BRPI1100013B1 - microesfera, uso da mesma, e, método de preparar microesferas - Google Patents

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James Krom
Philippe Reb
Pierre Marion
Barbara De Gioannis
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Biosphere Medical, Inc.
Biosphere Medical, S.A
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Abstract

MICROESFERA, USO DA MESMA, E, MÉTODO DE PREPARAR MICROESFERAS São fornecidas, por exemplo, microesferas compreendendo uma gelatina ou substituinte de gelatina e um copolímero de uma unidade de monômero de N-trishidroximetil metilacrilamida, uma unidade de monômero de dietilaminoetilacrilamida e uma unidade de monômero de N,Nmetilenobis- acrilamida. Também são fornecidos métodos de produzir microesferas compreendendo uma gelatina ou substituinte de gelatina e um copolímero de uma unidade de monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, uma unidade de monômero de dietilaminoetilacrilamida e uma unidade de monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida. Ainda aqui fornecidas são, por exemplo, composições compreendendo as microesferas e métodos de usar as microesferas e composições destes.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO
[001] São aqui fornecidas, por exemplo, microesferas compreendendo uma gelatina ou substituinte de gelatina e um copolímero de uma unidade de monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, uma unidade de monômero de dietilaminoetilacrilamida e uma unidade de monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida. Também são fornecidos métodos de produzir microesferas compreendendo uma gelatina ou substituinte de gelatina e um copolímero de uma unidade de monômero de N-tris- hidroximetil metilacrilamida, uma unidade de monômero de dietilaminoetilacrilamida e uma unidade de monômero de N,N-metileno-bis- acrilamida. Ainda fornecidas aqui são, por exemplo, composições compreendendo as microesferas e métodos de usar as microesferas e composições destes.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
[002] Oclusão vascular terapêutica (isto é, embolização) é usada para prevenir ou tratar certas condições patológicas em situ. Ela pode ser administrada por meio de cateteres que tornam isso possível, em controle de imagem, para posicionar agentes de oclusão particulados (isto é, embolias) no sistema circulatório. Ela tem uma variedade de aplicações médicas, tais como no tratamento de tumores, incluindo, por exemplo, fibróides uterinas, malformações vasculares e processos hemorrágicos.
[003] Por exemplo, oclusão vascular pode suprimir dor, perda sanguínea limite na intervenção cirúrgica para fluir a embolização ou ainda o surgimento de uma necrose tumoral e evitar a operação. No caso de malformações vasculares, oclusão vascular possibilita que o fluxo sanguíneo para os tecidos normais seja normalizado, ajude na cirurgia e limite o risco de hemorragia. Nos processos hemorrágicos, oclusão vascular pode produzir uma redução do fluxo, que promove cicatrização da abertura arterial. Além disso, dependendo das condições tratadas, embolização pode ser usada para propósitos temporários, bem como permanentes.
[004] Diferentes tipos de êmbolos foram usados para embolização, por exemplo, agentes líquidos (por exemplo, colas acrílicas, géis ou suspensões viscosas), bem como agentes particulados (por exemplo, polímeros misturados, dura mater, esponjas de gelatina, esferas, balões ou espirais), incluindo microesferas de trisacrila gelatina EmboEsfera® (BioEsfera Medical, Rockland, M.A) (ver também, por exemplo, patentes U.S. Nos. 5.635.215 e 5.648.100).
[005] Entre os vários agentes de oclusão, microesferas demonstraram melhores propriedades embólicas que outros êmbolos sólidos. Entretanto, a qualidade e rendimento das microesferas frequentemente varia devido aos materiais usados no processo de produção e métodos de prepará- los.
[006] Desta maneira, ainda existe uma necessidade de métodos de produzir microesferas com, por exemplo, uma melhor produtividade de rendimento e possivelmente melhor uniformidade ou pureza. Além do mais, também permanece uma necessidade de microesferas com, por exemplo, uma qualidade melhor ou mais consistente de lote de produção para lotes de produção que são capazes de fornecer efeitos embólicos otimizados.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[007] Os métodos aqui fornecidos geralmente dizem respeito a microesferas e composições compreendendo as microesferas. Também fornecidos aqui são métodos de produzir e usar as microesferas.
[008] Aqui fornecida, em um aspecto, é uma microesfera compreendendo: (a) um copolímero compreendendo uma unidade de monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, uma unidade de monômero de dietilaminoetilacrilamida e uma unidade de monômero de N,N-metileno- bis-acrilamida, e (b) gelatina reticulada. Em certas modalidades, a microesfera apresenta em um espectro de !HNMR, um primeiro pico de cerca de 3,5 ppm a cerca de 4 ppm, um segundo pico de cerca de 3 ppm a cerca de 3,5 ppm, e um.terceiro pico de cerca de 1 ppm a cerca de 1,5 ppm. Em modalidades específicas, (i) a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico é cerca de 0,50 a cerca de 0,65, (ii) a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico é cerca de 0,55 a cerca de 0,75 (por exemplo, cerca de 0,61 a cerca de 0,75), ou (iii) uma combinação de (i) e (ii). Em certas modalidades, a unidade de monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida é uma unidade de monômero ultra-pura, monômero trisdietilaminoetilacrilamida é uma unidade de monômero ultra-pura e/ou a unidade de monômero de N,N- metileno-bis-acrilamida é um monômero ultra-puro.
[009] Em um outro aspecto, é aqui fornecida uma microesfera compreendendo: (a) um copolímero preparado por copolimerização de um monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, um monômero de dietilaminoetilacrilamida e um monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida, e (b) gelatina reticulada. Em certas modalidades, a microesfera apresenta em um espectro de 'HNMR, um primeiro pico de cerca de 3,5 ppm a cerca de 4 ppm, um segundo pico de cerca de 3 ppm a cerca de 3,5 ppm, e um terceiro pico de cerca de 1 ppm.a cerca de 1,5 ppm. Em modalidades específicas, (i) a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico é cerca de 0,50 a cerca de 0,65, (ii) a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico é cerca de 0,55 a cerca de 0,75 (e.g. cerca de 0,61 a cerca de 0,75), ou (iii) uma combinação de (i) e (ii). Em certas modalidades, o monômero de N-tris- hidroximetil metilacrilamida é um monômero ultra-puro, o monômero de dietilaminoetilacrilamida é um monômero ultra-puro e/ou o monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida é um monômero ultra-puro.
[0010] Em um outro aspecto, é aqui fornecido um método de preparar microesferas compreendendo: (a) preparar uma solução aquosa compreendendo (i) um monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, (ii) um monômero de dietilaminoetilacrilamida, (iii) um monômero de N,N- metileno-bis-acrilamida, e (iv) gelatina, em que o monômero de N-tris- hidroximetil metilacrilamida é um monômero ultra-puro, o monômero de dietilaminoetilacrilamida é um monômero ultra-puro e/ou o monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida é na monômero ultra-puro; (b) adicionar a solução aquosa a uma fase orgânica líquida (por exemplo, um óleo, tais como um óleo mineral, tais como um óleo de parafina) que tem baixa miscibilidade em água, antes ou durante a agitação; produzindo assim microesferas compreendendo um copolímero compreendendo unidades de monômero de N-tris-hidroxietil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida e N,N-metileno- bis-acrilamida; (c) reticular a gelatina. Em some modalidades, o método ainda compreende submeter as microesferas a sonicação (por exemplo, ultrassonicação) antes de reticular a gelatina. Em uma modalidade, a solução aquosa é adicionada por meio de um anel de alimentação na fase orgânica líquida. Também são fornecidas aqui microesferas produzidas por estes métodos.
[0011] Em um um outro aspecto, são aqui fornecidos métodos de embolização em um paciente, compreendendo administrar ao paciente a microesfera(s) aqui fornecida.
[0012] Ainda em um outro aspecto, são aqui fornecidos métodos de gerenciar ou tratar a doença dependente da angiogênese em um paciente, compreendendo administrar ao paciente a microesfera(s) aqui fornecida. TERMINOLOGIA
[0013] A menos que definido de outra maneira, todos os termos técnicos e científicos aqui usados têm o mesmo significado comumente entendido por um versado na tecnologia. Todas as patentes, pedidos de patente, pedidos de patente publicados e outros pedidos de patente estão aqui incorporados pela referência na íntegra. No evento existe uma pluralidade de definições para um termo aqui, os nesta seção prevalecem, a menos que estabelecido de outra maneira.
[0014] O termo “cerca de” ou “aproximadamente” significa em 20 %, tais como em 15 %, em 10 %, em 9 %, em 8 %, em 7 %, em 6 %, em 5 %, em 4 %, em 3 %, em 2 %, em 1 %, em 0,5 % ou menos que de um dado valor ou faixa.
[0015] Da forma aqui usada, “administrar,” “administração” e “administrando” refere-se à ação de injetar ou de outra forma distribuir uma substância como ela existe for a do corpo (por exemplo, uma partícula ou microesfera aqui fornecida) em um paciente, tais como, mas sem limitações, por pulmonary (por exemplo, inhalation), mucosal (por exemplo, intranasal), distribuição intradérmica, intravenosa, intrarterial, intrabiliar, intraocular, intraóssea, intramuscular e/ou qualquer outro método de distribuição física descrito aqui ou conhecido na tecnologia. Em modalidades específicas, as microesferas são distribuídas usando uma seringa e/ou um cateter. Quando uma doença, ou um sintoma desta, é tratado ou de outra forma gerenciado, administração da substância tipicamente ocorre depois do início de ação da doença ou sintomas desta. Quando uma doença, ou sintoma desta, é prevenida, administração da substância tipicamente ocorre antes do início de ação da doença ou sintomas desta. Tal administração, em certas modalidades, resulta, nas partículas distribuídas (por exemplo, uma microesfera aqui fornecida) em contato com a área alvo (por exemplo, um vaso sanguíneo, tecido ou órgão).
[0016] O termo “angiografia” refere-se a um tipo de raios-X que é feito para imagear vasos sanguíneos em várias partes do corpo (por exemplo, fígado, próstata, útero), de maneira a determinar se os vasoss são doentes, estreitos, alargados ou bloqueados no geral. Em certas modalidades, um angiograma (por exemplo, raios-X) é feito injetando um material de contraste para salientar os vasos, depois de passar um cateter em uma artéria levando à área do corpo de interesse.
[0017] “Angiografia super-seletiva” refere-se a angiografia com o uso de um pequeno cateter que pode ser passado através de um maior em um ramo da artéria fornecendo uma pequena área de tecido ou um tumor.
[0018] O termo “malformação arteriovenosa,” “AVM,” “malformação vascular” refere-se a um grupo de doenças em que pelo menos uma (e mais tipicamente, muitos) comunicações anormais entre as artérias e veias ocorre resultando em uma massa tipo tumor local composta predominantemente de vasos sanguíneos. Tal doença pode ser tanto congênita ou adquirida.
[0019] O termo “hiperplasia prostática benigna” refere-se ao aumento no tamanho da próstata, por exemplo, em homens de idade média ou mais velhos.
[0020] Da forma aqui usada, “reticular,” “reticulado” e “reticulação” geralmente refere-se à ligação de dois ou mais materiais estabilizantes, incluindo lipídeo, proteína, polímero, carboidrato, materiais estabilizantes de agente tensoativo, fator terapêutico bioativo e/ou agentes bioativos por uma ou mais pontes. As pontes podem ser compostas de um ou mais elementos, grupos, ou componentes, e geralmente servem para unir um átomo de uma primeira molécula de material estabilizante a um átomo de uma segunda molécula de material estabilizante. As pontes de reticulação podem envolver associações covalentes e/ou não covalentes. Qualquer uma variedade de elementos, grupos, e/ou componentes pode formar as pontes nas reticulações e os materiais estabilizantes podem ser reticulados naturalmente ou por meios sintéticos. Por exemplo, reticulação pode ocorrer na natureza em material formulado de cadeias de peptídeo que são unidas por ligações de dissulfito de resíduos de cistina, como em queratinas, insulinas e outras proteínas. Alternativamente, reticulação pode ser efetuada por modificação química adequada, tais como, por exemplo, combinando um componente, tais como um material estabilizante, e uma substância química que pode servir como um agente de reticulação, que pode reagir, por exemplo, por exposição ao calor, radiação de alta energia, e similares. Exemplos incluem reticulação por enxofre para formar ligações de dissulfito, reticulação usando peróxidos orgânicos, reticulação de materiais insaturados por meio de radiação de alta energia, reticulação com carbamato de dimetilol, e similares. Em certas modalidades das microesferas aqui fornecidas, a gelatina é reticulada.
[0021] O termo “promotor de adesão celular” da forma aqui usada significa qualquer material que, em virtude de sua presença em ou associação com as microesferas, promove ou melhora a adesividade das células na superfície das microesferas. Estes materiais são frequentemente proteínas que se ligam à superfície das microesferas por meio de ligações covalentes das proteínas e dos polímeros.
[0022] Da forma aqui usada, “modificação química” refere-se às mudanças das propriedades químicas e características das microesferas, tanto durante seu processo de produção quanto por meio de mistura ou contato deles com vários agentes ou tecidos, tais como as microesferas têm a capacidade de realizar, além da embolização, outras funções, por exemplo, uma vez injetado no corpo.
[0023] O termo “quantidade efetiva” da forma aqui usada refere-se à quantidade de uma terapia (por exemplo, uma microesfera ou composição aqui fornecida) que é suficiente para parcial ou completamente ocludir um vaso sanguíneo, tais como uma artéria ou veia. Tal oclusão pode ser temporária ou permanente. Em certas modalidades, a quantidade efetiva ainda aliviará a severidade e/ou duração de uma dada doença e/ou um sintoma relacionado a esta. Em certas modalidades dos métodos aqui fornecidos, uma quantidade efetiva das microesferas é administrada ao paciente.
[0024] O termo “embolização” ou “embolização terapêutica” da forma aqui usada refere-se a uma oclusão parcial ou total dos vasos onde o sangue é inundado, por exemplo, oclusão seletiva dos vasos sanguíneos introduzindo propositalmente êmbolos nos vasos. Por exemplo, embolização permite a oclusão das artérias ou veias tanto para corrigir uma disfunção (por exemplo, uma malformação arteriovenosa) quanto interromper ou diminuir o fluxo sanguíneo (por exemplo, a um crescimento de tumor sólido/câncer). Em certas modalidades, embolização é uma operação passiva no sentido que nenhuma molécula ativa é carregada e/ou distribuída onde o material embólico é depositado.
[0025] O termo “em combinação” da forma aqui usada no contexto da administração de outras terapias refere-se ao uso de mais que uma terapia. O uso do termo “em combinação” não restringe a ordem em que as terapias são administradas a um paciente. Uma primeira terapia pode ser administrada antes (por exemplo, 1 minuto, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas, ou 12'semanas), concorrentemente, ou depois (por exemplo, 1 minuto, 15 minutos, 30 minutos, 45 minutos, 1 hora, 2 horas, 4 horas, 6 horas, 12 horas, 24 horas, 48 horas, 72 horas, 96 horas, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 5 semanas, 6 semanas, 8 semanas, ou 12 semanas) a administração de uma segunda terapia a um paciente, por exemplo, que teve, tem, ou é suscetível a uma dada doença. Qualquer terapia adicional pode ser administrada em qualquer ordem com outras terapias adicionais em certas modalidades, as partículas aqui fornecidas podem ser administradas em combinação com uma ou mais terapias (por exemplo, terapias que não são microesferas que são atualmente administradas para prevenir, tratar, gerenciar e/ou aliviar uma dada doença ou outro sintoma relacionado a ele). Exemplos não limitantes de terapias que podem ser administradas em combinação com as partículas aqui fornecidas incluem agentes analgésicos, agentes anestésicos, antibióticos ou agentes imunomodulatórios ou qualquer outro agente listado na U.S. Pharmacopoeia - National Formulary (2009) U.S.. Pharmacopoeia, incluindo revisões e/ou Physician's Desk Reference (2009) 63'd ed Thomson Reuters.
[0026] Da forma aqui usada, o termo “impureza” ou “impurezas” refere-se a substâncias presentes em uma quantidade confinada de material ou componente (por exemplo, um monômero ou unidade de monômero), que difere da composição química do material ou componente. Impurezas podem ocorrer naturalmente ou ser adicionaras durante ou resultante da síntese de amaterial ou componente.
[0027] Da forma aqui usada, “injetável” significa capaz de ser administrado, distribuído ou carregado no corpo por meio de seringa, cateteres, agulhas ou outros meios para injetar ou infundir as microesferas em um meio líquido. Em certas modalidades, as partículas aqui fornecidas são partículas injetáveis.
[0028] Da forma aqui usada, um líquido ou solução que tem “baixa miscibilidade em água” refere-se a um líquido ou solução tendo cerca de 50 % ou menos, cerca de 40 % ou menos, cerca de 35 % ou menos, cerca de 30 % ou menos, cerca de 25 % ou menos, cerca de 20 % ou menos, cerca de 15 % ou menos, cerca de 10 % ou menos, cerca de 5 % ou menos, cerca de 4 % ou menos, cerca de 3 % ou menos, cerca de 2 % ou menos, cerca de 1 % ou menos, cerca de 0,5 %, cerca de 0,1 % ou menos, ou cerca de 0 % miscibilidade em água a 25 °C. Em uma modalidade específica, o líquido ou solução tem cerca de 5 % ou menos que miscibilidade em água a 25 °C. Em uma outra modalidade específica, o líquido ou solução tem cerca de 1 % ou menos que miscibilidade em água a 25 °C. Em algumas modalidades, o líquido ou solução é imiscível.
[0029] Da forma aqui usada, os termos “gerenciar,” “gerenciando,” e “gerenciamento” referem-se aos efeitos benéficos que um paciente deriva de uma terapia (por exemplo, microesferas aqui fornecidas), que não resulta em uma cura da doença. Em certas modalidades dos métodos aqui fornecidos, um paciente é administrado com uma ou mais terapias para “gerenciar” uma dada doença ou um ou mais sintomas relacionados a ela, de maneira a prevenir a progressão ou piora da doença.
[0030] Da forma aqui usada, o termo “microesferas” refere-se a um polímero ou uma ou mais combinações de polímeros feitas em corpos de vários tamanhos. As microesferas da forma aqui usada podem ser de qualquer forma. Em certas modalidades, as microesferas são substancialmente de forma esférica. Estas estruturas das microesferas podem ser geralmente de forma esférica ou esferóide ou ser ligadas por formas esféricas ou esferóides imaginárias. Em algumas modalidades, as superfícies das microesferas aqui fornecidas parecem lisas em amplificação de até 1000 vezes, tais como até 100 vezes, até 10 vezes, 0 vezes ou uma faixa desta. As microesferas podem ser esterilizadas por qualquer método conhecido na tecnologia; por exemplo, por irradiação, tais como irradiação gama ou beta. As microesferas aqui fornecidas podem compreender outros materiais aqui descritos e definidos. Entretanto, percebe-se que o termo microesfera” representa uma desrição conveniente para os propósitos de explicação das composições e métodos aqui fornecidos, e que, em certas modalidades, as microesferas exemplares aqui descritas não são necessariamente limitadas como sendo de forma precisamente esférica (por exemplo, são partículas).
[0031] O termo “monômero” refere-se a uma molécula pequena que pode ser quimicamente ligado a outros monômeros para formar um polímero ou copolímero. Referência a certas propriedades ou características de um monômero aqui também pode se aplicar à unidade de monômero correspondente e vice versa.
[0032] O termo “unidade de monômero” refere-se a um monômero em um polímero ou copolímero.
[0033] O termo “farmaceuticamente aceitável” da forma aqui usada significa ser aprovado por uma agência regulatória do governo Federal ou estadual ou listado na U.S. Pharmacopeia, European Pharmacopeia ou outra farmacopéia geralmente reconhecida para uso em animais, e mais particularmente em humanos.
[0034] Da forma aqui usada, os termos “prevenir,” “prevenindo,” e “prevenção” refere-se à inibição parcial ou total de uma dada doença, a inibição total ou parcial do desenvolvimento ou início de ação da progressão da doença da dada doença, ou um sintoma relacionado a ela em um paciente.
[0035] Da forma aqui usada, o termo “efeitos colaterais” engloba efeitos indesejados e adversos de uma terapia. Efeitos indesejados não são necessariamente adversos. Um efeito adverso de uma terapia deve ser nocivo ou desconfortável ou de risco. Exemplos de efeitos colaterais incluem, mas sem limitações, rinite, diarréia, tosse, gastroenterite, chiado, náusea, vômito, anorexia, cólica abdominal, febre, dor, perda de peso, desidratação, alopécia, dispinéia, insônia, vertigem, mucosite, efeitos no nervo e músculo, fadiga, boca seca e perda de appetite, erupções ou inchaços no local de administração, sintomas tipo gripe, tais como febre, calafrios e fadiga, problemas do trato digestivo e reações alérgicas. Efeitos indesejados adicionais experimentados pelos pacientes são inúmeros e conhecidos na tecnologia. Muitos são descritos no Physician's Desk Reference (58'led., 2004).
[0036] O termo “sonicação” refere-se à ação de aplicar energia sonora (por exemplo, ultrassonicação) para agitar as partículas em uma amostra (por exemplo, microesferas).
[0037] Da forma aqui usada, “material estabilizante” ou “componente estabilizante” refere-se a qualquer material que é capaz de melhorar a estabilidade das composições, alvejar ligantes e/ou outros fatores terapêuticos bioativos descritos aqui, incluindo, por exemplo, misturas, suspensões, emulsões, dispersões, vesículas ou similares.
[0038] O termo “células tronco” refere-se a células que têm a capacidade de se auto-regenerar e gerar progénie diferenciada. Em certas modalidades, as células tronco são células tronco mesenquimais.
[0039] O termo “pegajoso” ou “agregado” refere-se ao estado onde um artigo em questão (por exemplo, uma microesfera) está em contato físico íntimo com um ou mais objetos ou artigos e é inseparável dos outros objetos ou artigos sem forças externas (por exemplo, coleta em uma massa ou todo). Em certas modalidades, uma microesfera pegajosa ou agregada refere-se a uma microesfera que está em contato físico íntimo com uma ou mais microesferas, por exemplo, devido à gelatina ou um substituinte de gelatina. O termo “não pegajoso,” “não agredado” ou “desagregado” refere-se ao estado sem contato físico íntimo ou adesão. Em certas modalidades, uma microesfera não pegajosa, desagregada ou não agregada refere-se a uma microesfera que é substancialmente sem ou completamente sem contato físico íntimo com outras microesferas. A porcentagem de microesferas pegajosas em uma população pode ser determinada, por exemplo, por observação em um microscópio.
[0040] Da forma aqui usada, os termos “paciente” e “paciente” são usados independentemente.
[0041] Da forma aqui usada, um paciente é um mamífero, tais como um não primata (por exemplo, vacas, porcos, cavalos, gatos, cães, ratos, coelhos etc.) ou um primata (por exemplo, macaco e humano) compreendendo administração de partículas aqui fornecidas. Em algumas modalidades, o paciente está em necessidade de tratamento ou gerenciamento da doença ou sintoma desta Em modalidades específicas, o paciente é um humano.
[0042] Da forma aqui usada, o termo “substancialmente esférica” ou “geralmente esférica” refere-se a uma forma que é próxima de uma esfera perfeita, que é definida como um volume que apresenta a menor área de superfície externa. Especificamente, “substancialmente esférica da forma aqui usada significa, quando vista de qualquer transversal da partícula (por exemplo, Linder um microscópio), a diferença entre o diâmetro principal médio e o diâmetro menor médio é menos que 20 %, menos que 15 %, menos que 10 %, menos que 5 %, ou menos que 1 %. Em algumas modalidades, as superfícies das microesferas aqui fornecidas parecem lisas em amplificação de até 1000 vezes, tais como até 100 vezes, até 1,0 vezes, 0 vezes ou uma faixa desta.
[0043] Os termos “agente terapêutico” ou “medicamento terapêutico” podem ser usados independentemente aqui e referem-se a qualquer substância terapeuticamente ativa que é distribuída a um conduíte corporal de um ser vivo para produzir um efeito desejado, normalmente benéfico.
[0044] Da forma aqui usada, o termo “terapia” refere-se a qualquer protocolo, método e/ou agente que pode ser usado no gerenciamento, tratamento e/ou alívio de uma dada doença, ou um sintoma relacionado a ela, Em certas modalidades, os termos “terapias” e “terapia” referem-se a uma terapia biológica, terapia de suporte e/ou outras terapias conhecidas por um versado na tecnologia, tais como pessoal médico, usado no gerenciamento ou tratamento de uma dada doença, ou sintoma relacionado a ela.
[0045] Da forma aqui usada, os termos “tratar,” “tratamento” e “tratanto” referem-se à redução ou alívio da progressão, severidade e/ou duração de uma doença ou um sintoma desta.
[0046] Da forma aqui usada, o termo “ultra-puro refere-se ao estado de um componente ou material (por exemplo, monômero ou unidade de monômero) tendo um nível muito baixo das impurezas comparado a um componente ou material (por exemplo, monômero ou unidade de monômero) que não é diluído ou misturado com componentes ou materiais estranhos. Em certas modalidades, a impureza é um sal. Em algumas modalidades, o nível das impurezas presentes em um componente ou,material pode ser expresso como uma porcentagem (%), por exemplo, um monômero ultra-puro ou uma unidade de monômero ultra-pura pode ter menos que 1 %, menos que 2 %, menos que 3 %, menos que 4 %, menos que 5 %, menos que 6 %, menos que 7 %, menos que 8 %, menos que 9 %, menos que 10 %, menos que 15 %, menos que 20 %, menos que 25 % das impurezas ou qualquer faixa desta. Em certas modalidades, o nível das impurezas é determinado pelo teste de bromo (ver, por exemplo, Exemplos 3 e 6). Em modalidades, o nível das impurezas é determinado por HPLC (ver, por exemplo, Exemplos 2 e 5).
[0047] O termo “fibróide uterina” ou “mieloma” refere-se a tumores não cancerosos compostos de certos tipos de fibras musculares, e tecido conectivo fibroso do útero.
DESCRIÇÃO RESUMIDA DOS DESENHOS
[0048] Figuras 1A-1B ilustram uma comparação da pureza dos monômeros. Figura IA apresenta as diferenças nas sensibilidades da pureza observada usando uma reação de bromação (barras da direita, conforme fornecido pelo fabricante BioSepra) e HPLC (barras da esquerda) para dados lotes de monômero DEAF (T209, 0088 e U089) obtido da BioSepra. Figura 1B apresenta a diferença nas sensibilidades da pureza para dois diferentes lotes de trisacrila (R426 e R402 obtido da BioSepra) observada usando um reação de bromação (barras da direita) ou HPLC (barras da esquerda), e os dados são mostrados com uma afirmação de 100 % de pureza de um trisacrila recristalizado (TA-R) obtido e comparado com monômero de trisacrila da SAFC antes da recristalização (TA).
[0049] Figuras 2A-2C ilustram a redução das microesferas pegajosas por ultrassonicação. A análise da imagem mostra uma diminuição significativa das microesferas pegajosas por ultrassonicação. Nenhuma microesfera quebrada foi observada por este método. Figura 2A mostra microesferas antes da reticulação, inicialmente (painel da esquerda) e depois de 15 min de ultrassonicação (painel da direita). A porcentagem de microesferas pegajosas diminui de cerca de 7 % a cerca de 0,2 % com ultrassonicação. Figura 2B demonstra microesferas depois da reticulação sem (painel da esquerda) ou com (painel da direita) ultrassonicação antes da reticulação. Peneiramento doi feito depois da etapa de ultrassonicação. A porcentagem de microesferas pegajosas diminui de cerca de 3 % a próximo de cerca de 0 % com ultrassonicação. Figura 2C mostra microesferas antes da reticulação, inicialmente (painel da esquerda) e depois de 2 x 15 min, de ultrassonicação (painel da direita). A porcentagem de microesferas pegajosas diminui de cerca de 9,2 % a cerca de 1,6 % com ultrassonicação.
[0050] Figuras 3A-3C ilustram as porcentagens de microesferas pegajosas sujeitas a ultrassonicação antes (Figura 3A) e depois da reticulação da gelatina (Figura 3B). O peneiramento foi feito depois da etapa de ultrassonicação, e a porcentagem de volume na peneira é mostrada na figura.
[0051] Figuras 4A-4G ilustram os espectros 1 H unidimensional (1D) de giro de ângulo mágico de alta resolução (HR-MAS) de materiais de partida e microesferas. Figuras 4A-D ilustram o espectro 1H unidimensional de HR- MAS de trisacrila (4A), gelatina (4B), MBA (4C) e DEAF acrilamida (4D). Figura 4E-4G mostra a atribuição de núcleos 1H de trisacrila (4E), MBA (4F) e DEAF acrilamida (4G).
[0052] Figuras 5A-5J ilustram o espectro de 'HNMR unidimensional de microesferas feitas de materiais de diferentes fontes.
[0053] Figuras 5A-51D ilustram o espectro de NMR de amostras SAFC FMP 128 e PALL FMP 130. Figura 5A é a superposição de espectros de NMR que mostra uma similaridade entre os picos principais correspondentes (marcados como A, B e C) identificados a partir do espectro. Figuras 5B mostram o espectro de NMR na região de 9-5 ppm. Figura 5C mostra o espectro de NMR na região de 5-0 ppm. Figura 5D mostra o espectro de NMR na região de 3,4-1,2 ppm. Figuras 5E-5J ilustram o espectro de NMR das amostras SAFC FMP 128, PALL FMP 130, FM0903031-M1675 e FM090302 I -M 1654. Figura 5E mostra uma comparação do espectro de NMR. Figura 5F mostra o espectro de NMR de 2,6-1,5 ppm. Figura 5G mostra o espectro na região de 3,4-1,2 ppm. Figura 5H mostra o espectro de NMR na região de 9-5 ppm. Figura 51 mostra uma superposição dos espectros (Figura 51). Figura 5J mostra o espectro de NMR depois da deconvolução.
[0054] Figura 6 ilustra um diagrama esquemático e um processo de anel de alimentação ilustrativo.
[0055] Figura 7 ilustra um rotor de HR-MAS usado para a análise de NMR.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0056] As microesferas aqui fornecidas são, em certas modalidades, não tóxicas aos órgãos, tecidos e células, biocompatíveis e adesivas em várias células e tecidos no sítio de implantação por meio do crescimento celular que eis promovem. Além do mais, em certas modalidades, estas microesferas são não resorvíveis e não biodegradáveis e assim são estáveis, duráveis e manterão sua forma e posição geral uma vez implantados em um sítio desejado. Em modalidades adicionais, as microesferas também são estáveis em suspensão que permite que as microesferas ou outros substratos sólidos sejam formulados e armazenados em suspensão e injetados com diferentes líquidos.
A. Microesferas para embolização
[0057] Em um aspecto, é aqui fornecida uma microesfera compreendendo: (a) um copolímero compreendendo uma unidade de monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, uma unidade de monômero de dietilaminoetilacrilamida e uma unidade de monômero de N,N-metileno- bis-acrilamida, e (b) uma gelatina reticulada ou substituinte de gelatina. Em um outro aspecto, é aqui fornecida uma microesfera compreendendo (a) um copolímero preparado por copolimerização um monômero de N-tris- hidroximetil metilacrilamida, um monômero de dietilaminoetilacrilamida e um monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida, e (b) uma gelatina reticulada ou substituinte de gelatina. Em modalidades específicas, um, dois ou todos os três dos monômeros de N-tris-hiroximetil tetilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida e um N,N-metileno-bis-acrilamida (ou unidades de monômero) são monômeros ultra-puros (ou unidades de monômeros). Em certas modalidades, a microesfera apresenta em um espectro de 'HNMR, um primeiro pico (por exemplo, de cerca de 3,5 ppm a cerca de 4 ppm), um segundo pico (por exemplo, de cerca de 3 ppm to. cerca de 3,5 ppm), e um terceiro pico de cerca de 1 ppm a cerca de 1,5 ppm). Em modalidades específicas, a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico é de cerca de 0,50 a cerca de 0,65 e/ou a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico é de cerca de 0,55 a cerca de 0,75 (por exemplo, cerca de 0,61 a cerca de 0,75).
[0058] Em uma modalidade, a microesfera compreende: (a) um copolímero compreendendo uma unidade de monômero de N-tris- hidroximetil metilacrilamida, uma unidade de monômero de dietilaminoetilacrilamida e uma unidade de monômero de N,N-metileno-bis- acrilamida, e (b) gelatina reticulada; em que a microesfera apresenta em um espectro de 'HNMR, um primeiro pico de cerca de 3,5 ppm a cerca de 4 ppm, um segundo pico de cerca de 3, ppm a cerca de 3,5 ppm, e um terceiro pico de cerca de 1 ppm a cerca de 1,5 ppm; e em que (i) a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico é cerca de 0,50 a cerca de 0,65, (ii) a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico é cerca de 0,55 a cerca de 0,75 (por exemplo, cerca de 0,61 a cerca de 0,75), ou (iii) uma combinação de (i) e (ii). Em uma outra modalidade, a microesfera compreende (a) um copolímero preparado por copolimerização um monômero de N-tris- hidroximetil metilacrilamida, um monômero de dietilaminoetilacrilamida e um monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida, e (b) gelatina reticulada; em que o micrdesfera apresenta em espectro de ’HNMR, um primeiro pico de cerca de 3,5 ppm a cerca de 4 ppm, um segundo pico de cerca de 3 ppm a cerca de.3,5 ppm, e um terceiro pico de cerca de 1 ppm a cerca de 1,5 ppm; e em que (i) a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico é'cerca de 0,50 a cerca de 0,65, (ii), a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico é cerca de 0,55 a cerca de 0,75 (por exemplo, cerca de 0,61 a cerca de 0,75), ou (iii) uma combinação de (i) e (ii). Em certas modalidades, o primeiro pico é em cerca de 3,77 ppm, o segundo pico é em cerca de 3,2 ppm, o terceiro pico é em cerca de 1,3 ppm, ou uma combinação destes. Em outras modalidades, a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico é cerca de 0,574, ou em que a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico é cerca de 0,625. Em algumas modalidades, a microesfera é a 25 °C e/ou em um solvente deuterado quando o espectro de 'HNMR é registrado (por exemplo, a 400 MHz).
[0059] Em algumas modalidades, um ou mais dos monômeros (ou unidades de monômero) é um monômero ultra-puro (ou unidades de monômero). Em certas modalidades, o monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, o monômero de dietilaminoetilacrilamida e/ou o monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida são cada um monômeros ultra-puros. Em modalidades específicas, o monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida compreende menos que 9 % das impurezas e/ou o monômero de dietilaminoetilacrilamida compreende menos que 2 % das impurezas (por exemplo, da forma determinada por HPLC (ver, por exemplo, Exemplos 2 e 5) ou por um teste de bromo (ver, por exemplo, Exemplos 3 e 6). Em certas modalidades, monômero de o N-tris-hidroximetil metilacrilamida, o monômero de dietilaminoetilacrilamida e o monômero de N,N-metileno-bis- acrilamida são cada um monômeros ultra-puros. Em uma modalidade, o monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida é um monômero ultra-puro, enquanto que o monômero de dietilaminoetilacrilamida e monômero de N,N- metileno-bis-acrilamida não são monômeros ultra-puros. Em uma outra modalidade, o monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida e o monômero de dietilaminoetilacrilamida são cada um monômeros ultra-puros, enquanto que o monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida não é um monômero ultra-puro. Em algumas modalidades, o monômero de N-tris- hidroximetil metilacrilamida e o monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida são cada um monômeros ultra-puros, enquanto que o monômero de dietilaminoetilacrilamida não é um monômero ultra-puro. Em uma modalidade, o monômero de dietilaminoetilacrilamida é um monômero ultra- puro, enquanto que o monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida e o monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida não são monômeros ultra-puros. Em uma outra modalidade, o monômero de dietilaminoetilacrilamida e o monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida são cada um monômeros ultra- puros, enquanto que o N-tris-hidroximetil metilacrilamida não é um monômero ultra-puro. Em uma modalidade, o monômero de N,N-metileno- bis-acrilamida é um monômero ultra-puro, enquanto que o monômero de N- tris-hidroximetil metilacrilamida e o monômero de dietilaminoetilacrilamida não são monômeros ultra-puros. Em uma outra modalidade, o monômero de dietilaminoetilacrilamida é um monômero ultra-puro enquanto que o monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida não é. Ainda em uma outra modalidade, tanto o monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida quanto o de dietilaminoetilacrilamidas são monômeros ultra-puros. Em modalidades adicionais, a hidrofobicidade ou caráter iônico destes monômeros pode ser modificada conforme necessário, introduzindo, por exemplo, sem limitações, cadeias de hidrocarboneto e/ou grupos químicos ionizáveis hidrofílicos, que podem, por exemplo, ser usados para facilitar as características de carga de medicamento da microesfera (por exemplo, interações iônicas entre o copolímero e o medicamento). Por exemplo, em certas modalidades, o monômero ou polímero é modificado para adicionar grupos funcionais ácidos (por exemplo, adição de mistura de monômeros de acrilato de sódio ou sulfonato de vinila), que pode, por exemplo interagir com funções amina em um dado medicamento (por exemplo, doxorubicina ou outras antraciclinas). Em uma modalidade específica, monômero é modificado com grupos sulfonato. Em algumas modalidades, o monômero tem um teor de umidade de cerca de 5 % a cerca de 0 %, tais como 5 % ou menos, 4 % ou menos, 3 % ou menos, 2 % ou menos que ou 1 % ou menos. O teor de umidade pode ser determinado usando métodos conhecidos na tecnologia, tais como análise de NMR.
[0060] Em algumas modalidades, a gelatina é reticulada, por exemplo, a ou no copolímero da microesfera. Em outras modalidades, a gelatina não é reticulada. A gelatina da forma aqui usada pode ser de qualquer fonte. Fontes exemplares incluem, mas sem limitações, colágenos extraídos de ossos, tecidos conectivos, órgãos e alguns intestinos de gado, porcos e cavalos. Em uma modalidade específica, a gelatina é uma gelatina de porco. Em modalidades específicas, a gelatina é gelatina grau farmacêutico e/ou alimentício, que pode ser obtida de fornecedores comerciais, tais como PB Leiner (Vilvoorde, Bélgica).
[0061] Em um segundo aspecto, são aqui fornecidas microesferas preparadas por um processo compreendendo: (a) preparar uma solução aquosa compreendendo (i) um monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, (ii) um monômero de dietilaminoetilacrilamida, (iii) um N,N-metileno-bis- acrilamida monômero; e (iv) gelatina, em que o monômero de N-tris- hidroximetil metilacrilamida, o monômero de dietilaminoetilacrilamida e/ou o monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida é um monômero ultra-puro; (b) adicionar a solução aquosa a uma fase orgânica líquida (por exemplo, um óleo, tais como um óleo mineral, tais como um óleo de parafina) que tem baixa miscibilidade em água, antes ou durante a agitação; produzindo assim microesferas compreendendo um copolímero compreendendo unidades de monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida e de N,N-metileno-bis-acrilamida; (c) opcionalmente submeter as microesferas a sonicação (por exemplo, ultrasonicação); e (d) reticular a gelatina. Modalidades do processo são descritas na seção C a seguir.
[0062] Microesferas aqui fornecidas podem ter qualquer forma. Em modalidades específicas, estas microesferas são substancialmente de forma esférica. Em certas modalidades, as microesferas são de forma uniforme.
[0063] Em certas modalidades, as microesferas fornecidas são calibradas a uma certa faixa de tamanho. Tal calibração pode ser alcançada usando métodos conhecidos na tecnologia, tais como por uma ou mais rodadas de peneiramento usando uma peneira de malha apropriadamente classificada.
[0064] Em certas modalidades, as microesferas aqui fornecidas têm um diâmetro de cerca de 1 pm a 2000 pm, tais como de cerca de 10 pm a 1000 pm, de cerca de 40 pm a cerca de 120 pm, de cerca de 100 pm a cerca de 300 pm, de cerca de 300 pm a cerca de 500 pm, de cerca de 500 pm a cerca de 700 pm, de cerca de 700 pm a cerca de 900 pm, ou de cerca de 900 pm a cerca de 1200 pm. Estes diâmetros podem permitir que as microesferas sejam distribuídas para alvejar vasos sanguíneos, tecidos ou órgãos in vivo por meio de cateter, agulha (por exemplo, uma agulha calibre 18 ou menor), tubo ou similares por vários meios incluindo vascular, intradutal, transesofageal, subcutânea, subdérmica, submucosa, transbronquial, ou intersticial. Em certas modalidades, as microesferas podem ser eliminadas por meio de macrófagos ou outros elementos do sistema imune ou do sistema linfático.
[0065] Em certas modalidades, as microesferas têm um tamanho uniforme. Em certas modalidades as microesferas têm um tamanho uniforme em que a diferença no diâmetro entre microesferas individuais é de cerca de 0 pm a cerca de 100 pm, de cerca de 0 pm a cerca de 50 pm, ou de cerca de 0 pm a cerca de 25 pm, tais como 100 pm ou menos, cerca de 50 pm ou menos, cerca de 25 jam ou menos, cerca de 10 jam ou menos que ou cerca de 5 jam ou menos.
[0066] Em certas modalidades, as microesferas são em uma população em que mais que 68 % têm um diâmetro de ± 20 % do diâmetro médio, ± 10 % do diâmetro médio, ± 15 % do diâmetro médio, ± 10 % do diâmetro médio, ± 9 % do diâmetro médio, ± 8 % do diâmetro médio, ± 7 % do diâmetro médio, ± 6 % do diâmetro médio, ± 5 % do diâmetro médio, ± 4 % do diâmetro médio, t 3 % do diâmetro médio, ± 2 % do diâmetro médio, ou ± 1 % do diâmetro médio, ou qualquer faixa deste. Em uma modalidade, as microesferas são em uma população em que mais que 70 % têm um diâmetro de ± 20 % do diâmetro médio, ± 10 % do diâmetro médio, ± 15 % do diâmetro médio, ± 10 % do diâmetro médio, ± 9 % do diâmetro médio, ± 8 % do diâmetro médio, ± 7 % do diâmetro médio, ± 6 % do diâmetro médio, ± 5 % do diâmetro médio, ± 4 % do diâmetro médio, ± 3 % do diâmetro médio, ± 2 % do diâmetro médio, ou ± 1 % do diâmetro médio, ou qualquer faixa deste. Em uma modalidade, as microesferas são em uma população, em que mais que 75 % têm um diâmetro de 20 % do diâmetro médio, ± 10 % do diâmetro médio, ± 15 % do diâmetro médio, ± 10 % do diâmetro médio, ± 9 % do diâmetro médio, ± 8 % do diâmetro médio, ± 7 % do diâmetro médio, ± 6 % do diâmetro médio, 15 % do diâmetro médio, ± 4 % do diâmetro médio, ± 3 % do diâmetro médio, ± 2 % do diâmetro médio, ou ± 1 % do diâmetro médio, ou qualquer faixa deste. Em um modalidade, as microesferas são em uma população em que mais que 80 % têm um diâmetro de ± 20 % do diâmetro médio, ± 10 % do diâmetro médio, ± 15 % do diâmetro médio, ±10 % do diâmetro médio, ± 9 % do diâmetro médio, ± 8 % do diâmetro médio, ± 7 % do diâmetro médio, ± 6 % do diâmetro médio, ± 5 % do diâmetro médio, ± 4 % do diâmetro médio, ± 3 % do diâmetro médio, ± 2 % do diâmetro médio, ou ± 1 % do diâmetro médio, ou qualquer faixa deste. Em uma modalidade, as microesferas são em uma população em que mais que 85 % têm.um diâmetro de ± 20 % do diâmetro médio, 10 % do diâmetro médio, 15 % do diâmetro médio, ± 10 % do diâmetro médio, ± 9 % do diâmetro médio, ± 8 % do diâmetro médio, ± 7 % do diâmetro médio, ± 6 % do diâmetro médio, ± 5 % do diâmetro médio, ± 4 % do diâmetro médio, ± 3 % do diâmetro médio, ± 2 % do diâmetro médio, ou ± 1 % do diâmetro médio, ou qualquer faixa deste. Em uma modalidade, as microesferas são em uma população em que mais que 90 % têm um diâmetro de ± 20 % do diâmetro médio, ± 10 % do diâmetro médio, ± 15 % do diâmetro médio, ± 10 % do diâmetro médio, ± 9 % do diâmetro médio, ± 8 % do diâmetro médio, ± 7 % do diâmetro médio, ± 6 % do diâmetro médio, 5 % do diâmetro médio, ± 4 % do diâmetro médio, ± 3 % do diâmetro médio, ± 2 % do diâmetro médio, ou ± 1 % do diâmetro médio, ou qualquer faixa deste. Em uma modalidade, as microesferas são em uma população em que mais que 95 % têm um diâmetro de ± 20 % do diâmetro médio, ± 10 % do diâmetro médio, ± 15 % do diâmetro médio, ± 10 % do diâmetro médio, ± 9 % do diâmetro médio, ± 8 % do diâmetro médio, ± 7 % do diâmetro médio, ± 6 % do diâmetro médio, ± 5 % do diâmetro médio, ± 4 % do diâmetro médio, ± 3 % do diâmetro médio, ± 2 % do diâmetro médio, ou ± 1 % do diâmetro médio, ou qualquer faixa deste.
[0067] Em algumas modalidades, menos que 1 %, menos que 0,9 %, menos que 0,8 %, menos que 0,7 %, menos que 0,6 %, menos que 0,5 %, menos que 0,4 %, menos que 0,3 % ou menos que 0,2 %, menos que 0,1 % ou 0 % (ou uma faixa desta) das microesferas em uma população são fora de uma dada faixa extendida (por exemplo, ±50 pm ±100 pm, ±150 pm, ±200 pm, ±250 pm ou ±300 pm) das microesferas. Como uma ilustração exemplar, isef o diâmetro de uma população das microesferas calibradas for de 500 pm a 700 pm (a faixa), então a faixa extendida pode ser, por exemplo, ±100 pm, por exemplo, em que 99 % das microesferas são de uma faixa de tamanho de 400 pm a 800 pm, e 1 % das microesferas, são de um tamanho fora da faixa extendida. Em uma outra modalidade exemplar, a faixa é 500 pm a 700 pm, com a faixa nominal sendo 600 jam, em que 80 % da população é ±100 pm da faixa nominal (isto é, uma faixa extendida de 500 pm a 700 pm), 99 % da população é ± 200 pm da faixa nominal (isto é, 400 pm a 800 pm), com 0,5 % a 1 % da população sendo maior que 800 pm e o retante 0 % a 0,5 % sendo da população menro que 400 pm (para um total de 100 %). Em certas modalidades, a faixa nominal é de cerca de 50 pm a 2000 pm, tais como 80 pm, 100 pm, 200 pm, 300 pm, 400 pm, 500 pm, 600 pm, 700 pm, 800 pm, 900 pm, 1000 pm, 1100 pm, 1150 pm, 1200 pm, 1300 pm, 1400 pm, 1500 pm, 1600 pm, 1700 pm; 1800 pm, 1900 pm, 2000 pm ou qualquer faixa deste.
[0068] As microesferas são estáveis em suspensão, que permite que as microesferas sejam formuladas e armazenadas em suspensão e injetadas com diferentes líquidos. Mais especificamente, a natureza hidrofílica das microesferas permite colocá-las em suspensão e, em particular, na forma de soluções injetáveis estéreis e não pirogênicas ou sem pirogênio, evitando ao mesmo tempo a formação de agregados ou adesão nas paredes de recipientes de armazenamento e dispositivos de implantação, tais como cateteres, seringas, agulhas, e similares.
[0069] Microesferas aqui fornecidas podem ser implantadas, tais como por injeção, em vários locais do corpo. O material polimérico para uso nas composições e métodos é aqui fornecido não tóxico aos tecidos e células e é biocompatível, isto é, geralmente não causa inflamação. As microesferas podem manter sua forma e posição gerais, uma vez implantadas em um local desejado. As microesferas aqui fornecidas são compressíveis e, em modalidades específicas, podem ser injetadas por meio de agulhas de calibre 18 ou menores.
[0070] Em certas modalidades, as microesferas são injetáveis através de uma agulha de calibre 18 ou menor e não são capazes de ser eliminadas, ou têm menor eliminação, pelo sistema imune ou linfático. Em algumas modalidades, os polímeros são revestidos com agentes que promovem adesão celular. Em certas modalidades, as microesferas compreendem um promotor de adesão celular ealém da gelatina ou gelatina, substituinte. Vários tipos de promotores de adesão celular bem conhecidos na tecnologia podem ser usados. Em algumas modalidades, o promotor de adesão celular é selecionado de colágeno, gelatina, carboximetil (CM) dextrana, DEAE dextrana, glucosaminoglicanos, fibronectina, lectinas, policações (tais como polilisina, quitosana), qualquer outro agente celular de adesão biológica natural ou sintética ou quaisquer combinações destes. Em certas modalidades, a estabilidade das microesferas é aumentada reticulando o agente de adesão. No caso de gelatina, por exemplo, o agente de reticulação pode ser escolhido de agentes químicos difuncionais que reagem nas aminas de gelatina (por exemplo, glutaraldeído, formaldeído, glioxal, e similares). Em algumas modalidades, o promotor de adesão celular está presente na microesfera, ou outro substrato sólido, em uma quantidade de cerca de 0,1 g/mL a 1 g/mL das microesferas assentadas.
[0071] Em certas modalidades, as microesferas são visíveis na luz e no corpo, por exemplo, ainda compreendendo um agente de marcação. Em algumas modalidades, microesferas podem ser marcadas depois de sua síntese. Isto pode ser feito, por exemplo, enxertando derivados de marcador fluorescente (incluindo, por exemplo, isotiocianato de fluoresceína (FITC), isotiocianato de rodamina (RITC) e similares). Em algumas modalidades, um monômero detectável pode ser obtido por acoplamento químico do monômero com um marcador, qeu pode ser um corante químico, tais como Cibacron Blue ou Procion Red HE-3B, tomando possível uma vizualização direta das microesferas, um agente de formação de imagem de ressonância magnética (érbio, gadolínio ou magnetita); um agente de contraste, tais como sais de bário ou iodo, incluindo, por exemplo, ácido (acrilamido-3-propionamido)-3- triiodo-2,4,6-benzóico. No caso de sais de bário ou magnetita, eles podem ser diretamente introduzidos na forma de pó na solução de monômero inicial. Em uma certa modalidade, o agente de contraste é um agente de contraste radiopaco, tais como um agente de contraste não iônico. Em algumas modalidades, o agente de contraste é misturado com a microesfera antes, durante e/ou depois da injeção no paciente. Em uma modalidade específica, o paciente é administrado com uma composição compreendendo um agente de contraste (por exemplo, um agente de contraste não iônico) e microesferas aqui fornecidas.
[0072] Promotores de adesão celular ou agentes de marcação podem ser introduzidos nas microesferas por procedimentos de acoplamento químico bem conhecidos em cromatografia de afinidade. A introdução também pode ser realizada por difusão na rede de gel que constitui a microesfera e então aprisionando as moléculas difundidas no lugar por precipitação ou reticulação química.
[0073] Em algumas modalidades, células vivas (por exemplo, células tronco) são anexadas às microesferas que formam camadas das células nela ou que ligam com tecidos circundantes e podem melhorar a estabilidade a longo prazo das contas.
1. monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida
[0074] N-tris-hidroximetil metilacrilamida também pode ser conhecida como trisacrila; N-[l,3-diidróxi-2-(hidroximetil)propan-2-il]prop- 2-enamida; tris-acrilamida; N-[tris(hidroximetil)metil]acrilamida; N- acriloiltris(hidroximetil)aminometano; ou N-acriloil- tris(hidroximetil)aminometano. Em certas modalidades, N-tris-hidroximetil metilacrilamida é definida como tendo um número de registro CAS 13880-05- 2, uma fórmula molecular de C7H13NO4, um peso molecular de cerca de 175,2 gramas por mol, e uma estrutura de
Figure img0001
[0075] Monômerosde N-tris-hidroximetil metilacrilamida são comercialmente disponíveis (por exemplo, PALL Biosepra, France ou Sigma Aldrich Fine Chemicals (SAFC), número do produto 78561) ou podem ser sintetizados (ver, por exemplo, Exemplo 4). Em certas modalidades, o monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida é sintetizado de acordo com o seguinte esquema:
Figure img0002
[0076] Em certas modalidades, o monômero de N-tris-hidroximetil metacrilamida é um monômero ultra puro. Em modalidades específicas, o monômero de N-tris-hidroximetil metacrilamida compreende de 0% a 9% deimpurezas, i.e., subtâncias outras que N-tris-hidroximetil metilacrilamida tais como excesso de materiais de inicio ou derivados do mesmo (e.g., cloreto de acriloíla ou 2-amino-2-(hidroximetil)propano-l,3-diol), pelo sais de produto ou inorgânicos, por exemplo, como determinado pelo teste de bromo (e.g., como fornecido no Exemplo 6). Em algumas modalidades, o monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida compreende de 25 a 0% de impurezas, tal como de 25% a 20%, de 25% a 15%, de 25% a 10%, de 25% a 5%, de 25% a 1%, de 25% a 0%, de 20% a 15%, de 20% a 10%, de 20% a 5%, de 20% a 1%, de 20% a 0%, de 15% a 10%, de 15% a 5%, de 15% a 1%, de 15% a 0%, de 10% a 5%, de 10% a 1%, de 10% a 0%, de 5% a 1%, de 5% a 0% (e.g., como determinado pelo HPLC, e.g., como fornecido no Exemplo 5). Em outras modalidades, o monômero de N-tris-hidroximetil metacrilamida compreende de 25% a 0% de impurezas, tal como de 25% a 20%, de 25% a 15%, de 25% a 10%, de 25% a 5%, de 25% a 1%, de 25% a 0%, de 20% a 15%, de 20% a 10%, de 20% a 5%, de 20% a 1%, de 20% a 0%, de 15% a 10%, de 15% a 5%, de 15% a 1%, de 15% a 0%, de 10% a 5%, de 10% a 1%, de 10% a 0%, de 5% a 1%, de 5% a 0% (e.g., como determinado pelo HPLC, e.g., como fornecido no Exemplo 5). Em algumas modalidades, o o monômero de N-tris-hidroximetil metacrilamida compreende menos de 25%, menos de 24%, menos de 23%, menos de 22%, menos de 21%, menos de 20%, menos de 19%, menos de 18%, menos de 17%, menos de 16%, menos de 15%, menos de 14%, menos de 13%, menos de 12%, menos de 11%, menos de 10%, menos de 9%, menos de 8%, menos de 7%, menos de 6%, menos de 5%, menos de 4%, menos de 3%, menos de 2,75%, menos de 2,5%, menos de 2,25%, menos de 2%, menos de 1,75%, menos de 1,5%, menos de 1,25%, menos de 1%, menos de 0,25%, menos de 0,5%, menos de 0,25% ou 0% de impurezas ou qualquer faixa da mesma (e.g. como determinado pelo teste de bromo, e.g., como fornecido no Exemplo 6). Em outras modalidades, o monômero de N-tris-hidroximetil metacrilamida compreende menos que 25%, menos que 24%, menos de 23%, menos de 22%, menos de 21%, menos de 20%, menos de 19%, menos de 18%, menos de 17%, menos de 16%, menos de 15%, menos de 14%, menos de 13%, menos de 12%, menos de 11%, menos de 10%, menos de 9%, menos de 8%, menos de 7%, menos de 6%, menos de 5%, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2,75 %, menos que 2,5 %, menos que 2,25 %, menos que 2 %, menos que 1,75 %, menos que 1,5 %, menos que 1,25 %, menos que 1 %, menos que 0,25 %, menos que 0,5 %, menos que 0,25 % ou 0 % das impurezas ou qualquer faixa deste (por exemplo, da forma determinada por HPLC, por exemplo, conforme fornecido no exemplo 5). Em modalidades específicas, o monômero de N-tris- hidroximetil metilacrilamida compreende menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2 %, menos que 1 %, ou 0 % das impurezas, ou qualquer faixa deste (por exemplo, da forma determinada pelo teste de bromo, por exemplo, conforme fornecido no exemplo 6). Em outras modalidades, o monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida compreende menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2 %, menos que 1 %, ou 0 % das impurezas, ou qualquer faixa deste (por exemplo, da forma determinada por HPLC, por exemplo, conforme fornecido no exemplo 5).
2. Monômero de dietilaminoetilacrilamida
[0077] Dietilaminoetilacrilamida também pode ser conhecida como DEAE, DEAE acrilamida, N-((2-dietilamino)etil)acrilamida; N-(2- dietilaminoetil)prop-2-enamida; N-((2-dietilamino)etil)acrilamida; N-(2- (dietilamino)etil) acrilamida; ou N-(2-(dietilamino)etil)-2-propenamida.
[0078] Em certas modalidades, dietilaminoetilacrilamida é definida como tendo uma fórmula molecular de C9H18N2O, um peso molecular de cerca de 170,3 gramas por mol, e uma estrutura de
Figure img0003
[0079] Monômeros de dietilaminoetilacrilamida são comercialmente disponíveis (por exemplo, PALL Biosepra, France ou SAFC) ou podem ser sintetizados (ver, por exemplo, Exemplo 1). Em certas modalidades, o monômero de dietilaminoetilacrilamida é sintetizado de acordo com o seguinte esquema:
Figure img0004
[0080] Em certas modalidades, o monômero de dietilaminoetilacrilamida é um monômero ultra-puro. Em modalidades específicas, o monômero ultra-puro de dietilaminoetilacrilamida compreende de 0 % a 2 % das impurezas, isto é, substâncias a não ser dietilaminoetilacrilamida, tais como materiais de partida em excesso ou derivados destes (por exemplo, cloreto de acriloíla, N,N,N',N'- tetrametiletilenodiamina ou N,N-dietiletilenodiamina), subprodutos ou sais inorgânicos (da forma determinada pelo teste de bromo, por exemplo, conforme fornecido no exemplo 3). Em algumas modalidades, o monômero de dietilaminoetilacrilamida compreende de 20 % a 0 % impurezas, tais como de 20 % a 15 %, de 20 % a 10 %, de 20 % a 5 %, de 20 % a 1 %, de 20 % a 0 %, de 15 % a 10 %; from 15 % a 5 %, de 15 %, to 1 %, de 15 % a 0 %, de 10 % a 5 %, de 10 % a 1 %, de 10 % a 0 %, de 5 % a 1 %, de 5 % a 0 % (por exemplo, da forma determinada pelo teste de bromo, por exemplo, conforme fornecido no exemplo 3). Em outras modalidades, o monômero de dietilaminoetilacrilamida compreende de 20 % a 0 % impurezas, tais como from 20 % a 15 %, de 20 % a 10 %, de 20 % a 5 %, de 20 % a 1 %, de 20 % a 0 %, de 15 % a 10 %, de 15 % a 5 %, de 15 % a 1 %, de 15 % a 0 %, de 10 % a 5 %, de 10 % a 1 %, de 10 % a 0 %, de 5 % a I %, de 5 % a 0 % (por exemplo, da forma determinada por HPLC, por exemplo, conforme fornecido no exemplo 2). Em algumas modalidades, o monômero de dietilaminoetilacrilamida compreende menos que 20 %, menos que 19 %, menos que 18 %, menos que 17 %, menos que 16 %, menos que 15 %, menos que 14 %, menos que 13 %, menos que 12 %, menos que 11 %, menos que 10 %, menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2,75 %, menos que 2,5 %, menos que 2,25 %, menos que 2 %, menos que 1,75 %, menos que 1,5 %, menos que 1,25 %, menos que 1 %, menos que 0,25 %, menos que 0,5 %, menos que 0,25 % ou 0 % das impurezas ou qualquer faixa deste (por exemplo, da forma determinada pelo teste de bromo, por exemplo, conforme fornecido no exemplo 3). Em outras modalidades, o monômero de dietilaminoetilacrilamida compreende menos que 20 %, menos que 19 %, menos que 18 %, menos que 17 %, menos que 16 %, menos que 15 %, menos que 14 %, menos que 13 %, menos que 12 %, menos que 11 %, menos que 10 %, menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6; %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2,75 %, menos que 2,5 %, menos que 2,25 %, menos que 2 %, menos que 1,75 %, menos que 1,5 %, menos que 1,25 %, menos que 1 %, menos que 0,25 %, menos que 0,5 %, menos que 0,25 % ou 0 % das impurezas ou qualquer faixa deste (por exemplo, da forma determinada por HPLC, por exemplo, conforme fornecido no exemplo 2). Em modalidades específicas, o monômero DEAE compreende menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2,75 %, menos que 2,5 %, menos que 2,25 %, menos que 2 %, menos que 1,75 %, menos que 1,5 %, menos que 1,25 %, menos que 1 %, menos que 0,25 %, menos que 0,5 %, menos que 0,25 % ou 0 % das impurezas ou qualquer faixa deste (por exemplo, da forma determinada pelo teste de bromo, por exemplo, conforme fornecido no exemplo 3). Em outras modalidades específicas, o monômero DEAF compreende menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2.75 %, menos que 2,5 %, menos que 2,25 %, menos que 2 %, menos que 1,75 %, menos que 1,5 %, menos que 1,25 %, menos que 1 %, menos que 0,25 %, menos que 0,5 %, menos que 0,25 % ou 0 % das impurezas ou qualquer faixa deste (por exemplo, da forma determinada por HPLC, por exemplo, conforme fornecido no exemplo 2). O monômero DEAF pode ser fornecido em uma forma líquida ou sólida. Em certas modalidades, o monômero DEAE é fornecido em uma forma de amina líquida. Em modalidades específicas, o monômero DEAF não é fornecido em uma forma de sal em pó (pó).
3. monômero ãe NN-metileno-bis-acrilamida
[0081] N,N-metileno-his-acrilamida também pode ser conhecido como MBA, N-[(prop-2-enoilamino)metillprop-2-enamida; metilenodiacrilamida; metilenobisacrilanilida; N,N'-metilpriediacrilamida; N,N'-metilenobisacrilamida; ou N,N'-metilidenebisacrilamida.
[0082] Em certas modalidades, N,N-metileno-bis-acrilamida é definido como tendo uma fórmula molecular de C7H10N2O2, um peso molecular de cerca de 154,2 gramas por mol, e uma estrutura de
Figure img0005
[0083] Monômero de N,N-metileno-bis-acrilamidas são comercialmente disponíveis (por exemplo, PALL Biosepra, France ou SAFC) ou podem ser sintetizados. Em certas modalidades, o monômero de N,Nmetileno-bis-acrilamida é sintetizado de acordo com o seguinte esquema:
Figure img0006
[0084] Em certas modalidades, o monômero de N,N-metileno-bis- acrilamida é um monômero ultra-puro. Em modalidades específicas, o monômero de N,N-trisetileno-bis-acrilamida ultra-puro compreende de 0 % a 9 % das impurezas, isto é, substâncias a não ser monômero de N,N- metilenobis-acrilamida, tais como materiais de partida em excesso ou, derivados destes, subprodutos ou sais inorgânicos (por exemplo, da forma determinada pelo teste de bromo). Em outras modalidades, o monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida ultra-puro compreende de 0 % a 9 % das impurezas, isto é, substâncias a não ser monômero de N,N-metileno-bis- acrilamida, tais como materiais de partida em excesso ou derivados destes, subprodutos ou sais inorgânicos (por exemplo, da forma determinada por HPLC). Em algumas modalidades, o monômero de N,N-metileno-bis- acrilamida compreende menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2 %, menos que 1 %, menos que 0,5 %.ou 0 % das impurezas, ou qualquer faixa deste (por exemplo, conforme determinado pelo treste de bromo). Em algumas modalidades, o monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida compreende menos que 9 %, menos que 8 %, menos que 7 %, menos que 6 %, menos que 5 %, menos que 4 %, menos que 3 %, menos que 2 %, menos que 1 %, menos que 0,5 % ou 0 % das impurezas, ou qualquer faixa deste (por exemplo, da forma determinada por HPLC).
[0085] O pureza de qualquer um dos monômeros aqui fornecidos pode ser estimada por uma variedade de métodos conhecidos na tecnologia. Por exemplo, o teor das impurezas pode ser determinado pelo teor das ligações duplas nos monômeros, por exemplo, o teste de bromo (ver, por exemplo, Exemplos 3 e 6) O teste de bromo pode ser usdo para determinar se os componente contêm alguma ligação dupla C=C, ou o grupo funcional alqueno, em virtude de os alquenos poderem reagir printamente com bromo para produzir mudança de cor. Reação de bromação exemplar;
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[0086] O bromo reage com a ligação dupla e o consumo de bromo determina a quantidade de ligação dupla presente, que então é usado para avaliar a pureza, ou a real presença de um monômero (por exemplo, trisacrila). O desvio padrão pode ser pelo menos 3 % usando esta reação. A quantidade de ligações duplas presentes pode corresponder à pureza do monômero presente, em virtude de subprodutos não estarem presentes em grandes quantidades. Subprodutos exemplares são:
Figure img0008
[0087] As impurezas presentes nos monômeros também podem ser detectadas por outros métodos com uma sensibilidade de detecção superior (por exemplo, cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC), cromatografia gasosa (GC) ou ressonância magnética nuclear (NMR)). Em um exemplo ilustrativo uma análise de HPLC pode ser realizada para estimar a pureza de monômeros de N-tris-hidroximetil metilacrilamida correndo as amostras do monômero em um Waters Atlantic C, uma coluna (por exemplo, 5 pm, 4,6 x 250 mm) e detectando a absorção em um comprimento de onda específico, por exemplo, em cerca de 230 nm (ver, por exemplo, Exemplos 2 e 5). A pureza dos monômeros testados pode ser determinada, por exemplo, comparando a curva de HPLC das amostras testadas com a curva de HPLC de um monômero de controle com pureza conhecida.
[0088] Em certas modalidades, o monômero DEAE compreende menos que 2,5 %, menos que 2 %, menos que 1,5 %, ou menos que 1 % de cada um ou ambas das seguintes impurezas (por exemplo, conforme determinado por HPLC), tanto sozinho quanto em combinação:
[0089] Em algumas modalidades, a microesfera compreende cerca de 1 % a cerca de 95 % em peso de um monômero de N-tris- hidroximetiletilacrilamida (por exemplo, um monômero ultra-puro). Em certas modalidades, a microesfera compreende um monômero de N-tris- hidroximetil metilacrilamida (por exemplo, um monômero ultra-puro) em uma quantidade selecionada do grupo que consiste em cerca de 1 % em peso, cerca de 5 % em peso, cerca de 10 % em peso, cerca de 1 5 % em peso, cerca de 20 % em peso, cerca de 25 % em peso, cerca de 30 % em peso, cerca de 35 % em peso, cerca de 40 % em peso, cerca de 45 % em peso, cerca de 50 % em peso, cerca de 55 % em peso, cerca de 60 % em peso, cerca de 65 %..by weight, cerca de 70 % em peso, cerca de 75 % em peso, cerca de 80 % em peso, cerca de 85 % em peso, cerca de 90 % em peso, e cerca de 95 % em peso (ou nesta faixa).
[0090] Em certas modalidades, a microesfera compreende cerca de 1 % a cerca de 95 % em peso de um monômero de dietilaminoetilacrilamida (por exemplo, um monômero ultra-puro). Em certas modalidades, a microesfera compreende um monômero de dietilaminoetilacrilamida (por exemplo, um monômero ultra-puro) em uma quantidade selecionada do grupo que consiste em cerca de 1 % em peso, cerca de 5 % em peso, cerca de 10 % em peso, cerca de 15 % em peso, cerca de 20 % em peso, cerca de 25 % em peso, cerca de 30 % em peso, cerca de 35 % em peso, cerca de 40 % em peso, cerca de 45 % em peso, cerca de 50 % em peso, cerca de 55 % em peso, cerca de 60 % em peso, cerca de 6.5 % em peso, cerca de 70 % em peso, cerca de 75 % em peso, cerca de 80 % em peso, cerca de 85 % em peso, cerca de 90 % em peso, e cerca de 95 % em peso (ou nesta faixa).
[0091] Em outras modalidades, a microesfera compreende cerca de 1 % a cerca de 95 % em peso de um monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida (por exemplo, um monômero ultra-puro). Em certas modalidades, a microesfera compreende um monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida (por exemplo, um monômero ultra-puro) em uma quantidade selecionada do grupo que consiste em cerca de 1 % em peso, cerca de 5 % em peso, cerca de 10 % em peso, cerca de 15 % em peso, cerca de 20 % em peso, cerca de 25 % em peso, cerca de 30 % em peso, cerca de 35 % em peso, cerca de 40 % em peso, cerca de 45 % em peso, cerca de 50 % em peso, cerca de 55 % em peso, cerca de 60 % em peso, cerca de 65 % em peso, cerca de 70 % em peso, cerca de 75 % em peso, cerca de 80 % em peso, cerca de 85 % em peso, cerca de 90 % em peso, e cerca de 95 % em peso (ou nesta faixa).
[0092] Em uma modalidade, a microesfera compreende de cerca de 58 % a cerca de 66 % em peso e um monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida de cerca de 22 % a cerca de 26 % em peso de um monômero de dietilaminoetilacrilamida e cerca de 6 % a cerca de 7 % em peso de um monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida, e cerca de 0 % a cerca de 13 % em peso de gelatina ou substituinte de gelatina, tal como o total é 100 %.
[0093] As microesferas aqui fornecidas podem, em certas modalidades, compreender qualquer combinação das porcentagenss em peso dos monômeros listados anteriormente (por exemplo, um ou mais monômeros ultra-puros).
[0094] Em certas modalidades, microesferas aqui fornecidas preparadas de um ou mais dos monômeros de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida e/ou N,N-metileno-bis-acrilamida ultra-puros aqui fornecidos ou compreendendo um ou mais das unidades de monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida e/ou N,N-metileno-bis-acrilamida ultra pura aqui fornecidas (por exemplo, usando um método aqui fornecido) podem resultar na redução ou em um de mais efeitos colaterais em um paciente depois da injeção comparado à mesma microesfera preparada sem um ou mais monômeros ultra-puros. Sem ficar preso à teoria, os menores efeitos colaterais podem ser o resultaro da menor quantidade das impurezas (por exemplo, um subproduto da reação, tais como etanol ou ácido acrílico, monômeros não reagidos e/ou inibidores) nas microesferas preparadas.
[0095] Em outras modalidades, microesferas aqui fornecidas preparadas de um ou mais dos monômeros de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida e/ou N,N-metileno-bis-acrilamida ultra-puros aqui fornecidos ou compreendendo um ou mais das unidades de monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida e/ou N,N-metileno-bis-acrilamida ultra-puras aqui fornecidas (por exemplo, usando um método aqui fornecido) podem resultar em um aumento na eficiência de polimerização (por exemplo, em que maos do monômero é incorporado no polímero e/ou melhor eficiência de reticulação) comparado à mesma microesfera preparada sem um ou mais monômeros ultra-puros.
[0096] Em uma outra modalidade, microesferas aqui fornecidas preparadas de um ou mais dos monômeros de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida e/ou N,N-metileno-bis-acrilamida ultra-puros aqui fornecidos ou compreendendo um ou mais das unidades de monômero ultra-puras de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida e/ou N,N-metileno-bis-acrilamida aqui fornecidas (por exemplo, usando um método aqui fornecido) pode resultar em um aumento no ponto de gel comparado à mesma microesfera preparada sem um ou mais monômeros ultra-puros. Maiores pontos de gel podem resultar em uma reação de polimerização mais rápida, que pode ainda levar a uma diminuição no número das microesferas agregadas em uma população. Métodos para estimar o ponto de gel nas reações de polimerização são conhecidos na tecnologia (ver, por exemplo, Nita et al. (2007) Rheol. Acta 46, 595-600).
[0097] Ainda em outras modalidades, microesferas aqui fornecidas preparadas de um ou mais dos monômeros de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida e/ou N,N-metileno-bis-acrilamidas ultra-puros aqui fornecidos ou compreendendo um ou mais das unidades de monômeros ultra-puras de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida e/ou N,N-metileno-bis-acrilamida aqui fornecidas (por exemplo, usando um método aqui fornecido) pode resultar em uma melhora no processo de fabricação geral das microesferas, que pode levar a uma melhora no rendimento e/ou qualidade geral das microesferas (por exemplo, menos microesferas quebradas e/ou agregadas), um produto mais consistente, melhor uniformidade de tamanho, distribuição de tamanho mais estreita, melhor uniformidade na forma, ou qualquer combinação destes, as comparado à mesma microesfera preparada sem um ou mais monômeros ultra-puros.
4. Análise de NMR da microesfera
[0098] Em certas modalidades, a microesfera aqui fornecida, quando analisada por espectroscopia de NMR (ver, por exemplo, Exemplo 14), apresenta um primeiro pico (por exemplo, de cerca de 3,5 ppm a cerca de 4.0 ppm), um segundo pico (por exemplo, de cerca de 3,0 ppm a cerca de 3,5 ppm, e um terceiro pico (por exemplo, de cerca de. 1,0 ppm a cerca de 1,4 ppm) em um espectro de 'HNMR unidimensional (ID). Em algumas modalidades, a NMR pode ser realizada por um espectrômetro de NMR, por exemplo, por um espectrômetro Avance I Bruker (1H), equipado com uma sonda HR-MAS de 4 mm (1H, 13C, trava 2H) ou um equipamento similar. Em certas modalidades, a técnica de giro de ângulo mágico de alta resolução (HR- MAS) pode ser empregada para analisar a microesfera. Sem ficar preso a nenhuma teoria, a técnica de HR-MAS foi inicialmente desenvolvida para a química combinatorial usando a síntese de fase sólida. O HR-MAS é particularmente usado para a análise de amostras não completamente solúveis ou contendo sólidos. Ela dá resultados muito bons quando a amostra tem a propriedade de intumescer ou aumentar a mobilidade em um solvente apropriado. NMR HR-MAS pode ser considerada uma técnica híbrida entre NMR de estado sólido e NMR de estado de solução clássica. Similar à NMR de estado sólido, o uso de giro de ângulo mágico (MAS) efetivamente remove o alargamento de linhas espectrais resultante da anisotropia de deslocamento químico, interações dipolares homonucleares e suscetibilidade magnética.
[0099] Em algumas modalidades, o espectro de 'HNMR pode ser registrado em de 100MHz e 900 MHz, tais como a 100 MHz, 200 MHz, 300 MHz, 400 MHz, 500 MHz, 600 MHz, 700 MHz, 800 MHz, ou 900 MHz, ou uma faixa desta. Em uma modalidade específica, o espectro de 'HNMR é registrado a 400 MHz. Em certas modalidades, a microesfera pode ser dispersa em qualquer solvente compatível com a análise de NMR. Solventes exemplares incluem, mas sem limitações, solvente deuterados, tais como água deuterada, ácido acético-d4, acetona-d6, acetonitrila-d3, benzeno-d6, clorofórmio-d, diclorometano-d2, N,N-dimetil formamida-d7, dimetil sulfóxido-d6, etanol-d6, metanol-d4. nitrometano-d3, piridina-d5, tetraidrofurano-ds, toluene-ds, ácido trifluoracético-d4, e trifluoretanol-d3, e outros solventes, tais como dissulfito de carbono, 1,1,2,2-tetracloroetano, tetracloreto de carbono, éter dietílico (-100 °C), éter dimetílico (-100 °C), 1,4- dioxano, triclorofluormetano, nitrobenzeno, tetraidrofurano (-100 °C). Em uma modalidade específica, o solvente é água deuterada (D20).
[00100] Em certas modalidades, a microesfera pode ser analisada por espectroscopia de NMR em uma temperatura de cerca de 0 °C a cerca de 80 °C, tais como de cerca de 10 °C a cerca de 50 °C, de cerca de 15 °C a cerca de 35 °C, de cerca de 20 °C a cerca de 25 °C (por exemplo, a temperatura ambiente), ou de cerca de 0 °C a cerca de 5 °C, ou qualquer faixa deste. Em uma modalidade específica, a microesfera é analisada em uma temperatura de cerca de 25 °C.
[00101] Em uma modalidade específica, as microesferas são analisadas em um espectro de 'HNMR unidimensional 1D, usando os parâmetros essencialmente conforme fornecido no exemplo 14 (por exemplo, Tabela 10), e o primeiro, segundo e terceiro picos e/ou as razões de integração do segundo pico para o primeiro pico (normalizado para 1) e o terceiro pico para o primeiro pico são determinadas.
[00102] O primeiro pico apresentado pela microesfera no espectro de 'HNMR pode ser atribuído, por exemplo, aos grupos tris-hidroximetila (por exemplo, C(CH2OH)3) no copolímero da microesfera. Em certas modalidades, o primeiro pico apresentado pela microesfera no espectro de ’HNMR é de cerca de 3,60 ppm a cerca de 3,95 ppm, tais como de cerca de 3,65 ppm a cerca de 3,90 ppm, de cerca de 3,70 ppm a cerca de 3,85 ppm, ou de cerca de 3,75 ppm a cerca de 3,80 ppm, ou qualquer faixa deste. Em uma modalidade específica, o primeiro pico apresentado pela microesfera no espectro de 'HNMR é em cerca de 3,77 ppm.
[00103] O segundo pico apresentado pela microesfera no espectro de !HNMR pode ser atribuído, por exemplo, aos grupos CH2 ligados ao átomo de nitrogênio básico (por exemplo, (CHoN (C^CHs^)). Em certas modalidades, o segundo pico apresentado pela microesfera no espectro de !HNMR é de cerca de 3,05 ppm a cerca de 3,45 ppm, tais como de cerca de 3,10 ppm a cerca de 3,40 ppm, de cerca de 3,15 ppm a cerca de 3,35 ppm, de cerca de 3,20,ppm a cerca de 3,30 ppm, ou de cerca de 3,15 ppm a cerca de 3,25 ppm, ou qualquer faixa deste. Em uma modalidade específica, o segundo pico apresentado pela microesfera no espectro de 'HNMR é em cerca de 3,2 ppm.
[00104] O terceiro pico apresentado pela microesfera no espectro de !HNMR pode ser atribuído, por exemplo, aos grupos na posição β do grupo carboxamida na estrutura polimerizada da microesfera (por exemplo, CH3- CHCONH), Em certas modalidades, o terceiro pico apresentado pela microesfera no espectro !HNMR é de cerca de 1,01 ppm a cerca de 1,49 ppm, tais como de cerca de 1,05 ppm a cerca de 1,47 ppm, de cerca de 1,10 ppm a cerca de 1,45 ppm, de cerca de 1,15 ppm a cerca de 1,40 ppm; ou de cerca de 1,25 ppm a cerca de 1,35 ppm ou qualquer faixa deste. Em uma modalidade específica, 0 terceiro pico apresentado pela microesfera no espectro de !HNMR é em cerca de 1,3 ppm. Em algumas modalidades, (i) o segundo pico é em cerca de 3,245 ppm ou menos, tais como cerca de 3,211 ppm ou menos que ou cerca de 3,192 ppm ou menos que; (ii) o terceiro pico é em cerca de 1,297 ppm ou menos, tais como cerca de 1,283 ppm ou menos que ou cerca de 1,276 ppm ou menos que; (ii) ou qualquer combinação de (i) e (ii). Em uma modalidade, o segundo pico não é a 3,212 ou 3,246 (+/- 0,002 ou 0,005) ppm e/ou o terceiro pico não é a 1,284 ou 1,298 (+/- 0,002 ou 0,005) ppm.
[00105] Em certas modalidades, a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico apresentado pela microesfera no espectro de 'HNMR é de cerca de 0,498 a cerca de 0,650, tais como de cerca de 0,53 a cerca de 0,63, de cerca de 0,55 a cerca de 0,60, ou qualquer faixa deste. Em algumas modalidades, a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico apresentado pela microesfera no espectro de *HNMR é cerca de 0,50, 0,51, 0,52, 0,53, 0,54, 0,55, 0,56, 0,57, 0,58, 0,59, 0,60, 0,61, 0,62, 0,63, 0,64, ou 0,65, ou qualquer faixa deste. Em certas modalidades, a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico apresentado pela microesfera no espectro de 'HNMR é cerca de 0,571, 0,572, 0,573, 0,574, 0,575, 0,576, 0,577, 0,578, ou 0,579, ou qualquer faixa deste. Em uma modalidade específica, a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico apresentado pela microesfera no espectro de !HNMR é cerca de 0,574.
[00106] Razões de integração podem ser calculadas usando métodos conhecidos na tecnologia, por exemplo, normalizando o primeiro pico para o valor de 1 e então comparando a razão do segundo (ou terceiro) pico para o primeiro pico. Sem ficar preso à teoria, acredita-se que as razões de integração podem ser usadas para diretamente correlacionar com a proporção de cada material que é incorporado na cadeia de polímero. Isto é, maiores razões de integração podem correlacionar com mais monômeros e/ou uma maior proporção de monômeros e menos impurezas incorporadas no produto de polímero final, bem como uma melhor eficiência geral de polimerização.
[00107] Em algumas modalidades, a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico apresentado por uma microesfera compreendendo um copolímero preparado por copolimerização (i) um monômero ultra-puro de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, (ii) um monômero de dietilaminoetilacrilamida ultra-puro, (iii) um monômero ultra-puro de N,N- metileno-bis-acrilamida, (iv) um monômero ultra-puro de N-tris-hidroximetil metilacrilamida e um monômero de dietilaminoetilacrilamida ultra-puro, (v) um monômero ultra-puro de N-tris-hidroximetil metilacrilamida e um um monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida ultra-puro, (vi) um monômero de dietilaminoetilacrilamida ultra-puro e um monômero de N,N-metileno-bis- acrilamida ultra-puro, ou (vii) um N-tris-hidroximetil metilacrilamida ultra- puro, um monômero ultra puro de dietilaminoetilacrilamida, e em um N,N- monômero de metileno-tris-acrilamida ultra-puro no espectro de 'HNMR é de cerca de 5 % a cerca de 100 % superior, tais como cerca de 5 % superior, cerca de 10 % superior, cerca de 15 % superior, cerca de 20 % superior, cerca de 25 % superior, cerca de 30 % superior, cerca de 35 % superior, cerca de 40 % superior, cerca de 45 % superior, cerca de 50 % superior, cerca de 55 % superior, cerca de 60 % superior, cerca de 65 % superior, cerca de 70 %, higher, cerca de 75 % superior, cerca de 80 % superior, cerca de 85 % superior, cerca de 90 %.higher, cerca de 95 % superior, cerca de 100 % superior, ou qualquer faixa deste, comparado à mesma microesfera preparada sem o monômero ultra-puro(s).
[00108] Em algumas modalidades, a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico apresentado por uma microesfera compreendendo (i) uma unidade de monômero ultra-pura de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, (ii) uma unidade de monômero ultra-pura de dietilaminoetilacrilamida, (iii) uma unidade de monômero ultra-pura de N,N- metileno-bis-acrilamida, (iv) uma unidade de monômero ultra-pura de N-tris- hidroximetil metilacrilamida e uma unidade de monômero ultra-pura de dietilaminoetilacrilamida, (v) uma unidade de monômero ultra-pura de N-tris- hidroximetil metilacrilamida e uma unidade de monômero ultra-pura de N,N- metileno-bis-acrilamida, (vi) uma unidade de monômero ultra-pura de dietilaminoetilacrilamida e uma unidade de monômero ultra-pura de N,N- metileno-bis-acrilamida, ou (vii) uma unidade de monômero ultra-pura de N- trishidroximetil metilacrilamida, uma unidade de monômero ultra-pura de dietilaminoetilacrilamida, e uma unidade de monômero ultra-pura de N,N- metileno-bis-acrilamida no espectro de 'HNMR é de cerca de 5 % a cerca de 10 % superior, tais como cerca de 5 % superior, cerca de 10 % superior, cerca de 15 % superior, cerca de 20 % superior, cerca de 25 % superior, cerca de 30 % superior, cerca de 35 % superior, cerca de 40 % superior, cerca de 45 % superior, cerca de 50 % superior, cerca de 55 % superior, cerca de 606/o higher, cerca de 65 % superior, cerca de 70 % superior, cerca de 75 % superior, cerca de 80 % superior, cerca de 85 % superior, cerca de 90 % superior, cerca de 95 % superior,, cerca de 100 % superior, ou qualquer faixa deste, comparado à mesma microesfera que não compreende a unidade de monômero ultra-pura(s) (preparada sem o respectivo monômero ultra- puro(s)).
[00109] Em certas modalidades, a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico apresentado pela microesfera no espectro de 'HNMR é de cerca de 0,53 a cerca de 0,75, tais como de cerca de 0,57 a cerca de 0,60, de cerca de 0,60 a cerca de 0,65, de cerca de 0,61 a cerca de 0,75 ou de cerca de.0,61 a cerca de 0,65 ou qualquer faixa deste. Em certas modalidades, a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico apresentado pela microesfera no espectro de !HNMR é cerca de 0,53, 0,54, 0,55, 0,56, 0,57, 0,58, 0,59, 0,60, 0,61, 0,62, 0,63, 0,64, 0,65, 0,66, 0,67, 0,68, 0,69, 0,70, 0,71, 0,72, 0,73, 0,74, ou 0,75, ou qualquer faixa deste. Em certas modalidades, a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico apresentado pela microesfera no espectro de 'HNMR é cerca de 0,611, 0,612, 0,613, 0,614, 0,6 i 5, 0,616, 0,617, 0,618,0,619, 0,620, 0,621, 0,622, 0,623, 0,624, 0,625, 0,626, 0,.627, 0,628, ou 0,629, ou qualquer faixa deste. Em uma modalidade específica, a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico apresentado pela microesfera no espectro de 'HNMR é cerca de 0,625.
[00110] Em algumas modalidades, a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico apresentado por um'microesfera compreendendo um-copolímero preparado por copolimerização (i) um monômero ultra-puro de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, (ii) um monômero de dietilaminoetilacrilamida ultra-puro, (iii) um monômero de N,N-metileno-bis- acrilamida ultra-puro, (iv) um monômero ultra-puro de N-tris-hidroximetil metilacrilamida e um monômero de dietilaminoetilacrilamida ultra-puro, (v) um monômero ultra-puro de N-tris-hidroximetil metilacrilamida e um monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida ultra-puro, (vi) um monômero de dietilaminoetilacrilamida ultra-puro e um monômero ultra-puro de N,N- metileno-bis-acrilamida ou (vii) um monômero ultra-puro de N-tris- hidroximetil metilacrilamida, um monômero de dietilaminoetilacrilamida ultra-puro, e um monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida ultra-puro no espectro de 'HNMR é de cerca de 5 % a cerca de 100 % superior, tais como cerca de 5 % superior, cerca de 10 % superior, cerca de 15 % superior, cerca de 20 % superior; cerca de 25 % superior, cerca de 30 % superior, cerca de 35 % superior, cerca de 40 % superior, cerca de 45 % superior, cerca de 50 % superior, cerca de 55 % superior, cerca de 60 % superior, cerca de 65 % superior, cerca de 70 % superior, cerca de 75 % superior, cerca de 80 % superior, cerca de 85 % superior, cerca de 90 % superior, cerca de 95 % superior, cerca de 100 % superior, ou qualquer faixa deste, comparado à mesma microesfera preparada sem o monômero ultra-puro(s).
[00111] Em algumas modalidades, a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico apresentado por uma microesfera compreendendo (i) uma unidade de monômero ultra-pura de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, (ii) uma unidade de monômero ultra-pura de dietilaminoetilacrilamida, (iii) uma unidade de monômero ultra-pura de N,N- metileno-bis-acrilamida, (iv) uma unidade de monômero ultra-pura de N-tris- hidroximetil metilacrilamida e uma unidade de monômero ultra-pura de dietilaminoetilacrilamida, (v) uma unidade de monômero ultra-pura de N-tris- hidroximetil metilacrilamida e uma unidade de monômero ultra-pura de N,N- metileno-bis-acrilamida, (vi), uma unidade de monômero ultra-pura de dietilaminoetilacrilamida e uma unidade de monômero ultra-pura de NN- metileno-bis-acrilamida, ou (vii) uma unidade de monômero ultra-pura de N- tris-hidroximetil metilacrilamida, uma unidade de monômero ultra-pura de dietilaminoetilacrilamida, e uma unidade de monômero ultra-pura de N,N- metileno-bis-acrilamida no espectro de ^NMR é de cerca de 5 % a cerca de 100 % superior, tais como cerca de 5 % superior, cerca de 10 % superior, cerca de 15 % superior, cerca de 20 % superior, cerca de 25 % superior, cerca de 30 % superior, cerca de 35 % superior, cerca de 40 % superior, cerca de 45 % superior, cerca de 50 % superior, cerca de 55 % superior, cerca de 60 % superior, cerca de 65 % superior, cerca de 70 % superior, cerca de 75 % superior, cerca de 80 % superior, cerca de 85 % superior, cerca de 90 % superior, cerca de 95 % superior, cerca de 100 % superior, ou qualquer faixa deste, comparado à mesma microesfera que não compreende a unidade de monômero(s) ultra-pura (preparada sem o respectivo monômero ultra- puro(s)).
[00112] Em algumas modalidades, (a) a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico apresentado por uma microesfera compreendendo um copolímero preparado por copolimerização (i) um monômero ultra-puro de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, (ii) um monômero ultra puro de dietilaminoetilacrilamida, (iii) um monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida ultra-puro, (iv) um monômero ultra-puro de N- tris-hidroximetil metilacrilamida e um monômero de dietilaminoetilacrilamida ultra-puro, (v) um monômero ultra-puro de N-tris-hidroximetil metilacrilamida e um monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida ultra-puro, (vi) um monômero de dietilaminoetilacrilamida ultra-puro e um monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida ultra-puro ou (Vii) um monômero ultra-puro de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, um monômero ultra puro de dietilaminoetilacrilamida, e um monômero ultra-puro de N,N-metileno-bis- aorilamida no espectro de 'HNMR é de cerca de 5 % a cerca de 100 % superior, tais como cerca de 5 % superior, cerca de 10 % superior, cerca de 15 % superior, cerca de 20 % superior, cerca de 25 % superior, cerca de 30 % superior, cerca de 95 % superior, cerca de 1,00 % superior, ou qualquer faixa deste, e (b) a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico apresentado por uma microesfera compreendendo um copolímero preparado por copolimerização (i) um monômero ultra-puro de N-tris-hidroximetil metacrilamida, (ii) um monômero de dietilaminoetilacrilamida ultra-puro, (iii) na um monômero ultra-puro de N,N-metileno-bis-acrilamida, (iv) um monômero ultra-puro de N-tris-hidroximetil metilacrilamida e um monômero ultra puro de dietlrilaminoetilacrilamida, (v) um monômero ultra-puro de N- tris-hidroximetil metilacrilamida e um monômero ultra-puro de N,N- metileno-bis-acrilamida, (vi) um monômero de dietilaminoetilacrilamida ultra-puro e um monômero ultra-puro de N,N-metileno-bis-acrilamida ou (vii) um monômero ultra-puro de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, um monômero ultra-puro de dietilaminoetilacrilamida, e um monômero ultra-puro de N,N-metileno-bis-acrilamida, respectivamente, no espectro de 'HNMR é de cerca de 5 % a cerca de 100 % superior, tais como cerca de 5 % superior, cerca de 10 % superior, cerca de 15 % superior, cerca de 20 % superior, cerca de 25 % superior, cerca de 30 % superior, cerca de 35 % superior, cerca de 40 % superior, cerca de 45 % superior, cerca de 50 % superior, cerca de 55 % superior; cerca de 60 % superior, cerca de 65 % superior, cerca de 70 % superior, cerca de 75 % superior, cerca de 80 % superior, cerca de 85 % superior; cerca de 90 % superior, cerca de 95 % superior, cerca de 100 % superior, ou qualquer faixa deste; e (b).
[00113] Em outras modalidades, (a) a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico apresentado por uma microesfera compreendendo (i) uma unidade de monômero ultra-pura de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, (ii) uma unidade de monômero ultra-pura de dietilaminoetilacrilamida, (iii) uma unidade de monômero ultra-pura de N,N- metileno-bis-acrilamida, (iv) um unidade de monômero ultra-pura de N-tris- hidroximetil metilacrilamida e uma unidade de monômero ultra-pura de dietilaminoetilacrilamida, (v) uma unidade de monômero ultra-pura de N-tris- hidroximetil metilacrilamida e uma unidade de monômero ultra-pura de N,N- metileno-bis-acrilamida, (vi) uma unidade de monômero ultra-pura de dietilaminoetilacrilamida e uma unidade de monômero ultra-pura de N,N- metileno-bis-acrilamida, ou (vii) uma unidade de monômero ultra-pura de N- tris-hidroximetil metilacrilamida, uma unidade de monômero ultra-pura de dietilaminoetilacrilamida, e uma unidade de monômero ultra-pura de N,N- metileno-bis-acrilamida no espectro de 'HNMR é de cerca de 5 % a cerca de 100 % superior, tais como cerca de 5 % superior, cerca de 10 % superior, cerca de 15 % superior, cerca de 20 % superior, cerca de 25 % superior, cerca de 30 % superior, cerca de 35 % superior; cerca de 40 % superior, cerca de 45 % superior, cerca de 50 % superior, cerca de 55 % superior, cerca de 60 % superior, cerca de 65 % superior, cerca de 70 % superior, cerca de 75 % superior, cerca de 80 % superior, cerca de 85 % superior, cerca de 90 % superior, cerca de 95 % superior, cerca de 100 % superior, ou qualquer faixa deste, e (b) a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico apresentado para uma microesfera compreendendo (i) uma unidade de monômero ultra-pura de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, (ii) uma unidade de monômero ultra-pura de dietilaminoetilacrilamida, (iii) uma unidade de monômero ultra-pura de N,N-metileno-bis-acrilamida, (iv) uma unidade de monômero ultra-pura de N-tris-hidroximetil metilacrilamida e uma unidade de monômero ultra-pura de dietilaminoetilacrilamida, (v) uma unidade de monômero ultra-pura de N-tris-hidroximetil metilacrilamida e uma unidade de monômero ultra-pura de N,N-metileno-bis-acrilamida, (vi) uma unidade de monômero ultra-pura de dietilaminoetilacrilamida e uma unidade de monômero ultra-pura de N,N-metileno-bis-acrilamida, ou (vii) uma unidade de monômero ultra-pura de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, uma unidade de monômero ultra-pura de dietilaminoetilacrilamida, e uma unidade de monômero ultra-pura de N,N-metileno-bis-acrilamida no espectro de 'HNMR é de cerca de 5 % a cerca de 100 % superior, tais como cerca de 5 % superior, cerca de' 10 % superior, cerca de 15 % superior, cerca de 20 % superior; cerca de 25 % superior, cerca de 30 % superior, cerca de 35 % superior, cerca de 40 % superior, cerca de 45 % superior, cerca de 50 % superior, cerca de 55 % superior, cerca de 60 % superior, cerca de 65 % superior, cerca de 70 % superior, cerca de 75 % superior, cerca de 80 % superior, cerca de 85 % superior, cerca de 90 % superior, cerca de 95 % superior, cerca de 100 % superior, ou qualquer faixa desta, comparado à mesma microesfera que não compreende a unidade de monômero ultra-pura(s) preparada sem o respectivo monômero ultra-puro(s).
[00114] Também é aqui fornecida uma microesfera compreendendo (a) um copolímero preparado por copolimerização um monômero de N-tris- hidroximetil metilacrilamida, um monômero de dietilaminoetilacrilamida e um monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida, em que um, dois ou três dos monômeros é um monômero ultra-puro, e (b) gelatina reticulada em que a microesfera apresenta em um espectro de ’HNMR, um primeiro pico de cerca de 3,5 ppm a cerca de 4 ppm, um segundo pico de cerca de 3 ppm a cerca de 3,5 ppm, e um terceiro pico de cerca de 1, ppm a cerca de 1,5 ppm; e em que (i) a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico é maior que a razão de integração da mesma microesfera preparada sem o monômero ultra- puro(s), (ii) a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico é maior que a razão de integração da mesma microesfera preparada sem o monômero ultra-puro(s), ou (iii) a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico e-a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico são cada um maior que as respectivas razões de integração da mesma microesfera preparada sem o monômero ultra-puro(s). Em algumas modalidades, a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico e/ou a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico é independentemente selecionada de cerca de 5 % superior, cerca de 10 % superior, cerca de 15 % superior, cerca de 20 % superior, cerca de 25 % superior, cerca de 30 % superior, cerca de 35 % superior, cerca de 40 % superior, cerca de 45 % superior, cerca de 50 % superior, cerca de 55 % superior, cerca de 60 % superior, cerca de 65 % superior, cerca de 70 % superior, cerca de 75 % superior, cerca de 80 % superior, cerca de 85 % superior, cerca de 90 % superior, cerca de 95 % superior, cerca de 100 % superior, ou qualquer faixa deste.
[00115] Também é aqui fornecida uma microesfera compreendendo (a) um copolímero compreendendo uma unidade de monômero de N-tris- hidroximetil metilacrilamida, uma unidade de monômero de dietilaminoetilacrilamida e uma unidade de monômero de N,N-metileno-bis- acrilamida, em que uma, duas ou três das unidades de monômero é uma unidade de monômero ultra-pura, e (b) gelatina reticulada; em que a microesfera apresenta em um espectro de 'HNMR, um primeiro pico de cerca de 3,5 ppm a cerca de 4 ppm, um segundo pico de cerca de 3 ppm a cerca de 3,5 ppm, e um terceiro pico de cerca de 1 ppm a cerca de 1,5 ppm; e em que (i) a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico é maior que a razão de integração das mesma microesfera que não compreende a unidade de monômero ultra-pura(s) (preparada sem o respectivo monômero ultra- puro(s)), (ii) a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico é maior que a razão de integração das mesma microesfera para a mesma microesfera que não compreende a unidade de monômero ultra-pura(s) (preparada sem o respectivo monômero ultra-puro(s)), ou (iii) a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico e a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico são cada um maior que as respectivas razões de integração da mesma microesfera que não compreende a unidade de monômero ultra-pura(s) (preparada sem o respectivo monômero ultra- puro^)). Em algumas modalidades, a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico e/ou a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico é independentemente selecionada de cerca de 5 % superior, cerca de 10 % superior, cerca de 15 % superior, cerca de 20 % superior, cerca de 25 % superior, cerca de 30 % superior, cerca de 35 % superior, cerca de 40 % superior, cerca de 45 % superior, cerca de 50 % superior, cerca de 55 % superior, cerca de 60 % superior, cerca de 65 % superior, cerca de 70 % superior, cerca de 75 % superior, cerca de 80 % superior, cerca de 85 % superior, cerca de 90 % superior, cerca de 95 % superior, cerca de 100 % superior, ou qualquer faixa deste.
[00116] Em modalidades específicas, a microesfera é uma microesfera ultra-pura. Em certas modalidades, a microesfera ultra-pura compreende 10 % ou menos, 9 % ou menos, 8 % ou menos, 7 % ou menos, 6 %, ou menos, 5 % ou menos, 4 % ou menos, 3 % ou menos, 2 % ou menos, I % ou menos que ou 0 % das impurezas em peso. Em algumas modalidades, a microesfera ultra-pura compreende 90 % ou mais, 91 % ou mais, 92 % ou mais, 93 % ou mais, 94 % ou mais, 95 % ou mais, 96 % ou mais, 97 % ou mais, 98 % ou mais, 99 % ou mais, ou 100 % em peso de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida, N,N-metileno-bis-acrilamida e gelatina.
[00117] Em uma modalidade, é aqui fornecida uma microesfera compreendendo: (a) um copolímero compreendendo uma unidade de monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, uma unidade de monômero de dietilaminoetilacrilamida e uma unidade de monômero de N,N-metileno- bis-acrilamida, e (b) gelatina reticulada; em que a microesfera apresenta em um espectro de 'HNMR, um primeiro pico de cerca de 3,5 ppm a cerca de 4 ppm, um segundo pico de cerca de 3 ppm a cerca de 3,5 ppm, e um terceiro pico de cerca de 1 ppm a cerca de 1,5 ppm; e em que (i) a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico é de 0,50 a cerca de 0,65, (ii) a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico é de 0,61 a cerca de 0,75, ou (iii) uma combinação de (i) e (ii) em uma modalidades, o primeiro pico é em cerca de 3,77 ppm, o segundo pico é em cerca de 3,2 ppm, o terceiro pico é em cerca de 1,3 ppm, ou uma combinação destes. Em algumas modalidades, a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico é cerca de 0,574, ou em que a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico é cerca de 0,625. Em uma modalidades, a microesfera da reivindicação 1, em que a microesfera é a 25 °C e/ou em um solvente deuterado quando o espectro de 'HNMR é registrado e/ou o espectro de !HNMR é registrado a 400 MHz. Em algumas modalidades, uma, duas ou três das unidades de monômero de N- tris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida e N,N-metileno- bis-acrilamida é uma unidade de monômero ultra-pura. Em certas modalidades, a unidade de monômero de N-tris hidroximetil metilacrilamida compreende menos que 9 % das impurezas e/ou a unidade de monômero de dietilaminoetilacrilamida compreende menos que 2 % das impurezas (por exemplo, da forma determinada pelo teste de bromo). Em certas modalidades, a unidade de monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida compreende menos que 9 % das impurezas e/ou a unidade de monômero de dietilaminoetilacrilamida compreende menos que 2 % das impurezas (por exemplo, da forma determinada por HPLC). Em uma outra modalidade, a microesfera tem um diâmetro de cerca de 1 pm a cerca de 2000 pm, de cerca de 40 pm a cerca de 120 pm, de cerca de 100 pm a cerca de 300 pm, de cerca de 300 pm a cerca de 500 pm; de cerca de 500 pm a cerca de 700 pm, de cerca de 700 pm a cerca de 900 pm, ou de cerca de 900 pm a cerca de 1200 pm.
B. Composições
[00118] As microesferas aqui fornecidas podem ser usadas em uma composição (por exemplo, composição farmacêutica) com um líquido farmaceuticamente aceitável ou outro carreador biocompatível.
[00119] Em certas modalidades, as microesferas ou as microesferas nas composições têm tamanho substancialmente uniforme. Por exemplo, em certas modalidades, a diferença em diâmetro entre microesferas individuais é de cerca de 0 pm a cerca de 100 pm, de cerca de 0 pm a cerca de 50 pm, ou de cerca de 0 pm a cerca de 25 pm. Em algumas modalidades, as microesferas têm diferenças em diâmetro de 100 pm ou menos, cerca de 50 pm ou menos, cerca de 25 pm ou menos, cerca de 10 pm ou menos que ou cerca de 5 pm ou menos.
[00120] Em certas modalidades, as microesferas nas composições têm um diâmetro de cerca de pm a 2000 pm, de cerca de 10 pm a 1000 pm, de cerca de 40 pm a cerca de 120 pm, de cerca de 100 pm a cerca de 300 pm, de cerca de 300 pm a cerca de 500 pm, de cerca de 500 pm a cerca de 700 pm, de cerca de 700 pm a cerca de 900, pm, ou de cerca de 900 pm a cerca de 1200 pm.
[00121] Em certas modalidades, as microesferas são em uma população em que mais que 69 % têm um diâmetro de ± 20 % da média, 10 % da média, ou 5 % do diâmetro médio em uma modalidade, as microesferas são em uma população em que mais que 75 % têm um diâmetro de ± 20 % da média, ± 15 % da média, ± 10 % da média ou ± 5 % do diâmetro médio, ou uma faixa desta.
[00122] A composição pode ser na forma de uma suspensão, um hidrogel, ou uma emulsão. A composição também pode ser uma suspensão das microesferas no líquido. A natureza hidrofílica das microesferas permite colocá-las em suspensão, e em particular, na forma de soluções injetáveis estéreis e não pirogênicas ou sem pirogênio, evitando ao mesmo tempo a formação de agregados ou adesão nas paredes de recipientes de armazenamento e dispositivos de implantação, tais como cateteres, seringas, agulhas, e similares.
[00123] Em algumas modalidades, um cateter é usado para a administração. Em uma modalidade específica, um cateter seletivamente posicionado é usado. Tal cateter tem um cateter guia inserido em uma artéria principal, um microcateter com ou sem um fio microguia direcionável, e uma válvula hemostática que fornece uma selagem apertada entre o cateter guia e o microcateter, de maneira tal que uma lavagem de heparina contínua possa ser usada para evitar a coagulação do sangue.
[00124] Em modalidades específicas, as microesferas ou as composições farmacêuticas são adequadas para injeção. Em modalidades específicas, as microesferas e/ou composições compreendendo as microesferas são estéreis. As microesferas podem ser esterilizadas por qualquer método conhecido na tecnologia, por exemplo, por irradiação, tais como irradiação gama ou beta. Em certas modalidades, as microesferas são preparadas assepticamente usando técnicas assépticas. Em algumas modalidades, as microesferas preparadas assepticamente compreendem um agente terapêutico ou medicamento.
[00125] O líquido farmaceuticamente aceitável pode ser, sem limitação, salina, um solução tampão, água, um solução isotônica, um fluido biológico ou uma mistura destes. O líquido também pode ser uma solução de sal e, em certas modalidades, é composto de cátions selecionados do grupo que consiste em sódio, potássio, cálcio, magnésio, ferro, zinco, e amónio, por exemplo, em uma quantidade de cerca de 0,01 M a cerca de 5 M.. Em certas modalidades, as microesferas são suspensas, ou de outra maneira administradas a um paciente, em combinação com lipiodol e opcionalmente um medicamento (por exemplo, doxorubicina) ou outro agente terapêutico.
[00126] A composição pode compreender as microesferas em uma quantidade de cerca de 10 % a cerca de 90 % em peso e o líquido (ou outr carreador biocompatível) em uma quantidade de cerca de 10 % a cerca de 90 % em peso. A composição também pode compreender as microesferas em uma quantidade de cerca de 10 % a cerca de 50 % em peso e o líquido (ou outro carreador biocompatível) em uma quantidade de cerca de 50 % a cerca de 90 % em peso.
[00127] Carreadores farmaceuticamente aceitáveis para uso terapêutico incluem diluentes, solubilizantes, lubrificantes, agentes de suspensão, materiais de encapsulação, solventes, espessantes, dispersantes, tampões, tais como sais de fosfato, citrato, acetato e outros sais de ácido orgânico, antioxidantes, tais como ácido ascórbico, conservantes, peptídeos de baixo peso molecular (menos que cerca de resíduos), tais como poliarginina, proteínas, tais como albumina sérica, gelatina ou imunoglobulinas, polímeros hidrofílicos, tais como poli(vinilpirrolindinona), aminoácidos, tais como glicina, ácido glutâmico, ácido aspártico ou arginina, monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos incluindo celulose ou seus derivados, glicose, manose ou dextrinas, agentes quelantes, tais como EDTA, álcoois de açúcar, tais como manitol ou sorbitol, contra-íons, tais como agentes tensoativos de sódio e/ou não iônicos, tais como tween, pluronics ou PEG.
[00128] Em algumas modalidades, a composição ou formulação compreende as microesferas aqui fornecidas, por exemplo, na forma de um pó seco, que pode ser fornecido em um recipiente, tais como um frasco ou seringa. As microesferas podem ser misturadas com um ou mais carreadores farmacêuticos e/ou um ou mais outros componentes aqui fornecidos (por exemplo, um agente de marcação e/ou um agente terapêutico, tais como um medicamento) aqui fornecidos antes, durante ou depois douso (por exemplo, antes, durante ou depois da injeção em um paciente).
[00129] Em algumas modalidades, o carreador biocompatível é uma solução de base aquosa, uma solução hidro-orgânica, uma solução orgânica, uma solução não aquosa, ou uma mistura destes. Em certas modalidades, o carreador biocompatível compreende um sal composto de cátions, tais como sódio, potássio, cálcio, magnésio, ferro, zinco, amónio, e misturas destes, por exemplo, em uma quantidade de cerca de 0,01 Ma cerca de 5 M.
[00130] Em certas modalidades, as microesferas da composição são visíveis na luz e no corpo, por exemplo, ainda compreendendo um agente de marcação. Em algumas modalidades, microesferas podem ser marcadas depois de sua síntese. Isto pode ser feito, por exemplo, enxertando derivados de marcadores fluorescentes (incluindo, por exemplo, isotiocianato de fluoresceína (FITC), isotiocianato de rodamina (RITC) e similares). Em algumas modalidades, um monômero detectável pode ser obtido por acoplamento químico do monômero com um marcador, que pode ser um corante químico, tais como Cibacron Blue ou Procion Red HE-3B, tornando possível uma visualização direta das microesferas, uma ressonância magnética, agente de formação de imagem (érbio, gadolínio ou magnetita); um agente de contraste, tais como sais de bário ou iodo, (incluindo, por exemplo, ácido (acrilamido-3-propionamido)-3-triiodo-2,4,6-benzóico. No caso de sais de bário e magnetita, eles podem ser diretamente introduzidos na forma de pó na solução de monômero inicial.
[00131] Em uma certa modalidade, a composição compreende um agente de contraste ou outro agente de marcação, tais como um agente de contraste radiopaco, tais como um agente de contraste não iônico. Em algumas modalidades, o agente de contraste é misturado com as microesferas na composição antes, durante e/ou depois da injeção no paciente. Em uma modalidade específica, o paciente é administrado com uma composição compreendendo um agente de contraste (por exemplo, um agente de contraste não iônico) e microesferas aqui fornecidas.
C. Método de preparar microesferas
[00132] É aqui fornecido um método para produzir microesferas compreendendo uma gelatina ou substituinte de gelatina e um copolímero de um N-tris-hidroximetil metilacrilamida, um dietilaminoetilacrilamida e um N,N-metileno bis-acrilamida. Ainda aqui fornecidas são, por exemplo, as microesferas produzidas por este método, bem como composições e usos das microesferas estes.
[00133] As microesferas aqui fornecidas podem ser preparadas por qualquer método conhecido por um versado, por exemplo, por polimerização por suspensão (por exemplo, uma suspensão ou emulsão água-em-óleo), polimerização gota-a-gota, da forma descrita em E. Boschetti, Microspheres for Biochrornatography and Biomedical Applications. Part I, Preparation of Microbeads In Microspheres, Microencapsulation and Liposomes, John Wiley & Sons, Arshady R., Ed., vol. 2; p. 171-189 (1999), ou como nas patentes U.S. Nos. 5.635.215 e 5.648.100, cada uma das quais está aqui incorporada pela referência. O modo de preparação da microesfera selecionado normalmente dependerá das características desejadas, tais com o diâmetro e composição química da microesfera, para as microesferas resultantes. Em algumas modalidades dos vários métodos aqui fornecidos, os monômeros são polimerizados por polimerização de radical ou radiação.
[00134] Em certas modalidades, polimerização é realizada por polimerização por emulsão ou suspensão, uma vez que torna possível estimar diretamente as microesferas de um tamanho desejado. Pode ser conduzida como se segue: a solução aquosa contendo os diferentes constituintes dissolvidos (por exemplo; diferentes monômeros, agente de adesão celular), é misturada por agitação com uma solução compreendendo uma fase orgânica líquida (por exemplo, óleo vegetal, animal ou mineral, certos produtos de destilação de petróleo, hidrocarbonetos clorados ou uma mistura destas diferentes soluções) que tem baixa (por exemplo, cerca de 15 % ou menos, cerca de 10 % ou menos, cerca de 5 % ou menos, cerca de 4 % ou menos, cerca de 3 % ou menos, cerca de 2 % ou menos, cerca de 1 % ou menos, cerca de 0,5 %, cerca de 0,1 % ou menos, ou cerca de 0 %) miscibilidade em água (por exemplo, é imiscível) a 25 °C, e opcionalmente na presença de um emulsificante (por exemplo, um sorbi(um sesquioleato) para criar uma suspensão de gotículas, que são então solidificadas em gel por polimerização de monômeros por meio de catalisadores apropriados. Em uma modalidade específica, a fase orgânica líquida tem uma miscibilidade de cerca de 1 % ou menos que em água a 25 °C. Em um certasmodalidade, a fase orgânica líquida compreende ou consiste em um óleo. Em uma modalidade específica, a fase orgânica líquida compreende ou consiste em um óleo vegetal ou um óleo mineral (por exemplo, óleo de parafina) ou uma combinação de um óleo vegetal e um óleo mineral. A taxa de agitação é ajustada de maneira a obter uma emulsão de fase aquosa na fase orgânica que forma gotículas de diâmetro desejado. Polimerização é então iniciado pela adição do iniciador. Ela é acompanhada por uma reação exotérmica e seu desenvolvimento então ser seguido pela medição da temperatura do meio de reação.
[00135] O iniciador de polimerização é vantajosamente escolhido entre sistemas redox, por exemplo, usando combinações de um perssulfato de metal alcalino com N,N,N',N'-tetrametiletilenodiamina ou com dimetilaminopropionitrila, peróxidos orgânicos, tais como peróxidos de benzoíla ou mesmo 2,2'-azo-bis-isobutironitrila. A quantidade de iniciador usada é adaptada para a quantidade de monômeros e a taxa de polimerização solicitada. Polimerização pode ser realizada em massa ou em emulsão. No caso de uma polimerização em massa, a solução aquosa contendo os diferentes constituintes dissolvidos e o iniciador se submete a polimerização em um meio homogêneo. Isto torna possível estimar uma protuberância do gel aquoso que pode então ser separado nas microesferas passando, por exemplo, através da malha de uma tela. Em certas modalidades, um iniciador de polimerização é adicionado na fase aquosa antes da emulsificação quando o iniciador de polimerização inclui vários componentes (sistema redox).
[00136] As microesferas assim obtidas então podem ser recuperadas por refrigeração, decantação e filtração. Elas são então separadas pela categoria de tamanho e lavadas para eliminar qualquer traço de produto secundário.
[00137] O estágio de polimerização pode ser seguido por um estágio de reticulação do agente de adesão celular e possivelmente por um estágio de agente de marcação no caso de microesferas) foram identificáveis por enxerto depois da síntese. Por exemplo, em certas modalidades, polimerização de radical dos monômeros de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida, e N,N-metileno-bis-acrilamida é seguida por aquecimento em uma temperatura superior, tais como 37 °C, de maneira tal que a gelatina nas microesferas fica solúvel em água. Então, um reticulador, tal como glutaraldeído é usado para reticular a gelatina (por exemplo, cerca de 300 mL de glutaraldeído por cerca de 1 L das microesferas). Em certas modalidades, as microesferas são submetidas a sonicação antes da reticulação da gelatina.
[00138] Assim, em um aspecto, é aqui fornecido um método de preparar uma microesfera, compreendendo:, (a) preparar uma solução aquosa compreendendo um monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, um monômero de dietilaminoetilacrilamida, um monômero de N,N-metileno-bis- acrilamida, e gelatina, em que pelo menos um dos monômeros é um monômero ultra-puro; (b) adicionar a solução aquosa a uma fase orgânica líquida (por exemplo, um óleo, tais como um óleo mineral, tais como um óleo de parafina) que tem baixa miscibilidade em água, antes ou durante a agitação; produzindo assim microesferas compreendendo um copolímero compreendendo unidades de monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida e de N,N-metileno-bis-acrilamida; (c) opcionalmente submeter as microesferas à sonicação (por exemplo, ultrassonicação); e (d) reticular a gelatina. Subsequentemente, microesferas podem ser coletadas por filtração ou centrifugação e lavadas. Em certas modalidades, a solução aquosa dos monômeros pode conter agentes de adesão, tais como colágeno (gelatina é um colágeno desnaturado).
[00139] Em um outro aspecto, são aqui fornecidas microesferas preparadas por um processo compreendendo: (a) preparar uma solução aquosa compreendendo (i) um N-tris-hidroximetiletilacrilamida monômero, (ii) um monômero de dietilaminoetilacrilamida, (iii) um monômero de N,N-metileno- bis-acrilamida, e (iv) gelatina, em que o,monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, o monômero de dietilaminoetilacrilamida e/ou o monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida é um monômero ultra-puro; (b) adicionar a solução aquosa a uma fase orgânica líquida (por exemplo, um óleo, tais como um óleo mineral, tais como um óleo de parafina) que tem baixa miscibilidade em água, antes ou durante a agitação; produzindo assim microesferas compreendendo um copolímero compreendendo unidades de monômero de N-tris-hidroximetilmetilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida e N,N-metileno- bis-acrilamidas; (c) opcionalmente submeter as microesferas a sonicação (por exemplo, ultrassonicação); e (d) reticular a gelatina. Em algumas modalidades, a microesfera apresenta em um espectro de 'HNMR (por exemplo, conforme fornecido no exemplo 14), um primeiro pico (por exemplo, de cerca de 3,5 ppm a cerca de 4 ppm), um segundo pico (por exemplo, de cerca de 3 ppm a cerca de 3,5 ppm), e um terceiro pico (por exemplo, de cerca de 1 ppm a cerca de 1,5 ppm). Em modalidades específicas, a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico é cerca de 0,50 a cerca de 0,65 e/ou a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico é cerca de 0,55 a cerca de 0,75 (por exemplo, cerca de 0,61 a cerca de 0,75). Em certas modalidades, as microesferas têm um tamanho uniforme. Em outras modalidades, as microesferas têm um diâmetro de cerca de 1 pm a 2000 pm, de 40 pm a cerca de 120 pm, de cerca de 100 pm a cerca de 300 pm, de cerca de 300 pm a cerca de 500 pm, de cerca de 500 ptm a cerca de 700 pm, de cerca de 700 pm a cerca de 900 pm, ou de cerca de 900 pm a cerca de 1200 pm. Em modalidades específicas, menos que 1 % das microesferas são microesferas agregadas (pegajosas).
[00140] Também é aqui fornecido um método de preparar microesfera ultra-pura compreendendo cerca de 10 % ou menos, 9 % ou menos, 8 % ou menos, 7 % ou menos, 6 % ou menos, 5 % ou menos, 4 % ou menos, 3 % ou menos, 2 % ou menos que ou 1 % ou menos que das impurezas e/ou compreende 90 % ou mais, 91 % ou mais, 92 % ou mais, 93 % ou mais, 94 % ou mais, 95 % ou mais, 96 % ou mais, 97 % ou mais, 98 % ou mais ou 99 % ou mais em peso de um monômero ultra-puro de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, um monômero de dietilaminoetilacrilamida ultra-puro, um monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida ultra-puro, e gelatina, por polimerização por suspensão, por exemplo (a) preparando uma solução aquosa, compreendendo (i) um monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, (ii) um monômero de dietilaminoetilacrilamida; (iii) um monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida, e (iv) gelatina, um, dois ou três dos monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida e/ou o monômero de dietilaminoetilacrilamida ou N,N-metileno-bis-acrilamida é um monômero ultra-puro; (b) adicionar a solução aquosa a uma fase orgânica líquida (por exemplo, um óleo, tais como um óleo mineral, tais como um óleo de parafina) que tem baixa miscibilidade em água, antes ou durante a agitação produzindo assim microesferas compreendendo um copolímero compreendendo unidades de monômero de N-tris-hidroximetilmetilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida e N,N-metileno-bis-acrilamida; (c) opcionalmente submeter as microesferas a ultrassonicação; e (d) reticular a gelatina. Também são aqui fornecidas microesferas ultra-puras compreendendo as respectivas unidades de monômero preparadas por este processo.
[00141] Em certas modalidades dos vários métodos aqui fornecidos, a solução aquosa é adicionada por meio de um anel de alimentação à fase orgânica líquida.
[00142] Em algumas modalidades dos métodos aqui fornecidos, o método ainda compreende peneirar as microesferas (por exemplo, para calibração por tamanho e/ou redução do número das microesferas agregadas em uma população das microesferas). Em outras modalidades, o método não compreende submeter as microesferas a uma ou mais rodadas de peneiração (por exemplo, para calibração por tamanho e/ou redução do número das microesferas agregadas em uma população das microesferas).
[00143] Em modalidades específicas, os métodos aqui fornecidos compreendem submeter as microesferas a sonicação (por exemplo, ultrassonicação). Em certas modalidades, a sonicação é feita em um banho ultrassónico, por exemplo, por de cerca de. 10 minutos a cerca de 15 minutos. Em modalidades específicas, o monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida compreende menos que 9 % de impurezas e/ou o monômero de dietilaminoetilacrilamida compreende menos que 2 % das impurezas.
[00144] Em certas modalidades dos métodos aqui fornecidos, o uso de um ou mais de monômeros ultra-puros de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida e N,N-metileno-bis-acrilamida aqui fornecidos resulta em um rendimento superior de produto de microesfera comparado a um método que não usa um ou mais monômeros ultra-puros.
[00145] Em outras modalidades dos métodos aqui fornecidos, o uso de um ou mais dos monômeros ultra-puros de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida e N,N-metileno-bis-acrilamidas aqui fornecidos result em uma distribuição de tamanho mais estreita das microesferas produzidas comparado a um método que não usa um ou mais monômeros ultra-puros.
[00146] Em outras modalidades dos métodos aqui fornecidos, o uso de um ou mais dos monômeros ultra-puros de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida e N,N-metileno-bis-acrilamida aqui fornecidos resulta em um aumento na eficiência de polimerização (por exemplo, em que mais do monômero é incorporado no polímero e/ou melhor eficiência de reticulação) comparado à mesma microesfera preparada sem um ou mais monômeros ultra-puros.
[00147] Em uma outra modalidade dos métodos aqui fornecidos, o uso de um ou mais dos monômeros ultra-puros de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida e N,N-metileno-bis-acrilamidas aqui fornecidos resulta em um aumento no ponto de gel comparado à mesma microesfera preparada sem um ou mais monômeros ultra-puros. O maior ponto de gel pode resultar em uma reação de polimerização mais rápida, que pode ainda levar a uma diminuição no número das microesferas agregadas em uma população. Métodos para estimar o ponto de gel nas reações de polimerização são conhecidos na tecnologia (ver, por exemplo, Nita et al. (2007) Rheol. Acta 46, 595-600).
[00148] Ainda em outras modalidades dos métodos aqui fornecidos, o uso de um ou mais dos monômeros ultra-puros de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida e N,N-metileno-bis-acrilamida aqui fornecidos resulta em uma melhora no processo de fabricação geral das microesferas, que pode levar a uma melhora no rendimento e/ou qualidade geral das microesferas (por exemplo, menos microesferas quebradas e/ou agregadas), um produto mais consistente, melhor uniformidade de tamanho, distribuição de tamanho mais estreita; melhor uniformidade na forma, ou qualquer combinação destes, comparado à mesma microesfera preparada sem um ou mais monômeros ultra-puros.
1. Processo de anel de alimentação
[00149] Em certas modalidades, as microesferas aqui fornecidas são produzidas usando equipamento de anel de alimentação (por exemplo, mostrado na figura 6) durante a etapa de adicionar a solução aquosa a uma fase orgânica líquida (por exemplo, um óleo, tais como um óleo mineral, tais como um óleo de parafina) que tem baixa miscibilidade em água, antes ou durante a agitação (por exemplo, em step (b) em certos métodos aqui fornecidos), o processo de anel de alimentação pode ser usado ainda para melhorar a qualidade das microesferas produzidas, por exemplo, removendo algumas das reações laterais que levam a encapsulação das microesferas, encapsulação do óleo e/ou limitação do número de esferas quebradas em uma população.
[00150] Em uma modalidade ilustrativa, equipamento de anel de alimentação pode compreender um misturador estático. Em uma modalidade, o misturador estático compreende um eixo longitudinal e um pente tendo uma pluralidade de anéis espaçados que se estendem para for a de um leito transversal conectado ao eixo longitudinal. Em algumas modalidades, o equipamento de anel de alimentação é conectado a uma ou mais bombas. Em uma modalidade, uma ou mais bombas compreende uma primeira bomba (por exemplo, bomba Q2) e uma segunda bomba (por exemplo, bomba RHO). Em certas modalidades, a solução aquosa compreendendo, por exemplo, monômeros (por exemplo, monômeros de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida, e N,N-metileno-bis-acrilamida) e/ou gelatina é filtrada e colocada em agitação. Em algumas modalidades, a agitação é feita em uma temperatura de cerca de 25 °C a cerca de .80 °C, tais como cerca de 40 °C a cerca de 70 °C. Em algumas modalidades, a agitação é feita em uma temperatura de cerca de 25 °C; 40 °C, 50 °C, 55 °C, 60 °C, 65 °C ou 70 °C, ou qualquer faixa desta. Em uma modalidade específica, a agitação é feita em uma temperatura de cerca de 60 °C. Em certas modalidades, a solução aquosa compreendenda microesfera monômeros e gelatina é através da primeira bomba no equipamento de anel de alimentação colocado em uma solução compreendendo um óleo, tais como óleo mineral (por exemplo, óleo de parafina), e um emulsificante, tais como um sesquioleato de sorbitano (por exemplo, Arlacel 83; ou produto similar). Em certas modalidades, o emulsificante (por exemplo, sesquioleato de sorbitano) é em uma concentração de cerca de 0,01 g/L a cerca de 1 g/L, tais como de cerca de 0,02 g/L a cerca de 0,5 g/L, ou de cerca de 0,03, g/L a cerca de 0,3 g/L em óleo. Em uma modalidade, o emulsificante (por exemplo, sesquioleato de sorbitano) é a uma concentração de cerca de 0,031 g/L em óleo (por exemplo, 3,1 g (ou 3 ml) de Arlacel em 4 litros de óleo). Em certas modalidades, a solução ainda compreende N,N,N',N'-tetrametiletilenodiamina (TEMED).
[00151] Em certas modalidades, uma solução de perssulfato de amónio aquosa é preparada e injetada através da segunda bomba no equipamento de anel de alimentação colocado em uma solução compreendendo um emulsificante (por exemplo, sesquioleato de sorbitano). Em uma modalidade, o monômero/gelatina solução e amónio persulfate solução são simultaneamente injetadas através da primeira bomba e segunda bomba, respectivamente, no equipamento de anel de alimentação. Em algumas modalidades, o perssulfato de amónio é a uma concentração de cerca de 0,01 g/mL a cerca de 1 g/mL, tais como de cerca de 0,02 g/mL a cerca de 0,5 g/mL, ou de cerca de 0,03 g/mL a cerca de 0,3 g/mL em água. Em uma modalidade, a solução de perssulfato de amónio aquosa é a uma concentração de cerca de 0,034 g/mL em água (por exemplo, 3,5 g de perssulfato de amónio em 101,6 g de água). Em algumas modalidades, o uso do processo de anel de alimentação resulta em menor encapsulação de óleo das microesferas, menores números de partículas pequenas formadas em maiores partículas e/ou menos microesferas quebradas.
2. Sonicação
[00152] Em certas modalidades, as microesferas aqui fornecidas são opcionalmente submetidas a sonicação (particularmente ultrassonicação). Em modalidades específicas, as microesferas são submetidas a sonicação (por exemplo, ultrassonicação) antes, durante ou depois da reticulação da gelatina. Em uma modalidade, microesferas aqui fornecidas são submetidas a sonicação (por exemplo, ultrassonicação) antes da reticulação da gelatina. Sonicação (por exemplo, ultrassonicação) pode ser usada para quebrar as interações entre microesferas e reduzir a porcentagem de microesferas pegajosas presente na população de microesfera. O resultado de uma etapa de sonicação como esta pode resultar em maior eficiência na produção de microesferas não pegajosas (isto é, redução da quantidade das microesferas agregadas) e um meio mais barato de produzir microesferas reduzindo a necessidade de (ou número de) uma ou mais rodadas de peneiramento em um esforço de eliminar as microesferas pegajosas de uma dada população de microesferas.
[00153] Qualquer gerador de ultrassom pode ser usado em combinação com um ou mais dos processos ou métodos de preparar as microesferas aqui fornecidas. Em certas modalidades, a sonicação é realizada usando um sonicador, por exemplo, um banho ultrassónico, sonda ultrassónica ou processador ultrassónico. Em uma modalidade, a sonicação é realizada usando um banho ultrassónico. Em algumas modalidades, a sonicação é reslizada uma vez. Em outras modalidades, a sonicação é realizada mais de uma vez. Em certas modalidades, a sonicação é realizada em uma frequência de cerca de 20 kHz a cerca de 200 kHz, tais como de cerca de 30 kHz a cerca de 100 kHz, ou de cerca de 35 kHz a cerca de 70 kHz. Em algumas modalidades, a sonicação é realizada em uma frequência de cerca de 35 kHz, 40 kHz, 45 kHz, 50 kHz, 55 kHz, 60 kHz, 65 kHz, ou cerca de 70 kHz, ou qualquer faixa desta. Em uma modalidade, a sonicação é realizada em uma frequência de cerca de 35 kHz. Em certas modalidades, a sonicação é realizada em uma temperatura de de cerca de 0 °C a cerca de 80 °C, tais como de cerca de i 0 °C a cerca de 50 °C, de cerca de 15 °C a cerca de 35 °C, de cerca de 20 °C a cerca de 25 °C (por exemplo, temperatura ambiente), ou de cerca de 0 °C a cerca de 5 °C (por exemplo, em gelo), ou qualquer faixa deste. Em certas modalidades, a sonicação é realizada em uma temperatura de cerca de 0 °C, 4 °C, 5 °C, 10 °C, 25 °C ou temperatura ambiente.
[00154] Em certas modalidades, a sonicação é feita por de cerca de 1 minuto a cerca de 60 minutos, tais como de cerca de 5 minutos a cerca de 40 minutos, ou de cerca de 10 minutos a cerca de 15 minutos, ou qualquer faixa deste. Em algumas modalidades, a sonicação é feita por cerca de 5, 10, 15, ou 20 minutos. Em uma modalidade, a sonicação é feita por cerca de 10 minutos ou cerca de 15 minutos. Os períodos de tempo anteriores podem refletir uma sonicação única, contínua ou múltiplas sonicações.
[00155] Em certas modalidades, a porcentagem de microesferas pegajosas (ou agregadas) presente depois da sonicação é de cerca de 0 % a cerca de 3 %, de cerca de 0 % a cerca de 2 %, de cerca de 0 % a cerca de 1,5 %, de cerca de 0 % a cerca de 1 %, ou de cerca de 0 % a cerca de 0,5 %, ou qualquer faixa deste. Em algumas modalidades, a porcentagem de esferas pegajosas presentes nas microesferas depois da sonicação é cerca de 0 %, cerca de 0,1 %, cerca de 0,2 %, cerca de 03 %, cerca de 0,4 %, cerca de 0,5 %, cerca de 0,6 %, cerca de 0,7 %, cerca de 0,8 %, cerca de 0,9 % ou cerca de 1 %. Em certas modalidades, nenhuma microesfera quebrada foi observada depois da sonicação.
[00156] Em algumas modalidades, microesferas aqui fornecidas preparadas usando sonicação (por exemplo ultrassonicação) resulta em uma melhora no processo de fabricação geral das microesferas (por exemplo, maior rendimento e/ou melhor custo), que pode levar a uma melhora na qualidade das microesferas (por exemplo, menos microesferas quebradas e/ou agregadas), um produto mais consistente (por exemplo, maior uniformidade no tamanho e/ou forma), ou uma combinação destes, comparado à mesma microesfera preparada sem usando ultrassonicação. Em modalidades específicas, microesferas aqui fornecidas preparadas usando sonicação (por exemplo ultrassonicação) resulta em rendimentos maiores que 30 %, maior que 35 %, maior que 40 %, maior que 50 %, maior que 55 %, maior que 60 % (ou superior) das microesferas de um lote preparado (ou população) das microesferas, que compreende 5 % ou menos, 4,5 % ou menos, 3,5 % ou menos, 3 % ou menos, 2,5 % ou menos, 2 % ou menos, 1,5 % ou menos, 1 % ou menos, 0,5 % ou menos, 0,4 % ou menos, 0,3 % ou menos, 0,25 % ou menos, 0,2 % ou menos que ou 0,1 % ou menos das microesferas agregadas.
[00157] Em uma modalidade, é aqui fornecido um método de preparar microesferas compreendendo: (a) preparar uma solução aquosa compreendendo: (i) um monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, (ii) um monômero de dietilaminoetilacrilamida, (iii) um monômero de N,N- metileno-his-acrilamida, e (iv) gelatina, em que o monômero de N-tris- hidroximetil metilacrilamida e/ou o monômero de dietilaminoetilacrilamida é um monômero ultra-puro; (b) adicionar a solução aquosa a uma fase orgânica líquida que tem baixa miscibilidade em água, antes ou durante a agitação; produzindo assim microesferas compreendendo um copolímero compreendendo uma unidade de monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, uma unidade de monômero de dietilaminoetilacrilamida e uma unidade de monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida; (c) opcionalmente submeter as microesferas a ultrassonicação; e (d) reticular a gelatina. Em algumas modalidades, a solução aquosa é adicionada por meio de um anel de alimentação na fase orgânica líquida. Em uma modalidade, o monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida compreende menos que 9 % das impurezas e/ou o monômero de dietilaminoetilacrilamida compreende menos que 2 % das impurezas. Em uma modalidade, as microesferas são ultra-pure microesferas. Em anoutras modalidades, as (i) as microesferas ultra-puras compreendem cerca de 1 0 % ou menos, 9 % ou menos, 8 % ou menos, 7 % ou menos, 6 % ou menos, 5 % ou menos, 4 % ou menos, 3 % ou menos, 2 % ou menos que ou 1 % ou menos que das impurezas (ii) as microesferas ultra-puras compreendem 90 % ou mais, 91 % ou mais, 92 % ou mais, 93 % ou mais, 94 % ou. more, 95 % ou mais, 96 % ou mais, 97 % ou mais, 98 % ou mais ou 99 % ou mais em peso da N-iris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida, N,N-metileno-bis-acrilamida e gelatina, ou (iii) uma combinação de (i) e (ii). Ainda em uma outra modalidade, o ultrassonicação é feita em um banho ultrassónico. Em certas modalidades, o método não compreende peneirar as microesferas.
[00158] Também são fornecidas aqui microesferas preparadas por qualquer um dos vários métodos aqui fornecidos. Em uma modalidade, as microesferas preparadas por estes métodos apresentam em um espectro de ^NMR, um primeiro pico de cerca de 3,5 ppm a cerca de 4 ppm, um segundo pico de cerca de 3 ppm a cerca de 3,5 ppm, e um terceiro pico de cerca de 1 ppm a cerca de 1,5 ppm; e em que (i) a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico é de 0,50 a cerca de 0,65, (ii) a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico é de 0,61 a cerca de 0,75, ou (iii.) uma combinação destes. Em uma modalidade, as microesferas têm um tamanho uniforme. Em uma outra modalidade, as microesferas têm um diâmetro de cerca de 1 pm a cerca de 2000 pm, de 40 pm a cerca de 1,20 pm, de cerca de 100 pm a cerca de 300 pm, de cerca de 300 pm a cerca de 500 pm, de cerca de 500 pm a cerca de 700 pm, de cerca de 700 pm a cerca de 900 pm, ou de cerca de 900 pm a cerca de 1200 pm. Em algumas modalidades, menos que 1 % das microesferas são as microesferas agregadas.
D. Método de uso
[00159] Em certas modalidades, as microesferas são flexíveis, mas não frágeis, de maneira tal que elas possam facilmente passar nos dispositivos de injeção e pequenos cateteres ou através deles sem ser permanentemente alterradas ou quebradas, mas as microesferas também são resistentes à tensão de contração muscular gerado durante e depois do processo de implantação. Em algumas modalidades, as microesferas são termicamente estáveis o que permite facilidade de esterilização conveniente e armazenamento em congelamento.
[00160] Assim, as microesferas aqui fornecidas têm uma ampla variedade de aplicações. Por exemplo, as microesferas aqui fornecidas podem ser usadas para embolização, engenharia genética de tecido, regeneração guiada do tecido, coleta celular in vivo, cultura ou diferenciação, distribuição e suspensão de materiais terapêuticos em tecidos humanos ou animais alvejados e/ou outras aplicações.
[00161] Qualquer uma das várias microesferas aqui fornecidas, ou preparadas por vários métodos aqui fornecidos, podem ser usadas em qualquer das várias modalidades de gerenciamento e tratamento de embolização e doença aqui fornecidas. Em uma modalidade, é fornecido um método de embolização em um paciente, compreendendo administrar ao paciente as microesferas aqui fornecidas. Em uma outra modalidade, é aqui fornecido um método de gerenciar ou tratar uma doença dependente da angiogênese em um paciente, compreendendo administrar ao paciente as microesferas aqui fornecidas. Em uma modalidade, a doença dependente da angiogênese é malformação arteriovenosa, fibróide uterina, ou hiperplasia prostática benigna. Em uma modalidade, a doença dependente da angiogênese é um câncer ou tumor, tais como um câncer ou tumor de fígado ou próstata.
1. Embolização
[00162] Existem inúmeros situações clínicas (por exemplo, hemorragia, desenvolvimento do tumor) onde é desejável reduzir ou abolir o suprimento de sangue para um órgão ou região. Conforme descrito com mais detalhes a seguir, isto pode ser realizado injetando as microesferas ou composições em um vaso sanguíneo desejado através de uma agulha ou cateter seletivamente posicionado, ou sob a orientação de uma câmara de raios X (por exemplo, um fluoróscopo). As microesferas ou composições movimentam por meio da corrente sanguínea até elas se tornarem acunhadas na vasculatura, por meio disso fechando fisicamente (ou quimicamente) o vaso sanguíneo. O fluxo sanguíneo reduzido ou abolido, para a área selecionada resulta em infarto (morte da célula em virtude de um suprimento inadequado de oxigênio e nutrientes) ou menor perda de sangue de um vaso danificado.
[00163] Assim, em certas modalidades, é provido aqui um método de embolização em um paciente ou paciente, compreendendo administrar ao paciente uma microesfera (microesferas) ou uma composição compreendendo a(s) microesfera(s). Em uma modalidade, são providos métodos para embolizar um vaso sanguíneo, compreendendo administrar ao vaso de um paciente ou paciente uma quantidade terapeuticamente efetiva das microesferas, de maneira tal que o vaso sanguíneo é efetivamente fechado. Em algumas modalidades, embolização pode ser realizada a fim de tratar ou prevenir condições de hemorragia excessiva. Terapia de embolização utilizando microesferas ou composições providas aqui pode também ser aplicada a uma variedade de outras situações clínicas onde é desejado fechar vasos sanguíneos, por exemplo, para hemorragia aguda, anormalidades vasculares, distúrbios do sistema nervoso central e hiperesplenismo.
[00164] No caso de más formações vasculares, tal como AVM ou fístulas arteriovenosas, oclusão vascular permite que o fluxo sanguíneo para os tecidos seja normalizado, ajuda em cirurgia e limita o risco de hemorragia. Em processos hemorrágicos, oclusão vascular produz uma redução de fluxo, que promove cicatrização da(s) abertura(s) arterial(s).
[00165] Embolização pode ser usada no tratamento de fibróides uterinas, hemorragia pós-parto e/pós-caesariana, hemorragia vaginal pós- cirúrgica, o prevenção e/ou tratamento de hemorragia de gravidez tópica, profilaticamente antes de miomectomia e em pacientes obstétricos com alto risco de hemorragia, tais como aqueles pacientes com placenta prévia, placenta acreta e morte fetal de gêmeos. Embolização pode também ser usada para parar hemorragia não controlada, ou para diminuir hemorragia antes ou durante cirurgia e para selar endovazamentos nos sacos de aneurisma.
[00166] Quaisquer das várias doenças ou distúrbios providos aqui, ou um sintoma destes, podem ser controlados, tratados ou prevenidos de acordo com os métodos providos aqui.
[00167] Além disso, dependendo das condições patológicas tratadas, embolização pode ser realizada com objetivos temporários bem como permanentes.
[00168] Embolização pode também ser usada em combinação com outros procedimentos clínicos, tais como angiografia. Por exemplo, um agente de contraste radio-opaco pode ser injetado na área a ser embolizada através de, por exemplo, um cateter inserido percutaneamente ou por cirurgia em um artéria ou veia a medida que é feita um x-raio. O vaso sanguíneo pode então ser embolizado refluxando microesferas providas aqui através do cateter, até ser observado cessar o fluxo. Oclusão pode ser confirmada repetindo o angiograma.
[00169] As microesferas providas aqui podem ser administradas (ou de outra forma colocadas em contato com) a um vaso sanguíneo, um tecido ou órgão (por exemplo, coração, rim, medula espinhal, útero, fígado ou pâncreas) por meios conhecidos na técnica. Em certas modalidades, as microesferas são administradas (por exemplo, por injeção) a um tecido ou órgão que tem mais que um suprimento de sangue, por exemplo, o fígado, pulmão, espinha dorsal, medula espinhal, útero ou pâncreas. Em certas modalidades, as microesferas são administradas ao coração, pulmão, sistema nervoso, cérebro, pulmão, fígado, útero ou pâncreas do paciente. Em algumas modalidades, as microesferas são administradas a um ou mais vasos sanguíneos, veias ou artérias compreendidos, no tecido ou órgão. Em certas modalidades, as microesferas providas aqui são usadas para contar isquemia na área alvejada, por exemplo, a área de administração ou injeção, tais como em ou próximo a um tecido ou órgão. Em algumas modalidades dos métodos providos aqui, as microesferas são administradas a um paciente por administração intraluminal ou injeção. Em outras modalidades dos métodos providos aqui, as microesferas são administradas a um paciente por administração intravascular ou injeção.
[00170] As microesferas pode ser distribuídas sistemicamente ou localmente ao vaso sanguíneo, tecido ou órgão desejado. Em algumas modalidades, as microesferas são administradas a um vaso sanguíneo, tecido ou órgão antes, durante ou depois de uma cirurgia. Em outras modalidades, as microesferas são distribuídas a um vaso sanguíneo, tecido ou órgão usando métodos não cirúrgicos, por exemplo, tanto localmente por injeção direta na área alvejada, a um sítio remoto e deixadas circular passivamente no sítio alvejado, quanto a um sítio remoto e ativamente direcionado ao sítio alvejado. Tais métodos de distribuição não cirúrgicos incluem, por exemplo, infusão ou administração intravascular (por exemplo, intravenoso ou intra-arterial), intramuscular, intraperitoneal, intratecal, intradémica ou subcutânea. Em certas modalidades, angiografia (por exemplo, angiografia seletiva ou angiografia superseletiva) é usada junto com embolização para avaliar o suprimento de sangue no tecido ou órgão. Em tais modalidades, um angiograma pode ser feito antes, durante, ou depois da embolização.
[00171] Doenças ou distúrbios providos aqui podem ser tratados ou de outra forma controlados administrando-se ao paciente (por exemplo, um paciente que necessita deste) uma quantidade terapeuticamente efetiva das microesferas ou uma composição provida aqui.
[00172] Em certas modalidades, a administração é realizada por injeção. Em certas modalidades, as microesferas são administradas por um cateter. Em outras modalidades, as microesferas são injetadas usando uma agulha anexada a uma seringa. Em algumas modalidades, a administração é em um vaso sanguíneo. Em outras modalidades, a administração é diretamente no sítio de ação, por exemplo, em uma massa de tumor, ou em uma célula, órgão ou tecido que exige tal tratamento ou administração. Em algumas modalidades, as microesferas são administradas em combinação com uma solução de medicamento ou outra terapia, em que a solução de medicamento ou outra terapia é administrada antes, simultaneamente ou depois da administração das microesferas.
[00173] Deve-se entender que os pacientes adequados para embolização com as microesferas providas aqui, incluem humanos e animais, incluindo bebês crianças e adultos, machos e fêmeas, incluindo os idosos. Em uma modalidade específica, o paciente tem o risco ou geralmente é acometido, de doenças hepatocelulares, tal como hepatite ou um câncer no fígado ou tumor, por exemplo, Caucasian ou Asian (por exemplo, incluindo, mas sem limitações, pessoas de herança Japonesa) pacientes humanos, de 18 a 75 anos de idade. Em algumas modalidades, os pacientes são de 25 a 75 anos de idade, de 25 a 50 anos de idade, de 50 a 75 anos de idade, ou de 18 a 25 anos de idade. Em uma modalidade, o paciente tem menos que 18 anos de idade (por exemplo, de 1 a 5 anos de idade, de 5 a 10 anos de idade, de 10 a 15 anos de idade ou de 15 a 18 anos de idade). Em uma outra modalidade, o paciente tem 75 anos de idade ou mais.
[00174] Em algumas modalidades, as microesferas providas aqui são usadas no tratamento, administração, ou prevenção de doença hepatocelular, ou um sintoma desta, em um paciente. Em uma modalidade, o paciente é classe Child-Pugh A. Em uma outra modalidade, o paciente é classe Child- Pugh B. Ainda em outras modalidades, o paciente é classe Child-Pugh C. A classificação Child-Pugh é bem conhecida na tecnologia, ver, por exemplo, Child and Turcotte (1964) Surgery and portal hipertension, in: The liver and portal hipertension (Editado por: Child CG). Philadelphia, Saunders 1964, SO- 64; que foi posteriormente modificado por Pugh et al. Transection of the esophagus in bleeding oesophageal varices (1973) Br. J. Surg. 60:648-652. Em algumas modalidades, o paciente é infectado com um vírus da hepatite C (HCV).
[00175] Microesferas e composições providas aqui podem também ser em combinação com medicamentos ou outras terapias. Por exemplo, as microesferas e composições podem ser usadas para tratar ou, de outra forma controlar tumores ou cânceres, (por exemplo, câncer de próstata ou no fígado), doenças inflamatórias ou outras doenças associadas com inflamação, ou um sintoma deste. Em outras modalidades, as microesferas e composições providas aqui podem ser usadas para tratar ou de outra forma controlar fibróides uterinas, ou um sintoma destes. Em outras modalidades, as microesferas e composições providas aqui podem ser usadas para tratar ou de outra forma controlar uma má formação vascular, tal como um AVM, ou um sintoma deste, ainda em outras modalidades, as microesferas e composições providas aqui podem ser usadas para tratar ou de outra forma controlar uma doença da próstata, tal como uma hiperplasia da próstata benigna, ou um sintoma desta.
[00176] Em certas modalidades, um medicamento ou outra terapia é administrado simultaneamente ao paciente em combinação com as microesferas providas aqui. Em algumas modalidades; um medicamento ou outra terapia é administrado ao paciente antes da administração de microesferas. Em certas modalidades, um medicamento ou outra terapia é administrado cerca de 1 minuto a cerca de 60 minutos antes da administração de microesferas. Em algumas modalidades, um medicamento ou outra terapia é administrado ao paciente em cerca de 1 minuto, cerca de 5 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 45 minutos ou cerca de 1 hora, cerca de 2 horas, cerca de 4 horas, cerca de 6 horas, cerca de 10 horas, cerca de 12 horas, cerca de 18 horas, cerca de 20 horas ou cerca de 24 horas de administração de microesferas. Ainda em outras modalidades, um medicamento ou outra terapia é administrado simultaneamente com microesferas. Em certas modalidades, microesferas são administradas ao paciente antes da administração de um medicamento ou outra terapia. Em certas modalidades, microesferas são administradas entre cerca de 1 minuto e cerca de 60 minutos antes da administração de um medicamento ou outra terapia. Em algumas modalidades, microesferas são administradas ao paciente em cerca de 1 minuto, cerca de 5 minutos, cerca de 10 minutos, cerca de 15 minutos, cerca de 20 minutos, cerca de 30 minutos, cerca de 45 minutos ou cerca de 1 hora, cerca de 2 horas, cerca de 4 horas, cerca de 6 horas, cerca de 10 horas, cerca de 12 horas, cerca de 18 horas, cerca de 20 horas ou cerca de 24 horas de administração de um medicamento ou outra terapia.
2. Doenças dependentes de angiogênese
[00177] Doenças dependentes de angiogênese (isto é, aquelas doenças que exigem ou induzem crescimento vascular) representam uma porção significante de todas as doenças para as quais tratamento médico é procurado. Tais doenças incluem, por exemplo, cânceres ou tumores (por exemplo, cânceres ou tumores de fígado, ou câncer ou tumores de próstata) e não doenças tumorigênicas dependentes de angiogênese.
[00178] Em certas modalidades, são providos aqui microesferas, composições e métodos adequados para tratar ou de outra forma controlar doenças dependentes de angiogênese, incluindo tumores ou outros cânceres, doenças não tumorigênicas dependentes de angiogênese, ou dor, tal como dor relacionada a presença de um tumor ou outro câncer, ou um sintoma desta. Em uma modalidade, são providos métodos para controlar ou tratar uma doença dependente de angiogênese em um paciente, compreendendo administrar ao paciente uma microesfera (microesferas) ou uma composição compreendendo a(s) microesfera(s). Em modalidades específicas, são providos métodos para controlar ou tratar uma doença dependente de angiogênese em um paciente compreendendo, por exemplo, administrar ao paciente uma microesfera (microesferas) ou uma composição compreendendo (s) microesfera(s).
[00179] Além de câncer, numerosas outras doenças não dependentes de angiogênese tumorigênicas que são caracterizadas pelo crescimento anormal de vasos sanguíneos podem também ser tratadas, tanto por meio de infrarregulação ou suprarregulação, quanto de outra forma controladas com as microesferas ou composições providas aqui. Exemplos representativos de tais doenças não tumorigênicas dependentes de angiogênese incluem, mas sem limitações, escaras hipertróficas e quelóides, retinopatia diabética proliferativa, artrite reumatóide, má formação arteriovenosa AVM) más formações linfangítica, más formações venosas, placas aterosclerótica, cicatrização de ferida atrasada, juntas hemofílicas, fraturas não união Klippel Trenaunay Syndrome, Parkes Weber Syndrome, Osler-Weber-Rendu Syndrone, Blue Rubber Bleb Syndrome, nervo cutâneo e subcutâneo, hemangiomas, leiomioma, adenomas, hamartomas, psoriase, granuloma piogênica, escleroderma, tracoma, menorragia, adesões vasculares, hiperplasia prostática benigna (BPI-1) e fibróides uterinas.
a.Cânceres ou Tumores
[00180] Em modalidades específicas, métodos são providos para controlar ou tratar um câncer ou tumor (por exemplo, um câncer ou tumor hipervascularizado) em um paciente compreendendo, por exemplo, administrar ao paciente uma microesfera (microesferas) ou uma composição compreendendo (s) microesfera(s). Tais cânceres incluem, mas sem limitações, (tanto anatomicamente quanto por sítio neoplástico primário), câncer do fígado, ovário, mama, rim, pulmão, pancreático, tireoide, próstata, uterino, de pele, tumores da cabeça e pescoço, tumores de mama, cérebro, ósseo, tecidos macios (tais como sarcoma, lipoma, histiocitoma fibroso maligno), sangue (tal como linfoma), sarcoma de Kaposi e formas superficiais de câncer da bexiga. Em certas modalidades, o método de tratamento ou administração pode ser o resultado de distribuição de medicamento localizado (ou sistêmico) em combinação com efeitos embólicos das microesferas (por exemplo, TACE).
[00181] Outras doenças e seus sintomas, contemplados para administração e tratamento com as composições e métodos providos aqui incluem, por exemplo, sem limitação, tumores associados com o fígado, rim, leucemia linfoblástica aguda, leucemia mielóide aguda, sarcoma de Ewing, carcinoma gestacional trofoblástico, doença de Hodgkin, linfoma de não Hodgkin, linfoma de Burkitt linfoma de grande célula difusa, linfoma misto folicular, linfoma linfoblástico, rabdomiosarcoma, carcinoma testicular, tumor de wilms, carcinoma anal, carcinoma de bexiga, carcinoma da mama, leucemia linfocítica crônica, leucemia mielogenosa crônica, leucemia da célula capilar, carcinoma da cabeça e pescoço, meningioma, neuro fibrosoma, angio fibrosoma, carcinoma do pulmão (pequena célula), mieloma múltiplo, linfoma de Não Hodgkin, linfoma folicular, carcinoma do ovário, tumores do cérebro (astrocitoma), carcinoma cervical, carcinoma coloretal, carcinoma hepatocelular, carcinoma grande hepatocelular humano, sarcoma de Kaposi, carcinoma de pulmão (não pequena célula), melanoma, carcinoma pancreático, carcinoma de próstata, sarcoma do tecido macio, carcinoma da mama, carcinoma coloretal (estágio II), tumores ósseos, sarcoma osteogênico, carcinoma do ovário, carcinoma testicular, ou suas combinações.
[00182] Terapia de embolização usando as microesferas ou composições, provida aqui pode ser utilizada em pelo menos três modos principais para assistir na administração de neoplasmas: (1) tratamento de tumores definitivos (normalmente benignos); (2) para embolização pró- operatória; e (3) para embolização poliativa. Resumidamente, tumores benignos podem algumas vezes ser prosperamente tratados por terapia de embolização sozinha. Exemplos de tais tumores incluem tumores simples de origem vascular (por exemplo, hemangiomas), tumores endócrinos tais como adenomas da paratireóide e tumores ósseos benignos.
[00183] Para outros tumores, (por exemplo, de nocarcinoma renal) embolização pró-operatória pode ser empregada horas ou dias antes da resseção cirúrgica a fim de reduzir perda de sangue operatória, que diminui a duração da operação e reduz o risco de disseminação de células malignas viáveis por manipulação cirúrgica do tumor, muitos tumores podem ser prosperamente embolizados pré-operatoriamente, incluindo por exemplo, tumores nasofaringeais, tumores glomus jugulares, meningiomas, quemodectomas e neuromas vagais.
[00184] Embolização usando as microesferas ou composições podem também ser utilizada como um modo de tratamento primário para malignidades inoperáveis, a fim de estender o tempo de sobrevivência de pacientes com doença avançada. Embolização pode produzir uma melhoria notável nas qualidades de vida de pacientes com tumores malignos aliviando sintomas desagradáveis tais como hemorragia, obstrução venosa compressão e traqueal. Os benefícios de embolização de tumor paliativo, em certas modalidades, pode ser visto em pacientes que sofrem dos efeitos humorais de tumores endócrinos malignos, em que metástase de tumores carcinóides e outros neoplasmas endócrinos tais como insulinomas e glucagonomas pode ser baixo crescimento e ainda assim causar grande aflição em virtude das síndromes endócrinas que ela produz. Em certas modalidades, terapia de embolização pode também ser usada durante cirurgia para remover um tumor ou massa vascular ou órgão canceroso, ou para prevenir ou melhorar a metástase.
[00185] Quimioembolização é uma combinação de quimioterapia e embolização ou emboloterapia; usada tipicamente para tratar câncer. Similarmente, radioembolização é uma combinação de terapia de radiação e embolização ou emboloterapia. Em certas modalidades, as microesferas providas aqui podem ser injetadas em uma área alvejada como uma terapia autônoma ou com os propósitos de intercalação entre microesferas terapêuticas terminais para permitir migração gradual das microesferas no suprimento de sangue do tumor, fornecendo ao mesmo tempo perfusão/fluxo sanguíneo contínuo no tumor alvejado. A adição de produtos quimioterapêuticos na matriz da microesfera pode aumentar a eficácia da terapia melhorando o tempo de exposição de terapia com o efeito embólico terminal das microesferas.
[00186] Uma ampla variedade de cânceres ou tumores pode ser embolizada utilizando uma composição de microesfera provida aqui. Resumidamente, tumores são tipicamente divididos em duas classes: benigna e maligna. Em um tumor benigno, as células podem reter seus recursos diferenciados e não se dividem de uma maneira completamente descontrolada. Além do mais, o tumor é localizado e não metastático. Em um tumor maligno, as células podem se tornar não diferenciadas, não respondem ao crescimento e sinais hormonais do corpo e se multiplicam de uma maneira descontrolada; o tumor é invasivo e capaz de se espalhar para sítios distantes (espalhando por metástase). Tanto tumores benignos quanto malignos podem ser embolizados, tratados, controlados, prevenidos ou melhorados usando as microesferas providas aqui.
[00187] Em certas modalidades, também providos aqui são métodos de controlar ou tratar tumores secundários (por exemplo, tumores hepáticos secundários) usando as microesferas ou composições providas aqui. Um tumor secundário, ou metástase, é um tumor que originou em outra parte no corpo mas se espalhou subsequentemente para um órgão distante. As vias comuns para metástase são crescimento direto nas estruturas adjacentes, espalhamento através dos sistemas vasculares ou linfáticos e rastreamento junto aos tecidos planos e espaços do corpo (fluido peritoneal, fluido cerebrospinal, etc.).
[00188] Em outras modalidades dos métodos providos aqui, terapia de embolização pode ser usada durante cirurgia para remover um tumor ou massa vascular ou órgão canceroso. Adicionalmente, terapia de embolização terapêutica pode ser usada para tratar, controlar, prevenir ou melhorar a metástase.
[00189] Em certas modalidades, vasos sanguíneos que nutrem um tumor são deliberadamente bloqueados por injeção de um material embólico no vaso. Notavelmente, no caso de tumores, métodos de oclusão vascular providos aqui podem ser usados para suprir dor, limitar a perda de sangue na intervenção cirúrgica para continuar a embolização, ou mesmo levara a uma necrose tumoral e evitar uma operação.
i. Cânceres ou tumores do fígado
[00190] Em certas modalidades; cânceres ou tumores do fígado podem ser tratados ou controlados utilizando os métodos compreendendo administrar as microesferas ou composições ao paciente. Exemplos representativos de tumores hepáticos benignos incluem adenoma hepatocelular, hemangioma cavernosa e hiperplasia nodular focal. Outros tumores benignos, que são mais raros e frequentemente não têm manifestações clínicas, podem também ser tratados. Essses incluem adenomas do duto biliar, cistadenomas do duto biliar, fibromas, lipomas, leiomiomas, mesoteliomas, teratomas, mixomas; e hiperplasia regenerativa nodular.
[00191] Tumores hepáticos malignos podem ser subdivididos em duas categorias: primária e secundária. Tumores primários surgem diretamente a partir do tecido no qual eles são encontrados. Assim, um tumor de fígado primário é derivado originalmente das células que constituem o tecido do fígado (tais como células hepatócitas e biliares). Exemplos representativos de malignidades hepáticas primárias incluem hepatocelularcarcinoma, colangioearcinoma, angiosarcoma, cistadenoearcinoma, carcinoma da célula escamosa e hepatoblastoma. Malignidades hepáticas, ou seus sintomas, podem ser tratados ou de outra forma controlados, por exemplo, usando as composições e métodos providos aqui.
[00192] Embolização arterial pode ser feita, por exemplo, injetando microesferas através de um pequeno tubo, ou cateter, enfiado na artéria hepática. Por exemplo, um cateter pode ser inserido por meio da artéria femoral ou branquial e avançado na artéria hepática direcionando-o através do sistema arterial sob controle fluoroscópico. O cateter pode ser avançado na árvore arterial hepática o máximo necessário para permitir bloqueio completo dos vasos sanguíneos que suprem o(s) tumor(s), poupando ao mesmo tempo ao máximo possível as ramificações arteriais que suprem as estruturas normais. Isto pode ser, por exemplo, uma ramificação segmentai da artéria hepática, mas pode ser que toda a artéria hepática distal com a origem da artéria gastroduodenal, ou mesmo múltiplas artérias separadas, precisem ser bloqueadas dependendo da extensão de tumor e seu suprimento de sangue individual. Uma vez a posição desejada do cateter é obtida, a artéria pode ser embolizada injetando composições terapêuticas anti-angiogênicas (por exemplo, microesferas providas aqui e opcionalmente uma ou mais terapias adicionais) através do cateter arterial até o fluxo na artéria que precisa ser bloqueada cesse, tal como depois de observação por 5 minutos. Oclusão da artéria pode ser confirmada injetando contraste radiopaco através do cateter e demonstrando por fluoroscopia ou filme de raios x que o vaso que foi previamente cheio com contraste não está mais. O mesmo procedimento pode ser repetido com cada artéria de alimentação a ser fechada.
[00193] A artéria hepática é a fonte principal de sangue para a maioria dos tumores do fígado e assim, microesferas podem bloquear o fluxo de sangue para o tumor, privando-o dos nutrientes e oxigênio que ele precisa para sobreviver. De uma maneira similar, embolização arterial pode ser realizada em uma variedade de outras condições, incluindo, por exemplo, sem limitação, hemorragia aguda, anormalidades vasculares, sistema nervoso central, distúrbios e hiperesplenismo. Em certas modalidades, quimioemabolização transarterial (TACE) e embolização transarterial (TAE) podem ser realizadas para tratar cânceres ou tumores do fígado. TACE é uma terapia de combinação de TAE e quimioterapia regional, que refere-se a um procedimento de radiologia intervencionai que envolve ganhar acesso percutâneo para a artéria hepática, normalmente puncionando a artéria femoral comum na virilha direita e passando um cateter através da aorta abdominal, através do eixo celíaco e artéria hepática comum, na artéria hepática própria (que supre o fígado).
[00194] Obstrução arterial seletiva pode induzir necrose de tumor isquêmico minimizando ao mesmo tempo dano ao tecido do fígado. O suprimento de sangue para o tecido do fígado é mantido ainda por fluxo sanguíneo dominante da veia portal minimizando dano ao fígado. Além do mais, agentes quimioterapêuticos administrados concomitantemente permanecem em um tumor para um período maior em concentrações mais altas. A emboloterapia interrompe o fluxo sanguíneo arterial para um tumor e previne lavagem dos agentes quimioterapêuticos injetados de um tumor.
[00195] TACE pode derivar seu efeito benéfico de dois modos. Uma vez que a maioria dos tumores é suprida pela artéria hepática, embolização arterial interrompe seu suprimento de sangue e adia o crescimento até ser substituído por neovascularidade. Adicionalmente, administração focada na quimioterapia permite uma dose maior para o tecido reduzindo simultaneamente a exposição sistêmica, que é tipicamente o fator de limitação da dose. Este efeito é potencializado pelo fato de que o medicamento quimioterapêutico não é lavado fora do leito do tumor depois da embolização. Assim, a combinação de emboloterapia e quimioterapia regional tem efeitos anti-tumor sinergisticos com um alta taxa de resposta objetiva. Um outro benefício adicionado é que o uso de terapia de combinação resulta em níveis mais baixos de medicamento sistêmico e portanto menos toxicidade.
[00196] Em certas modalidades, também providos aqui são métodos de controlar ou tratar tumores hepáticos secundários usando as microesferas ou composições providas aqui. Tumores hepáticos secundários são uma causa de morte mais comum no paciente de câncer e são de longe a forma mais comum de tumor do fígado. Embora virtualmente, qualquer malignância pode metastatizar no fígado, tumores que são muito prováveis de espalhar no fígado incluem: câncer de estômago, cólon e pâncreas; melanoma; tumores do pulmão, orofaringe e bexiga; linfoma de Hodgkin e não Hodgkin; tumores da mama, ovário e próstata. Cada um dos tumores primários supramencionado tem numerosos tipos de tumor diferentes que podem ser tratados por embolização arterial (por exemplo, sem limitação, existem notadamente mais de 32 diferentes tipos de câncer de ovário).
ii. cânceres ou tumores da próstata
[00197] Em certas modalidades, são providos métodos para controlar ou tratar cânceres ou tumores da próstata, ou um sintoma destes, usando microesferas ou composições providas aqui.
[00198] Em algumas modalidades, as microesferas ou composições são administradas a uma área adjacente à próstata, tal como, a artéria prostática. Por exemplo, mas sem limitações, as microesferas ou composições podem ser distribuídas a um vaso sanguíneo que nutre o câncer da próstata.
[00199] A administração de microesferas ou composições pode ser conduzida por meio de uma seringa, um cateter, uma agulha e outro dispositivo para injetar ou infundir. A seringa, o cateter, a agulha ou similares podem ser inseridos em uma veia ou uma artéria, por exemplo, a artéria femoral ou a artéria de vesícula inferior.
[00200] Em certas modalidades, uma seringa, um cateter, ou uma agulha é avançado, por exemplo, no óstio das artérias da próstata e em uma modalidade, avançado o quanto necessário para permitir bloqueio completo dos vasos sanguíneos que suprem um câncer da próstata, poupando ao mesmo tempo ao máximo possível as ramificações arteriais que suprem as estruturas normais.
[00201] Em algumas modalidades dos métodos providos aqui, aniografia da área a ser embolizada é realizada antes da embolização. O vaso sanguíneo é então embolizado refluxando um material embólico provido aqui através de um cateter previamente colocado, até ser observado que o fluxo cessou. O cateter pode ser inserido tanto percutaneamente quanto por cirurgia. Oclusão pode ser confirmada repetindo o angiograma.
b. Má formação arteriovenosa
[00202] Em modalidades específicas adicionais, são providos métodos para controlar ou tratar má formação arteriovenosa ou um sintoma destes em um paciente compreendendo, por exemplo, administrar ao paciente uma microesfera (microesferas) ou uma composição compreendendo a(s) microesfera(s) para fechar as artérias ou veias para corrigir a má formação arteriovenosa. Em uma modalidade, a má formação arteriovenosa pode ser tratada inserindo um cateter por meio da artéria femoral ou branquial e avançando-o na artéria de alimentação sob controle fluoroscópico. O cateter pode ser avançado o tanto quanto necessário para permitir bloqueio completo dos vasos sanguíneos que suprem a má formação vascular, poupando ao máximo possível as ramificações arteriais que suprem as estruturas normais (idealmente isto será uma artéria única, mas mais frequentemente múltiplas artérias separadas podem precisar ser fechadas, dependendo da extensão da má formação vascular e seu suprimento de sangue individual). Uma vez a posição desejada do cateter é obtida, cada artéria pode ser embolizada utilizando as microesferas ou composições providas aqui.
c.Fibróides uterinas
[00203] Em modalidades específicas adicionais, são providos métodos para controlar ou tratar fibróides uterinas ou um sintoma destes, por exemplo, usando embolização de fibróide uterina. (UFE) ou embolização artéria uterina (UAE). A causa de fibróides uterinas é desconhecida. Entretanto, elas causam comumente hemorragia menstrual pesada, dor na região pélvica e pressão na bexiga ou intestino.
[00204] Em certas modalidades, embolização (tal como UFE) usando as microesferas e composições providas aqui pode ser realizada a fim de tratar condições de hemorragia excessiva, incluindo hemorragia excessiva associada com fibróides uterinas. Por exemplo, menorragia (hemorragia excessiva com menstruação) pode ser facilmente tratada por embolização de artérias uterinas (por exemplo, ramificações das artérias ilíacas internas bilateralmente). Em certas modalidades, as composições e métodos providos aqui são usados para controlar ou tratar sintomas de fibróides uterinas, tais como hemorragia menstrual pesada, dor pélvica ou pressão e/ou disfunção urinária.
[00205] Em algumas modalidades, um cateter pode ser inserido por meio da artéria femoral ou branquial e avançado em cada artéria uterina por direcionando-o através do sistema arterial sob o controle de uma câmara de raios X (por exemplo, um fluoróscopo). Em certas modalidades, o cateter pode ser avançado o tanto quanto necessário para permitir bloqueio completo dos vasos sanguíneos no útero, poupando ao mesmo tempo o máximo possível ramificações arteriais que surgem da artéria uterina e suprem as estruturas normais. Em certas modalidades, uma artéria uterina única em cada lado pode ser embolizada, mas ocasionalmente múltiplas artérias separadas podem precisar ser bloqueadas dependendo do suprimento de sangue individual. Uma vez que a posição desejada do cateter é obtida, cada artéria pode ser embolizada por administração das microesferas e composições conforme descrito anteriormente. As microesferas administradas bloqueiam as artérias que fornecem fluxo sanguíneo, fazendo com que as fibróides se encolham e aliviando os sintomas de mulher com fibróides: Em certas modalidades, UAE pode também ser usada para parar hemorragia pélvica grave causada, por exemplo, por trauma, tumores ginecológicos malignas ou hemorragia depois parto.
d. Hiperplasia prostática benigna
[00206] Em modalidades específicas adicionais, são providos métodos para controlar ou tratar hiperplasia prostática benigna (BPH) ou um sintoma desta. Os sintomas urinários obstrutivos mais frequentes são hesitação, diminuição na corrente urinária, intermitência, sensação de esvaziamento incompleto, frequência e urgência noturna.
[00207] Em certas modalidades, a administração ou tratamento de BPH pode ser realizado por embolização tal como embolização da artéria prostática (PAE) ou embolização arterial transcateter (TAE) usando as microesferas e composições providas aqui.
[00208] Em algumas modalidades, um cateter (por exemplo, um microcateter) pode ser inserido nas artérias de vesícula direita e/ou esquerda inferior sob o controle de uma câmara de raios X (por exemplo, um fluoróscopo). Em certas modalidades, o cateter pode ser avançado o tanto quanto necessário para permitir bloqueio completo dos vasos sanguíneos na próstata, poupando ao mesmo tempo o máximo possível de ramificações arteriais que surgem da artéria da próstata e supre as estruturas normais.
[00209] Em certas modalidades, angiografia (por exemplo, angiografia pélvica inicial ou angiografia de subtração digital seletiva) pode ser usada junto com embolização para avaliar os vasos ilíacos e artérias da próstata durante as fases arteriais e tardias, ou para avaliar o suprimento de sangue para a próstata. Uma vez que a posição desejada do cateter é obtida, cada artéria pode ser embolizada por administração das microesferas e composições conforme descrito anteriormente. As microesferas administradas podem bloquear as artérias que fornecem fluxo sanguíneo, reduzindo o tamanho da próstata e aliviando os sintomas de BPH. Em certas modalidades, embolização pode também ser usada para controlar hemorragia massiva depois prostatectomia ou bióposia da próstata.
3.Formação de imagem de diagnóstico
[00210] Conforme discutido anteriormente, as microesferas providas aqui podem ser usadas junto com formação de imagem de diagnóstico, formação de imagem terapêutico e distribuição de medicamento terapêutico, incluindo, por exemplo, ultrassom (US), formação de imagem por ressonância magnética (1), ressonância magnética nuclear (RNM), tomografia computadorizada (CT), ressonância do spin do elétron (ESR), formação de imagem médico nuclear, formação de imagem ótico, elastografia, distribuição de medicamento com ultrassom, radiofrequência (RF) e laser de micro-ondas.
[00211] Em certas modalidades, as microesferas providas aqui são fluoroscopicamente visíveis. Ou seja, em algumas modalidades, as microesferas são carregadas com, associadas com, ou de outra forma contêm um ou mais agentes de contraste adequados, tal como um agente de contraste iônico ou não iônico.
[00212] Em algumas modalidades, as microesferas providas aqui compreendem um agente de contraste não iônico. O agente de contraste pode ser carregado na microesfera, associado com a microesfera, absorvido, adsorvido por ou de outra forma contido em ou na microesfera. Altemativamente, o agente de contraste é uma solução carreadora para a microesfera. Em modalidades específicas, o agente de contraste, tal como um agente de contraste não iônico, é carregado na microesfera (por exemplo, misturando ou de outra forma colocando em contato o agente de contraste com as microesferas). Em outras modalidades, as microesferas não compreendem um agente de contraste, tal como um agente de contraste não iônico.
[00213] Os agentes de contraste não iônicos podem ser um raio X, CT, agente de contraste MRI, ou uma combinação destes, o agente de contraste pode ser paramagnético ou superparamagnético. Em algumas modalidades, o agente de contraste é um agente de contraste de raios X (também referido como agente fluoroscópico ou radio-opaco) ou um agente de contraste CT. Em certas modalidades, o agente contém iodo. Os agentes de contraste não iônicos podem ser monomérico, dimérico, ou polimérico.
[00214] Exemplos de agentes de contraste não iônicos incluem, mas sem limitações, metrizamida, iopamidol (Isovue™ ou lopamiron™), iodixanol (Visipaque™), ioexol (Otnnipaque™), iopromida (Ultravist™), iobtiridol, iomeprol, iopentol, iopamiron, ioxilan, iotrolari, gadodiamida, gadoteridol, iotrol, ioversol (Optiraio™) ou suas combinações. Em certas modalidades, o agente de contraste é iopamidol. Em modalidades específicas, agente de contraste não iônico isiodixanol, ioexal, iopromida, ou ioversol. Em uma outra modalidade, o agente de contraste não iônico é gadodiamida ou gadoteridol.
[00215] Exemplos adicionais de agentes de contraste adequados para uso em combinação com os presentes materiais estabilizantes incluem radicais livres estáveis, tais como, nitróxidos estáveis, bem como compostos compreendendo elementos de transição, latanídeo e actinídeo, que podem, se desejado, ser na forma de um sal ou pode ser covalentemente ou não covalentemente ligados aos agentes complexantes, incluindo derivados lipofílicos desses, ou to macromoléculas proteináceas. Os elementos de transição, latanídeo e actinídeo podem incluir, por exemplo, Gd(III), Mn(II), Cu(II), Cr(III), Fe(II), Fe(lll), Co(II), Er(II), Ni(II), Eu(III) e Dy(III). Em algumas modalidades, o elementos são Gd(III), Mn(Il), Cu(ll), Fe(II), Fc(Ill), Eu(III) e Dy(III). Os elementos anteriores podem ser na forma de um sal, incluindo sais inorgânicos, tal como um sal de manganês, por exemplo, cloreto de manganês, carbonato de manganês, acetato de manganês e sais orgânicos, tais como gluconato de manganês e hidroxilapatita de manganês. Outros sais exemplares incluem sais de ferro, tais como sulfatos de ferro e sais férricos, tal como cloreto férrico.
[00216] Os elementos anteriores podem também ser ligados, por exemplo, através de associação covalente ou não covalente, a agentes complexantes, incluindo derivados lipofílicos desses, ou a macromoléculas proteináceas. Agentes complexantes podem incluir, por exemplo, ácido dietilenotriaminapenta-acético (DTPA), ácido etilenodiaminatetraacético (EDTA), ácido 1,4,7,10-tetra-azaciclododecano-N,N',N',N"'-tetra-acético (DOTA), ácido l,4,7,10-tetraazaciclododecano-N,N',N"-triacético (DOTA), ácido 3,6,9-triaza-12-oxa-3,6,9-tricarboximetileno-10-carbóxi-13- fenilridecanóico (B-19036), ácido hidroxibenziletilenodiamina diacético (HBED), N,N'-bis(piridoxil-5-fosfato)etileno diamina, N,N'-diacetato (DPDP), ácido l,4,7-triazaciclononano-N,N';N"-triacético (NOTA), ácido l,4,8,ll-tetra-azaciclotetradecano-N,N',N",N'-tetra-acético (TETA), criptantes (complexos macrocíclicos) e desferrioxamina. Em algumas modalidades, os agentes complexantes são EDTA, DTPA, DOTA, DO3A e criptantes, tal como DTPA. Complexos lipofílicos podem incluir derivados alquilados dos agentes complexantes EDTA, DOTA, por exemplo, N,N'-bis- (carboxidacilamidometil-N-2,3-di-idroxipropil)etilenodiamina-N, N'-diacetato (EDTA-DDP); N,N'-bis-(carboxioctadecilamidometil -N-2, 3-di- idroxipropil)etilenodiamina-N,N'-diacetato (EDTA-ODP); e N,N'- Bis(carbóxi-laurilamidometil-N-2,3-di-idroxipropil)etilenodiamina-N, N'- diacetato (EDTA-LDP); incluindo aqueles descritos na patente U.S No. 5.312.617, a revelação da qual está por meio desta incorporada aqui pela referência na sua íntegra. Macromoléculas proteináceas podem incluir, por exemplo, albumina, colágeno, poliarginina, polilisina, poli-istidina, y- globulina e β-globulina. Em certas modalidades, a macromolécula proteinácea é uma albumina, poliarginina, polilisina ou poliistidina. Complexos adequados portanto incluem Mn(lI)-DTPA, Mn(II)-EDTA, Mn(II)-DOTA, Mn(II)DO3A, Mn(II)-criptantes, Gd(III)-DTPA, Gd(III)-DOTA, Gd(III)- DO3A, Gd(III)-criptantes, Cr(III)-EDTA, Cu(II)-EDTA, ou ferro- desferrioxamina. Em modalidades específicas, os complexos são Mn(II)- DTPA ou Gd(III)-DTPA.
[00217] Nitróxidos são agentes de contraste paramagnéticos que aumentam tanto taxas de relaxamento TI quanto T2 em MRI em virtude da presença de um elétron não pareado na molécula de nitróxido. Conforme conhecido pelos versados na técnica, a eficácia paramagnética de um dado composto como um agente de contraste MRI pode estar relacionado, pelo menos em parte, ao número de elétron não pareados no núcleo ou molécula paramagnética e especificamente, ao quadrado do número de elétrons não pareados. Por exemplo, gadolínio tem sete elétrons não pareados ao passo que uma molécula de nitróxido tem um elétron não pareado. Assim, gadolínio é geralmente um agente de contraste MRI muito mais forte que um nitróxido. Entretanto, tempo de correlação efetiva, um outro importante parâmetro para avaliar a eficácia de agentes de contraste, confere maior potencial de relaxividade aos nitróxidos. Quando a taxa rolamento é lenta, por exemplo, anexando-se o contraste paramagnético a uma grande molécula, ela rolará mais lentamente e por meio disso transferindo mais efetivamente energia para relaxamento acelerado dos prótons da água. Em gadolínio; entretanto, o tempo de relaxamento spin do elétron é rápido e limitará a extensão na qual tempos de correlação rotacional lenta podem aumentar a relaxividade. Para nitróxidos, entretanto, os tempos de correlação do spin do elétron são mais favoráveis e aumento extraordinário na relaxividade pode ser atingido diminuindo o tempo de correlação rotacional dessas moléculas. Nitróxidos podem ser projetados para revestir os perímetros das microesferas, por exemplo, tornando alquila seus derivados, os tempos de correlação resultantes podem ser otimizados. Além disso, o meio de contraste resultante pode ser visto como uma esfera magnética, uma configuração geométrica que maximiza a relaxividade.
[00218] Agentes de contraste superparamagnéticos exemplares adequados para uso nas composições aqui, incluem óxidos e sulfatos de metal que experimentam um domínio magnético, compostos de ferro ou ferrimagnéticos, tais como ferro puro, óxido de ferro magnético, tais como magnetita, y-Fe2 O3, Fe/CU, ferrita de manganês; ferrita de cobalto e ferrita de níquel. A formação de imagem do corpo total MR pode então ser empregado para classificar rapidamente o corpo, por exemplo, para trombose e ultrassom pode ser aplicado se desejado, para ajudar na trombólise.
[00219] Os agentes de contraste, tais como os agentes de contraste paramagnéticos e supermagnéticos descritos anteriormente, podem ser empregados como um componente nas microesferas e/ou materiais estabilizantes. Com relação às vesículas, os agentes de contraste podem ser aprisionados nos seu espaço interno, administrados como uma solução com as microesferas, incorporados com quaisquer materiais estabilizantes adicionais, ou revestidos na superfície ou membrana da vesícula. Misturas de qualquer um ou mais dos agentes paramagnéticos e/ou agentes superparamagnéticos nas presentes composições podem ser usadas. Os agentes paramagnéticos e superparamagnéticos podem também ser coadministrados separadamente se desejado.
[00220] Se desejado, os agentes paramagnéticos ou superparamagnéticos podem ser distribuídos como alquilado ou outros derivados incorporados nas composições, especialmente as paredes lipídicas das microesferas. Em particular, os nitróxidos 2,2,5,5-tetrametil-l- pirrolidinilóxi, radical livre e 2,2,6,6-tetrametil-l-piperidinilóxi, radical livre, podem formar adutos, com ácidos graxos de cadeia longa nas posições do anel que não são ocupadas pelos grupos metila por meio de uma variedade de ligações, incluindo, por exemplo, uma ligação de acetilóxi.
[00221] As microesferas providas aqui podem servir não somente como carreadores efetivos dos agentes superparamagnéticos descritos anteriormente, mas também podem melhorar o efeito dos agentes de contraste de susceptibilidade. Agentes de contraste superparamagnéticos incluem óxidos de metal, particularmente óxidos de ferro, mas incluindo óxidos de manganês e como óxidos de ferro, contendo quantidades variadas de manganês, cobalto e níquel que experimentam um domínio magnético. Esses agentes são nano ou microesferas e têm susceptibilidades macivas muito altas e taxas transversas de relaxamento. As partículas grandes, por exemplo, partículas tendo diâmetros de cerca de 100 mn, têm relaxividades R2 muito maior comparado às relaxividades Ri. As partículas menores, por exemplo, partículas tendo diâmetros de cerca de 10 a cerca de 15 nm, têm relaxividades R2 um pouco menores, mas valores Ri e R2 muito mais equilibrados. As partículas muito menores, por exemplo, partículas de óxido de ferro monocristalinas tendo diâmetros de cerca de 3 a cerca de 5 nm, têm relaxividades R2 menores, mas provavelmente as taxas de relaxamento Ri e R2 mais equilibradas. Ferritina pode também ser formulada para encapsular um núcleo de taxa relaxamento muito alta de ferro superparamagnético.
[00222] Os óxidos de ferro podem simplesmente ser incorporados nos materiais estabilizantes e/ou microesferas. Em modalidades específicas, os óxidos de ferro podem ser incorporados nas paredes das microesferas, por exemplo, sendo adsorbidas nas superfícies das microesferas, ou aprisionadas no interior das microesferas.
E. Kits
[00223] Também providos aqui são pacotes e kits farmacêuticos compreendendo um ou mais recipientes cheios com um ou mais dos ingredientes das composições providas aqui. Os kits podem compreender, por exemplo, microesferas e um ou mais componentes adicionais, em que um, dois, três ou mais dos componentes podem ser em um, dois, três ou mais frascos. Em certas modalidades as microesferas são providas na forma de um pó seco. Em outras modalidades, as microesferas são providas em um carreador biocompatível, por exemplo, como uma emulsão ou suspensão.
[00224] Em certas modalidades, o recipiente é uma seringa (por exemplo, uma seringa de policarbonato, polipropileno, ou polímero olefina cíclica (COP)). Em modalidades específicas, a seringa tem perda de umidade baixa, que pode resultar em um aumento na vida de prateleira (por exemplo, 2 a 3 anos ou mais) para modalidades de seringa pré-cheia dos kits providos aqui. Em uma modalidade específica, microesferas providas aqui são contidas dentro de uma seringa estéril, tal como uma seringa pré-cheia estéril (por exemplo, uma seringa de 20 cc), que é opcionalmente provida em uma bolsa destacável. Em certas modalidades, a seringa compreende cerca de 1 mL, 2 mL, 3 mL ou 4 mL das microesferas em um carreador farmaceuticamente aceitável, tais como salina (por exemplo, uma salina não pirogênica ou sem pirogênio, fisiológica estéril).
[00225] Em outras modalidades, as microesferas providas aqui são contidas em um frasco. Em modalidades específicas, o frasco é um frasco de vidro com uma tampa de rosca (por exemplo, um frasco de vidro de 5 mL), que é opcionalmente empacotado em um pacote destacável compreendendo um ou mais frascos adicionais. Em modalidades específicas, o frasco compreende 1 mL ou 2 mL das microesferas em um carreador farmaceuticamente aceitável, tal como salina (por exemplo, uma salina não pirogênica ou sem pirogênio, fisiológica estéril).
[00226] Associado com tal(s) recipiente(s) pode ter uma informação na forma prescrita por uma agência governamental que regula a fabricação, uso ou venda de produtos farmacêuticos ou biológicos, que reflete na aprovação pela agência de fabricação, uso ou venda do produto para administração ao paciente (por exemplo, humano ou outro mamífero). Também associado com tal(s) recipiente(s) podem estar instruções para uso. Os reagentes de qualquer dos métodos descritos aqui podem também estar incluídos como componentes de um kit.
[00227] Em um formato do kit, as microesferas providas aqui estão presentes em uma solução líquida, fisiologicamente compatível em um frasco. Em um outro formato de kit, as microesferas providas aqui estão presentes de forma seca em um frasco. Em certos formatos de kit compreendendo múltiplos componentes em múltiplos frascos, os teores dos frascos podem ser misturados antes ou simultaneamente com a administração. Em algumas modalidades, as microesferas são suspensas em líquido adequado antes da administração, ou opcionalmente um segundo frasco é provido, que contêm a solução injetável e os teores de ambos os frascos são combinados antes da administração ou simultaneamente com a administração.
[00228] Finalmente, em um outro formato de kit as microesferas providas aqui estão presentes em um frasco e um segundo frasco contém uma solução farmaceuticamente aceitável compreendendo o agente de contraste. As microesferas podem então ser misturadas com o agente de contraste, por exemplo, antes ou simultaneamente com a administração.
[00229] Os exemplos seguintes são oferecidos a título de ilustração e não a título de limitação.
EXEMPLOS
[00230] A prática da invenção emprega, a menos que de outra forma indicada, técnicas convencionais em biologia molecular, química orgânica, bioquímica e campos relacionados com os versados da técnica. Essas técnicas são descritas nas referências citadas aqui e são completamente explicadas na literatura. Ver, por exemplo, Maniatis et al. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook et al. (1989), Molecular Clonin: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel et al.,Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates); Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates).
EXEMPLO 1; SÍNTESE DE UM MONÔMERO DE DIETILAMINOETILACRILAMIDA ULTRA PURO
[00231] Um monômero de dietilaminoetilacrilamida ultra puro foi, sintetizado de acordo com o seguinte esquema:
Figure img0009
[00232] Resumidamente, cloreto de acriloíla foi dissolvido em CH2Q2 e resfriado a 0 °C. N,N-dietiletilenodiamina dissolvido em CH2CI2 foi adicionado gota a gota a Ti= 0,5 °C seguido por NaO4 (~ 15 % de solução aquosa). A mistura da reação foi agitada por 15 minutos e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com água e solução de NaHCCh e seca sobre MgSCU. A suspensão foi filtrada e concentrada sob baixa pressão e estabilizada por BHT.
EXEMPLO 2: ANÁLISE HPLC DE UM MONÔMERO de DIETILAMINOETILACRILAMIDA
[00233] Primeiramente, as soluções padrões foram preparadas da maneira a seguir, com MBA escolhido como no controle de referência interna: Soluções estoque
[00234] Solução estoque DEAE: aproximadamente 200 mg (ou 250 mg) de DEAE foram pesados em um frasco de referência de 200 mL (ou 250 mL) e dissolvidos em água pura (Purelab). O pH da solução foi ajustado a 2 por HCI 1 N. A solução foi ajustada com água a uma concentrações de 1.000 ppm (mg/L).
[00235] Solução estoque MBA: aproximadamente 200 mg (ou 250 mg) de MBA foram pesados em um frasco de referência de 200 mL (ou 250 mL) e dissolvidos em água pura. A solução foi então submetida a ultrassonicação por 15 minutos e retornada para a temperatura ambiente. A solução foi ajustada a um concentração de 1.000 ppm (mg/L).
[00236] Solução intermediária: uma solução intermediária foi preparada diluindo-se 5 mL da solução de 1.000 ppm com água a um volume final de 5,0 mL. Foram também preparadas 20, 40, 60, 80,100 ppm.
[00237] As soluções injetadas são listadas na tabela 1. As concentrações exatas das soluções foram notadas. Tabela 1 .Soluções injetadas
Figure img0010
[00238] As amostras a ser analisadas foram preparadas da maneira a seguir:
[00239] Soluções estoque: aproximadamente 200 mg (ou 250 mg) de DEAE foram pesados em um frasco de referência de 200 mL (ou 250 mL) e dissolvidos em água pura (Purelab). O pH da solução foi ajustado a 2 por HCI 1 N. A solução foi ajustada com água a uma concentração de 1.000 ppm (mg/L). Três soluções estoque foram preparadas e testadas.
[00240] Solução intermediária:, uma solução intermediária foi preparada diluindo-se 5 mL da solução de 1.000 ppm com água a um volume final de 50 mL.
[00241] Soluções amostra: as soluções amostra foram preparadas diluindo-se as soluções intermediárias a aproximadamente 60 ppm (pelo menos 5 mL para injeção da amostra), A solução intermediária (100 ppm) foi também testada. As concentrações exatas foram registradas.
[00242] As soluções (padrões e amostras) foram então transferidas para os frascos HPLC no suporte do injetor para análise. As configurações do HPLC são listadas na tabela 2. Tabela 2. Configurações do HPLC
Figure img0011
[00243] Os resultados de análise HPLC são mostrados na figura IA, que representa as sensibilidades de pureza observado usando uma reação de brominação (barras a direita, conforme provido pelo fabricante BioSepra) e HPLC (barras a esquerda) para dados lotes de monômero DEAE (T209, U088 e U089) obtido pela BioSepra.
EXEMPLO 3: TESTE DE BROMO DE UM MONÔMERO DIETILAMINOETILACRILAMIDA
[00244] Uma amostra teste (0,1 g) contendo dietilaminoetilacrilamida é adicionada a tetracloreto de carbono (2 mL). Uma solução de bromo 5 % em tetracloreto de carbono, é adicionada gota a gota, com agitação, até a cor do bromo persistir. O teste de bromo é sensível na presença de ligação C=C, que pode indica o teor aproximado de dietilaminoetilacrilamida presente na amostra teste.
EXEMPLO 4: SÍNTESE DE UM MONÔMERO DE N-TRIS- HIDROXIMETIL METILACRILAMIDA ULTRA PURO
[00245] Um monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida ultra puro foi sintetizado de acordo com o seguinte esquema:
Figure img0012
[00246] Resumidamente, cloreto de acriloíla foi dissolvido em CH2O2 e resfriado a 0 °C. N-trisidróxi)metil amina dissolvido em CH2O2 foi adicionado gota a gota a Ti= 0,5 °C seguido por NaOH (~ 15 % de solução aquosa). A mistura da reação foi agitada por 2 horas. O N-tris-hidroximetil metilacrilamida foi removido depois de recristalização em água.
EXEMPLO 5: ANÁLISE HPLC DE MONÔMERO DE N-TRIS- HIDROXIMETIL METILACRILAMIDA
[00247] Primeiro, uma curva padrão foi preparada usando N-[Tris (hidroximetil) metil] acrilamida (trisacry) com pelo menos 98 % de pureza (provido por SAFC; informação pelo certificado de pureza do fabricante).
[00248] Solução estoque: aproximadamente 200 mg (ou 250 mg) de trisacrila foram pesados em um frasco de referência de 200 mL (ou 250 mL) e dissolvidos em água pura. A solução foi então submetida a ultrassonicação por 15 minutos e retornada para a temperatura ambiente. A solução foi ajustada a uma concentração de 1.000 ppm (mg/L).
[00249] Solução intermediária: uma solução intermediária foi preparada diluindo-se 5 mL da solução de 1.000 ppm com água a um volume final de 50 mL.
[00250] As soluções injetadas são listadas na tabela 3. As concentrações exatas das soluções foram notadas. Tabela 3. Soluções injetadas
Figure img0013
[00251] As amostras a ser analisadas foram preparadas da maneira a seguir:
[00252] Solução estoque: aproximadamente 200 mg (ou 250 mg) de trisacrila foram pesados em um frasco de referência de 200 mL (ou 250 mL) e dissolvidos em água pura. A solução foi então submetida a ultrassonicação por 15 minutos e retornada para a temperatura ambiente. A solução foi ajustada a uma concentração de 1.000 ppm (mg/L). Três soluções são preparadas e testadas.
[00253] Solução intermediária: uma solução intermediária foi preparada diluindo-se 5 mL da solução de 1.000 ppm com água a um volume final de 50 mL.
[00254] Soluções amostra (cada solução): soluções amostra foram preparadas diluindo-se as soluções intermediárias em aproximadamente 60 ppm (pelo menos 5 mL para injeção da amostra). A solução intermediária (100 ppm) foi também testada. As concentrações exatas foram registradas.
[00255] As soluções (padrões e amostras) foram então transferidas para os frascos de HPLC no suporte do injetor para análise. As configurações do HPLC são listadas na tabela 4. Tabela 4. Configurações do HPLC
Figure img0014
[00256] Os resultados de análise HPLC que mostram a pureza de trisacrila de diferentes fontes são mostrados na figura 1B. A Figura 1B representa as sensibilidades de pureza para dois diferentes lotes de trisacrila (R426 e R402 obtidos pela BioSepra) observado usando uma reação de brominação (barras a direita, conforme provido pelo fabricante) ou HPLC (barras a esquerda). Os dados são mostrados com uma suposição de 100 % de pureza de um trisacrila(TA-R) recristalizado obtido e comparado com monômero de trisacrila de SAFC antes da recristalização (TA) (ver a seguir). O TA-R foi preparado recristalizando TA (trisacrila da SAFC) em água e então seco. Análise RNM 1H foi realizada na amostra de TA-R recristalizada e nenhuma impureza orgânica foi detectada no espectro RNM 1H (dados não mostrados). Adicionalmente, uma análise elementar foi realizada na amostra de TA-R para checar se existiam sais inorgânicos presentes; Os resultados teóricos para trisacrila 100 % puro é C 47,99 %, H 7,48 %, N 8,00 % e 0 36,53 %. Observou-se que amostra de TA obtida de SAFC:, C 46,76 % H 7,39 % e N 7,86 % e TA-R 48,14%, H 7,63 % e N 8,07 %, assim a suposição foi feita de que a amostra de TA-R estava próxima a 100 % puro. Cada qual das amostras de R426, 8402 TA e TA-R foram então testadas por análise HPLC e o espectros foram registrados a 232 nm. Para todas as amostras analisadas, houve boa linearidade entre a área de pico e as concentrações (dados não mostrados). Com a suposição de que TA-R foi cerca de 100 % puro, o gradiente de cada linha foi tomado para definir a pureza de HPLC de cada amostra de trisacrila. Os resultados das análises HPLC da amostra TA e TA-R são mostrados na figura 1 B conforme discutido anteriormente. EXEMPLO 6: TESTE DE BROMO DE MONÔMERO DE N-TRIS- HIDROXIMETILMETILACRILAMIDA
[00257] Uma amostra teste (0,1 g) contendo N-tris-hidroximetil metilacrilamida é adicionada a tetracloreto de carbono (2 mL). Uma solução de bromo 5 % em tetracloreto de carbono é adicionada gota a gota com agitação, até a cor do bromo persistir. O teste de bromo é sensível na presença de ligação C=C, que pode indicar o teor aproximado de N-tris-hidroximetil metilacrilamida presente na amostra teste. EXEMPLO 7: PREPARAÇÃO DE MICROESFERA USANDO UM MONÔMERO N-TRIS-HIDROXIMETIL METILACRILAMIDA ULTRA PURO
[00258] NaCI (58 g) e acetato de sódio (27,2 g) foram solubilizados em água (300 mL) sob agitação em um béquer de um litro. Glicerol (400 mL) foi adicionado e o pH de solução foi ajustado a 6 com ácido acético. Esta solução foi então aquecida a 60 °C sob agitação e três monômeros foram adicionados na solução. Os materiais do monômero não foram 100 % puros e a quantidade de cada monômero usada nas etapas seguintes foi pesada com um ajuste da quantidade de impurezas presente nos materiais. Supondo-se que os monômeros foram 100 % puros, as quantidades de cada monômero foram da maneira a seguir:
[00259] N,N-metileno-bis-acrilamida: 10 g. Dietilamioetilacrilamida: 35 g N-tris-hidroximetil metilacrilamida: 90 g Gelatina de porco (PB Leiner; Vilvoorde, Bélgica): 20 g.
[00260] Dietilaminoetilacrilamida foi suprido por Pall BioSepra, França. A pureza de dietilaminoetilacrilamida foi maior que 80 % de acordo com to especificação de Pall BioSepra.
[00261] N-tris-hidroximetilmetilacrilamida foi suprido por Pall BioSepra e Sigma Aldrich Fine Chemicals (SAFC)). De acordo com especificação do produto do fornecedor, a pureza de N-tris-hidroximetil metilacrilamida suprido por Pall BioSepra e SAFC é maior que 76 % e 93 %, respectivamente (ver Tabela 5). Outros dados comparativos de N-tris- hidroximetil metilacrilamida suprido por PALL Biosepra e SAFC são providos na tabela 5. Tabela 5: Dados comparativos de N-tris-hidroximetil metilacrilamida supridos por PALL Biosepra e SAFC
Figure img0015
[00262] Quando a solução ficou clara, uma solução de gelatina (25 g) em água (250 mL) foi adicionada na solução do monômero. Esta solução foi filtrada e colocada sob agitação a 60 °C (Solução A). Uma solução de persulfato de amónio (3,5 g) em água (101,6 g) foi também preparada (Solução B). Em um béquer de 10 litros, óleo (4 L) e Arlacel (3,1 g) foram agitados a 60 °C (Solução C). Solução A e solução B foram injetadas através de bomba Q2 e bomba RHO, respectivamente, no equipamento do Anel Alimentado colocado na solução C. Depois de a injeção ser completa, a solução foi agitada a 125 rpm por 30 minutos a 60 °C. A reação foi interrompida adicionando-se uma solução de água fria, gelo e agente tensoativo. As microesferas obtidas foram lavadas diversas vezes com água até o óleo ser completamente removido. O béquer foi colocado em um banho de ultrassom por 10 minutos para reduzir o número de microesferas aderentes. As microesferas foram então aquecidas a 37 °C e 300 mL de glutaraldeído foram adicionados por 1 L de microesferas para reticulação da gelatina. As microesferas foram lavadas novamente duas vezes com água. As microesferas foram então recobertas por decantação, lavadas cuidadosamente, classificadas e esterilizadas em uma autoclave em um meio tamponado.
EXEMPLO 8: PREPARAÇÃO De MICROESFERA USANDO UM MONÔMERO DE N-TRIS-HIDROXIMETIL METILACRILAMIDA ULTRAPURO E UMMONÔMERO DIETILAMINOETILACRILAMIDA ULTRAPURO
[00263] NaCl (58 g) e acetato de sódio (27,2 g) foram solubilizados em água (300 mL) sob agitação em um 1 béquer de um litro. Subsequentemente, glicerol (400 mL) foi adicionado e o pH da solução foi ajustado a 6 com ácido acético.
[00264] Esta solução foi aquecida a 60 °C sob agitação e dois dos três monômeros foram adicionados na solução. Os materiais do monômero não foram 100 % puros e a quantidade de cada monômero usada nas etapas seguintes foi pesada com um ajuste da quantidade de impurezas presente nos materiais. Supondo-se que os monômeros foram 100 % puros, as quantidades de cada monômero foram da maneira a seguir: N,N-metileno-bis-acrilamida: 10 g.
[00265] N-tris-hidroximetil metilacrilamida: 90 g Dietilaminoetilacrilamida: 35 g Gelatina de porco (PB Leiner; Vilvoorde, Bélgica): 20 g.
[00266] N-tris-hidroximetil metilacrilamida foi suprido por Pali BioSepra e SAFC. De acordo com a especificação do produto dos fornecedores, a pureza de N-tris-hidroximetil metilacrilamida suprido por Pali BioSepra e SAFC é maior que 76 % e 93 %, respectivamente (ver Tabela 5). Outros dados comparativos de N-tris-hidroximetil metilacrilamida suprido por PALL Biosepra e SAFC são providos na tabela 5.
[00267] Dietilaminoetilacrilamida foi suprido por PALL Biosepra e SAFC. De acordo com a especificação do produto dos fornecedores, a pureza de dietilaminoetilacrilamida suprido por Pali BioSepra e SAFC é maior que 80 % e 95 %, respectivamente. Outros dados comparativos de dietilaminoetilacrilamida suprido por PALL Biosepra e SAFC são providos na tabela 6: Tabela 6. Dados comparativos de dietilaminoetilacrilamida suprido por PALL Biosepra e SAFC
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[00268] O terceiro monômero, dietilaminoetilacrilamida, foi adicionado depois de sua preparação. Dietilaminoetilacrilamida (35 g) foi diluído com água (17 g). Esta solução foi colocada em um banho resfriado com gelo e o pH da solução foi ajustado a 2 com HCI. Esta solução foi adicionada na solução contendo os outros dois monômeros.
[00269] Quando a solução ficou clara, gelatina (25 g) em solução aquosa (250 mL) foi adicionada na solução do monômero anterior. Esta solução foi filtrada e colocada sob agitação a 60 °C (solução A). Persulfato de amónio (3,5 g) em água (101,6 g) foi também preparado (Solução B). Em um béquer de 10 litros, óleo (4 L) e Arlacel (3,1 g) foram agitados a 60 °C (Solução C). Solução A e solução B foram injetadas através de bomba Q2 e bomba RHO, respectivamente, no equipamento de Anel Alimentado colocado na solução C. Depois da injeção ser completa, a solução foi agitada a 125 rpm por 30 minutos a 60 °C. A reação foi interrompida adicionando-se uma solução de água fria, gelo e agente tensoativo. As microesferas obtidas foram lavadas diversas vezes com água até o óleo ser completamente removido e o béquer ser colocado em um banho de ultrassom por 10 minutos para reduzir o número de microesferas aderentes. As microesferas foram então aquecidas a 37 °C e 300 mL de glutaraldeído foram adicionados por 1 L de microesferas para reticulação da gelatina. As microesferas foram lavadas novamente duas vezes com água. As microesferas foram então recobertas por decantação, lavadas cuidadosamente, classificadas e esterilizadas em uma autoclave em um meio tamponado.
EXEMPLO 9; PREPARAÇÃO DE MICROESFERA COLORIDA USANDO MONÔMEROS ULTRA PUROS
[00270] Microesferas (100 mL) obtidas de acordo com os Exemplos 7 ou 8 anteriores foram lavadas com um tampão de borato (0,1 M, pH 8) e então suspensas em uma solução de isotiocianato de eritrosina (50 mL, 5 mg/mL). A suspensão foi então agitada por pelo menos 15 horas, após o que ela foi lavada com um tampão neutro para um sobrenadante incolor. As microesferas de cor vermelha foram então calibradas e esterilizadas e pode ser usadas em embolização percutânea.
EXEMPLO 10: PREPARAÇÃO DE PREPARAÇÃO OPACA USANDO MONÔMEROS ULTRA PUROS
[00271] O procedimento dos Exemplos 7 ou 8 é seguido, adicionando- se pó de sulfato de bário (200 g) no monômero inicial. As microesferas obtidas são opacas tanto para luz visível quanto raios X.
EXEMPLO 11: PREPARAÇÃO DE MICROESFERA MAGNÉTICA USANDO MONÔMEROS ULTRA PUROS
[00272] O procedimento dos Exemplos 7 ou 8 é seguido, adicionando- se 50 mg de magnetita (por exemplo, FejOzi) na solução inicial do monômero. Alternativamente, microesferas obtidas de acordo com Exemplos 7 e 8 podem cada qual ser empacotada em uma coluna cromatográfica de 16 mm de diâmetro e lavada com um tampão fisiológico. A coluna é então carregada com uma suspensão coloidal de fluido de ferro (partículas de magnetita muito pequenas) a uma vazão de 10 mL/hora. Partículas de magnetita são adsorvidas pelas microesferas e permanentemente aprisionadas: Microesferas resultantes podem ser usadas para regular o procedimento de embolização e têm propriedades magnéticas, por exemplo, podem ser detectadas em imagem de Formação de Imagem por ressonância magnética (MRI).
EXEMPLO 12: SEPARAÇÃO DE NÃO MICROESFERAS ADERENTES POR ULTRASSONICAÇÃO
[00273] Microesferas feitas de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, dietilaminoetilacrilamida, N,N-metileno-bis-acrilamida e TEMED foram processadas seguindo diferentes métodos. Ultrassonicação foi feita uma ou duas vezes em um 35 banho ultrassónico KHz por aproximadamente 10-15 minutos.
[00274] As Figuras 2A-2C ilustram a redução de microesferas aderentes por ultrassonicação. A Figura 2A mostra microesferas antes de reticulação, inicialmente (painel esquerdo) e depois de 15 minutos de ultrassonicação (painel direito). A porcentagem de microesferas aderentes diminui de cerca de 7 % para cerca de 0,2 % com ultrassonicação. A Figura 2B demonstra um segundo lote de microesferas (divididos em duas frações) depois de reticulação sem (painel esquerdo) ou com (painel direito) ultrassonicação antes da reticulação. Peneiramento foi feito depois da etapa de ultrassonicação. A porcentagem de microesferas aderentes diminuiu de cerca de 3 % para aproximadamente cerca de 0 % com ultrassonicação. A Figura 2C mostra microesferas antes da reticulação, inicialmente (painel esquerdo) e depois 2x15 minutos, de ultrassonicação (painel direito). A porcentagem de microesferas aderentes diminuiu de cerca de 9,2 % a cerca de 1,6 % com ultrassonicação.
[00275] Juntas, em todos os casos, as microesferas mostraram menos esferas aderentes quando a ultrassonicação foi aplicada (Figuras 2A-2C, painéis a direita) comparado a nenhuma ultrassonicação (Figuras 2A 2C, painéis a esquerda). Não foi observada nenhuma microesfera quebrada por este método.
[00276] A Tabela 7 e Figuras 3 representam resultados de um experimento separado e também ilustram adicionalmente porcentagens reduzidas de microesferas aderentes (lote FM0904 100) submetidas a ultrassonicação antes (Figura 3A) e depois de reticulação da gelatina (Figura 3B). Tabela 7.
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[00277] Peneiramento foi feito depois da etapa de ultrassonicação e a porcentagem de volume em uma peneira de 800 pm, 630 pm, 450 pm ou 50 pm é mostrada na tabela 8 e Figura 3C. Tabela 8.
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EXEMPLO 13: ANÁLISE RNM HR-MAS DE MONÔMEROS
[00278] A com técnica com giro no ângulo mágico de alta resolução ("HR-MAS") foi empregada para analisar os materiais de partida usados aqui para síntese de microesfera.
Preparação de amostras
[00279] Amostras de Trisacryl, Gelatina de porco, DEAE-acrilamida e MBA (~15 mg cada) foram carregadas em um rotor HR-MAS (ver Figura 7). Solvente deuterado foi então adicionado para obter um volume total de 50 pL.
[00280] Os rotores são referenciados na tabela 9. Tabela 9
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Análise de amostra por espectroscopia RNM
[00281] Espectros RNM registrados em um espectrômetro Bruker Avance I a 400 MHz (1H) com um cabeçote HR-MAS de 4 mm (trava 1H, 13C, 2H).
Ajuste fino
[00282] Depois do ajuste do ângulo mágico do cabeçote, os seguintes ajustes foram realizados para cada amostra: Ajuste fino e casamento do cabeçote (!H) medição de pulso 90 ° ajuste de homogeneidade (calços)
Aquisição
[00283] Todos os experimentos foram realizados à temperatura ambiente (298 K). Para cada amostra, um espectro 1 D RNM 1H foi registrado.
Processamento
[00284] Parâmetros de aquisição e processamento são sumarizados na tabela. 10. Tabela 10
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Resultados
[00285] Sinais típicos para resíduos vinílicos e frações aromáticas foram identificados nos espectros. O espectro RNM IR dimensional de trisacrila, gelatina, MBA e DEAE acrilamida são mostrados na figuras 4A- 4D. A atribuição de do núcleo para trisacrila, MBA e DEAE acrilamida é mostrada na figuras 4E-4G. O espectro 1D RNM 1H para gelatina consiste em picos de 7,20 a 7,30 ppm, que podem ser atribuídos, por exemplo, aos prótons aromáticos presentes nos aminoácidos.
EXEMPLO 14: ANÁLISE RNM HR-MAS DE MICROESFERAS
[00286] Microesferas preparadas de acordo com o Exemplo 8 usando trisacrila e DEAF acrilamida de diferentes fontes (SAFC, PALL Biosepra) foram analisadas por espectroscopia RNM.
Análise de amostra por espectrocospia RNM
[00287] Amostras de microesfera (~ 3 mg qual) feito de trisacrila e DEAE acrilamida de diferentes fontes. A amostra de microesfera SAFC FMP 128 foi preparada em escala de laboratório usando trisacrila e DEAF obtidos de SAFC (trisacrila lote 1443257, 96 % de pureza; lote DEAF S85803-199, 98 % de pureza). A amostra de microesfera PALL FMP 130 foi preparada em escala de laboratório usando trisacrila e DEAF obtidos de PALL Biosepra (trisacrila lote Y 175; 90.9 % de pureza; DEAF lote U089; 85 % de pureza): A amostra de microesfera FM090303 I -M 1675 foi fabricada usando trisacrila obtido de SAFC (lote 03211 DJ; 95,2 % de pureza) e DEAF de PALL Biosepra (lote U089; 85,0 % de pureza). A amostra de microesfera FM0903021-M 1654 foi fabricado usando trisacrila e DEAF obtido de PALL Biosepra (trisacrila lote W299, 88.2 % de pureza; DEAF lote U089; 85,0 % de pureza). Os níveis de pureza foram conforme provido pelas especificações do fabricante. Cada qual das quatro amostras foram carregadas em um rotor HR-MAS (ver Figura 7). Solvente deuterado (D20) foi então adicionado para obter um volume total de 50 pL.
[00288] Os rotores são referenciados na tabela 11. Tabela 11
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Ajuste fino
[00289] Depois de ajuste do ângulo mágico do cabeçote, os seguintes ajustes foram realizados para cada amostra: Ajuste fino e casamento do cabeçote (1H) Medição de pulso Ajuste de homogeneidade (calços)
Aquisição
[00290] Todos os experimentos foram realizados à temperatura ambiente (25 °C). Para cada amostra, um espectro RNM 1H unidimensional foi registrado.
Processamento
[00291] Parâmetros de aquisição e processamento são sumarizados na tabela 12, Tabela 12
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Resultados
[00292] Os resultados são mostrados na figuras 5A-5J. As Figuras 5A- 5D ilustram os espectros RNM das amostras SAFC FMP 128 e PAUL FMP 130. As Figuras 5E-5J ilustram os espectros RNM dos espectros SAFC FMP 128, PALL FMP 130, FM0903031-M1675 e FM0903021-M 1654.
[00293] A Figura 5A é a superposição dos espectros RNM de duas amostras, que mostra uma similaridade entre os picos principais correspondentes (marcados como A, B e C) identificados nos espectros. A indicação de picos A, B e C e outro picos menores foram com base na análise de Espectros RNM HR-AS de materiais de partida do Exemplo 13.
[00294] Pico A: identificado a 3,77 ppm, que pode ser atribuído, por exemplo, aos grupos tris-hidroximetila (C(CH2OH)3) no copolímero.
[00295] Pico B: identificado a 3,2 ppm, que pode ser atribuído, por exemplo, aos grupos CH2 ligados no átomo de nitrogênio básico (CH2N(CH2CH)2). Sem se ligar a qualquer teoria, a diferença no deslocamento químico entre os monômeros puros nas microesferas D20 sugere que a amina é protonada (amónio) na estrutura reticulada.
[00296] Pico C: identificado a 1,3 ppm, que pode ser atribuído, por exemplo, aos grupos na posição beta do grupo carboxamida da estrutura polimerizada (CR2-CHCONH). As razões de integração relativas de pico B para pico A e pico C para pico A foram realizadas usando uma abordagem semi-quantitativa por integração da superfície dos picos e sumarizadas na tabela 13. Tabela 13.
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[00297] Sem se ligar a qualquer teoria, as maiores razões de integração de microesferas sintetizadas com trisacrila e DEAF acrilamida mais puros podem indicar que uma melhor eficiência de polimerização foi obtida na síntese comparada com as microesferas com materiais menos puros.
[00298] As Figuras 5B e 5C mostram os espectros nas regiões de 9-5 ppm (5B) e -5-0 ppm (SC). Picos residuais foram identificados entre 5 e 9 ppm, centralizados a 7,3 ppm, que pode ser atribuído, por exemplo, aos prótons aromáticos presentes em gelatina. Picos entre 6,4 e 5,8 ppm podem ser atribuídos, por exemplo; aos traços de excesso de acrilamida durante a polimerização. A Figura 5D e Tabela 13 mostram a leve diferença no deslocamento químico (S) para picos B e C.
[00299] A Figura 5E mostra uma comparação dos espectros RNM 1H de quatro diferentes amostras. Um triplete a 1,15 ppm e um quadruplete a 3,62 ppm foram identificados a partir dos espectros FM0903031-M1675 e FM0903021-M1654. Um singlete a 2,2 ppm foi identificado a partir do espectro FM0903031-M.1675, que está também presente nos espectros SAFC 128 e PALL FMP 130 mas com muito menos intensidade (Ver Figura 5F).
[00300] Estas linhas de ressonância são relativamente finas comparadas com o pico principal, que pode ser em virtude da presença de moléculas orgânica pequenas. O triplete a 1,15 ppm e quadruplete a 3,62 ppm pode ser atribuído, por exemplo, à presença de etanol ou éter dietílico. Os deslocamentos químicos dos picos B e C são idênticos para FM0903031- M1675 e FM0903021-M1654, que são diferentes de PALL FMP 130 e SAFC FMP 128 (Figura 5 g). Tabela 14 sumariza as diferenças nos observado deslocamentos químicos. Tabela 14.
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 *Diferença em Hz medida com relação à ressonâncias dos picos B e C da amostra PALL FMP 130
[00301] Um pico localizado a 8:.4 ppm foi identificado nos espectros FM0903031 -Ml675 e FM0903021-M 1654 (Figura 511).
[00302] Abordagem semi-quantitativa foi empregada para analisar os espectros. A superposição dos quatro espectros (Figura 51) ilustra as variações na intensidade e largura na meia altura dos picos B e C. Uma desconvolução de massa A, B e C foi realizada para cada espectro para quantificação (Figura 5J) usando computador, software. Os valores da amplitude dos picos B e C calculados e normalizados para a área de pico A são sumarizados na tabela 15. Tabela 15.
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[00303] Sem se ligar a qualquer teoria, as diferenças observadas para os picos B e C entre diferentes amostras podem ser explicadas, em parte, da maneira a seguir: Diferenças nos deslocamentos químicos e larguras na meia altura podem ser atribuídas aos graus residuais de anisotropia entre diferentes amostras. Mesmo se o intumescimento em água combinado com o ângulo mágico de rotação permitir medir a anisotropia de deslocamento químico e acoplamentos dipolares, esses efeitos não são completamente cancelados. Esses efeitos residuais observáveis para os espectros RNM podem ser atribuídos ao grau de reticulação em diferentes amostras. Diferentes superfícies podem ser explicadas pelas diferenças na microestrutura dos polímeros. As diferenças na presença ou ausência de moléculas orgânicas pequenas podem ser explicadas por uma diferença no processo de fabricação ou por uma diferença nos materiais usados. As diferenças no deslocamento químico e largura na meia altura observadas para os picos B e C podem ser usadas para diferenciar as fontes das amostras.
EXEMPLO 15: ADMINISTRAÇÃO DE MICROESFERAS EM PACIENTES COM CÂNCERES DE FÍGADO
[00304] Este estudo é realizado de acordo com um procedimento modificado descrito em Xu et. Al., (2009) World J Gastroenterol15(29): 3664-3669. Resumidamente, embolização (opcionalmente TACE) é realizada em pacientes depois de imagens seccionais transversais serem revistas. Uma bainha vascular French é colocada na artéria femoral e um cateter Mickaelson é avançado nas artérias celíacas e mesentéricas superiores. Contraste é injetado nas artérias durante formação de imagem radiográfico de sequência rápida. Ramificações arteriais que suprem os tumores são então localizadas. A fase venosa é cuidadosamente examinada para desobstrução das veias portais. Um cateter Tracker é avançado através do cateter Mickaelson até as ramificações arteriais que suprem os tumores. A mistura de doxorubicina (~ 50 mg), mitomicina (~ 10 mg) e lipiodol (% ~ 4-15 mL) é injetada nas ramificações arteriais até hemostase ser obtida. Se os tumores tiver diminuído 2 semanas depois do procedimento, uma segunda embolização pode ser realizada.
[00305] O radiologista intervencionai então realiza um arteriograma para identificar as ramificações da artéria hepática que suprem o(s) tumor(s) e enfia cateteres menores nessas ramificações. Isto é feito para maximizar a quantidade da dose quimioterapêutica que é direcionada ao tumor.
[00306] Quando um vaso sanguíneo que supre o tumor foi selecionado, microesferas sozinhas ou, no caso de TACE, alíquotas alternadas de dose de quimioterapia e de microesferas preparadas de acordo com os Exemplos 7 ou 8 (ou outra microesfera provida aqui), ou microesferas em combinação com o agente de quimioterapia, são injetados através do cateter. A dose de microesfera total e/ou quimioterapêutica pode ser dada em uma distribuição de vasos, ou ela pode ser dividida entre diversos vasos que suprem o(s) tumor(s).
EXEMPLO 16: ADMINISTRAÇÃO DE MICROESFERAS EM PACIENTES COM CÂNCER DE PRÓSTATA
[00307] Pacientes diagnosticados com câncer da próstata são divididos em dois grupos, um grupo teste e um controle grupo. Pacientes do teste grupo são tratados com embolização, usando microesferas preparadas de acordo com os Exemplos 7 ou 8 (ou outras microesferas providas aqui).
[00308] Biópsias são realizadas em pacientes com tumores de próstata visíveis. Pacientes cujos tumores de próstata são diagnosticados ser cânceres são tratados com embolização. Antes do tratamento, tamanhos dos tumores de câncer da próstata e níveis do PSA no sangue em pacientes tendo os tumores de câncer da próstata são registrados.
[00309] Antes do procedimento de embolização, uma dose única profilática de 200 mg de ciprofloxacina é dada. Intervenção é realizada sob anestesia local através da abordagem transfemoral direita. Angiografia pélvica inicial é realizada para avaliar os vasos ilíacos e artérias da próstata durante as fases arteriais e posteriores. Angiografia subtração digital seletiva das artérias ilíacas internas direitas e esquerdas é realizada usando um cateter 5-Fr Cobra 2 para avaliar melhor o suprimento de sangue para a próstata. Cateterização superseletiva das artérias da vesícula inferiores direitas e esquerdas é então realizada usando um microcateter (Embocath; biosphere Medical, Rockland, ME, USA) e angiografia é realizada injetando manualmente 3-5 mL de meio de contraste para garantir que a ponta do microcateter está dentro ou no teóstio da artéria prostática. Microesferas preparadas de acordo com os Exemplos 7 ou 8 são calibradas a 300-500 pm em diâmetro são e usadas para embolização. Cada frasco de microesferas de 2 mL é diluído em uma mistura de 20 mL de 50 % meio de contraste iodado mais solução de salina normal 50 %. A mistura é lentamente injetada sob controle fluoroscópico. Embolização das artérias da próstata que surgem das artérias da vesícula inferiores é realizada para estatizar sem refluxo da mistura para as artérias indesejadas. Acompanhamento da angiografia é realizado manualmente com o microcateter na artéria da vesícula inferior e usando a bomba com o cateter 5- Fr na ramificação anterior da artéria ilíaca interna checando qualquer suprimento de sangue adicional para a próstata. Embolização é então realizada no outro lado usando a mesma técnica.
[00310] Medições semanais do tamanho do tumor são registradas. O volume do tumor é calculado (volume do tumor=0-5 (L+W)xLxWxO,5236, onde L=comprimento do tumor e W=largura). O volume do tumor no momento da embolização serve como o ponto de referência para comparação futura desta variação do tamanho do tumor. As variações semanais de cada volume do tumor são registradas como diferenciação percentual da medição original na embolização. Os níveis sangue PS A são seguidos e comparados com os níveis no momento da embolização.
EXEMPLO 17; ADMINISTRAÇÃO DE MICROESFERAS EM PACIENTES COM MÁ FORMAÇÃO ARTERIOVENOSA
[00311] Pacientes com má formações arteriovenosa no cérebro (BAVM) recebem embolização de acordo com um procedimento modificado descrito em Gao et al. (2009) Chinese Medical Journal 122 (16): 1851-1856. Resumidamente, embolização é realizada sob anestesia geral sem heparinização sistêmica. Durante o procedimento, pressão sanguínea sistólica é controlada entre 100 e 110 mmHg. Cateterização é realizada usando uma abordagem transfemoral com técnicas coaxiais padrões. O cateter guiado é lavado por meio de um saco de pressão com salina contendo heparina 2.500 U/L. Navegação de um microcateter compatível com DMSO (UltraFlow ou Marathon; ev3; USA) até o alvo ser realizado com uma combinação das técnicas guiadas por fluxo e guiadas por arame usando um arame de 0,010 polegadas ou um de 0,008 polegadas (Silverspeed ou Mirage; ev3; USA). Uma vez que a ponta do microcateter está na posição desejada, a injeção de microesferas preparada de acordo com o Exemplo 7 ou 8 (ou outras microesferas providas aqui) é realizada da maneira a seguir: 1) o microcateter é lavado com salina normal 5 mL; 2) DMSO 0,25 mL é injetado no microcateter par preencher o espaço morto; 3) microesferas aspiradas em uma seringa de 1 mL e 0,25 mL desta quantidade é injetado por para 40 segundos para preencher o microcateter e substituir o DMSO no espaço morto; 4) injeção lenta da solução de microesfera é então continuada sob fluoroscopia.
[00312] Depois da embolização, a pressão sanguínea do paciente é rigorosamente monitorada por 48 horas na unidade de cuidado intensivo. No caso raro em que o microcateter adere no alimentador arterial, heparina é intravenosamente administrada (750-1.000 U/hora) por 72 horas, seguido por aspirina oral por 3 meses em uma dose de 250 mg/d. O tamanho do BAVM é então monitorado por MRI diariamente. Se depois de três anos o AVM ainda não for eliminado, radiocirurgia é considerada.
EXEMPLO 18; ADMINISTRAÇÃO DE MICROESFERAS EM UM MODELO DE GELATINA DE PORCO DE UM HIPERPLASIA PROSTÁTICA BENÍGNA
[00313] O estudo é realizado de acordo com um procedimento modificado descrito em Sun et al. (2008) Radiology 246: 783-789. Resumidamente, porcos são aleatoriamente determinados para o grupo de embolização ou o grupo controle. Depois de jejum por 24 horas, todos os porcos machos são cada qual pré-medicado com 0,1 mg de diazepam por quilograma de peso corpóreo, 10 mg/kg de cetamina e 0,01 mg/kg de atropina intramuscularmente. Anestesia é iniciada com 2 mg/kg de propofol (i.v.) e mantida com 2,0 %-2,5 % de halotano. Cada porco é conectado a um sistema de anestesia e um ventilador mecânico depois intubado endotraquealmente. A área da virilha e abdômen inferior foram rapados e drapeados de uma maneira estéril.
[00314] Acesso arterial femoral é ganho percutaneamente com um bainha introdutora 5-F. Angiografia pélvica é realizada, um cateter 5-F Cobra é inserido na aorta e a ponta do cateter é modelada em um laço Waltman da artéria ilíaca externa contralateral. Com controle de vias, cateterização seletiva da artéria ilíaca interna em ambos lados é obtida. Angiografia é realizada nas duas artérias. Os animais do grupo controle então recuperados da anestesia.
[00315] Embolização seletiva da próstata é realizada no grupo de embolização. Depois da distribuição sistêmica de heparina (150 IU de heparina/quilograma em peso corpóreo), um cateter infusão 3-F é inserido coaxialmente através do cateter Cobra e seletivamente colocado na ramificação prostática da artéria da vesícula inferior. Angiografia superseletiva é realizada injetando manualmente 1 mL de meio de contraste para garantir que a ponta do cateter de microinfusão esteja no sítio desejado. Microesferas preparadas de acordo com o Exemplo 7 ou 8 (ou outras microesferas providas aqui) são calibradas a 500-700 pm em diâmetro. Cada frasco de microesferas, contendo 2,0 mL de partículas de microesfera, é diluído em uma mistura de 20 mL de 50 % meio de contraste iodado mais solução de salina normal 50 %. A mistura é lentamente injetada com controle fluoroscópico. Embolização é imediatamente terminada uma vez que hemostase é obtida sem refluxo da mistura para artérias indesejadas. Angiografia de acompanhamento é realizada. Subsequentemente, embolização é realizada no outro lado usando a mesma técnica. Os animais recuperam naturalmente da anestesia sob cuidado. Depois da embolização, todos os animais são checados duas vezes ao dia por 72 horas e então uma vez por dia por 1 semana para possíveis complicações associadas com embolização.
EXEMPLO 19: ADMINISTRAÇÃO DE MICROESFERAS EM PACIENTES COM FIBRÓIDES UTERINAS
[00316] Embolização da artéria uterina (UAE) é realizada de acordo com um procedimento modificado descrito em Pelage et al. (2000) Radiology 215:428-431.Resumidamente, UAE é realizada por um radiologista intervencionai e envolve completa oclusão de qualquer uma ou ambas artérias uterinas com êmbolo particulado para causar necrose isquêmica das fibróides uterinas. O fechamento das artérias é considerado permanente, bloqueando por meio disso o suprimento de sangue para a fibróide mas sem nenhum efeito adverso permanente no útero de outra forma normal. UAE é realizado sob anestésico local, algumas vezes com sedação consciente, anestésico epidural ou espinhal. Antibióticos profiláticos podem também ser administrados. Uma bainha vascular French de diâmetro 4 ou 5 é inserida diretamente na artéria femoral da mulher e a artéria uterina contralateral é então seletivamente cateterizada. O cateter pode então ser manobrado para a artéria uterina ipsilateral e o processo repetido.
[00317] Neste estudo, microesferas preparadas de acordo com o Exemplo 7 ou 8 (ou outras microesferas providas aqui) são calibradas a 700- 900 pm em diâmetro e administradas. Oclusão dos vasos uterinos é confirmada por angiografia e o cateter removido. A mulher é exposta a aproximadamente 20rad (20cGy) de radiação ionizante para os ovários. UAE bem sucedido fecha totalmente ambos vasos uterinos. O miométrio normal (músculo do útero) estabelece rapidamente um novo suprimento de sangue através de vasos colaterais do ovário e as circulações vaginais.
[00318] As modalidades da presente invenção descritas anteriormente devem ser meramente exemplares e versados na técnica perceberão ou poderão determinar usando não mais que experimentação de rotina, numerosos equivalentes aos procedimentos descritos específicos aqui. Todos tais equivalentes são considerado no escopo da presente invenção e são cobertos pelas seguintes reivindicações. Além disso, da maneira usada nesta especificação e reivindicações, as formas singulares "um,""uma" e "o"' incluem formas plurais a menos que o conteúdo claramente dite de outra forma. Assim, por exemplo, referência a "uma microesfera" inclui uma mistura de duas ou mais microesferas como essas. Adicionalmente, versados perceberão que sequência operacional deve ser apresentada em mesma ordem específica com o propósito de esclarecimento e reivindicação, mas a presente invenção contempla várias mudanças além de tal ordem específica.

Claims (15)

1. Método de preparar microesferas, caracterizadopelo fato de que compreende: (a) preparar uma solução aquosa compreendendo (i) um monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, (ii) um monômero de dietilaminoetilacrilamida, (iii) um monômero de N,N-metileno-bis-acrilamida, e (iv) gelatina, (b) adicionar a solução aquosa por meio de um anel de alimentação a uma fase orgânica líquida que tem baixa miscibilidade em água, antes ou durante a agitação; produzindo assim microesferas compreendendo um copolímero compreendendo uma unidade de monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida, uma unidade de monômero de dietilaminoetilacrilamida e uma unidade de monômero de N,N-metileno-bis- acrilamida; (c) opcionalmente submeter as microesferas a ultrassonicação; e (d) reticular a gelatina.
2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que o monômero de N-tris-hidroximetil metilacrilamida compreende menos que 9 % das impurezas e/ou o monômero de dietilaminoetilacrilamida compreende menos que 2 % das impurezas.
3. Método de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que as microesferas são as microesferas ultra-puras.
4. Método de acordo com a reivindicação 3, caracterizadopelo fato de que (i) as microesferas ultra-puras compreendem cerca de 10% ou menos, 9% ou menos, 8% ou menos, 7% ou menos, 6% ou menos, 5% ou menos, 4% ou menos, 3% ou menos, 2% ou menos ou 1% ou menos das impurezas, (ii) as microesferas ultra-puras compreendem 90% ou mais, 91% ou mais, 92% ou mais, 93% ou mais, 94% ou mais, 95% ou mais, 96% ou mais, 97% ou mais, 98% ou mais ou 99% ou mais em peso do N-tris- hidroximetil metilacrilamida, o dietilaminoetilacrilamida, o N,N-metileno-bis- acrilamida e a gelatina, ou (iii) uma combinação de (i) e (ii).
5. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a ultrassonicação é feita em um banho ultrassónico.
6. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que o método não compreende peneirar as microesferas.
7. Microesferas, caracterizadas pelo fato de que são preparadas pelo método como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 6.
8. Microesferas de acordo com a reivindicação 7, caracterizadas pelo fato de que as microesferas apresentam em um espectro de !HNMR, um primeiro pico de cerca de 3,5 ppm a cerca de 4 ppm, um segundo pico de cerca de 3 ppm a cerca de 3,5 ppm, e um terceiro pico de cerca de 1 ppm a cerca de 1,5 ppm; e em que (i) a razão de integração do segundo pico para o primeiro pico é de 0,50 a cerca de 0,65, (ii) a razão de integração do terceiro pico para o primeiro pico 0,61 a cerca de 0,75, ou (iii) uma combinação destes.
9. Microesferas de acordo com a reivindicação 7 ou 8, caracterizadas pelo fato de que as microesferas têm um tamanho uniforme.
10. Microesferas de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 9, caracterizadas pelo fato de que as microesferas têm um diâmetro de cerca de 1 pm a cerca de 2000 pm, de 40 pm a cerca de 120 pm, de cerca de 100 pm a cerca de 300 pm, de cerca de 300 pm a cerca de 500 pm, de cerca de 500 pm a cerca de 700 pm de cerca de 700 pm a cerca de 900 pm, ou de cerca de 900 pm a cerca de 1200 pm.
11. Microesferas de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 10, caracterizadaspelo fato de que menos que 1 % das microesferas são as microesferas agregadas.
12. Uso da microesfera como definida em qualquer uma das reivindicações 7 a 11, caracterizadopelo fato de ser para a manufatura de um medicamento para o tratamento de uma doença dependente da angiogênese em um paciente.
13. Uso de acordo com a reivindicação 12, caracterizadopelo fato de que a doença dependente da angiogênese é uma malformação arteriovenosa, fibróide uterina, ou hiperplasia prostática benigna.
14. Uso de acordo com a reivindicação 12, caracterizadopelo fato de que a doença dependente da angiogênese é um câncer ou tumor.
15. Uso de acordo com a reivindicação 14, caracterizadopelo fato de que o câncer ou tumor é um câncer ou tumor de fígado ou próstata.
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