CH375104A - Verfahren zur Herstellung von Tennecetin - Google Patents

Description

  Verfahren zur     HersteHung    von     Tennecetin       Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Her  stellung eines neuen Antibiotikums,' welches im     fol-          gendün    mit.      Tennecc#ti#n     bezeichnet wird. Dieses  neue Antibiotikum wurde durch Kultivierung einer  Art eines bisher     unbDkannten,    Mikroorganismus er  zeugt, welcher aus Erde in     Chattanooga,        Tennessee,     <B>USA,</B> isoliert worden ist.

   Die neue     Mikroorganisraen-          Art    gehört zur Gattung der     Streptorayces    und wird  nun mit     Streptorayces        chattanoogensis    bezeichnet.       Da,s    erfindungsgemässe Verfahren     istdadurch    gekenn  zeichnet,     dass    eine<B>'</B> Kultur von     Streptomyces        chatta-          noo,gensis    kultiviert und das erzeugte     Tennecetin.     isoliert wird.  



  Das von diesem Mikroorganismus erhaltene neue  Antibiotikum zeigt bei     in-vitro-Versuchen        fungi-          statische        und/oder        fungizide    Wirkung gegen einen  weiten Bereich von     pathogenen    Hefen und Haar  pilzen. Es zeigt im allgemeinen geringe Aktivität  gegen Bakterien.     Tennecetin    ist jedoch wirksam gegen       Corynebacterium        diphteriae    und     Pseudomonas        tabaei          (,die    Ursache von Wildfeuer     [wild-fire]    in Tabak).

   Es  ist wirksam gegen zahlreiche     Pillze    von Pflanzen  krankheiten und ist deshalb nützlich in der Land  wirtschaft.  



  Wie Versuche von     intraperitonealen    Injektionen  an Mäusen ergeben haben, zeigt das neue     An,-bbioti-          kum    relativ geringe Toxizität. Es zeigt nach Inku  bation in     frisch-cm    menschlichem Blut oder frischem  menschlichem Blutplasma selbst nach drei Stunden  praktisch keine     Aktivitätseinbusse.    Es ist für     die     menschlichen     Blutzcllen    nicht     hämolytisch    und<U>kann</U>  deshalb in der Behandlung von menschlichen und/       odcr    tierischen     Pilzer-krankungen    nützlich sein.  



  Versuche, das erfindungsgemäss erhaltene     Tenne-          ectin    zu     kristalliisierzn,    waren erfolglos, und die  exakte chemische Zusammensetzung und die Eigen  schaften des neuen Antibiotikums sind wegen der    Unfähigkeit, das aktive Material in anderer als     Rul-          verform    zu erhalten, nicht vollständig bestimmt wor  den. Das neue Material zeigt in     wässriger    Lösung  optische Rechtsdrehung.

   Wie weiter unten noch be  schrieben wird, weist das neue Antibiotikum die  Charakteristiken von     Polyenverbindungen    auf, und  zwar     irn        besonderen    diejenigen von     Tetr;aenen,    das  heisst Verbindungen, welche vier     (-CH        =        CH-)-          Gruppen    enthalten.  



  Das neue Antibiotikum ist löslich     in    Wasser,       Methanol,        95        %igem        Äthanol,        70,1/oigem        Isopro-          panol    und     n-Butanol.    Es ist unlöslich in Chloroform,       Athylacetat,        Amylacetat,    Äther und     Petroläther.   <B>Die</B>  Filtration durch     Seitzfilter    sowohl als auch, das Er  hitzen von     Tennecetinlösungen        (pH   <B>7)

  </B> auf     10011C     führ 20 Minuten bringt keinen erkennbaren     Aktivitäts-          verlust    mit sich. Gekühlte Lösungen bleiben mehr als  .einen     Monat.aktiv.     



       Oroshnik,    et     al.        [Science    121, 147<B>(19.55)]</B> hat  festgestellt,     dass        gc##visse        Antibiotica    zu Gruppen     zu-          sammengefasst    werden können, und zwar auf der  Basis ihres     Ultraviolettabsorptionsspektrums    als       Polyene,    das heisst als Verbindungen, die mehr als  ein Paar von     Kohlenstoff-Kohlenstoffdoppelbindun-          gen    enthalten.

   Diese     Antiblotica    werden hauptsäch  lich durch     Aet-inomyceten        produiiert    und zeigen alle       Antifungi-Wirkung.    Sie können gemäss der durch  das     Ultraviolettabsorptionsspektrum    bestimmten An  zahl von solchen ungesättigten Gruppen im Molekül  weiter klassifiziert werden. So sind     Tetraene,          Pentaene,        Hexaene    und-     Heptaene    in dieser Gruppe  vertreten.

   Die Trennung von     Antifungi-Anti#biotica     auf der Basis ihres     Ultraviolettabsorptionsspektrums     ist nun allgemein anerkannt     [Vini-ng,    et     al,        Antibio-ties          Annual        (1954-1955),   <B>S.</B>     980-987;        Waksman,          Therapy        of        Fungus        Diseases,        Little,        Brown,        and    Co.

    <B>(1955), S.</B>     3-121.              Tennecetin    weist als charakteristisches Glied die       Tetraengruppe    auf. Sechs andere Stoffe weisen Glie  der dieser Gruppe auf, von denen bis jetzt die folgen  den bekannt sind:     Nystatin        (Fungicidin)        [Proc.        Soc,          Exp'tI.        Biol.   <B> & </B>     Med.   <B>76, 93 (1951);</B> Britische Patent  schrift     Nr.   <B>714189</B> (1954); Trans.<B>N.</B> Y.     Acad.    Sei.

    <B>19,</B> 447<B>(1957);</B>     Rimocidin        (Antibiotics   <B> & </B>     Chemo-          therapy   <B>1, 287 (1951);</B> Britische     Patents.chrift    Num  mer<B>719878</B>     (1954)];        Antimyco-in        [Antibiotics   <B> & </B>       Chemotherapy    2,<B>179</B>     (1952)];        Chromin   <B>[J.</B>     Anti-          biotics,    Japan, 6B, 247<B>(1953)];

  </B>     Sistomycosin    [Bri  tische Patentschrift     Nr.   <B>712547</B>     (1954)];    und     Ampho-          tericin   <B>A</B>     [Antibiotics        Annual        (1955-1956),   <B>S.</B> 574  bis<B>578, 579-586</B> und<B>587-591].</B> Neben ihren     chaxak-          teristischen        Ultraviolettabsorptionsspektren    haben  diese     Antibiotica        die    folgenden gemeinsamen Eigen  s     ch        af        ten:

       Alle werden durch Arten der Gattung     Strepto-          myces    produziert.  



  Alle sind wirksam gegen einen weiten Bereich  von Pilzen" besitzen jedoch     nur    geringe oder gar keine  Wirkung gegen     Bakterien.und        Actinomyceten.     



  Alle sind in nichtpolaren Lösungsmitteln un  löslich.  



  Die Moleküle der genannten Antibiotika enthal  ten nur Kohlenstoff, Wasserstoff, Sauerstoff und  manchmal Stickstoff.  



  Einige sind lichtempfindlich.  Kaliumpermanganat wird entfärbt.  



  Der     FeCI.-Test    für     Phenolgruppen    ist negativ.  In konzentrierter Schwefelsäure werden rote bis  braune Färbungen erzeugt.  



  Die     WasserlösÜchkeit    variiert zwischen den Glie  dern der Gruppen.  



  Anscheinend wird die Löslichkeit in niedrigen  Alkoholen gewöhnlich durch die Gegenwart von  Wasser erhöht.  



  Die     meisten,scheinen        amphoter    und optisch aktiv  <B>zu</B> sein.  



  Die einzelnen dieser als      Tetraen-Antibiotica      bezeichneten Stoffe können auf Grund folgender  Merkmale voneinander     unterschiedien    werden:  <B>1.</B>     Ultraviolettabsorptionsspektrum.     2.     Infrarotabsorptionsspektrum.     



  <B>3.</B> Biologisches Spektrum.  4. Löslichkeitseigenschaften.  <B><I>5.</I></B> Verschiedene, Eigenschaften.  <B>6.</B>     Papierchromatcqgraph-i#e.     



  Im folgenden wird jedes der     obengenannten    Merk  male in     bezug    auf     Tennecetin    näher betrachtet.  



  <B><I>1.</I></B>     Ultraviolettabsorptionsspektrum          Tennecetin    zeigt     ein        AbsoiDptionssprktrum    im       Ultraviolettbereich    mit Maxima bei<B>288, 300-302</B>  und<B>315-318</B>     Millimikron.    Dieses letztere Maximum  ist immer scharf, variiert jedoch zwischen<B>315</B> und  <B>318</B> mit     in    den verschiedenen Bestimmungen. Ein  solches     Absorptionsspektrw-n    ist charakteristisch für       Polye,nverbindungen    im allgemeinen und für     Tetraene     im besonderen.

      Unterhalb<B>288</B>     my    sind keine Maxima gefunden  worden.     Nystatin    hat ein schwaches,<B>jedoch</B> be  <U>stimmtes</U>     Maximumbei   <B>230</B>     mu.    Es wird angenom  men,     dass    dies auf ein     Diensystem    zurückzuführen ist,  welches neben dem     Tot#raenteil    des Moleküls vorhan  den ist     (Dutcher    et     al.,        Therapy        of    Fungus     Diseas#es,          loe.        ch.,   <B>S.</B>     168-175)

  .        Sistomycosin    hat ein bestimmtes  Maximum     in    der Nähe von<B>218</B> mit.     Rimocidin    hat  ein Maximum bei<B>279</B>     my.    Nach veröffentlichten Kur  ven     jscheintes,        dass        Antimycoin    und     Amphoteiricin   <B>A</B>  beide ein Maximum in     Ader    Nähe, von<B>230</B>     my    haben.  



  Tabelle I zeigt     die    publizierten UV-Maxima für  jedes der bekannten     Totraen-A.ntibiotika    und für       Tennecetin.     
EMI0002.0097     
  
    <I>Tabelle <SEP> I</I>
<tb>  UV-Maxima <SEP> von <SEP> Tetraen-Antifu#ngi-Antibiotica
<tb>  Antibiotica <SEP> <U>Maxima <SEP> my</U>
<tb>  Nystatin <SEP> 240 <SEP> <B>292 <SEP> 305,5 <SEP> 318</B>
<tb>  Pdmocidin <SEP> <B>279 <SEP> 291</B> <SEP> 304 <SEP> <B>318</B>
<tb>  Antünycoin <SEP> <B>230 <SEP> (?) <SEP> 291</B> <SEP> 304-305 <SEP> <B>318</B>
<tb>  Chromin <SEP> <B>292,5 <SEP> 305 <SEP> 320</B>
<tb>  Sistoraycosin <SEP> <B>218 <SEP> 292,5 <SEP> 306 <SEP> 320</B>
<tb>  Amphotericin <SEP> <B>A</B> <SEP> 232(s1)

   <SEP> <B>291 <SEP> 306 <SEP> 320</B>
<tb>  Tennecotin <SEP> keine <SEP> <B>288 <SEP> 300-302 <SEP> 318</B>       <I>2.</I>     Infrarotabsorptionsspektren     Die<U>aufgenommenen</U>     Infrarotabsorptionsspektren     von     Tenncoetin    sind mit publizierten Spektren von  anderen     Tetraen-Antifungi-Antibiotica    verglichen  worden.  



       Tennecetin        (KBr        pellet)    zeigt charakteristische       Hauptabsorptionsbande,n    bei oder in der Nähe von  <B>3,0,</B> 3,4,<B>6,0, 6,3, 9,5,</B>     9,9und   <B>11,9</B>     Mikron.    Banden  von geringerer Intensität liegen bei oder in der<B>Nähe</B>  von<B>6,6, 6,9, 7,2, 7,9, 8,5, 9,05</B> und<B>11,3</B>     Mikron.     Geringe Maxima oder Schultern auf anderen Maxima  erscheinen bei<B>5,85, 7,7</B> und<B>8,9</B>     Mikron.    Ein       typ##sches,

          Spekfrum    von     Tennecetin    ist in der     beihe-          genden    Figur dargestellt.  



  Das     Infrarotabsorptlonsspektrum,    welches dem  jenigen von     Tennecetin    am meisten gleicht, ist das  jenige von     Sistomycosin.    Von     Sistomycosin    werden  folgende     Haupt-Maxima        (vgl.    Britische     Patentschfift          Nr.   <B>712547)</B> angegeben:

  <B>2,96,</B> 6,34 und 9,44     Mikron.     Banden von schwacher oder mittlerer Intensität liegen  bei     ode-r    in der<B>Nähe</B> von<B>7,70, 7,86, 8,55, 11,16,</B>  <B>11,85</B> und 12,4     Mikron.    Andere Maxima erscheinen  als Schultern auf den vorhergehenden Bändern, und  zwar bei oder in der Nähe von<B>7,08, 7,16, 8,95,</B>  <B>9,89, 10,25</B> und<B>10,6</B>     Mikron.     



  Die,     Absorptionscharakteristiken    von     Si#st#omycosin     zwischen<B>3,0</B> und<B>6,0</B>     Mikron    sind unbekannt. Die  Banden bei<B>7,8, 9,89, 10,25, 10,6</B> und 12,4 y er  scheinen in den Spektren von     Tennecetin    nicht.

    Nähere Prüfung des angeführten     IR-Spektrums        in    der  genannten -britischen Patentschrift betreffend     Sisto-          myr,osin    zeigt keinen Hinweis auf ein Maximum bei      <B>6,6</B>     Mikron;    das genannte<U>Diagramm</U> zeigt     viehnehr     ein ausgesprochenes Maximum. bei<B>6,9</B>     Mikron.     Dieses wird jedoch dem     Mineralölträger    zugeschrie  ben.     Tennecetin    als     Kaliumbromidpellet    präpariert  zeigt ein Band von ausgesprochener Absorption bei  dieser selben Wellenlänge..  



  Das     Absorptionsspektram    von     Rünocidin        (vgl.     britische Patentschrift     Nr.   <B>719878)</B> zeigt eine Anzahl  von Maxima, wie sie,     Tenneoet-in    nicht aufweist.

   Die  hauptsächlichsten Maxima liegen bei oder     in    der  Nähe von<B>10,7,</B> 12,2,<B>12,5</B> und<B>12,75</B>     Mikron    und  mehrere     Eegen        büschelförmig    in der<B>Nähe</B> aber nicht  bei<B>6,0</B>     Mikren.    Bande von oder in     der    Nähe von  <B>6,6</B> und     #6,9    u, welche für     Tennecetin    charakteristisch  sind, sind in dem in     dür    genannten britischen Patent  schrift angeführten     Diagranun    betreffend     Rimocidin     nicht angegeben.  



  Das     Infrarotabsorptionsspektrum    von     Nystatin     ist verschiedentlich publiziert     und    diskutiert worden       [vgl.    britische Patentschrift     Nr.   <B>714189;</B>     Dutcher,          Therapy        of        Fungus        Diseases;        Brown   <B> & </B>     Hazen,    Trans.

    <B>N.</B> Y.     Acad.        Sci.   <B>19,</B> 447<B>(1957)].</B>     Nystatin    hat Ban  den von starker Absorption bei     oderin    der<B>Nähe</B> von  <B>3,0, 3,5, 5,87,</B>     6#,37,   <B>7,2, 8,55, 8,9, 10,0, 10,6,</B>  11,2,<B>11,8</B> und<B>12,6</B>     Mikron.    Sowohl diejenigen bei  <B>10,6J1,2</B>     und   <B>12,6</B> y als auch die kleineren Maxima  bei<B>7,5, 8,2</B> und 10,4<B>y</B> scheinen im     IR-Diagranim    von       Tennecetin    keine     Gogenstücke    zu haben.

   Das starke       Absorptio#nsband    von     Tennecetin    bei oder sehr nahe  bei<B>6,0</B>     Mikron    scheint in     Nystatin    nicht vorhanden  zu sein.  



  Das     Infrarotabsorptionsspektrum    von     Ampho-          tericin   <B>A</B>     [vgl.        Anfibioties,        Annual        (1955-1956),     <B>S. 587-591]</B> zeigt wenig Einzelheiten; nichtsdestotrotz  sind bestimmte Unterschiede     zwischen,diesem    Spek  trum und demjenigen von     Tenneectin    erkennbar.

         Amphotericin   <B>A</B> hat Maxima bei oder     in    der Nähe  von<B>7,5, 8,2, 9,6, 10,05</B> und mehrere,     ün    Bereich  zwischen<B>10,5</B> und 11,4     Mikron,    welche     Tennecetin     nicht aufweist.     Tennecetin    hat Maxima bei oder in  der Nähe von<B>6,0</B> und<B>7,8</B>     Mikron,    welche     Ampho-          tericin   <B>A</B> nicht zeigt.  



  <B><I>3.</I></B><I> Biologisches Spektrum</I>       Nystatin    ist unwirksam gegen     Allescheria        boydii     und     Monosporium        apiospermum.     



       Sistomycosin    ist     unwirksain    gegen     Cryptococcus          neoformans.     



       Antimycoin    ist unwirksam -gegen     Aspergillus        niger.          Tennecetin    ist gegen mindestens einen authen  tischen Stamm jeder der     obengenannten    Arten ge  testet und     jedesmal    als hochaktiv befunden worden.  <I>4. Löslichkeitseigenschaften</I>       Nystatin,        RimocIdin    und     Amphotericin   <B>A</B> sind in  Wasser nur wenig     lösh!ch.     



       Chromin    ist     gemässden    Angaben der     obengenann-          ten    Autoren in Chloroform löslich.  



       Tennecetin    ist wasserlöslich und unlöslich     in     Chloroform.    <B><I>5.</I></B><I> Verschiedene Eigenschaften</I>       Nystatin        und        Rimocidin    werden aus dem     Myce-          lIum    des das Antibiotikum produzierenden Orga  nismus extrahiert.     Unnecefin    befindet sich fast gänz  lich in der Kulturflüssigkeit.  



       Autiimycoi,n    wird durch eine, Lösung von<B>0,01</B>     a          Cysteinh-yidrochlori,d        desaktiviert.        Tennecetin    dagegen  wird weder durch     diesenoch    durch eine andere     Kon-          zentraftion    von,     Cysteinhydrochlorid        desaktiviert.     



       Chromin    wird im Gegensatz zu     Tennecetin    an       Seitzfiltern    absorbiert.  



       Nystatin    und     Sistomycosin    werden durch Licht       desaktiviert.    Auf     Tennecetin    hat Licht keine erkenn  bare Wirkung.  



       Nystatin    wird durch     Streptomyces        noursei,          Rimocidin    durch     S.,rimosus,        Antimycoin    durch<B>S.</B>       aureus,        Chromin    durch<B>S.</B>     anfibiotious,        Sistomycosin     durch<B>S.</B>     viridosporus,        Amphotericin   <B>A</B> durch     Strepto-          myce,s,sp.    produziert.     Tcnnücetin,dagegen#    wird durch  einen anderen als die genannten Organismen erzeugt.

    Von     Rimovidin    wird angegeben,     dass    es die, mensch  lichen roten Blutkörperchen     hämolysiert.     



  <B>.</B>     Tennecetin,    verursacht in konzentrierter     Schwefe,1-          säure    eine     weinrote    Färbung, welche für unbestimmte  Zeiten stabil ist-. In konzentrierter Phosphorsäure wird  eine wassergrüne Färbung erzeugt.     Kaliumperman-          ga,nät    wird ziemlich rasch     entfärbt.    Mit     Ferrichlorid     wird keine Reaktion erhalten. Der     Ninhydrin-Test     ist     nggativ.    Der     2,4-Dinit#ro-phenyIhydr-azin-Test    ist  negativ.  



  Eine Anzahl von     Substanzensind    auf ihre<B>Fähig-</B>  keit geprüft worden, die,     Antifungi-Wirkung    von       Tennece,tin    in     vitro    aufzuheben. Darunter waren  zahlreiche     Aminosäuren,    einschliesslich     Cysteinmono-          hydrochlorid    (von welchem angegeben wird,     dass    es  ,die Wirksamkeit von     Antknycoin    aufhebt), Vitamine  und anorganische Ionen..

   Es ist gefunden worden,     dass     keine dieser Substanzen die Wirksamkeit von     Tenne-          cefin    in     vitro,        beeinflusst.     



  <B><I>6.</I></B>     Papierchromatographie     Das     Papierchromatogramm    von     Tennecetin,          Nystatin,        Rknocidiu    und der     Tennecetin-Nystatin-          Rimocidin-Mischungen    ist mit wassergesättigtem       u-Butanol    als Lösungsmittel bewerkstelligt worden,  wobei die absteigende     eindirnensionale    Technik auf       Whatman        Nr.        1-Papier    angewendet wurde.

   Streifen  wurden mit<B>10</B> Tropfen des Testmaterials     betropft     und     nach-dem    sie einer     18stundige#n    Einwirkung des       a-Butanol-Lösungsimiittols    unterworfen waren, an der       Luf   <B>-</B> t getrocknet und in Schalen gegeben, welche mit       Saecharomyces        carlsbergensis        K-20    geimpft waren.  Die Streifen wurden nach<B>15</B> Minuten, entfernt, über  Nacht bei Raumtemperatur ausgebrütet und mit       TPTZCI    in Glucose entwickelt.

   Alle drei Verbindun  gen wurden nebeneinander auf einen einzigen Strei  fen von     Whatman        Nr.        4-Papier    aufgezogen und  gleichzeitig während<B>18</B> Stunden mit     wassergesättig#          tem        Butanol    als Lösungsmittel     chromatographiert.     Das     Chromatogramm        wurdedanngemäss    der Technik      von     Ammann    und Gottlieb     -(1955)    entwickelt.

   Die       RF-Werte    sind:     Nystatin    0,22;     Rimocidin   <B>0,38;</B>       Tennecetin   <B>0,33.</B>  



  <I>Der Organismus<B>S.</B></I>     chattanoogensis     Die     Tennecetin    produzierende     Organismen-Art    ist  ,ein typisches Glied der     Streptomyces-Gattung.    Seine  Morphologie und Physiologie     isind    so weitgehend  studiert worden,     dass    es genügt, um ihn von allen       Artender    genannten Gattung zu unterscheiden, wie  sie in     Bergeys    Manual     of        Detiermänative        Bacteriology,          6th   <B>cd.,

  </B>     Williams        and        Wilkins    Co.,     Balt.    (1948) und  in     Waksman    und     Lechevaher's        Actinomycetes        and          their        Antibioties,        WiRiams        and        Wilkins    Co.,     Balt.     <B>(1953)</B> angegeben sind.  



  Der     beueff    ende Organismus ist weiter dem Krite  rium der     Artbestimmung.    für die Gattung der     Strepto-          myces    unterworfen worden, wie es durch     Burkholder     et     al.    in den     Annals        of        the   <B>N.</B> Y.     Acad.        of        Sci.   <B><I>60,</I></B>  <B>102-123 (1955)</B> beschrieben worden ist.

   Auch die  nützlichen Kriterien für die     Artdifferünzierung    gemäss       Hesseltine    et     aL    in den     Annals        of        the   <B>N.</B> Y.     Acad.          Sci   <B>*<I>60</I> 136-151 (1955)</B> sowohl als auch die     über-          Sicht    von     Waksman    in     Bact.        Rev.    21,<B>1029 (1957)</B>  wurden angewendet.  



  Die Wahrscheinlichkeit,     dass    noch viele Arten von       Streptomyces    aus natürlichem Quellen isoliert werden  und klassifiziert werden müssen, wird durch die Tat  sache veranschaulicht,     dass        Krassibükov,    1941,     mi.        sei-          neni    Führer für die Strahlenpilze nur 47 Arten an  führt, wogegen     Bergey's-        Mannal,        6th        ed.,    1948,<B>73</B>       und        Waksman    und     Lechevalier,   <B>1953,

  </B> bereits 146  Arten von     Streptomyces    angeben.  



       Streptomyces        chattanoogensis    wurde am<B>10.</B> Ja  nuar<B>1959</B> in der     American    Type     Culture        Cofiection,     <B>1025</B>     Connecticut    Avenue,<B>N.</B> W. Washington<B>7, D. C.</B>  unter der     Nr.   <B>13358</B> deponiert.  



       Streptomyces     Wie bei anderen     Streptomyces-Arten    variiert die  koloniale Morphologie von<B>S.</B>     chattanoogensis    bis<B>zu</B>  einem .gewissen Grad<B>je</B> nach der Zusammensetzung  des gebrauchten Mediums und der Konditionen,  unter welchen der Organismus kultiviert wird. Die  folgende Beschreibung gilt für Charakteristika, wie  sie, auf den meisten Medien erscheinen, auf denen  <B>S.</B>     chattanoogensis    gut wächst, z. B.     Glycerinagar,          Stärkeagar,        Hafermehlagar,        Phytonagar,    und zwar bei       Standardk-ultivierungsbedingungen,    das heisst- z. B.

    durch     aerobe,    Kultivierung bei<B>25</B> bis     2811   <B>C.</B>  



  <B>Die</B>     Kolomen    sind     im    allgemeinen nach -einer     Be-          brütungszeit    von 48 Stunden sichtbar. Das     vDgetative          Mycelium    ist     gelblichbraun    und wächst in das  Medium hinein. Isolierte Kolonien sind     kreisförmig,     am Rande runzlig und bis zu 20<U>mm</U> im Durchmesser.  Eines der am meisten heraustretenden Merkmale des  Organismus ist seine Fähigkeit, auf den meisten       Medienein        heEgelbQs,    wasserlösliches Pigment<B>zu</B> er  zeugen.

   Die     Spurenbildung    erscheint gewöhnlich nach  vier bis fünf Tagen bei Raumtemperatur. Das Luft-         Mycelium    ist zuerst weiss und wird<U>dann</U> im allge  meinen etwas gräulich bei längerer     Bebrütung.     



  Mikroskopisch gesehen, setzt sich das     Mycellum     aus dünnen, sich verzweigenden Fäden zusammen.  Die sphärischen Sporen, 1,0-1,2     Mikron    im Durch  messer, werden an ziemlich eng verwickelten     Sporen-          trägern    erzeugt. In einigen     Med#ien    kann     ein    An  schwellen der Fäden beobachtet werden.  



  Die folgenden biochemischen Charakteristika sind  beobachtet worden:  Gelatine wird verflüssigt;  Milch wird koaguliert und     peptonisiert;     Stärke wird     hydrolysiert;          Catalase    wird produziert;  Nitrate werden zu Nitriten reduziert;  Wenn der genannte Organismus auf mensch  lichem     Blut-Agar    gezüchtet wird, wird das Blut       hämolysiert;     .die     Tyrosinase-Reaktion    ist negativ;

    in Medien, die<B>3</B> % Kochsalz enthalten, findet  kein Wachstum     istatt;          Ribonuelein#Säure    wird     hydrolysiert;     der typische Schimmelgeruch von     Streptomyceten     wird auf festen Medien erzeugt;  das Wachstum findet bei     370,C,    aber nicht bei  450<B>C</B> statt;  der Organismus ist     gram-positiv    und nicht säure  fest.  



  Das Wachstum in     beläfteten,    flüssigen Medien  findet in Form von Kügelchen oder Flocken statt. Es  wird dabei ein charakteristischer, nicht     unangeneh-mer     flauer und ganz     unbeschreibbarer    Geruch abgegeben.  



  In     ungeschüttelten    Röhren oder Flaschen bildet  sich nicht ein     Häutehen-,    sondern.     ein    Ring und ein       schwer-er    Niederschlag.  



       Diegenannte        Organismen-Art    ist verglichen wor  den mit Kulturen von     Streptomyces        flaveolus        ATCC     <B>3319, S.</B>     rimosus        NRRL    B2234,<B>S.</B>     aureus        NRRL     111274,<B>S.</B>     cellulosae        ATCC   <B>3313</B> und anderen       Streptomyceten,    welche ein gelbes Pigment bilden.  Keine von diesen zeigen morphologische, oder physio  logische Charakteristiken, die mit denen des genann  ten Mikroorganismus identisch wären.<B>S.</B>     flaveolus     z.

   B. produziert ovale, elliptische     Conidia,    wogegen  die,     Corüdia    des neu entdeckten     Organssmus   <B>S.</B>       chattanooigensis    sphärische Form aufweist.<B>S.</B>     cellu-          losae    bewirkt eine nur geringe     Nitrat-Reduktion,     wogegen der neu entdeckte Organismus Nitrate  schnell[ reduziert.<B>S.</B>     aureus    'bildet in     Litmus-Müch     einen     tschwaTzen    Ring ohne Koagulation und zweifel  hafte     Peptonisierung,

      wogegen der neu entdeckte       Organismus        ausg        .,eprägte        Koagulation        und        Peptonisie-          rung,    aber keine Erscheinung des schwarzen Ringes  hervorruft.<B>S.</B>     rimosus    zeigt auf vielen Medien kein  Pigment und die     Peptonisierung    von Milch bleibt  aus.

   Von diesem Mikroorganismus wird in der Lite  ratur auch, festgehalten,     dass    er zusammengeballte  Spiralen bildet, die mässig dicht,     kuTz    und zylindrisch      sind, nämlich<B>0,65</B> X<B>1,0</B>     Mikron.    Im weiteren redu  ziert<B>S.</B>     rimosus    keine Nitrate.  



  Bis jetzt sind zwischen     demneu    entdeckten Orga  nismus und     Stireptomyces        viridosporus    kein-,     Labora-          toriumsvergleichsversuche    gemacht worden, aber vom  letzteren wird in der Literatur festgehalten,     dass    er  Sporen von     dunkelelivgrüner    Farbe auf     Glucose-          Tryptos,e#Agar    produziert.

   Es ist auch festgestellt  worden,     dass    beim Gebrauch von     Lactose    als     Kohlen-          stoffquelle        zin    Antibiotikum     (Sistoraycosin)    produziert  wird, welches auf     CMtococcus        neoformans    keine  Wirkung ausübt.<B>S.</B>     virodospürus    ist deshalb vom neu  entdeckten Organismus gänzlich verschieden.  



  <I>Medien für die</I>     Tennecetin-Produktion     <I>Stammkultur:</I> Die genannte     Tennecefin    produ  zierende     Streptcymyces-Art    ist durch wöchentliche  Übertragung auf eine Anzahl von Medien gebracht  worden. Die Stammkulturen. sind bei Raumtempe  ratur gehalten worden. Erdkulturen haben sich für  die     AufrechteThaltung    des Organismus als nicht be  friedigend erwiesen. Die     Lyophilisierung    ist nicht  versucht worden.  



  Die     Sporenbildung    erscheint auf     Carvajals        Hafer-          mehl-Agar    sehr rasch und dieses ist     ein    geeignetes  Medium für die     Aufticchterhaltung    der     Grundstämme.     Der neu entdeckte Organismus zeigt keine Anzeichen  dafür,     dass        ier    sich einer spontanen Mutation unter  zogen hätte während der 21/2     Tahre,    während wel  cher er in     LaboratoTiums-Kultur    gehalten wurde.

    Nach     Ultraviolett-Bestrählung    wurde ein nicht Sporen  bildender     und    nicht Antibiotika produzierender  Stamm entdeckt.  



       Schüttelflaschenmedien:    Experimente zur Be  stimmung eines optimalen Mediums für die Kulti  vierung von     Tennecetin    in     Schüttelflaschhen    haben  gezeigt,     dass    nur bestimmte     Kohlenhydrat-Que-Ilen     für die Produktion geeignet sind. Obschon     ein    gutes  Wachstum in Schüttelflaschen erzielt werden kann,  die     Nährbrähe,    ohne     Kohlenhydrat-Zusatz    enthalten,  findet unter diesem Bedingungen keine     Antibiotica-          Produktion    statt.

   Wenn     Lactose    oder     Saccharose    als       Kohlen,hydrat-Quelle    verwendet wird, bildet sich     werag     oder kein Antibiotikum. Dextrose erlaubt rasches  Wachstum des Organismus, verschafft aber keine  hohen Ausbeuten an     Tennecain.        Glycenn,        Dextrin,          Galactosa    und     Inosit    scheinen die 'besten     Kohlen-          hydrat-QueRen    zu sein und sind fast     ausschlizsslich     gebraucht worden.  



  Für das Nährmedium, sind zahlreiche Zusätze  geprüft worden zwecks Bestimmung, ob ihre     Gegen-          wartdie,    Ausbeute an     TenneceAtin    verbessern könnte.  Es ist gefunden worden,     dass        Phyton    und Hefe die  Bildung von     Tennecetin    deutlich stimulieren.

       Mais-          aische        (corn        steep        liquor),        Natriumchlorid,        Kahum-          osphat,        Palmitinsäure,        Oleinsäure,        Sojabohnenöl     und      Tween-80     hatten keine erkennbare nützliche  Wirkung.

      Das folgende     Medlum    wurde für die meisten       Produktions-Versuche    gebraucht:  
EMI0005.0081     
  
    Glyce,rin <SEP> 2%
<tb>  Phyton <SEP> (BBL) <SEP> <B><I>0,50le</I></B>
<tb>  Pepton <SEP> (eDifco ) <SEP> <B><I>0.5010</I></B>
<tb>  Ochsenbrühe <SEP> ( Difco ) <SEP> <B>0,311/o</B>
<tb>  Hefe-Extrakt <SEP> ( Difco ) <SEP> <B>0,30/9</B>
<tb>  Leitungswasser       Im folgenden wird dieses Medium      GPY-Medium      genannt.

   Das     pH    des im     Autoklaven    behandelten  Mediums ist<B>7,0.</B> Während     den    ersten 48     Stun & n     der     Fertnentierung    findet ein rascher Fall des     pH    auf  ungefähr 4,5     istatt.    Dieser Fall kann kontrolliert  werden, wann das Medium vor der     Sterflisierung    auf  ein     pH    von<B>7,6</B> gebracht wird und weiter nach der  Sterilisierung<B>0,25</B>     11/o        Caliciumcarbonat    zugesetzt wer  den.

   Die Variation des     pH    scheint jedoch keinen  grossen     Einfluss    auf die Menge des in. diesem Medium  produzierten Antibiotikums auszuüben.  



  Das     Weglatssen    irgendeines der angegebenen     Be,          standteile    aus dem genannten     GPY-Medium.    bewirkt  geringere     Ausbcut-en.    Es sind jedoch Anhaltspunkte  dafür vorhanden,     dass    die Konzentration des     Hefe-          Extraktes    bis zu<B>0, 1</B>     j0/9    reduziert werden<U>kann,</U> ohne  die Fermentation zu beeinflussen.  



  Im einzelnen wird beispielsweise wie folgt vor  gegangen:  <I>Oberflächenkultur:</I> Oberflächen<B>-</B> Impfung mit  einer     Sporen-Suspension    der     neu    entdeckten     Tennen          cetin    produzierenden     Streptomyces-Art    auf mit     Agar     verfestigtes      GPY-Mediu#m     bewirkt ein starkes  Wachstum nach einer     Bebrütung    von drei bis vier  Tagen bei<B>25</B> bis<B>280-C.</B> Die Extraktion dieser     Kul-          turen    mit Aceton, Alkohol oder Wasser ergibt ein  gelbes Extrakt,

   weiches zu einem relativ wirksamen  Präparat konzentriert werden<U>kann.</U> Diese Methode  ist sehr zuverlässig. Sie ist jedoch mühsam und  natürlich unpraktisch, wenn grössere, Quantitäten des  aktiven     Materids    benötigt werden.  



  <I>Schüttelflaschen:</I> Fünf     100-,cm3-Erlenmeyer-          Flaschen,    welche<B>100</B>     cms         GPY-Medium     enthalten,  werden mit 1-2     cm3    einer 24-48 Stunden geschüttel  ten Kultur (gleiches Medium) des Organismus geimpft.       Bebrütung    unter Zuhilfenahme einer reziproken oder  rotierenden     Schütteänaschine    bei     25-280C    ergibt  ein gutes Wachstum und eine     Anfilbiotica-Produktion     nach drei bis vier Tagen.  



  <I>Gärbottich:<B>5-</B></I> oder     10-Gallonen-Glasäaschen-          oder        -Gäilbottiche,    die<B>10</B> bis<B>15</B> Liter des      GPY-          Mediums     enthalten, werden mit<B>100</B> bis<B>500</B>     cm3     einer 24-48 Stunden geschüttelten Kultur (gleiches  Medium) des genannten Organismus     angeimpft.    Die  Glasflaschen werden auf reziproken     Sohüttelmaschi-          nen    bewegt, während die<B>'</B>     Gärottiche    mit mecha  nischen     Rührern        veTsehen    werden.

   Beide können  während der     Fermentationsperiode    mit filtrierter  Luft oder Sauerstoff belüftet werden. Das Wachstum      ist unter diesen Bedingungen sehr gut und die     Anti-          bioticum-Produktion    erreicht ihr Maximum nach  ungefähr<B>60</B> bis<B>72</B> Stunden bei Temperaturen von  <B>25-280 C.</B> Die     Schaumbildung    war in Schüttelflaschen,  Glasflaschen oder     Gärbottichen    kein wesentliches  Problem.  



  <I>Gewinnungsverfahren</I>  Die Gewinnung des Antibiotikums aus     stationäxen     Kulturen wird wie folgt bewerkstelligt: Drei bis vier  Tage alte     Agar-Kulturen    werden für<B>30</B> Minuten bei       Raumtemperatur    in Wasser, Aceton oder einem  niederen Alkohol     vingetaucht.    Das Extrakt wird dann  abgeschüttelt, durch Filtrieren oder     Zentri-fugieren     geklärt und im Vakuum eingedampft oder, durch  Kochen auf ungefähr     1/,()    des ursprünglichen     Vol-u-          mens    eingeengt.

   Dies ergibt eine im wesentlichen       wässrige    Lösung, welche gemäss den Testen für das       Antünikroibe,n-Spek,trum,    das Ultraviolett-     und        Infra-          rot-Absorptionsspektrum    und nach- ihrem Verhalten  bei den     Papierchr-omatogrammen    identisch ist mit  den Extrakten aus     Brühenkfflturen.     



  Wenn diese Präparate mehrere Tage im     Kühl-          schr(ank    gehalten werden, scheidet sich ein hellgelber  Niederschlag aus. Die     gelblichbraune    überstehende  Flüssigkeit ist der hauptsächliche Träger der anti  biotischen Aktivität. Der gelbe Niederschlag- ist prak  tisch unlöslich und ohne antibiotische Aktivität.  



  Die Gewinnung des Antibiotikums aus den Brü  hen geht wie, folgt vor sich: Wie in anderen     Anti-          biotica-Fürinentatione-ii    bedingt die     Kügelchenbildung     des Organismus eine niedrigere Ausbeute des Anti  biotikums. Flockiges Wachstum gibt bessere     Aus-          beut-e,n;   <B>im</B> vorliegenden Falle jedoch ist der flockig  gewachsene Organismus schwierig von der Brühe zu  trennen. Das     Mycelium    selbst ist Träger einer nur  geringen Aktivität. Durch     Ansäuren    kann die Filtra  tion erleichtert werden ohne spürbare Abnahme der  Aktivität.

   Die Brühe ist ein einziges Mal mit einem  gleich grossen Volumen von wassergesättigtem     Buta-          nol    extrahiert worden,     Emulsionen'sind    durch     Filtrie-          rung    durch     aibsorbierende    Baumwolle gebrochen wor  den.  



  Die Konzentration des     Butancyl-Extraktes    wird im  Vakuum bewerkstelligt, und zwar- bis zu     eihern     Zehntel des ursprünglichen Volumens-.  



  Vier Volumen von     wasseifreiern    Äther werden  dann, dem konzentrierten     Butanol-Extrakt    zugegeben.  Ein feiner     gelbe#r-    Niederschlag erscheint, welcher  durch Filtrieren oder Zentrifugieren gesammelt wer  den kann.  



  Der Niederschlag wird in Wasser oder     Meehanol     aufgelöst, nachdem der unlösliche Niederschlag durch       Fitration    entfernt worden ist. Danach wird der Nie  derschlag aus Wasser oder Methanol durch Zugabe  von<B>10</B> Volumen Aceton wieder- erzeugt. Der- so  entstandene gelbe Niederschlag wird getrocknet und  im Kühlschrank gelagert. Dieses Material,     welcheg     das am- besten gereinigte Produkt darstellt, das bis  jetzt erhalten worden ist, sollte einen Gehalt von  zwischen<B>100</B> und 200     E-üffiei,#ten-        Tennecetinn    pro-    mg aufweisen. Die betreffende Einheit ist zum  mindesten gleichwertig wie<B>10</B>     Nystatin-Einheiten.     



       Gehaltsbestimmungsmethode   <I>für</I>     Tennecetin     Eine quantitative mikrobiologische,     Gehaltsbe-          stimmungsinethode    ist für die Messung des     Tenne-          cetin-Gehaltes    in rohen Brühen und Extrakten ent  wickelt worden. Es ist dies die bekannte     Papier-          .Sche#iben-Ag,ardiffusionsnieth,ode,    welche als Testorga  nismus     Saccharomyces        carlsbergensis    verwendet.

   Die       Gchaltsbestimmungsmethode    gibt über einen zehn  fachen Konzentrationsbereich eine gerade Linie     niit     ,guter Steilheit, wenn sie auf     seniflogaritlintisches    Pa  pier aufgezeichnet wird.  



  Bei -dieser Methode ist eine willkürliche Einheit  von     Tennecetin    definiert worden, und zwar derart,       dass    diejenige Menge des Antibiotikums, welche,  wenn sie in<B>1,0</B>     cm3    Brühe oder Verdünnungsmittel  enthalten ist, eine,     20-min-Hemmzc>ne    (Durchmesser)  gegen den Versuchsstamm<B>S.</B>     carlsbergensis    bewirkt,  und zwar gemäss den vorgeschriebenen     Bedingungen     für die     Standard-Gehaltsbestimmungs-Methode    (die  gemäss dieser Methode verwendeten Papierscheiben  sind  Schleicher<B> & </B> Schnell     Nr.        740-E ,   <B>12,7</B> mm  Durchmesser).  



  <B>S.</B>     earlsberge-n#sis    wird durch tägliche     Serien-über-          tragung    in     Wickerhain-Brühe    (Glucose<B>1</B>     Ilo,        Pepton          0,5        1%,        Hefe-Extrakt        0,3        1/@,        Malz-Extrakt        0,3        "/e)     eingebracht.

   Gehaltsplatten werden durch über  strömen von     Standard-Petrischalen    mit 20     cm3          2,1/oigem        Agar    hergestellt, um eine, Basisschicht zu  bilden. Wenn die Basisschicht erhärtet ist, werden  <B>5</B>     cm31    eines     überzugs-Agar        (Wickerham-Brühe          und        1%        Agar),        welches        mit        2%        Inoculum        geimpft     ist,

   über die Basisschicht     pipettiert    und gleichmässig  verteilt. Muster werden durch Eintauchen von  <B> S  & </B>     S -Filterpapierscheiben    in Lösungen von ver  schiedener     Verdünnung    geprüft. Die Muster werden  auf ungefähr 2,0     Einheiten/cm3    verdünnt. Ein     Stau-          dard-Präparat    wird auf jeder Platte geprüft.  



  <I>Hitzestabilität von</I>     Tennecetin     Lösungen von erfindungsgemäss erhaltenem rohem       Tenneectin    haben ihre volle Aktivität nach einer       20minutigen    Behandlung bei<B>1000</B>     C        beib-ehalten.     Lösungen, die mehr als einen Monat     irn    Kühlschrank  gehalten wurden, haben ihre Aktivität ebenfalls bei  behalten. Die Stabilität nimmt spürbar ab bei einem       pH    von 4,0 und<B>10,0</B>     (vgl.    Tabelle<B>11).</B>  



  Portionen aus einer<B>S.</B>     chattanoogensis-Kultur,     die<B>72</B> Stunden in einer Schüttelflasche geschüttelt  worden ist, werden auf ein     pH    4,0,<B>7,0</B> und<B>10,0</B>  eingestellt. 2     cm3    von jeder Portion werden in<B>je</B>  eine Teströhre     pipettiert        und    wie     folgtbehandelt:     a) nicht erhitzt,  <B><I>b)</I> 5</B> Minuten, in siedendes     Wasserbad    gestellt,  <I>c)</I><B>10</B> Minuten in siedendes Wasserbad gestellt,  <B><I>d)</I></B> 20 Minuten, in     sIedendes    Wasserbad gestellt.  <I>e)</I><B>30</B> Minuten bei 121-<B>C</B> im     Auteklav    behandelt.

      
EMI0007.0001     
  
    <I>Tabelle <SEP> II</I>
<tb>  <I>Hitzestabilität <SEP> des <SEP> Antibiotikums</I>
<tb>  Antibiotische. <SEP> Aktivität <SEP> (Einheiten)
<tb>  Behandlung <SEP> <B><U>pH</U></B><U> <SEP> 4,0 <SEP> <B>1 <SEP> pH <SEP> 7,0 <SEP> 1 <SEP> pH</B></U><B> <SEP> 10,0</B>
<tb>  Keine <SEP> (Kontrollversuch) <SEP> <B>8 <SEP> 8 <SEP> 8</B>
<tb>  Siedendes <SEP> Wasser <SEP> <B>5</B> <SEP> Minuten <SEP> <B>8 <SEP> 8 <SEP> 5,2</B>
<tb>  Siedendes <SEP> Wasser <SEP> <B>1U</B> <SEP> Minuten <SEP> <B>6,6 <SEP> 8 <SEP> 2,7</B>
<tb>  Siedendes <SEP> Wasser <SEP> 20 <SEP> Minuten <SEP> <B>3,3 <SEP> 8 <SEP> 0,8</B>
<tb>  Autoklav-Behandlung- <SEP> <B>30</B> <SEP> Minuten <SEP> keine <SEP> <B>3,

  3</B> <SEP> keine       <I> In</I>     vitro -Spektrum     Unter Verwendung der konventionellen     Kreuz-          strich-Agar-Diffuisio-ns-tech#nik    wurden mehr als<B>80</B>  verschiedene Arten von Organismen auf ihre     ErnP-          findlichkeit    gegenüber dieser antibiotischen Substanz  getestet. Bis jetzt konnte keine Hefe oder Pilz -gefun  den werden, deren Wachstum durch     Tennece-tin        rucht     verhindert worden wäre. In dieser     Grupp    e sind  menschlich     pathogene    Organismen eingeschlossen, die  eine starke     Mycose    verursachen, wie z.

   B.     Crypto-          coccus        neoformans,        Blastomyws        dermatitidis,        Can-          dida        albicans;    und     Dermatophyten,    wie,     Trichophyton          mentagrophytes,        Microsporum        gypseum;

      und     pflan-          zenpathogene    Organismen,     wieg        Fusarium        sp.    und       Monascus        purpurea.     



  Die meisten Bakterien scheinen von Anfang an  gegen die Wirkung des     erfindungsigemäss    -erhaltenen  Antibiotikums resistent zu     #sein.    Zwei bis jetzt     beraus-          gefundene    Ausnahmen bilden     Pseudomonas        tabaci     und     C6rynebacte-rium        diphthieriae.    Die Wirksamkeit  von     Tennecetin    gegen säurefeste     Organismein    ist bis  jetzt nicht gänzlich erforscht worden. Gemäss den  vorläufigen Ergebnissen zeigt sich-,     dass    das neue Anti  biotikum wenig oder gar keine Wirkung auf diese  Organismen ausübt.

   Die     Tabolle        III    gibt diejenigen  Arten wieder, deren     in-vitro-Empfindlichkeit    gegen       Tennecetin        gepTilft    wurde.  



  <I>Tabelle</I>     III     <B>A.</B> Organismen, deren Wachstum in     vi-tro    durch       Tennecet,in    gehindert wurde:       Penicillium        sp.          AspergillIus        sp.          AspergiEus        niger          Absidia        spinosa          Mucor        sp.     



       Syncephalastrum        raoemosum          Canninghameüa        sp.          Thamnidium        elegans          Cirr,inella        tenella          Penicillium        citrenum          A.spergillus        candidus          Aspergilllus        glaucus          Aspergillus        fumigatus            Aspergillus        clavatus          Asper,

  gillus.        ochraoeus          Paecilomyr-es        sp.          Scopulari!opsis,sp.          Fusarium        graminum          Fusarium        sp.          Penicilfium        canescens          Rhodoto-rula        sp.     



       Saccharomyces        verevisae   <B>(3</B> Stämme)       Sacch,aromy,cQs        caTIsibergensis    (2 Stämme)       Sacch-aromyces        fragii          Hansenula        anomola          Blastomyces        dermatitidis        (Hefe-Phase)          Blastomyces        derrnatitidis        (PilznPhas--)

            Sporotrichum        schenckh          Trichophyton        mentagrophytes          Microsporum        typseum          Microsporum        aud.ouini          Corync-bacte.rium        sp.          Corynebacterium        diphtheriae          P.seudomonas        tabaci          Candida        albicans   <B>(6</B> Stämme)

         Candida        krusei          Candida        parakrasei          Candida        stelletoidea          Ge,otrichum        sp.     



       Cryptococcus        neoformans    (2 Stämme)       Tor-ulopsis        sp.   <B>(3</B> Stämme)       Hansenulamrakii          Hansenula        silvacola          Pichia        membranefaciens          Schwa-nniomyces        sp.          Trigonopsis        variabilis          Myco:

  de,rma        sp.          Debaryorayces        globosus          Spor..cbc>1"omyces        salmonicolor          Zygosacch#aromy-ces        lactis          Candida        tropicahs         B.

   Organismen, deren Wachstum in     vitro    durch       Tennecetin    nur gering oder fragwürdig gehindert  wurde:       Oospera        lactis          Staphylococcus        aureus   <B>(3</B> Stämme)       Staphylococcus        albus          Sarcina        lutea          Corynebacteri,um        sp.          Mycobaete#d,um        sp.        (ATCC   <B>607)</B>  <B>C.</B>     Organisinen,

      deren Wachstum in     vitro    durch       Tennecetin    nichtgehindert wurde:       Esche,richia        coli          Serratia        sp.          Sahrionella        typhosa          Paracolobactrum.        sp.          Pseudomonas        fragii          Pseudomonas        Ihiorescens          Alcaligenes        viscosus.          Pseudomonas        aeruginosa       <RTI  

   ID="0008.0035">   Sahnonella        enteritidis          Bacterium,        cadaveris          Bacillus        cereus          Bacilltis        subtilis          Bacillus        graveolus          Neisseria        catarrhalis,          Neisseria        perflava          Mycobacterium.        avium.          Streptorayces        rinios:

  us          Streptomyces        Iavendulae          Streptomyces        viridis          Streptorayces.        coelicolor          Streptomyces        cellulosae          Streptomyces.        griseus          Streptomyces        albus          Streptomyce,s        cahfornIcus          Nocardia        sip.     



       Nocardia        astoroides          Mieromonospo,ra        sp.            Toxizität   <I>für Tiere</I>  Ein 104 Einheiten pro     Milfigramm    aufweisendes  Präparat des erfindungsgemäss erhaltenen neuen       Anti#bioti,k-=s    wurde in wassergesättigtem.     Butanol     gelöst und     intraperitoneal    injiziert in<B>18-20</B>     gschwere          CFW-w,eisse    Mäuse in einer Dosis von 0,2     cm3    pro  Maus. Als     LD.,    wurde eine Menge von 134     mg/kg     bestimmt.

   Das neue Antibiotikum könnte also mit  verhältnismässiger Sicherheit als prophylaktisches oder  therapeutisches Mittel im Zusammenhang     init    Pilzer  krankungen von Tieren verwendet werden.

Claims (1)

1. <B>PATENTANSPRUCH</B> Verf ahren zur HersteRung von Tennecetin, da durch gekennzeichnet, dass eine Kultur von Strepto- myces chattanoogensls kultiviert und das erzeugte Tennecetin isoliert wird. UNTERANSPRüCHE <B>1.</B> Verfahren nach Patentanspruch, dadurch ge kennzeichnet, dass die Kultivierung<B>durch</B> Oberffä- chenkultur in einem wässrigen Nährmedium. vorge nommen wird. 2.

   Verfahren nach Batentanspruch, dadurch ge kennzeichnet, dass die Kultivierung in einem wässrigen Nährinedium submers und aerob <U>vorgenommen</U> wird. <B>3.</B> VeTf ahren nach Unteranspruch 2, dadurch ge kennzeichnet, dass das Nährinedium bei einer Tempe ratur von 25-281> <B>C</B> gehalten wird und die Züchtung im Maxünum <B>60-72</B> Stunden dauert. 4.

   Verfahren nach Unteransprach 2, dadurch<B>ge-</B> kennzeichnet, dass das pH ödes Nährniediums zwi schen<B>7,6</B> und 4,5 liegt. <B>5.</B> Verfahren nach Patentanspruch, dadurch<B>ge-</B> kennzeichnet, dass die Isolierung durch Lösungsmittel- extuaktion, die nachfolgende Konzentrierung des Extraktes durch Eindampfen und fraktionierte Fäl lung des Antibiotikums a-ls Pulver vorgenommen wird.