KR101297500B1 - 치료적 혈관 색전술에 유용한 마이크로스피어 - Google Patents

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Abstract

젤라틴 또는 젤라틴 대용품, 및 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위의 공중합체를 포함하는 마이크로스피어(microsphere)가, 예를 들어, 본원에서 제공된다. 젤라틴 또는 젤라틴 대용품, 및 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위의 공중합체를 포함하는 마이크로스피어의 제조 방법이 또한 제공된다. 이러한 마이크로스피어를 포함하는 조성물, 및 이러한 마이크로스피어 및 이의 조성물을 사용하는 방법이, 예를 들어, 본원에서 추가로 제공된다.

Description

치료적 혈관 색전술에 유용한 마이크로스피어{MICROSPHERES USEFUL FOR THERAPEUTIC VASCULAR EMBOLIZATION}
기술분야
젤라틴 또는 젤라틴 대용품, 및 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위의 공중합체를 포함하는 마이크로스피어(microsphere)가, 예를 들어, 본원에서 제공된다. 젤라틴 또는 젤라틴 대용품, 및 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위의 공중합체를 포함하는 마이크로스피어의 제조 방법이 또한 제공된다. 이러한 마이크로스피어를 포함하는 조성물, 및 이러한 마이크로스피어 및 이의 조성물을 사용하는 방법이, 예를 들어, 본원에서 추가로 제공된다.
배경기술
원위치에서 특정 병리학적 용태를 예방 또는 치료하기 위해 치료적 혈관 폐색 (즉, 색전술)이 사용된다. 이는 영상 제어 하에 미립자 폐색제 (즉, 색전)를 순환계 내에 놓는 것을 가능하게 하는 카테터에 의해 투여될 수 있다. 이는 자궁 섬유종이 예를 들어 포함되는 종양, 혈관 기형 및 출혈 프로세스의 치료에서와 같이 다양한 의학적 용도를 지닌다. 예를 들어, 혈관 폐색이 통증을 억제할 수 있거나, 색전술 후의 수술적 개입 시 혈액 손실을 제한할 수 있거나, 또는 심지어 종양 괴사를 초래하고 수술을 막을 수 있다. 혈관 기형의 경우, 혈관 폐색은 정상 조직으로의 혈류를 정상화되게 할 수 있고, 수술을 도우며, 출혈 위험을 제한한다. 출혈 프로세스에서, 혈관 폐색은 혈류를 감소시킬 수 있고, 이는 동맥 개구부(들)이 아무는 것을 촉진한다. 또한, 치료되는 병리학적 용태에 따라, 색전술은 일시적인 목적, 뿐만 아니라 영구적인 목적으로 사용될 수 있다.
여러 유형의 색전, 예를 들어, 액체 작용제 (예를 들어, 아크릴 글루, 겔 또는 점성 현탁액), 뿐만 아니라 엠보스피어(EmboSphere)® 트리스아크릴 젤라틴 마이크로스피어 (BioSphere Medical, Rockland, MA)가 포함되는 미립자 작용제 (예를 들어, 다양한 중합체, 경질막, 젤라틴 스폰지, 스피어(sphere), 풍선 또는 나선)가 색전술에 사용되었다 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,635,215 및 5,648,100를 또한 참조).
다양한 폐색제들 중에서, 마이크로스피어에서 다른 고체 색전에 비해 더 양호한 색전 성질이 실연되었다. 그러나, 마이크로스피어의 품질 및 수율이 생산 공정에서 사용된 물질 및 및 이의 제조 방법으로 인해 종종 변한다.
따라서, 예를 들어, 더욱 양호한 생산성 수율 및 가능하게는 더욱 양호한 균일성 또는 순도를 갖는 마이크로스피어의 제조 방법이 여전히 요구된다. 또한, 최적화된 색전 효과를 제공할 수 있는, 생산 뱃치(batch)에서 생산 뱃치로, 예를 들어, 더욱 일관되거나 또는 더욱 양호한 품질을 갖는 마이크로스피어가 여전히 또한 요구된다.
개요
본원에서 제공되는 방법은 일반적으로 마이크로스피어 및 이러한 마이크로스피어를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 이러한 마이크로스피어의 제조 및 사용 방법이 본원에서 또한 제공된다.
한 측면에서, (a) N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위를 포함하는 공중합체, 및 (b) 가교된 젤라틴을 포함하는 마이크로스피어가 본원에서 제공된다. 특정 실시양태에서, 이러한 마이크로스피어는 1H NMR 스펙트럼에서, 약 3.5 ppm 내지 약 4 ppm의 제1 피크, 약 3 ppm 내지 약 3.5 ppm의 제2 피크, 및 약 1 ppm 내지 약 1.5 ppm의 제3 피크를 나타낸다. 구체적 실시양태에서, (i) 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 0.50 내지 약 0.65이거나, (ii) 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 0.55 내지 약 0.75 (예를 들어, 약 0.61 내지 약 0.75)이거나, 또는 (iii) (i)과 (ii)의 조합이다. 특정 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위가 초고순도 단량체 단위이고/이거나, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체가 초고순도 단량체 단위이고/이거나, N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위가 초고순도 단량체이다.
또 다른 측면에서, (a) N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체를 공중합시킴으로써 제조된 공중합체, 및 (b) 가교된 젤라틴을 포함하는 마이크로스피어가 본원에서 제공된다. 특정 실시양태에서, 이러한 마이크로스피어는 1H NMR 스펙트럼에서, 약 3.5 ppm 내지 약 4 ppm의 제1 피크, 약 3 ppm 내지 약 3.5 ppm의 제2 피크, 및 약 1 ppm 내지 약 1.5 ppm의 제3 피크를 나타낸다. 구체적 실시양태에서, (i) 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 0.50 내지 약 0.65이거나, (ii) 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 0.55 내지 약 0.75 (예를 들어, 약 0.61 내지 약 0.75)이거나, 또는 (iii) (i)과 (ii)의 조합이다. 특정 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체가 초고순도 단량체이고/이거나, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체가 초고순도 단량체이고/이거나, N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체가 초고순도 단량체이다.
또 다른 측면에서, (a) (i) N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, (ii) 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체, (iii) N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체, 및 (iv) 젤라틴을 포함하고, 이때 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체가 초고순도 단량체이고/이거나, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체가 초고순도 단량체이고/이거나, N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체가 초고순도 단량체인 수용액을 제조하는 단계; (b) 수용액을 물에서의 혼화성이 낮은 액체 유기 상 (예를 들어, 오일, 예컨대 미네랄 오일, 예컨대 파라핀 오일)에 첨가한 후 교반하거나 또는 첨가하면서 교반함으로써, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위를 포함하는 공중합체를 포함하는 마이크로스피어를 생산하는 단계; (c) 젤라틴을 가교시키는 단계를 포함하는, 마이크로스피어의 제조 방법이 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, 이러한 방법은 젤라틴 가교 전에 마이크로스피어에 음파처리 (예를 들어, 초음파처리)를 적용하는 단계를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 수용액이 피드 링(feed ring)을 통해 액체 유기 상에 첨가된다. 이러한 방법에 의해 생산된 마이크로스피어가 본원에서 또한 제공된다.
또 다른 측면에서, 대상체에게 본원에서 제공되는 마이크로스피어(들)을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서의 색전술 방법이 본원에서 제공된다.
또 다른 측면에서, 대상체에게 본원에서 제공되는 마이크로스피어(들)을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 혈관형성-의존적 질환을 관리 또는 치료하는 방법이 본원에서 제공된다.
용어
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 당업자가 통상적으로 이해하는 바와 의미가 동일하다. 모든 특허, 출원, 공개된 출원 및 기타 간행물은 그 전문이 본원에 참고로 포함된다. 본원에서의 용어에 대해 다수의 정의가 있는 경우, 달리 언급되지 않는 한 본 섹션의 정의를 우선으로 한다.
용어 "약" 또는 "대략"은 소정의 값 또는 범위의 20％ 이내, 예컨대 15％ 이내, 10％ 이내, 9％ 이내, 8％ 이내, 7％ 이내, 6％ 이내, 5％ 이내, 4％ 이내, 3％ 이내, 2％ 이내, 1％ 이내, 0.5％ 이내 또는 이보다 낮은 ％ 이내를 의미한다.
본원에서 사용된 "투여하다", "투여" 및 "투여하는"은 신체 외부에 존재하는 물질 (예를 들어, 본원에서 제공되는 입자 또는 마이크로스피어)을 폐 (예를 들어, 흡입), 점막 (예를 들어, 비강), 피내, 정맥내, 동맥내, 쓸개내, 안내, 골내, 근육내 전달 및/또는 본원에 기술되어 있거나 당업계에 공지된 임의의 또 다른 물리적 전달 방법과 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 방법에 의해 환자 내로 주입하거나 또는 다른 방식으로 물리적으로 전달하는 행위를 지칭한다. 구체적 실시양태에서, 주사기 및/또는 카테터를 사용하여 마이크로스피어가 전달된다. 질환 또는 이의 증상을 치료하거나 또는 다른 방식으로 관리하는 경우, 전형적으로 질환 또는 이의 증상의 발병 후에 물질이 투여된다. 질환 또는 이의 증상을 예방하는 경우, 전형적으로 질환 또는 이의 증상의 발병 전에 물질이 투여된다. 특정 실시양태에서, 이같은 투여는 전달된 입자 (예를 들어, 본원에서 제공되는 마이크로스피어)가 표적 구역 (예를 들어, 혈관, 조직 또는 장기)과 접촉하는 것을 초래한다.
용어 "혈관조영술"은 혈관이 질환에 걸렸거나, 협소화되었거나, 확대되었거나 또는 전적으로 차단되었는지 여부를 결정하도록 신체의 다양한 부분 (예를 들어, 간, 전립선, 자궁) 내의 혈관을 영상화하기 위해 수행되는 일종의 x-선을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 카테터를 동맥 내로 통과시켜 관심 신체 구역에 이르게 한 후, 조영 물질을 주입하여 혈관을 강조함으로써 혈관조영상 (예를 들어, x-선)이 취득된다. "초선택적 혈관조영술"은 조직의 소형 구역 또는 종양에 공급되는 분지 정맥 내로 더 큰 카테터를 통과하여 통할 수 있는 더 작은 카테터를 사용하는 혈관조영술을 지칭한다.
용어 "동정맥 기형", "AVM", "혈관 기형"은 동맥과 정맥 간의 하나 이상 (가장 전형적으로는, 다수)의 비정상적인 통신이 발생하여, 혈관으로 주로 구성된 국소적인 종양-유사 덩어리가 초래된 질환 군을 지칭한다. 이같은 질환은 선천적 또는 후천적일 수 있다.
용어 "양성 전립선 비대증"은, 예를 들어, 중년 및 노년 남성에서, 전립선 크기가 증가되는 것을 지칭한다.
본원에서 사용된 "가교시키다", "가교된" 및 "가교시키는"는 지질, 단백질, 중합체, 탄수화물, 계면활성제 안정화 물질, 생활성 치료 인자 및/또는 생활성 작용제가 포함되는 안정화 물질 2개 이상을 하나 이상의 다리에 의해 연결하는 것을 일반적으로 지칭한다. 상기 다리는 하나 이상의 원소, 기, 또는 화합물로 구성될 수 있고, 일반적으로 제1 안정화 물질 분자로부터의 원자를 제2 안정화 물질 분자의 원자에 연결하는 역할을 한다. 가교 다리는 공유 및/또는 비-공유 회합을 수반할 수 있다. 임의의 다양한 원소, 기 및/또는 화합물이 가교에서 다리를 형성할 수 있고, 천연적으로 또는 합성 수단을 통해 안정화 물질이 가교될 수 있다. 예를 들어, 케라틴, 인슐린 및 기타 단백질에서와 같이, 시스틴 잔기들의 디설피드 결합에 의해 연결되는 펩티드 사슬들로부터 제형된 물질에서 가교가 천연적으로 발생할 수 있다. 별법적으로, 적절한 화학적 변형에 의해, 예를 들어, 안정화 물질과 같은 화합물과 가교제로 작용할 수 있는 화학 물질을 조합함으로써 가교가 달성될 수 있고, 상기 화학 물질은 예를 들어 열에 대한 노출, 고에너지 조사 등에 의해 반응하도록 야기될 수 있다. 예로는 디술피드 결합이 형성되는 황에 의한 가교, 유기 과산화물을 사용하는 가교, 고에너지 조사에 의한 불포화 물질의 가교, 디메틸올 카르바메이트로의 가교 등이 포함된다. 본원에서 제공되는 마이크로스피어의 특정 실시양태에서, 젤라틴이 가교된다.
본원에서 사용된 용어 "세포 부착 촉진제"는 마이크로스피어 내의 존재 또는 마이크로스피어와의 회합으로 인해 마이크로스피어의 표면에 대한 세포의 부착성을 촉진하거나 강화하는 임의의 물질을 의미한다. 종종 이러한 물질은 단백질과 중합체의 공유 결합을 통해 마이크로스피어의 표면에 결합되는 단백질이다.
본원에서 사용된 "화학적 변형"은, 예를 들어, 일단 신체 내로 주사되면, 마이크로스피어가 색전술에 더하여 또 다른 기능을 수행하는 능력을 지니도록, 생산 공정 동안에 또는 마이크로스피어를 다양한 작용제 또는 조직과 혼합하거나 이에 접촉시키는 것에 의해, 마이크로스피어의 화학적 성질 및 특징이 변화되는 것을 지칭한다.
본원에서 사용된 용어 "유효량"은 혈관, 예컨대 동맥 또는 정맥을 부분적으로 또는 완전히 폐색하는데 충분한 치료법 (예를 들어, 본원에서 제공되는 마이크로스피어 또는 조성물)의 양을 지칭한다. 이같은 폐색은 일시적 또는 영구적일 수 있다. 특정 실시양태에서, 이러한 유효량은 소정의 질환 및/또는 이와 관련된 증상의 중증도 및/또는 기간을 추가로 개선할 수 있을 것이다. 본원에서 제공되는 방법들의 특정 실시양태에서, 유효량의 마이크로스피어가 환자에게 투여된다.
본원에서 사용된 용어 "색전술" 또는 "치료적 색전술"은 혈액이 흘러가는 혈관의 부분적인 또는 전체적인 폐색, 예를 들어, 혈관 내로 색전을 고의로 도입하는 것에 의한 혈관의 선택적인 폐색을 지칭한다. 예를 들어, 색전술은 기능장애 (예를 들어, 동정맥 기형)를 수정하기 위한 또는 혈류 (예를 들어, 고형 종양/암 성장으로의 혈류)를 정지시키거나 느리게 하기 위한 동맥 또는 정맥의 폐색을 허용한다. 특정 실시양태에서, 색전술은 색전 물질이 침착되는 곳에 활성 분자가 운반 및/또는 전달되지 않는다는 점에서 수동적인 수술이다.
또 다른 치료법을 투여하는 정황에서 본원에서 사용된 용어 "~와 조합된"은 1가지를 초과하는 치료법의 사용을 지칭한다. 용어 "~와 조합된"의 사용은 치료법들이 대상체에게 투여되는 순서를 제한하지 않는다. 제1 치료법은 제2 치료법의 투여 전 (예를 들어, 1분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주)에, 제2 치료법의 투여와 동시에, 또는 제2 치료법의 투여 후 (예를 들어, 1분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주)에 소정의 질환에 걸린 적이 있거나, 걸렸거나, 걸리기 쉬운 대상체에게 투여될 수 있다. 임의의 추가적인 치료법이 임의의 순서로 또 다른 추가적인 치료법과 함께 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 입자가 하나 이상의 치료법 (예를 들어, 소정의 질환 또는 이와 관련된 기타 증상을 예방, 치료, 관리 및/또는 완화하기 위해 현재 투여되는, 마이크로스피어가 아닌 치료법)과 조합되어 투여될 수 있다. 본원에서 제공되는 입자와 조합되어 투여될 수 있는 치료법의 비제한적인 예로는 진통제, 마취제, 항생제 또는 면역조정제 또는 [U.S. Pharmacopoeia - National Formulary (2009) U.S. Phannacopoeia] (개정판 포함), 및/또는 [Physician's Desk Reference (2009) 63rd ed., Thomson Reuters]에 열거된 임의의 또 다른 작용제가 포함된다.
본원에서 사용된 용어 "불순물" 또는 "불순물들"은 한정된 양의 물질 또는 화합물 (예를 들어, 단량체 또는 단량체 단위) 내에 존재하는, 이러한 물질 또는 화합물의 화학 조성과 상이한 물질을 지칭한다. 불순물은 천연적으로 발생할 수 있거나, 또는 물질 또는 화합물의 합성 동안 첨가되거나 합성으로부터 초래될 수 있다.
본원에서 사용된 "주입가능한(injectable)"은 주사기, 카테터, 바늘 또는 액체 매질 내의 마이크로스피어를 주사 또는 주입하기 위한 기타 수단을 통해 신체 내로 투여, 전달 또는 운반될 수 있음을 의미한다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 입자는 주입가능한 입자이다.
본원에서 사용된, "물에서의 혼화성이 낮은" 액체 또는 용액은 25℃의 물에서의 혼화성이 약 50％ 이하, 약 40％ 이하, 약 35％ 이하, 약 30％ 이하, 약 25％ 이하, 약 20％ 이하, 약 15％ 이하, 약 10％ 이하, 약 5％ 이하, 약 4％ 이하, 약 3％ 이하, 약 2％ 이하, 약 1％ 이하, 약 0.5％, 약 0.1％ 이하, 또는 약 0％인 액체 또는 용액을 지칭한다. 구체적 실시양태에서, 이러한 액체 또는 용액은 25℃의 물에서의 혼화성이 약 5％ 이하이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 이러한 액체 또는 용액은 25℃의 물에서의 혼화성이 약 1％ 이하이다. 일부 실시양태에서, 이러한 액체 또는 용액은 비-혼화성이다.
본원에서 사용된 용어 "관리하다", "관리하는" 및 "관리"는 질환의 치유를 초래하지 않는 치료법 (예를 들어, 본원에서 제공되는 마이크로스피어)으로부터 대상체가 얻는 이로운 효과를 지칭한다. 본원에서 제공되는 방법들의 특정 실시양태에서, 질환의 진행 또는 악화를 방지하도록, 소정의 질환 또는 이와 관련된 하나 이상의 증상을 "관리"하기 위해 하나 이상의 치료법이 대상체에게 투여된다.
본원에서 사용된 용어 "마이크로스피어"는 다양한 크기의 물체로 제조되는 중합체 또는 중합체들의 하나 이상의 조합을 지칭한다. 본원에서 사용되는 마이크로스피어는 임의의 형상일 수 있다. 특정 실시양태에서, 마이크로스피어는 실질적으로 구형 형상이다. 이러한 마이크로스피어 구조물들은 일반적으로 형상이 구형 또는 회전타원형이거나, 가상의 구형 또는 회전타원형 형상으로 경계지워질 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어의 표면은 1000배 이하, 예컨대 100배 이하, 10배 이하, 0배 또는 이의 범위의 확대 하에 매끄럽게 보인다. 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어, 감마 또는 베타 방사선조사와 같은 방사선조사에 의해 마이크로스피어를 살균할 수 있다. 본원에서 제공되는 마이크로스피어는 본원에 기술되고 정의된 바와 같은 또 다른 물질들을 포함할 수 있다. 그러나, 용어 "마이크로스피어"가 본원에서 제공되는 조성물 및 방법의 설명을 목적을 위해서 편리한 서술을 나타낸다는 것과 특정 실시양태에서, 본원에 기술된 예시적인 마이스크로스피어가 형상이 정확하게 구형인 것으로 반드시 제한되지는 않는다 (예를 들어, 입자이다)는 것이 이해될 것이다.
용어 "단량체"는 중합체 또는 공중합체를 형성하도록 또 다른 단량체에 화학적으로 결합될 수 있는 소형 분자를 지칭한다. 본원에서의 단량체의 특정 성질 또는 특징에 대한 언급은 상응하는 단량체 단위에 또한 적용될 수 있고, 반대로도 적용된다.
용어 "단량체 단위"는 중합체 또는 공중합체 내의 단량체를 지칭한다.
본원에서 사용된 용어 "제약상 허용가능한"은 연방 정부 또는 주 정부의 관리 기관에 의해 의해 허가됨, 또는 동물, 더욱 특히 인간에서의 사용에 대해 미국 약전, 유럽 약전 또는 기타 일반적으로 인정되는 약전에 열거됨을 의미한다.
본원에서 사용된 용어 "예방한다", "예방하는", 및 "예방"은 소정의 질환의 전체적인 또는 부분적인 억제; 대상체에서의 소정의 질환 또는 이와 관련된 증상의 질환 진행의 개시 또는 발달의 전체적인 또는 부분적인 억제를 지칭한다.
본원에서 사용된 용어 "부작용"은 치료법의 원치 않는 불리한 효과를 포함한다. 원치 않는 효과가 반드시 불리하지는 않다. 치료법으로부터의 불리한 효과는 해롭거나, 불편하거나, 위험할 수 있다. 부작용의 예로는 비염, 설사, 기침, 위장염, 쌕쌕거림, 구역질, 구토, 식욕부진, 복부 경련, 발열, 통증, 체중 감소, 탈수, 탈모, 호흡 곤란, 불면증, 현기증, 점막염, 신경 및 근육에 대한 효과, 피로, 구강 건조, 및 식욕 감퇴, 투여 부위의 발진 또는 종창, 인플루엔자-유사 증상 예컨대 발열, 오한 및 피로, 소화관 장애 및 알러지 반응이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 환자가 경험하는 추가적인 바람직하지 않은 효과가 다수이고, 당업계에 공지되어 있다. 다수가 [Physician's Desk Reference (58th ed., 2004)]에 기술되어 있다.
용어 "음파처리"는 샘플 내의 입자 (예를 들어, 마이크로스피어)를 진탕시키기 위해 소리 에너지를 적용하는 행위 (예를 들어, 초음파처리)를 지칭한다.
본원에서 사용된 "안정화 물질" 또는 "안정화 화합물"은 혼합물, 현탁액, 에멀젼, 분산액, 소포 등이 예를 들어 포함되는 본원에 기술된 조성물, 표적화 리간드 및/또는 기타 생체활성 치료 인자의 안정성을 개선할 수 있는 임의의 물질을 지칭한다.
용어 "줄기 세포"는 자가 재생하고, 분화된 자손을 생성하는 능력이 있는 세포를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 줄기 세포는 중간엽 줄기 세포이다.
용어 "점착성" 또는 "응집된"은 물체 또는 물품 (예를 들어, 마이크로스피어)이 하나 이상의 물체 또는 물품과 단단하게 물리적으로 접촉되어 있고, 외부의 힘 없이 다른 물체 또는 물품과 분리될 수 없는 상태를 지칭한다 (예를 들어, 덩어리 또는 통합체로 모아짐). 특정 실시양태에서, 점착성 또는 응집된 마이크로스피어는, 예를 들어, 젤라틴 또는 젤라틴 대용품으로 인해, 하나 이상의 마이크로스피어와 단단하게 물리적으로 접촉된 마이크로스피어를 지칭한다. 용어 "점착성이지 않은", "비-점착성", "응집되지 않은" 또는 "비-응집된"은 단단한 물리적 접촉 또는 부착이 없는 상태를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 점착성이지 않은, 비-점착성, 응집되지 않은 또는 비-응집된 마이크로스피어는 다른 마이크로스피어와의 단단한 물리적 접촉이 실질적으로 없거나 완전히 없는 마이크로스피어를 지칭한다. 예를 들어, 현미경 하에 관찰함으로써, 집단 내의 점착성 마이크로스피어의 백분율을 결정할 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "대상체" 및 "환자"는 상호교환가능하게 사용된다. 본원에서 사용된 대상체는 본원에서 제공되는 입자의 투여를 포함하는 포유동물 예컨대 비-영장류 (예를 들어, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 래트, 토끼 등) 또는 영장류 (예를 들어, 원숭이 및 인간)이다. 일부 실시양태에서, 환자는 질환 또는 이의 증상의 치료 또는 관리를 필요로 한다. 구체적 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
본원에서 사용된 용어 "실질적으로 구형" 또는 "일반적으로 구형"은 최저 외부 표면적을 나타내는 부피로 정의되는 완전한 구에 가까운 형상을 지칭한다. 구체적으로, 본원에서 사용된 "실질적으로 구형"은, 입자의 임의의 단면을 볼 때 (예를 들어 현미경으로), 평균 긴 지름과 평균 짧은 지름 간의 차이가 20％ 미만, 15％ 미만, 10％ 미만, 5％ 미만, 또는 1％ 미만인 것을 의미한다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어의 표면은 1000배 이하, 예컨대 100배 이하, 10배 이하, 0배 또는 이의 범위의 확대 하에 매끄럽게 보인다.
용어 "치료제" 또는 "치료 약물"은 상호교환가능하게 사용되고, 원하는 효과, 일반적으로는 이로운 효과를 일으키도록 살아 있는 존재의 신체 도관에 전달되는 임의의 치료적으로 활성인 물질을 지칭한다.
본원에서 사용된 용어 "치료법"은 소정의 질환 또는 이와 관련된 증상의 관리, 치료 및/또는 개선에서 사용될 수 있는 임의의 프로토콜, 방법 및/또는 작용제를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 용어 "치료법들" 및 "치료법"은 소정의 질환 또는 이와 관련된 증상의 관리 또는 치료에서 유용한, 생물학적 치료법, 지지 치료법, 및/또는 의료진과 같은 당업자에게 공지된 기타 치료법을 지칭한다.
본원에서 사용된 용어 "치료하다", "치료" 및 "치료하는"은 질환 또는 이의 증상의 진행, 중증도 및/또는 기간의 감소 또는 개선을 지칭한다.
본원에서 사용된 용어 "초고순도"는 이질적인 화합물 또는 물질로 희석되지 않은 또는 이질적인 화합물 또는 물질과 혼합되지 않은 화합물 또는 물질 (예를 들어, 단량체 또는 단량체 단위)과 비교하여 불순물의 수준이 매우 낮은 화합물 또는 물질 (예를 들어, 단량체 또는 단량체 단위)의 상태를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 불순물은 염이다. 일부 실시양태에서, 화합물 또는 물질 내에 존재하는 불순물의 수준은 백분율 (％)로 표현될 수 있다; 예를 들어, 초고순도 단량체 또는 초고순도 단량체 단위에는 1％ 미만, 2％ 미만, 3％ 미만, 4％ 미만, 5％ 미만, 6％ 미만, 7％ 미만, 8％ 미만, 9％ 미만, 10％ 미만, 15％ 미만, 20％ 미만, 25％ 미만 또는 이의 임의의 범위의 불순물이 있을 수 있다. 특정 실시양태에서, 브롬 테스트에 의해 불순물의 수준이 결정된다 (예를 들어, 실시예 3 및 6 참조). 또 다른 실시양태에서, HPLC에 의해 불순물의 수준이 결정된다 (예를 들어, 실시예 2 및 5 참조).
용어 "자궁 섬유종" 또는 "평활근종"은 자궁의 특정 유형의 근육 섬유 및 섬유 결합 조직으로 구성된 비-암성 종양을 지칭한다.
도면의 간단한 설명
도 1a-1b는 단량체들의 순도 비교를 도해한다. 도 1a는 바이오세프라(BioSepra)로부터 수득된 DEAE 단량체의 소정의 롯트(lot) (T209, U088 및 U089)에 대해 브롬화 반응 (오른쪽 막대, 제조사인 바이오세프라 제공) 및 HPLC (왼쪽 막대)를 사용하여 관찰된 순도 감도에서의 차이를 묘사한다. 도 1b는 브롬화 반응 (오른쪽 막대) 또는 HPLC (왼쪽 막대)를 사용하여 관찰된 트리스아크릴의 2개의 상이한 롯트 (바이오세프라로부터 수득된 R426 및 R402)에 대한 순도 감도에서의 차이를 묘사하고, 데이터는 재결정화 전의 SAFC의 트리스아크릴 단량체 (TA)로 수득되고 이와 비교된 재결정화된 트리스아크릴 (TA-R)의 100％ 순도를 가정하여 제시된다.
도 2a-2c는 초음파처리에 의한 점착성 마이크로스피어의 감소를 도해한다. 영상 분석은 초음파처리에 의한 점착성 마이크로스피어의 유의한 감소를 나타낸다. 이러한 방법에 의해 파괴된 마이크로스피어가 관찰되지 않았다. 도 2a는 초기 (왼쪽 패널) 및 15분의 초음파처리 후 (오른쪽 패널)의 가교 전의 마이크로스피어를 나타낸다. 점착성 마이크로스피어의 백분율이 초음파처리로 약 7％에서 약 0.2％로 감소된다. 도 2b는 가교 전에 초음파처리되지 않은 (왼쪽 패널) 또는 초음파처리된 (오른쪽 패널) 가교 후의 마이크로스피어를 나타낸다. 초음파처리 단계 후 체질을 수행하였다. 점착성 마이크로스피어의 백분율이 초음파처리로 약 3％에서 거의 약 0％로 감소된다. 도 2c는 초기 (왼쪽 패널) 및 2×15분의 초음파처리 후 (오른쪽 패널)의 가교 전의 마이크로스피어를 나타낸다. 점착성 마이크로스피어의 백분율이 초음파처리로 약 9.2％에서 약 1.6％로 감소된다.
도 3a-3c는 젤라틴 가교 전 (도 3a) 및 후 (도 3b)에 초음파처리가 적용된 점착성 마이크로스피어의 백분율을 도해한다. 초음파처리 단계 후 체질을 수행하였고, 체 상의 부피의 백분율이 도 3c에서 제시된다.
도 4a-4g는 출발 물질 및 마이크로스피어의 고해상도 매직 앵글 스피닝 (HR-MAS: high resolution magic angle spinning) 1차원 (1D) 1H 스펙트럼을 도해한다. 도 4a-d는 트리스아크릴 (4a), 젤라틴 (4b), MBA (4c) 및 DEAE 아크릴아미드 (4d)의 HR-MAS 1차원 1H 스펙트럼을 도해한다. 도 4e-4g는 트리스아크릴 (4e), MBA (4f) 및 DEAE 아크릴아미드 (4g)의 1H 핵의 속성을 나타낸다.
도 5a-5j는 여러 공급원들의 물질로부터 제조된 마이크로스피어들의 1차원 1H NMR 스펙트럼을 도해한다. 도 5a-5d는 샘플 SAFC FMP 128 및 PALL FMP 130의 NMR 스펙트럼을 도해한다. 도 5a는 스펙트럼들로부터 확인된 상응하는 주요 피크들 (A, B 및 C로 표시됨) 간의 유사성을 나타내는 NMR 스펙트럼의 중첩이다. 도 5b는 9-5 ppm 영역에서의 NMR 스펙트럼을 나타낸다. 도 5c는 5-0 ppm 영역에서의 NMR 스펙트럼을 나타낸다. 도 5d는 3.4-1.2 ppm 영역에서의 NMR 스펙트럼을 나타낸다. 도 5e-5j는 샘플 SAFC FMP 128, PALL FMP 130, FM0903031-M1675 및 FM0903021-M1654의 NMR 스펙트럼을 도해한다. 도 5e는 NMR 스펙트럼들의 비교를 나타낸다. 도 5f는 2.6-1.5 ppm의 NMR 스펙트럼을 나타낸다. 도 5g는 3.4-1.2 ppm 영역에서의 스펙트럼을 나타낸다. 도 5h는 9-5 ppm 영역에서의 NMR 스펙트럼을 나타낸다. 도 5i는 스펙트럼들의 중첩을 나타낸다 (도 5i). 도 5j는 디콘볼루션(deconvolution) 후의 NMR 스펙트럼을 나타낸다.
도 6은 예시적인 피드 링 공정의 개략도를 도해한다.
도 7은 NMR 분석에 사용된 HR-MAS 로터를 도해한다.
상세한 설명
본원에서 제공되는 마이크로스피어는, 특정 실시양태에서, 장기, 조직 및 세포에 비-독성이고, 생체적합성이며, 이들이 촉진하는 세포 성장에 의해 이식 부위의 다양한 세포 및 조직에 대해 부착성이다. 또한, 특정 실시양태에서, 이러한 마이크로스피어는 비-흡수성 및 비-생체분해성이고, 따라서 안정적이고, 내구적이며, 일단 원하는 부위에서 이식되면 자신의 일반적인 형상 및 위치를 유지할 것이다. 추가적인 실시양태에서, 마이크로스피어는 현탁액 내에서 또한 안정적이고, 이는 마이크로스피어 또는 기타 고체 물질이 현탁액으로 제형 및 저장되고 다른 액체와 함께 주입되는 것을 허용한다.
A. 색전술용 마이크로스피어
한 측면에서, (a) N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위를 포함하는 공중합체, 및 (b) 가교된 젤라틴 또는 젤라틴 대용품을 포함하는 마이크로스피어가 본원에서 제공된다. 또 다른 측면에서, (a) N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체를 공중합시킴으로써 제조된 공중합체, 및 (b) 가교된 젤라틴 또는 젤라틴 대용품을 포함하는 마이크로스피어가 본원에서 제공된다. 구체적 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 (또는 단량체 단위) 중 1개, 2개 또는 3개 모두가 초고순도 단량체 (또는 단량체 단위)이다. 특정 실시양태에서, 마이크로스피어는 1H NMR 스펙트럼에서, 제1 피크 (예를 들어, 약 3.5 ppm 내지 약 4 ppm), 제2 피크 (예를 들어, 약 3 ppm 내지 약 3.5 ppm), 및 제3 피크 (예를 들어, 약 1 ppm 내지 약 1.5 ppm)를 나타낸다. 구체적 실시양태에서, 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 0.50 내지 약 0.65이고/이거나 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 0.55 내지 약 0.75 (예를 들어, 약 0.61 내지 약 0.75)이다.
한 실시양태에서, 마이크로스피어는 (a) N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위를 포함하는 공중합체, 및 (b) 가교된 젤라틴을 포함하고; 이때 마이크로스피어는 1H NMR 스펙트럼에서, 약 3.5 ppm 내지 약 4 ppm의 제1 피크, 약 3 ppm 내지 약 3.5 ppm의 제2 피크, 및 약 1 ppm 내지 약 1.5 ppm의 제3 피크를 나타내고; (i) 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 0.50 내지 약 0.65이거나, (ii) 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 0.55 내지 약 0.75 (예를 들어, 약 0.61 내지 약 0.75)이거나, 또는 (iii) (i)과 (ii)의 조합이다. 또 다른 실시양태에서, 마이크로스피어는 (a) N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체를 공중합시킴으로써 제조된 공중합체, 및 (b) 가교된 젤라틴을 포함하고; 이때 마이크로스피어는 1H NMR 스펙트럼에서, 약 3.5 ppm 내지 약 4 ppm의 제1 피크, 약 3 ppm 내지 약 3.5 ppm의 제2 피크, 및 약 1 ppm 내지 약 1.5 ppm의 제3 피크를 나타내고; (i) 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 0.50 내지 약 0.65이거나, (ii) 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 0.55 내지 약 0.75 (예를 들어, 약 0.61 내지 약 0.75)이거나, 또는 (iii) (i)과 (ii)의 조합이다. 특정 실시양태에서, 제1 피크가 약 3.77 ppm이거나, 제2 피크가 약 3.2 ppm이거나, 제3 피크가 약 1.3 ppm이거나, 또는 이들의 조합이다. 또 다른 실시양태에서, 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 0.574이거나, 또는 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 0.625이다. 일부 실시양태에서, 1H NMR 스펙트럼이 기록될 때 (예를 들어, 400 MHz에서), 마이크로스피어는 25℃이고/이거나 중수소화 용매 내에 존재한다.
일부 실시양태에서, 단량체 (또는 단량체 단위) 중 하나 이상이 초고순도 단량체 (또는 단량체 단위)이다. 특정 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 및/또는 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체가 각각 초고순도 단량체이다. 구체적 실시양태에서, 예를 들어, HPLC (예를 들어, 실시예 2 및 5 참조) 또는 브롬 테스트 (예를 들어, 실시예 3 및 6 참조)에 의해 결정 시, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체가 9％ 미만의 불순물을 포함하고/하거나 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체가 2％ 미만의 불순물을 포함한다. 특정 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체가 각각 초고순도 단량체이다. 한 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체가 초고순도 단량체인 한편, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체는 초고순도 단량체가 아니다. 또 다른 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 및 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체가 각각 초고순도 단량체인 한편, N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체는 초고순도 단량체가 아니다. 일부 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체가 각각 초고순도 단량체인 한편, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체는 초고순도 단량체가 아니다. 한 실시양태에서, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체가 초고순도 단량체인 한편, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체는 초고순도 단량체가 아니다. 또 다른 실시양태에서, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체가 각각 초고순도 단량체인 한편, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드는 초고순도 단량체가 아니다. 한 실시양태에서, N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체가 초고순도 단량체인 한편, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 및 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체는 초고순도 단량체가 아니다. 또 다른 실시양태에서, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체가 초고순도 단량체인 한편, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체는 그렇지 않다. 또 다른 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 및 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 양쪽 모두가 초고순도 단량체이다. 추가적인 실시양태에서, 예를 들어, 비제한적으로, 탄화수소 사슬 및/또는 이온화될 수 있는 친수성 화학기를 도입함으로써 원하는 대로 이러한 단량체들의 소수성 또는 이온 특성이 변형될 수 있고, 이는 마이크로스피어의 약물-로딩(loading) 특성 (예를 들어, 공중합체와 약물 간의 이온 상호작용)을 촉진하는데 예를 들어 사용될 수 있다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 산성 관능기가 부가되도록 단량체 또는 중합체가 변형되고 (예를 들어, 단량체 혼합물에 아크릴산나트륨 또는 비닐 설포네이트가 첨가됨), 이러한 관능기는 소정의 약물 (예를 들어, 독소루비신 또는 기타 안트라사이클린) 내의 아민 관능기와 예를 들어 상호작용할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 단량체가 설포네이트 기로 변형된다. 일부 실시양태에서, 단량체는 수분 함량이 약 5％ 내지 약 0％, 예컨대 5％ 이하, 4％ 이하, 3％ 이하, 2％ 이하 또는 1％ 이하이다. 당업계에 공지된 방법, 예컨대 NMR 분석을 사용하여 수분 함량을 결정할 수 있다.
일부 실시양태에서, 예를 들어, 마이크로스피어의 공중합체에 또는 공중합체 내에 젤라틴이 가교된다. 또 다른 실시양태에서, 젤라틴이 가교되지 않는다. 본원에서 사용되는 젤라틴은 임의의 공급원으로부터의 것일 수 있다. 예시적인 공급원에는 소, 돼지 및 말의 뼈, 결합 조직, 장기 및 일부 창자로부터 추출된 콜라겐이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 구체적 실시양태에서, 젤라틴은 돼지 젤라틴이다. 구체적 실시양태에서, 젤라틴은 제약 및/또는 식품 등급의 젤라틴이고, 피비 라이너(PB Leiner) (Vilvoorde, Belgium)와 같은 시판원으로부터 이를 수득할 수 있다.
두번째 측면에서, (a) (i) N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, (ii) 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체, (iii) N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체, 및 (iv) 젤라틴을 포함하고, 이때 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 및/또는 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체가 초고순도 단량체인 수용액을 제조하는 단계; (b) 수용액을 물에서의 혼화성이 낮은 액체 유기 상 (예를 들어, 오일, 예컨대 미네랄 오일, 예컨대 파라핀 오일)에 첨가한 후 교반하거나 또는 첨가하면서 교반함으로써, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위를 포함하는 공중합체를 포함하는 마이크로스피어를 생산하는 단계; (c) 임의적으로, 마이크로스피어에 음파처리 (예를 들어, 초음파처리)를 적용하는 단계; 및 (d) 젤라틴을 가교시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 마이크로스피어가 본원에서 제공된다. 이러한 방법의 실시양태들이 하기 섹션 C에서 기술된다.
본원에서 제공되는 마이크로스피어는 임의의 형상을 지닐 수 있다. 구체적 실시양태에서, 이러한 마이크로스피어는 형상 면에서 실질적으로 구형이다. 특정 실시양태에서, 마이크로스피어는 균일한 형상이다.
특정 실시양태에서, 제공되는 마이크로스피어는 특정 크기 범위로 조정된다. 이같은 조정은 당업계에 공지된 방법을 사용하여, 예컨대 적합한 크기의 메쉬 체를 사용하는 1회 이상의 체질에 의해 달성될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어는 직경이 약 1 ㎛ 내지 2000 ㎛, 예컨대 약 10 ㎛ 내지 1000 ㎛, 약 40 ㎛ 내지 약 120 ㎛, 약 100 ㎛ 내지 약 300 ㎛, 약 300 ㎛ 내지 약 500 ㎛, 약 500 ㎛ 내지 약 700 ㎛, 약 700 ㎛ 내지 약 900 ㎛, 또는 약 900 ㎛ 내지 약 1200 ㎛이다. 이러한 직경은 마이크로스피어가 혈관, 관내, 경식도, 진피하, 피하, 점막하, 경기관지 또는 간질 경로가 포함되는 다양한 경로에 의해 카테터, 바늘 (예를 들어, 18 게이지 이하의 바늘), 튜빙(tubing) 등을 통해 생체 내의 표적 혈관, 조직 또는 장기에 전달되도록 허용할 수 있다. 특정 실시양태에서, 마이크로스피어는 대식세포 또는 면역계 또는 림프계의 또 다른 요소를 통해 제거될 수 있다.
특정 실시양태에서, 마이크로스피어는 크기 면에서 균일하다. 특정 실시양태에서, 마이크로스피어는 크기 면에서 균일하고, 이때 개별적인 마이크로스피어들 간의 직경 차이는 약 0 ㎛ 내지 약 100 ㎛, 약 0 ㎛ 내지 약 50 ㎛, 또는 약 0 ㎛ 내지 약 25 ㎛, 예컨대 100 ㎛ 이하, 약 50 ㎛ 이하, 약 25 ㎜ 이하, 약 10 ㎜ 이하 또는 약 5 ㎛ 이하이다.
특정 실시양태에서, 마이크로스피어는 집단의 68％ 초과가 평균 직경의 ±20％, 평균 직경의 ±10％, 평균 직경의 ±15％, 평균 직경의 ±10％, 평균 직경의 ±9％, 평균 직경의 ±8％, 평균 직경의 ±7％, 평균 직경의 ±6％, 평균 직경의 ±5％, 평균 직경의 ±4％, 평균 직경의 ±3％, 평균 직경의 ±2％, 또는 평균 직경의 ±1％, 또는 이의 임의의 범위의 직경을 갖는 집단 내에 존재한다. 한 실시양태에서, 마이크로스피어는 집단의 70％ 초과가 평균 직경의 ±20％, 평균 직경의 ±10％, 평균 직경의 ±15％, 평균 직경의 ±10％, 평균 직경의 ±9％, 평균 직경의 ±8％, 평균 직경의 ±7％, 평균 직경의 ±6％, 평균 직경의 ±5％, 평균 직경의 ±4％, 평균 직경의 ±3％, 평균 직경의 ±2％, 또는 평균 직경의 ±1％, 또는 이의 임의의 범위의 직경을 갖는 집단 내에 존재한다. 한 실시양태에서, 마이크로스피어는 집단의 75％ 초과가 평균 직경의 ±20％, 평균 직경의 ±10％, 평균 직경의 ±15％, 평균 직경의 ±10％, 평균 직경의 ±9％, 평균 직경의 ±8％, 평균 직경의 ±7％, 평균 직경의 ±6％, 평균 직경의 ±5％, 평균 직경의 ±4％, 평균 직경의 ±3％, 평균 직경의 ±2％, 또는 평균 직경의 ±1％, 또는 이의 임의의 범위의 직경을 갖는 집단 내에 존재한다. 한 실시양태에서, 마이크로스피어는 집단의 80％ 초과가 평균 직경의 ±20％, 평균 직경의 ±10％, 평균 직경의 ±15％, 평균 직경의 ±10％, 평균 직경의 ±9％, 평균 직경의 ±8％, 평균 직경의 ±7％, 평균 직경의 ± 6％, 평균 직경의 ±5％, 평균 직경의 ±4％, 평균 직경의 ±3％, 평균 직경의 ±2％, 또는 평균 직경의 ±1％, 또는 이의 임의의 범위의 직경을 갖는 집단 내에 존재한다. 한 실시양태에서, 마이크로스피어는 집단의 85％ 초과가 평균 직경의 ±20％, 평균 직경의 ±10％, 평균 직경의 ±15％, 평균 직경의 ±10％, 평균 직경의 ±9％, 평균 직경의 ±8％, 평균 직경의 ±7％, 평균 직경의 ±6％, 평균 직경의 ±5％, 평균 직경의 ±4％, 평균 직경의 ±3％, 평균 직경의 ±2％, 또는 평균 직경의 ±1％, 또는 이의 임의의 범위의 직경을 갖는 집단 내에 존재한다. 한 실시양태에서, 마이크로스피어는 집단의 90％ 초과가 평균 직경의 ±20％, 평균 직경의 ±10％, 평균 직경의 ±15％, 평균 직경의 ± 10％, 평균 직경의 ±9％, 평균 직경의 ±8％, 평균 직경의 ±7％, 평균 직경의 ±6％, 평균 직경의 ±5％, 평균 직경의 ±4％, 평균 직경의 ±3％, 평균 직경의 ±2％, 또는 평균 직경의 ±1％, 또는 이의 임의의 범위의 직경을 갖는 집단 내에 존재한다. 한 실시양태에서, 마이크로스피어는 집단의 95％ 초과가 평균 직경의 ±20％, 평균 직경의 ±10％, 평균 직경의 ±15％, 평균 직경의 ±10％, 평균 직경의 ±9％, 평균 직경의 ±8％, 평균 직경의 ±7％, 평균 직경의 ±6％, 평균 직경의 ±5％, 평균 직경의 ±4％, 평균 직경의 ±3％, 평균 직경의 ±2％, 또는 평균 직경의 ±1％, 또는 이의 임의의 범위의 직경을 갖는 집단 내에 존재한다.
일부 실시양태에서, 집단 내의 마이크로스피어의 1％ 미만, 0.9％ 미만, 0.8％ 미만, 0.7％ 미만, 0.6％ 미만, 0.5％ 미만, 0.4％ 미만, 0.3％ 미만 또는 0.2％ 미만, 0.1％ 미만 또는 0％ (또는 이의 범위내)가 마이크로스피어의 소정의 확장 범위 (예를 들어, ±50 ㎛, ±100 ㎛, ±150 ㎛, ±200 ㎛, ±250 ㎛ 또는 ±300 ㎛) 바깥에 존재한다. 예시적인 설명으로서, 조정된 마이크로스피어 집단의 직경이 500 ㎛ 내지 700 ㎛ (범위)이면, 확장 범위는 예를 들어 ± 100 ㎛일 수 있고, 예를 들어, 이때 99％의 마이크로스피어는 크기 범위가 400 ㎛ 내지 800 ㎛이고, 1％의 마이크로스피어는 크기 범위가 이러한 확장 범위 바깥이다. 또 다른 예시적인 실시양태에서, 이러한 범위는 명목 범위 600 ㎛의 500 ㎛ 내지 700 ㎛이고, 이때 집단의 80％는 명목 범위의 ±100 ㎛ (즉, 500 ㎛ 내지 700 ㎛의 확장 범위)이고, 집단의 99％는 명목 범위의 ±200 ㎛ (즉, 400 ㎛ 내지 800 ㎛)이며, 집단의 0.5％ 내지 1％는 800 ㎛을 초과하고 집단의 나머지 0％ 내지 0.5％는 400 ㎛ 미만이다 (총 100％). 특정 실시양태에서, 명목 범위는 약 50 ㎛ 내지 2000 ㎛, 예컨대 80 ㎛, 100 ㎛, 200 ㎛, 300 ㎛, 400 ㎛, 500 ㎛, 600 ㎛, 700 ㎛, 800 ㎛, 900 ㎛, 1000 ㎛, 1100 ㎛, 1150 ㎛, 1200 ㎛, 1300 ㎛, 1400 ㎛, 1500 ㎛, 1600 ㎛, 1700 ㎛, 1800 ㎛, 1900 ㎛, 2000 ㎛ 또는 이의 임의의 범위이다.
마이크로스피어는 현탁액에서 안정적이고, 이는 마이크로스피어가 현탁액으로 제형 및 저장되고 다른 액체와 함께 주입되는 것을 허용한다. 더욱 구체적으로, 마이크로스피어의 소수성 성질은 보관 용기 및 이식 장치, 예컨대 카테터, 주사기, 바늘 등의 벽에 대한 부착 또는 응집물의 형성을 피하면서 이를 현탁액 내에, 특히 비-발열성이거나 발열원이 없는 무균성의 주입가능한 용액의 형태로 놓는 것을 허용한다.
본원에서 제공되는 마이크로스피어는 예컨대 주입에 의해 다양한 신체 위치 내에 이식될 수 있다. 본원에서 제공되는 조성물 및 방법에서 사용하기 위한 중합체성 물질은 조직 및 세포에 대해 비-독성이고, 생체적합성이며, 즉 일반적으로 염증을 야기하지 않는다. 마이크로스피어는 일단 원하는 부위에 이식되면 자신의 일반적인 형상 및 위치를 유지할 수 있다. 본원에서 제공되는 마이크로스피어는 압축성이고, 구체적 실시양태에서, 18 게이지 이하의 바늘을 통해 주사될 수 있다.
특정 실시양태에서, 마이크로스피어는 18 게이지 이하의 바늘을 통해 주입가능하고, 면역계 또는 림프계에 의해 제거될 수 없거나, 또는 이에 의한 제거가 감소된 것이다. 일부 실시양태에서, 중합체가 세포 부착을 촉진하는 작용제로 코팅된다. 특정 실시양태에서, 마이크로스피어는 젤라틴 또는 젤라틴 대용품에 더하여 세포 부착 촉진제를 포함한다. 당업계에 주지된 다양한 유형의 세포 부착 촉진제를 사용할 수 있다. 일부 실시양태에서, 콜라겐, 젤라틴, 카르복시메틸 (CM) 덱스트란, DEAE 덱스트란, 글루코사미노글리칸, 피브로넥틴, 렉틴, 다가양이온 (예컨대 폴리라이신, 키토산), 임의의 기타 천연 또는 합성 생물학적 세포 부착제 또는 이들의 임의의 조합물로부터 세포 부착 촉진제가 선택된다. 특정 실시양태에서, 부착제를 망상화함으로써 마이크로스피어의 안정성이 증가된다. 젤라틴의 경우, 예를 들어, 망상화제는 젤라틴 아민 상에 작용하는 2관능성 화학 작용제 (예를 들어, 글루타르알데하이드, 포름알데하이드, 글리옥살 등) 중에서 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포 부착 촉진제는 침강된 마이크로스피어 1 ㎖ 당 약 0.1 g 내지 1 g 양으로 마이크로스피어 또는 기타 고체 물질 내에 존재한다.
특정 실시양태에서, 예를 들어, 표지제를 추가로 포함함으로써, 마이크로스피어가 광원 하에 신체 내에서 가시적이다. 일부 실시양태에서, 마이크로스피어가 이의 합성 후에 표지될 수 있다. 이는, 예를 들어, 형광 마커 유도체 (예를 들어, 플루오레세인 이소티오시아네이트 (FITC), 로다민 이소티오시아네이트 (RITC) 등 포함)를 그래프트시킴으로써 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학 염료, 예컨대 시바크론 블루(Cibacron Blue) 또는 프로시온 레드(Procion Red) HE-3B (마이크로스피어의 직접적인 가시화를 가능하게 함), 자기 공명 영상화제 (에르븀, 가돌리늄 또는 자철광); 조영제, 예컨대 바륨 또는 요오드 염 (예를 들어, (아크릴아미도-3-프로피온아미도)-3-트리요오도-2,4,6-벤조산 포함)일 수 있는 마커와 단량체를 화학적으로 커플링시킴으로써 검출가능한 단량체가 수득될 수 있다. 바륨 또는 자철광 염의 경우, 이는 분말화된 형태로 초기 단량체 용액에 직접 도입될 수 있다. 특정 실시양태에서, 조영제는 방사선 비투과성 조영제, 예컨대 비-이온성 조영제이다. 일부 실시양태에서, 조영제는 환자 내로의 주입 전, 동안 및/또는 후에 마이크로스피어와 혼합된다. 구체적 실시양태에서, 조영제 (예를 들어, 비-이온성 조영제) 및 본원에서 제공되는 마이크로스피어를 포함하는 조성물이 환자에게 투여된다.
친화성 크로마토그래피에서 주지되어 있는 화학적 커플링 절차에 의해 세포 부착 촉진제 또는 표지제가 마이크로스피어 상에 도입될 수 있다. 마이크로스피어를 구성하는 겔 네트워크 내에 확산시킨 후, 확산된 분자를 침전 또는 화학적 가교에 의해 적소에 포착시킴으로써 도입이 또한 달성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 살아 있는 세포 (예를 들어, 줄기 세포)가 마이크로스피어에 부착되어 마이크로스피어 내 또는 마이크로스피어 상에 세포층을 형성하고, 이는 주변 조직과 연결되고 비드(bead)의 장기 안정성을 강화할 수 있다.
1. N- 트리스 -히드록시 메틸 메틸아크릴아미드 단량체
N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드는 트리스아크릴, N-[1,3-디히드록시-2-(히드록시메틸)프로판-2-일]프로프-2-엔아미드; TRIS-아크릴아미드; N-(트리스(히드록시메틸)메틸)아크릴아미드; N-아크릴로일트리스(히드록시메틸)아미노메탄; 또는 N-아크릴로일-트리스(히드록시메틸)아미노메탄으로 또한 공지될 수 있다. 특정 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드는 CAS 등록 번호 13880-05-2, 분자식 C7H13NO4, 분자량 약 175.2 g/몰, 및 하기의 구조를 갖는 것으로 정의된다:
Figure 112011023574513-pct00001
N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체는 시판되거나 (예를 들어, <PALL Biosepra> (France) 또는 <Sigma Aldrich Fine Chemicals> (SAFC), 제품 번호 78561), 또는 합성될 수 있다 (예를 들어, 실시예 4 참조). 특정 실시양태에서, 하기 반응식에 따라 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체가 합성된다:
Figure 112011023574513-pct00002
특정 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체는 초고순도 단량체이다. 구체적 실시양태에서, 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체는, 예를 들어, 브롬 테스트 (예를 들어, 실시예 6에서 제공된 바와 같음)에 의해 결정 시, 0％ 내지 9％의 불순물, 즉, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 이외의 물질 예컨대 과량의 출발 물질 또는 이의 유도체 (예를 들어, 아크릴로일 클로라이드 또는 2-아미노-2-(히드록시메틸)프로판-1,3-디올), 부산물 또는 무기 염을 포함한다. 일부 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체는 25％ 내지 0％ 불순물, 예컨대 25％ 내지 20％, 25％ 내지 15％, 25％ 내지 10％, 25％ 내지 5％, 25％ 내지 1％, 25％ 내지 0％, 20％ 내지 15％, 20％ 내지 10％, 20％ 내지 5％, 20％ 내지 1％, 20％ 내지 0％, 15％ 내지 10％, 15％ 내지 5％, 15％ 내지 1％, 15％ 내지 0％, 10％ 내지 5％, 10％ 내지 1％, 10％ 내지 0％, 5％ 내지 1％, 5％ 내지 0％를 포함한다 (예를 들어, 실시예 5에서 예를 들어 제공되는 바와 같은 HPLC에 의해 결정 시). 또 다른 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체는 25％ 내지 0％ 불순물, 예컨대 25％ 내지 20％, 25％ 내지 15％, 25％ 내지 10％, 25％ 내지 5％, 25％ 내지 1％, 25％ 내지 0％, 20％ 내지 15％, 20％ 내지 10％, 20％ 내지 5％, 20％ 내지 1％, 20％ 내지 0％, 15％ 내지 10％, 15％ 내지 5％, 15％ 내지 1％, 15％ 내지 0％, 10％ 내지 5％, 10％ 내지 1％, 10％ 내지 0％, 5％ 내지 1％, 5％ 내지 0％를 포함한다 (예를 들어, 실시예 5에서 예를 들어 제공되는 바와 같은 HPLC에 의해 결정 시). 일부 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체는 25％ 미만, 24％ 미만, 23％ 미만, 22％ 미만, 21％ 미만, 20％ 미만, 9％ 미만, 18％ 미만, 17％ 미만, 16％ 미만, 15％ 미만, 14％ 미만, 13％ 미만, 12％ 미만, 11％ 미만, 10％ 미만, 9％ 미만, 8％ 미만, 7％ 미만, 6％ 미만, 5％ 미만, 4％ 미만, 3％ 미만, 2.75％ 미만, 2.5％ 미만, 2.25％ 미만, 2％ 미만, 1.75％ 미만, 1.5％ 미만, 1.25％ 미만, 1％ 미만, 0.25％ 미만, 0.5％ 미만, 0.25％ 미만 또는 0％, 또는 이의 임의의 범위의 불순물을 포함한다 (예를 들어, 실시예 6에서 예를 들어 제공되는 바와 같은 브롬 테스트에 의해 결정 시). 또 다른 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체는 25％ 미만, 24％ 미만, 23％ 미만, 22％ 미만, 21％ 미만, 20％ 미만, 9％ 미만, 18％ 미만, 17％ 미만, 16％ 미만, 15％ 미만, 14％ 미만, 13％ 미만, 12％ 미만, 11％ 미만, 10％ 미만, 9％ 미만, 8％ 미만, 7％ 미만, 6％ 미만, 5％ 미만, 4％ 미만, 3％ 미만, 2.75％ 미만, 2.5％ 미만, 2.25％ 미만, 2％ 미만, 1.75％ 미만, 1.5％ 미만, 1.25％ 미만, 1％ 미만, 0.25％ 미만, 0.5％ 미만, 0.25％ 미만 또는 0％, 또는 이의 임의의 범위의 불순물을 포함한다 (예를 들어, 실시예 5에서 예를 들어 제공되는 바와 같은 HPLC에 의해 결정 시). 구체적 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체는 9％ 미만, 8％ 미만, 7％ 미만, 6％ 미만, 5％ 미만, 4％ 미만, 3％ 미만, 2％ 미만, 1％ 미만 또는 0％, 또는 이의 임의의 범위의 불순물을 포함한다 (예를 들어, 실시예 6에서 예를 들어 제공되는 바와 같은 브롬 테스트에 의해 결정 시). 또 다른 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체는 9％ 미만, 8％ 미만, 7％ 미만, 6％ 미만, 5％ 미만, 4％ 미만, 3％ 미만, 2％ 미만, 1％ 미만 또는 0％, 또는 이의 임의의 범위의 불순물을 포함한다 (예를 들어, 실시예 5에서 예를 들어 제공되는 바와 같은 HPLC에 의해 결정 시).
2. 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체
디에틸아미노에틸아크릴아미드는 DEAE, DEAE 아크릴아미드, N-((2-디에틸아미노)에틸)아크릴아미드; N-(2-디에틸아미노에틸)프로프-2-엔아미드; N-(2-디에틸아미노)에틸)아크릴아미드; N-(2-(디에틸아미노)에틸)아크릴아미드; 또는 N-(2-(디에틸아미노)에틸)-2-프로펜아미드로 또한 공지될 수 있다.
특정 실시양태에서, 디에틸아미노에틸아크릴아미드는 분자식 C9H18N2O, 분자량 약 170.3 g/몰, 및 하기의 구조를 갖는 것으로 정의된다:
Figure 112011023574513-pct00003
디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체는 시판되거나 (예를 들어, <PALL Biosepra> (France) 또는 SAFC), 또는 합성될 수 있다 (예를 들어, 실시예 1 참조). 특정 실시양태에서, 하기 반응식에 따라 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체가 합성된다:
Figure 112011023574513-pct00004
특정 실시양태에서, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체는 초고순도 단량체이다. 구체적 실시양태에서, 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체는 0％ 내지 2％의 불순물, 즉, 디에틸아미노에틸아크릴아미드이외의 물질 예컨대 과량의 출발 물질 또는 이의 유도체 (예를 들어, 아크릴로일 클로라이드, N,N,N',N'-테트라메틸에틸렌디아민 또는 N,N-디에틸에틸렌디아민), 부산물 또는 무기 염을 포함한다 (실시예 3에서 예를 들어 제공되는 바와 같은 브롬 테스트에 의해 결정 시). 일부 실시양태에서, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체는 20％ 내지 0％ 불순물, 예컨대 20％ 내지 15％, 20％ 내지 10％, 20％ 내지 5％, 20％ 내지 1％, 20％ 내지 0％, 15％ 내지 10％, 15％ 내지 5％, 15％ 내지 1％, 15％ 내지 0％, 10％ 내지 5％, 10％ 내지 1％, 10％ 내지 0％, 5％ 내지 1％, 5％ 내지 0％를 포함한다 (예를 들어, 실시예 3에서 예를 들어 제공되는 바와 같은 브롬 테스트에 의해 결정 시). 또 다른 실시양태에서, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체는 20％ 내지 0％ 불순물, 예컨대 20％ 내지 15％, 20％ 내지 10％, 20％ 내지 5％, 20％ 내지 1％, 20％ 내지 0％, 15％ 내지 10％, 15％ 내지 5％, 15％ 내지 1％, 15％ 내지 0％, 10％ 내지 5％, 10％ 내지 1％, 10％ 내지 0％, 5％ 내지 1％, 5％ 내지 0％를 포함한다 (예를 들어, 실시예 2에서 예를 들어 제공되는 바와 같은 HPLC에 의해 결정 시). 일부 실시양태에서, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체는 20％ 미만, 19％ 미만, 18％ 미만, 17％ 미만, 16％ 미만, 15％ 미만, 14％ 미만, 13％ 미만, 12％ 미만, 11％ 미만, 10％ 미만, 9％ 미만, 8％ 미만, 7％ 미만, 6％ 미만, 5％ 미만, 4％ 미만, 3％ 미만, 2.75％ 미만, 2.5％ 미만, 2.25％ 미만, 2％ 미만, 1.75％ 미만, 1.5％ 미만, 1.25％ 미만, 1％ 미만, 0.25％ 미만, 0.5％ 미만, 0.25％ 미만 또는 0％, 또는 이의 임의의 범위의 불순물을 포함한다 (예를 들어, 실시예 3에서 예를 들어 제공되는 바와 같은 브롬 테스트에 의해 결정 시). 또 다른 실시양태에서, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체는 20％ 미만, 19％ 미만, 18％ 미만, 17％ 미만, 16％ 미만, 15％ 미만, 14％ 미만, 13％ 미만, 12％ 미만, 11％ 미만, 10％ 미만, 9％ 미만, 8％ 미만, 7％ 미만, 6％ 미만, 5％ 미만, 4％ 미만, 3％ 미만, 2.75％ 미만, 2.5％ 미만, 2.25％ 미만, 2％ 미만, 1.75％ 미만, 1.5％ 미만, 1.25％ 미만, 1％ 미만, 0.25％ 미만, 0.5％ 미만, 0.25％ 미만 또는 0％, 또는 이의 임의의 범위의 불순물을 포함한다 (예를 들어, 실시예 2에서 예를 들어 제공되는 바와 같은 HPLC에 의해 결정 시). 구체적 실시양태에서, DEAE 단량체는 5％ 미만, 4％ 미만, 3％ 미만, 2.75％ 미만, 2.5％ 미만, 2.25％ 미만, 2％ 미만, 1.75％ 미만, 1.5％ 미만, 1.25％ 미만, 1％ 미만, 0.25％ 미만, 0.5％ 미만, 0.25％ 미만 또는 0％, 또는 이의 임의의 범위의 불순물을 포함한다 (예를 들어, 실시예 3에서 예를 들어 제공되는 바와 같은 브롬 테스트에 의해 결정 시). 또 다른 구체적 실시양태에서, DEAE 단량체는 5％ 미만, 4％ 미만, 3％ 미만, 2.75％ 미만, 2.5％ 미만, 2.25％ 미만, 2％ 미만, 1.75％ 미만, 1.5％ 미만, 1.25％ 미만, 1％ 미만, 0.25％ 미만, 0.5％ 미만, 0.25％ 미만 또는 0％, 또는 이의 임의의 범위의 불순물을 포함한다 (예를 들어, 실시예 2에서 예를 들어 제공되는 바와 같은 HPLC에 의해 결정 시). DEAE 단량체는 액체 또는 고체 형태로 제공될 수 있다. 특정 실시양태에서, DEAE 단량체는 액체 아민 형태로 제공된다. 구체적 실시양태에서, DEAE 단량체는 분말 염 형태 (분말)로 제공되지 않는다.
3. N,N-메틸렌- 비스 - 아크릴아미드 단량체
N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드는 MBA, N-[(프로프-2-에노일아미노)메틸]프로프-2-엔아미드; 메틸렌디아크릴아미드; 메틸렌비스아크릴아미드; N,N'-메틸렌디아크릴아미드; N,N'-메틸렌비스아크릴아미드; 또는 N,N'-메틸리덴비스아크릴아미드로 또한 공지될 수 있다.
특정 실시양태에서, N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드는 분자식 C7H10N2O2, 분자량 약 154.2 g/몰, 및 하기의 구조를 갖는 것으로 정의된다:
Figure 112011023574513-pct00005
N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체는 시판되거나 (예를 들어, <PALL Biosepra> (France) 또는 SAFC), 또는 합성될 수 있다. 특정 실시양태에서, 하기 반응식에 따라 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체가 합성된다:
Figure 112011023574513-pct00006
특정 실시양태에서, N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체는 초고순도 단량체이다. 구체적 실시양태에서, 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체는 0％ 내지 9％의 불순물, 즉, N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 이외의 물질 예컨대 과량의 출발 물질 또는 이의 유도체, 부산물 또는 무기 염을 포함한다 (예를 들어, 브롬 테스트에 의해 결정 시). 또 다른 실시양태에서, 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체는 0％ 내지 9％의 불순물, 즉, N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 이외의 물질 예컨대 과량의 출발 물질 또는 이의 유도체, 부산물 또는 무기 염을 포함한다 (예를 들어, HPLC에 의해 결정 시). 일부 실시양태에서, N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체는 9％ 미만, 8％ 미만, 7％ 미만, 6％ 미만, 5％ 미만, 4％ 미만, 3％ 미만, 2％ 미만, 1％ 미만, 0.5％ 미만 또는 0％, 또는 이의 임의의 범위의 불순물을 포함한다 (예를 들어, 브롬 테스트에 의해 결정 시). 일부 실시양태에서, N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체는 9％ 미만, 8％ 미만, 7％ 미만, 6％ 미만, 5％ 미만, 4％ 미만, 3％ 미만, 2％ 미만, 1％ 미만, 0.5％ 미만 또는 0％, 또는 이의 임의의 범위의 불순물을 포함한다 (예를 들어, HPLC에 의해 결정 시).
임의의 본원에서 제공되는 단량체의 순도를 당업계에 공지된 다양한 방법에 의해 평가할 수 있다. 예를 들어, 불순물의 함량을 단량체 내의 이중 결합의 함량, 예를 들어, 브롬 테스트 (예를 들어, 실시예 3 및 6 참조)에 의해 결정할 수 있다. 브롬 테스트를 사용하여 화합물이 임의의 이중 C=C 결합, 또는 알켄 관능기를 함유하는지를 결정할 수 있는데, 이는 알켄이 브롬과 쉽게 반응하여 색 변화를 일으킬 수 있기 때문이다. 예시적인 브롬화 반응:
Figure 112011023574513-pct00007
브롬이 이중 결합과 반응하고, 브롬 소비는 존재하는 이중 결합의 양을 결정하며, 이는 단량체 (예를 들어, 트리스아크릴)의 실존 또는 순도를 결정하도록 사용된다. 이러한 반응을 사용하여 표준 편차는 ±3％ 이상일 수 있다. 부산물이 다량으로 존재하지 않아야 하기 때문에, 존재하는 이중 결합의 양은 존재하는 단량체의 순도에 상응할 수 있다. 예시적인 부산물은 하기와 같다:
Figure 112011023574513-pct00008
단량체 내에 존재하는 불순물을 검출 감도가 더 높은 또 다른 방법 (예를 들어, 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC), 기체 크로마토그래피 (GC) 또는 핵 자기 공명 (NMR))으로 또한 검출할 수 있다. 예시적인 예에서, 단량체 샘플을 워터스 아틀란틱(Waters Atlantic) C18 칼럼 (예를 들어, 5 ㎛, 4.6×250 ㎜) 상에 러닝(running)시키고 특정 파장, 예를 들어, 약 230 ㎚에서 흡광을 검출함으로써 HPLC 분석을 수행하여 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체의 순도를 평가할 수 있다 (예를 들어, 실시예 2 및 5 참조). 예를 들어, 테스트된 샘플의 HPLC 곡선을 순도가 공지된 대조군 단량체의 HPLC 곡선에 비교함으로써, 테스트된 단량체의 순도를 결정할 수 있다.
특정 실시양태에서, DEAE 단량체는 2.5％ 미만, 2％ 미만, 1.5％ 미만, 또는 1％ 미만으로 하기의 불순물 각각 또는 양쪽 모두를 단독으로 또는 조합하여 포함한다 (예를 들어, HPLC에 의해 결정 시):
Figure 112011023574513-pct00009
일부 실시양태에서, 마이크로스피어는 약 1 중량％ 내지 약 95 중량％의 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 (예를 들어, 초고순도 단량체)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 마이크로스피어는 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 (예를 들어, 초고순도 단량체)를 약 1 중량％, 약 5 중량％, 약 10 중량％, 약 15 중량％, 약 20 중량％, 약 25 중량％, 약 30 중량％, 약 35 중량％, 약 40 중량％, 약 45 중량％, 약 50 중량％, 약 55 중량％, 약 60 중량％, 약 65 중량％, 약 70 중량％, 약 75 중량％, 약 80 중량％, 약 85 중량％, 약 90 중량％, 및 약 95 중량％ (또는 이의 범위내)로 구성된 군으로부터 선택된 양으로 포함한다.
특정 실시양태에서, 마이크로스피어는 약 1 중량％ 내지 약 95 중량％의 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 (예를 들어, 초고순도 단량체)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 마이크로스피어는 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 (예를 들어, 초고순도 단량체)를 약 1 중량％, 약 5 중량％, 약 10 중량％, 약 15 중량％, 약 20 중량％, 약 25 중량％, 약 30 중량％, 약 35 중량％, 약 40 중량％, 약 45 중량％, 약 50 중량％, 약 55 중량％, 약 60 중량％, 약 65 중량％, 약 70 중량％, 약 75 중량％, 약 80 중량％, 약 85 중량％, 약 90 중량％, 및 약 95 중량％ (또는 이의 범위내)로 구성된 군으로부터 선택된 양으로 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 마이크로스피어는 약 1 중량％ 내지 약 95 중량％의 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 (예를 들어, 초고순도 단량체)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 마이크로스피어는 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 (예를 들어, 초고순도 단량체)를 약 1 중량％, 약 5 중량％, 약 10 중량％, 약 15 중량％, 약 20 중량％, 약 25 중량％, 약 30 중량％, 약 35 중량％, 약 40 중량％, 약 45 중량％, 약 50 중량％, 약 55 중량％, 약 60 중량％, 약 65 중량％, 약 70 중량％, 약 75 중량％, 약 80 중량％, 약 85 중량％, 약 90 중량％, 및 약 95 중량％ (또는 이의 범위내)로 구성된 군으로부터 선택된 양으로 포함한다.
한 실시양태에서, 마이크로스피어는 총 100％이도록 약 58 중량％ 내지 약 66 중량％의 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, 약 22 중량％ 내지 약 26 중량％의 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 및 약 6 중량％ 내지 약 7 중량％의 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체, 및 약 0 중량％ 내지 약 13 중량％의 젤라틴 또는 젤라틴 대용품을 포함한다.
본원에서 제공되는 마이크로스피어는, 특정 실시양태에서, 임의의 중량 백분율 조합의 상기 열거된 단량체 (예를 들어, 하나 이상의 초고순도 단량체)를 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, (예를 들어, 본원에서 제공되는 방법을 사용하여) 본원에서 제공되는 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및/또는 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 초고순도 단량체 중 하나 이상으로부터 제조되거나 본원에서 제공되는 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및/또는 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 초고순도 단량체 단위 중 하나 이상을 포함하는 본원에서 제공되는 마이크로스피어는 하나 이상의 초고순도 단량체 없이 제조된 동일한 마이크로스피어와 비교하여 주입 후 대상체에서의 하나 이상의 부작용의 감소를 초래할 수 있다. 이론에 의해 한정되기를 원치 않으면서, 감소된 부작용은 제조된 마이크로스피어 내의 불순물 (예를 들어, 반응 부산물, 예컨대 에탄올 또는 아크릴산, 미반응 단량체 및/또는 억제제)의 양이 감소된 것의 결과일 수 있다.
다른 실시양태에서, (예를 들어, 본원에서 제공되는 방법을 사용하여) 본원에서 제공되는 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및/또는 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 초고순도 단량체 중 하나 이상으로부터 제조되거나 본원에서 제공되는 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및/또는 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 초고순도 단량체 단위 중 하나 이상을 포함하는 본원에서 제공되는 마이크로스피어는 하나 이상의 초고순도 단량체 없이 제조된 동일한 마이크로스피어와 비교하여 중합 효율의 증가 (예를 들어, 더 많은 단량체가 중합체 내로 혼입되는 경우 및/또는 더 양호한 가교 효율)를 초래할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, (예를 들어, 본원에서 제공되는 방법을 사용하여) 본원에서 제공되는 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및/또는 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 초고순도 단량체 중 하나 이상으로부터 제조되거나 본원에서 제공되는 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및/또는 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 초고순도 단량체 단위 중 하나 이상을 포함하는 본원에서 제공되는 마이크로스피어는 하나 이상의 초고순도 단량체 없이 제조된 동일한 마이크로스피어와 비교하여 젤화점 증가를 초래할 수 있다. 증가된 젤화점은 더 빠른 중합 반응을 초래할 수 있고, 이는 추가로 집단 내의 응집된 마이크로스피어 개수의 감소에 이를 수 있다. 중합 반응에서 젤화점을 평가하는 방법은 당업계에 공지되어 있다 (예를 들어, [Nita et al. (2007) Rheol. Acta 46, 595-600] 참조).
또 다른 실시양태에서, (예를 들어, 본원에서 제공되는 방법을 사용하여) 본원에서 제공되는 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및/또는 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 초고순도 단량체 중 하나 이상으로부터 제조되거나 본원에서 제공되는 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및/또는 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 초고순도 단량체 단위 중 하나 이상을 포함하는 본원에서 제공되는 마이크로스피어는 하나 이상의 초고순도 단량체 없이 제조된 동일한 마이크로스피어와 비교하여 마이크로스피어의 전반적인 제작 공정의 개선을 초래할 수 있고, 이는 마이크로스피어의 수율 및/또는 전반적인 품질에서의 개선 (예를 들어, 덜 파괴되고/되거나 응집된 마이크로스피어), 더욱 일관된 생성물, 더욱 양호한 크기 균일성, 더 좁은 크기 분포, 더욱 양호한 형상 균일성, 또는 이들의 임의의 조합에 이를 수 있다.
4. 마이크로스피어의 NMR 분석
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어는, NMR 분광법에 의해 분석되는 경우 (예를 들어, 실시예 14 참조), 1차원 (1D) 1H NMR 스펙트럼에서 제1 피크 (예를 들어, 약 3.5 ppm 내지 약 4.0 ppm), 제2 피크 (예를 들어, 약 3.0 ppm 내지 약 3.5 ppm), 및 제3 피크 (예를 들어, 약 1.0 ppm 내지 약 1.4 ppm)를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 튜닝된 4 ㎜ HR-MAS 프로브헤드 (1H, 13C, 록(lock) 2H) 또는 유사한 설비가 설비된 NMR 분광계, 예를 들어, <Avance I Bruker> 분광계 (1H)에 의해 NMR이 수행될 수 있다. 특정 실시양태에서, 고해상도 매직 앵글 스피닝 (HR-MAS) 기술을 사용하여 마이크로스피어를 분석할 수 있다. 어떠한 이론에 의해서도 한정되기를 원치 않으면서, HR-MAS 기술은 고체상 합성을 사용하는 조합 화학에 대해 최초로 개발되었다. HR-MAS는 완전히 가용성이지 않거나 고체를 함유하는 샘플의 분석에 특히 유용하다. 이는 샘플에 적합한 용매에서 이동성이 증가하거나 팽윤하는 성질이 있는 경우에 매우 양호한 결과를 제공한다. HR-MAS NMR은 고체 상태 NMR과 고전적인 용액 상태 NMR 간의 하이브리드 기술로 간주될 수 있다. 고체 상태 NMR과 유사하게, 매직 앵글 스피닝 (MAS)의 사용은 화학 변위 비등방성, 동종핵 2극성 상호작용 및 자기 감수율로부터 초래되는 스펙트럼 선 확대를 효과적으로 제거한다.
일부 실시양태에서, 100 MHz 내지 900 MHz, 예컨대 100 MHz, 200 MHz, 300 MHz, 400 MHz, 500 MHz, 600 MHz, 700 MHz, 800 MHz, 또는 900 MHz, 또는 이의 범위에서 1H NMR 스펙트럼이 기록될 수 있다. 구체적 실시양태에서, 1H NMR 스펙트럼이 400 MHz에서 기록된다. 특정 실시양태에서, NMR 분석과 상용성인 임의의 용매에 마이크로스피어가 분산될 수 있다. 예시적인 용매에는 중수소화 용매 예컨대 중수, 아세트산-d4, 아세톤-d6, 아세토니트릴-d3, 벤젠-d6, 클로로포름-d, 디클로로메탄-d2, N,N-디메틸 포름아미드-d7, 디메틸 설폭시드-d6, 에탄올-d6, 메탄올-d4, 니트로메탄-d3, 피리딘-d5, 테트라히드로푸란-d8, 톨루엔-d8, 트리플루오로아세트산-d4, 및 트리플루오로에탄올-d3, 및 기타 용매 예컨대 이황화탄소, 1,1,2,2-테트라클로로에탄, 사염화탄소, 디에틸 에테르 (-100℃), 디메틸 에테르 (-100℃), 1,4-디옥산, 트리크로로플루오로메탄, 니트로벤젠, 테트라히드로푸란 (-100℃)이 포함되지만, 이에 한정되지는 않는다. 구체적 실시양태에서, 용매는 중수 (D2O)이다.
특정 실시양태에서, 약 0℃ 내지 약 80℃, 예컨대 약 10℃ 내지 약 50℃, 약 15℃ 내지 약 35℃, 약 20℃ 내지 약 25℃ (예를 들어, 실온), 또는 약 0℃ 내지 약 5℃, 또는 이의 임의의 범위의 온도에서 NMR 분광법에 의해 마이크로스피어를 분석할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 마이크로스피어가 약 25℃의 온도에서 분석된다.
구체적 실시양태에서, 본질적으로 실시예 14 (예를 들어, 표 10)에서 제공된 바와 같은 파라미터를 사용하여 1차원 1D 1H NMR 스펙트럼에서 마이크로스피어가 분석되고, 제1 피크, 제2 피크 및 제3 피크, 및/또는 제2 피크 대 제1 피크 (1로 표준화됨) 및 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 결정된다.
1H NMR 스펙트럼에서 마이크로스피어가 나타내는 제1 피크는, 예를 들어, 마이크로스피어의 공중합체 내의 트리스-히드록시메틸 기 (예를 들어, C(CH 2OH)3)에 기인할 수 있다. 특정 실시양태에서, 1H NMR 스펙트럼에서 마이크로스피어가 나타내는 제1 피크는 약 3.60 ppm 내지 약 3.95 ppm, 예컨대 약 3.65 ppm 내지 약 3.90 ppm, 약 3.70 ppm 내지 약 3.85 ppm, 또는 약 3.75 ppm 내지 약 3.80 ppm, 또는 이의 임의의 범위이다. 구체적 실시양태에서, 1H NMR 스펙트럼에서 마이크로스피어가 나타내는 제1 피크는 약 3.77 ppm이다.
1H NMR 스펙트럼에서 마이크로스피어가 나타내는 제2 피크는, 예를 들어, 염기성 질소 원자에 연결된 CH2 기 (예를 들어, CH 2N(CH 2CH3)2)에 기인할 수 있다. 특정 실시양태에서,1H NMR 스펙트럼에서 마이크로스피어가 나타내는 제2 피크는 약 3.05 ppm 내지 약 3.45 ppm, 예컨대 약 3.10 ppm 내지 약 3.40 ppm, 약 3.15 ppm 내지 약 3.35 ppm, 약 3.20 ppm 내지 약 3.30 ppm, 또는 약 3.15 ppm 내지 약 3.25 ppm, 또는 이의 임의의 범위이다. 구체적 실시양태에서, 1H NMR 스펙트럼에서 마이크로스피어가 나타내는 제2 피크는 약 3.2 ppm이다.
1H NMR 스펙트럼에서 마이크로스피어가 나타내는 제3 피크는 마이크로스피어의 중합 구조 내의 카르복사미드 기의 β 위치 내의 기 (예를 들어, CH 2-CHCONH)에 기인할 수 있다. 특정 실시양태에서, 1H NMR 스펙트럼에서 마이크로스피어가 나타내는 제3 피크는 약 1.01 ppm 내지 약 1.49 ppm, 예컨대 약 1.05 ppm 내지 약 1.47 ppm, 약 1.10 ppm 내지 약 1.45 ppm, 약 1.15 ppm 내지 약 1.40 ppm, 또는 약 1.25 ppm 내지 약 1.35 ppm 또는 이의 임의의 범위이다. 구체적 실시양태에서, 1H NMR 스펙트럼에서 마이크로스피어가 나타내는 제3 피크는 약 1.3 ppm이다. 일부 실시양태에서, (i) 제2 피크가 약 3.245 ppm 이하, 예컨대 약 3.211 ppm 이하 또는 약 3.192 ppm 이하이거나; (ii) 제3 피크가 약 1.297 ppm 이하, 예컨대 약 1.283 ppm 이하 또는 약 1.276 ppm 이하이거나; (iii) (i)과 (ii)의 임의의 조합이다. 한 실시양태에서, 제2 피크가 3.212 또는 3.246 (± 0.002 또는 0.005) ppm이 아니고/아니거나 제3 피크가 1.284 또는 1.298 (± 0.002 또는 0.005) ppm이 아니다.
특정 실시양태에서, 1H NMR 스펙트럼에서 마이크로스피어가 나타내는 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율은 약 0.498 내지 약 0.650, 예컨대 약 0.53 내지 약 0.63, 약 0.55 내지 약 0.60, 또는 이의 임의의 범위이다. 일부 실시양태에서, 1H NMR 스펙트럼에서 마이크로스피어가 나타내는 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율은 약 0.50, 0.51, 0.52, 0.53, 0.54, 0.55, 0.56, 0.57, 0.58, 0.59, 0.60, 0.61, 0.62, 0.63, 0.64, 또는 0.65, 또는 이의 임의의 범위이다. 특정 실시양태에서, 1H NMR 스펙트럼에서 마이크로스피어가 나타내는 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율은 약 0.571, 0.572, 0.573, 0.574, 0.575, 0.576, 0.577, 0.578, 또는 0.579, 또는 이의 임의의 범위이다. 구체적 실시양태에서, 1H NMR 스펙트럼에서 마이크로스피어가 나타내는 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율은 약 0.574이다.
당업계에 공지된 방법을 사용하여, 예를 들어, 제1 피크를 값 1로 표준화한 후 제2 피크 (또는 제3 피크) 대 제1 피크의 비율을 비교함으로써, 통합 비율을 계산할 수 있다. 이론에 의해 제한되기를 원치 않으면서, 중합체 사슬 내로 통합되는 각각의 물질의 비에 직접적으로 상관되는데 통합 비율이 사용될 수 있는 것으로 생각된다. 즉, 더 높은 통합 비율이 최종 중합체 생성물 내로 혼입되는 더 많은 단량체 및/또는 더 높은 단량체 비율 및 더 적은 불순물, 뿐만 아니라 전체적으로 더욱 양호한 중합 효율과 상관될 수 있다.
일부 실시양태에서, 초고순도 단량체(들) 없이 제조된 동일한 마이크로스피어와 비교하여, (i) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, (ii) 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체, (iii) 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체, (iv) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 및 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체, (v) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체, (vi) 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체, 또는 (vii) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체를 공중합시킴으로써 제조된 공중합체를 포함하는 마이크로스피어가 1H NMR 스펙트럼에서 나타내는 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 5％ 내지 약 100％ 더 높고, 예컨대 약 5 ％ 더 높거나, 약 10 ％ 더 높거나, 약 15 ％ 더 높거나, 약 20 ％ 더 높거나, 약 25 ％ 더 높거나, 약 30 ％ 더 높거나, 약 35 ％ 더 높거나, 약 40 ％ 더 높거나, 약 45 ％ 더 높거나, 약 50 ％ 더 높거나, 약 55 ％ 더 높거나, 약 60 ％ 더 높거나, 약 65 ％ 더 높거나, 약 70 ％ 더 높거나, 약 75 ％ 더 높거나, 약 80 ％ 더 높거나, 약 85 ％ 더 높거나, 약 90 ％ 더 높거나, 약 95 ％ 더 높거나, 약 100％ 더 높거나, 또는 이의 임의의 범위이다.
일부 실시양태에서, 초고순도 단량체 단위(들)을 포함하지 않는 동일한 마이크로스피어 (각각의 초고순도 단량체(들) 없이 제조됨)와 비교하여, (i) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위, (ii) 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위, (iii) 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위, (iv) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위 및 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위, (v) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위, (vi) 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위, 또는 (vii) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위, 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위를 포함하는 마이크로스피어가 1H NMR 스펙트럼에서 나타내는 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 5％ 내지 약 100％ 더 높고, 예컨대 약 5 ％ 더 높거나, 약 10 ％ 더 높거나, 약 15 ％ 더 높거나, 약 20 ％ 더 높거나, 약 25 ％ 더 높거나, 약 30 ％ 더 높거나, 약 35 ％ 더 높거나, 약 40 ％ 더 높거나, 약 45 ％ 더 높거나, 약 50 ％ 더 높거나, 약 55 ％ 더 높거나, 약 60 ％ 더 높거나, 약 65 ％ 더 높거나, 약 70 ％ 더 높거나, 약 75 ％ 더 높거나, 약 80 ％ 더 높거나, 약 85 ％ 더 높거나, 약 90 ％ 더 높거나, 약 95 ％ 더 높거나, 약 100％ 더 높거나, 또는 이의 임의의 범위이다.
특정 실시양태에서, 1H NMR 스펙트럼에서 마이크로스피어가 나타내는 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율은 약 0.53 내지 약 0.75, 예컨대 약 0.57 내지 약 0.60, 약 0.60 내지 약 0.65, 약 0.61 내지 약 0.75 또는 약 0.61 내지 약 0.65 또는 이의 임의의 범위이다. 특정 실시양태에서, 1H NMR 스펙트럼에서 마이크로스피어가 나타내는 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율은 약 0.53, 0.54, 0.55, 0.56, 0.57, 0.58, 0.59, 0.60, 0.61, 0.62, 0.63, 0.64, 0.65, 0.66, 0.67, 0.68, 0.69, 0.70, 0.71, 0.72, 0.73, 0.74, 또는 0.75, 또는 이의 임의의 범위이다. 특정 실시양태에서, 1H NMR 스펙트럼에서 마이크로스피어가 나타내는 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율은 약 0.611, 0.612, 0.613, 0.614, 0.615, 0.616, 0.617, 0.618, 0.619, 0.620, 0.621, 0.622, 0.623, 0.624, 0.625, 0.626, 0.627, 0.628, 또는 0.629, 또는 이의 임의의 범위이다. 구체적 실시양태에서, 1H NMR 스펙트럼에서 마이크로스피어가 나타내는 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율은 약 0.625이다.
일부 실시양태에서, 초고순도 단량체(들) 없이 제조된 동일한 마이크로스피어와 비교하여, (i) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, (ii) 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체, (iii) 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체, (iv) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 및 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체, (v) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체, (vi) 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체, 또는 (vii) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸메틸아크릴아미드 단량체, 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체를 공중합시킴으로써 제조된 공중합체를 포함하는 마이크로스피어가 1H NMR 스펙트럼에서 나타내는 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 5％ 내지 약 100％ 더 높고, 예컨대 약 5 ％ 더 높거나, 약 10 ％ 더 높거나, 약 15 ％ 더 높거나, 약 20 ％ 더 높거나, 약 25 ％ 더 높거나, 약 30 ％ 더 높거나, 약 35 ％ 더 높거나, 약 40 ％ 더 높거나, 약 45 ％ 더 높거나, 약 50 ％ 더 높거나, 약 55 ％ 더 높거나, 약 60 ％ 더 높거나, 약 65 ％ 더 높거나, 약 70 ％ 더 높거나, 약 75 ％ 더 높거나, 약 80 ％ 더 높거나, 약 85 ％ 더 높거나, 약 90 ％ 더 높거나, 약 95 ％ 더 높거나, 약 100％ 더 높거나, 또는 이의 임의의 범위이다.
일부 실시양태에서, 초고순도 단량체 단위(들)을 포함하지 않는 동일한 마이크로스피어 (각각의 초고순도 단량체(들) 없이 제조됨)와 비교하여, (i) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위, (ii) 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위, (iii) 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위, (iv) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위 및 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위, (v) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위, (vi) 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위, 또는 (vii) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위, 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위를 포함하는 마이크로스피어가 1H NMR 스펙트럼에서 나타내는 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 5％ 내지 약 100％ 더 높고, 예컨대 약 5 ％ 더 높거나, 약 10 ％ 더 높거나, 약 15 ％ 더 높거나, 약 20 ％ 더 높거나, 약 25 ％ 더 높거나, 약 30 ％ 더 높거나, 약 35 ％ 더 높거나, 약 40 ％ 더 높거나, 약 45 ％ 더 높거나, 약 50 ％ 더 높거나, 약 55 ％ 더 높거나, 약 60 ％ 더 높거나, 약 65 ％ 더 높거나, 약 70 ％ 더 높거나, 약 75 ％ 더 높거나, 약 80 ％ 더 높거나, 약 85 ％ 더 높거나, 약 90 ％ 더 높거나, 약 95 ％ 더 높거나, 약 100％ 더 높거나, 또는 이의 임의의 범위이다.
일부 실시양태에서, (a) (i) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, (ii) 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체, (iii) 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체, (iv) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 및 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체, (v) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체, (vi) 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체, 또는 (vii) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체를 공중합시킴으로써 제조된 공중합체를 포함하는 마이크로스피어가 1H NMR 스펙트럼에서 나타내는 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 5％ 내지 약 100％ 더 높고, 예컨대 약 5 ％ 더 높거나, 약 10 ％ 더 높거나, 약 15 ％ 더 높거나, 약 20 ％ 더 높거나, 약 25 ％ 더 높거나, 약 30 ％ 더 높거나, 약 35 ％ 더 높거나, 약 40 ％ 더 높거나, 약 45 ％ 더 높거나, 약 50 ％ 더 높거나, 약 55 ％ 더 높거나, 약 60 ％ 더 높거나, 약 65 ％ 더 높거나, 약 70 ％ 더 높거나, 약 75 ％ 더 높거나, 약 80 ％ 더 높거나, 약 85 ％ 더 높거나, 약 90 ％ 더 높거나, 약 95 ％ 더 높거나, 약 100％ 더 높거나, 또는 이의 임의의 범위이고, (b) (i) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, (ii) 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체, (iii) 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체, (iv) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 및 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체, (v) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체, (vi) 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체, 또는 (vii) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 각각을 공중합시킴으로써 제조된 공중합체를 포함하는 마이크로스피어가 1H NMR 스펙트럼에서 나타내는 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율은 약 5％ 내지 약 100％ 더 높고, 예컨대 약 5 ％ 더 높거나, 약 10 ％ 더 높거나, 약 15 ％ 더 높거나, 약 20 ％ 더 높거나, 약 25 ％ 더 높거나, 약 30 ％ 더 높거나, 약 35 ％ 더 높거나, 약 40 ％ 더 높거나, 약 45 ％ 더 높거나, 약 50 ％ 더 높거나, 약 55 ％ 더 높거나, 약 60 ％ 더 높거나, 약 65 ％ 더 높거나, 약 70 ％ 더 높거나, 약 75 ％ 더 높거나, 약 80 ％ 더 높거나, 약 85 ％ 더 높거나, 약 90 ％ 더 높거나, 약 95 ％ 더 높거나, 약 100％ 더 높거나, 또는 이의 임의의 범위이다.
또 다른 실시양태에서, 초고순도 단량체 단위(들)을 포함하지 않는 동일한 마이크로스피어 (각각의 초고순도 단량체(들) 없이 제조됨)와 비교하여, (a) (i) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위, (ii) 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위, (iii) 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위, (iv) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위 및 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위, (v) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위, (vi) 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위, 또는 (vii) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위, 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위를 포함하는 마이크로스피어가 1H NMR 스펙트럼에서 나타내는 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 5％ 내지 약 100％ 더 높고, 예컨대 약 5 ％ 더 높거나, 약 10 ％ 더 높거나, 약 15 ％ 더 높거나, 약 20 ％ 더 높거나, 약 25 ％ 더 높거나, 약 30 ％ 더 높거나, 약 35 ％ 더 높거나, 약 40 ％ 더 높거나, 약 45 ％ 더 높거나, 약 50 ％ 더 높거나, 약 55 ％ 더 높거나, 약 60 ％ 더 높거나, 약 65 ％ 더 높거나, 약 70 ％ 더 높거나, 약 75 ％ 더 높거나, 약 80 ％ 더 높거나, 약 85 ％ 더 높거나, 약 90 ％ 더 높거나, 약 95 ％ 더 높거나, 약 100％ 더 높거나, 또는 이의 임의의 범위이고, (b) (i) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸메틸아크릴아미드 단량체 단위, (ii) 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위, (iii) 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위, (iv) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위 및 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위, (v) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위, (vi) 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위, 또는 (vii) 초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위, 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위 및 초고순도 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위를 포함하는 마이크로스피어가 1H NMR 스펙트럼에서 나타내는 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 5％ 내지 약 100％ 더 높고, 예컨대 약 5 ％ 더 높거나, 약 10 ％ 더 높거나, 약 15 ％ 더 높거나, 약 20 ％ 더 높거나, 약 25 ％ 더 높거나, 약 30 ％ 더 높거나, 약 35 ％ 더 높거나, 약 40 ％ 더 높거나, 약 45 ％ 더 높거나, 약 50 ％ 더 높거나, 약 55 ％ 더 높거나, 약 60 ％ 더 높거나, 약 65 ％ 더 높거나, 약 70 ％ 더 높거나, 약 75 ％ 더 높거나, 약 80 ％ 더 높거나, 약 85 ％ 더 높거나, 약 90 ％ 더 높거나, 약 95 ％ 더 높거나, 약 100％ 더 높거나, 또는 이의 임의의 범위이다.
(a) N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체를 공중합시킴으로써 제조되고, 이때 단량체들 중 1개, 2개 또는 3개가 초고순도 단량체인 공중합체, 및 (b) 가교된 젤라틴을 포함하고; 이때 마이크로스피어가 1H NMR 스펙트럼에서, 약 3.5 ppm 내지 약 4 ppm의 제1 피크, 약 3 ppm 내지 약 3.5 ppm의 제2 피크, 및 약 1 ppm 내지 약 1.5 ppm의 제3 피크를 나타내고; (i) 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 초고순도 단량체(들) 없이 제조된 동일한 마이크로스피어의 통합 비율보다 높거나, (ii) 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 초고순도 단량체(들) 없이 제조된 동일한 마이크로스피어의 통합 비율보다 높거나, 또는 (iii) 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율 및 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 초고순도 단량체(들) 없이 제조된 동일한 마이크로스피어의 각각의 통합 비율보다 각각 더 높은 마이크로스피어가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율 및/또는 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 5％ 더 높거나, 약 10％ 더 높거나, 약 15％ 더 높거나, 약 20％ 더 높거나, 약 25％ 더 높거나, 약 30％ 더 높거나, 약 35％ 더 높거나, 약 40％ 더 높거나, 약 45％ 더 높거나, 약 50％ 더 높거나, 약 55％ 더 높거나, 약 60％ 더 높거나, 약 65％ 더 높거나, 약 70％ 더 높거나, 약 75％ 더 높거나, 약 80％ 더 높거나, 약 85％ 더 높거나, 약 90％ 더 높거나, 약 95％ 더 높거나, 약 100％ 더 높거나, 또는 이의 임의의 범위로부터 독립적으로 선택된다.
(a) N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위를 포함하고, 이때 단량체들 중 1개, 2개 또는 3개가 초고순도 단량체인 공중합체, 및 (b) 가교된 젤라틴을 포함하고; 이때 마이크로스피어가 1H NMR 스펙트럼에서, 약 3.5 ppm 내지 약 4 ppm의 제1 피크, 약 3 ppm 내지 약 3.5 ppm의 제2 피크, 및 약 1 ppm 내지 약 1.5 ppm의 제3 피크를 나타내고; (i) 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 초고순도 단량체 단위(들)을 포함하지 않는 동일한 마이크로스피어 (각각의 초고순도 단량체(들) 없이 제조됨)의 통합 비율보다 높거나, (ii) 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 초고순도 단량체 단위(들)을 포함하지 않는 동일한 마이크로스피어 (각각의 초고순도 단량체(들) 없이 제조됨)의 통합 비율보다 높거나, 또는 (iii) 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율 및 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 초고순도 단량체 단위(들)을 포함하지 않는 동일한 마이크로스피어 (각각의 초고순도 단량체(들) 없이 제조됨)의 각각의 통합 비율보다 각각 더 높은 마이크로스피어가 본원에서 또한 제공된다. 일부 실시양태에서, 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율 및/또는 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 5％ 더 높거나, 약 10％ 더 높거나, 약 15％ 더 높거나, 약 20％ 더 높거나, 약 25％ 더 높거나, 약 30％ 더 높거나, 약 35％ 더 높거나, 약 40％ 더 높거나, 약 45％ 더 높거나, 약 50％ 더 높거나, 약 55％ 더 높거나, 약 60％ 더 높거나, 약 65％ 더 높거나, 약 70％ 더 높거나, 약 75％ 더 높거나, 약 80％ 더 높거나, 약 85％ 더 높거나, 약 90％ 더 높거나, 약 95％ 더 높거나, 약 100％ 더 높거나, 또는 이의 임의의 범위로부터 독립적으로 선택된다.
구체적 실시양태에서, 마이크로스피어는 초고순도 마이크로스피어이다. 특정 실시양태에서, 초고순도 마이크로스피어는 10 중량％ 이하, 9 중량％ 이하, 8 중량％ 이하, 7 중량％ 이하, 6 중량％ 이하, 5 중량％ 이하, 4 중량％ 이하, 3 중량％ 이하, 2 중량％ 이하, 1 중량％ 이하 또는 0 중량％의 불순물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 초고순도 마이크로스피어는 90 중량％ 이상, 91 중량％ 이상, 92 중량％ 이상, 93 중량％ 이상, 94 중량％ 이상, 95 중량％ 이상, 96 중량％ 이상, 97 중량％ 이상, 98 중량％ 이상, 99 중량％ 이상, 또는 100 중량％의 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드, N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 및 젤라틴을 포함한다.
한 실시양태에서, (a) N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위를 포함하는 공중합체, 및 (b) 가교된 젤라틴을 포함하고; 이때 마이크로스피어가 1H NMR 스펙트럼에서, 약 3.5 ppm 내지 약 4 ppm의 제1 피크, 약 3 ppm 내지 약 3.5 ppm의 제2 피크, 및 약 1 ppm 내지 약 1.5 ppm의 제3 피크를 나타내고; (i) 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 0.50 내지 약 0.65이거나, (ii) 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 0.61 내지 약 0.75이거나, 또는 (iii) (i)과 (ii)의 조합인 마이크로스피어가 본원에서 제공된다. 한 실시양태에서, 제1 피크가 약 3.77 ppm이거나, 제2 피크가 약 3.2 ppm이거나, 제3 피크가 약 1.3 ppm이거나, 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 0.574이거나, 또는 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 0.625이다. 한 실시양태에서, 제1항의 마이크로스피어에서의 마이크로스피어는 400 MHz에서 1H NMR 스펙트럼이 기록될 때 마이크로스피어가 25℃이고/이거나 중수소화 용매 내에 있다. 일부 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위 중 1개, 2개 또는 3개가 초고순도 단량체 단위이다. 특정 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위가 9％ 미만의 불순물을 포함하고/하거나 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위가 2％ 미만의 불순물을 포함한다 (예를 들어, 브롬 테스트에 의해 결정 시). 특정 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위가 9％ 미만의 불순물을 포함하고/포함하거나 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위가 2％ 미만의 불순물을 포함한다 (예를 들어, HPLC에 의해 결정 시). 또 다른 실시양태에서, 마이크로스피어는 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 2000 ㎛, 약 40 ㎛ 내지 약 120 ㎛, 약 100 ㎛ 내지 약 300 ㎛, 약 300 ㎛ 내지 약 500 ㎛, 약 500 ㎛ 내지 약 700 ㎛, 약 700 ㎛ 내지 약 900 ㎛, 또는 약 900 ㎛ 내지 약 1200 ㎛이다.
B. 조성물
본원에서 제공되는 마이크로스피어는 제약상 허용되는 액체 또는 기타 생체적합성 담체와 함께 조성물 (예를 들어, 제약 조성물)에서 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 마이크로스피어 또는 조성물 내의 마이크로스피어는 크기 면에서 실질적으로 균일하다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 개별적인 마이크로스피어들 간의 직경 차이가 약 0 ㎛ 내지 약 100 ㎛, 약 0 ㎛ 내지 약 50 ㎛, 또는 약 0 ㎛ 내지 약 25 ㎛이다. 일부 실시양태에서, 마이크로스피어들의 직경 차이가 100 ㎛ 이하, 약 50 ㎛ 이하, 약 25 mm 이하, 약 10 mm 이하 또는 약 5 ㎛ 이하이다.
특정 실시양태에서, 조성물 내의 마이크로스피어는 직경이 약 1 ㎛ 내지 2000 ㎛, 약 10 ㎛ 내지 1000 ㎛, 약 40 ㎛ 내지 약 120 ㎛, 약 100 ㎛ 내지 약 300 ㎛, 약 300 ㎛ 내지 약 500 ㎛, 약 500 ㎛ 내지 약 700 ㎛, 약 700 ㎛ 내지 약 900 ㎛, 또는 약 900 ㎛ 내지 약 1200 ㎛이다.
특정 실시양태에서, 마이크로스피어는 집단의 68％ 초과가 직경이 평균의 ±20％, 평균의 ±10％, 또는 평균 직경의 ±5％인 집단 내에 존재한다. 한 실시양태에서, 마이크로스피어는 집단의 75％ 초과가 직경이 평균의 ±20％, 평균의 ±15％, 평균의 ±10％, 또는 평균 직경의 ±5％, 또는 이의 범위 내인 집단 내에 존재한다.
조성물은 현탁액, 히드로겔, 또는 에멀젼의 형태일 수 있다. 또한 조성물은 액체 내의 마이크로스피어의 현탁액일 수 있다. 마이크로스피어의 소수성 성질은 보관 용기 및 이식 장치, 예컨대 카테터, 주사기, 바늘 등의 벽에 대한 부착 또는 응집물의 형성을 피하면서 이를 현탁액 내에, 특히 비-발열성이거나 발열원이 없는 무균성의 주사가능한 용액의 형태로 놓는 것을 허용한다.
일부 실시양태에서, 카테터가 투여에 사용된다. 구체적 실시양태에서, 선택적으로 위치가 정해진 카테터가 사용된다. 이같은 카테터에는 대동맥 내로 삽입된 가이딩(guiding) 카테터, 조종가능한 마이크로가이드(microguide) 와이어가 있는 또는 이러한 와이어가 없는 마이크로카테터, 및 가이딩 카테터와 마이크로카테터 사이의 밀봉을 제공하는 지혈 밸브가 있어, 지속적인 헤파린 플러시(flush)가 혈액 응고를 방지하도록 사용될 수 있다.
구체적 실시양태에서, 마이크로스피어 또는 제약 조성물은 주입에 적절하다. 구체적 실시양태에서, 마이크로스피어 및/또는 마이크로스피어를 포함하는 조성물은 무균성이다. 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어, 감마 또는 베타 방사선조사와 같은 방사선조사에 의해 마이크로스피어가 살균될 수 있다. 특정 실시양태에서, 무균 기술을 사용하여 무균적으로 마이크로스피어가 제조된다. 일부 실시양태에서, 무균적으로 제조된 마이크로스피어가 치료제 또는 약물을 포함한다.
제약상 허용되는 액체는, 비제한적으로, 염수, 완충제 용액, 물, 등장 용액, 생물학적 유체 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 액체는 또한 염 용액일 수 있고, 특정 실시양태에서, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 철, 아연 및 암모늄으로 구성된 군으로부터 선택된 양이온을, 예를 들어 약 0.01 M 내지 약 5 M의 양으로 포함한다. 특정 실시양태에서, 마이크로스피어가 리피오돌 및 임의적인 약물 (예를 들어, 독소루비신) 또는 기타 치료제에 현탁되거나 또는 또 다른 방식으로 이들과 조합되어 대상체에게 투여된다.
조성물은 약 10 중량％ 내지 약 90 중량％ 양의 마이크로스피어, 및 약 90 중량％ 내지 약 10 중량％ 양의 액체 (또는 기타 생체적합성 담체)를 포함할 수 있다. 조성물은 약 10 중량％ 내지 약 50 중량％ 양의 마이크로스피어, 및 약 50 중량％ 내지 약 90 중량％ 양의 액체 (또는 기타 생체적합성 담체)를 또한 포함할 수 있다.
치료적 용도를 위한 제약상 허용되는 담체에는 희석제, 가용화제, 윤활제, 현탁제, 캡슐화 물질, 용매, 증점제, 분산제, 완충제 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 아세테이트 및 기타 유기 산 염, 항산화제 예컨대 아스코르브산, 방부제, 저분자량 (잔기 약 10개 미만) 펩티드 예컨대 폴리아르기닌, 단백질 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린, 친수성 중합체 예컨대 폴리(비닐피롤리돈), 아미노산 예컨대 글리신, 글루탐산, 아스파르트산 또는 아르기닌, 셀룰로스 또는 이의 유도체, 글루코스, 만노스 또는 덱스트린이 포함되는 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물, 킬레이팅제 예컨대 EDTA, 당 알코올 예컨대 만니톨 또는 소르비톨, 카운터 이온 예컨대 나트륨 및/또는 비-이온성 계면활성제 예컨대 트윈, 플루로닉스 또는 PEG가 포함된다.
일부 실시양태에서, 조성물 또는 제형은 본원에서 제공되는 마이크로스피어를 예를 들어 건조 분말로서 포함하고, 이는 용기, 예컨대 바이알 또는 주사기 내에서 제공될 수 있다. 사용 전, 사용 동안 또는 사용 후에 (예를 들어, 환자 내로의 주입 전, 주입 동안 또는 주입 후에), 마이크로스피어가 본원에서 제공되는 하나 이상의 제약 담체 및/또는 하나 이상의 또 다른 성분 (예를 들어, 표지제 및/또는 치료제, 예컨대 약물)과 혼합될 수 있다.
일부 실시양태에서, 생체적합성 담체는 수성-기반 용액, 히드로-유기 용액, 유기 용액, 비-수성 용액, 또는 이들의 혼합물이다. 특정 실시양태에서, 생체적합성 담체는 양이온, 예컨대 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 철, 아연, 암모늄, 및 이들의 혼합물로 구성된 염을, 예를 들어, 약 0.01 M 내지 약 5 M의 양으로 포함한다.
특정 실시양태에서, 예를 들어, 표지제를 추가로 포함함으로써, 조성물의 마이크로스피어가 광원 하에 신체 내에서 가시적이다. 일부 실시양태에서, 마이크로스피어가 이의 합성 후에 표지될 수 있다. 이는, 예를 들어, 형광 마커 유도체 (예를 들어, 플루오레세인 이소티오시아네이트 (FITC), 로다민 이소티오시아네이트 (RITC) 등 포함)를 그래프트시킴으로써 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 화학 염료, 예컨대 시바크론 블루 또는 프로시온 레드 HE-3B (마이크로스피어의 직접적인 가시화를 가능하게 함), 자기 공명 영상화제 (에르븀, 가돌리늄 또는 자철광); 조영제, 예컨대 바륨 또는 요오드 염 (예를 들어, (아크릴아미도-3-프로피온아미도)-3-트리요오도-2,4,6-벤조산 포함)일 수 있는 마커와 단량체를 화학적으로 커플링시킴으로써 검출가능한 단량체가 수득될 수 있다. 바륨 또는 자철광 염의 경우, 이는 분말화된 형태로 초기 단량체 용액에 직접 도입될 수 있다.
특정 실시양태에서, 조성물은 조영제 또는 기타 표지제, 예컨대 방사선 비투과성 조영제, 예컨대 비-이온성 조영제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조영제는 환자 내로의 주입 전, 동안 및/또는 후에 조성물 내의 마이크로스피어와 혼합된다. 구체적 실시양태에서, 조영제 (예를 들어, 비-이온성 조영제) 및 본원에서 제공되는 마이크로스피어를 포함하는 조성물이 환자에게 투여된다.
C. 마이크로스피어의 제조 방법
젤라틴 또는 젤라틴 대용품, 및 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드의 공중합체를 포함하는 마이크로스피어의 제조 방법이 본원에서 제공된다. 예를 들어, 이러한 방법에 의해 제조된 마이크로스피어, 뿐만 아니라 이러한 마이크로스피어의 조성물 및 용도가 추가로 본원에서 제공된다.
본원에서 제공되는 마이크로스피어는 [E. Boschetti, Microspheres for Biochromatography and Biomedical Applications. Part I, Preparation of Microbeads, Microspheres , Microencapsulation and Lippsomes, John Wiley & Sons, Arshady R., Ed., vol. 2, p. 171-189 (1999)], 또는 미국 특허 번호 5,635,215 및 5,648,100 (각각 본원에 참고로 포함됨)에 기술된 바와 같이, 당업자에게 공지된 임의의 방법, 예를 들어, 현탁 중합 (예를 들어, 유중수 현탁액 또는 에멀젼), 드롭-바이-드롭(drop-by-drop) 중합에 의해 제조될 수 있다. 선택된 마이크로스피어 제조 방식은 생성된 마이크로스피어에 대한 원하는 특성, 예컨대 마이크로스피어 직경 및 화학적 조성에 일반적으로 좌우될 것이다. 본원에서 제공되는 다양한 방법들의 일부 실시양태에서, 단량체는 라디칼 중합 또는 방사선에 의해 중합된다.
특정 실시양태에서, 에멀젼 또는 현탁 중합에 의해 중합이 수행되는데, 이는 이러한 중합이 원하는 크기의 마이크로스피어를 직접적으로 입수할 수 있게 하기 때문이다. 이는 하기와 같이 수행될 수 있다: 용해된 여러 구성성분들 (예를 들어, 여러 단량체, 세포 부착제)을 함유하는 수용액이, 임의적으로 유화제 (예를 들어, 소르비탄 세스퀴올레에이트)의 존재 하에, 25℃에서 물에서의 혼화성이 낮은 (예를 들어, 약 15％ 이하, 약 10％ 이하, 약 5％ 이하, 약 4％ 이하, 약 3％ 이하, 약 2％ 이하, 약 1％ 이하, 약 0.5％ 이하, 약 0.1％ 이하, 또는 약 0％) (예를 들어, 비-혼화성인) 액체 유기 상 (예를 들어, 식물성, 동물성 또는 미네랄 오일, 특정 페트롤륨 증류 생성물, 염화 탄화수소 또는 이러한 여러 용액들의 혼합물)을 포함하는 용액과 교반에 의해 혼합되어 액적의 현탁액이 생성된 후, 이러한 액적이 적합한 촉매에 의한 단량체들의 중합에 의해 고체 젤로 변환된다. 구체적 실시양태에서, 액체 유기 상은 25℃에서 물에서의 혼화성이 약 1％ 이하이다. 특정 실시양태에서, 액체 유기 상은 오일을 포함하거나 또는 오일로 구성된다. 구체적 실시양태에서, 액체 유기 상은 식물성 오일 또는 미네랄 오일 (예를 들어, 파라핀 오일) 또는 식물성 오일과 미네랄 오일의 조합물을 포함하거나 이러한 오일또는 조합물로 구성된다. 원하는 직경의 액적을 형성하는 유기 상 내의 수성 상 에멀젼을 수득하도록 교반 속도가 조정된다. 그후, 개시제의 첨가에 의해 중합이 시작된다. 발열 반응이 동반되고, 그후 이의 발달을 반응 매질의 온도 측정에 의해 추적할 수 있다.
중합 개시제는 산화환원 시스템 중에서 유리하게 선택되고, 예를 들어, 알칼리금속 퍼설페이트와 N,N,N',N'-테트라메틸에틸렌디아민 또는 디메틸아미노프로피오니트릴, 유기 과산화물 예컨대 과산화 벤조일 또는 심지어 2,2'-아조-비스-이소부티로니트릴의 조합물이 사용된다. 개시제의 사용량은 추구되는 단량체의 양 및 중합 속도에 맞춰진다. 중합은 괴상 또는 에멀젼으로 수행될 수 있다. 괴상 중합의 경우, 용해된 여러 구성성분들 및 개시제를 함유하는 수용액에 균질한 매질에서의 중합이 진행된다. 이는 수성 젤의 덩어리를 입수하는 것을 가능하게 하고, 그후 이러한 덩어리를 스크린 메쉬에 예를 들어 통과시킴으로써 마이크로스피어로 분리할 수 있다. 특정 실시양태에서, 중합 개시제가 여러 성분들 (산화환원 시스템)을 포함하는 경우, 유화 전에 수성 상에 중합 개시제가 첨가된다.
그후, 이렇게 수득된 마이크로스피어를 냉각, 경사분리 및 여과에 의해 회수할 수 있다. 그후, 크기 카테고리에 의해 이를 분리하고, 세정하여, 모든 미량의 2차 생성물을 제거한다.
세포부착제의 망상화 단계, 및 합성 후 그래프트화에 의해 확인가능하게 된 마이크로스피어의 경우에는 가능하게는 표지제 단계가 중합 단계에 이어질 수 있다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체의 라디칼 중합 후에, 마이크로스피어 내의 젤라틴이 수용성이 되도록 더 높은 온도, 예컨대 37℃에서 가열하는 것이 이어진다. 그후, 가교제, 예컨대 글루타르알데하이드가 젤라틴을 가교시키는데 사용된다 (예를 들어, 마이크로스피어 약 1 ℓ 당 약 300 ㎖의 글루타르알데하이드). 특정 실시양태에서, 젤라틴 가교 전에 마이크로스피어가 음파처리에 적용된다.
따라서, 한 측면에서, (a) N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체. 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체, N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체, 및 젤라틴을 포함하고, 이때 단량체들 중 하나 이상이 초고순도 단량체인 수용액을 제조하는 단계; (b) 수용액을 물에서의 혼화성이 낮은 액체 유기 상 (예를 들어, 오일, 예컨대 미네랄 오일, 예컨대 파라핀 오일)에 첨가한 후 교반하거나 또는 첨가하면서 교반함으로써, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위를 포함하는 공중합체를 포함하는 마이크로스피어를 생산하는 단계; (c) 임의적으로, 마이크로스피어에 음파처리 (예를 들어, 초음파처리)를 적용하는 단계; 및 (d) 젤라틴을 가교시키는 단계를 포함하는, 마이크로스피어의 제조 방법이 본원에서 제공된다. 이어서, 마이크로스피어를 여과 또는 원심분리에 의해 수집하고 세정할 수 있다. 특정 실시양태에서, 단량체들의 수용액은 부착제 예컨대 콜라겐을 함유할 수 있다 (젤라틴은 변성 콜라겐이다).
또 다른 측면에서, (a) (i) N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, (ii) 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체, (iii) N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체, 및 (iv) 젤라틴을 포함하고, 이때 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 및/또는 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체가 초고순도 단량체인 수용액을 제조하는 단계; (b) 수용액을 물에서의 혼화성이 낮은 액체 유기 상 (예를 들어, 오일, 예컨대 미네랄 오일, 예컨대 파라핀 오일)에 첨가한 후 교반하거나 또는 첨가하면서 교반함으로써, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위를 포함하는 공중합체를 포함하는 마이크로스피어를 생산하는 단계; (c) 임의적으로, 마이크로스피어에 음파처리 (예를 들어, 초음파처리)를 적용하는 단계; 및 (d) 젤라틴을 가교시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된 마이크로스피어가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, 마이크로스피어는 1H NMR 스펙트럼 (예를 들어, 실시예 14에서 제공된 바와 같음)에서, 제1 피크 (예를 들어, 약 3.5 ppm 내지 약 4 ppm), 제2 피크 (예를 들어, 약 3 ppm 내지 약 3.5 ppm), 및 제3 피크 (예를 들어, 약 1 ppm 내지 약 1.5 ppm)를 나타낸다. 구체적 실시양태에서, 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 0.50 내지 약 0.65이고/이거나 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 약 0.55 내지 약 0.75 (예를 들어, 약 0.61 내지 약 0.75)이다. 특정 실시양태에서, 마이크로스피어는 크기 면에서 균일하다. 또 다른 실시양태에서, 마이크로스피어는 직경이 약 1 ㎛ 내지 2000 ㎛, 40 ㎛ 내지 약 120 ㎛, 약 100 ㎛ 내지 약 300 ㎛, 약 300 ㎛ 내지 약 500 ㎛, 약 500 ㎛ 내지 약 700 ㎛, 약 700 ㎛ 내지 약 900 ㎛, 또는 약 900 ㎛ 내지 약 1200 ㎛이다. 구체적 실시양태에서, 마이크로스피어들 중 1％ 미만이 응집된 (점착성) 마이크로스피어이다.
현탁 중합에 의해, 예를 들어 (a) (i) N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, (ii) 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체, (iii) N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체, 및 (iv) 젤라틴을 포함하고, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 및/또는 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 또는 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 중 1개, 2개 또는 3개가 초고순도 단량체인 수용액을 제조하는 단계; (b) 수용액을 물에서의 혼화성이 낮은 액체 유기 상 (예를 들어, 오일, 예컨대 미네랄 오일, 예컨대 파라핀 오일)에 첨가한 후 교반하거나 또는 첨가하면서 교반함으로써, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위를 포함하는 공중합체를 포함하는 마이크로스피어를 생산하는 단계; (c) 임의적으로, 마이크로스피어에 초음파처리를 적용하는 단계; 및 (d) 젤라틴을 가교시키는 단계에 의해, 약 10％ 이하, 9％ 이하, 8％ 이하, 7％ 이하, 6％ 이하, 5％ 이하, 4％ 이하, 3％ 이하, 2％ 이하 또는 1％ 이하의 불순물을 포함하고/하거나 90 중량％ 이상, 91 중량％ 이상, 92 중량％ 이상, 93 중량％ 이상, 94 중량％ 이상, 95 중량％ 이상, 96 중량％ 이상, 97 중량％ 이상, 98 중량％ 이상 또는 99 중량％ 이상의 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 초고순도 단량체, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 초고순도 단량체, N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 초고순도 단량체, 및 젤라틴을 포함하는 초고순도 마이크로스피어를 제조하는 방법이 본원에서 또한 제공된다. 이러한 방법에 의해 제조된 각각의 단량체 단위를 포함하는 초고순도 마이크로스피어가 본원에서 또한 제공된다.
본원에서 제공되는 다양한 방법들의 특정 실시양태에서, 수용액이 피드 링을 통해 액체 유기 상에 첨가된다.
본원에서 제공되는 방법들의 일부 실시양태에서, 마이크로스피어를 체질 (예를 들어, 크기 조정을 위한 및/또는 마이크로스피어 집단 내의 응집된 마이크로스피어의 개수를 감소시키기 위한 체질)하는 단계가 방법에 추가로 포함된다. 또 다른 실시양태에서, 마이크로스피어를 1회 이상의 체질 (예를 들어, 크기 조정을 위한 및/또는 마이크로스피어 집단 내의 응집된 마이크로스피어의 개수를 감소시키기 위한 체질)에 적용하는 것이 방법에 포함되지 않는다.
구체적 실시양태에서, 본원에서 제공되는 방법들은 마이크로스피어를 음파처리 (예를 들어, 초음파처리)에 적용하는 단계를 포함한다. 특정 실시양태에서, 초음파 조(bath)에서, 예를 들어, 약 10분 내지 약 15분 동안 음파처리가 수행된다. 구체적 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체가 9％ 미만의 불순물을 포함하고/하거나 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체가 2％ 미만의 불순물을 포함한다.
본원에서 제공되는 방법들의 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 초고순도 단량체 중 하나 이상을 사용하는 것은 하나 이상의 초고순도 단량체를 사용하지 않는 방법과 비교하여 마이크로스피어 생성물의 더 높은 수율을 초래한다.
본원에서 제공되는 방법들의 또 다른 실시양태에서, 본원에서 제공되는 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 초고순도 단량체 중 하나 이상을 사용하는 것은 하나 이상의 초고순도 단량체를 사용하지 않는 방법과 비교하여 생산된 마이크로스피어의 더 좁은 크기 분포를 초래한다.
본원에서 제공되는 방법들의 또 다른 실시양태에서, 본원에서 제공되는 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 초고순도 단량체 중 하나 이상을 사용하는 것은 하나 이상의 초고순도 단량체 없이 제조된 동일한 마이크로스피어와 비교하여 중합 효율의 증가 (예를 들어, 더 많은 단량체가 중합체 내로 혼입되는 경우 및/또는 더 양호한 가교 효율)를 초래한다.
본원에서 제공되는 방법들의 또 다른 실시양태에서, 본원에서 제공되는 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 초고순도 단량체 중 하나 이상을 사용하는 것은 하나 이상의 초고순도 단량체 없이 제조된 동일한 마이크로스피어와 비교하여 젤화점 증가를 초래한다. 증가된 젤화점은 더 빠른 중합 반응을 초래할 수 있고, 이는 추가로 집단 내의 응집된 마이크로스피어 개수의 감소에 이를 수 있다. 중합 반응에서 젤화점을 평가하는 방법은 당업계에 공지되어 있다 (예를 들어, [Nita et al. (2007) Rheol. Acta 46, 595-600] 참조).
본원에서 제공되는 방법들의 또 다른 실시양태에서, 본원에서 제공되는 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 초고순도 단량체 중 하나 이상을 사용하는 것은 하나 이상의 초고순도 단량체 없이 제조된 동일한 마이크로스피어와 비교하여 마이크로스피어의 전반적인 제작 공정의 개선을 초래할 수 있고, 이는 마이크로스피어의 수율 및/또는 전반적인 품질에서의 개선 (예를 들어, 덜 파괴되고/되거나 응집된 마이크로스피어), 더욱 일관된 생성물, 더욱 양호한 크기 균일성, 더 좁은 크기 분포, 더욱 양호한 형상 균일성, 또는 이들의 임의의 조합에 이를 수 있다.
1. 피드 링 공정
특정 실시양태에서, 수성 상을 물에서의 혼화성이 낮은 액체 유기 상 (예를 들어, 오일, 예컨대 미네랄 오일, 예컨대 파라핀 오일)에 첨가한 후 교반하거나 또는 첨가하면서 교반하는 단계 동안 (예를 들어, 본원에서 제공되는 특정 방법들의 단계 (b)에서), 피드 링 설비 (예를 들어, 도 6에 제시됨)을 사용하여 본원에서 제공되는 마이크로스피어가 제조된다. 예를 들어, 마이크로스피어의 캡슐화, 오일의 캡슐화에 이르는 부반응을 제거하고/하거나 집단 내의 파괴된 스피어의 개수를 제한함으로써, 피드 링 공정은 생산되는 마이크로스피어의 품질을 추가로 개선하는데 사용될 수 있다.
예시적인 실시양태에서, 피드 링 설비는 고정식 혼합기를 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 고정식 혼합기는 세로축, 및 세로축에 연결된 대들보로부터 바깥쪽으로 확장되는, 간격이 있는 다수의 빗살(finger)이 있는 빗(comb)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 피드 링 설비가 하나 이상의 펌프에 연결된다. 한 실시양태에서, 하나 이상의 펌프가 제1 펌프 (예를 들어, Q2 펌프) 및 제2 펌프 (예를 들어, RHO 펌프)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 단량체 (예를 들어, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드, 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체) 및/또는 젤라틴을 예를 들어 포함하는 수용액이 여과되고, 교반 하에 놓인다. 일부 실시양태에서, 약 25℃ 내지 약 80℃, 예컨대 약 40℃ 내지 약 70℃의 온도에서 교반이 수행된다. 일부 실시양태에서, 약 25℃, 40℃, 50℃, 55℃, 60℃, 65℃ 또는 70℃, 또는 이의 임의의 범위의 온도에서 교반이 수행된다. 구체적 실시양태에서, 교반이 약 60℃의 온도에서 수행된다. 특정 실시양태에서, 마이크로스피어 단량체 및 젤라틴을 포함하는 수용액이 오일, 예컨대 미네랄 오일 (예를 들어, 파라핀 오일), 및 유화제, 예컨대 소르비탄 세스퀴올레에이트 (예를 들어, 아를라셀(Arlacel) 83; 또는 유사 제품)를 포함하는 용액 내에 놓인 피드 링 설비 내로 제1 펌프를 통해 주입된다. 특정 실시양태에서, 유화제 (예를 들어, 소르비탄 세스퀴올레에이트)의 농도는 오일에서 약 0.01 g/ℓ 내지 약 1 g/ℓ, 예컨대 약 0.02 g/ℓ 내지 약 0.5 g/ℓ, 또는 약 0.03 g/ℓ 내지 약 0.3 g/ℓ이다. 한 실시양태에서, 유화제 (예를 들어, 소르비탄 세스퀴올레에이트)의 농도는 오일에서 약 0.031 g/ℓ이다 (예를 들어, 4 ℓ의 오일 내의 3.1 g (또는 3 ㎖)의 아를라셀). 특정 실시양태에서, 용액은 N,N,N',N'-테트라메틸에틸렌디아민 (TEMED)을 추가로 포함한다.
특정 실시양태에서, 수성 과황산암모늄 용액이 제조되고, 유화제 (예를 들어, 소르비탄 세스퀴올레에이트)를 포함하는 용액 내에 놓인 피드 링 설비 내로 제2 펌프를 통해 주입된다. 한 실시양태에서, 단량체/젤라틴 용액 및 과황산암모늄 용액이 각각 제1 펌프 및 제2 펌프를 통해 피드 링 설비 내로 동시에 주입된다. 일부 실시양태에서, 과황산암모늄의 농도는 물에서 약 0.01 g/㎖ 내지 약 1 g/㎖, 예컨대 약 0.02 g/㎖ 내지 약 0.5 g/㎖, 또는 약 0.03 g/㎖ 내지 약 0.3 g/㎖이다. 한 실시양태에서, 수성 과황산암모늄 용액의 농도는 물에서 약 0.034 g/㎖이다 (예를 들어, 101.6 g의 물 내의 3.5 g의 과황산암모늄). 일부 실시양태에서, 피드 링 공정을 사용하는 것은 마이크로스피어의 오일 캡슐화 감소, 더 큰 입자 내에 형성된 소형 입자의 개수 감소 및/또는 균열된 마이크로스피어 감소를 초래한다.
2. 음파처리
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어에 임의적으로 음파처리 (특히 초음파처리)가 적용된다. 구체적 실시양태에서, 젤라틴 가교 전, 동안 또는 후에 마이크로스피어에 음파처리 (예를 들어, 초음파처리)가 적용된다. 한 실시양태에서, 젤라틴 가교 전에 본원에서 제공되는 마이크로스피어에 음파처리 (예를 들어, 초음파처리)가 적용된다. 음파처리 (예를 들어, 초음파처리)를 사용하여, 마이크로스피어들 간의 상호작용을 파괴하고, 마이크로스피어 집단 내에 존재하는 점착성 마이크로스피어의 백분율을 감소시킬 수 있다. 이같은 음파처리 단계의 결과는 비-점착성 마이크로스피어 생산에서의 더욱 큰 효율 (즉, 응집된 마이크로스피어의 양을 감소시킴), 및 소정의 마이크로스피어 집단으로부터 점착성 마이크로스피어를 제거하기 위한 1회 이상의 체질에 대한 필요 또는 체질 횟수를 감소시키는 것에 의한 더욱 비용-효과적인 마이크로스피어 생산 방식을 초래할 수 있다.
임의의 초음파 발생기가 본원에서 제공되는 마이크로스피어의 제조 공정 또는 방법 중 하나 이상과 조합되어 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 음파처리기, 예를 들어, 초음파 조, 초음파 프로브 또는 초음파 파쇄기(processor)를 사용하여 음파처리가 수행된다. 한 실시양태에서, 초음파 조를 사용하여 음파처리가 수행된다. 일부 실시양태에서, 음파처리가 1회 수행된다. 또 다른 실시양태에서, 음파처리가 1회를 초과하여 수행된다. 특정 실시양태에서, 음파처리가 약 20 kHz 내지 약 200 kHz, 예컨대 약 30 kHz 내지 약 100 kHz, 또는 약 35 kHz 내지 약 70 kHz의 주파수에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 음파처리가 약 35 kHz, 40 kHz, 45 kHz, 50 kHz, 55 kHz, 60 kHz, 65 kHz, 또는 약 70 kHz, 또는 이의 임의의 범위의 주파수에서 수행된다. 한 실시양태에서, 음파처리가 약 35 kHz의 주파수에서 수행된다. 특정 실시양태에서, 음파처리가 약 0℃ 내지 약 80℃, 예컨대 약 10℃ 내지 약 50℃, 약 15℃ 내지 약 35℃, 약 20℃ 내지 약 25℃ (예를 들어, 실온), 또는 약 0℃ 내지 약 5℃ (예를 들어, 얼음 상), 또는 이의 임의의 범위의 온도에서 수행된다. 특정 실시양태에서, 음파처리가 약 0℃, 4℃, 5℃, 10℃, 25℃ 또는 실온의 온도에서 수행된다.
특정 실시양태에서, 음파처리가 약 1분 내지 약 60분, 예컨대 약 5분 내지 약 40분, 또는 약 10분 내지 약 15분, 또는 이의 임의의 범위 동안 수행된다. 일부 실시양태에서, 음파처리가 약 5분, 10분, 15분 또는 20분 동안 수행된다. 한 실시양태에서, 음파처리가 약 10분 또는 약 15분 동안 수행된다. 상기 시간은 단일한 연속적인 음파처리 또는 다중 음파처리를 반영할 수 있다.
특정 실시양태에서, 음파처리 후에 존재하는 점착성 (또는 응집된) 마이크로스피어의 백분율은 약 0％ 내지 약 3％, 약 0％ 내지 약 2％, 약 0％ 내지 약 1.5％, 약 0％ 내지 약 1％, 또는 약 0％ 내지 약 0.5％, 또는 이의 임의의 범위이다. 일부 실시양태에서, 음파처리 후 마이크로스피어 내에 존재하는 점착성 스피어의 백분율은 약 0％, 약 0.1％, 약 0.2％, 약 0.3％, 약 0.4％, 약 0.5％, 약 0.6％, 약 0.7％, 약 0.8％, 약 0.9％ 또는 약 1％이다. 특정 실시양태에서, 파괴된 마이크로스피어가 음파처리 후 관찰되지 않는다.
일부 실시양태에서, 음파처리 (예를 들어 초음파처리)를 사용하여 제조된 본원에서 제공되는 마이크로스피어는, 초음파처리를 사용하지 않고 제조된 동일한 마이크로스피어와 비교하여, 마이크로스피어의 전반적인 제작 공정에서의 개선 (예를 들어, 더 높은 수율 및/또는 덜 고가)을 초래하고, 이는 마이크로스피어의 품질 개선 (예를 들어, 덜 파괴되고/되거나 응집된 마이크로스피어), 더욱 일관된 생성물 (예를 들어, 더 큰 크기 및/또는 형상 균일성), 또는 이들의 조합에 이를 수 있다. 구체적 실시양태에서, 음파처리 (예를 들어 초음파처리)를 사용하여 제조된 본원에서 제공되는 마이크로스피어는 5％ 이하, 4.5％ 이하, 3.5％ 이하, 3％ 이하, 2.5％ 이하, 2％ 이하, 1.5％ 이하, 1％ 이하, 0.5％ 이하, 0.4％ 이하, 0.3％ 이하, 0.25％ 이하, 0.2％ 이하 또는 0.1％ 이하의 응집된 마이크로스피어를 포함하는, 제조된 마이크로스피어 배치 (또는 집단)로부터의 마이크로스피어에 비해 30％ 초과, 35％ 초과, 40％ 초과, 50％ 초과, 55％ 초과, 60％ 초과 (또는 이보다 높은 값)의 수율을 초래한다 .
한 실시양태에서, (a) (i) N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체, (ii) 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체, (iii) N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체, 및 (iv) 젤라틴을 포함하고, 이때 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 및/또는 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체가 초고순도 단량체인 수용액을 제조하는 단계; (b) 수용액을 물에서의 혼화성이 낮은 액체 유기 상에 첨가한 후 교반하거나 또는 첨가하면서 교반함으로써, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위를 포함하는 공중합체를 포함하는 마이크로스피어를 생산하는 단계; (c) 임의적으로, 마이크로스피어에 초음파처리를 적용하는 단계; 및 (d) 젤라틴을 가교시키는 단계를 포함하는 마이크로스피어의 제조 방법이 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, 수용액이 피드 링을 통해 액체 유기 상에 첨가된다. 한 실시양태에서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체가 9％ 미만의 불순물을 포함하고/하거나 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체가 2％ 미만의 불순물을 포함한다. 한 실시양태에서, 마이크로스피어는 초고순도 마이크로스피어이다. 또 다른 실시양태에서, (i) 초고순도 마이크로스피어가 약 10％ 이하, 9％ 이하, 8％ 이하, 7％ 이하, 6％ 이하, 5％ 이하, 4％ 이하, 3％ 이하, 2％ 이하 또는 1％ 이하의 불순물을 포함하거나, (ii) 초고순도 마이크로스피어가 90 중량％ 이상, 91 중량％ 이상, 92 중량％ 이상, 93 중량％ 이상, 94 중량％ 이상, 95 중량％ 이상, 96 중량％ 이상, 97 중량％ 이상, 98 중량％ 이상 또는 99 중량％ 이상의 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드, N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 및 젤라틴을 포함하거나, 또는 (iii) (i)과 (ii)의 조합이다. 또 다른 실시양태에서, 초음파 조에서 초음파처리가 수행된다. 특정 실시양태에서, 이러한 방법은 마이크로스피어를 체질하는 단계를 포함하지 않는다.
본원에서 제공되는 다양한 방법 중 임의의 방법에 의해 제조되는 마이크로스피어가 본원에서 또한 제공된다. 한 실시양태에서, 이러한 방법에 의해 제조된 마이크로스피어는 1H NMR 스펙트럼에서, 약 3.5 ppm 내지 약 4 ppm의 제1 피크, 약 3 ppm 내지 약 3.5 ppm의 제2 피크, 및 약 1 ppm 내지 약 1.5 ppm의 제3 피크를 나타내고, 이때 (i) 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 0.50 내지 약 0.65이거나, (ii) 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 0.61 내지 약 0.75이거나, 또는 (iii) 이의 조합이다. 한 실시양태에서, 마이크로스피어는 크기 면에서 균일하다. 또 다른 실시양태에서, 마이크로스피어는 직경이 약 1 ㎛ 내지 약 2000 ㎛, 40 ㎛ 내지 약 120 ㎛, 약 100 ㎛ 내지 약 300 ㎛, 약 300 ㎛ 내지 약 500 ㎛, 약 500 ㎛ 내지 약 700 ㎛, 약 700 ㎛ 내지 약 900 ㎛, 또는 약 900 ㎛ 내지 약 1200 ㎛이다. 일부 실시양태에서, 마이크로스피어들 중 1％ 미만이 응집된 마이크로스피어이다.
D. 사용 방법
특정 실시양태에서, 마이크로스피어는 가요성이지만 부서지기 쉽지 않아서, 영구적으로 변형 또는 파손되지 않으면서 주입 장치 및 소형 카테터 내로, 그리고 이를 지나 쉽게 통과할 수 있지만, 또한 마이크로스피어는 이식 프로세스 동안 또는 후에 생성되는 근육 수축 스트레스에 대해 저항성이다. 일부 실시양태에서, 마이크로스피어는 열적으로 안정적이고, 이는 용이하고 편리한 살균 및 동결 보관을 허용한다.
따라서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어는 광범위한 용도를 지닌다. 예를 들어, 본원에서 제공되는 마이크로스피어는 색전술, 조직 조작, 조직 유도 재생, 생체내 줄기 세포 수확, 배양 또는 분화, 표적화된 인간 또는 동물 조직에서의 치료 물질의 전달 및 현탁 및/또는 기타 용도에 사용될 수 있다.
본원에서 제공되거나 또는 본원에서 제공되는 다양한 방법에 의해 제조되는 다양한 마이크로스피어 중 임의의 것이 본원에서 제공되는 임의의 다양한 색전술 및 질환 관리 및 치료 실시양태에서 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서의 색전술 방법이 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 혈관형성-의존적 질환을 관리 또는 치료하는 방법이 본원에서 제공된다. 한 실시양태에서, 혈관형성-의존적 질환은 동정맥 기형, 자궁 섬유종, 또는 양성 전립선 비대증이다. 한 실시양태에서, 혈관형성-의존적 질환은 암 또는 종양, 예컨대 간 또는 전립선 암 또는 종양이다.
1. 색전술
장기 또는 영역으로의 혈액 공급을 감소시키거나 폐지하는 것이 바람직한 다수의 임상 상황 (예를 들어, 출혈, 종양 발달)이 있다. 하기에 더욱 상세하게 기술되는 바와 같이, 이는 선택적으로 놓인 바늘 또는 카테터를 통해 또는 x선 카메라 (예를 들어, 형광투시경)의 안내 하에 마이크로스피어 또는 조성물을 원하는 혈관 내로 주입함으로써 달성될 수 있다. 마이크로스피어 또는 조성물이 혈관구조 내에 쐐기를 박게 될 때까지 혈류를 통해 이동함으로써, 혈관을 물리적으로 (또는 화학적으로) 폐색한다. 선택된 구역으로의 혈류 감소 또는 폐지는 경색 (산소 및 영양분의 부적절한 공급으로 인한 세포 사망) 또는 손상된 혈관으로부터의 혈액 손실 감소를 초래한다.
따라서, 특정 실시양태에서, 대상체에게 마이크로스피어 (마이크로스피어들) 또는 마이크로스피어(들)을 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 색전술 방법이 본원에서 제공된다. 한 실시양태에서, 혈관이 효과적으로 폐색되도록 치료적 유효량의 마이크로스피어를 대상체 또는 환자의 혈관에 투여하는 단계를 포함하는 혈관 색전 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 과도한 출혈 상태를 치료 또는 예방하기 위해 색전술이 달성될 수 있다. 본원에서 제공되는 마이크로스피어 또는 조성물을 사용하는 색전술 치료법은 혈관을 폐색하는 것이 유리한 다양한 기타 임상 상황, 예를 들어, 급성 출혈, 혈관 이상, 중추 신경계 장애 및 지라항진증에 또한 적용될 수 있다.
혈관 기형, 예컨대 AVM 또는 동정맥루의 경우, 혈관 폐색은 조직으로의 혈류를 정상화되게 할 수 있고, 수술에 도움이 되며, 출혈 위험을 제한한다. 출혈 프로세스에서, 혈관 폐색은 혈류 감소를 일으키고, 이는 동맥 개구부(들)이 아무는 것을 촉진한다.
색전술은 자궁 섬유종, 분만후 및/ 제왕절개후 출혈, 수술후 질 출혈의 치료에서, 자궁외 임신으로부터의 출혈의 예방 및/또는 치료에서, 근종적출술 이전에 예방적으로, 그리고 출혈 위험이 높은 분만 환자, 예컨대 전치 태반, 유착 태반 및 쌍태아 사망 환자에서 사용될 수 있다. 색전술은 미제어 출혈을 정지시키는데, 또는 수술 전 또는 수술 동안 출혈을 느리게 하는데, 그리고 동맥류 주머니 내로의 내강누출(endoleak)을 밀봉하기 위해 또한 사용될 수 있다.
본원에서 제공되는 다양한 질환 또는 장애 중 임의의 것 또는 이의 증상이 본원에서 제공되는 방법에 따라 관리, 치료 또는 예방될 수 있다.
또한, 치료되는 병리 용태에 따라, 색전술이 일시적, 뿐만 아니라 영구적 목적으로 수행될 수 있다.
색전술은 또 다른 임상 시술, 예컨대 혈관조영술과 조합되어 또한 사용될 수 있다. 예를 들어, x선을 취할 때 경피적으로 또는 수술에 의해 동맥 또는 정맥 내로 삽입된 카테터를 통해 예를 들어 색전될 구역에 방사선 비투과성 조영제가 주입될 수 있다. 그후, 혈류가 멈추는 것으로 관찰될 때까지, 카테터를 통해 본원에서 제공되는 마이크로스피어를 환류시킴으로써 혈관이 색전될 수 있다. 혈관조영상을 반복함으로써 폐색이 확인될 수 있다.
본원에서 제공되는 마이크로스피어는 당업계에 공지된 방법에 의해 혈관, 조직 또는 장기 (예를 들어, 심장, 신장, 척수, 자궁, 간 또는 췌장)에 투여될 수 있다 (또는 또 다른 방식으로 이와 접촉될 수 있다). 특정 실시양태에서, 1개를 초과하는 혈액 공급이 있는 조직 또는 장기, 예를 들어 간, 폐, 척추, 척수, 자궁 또는 췌장에 마이크로스피어가 투여된다 (예를 들어, 주사에 의해). 특정 실시양태에서, 환자의 심장, 폐, 신경계, 뇌, 폐, 간, 자궁 또는 췌장에 마이크로스피어가 투여된다. 일부 실시양태에서, 이러한 조직 또는 장기 내에 포함되는 하나 이상의 혈관, 정맥 또는 동맥에 마이크로스피어가 투여된다. 특정 실시양태에서, 표적 구역, 예를 들어, 투여 또는 주사 구역 내, 예컨대 조직 또는 장기 내 또는 근처의 허혈에 대항하는데 본원에서 제공되는 마이크로스피어가 사용된다. 본원에서 제공되는 방법들의 일부 실시양태에서, 관내 투여 또는 주사에 의해 환자에게 마이크로스피어가 투여된다. 본원에서 제공되는 방법들의 또 다른 실시양태에서, 혈관내 투여 또는 주사에 의해 환자에게 마이크로스피어가 투여된다.
마이크로스피어는 전신적으로 또는 국소적으로 원하는 혈관, 조직 또는 장기에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 수술 전, 동안 또는 후에 마이크로스피어가 혈관, 조직 또는 장기에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 마이크로스피어가 비-수술 방법을 사용하여 혈관, 조직 또는 장기에 전달되고, 예를 들어, 국소적으로 표적 구역 내로 직접적으로 주사되거나, 원격 부위에 주사되어 표적 부위로 수동적으로 순환되거나, 또는 원격 부위에 주사되어 표적 부위로 능동적으로 지시된다. 이같은 비-수술 전달 방법에는, 예를 들어, 주입 또는 혈관내 (예를 들어, 정맥내 또는 동맥내), 근육내, 복강내, 수막강내, 피내 또는 피하 투여가 포함된다. 특정 실시양태에서, 혈관조영술 (예를 들어, 선택적 혈관조영술 또는 초선택적 혈관조영술)이 조직 또는 장기로의 혈액 공급을 평가하기 위해 색전술과 함께 사용된다. 이같은 실시양태에서, 혈관조영상이 색전술 전, 동안 또는 후에 취득될 수 있다.
치료적 유효량의 본원에서 제공되는 마이크로스피어 또는 조성물을 환자 (예를 들어, 치료 또는 관리를 필요로 하는 환자)에게 투여함으로써 본원에서 제공되는 질환 또는 장애가 치료되거나 또는 또 다른 방식으로 관리될 수 있다.
특정 실시양태에서, 주사에 의해 투여가 수행된다. 특정 실시양태에서, 카테터에 의해 마이크로스피어가 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 주사기에 부착된 바늘을 사용하여 마이크로스피어가 주사된다. 일부 실시양태에서, 혈관 내로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 직접적으로 작용 부위에, 예를 들어, 종양 덩어리 내로 또는 이같은 치료 또는 관리를 필요로 하는 세포, 장기 또는 조직 내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 약물 용액 또는 기타 치료법과 조합되어 마이크로스피어가 투여되고, 이때 이러한 약물 용액 또는 기타 치료법은 마이크로스피어의 투여 전에, 투여와 동시에 또는 투여 후에 투여된다.
남성 및 여성 유아, 아동 및 성인 (노인 포함)을 포함하는 인간 및 동물이 본원에서 제공되는 마이크로스피어로의 색전술에 적절한 환자에 포함된다는 것을 이해하여야 한다. 구체적 실시양태에서, 환자는 간세포 질환, 예컨대 간염 또는 간 암 또는 종양에 걸릴 위험이 있거나 현재 걸려 있고, 예를 들어, 18세 내지 75세의 백인 또는 아시아인 (예를 들어, 일본계의 사람들을 포함하지만 이에 한정되지 않음) 환자이다. 일부 실시양태에서, 환자의 연령은 25세 내지 75세, 25세 내지 50세, 50세 내지 75세, 또는 18세 내지 25세이다. 한 실시양태에서, 환자의 연령은 18세 미만 (예를 들어, 1세 내지 5세, 5세 내지 10세, 10세 내지 15세 또는 15세 내지 18세)이다. 또 다른 실시양태에서, 환자의 연령은 75세 이상이다.
일부 실시양태에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어가 환자의 간세포 질환 또는 이의 증상의 치료, 관리 또는 예방에서 사용된다. 한 실시양태에서, 환자는 차일드-푸(Child-Pugh) 클래스 A이다. 또 다른 실시양태에서, 환자는 차일드-푸 클래스 B이다. 또 다른 실시양태에서, 환자는 차일드-푸 클래스 C이다. 차일드-푸 분류는 당업계에 주지되어 있고, 예를 들어, [Child and Turcotte (1964) Surgery and portal hypertension, The liver and portal hypertension (ed. Child CG). Philadelphia, Saunders 1964, 50-64]를 참조하며, 이는 이후에 [Pugh et al. Transection of the esophagus in bleeding oesophageal varices (1973) Br. J. Surg. 60:648-652]에서 개정되었다. 일부 실시양태에서, 환자는 C형 간염 바이러스 (HCV)에 감염되어 있다.
본원에서 제공되는 마이크로스피어 및 조성물은 약물 또는 기타 치료법과 또한 조합될 수 있다. 예를 들어, 마이크로스피어 및 조성물이 종양 또는 암 (예를 들어, 전립선 또는 간 암), 염증성 질환 또는 염증과 관련된 기타 질환, 또는 이의 증상을 치료하거나 또는 또 다른 방식으로 관리하는데 사용될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어 및 조성물이 자궁 섬유종 또는 이의 증상을 치료하거나 또는 또 다른 방식으로 관리하는데 사용될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어 및 조성물이 혈관 기형, 예컨대 AVM, 또는 이의 증상을 치료하거나 또는 또 다른 방식으로 관리하는데 사용될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어 및 조성물이 전립선 질환, 예컨대 양성 전립선 비대증, 또는 이의 증상을 치료하거나 또는 또 다른 방식으로 관리하는데 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 약물 또는 기타 치료법이 본원에서 제공되는 마이크로스피어와 조합되어 대상체에게 동시에 투여된다. 일부 실시양태에서. 약물 또는 기타 치료법이 마이크로스피어의 투여 전에 대상체에게 투여된다. 특정 실시양태에서, 약물 또는 기타 치료법이 마이크로스피어를 투여하기 약 1분 내지 약 60분 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 약물 또는 기타 치료법이 마이크로스피어를 투여하고 나서 약 1분, 약 5분, 약 10분. 약 15분, 약 20분, 약 30분, 약 45분 또는 약 1시간, 약 2시간, 약 4시간, 약 6시간, 약 10시간, 약 12시간, 약 18시간, 약 20시간 또는 약 24시간 이내에 대상체에게 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 약물 또는 기타 치료법이 마이크로스피어와 동시에 투여된다. 특정 실시양태에서, 마이크로스피어가 약물 또는 기타 치료법의 투여 전에 대상체에게 투여된다. 특정 실시양태에서, 마이크로스피어가 약물 또는 기타 치료법을 투여하기 약 1분 내지 약 60분 사이 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 마이크로스피어가 약물 또는 기타 치료법을 투여하고 나서 약 1분, 약 5분, 약 10분, 약 15분, 약 20분, 약 30분, 약 45분 또는 약 1시간, 약 2시간, 약 4시간, 약 6시간, 약 10시간, 약 12시간, 약 18시간, 약 20시간 또는 약 24시간 이내에 대상체에게 투여된다.
2. 혈관형성-의존적 질환
혈관형성-의존적 질환 (즉, 혈관 성장을 필요로 하거나 유도하는 질환)은 의학적 치료가 추구되는 모든 질환의 상당한 부분을 나타낸다. 이같은 질환에는, 예를 들어, 암 또는 종양 (예를 들어, 간 암 또는 종양, 또는 전립선 암 또는 종양) 및 비-종양발생성 혈관형성-의존적 질환이 포함된다.
특정 실시양태에서, 종양 또는 기타 암, 비-종양발생성 혈관형성-의존적 질환, 또는 통증, 예컨대 종양 또는 기타 암의 존재와 관련되는 통증, 또는 이의 증상이 포함되는 혈관형성-의존적 질환을 치료하거나 또는 다른 방식으로 관리하는데 적절한 마이크로스피어, 조성물 및 방법이 본원에서 제공된다. 한 실시양태에서, 대상체에게 마이크로스피어 (마이크로스피어들) 또는 마이크로스피어(들)을 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 혈관형성-의존적 질환을 관리 또는 치료하는 방법이 제공된다. 구체적 실시양태에서, 대상체에게 마이크로스피어 (마이크로스피어들) 또는 마이크로스피어(들)을 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 예를 들어 포함하는, 대상체에서 혈관형성-의존적 질환을 관리 또는 치료하는 방법이 제공된다.
암에 더하여, 비정상적인 혈관 성장을 특징으로 하는 수많은 또 다른 비-종양발생성 혈관형성-의존적 질환이 또한 본원에서 제공되는 마이크로스피어 또는 조성물로 하향-조절 또는 상향-조절을 통해 치료될 수 있거나, 또는 다른 방식으로 관리될 수 있다. 이같은 비-종양발생성 혈관형성-의존적 질환의 대표적인 예로는 비후성 흉터 및 켈로이드, 증식성 당뇨병성 망막증, 류머티스성 관절염, 동정맥 기형 (AVM), 림프관성 기형, 정맥 기형, 죽상경화판, 상처 치유 지연, 혈우병 관절, 불유합 골절, 클리펠 트레노우네이(Klippel Trenaunay) 증후군, 팍스 웨버(Parkes Weber) 증후군, 오슬러-웨버-렌두(Osler-Weber-Rendu) 증후군, 청색 고무 물집(Blue Rubber Bleb) 증후군, 피부 및 피하 모반, 혈관종, 평활근종, 선종, 과오종, 건선, 화농성 육아종, 경피증, 트라코마, 월경과다, 혈관 유착, 양성 전립선 비대증 (BPH) 및 자궁 섬유종이 비제한적으로 포함된다.
a. 암 또는 종양
구체적 실시양태에서, 마이크로스피어 (마이크로스피어들) 또는 마이크로스피어(들)을 포함하는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 예를 들어 포함하는, 대상체에서 암 또는 종양 (예를 들어, 과다혈관화 암 또는 종양)을 관리 또는 치료하는 방법이 제공된다. 이같은 암에는, 비제한적으로 (해부학적으로 및 1차 신생물 부위에 의해), 간, 난소, 유방, 신장, 폐, 췌장, 갑상선, 전립선, 자궁, 피부 암, 두경부 종양, 유방 종양, 뇌, 골, 연질 조직 (예컨대 육종, 지방종, 악성 섬유 조직구종), 혈액 (예컨대 림프종), 카포시 육종, 및 표재성 형태의 방광암이 비제한적으로 포함된다. 특정 실시양태에서, 치료 또는 관리 방법은 마이크로스피어의 색전 효과 (예를 들어, TACE)와 조합된 국소 (또는 전신) 약물 전달의 결과일 수 있다.
본원에서 제공되는 조성물 및 방법으로의 관리 및 치료에 고려되는 기타 질환 및 이의 증상에는, 예를 들어, 간, 신장과 관련된 종양, 급성 림프모세포종 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 유잉(Ewing) 육종, 임신성 영양모세포성 암종, 호지킨(Hodgkin) 병, 비-호지킨 림프종, 버킷(Burkitt) 림프종 미만성 대세포 림프종, 여포성 혼합 림프종, 림프모세포종 림프종, 횡문근육종, 고환 암종, 윌름(wilms) 종양, 항문 암종, 방광 암종, 유방 암종, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 모발상 세포 백혈병, 두경부 암종, 수막종, 신경 섬유종, 혈관 섬유종, 폐 (소세포) 암종, 다발성 골수종, 비-호지킨 림프종, 여포성 림프종, 난소 암종, 뇌 종양 (성상세포종), 자궁경부 암종, 결장직장 암종, 간세포 암종, 인간 거대 간세포 암종, 카포시(Kaposi) 육종, 폐 (비-소세포) 암종, 흑색종, 췌장 암종, 전립선 암종, 연조직 육종, 유방 암종, 결장직장 암종 (단계 II), 골 종양, 골원성 육종, 난소 암종, 고환 암종, 또는 이들의 조합이 비제한적으로 포함된다.
본원에서 제공되는 조성물 및 방법을 사용하는 색전술 치료법은 신생물의 관리를 보조하는 적어도 3가지의 주요 방식으로 이용될 수 있다: (1) 종양 (일반적으로 양성)의 한정적인 치료; (2) 수술전 색전술; 및 (3) 고식적 색전술. 간략하게, 때때로 양성 종양이 색전술 치료법 단독에 의해 성공적으로 치료될 수 있다. 이같은 종양의 예로는 혈관 기원의 단순 종양 (예를 들어, 혈관종), 내분비 종양 예컨대 부갑상선 선종, 및 양성 골 종양이 포함된다.
또 다른 종양 (예를 들어, 신장 선암종)에 대해, 수술 중 혈액 손실을 감소시키고, 수술 시간을 짧게 하며, 종양의 외과적 조작에 의한 생육성 악성 세포의 전염 위험을 감소시키기 위해 외과적 절제 수 시간 또는 수 일 전에 수술전 색전술이 사용될 수 있다. 비인두 종양, 경정맥구 종양, 수막종, 화학감수체종 및 미주 신경종이 예를 들어 포함되는 다수의 종양이 성공적으로 수술 전에 색전화될 수 있다.
질환이 진행된 환자의 생존 시간을 연장하기 위해, 마이크로스피어 또는 조성물을 사용하는 색전술이 수술불가능한 악성 종양에 대해 주요 치료 양식으로 또한 이용될 수 있다. 색전술은 출혈, 혈관 폐색 및 기관(氣管) 압박과 같은 불쾌한 증상을 경감시킴으로써 악성 종양에 걸린 환자의 삶의 질에서의 현저한 개선을 일으킬 수 있다. 특정 실시양태에서, 카르시노이드 종양 및 기타 내분비 신생물 예컨대 인슐린종 및 글루카곤종으로부터의 전이는 천천히 성장 중일 수 있지만, 이들이 일으키는 내분비 증후군으로 인해 여전히 큰 고통을 야기할 수 있는, 악성 내분비 종양의 체액성 효과를 앓고 있는 환자에서 고식적 종양 색전술로부터의 장점이 나타날 수 있다. 특정 실시양태에서, 색전술 치료법은 종양 또는 혈관 덩어리 또는 암성 장기를 제거하기 위한 또는 전이를 방지하거나 경감시키기 위한 수술 동안 또한 사용될 수 있다.
화학색전술은 암을 치료하는데 전형적으로 사용되는, 화학요법과 색전술 또는 색전요법의 조합이다. 유사하게, 방사선색전술은 방사선조사 요법과 색전술 또는 색전요법의 조합이다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어는 표적화된 종양 내로의 지속적인 관류/혈류를 제공하는 한편 종양 혈관 공급부 내로의 마이크스피어의 점진적인 이동을 허용하도록 말단의 치료적 마이크로스피어들 간의 산재를 목적으로 또는 독립형(standalone) 치료법으로서 표적 구역에 주입될 수 있다. 화학요법제를 마이크로스피어 매트릭스에 첨가하는 것은 마이크로스피어의 말단 색전 효과로 치료법의 노출 시기를 개선함으로써 치료법의 효능을 증가시킬 수 있다.
광범위한 암 또는 종양을 본원에서 제공되는 마이크로스피어 조성물을 사용하여 색전화할 수 있다. 간략하게, 종양은 전형적으로 2개의 부류로 나뉜다: 양성 및 악성. 양성 종양에서, 세포는 자신의 분화된 특색을 유지할 수 있고, 완전히 제어되지 않는 방식으로 분열되지 않는다. 또한, 이러한 종양은 국소화되고, 비-전이성이다. 악성 종양에서는, 세포들이 미분화 세포가 될 수 있고, 신체 성장 및 호르몬 신호에 응답하지 않으며, 제어되지 않는 방식으로 증식된다; 이러한 종양은 침습성이고, 원격 부위로 확산 (전이)될 수 있다. 양성 종양 및 악성 종양 모두 본원에서 제공되는 마이크로스피어를 사용하여 색전, 치료, 관리, 예방 또는 경감될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어 또는 조성물을 사용하여 2차 종양 (예를 들어, 2차 간 종양)을 관리 또는 치료하는 방법이 본원에서 또한 제공된다. 2차 종양 또는 전이는 신체 내의 다른 곳에서 유래되지만 그 후에 원격 장기로 확산된 종양이다. 전이에 대한 통상적인 경로는 인접 구조물 내로의 직접적인 성장, 혈관계 또는 림프계를 통한 확산, 및 조직 면 및 신체 공간 (복강액, 뇌척수액 등)을 따라가는 것이다.
본원에서 제공되는 방법들의 또 다른 실시양태에서, 종양 또는 혈관 덩어리 또는 암성 장기를 제거하는 수술 동안 색전술 요법이 사용될 수 있다. 추가적으로, 치료적 색전술 요법이 전이의 치료, 관리, 예방 또는 경감에 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 종양에 영양을 공급하는 혈관이 혈관 내로의 색전 물질 주사에 의해 신중하게 차단된다. 특히, 종양의 경우, 본원에서 제공되는 혈관 폐색 방법을 사용하여, 통증을 억제하거나, 색전술 후의 수술적 개입 시 혈액 손실을 제한하거나, 또는 심지어 종양 괴사를 일으켜 수술을 피할 수 있다.
i. 간 암 또는 종양
특정 실시양태에서, 대상체에게 마이크로스피어 또는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 사용하여 간 암 또는 종양을 치료 또는 관리할 수 있다. 양성 간 종양의 대표적인 예로는 간세포성 선종, 해면상 혈관종, 및 국소 결절성 과증식이 포함된다. 더욱 희귀하고 종종 임상 소견을 나타내지 않는 또 다른 양성 종양이 또한 치료될 수 있다. 여기에는 담관 선종, 담관 낭선종, 섬유종, 지방종, 평활근종, 중피종, 기형종, 점액종 및 결절 재생성 과증식이 포함된다.
악성 간 종양은 2가지 카테고리로 세분될 수 있다: 1차 및 2차. 1차 종양은 자신이 발견되는 조직으로부터 직접 발생한다. 따라서, 1차 간 종양은 간 조직을 구성하는 세포 (예컨대 간세포 및 담즙 세포)로부터 처음부터 기원한다. 1차 간 악성 종양의 대표적인 예로는 간세포성 암종, 담관 암종, 혈관육종, 낭선암종, 편평세포 암종 및 간세포종이 포함된다. 예를 들어, 본원에서 제공되는 조성물 및 방법을 사용하여, 간 악성 종양, 또는 이의 증상을 치료하거나 또는 다른 방식으로 관리할 수 있다.
예를 들어, 간 동맥 내로 꿰어진 소형 튜브 또는 카테터를 통해 마이크로스피어를 주입함으로써 동맥색전술이 수행될 수 있다. 예를 들어, 카테터를 대퇴 또는 상완 동맥을 통해 삽입하고, 형광투시경의 안내 하에 동맥계를 통해 이를 인도함으로써 간 동맥 내로 전진시킬 수 있다. 정상 구조물에 공급되는 동맥 분지를 가능한 한 많이 남기면서, 카테터가 종양(들)에 공급되는 혈관의 완전한 차단을 허용하도록 필요한 만큼 간 동맥 분지 내로 전진될 수 있다. 이는, 예를 들어, 간 동맥의 분절 분지일 수 있지만, 종양의 정도 및 이의 개별적인 혈액 공급에 따라, 위십이지장 동맥의 기원에 대해 원위부인 전체 간 동맥, 또는 심지어 여러 분리된 동맥들이 차단될 필요가 있을 수 있다. 일단 원하는 카테터 위치가 달성되면, 차단될 동맥 내의 혈류가 정지될 때까지, 예컨대 5분 동안의 관찰 후에, 동맥 카테터를 통해 항-혈관형성 치료 조성물 (예를 들어, 본원에서 제공되는 마이크로스피어 및 임의적으로 하나 이상의 추가적인 치료제)을 주입함으로써 동맥이 색전될 수 있다. 방사선 비투과성 조영제를 카테터를 통해 주입하고, 이전에는 조영제로 채워졌던 혈관이 더 이상 그렇지 않다는 것을 형광투시경 또는 x선 필름에 의해 실연함으로써 동맥의 폐색이 확인될 수 있다. 폐색될 각각의 영양공급 동맥으로 동일한 절차를 반복할 수 있다.
간 동맥은 대부분의 간 종양에 대한 주요 혈액 공급원이고, 따라서, 마이크로스피어가 종양으로의 혈류를 차단하여, 종양이 생존하기 위해 필요로 하는 영양분 및 산소를 종양으로부터 빼앗을 수 있다. 유사한 방식으로, 동맥 색전술이 급성 출혈, 혈관 이상, 중추 신경계 장애 및 지라항진증이 예를 들어 포함되는 다양한 다른 용태에서 달성될 수 있다. 특정 실시양태에서, 경동맥 화학색전술 (TACE) 및 경동맥 색전술 (TAE)이 간 암 또는 종양을 치료하는데 수행될 수 있다. TACE는 TAE와 국소 화학요법의 조합 요법이고, 일반적으로, 오른쪽 서혜부 내의 총대퇴동맥을 찌르고, 카테터를 복부 대동맥, 복강동맥 및 총간동맥을 지나 고유간동맥 (간에 공급됨) 내로 통과시킴으로써, 간 동맥으로의 경피 접근을 획득하는 것을 수반하는 중재성 방사선학 절차를 지칭한다.
선택적 동맥 폐색은 간 조직에 대한 손상을 최소화하면서 허혈성 종양 괴사를 유도할 수 있다. 문맥으로부터의 우세한 혈류에 의해 간 조직으로의 혈액 공급이 여전히 유지되어, 간에 대한 손상을 최소화한다. 또한, 동시에 투여된 화학요법제가 종양 내에 더 긴 기간 동안 더 높은 농도로 잔존한다. 색전요법은 종양으로의 동맥 혈류를 중단시키고, 주사된 화학요법제가 종양으로부터 세척되는 것을 방지한다.
TACE는 2가지 방식으로 자신의 이로운 효과를 끌어낼 수 있다. 대부분의 종양에 간 동맥이 공급되기 때문에, 동맥 색전술은 이의 혈액 공급을 중단시키고, 신생혈관분포에 의해 교체될 때까지 성장을 연기시킨다. 추가로, 화학요법의 초점식 투여는 조직으로의 더 높은 용량을 허용하면서, 전형적으로 용량 제한 요인인 전신 노출을 동시에 감소시킨다. 이러한 효과는 화학요법 약물이 색전술 후 종양 부위(bed)로부터 세척되지 않는다는 사실에 의해 강화된다. 따라서, 색전요법과 국소적 화학요법의 조합은 높은 객관적인 반응률과 함께 상승작용적인 항-종양 효과를 지닌다. 부가된 또 다른 이점은 조합 요법의 사용이 더 낮은 전신 약물 수준, 및 따라서 더 적은 독성을 초래한다는 것이다.
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어 또는 조성물을 사용하여 2차 간 종양을 관리 또는 치료하는 방법이 본원에서 또한 제공된다. 2차 간 종양은 암 환자에서 가장 통상적인 사망 원인 중 하나이고, 월등하게 가장 통상적인 형태의 간 종양이다. 실제로 임의의 악성 종양이 간으로 전이될 수 있지만, 간으로 확산되기 쉬운 종양에는 위, 결장 및 췌장의 암; 흑색종; 폐, 구강인두부 및 방광의 종양; 호지킨 및 비-호지킨 림프종; 유방, 난소 및 전립선의 종양이 포함된다. 상기 언급된 1차 종양들 각각은 동맥 색전술에 의해 치료될 수 있는 다수의 상이한 종양 유형을 지닌다 (예를 들어, 비제한적으로, 32가지를 초과하는 상이한 유형의 난소 암이 있는 것으로 알려져 있다).
ii . 전립선 암 또는 종양
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어 또는 조성물을 사용하여, 전립선 암 또는 종양, 또는 이의 증상을 관리 또는 치료하는 방법이 제공된다.
일부 실시양태에서, 마이크로스피어 또는 조성물이 전립선 주변의 구역, 예컨대 전립선 동맥에 투여된다. 예를 들어, 비제한적으로, 마이크로스피어 또는 조성물이 전립선 암에 영양을 공급하는 혈관에 전달될 수 있다.
주사기, 카테터, 바늘, 및 주사 또는 주입을 위한 기타 수단을 통해 마이크로스피어 또는 조성물의 투여가 수행될 수 있다. 주사기, 카테터, 바늘 등이 정맥 또는 동맥, 예를 들어, 대퇴 동맥 또는 아래 방광 동맥 내로 삽입될 수 있다
특정 실시양태에서, 주사기, 카테터, 또는 바늘이, 예를 들어, 전립선 동맥의 구멍 내로 전진되고, 한 실시양태에서는, 정상 구조물에 공급되는 동맥 분지를 가능한 한 많이 남기면서, 전립선 암에 공급되는 혈관의 완전한 차단을 허용하도록 필요한 만큼 전진될 수 있다.
본원에서 제공되는 방법들의 일부 실시양태에서, 색전될 구역의 혈관조영술이 색전술 전에 수행된다. 그후, 혈류가 정지되는 것이 관찰될 때까지, 기존에 놓인 카테터를 통해 본원에서 제공되는 색전 물질을 환류시킴으로써 혈관이 색전된다. 카테터를 경피적으로 또는 수술에 의해 삽입할 수 있다. 혈관조영상을 반복함으로써 폐색을 확인할 수 있다.
b. 동정맥 기형
추가적인 구체적 실시양태에서, 동정맥 기형을 교정하도록 동맥 또는 정맥을 폐색하기 위해 마이크로스피어 (마이크로스피어들) 또는 마이크로스피어(들)을 포함하는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 예를 들어 포함하는, 대상체에서 동정맥 기형 또는 이의 증상을 관리 또는 치료하는 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, 대퇴 또는 상완 동맥을 통해 카테터를 삽입하고 이를 형광투시경의 안내 하에 영양공급 동맥 내로 전진시킴으로써 동정맥 기형을 치료할 수 있다. 정상 구조물에 공급되는 동맥 분지를 가능한 한 많이 남기면서, 혈관 기형에 공급되는 혈관의 완전한 차단을 허용하도록 필요한 만큼 카테터를 전진시킬 수 있다 (이상적으로는, 이는 단일 동맥일 것이지만, 혈관 기형의 정도 및 이의 개별적인 혈액 공급에 따라 종종 여러 분리된 동맥들이 폐색될 필요가 있을 수 있다). 일단 원하는 카테터 위치가 달성되면, 본원에서 제공되는 마이크로스피어 또는 조성물을 이용하여 각각의 동맥이 색전될 수 있다.
c. 자궁 섬유종
추가적인 구체적 실시양태에서, 예를 들어, 자궁 섬유종 색전술 (UFE) 또는 자궁 동맥 색전술 (UAE)을 사용함으로써, 자궁 섬유종 또는 이의 증상을 관리 또는 치료하는 방법이 제공된다. 자궁 섬유종의 원인은 미지이다. 그러나, 이는 심한 월경 출혈, 골반 영역에서의 통증, 및 방광 또는 장에 대한 압박을 통상적으로 야기한다.
특정 실시양태에서, 자궁 섬유종과 관련된 과다 출혈을 포함하는 과다 출혈 용태를 치료하기 위해, 본원에서 제공되는 마이크로스피어 및 조성물을 사용하는 색전술 (예컨대 UFE)이 달성될 수 있다. 예를 들어, 월경과다 (월경 시의 과다 출혈)가 자궁 동맥 (예를 들어, 양측 속엉덩동맥의 분지)의 색전술에 의해 쉽게 치료될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 조성물 및 방법이 자궁 섬유종의 증상, 예컨대 심한 월경 출혈, 골반 통증 또는 압박 및/또는 방광 기능장애를 관리 또는 치료하는데 사용된다.
일부 실시양태에서, 대퇴 또는 상완 동맥을 통해 카테터를 삽입하고 이를 x선 카메라 (예를 들어, 형광투시경)의 안내 하에 동맥계를 통해 인도함으로써 각각의 자궁 동맥 내로 전진시킬 수 있다. 특정 실시양태에서, 자궁 동맥으로부터 발생하고 정상 구조물에 공급되는 동맥 분지를 가능한 한 많이 남기면서, 자궁으로의 혈관의 완전한 차단을 허용하도록 필요한 만큼 카테터를 전진시킬 수 있다. 특정 실시양태에서, 각각의 측면 상의 단일 자궁 동맥이 색전될 수 있지만, 때때로 개별적인 혈액 공급에 따라 여러 분리된 동맥들이 차단될 필요가 있을 수 있다. 일단 원하는 카테터 위치가 달성되면, 상기 기술된 바와 같은 마이크로스피어 또는 조성물의 투여에 의해 각각의 동맥이 색전될 수 있다. 투여된 마이크로스피어가 혈류를 공급하는 동맥을 차단하여, 섬유종이 수축되도록 하고, 섬유종에 걸린 여성의 증상들을 완화시킨다. 특정 실시양태에서, 외상, 악성 부인과 종양 또는 출산 후의 출혈에 의해 예를 들어 야기되는 중증 골반 출혈을 정지시키는데 UAE가 또한 사용될 수 있다.
d. 양성 전립선 비대증
추가적인 구체적 실시양태에서, 양성 전립선 비대증 (BPH) 또는 이의 증상을 관리 또는 치료하는 방법이 제공된다. 가장 빈번한 폐색성 방광 증상은 배뇨지연, 소변 줄기 감소, 배뇨중단, 불완전 배뇨감, 야간뇨, 빈뇨 및 절박뇨이다.
특정 실시양태에서, BPH의 관리 또는 치료가 본원에서 제공되는 마이크로스피어 및 조성물을 사용하는 색전술 예컨대 전립선 동맥 색전술 (PAE) 또는 트랜스카테터 동맥 색전술 (TAE)에 의해 달성될 수 있다.
일부 실시양태에서, 카테터 (예를 들어, 마이크로카테터)가 x선 카메라 (예를 들어, 형광투시경)의 안내 하에 오른쪽 및/또는 왼쪽 아래 방광 동맥 내로 삽입될 수 있다. 특정 실시양태에서, 전립선 동맥으로부터 발생하고 정상 구조물에 공급되는 동맥 분지를 가능한 한 많이 남기면서, 전립선으로의 혈관의 완전한 차단을 허용하도록 필요한 만큼 카테터가 전진될 수 있다.
특정 실시양태에서, 동맥기 및 후기 동안 엉덩 혈관 및 전립선 동맥을 평가하기 위해, 또는 전립선으로의 혈액 공급을 평가하기 위해, 색전술과 함께 혈관조영술 (예를 들어, 최초의 골반 혈관조영술 또는 선택적 디지털 감산 혈관조영술)이 사용될 수 있다. 일단 원하는 카테터 위치가 달성되면, 상기 기술된 바와 같은 마이크로스피어 또는 조성물의 투여에 의해 각각의 동맥이 색전될 수 있다. 투여된 마이크로스피어가 혈류를 공급하는 동맥을 차단하여, 전립선 크기를 감소시키고 BPH의 증상들을 완화시킬 수 있다. 특정 실시양태에서, 전립선절제술 또는 전립선 생검 후의 대량 출혈을 제어하는데 색전술이 또한 사용될 수 있다.
3. 진단 영상화
상기 논의된 바와 같이, 본원에서 제공되는 마이크로스피어가 초음파 (US), 자기 공명 영상화 (I), 핵 자기 공명 (NMR), 컴퓨터 단층촬영술 (CT), 전자 스핀 공명 (ESR), 핵 의료 영상화, 광학적 영상화, 엘라스토그래피(elastography), 초음파, 고주파 (RF) 및 마이크로파 레이저를 사용한 약물 전달이 예를 들어 포함되는 진단 영상화, 치료 영상화 및 치료 약물 전달과 관련하여 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어는 형광투시경에 의해 가시적이다. 즉, 일부 실시양태에서, 하나 이상의 적절한 조영제, 예컨대 이온성 또는 비-이온성 조영제가 마이크로스피어에 로딩(loading)되거나, 마이크로스피어와 회합되거나, 또는 다른 방식으로 마이크로스피어에 함유된다.
일부 실시양태에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어는 비-이온성 조영제를 포함한다. 조영제가 마이크로스피어 상에 로딩될 수 있거나, 마이크로스피어와 회합될 수 있거나, 마이크로스피어에 흡수될 수 있거나, 또는 마이크로스피어에 흡착될 수 있거나, 또는 다른 방식으로 마이크로스피어 내에 또는 마이크로스피어 상에 함유될 수 있다. 별법적으로, 조영제가 마이크로스피어에 대한 담체 용액이다. 구체적 실시양태에서, 조영제, 예컨대 비-이온성 조영제가 마이크로스피어 내에 로딩된다 (예를 들어, 조영제를 마이크로스피어와 다른 방식으로 접촉시키는 혼합에 의해). 또 다른 실시양태에서, 마이크로스피어는 조영제, 예컨대 비-이온성 조영제를 포함하지 않는다.
비-이온성 조영제는 X선, CT, MRI 조영제, 또는 이들의 조합물일 수 있다. 조영제는 상자성 또는 초상자성일 수 있다. 일부 실시양태에서, 조영제는 X선 조영제 (형광투시제 또는 방사선 비투과성 작용제로 또한 지칭됨) 또는 CT 조영제일 수 있다. 특정 실시양태에서, 조영제는 요오드를 함유한다. 비-이온성 조영제는 단량체성, 이량체성, 또는 중합체성일 수 있다.
비-이온성 조영제의 예로는 메트리자미드, 이오파미돌 (Isovue™ 또는 Iopamiron™), 이오딕사놀 (Visipaque™), 이오헥솔 (Omnipaque™), 이오프로미드 (Ultravist™), 이오브티리돌, 이오메프롤, 이오펜톨, 이오파미론, 이옥실란, 이오트롤란, 가도디아미드, 가도테리돌, 이오트롤, 이오베르솔 (Optiray™) 또는 이들의 조합물이 비제한적으로 포함된다. 특정 실시양태에서, 조영제는 이오파미돌이다. 구체적 실시양태에서, 비-이온성 조영제는 이오딕사놀, 이오헥살, 이오프로미드 또는 이오베르솔이다. 또 다른 실시양태에서, 비-이온성 조영제는 가도디아미드 또는 가도테리돌이다.
본 발명의 안정화 물질과 조합하여 사용하기 위한 적절한 조영제의 추가적인 예로는 안정적인 유리 라디칼, 예컨대 안정적인 니트록시드(nitroxide), 뿐만 아니라 전이 원소, 란탄족 원소 및 악틴족 원소를 포함하는 화합물이 포함되고, 상기 원소들은 원한다면 염의 형태일 수 있거나, 또는 착화제 (이의 친지성 유도체 포함) 또는 단백질성 거대분자에 공유결합으로 또는 비-공유결합으로 결합될 수 있다. 전이 원소, 란탄족 원소 및 악틴족 원소에는, 예를 들어, Gd(III), Mn(II), Cu(II), Cr(III), Fe(II), Fe(III), Co(II), Er(II), Ni(II), Eu(III) 및 Dy(III)가 포함될 수 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 원소는 Gd(III), Mn(II), Cu(II), Fe(II), Fe(III), Eu(III) 및 Dy(III)이다. 상기 원소들은 무기 염, 예컨대 망간 염, 예를 들어, 염화망간, 탄산망간, 아세트산망간, 및 유기 염, 예컨대 글루콘산망간, 및 망간 히드록시아파타이트가 포함되는 염 형태일 수 있다. 또 다른 예시적인 염에는 철 염, 예컨대 황화철, 및 제2철 염, 예컨대 염화제2철이 포함된다.
상기 원소들은, 예를 들어, 공유결합 또는 비공유결합 회합을 통해, 착화제 (이의 친지성 유도체 포함), 또는 단백질성 거대분자에 또한 결합될 수 있다. 착화제에는, 예를 들어, 디에틸렌트리아민펜타아세트산 (DTPA), 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA), 1,4,7,10-테트라아자사이클로도데칸-N,N',N',N"'-테트라아세트산 (DOTA), 1,4,7,10-테트라아자사이클로도데칸-N,N',N"-트리아세트산 (DOTA), 3,6,9-트리아자-12-옥사-3,6,9-트리카르복시메틸렌-10-카르복시-13-페닐트리데카노산 (B-19036), 히드록시벤질에틸렌디아민 디아세트산 (HBED), N,N'-비스(피리독실-5-포스페이트)에틸렌 디아민, N,N'-디아세테이트 (DPDP), 1,4,7-트리아자사이클로노난-N,N',N"-트리아세트산 (NOTA), 1,4,8,11-테트라아자사이클로테트라데칸-N,N',N",N"'-테트라아세트산 (TETA), 크립탄드 (거대환식 착물) 및 데스페리옥스아민이 포함될 수 있다. 일부 실시양태에서, 착화제는 EDTA, DTPA, DOTA, DO3A 및 트립탄드, 예컨대 DTPA이다. 친지성 착물에는 착화제 EDTA, DOTA의 알킬화 유도체, 예를 들어, N,N'-비스-(카르복시데실아미도메틸-N-2,3-디히드록시프로필)에틸렌디아민-N,N'-디아세테이트 (EDTA-DDP); N,N'-비스-(카르복시옥타데실아미도메틸-N-2,3-디히드록시프로필)에틸렌디아민-N,N'-디아세테이트 (EDTA-ODP); 및 N,N'-비스(카르복시-라우릴아미도메틸-N-2,3-디히드록시프로필)에틸렌디아민-N,N'-디아세테이트 (EDTA-LDP) (개시내용 전문이 본원에 참고로 포함된 미국 특허 번호 5,312,617에 기술되어 있는 것들 포함)이 포함될 수 있다. 단백질성 거대분자에는, 예를 들어, 알부민, 콜라겐, 폴리아르기닌, 폴리라이신, 폴리히스티딘, γ-글로불린 및 β-글로불린이 포함될 수 있다. 특정 실시양태에서, 단백질성 거대분자는 알부민, 폴리아르기닌, 폴리라이신 또는 폴리히스티딘이다. 따라서, 적절한 착물에는 Mn(II)-DTPA, Mn(II)-EDTA, Mn(II)-DOTA, Mn(II)-DO3A, Mn(II)-크립탄드, Gd(III)-DTPA, Gd(III)-DOTA, Gd(III)-DO3A, Gd(III)-크립탄드, Cr(III)-EDTA, Cu(II)-EDTA, 또는 철-데스페리옥스아민이 포함된다. 구체적 실시양태에서, 착물은 Mn(II)-DTPA 또는 Gd(III)-DTPA이다.
니트록시드는 니트록시드 분자 내의 쌍을 이루지 않은 전자의 존재로 인해 MRI 상에서 T1 및 T2 이완율 양쪽 모두를 증가시키는 상자성 조영제이다. 당업자에게 공지된 바와 같이, MRI 조영제로서의 소정의 화합물의 상자성 유효성은, 적어도 부분적으로, 상자성 핵 또는 분자 내의 쌍을 이루지 않은 전자의 개수, 구체적으로는, 쌍을 이루지 않은 전자의 개수의 제곱에 관련될 수 있다. 예를 들어, 가돌리늄에는 7개의 쌍을 이루지 않은 전자가 있는 반면, 니트록시드 분자에는 1개의 쌍을 이루지 않은 전자가 있다. 따라서, 일반적으로 가돌리늄이 니트록시드보다 훨씬 더 강력한 MRI 조영제이다. 그러나, 조영제의 유효성을 평가하기 위한 또 다른 중요한 파라미터인 유효 상관 시간이 잠재적인 이완성 증가를 니트록시드에게 부여한다. 예를 들어, 상자성 조영제를 대형 분자에 부착시킴으로써, 텀블링율(tumbling rate)이 느려지는 경우, 이는 더욱 느리게 텀블링할 것이고, 이에 의해, 수 양자의 이완을 촉진하도록 더욱 효과적으로 에너지를 전달할 것이다. 그러나, 가돌리늄에서는, 전자 스핀 이완 시간이 빠르고, 느린 회전 상관 시간이 이완성을 증가시킬 수 있는 정도를 제한할 것이다. 그러나, 니트록시드의 경우는, 전자 스핀 상관 시간이 더욱 유리하고, 이러한 분자의 회전 상관 시간을 느리게 함으로써 이완성에서의 막대한 증가가 달성될 수 있다. 예를 들어, 알킬 유도체를 제조함으로써, 마이크로스피어의 주변을 코팅하도록 니트록시드가 디자인될 수 있고, 생성된 상관 시간이 최적화될 수 있다. 또한, 생성된 조영제 매체가 이완성을 최대화하는 기하학적 형상인 자기 스피어로서 고려될 수 있다.
본원에서의 조성물에서 사용하기에 적절한 초상자성 조영제에는 자기 도메인을 겪는 금속 산화물 및 화합물, 강자성(ferromagnetic) 또는 준강자성(ferrimagnetic) 화합물, 예컨대 순수 철, 자성 산화철, 예컨대 자철광, γ-Fe2O3, Fe3O4, 아철산망간, 아철산코발트 및 아철산니켈이 포함된다. 그후, MR 전신 영상화를 사용하여, 예를 들어, 혈전증에 대해, 신체를 신속하게 스크리닝할 수 있고, 원한다면 초음파를 적용하여 혈전용해를 도울 수 있다.
조영제, 예컨대 상기 기술된 상자성 및 초상자성 조영제가 마이크로스피어 및/또는 안정화 물질 내에서 구성성분으로 사용될 수 있다. 소포와 관련하여, 조영제가 소포의 내부 공극 내에 포착될 수 있거나, 마이크로스피어와 함께 용액으로서 투여될 수 있거나, 임의의 추가적인 안정화 물질이 혼입될 수 있거나, 또는 소포의 표면 또는 막 상에 코팅될 수 있다. 본 발명의 조성물 내의 상자성 작용제들 및/또는 초상자성 작용제들 중 임의의 하나 이상의 혼합물이 사용될 수 있다. 원한다면, 상자성 및 초상자성 작용제가 또한 따로따로 공동-투여될 수 있다.
원한다면, 상자성 또는 초상자성 작용제가 조성물, 특히 마이크로스피어의 지질성 벽 내로 혼입된 알킬화 또는 기타 유도체로서 전달될 수 있다. 특히, 니트록시드 2,2,5,5-테트라메틸-1-피롤리디닐옥시 유리 라디칼 및 2,2,6,6-테트라메틸-1-피페리디닐옥시 유리 라디칼이 다양한 결합 (예를 들어, 아세틸옥시 결합 포함)을 통해 메틸 기가 차지하지 않은 고리 위치에서 장쇄 지방산과 부가물을 형성할 수 있다.
본원에서 제공되는 마이크로스피어는 상기 기술된 초상자성 작용제의 효과적인 담체로서 작용할 수 있을 뿐만 아니라, 자화율 조영제의 효과를 또한 개선할 수 있다. 초상자성 조영제에는 금속 산화물, 특히 산화철 (산화망간을 포함하지 않음)이 포함되고, 산화철로서, 자성 도메인을 겪는 다양한 양의 망간, 코발트 및 니켈을 함유한다. 이러한 작용제들은 나노 또는 마이크로스피어이고, 벌크 자화율 및 횡단 이완율이 매우 높다. 더 큰 입자, 예를 들어, 직경이 약 100 ㎚인 입자는 R1 이완성에 비해 R2 이완성이 훨씬 더 높다. 더 작은 입자, 예를 들어, 직경이 약 10 내지 약 15 ㎚인 입자는 R2 이완성이 다소 더 낮지만, R1과 R2 값이 훨씬 더 균형을 이룬다. 훨씬 더 작은 입자, 예를 들어, 직경이 약 3 내지 약 5 ㎚ 인 단결정질 산화철 입자는 R2 이완성이 더 낮지만, 아마도 R1과 R2 이완율이 가장 균형을 이룰 것이다. 페리틴이 이완율이 매우 높은 초상자성 철의 코어를 캡슐화하도록 또한 제형될 수 있다.
산화철이 단순히 안정화 물질 및/또는 마이크로스피어 내로 혼입될 수 있다. 구체적 실시양태에서, 예를 들어, 마이크로스피어의 표면 상에 흡착됨으로써 또는 마이크로스피어의 내부에 포착됨으로써, 산화철이 마이크로스피어의 벽 내로 혼입될 수 있다.
E. 키트
본원에서 제공되는 조성물의 성분들 중 하나 이상으로 충전된 하나 이상의 용기를 포함하는 제약 팩(pack) 및 키트(kit)가 본원에서 또한 제공된다. 이러한 키트는, 예를 들어, 마이크로스피어 및 하나 이상의 추가적인 성분을 포함하고, 이때 성분들 중 1개, 2개, 3개 또는 그 이상은 1개, 2개, 3개 또는 그 이상의 바이알 내에 존재할 수 있다. 특정 실시양태에서, 건조 분말의 형태로 마이크로스피어가 제공된다. 또 다른 실시양태에서, 생체적합성 담체 내에서, 예를 들어, 에멀젼 또는 현탁액으로서 마이크로스피어가 제공된다.
특정 실시양태에서, 용기는 주사기 (예를 들어, 폴리카르보네이트, 폴리프로필렌, 또는 고리형 올레핀 중합체 (COP) 주사기)이다. 구체적 실시양태에서, 주사기의 수분 손실이 낮고, 이는 본원에서 제공되는 키트의 예비-충전 주사기 실시양태에 대해 반감기 증가 (예를 들어, 2년 내지 3년 이상)를 초래할 수 있다. 구체적 실시양태에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어는 무균성 주사기, 예컨대 예비-충전된 무균성 주사기 (예를 들어, 20 cc 주사기) 내에 함유되고, 이는 임의적으로 필-어웨이(peel-away) 파우치(pouch) 내에서 제공된다. 특정 실시양태에서, 주사기는 제약상 허용되는 담체, 예컨대 염수 (예를 들어, 비-발열성이거나 발열원이 없는 무균성의 생리식염수) 내의 마이크로스피어 약 1 ㎖, 2 ㎖, 3 ㎖ 또는 4 ㎖를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 바이알 내에 본원에서 제공되는 마이크로스피어가 함유된다. 구체적 실시양태에서, 바이알은 돌려서 여는 뚜껑이 있는 유리 바이알 (예를 들어, 5 ㎖ 유리 바이알)이고, 임의적으로 이는 하나 이상의 추가적인 바이알을 포함하는 필-어웨이 팩 내에 포장된다. 구체적 실시양태에서, 바이알은 제약상 허용되는 담체, 예컨대 염수 (예를 들어, 비-발열성이거나 발열원이 없는 무균성의 생리식염수) 내의 마이크로스피어 1 ㎖ 또는 2 ㎖를 포함한다.
정부 기관이 환자 (예를 들어, 인간 또는 기타 포유동물) 투여를 위한 제품의 제작, 사용 또는 판매를 허가하였음을 반영하는, 제약 또는 생물학적 제품의 제작, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관이 규정하는 형태의 안내문이 이같은 용기(들)과 결합될 수 있다. 사용 설명서가 이같은 용기(들)과 또한 결합될 수 있다. 본원에 기술된 방법들 중 임의의 방법의 시약이 키트의 성분으로서 또한 포함될 수 있다.
한 키트 양식에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어는 1개의 바이알 내의 생리학적으로 혼화성인 액체 용액 내에 존재한다. 또 다른 키트 양식에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어는 1개의 바이알 내에 건조 형태로 존재한다. 여러 바이알 내의 여러 성분을 포함하는 특정 키트 양식에서, 바이알들의 내용물이 투여 전에 또는 투여와 동시에 혼합될 수 있다. 일부 실시양태에서, 마이크로스피어가 투여 전에 적절한 액체 내에 현탁되거나, 또는 임의적으로, 주사가능한 용액을 함유하는 제2 바이알이 제공되고, 양쪽 바이알의 내용물이 투여 전에 또는 투여와 동시에 조합된다.
마지막으로, 또 다른 키트 양식에서, 본원에서 제공되는 마이크로스피어가 1개의 바이알 내에 존재하고, 조영제를 포함하는 제약상 허용되는 용액을 제2 바이알이 함유한다. 그후, 예를 들어, 투여 전 또는 투여와 동시에, 마이크로스피어가 조영제와 혼합될 수 있다.
하기의 실시예들은 제한하기 위해서가 아니라 예시의 목적으로 제공된다.
실시예
본 발명의 실행은, 달리 지시되지 않는 한, 당업계의 기술 내의 분자 생물학, 유기 화학, 생화학 및 관련 분야에서의 통상적인 기술을 사용한다. 이러한 기술들은 본원에서 인용된 참고문헌들에 기술되어 있고, 문헌에 충분히 설명되어 있다. 예를 들어, [Maniatis et al. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press]; [Sambrook et al. (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press]; [Sambrook et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY]; [Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates)]; [Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates)] 참조.
실시예 1: 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체의 합성
초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체를 하기의 도식에 따라 합성하였다:
Figure 112011023574513-pct00010
간략하게, 아크릴로일 클로라이드를 CH2Cl2에 용해시키고, 0℃로 냉각하였다. CH2Cl2에 용해된 N,N-디에틸에틸렌디아민을 Ti= 0-5℃에서 적가한 후, NaOH (약 15％ 수용액)를 적가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 교반하였고, 층들이 분리되었다. 유기층을 물 및 NaHCO3 용액으로 세정하고, MgSO4 상에서 건조시켰다. 현탁액을 여과하고, 감압 하에 농축하고, BHT에 의해 안정화시켰다.
실시예 2: 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체의 HPLC 분석
먼저, 표준 용액을 하기와 같이 제조하였고, 이때 MBA가 내부 기준 대조군으로서 선택되었다:
원액
DEAE 원액: 약 200 ㎎ (또는 250 ㎎)의 DEAE를 200 ㎖ (또는 250 ㎖) 기준 플라스크에서 칭량하고, 순수 (Purelab)에 용해시켰다. 용액의 pH를 1N HCl에 의해 2로 조정하였다. 용액의 농도를 물로 1000 ppm (㎎/ℓ)으로 조정하였다.
MBA 원액: 약 200 ㎎ (또는 250 ㎎)의 MBA를 200 ㎖ (또는 250 ㎖) 기준 플라스크에서 칭량하고, 순수에 용해시켰다. 그후, 용액에 15분 동안 초음파처리를 적용하고, 실온으로 돌아오게 하였다. 용액의 농도를 1000 ppm (㎎/ℓ)으로 조정하였다.
중간체 용액: 5 ㎖의 1000 ppm 용액을 50 ㎖의 최종 부피로 물로 희석함으로써 중간체 용액을 제조하였다. 20, 40, 60, 80, 100 ppm을 또한 제조하였다.
주입 용액이 표 1에서 열거된다. 용액의 정확한 농도를 기록하였다.
Figure 112011023574513-pct00011
분석할 샘플들을 하기와 같이 제조하였다:
원액: 약 200 ㎎ (또는 250 ㎎)의 DEAE를 200 ㎖ (또는 250 ㎖) 기준 플라스크에서 칭량하고, 순수 (Purelab)에 용해시켰다. 용액의 pH를 1N HCl에 의해 2로 조정하였다. 용액의 농도를 물로 1000 ppm (㎎/ℓ)으로 조정하였다. 3개의 원액을 제조하고 테스트하였다.
중간체 용액: 5 ㎖의 1000 ppm 용액을 50 ㎖의 최종 부피로 물로 희석함으로써 중간체 용액을 제조하였다.
샘플 용액: 중간체 용액을 약 60 ppm으로 희석함으로써 샘플 용액을 제조하였다 (샘플 주입을 위해 5 ㎖ 이상). 중간체 용액 (100 ppm)을 또한 테스트하였다. 정확한 농도를 기록하였다.
그후, 용액 (표준물 및 샘플)을 분석을 위해 주입기의 받침대 상의 HPLC 바이알로 옮겼다. HPLC의 설정이 표 2에서 열거된다.
Figure 112011023574513-pct00012
HPLC 분석 결과가 도 1a에서 제시되고, 이는 바이오세프라로부터 수득된 DEAE 단량체의 소정의 롯트 (T209, U088 및 U089)에 대해 브롬화 반응 (오른쪽 막대, 제조사인 바이오세프라 제공) 및 HPLC (왼쪽 막대)를 사용하여 관찰된 순도 감도를 묘사한다.
실시예 3: 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체의 브롬 테스트
디에틸아미노에틸아크릴아미드를 함유하는 테스트 샘플 (0.1 g)을 사염화탄소 (2 ㎖)에 첨가하였다. 진탕하면서, 브롬 색이 지속될 때까지 사염화탄소 내의 브롬의 5％ 용액을 적가하였다. 브롬 테스트는 C=C 결합의 존재에 대해 민감하고, 이는 테스트 샘플 내에 존재하는 디에틸아미노에틸아크릴아미드의 대략적인 함량을 지시할 수 있다.
실시예 4: 초고순도 N- 트리스 -히드록시 메틸 메틸아크릴아미드 단량체의 합성
초고순도 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체를 하기의 도식에 따라 합성하였다:
Figure 112011023574513-pct00013
간략하게, 아크릴로일 클로라이드를 CH2Cl2에 용해시키고, 0℃로 냉각하였다. CH2Cl2에 용해된 N-(트리스히드록시메틸) 메틸 아민을 Ti= 0-5℃에서 적가한 후, NaOH (약 15％ 수용액)를 적가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 물에서의 재결정화 후 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드를 제거하였다.
실시예 5: N- 트리스 -히드록시 메틸 메틸아크릴아미드 단량체의 HPLC 분석
먼저, 표준 곡선을 순도가 98％ 이상인 N-[트리스(히드록시메틸)메틸]아크릴아미드 (트리스아크릴) (SAFC 제공; 제조사의 순도 증명서에 따른 정보)를 사용하여 제조하였다.
원액: 약 200 ㎎ (또는 250 ㎎)의 트리스아크릴을 200 ㎖ (또는 250 ㎖) 기준 플라스크에서 칭량하고, 순수에 용해시켰다. 그후, 용액에 15분 동안 초음파처리를 적용하고, 실온으로 돌아오게 하였다. 용액의 농도를 1000 ppm (㎎/ℓ)으로 조정하였다.
중간체 용액: 5 ㎖의 1000 ppm 용액을 50 ㎖의 최종 부피로 물로 희석함으로써 중간체 용액을 제조하였다.
주입 용액이 표 3에서 열거된다. 용액의 정확한 농도를 기록하였다.
Figure 112011023574513-pct00014
분석할 샘플들을 하기와 같이 제조하였다:
원액: 약 200 ㎎ (또는 250 ㎎)의 트리스아크릴을 200 ㎖ (또는 250 ㎖) 기준 플라스크에서 칭량하고, 순수에 용해시켰다. 그후, 용액에 15분 동안 초음파처리를 적용하고, 실온으로 돌아오게 하였다. 용액의 농도를 1000 ppm (㎎/ℓ)으로 조정하였다. 3개의 용액을 제조하고 테스트하였다.
중간체 용액: 5 ㎖의 1000 ppm 용액을 50 ㎖의 최종 부피로 물로 희석함으로써 중간체 용액을 제조하였다.
샘플 용액 (각각의 용액): 중간체 용액을 약 60 ppm으로 희석함으로써 샘플 용액을 제조하였다 (샘플 주입을 위해 5 ㎖ 이상). 중간체 용액 (100 ppm)을 또한 테스트하였다. 정확한 농도를 기록하였다.
그후, 용액 (표준물 및 샘플)을 분석을 위해 주입기의 받침대 상의 HPLC 바이알로 옮겼다. HPLC의 설정이 표 4에서 열거된다.
Figure 112011023574513-pct00015
여러 공급원으로부터의 트리스아크릴의 순도를 나타내는 HPLC 분석 결과가 도 1b에서 제시된다. 도 1b는 브롬화 반응 (오른쪽 막대, 제조사 제공) 또는 HPLC (왼쪽 막대)를 사용하여 관찰된 트리스아크릴의 2개의 상이한 롯트 (바이오세프라로부터 수득된 R426 및 R402)에 대한 순도 감도를 묘사한다. 데이터는 재결정화 전의 SAFC의 트리스아크릴 단량체 (TA)로 수득되고 이와 비교된 재결정화된 트리스아크릴 (TA-R)의 100％ 순도를 가정하여 제시된다 (하기 참조). 물 내의 TA (SAFC로부터의 트리스아크릴)를 재결정화시킴으로써 TA-R을 제조한 후, 건조시켰다. 재결정화된 TA-R 샘플 상에서 NMR 1H 분석을 수행하였고, NMR 1H 스펙트럼에서 유기 불순물이 검출되지 않았다 (데이터는 제시되지 않음). 추가적으로, TA-R 샘플에 대해 원소 분석을 수행하여, 무기 염이 존재하는지를 점검하였다. 100％ 순수한 트리스아크릴에 대한 이론적인 결과는 C 47.99％, H 7.48％, N 8.00％ 및 O 36.53％이다. SAFC로부터 수득된 TA 샘플에 대해서 C 46.76％ H 7.39％ 및 N 7.86％, TA-R 48.14％, H 7.63％ 및 N 8.07％가 확인되었고, 따라서 TA-R 샘플이 거의 100％ 순수한 것으로 가정되었다. 그후, R426, R402 TA 및 TA-R 샘플 각각을 HPLC 분석에 의해 테스트하였고, 스펙트럼을 232 nm에서 기록하였다. 분석된 모든 샘플에 대해, 피크 면적과 농도 간에 양호한 선형성이 있었다 (데이터는 제시되지 않음). TA-R이 약 100％ 순수한 것으로 가정하고, 각각의 선의 경사를 취하여 각각의 트리스아크릴 샘플의 HPLC 순도를 정의하였다. 상기 논의된 바와 같이 도 1b에 TA 및 TA-R 샘플의 HPLC 분석 결과가 제시된다.
실시예 6: N- 트리스 -히드록시 메틸 메틸아크릴아미드 단량체의 브롬 테스트
N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드를 함유하는 테스트 샘플 (0.1 g)을 사염화탄소 (2 ㎖)에 첨가하였다. 진탕하면서, 브롬 색이 지속될 때까지 사염화탄소 내의 브롬의 5％ 용액을 적가하였다. 브롬 테스트는 C=C 결합의 존재에 대해 민감하고, 이는 테스트 샘플 내에 존재하는 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드의 대략적인 함량을 지시할 수 있다.
실시예 7: 초고순도 N- 트리스 -히드록시 메틸 메틸아크릴아미드 단량체를 사용한 마이크로스피어 제조
NaCl (58 g) 및 아세트산나트륨 (27.2 g)을 1 ℓ 비이커에서 교반 하에 물 (300 ㎖)에 용해시켰다. 글리세롤 (400 ㎖)을 첨가하고, 아세트산으로 용액의 pH를 6으로 조정하였다. 그후, 이러한 용액을 교반 하에 60℃에서 가열하고, 3가지 단량체를 용액에 첨가하였다. 단량체 물질은 100％ 순수하지 않았고, 후속 단계에서 사용되는 각각의 단량체의 양을 물질 내에 존재하는 불순물의 양을 조정하면서 칭량하였다. 단량체가 100％ 순수한 것으로 가정했을 때, 각각의 단량체의 양은 하기와 같았다:
N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드: 10 g
디에틸아미노에틸아크릴아미드: 35 g
N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드: 90 g
돼지 젤라틴 (PB Leiner; Vilvoorde, Belgium): 20 g.
폴 바이오세프라(Pall Biosepra, France)에서 디에틸아미노에틸아크릴아미드가 공급되었다. 폴 바이오세프라의 명세서에 따르면 디에틸아미노에틸아크릴아미드의 순도는 80％를 초과하였다.
폴 바이오세프라 및 시그마 알드리치 파인 케미컬즈(Sigma Aldrich Fine Chemicals) (SAFC)에서 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드가 공급되었다. 공급사의 제품 명세서에 따르면, 폴 바이오세프라 및 SAFC가 공급하는 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드의 순도는 각각 76％ 및 93％를 초과하였다 (표 5 참조). 폴 바이오세프라 및 SAFC가 공급하는 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드의 또 다른 비교 데이터가 표 5에서 제공된다.
Figure 112011023574513-pct00016
용액이 투명할 때, 물 (250 ㎖) 내의 젤라틴 (25 g)의 용액을 단량체 용액에 첨가하였다. 이러한 용액을 여과하고, 60℃의 교반 하에 놓았다 (용액 A). 물 (101.6 g) 내의 과황산암모늄 (3.5 g)의 용액을 또한 제조하였다 (용액 B). 10ℓ 비이커에서, 오일 (4 ℓ) 및 아를라셀 (3.1 g)을 60℃에서 교반하였다 (용액 C). 각각 펌프 Q2 및 펌프 RHO를 통해 용액 A 및 용액 B를 용액 C 내에 놓인 피드 링 설비에 주입하였다. 주입이 완료된 후, 용액을 60℃, 125 rpm에서 30분 동안 교반하였다. 물, 얼음 및 계면활성제의 저온 용액을 첨가함으로써 반응을 정지시켰다. 수득된 마이크로스피어를 오일이 완전히 제거될 때까지 물로 여러 번 세정하였다. 비이커를 초음파 조에 10분 동안 놓아 점착성 마이크로스피어의 개수를 감소시켰다. 그후, 마이크로스피어를 37℃에서 가열하고, 300 ㎖의 글루타르알데하이드를 젤라틴 가교를 위해 1 ℓ의 마이크로스피어에 첨가하였다. 마이크로스피어를 물로 2회 다시 세정하였다. 그후, 마이크로스피어를 경사분리에 의해 제거하고, 조심스럽게 세정하고, 스크리닝하고, 완충 매질에서 오토클레이브에서 살균하였다.
실시예 8: 초고순도 N- 트리스 -히드록시 메틸 메틸아크릴아미드 단량체 및 초고순도 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체를 사용한 마이크로스피어 제조
NaCl (58 g) 및 아세트산나트륨 (27.2 g)을 1 ℓ 비이커에서 교반 하에 물 (300 ㎖)에 용해시켰다. 이어서, 글리세롤 (400 ㎖)을 첨가하고, 아세트산으로 용액의 pH를 6으로 조정하였다.
이러한 용액을 교반 하에 60℃에서 가열하고, 3가지 단량체 중 2가지를 용액에 첨가하였다. 단량체 물질은 100％ 순수하지 않았고, 후속 단계에서 사용되는 각각의 단량체의 양을 물질 내에 존재하는 불순물의 양을 조정하면서 칭량하였다. 단량체가 100％ 순수한 것으로 가정했을 때, 각각의 단량체의 양은 하기와 같았다:
N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드: 10 g
N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드: 90 g
디에틸아미노에틸아크릴아미드: 35 g
돼지 젤라틴 (PH Leiner; Vilvoorde, Belgium): 20 g.
폴 바이오세프라 및 SAFC에서 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드가 공급되었다. 공급사의 제품 명세서에 따르면, 폴 바이오세프라 및 SAFC가 공급하는 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드의 순도는 각각 76％ 및 93％를 초과하였다 (표 5 참조). 폴 바이오세프라 및 SAFC가 공급하는 N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드의 또 다른 비교 데이터가 표 5에서 제공된다.
폴 바이오세프라 및 SAFC에서 디에틸아미노에틸아크릴아미드가 공급되었다. 공급사의 제품 명세서에 따르면, 폴 바이오세프라 및 SAFC가 공급하는 디에틸아미노에틸아크릴아미드의 순도는 각각 80％ 및 95％를 초과하였다. 폴 바이오세프라 및 SAFC가 공급하는 디에틸아미노에틸아크릴아미드의 또 다른 비교 데이터가 표 6에서 제공된다.
Figure 112011023574513-pct00017
제3 단량체인 디에틸아미노에틸아크릴아미드를 제조 후 첨가하였다. 디에틸아미노에틸아크릴아미드 (35 g)를 물 (17 g)로 희석하였다. 이러한 용액을 빙냉 조에 놓고, HCl로 용액의 pH를 2로 조정하였다. 이러한 용액을 나머지 2개의 단량체를 함유하는 용액에 첨가하였다.
용액이 투명할 때, 물 내의 젤라틴 (25 g)의 용액 (250 ㎖)을 상기 단량체 용액에 첨가하였다. 이러한 용액을 여과하고, 60℃의 교반 하에 놓았다 (용액 A). 물 (101.6 g) 내의 과황산암모늄 (3.5 g)을 또한 제조하였다 (용액 B). 10ℓ 비이커에서, 오일 (4 ℓ) 및 아를라셀 (3.1 g)을 60℃에서 교반하였다 (용액 C). 각각 펌프 Q2 및 펌프 RHO를 통해 용액 A 및 용액 B를 용액 C 내에 놓인 피드 링 설비에 주입하였다. 주입이 완료된 후, 용액을 60℃, 125 rpm에서 30분 동안 교반하였다. 물, 얼음 및 계면활성제의 저온 용액을 첨가함으로써 반응을 정지시켰다. 수득된 마이크로스피어를 오일이 완전히 제거될 때까지 물로 여러 번 세정하고, 비이커를 초음파 조에 10분 동안 놓아 점착성 마이크로스피어의 개수를 감소시켰다. 그후, 마이크로스피어를 37℃에서 가열하고, 300 ㎖의 글루타르알데하이드를 젤라틴 가교를 위해 1 ℓ의 마이크로스피어에 첨가하였다. 마이크로스피어를 물로 2회 다시 세정하였다. 그후, 마이크로스피어를 경사분리에 의해 제거하고, 조심스럽게 세정하고, 스크리닝하고, 완충 매질에서 오토클레이브에서 살균하였다.
실시예 9: 초고순도 단량체들을 사용한 유색 마이크로스피어의 제조
상기 실시예 7 또는 8에 따라 수득된 마이크로스피어 (100 ㎖)를 보레이트 완충제 (0.1 M, pH 8)로 세정한 후, 에리트로신 이소티오시아네이트 용액 (50 ㎖, 5 ㎎/㎖)에 현탁하였다. 그후, 현탁액을 15시간 이상 동안 교반하고 나서, 이를 중성 완충제로 무색 상등액으로 세정하였다. 그후, 적색 마이크로스피어를 조정 및 살균하였고, 이는 경피 색전술에 사용될 수 있다.
실시예 10: 초고순도 단량체들을 사용한 불투명 제제의 제조
황산바륨 분말 (200 g)을 초기 단량체에 첨가하면서, 실시예 7 또는 8의 절차를 따랐다. 수득된 마이크로스피어는 가시광선 및 x-선 양쪽 모두에 대해 불투명하다.
실시예 11: 초고순도 단량체들을 사용한 자기 마이크로스피어의 제조
50 ㎎의 자철광 (예를 들어, Fe3O4)을 초기 단량체 용액에 첨가하면서, 실시예 7 또는 8의 절차를 따랐다. 별법적으로, 실시예 7 및 8에 따라 수득된 마이크로스피어를 각각 16 ㎜ 직경의 크로마토그래피 칼럼 내로 패킹하고, 생리식염수로 세정할 수 있었다. 그후, 10 ㎖/시의 유속으로 자성유체(ferrofluid) (자철광의 초소형 입자)의 콜로이드성 현탁액을 칼럼에 로딩하였다. 자철광의 입자가 마이크로스피어에 흡착되었고, 영구적으로 포착되었다. 생성된 마이크로스피어는 정규 색전술 절차에 사용될 수 있고, 자기 성질을 지니며, 예를 들어, 자기 공명 영상화 (MRI) 영상에서 검출될 수 있다.
실시예 12: 초음파처리에 의한 비-점착성 마이크로스피어의 분리
N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드, 디에틸아미노에틸아크릴아미드, N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 및 TEMED로부터 제조된 마이크로스피어를 하기의 여러 방법에 따라 가공하였다. 약 10-15분 동안 35 KHz 초음파 조에서 1회 또는 2회 초음파 처리를 수행하였다.
도 2a-2c는 초음파처리에 의한 점착성 마이크로스피어의 감소를 도해한다. 도 2a는 초기 (왼쪽 패널) 및 15분의 초음파처리 후 (오른쪽 패널)의 가교 전의 마이크로스피어를 나타낸다. 점착성 마이크로스피어의 백분율이 초음파처리로 약 7％에서 약 0.2％로 감소된다. 도 2b는 가교 전에 초음파처리되지 않은 (왼쪽 패널) 또는 초음파처리된 (오른쪽 패널) 가교 후의 마이크로스피어의 제2 뱃치(batch)를 나타낸다 (2개의 분획으로 분할됨). 초음파처리 단계 후 체질을 수행하였다. 점착성 마이크로스피어의 백분율이 초음파처리로 약 3％에서 거의 약 0％로 감소된다. 도 2c는 초기 (왼쪽 패널) 및 2×15분의 초음파처리 후 (오른쪽 패널)의 가교 전의 마이크로스피어를 나타낸다. 점착성 마이크로스피어의 백분율이 초음파처리로 약 9.2％에서 약 1.6％로 감소된다.
총괄적으로, 모든 사례에서, 초음파처리 없음 (도 2a-2c, 왼쪽 패널)에 비교하여 초음파처리가 적용된 경우 (도 2a-2c, 오른쪽 패널)에, 마이크로스피어가 덜 점착성인 스피어를 나타냈다. 이러한 방법에 의해, 파괴된 마이크로스피어가 관찰되지 않았다.
표 7 및 도 3은 별도의 실험으로부터의 결과를 나타내고, 젤라틴 가교 전 (도 3a) 및 후 (도 3b)에 초음파처리가 적용된 점착성 마이크로스피어 (롯트 FM0904100)의 백분율 감소를 또한 추가로 나타낸다.
Figure 112011023574513-pct00018
초음파처리 단계 후 체질을 수행하였고, 800 ㎛, 630 ㎛, 450 ㎛ 또는 50 ㎛ 체 상의 부피의 백분율이 표 8 및 도 3c에서 제시된다.
Figure 112011023574513-pct00019
실시예 13: 단량체의 HR - MAS NMR 분석
고해상도 매직 앵글 스피닝 ("HR-MAS") 기술을 사용하여, 마이크로스피어 합성을 위해 본원에서 사용되는 출발 물질들을 분석하였다.
샘플 제조
트리스아크릴, 돼지 젤라틴, DEAE-아크릴아미드 및 MBA 샘플 (각각 약 15 ㎎)을 HR-MAS 로터에 로딩하였다 (도 7 참조). 그후 중수소화 용매를 첨가하여, 50 ㎕의 최종 부피를 수득하였다.
로터가 표 9에서 언급된다.
Figure 112011023574513-pct00020
NMR 분광법에 의한 샘플 분석
4 ㎜ HR-MAS 프로브헤드 (1H, 13C, 2H 록)으로 400 MHz (1H)에서 <Bruker Avance I> 분광계에서 NMR 스펙트럼이 기록되었다.
튜닝
프로브헤드의 매직 앵글의 조정 후, 하기의 조정을 각각의 샘플에 대해 수행하였다:
프로브헤드 튜닝 및 매칭 (1H)
90° 펄스 측정
B0 균질성 조정 (심(shim))
취득
모든 실험은 실온 (298 K)에서 수행되었다. 각각의 샘플에 대해, 1D 1H NMR 스펙트럼을 기록하였다.
프로세싱
취득 및 프로세싱 파라미터가 표 10에서 요약된다.
Figure 112011023574513-pct00021
결과
비닐계 잔기 및 방향족 모이어티에 대한 전형적인 신호가 스펙트럼에서 확인되었다. 트리스아크릴, 젤라틴, MBA 및 DEAE 아크릴아미드에 대한 1차원 1H NMR 스펙트럼이 도 4a-4d에서 제시된다. 트리스아크릴, MBA 및 DEAE 아크릴아미드에 대한 1H 핵의 속성이 도 4e-4g에서 제시된다. 젤라틴에 대한 1D 1H NMR 스펙트럼은 7.20 내지 7.30 ppm의 피크로 구성되고, 이는, 예를 들어, 아미노산 내에 존재하는 방향족 양자에 기인할 수 있다.
실시예 14: 마이크로스피어의 HR - MAS NMR 분석
여러 공급원 (SAFC, 폴 바이오세프라)으로부터의 트리스아크릴 및 DEAE 아크릴아미드를 사용하여 실시예 8에 따라 제조된 마이크로스피어를 NMR 분광법으로 분석하였다.
NMR 분광법에 의한 샘플 분석
여러 공급원으로부터의 트리스아크릴 및 DEAE 아크릴아미드로 제조된 마이크로스피어 샘플 (각각 약 3 ㎎). SAFC로부터 수득된 트리스아크릴 및 DEAE (트리스아크릴 롯트 1443257, 96％ 순도; DEAE 롯트 S85803-199, 98％ 순도)를 사용하여 SAFC FMP 128 마이크로스피어 샘플을 실험실 벤치에서 제조하였다. 폴 바이오세프라로부터 수득된 트리스아크릴 및 DEAE (트리스아크릴 롯트 Y175, 90.96％ 순도; DEAE 롯트 U089, 85％ 순도)를 사용하여 PALL FMP 130 마이크로스피어 샘플을 실험실 벤치에서 제조하였다. SAFC로부터의 트리스아크릴 SAFC (롯트 03211DJ; 95.2％ 순도) 및 폴 바이오세프라로부터의 DEAE (롯트 U089; 85.0％ 순도)를 사용하여 FM0903031-M1675 마이크로스피어 샘플을 제작하였다. 폴 바이오세프라로부터 수득된 트리스아크릴 및 DEAE (트리스아크릴 롯트 W299, 88.2％ 순도; DEAE 롯트 U089; 85.0％ 순도)를 사용하여 FM0903021-M1654 마이크로스피어 샘플을 제작하였다. 순도 수준은 제작사의 명세서가 제공하는 바와 같았다. 4개의 샘플 각각을 로터 HR-MAS에 로딩하였다 (도 7 참조). 그후 중수소화 (D2O) 용매를 첨가하여, 50 ㎕의 최종 부피를 수득하였다.
로터가 표 11에서 언급된다.
Figure 112011023574513-pct00022
튜닝
프로브헤드의 매직 앵글의 조정 후, 하기의 조정을 각각의 샘플에 대해 수행하였다:
프로브헤드 튜닝 및 매칭 (1H)
90° 펄스 측정
B0 균질성 조정 (심)
취득
모든 실험은 실온 (25℃)에서 수행되었다. 각각의 샘플에 대해, 1차원 1H NMR 스펙트럼을 기록하였다.
프로세싱
취득 및 프로세싱 파라미터가 표 12에서 요약된다.
Figure 112011023574513-pct00023
결과
결과가 도 5a-5j에서 제시된다. 도 5a-5d는 샘플 SAFC FMP 128 및 PALL FMP 130의 NMR 스펙트럼을 도해한다. 도 5e-5j는 샘플 SAFC FMP 128, PALL FMP 130, FM0903031-M1675 및 FM0903021-M1654의 NMR 스펙트럼을 도해한다.
도 5a는 스펙트럼들에서 확인된 상응하는 주요 피크들 (A, B 및 C로 표시됨) 간의 유사성을 나타내는 두 샘플의 NMR 스펙트럼의 중첩이다. 피크 A, B 및 C 및 기타 부수적인 피크들은 실시예 13으로부터의 출발 물질의 HR-MAS NMR 스펙트럼의 분석을 기초로 하였다.
피크 A: 3.77 ppm에서 확인되고, 이는, 예를 들어, 공중합체 내의 트리스-히드록시메틸 기 (C(CH 2OH)3)에 기인할 수 있다.
피크 B: 3.2 ppm에서 확인되고, 이는, 예를 들어, 염기성 질소 원자에 연결된 CH2 기 (CH 2N(CH 2CH3)2)에 기인할 수 있다. 어떠한 이론에 의해서도 한정되기를 원치 않으면서, D2O 내의 순수 단량체와 마이크로스피어 간의 화학 변위 차이는 가교된 구조 내에서 아민이 양자화됨 (암모늄)을 시사한다.
피크 C: 1.3 ppm에서 확인되고, 이는, 예를 들어, 중합된 구조 내의 카르복사미드 기 (CH 2-CHCONH)의 베타 위치에 기인할 수 있다. 피크 B 대 피크 A 및 피크 C 대 피크 A의 상대적인 통합 비율이 피크 표면의 적분에 의해 반(semi)-정량적 접근법을 사용하여 실행되었고, 표 13에서 요약된다.
Figure 112011023574513-pct00024
어떠한 이론에 의해서도 한정되기를 원치 않으면서, 더욱 순수한 트리스아크릴 및 DEAE 아크릴아미드로 합성된 마이크로스피어의 더 높은 통합 비율은 덜 순수한 물질로 합성된 마이크로스피어와 비교하여 합성에서 더욱 양호한 중합 효율이 달성되었음을 가리킬 수 있다.
도 5b 및 5c는 9-5 ppm (5b) 및 5-0 ppm (5c) 영역에서의 스펙트럼을 나타낸다. 잔류 피크들이 5 ppm 내지 9 ppm 사이에서 확인되었고, 7.3 ppm에 집중되었으며, 이는, 예를 들어, 젤라틴 내에 존재하는 방향족 양자에 기인할 수 있다. 6.4 ppm 내지 5.8 ppm 사이의 피크는, 예를 들어, 중합 동안의 과량의 아크릴아미드의 자취에 기인할 수 있다. 도 5d 및 표 13은 피크 B 및 C에 대한 화학 변위 (δ)에서의 약간의 차이를 나타낸다.
도 5e는 4가지 상이한 샘플들의 1H NMR 스펙트럼의 비교를 나타낸다. 1.15 ppm의 삼중선 및 3.62 ppm의 사중선이 FM0903031-M1675 및 FM0903021-M1654 스펙트럼으로부터 확인되었다. 2.2 ppm의 단일선이 FM0903031-M1675 스펙트럼으로부터 확인되었고, 이는 SAFC 128 및 PALL FMP 130 스펙트럼에 또한 존재하지만 강도는 훨씬 덜하다 (도 5f 참조).
이러한 공명 선들은 주요 피크에 비해 비교적 가늘고, 이는 소형 유기 분자의 존재로 인한 것일 수 있다. 1.15 ppm의 삼중선 및 3.62 ppm의 사중선은, 예를 들어, 에탄올 또는 에테르 디에틸의 존재에 기인할 수 있다. 피크 B 및 C의 화학 변위가 FM0903031-M1675 및 FM0903021-M1654에 대해 동일하고, 이는 PALL FMP 130 및 SAFC FMP 128과 상이하다 (도 5g). 표 14는 관찰된 화학 변위에서의 차이를 요약한다.
Figure 112011023574513-pct00025
8.4 ppm에 위치하는 피크가 FM0903031-M1675 및 FM0903021-M1654 스펙트럼에서 확인되었다 (도 5h).
반-정량적 접근법을 사용하여 스펙트럼을 분석하였다. 4개의 스펙트럼의 중첩 (도 5i)은 피크 B 및 C의 강도 및 절반 높이의 폭에서의 변동을 나타낸다. 매스 A, B, 및 C의 디콘볼루션을 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 정량을 위해 각각의 스펙트럼에 대해 수행하였다 (도 5j). 계산되고 피크 면적 A에 대해 표준화된 피크 B 및 C의 진폭 값이 표 15에서 요약된다.
Figure 112011023574513-pct00026
어떠한 이론에 의해서도 한정되기를 원치 않으면서, 여러 샘플들 간에 피크 B 및 C에 대해 관찰된 차이는, 부분적으로, 하기와 같이 설명될 수 있다: 화학 변위 및 절반 높이의 폭에서의 차이는 여러 샘플들 간의 비등방성의 잔류 정도에 기인할 수 있다. 회전 매직 앵글과 조합된 물에서의 팽창이 화학적 및 이극성 치환 커플링의 비등방성을 평균화하도록 허용하더라도, 이러한 효과가 완전히 취소되지 않는다. NMR 스펙트럼에 대해 관찰가능한 이러한 잔류 효과는 여러 샘플에서의 가교 정도에 기인할 수 있다. 상이한 표면이 중합체의 미세구조에서의 차이에 의해 설명될 수 있다. 소형 유기 분자의 존재 또는 부재에서의 차이가 제작 공정에서의 차이에 의해 또는 사용된 물질에서의 차이에 의해 설명될 수 있다. 피크 B 및 C에 대해 관찰된 화학 변위 및 절반 높이의 폭에서의 차이가 샘플의 공급원들을 구별하는데 사용될 수 있다.
실시예 15: 간암 환자에서의 마이크로스피어의 투여
이러한 연구는 [Xu et al. (2009) World J Gastroenterol 15(29): 3664-3669]에 기술된 변형 절차에 따라 수행된다. 간략하게, 단면 영상을 검토한 후 색전술 (임의적으로 TACE)을 수행하였다. 프렌치(French) 혈관초를 대퇴 동맥 내에 놓고, 마이켈슨(Mickaelson) 카테터를 복강동맥 및 위장간막동맥 내로 전진시켰다. 조영제를 급속 연속 방사선 영상화 동안 동맥 내로 주입하였다. 그후, 종양에 공급되는 동맥 분지가 정해졌다. 정맥기를 문맥의 개방에 대해 조심스럽게 검사하였다. 트래커(tracker) 카테터를 마이켈슨 카테터를 통해 종양에 공급되는 동맥 분지로 전진시켰다. 독소루비신 (약 50 ㎎), 미토마이신 (약 10 ㎎), 및 리피오돌 (약 4-15 ㎖)의 혼합물을 지혈이 달성될 때까지 동맥 분지 내로 주입하였다. 절차 2주 후에 종양이 수축되지 않으면, 제2 색전술을 수행할 수 있었다.
그후, 중재적 방사선의사가 동맥조영상을 수행하여, 종양(들)에 공급되는 간 동맥의 분지를 확인하고, 더 작은 카테터를 이러한 분지 내로 끼워넣는다. 이는 종양에 지시되는 화학요법제 용량을 최대화하기 위해 수행된다.
종양에 공급되는 혈관이 선택되면, 마이크로스피어 단독, 또는 TACE의 경우에는 교대되는 분취량의 화학요법제 및 실시예 7 또는 8에 따라 제조된 마이크로스피어 (또는 본원에서 제공되는 기타 마이크로스피어), 또는 화학요법제와 조합된 마이크로스피어가 카테터를 통해 주입된다. 전체 마이크로스피어 및/또는 화학요법제가 단일 혈관 분포에서 제공될 수 있거나, 또는 종양(들)에 공급되는 여러 혈관에 분할될 수 있다.
실시예 16: 전립선 암 환자에서의 마이크로스피어의 투여
전립선 암으로 진단된 환자를 시험군 및 대조군의 2개의 군으로 분할하였다. 시험군으로부터의 환자를 실시예 7 또는 8에 따라 제조된 마이크로스피어 (또는 본원에서 제공되는 기타 마이크로스피어)를 사용하여 색전술로 치료하였다.
가시적인 전립선 종양이 있는 환자에서 생검을 수행하였다. 전립선 종양이 암인 것으로 진단된 환자를 색전술로 치료하였다. 치료 전에, 전립선 암 종양에 걸린 환자 내의 혈액 PSA 수준 및 전립선 암 종양의 크기를 기록하였다.
색전술 절차 전에, 예방적 단일 용량의 200 ㎎ 시프로플록사신을 제공하였다. 오른쪽 경대퇴(transfemoral) 접근법을 통해 국소 마취 하에 시술을 수행하였다. 초기 골반 혈관조영술을 수행하여, 동맥기 및 후기 동안 엉덩혈관 및 전립선 동맥을 평가하였다. 전립선으로의 혈액 공급을 더 잘 평가하기 위해 오른쪽 및 왼쪽 속엉덩동맥의 선택적인 디지털 감산 혈관조영술을 5-Fr 코브라(Cobra) 2 카테터를 사용하여 수행하였다. 그후, 마이크로카테터 (Embocath; Biosphere Medical, Rockland, ME, USA)를 사용하여 오른쪽 및 왼쪽 아래 방광 동맥의 초선택적 카테터삽입을 수행하고, 3-5 ㎖의 조영제를 수동으로 주입함으로써 혈관조영술을 수행하여, 마이크로카테터의 끝부분이 전립선 동맥의 구멍 내부에 또는 구멍에 있음을 확실히 하였다. 직경 300-500 ㎛로 조정된 실시예 7 또는 8에 따라 제조된 마이크로스피어가 색전술에 사용되었다. 각각 2 ㎖ 바이알의 마이크로스피어를 20 ㎖의 50％ 요오드화 조영제 + 50％ 생리식염수 용액의 혼합물에 희석하였다. 혼합물을 형광투시경 안내 하에 천천히 주입하였다. 아래 방광 동맥으로부터 일어나는 전립선 동맥의 색전술을 정지될 때까지 수행하였고, 이때 원치 않는 동맥으로 혼합물이 환류되지 않았다. 아래 방광 동맥의 마이크로카테터로, 그리고 속엉덩동맥의 전방 분지에서 5-Fr 카테터가 있는 펌프를 사용하여 추적 혈관조영술을 수동으로 수행하여, 전립선으로의 모든 추가적인 혈액 공급을 점검하였다. 그후, 동일한 기술을 사용하여 다른 쪽에서 색전술을 수행하였다.
종양 크기를 매주 측정하여 기록하였다. 종양 부피를 계산하였다 (종양 부피 = 0-5 (L+W)×L×W×0.5236 (식중, L = 종양 길이, W = 폭)). 색전술 시점의 종양 부피가 이러한 종양의 크기 변동의 추후 비교를 위한 기준점으로서의 구실을 하였다. 각각의 종양 부피의 주간 변동을 색전술 시의 최초의 측정으로부터의 백분율 차이로서 기록하였다. 혈액 PSA 수준을 추적하였고, 색전술 시점의 수준과 비교하였다.
실시예 17: 동정맥 기형 환자에서의 마이크로스피어의 투여
뇌 동정맥 기형 (BAVM) 환자에게 [Gao et al. (2009) Chinese Medical Journal 122(16):1851-1856]에 기술된 변형 절차에 따라 색전술을 제공하였다. 간략하게, 전신 헤파린화 없이 전신 마취 하에 색전술을 수행하였다. 절차 동안, 수축기 혈압을 100 내지 110 mmHg 사이로 조절하였다. 표준 동축 기술로 경대퇴 접근법을 사용하여 카테터삽입을 수행하였다. 가이딩 카테터에 압력 백(pressure bag)을 통해 2500 U 헤파린/ℓ를 함유하는 염수를 플러싱하였다. 0.010 인치 또는 0.008 인치 와이어 (Silverspeed 또는 Mirage; ev3; USA)를 사용하여 유동-안내 및 와이어-안내 기술을 조합하여, 표적으로의 DMSO-혼화성 마이크로카테터 (UltraFlow 또는 Marathon; ev3; USA)의 항해를 수행하였다. 일단 마이크로카테터 끝부분이 원하는 위치에 있으면, 실시예 7 또는 8에 따라 제조된 마이크로스피어 (또는 본원에서 제공되는 기타 마이크로스피어)를 하기와 같이 주입하였다: 1) 마이크로카테터에 5 ㎖ 생리식염수를 플러싱하였다; 2) 0.25 ㎖ DMSO를 마이크로카테터 내로 주입하여, 사강(dead space)을 채웠다; 3) 마이크로스피어를 1 ㎖ 주사기 내로 흡인하고, 이러한 양 중 0.25 ㎖을 40초에 걸쳐 주입하여, 마이크로카테터를 채우고, 사강 내의 DMSO를 교체하였다; 4) 그후, 형광투시경 하에 마이크로스피어 용액을 계속 천천히 주입하였다.
색전술 후, 중환자실에서 환자 혈압을 48시간 동안 엄격하게 모니터링하였다. 드물게 마이크로카테터가 동맥 피더에서 점착성인 경우, 72시간 동안 헤파린을 투여한 후 (750-1000 U/시), 3개월 동안 250 ㎎/일의 용량으로 아스피린을 경구 투여하였다. 그후, 매년 MRI로 BAVM 병소 크기를 모니터링하였다. 3년 후 AVM이 여전히 소실되지 않은 경우, 방사선수술이 고려되었다.
실시예 18: 양성 전립선 비대증의 돼지 모델에서의 마이크로스피어의 투여
[Sun et al. (2008) Radiology 246: 783-789]에 기술된 변형 절차에 따라 연구를 수행하였다. 간략하게, 돼지들을 색전술 군 또는 대조군에 무작위로 할당하였다. 24시간 동안 단식시킨 후, 모든 수컷 돼지에게 체중 1 ㎏ 당 0.1 ㎎의 디아제팜, 10 ㎎/㎏ 케타민, 및 0.01 ㎎/㎏ 아트로핀을 각각 예비투약하였다. 2 ㎎/㎏ 프로포폴 (i.v.)로 마취를 시작하고, 2.0％-2.5％ 할로탄으로 유지시켰다. 기관내 삽관 후 각각의 돼지를 마취 시스템 및 기계적 호흡기에 연결하였다. 서혜부 및 하복부를 면도하고, 무균성 방식으로 드레이핑(draping)하였다.
5-F 유도관(introducer sheath)으로 경피적으로 대퇴 동맥에 접근하였다. 골반 혈관조영술을 수행하고, 5-F 코브라 카테터를 대동맥 내로 삽입하고, 카테터 끝부분을 반대쪽 바깥엉덩동맥으로부터 발트만(Waltman) 루프 모양으로 만들었다. 로드맵(road map) 안내로, 양쪽 측면 상의 속엉덩동맥으로의 선택적 카테터삽입을 달성하였다. 2개의 동맥에서 혈관조영술을 수행하였다. 그후, 대조군 동물을 마취로부터 회복시켰다.
색전술 군에서 전립선의 선택적 색전술을 수행하였다. 헤파린의 전신 분포 후 (체중 1 ㎏ 당 150 IU의 헤파린), 3-F 주입 카테터를 코브라 카테터를 통해 동축 삽입하고, 아래 방광 동맥의 전립선 분지에 선택적으로 놓았다. 수동으로 1 ㎖의 조영제를 주입함으로써 초선택적 혈관조영술을 수행하여, 미세주입 카테터의 끝부분이 원하는 부위에 있음을 확실히 하였다. 실시예 7 또는 8에 따라 제조된 마이크로스피어 (또는 본원에서 제공되는 기타 마이크로스피어)를 직경 500-700 ㎛로 조정하였다. 2.0 ㎖의 마이크로스피어 입자를 함유하는 각각의 마이크로스피어 바이알을 20 ㎖의 50％ 요오드화 조영제 + 50％ 생리식염수 용액의 혼합물에 희석하였다. 혼합물을 형광투시경 안내 하에 천천히 주입하였다. 일단 지혈이 달성되면 색전술을 즉각적으로 종결하였고, 이때 원치 않는 동맥으로 혼합물이 환류되지 않았다. 추적 혈관조영술을 수행하였다. 이어서, 동일한 기술을 사용하여 다른쪽에서 색전술을 수행하였다. 관리 하에 동물들이 마취로부터 회복되도록 하였다. 색전술 후, 색전술과 관련된 가능한 합병증에 대해 모든 동물을 72시간 동안 하루에 2번 점검한 후, 1주일 동안 하루에 1번 점검하였다.
실시예 19: 자궁 섬유종 환자에서의 마이크로스피어의 투여
[Pelage et al. (2000) Radiology 215:428-431]에 기술된 변형 절차에 따라 자궁 동맥 색전술 (UAE)을 수행하였다. 간략하게, 중재적 방사선의사가 UAE를 수행하였고, 이는 자궁 섬유종의 허혈성 괴사를 야기하는 미립자 색전으로의 자궁 동맥 중 하나 또는 양쪽 모두의 완전한 폐색을 수반하였다. 동맥의 폐쇄가 영구적인 것으로 간주됨으로써, 섬유종으로의 혈액 공급을 차단하였지만, 다른 정상 자궁에 대해서는 어떠한 영구적인 역효과도 없었다. 국소 마취 하에, 때로는 얕은 진정, 경막외 또는 척수 마취로, UAE가 수행되었다. 예방적 항생제를 또한 투여할 수 있다. 4 또는 5 프렌치 직경의 혈관초를 여성의 대퇴 동맥 내로 직접 삽입한 후, 반대쪽 자궁 동맥에 선택적으로 카테터를 삽입하였다. 그후, 카테터를 같은쪽 자궁 동맥으로 내보낼 수 있고, 공정을 반복할 수 있다.
이러한 연구에서, 실시예 7 또는 8에 따라 제조된 마이크로스피어 (또는 본원에서 제공되는 기타 마이크로스피어)를 직경 700-900 ㎛로 조정하고, 투여하였다. 혈관조영술에 의해 자궁 혈관의 폐색을 확인하고, 카테터를 제거하였다. 여성을 난소에 대한 약 20 라드 (20 cGy)의 이온화 방사선에 노출시켰다. 성공적인 UAE는 양쪽 자궁 혈관을 완전히 폐색시켰다. 정상 자궁근층 (자궁의 근육)은 난소 및 질 순환으로부터의 측부 혈관을 통해 새로운 혈액 공급을 신속하게 확립하였다.
상기 기술된 본 발명의 실시양태들은 단지 예시적인 것으로 의도되고, 당업자는 본원에 기술된 구체적인 절차들에 대한 다수의 등가물을 인지할 것이거나, 또는 단지 일상적인 실험을 사용하여 이를 확인할 수 있을 것이다. 모든 이같은 등가물은 본 발명의 범주 내인 것으로 간주되고, 하기의 청구항에 포함된다. 또한, 본 명세서 및 청구항에서 사용된 단수형 ("a", "an" 및 "the")는 문맥적으로 명확하게 다르게 지시되지 않는 한 복수형을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "마이크로스피어(a microsphere)"에 대한 언급은 2가지 이상의 이같은 마이크로스피어의 혼합물을 포함한다. 추가적으로, 당업자는 공정 순서가 설명 및 청구의 목적으로 약간 구체적인 순서로 기재되어야 하지만, 본 발명에서 이같은 구체적인 순서 이외의 다양한 변화가 고려된다는 것을 인지할 것이다.

Claims (28)

  1. (a) N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위를 포함하는 공중합체, 및
    (b) 가교된 젤라틴
    을 포함하고, 1H NMR 스펙트럼에서, 3.5 ppm 내지 4 ppm의 제1 피크, 3 ppm 내지 3.5 ppm의 제2 피크, 및 1 ppm 내지 1.5 ppm의 제3 피크를 나타내며, 이때
    (i) 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 0.50 내지 0.65이거나,
    (ii) 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 0.61 내지 0.75이거나, 또는
    (iii) (i)과 (ii)의 조합
    인 마이크로스피어.
  2. 제1항에 있어서, 제1 피크가 3.77 ppm이거나, 제2 피크가 3.2 ppm이거나, 제3 피크가 1.3 ppm이거나, 또는 이들의 조합인 마이크로스피어.
  3. 제1항에 있어서, 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 0.574이거나, 또는 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 0.625인 마이크로스피어.
  4. 제2항에 있어서, 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 0.574이거나, 또는 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 0.625인 마이크로스피어.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 1H NMR 스펙트럼이 기록될 때 마이크로스피어가 25℃이거나, 중수소화 용매 내에 있거나, 또는 이들 모두인 마이크로스피어.
  6. 제5항에 있어서, 1H NMR 스펙트럼이 400 MHz에서 기록되는 마이크로스피어.
  7. 삭제
  8. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위가 9％ 미만의 불순물을 포함하거나, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위가 2％ 미만의 불순물을 포함하거나, 또는 이들 모두인 마이크로스피어.
  9. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 마이크로스피어의 직경이 10 ㎛ 내지 1000 ㎛인 마이크로스피어.
  10. (a) (i) N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체,
    (ii) 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체,
    (iii) N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체, 및
    (iv) 젤라틴
    을 포함하는 수용액을 제조하는 단계;
    (b) 25℃ 물에서의 혼화성이 50％ 이하인 액체 유기 상에 상기 수용액을 피드 링(feed ring)을 통해 첨가한 후 교반하거나 또는 첨가하면서 교반함으로써, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체 단위, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체 단위 및 N,N-메틸렌-비스-아크릴아미드 단량체 단위를 포함하는 공중합체를 포함하는 마이크로스피어를 생산하는 단계;
    (c) 임의적으로, 마이크로스피어에 초음파처리를 적용하는 단계; 및
    (d) 젤라틴을 가교시키는 단계
    를 포함하는, 마이크로스피어의 제조 방법.
  11. 삭제
  12. 제10항에 있어서, N-트리스-히드록시메틸 메틸아크릴아미드 단량체가 9％ 미만의 불순물을 포함하거나, 디에틸아미노에틸아크릴아미드 단량체가 2％ 미만의 불순물을 포함하거나, 또는 이들 모두인 방법.
  13. 삭제
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 삭제
  17. 제10항에 있어서, 초음파처리가 초음파 조(bath)에서 수행되는 방법.
  18. 제10항에 있어서, 마이크로스피어를 체질하는 단계를 포함하지 않는 방법.
  19. 제10항 또는 제12항에 의해 제조된 마이크로스피어.
  20. 제19항에 있어서, 1H NMR 스펙트럼에서, 3.5 ppm 내지 4 ppm의 제1 피크, 3 ppm 내지 3.5 ppm의 제2 피크, 및 1 ppm 내지 1.5 ppm의 제3 피크를 나타내고, 이때
    (i) 제2 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 0.50 내지 0.65이거나,
    (ii) 제3 피크 대 제1 피크의 통합 비율이 0.61 내지 0.75이거나, 또는
    (iii) 이들의 조합
    인 마이크로스피어.
  21. 제19항에 있어서, 마이크로스피어가 크기 면에서 균일하여, 개별적인 마이크로스피어들 간의 직경 차이가 0 ㎛ 내지 100 ㎛인 마이크로스피어.
  22. 제19항에 있어서, 마이크로스피어의 직경이 10 ㎛ 내지 1000 ㎛인 마이크로스피어.
  23. 제19항에 있어서, 마이크로스피어들 중 1％ 미만이 응집된 마이크로스피어인 마이크로스피어.
  24. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 마이크로스피어 또는 제10항 또는 제12항에 의해 제조된 마이크로스피어를 포함하는, 대상체에서의 색전술을 위한 조성물.
  25. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 마이크로스피어 또는 제10항 또는 제12항에 의해 제조된 마이크로스피어를 포함하는, 대상체에서 혈관형성-의존적 질환을 관리 또는 치료하기 위한 조성물.
  26. 제25항에 있어서, 혈관형성-의존적 질환이 동정맥 기형, 자궁 섬유종, 또는 양성 전립선 비대증인 조성물.
  27. 제25항에 있어서, 혈관형성-의존적 질환이 암 또는 종양인 조성물.
  28. 제27항에 있어서, 암 또는 종양이 간 또는 전립선의 암 또는 종양인 조성물.
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