7，8-四氢-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶-2-基胺
12.7％的HCl的乙醇(5.35mL)溶液和10％Pd-C(50％湿的)(2.5g)加入到[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶-2-基胺(2.5g)的乙醇(72mL)混合物中。反应混合物在室温400Kpa的氢气下氢化3天。混合物过滤并减压浓缩。残余物用饱和碳酸钾溶液处理并用氯仿萃取。有机层干燥(Na2SO4)并减压浓缩。获得题列化合物，浅黄色固体(2.31g，90％)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.88-1.94(m，2H)，1.98-2.05(m，2H)，2.77(t，2H，J＝6.2Hz)，3.95(t，2H，J＝6.2Hz)，4.09(brs，2H)。
步骤2：4，5，6，7-四氢-1，3a，3b，8-四氮杂环戊二烯并[a]茚-2-甲酸乙酯
溴丙酮酸乙酯(10.23g)加入到5，6，7，8-四氢-[1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶-2-基胺(5.8g)的1，2-二甲氧基乙烷(320mL)的混合物中。反应混合物室温搅拌5小时并在减压下浓缩至100mL。通过加入乙醚(200mL)，继而过滤获得沉淀。该沉淀溶解于乙醇(175mL)中，并在保护管(shieldtube)中110℃搅拌20小时。反应混合物冷却至室温并减压浓缩。残余物用饱和碳酸钾溶液处理并用氯仿萃取。有机层干燥(Na2SO4)并减压浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后用乙酸乙酯-甲醇(1/1)洗脱。获得题列化合物，浅黄色固体(7.56g，77％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.42(t，3H，J＝7.1Hz)，2.14-2.25(m，4H)，3.11(t，2H，J＝6.1Hz)，4.37(t，2H，J＝5.7Hz)，4.41(q，2H，J＝7.1Hz)，7.57(s，1H)。
步骤3：4，5，6，7-四氢-1，3a，3b，8-四氮杂环戊二烯并[a]茚-2-甲醛
1.01M氢化二异丁基铝的甲苯(1.06mL)溶液-78℃氮气下逐滴地加入到4，5，6，7-四氢-1，3a，3b，8-四氮杂环戊二烯并[a]茚-2-甲酸乙酯(100mg)的无水THF(5mL)溶液中。反应混合物-78℃搅拌30分钟，并用乙醇(约1mL)处理。混合物升温至0℃并在0℃搅拌1小时。反应溶液用乙酸乙酯(20mL)稀释，并用0.5mL饱和氯化铵溶液处理，超声处理约5分钟(直到沉淀足以沉积)。混合物干燥(Na2SO4)并用硅藻土垫片过滤。滤液减压下浓缩。残余物由二氯甲烷和乙醚中结晶得到题列化合物(47.4mg，58％)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ2.16-2.27(m，4H)，3.14(t，2H，J＝6.1Hz)，4.39(t，2H，J＝5.7Hz)，7.53(s，1H)，10.01(s，1H)。
步骤4：(5R，6RS)-6-{(RS)-乙酰氧基-[4，5，6，7-四氢-1，3a，3b，8-四氮杂环戊 二烯并[a]茚-2-基]-甲基}-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯- 2-甲酸-4-硝基-苯甲酯
4，5，6，7-四氢-1，3a，3b，8-四氮杂环戊二烯并[a]茚-2-甲醛(2.97g)室温氮气下加入到无水MgBr2(4.45g)的无水乙腈(110mL)溶液中。(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基-苯甲酯(2.97g)的无水THF溶液(110mL)加入到该反应混合物中，冷却至-20℃，一次性加入三乙胺(6.45mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。混合物-20℃搅拌1.2小时后，一次性加入乙酸酐(2.9mL)。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌16.5小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用H2O和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并用硅藻土垫片过滤。该垫片用乙酸乙酯洗涤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，用乙酸乙酯-正己烷(3/1)洗脱，然后用乙酸乙酯-甲醇(5/1)洗脱。获得题列化合物，褐色无定形固体(651.6mg，13％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ2.102.24(m，4H)，2.29(s，3H)，3.04-3.07(m，2H)，4.28-4.32(m，2H)，5.27(d，1H，J＝13.7Hz)，5.43(d，1H，J＝13.7Hz)，6.19(s，1H)，6.91(s，1H)，7.01(s，1H)，7.49(s，1H)，7.59-7.62(m，2H)，8.23-8.25(m，2H)。
步骤5：(5R)，(6Z)-6-(4，5，6，7-四氢-1，3a，3b，8-四氮杂环戊二烯并[a]茚-2- 基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸钠盐
(5R，6RS)-6-{(RS)-乙酰氧基-[4，5，6，7-四氢-1，3a，3b，8-四氮杂环戊二烯并[a]茚-2-基]-甲基}-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(643.6mg)溶解于THF(9mL)和乙腈(4.2mL)中。新鲜活化的锌粉(2.57g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.4，13.2mL)加入到该反应混合物中。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。混合物室温剧烈地搅拌2小时。混合物冷却至9℃，加入1M NaOH水溶液将pH调整至7.5。反应溶液用乙酸乙酯混合并用硅藻土垫片过滤。该垫片用水洗涤。水层在35℃高真空下浓缩至20mL。浓缩物经过Diaion HP-21(60mL，Mitsubishi Kasei Co.Ltd.)树脂柱色谱法。吸附后，柱子用水洗脱，然后用2.5-10％的乙腈-水洗脱。合并后的馏分35℃高真空下浓缩，冷冻干燥获得题列化合物，黄色无定形固体(68mg，18％，pH7.4)。MP 175℃(分解)；
1H-NMR(400MHz，D2O)δ1.85-2.03(m，4H)，2.85-2.99(m，2H)，4.07-4.14(m，2H)，6.34(s，1H)，6.74(s，1H)，6.76(s，1H)，7.28(s，1H)。
实施例39
制备(5R，6E)-6-[(10-苯甲基-11-氧代-10，11-二氢二苯并[b，f][1，4]氧氮杂 (oxazepine)-8-基)亚甲基]-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2- 甲酸
步骤1：制备8-(羟基甲基)二苯并[b，f][1，4]氧氮杂-11(10H)-酮；
氢化铝锂(11mL，11mmole)室温氮气下缓慢地加入到11-氧代-10，11-二氢二苯并[b，f][1，4]氧氮杂-8-甲酸甲酯(1.346g，5mmole)的THF溶液中。反应混合物搅拌1小时45分钟，然后用2N的HCl停止直到pH值达到2-3。旋转蒸发分出所有的THF，反应混合物用乙酸乙酯萃取5次，有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。获得所要的化合物(白色固体)，46％收率。
步骤2：制备11-氧代-10，11-二氢二苯并[b，f][1，4]氧氮杂-8-甲醛；
8-(羟基甲基)二苯并[b，f][1，4]氧氮杂-11(10H)-酮(0.241g，1mmole)的乙腈溶液室温氮气下加入分子筛(1g)中，然后4-甲基吗啉-N-氧化物(0.175g，1.5mmole)再加入到该反应混合物中。混合物搅拌10分钟后，加入过镣酸四丙基铵(0.0176g，0.05mmole)，反应通过薄层色谱法检测直到反应完成。用10ml乙酸乙酯稀释该反应混合物，通过小的快速硅胶柱。收集所有的含有所要产物的乙酸乙酯，用1N HCl萃取有机层再用盐水洗涤。有机层通过硫酸钠干燥，过滤并浓缩。获得所要的化合物(白色固体)，83％的收率。
步骤3：制备10-苯甲基-11-氧代-10，11-二氢二苯并[b，f][1，4]氧氮杂8-甲醛；
无水碳酸钾(0.207g，1.5mmole)和苯甲基溴(0.205g，1.2mmole)室温氮气下加入到11-氧代-10，11二氢二苯并[b，f][1，4]氧氮杂-8-甲醛(0.240g，1mmole)的乙腈溶液中。反应混合物然后回流4小时，并冷却至室温。反应混合物用乙酸乙酯稀释，通过酸式硅酸镁垫片过滤并浓缩。用硅胶柱和50％乙酸乙酯的己烷溶液纯化。获得所要的化合物(淡黄色油)，收率63％。
步骤4：制备6-[乙酰氧基-(10-苯甲基-11-氧代-10，11-二氢二苯并[b，f][1，4]氧氮杂-8-基)-甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯；
10-苯甲基-11-氧代-10，11-二氢二苯并[b，f][1，4]氧氮杂-8-甲醛(0.250g，0.759mmole)的乙腈溶液室温氮气下加入溴化镁(0.419g，2.28mmole)中。然后，(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(0.292g，0.758mmole)的无水THF溶液加入到该混合物中。15分钟后，反应混合物冷却至-20℃，加入三乙胺(0.317mL，2.27mmole)。反应烧瓶用箔片覆盖以遮挡光线。-20℃4小时后，用乙酸酐(0.358mL，3.795mmole)和DMAP(0.00927g，0.0759mmole)处理。将反应混合物升温至0℃，放入冰箱中过夜。反应溶液浓缩，用乙酸乙酯溶解，并用5％柠檬酸水溶液，饱和NaHCO3，水和盐水洗涤。有机层在硫酸钠中干燥，过滤并浓缩。用硅胶柱和1∶15乙酸乙酯/CH2Cl2纯化。获得所要的化合物(淡黄色固体)，41％的收率。
步骤5：制备6-(10-苯甲基-11-氧代-10，11-二氢二苯并[b，f][1，4]氧氮杂-8-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐；
0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5)加入到6-[乙酰氧基-(10-苯甲基-11-氧代-10，11-二氢二苯并[b，f][1，4]氧氮杂-8-基)-甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(0.210g，0.273mmole)的THF溶液中，继而加入10％Pd-C(0.0546g)。然后反应混合物在40psi下氢化3小时。通过硅藻土垫片过滤，旋转蒸发分出THF，用乙酸乙酯萃取该混合物并用水和盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。用最小量的离心(distal)水溶解NaHCO3，加入到该反应混合物中，伴随着加入少量的乙酸乙酯直到pH值达到7-8，蒸发乙酸乙酯。用反相柱(MCI Gel CHP20P)和变化量的乙腈(0％-20％)水溶液纯化。旋转蒸发分出乙腈和水，冷冻干燥该化合物。获得所要的产物(黄色固体)，24％的收率。MP：179℃。
1H NMR(DMSO)δ1.755-1.825(s，1H)，2.497-2.506(d，2H)，5.243-5.434(m，2H)，6.516-6.770(m，1H)，7.039-7.792(m，11H)。
实施例40
制备6-(5-乙氧基-7，8-二氢-6H-3，4，8b-三氮杂-as-indacen-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸
步骤1：制备4-乙氧基-6，7-二氢-5H-环戊二烯并嘧啶-2-基胺
(SM：Ross，L.O.；Goodman，L.；Baker，B.R.J.Am.Chem.Soc.1059，81，3108)
5.1克4-氯-6，7-二氢-5H-环戊二烯并嘧啶-2-基胺溶解于200ml二甲苯和30ml无水乙醇中。然后加入6.8克乙醇钠，混合物回流3小时。然后真空分出溶剂，100ml水加入到该残余物中。过滤，滤饼用水(50ml)洗涤。该固体再真空干燥数小时。所要的产物重5.3克(98％收率)。
Mp：133.8-134.9℃。
H-NMR：(300MHz，CDCl3)δ.6.23(s，NH2)，4.28(四重峰，2H，J＝6.9Hz)，2.6(m，2H)，1.93(m，2H)，1.27(t，CH3，J＝6.9Hz)；MS：180.0(M+H)
步骤2：制备5-乙氧基-7，8-二氢-6H-3，4，8b-三氮杂-as-indacene-2-甲酸乙酯
5.2克(29mmol)4-乙氧基-6，7-二氢-5H-环戊二烯并嘧啶-2-基胺溶解于100ml无水THF中。然后5分钟内逐滴地加入溴丙酮酸盐(5.4ml，)。混合物23℃搅拌1小时。然后过滤并用乙醚洗涤得到8.7克固体。该固体然后溶解于50ml乙醇中并回流2小时。反应混合物冷却至室温并在350ml氯仿和200ml饱和碳酸氢钠间分配。有机层分离，通过硫酸镁干燥。过滤出干燥剂，浓缩得到6.5克产物。
MP：168.6-168.7℃。
H-NMR：(300MHz，CDCl3)δ.7.69(s，1H)，4.50(四重峰，2H，J＝7.2Hz)，4.40(四重峰，2H，J＝7.2Hz)，3.11(t，2H，J＝9.6Hz)，2.88(t，2H，J＝9.6Hz)，2.88(m，2H)，1.43(t，2H，J＝7.2Hz)；MS：276.2(M+H)
步骤3：制备5-乙氧基-7，8-二氢-6H-3，4，8b-三氮杂-as-indacene-2-甲醛
1.925克的5-乙氧基-7，8二氢-6H-3，4，8b-三氮杂-as-indacene-2-甲酸乙酯溶解于40ml二氯甲烷中，然后冷却至-78℃。然后5分钟内加入DIBAL(1M，21ml，3eq.)。反应介质然后用2ml乙醇停止，并在350ml二氯甲烷和100ml 1N氢氧化钠间分配。水层再用150ml氯仿洗涤，合并后的有机层干燥经硫酸镁干燥，过滤并浓缩得到相应的醇。该醇然后溶解于150ml二氯甲烷中，然后加入10克二氧化锰。混合物在23℃搅拌2小时。反应混合物然后通过硅藻土垫片过滤并浓缩得到1.1克(68％)所要的醛。MP：237.2～237.3℃。
H-NMR：(300MHz，CDCl3)δ.9.94(s，1H，CHO)，8.39(s，1H)，4.46(四重峰，2H，J＝7.2Hz)，3.2(m，2H，CH2)，2.85(m，2H，CH2)，2.24(m，2H，CH2)，1.38(t，3H，CH3，J＝7.2Hz)；MS：232.1(M+H)
步骤4：制备6-[乙酰氧基-(5-乙氧基-7，8-二氢-6H-3，4，8b-三氮杂-as-indacen-2-基)-甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯
5-乙氧基-7，8二氢-6H-3，4，8b-三氮杂-as-indacene-2-甲醛(693mg，3mmol)的30ml乙腈溶液中加入1.03克的溴化镁醚合物。混合物在23℃搅拌半小时。然后一分钟内注入6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(1.155克，1eq.)的30ml无水THF溶液，反应混合物然后冷却至-20℃。然后注入三乙胺(0.7ml，eq.)，反应混合物-20℃搅拌5小时。然后注入乙酸酐(0.377ml，eq.)，反应混合物在0℃保持18小时。反应介质然后用400ml乙酸乙酯稀释并用100ml 5％柠檬酸、100ml饱和碳酸氢钠和100ml盐水洗涤。有机层然后通过硫酸镁干燥，过滤并浓缩。利用20％乙酸乙酯的己烷溶液由快速柱色谱法得到1.1克产物。
MP：118.7～119.1℃
H-NMR：(300MHz，CDCl3)δ.8.35(d，2H，J＝11Hz)，7.63(m，2H)，7.41(d，1H，J＝6.9Hz)，7.08(d，1H，J＝11Hz)，6.47(s，1H)，5.55(4H，CH2)，4.54(m，2H)，3.09(m，2H)，2.93(m，2H)，2.32(m，2H)，1.41(t，J＝9.6Hz)；MS：660.1(M+H)
步骤5：制备6-(5-乙氧基-7，8-二氢-6H-3，4，8b-三氮杂-as-indacen-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸
6-[乙酰氧基-(5-乙氧基-7，8-二氢-6H-3，4，8b-三氮杂-as-indacen-2-基)-甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(1.03克，1.565mmol)悬浮在20ml THF和20ml pH＝6.5磷酸盐缓冲水溶液中。混合物然后在45psi氢气下氢化2小时。然后用硅藻土垫片过滤，真空浓缩分出大部分THF。该溶液然后冷却至0℃并用1N氢氧化钠碱化至pH＝8。然后利用1升水，再用5％～25％乙腈和水通过反相HPLC纯化。水然后通过真空浓缩分出，收集到100mg的产物。
MP：＞250℃
H-NMR；(300MHz，CDCl3)δ.7.52(s，1H)，6.95(s，1H)，6.54(s，1H)，4.73(m，2H)，3.06(m，2H)，2.84(m，2H)，2.27(m，2H)，1.43(t，3H)；MS：383.2(M+H)。
实施例41
(5R，6E&Z)-7-氧代-6-(4H，10H-吡唑并[5，1-c][1，4]苯并氧氮杂(benzoxazepin)-2-基亚甲基)-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐
步骤1：制备1-(2-氟苯甲基)-1H-吡唑-3，5-二甲酸酯
2-氟苯甲基溴(2.0ml，16.58mmol)氮气下加入到3，5-吡唑二甲酸二乙酯(3.01g，14.18mmol)，Cs2CO3(5.57g，17.1mmol)和乙腈(140ml)的混合物中。加热至60℃2小时，然后冷却至室温。过滤并浓缩该反应溶液。向所得的残余物中加入水(～200mL)并用EtOAc萃取。用水和盐水洗涤该有机物。有机物通过硫酸钠干燥，过滤并浓缩。获得1-(2-氟苯甲基)-1H-吡唑-3，5-二甲酸二乙酯(淡黄色油)，定量的收率。
步骤2：制备1-(2-氟苯甲基)-1H-吡唑-3，5-甲烷二醇
1M DIBAL-H的THF(90ml，90mmol)溶液0℃氮气下加入到1-(2-氟苯甲基)-1H-吡唑-3，5-二甲酸二乙酯(4.80g，14.99mmol)的CH2Cl2(90ml)溶液中。2小时后用NH4Cl(aq)停止，形成悬浮液。过滤并用EtOAc萃取，用盐水洗涤。有机物经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。硅胶柱和5％MeOH的CH2Cl2溶液纯化。获得3.4g二醇化合物(澄清的油)，收率96％。
步骤3：制备4H，10H-吡唑并[5，1-c][1，4]苯并氧氮杂-2-甲醛
二醇化合物(3.83g，16.21mmol)的HMPA(24ml)溶液氮气下加入到NaH(60％，1.34g，33.5mmol)的甲苯(330ml)悬浮液中。迅速地加热至95℃3小时，并冷却至室温。用水停止并用EtOAc萃取。有机物用水和盐水洗涤。有机物经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。用硅胶柱和2％MeOH的CH2Cl2溶液纯化。获得4H，10H-吡唑并[5，1-c][1，4]苯并氧氮杂-2-基甲醇(白色固体)。收率：0.71g，20％。
4H，10H-吡唑并[5，1-c][1，4]苯并氧氮杂-2-基甲醇(0.71g，3.28mmol)，4甲基吗啉-N-氧化物(1/198g，10.23mmol)，分子筛(粉末，4埃)(3.32g)和乙腈(0.07M)在氮气下放在一起。加入过镣酸四丙基铵(0.113g，0.322mmol)，3小时后反应溶液通过硅藻土过滤并浓缩。用硅胶柱和1∶1EtOAc/己烷纯化。获得4H，10H-吡唑并[5，1-c][1，4]苯并氧氮杂-2-甲醛(白色固体)。收率：0.31g，44％。
步骤4：制备6-[乙酰氧基-(4H，10H-吡唑并[5，1-c][1，4]苯并氧氮杂-8-基)-甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯；
4H，10H-吡唑并[5，1-c][1，4]苯并氧氮杂-2-甲醛(0.19g，0.887mmol)的乙腈(14ml)溶液氮气下加入到MgBr2(0.49g，2.66mmol)中。25分钟后加入6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸4-硝基苯甲酯(0.342g，0.888mmol.)的THF(14ml)溶液。15分钟后反应冷却至-20℃。10分钟后加入Et3N(3eq)，将反应物置于黑暗中。6.5小时后加入Ac2O(0.42ml，4.45mmol)和DMAP(0.011g，0.0900mmol)。升温至0℃，放入制冷器中过夜。反应溶液浓缩，所得的残余物溶解于EtOAc中。用5％柠檬酸(aq)和饱和NaHCO3(aq)洗涤。再用水和盐水洗涤。有机物经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。用硅胶预制板和1∶2EtOAc/己烷纯化。获得缩合产物。(黄色树脂/固体)。收率：0.31g，54％的收率。
步骤5：(5R，6E&Z)-7-氧代-6-(4H，10H-吡唑并[5，1-c][1，4]苯并氧氮杂-2-基亚甲基)-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐：
步骤6：0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.5)(18mL)加入到缩合产物(5)(0.300g，0.468mmol)的THF(18mL)溶液中。加入Pd/C(0.102g)，反应混合物在40psi下氢化2小时。通过硅藻土过滤，旋转蒸发分出THF。用EtOAc萃取。有机物通过硫酸钠干燥，过滤并浓缩。NaHCO3(0.08g，0.952mol)溶解于少量的水中并加入到浓缩的有机物中，同时加入少量的EtOAc。过滤，旋转蒸发分出EtOAc。用反相柱(MCI GelCHP20P)和变化量的乙腈(0％-15％)水溶液纯化。旋转蒸发由所收集的馏分中分出乙腈和大部分水。冷冻干燥剩余物获得41mg(5R，6E)-7-氧代-6-(4H，10H-吡唑并[5，1-c][1，4]苯并氧氮杂-2-基亚甲基)-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸，钠盐(6)(黄色固体)，22％收率。HPLC发现纯度为77％，E/Z异构体比例为3∶2。
1H-NMR(δ，DMSO-d6)5.366(m，4H)，5.649(m，4H)，6.326(t，2H)，6.444(s，2H)，6.551(s，2H)，6.640(s，2H)，6.810(s，2H)，6.974(m，2H)，7.249(m，2H)，7.355(m，2H).m/z(M+H)390.0
实施例42
(5R)，(6Z)-6-(5H-咪唑并[2，1-a]异吲哚-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮 杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸钠盐
步骤1：制备5H-咪唑并[2.1-a]异吲哚-2-甲醛
2-溴-3-异丙氧基丙烯醛(4.97g)的无水乙腈(3mL)溶液加入到3-氨基-1H-异吲哚(3.4g)的无水乙腈(100mL)混合物中。反应混合物室温搅拌3.25小时。然后三乙胺(3.6mL)加入到该混合物中并加热至回流2小时。混合物冷却至室温，用乙酸乙酯稀释并用20％碳酸氢钾洗涤。通过硅藻土垫片过滤后，有机层干燥(MgSO4)并减压浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后用乙酸乙酯-己烷(3/1-4/1)洗脱。粗化合物由乙酸乙酯和正己烷中结晶，得到题列化合物(1.04g，22％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.01(s，2H)，7.28-7.52(m，3H)，7.90(s，1H)，7.91-7.93(m，1H)，9.92(s，1H)。
步骤2：制备(5R，6RS)-6-[(RS)-乙酰氧基-(5H-咪唑并[2，1-a]异吲哚-2- 基)-甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基- 苯甲酯：
5H-咪唑并[2，1-a]异吲哚-2-甲醛(736.8mg)室温氮气下加入到无水MgBr2(1.8g)的无水乙腈(50mL)溶液中。(5R，6S)-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(1.55g)的无水THF溶液(50mL)加入到该反应混合物中，冷却至-20℃，一次性加入三乙胺(1.34mL)。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。混合物-20℃搅拌2小时，用乙酸酐(0.76mL)一次性处理。反应混合物升温至0℃并在0℃搅拌18小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用H2O、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层干燥(MgSO4)并用硅藻土垫片过滤。该垫片用乙酸乙酯洗涤。滤液减压下浓缩。残余物经过硅胶柱色谱法，然后用乙酸乙酯-己烷(2/3-1/1)洗脱。获得题列化合物，两种非对映体的混合物(5/1，浅黄色无定形固体，1.8g，73％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.02(s，0.84×3H)，2.27(s，0.16×3H)，4.89-4.94(m，2H)，5.29(d，1H，J＝13.6Hz)，5.47(d，1H，J＝13.6Hz)，6.18(s，0.16×1H)，6.40(s，0.84×1H)，6.42(s，0.84×1H)，6.94(d，0.16×1H，J＝0.9Hz)，7.18(d，0.16×1H，J＝0.7Hz)，7.35-7.48(m，3H)，7.51(s，0.84×1H)，7.60-7.64(m，2H)，7.79-7.83(m，1H)，8.23-8.27(m，2H)。
步骤3：(5R)，(6Z)-6-(5H-咪唑并[2，1-a]异吲哚-2-基亚甲基)-7-氧代-4-硫 杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸钠盐
(5R，6RS)-6-[(RS)-乙酰氧基-(5H-咪唑并[2，1-a]异吲哚-2-基)-甲基]-6-溴-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂二环[3.2.0]庚-2-烯-2-甲酸-4-硝基苯甲酯(1.5g)溶解于THF(21mL)和乙腈(9.8mL)中。新鲜活化的锌粉(6g)和0.5M磷酸盐缓冲液(pH6.4，30.8mL)加入到该反应混合物中。反应容器用箔片覆盖以遮挡光线。混合物室温剧烈地搅拌2小时。混合物冷却至9℃，加入1M NaOH水溶液将pH调整至7.5。反应溶液用乙酸乙酯混合并用硅藻土垫片过滤。该垫片用水洗涤并分出水层。水层在35℃高真空下浓缩至25mL。浓缩物经过Diaion HP-21(100mL，MitsubishiKasei Co.Ltd.)树脂柱色谱法。吸附后，柱子用水洗脱，然后用5-15％乙腈-水洗脱。合并后的馏分在35℃高真空下浓缩，冷冻干燥获得题列化合物，黄色无定形固体(527mg，58％)。Mp170℃(分解)；
1H NMR(400MHz，D2O)δ4.62(s，2H)，6.27(s，1H)，6.56(s，1H)，6.78(s，1H)，7.22-7.31(m，4H)，7.52(d，1H，J＝6.7Hz)。

Claims (27)

1.制备通式I化合物的方法
Figure C038096950002C1
其中：
A和B中的一个表示氢，另一个具有以下结构通式
条件是Z1、Z2、或Z3中的一个是碳原子，与通式I所示的分子的剩余部分键合；
t＝1-4；
条件是Z1-Z3中的一个是碳原子，与分子的剩余部分键合；
t＝1-4；
条件是如果式16-B中的芳环部分是咪唑，那么非芳环部份不能含有与桥头碳相连的S；
Figure C038096950002C4
条件是Z1-Z4中的一个是碳原子，与分子的剩余部分键合；
t＝1-4；
Figure C038096950003C1
条件是Z1-Z7中之一是与分子的剩余部分相连的碳原子；
Figure C038096950003C2
条件是Z1-Z8中之一是与分子的剩余部分相连的碳原子；
条件是Z1-Z8中之一是与分子的剩余部分相连的碳原子；
Figure C038096950004C1
条件是Z1-Z9中之一是与分子的剩余部分相连的碳原子；
条件是Z1-Z4中之一是与分子的剩余部分相连的碳原子；
和t＝1-3；
Figure C038096950004C3
条件是Z1-Z5中之一是与分子的剩余部分相连的碳原子；
和t＝1-3；
条件是Z1-Z6中之一是与分子的剩余部分相连的碳原子；
和t＝1-3；
Figure C038096950005C2
条件是Z1-Z7中之一是与分子的剩余部分相连的碳原子；
和t＝0-3；
Figure C038096950005C3
条件是Z1-Z3中之一是与分子的剩余部分相连的碳原子；
t＝0-2；和
u＝1-3；
Figure C038096950006C1
条件是Z1-Z9中之一是与分子的剩余部分相连的碳原子；
Figure C038096950006C2
条件是Z1-Z10中之一是与分子的剩余部分相连的碳原子；
Figure C038096950006C3
条件是Z1-Z5中之一是与分子的剩余部分相连的碳原子；
和t＝1-4；
Figure C038096950007C1
条件是Z1-Z6中之一是与分子的剩余部分相连的碳原子；
和t＝1-3；
Figure C038096950007C2
条件是Z1-Z8中之一是与分子的剩余部分相连的碳原子；
和t＝1-2；
Figure C038096950007C3
条件是Z1-Z4中之一是与分子的剩余部分相连的碳原子；
t＝1-3；
和u＝1-3；
R5是H、C1-C6烷基或其阳离子；
Z1、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9和Z10独立的是CR2、N、O、S或N-R1，条件是在式16-C中，Z1、Z2、Z3和Z4独立的是CR2或N；
Y1和Y2独立的是C或N，条件是在式9-A和9-B中，Y2和Y3独立的是CH或N；
W1、W2、W3、W4和W5独立的是CR4R4、O、N-R1、或S(O)r，其中r＝0-2，条件是没有可形成饱和环的S-S、S-O或O-O键形成；
R1是H、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基或单或双环的饱和杂环、任选取代的环烷基、任选取代的链烯基、任选取代的炔基，条件是直接与N相连的碳原子上不存在双键或三键；、-S(O)p任选取代的烷基或芳基，其中p是0-2、任选取代的-C＝O杂芳基、任选取代的-C＝O芳基、任选的取代的-C＝O烷基、任选的取代的-C＝O环烷基、任选取代的-C＝O单或双环饱和杂环、-CONR6R7、-SO2NR6R7、任选取代的芳基烷氧基烷基、任选取代的-烷基-O-烷基芳基、任选取代的-烷基-O-烷基杂芳基、任选取代的C1-C6烷基芳氧基芳基、任选取代的C1-C6烷基芳氧基杂芳基、任选取代的烷基芳氧基烷基胺、任选取代的烷氧基羰基、任选取代的芳氧基羰基、或任选取代的杂芳氧基羰基；
R2是H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C2-C6链烯基、任选取代的C2-C6炔基、卤素、氰基、N-R6R7、任选取代的C1-C6烷氧基、羟基；任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、COOR6、任选取代的烷基芳氧基烷基胺、任选取代的芳氧基、任选取代的杂芳氧基、任选取代的C3-C6链烯基氧基、任选取代的C3-C6炔基氧基、C1-C6烷基氨基-C1-C6烷氧基、烷撑二氧基、任选取代的芳氧基-C1-C6烷基胺、S(O)q任选取代的C1-C6烷基，其中q是0、1或2、S(O)q任选取代的芳基，其中q是0、1或2、CONR6R7、胍基或环状胍基、任选的取代的C1-C6烷基单或双环饱和杂环、-SO2NR6R7、任选取代的杂芳氧基芳基、任选取代的C1-C6烷基芳氧基芳基、任选取代的C1-C6烷基芳氧基杂芳基、或任选取代的烷基芳氧基烷基胺；
R3是氢、C1-C6烷基、C5-C6环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基；
R4是H，任选取代的C1-6烷基，R4中的一个是OH、C1-6烷氧基、-S-C1-C6烷基、COOR6、-NR6R7、-CONR6R7；或R4R4可一起为
Figure C038096950008C1
O或R4R4与它们相连的碳原子一起形成5-8元的螺环系，存在或不存在选自N、O、S＝(O)n，其中n＝0-2、N-R1的杂原子，并且条件是在式5-A、5-B、6-A、6-B、6-C、7-A、7-B、8-A、8-B、9-A、9-B、12-A、12-B、13-A、13-B、13-C、14-A、14-B、14-C、15-A、15-B和15-C中，两个R4都不是OH；
R6和R7独立的是H、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基，R6和R7可一起形成3-7元的饱和环系，任选地具有一个或两个杂原子，如N-R1、O、S＝(O)n，n＝0-2；
其中“任选取代的”是指未取代的、或被下列基团中的一个或两个取代的取代基：硝基、-芳基、-杂芳基、烷氧基羰基-、-烷氧基、-烷氧基烷基、烷基-O-C2-C4烷基-O-、-氰基、-卤素、-羟基、-N-R6R7、-三氟甲基、-三氟甲氧基、芳基烷基、烷基芳基、R6R7N-烷基-、HO-C1-C6-烷基-、烷氧基烷基-、烷基-S-、-SO2N-R6R7、-SO2NHR6、-CO2H、CONR6R7、芳基-O-、杂芳基-O-、-S(O)s-芳基，其中s＝0-2、-烷基-O-烷基-NR6R7、-烷基芳基-O-烷基N-R6R7、C1-C6烷基、链烯基、炔基、环烷基、烷氧基烷基-O-、R6R7N-烷基-、和-S(O)s-杂芳基，其中s＝0-2；
所述方法包括
(a)适当取代的醛17
A′-CHO
 17
其中A′是当B为氢时上文所定义的A，或当A为氢时上文所定义的B在选自无水卤化镁的路易斯酸和选自三乙胺、DMAP或二异丙基乙胺的弱碱的存在下，在-20℃至-40℃下，与结构16的6-溴青霉烯衍生物缩合
Figure C038096950009C1
其中R是对硝基苯甲基，形成中间体羟醛产物18
Figure C038096950009C2
其中A′和R如上文所定义；
(b)中间体18与酰基氯或通式(R8)Cl或(R8)2O的酸酐、或与通式C(X1)4的四卤代甲烷，和三苯基膦反应，其中R8是烷基SO2、芳基SO2、烷基CO、或芳基CO；X1是Br、I、或Cl；形成中间体化合物19
Figure C038096950010C1
其中R9是X1或OR8，其中R8、X1、A′和R如上文所定义；和
(c)通过还原消除方法将中间体化合物19转化为所要的通式I化合物，其中R5是氢，其中的还原消除步骤利用活化的锌和磷酸盐缓冲液在pH6.5-8.0、20℃至35℃的温度下进行，或通过催化剂氢化来进行；如果需要的话转化为制药上可接受的盐或酯，其中R5是C1-C6烷基。
2.权利要求1的方法，其中R1中任选取代的烷基选自任选取代的全氟烷基、任选取代的芳基-C1-C6烷基、任选取代的杂芳基-C1-C6烷基、任选取代的芳氧基烷基、任选取代的杂芳氧基烷基和任选取代的芳氧基芳基。
3.权利要求1的方法，其中R1中任选取代的芳基选自任选取代的C1-C6烷基芳基和任选取代的芳氧基芳基。
4.权利要求1的方法，其中R1中任选取代的杂芳基选自任选取代的C1-C6烷基杂芳基和任选取代的芳氧基杂芳基
5.权利要求1的方法，其中任选取代的单或双环饱和杂环是任选取代的C1-C6烷基单或双环饱和杂环。
6.权利要求1的方法，其中R1中任选取代的链烯基是任选取代的8-16碳原子的芳基链烯基。
7.权利要求1的方法，其中R2中任选取代的C1-C6烷基选自任选取代的C1-C6全氟烷基、任选取代的芳基烷基、任选取代的杂芳基-C1-C6烷基、任选取代的芳氧基烷基、任选取代的杂芳氧基烷基。
8.权利要求1的方法，其中R2中任选取代的芳基选自任选取代的烷基芳基、任选取代的芳氧基芳基和任选取代的杂芳氧基芳基。
9.权利要求1的方法，其中R2中任选取代的杂芳基选自任选取代的C1-C6烷基杂芳基和任选取代的芳氧基杂芳基。
10.权利要求1的方法，其中R2中任选取代的C2-C6链烯基是任选取代的8-16碳原子的芳基链烯基。
11.权利要求1的方法，其中R6和R7中任选的取代的芳基烷基选自任选的取代的芳基烷基、任选的取代的杂芳基烷基。
12.权利要求1的方法，其中R6和R7中任选取代的芳基是任选取代的C1-C6烷基芳基。
13.权利要求1的方法，其中R6和R7中任选取代的杂芳基是任选取代的C1-C6烷基杂芳基。
14.权利要求1的方法，其中的中间体化合物19是乙酸酯、三氟甲基磺酸酯或甲苯磺酸酯。
15.权利要求1的方法，其中的中间体化合物19不进行分离。
16.权利要求1的方法，其中步骤(a)中的无水卤化镁是无水MgBr2或MgBr2：醚合物。
17.权利要求1的方法，其中的催化剂是Pd/C。
18.结构16的6-溴青霉烯衍生物
Figure C038096950011C1
其中R是对硝基苯甲基。
19.制备权利要求18的(5R，6S)-6-溴青霉烯-3-甲酸-4-硝基苯甲酯的方法，包括下列步骤：
A)(i)6-氨基青霉烷酸在有机溶剂和水中与氢溴酸反应形成6-溴衍生物21
Figure C038096950011C2
和(ii)在碱存在的有机溶剂中利用4-硝基苯甲基溴将6-溴青霉烷酸21衍生物转化为6-溴青霉烷酸对硝基苯甲酯22
Figure C038096950012C1
其中R是对硝基苯甲基；
(B)氧化6-溴青霉烷酸对硝基苯甲酯22形成6-溴青霉烷酸对硝基苯甲酯-1-氧化物23
Figure C038096950012C2
(C)6-溴青霉烷酸对硝基苯甲酯-1-氧化物23与2-巯基苯并噻唑在芳族溶剂中回流形成(2R)-2-[(3S，4R)-4-(苯并噻唑-2-基二硫基)-3-溴-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-3-烯酸-4-硝基苯甲酯24；
(D)(2R)-2-[(3S，4R)-4-(苯并噻唑-2-基二硫基)-3-溴-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-3-烯酸-4-硝基苯甲酯24溶解于有机溶剂中，与有机叔碱反应形成2-[(3S，4R)-4-(苯并噻唑-2-基二硫基)-3-溴-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸-4-硝基苯甲酯25；
(E)在-10℃至-40℃，通过在有机酸、乙酸酐/有机叔碱和三烷基或三芳基磷酸盐存在的芳族有机溶剂中反应将2-[(3S，4R)-4-(苯并噻唑-2-基二硫基)-3-溴-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸-4-硝基苯甲酯25转化为2-[(3S，4R)-3-溴-4-甲酰基硫基-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸-4-硝基苯甲酯26；
(F)所述的2-[(3S，4R)-3-溴-4-甲酰基硫基-2-氧代氮杂环丁烷-1-基]-3-甲基丁-2-烯酸-4-硝基苯甲酯26在-70℃至-90℃溶解于有机溶剂中，通过臭氧处理的氧3-4小时，继而利用亚磷酸盐试剂进行分子内环化形成(5R，6S)-6-溴青霉烯-3-甲酸-4-硝基苯甲酯16。
20.权利要求1制备通式I化合物的方法
Figure C038096950013C1
如权利要求1所定义，其中步骤(a)中使用的(5R，6S)-6-溴青霉烯-3-甲酸-4-硝基苯甲酯16根据权利要求11来制备。
21.权利要求19的方法，其中的6-氨基青霉烷酸溶解于甲醇或THF中。
22.权利要求19的方法，其中步骤(A)(i)在48％w/w的氢溴酸和亚硝酸钠或钾溶液的存在下进行。
23.权利要求19的方法，其中步骤(A)(i)在-10℃至-30℃的温度进行。
24.权利要求19的方法，其中步骤(A)(ii)中的碱是碳酸钠或钾，有机溶剂是THF或DMF。
25.权利要求19的方法，其中步骤(C)中的芳族溶剂是甲苯或二甲苯。
26.权利要求19的方法，包括化合物23向26的连续转化，其中不用分离中间体。
27.权利要求26的方法，其中，6-溴青霉烷酸-4-硝基苯甲酯-1-氧化物23在回流的芳族有机溶剂中与2-巯基苯并噻唑反应，并在0至-20℃用三乙胺处理形成反应混合物；所述的反应混合物在-10℃至-40℃顺序地加入有机酸和酸酐，有机叔碱和三烷基或三芳基磷酸盐。
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