BRPI0610828A2

BRPI0610828A2 - compostos e composições como inibidores de proteìna quinase

Info

Publication number: BRPI0610828A2
Application number: BRPI0610828-8A
Authority: BR
Inventors: Barun Okram; Pingda Ren; Nathanael Schiander Gray
Original assignee: Irm Llc; Scripps Research Inst
Priority date: 2005-05-16
Filing date: 2006-05-15
Publication date: 2010-07-27
Also published as: EP1896470A2; RU2387653C2; CA2608333A1; PT1896470E; CN101218241B; ES2345629T3; CN101218241A; AU2006247322A1; RU2007146390A; MX2007014327A; ATE469151T1; DE602006014540D1; WO2006124863A2; JP2008540664A; KR20080016643A; PL1896470T3; US20080300267A1; EP1896470B1; WO2006124863A3

Abstract

COMPOSTOS E COMPOSIçõES COMO INIBIDORES DE PROTEìNA QUINASE. A presente invenção refere-se a uma nova classe de compostos, composições farmacêuticas compreendendo tais compostos, e métodos de uso de tais compostos, para tratar ou prevenir doenças ou enfermidades associacías com atividade de quinase anormal ou desregulada, particularmente doenças ou enfermidades que envolvem ativação anormal das CDKs, Aurora, Jak2, Rock, CAMKII, FLT3, Tie2, TrkB, FGFR3 e KDR quinases.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSTOS E COMPOSIÇÕES COMO INIBIDORES DE PROTEÍNA QUINASE".

Referência Cruzada a Pedidos Relacionados

Este pedido reivindica o benefício de prioridade ao Pedido dePatente Provisório dos Estados Unidos Número 60/681,853, depositado emde maio de 2005. A descrição total deste pedido é incorporada aqui porreferência em sua totalidade, e para todas as propostas.

Antecedentes da Invenção

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se a uma nova classe de compostos,composições farmacêuticas compreendendo tais compostos, e métodos deuso de tais compostos, para tratar ou prevenir doenças ou enfermidades as-sociadas com atividade de quinase anormal ou desregulada, particularmentedoenças ou enfermidades que envolvem ativação anormal das quinasesCDKs, Aurora, Jak2, Rock, CAMKII, FLT3, Tie2, TrkB, FGFR3 e KDR.

Antecedentes

As proteínas quinases representam uma grande família de prote-ínas, que desempenha um papel central na regulação de uma ampla varie-dade de processos celulares e manutenção do controle da função celular.Uma lista não-limitativa parcial destas quinases incluem: quinases de tirosi-na, tais como FLT3, Tie2, TrkB, KDR, e o receptor de fator de crescimentode fibroblasto, FGFR3; e serina/treonina quinases, tais como CDKs Aurora,Jak2, Rock e CAMKII. A atividade de quinase aberrante tem sido observadaem muitos estados de doença, incluindo enfermidades proliferativas benig-nas e malignas, bem como enfermidades resultantes de ativação inapropria-da dos sistemas imune e nervoso.

Os novos compostos desta invenção inibem a atividade de umaou mais proteínas quinases e são, portanto, esperados serem úteis no tra-tamento de doenças associadas a quinase.

Sumário da Invenção

Em um aspecto, a presente invenção proporciona compostosselecionados a partir da Fórmula Ia, Ib e Ic:<formula>formula see original document page 3</formula>

em que:

n é selecionado a partir de 0, 1 e 2;

R1 é selecionado a partir de halo, d-6alquila, Ci.6alcóxi, C-i.6alquila halo-substituída e Ci-6alcóxi halo-substituído;

R2 é selecionado a partir de C6-ioaril-Co-4alquila e C5-ioheteroaril-Co-4alquila; no qual a referida arila ou heteroarila de R2 é opcionalmentesubstituída por 1-3 radicais independentemente selecionados a partir de ha-lo, Ci-6alquila, Cí-ealcóxi, C^alquila halo-substituída, halo-substituído-C^6alcóxi, -S(0)o.2R5. -COOR5, - C(0)NR5R6 e -NR5C(0)R6; no qual R5 é se-lecionado a partir de hidrogênio e d-6alquila; e R6 é selecionado a partir deC6-ioarila e C5.i0heteroarila; na qual a referida arila ou heteroarila de R6 éopcionalmente substituída com 1 a 3 radicais independentemente seleciona-dos a partir de halo, Ci-6alquila, C-|.6alcóxi, Ci-6alquila halo-substituída e C-i_6alcóxi halo-substituído;

X é selecionado a partir de CR7 ou N; no qual R7 é selecionado apartir de hidrogênio e C-i_6alquila; e os derivados de N-óxido, derivados depró-fármaco, derivados protegidos, isômeros individuais e misturas de isô-meros destes; e os sais farmaceuticamente aceitáveis e solvatos (por exem-plo, hidratos) de tais compostos.

Em um segundo aspecto, a presente invenção proporciona umacomposição farmacêutica que contém um composto de Fórmula I ou um de-rivado de N-óxido, isômeros individuais e mistura de isômeros destes; ou umsal farmaceuticamente aceitável deste, em mistura com um ou mais excipi-entes adequados.

Em um terceiro aspecto, a presente invenção proporciona ummétodo de tratamento de uma doença em um animal em que inibição de ati-vidade de quinase, particularmente atividade de CDKs, Aurora, Jak2, Rock,CAMKII, FLT3, Tie2, TrkB, FGFR3 e/ou KDR, pode prevenir, inibir ou melho-rar a patologia e/ou sintomatologia das doenças, cujo método compreendeadministrar ao animal uma quantidade terapeuticamente eficaz de um com-posto de Fórmula I, ou um derivado de N-óxido, isômeros individuais e mis-tura de isômeros destes, ou um sal farmaceuticamente aceitável destes.

Em um quarto aspecto, a presente invenção proporciona o usode um composto de Fórmula I na manufatura de um medicamento para tra-tamento de uma doença em um animal cuja atividade de quinase, particu-larmente atividade de CDKs, Aurora, Jak2, Rock, CAMKII, FLT3, Tie2, TrkB,FGFR3 e/ou KDR, contribui para a patologia e/ou sintomatologia da doença.

Em um quinto aspecto, a presente invenção proporciona umprocesso para preparação de compostos de Fórmula I e os derivados de N-oxido, derivados de pró-fármaco, derivados protetores, isômeros individuaise mistura de isômeros destes, e os sais farmaceuticamente aceitáveis destes.

Descrição Detalhada da Invenção

Definições

"Alquila" como um grupo e como um elemento estrutural de ou-tros grupos, por exemplo, alquil halo-substituída e alcóxi, pode ser ou de ca-deia reta ou ramificada, d-4-alcóxi inclui metóxi, etóxi, e similares. Alquil ha-lo-substituída inclui trifluorometila, pentafluoroetila, e similares.

"Arila" significa um conjunto de anel aromático monocíclico oubicíclico fundido contendo seis a dez átomos de carbono no anel. Por exem-plo, aril pode ser fenila ou naftila, preferivelmente fenila. "Arileno" significaum radical divalente derivado de um grupo arila.

"Heteroarila" é conforme definido para arila acima onde um oumais membros do anel de carbono indicados podem ser substituídos por umheteroátomo. Por exemplo Cs-sheteroarila inclui piridila, indolila, indazolila,quinoxalinila, quinolinila, benzofuranila, benzopiranila, benzotiopiranila, ben-zo[1,3]dioxole, imidazolila, benzo-imidazolila, pirimidinila, furanila, oxazolila,isoxazolila, triazolila, tetrazolila, pirazolila, tienila, etc.

"Cicloalquila" significa um conjunto de anel saturado ou parcial-mente insaturado, monocíclico, bicíclico fundido ou policíclico em ponte, con-tendo o número de átomos de anel indicado. Por exemplo, C3-ioCicloalquilinclui ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, etc.

"Heterocicloalquila" significa cicloalquila, conforme definido nestepedido, provido que um ou mais dos carbonos de anel indicados, são substi-tuídos por uma porção selecionada a partir de -O-, -N=, -NR-, -C(O)-, -S-,-S(O) - ou -S(0)2-, no qual R é hidrogênio, C-Malquila ou um grupo de prote-ção de nitrogênio. Por exemplo, Ca-sheterocicloalquila conforme usada nestepedido para descrever compostos da invenção inclui morfolino, pirrolidinila,pirrolidinil-2-ona, piperazinila, piperidinila, piperidinilona, 1,4-dioxa-8-aza-spiro[4.5]dec-8-ila, etc.

"Halogênio" (ou halo) preferivelmente representa cloro ou flúor,mas pode também ser bromo ou iodo.

"Painel de Quinase" é uma lista de quinases compreendendoAbl(humana), Abl(T315l), JAK2, JAK3, ALK, JNK1a1, ALK4, KDR, Aurora-A,Lck, Blk, MAPK1, Bmx, MAPKAP-K2, BRK, MEK1, CaMKII(rat), Met,CDK1/cyclinB, p70S6K, CHK2, PAK2, CK1, PDGFRa, CK2, PDK1, c-kit,Pim-2, c-RAF, PKA(h), CSK, PKBa, cSrc, PKCa, DYRK2, Plk3, EGFR,ROCK-I, Fes, Ron, FGFR3, Ros, Flt3, SAPK2a, Fms, SGK, Fyn, SIK,GSK3f3, Syk, IGF-1R, Tie-2, IKKft, TrKB, IR, WNK3, IRAK4, ZAP-70, ITK,AMPK(rat), LIMK1, Rsk2, Axl, LKB1, SAPK20, BrSK2, Lyn (h), SAPK3, BTK,MAPKAP-K3, SAPK4, CaMKIV, MARK1, Snk, CDK2/ciclinA, MINK, SRPK1,CDK3/ciclinE, MKK4(m), TAK1, CDK5/p25, MKK6(h), TBK1, CDK6/ciclinD3,MLCK, TrkA, CDK7/ciclinH/MAT1, MRCKB, TSSK1, CHK1, MSK1, Yes,CK1d, MST2, ZIPK, c-Kit (D816V), MuSK, DAPK2, NEK2, DDR2, NEK6,DMPK, PAK4, DRAK1, PAR-1Ba, EphA1, PDGFRB, EphA2, Pim-1, EphA5,PKBB, EphB2, PKCBI, EphB4, PKCõ, FGFR1, PKCr|, FGFR2, PKC9, FG-FR4, PKD2, Fgr, PKG1B, Flt1, PRK2, Hck, PYK2, HIPK2, Ret, IKKa, RIPK2,IRR, ROCK-ll(humana), JNK2a2, Rse, JNK3, Rsk1(h), PI3 Ky, PI3 Kõ" e PI3-KB. Os compostos da invenção são peneirados contra o painel de quinase(tipo selvagem e/ou mutação destes) e inibem a atividade de pelo menos umde referidos membros de painel.

"Formas mutantes de BCR-Abl" significam mudanças de amino-ácido simples ou múltiplo a partir da seqüência tipo selvagem. As mutaçõesem BCR-ABL agem pelo rompimento de pontos de contato críticos entre aproteína e o inibidor (por exemplo, Gleevec, e similares), mais freqüente-mente pela indução de uma transição a partir do estado inativo para o esta-do ativo, isto é, para uma conformação na qual BCR-ABL e Gleevec são in-capazes de se ligarem. A partir da análise das amostras clínicas, o repertóriode mutações se encontra em associação com o fenótipo resistente que esta-va aumentando vagarosamente, mas inexoravelmente com o tempo. As mu-tações parecem se agrupar em quatro regiões principais. Um grupo de mu-tações (G250E, Q252R, Y253F/H, E255KA/) inclui aminoácidos que formamo laço de ligação de fosfato para ATP (também conhecido como a laço P).

Um segundo grupo (V289A, F311L, T315I, F317L) pode ser encontrado nolocal de ligação de Gleevec, e interage diretamente com o inibidor, via liga-ções de hidrogênio nas interações de Van der Waals. O terceiro grupo demutações (M351T, E355G) se agrupa em proximidade ao domínio catalítico.

O quarto grupo de mutações (H396R/P) está localizado no laço de ativação,cuja conformação é a ativação/inativação de quinase de controle de altera-ção molecular. As mutações de ponto de BCR-ABL associadas com a resis-tência de Gleevec detectada em pacientes de CML e ALL, incluem: M224V,L248V, G250E, G250R, Q252R, Q252H, Y253H, Y253F, E255K, E255V,D276G, T277A, V289A, F311L, T315I, T315N, F317L, M343T, M315T,E355G, F359V, F359A, V379I, F382L, L387M, L387F, H396P, H396R,A397P, S417Y, E459K, e F486S (as posições do aminoácido, indicadas pelocódigo de letras simples, são aquelas da seqüência do Banco de Gene, nú-mero de acesso AAB60394, e correspondem ao tipo ABL 1a; Martinelli et al.,Haematologica/The Hematology Journal, 2005, april; 90-4). A menos que deoutro modo citado para esta invenção, Bcr-Abl se refere a formas tipo selva-gem e mutante da enzima.

"Tratar", "tratando-se" e "tratamento" se referem a um método dealiviar ou minorar uma doença, e/ou seus sintomas criados.

Descrição das Concretizações Preferidas

A presente invenção proporciona compostos, composições emétodos para o tratamento de doenças relacionadas a quinase, particular-mente doenças relacionadas a CDKs, Aurora, Jak2, Rock, CAMKII, FLT3,Tie2, TrkB, FGFR3 e KDR quinase.

Em uma concretização, com referência aos compostos de Fór-mula Ia, Ib e Ic, n é selecionado a partir de 0 e 1; Ri é Ci-6alcóxi; e R2 é se-lecionado a partir de C6-ioaril-C0-4alquila e C5.ioheteroaril-Co-4alquila; no quala referida arila ou heteroarila de R2 é opcionalmente substituída por 1-3 radi-cais independentemente selecionados a partir de halo, Ci-6alquila, Ci-6alcóxi,C^alquila halo-substituída, -S(O)0.2R5, -COOR5, e -NR5C(0)R6; no qual R5é selecionado a partir de hidrogênio e Ci-6alquila; e R6 é C6-ioarila opcional-mente substituída com 1 a 3 radicais independentemente selecionados apartir de C-i-6alquila halo-substituída.

Em outra concretização, Ri é metóxi; R2 é selecionado a partirde fenila, benzila e piridinila; no qual a referida fenila, benzila ou piridinila deR2 é opcionalmente substituída com 1 a 2 radicais independentemente sele-cionados a partir de cloro, bromo, flúor, metila, trifluorometóxi, trifluorometila,-COO2R5, -S(0)2R5 e -NHC(0)R6; no qual R5 é selecionado a partir de meti-la e etila; e R6 é fenila opcionalmente substituída com trifluorometil.

Compostos preferidos da invenção são selecionados a partir de(3-Cloro-fenil)-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (4-Flúor-fenil)-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; [4-(1 H-Pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-(4-trifluorometóxi-fenil)-amina; [4-(1 H-Pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-(3-trifluorometil-fenil)-amina; (3,4-Diflúor-fenil)-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; [4-(1 H-Pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-(4-trifluorometil-fenil)-amina; etil éster de ácido 4-[4-(1H-Pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-ilamino]-benzóico; (3-Metóxi-fenil)-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (3-Flúor-benzil)-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (3,5-Dimetóxi-fenil)-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (2-Metil-piridin-4-il)-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (2-Cloro-piridin-4-il)-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (2-Metóxi-piridin-4-il)-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (4-Metanossulfonil-fenil)-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; Piridin-4-il-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (4-Metil-pirimidin-2-il)-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (3-Bromo-fenil)-[4-(1-metil-1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (3-Cloro-fenil)-4-(1 -metil-1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; [4-(1 -Metil-1 H-pirrolo[2,3-b]píridin-4-il)-pirimidin-2-il]-(3-trifluorometil-fenil)-amina; (3-Bromo-4-metil-fenil)-[4-(1-metil-1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; 2-{4-[2-(3-Bromo-fenilamino)-pirimidin-4-il]-pirrolo[2,3-b]piridin-1-il}-etanol; 2-{4-[2-(3-Trifluorometil-fenilamino)-pirimidin-4-il]-pirrolo[2,3-b]piridin-1-il}-etanol; 2-{4-[2-(3-Cloro-fenilamino)-pirimidin-4-il]-pirrolo[2,3-b]piridin-1-il}-etanol; 2-{4-[2-(3-Bromo-4-metil-fenilamino)-pirimidin-4-il]-pirrolo[2,3-b]piridin-1-il}-etanol; {4-[1-(2-Amino-etil)-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il]-pirimidin-2-il}-(3-brom^amina; {4-[1 -(2-Amino-etil)-1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il]-pirimidin-2-il}-(3-bromo-fenil)-metil-amina; {4-[1 -(2-Amino-etil)-1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il]-pirimidin-2-il}-(4-trifluorometil-fenil)-amina; N-{4-Metil-3-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-ilamino]-henil}-3-trifluorometil-benzamida; [4-(1H-Pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-il]-(4-trifluorometil-fenil)-amina; (3,5-Dimetóxi-fenil)-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-il]-amina; (3,5-Diflúor-fenil)-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-il]-amina; (3-Bromo-fenil)-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-il]-amina; (3-Metóxi-fenil)-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-il]-amina; (4-Cloro-fenil)-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-il]-amina; etil éster de ácido 4-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-ilamino]-benzóico; N-{4-Metil-3-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-ilamino]-fenil}-3-trifluorometil-benzamida;(3-Cloro-fenil)-[4-(4-metóxi-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-il]-amina;[4-(4-Metóxi-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-il]-(3-trifluorometil-fenil)-amina; (3-Bromo-fenil)-[4-(4-metóxi-1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-il]-amina; N-{4-Metil-3-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-pirimidin-2-ilamino]-fenil}-3-trifluorometil-benzamida; N-Etil-4-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-ilamino]-benzenossulfonamida; N-(2-Metóxi-etil)-4-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-ilamino]-benzenossulfonamida; N-(3-Metóxi-propil)-4-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-ilamino]-benzenosulfonamida; N-(3-Metóxi-propil)-4-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-ilamino]-benzenosulfonamida; (3-Bromo-fenil)-[4-(2-metil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (3-Cloro-fenil)-[4-(2-metil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; [4-(2-Metil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-(3-trifluorometil-fenil)-amina; N-(2-Metóxi-etil)-4-[4-(2-metil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-ilamino]-benzenosulfonamida; N-(3-Metóxi-propil)-4-[4-(2-metil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-ilamino]-benzenosulfonamida; (3-Bromo-fenil)-[4-(1H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (3-Cloro-fenil)-[4-(1H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; [4-(1H-Pirazolo[3,4-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-(3-trifluorometil-fenil)-amina; (3-Cloro-fenil)-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-pirimidin-2-il]-amina; (3-Bromo-fenil)-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-pirimidin-2-il]-amina; e[4-(1H-Pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-pirimidin-2-il]-(3-trifluorometil-fenil)-amina.

Compostos adicionais preferidos da invenção são detalhadosnos Exemplos e Tabela I, infra.

Farmacologia e Utilidade

Os compostos da invenção modulam a atividade de quinases e,como tais, são úteis para tratamento de doenças ou enfermidades em queas quinases contribuem para a patologia e/ou sintomatologia da doença. E-xemplos de quinases que são inibidas pelos compostos e composições des-critas aqui e contra os quais os métodos aqui descritos são úteis incluem,mas não estão limitados a, CDKs, Aurora, Jak2, Rock, CAMKII, FLT3, Tie2,TrkB, FGFR3 e KDR.

A quinase de tirosina de Abelson (isto é, Abi, c-Abl) é envolvidana regulação do ciclo de célula, na resposta celular à tensão genotoxica, ena transmissão de informação sobre o ambiente celular através de sinaliza-ção de integrin. Além de tudo, parece que a proteína Abi serve como um pa-pel complexo como um módulo celular que integra sinais a partir de váriasfontes extracelular e intracelular, e que influencia as decisões em relação aociclo de célula e apoptose. A quinase de tirosina de Abelson inclui derivadosde subtipos, tais como a fusão quimérica (oncoproteína) BCR-Abl com ativi-dade de quinase de tirosina desregulada ou a v-Abl. BCR-Abl é crítica napatogênese de 95% de leucemia mielogênea crônica (CML) e 10% de leu-cernia linfocítica aguda. STI-571 (Gleevec) é um inibidor da quinase de tiro-sina de BCR-Abl oncogênica, e é usada para o tratamento de leucemia mie-loide crônica (CML). Contudo, alguns pacientes no estágio de crise de soprode CML são resistentes a STI-571 devido a mutações na quinase de BCR-Abl. Mais de 22 mutações foram reportadas até agora com as mais comunssendo G250E, E255V, T315I, F317L e M351T.

Os compostos da presente invenção inibem a quinase abi, espe-cialmente a quinase v-abl. Os compostos da presente invenção também ini-bem a quinase BCR-Abl tipo selvagem e mutações de quinase BCR-Abl, esão, desse modo, adequadas para o tratamento de câncer Bcr-abl-positivo edoenças de tumores, tais como leucemias (especialmente leucemia mieloidecrônica e leucemia linfoblástica aguda, onde especialmente mecanismosapoptóticos de ação, são encontrados), e também mostram efeitos no sub-grupo de células de haste de leucemia, bem como potencial para a purifica-ção destas células in vitro após remoção de referidas células (por exemplo,remoção do tutano do osso), e reimplante das células, uma vez que elas te-nham sido desprovidas de células de câncer (por exemplo, reimplante decélulas de tutano de osso purificadas).

A trajetória de sinalização de Ras-Raf-MEK-ERK serve de medi-adora à resposta celular ao crescimento de sinais. Ras sofre mutação parauma forma oncogênica em -15% de câncer humano. A família Raf pertenceà proteína serina/treonina quinase, e ela inclui três membros, A-Raf, B-Raf ec-Raf (ou Raf-1). O foco em Raf sendo um fármaco-alvo centrado no relacio-namento de Raf como um efetuador a jusante de Ras. Contudo, dados re-centes sugerem que B-Raf pode ter um papel proeminente na formação decertos tumores, não requerendo um alelo de Ras ativado (Nature 417, 949 -954 (01 de Julho de 2002). Em particular, mutações de B-Raf foram detecta-das em uma grande percentagem de malanomas malignos.Os tratamentos médicos existentes para melanoma são limita-dos em sua eficiência, especialmente para melanomas de etágio avançado.Os compostos da presente invenção também inibem processos celularesenvolvendo quinase b-Raf, proporcionando uma nova oportunidade terapêu-tica para tratamento de cânceres humanos, especialmente para melanoma.

Os compostos da presente invenção também inibem processoscelulares envolvendo c-Raf. quinase c-Raf é ativada pelo oncogene ras, quesofre mutação em um número amplo de certos cânceres humanos. Portanto,a inibição da atividade de c-Raf quinase pode proporcionar um modo de im-pedir o crescimento de tumor mediado por ras [Campbell, S. L, Oncogene,17, 1395 (1998)].

PDGF (Fator de Crescimento derivado de Plaqueta) é um fatorde crescimento que ocorre muito comumente, que desempenha um papelimportante, ambos no crescimento normal e também na proliferação de célu-la patológica, tal como é visto em carcinogênese e em doenças das célulasde músculo liso de vasos sangüíneos, por exemplo, na aterosclerose etrombose. Os compostos da invenção podem inibir a atividade de receptorde PDGF (PDGFR) e são, portanto, adequados para o tratamento de doen-ças de tumor, tais como gliomas, sarcomas, tumores de próstata, e tumoresdo cólon, mama e ovário.

Os compostos da presente invenção podem ser usados não so-mente como uma substância de inibição de tumor, por exemplo, em câncerde pulmão de célula pequena, mas também como um agente para tratar en-fermidades proliferativas não-malignas, tais como aterosclerose, trombose,psoríase, escleroderma e fibrose, bem como para a proteção de células deorigem, por exemplo, para combater o efeito hematóxico de agentes quimio-terápicos, tal como 5-fluoruracila, e na asma. Os compostos da invençãopodem especialmente serem usados para o tratamento de doenças, que res-pondem a uma inibição do receptor PDGF quinase.

Os compostos da presente invenção mostram efeitos úteis notratamento de enfermidades que ocorrem como um resultado de transplante,por exemplo, transplante alogênico, especialmente rejeição de tecido, talcomo especialmente bronquiolite obliterativa (OB), isto é, uma rejeição crô-nica de transplantes de pulmão alogênicos. Em contraste a pacientes semOB, aqueles com OB freqüentemente mostram concentração de PDGF ele-vada em fluidos de lavagem interna broncoalveolar.

Os compostos da presente invenção são também efetivos emdoenças associadas com migração e proliferação de célula de músculo lisovascular (onde PDGF e PDGF-R freqüentemente também desempenhamum papel), tal como restenose e aterosclerose. Estes efeitos e as conse-qüências destes para a proliferação ou migração de células de músculo lisovascular in vitro e in vivo podem ser demonstrados pela administração doscompostos da presente invenção, e também pela investigação de seu efeitono espessamento da membrana interna de um vaso sangüíneo vascular emseguida a dano in vivo.

A família trk de receptores de neurotrofin (trkA, trkB, trkC) pro-move a sobrevivência, crescimento e diferenciação dos tecidos neuronal enão-neuronal. A proteína TrkB é expressa em células tipo neuroendócrina nointestino delgado e cólon, nas células alfas do pâncreas, nos monócitos emacrófagos dos nodos linfáticos e do baço, e nas camadas granulares daepiderme (Shibayama e Koizumi, 1996). A expressão da proteína TrkB foiassociada com uma progressão desfavorável de tumores de Wilms e deneuroblastomas. TkrB é, além disso, expressa em células cancerosas depróstata, mas não em células normais. A trajetória de sinalização a jusantedos receptores de trk envolve a cascata de ativação de MAPK através doShc, Ras ativado, genes de ERK-1 e ERK-2, e a trajetória de transdução dePLC-gammal (Sugimoto et al., 2001).

A c-Src quinase de transmite sinais oncogênicos de muitos re-ceptores. Por exemplo, a sobre-expressão de EGFR ou HER2/neu em tumo-res conduz a ativação constitutiva de c-src, que é característica da célulamaligna, mas ausente da célula normal. Por outro lado, camundongos defici-entes na expressão de c-src exibem um fenótipo osteopetrótico, indicandouma participação chave de c-src na função osteoclástica, e um envolvimentopossível em enfermidades relacionadas.A quinase de família Tec, Bmx, uma proteína tirosina quinasenão-receptora, controla a proliferação de células de câncer epiteliais mamá-rias.

O receptor de fator de crescimento de fibroblasto 3 foi mostradoexercer um efeito regulatório negativo no crescimento de osso, e uma inibi-cão de proliferação de condrócito. A displasia tanatofórica é causada pormutações diferentes no receptor de fator de crescimento de fibroblasto 3, euma mutação, TDII FGFR3, tem uma atividade de tirosina quinase constituti-va que ativa o fator de transcrição Statl, conduzindo a expressão de um ini-bidor de ciclo de célula, impedimento do crescimento, e desenvolvimento deosso anormal (Su et al., Nature, 1997, 386, 288-292). FGFR3 é também fre-qüentemente expresso em cânceres tipo mieloma múltiplo. Os inibidores deatividade de FGFR3 são úteis no tratamento de doenças inflamatórias ouautoimunes mediadas por célula T, incluindo, mas não limitadas a, artritereumatoide (RA), artrite de colágeno II, esclerose múltipla (MS), eritematosede lupos sistêmica (SLE), psoríase, diabete de ataque juvenila, doença deSjogren, doença de tireoide, sarcoidose, uveítes autoimunes, doença infla-matória de intestino (colite de Crohn e ulcerativa), doença delíaca e miaste-nia gravis.

A atividade de quinase regulada por soro e glucocorticoide(SGK), está correlacionada a atividades de íon-canal perturbadas, em parti-cular, aquelas de canais de sódio e/ou potássio e compostos da invenção,pode ser útil para tratamento de hipertensão.

Lin et al (1997) J. Clin. Invest. 100, 8: 2072-2078 e P. Lin (1998)PNAS 95, 8829-8834, mostraram uma inibição de crescimento de tumor evascularização, e também uma diminuição de metastase de pulmão duranteinfecções adenovirais, ou durante injeção do domínio extracelular de Tie-2(Tek) em tumor de mama e modelos de xeno-enxerto de melanoma. Os ini-bidores Tie2 podem ser usados em situações onde neovascularização ocor-re inapropriadamente (isto é, em retinopatia diabética, inflamação crônica,psoríase, sarcoma de Kaposi, neovascularização crônica devido à degene-ração macular, artrite reumatoide, haemangioma infantila e cânceres).Lck desempenha um papel na sinalização da célula T. Os ca-mundongos que carecem do gene Lck têm uma capacidade pobre de de-senvolver timócitos. A função de Lck como um ativador positivo de sinaliza-ção de célula T sugere que os inibidores Lck podem ser úteis para tratamen-to de doença autoimune, tal como artrite reumatoide.

JNKs, junto com outros MAPKs, foram implicados em ter um pa-pel na mediação de resposta celular para câncer, agregação de plaquetainduzida por trombina, enfermidades de imunodeficiência, doenças autoimu-nes, morte celular, alergias, osteoporose e doença do coração. Os alvos te-rapêuticos relacionados à ativação da trajetória de JNK incluem leucemiamielogênea crônica (CML), artrite reumatoide, asma, osteoartrite, isquemia,câncer e doenças neurodegenerativas. Como um resultado da importânciade ativação de JNK associada com doença do fígado ou episódios de is-quemia hepática, os compostos da presente invenção podem também serúteis para tratar várias enfermidades hepáticas. Um papel para JNK em do-ença cardiovascular, tais como infarto miocardial ou falha congestiva do co-ração, foi também reportado conforme mostrado em respostas hipertróficasmediadas por JNK para várias formas de tensão cardíaca. Verificou-se que acascata de JNK também desempenha um papel na ativação de célula T, in-cluindo ativação do promotor IL-2. Desse modo, inibidores de JNK podem tervalor terapêutico na alteração de respostas imunes patológicas. Um papelpara ativação de JNK em vários cânceres foi também estabelecido, sugerin-do o uso potencial de inibidores de JNK em câncer. Por exemplo, JNK cons-titutivamente ativado está associado com tumorigênese mediada por HTLV-1[Oncogene 13:135-42 (1996)]. JNK pode desempanhar um papel em sarco-ma de Kaposi (KS). Outros efeitos proliferativos de outras citoquinas impli-cadas em proliferação de KS, tais como fator de crescimento endotelial vas-cular (VEGF), IL-6 e TNFa, podem também ser mediados por JNK. Em adi-ção, a regulação do gene c-jun em células transformadas p210 BCR-ABLcorresponde com a atividade de JNK, sugerindo um papel para para inibido-res de JNK no tratamento de leucemia mielogênea crônica (CML) [Blood92:2450-60(1998)].Certas condições proliferativas anormais são acreditadas seremassociadas com expressão de raf e são, portanto, acreditadas serem res-ponsivas a inibição de expressão de raf. Níveis anormalmente altos de ex-pressão da proteína raf são também implicados na transformação e prolife-ração de célula anormal. Estas condições proliferativas anormais são tam-bém acreditadas serem respondivas à inibição de expressão de raf. Por e-xemplo, a expressão de proteína c-raf é acreditada desempenhar um papelna proliferação de célula anormal visto que foi reportado que 60% de todasas linhas de célula de carcinoma de pulmão expressam níveis não-usualmente altos de mRNA e proteína c-raf. Exemplos adicionais de condi-ções proliferativas anormais são enfermidades hiperproliferativas, tais como,cânceres, tumores, hiperplasia, fibrose pulmonar, angiogênese, psoríase,aterosclerose e proliferação de célula de músculo liso nos vasos sangüí-neos, tais como estenose ou restenose em seguida à angioplastia. A trajetó-ria de sinalização celular da qual raf é uma parte foi também implicada emenfermidades inflamatórias caracterizadas por proliferação de célula T (ati-vação e crescimento de célula T), tais como rejeição de enxerto de tecido,choque de endotoxina, e nefrite glomerular, por exemplo.

As proteína quinases ativadas por tensão (SAPKs) são uma fa-mília de proteínas quinases que representam a penúltima etapa em trajetó-rias de transdução de sinal que resultam na ativação do fator de transcriçãoc-jun e expressão de genes regulados por c-jun. Em particular, c-jun é en-volvido na transcrição de genes que codificam proteínas envolvidos no repa-ro de DNA que é danificado devido a insultos genotóxicos. Portanto, agentesque inibem a atividade de SAPK em uma célula impedem o reparo de DNA esensibilizam a célula a agentes que induzem dano de DNA, ou inibem sínte-se de DNA, e induzem apoptose de uma célula, ou que inibem proliferaçãoda célula.

As proteínas quinases ativadas por mitogen (MAPKs) são mem-bros de trajetórias de transdução de sinal conservadas que ativam os fatoresde transcrição, fatores de tradução, e outras moléculas-alvo em resposta àuma variedade de sinais extracelulares. MAPKs são ativadas por fosforilaçãoem um motivo de fosforilação duplo tendo a seqüência Thr-X-Tyr por quina-ses de proteínas quinases ativadas por mitôgenio (MKKs). Em eucariotesmais altos, o papel fisiológico de sinalização de MAPK foi correlacionadocom eventos celulares tais como proliferação, oncogênese, devenvolvimentoe diferenciação. Conseqüentemente, a capacidade de regular transdução desinal, via estas trajetórias (particularmente via MKK4 e MKK6), pode condu-zir ao desenvolvimento de tratamentos e terapias preventivas para doençashumanas associadas com sinalização de MAPK, tal como doenças inflama-tórias, doenças autoimunes, e câncer.

A família de proteína quinases S6 ribossômicas humana consis-te em pelo menos 8 membros (RSK1, RSK2, RSK3, RSK4, MSK1, MSK2,p70S6K e p70S6 Kb). A proteína quinases de ribossomal humano S6 de-sempenha funções pleotrópicas importantes, entre elas é um papel chave naregulação de translação de mRNA durante biossíntese de proteína (Eur. J.Biochem, Novembro de 2000; 267(21): 6321-30, Exp Cell Res. 25 de No-vembro de 1999; 253 (1):100-9, Mol Cell Endocrinol. 25 de Maio de 1999;151(1-2):65-77). A fosforilação da proteína ribossômica S6 p70S6 tem tam-bém sido implicada na regulação de motilidade de célula (Immunol. Cell Biol.Agosto de 2000;78(4):447-51) e crescimento de célula (Prog. Nucleic AcidRes. Mol. Biol., 2000; 65:101-27), e, conseqüentemente, pode ser importanteem metástese de tumor, na resposta imune e reparo de tecido, bem comooutras condições de doença.

As SAPK's (também denominadas "quinases jun N-terminal" ou"JNK's") são uma família de proteína quinases que representam a penúltimaetapa nas trajetórias de transdução de sinal que resultam na ativação dofator de transcrição c-jun e expressão de genes regulados por c-jun. Em par-ticular, c-jun é envolvido na transcrição de genes que codificam proteínasenvolvidas no reparo de DNA que é danificado devido a insultos genotóxi-cos. Os agentes que inibem a atividade de SAPK em uma célula impedemreparo de DNA e sintetizam a célula àquelas modalidades terapêuticas decâncer que agem pela indução de dano de DNA.

BTK desempenha um papel na doença autoimune e/ou inflama-tória, tais como, eritematose de lupos sistêmica (SLE), artrite reumatoide,vasculitides múltiplas, púrpura trombocitopênica idiopática (ITP), miasteniagravis, e asma. Devido ao papel da BTK na ativação de célula B, os inibido-res de BTK são úteis como inibidores de atividade patogênica mediada porcélula B, tal como produção de autoanticorpo, e são úteis para o tratamentode linfoma de célula B e leucemia.

CHK2 é um membro da família de quinase de proteína de seri-na/treonina quinases, e é envolvido em um mecanismo usado para vigilânciade dano de DNA, tal como dano causado por mutagenes ambientais e espé-cies de oxigênio reativas endógenas. Como um resultado, é implicado comoum supressor de tumor, e alvo para terapia de câncer.

CSK influencia o potencial metastático de células de câncer, par-ticularmente câncer de cólon.

Fes é uma proteína de tirosina quinase não-receptora que temsido implicada em uma variedade de trajetórias de transdução de sinal decitoquina, bem como diferenciação de células mieloides. Fes é também umcomponente chave da maquinaria de diferenciação de granulócito.

A atividade de tirosina quinase receptora Flt3 é implicada emleucemias e síndrome de mielodiplástica. Em aproximadamente 25% deAML, as células de leucemia expressam uma forma constitutivamente ativade tirosina quinase (p) FLT3 autofosforilatada da superfície celular. A ativi-dade de p-FLT3 confere vantagem de crescimento e sobrevivência nas célu-las de leucemia. Pacientes com leucemia aguda, cujas células de leucemiaexpressam atividade de quinase p-FLT3, têm um efeito clínico total pobre. Ainibição de atividade de quinase p-FLT3 induz apoptose (morte celular pro-gramada) das células de leucemia.

Inibidores de IKKa e IKK(3 (1 e 2) são terapêuticos para doençasque incluem artrite reumatoide, rejeição de transplante, doença inflamatóriado intestino, osteoartrite, asma, doença pulmonar obstrutiva crônica, ateros-clerose, psoríase, esclerose múltipla, derrame cerebral, eritematose de lupossistêmica, doença de Alzheimer, isquemia cerebral, dano de cérebro traumá-tico, doença de Parkinson, esclerose lateral amiotrófica, hemorragia suba-racnoide, ou outras doenças ou enfermidades associadas com produçãoexcessiva de mediadores inflamatórios no cérebro e sistema nervoso cen-tral).

Met está associada com muitos tipos dos maiores cânceres hu-manos, e a expressão está freqüentemente correlacionada com prognosespobres e metástases. Os inibidores de Met são terapêuticos para doençasque incluem cânceres tais como câncer de pulmão, NSCLC (câncer de pul-mão de célula pequena), câncer de osso, câncer pancreático, câncer de pe-le, câncer da cabeça e pescoço, melanoma cutâneo ou intraocular, cânceruterino, câncer de ovário, câncer retal, câncer da região anal, câncer de es-tômago, câncer de cólon, câncer de mama, tumores ginecológicos (por e-xemplo, sarcomas uterinos, carcinoma dos tubos de falópio, carcinoma doendométrio, carcinoma do colo do útero, carcinoma da vagina ou carcinomada vulva), Doença de Hodgkin, câncer do esôfago, câncer do intestino del-gado, câncer do sistema endócrino (por exemplo, câncer da tireoide, glându-las paratireoide ou adrenal), sarcomas de tecidos macios, câncer da uretra,câncer do pênis, câncer de próstata, leucemia crônica ou aguda, tumoressólidos de infância, linfomas linfocíticos, câncer da bexiga, câncer do rim ouureter (por exemplo, carcinoma de célula renal, carcinoma da pélvis renal),malignidade pediátrica, neoplasmas do sistema nervoso central (por exem-plo, linfoma primário do CNS, tumores do eixo espinhal, glioma da base docérebro, ou adenomas de pituitária), cânceres do sangue, tais como leuce-mia mieloide aguda, leucemia mieloide crônica, etc, esôfago de Barrett (sín-drome pré-maligna), doença cutânea neoplástica, psoríase, micoses fungoi-des e hipertrofia prostática benigna, doenças relacionadas a diabetes, talcomo retinopatia diabética, isquemia retinal e neovascularização retinal, cir-rose hepática, doença cardiovascular, tal como aterosclerose, doença imu-nológica, tal como doença autoimune, e doença renal. Preferivelmente, adoença é câncer, tal como leucemia mieloide, e câncer colorretal.

A quinase 2 relacionada à Nima (Nek2) é uma proteína quinaseregulada por ciclo celular com atividade máxima no ataque de mitose que selocaliza no centrossoma. Estudos funcionais têm implicado Nek2 na regula-ção de separação de centrossoma e formação de fuso. A proteína Nek2 éelevada 2 a 5 vezes nas linhas celulares derivadas a partir de uma faixa detumores humanos incluindo aqueles de cervical, ovário, próstata, e particu-larmente mama.

As doenças mediadas por p70S6K ou condições incluem, masnão estão limitadas a, enfermidades proliferativas, tais como câncer e escle-rose tuberosa.

Existe evidência de crescimento que a terapia de inibidor de qui-nase opera consistente e seguramente contra cânceres nos quais o fármacode quinase-alvo é constitutivamente ativado por mutações de gene. Existemrelatórios múltiplos de mutações encontradas em quinases resultantes deum processo de seleção de tumor natural. Uma lista não-limitativa de exem-plos destes incluiria: mutante b-raf V599E em mais de 60% de casos de me-lanoma; mutantes FK3-ITD em 30% de casos AML; mutações de c-kit empacientes de GIST; PDGFRa em GIST e HES; PDGFRp em CMML; mutan-tes Pi3K em cânceres de cólon e gástricos e glioblastomas; e mutantes EG-FR em 10% de cânceres de pulmão (responsivos a Iressa®) e em glioblas-tomas.

De acordo com o precedente, a presente invenção também pro-porciona um método para prevenir ou tratar qualquer uma das doenças ouenfermidades descritas acima em um indivíduo em necessidade de tal tra-tamento, cujo método compreende administrar ao referido indivíduo umaquantidade terapeuticamente eficaz (Ver, "Administration and Pharmaceuti-cal Compositions", infra) de um composto de Fórmula I, ou um sal farmaceu-ticamente aceitável deste. Para qualquer um dos usos acima, a dosagemrequerida variará dependendo do modo de administração, da condição parti-cular a ser tratada, e do efeito desejado.Administração e Composições Farmacêuticas

Em geral, os compostos da invenção serão administrados emquantidades terapeuticamente eficazes, via qualquer um dos modos usuais eadequados conhecidos na técnica, ou simplesmente ou em combinação comum ou mais agentes terapêuticos. Uma quantidade terapeuticamente eficazpode variar amplamente dependendo da severidade da doença, da idade esaúde relativa do indivíduo, da potência do composto usado, e de outros fa-tores. Em geral, resultados satisfatórios são indicados para serem obtidossistemicamente em dosagens diárias de a partir de cerca de 0,03 a 2,5mg/kgpor peso do corpo. Conforme indicado, a dosagem diária nos mamíferosmaiores, por exemplo, humanos, está na faixa de cerca de 0,5 mg a cercade 100 mg, convenientemente administrada, por exemplo, em doses dividi-das até quatro vezes em um dia, ou em forma retardada. Formas de dosa-gem de unidade adequadas para administração oral compreendem de ca. 1a 50 mg de ingrediente ativo.

Os compostos da invenção podem ser administrados comocomposições farmacêuticas por qualquer rota convencional, em particularenteralmente, por exemplo, oralmente, por exemplo, na forma de comprimi-dos ou cápsula, ou parenteralmente, por exemplo, na forma de soluções in-jetáveis ou suspensões, topicamente, por exemplo, na forma de loções, géis,ungüentos ou cremes, ou em uma forma nasal, ou de supositórios. As com-posições farmacêuticas compreendendo um composto da presente inven-ção, na forma livre, ou em uma forma de sal farmaceuticamente aceitável,em associação com pelo menos um veículo ou diluente farmaceuticamenteaceitável, podem ser produzidas em uma maneira convencional por métodosde mistura, granulação ou revestimento. Por exemplo, composições oraispodem ser comprimidos ou cápsulas de gelatina compreendendo o ingredi-ente ativo junto com a) diluentes, por exemplo, lactose, dextrose, sucrose,manitol, sorbitol, celulose e/ou glicina; b) lubrificantes, por exemplo, sílica,talco, ácido esteárico, seu sal de magnésio ou cálcio e/ou polietilenoglicol;para comprimidos também c) ligantes, por exemplo, magnésio silicato dealumínio, pasta de amido, gelatina, tragacanto, metilcelulose, sódio carboxi-metilcelulose e/ou polivinilpirrolidona; se desejado, d) disintegrantes, por e-xemplo, amidos, agar, ácido algínico ou seu sal de sódio, ou misturas efer-vescentes; e/ou e) absorventes, colorantes, aromatizantes e adoçantes. Ascomposições injetáveis podem ser soluções isotônicas aquosas ou suspen-sões, e supositórios podem ser preparados de emulsões graxas ou suspen-soes. As composições podem ser esterilizadas e/ou conter adjuvantes, taiscomo conservantes, estabilizantes, agentes de umedecimento ou emulsifi-cantes, promotores de solução, sais para regular a pressão osmótica e/outampões. Em adição, elas podem também conter outras substâncias tera-peuticamente valiosas. Formulações adequadas para aplicações transder-mais incluem uma quantidade eficaz de um composto da presente invençãocom um veículo. Um veículo pode incluir solventes farmacologicamente acei-táveis absorvíveis para auxiliar a passagem através da pele do hospedeiro.Por exemplo, dispositivos transdermais são na forma de uma bandagemcompreendendo um membro de apoio, um reservatório contendo o compos-to opcionalmente com veículos, opcionalmente uma barreira de controle detaxa para distribuir o composto para a pele do hospedeiro a uma taxa contro-lada e predeterminada sobre um período controlado de tempo, e meios parasegurar o dispositivo à pele. Formulações transdermais de matriz podemtambém ser usadas. Formulações adequadas para aplicação tópica, por e-xemplo, para a pele e olhos, são preferivelmente soluções aquosas, ungüen-tos, cremes ou géis bem conhecidos na técnica. Tais podem conter solubili-zadores, estabilizadores, agentes de aumento de tonicidade, tampões e con-servantes.

Os compostos da invenção podem ser administrados em quanti-dades terapeuticamente eficazes em combinação com um ou mais agentesterapêuticos (combinações farmacêuticas). Por exemplo, efeitos sinergísti-cos podem ocorrer com outras substâncias imunomodulatórias ou anti-inflamatórias, por exemplo, quando usadas em combinação com ciclosporin,rapamicin, ou ascomicin, ou análogos imunosupressores destes, por exem-plo, ciclosporin A (CsA), ciclosporin G, FK-506, rapamicin, ou compostoscomparáveis, corticosteroides, ciclofosfamida, azatioprina, metotrexato, bre-quinar, leflunomida, mizoribina, ácido micofenólico, micofenolato mofetila,15-deoxispergualin, anticorpos imunosupressores, especialmente anticorposmonoclonais para receptores de leucócito, por exemplo, MHC, CD2, CD3,CD4, CD7, CD25, CD28, B7, CD45, CD58, ou seus ligantes, ou outros com-postos imunomodulatórios, tal como CTLA41g. Onde os compostos da in-venção são administrados em conjunto com outras terapias, dosagens doscompostos administrados variarão naturalmente dependendo do tipo de co-fármacos empregados, na condição sendo tratada, e assim por diante.

A invenção também proporciona combinações farmacêuticas,por exemplo, um kit, compreendendo a) um primeiro agente que é um com-posto da invenção conforme aqui revelada, na forma livre, ou na forma desal farmaceuticamente aceitável, e b) pelo menos um coagente. O kit podecompreender instruções para sua administração.

Os termos "coadministração" ou "administração combinada" ousimilares, conforme aqui utilizados, são significativos para envolverem admi-nistração dos agentes terapêuticos selecionados a um paciente simples, esão pretendidos para incluírem regimes de tratamento nos quais os agentesnão são necessariamente administrados pela mesma rota de administração,ou ao mesmo tempo.

O termo "combinação farmacêutica", conforme aqui usado, signi-fica um produto que resulta da mistura ou combinação de mais do que umingrediente ativo, e inclui ambas combinações fixas ou não-fixas dos ingredi-entes ativos. O termo "combinação fixa" significa que os ingredientes ativos,por exemplo, um composto de Fórmula I e um coagente, são ambos admi-nistrados a um paciente simultaneamente na forma de uma entidade ou do-sagem simples. O termo "combinação não-fixa" significa que os ingredientesativos, por exemplo, um composto de Fórmula I e um coagente, são ambosadministrados a um paciente como entidades separadas ou simultaneamen-te, concorrentemente ou seqüencialmente com nenhum limite de tempo es-pecífico, no qual tal administração proporciona níveis terapeuticamente efeti-vos dos 2 compostos no corpo do paciente. O último também se aplica aterapia de coquetel, por exemplo, a administração de 3 ou mais ingredientesativos.

Processos para Produção dos Compostos da Invenção

A presente invenção também inclui processos para a preparaçãode compostos da invenção. Nas reações descritas, pode ser necessário pro-teger grupos funcionais reativos, por exemplo, grupos hidróxi, amino, imino,tio ou carbóxi, onde estes são desejados no produto final, para evitar suaparticipação indesejada nas reações. Grupos de proteção convencionaispodem ser usados de acordo com a prática padrão, por exemplo, ver T.W.Greene e P. G. M. Wuts em "Protective Groups in Organic Chemistry", JohnWileye Sons, 1991.

Os compostos de Fórmula I podem ser preparados pelo proce-dimento como no seguinte Esquema de Reação I:Esquema de Reação I

em que n, Ri e R2 são conforme definidos no Sumário da Invenção. Umcomposto de Fórmula Ia pode ser sintetizado pela reação de um compostode fórmula 2 com um composto de fórmula 3 na presença de um solventeadequado (por exemplo, sec-butanol, e similares). A reação procede emuma faixa de temperatura de cerca de 20°C a cerca de 80°C, e pode levaraté cerca de 24 horas para completar.

Os compostos de Fórmula I podem ser preparados pelo proce-dimento como no seguinte Esquema de Reação II:

Esquema de Reação II

<formula>formula see original document page 23</formula>

em que n, Ri e R2 são conforme definidos no Sumário da Invenção. Umcomposto de Fórmula Ib pode ser sintetizado pela reação de um compostode fórmula 5 com um composto de fórmula 6 na presença de um solventeadequado (por exemplo, sec-butanol, e similares), e um catalisador adequa-do (por exemplo, ácido p-toluenossulfônico mono-hidrato, e similares). A re-ação procede em uma faixa de temperatura de cerca de 60°C a cerca de130°C, e pode levar até cerca de 24 horas para completar.

Alternativamente, os compostos de Fórmula Ib podem ser sinte-tizados pela reação de um composto de fórmula 5 com um composto defórmula 6 na presença de um solvente adequado (por exemplo, dioxano, esimilares), e um catalisador adequado (por exemplo, acetato de paládio, esimilares), e um ligante adequado (por exemplo, XantPhos, e similares). Areação procede em uma faixa de temperatura de cerca de 60°C a cerca de130°C, e pode levar até cerca de 24 horas para completar.

Os compostos de Fórmula I podem ser preparados pelo proce-dimento como no seguinte Esquema de Reação III:

Esquema de Reação III

<formula>formula see original document page 24</formula>

em que n, Ri e R2 são conforme definidos no Sumário da Invenção. Umcomposto de Fórmula I pode ser sintetizado pela reação de um composto defórmula 4 com um composto de fórmula 3 na presença de um solvente ade-quado (por exemplo, sec-butanol, e similares). A reação procede em umafaixa de temperatura de cerca de 20°C a cerca de 80°C, e pode levar atécerca de 24 horas para completar.

Exemplos detalhados da síntese de um composto de Fórmula Ipodem ser encontrados nos Examplos, infra.

Processos Adicionais para Produção dos Compostos da Invenção

Um composto da invenção pode ser preparado como um sal deadição ácido farmaceuticamente aceitável pela reação de uma forma de ba-se livre do composto com um ácido inorgânico ou orgânico farmaceutica-mente aceitável. Alternativamente, um sal de adição base farmaceuticamen-te aceitável de um composto da invenção pode ser preparado pela reaçãoda forma ácida livre do composto com uma base inorgânica ou orgânica far-maceuticamente aceitável.

Alternativamente, as formas de sal dos compostos da invençãopodem ser preparadas usando-se sais dos materiais de partida ou interme-diários.

As formas de ácido livre ou base livre dos compostos da inven-ção podem ser preparadas a partir do sal de adição base, ou sal de adiçãoácido correspondente, respectivamente. Por exemplo, um composto da in-venção em uma forma de sal de adição ácido pode ser convertido à baselivre correspondente pelo tratamento com uma base adequada (por exemplo,solução de hidróxido de amônio, hidróxido de sódio, e similares). Um com-posto da invenção em uma forma de sal de adição base pode ser convertidoao ácido livre correspondente pelo tratamento com um ácio adequado (porexemplo, ácido clorídrico, etc).

Os compostos da invenção na forma não-oxidada podem serpreparados a partir de N-óxidos de compostos da invenção pelo tratamentocom um agente de redução (por exemplo, enxofre, dióxido de enxofre, trifenilfosfina, boroidreto de lítio, boroidreto de sódio, tricloreto de fósforo, tribrome-to, ou similares) em um solvente orgânico inerte adequado (por exemplo,acetonitrila, etanol, dioxano aquoso, ou similares) a 0 a 80°C.

Derivados de pró-fármaco dos compostos da invenção podemser preparados por métodos conhecidos àqueles versados na técnica (porexemplo, para detalhes adicionais ver Saulnier et al., (1994), Bioorganic andMedicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985). Por exemplo, pró-fármacosapropriados podem ser preparados pela reação de um composto não-derivatizado da invenção com um agente de carbamilação adequado (porexemplo, 1,1-aciloxialquilcarbanocloridato, para-nitrofenil carbonato, ou simi-lares).

Derivados protegidos dos compostos da invenção podem serproduzidos por meios conhecidos àqueles versados na técnica. Uma descri-ção detalhada de técnicas aplicáveis para a criação de grupos de proteção esua remoção pode ser encontrada em T. W. Greene, "Protecting Groups inOrganic Chemistry", 3a edição, John Wiley and Sons, Inc., 1999.

Os compostos da presente invenção podem ser conveniente-mente preparados, ou formados durante o processo da invenção, como sol-vatos (por exemplo, hidratos). Hidratos de compostos da presente invençãopodem ser convenientemente preparados por recristalização de uma misturade solvente aquoso/orgânico, usando-se solventes orgânicos tais como dio-xin, tetra-hidrofurano ou metanol.

Os compostos da invenção podem ser preparados como seusestereoisômeros individuais pela reação de uma mistura racêmica do com-posto com um agente de resolução oticamente ativo para formar um par decompostos diastereoisoméricos, separando os disastereoisômeros, e recu-perando os enantiômeros oticamente puros. Enquanto a resolução de enan-tiômeros pode ser efetuada usando-se derivados diastereoméricos covalen-tes dos compostos da invenção, complexos dissociáveis são preferidos (porexemplo, sais diastereoméricos cristalinos). Os diastereômeros têm proprie-dades físicas distintas (por exemplo, pontos de fusão, pontos de ebulição,solubilidades, reatividade, etc), e podem ser prontamente separados levan-do-se vantagem destas dissimilaridades. Os diastereômeros podem ser pre-parados por cromatografia, ou preferivelmente, por técnicas de separa-ção/resolução baseadas nas diferenças na solubilidade. O enantiômero oti-camente puro é, em seguida, recuperado, junto com o agente de resolução,por qualquer meio prático que não resultaria em racemização. Uma descri-ção mais detalhada das técnicas aplicáveis para a resolução de estereoisô-meros de compostos de sua mistura racêmica pode ser encontrada em JeanJacques, André Collet, Samuel H. Wilen, "Enantiomers, Racemates and Re-solutions", John Wiley And Sons, Inc., 1981.

Em sumário, os compostos da Fórmula I podem ser produzidospor um processo, que envolve:

(a) aqueles dos esquemas de reação I, II ou III; e(b) opcionalmente convertendo um composto da invenção emum sal farmaceuticamente aceitável;

(c) opcionalmente convertendo uma forma de sal de um compos-to da invenção em uma forma de não-sal;

(d) opcionalmente convertendo uma forma não-oxidada de umcomposto da invenção em um N-óxido farmaceuticamente aceitável;

(e) opcionalmente convertendo uma forma de N-óxido de umcomposto da invenção em sua forma não-oxidada;

(f) opcionalmente resolvendo um isômero individual de um com-posto da invenção de uma mistura de isômeros;

(g) opcionalmente convertendo um composto não-derivatizadoda invenção em um derivado de pró-fármaco farmaceuticamente aceitável; e

(h) opcionalmente convertendo um derivado de pró-fármaco deum composto da invenção em sua forma não-derivatizada.

Visto que a produção dos materiais de partida não é particular-mente descrita, os compostos são conhecidos, ou podem ser preparadosanalogamente a métodos conhecidos na técnica, ou conforme descritos nosExemplos aqui em seguida.

Um versado na técnica apreciará que as transformações acimasão somente representativas dos métodos para preparação dos compostosda presente invenção, e que outros métodos bem conhecidos podem sersimilarmente usados.

Exemplos

A presente invenção é adicionalmente exemplificada, mas nãolimitada, pelos exemplos seguintes que ilustram a preparação de compostosde Fórmula I de acordo com a invenção.

Exemplo 1

4-f2-(fenilamino-substituído)-pirimidin-4-in-1H-pirrolof2,3-b1-piridina

<formula>formula see original document page 27</formula><formula>formula see original document page 28</formula>

Preparação de 1H-Pirrolor2,3-blpiridina-7-óxido 2

<formula>formula see original document page 28</formula>

A uma solução de 7-azaindol (10g, 84,6 mmoles) em etil acetato(80 ml) é adicionado mCPBA (18,96 g, 103,21 mmoles) a 0°C por 30 minu-tos. A mistura de reação é trazida à temperatura ambiente, e agitada por 3horas. Ela é, em seguida, arrefecida a 0°C e agitada por 1 hora. O resíduo éfiltrado, lavado com etil acetato e secado para proporcionar N-óxido comoum sal de mCPBA.

Uma suspensão do sal acima em água (80 ml) é arrefecida a15°C, e 30% de K2C03 é adicionado para elevar o pH para 10. Após agita-ção por 1 hora à temperatura ambiente, a mistura de reação é arrefecida a0°C, e mantida agitando por 1 hora. O resíduo é filtrado e lavado com H20fria (10 ml). Ele é, em seguida, secado para proporcionar 7g de N-óxido.

Preparação de 4-Bromo-1H-pirrolof2,3-b1piridina (3)

<formula>formula see original document page 28</formula>Uma suspensão de 1H-pirrolo[2,3-b]piridina-7-óxido (6 g, 44,8

mmoles) e tetrametil-amônio brometo (5,17, 34 mmoles) em DMF (60 ml), éarrefecida a 0°C. Após agitação por 15 minutos, anidrido metanossulfônico(7,8 g, 44,8 mmoles) é adicionado na mesma temperatura. A suspensão étrazida à temperatura ambiente e agitada por 4 horas. A mistura de reação é,em seguida, derramada em água (100 ml) e a solução é neutralizada com50% de NaOH. A solução é arrefecida entre 0 e 10°C. O sólido resultante é,em seguida, filtrado e secado para proporcionar 4-bromo-7-azaindol: 1HRMN 600 MHz (DMSO-d6) õ 10.81 (brs, 1H), 8.36 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.63(cf, J = 3.2 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 3.6 Hz, 1H); MS m/z198.1 (M + 1).

Preparação de 4-Acetil-1H-pirrolor2,3-b1piridina (5)

<formula>formula see original document page 29</formula>

4-Bromo-7-azaindol (1 g, 5 mmoles) é dissolvido em THF (15 ml)e arrefecido a -78°C. n-BuLi (5,25 ml, solução 2 M, 2,1 eq.) é adicionado va-garosamente na mesma temperatura por 10 minutos. Após agitação por 45minutos, N-metóxi-N-metil-acetamida (1,1 ml, 10,5 mmoles) é adicionadovagarosamente na mesma temperatura. A mistura de reação é trazida devolta à temperatura ambiente, e agitada por 3 horas. Ela é, em seguida, res-friada rapidamente pela adição de NH4CI saturado (2 ml) a -78°C. A misturade reação é operada com etil acetato, e a camada orgânica é lavada comsalmoura e secada sobre NaS04. A evaporação do solvente sob vácuo re-sultou em composto bruto que é purificado por cromatografia de coluna desílica-gel usando-se hexano/etil acetato como um eluente: 1H RMN 600 MHz(DMSO-de) õ 11.02 (brs, 1H), 8.41 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 3.2 Hz,1H), 7.54 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.09 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 2.47 (s, 3H); MS m/z161.1 (M + 1).Preparação de Enaminona (7)

<formula>formula see original document page 30</formula>

Uma mistura de 4-Acetil-7-azaindol (1g, 6,2 mmoles) e reagentede Bredereck (2,56 ml, 12,4 mmoles) é irradiada por microondas a 110°C porhora. O reagente em excesso é removido sob vácuo para proporcionarenaminona que é usada para a próxima etapa sem purificação adicional.

Preparação de 4-r2-(fenilamino-substituído)-pirimidin-4-in-1 H-pirroloí2,3-bl-piridina (9).

<formula>formula see original document page 30</formula>

Uma mistura de enaminona (35 mg, 0,16 mmol), 3-bromofenilguanidina nitrato (48,57 mg, 0,178 mmol), LiOH (11,5 mg, 48mmoles) em sec-butanol (1 ml) é aquecida a 130°C por 24 horas. O solventeé removido por vácuo, e o sólido bruto resultante é purificado por sujeição aLC-MS de fase reversa para produção do composto do título: 1H RMN 600MHz (DMSO-de) 5 11.92 (brs, 1H), 9.83 (s, 1H), 8.65 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.38(d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.12 (t, J = 2 Hz, 1H), 7.77 (m, 1H), 7.69 (m, 1H), 7.65 (d,J =4.8 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 2 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.33 (t, J = 8.4Hz, 1H), 7.06-7.07 (m, 1H); MS m/z 366.2 (M + 1).

Exemplo 2a e 2b

Piridin-2-il-[4-(1H-pirrolor2,3-blpiridin-4-in-pirimidin-2-in-amina (2a) e (3-Bromo-4-metil-fenilH4-(1H-pirrolof2,3-blpiridin-4-il)-pirimidin-2-in-amina (2b)<formula>formula see original document page 31</formula>

Preparação de 4-f2-Cloro-pirimidin-4-il1-1H-pirroloí2,3-b1piridina (11)

A uma solução de 4-Bromo-7-azaindol (500mg, 2,5 mmoles)THF é adicionado n-BuLi (2.6 ml, solução de hexanos a 2 M, 2,1 eqv) a -78°C. A mistura de reação é mantida agitando na mesma temperatura por 45minutos. 2-Cloropirimidina (314,9 mg, 2,75 mmoles) em THF é, em seguida,adicionado gota a gota a -78°C. Após agitação por outras 2 horas, 1 ml deágua é adicionado, e agitação é continuada por outros 20 minutos. DDQ(618,7mg, 2,75 mmoles) em THF é, em seguida, adicionado na mesma tem-peratura, e a mistura de reação é ajustada para 0°C, e agitada por 1 hora.Ela é refriada rapidamente com NaOH a 1 N e operada com etil acetato. Acamada orgânica é lavada com solução de NaHCÜ3 saturada, salmoura eágua. O solvente orgânico combinado é secado (MgS04) e evaporado paraproduzir o composto bruto 4-pirimidina substituída azaindol. O composto épurificado por cromatografia de coluna de sílica-gel usando-se hexano/etilacetato como eluente: 1H RMN 600 MHz (DMSO-d6) õ 12.05 (brs, 1H), 8.91(d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.41 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.25 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.76 (d,J = 5.2 Hz, 1H), 7.72 (brs, 1H), 7.09 (brs, 1H); MS m/z 231.0 (M + 1).

Preparação de (3-Bromo-4-metil-fenilH4-(1 H-pirrolor2,3-b1piridin-4-iD-pirimidin-2-ill-amina (13)

<formula>formula see original document page 32</formula>

Um frasco Smith (2-5 ml_) é carregado com 11 (26,5 mg, 0,115mmol), 3-bromo-4-metilanilina (42,54 mg, 0,23 mmol) e ácido p-toluenossulfonico mono-hidrato (4,4mg, 0,023 mmol), sec-BuOH (0.5 ml_).Após purga com Argônio, o frasco é vedado e irradiado a 100°C por 1,5 horaem um Smith Synthesizer. A solução resultante é submetida a purificaçãopor LC-MS de fase reversa para produzir o composto do título: MS m/z380,04(M + 1).

Preparação de Piridin-2-il-í4-(1 H-pirroloí2,3-blpiridin-4-il)-pirimidin-2-il1-amina(15)

<formula>formula see original document page 32</formula>

A uma solução de 4-[2-Cloro-pirimidin-4-il]-1H-pirrolo[2,3-bjpiridina (26,5 mg, 0,12 mmol) em dioxano (1 ml_) é adicionado Pd(OAc)2(2,6 mg, 0,0115 mM), XantPhose (9,98 mg, 0,017 mmol), CsC03 (112,40mg, 0,345 mmol) e 2-aminopiridina ( 16,17 mg, 0,172 mmol). O frasco é pur-gado com Argônio, tampado, e submetido à radiação de microondas por 10minutos a 150°C. Ele é, em seguida, filtrado, e evaporado em vácuo. Ocomposto desejado é separado por LC-MS de fase reversa para produzir ocomposto do título: 1H RMN 600 MHz (DMSO-d6) õ 11.97 (brs, 1H), 11.55(brs, 1H), 8.79 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.37-8.35 (m, 2H), 8.12 (d, J = 4.8 Hz,1H), 7.84-7.83 (m, 2H), 7.70 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.65 (d, J =4.8 Hz, 1H),7.25-7.20 (m, 2H); (M + 1); MS m/z 289.10 (M + 1).

Exemplo 3

(3-Cloro-fenil)-r4-(1H-pirrolo[2.3-blpiridin-3-in-pirimidin-2-ill-amina

<formula>formula see original document page 33</formula>

4-Metóxi-1 H-pirrolo[2,3-b]piridina (16)

<formula>formula see original document page 33</formula>

4-Metóxi-1H-pirrolo[2,3-b]piridina é sintetizado a partir de 7-azaindol usando-se o procedimento reportado. [Cottan, H. B.; Girfis, N. S.;Robins, R. K. Journal of Heterocyclic Chemistry (1989), 26(2), 317-25].3-Acetil-1 H-pirrolo[2,3-b]piridina (17)

<formula>formula see original document page 33</formula>

7-Azaindol (1 g, 8,4 mmoles) é dissolvido em diclorometano, e asolução é adicionada em uma suspensão de AICI3 (5,6g, 42 mmoles) em di-clorometano à temperatura ambiente. Após agitação por 1 hora, acetil clore-to (1,8 ml, 25,2 mmoles) é adicionado vagarosamente na mesma temperatu-ra, e mantido agitando por 2 horas. Após completação (HPLC analítica), amistura de reação é arrefecida a 0°C, e 3 ml de metanol é adicionado cuida-dosamente de modo a resfriar rapidamente a reação. A mistura de reação éconcentrada, e o resíduo é lavado com hexanos. O resíduo é, em seguida,neutralizado como 30% de solução de NaOH, e é extraído com diclorometa-no. O filtrado é lavado (salmoura), secado (MgS04) e evaporado, para pro-duzir produto bruto. O produto bruto é obtido por recristalização com hexa-nos/diclorometano.

Preparação de Enaminona (19)

<formula>formula see original document page 34</formula>

Uma mistura de 3-Acetil-7-azaindol (1g, 6,2 mmoles) e reagentede Bredereck (2, 5 equiv) é irradiada por microondas a 110°C por 1 hora. Oreagente em excesso é removido sob vácuo, para proporcionar enaminonaque é usada sem purificação adicional.

Preparação de (3-Clorofenil)-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridina-3-il)-pirimidin-2-il]-amina (21)

<formula>formula see original document page 34</formula>

Uma mistura de enaminona (35 mg, 0,16 mmol), 3-clorofenilguanidina nitrato (41,29 mg, 0,178 equiv), LiOH (11,5 mg, 48 mmo-les) em sec-butanol (1 ml), é aquecida a 130°C por 24 horas. O solvente éremovido, e o resíduo é lavado com H20 e hexano para produzir o compostodesejado. O composto é purificado pela sujeição à LC-MS de fase reversapara produzir o composto do título: 1H RMN 600 MHz (DMSO-d6) õ 12.41 (s,1H), 9.71 (s, 1H), 8.90 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.53 (d, J = 2.8, 1H), 8.38 (d, J =5.6 Hz, 1H), 8.33 (dd, J = 4.4, 1.6 Hz, 1H), 7.85-7.83 (m, 2H), 7.39 (d, J = 2.4Hz, 2H), 7.38 (s, 1H), 7.24 (dd, J = 7.6, 4.4 Hz, 1H); MS m/z 322.14 (M + 1).

Pela repetição dos procedimentos descritos nos exemplos aci-ma, usando-se materiais de partida apropriados, os seguintes compostos deFórmula I, conforme identificados na Tabela 1, são obtidos.

Tabela 1

<table>table see original document page 35</column></row><table><table>table see original document page 36</column></row><table><table>table see original document page 37</column></row><table><table>table see original document page 38</column></row><table><table>table see original document page 39</column></row><table><table>table see original document page 40</column></row><table><table>table see original document page 41</column></row><table><table>table see original document page 42</column></row><table><table>table see original document page 43</column></row><table><table>table see original document page 44</column></row><table><table>table see original document page 45</column></row><table><table>table see original document page 46</column></row><table><table>table see original document page 47</column></row><table>Elmer), seguido pela adição de 50 nL de compostos dissolvidos em DMSO,em seguida 5 jil da segunda solução que contém o substrato (poly-EY) eATP em tampão de quinase foi adicionado a cada cavidade. As reações sãoincubadas à temperatura ambiente por uma hora, cessada pela adição de 10uL de mistura de detecção de HTRF, que contém Tris-HCI a 30 mM, pH 7,5,KF a 0,5 M, ETDA a 50 mM, 0,2 mg/mL de BSA, 15 ug/mL de streptavidin-XL665 (CIS-US, Inc.), e 150 ng/mL de anticorpo de antifosfotirosina conju-gada de criptato (CIS-US, Inc.). Após uma hora de incubação à temperaturaambiente para permitir interação de streptavidin-biotin, os sinais florescentesresolvidos de tempo são lidos em Analyst GT (Molecular Devices Corp.). Osvalores de IC5o são calculados por análise de regressão linear da percenta-gem de inibição de cada composto em 12 concentrações (1:3 diluição de 50uM a 0,28 nM). Neste ensaio, os compostos da invenção têm uma IC5o nafaixza de 10 nM a 2 uM.

FGFR3 (Ensaio Celular)

Os compostos da invenção são testados para sua capacidadede inibir proliferação de células Ba/F3-TEL-FGFR3 transformadas, que é de-pendente da atividade de quinase celular FGFR3. Ba/F3-TEL-FGFR3 sãocultivadas até 800.000 células/mL em suspensão, com RPMI 1640 suple-mentado com 10% de soro bovino fetal como o meio de cultura. As célulassão dispensadas em placa de formato de 384 cavidades em 5000 célu-las/cavidade em 50 uL de meio de cultura. Os compostos da invenção sãodissolvidos e diluídos em dimetilsufóxido (DMSO). Doze pontos 1:3 de dilui-ções seriais são produzidos em DMSO para criar gradientes de concentra-ções variando tipicamente de 10 mM a 0,05 uM. As células são adicionadascom 50 nL de compostos diluídos e incubadas por 48 horas no incubador decultura de célula. AlamarBIue® (TREK Diagnostic Systems), que pode serusado para monitorar o ambiente de redução criado por proliferação de célu-las, é adicionado às células na concentração final de 10%. Após quatro ho-ras adicionais de incubação em um incubador de cultura de célula de 37 °C,sinais fluorescentes de AlamarBIue® reduzido (Excitação a 530 nm, Emissãoa 580 nm) são quantificados em Analyst GT (Molecular Devices Corp.). Osvalores de IC5o são calculados pela análise de regressão linear da percenta-gem de inibição de cada composto em 12 concentrações.FLT3 (Ensaio Celular)

Os efeitos dos compostos da invenção na atividade celular deFLT3 são conduzidos usando-se métodos idênticos conforme descritos aci-ma para atividade celular de FGFR3, exceto que Ba/F3-FLT3-ITD é usadoao invés de Ba/F3-TEL-FGFR3.

KinaseProfiler® Interior - Ensaio de ligação de filtro rádio-enzimático

Os compostos da invenção são acessados para sua capacidadede inibir membros individuais do painel de quinase. Os compostos são testa-dos em duplicatas em uma concentração final de 10 piM seguindo seu proto-colo geral. Nota-se que a composição de tampão de quinase e os substratosvariam para as quinases diferentes incluídas no painel de "KinaseProfiler®Interior". O tampão de quinase (2,5nL, 10x - contendo MnCb quando reque-rido), quinase ativa (0,001-0,01 Unidades; 2.5(jL), peptídeo específico ouPoly(Glu4-Tyr) (5-500|aM ou 0,01 mg/ml) em tampão de quinase e tampãode quinase (50^M; 5jJ_) são misturados em um eppendorf em gelo. Umamistura de Mg/ATP (10/aL; 67,5 (ou 33,75) mM de MgCI2, 450 (ou 225)ATP e 1 )j.Ci/^l [y-32P]-ATP (3000Ci/mmol)) é adicionado, e a reação é incu-bada a cerca de 30°C por cerca de 10 minutos. A mistura de reação é colo-cada em um quadrado de papel (20|aL) em um 2cm x 2cm P81 (fosfocelulo-se, para substratos de peptídeo positivamente carregados) ou Whatman N°1 (para Poly (Glu4-Tyr) substrato de peptídeo). Os quadrados de ensaio sãolavados 4 vezes, por 5 minutos cada, com 0,75% de ácido fosfórico, e lava-dos uma vez com acetona por 5 minutos. Os quadrados de ensaio são trans-feridos para um frasco de contilação, 5 ml de coquitel de cintilação são adi-cionados, e incorporação 32P (cpm) ao substrato de peptídeo é quantificadacom um contador de cintilação Beckman. A percentagem de inibição é calcu-lada para cada reação.

Os compostos de Fórmula I, na forma livre, ou na forma de salfarmaceuticamente aceitável, exibe propriedades farmacológicas valiosas,por exemplo, conforme indicado pelos testes in vitro descritos neste pedido.Por exemplo, os compostos de Fórmula I preferivelmente mostram uma IC50na faixa de 1 x 10"10 a 1 x 10"5 M, preferivelmente menos do que 500nM,400nM, 300nM e 200nM para pelo menos uma das quinases listadas no pai-nel de quinase. Os compostos de Fórmula I, em uma concentração de 10^M,preferivelmente mostra uma percentagem de inibição de mais do que 50%,preferivelmente mais do que cerca de 70%, contra CDKs, Aurora, Jak2,Rock, CAMKII, FLT3, Tie2, TrkB, FGFR3 e/ou KDR quinases.

É para ser compreendido que os exemplos e concretizações a-qui descritos são para propostas ilustrativas, e que várias modificações oumudanças á luz destes serão sugeridas aos versados na técnica, e são paraserem incluídas dentro do espírito e campo de ação deste pedido e escopodas reivindicações em anexo. Todas as publicações, patentes, e pedidos depatente aqui citados são desse modo, aqui incorporados por referência paratodas as propostas.

Claims

1. Composto selecionado a partir da Fórmula Ia, Ib e Ic:<formula>formula see original document page 51</formula>em que:n é selecionado a partir de 0, 1 e 2;Ri é selecionado a partir de halo, Ci-6alquila, C-i-6alcóxi C-i-6alquila halo-substituída e Ci-6alcóxi halo-substituído;R2 é selecionado a partir de C6-ioaril-Co-4alquila e C5-ioheteroaril-Co-4alquila; no qual a referida arila ou heteroarila de R2 é opcionalmentesubstituída por 1-3 radicais independentemente selecionados a partir de ha-lo, C^alquila, Ci-6alcóxi, Ci-6alquila halo-substituída, Ci-6alcóxi halo-substituído, -S(O)0-2R5, -COOR5, - C(0)NR5Re e -NR5C(0)R6; no qual R5 éselecionado a partir de hidrogênio e Ci-6alquila; e R6 é selecionado a partirde C6-ioarila e C5.10heteroarila; na qual a referida arila ou heteroarila de R6 éopcionalmente substituída com 1 a 3 radicais independentemente seleciona-dos a partir de halo, Ci-6alquila, Ci-6alcóxi, Ci-6alquila halo-substituída e C-i-6alcóxi halo-substituído;X é selecionado a partir de CR7 ou N; no qual R7 é selecionado apartir de hidrogênio e C-i-6alquila; e os sais farmaceuticamente aceitáveis,hidratos, solvatos e isômeros destes.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, em que:n é selecionado a partir de 0 e 1;Ri é Ci.6alcóxi;R2 é selecionado a partir de C6-ioaril-Co-4alquila e C5.ioheteroaril-C0-4alquila; no qual referido arila ou heteroarila de R2 é opcionalmente substi-tuído por 1-3 radicais independentemente selecionados a partir de halo,Ci-6alquila, Ci-6alcóxi, d-6alquila halo-substituída, -S(0)o-2R5. -COOR5, e -NR5C(0)R6; no qual R5 é selecionado a partir de hidrogênio e C-|.6alquila; eR6 é C6-ioarila opcionalmente substituída com 1 a 3 radicais independente-mente selecionados a partir de Ci-6alquila halo-substituída.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 2, em que: Ri émetóxi; R2 é selecionado a partir de fenila, benzila e piridinila; na qual referi-da fenila, benzila ou piridinila de R2 é opcionalmente substituído com 1 a 2radicais independentemente selecionado a partir de cloro, bromo, flúor, meti-la, trifluorometóxi, trifluorometila, -COO2R5, -S(0)2R5 e -NHC(0)R6; no qualR5 é selecionado a partir de metila e etila; e Rg é fenila opcionalmente substi-tuído com trifluorometila.

4. Composto, de acordo com a reivindicação 1, selecionado apartir de (3-Cloro-fenil)-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina;(4-Flúor-fenil)-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; [4-(1 H-Pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-(4-trifluorometóxi-fenil)-amina; [4-(1 H-Pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-(3-trifluorometil-fenil)-amina; (3,4-Diflúor-fenil)-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; [4-(1 H-Pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-(4-trifluorometil-fenil)-amina; etil ésterde ácido 4-[4-(1H-Pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-ilamino]-benzóico; (3-Metóxi-fenil)-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (3-Flúor-benzil)-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (3,5-Dimetóxi-fenil)-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (2-Metil-piridin-4-il)-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (2-Cloro-piridin-4-il)-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (2-Metóxi-piridin-4-il)-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (4-Metanossulfonil-fenil)-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; Piridin-4-il-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (4-Metil-pirimidin-2-il)-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (3-Bromo-fenil)-[4-(1-metil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (3-Cloro-fenil)-4-(1-metil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; [4-(1-Metil-1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-(3-trifluorometil-fenil)-amina; (3-Bromo-4-metil-fenil)-[4-(1 -metil-1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; 2-{4-[2-(3-Bromo-fenilamino)-pirimidin-4-il]-pirrolo[2,3-b]piridin-1 -il}-etanol; 2-{4-[2-(3-Trifluorometil-fenilamino)-pirimidin-4-il]-pirrolo[2,3-b]piridin-1-il}-etanol; 2-{4-[2-(3-Cloro-fenilamino)-pirimidin-4-il]-pirrolo[2,3-b]piridin-1-il}-etanol; 2-{4-[2-(3-Bromo-4-metil-fenilamino)-pirimidin-4-il]-pirrolo[2,3-b]piridin-1-il}-etanol; {4-[1-(2-Amino-etil)-1H-pirrolo[2,3-b]piramina; {4-[1 -(2-Amino-etil)-1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il]-pirimidin-2-il}-(3-bromo-fenil)-metil-amina; {4-[1 -(2-Amino-etil)-1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il]-pirimidin-2-il}-(4-trifluorometil-fenil)-amina; N-{4-Metil-3-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-ilamino]-henil}-3-trifluorometil-benzamida; [4-(1H-Pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-il]-(4-trifluorometil-fenil)-amina; (3,5-Dimetóxi-fenil)-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-il]-amina; (3,5-Diflúor-fenil)-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-il]-amina; (3-Bromo-fenil)-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-il]-amina; (3-Metóxi-fenil)-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-il]-amina; (4-Cloro-fenil)-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-il]-amina; etil éster de ácido 4-[4-(1H-Pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-ilamino]-benzóico; N-{4-Metil-3-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-ilamino]-fenil}-3-trifluorometil-benzamida;(3-Cloro-fenil)-[4-(4-metóxi-1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-il]-amina;[4-(4-Metóxi-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-il]-(3-trifluorometil-fenil)-amina; (3-Bromo-fenil)-[4-(4-metóxi-1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-il]-amina; N-{4-Metil-3-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-pirimidin-2-ilamino]-fenil}--3-trifluorometil-benzamida; N-Etil-4-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin--2-ilamino]-benzenosulfonamida; N-(2-Metóxi-etil)-4-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-ilamino]-benzenossulfonamida; N-(3-Metóxi-propil)--4-[4-(1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-ilamino]-benzenosulfonamida; N-(3-Metóxi-propil)-4-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-3-il)-pirimidin-2-ilamino]-benzenosulfonamida; (3-Bromo-fenil)-[4-(2-metil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (3-Cloro-fenil)-[4-(2-metil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; [4-(2-Metil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-(3-trifluorometil-fenil)-amina; N-(2-Metóxi-etil)-4-[4-(2-metil-1 H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-ilamino]-benzenosulfonamida; N-(3-Metóxi-propil)-4-[4-(2-metil-1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-ilamino]-benzenosulfonamida; (3-Bromo-fenil)-[4-(1H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-amina; (3-Cloro-fenil)-[4-(1H-pirazolo[3,4-b]piridin-4-il)-pirimidin--2-il]-amina; [4-(1H-Pirazolo[3,4-b]piridin-4-il)-pirimidin-2-il]-(3-trifluorometil-fenil)-amina; (3-Cloro-fenil)-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-pirimidin-2-il]-amina; (3-Bromo-fenil)-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-pirimidin-2-il]-amina; e[4-(1H-Pirrolo[2,3-b]piridin-5-il)-pirimidin-2-il]-(3-trifluorometi

5. Composição farmacêutica compreendendo uma quantidadeterapeuticamente eficaz de um composto como definido na reivindicação 1,em combinação com um excipiente farmaceuticamente aceitável.

6. Método para tratamento de uma doença em um animal emque a inibição de atividade de quinase pode prevenir, inibir ou melhorar apatologia e/ou sintomatologia da doença, cujo método compreende adminis-trar ao animal uma quantidade terapeuticamente eficaz de um compostocomo definido na reivindicação 1.

7. Método, de acordo com a reivindicação 6, em que a quinase éselecionada a partir de CDKs, Aurora, Jak2, Rock, CAMKII, FLT3, Tie2,TrkB, FGFR3 e KDR.

8. Uso de um composto como definido na reivindicação 1 namanufatura de um medicamento para tratamento de uma doença em umanimal, em que a atividade de CDKs, Aurora, Jak2, Rock, CAMKII, FLT3,Tie2, TrkB, FGFR3 e KDR quinase contribui para a patologia e/ou sintomato-logia da doença.