BRPI0609095A2 - derivado polimérico de antagonista metabólico de citidina, agente antitumor e antiviral e método para produzir o referido derivado - Google Patents

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compound
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Akira Masuda
Takeshi Onda
Hiroko Mashiba
Keiichirou Yamamoto
Kazutoshi Takashio
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Nippon Kayaku Kk
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Abstract

DERIVADO POLIMéRICO DE ANTAGONISTA METABóLICO DE CITIDINA, AGENTE ANTITUMOR E ANTIVIRAL E MéTODO PARA PRODUZIR O REFERIDO DERIVADO. A presente invenção refere-se a um derivado de um antagonista metabólico de citidina que pode exercer um alto efeito terapêutico em uma dose inferior. Um derivado polimérico de um antagonista metabólico de citidina que compreende um composto polimérico tendo uma porção de polietileno glicol e uma porção de polimero tendo um grupo carboxila em uma cadeia lateral e um antagonista metabólico, que tem uma estrutura tal que o grupo carboxila na cadeia lateral do composto polimérico e um grupo amino no antagonista metabólico de citidina sejam ligados juntamente para formar uma ligação de amida.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "DERIVADO POLIMÉRICO DE ANTAGONISTA METABÓLICO DE CITIDINA".
Campo Técnico
A presente invenção refere-se a um derivado polimérico de um ' antimetabólito de citidina, uso destes, e um método para produzir o mesmo. Técnica Antecedente.
Vários metabólitos de citidina foram desenvolvidos para tratar tumores malignos ou doenças virais; citarabina, gencitabina e os semellhan-tes são clinicamente usados como agentes Anti-tumor (anticâncer) e zalcita-
bina, lamivudina e os semelhantes como agentes antivirais.
Entretanto, muitos destes antimetabólitos de citicina podem não exercer suficientemente a eficácia destes próprios ou requer-se que sejam administrados naltas doses porque eles são suscetíveis a metabolismo e excreção in vivo a despeito de forte exibição de atividades in vivo. Por meio
de exemplo, a gencitabina tem uma forte atividade de supressão de desenvolvimento celular, em vitro, comparável àquela de agentes anticâncer tais como paclitaxel e doxorubicina, porém necessita ser clinicamente fornecida em uma alta dose de 1,000 mg/m2 de área da superfície do corpo para cada administração. Isto é considerado ser devido aquele grupo amino na posição
4 da base ser metabolizado e inativado por citidina deamiase, uma enzima de metabolização para 2'-deoxicitidina para reduzir na disponibilidade in vivo deste (veja Documento de Não Patente 1).
Ligar um agente a um polímero pode algumas vezes melhorar os farmacocinéticos destes in vivo para realçar o efeito terapêutico. O docu-
mento de Não Patente 2 descreve um derivado polimérico em que a citarabina é ligada a um ácido poliglutâmico tendo um peso molecular médio de cerca de 30.000. Entretanto, um derivado polimérico de um agente ççççç zzzzz algumas vezes a reação de hipersensibilidade devido à reação imune e, em tal situação, não pode ser administrado em doses repetidas como um
agente.
O Documento de Patente 1 descreve um derivado polimérico em que um derivado de citidina é ligado a um polietileno glicol, e o Documentode Não Patente 3 descreve um derivado polimérico em que citarabina é ligada ao ácido aspártico em um polietileno glicol tendo o ácido aspártico substi-duído em uma forma ramificada em ambas extremidades deste. Entretanto, existe também um problema da possibilidade de que os efeitos terapêuticos destes derivados poliméricos na clínica sejam enormemente afetados por diferenças individuais entre os pacientes visto que o agente libera-se dos derivados, largamente depende da reação de hidrólise por enzima in vivo.
O Documento de Patente 2 descreve que as moléculas em cada das quais um agente é ligado a um polímero tipo bloco obtido por condensa- ção de polietileno glicol com micelas em forma de ácido poliaspártico para fornecer um medicamento. Além disso, Documento de Patente 3 descreve um polímero em que uma substância anticâncer é ligada aos grupos carboxi-la de cadeia lateral de ácido glutamico de um polímero tipo bloco obtido por condensação de um polietileno glicol com ácido poliglutâmico. Entretanto, estes Documentos de Patentes não descrevem nenhum antimetabólito de citidina como agentes de ligação.
Documento de Não Patente 1: Câncer Science, Japanese Câncer Association, Vol, 95, p. 105-111 (2004)
O Documento de Não Patente 2: Câncer Research, American Association for Câncer Research, Vol. 44, p. 25-30 (1984)
O Documento de Não Patente 3: Journal de Controlled Release Isevier, England), Vol. 79: p. 55-70 (2002)
Documento de Patente 1: Pedido de Patente Japonesa Aberta ao Púbico (KOIJXO) No. 2003-524028 Documento de Patente 2: Patente Japonesa No. 2694923
Documento de Patente 3: Pedido de Patente Japonesa Aberta ao Público (KOKAI) ne 05-000955 Descrição da Invenção
Problemas a serem solucionados pela Invenção
Um objetivo da presente invenção é fornecer um antimetabólitode citidina tendo uma eficácia maior em uma dose inferior e servir como um novo agente anticâncer ou antiviral.Meios para Solucionar os Problemas
Como o resultado de intensivos estudos para solucionar os problemas acima, os presentes inventores descobriram um derivado polimérico de um antimetabólito de citidina, particularmente, aquele que compreende uma estrutura em que o grupo amino na posição 4 de um antimetabólito de citidina é ligado por amida a um grupo carboxila de um composto polimérico constituído de uma porção de polietileno glicol e uma porção polímera tendo grupos carboxila nas cadeias laterais, desse modo realizando a presente invenção.
Especificamente, a presente invenção refere-se aos seguintes (1) a (13).
(1) Um derivado polimérico de um antimetabólito de citidina, que compreende uma estrutura em que um grupo amino de um antimetabólito de citidina é ligado por amida a um grupo carboxila em uma cadeia lateral de um composto polimérico constituído de uma porção de polietileno glicol e
uma porção polímera tendo grupos carboxila nas cadeias laterais.
(2) O derivado polimérico de um antimetabólito de citidina como descrito no item (1) acima, em que a porção polímera tendo grupos carboxila nas cadeias laterais compreende uma cadeia de ácido poliglutâmico.
(3) O derivado polimérico de um antimetabólito de citidina como descrito no item (1) ou (2) acima, em que o derivado é um composto representado pela Fórmula geral (1).
Fórmula 1
<formula>formula see original document page 4</formula>
em que R representa um átomo de hidrogênio ou um grupo C1 a C6 alquila; A representa um átomo de hidrogênio, um grupo C1 a C6 acila, ou um grupo C1 a C6 alcoxicarbonila; m representa 3 a 200 como um valor médio; n re-presenta 5 a 2.000 como um valor médio; X representa um resíduo de anti-metabólito de citidina, um grupo hidroxila, ou um substituinte hidrofóbico; e X representa um resíduo de antimetabólito de citidina em 3 a 100% de m, um grupo hidroxila em 0 a 95% de m e um substituinte hidrofóbico em 0 a 80% 5 de m.
(4) O derivado polimérico de um antimetabólito de citidina como descrito no item (3) acima, em que R representa um grupo C1 a C3 alquila; A representa um grupo C2 a C4 acila; m representa 5 a 100 como um valor médio; n representa 50 a 1,000 como um valor médio; e o resíduo antimeta-10 bólito de citidina representa um grupo representado pela Fórmula (2):
em que Z representa um átomo de hidrogênio ou um átomo de flúor; -Rf representa um grupo selecionado do grupo consistindo em substituintes de Fórmula (3):
(5) O derivado polimérico de um antimetabólito de citidina como 15 descrito no item (3) acima, em que R representa um grupo metila; A repre-senta um grupo acetila; m representa 10 a 60 como um valor médio; n representa 100 a 300 como um valor médio; X representa um resíduo de anti-metabólito de citidina ou um grupo hidroxila; e o antimetabólito de citidina representa citarabina, gencitabina, ou 5'-deóxi-5-fluorocitidina. (6) O derivado polimérico de um antimetabólito de citidina como
descrito no item (3) ou (4) acima, em que o substituinte hidrofóbico representa um derivado de a-aminoácido representado pela Fórmula (4):
<formula>formula see original document page 6</formula>
em que Q representa uma cadeia lateral de um aminoácido neutro; W representa um grupo C1 a C6 alquila ou um grupo benzila.(7) O derivado polimérico de um antimetabólito de citidina como
descrito no item (6) acima, em que Q representa um grupo isopropila ou um grupo benzila; e W representa um grupo benzila.
(8) O derivado polimérico de um antimetabólito de citidina como descrito no item (3) ou (4) acima, em que o substituinte hidrofóbico represen- ta um grupo representado pela Fórmula (5): [Fórmula 5]
0-T(5)
em que T representa um grupo C1 a C6 alquila opcionalmente substituído por um grupo fenila. (9) O derivado polimérico de um antimetabólito de citidina como
descrito no item (8) acima, em que T representa um grupo benzila, um grupo 3-fenilpropila, um grupo 4-fenilbutila, ou um grupo 5-fenilpentila.
(10) O derivado polimérico de um antimetabólito de citidina como descrito no item (3) acima, em que R representa um grupo metila; A re- presenta um grupo acetila; m representa 10 a 60 como um valor médio; n representa 100 a 300 como um valor médio; o antimetabólito de citidina representa citarabina, gencitabina, ou 5'-deóxi-5-fluorocitidina; e o substituintehidrofóbico representa um grupo benzilóxi, um grupo 4-fenilbutóxi, um grupo (1-benziloxicarbonil-2-metil)propilamino, ou um grupo (1-benziloxicarbonil-2-fenil)etilamino.
(11) Um agente Anti-tumor compreendendo o derivado poliméri- co de um antimetabólito de citidina como descrito em qualquer um dos itens
(1) a (10) acima como um ingrediente medicinal.
(12) Um agente antiviral compreendendo o derivado polimérico de um antimetabólito de citidina como descrito em qualquer um dos itens (1) a (10) acima como um ingrediente medicinal.
(13) Um método para produzir o derivado polimérico de um an-
timetabólito de citidina como descrito em qualquer um dos itens (1) a (10) acima, compreendendo ligação por amida, usando um agente de condensação por desidratação em um solvente orgânico, um grupo amino de um antimetabólito de citidina a um grupo carboxila em uma cadeia lateral de um composto polimérico constituído de uma porção de polietileno glicol e uma porção polímera tendo grupos carboxila nas cadeias laterais. Efeito da Invenção
O derivado polimérico de um antimetabólito de citidina de acordo com a presente invenção tem uma estrutura em que um grupo amino na po- sição 4 de um metabólito de citidina é ligado por amida a um grupo carboxila de um composto polimérico constituído de uma porção de polietileno glicol e uma porção polímera tendo grupos carboxila nas cadeias laterais. O derivado pode liberar lentamente o antimetabólito de citidina in vivo e é útil como um agente anticâncer ou antiviral tendo um excelente efeito terapêutico em uma dose inferior. Além disso, tendo a propriedade de liberar lentamente o agente independentemente da enzima torna o derivado aquele cujo efeito terapêutico é menos afetado por diferenças individuais entre os pacientes. O derivado polimérico formando micelas seletivamente acumula-se na parte afetada e serve como um agente tendo uma eficácia maior com efeitos cola- terais reduzidos.
Breve Descrição dos Desenhos
A figura 1 é um gráfico mostrando os cursos de tempo de libera-ção de agente na ausência de enzima; e
A figura 2 é um gráfico mostrando os cursos de tempo de liberação de agente em plasma de camundongo. Melhor Modo para Realizar a Invenção O derivado polimérico de um antimetabólito de citidina de acordo
com a presente invenção compreende uma estrutura em que um grupo ami-no de um antimetabólito de citidina é ligado por amida a um grupo carboxila em uma cadeia lateral de um composto polimérico constituído de uma porção de polietileno glicol e uma porção polímera tendo grupos carboxila nas cadeias laterais.
Para o propósito da presente invenção, "antimetabólito de citidina" não é particularmente limitado, contanto que ele seja um derivado de 4-aminopirimidin-2-ona enquanto que sendo um composto tendo uma atividade Anti-tumor ou antiviral, e refere-se a um composto representado pela , Fórmula (2) na porção de base de ácido nucléico é citosina (em que Z é um átomo de hidrogênio) ou 5-fluorocitosina (em que Z é um átomo de flúor); e o grupo (Rf) ligado a ele é um grupo selecionado do grupo consistindo nos substituintes da Fórmula (3) acima.
Exemplos específicos destes incluem citarabina, gencitabina, 2'- deóxi-2'-metilidenecitidina (DNIDC), tezacitabina, zalcitabina, lamivudina, 5'-deóxi-5-fluoroeitidina (5'-DFCR), troxacitabina, citosina de 2'-C-ciano-2'-deóxi-1-0 -D-arabinofuranosila (CNDAC), 3'-etinilcitidina, e (-)-P-L-dioxolanecitidina.
De acordo com a presente invenção, exemplos da porção polí- mera tendo grupos carboxila nas cadeias laterais no "composto polimérico constituído de uma porção de polietileno glicol e uma porção polímera tendo grupos carboxila nas cadeias laterais" incluem um polímero tipo enxerto em que as cadeias de ácido carboxílico ramificam-se da espinha dorsal polímera ou um polímero tipo bloco em que os polímeros de ácido policarboxílicos são condensados.
Exemplos do composto polimérico em que a porção polímera tendo grupos carboxila nas cadeias laterais é o polímero tipo enxerto inclu-em um polímero obtido, por exemplo, pela reação de copolimerização de um condensado de polietileno glicol e um ácido acrílico com um ácido acrílico, anidrido maléico ou os semelhantes, seguido por reação de hidrólise opcional como descrito no Pedido de Patente Japonesa Aberta ao Púbico (KO- KAI) No. 11-279083.
Exemplos do composto polimérico em que a porção polímera tendo grupos carboxila nas cadeias laterais é o polímero tipo bloco incluem um composto em que um polietileno glicol tendo um grupo funcional terminal é ligado a um ácido policarboxílico tendo um grupo funcional na extremida- de, ou um composto obtido por reação de polimerização de um composto ativado por aminoácido em que a polimerização inicia-se com um polietileno glicol tendo um grupo amino na extremidade como descrito no Documento de Patente 3.
Exemplos do polímero tendo grupos carboxila nas cadeias late- rais incluem ácido poliacrílico, ácido polimetacrílico, ácido polimálico, e ácido poliglutâmico; ácido poliglutâmico é o preferido.
Para propósito da presente invenção, "polietileno giicor pode ser um derivado de polietileno glicol, ambas ou uma extremidade da qual é modificada, em cujo caso os grupos modificando ambas as extremidades po- dem ser idênticos ou diferentes. Exemplos do grupo de modificação de terminal incluem um grupo C1 a C6 alquila opcionalmente tendo um substituin-te; um grupo C1 a C4 alquila é preferido opcionalmente tendo um substituin-te.
Exemplos do grupo C1 a C6 alquila no grupo C1 a C6 alquila opcionalmente tendo um substituinte incluem um grupo C1 a C6 alquila de cadeia linear, ramificada ou cíclica. Exemplos específicos deste incluem um grupo metila, um grupo etila, um grupo propila, um grupo isopropila, um grupo butila, um grupo isobutila, um grupo t-butila, um grupo pentila, um grupo isopentila, um grupo 2-metilbutila, um grupo neopentila, um grupo 1- etilpropila, um grupo hexila, um grupo 4-metilpentila, um grupo 3-metilpentila, um grupo 2-metilpentila, um grupo 1-metilpentila, um grupo 3,3-dimetilbutila, um grupo 2,2-dimetilbutila, um grupo 1,1-dimetilbutila, um grupo 1,2-dimetilbutila, um grupo 1,3-dimetilbutila, um grupo 2,3-dimetilbutila, um grupo 2-etilbutila, um grupo ciclopropila, um grupo ciclopropila, e um cicloexila. Um grupo C1 a C4 alquila é preferido; exemplos específicos deste incluem um grupo metila, um grupo etila, um grupo n-propila, um grupo isopropila, um ' grupo n-butila, um grupo s-butila, e um grupo t-butila. Particularmente preferido é um grupo metila, um grupo etila, um grupo n-propila, ou um grupo isopropila.
O substituinte no grupo C1 a C6 alquila opcionalmente tendo um substituinte não é particularmente limitado; entretanto, os exemplos deste incluem um grupo amino, um grupo metilamino, um grupo dimetilamino, um grupo etilamino, e um grupo dietilamino. Um grupo amino é preferido.
De acordo com a presente invenção, o derivado de polietileno glicol, ambas extremidades do qual são modificadas, é preferível. Exemplos específicos deste incluem um derivado de polietileno glicol tendo um grupo C1 a C6 alquila naquela extremidade e um grupo amino-C1 a C4 alquila na outra extremidade. O derivado de polietileno glicol é preferido tendo um grupo grupo C1 a C3 alquila naquela extremidade e um grupo amínopropiia na outra extremidade.
De acordo com a presente invenção, "polietileno glicol" tem um peso molecular de média de peso de cerca de 200 a 500,000, preferivelmente cerca de 500 a 100,000, mais preferivelmente cerca de 2,000 a 50,000.
De acordo com a presente invenção, o "composto polimérico constituído de uma porção de polietileno glicol e uma porção polímera tendo grupos carboxila nas cadeias laterais" é preferivelmente um polímero tipo bloco, mais preferivelmente um copolímero de bloco de um polietileno glicol com um polímero tendo grupos carboxila nas cadeias laterais.
Exemplos do copolímero de bloco de um polietileno glicol com um polímero tendo grupos carboxila nas cadeias laterais incluem um um ácido alcoxipolietileno glicol-poliacrílico, um ácido alcoxipolietileno glicol- poli- metacrílico, e um ácido alcoxipolietileno glicol-poliglutâmico; ácido metoxipo-lietileno glicol-poliglutâmico é preferido.
De acordo com a presente invenção, o "composto poliméricoconstituído de uma porção de polietileno glicol e uma porção polímera tendo grupos carboxila nas cadeias laterais tem um número de grupo carboxila médio por molécula de cerca de 3 a 200, preferivelmente cerca de 5 a 100, mais preferivelmente cerca de 10 a 60.
De acordo com a presente invenção, o "composto poliméricoconstituído de uma porção de polietileno glicol e uma porção polímera tendo grupos carboxila nas cadeias laterais" tem um peso molecular de média de peso de cerca de 500 a 500,000, preferivelmente cerca de 2,000 a 100,000, mais preferivelmente cerca de 3,000 a 50,000.
De acordo com a presente invenção, a quantidade do antimeta-bólito de citidina ligado por amida ao composto polimérico constituído de uma porção de polietileno glicol e uma porção polímera tendo grupos carboxila nas cadeias laterais não é particularmente limitada contato que ela esteja incluída na faixa de um ao número total dos grupos carboxila para cada composto polimérico, e pode ser aquela quantidade que é suficiente para exercer o efeito de fármaco quando o composto é administrado in vivo.
O preferido é 3 a 100%, mais preferivelmente 5 a 70%, do número de grupo carboxila total do polímero.
A quantidade de ligação acima pode ser determinada da intensi- dade de espectro de absorção de ultravioleta do composto da presente invenção. A quantidade pode também ser determinada submetendo-se o derivado polimérico de um antimetabólito de citidina de acordo com a presente invenção à hidrólise alcalina para quantificar o antimetabólito de citidina liberado, por exemplo, por cromatografia líquida de alto desempenho.
Um composto típico como o derivado polimérico de um antime-tabólito de citidina de acordo com a presente invenção é um composto representado pela Fórmula geral acima (1), em que R representa um átomo de hidrogênio ou um grupo C1 a C6 alquila; A representa um átomo de hidrogênio, um grupo C1 a C6 acila, ou um grupo C1 a C6 alcoxicarbonila; m repre-senta 3 a 200 como um valor médio; n representa 5 a 2.000 como um valor médio; X representa um resíduo de antimetabólito de citidina, um grupo hi-droxila, ou um substituinte hidrofóbico; X representa o resíduo antimetabólitode citidina em 3 a 100% de m, o grupo hidroxila em 0 a 95% de m e o substi-tuinte hidrofóbico em 0 a 80% de m.
Na fórmula (1), o grupo C1 a C6 alquila para R tem o mesmo significado como o grupo alquila acima descrito; um grupo preferível é tam- ' bém o mesmo como acima.
Exemplos do grupo C1 a C6 acila para A na Fórmula (1) incluem um grupo formila, um grupo acetila, um grupo propionila, um grupo butirila, um grupo isobutirila, um grupo valerila, um grupo isovalerila, a pivaloyl group, e a hexanoyl group. É preferido um grupo C2 a C4 acila, por exemplo, um grupo acetila ou propionila; um grupo acetila é mais preferido.
Exemplos do grupo C1 a C6 alcoxicarbonila para A na Fórmula (1) incluem um grupo metoxicarbonila, um grupo etoxicarbonila, um grupo propoxicarbonila, um grupo isopropoxicarbonila, um grupo n-butoxicarbonila, um grupo terc-butoxicarbonila, um grupo pentoxicarbonila, um grupo hexilo-15 xicarbonila, um grupo ciclopropoxicarbonila, um grupo ciclopentiloxicarbonila, e um grupo cicloexiloxicarbonila. É preferido um grupo metoxicarbonila, um grupo etoxicarbonila, um grupo propoxicarbonila, um grupo isopropoxicarbonila, um grupo butoxicarbonila, ou um grupo terc-butoxicarbonila; é mais preferido um grupo etoxicarbonila ou um grupo terc-butoxicarbonila.
Na Fórmula (1), m é, como um valor médio, 3 a 200, preferivel-
mente 5 a 100, mais preferivelmente 10 a 60.
Na Fórmula (1), n is, como um valor médio, 5 a 2,000, preferivelmente 50 a 1,000, mais preferivelmente 100 a 300,
Na Fórmula geral (1) para o derivado polimérico de um antime- tabólito de citidina de acordo com a presente invenção, os derivados de ácido glutâmico em cada um do qual X é um resíduo de antimetabolito de citidina, um grupo hidroxila ou um substituinte hidrofóbico pode ser ligado aleatoriamente ou por formação de blocos.
Na Fórmula (1), o resíduo antimetabolito de citidina para X signi- fica o resíduo do antimetabolito de citidina acima; exemplos particularmente preferidos do antimetabolito de citidina incluem citarabina, gencitabina, e 5'-deóxi-5-fluorocitidina.Na Fórmula (1), exemplos do substituinte hidrofóbico para X incluem vários substituintes; o substituinte não é particularmente limitado contato que ele não prejudique o exercício do efeito do fármaco do derivado po-limérico de um antimetabólito de citidina. Entretanto, exemplos preferidos deste incluem um derivado de a-aminoácido representado pela Fórmula (4) acima, em que Q representa uma cadeia lateral de um aminoácido neutro; W representa um grupo C1 a C6 alquila ou um grupo benzila, e um grupo representado pela Fórmula (5) acima, em que T representa um grupo C1 a C6 alquila opcionalmente substituído por um grupo fenila.
Exemplos da cadeia lateral de um aminoácido neutro para Q na
Fórmula (4) incluem resíduos de aminoácidos naturais, tais como um átomo de hidrogênio, um grupo metila, um grupo isopropila, um grupo isobutila, um grupo s-butila, um grupo benzila, um grupo hidroximetila, um grupo 1-hidroxietila, um grupo carbamoilmetila, e um grupo 2-carbamoiletila, e deri-
vados de resíduos de aminoácidos, tais como um grupo terc-butoxymetila, um grupo benziloximetila, um grupo benziloxicarbonilmetila, e um grupo 2-benziloxicarboniletila. Exemplos preferidos deste incluem um grupo isopropila, um grupo isobutila, um grupo s-butila, um grupo benzila, um grupo benziloximetila, um grupo benziloxicarbonilmetila, e um grupo 2-
benziloxicarboniletila; mais preferido é um grupo isopropila, um grupo benzila, um grupo benziloximetila, ou grupo 2-benziloxicarboniletila; particularmente preferido é um grupo isopropila ou um grupo benzila.
Exemplos do grupo C1 a C6 alquila para W na Fórmula (4) incluem o mesmo grupo como o grupo alquila acima; um grupo preferível é o
mesmo como acima.
O grupo C1 a C6 alquila para T na Fórmula (5) tem o mesmo significado como o grupo alquila acima descrito; um grupo preferível é também o mesmo como acima. Exemplos do grupo representado pela Fórmula (5) incluem um grupo metóxi, um grupo etóxi, um grupo n-propóxi, um grupo
isopropóxi, um grupo n-butóxi, um grupo terc-butóxi, um grupo n-pentilóxi, um grupo n-hexilóxi, um grupo ciclopropilóxi, um grupo ciclopentilóxi, um ci-cloexilóxi, um grupo cicloexilmetóxi, um grupo benzilóxi, um grupo 2-fenetilóxi, um grupo 3-fenilpropóxi, um grupo 4-fenilbutóxi, um grupo 5-fenilpentilóxi, e um grupo difenilmetóxi.
Exemplos do substituinte hidrofóbico também incluem grupos amino tais como grupo metilamino, um grupo etilamino, um grupo n-' propilamino, um grupo isopropilamino, um grupo n-butilamino, um grupo iso-butilamino, um grupo n-pentilamino/ um grupo n-hexilamino, um ciclopropi-lamino, um grupo ciclopentilamino, um grupo cicloexilamino, um grupo ciclo-exilmetilamino, um grupo dicicloexilmetilamino, um grupo anilino, um grupo benzilamino, um grupo 2-fenetilamino, um grupo 3-fenilpropilamino, um gru- po 4-fenilbutilamino, e um grupo difenilmetilamino.
O substituinte hidrofóbico para X na Fórmula (1) é particularmente preferivelmente um grupo benzilóxi, um grupo 3-fenilpropóxi, um grupo 4-fenilbutóxi, um grupo 5-fenilpentóxi, um grupo (1-benziloxicarbonil-2-metil)propilamino ou um grupo (1-benziloxicarbonil-2-fenil)etilamino, e mais , particularmente preferivelmente um grupo benzilóxi, um grupo 4-fenilbutóxi, um grupo (1-benziloxicarbonil-2-metil) propilamino ou um grupo (1-benziloxicarbonil-2-fenil)etilamino.
Na Fórmula (1), a proporção de um resíduo de antimetabólito de citidina para X é de 3 a 100%, preferivelmente 5 a 70% com base no número total de grupo carboxila (m) do polímero; a proporção de um grupo hidroxila para X é de 0 a 95%, preferivelmente 5 a 70% com base no m; e a proporção de um substituinte hidrofóbico para X é de 0 a 80%, preferivelmente 20 a 70% com base nisso.
No derivado polimérico de um antimetabólito de citidina de acor- do com a presente invenção, quando um grupo carboxila de cadeia lateral ao qual o antimetabólito de citidina não é ligado estiver presente, o grupo carboxila pode ser em uma forma livre ou em forma de sal alcalino. Quando obtido em uma forma livre, o grupo carboxila pode ser convertido em uma forma de sal desejado por um método conhecido per se ou um método com base nisso. Inversamente, quando obtido em uma forma de sal, o grupo carboxila pode ser convertido em uma forma livre ou outra forma desejada de sal por um método conhecido per se ou um método com base nisso.Exemplos dos sais alcalinos incluem sais de lítio, sódio, potássio, magnésio, amônio e trietilamônio.
No derivado polimérico de um antimetabólito de citidina de acordo com a presente invenção, as unidades estruturais constituindo a porção polímera tendo substâncias oticamente ativas, um racemato, ou uma mistura destes em qualquer proporção. Por exemplo, quando a porção polímera tendo grupos carboxila nas cadeias laterais é um derivado de ácido poliglutâmi-co, o derivado pode ser um polímero em que ácido poli-L-glutâmico, ácido poli-D-glutâmico, e um ácido L-glutâmico substituído por cadeia lateral ou um ácido D-glutâmico substituído por cadeia lateral são ligados em qualquer ordem em qualquer proporção.
Particularmente preferidos exemplos do derivado polimérico de um antimetabólito de citidina de acordo com a presente invenção incluem os compostos mostrados na Tabela 1 abaixo. . Na Tabela 1, Bzl indica um grupo benzila; Vai, valina; Phe, feni-
lalanina; e C4H8Ph, um grupo 4-fenilbutila. Na X, as percentagens de substituição são valores aproximados; o resto diferente do resíduo e grupo descrito na Tabela é um grupo hidroxila. Como antimetabólito de citidinas para X, citarabina, gencitabina, 5'-deóxi-5-fluorocitidina, 2'-deóxi-2-metilidenecitidina (DMDC), 3'-etinilcitidina, citosina de 2'-C-ciano-2'-deóxi-l-p-D-arabinofuranosila (CNDAC) e (-)-(3-L-dioxolanecitidina são os seguintes compostos.
<formula>formula see original document page 15</formula>Citarabina
Gencitabina
5'-deóxi-5-fluorocitidina<formula>formula see original document page 16</formula>
<table>table see original document page 16</column></row><table><table>table see original document page 17</column></row><table>
Por meio de exemplo não limitante particular, o derivado poli-mérico de um antimetabólito de citidina de acordo com a presente invenção pode ser produzido por condensação, usando um agente de condensação por desidratação em um solvente orgânico, um antimetabólito de citidina 5 com o copolímero de bloco de ácido metoxipolietileno glicol - poliglutâmico preparado de acordo com o método descrito no Documento de Patente 3.O solvente usado na reação acima não é particularmente limitado contanto que ele permita a reação prossegir; entretanto, exemplos deste incluem um hidrocarboneto aromático tal como tolueno e xileno, um hidro-carboneto halogenado tal como cloreto de metileno, clorofórmio e 1,2- ' dicloroetano, um éter tal como tetraidrofurano, dioxano, dimetoxietano e éter de dimetila de dietileno glicol, um nitrilo tal como acetonitrilo e propionitrilo, uma amida tal como dimetilformamide, dimetilacetamida e N-metilpirrolidona, uma uréia tal como 1,3-dimetilimidazolidinona, e um solvente misto destes. A amida ou a uréia é preferível; mais preferido é dimetilformamida ou 1,3- dimetilimidazolidinona.
O agente de condensação por desidratação usado na reação acima não é particularmente limitado contanto que permita o progresso da reação de condensação de um grupo amino na posição 4 de um antimetabólito de citidina com o grupo carboxila; entretanto, exemplos preferidos deste incluem DMT-MM(4-(cloreto de 4,6-dimetóxi-1,3,5-triazin-2-il)-4-metilmorfolínio) e 2-etóxi-1 -etoxicarbonil-1,2-diidroquinolina'
A temperatura de reação na reação acima é tipicamente de 4 a 60°C, preferivelmente 15 a 50°C.
Após a reação acima, um meio de separação conhecido per se pode ser apropriadamente aplicado tal como, por exemplo, concentração a vácuo, extração de solvente, cristalização, diálise e cromátografia, se necessário, isolar e purificar um composto desejado.
Pelo método acima, um derivado polimerico pode ser obtido em que X consiste em um resíduo de antimetabólito de citidina sozinho ou de um resíduo de antimetabólito de citidina e um grupo hidroxila.
Quando o derivado polimerico de um antimetabólito de citidina de acordo com a presente invenção tiver um substituinte hidrofóbico, o derivado pode ser produzido por condensação, usando um agente de condensação por desidratação em um solvente orgânico, um grupo amino de um antimetabólito de citidina com um grupo carboxila não substituído em uma cadeia lateral de um composto polimerico constituído da seguinte porção polietileno glicol e uma porção polímera tendo grupos carboxila nas cadeiaslaterais que é obtido introduzindo-se um substituinte hidrofóbico em uma parte do grupo carboxila do copolímero de bloco de metoxipolietileno glicol -ácido poliglutâmico preparado, por exemplo, de acordo com o método descrito no Documento de Patente 3. O substituinte hidrofóbico é introduzido da seguinte maneira. Por
exemplo, quando o substituinte hidrofóbico for um grupo alcóxi, a introdução é realizada condensando-se um álcool correspondente com o grupo carboxila (esterificação) usando um agente de condensação por desidratação em um solvente ou submetendo um haleto de alquila correspondente ou os se-
melhantes e o grupo carboxila à reação de substituição nucleofílica na presença de uma base em um solvente. Por exemplo, quando o substituinte hidrofóbico for um grupo amino substituído, o derivado tendo o substituinte pode ser produzido condensando-se uma amina correspondente com o grupo carboxila (amidação) usando um agente de condensação por desidrata-
ção em um solvente.
O solvente usado na condensação por desidratação acima (esterificação) não é particularmente limitado contanto que permita a reação prossegir. Entretanto, o mesmo solvente pode ser usado como alquele usá-vel na condensação por desidratação do copolímero de bloco de ácido me-
toxipolietileno glicol-poliglutâmico acima com um antimetabólito de citidina; um solvente preferível é também o mesmo como acima. O agente de condensação por desidratação não é particularmente limitado contanto que permita o progresso da condensação por desidratação de um álcool com um grupo carboxila; entretanto, é preferido dicicloexilcarbodiimida, diisopropil-
carbodiimida, 1-dimetilaminopropil-3-etilcarbodiimida, carbonildiimidazol, iso-butila cloroformiato, ou cloreto de ácido piválico.
Um auxiliar de reação pode ser usado na na reação de condensação por desidratação; exemplos deste incluem N-hidroxissucinimida, 1-hidroxibenzotriazol, 4-dimetilaminopiridina e 2,6-di-t-butil-4-metilpiridina.
A temperatura de reação na reação de condensação por desi-
dratação é tipicamente 4 a 60°C, preferivelmente 15 a 50°C, o tempo de reação é de 2 horas a diversos dias, preferivelmente 4 a 48 horas.O solvente usado na reação de substituição nucleofílica acima não é particularmente limitado contanto que permita a reação prossegir. Entretanto, o mesmo solvente pode ser usado como alquele usável na condensação por desidratação do copolímero de bloco de ácido metoxipolietileno ' glicol - poliglutâmico acima com um antimetabólito de citidina; um solvente preferível é também o mesmo como acima. Exemplos da base incluem um carbonato de metal de áícali tal como carbonato de lítio, carbonato de sódio e carbonato de potássio; um hidreto de metal de álcali tal como hidreto de lítio, hidreto de sódio e hidreto de potássio; um hidróxido de metal de álcali tal como hidróxido de lítio, hidróxido de sódio e hidróxido de potássio; um alcóxido de metal de álcali tal como metóxido de lítio, metóxido de sódio, etóxido de sódio e terc-butóxido de potássio; e um amina orgânica tal como trietilamina, tributilamina, N,N-diisopropiletilamina, N-metilmorfolina, piridina, 4-(N,N-dimetilamino)piridina, N,N-dimetilaztilina, N,N-dietilanilina, 1,5-diazabiciclo[4,3,0]nona-5-eno, 1,4-diazabiciclo[2,2,2]octano (DABCO) e 1,8-diazabiciclo[5,4,0]-7-undeceno (DBU); uma amina orgânica é preferida.
A temperatura de reação na reação de substituição nucleofílica acima é tipicamente 4 a 60°C, preferivelmente temperatura ambiente para 50°C, o tempo de reação é uma hora a diversos dias, preferivelmente 4 a 48 horas.
O solvente usado na reação de condensação por desidratação acima (reação de amidação) não é particularmente limitado contanto que permita a reação prossegir. Entretanto, o mesmo solvente pode ser usado como alquele utilizável na condensação por desidratação do copolímero de bloco de ácido metoxipolietileno glicol-poliglutâmico acima com um antimetabólito de citidina; um solvente preferível é também o mesmo como acima. O agente de condensação por desidratação não é particularmente limitado, contanto que permita o progresso da condensação por desidratação de uma amina com um grupo carboxila; entretanto, é preferido dicicloexilcarbodiimi- da, diisopropilcarbodiimida, 1-dimetilaminopropil-3-etilcarbodiimida, carbonil-diimidazol, cloroformiato de isobutila, cloreto de ácido piválico, DMT-MM(cloreto de 4-(4,6-dimetóxi-1,3,5-triazin-2-il)-4-metilmorfolínio), TFFH(hexafluorofosfato de tetrametilfluoroformamidínio), ou BOP hexafluorofosfa-to de (benzotriazoMHIoxitris(dimetilamino)fosfônio).
Um auxiliar de reação pode ser usado na na reação de condensação por desidratação; exemplos deste incluem N-hidroxissucinimida, 1- hidroxibenzotriazol, 4-dimetilaminopiridina e 2,6-di-t-butil-4-metilpiridina.
A temperatura de reação na reação de condensação por desidratação é tipicamente 4 to 60°C, preferivelmente temperatura ambiente para 50°C. O tempo de reação é uma hora a diversos dias, preferivelmente 4 a 48 horas. Visto que a seqüência de reação para ligar o substituinte hidro-
fóbico e o antimetabólito de citidina ao composto polimérico não importa, eles podem ser misturados para a reação. Entretanto, o substituinte hidrofó-bico é preferivelmente introduzido no portador polimérico antes de ligar o antimetabólito de citidina a ele para evitar a reação e decomposição do an-. 15 timetabólito como o corpo para atividade tendo um grupo multifuncional.
O derivado polimérico de um antimetabólito de citidina de acordo com a presente invenção pode formar micelas tendo cascas da porção de polietileno glicol em água. A formação de micelas pode ser identificada, por exemplo, por cromatografia de filtragem de gel (GPC) ou dispersão de luz dinâmica.
De acordo com a presente invenção, a formação de micelas é facilitada pela ligação do grupo carboxila, que não é ligado ao antimetabólito de citidina, ao substituinte hidrofóbico.
A presente invenção abrange um agente Anti-tumor ou antiviral compreendendo o derivado polimérico de um antimetabólito de citidina acima descrito como um ingrediente medicinal. O derivado polimérico de um antimetabólito de citidina pode ser administrado como é ou na forma de uma composição farmacêutica em que é misturado com substâncias farm.aceuticamente aceitáveis. A forma de dosagem da composição farma-cêutica pode ser qualquer forma de dosagem tal como uma injeção, um pó, um grânulo, um comprimido e um supositório. Estas preparações podem também conter várias substâncias auxiliares para uso farmacêutico, isto é,um portador e outros auxiliares incluindo aditivos tais como um estabilizante, um preservante, um agente amenizante e um emulsificador.
O conteúdo do derivado polimérico de um antimetabólito de citi-dina na preparação diversamente varia dependendo da preparação; entre- tanto, é tipicamente de 0,1 a 100% por peso, preferivelmente 1 a 98% por peso.
A indicação do agente Anti-tumor da presente invenção compreendendo o derivado polimérico de um antimetabólito de citidina como um ingrediente medicinal não é particularmente limitado; entretanto, o agente
pode ser usado para cânceres tais como, por exemplo, câncer pulmonar de célula não pequena, câncer do pâncreas, câncer do estômago, câncer do cólon, câncer retal, câncer de mama, câncer ovariano, câncer de bexiga e sarcoma de Kaposi associado com AIDS.
A indicação do agente antiviral da presente invenção compreen-. dendo o derivado polimérico de um antimetabólito de citidina como um ingrediente medicinal não é particularmente limitado; entretanto, o agente pode ser usado, por exemplo, para síndrome de deficiência imune adquirida (AIDS), doença infecciosa do vírus de herpes simples, e os semelhantes e pode também ser empregado para o propósito de prevenir a infecção.
O derivado polimérico de um antimetabólito de citidina de acordo
com a presente invenção pode ser administrado por qualquer método incluindo administração oral, injeção, administração intraretal, administração in-traportal, misturando em um perfusado de órgão, e administração local em um órgão afetado. Entretanto, a administração parenteral é preferida; a ad-
ministração intravenosa ou intraarterial ou administração local em um órgão afetado é mais preferida. A dosagem do derivado polimérico de um antimetabólito de citidina de acordo com a presente invenção varia dependendo do estado da donça, o método de administração, a condição, idade e peso corporal de um paciente, e os semelhantes; entretanto, é tipicamente de 1 mg a
5.000 mg, preferivelmente 10 mg a 2.000 mg, por m2 da área da superfície do corpo, que pode ser administrado uma vez ou em diversas porções por dia. A administração pode ser realizada diariamente, ou repetidamente di-versos dias à diversos meses separadamente. Um método de administração, dosagem e escala de administração diferente do acima pode ser usado como necessário.
O derivado polimérico da presente invenção também inclui aque- le em que um pró-fármaco é ligado. Aqui, o fármaco é um derivado químico de um composto origem biologicamente ativo, que libera o composto origem in vivo quando administrado. Exemplos
A presente invenção é descrita abaixo em maiores detalhes com referência aos Exemplos, Exemplos de Referência e Exemplos Teste. Entretanto, o escopo da invenção não pretende-se ser limitada a eles. Exemplo de referência 1
Síntese de Copolímero de Bloco N-Acetilado de Monometoxipo-lietileno glicol tendo Peso Molecular de cerca de 12.000 com Ácido poliglu- tâmico tendo Número de polimerização de cerca de 26.
Um polietileno glicol tendo um grupo metóxi em uma extremidade e um grupo 3-aminopropila em outra extremidade (SUNBRIGHT MEPA-12T de NOF Corporation, peso molecular médio: 12.000, 16 g) foi dissolvido em sulfóxido de dimetila (320 ml_), ao qual anidrido de N-carboxílico de □- benzil-L-glutamato (BLGNCA, 9,48 g; 27 equivalentes com base no polietileno glicol) foi em seguida adicionado, seguido por agitação a 30°C durante a noite. A solução de reação foi adicionado em gotas a um solvente misto de etanol-éter de isopropila (4:1, 6,4 L) sob agitação, que foi em seguida agitado durante mais 3 horas. O depósito precipitado foi coletado por filtragem e lavado com um solvente misto de etanol-éter de isopropila (4:1, 400 rnL). O produto resultante (22,78 g) foi dissolvido em N,N-dimetilformamida (370 ml_), ao qual anidrido acético (6,83 mL) foi em seguida adicionado, seguido por agitação a 20°C durante a noite. A solução resultante foi adicionada em gotas a um solvente misto de éter de isopropila-acetato de etila a um solven-te misto de éter de isopropila-acetato de etila (4:1, 3,7 L) sob agitação, que foi em seguida agitado durante mais 3 horas. O depósito precipitado foi coletado por filtragem e lavado com um solvente misto de éter de isopropila-acetato de etila (4:1, 300 mL). O produto resultante (22,92 g) foi dissolvido em N,N-dimetilformamida (370 ml_), ao qual carbono de paládio a 5% (contendo 55% de água, 2,50 g) foi em seguida adicionado, seguido por agitação a 30°C em uma atmosfera de hidrogênio durante 4 horas e em seguida em ' temperatura ambiente durante a noite. Após filtrar a carbono de paládio, o filtrado foi adicionado em gotas a um solvente misto de éter de isopropila-acetato de etila (4:1, 5 L) sob agitação, que foi em seguida agitado durante mais uma hora. O depósito precipitado foi coletado por filtragem e lavado com um solvente misto éter de isopropila-acetato de etila (4:1, 300 ml_). O produto resultante (16 g) foi dissolvido em água destilada (800 ml_), ao qual uma solução aquosa de hidróxido de sódio de 1M foi em seguida adicionada para ajustar o pH da solução para 11. Água destilada foi adicionada a ela a fim de fornecer um volume de solução final de 1.600 ml_, seguido por adição de cloreto de sódio (80 g). Esta solução foi passada através de uma coluna da resina de absorção HP -20ss (de Mitsubishi Chemical Corporation, 500 ml_); a coluna foi lavada uma solução aquosa de cloreto de sódio a 5% (2,000 mL) e água destilada (20,000 mL) e em seguida eluída com uma solução aquosa de acetonitrilo a 50% (2,500 mL). A fração eluída contendo o composto desejado foi passada através, e eluída de uma coluna da resina de permuta de cátion Dowex 50W (de The Dow Chemical Company, tipo próton, 100 niL); a coluna foi também eluída com 50% de acetonitrilo aquoso (150 mL). A fração eluída contendo o composto desejado foi concentrada sob pressão reduzida até o volume de solução alcançar cerca de 300 mL, e em seguida submetida à secagem por congelamento para fornecer o com-posto título (15,84 g).
O número de polimerização médio de ácido glutâmico (o número de ácidos carboxílicos) em uma molécula do composto foi de 26,22, com base no valor de titulação usando uma solução aquosa de hidróxido de sódio.
Exemplo de referência 2
Síntese de Copolímero de Bloco N-Acetilado de Monometoxipo-lietileno glicol tendo peso molecular de cerca de 12.000 com ácido poliglu-tâmico tendo número de polimerização de cerca de 41.
De acordo com o método descrito no Exemplo de referência 1, 45 equivalentes de BLG-NCA foi usado com base no polietileno glicol para fornecer o composto título.
O número de polimerização médio de ácido glutâmico (o número
de ácidos carboxílicos) em uma molécula do composto foi de 41,45, com base no valor de titulação usando uma solução aquosa de hidróxido de sódio.
Exemplo de referência 3Síntese de Copolímero de Bloco N-Acetilado de Monometoxipo-
lietileno glicol tendo Peso Molecular de cerca de 12,000 com ácido poliglu-tâmico tendo número de polimerização de cerca de 24.
De acordo com o método descrito no Exemplo de referência 1, 25 equivalentes de BLG-NCA foi usado com base no polietileno glicol para fornecer o composto título.
O número de polimerização médio de ácido glutâmico (o número de ácidos carboxílicos) em uma molécula do composto foi de 23,70, com base no valor de titulação usando uma solução aquosa de hidróxido de sódio. Exemplo de referência 4
Síntese de Copolímero de Bloco N-Acetilado de Monometoxipo-lietileno glicol tendo Peso Molecular de cerca de 12,000 com ácido poliglu-tâmico tendo número de polimerização de cerca de 32.
De acordo com o método descrito no Exemplo de referência 1, 35 equivalentes de BLG-NCA foi usado com base no polietileno glicol para fornecer o composto título. O número de polimerização médio de ácido glutâmico (o número de ácidos carboxílicos) em uma molécula do composto foi de 31,71, com base no valor de titulação obtido usando uma solução aquosa de hidróxido de sódio.
Exemplo de referência 5
Síntese de Copolímero de Bloco N-Acetilado de Monometoxipo-lietileno glicol tendo Peso Molecular de cerca de 12,000 com ácido poliglu-tâmico tendo número de polimerização de cerca de 36.
De acordo com o método descrito no Exemplo de referência 1, 40 equivalentes de BLG-NCA foi usado com base no polietileno glicol para fornecer o composto título. ' O número de polimerização médio de ácido glutâmico (o número
de ácidos carboxílicos) em uma molécula do composto foi de 35,90, com base no valor de titulação usando uma solução aquosa de hidróxido de sódio.
Exemplo de referência 6 Síntese de Copolímero de Bloco N-Acetilado de Monometoxipo-
lietileno glicol tendo Peso Molecular de cerca de 12,000 com ácido poliglu-tâmico tendo número de polimerização de cerca de 21.
De acordo com o método descrito no Exemplo de referência 1, 23 equivalentes de BLG-NCA foi usado com base no polietileno glicol para . fornecer o composto título.
O número de polimerização médio de ácido glutâmico (o número de ácidos carboxílicos) em uma molécula do composto foi de 21,38, com base no valor de titulação usando uma solução aquosa de hidróxido de sódio.
Exemplo de referência 7
Síntese de Copolímero de Bloco N-Acetilado de Monometoxipo-lietileno glicol tendo Peso Molecular de cerca de 12,000 com ácido poliglu-tâmico tendo número de polimerização de cerca de 26.
De acordo com o método descrito no Exemplo de referência 1, 30 equivalentes de BLG-NCA foi usado com base no polietileno glicol para fornecer o composto título.
O número de polimerização médio de ácido glutâmico (vários ácidos carboxílicos) em uma molécula do composto foi de 26,48, com base no valor de titulação usando uma solução aquosa de hidróxido de sódio. Exemplo de referência 8
Síntese de Conjugado de Amida de Ester de Benzila de L-Fenilalanina com Copolímero de Bloco N-Acetilado de Monometoxipolietilenoglicol tendo Peso Molecular de cerca de 12,000 com ácido poliglutâmico tendo número de polimerização de cerca de 24.
O copolímero de bloco N-acetilado de um monometoxipolietileno glicol tendo um peso molecular de cerca de 12,000 com um ácido poliglutâ- mico tendo um número de polimerização de cerca de 24 (1,533 g) descrito no Exemplo de referência 3 foi dissolvido em N,N dimetilformamida (32 ml_), ao qual 4-toluenossulfonato de éster de benzila de L-fenilalanina (0,464 g), TFFH (0,286 g), N,N-diisopropiletilamina (0,672 ml;.) e 2,6-di-t-butil-4-metilpiridina (0,495 g) foram em seguida adicionados, seguido por agitação 0 da mistura a 37°C durante 20 horas. A solução de reação foi resfriada para temperatura ambiente e em seguida diluída com etanol (64 mL), à qual éter de diisopropila (256 mL) foi em seguida adicionado em gotas sob agitação. Após 30 minutos de agitação, o depósito precipitado foi coletado por filtragem e lavado com um solvente misto de éter-etanol (4:1). O produto resul-m tante foi dissolvido em 30% de acetonitrilo aquoso (45 mL), que foi em seguida dialisado com água destilada (2 L x 3) usando uma membrana de diá-lise (corte molecular de 12,000 a 14,000). Acetonitrilo (15 mL) foi adicionado à solução dialisada, e a mistura foi passada através da resina de permuta de cátion Dowex 50W (tipo próton), que foi eluída com 50% de acetonitrilo a- quoso. A fração eluída contendo o composto desejado foi concentrada sob pressão reduzida a 1/2 volume e submetida à secagem por congelamento para fornecer o composto título (1,689 g).
Após hidrolisar o composto, o álcool de benzila liberado foi quantificado cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) para determinar a taxa de ligação por amida do grupo Phe-OBzl no composto. Como um resultado, a taxa de ligação foi de 32,8% com base nos grupos carboxila do ácido poliglutâmico. Método de Hidrólise
O composto título (34.48 mg) foi dissolvido em metanol (1 mL), ao qual uma solução aquosa de hidróxido de sódio de 0,5 M (1 mL) foi em seguida adicionada, seguido por agitação a 40°C durante uma hora. A solução foi neutralizada com ácido acético e em seguida diluída com água desti-lada para fazer uma solução exata de 5 ml_.
Condições de Análise de LC (Análise de Álcool de Benzila) Coluna: Inertsil ODS-3 (tamanho de partícula: 5um), 4,6dp 4 x
150 mm;
' Temperatura de Coluna: 40°C;
Eluente: solução A: solução aquosa de ácido fosfórico a 1%, solução B:
acetonitrilo;
Gradiente: % solução B (tempo: minutos) 30 (0), 80 (10);
Taxa de fluxo: 1 mL/minutos;
Detector (detecção de comprimento de onda): UV (260 nm). Exemplo de referência 9
Síntese de Conjugado de Amida de Ester de Benzila de L-Fenilalanina com Copolímero de Bloco N-Acetilado de Monometoxipolietileno . glicol tendo Peso Molecular de cerca de 12,000 com ácido poliglutâmico tendo número de polimerização de cerca de 41.
O Copolímero de Bloco N-Acetilado de um monometoxipolietileno glicol tendo um peso molecular de cerca de 12,000 com um ácido poliglutâmico tendo um número de polimerização de cerca de 41 (176.5 mg) descri- to no Exemplo de referência 2 foi dissolvido em N,N-dimetilformamida (5.3 ml_), ao qual 4-toluenossulfonato de éster de benzila de L-fenilalanina (63,0 mg), TFFPT (38,9 mg), N,N-diisopropiletilamina (117,3 uL) e 2,6-di-t-butil-4-metilpiridina (87,0 mg) foram em seguida adicionados, seguido por agitação da mistura a 37°C durante 22 horas. A solução de reação foi resfriada para temperatura ambiente e em seguida diluída com etanol (10,6 ml_), ao qual éter de diisopropila (42,4 ml_) foi em seguida adicionado em gotas sob agitação. Após 30 minutos de agitação, o depósito precipitado foi coletado por filtragem e lavado com um solvente misto de éter-etanol (4:1). O produto resultante foi dissolvido em 20% de acetonitrilo aquoso (16 ml_), que foi em seguida dialisado com água destilada (2 L x 3) usando uma mebrana de diá-lise (corte molecular de 12,000 a 14,000). A solução dialisada foi passada através da resina de permuta de cátion Dowex 50W (tipo próton, 9 ml_), quefoi eluída com 50% de acetonitrilo aquoso. A fração eluída contendo o composto desejado foi submetida à secagem por congelamento para fornecer o composto título (194,0 mg).
Após hidrolisar o composto da mesma maneira como aquele no Exemplo de referência 8, o álcool de benzila liberado foi quantificado por cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) sob as mesmas condições como aquelas no Exemplo de referência S para determinar a taxa de ligação por amida do grupo Phe-OBzl no composto. Como um resultado, a taxa de ligação foi de 32,6% com base nos grupos carboxila do ácido poliglu- tâmico.
Exemplo de referência 10
Síntese de Conjugado de Amida de Ester de Benzila de L-Fenilalanina com Copolímero de Bloco N-Acetilado de Monometoxipolietileno Glicol tendo Peso Molecular de cerca de 12,000 com ácido poliglutâmico tendo número de polimerização de cerca de 32.
O Copolímero de Bloco N-acetilado de um monometoxipolietileno glicol tendo um peso molecular de cerca de 12.000 com um ácido poliglutâmico tendo um número de polimerização de cerca de 32 (668 mg) descrito no Exemplo de referência 4 foi dissolvido em N,N-dimetilformamida (13 rnL), ao qual 4-toluenossulfonato de éster de benzila de L-fenilalanina (282 mg), TFFH (175 mg) e N,N-diisopropiletilamina (345 uL) foram em seguida adicionados, seguido por agitação da mistura a 40°C durante 20 horas. A solução de reação foi resfriada para temperatura ambiente e em seguida diluída com etanol (26 mL), ao qual éter de diisopropila (104 ml_) foi em seguida adicionado em gotas sob agitação, O depósito precipitado foi coletado por filtragem e lavado com um solvente misto de éter-etanol (4:1). O produto resultante foi dissolvido em 50% de acetonitrilo aquoso (16 mL), que foi em seguida dialisado com água destilada (2 L x 3) usando uma mebrana de diá-lise (corte molecular de 12,000 a 14,000). A solução dialisada foi passadaatravés da resina de permuta de cátion Dowex 50W (tipo próton, 10 nl_), que foi eluída com 50% de acetonitrilo aquoso. A fração eluída contendo o composto desejado foi submetida à secagem por congelamento para fornecer ocomposto título (762 mg).
Após hidrolisar o composto da mesma maneira como aquele no Exemplo de referência 8, o álcool de benzila liberado foi quantificado por cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) sob as mesmas condi- ções como aquelas no Exemplo de referência 8 para determinar a taxa de ligação por amida do grupo Phe-OBzl no composto. Como um resultado, a taxa de ligação foi de 41,8% com base nos grupos carboxila do ácido poliglu-tâmico.
Exemplo de referência 11
Síntese de Conjugado de Amida de Ester de Benzila de L-Valina
com Copolímero de Bloco N-Acetilado de Monometoxipolietileno glicol tendo Peso Molecular de cerca de 12,000 com ácido poliglutâmico tendo número de polimerização de cerca de 36.
O Copolímero de Bloco N-Acetilado de um monometoxipolietile- no glicol tendo um peso molecular de cerca de 12,000 com um ácido poliglutâmico tendo um número de polimerização de cerca de 36 (531 mg) descrito no Exemplo de referência 5 foi dissolvido em N,N-dimetilformamida (10.6 ml_), ao qual 4-toluenossulfonato de éster d benzila de L-vanila (195 mg), TFJ'H (135 mg) e N.N-diisopropiletilamina (288) foram em seguida adiciona- dos, seguido por agitação da mistura a 40°C durante 30 horas. A solução de reação foi resfriada para temperatura ambiente e em seguida diluída com etanol (20 ml_), ao qual éter de diisopropila (80 mL) foi em seguida adicionado em gotas sob agitação. Após 30 minutos de agitação, o depósito precipitado foi coletado por filtragem e lavado com um solvente misto de éter-etanol (4:1). O produto resultante foi dissolvido em 30% de acetonitrilo aquoso (25 mL), que foi em seguida dialisado com água destilada (2 L x 3) usando uma mebrana de diálise (corte molecular de 12,000 a 14,000). Da resina de per-muta de cátion Dowex 50W (tipo próton, 3 mL) foi adicionado à solução diali-sada, que foi agitada durante 30 minutos, seguido por filtragem da resina. O filtrado contendo o composto desejado foi submetido à secagem por congelamento para fornecer o composto título (559 mg).
Após hidrolisar o composto da mesma maneira como aquele noExemplo de referência 8, o álcool de benzila liberado foi quantificado por cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) sob as mesmas condições como aquelas no Exemplo de referência 8 para determinar a taxa de ligação por amida do grupo Val-OBzl no composto. Como um resultado, a taxa de ligação foi de 41,3% com base nos grupos carboxila do ácido poliglu-tâmico.
Exemplo de referência 12
Síntese de Conjugado de Amida de Ester de Benzila de L-Fenilalanina com Copolímero de Bloco N-Acetilado de Monometoxipolietileno glicol tendo Peso Molecular de cerca de 12,000 com ácido poliglutâmico tendo número de polimerização de cerca de 26.
O Copolímero de Bloco N-Acetilado de um monometoxipolietileno glicol tendo um peso molecular de cerca de 12,000 com um ácido poliglutâmico tendo um número de polimerização de cerca de 26 (6.00 g) descritono Exemplo de referência 1 foi dissolvido em N,N-dimetilformamida (150 mL), ao qual Hidrocloreto de éster de benzila de L-fenilalanina (2,08 g), DMT-MM (2.37 g) e N,N-diisopropiletilamina (1.24 mL) foram em seguida adicionados, seguido por agitação da mistura a 40°C durante a noite.
A solução de reação foi resfriada para temperatura ambiente eem seguida adicionada em gotas a um solvente misto de éter-etanol (4:1, 1,500 mL). Após 30 minutos de agitação, o depósito precipitado foi coletado por filtragem e lavado com um solvente misto de éter-etanol (4:1). O produto resultante foi dissolvido em 97 % em peso de DMF aquoso (150 mL), ao qual a resina de permuta de cátion Dowex 50W (tipo próton, 15 mL) foi adiciona- da antes agitando a mistura em temperatura ambiente durante 2 horas, seguido por filtragem da resina e lavando a resina com DMF (75 mL). O filtrado resultante foi adicionado em gotas a um solvente misto de éter-etanol (4:1) (2,400 mL), que foi agitado durante 30 minutos, em seguida coletando-se o depósito precipitado por filtragem para fornecer o composto título (6,88 g).
Após hidrolisar o composto da mesma maneira como aquele noExemplo de referência 8, o álcool de benzila liberado foi quantificado por cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) sob as mesmas condi-ções como aquelas no Exemplo de referência 8 para determinar a taxa de ligação por amida do grupo Phe-OBz1 no composto, como um resultado, a taxa de ligação foi de 62,4% com base nos grupos carboxila do ácido poliglu-tâmico.
' Exemplo de referência 13
Síntese de Conjugado de Ester de Brometo de Benzila com Co-polímero de Bloco N-Acetilado de Monometoxipolietileno glicol tendo Peso Molecular de cerca de 12,000 com ácido poliglutâmico tendo número de po-limerização de cerca de 26.
O copolímero de bloco N-acetilado de um monometoxipolietileno
glicol tendo um peso molecular de cerca de 12,000 com um ácido poliglutâmico tendo um número de polimerização de cerca de 26 (342 mg) descrito no Exemplo de referência 1 foi dissolvido em N,N-dimetilformamida (6,8 mL), ao qual brometo de benzila (29,0 uL) e N,N-diisopropiletilamina (53,1 uL)
foram em seguida adicionados, seguido por agitação da mistura a 37°C durante a noite. A solução de reação foi resfriada para temperatura ambiente e em seguida diluída com etanol (13,6 mL), ao qual éter de diisopropila (54,4 mL) foi em seguida adicionado em gotas sob agitação. Após uma hora de agitação, o depósito precipitado foi coletado por filtragem e lavado com um
solvente misto éter de diisopropila-etanol (4:1). O produto resultante foi dissolvido em 50% de acetonitrilo aquoso (20 mL), e a solução foi passada a-través da resina de permuta de cátion Dowex 50W (tipo próton, 4 ml.), que foi em seguida eluted com 50% de acetonitrilo aquoso. A fração eluída contendo o composto desejado foi concentrada sob pressão reduzida a 1/2 vo-
lume e em seguida submetida à secagem por congelamento para fornecer o composto título (352 mg).
Após hidrolisar o composto da mesma maneira como aquele no Exemplo de referência 8, o álcool de benzila liberado foi quantificado por cromatografia líquida de alto desempenho (H PLC) sob as mesmas condi-
ções como aquelas do Exemplo de referência 8 para determinar a taxa de ligação do grupo OBzl no composto. Como um resultado, a taxa de ligação foi de 25,0% com base nos grupos carboxila do ácido poliglutâmico.Exemplo de referência 14:
Síntese de Conjugado de Ester de Brometo de 4-Fenilbutila com Copolímero de Bloco N-Acetilado de Monometoxipolietileno glicol tendo peso molecular de cerca de 12,000 com ácido poliglutâmico tendo número de po- limerização de cerca de 26.
O Copolímero de Bloco N-Acetilado de um monometoxipolietileno glicol tendo um peso molecular de cerca de 12,000 com um ácido poliglutâmico tendo um número de polimerização de cerca de 26 (2,33 g) descrito no exemplo de referência 7 foi dissolvido em N,N dimetilformamida (50 ml_),
ao qual brometo de 4-fenilbutila (682 mg) e 1,8-diazabiciclo[5,4,0]-7-undeceno (DBU, 598 uL) foram em seguida adicionados, seguido por agitação da mistura a 38°C durante a noite. A solução de reação foi resfriada para temperatura ambiente e em seguida adicionada em gotas a um solvente misto de éter-etanol (4:1, 500 ml_). Após uma hora de agitação, o depósito
precipitado foi coletado por filtragem e lavado com um solvente misto de é-ter-etanol (4:1). O produto resultante foi dissolvido em 50% de acetonitrilo aquoso, ao qual a resina de permuta de cátion Dowex 50W (tipo próton, 5 ml_) foi adicionada antes de agitar a mistura durante 2 horas, seguido por filtragem da resina e em seguida submetendo o filtrado à secagem por con-
gelamento para fornecer o composto título (2,54 g).
Após hidrolisar o composto da mesma maneira como aquele no Exemplo de referência 8, o 4-fenilbutanol liberado foi quantificado por croma-tografia líquida de alto desempenho (HPLC) para determinar a taxa de ligação do grupo 4-fenilbutóxi no composto. Como um resultado, a taxa de liga-
ção foi de 65,7% com base nos grupos carboxila do ácido poliglutâmico. Exemplo 1:
Derivado Polimérico de Antimetabólito de citidina de Fórmula (1) em que R é Grupo Metila; A é Grupo Acetila; Média de n é 272; Média de m é 21; e X é Grupo Hidroxila ou Gencitabina. N,N-Dimetilformamida (15 ml_) e N,N-diisopropiletilamina (192
uL) foram adicionados ao Copolímero de Bloco N-Acetilado de um monometoxipolietileno glicol tendo um peso molecular de cerca de 12,000 com umácido poliglutâmico tendo um número de polimerização de cerca de 21 (759 mg) descrito no Exemplo de referência 6 e hidrocloreto de gencitabina (330 mg), que foi em seguida agitado a 37°C. Após dissolução, 2-etóxi-l-etoxicarbonil-1,2-diidroquinolina (EEDQ, 300 mg) foi adicionado a ele, que foi ' agitado a 37°C durante 20 horas. A solução de reação foi resfriada para temperatura ambiente e em seguida;diluída com etanol (30 ml_), ao qual éter de diisopropila (120 rn.L) foi adicionado em gotas sob agitação. Após uma hora de agitação, o depósito precipitado foi coletado por filtragem e lavado com um solvente misto de éter-etanol (4:1). O produto resultante foi dissolvi- do em 25% de acetonitrilo aquoso (40 ml_), que foi em seguida dialisado com água destilada (2 L x 3) usando uma mebrana de diálise (corte molecular de 12,000 a 14,000). A solução dialisada foi submetida à secagem por congelamento para fornecer o composto título (1,078 mg).
Após hidrolisar o composto, a gencitabina liberada foi quantifica- da por cromaiografia líquida de alto desempenho HPLC) para determinar um conteúdo de gencitabina do composto. Como um resultado, o conteúdo foi de 20,8% (peso/peso) (58,0% com base nos grupos carboxila do ácido poli-carboxílico) em termos de hidrocloreto de gencitabina. Além disso, quando o composto da presente invenção foi submetido à análise por HPLC, o conte- údo de gencitabina. livre foi de 0,3% ou menos. Método de Hidrólise
O composto título (3,60 mg) foi dissolvido em metanol (0,5 ao qual água de amônia concentrada (0,5 ml_) foi em seguida adicionada antes de selar, seguido por agitação a 37°C durante uma hora. A solução foi neu- tralizada com ácido acético e em seguida diluída com água destilada para fazer uma solução exata de 10 mL.
Condições de Análise de HPLC (Análise de Gencitabina) Coluna: Inertsil ODS-3 (tamanho de partícula: 5um), 4,6 cp x 150
mm; Temperatura de Coluna: 40°C;
Eluente: 95% de tampão de fosfato (10 mM, pH 6.9) - 5% acetonitrilo; Taxa de fluxo: 1 mL/min.;Detector (detecção de comprimento de onda): U V (275 nm)
Exemplo 2:
Derivado Polimérico de Antimetabólito de citidina de Fórmula (1) Em que R é Grupo Metila; A é Grupo Acetila; Média de n é 272; Média de m é 24; eXé Gencitabina, Grupo Hidroxila ou Resíduo de Ester de Benzila de L-Fenilalanina
N,N-Dimetilformamida (26 ml_) e N,N-diisopropiletilamina (0,213 ml_) foram adicionados ao composto (1,298 g) descrito no Exemplo de referência 8 e hidrocloreto de gencitabina (0,366 g), que foi em seguida agitado a 37°C. Após dissolução, 2-etóxi-l-etoxicarbonil-1,2-diidroquinolina (E-EDQ.0,362 g) foi adicionado a ele, que foi agitado a 37°C durante a noite. A solução de reação foi resfriada para temperatura ambiente e em seguida diluída com etanol (52 mL), ao qual éter de diisopropila (208 ml_) foi adicionado em gotas sob agitação. Após uma hora de agitação, o depósito precipi- tado foi coletado por filtragem e lavado com um solvente misto de éter-etanol (4:1). O produto resultante foi dissolvido em 25% de acetonitrilo aquoso (40 mL), que foi em seguida dialisado com água destilada (2 L x 3) usando uma mebrana de diálise (corte molecular de 12,000 a 14,000). A solução dialisa-da foi submetida à secagem por congelamento para fornecer o composto título (1,330 g).
Após hidrolisar o composto da mesma maneira como aquela no Exemplo 1, a gencitabina liberada foi quantificada por cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) sob as mesmas condições como aquelas no Exemplo 1 para determinar um conteúdo de gencitabina do composto. Como um resultado, o conteúdo foi de 10,7% (peso/peso) (28, 1% com base nos grupos carboxila do ácido policarboxílico) em termos de hidrocloreto de gencitabina. Além disso, quando o composto foi submetido à análise de HPLC, o conteúdo de gencitabina livre foi de 0,3% ou menos. Exemplo 3:Derivado Polimérico de Antimetabólito de citidina de Fórmula (1)
Em que R é Grupo Metila; A é Grupo Acetila; Média de n é 272; Média de m é 41; e X é Gencitabina, Grupo Hidroxila ou Resíduo de Ester de Benzila deL-Fenilalanina
N,N-Dimetilformamida (3.3 mL) e N.N-diisopropiletilamina (39,2mL) foram adicionados ao composto (165 mg) descrito no Exemplo de refe-rência 9 e hidrocloreto de gencitabina (67.4 mg), que foi em seguida agitado ' a 37°C, Após dissolução, 2-etóxi-l-etoxicarbonil-l,2-diidroquinolina (EEDQ,56,0 mg) foi adicionado a ele, que foi em seguida agitado a 37°C durante 23horas. A solução de reação foi resfriada para temperatura ambiente e emseguida diluída com etanol (6,6 mL), ao qual éter de diisopropila (26,4 mL)foi adicionado em gotas sob agitação. Após 30 minutos de agitação, o depó-
sito precipitado foi coletado por filtragem e lavado com um solvente misto deéter-etanol (4:1). O produto resultante foi dissolvido em 10% de acetonitriloaquoso (16 mL), que foi em seguida dialisado com água destilada (2 L x 3)usando uma mebrana de diálise (corte molecular de 12,000 a 14,000). A so-lução dialisada foi submetida à secagem por congelamento para fornecer o composto título (183mg):
Após hidrolisar o composto da mesma maneira como aquela noExemplo 1, a gencitabina liberada foi quantificado por cromatografia líquidade alto desempenho (HPLC) sob as mesmas condições como aquelas noExemplo 1 para determinar um conteúdo de gencitabina do composto da
presente invenção. Como um resultado, o conteúdo foi de 21,2% (pe-so/peso) (42,6% com base nos grupos carboxila do ácido policarboxílico) emtermos de hidrocloreto de gencitabina. Além disso, quando o composto foisubmetido à análise por HPLC, o conteúdo de gencitabina livre foi de 0,3%ou menos.
Exemplo 4:
Derivado Polimérico de Antimetabólito de citidina de Fórmula (1)Em que R é Grupo Metila; A é Grupo Acetila; Média de n é 272; Média de mé 26; e X é Gencitabina, Grupo Hidroxila ou Grupo Benzilóxi.
N,N-Dimetilformamida (6 mL) e N,N-diisopropiletilamina (63.1 4) foram adicionados ao composto (295 mg) descrito no Exemplo de referência13 e hidrocloreto de gencitabina (108,5 mg), que foi em seguida agitado a37°C. Após dissolução, 2-etóxi-l-etoxicarbonil-1,2-diidroquinolina (EEDQ,98,2 mg) foi adicionado a ele, que foi agitado a 37°C durante 23 horas. Asolução de reação foi resfriada para temperatura ambiente e em seguidadiluída com etanol (12 mL), ao qual éter de diisopropila (48 ml_) foi adiciona-do em gotas sob agitação. Após 30 minutos de agitação, o depósito precipi- tado foi coletado por filtragem e lavado com um solvente misto de éter-etanol(4:1), O produto resultante foi dissolvido em 10% de acetonitrilo aquoso (16que foi em seguida dialisado com água destilada (2 L x 3) usando uma me-brana de diálise (corte molecular de 12,000 a 14,000). A solução dialisada foisubmetida à secagem por congelamento para fornecer o composto título (334 mg).
Após hidrolisar o composto da mesma maneira como aquela noExemplo 1, a gencitabina liberada foi quantificado por cromatografia líquidade alto desempenho (HPLC) sob as mesmas condições como aquelas noExemplo 1 para determinar um conteúdo de gencitabina do composto da presente invenção. Como um resultado, o conteúdo foi de 20,5% (pe-so/peso) (49.9% com base nos grupos carboxila do ácido policarboxílico) emtermos de hidrocloreto de gencitabina. Além disso, quando o composto foisubmetido à análise por HPLC, o conteúdo de gencitabina livre foi 5,1%.Exemplo 5:
Derivado Polimérico de Antimetabólito de citidina de Fórmula (1)
Em que R é Grupo Metila; A é Grupo Acetila; Média de n é 272; Média de mé 36; e X é Gencitabina, Grupo Hidroxila ou Resíduo de Ester de Benzila.
N,N-Dimetilformamida (10,3 mL) e N,N-diisopropiletilamina (77,9uL) foram adicionados ao composto (515 mg) descrito no Exemplo de refe- rência 11 e hidrocloreto de gencitabina (134 mg), que foi em seguida agitadoa 40°C. Após dissolução, 2-etóxi-l-etoxicarbonil-1,2-diidroquinolina (EEDQ,166 mg) foi adicionado a ele, que foi agitado a 40°C durante 20 horas. A so-lução de reação foi resfriada para temperatura ambiente e em seguida diluí-da com etanol (20.6 mL), ao qual éter de diisopropila (82.4 mL) foi adiciona- do em gotas sob agitação. O depósito precipitado foi coletado por filtragem elavado com um solvente misto de éter-etanol (4:1). O produto resultante foidissolvido em 30% de acetonitrilo aquoso (20 mL), que foi em seguida diali-sado com água destilada (2 L x 3) usando uma mebrana de diálise (cortemolecular de 12,000 a 14,000). A solução dialisada foi submetida à secagempor congelamento para fornecer o composto título (574 mg).
Após hidrolisar o composto da mesma maneira como aquela no ' Exemplo 1, a gencitabina liberada foi quantificado por cromatografia líquidade alto desempenho (HPLC) sob as mesmas condições como aquelas noExemplo 1 para determinar um conteúdo de gencitabina do composto dapresente invenção. Como um resultado, o conteúdo foi de 14,1% (pe-so/peso) (28,8% com base nos grupos carboxila do ácido policarboxílico) em termos de hidrocloreto de gencitabina. Além disso, quando o composto foisubmetido à análise por HPLC, o conteúdo de gencitabina livre foi 0,2% oumenos.Exemplo 6:
Derivado Polimérico de Antimetabólito de citidina de Fórmula (1) Em que R é Grupo Metila; A é Grupo Acetila; Média de n é 272; Média de mé 26; e X é Gencitabina, Grupo Hidroxila ou Resíduo de Ester de Benzila deL-Fenilalanina
N,N-Dimetilformamida (75 ml_) e N,N-diisopropiletilamina (286uL) foram adicionados ao composto (3,0 g) descrito no Exemplo de referên- cia 12 e hidrocloreto de gencitabina (492 mg), que foi em seguida agitado a40°C. Após dissolução, 2-etóxi-l-etoxicarbonil-1,2-diidròquinolina (EEDQ,508 mg) foi adicionado a ele, que foi agitado a 40°C durante 24 horas. A so-lução de reação foi resfriada para temperatura ambiente e em seguida adi-cionada em gotas a um solvente misto de éter-etanol (4:1) (750 ml_). Após 30 minutos de agitação, o depósito precipitado foi coletado por filtragem elavado com um solvente misto de éter-etanol (4:1). O produto resultante foidissolvido em 50% de acetonitrilo aquoso (50 ml_), que foi em seguida diali-sado com água destilada (3 L x 3) usando uma mebrana de diálise (cortemolecular de 12,000 a 14,000). A solução dialisada foi submetida à secagem por congelamento para fornecer o composto título (2,94 g).
Após hidrolisar o composto da mesma maneira como aquela noExemplo 1, a gencitabina liberada foi quantificado por cromatografia líquidade alto desempenho (HPLC) sob as mesmas condições como aquelas noExemplo 1 para determinar um conteúdo de gencitabina do composto. Comoum resultado, o conteúdo foi de 4,67% (peso/peso) (11,9% com base nosgrupos carboxila do ácido policarboxílico) em termos de hidrocloreto de gen- citabina. Além disso, quando o composto da presente invenção foi submeti-do à análise por HPLC, o conteúdo de gencitabina livre foi de 0,2% ou me-nos.
Exemplo 7:
Derivado Polimérico de Antimetabólito de citidina de Fórmula (1) Em que R é Grupo Metila; A é Grupo Acetila; Média de n é 272; Média de mé 26; e X é Gencitabina, Grupo Hidroxila ou Resíduo de Álcool de 4-Fenilbutila.
N,N-Dimetilformamida (50 mL) e N,N-diisopropiletilamina (218uL) foram adicionados ao composto (2,07 g) descrito no Exemplo de refe- rência 14 e hidrocloreto de gencitabina (375 mg), que foi em seguida agitadoa 40°C. Após dissolução, 2-etóxi-l-etoxicarbonil-1,2-diidroquinolina (EEDQ,386 mg)) foi adicionado a ele, que foi agitado a 40°C durante 24 horas. Asolução de reação foi resfriada para temperatura ambiente e em seguidaadicionada em gotas a um solvente misto de éter-etanol (4:1, 750 mL). Apósuma hora de agitação, o depósito precipitado foi coletado por filtragem e la-vado com um solvente misto de éter-etanol (4:1). O produto resultante foidissolvido em 50% de acetonitrilo aquoso (25 mL), que foi em seguida diali-sado com água destilada (3 L x 3) usando uma mebrana de diálise (cortemolecular de 12,000 a 14,000). A solução dialisada foi submetida à secagem por congelamento para fornecer o composto título (2,05 g).
Após hidrolisar o composto da mesma maneira como aquela noExemplo 1, a gencitabina liberada foi quantificado por crornatografia líquidade alto desempenho (HPLC) sob as mesmas condições como aquelas noExemplo 1 para determinar um conteúdo de gencitabina do composto da presente invenção. Como um resultado, o conteúdo foi de 7,35% (pe-so/peso) (17,5% com base nos grupos carboxila do ácido policarboxílico) emtermos de hidrocloreto de gencitabina. Além disso, quando o composto foisubmetido à análise por HPLC, o conteúdo de gencitabina livre foi 0,2% ou
menos.
Exemplo 8:
Derivado Polimérico de Antimetabólito de citidina de Fórmula (1) ' Em que R é Grupo Metila; A é Grupo Acetila; Média de n é 272; Média de mé 32; e X é Citarabina ou Grupo de Hidroxila.
O Copolímero de Bloco N-Acetilado de um monometoxipolietile-no glicol tendo um peso molecular de cerca de 12,000 com um ácido poliglu-tâmico tendo um número de polimerização de cerca de 32 (130 mg) descrito no Exemplo de referência 4 e citarabina (50,0 mg) foram dissolvidos em N,N-dimetilformamida (2,6 mL), ao qual 2-etóxi-l-etoxicarbonil-1,2-diidroquinolina(EEDQ, 63,6 mg) foi em seguida adicionado, seguido por agitação a 40°Cdurante 24 horas. A solução de reação foi resfriada para temperatura ambi-ente e em seguida diluída com etanol (5,2 mL), ao qual éter de diisopropila (20,8 mL) foi em seguida adicionado em gotas sob agitação. Após 30 minu-tos de agitação, o depósito precipitado foi coletado por filtragem e lavadocom um solvente misto de éter-etanol (4:1). O produto resultante foi dissolvi-do em 20% de acetonitrilo aquoso, que foi em seguida dialisado com águadestilada (2 L x 3) usando uma membrana de diálise (corte molecular de 12,000 a 14,000). A solução dialisada foi submetida à secagem por conge-lamento para fornecer o composto título (143 mg).
Após hidrolisar o composto, a citarabina liberada foi quantificadapor cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) para determinar umconteúdo de citarabina do composto. Como um resultado, o conteúdo foi de22.5% (peso/peso) (59,2% com base nos grupos carboxila do ácido policar-boxílico) em termos de citarabina.Método de Hidrólise
O composto título (3,20 mg) foi dissolvido em metanol (0.5 mL),ao qual água de amônia concentrada (0,5 mL) foi em seguida adicionada antes de selar, seguido por agitação a 37°C durante uma hora. A solução foineutralizada com ácido acético e em seguida diluída com água destilada pa-ra fazer uma solução exata de 10 mL.Condições de Análise de HPLC (Análise de Citarabina)
Coluna: SOPELCO Discovery HS F5 (tamanho de partícula:5um), 4,6 0 x 250 mm; Temperatura de Coluna: 40°C;
Eluente: tampão de fosfato (10 mM, pH 6,9); Taxa de fluxo: 1 mL/min.;
Detector (detecção de comprimento de onda): LN (275 nm)
Exemplo 9:
Derivado Polimérico de Antimetabólito de Citidina de Fórmula (1)em que R é Grupo Metila; A é Grupo Acetila; Média de n é 272; Média de m é 32; e X é Citarabina, Grupo Hidroxila ou Resíduo de Ester Benzila de L-Fenilalanina.
O composto (267 mg) descrito no Exemplo de referência 10 ecitarabina (50,0 mg) foram dissolvidos em N,N-dimetilformamida (5,3 ml_), aoqual 2-etóxi-l-etoxicarbonil-1,2-diidroquinolina (EEDQ, 63,6 mg) foi em se- guida adicionado, seguido por agitação a 40°C durante 21 horas. A soluçãode reação foi resfriada para temperatura ambiente e em seguida diluída cometanol (10,6 ml_), ao qual éter de diisopropila (42,4 mL) foi em seguida emgotas adicioano sob agitação. Após 30 minutos de agitação, o depósito pre-cipitado foi coletado por filtragem e lavado com um solvente misto de éter- etanol (4:1). O produto resultante foi dissolvido em 30% de acetonitrilo aquo-so, que foi em seguida dialisado com água destilada (2 L x 3) usando umamebrana de diálise (corte molecular de 12,000 a 14,000). A solução dialisa-da foi submetida à secagem por congelamento para fornecer o compostotítulo (290 mg).
Após hidrolisar o composto da mesma maneira como aquela no
Exemplo 8, acitarabina liberada foi quantificada por cromatografia líquida dealto desempenho (HPLC) sob as mesmas condições como aquelas no E-xemplo 8 para determinar um conteúdo de citarabina do composto. Comoum resultado, o conteúdo foi de 11,3% (peso/peso) (31,5% com base nos grupos carboxila do ácido policarboxílico) em termos de citarabina.
Exemplo Teste 1: Teste de Liberação de Agente na Ausência de Enzima
O composto de Exemplo 1 (indicado com composto 1 na figura1), o composto de Exemplo 2 (indicado com composto 2 na figura 1), ou ocomposto de Exemplo 7 (indicado com composto 7 na figura 1) foi dissolvidoem salina tamponado fosfato (pH 7,4) a fim de fornecer uma concentraçãode 1,0 mg/mL, que foi em seguida deixada repousar em uma temperatura' constante de 37°C. A quantidade liberada de gencitabina foi avaliada comtempo por HPLC para determinar uma percentagem da quantidade de genci-tabina liberada com base na quantidade da gencitabina total no compostousada. Os resultados são mostrados na figura 1. Como um resultado, oscompostos da presente invenção foram demonstrados para liberar lentamen- te os agentes sem depender da enzima.
Exemplo Teste 2: Teste de Liberação de Agente em Plasma de Camundon-go
O composto de Exemplo 1 (2,3 mg; indicado com composto 1 nafigura 2) ou o composto de Exemplo 2 (3,7 mg; indicado com composto 2 na
figura 2) foi dissolvido em salina tamponado fosfato (0,1 ml_, pH 7,4), ao qualuma quantidade de 4 vezes (volume/volume) do plasma (0,4 mL) coletado epreparado do camundongo foi em seguida adicionado, seguido permitindo amistura repousar em uma temperatura constante de 37°C. Alíquotas de cin-qüenta microlitros cada foram tomadas com o tempo e diluídas com 50% de
metanol aquoso (450 uL). A solução foi submetida ao tratamento de despro-teção usando um filtro de membrana (tamanho de poro: 0,45 um), seguidopor avaliando a quantidade de gencitabina liberada por HPLC para determi-nar uma percentagem da quantidade de gencitabina liberada com base naquantidade da gencitabina total no composto usado. Os resultados são mos-
trados na figura 2. O compostos da presente invenção foram demonstradosliberar lentamente os agentes também em plasma.Exemplo Teste 3:
Efeito Anti-tumor em Camundongos transportando Câncer (1)
Carcinoma de cólon de murino Cólon 26 foi mantido por implante subcutâneo em série em camundongos. O tumor de Cólon 26 foi picado emfragmentos quadrados de cerca de 2mm e estes pedaços de tumor foramimplantados nos camundongos subcutaneamente por trocar. Sete dias apóso implante de tumor, o composto de Exemplo 1 (indicado com composto 1na Tabela 2), o composto de Exemplo 2 (indicado com composto 2 na Tabe-la 2), o composto de Exemplo 4 (indicado com composto 4 na Tabela 2), ehidrocloreto de gencitabina como um agente de controle foram dissolvidosem injeção de glicose a 5%, respectivamente, e cada composto ou agentede controle foi administrado uma vez intravenosamente nas doses descritasna Tabela 2. O tamanho de tumor foi medido no dia de início da administra-ção e no dia 7 em seguida ao início da administração do fármaco, e os vo-lumes de tumor foram calculados usando a seguinte equação. Volumes rela-tivos de tumor no dia 7 após a administração versus no dia de início foramestimados, os resultados são mostrados na Tabela 2.[Equação 1]Volume Tumor (mm3) =
[Maior diâmetro de tumor (mmYl x [Menor diâmetro de tumor (mm)1 x [Menor diâmetro de tumor
<table>table see original document page 43</column></row><table>
*0 volume relativo de tumor médio (média ± SD) em 7 dias após o início daadministração quando o volume de tumor na data de início da administraçãoé estabelecido em 1,0. É evidente a partir destes resultados, que o compostos da pre-
sente invenção têm efeitos anti-tumor equivalentes ou maiores em dosesinferiores do que o hidrocloreto de gencitabina como um agente de controle.Mostrou-se também que o composto da presente invenção tendo o substitu-inte hidrofóbico (o composto de Exemplo 2 ou 4) tem um efeito comparávelem outras doses reduzidas comparadas ao composto não tendo nenhum ' substituinte hidrofóbico (o composto de Exemplo 1).
Exemplo Teste 4: Efeito Anti-tumor em Camundongos transportando Câncer(2)
Carcinoma de cólon de murino 26 foi mantido por implante sub-cutâneo em série em camundongos. O tumor de Cólon 26 foi picado em fragmentos de pedaços de cerca de 2 mm e estes pedaços de tumores fo-ram implantados nos camundongos subcutaneamente por trocar. Sete diasapós o implante de tumor, o composto de Exemplo 7 (indicado com compos-to 7 na Tabela 3) e gencitabina como um agente de controle foram dissolvi-dos em injeção de glicose a 5%, respectivamente, e cada foi administrado uma vez intravenosamente nas doses descritas na Tabela 3. Os volumes detumor foram calculados no dia de início da administração e no dia 10 em se-guida à iniciação da administração de fármaco como descrito em ExemploTeste 3. Volumes relativos de tumor no dia 10 após a administração versusno dia de início foram estimados. Os resultados são mostrados na Tabela 3. Tabela 3<table>table see original document page 44</column></row><table>*0 volume relativo de tumor médio (média ± SD) em 7 dias após o início daadministração quando o volume de tumor na data de início de administraçãoé estabelecido em 1,0.
É evidente a partir destes resultados que o composto da presen- te invenção tem um efeito Anti-tumor equivalente ou maior em doses inferio-res do que hidrocloreto de gencitabina como um agente de controle.Exemplo Teste 5:
Efeito Anti-tumor em Camundongos transportando Câncer (3)
Carcinoma de cólon de murino Cólon 26 foi mantido por implante subcutâneo em série em camundongos. O tumor Cólon 26 foi picado emfragmentos de pedaços de cerca de 2 mm e estes pedaços de tumores fo-ram implantados nos camundongos subcutaneamente por trocar. Sete diasapós o implante de tumor, o composto de Exemplo 8 (indicado com compos-to 8 na Tabela 4), o composto de Exemplo 9 (indicado com composto 9 na
Tabela 4), e citarabina como um agente de controle foram dissolvidos eminjeção de glicose a 5 %: respectivamente, e cada composto ou agente decontrole foi administrado uma vez intravenosamente nas doses descritas naTabela 4. Os volumes de tumor foram calculados no dia de início da adminis-tração e no dia 10 em seguida à iniciação da administração de fármaco co-
mo descrito em Exemplo Teste 3. Os volumes relativos de tumor no dia 10após a administração versus no dia de início foram estimados. Os resultadossão mostrados na Tabela 4.
Tabela 4<table>table see original document page 45</column></row><table>
*Volume relativo de tumor médio (média ± SD) em 10 dias após o início da
administração quando o volume de tumor na data de início de administraçãoé estabelecido em 1,0.
"Administração de cinco dias contínuos em 100 mg/kgÉ evidente a partir destes resultados que o compostos da pre-sente invenção têm efeitos Anti-tumor maiores em doses inferiores do quecitarabina como um agente de controle, Mostrou-se também que o compostotendo o substituinte hidrofóbico (o composto de Exemplo 9) tem um efeito' comparável em outras doses reduzidas comparadas ao composto não tendonenhum substituinte hidrofóbico (o composto de Exemplo 8).

Claims (13)

REIVINDICAÇÕES
1. Derivado polimérico de um antimetabólito de citidina, quecompreende uma estrutura em que um grupo amino de um antimetabólito decitidina é ligado por amida a um grupo carboxila em uma cadeia lateral de um composto polimérico constituído de uma porção de polietileno glicol euma porção polímera tendo grupos carboxila nas cadeias laterais.
2. Derivado polimérico de um antimetabólito de citidina de acor-do com a reivindicação 1, em que a porção polímera tendo grupos carboxilanas cadeias laterais compreende uma cadeia de ácido poliglutâmico.
3. Derivado polimérico de um antimetabólito de citidina de acor-do com a reivindicação 1 ou 2, em que o derivado é um composto represen-tado pela Fórmula geral (1): [Fórmula 7]<formula>formula see original document page 47</formula>em que R representa um átomo de hidrogênio ou um grupo C1 a C6 alquila;A representa um átomo de hidrogênio, um grupo C1 a C6 acila, ou um grupo C1 a C6 alcoxicarbonila; m representa 3 a 200 como um valor médio; n re-presenta 5 a 2,000 como um valor médio; X representa um resíduo de anti-metabólito de citidina, um grupo hidroxila, ou um substituinte hidrofóbico; e Xrepresenta um resíduo de antimetabólito de citidina em 3 a 100% de m, umgrupo hidroxila em 0 a 95% de m e um substituinte hidrofóbico em 0 a 80% de m.
4. O derivado polimérico de um antimetabólito de citidina de a-cordo com a reivindicação 3, em que R representa um grupo C1 a C3 alqui-la; A representa um grupo C2 a C4 acila; m representa 5 a 100 como umvalor médio; n representa 50 a 1,000 como um valor médio; e o resíduo an- timetabólito de citidina representa um grupo representado pela Fórmula (2):[Fórmula 8]<formula>formula see original document page 48</formula> (2)em que Z representa um átomo de hidrogênio ou um átomo de flúor; -Rf re-presenta um grupo selecionado do grupo consistindo em substituintes deFórmula (3):<formula>formula see original document page 48</formula>(3)
5. Derivado polimérico de um antimetabólito de citidina de acor-do com a reivindicação 3, em que R representa um grupo metila; A represen-ta um grupo acetila; m representa 10 a 60 como um valor médio; n represen-ta 100 a 300 como um valor médio; X representa um resíduo de antimetabó-lito de citidina ou um grupo hidroxila; e o antimetabólito de citidina representa citarabina, gencitabina, ou 5'-deóxi-5-fluorocitidina.
6. Derivado polimérico de um antimetabólito de citidina de acor-do com a reivindicação 3 ou 4, em que o substituinte hidrofóbico representaum derivado de a-aminoácido representado pela Fórmula (4):<formula>formula see original document page 49</formula>em que Q representa uma cadeia lateral de um aminoácido neutro; W repre-senta um grupo Cl a C6 alquila ou um grupo benzila.
7. O derivado polimérico de um antimetabólito de citidina de a-cordo com a reivindicação 6, em que Q representa um grupo isopropila ou um grupo benzila; e W representa um grupo benzila.
8. O derivado polimérico de um antimetabólito de citidina, de a-cordo com a reivindicação 3 ou 4, em que o substituinte hidrofóbico repre-senta um grupo representado pela Fórmula (5):[Fórmula 11] 0-T(5)em que T representa um grupo C1 a C6 alquila opcionalmente substituídopor um grupo fenila.
9. Derivado polimérico de um antimetabólito de citidina de acor-do com a reivindicação 8, em que T representa um grupo benzila, um grupo 3-fenilpropila, um grupo 4-fenilbutila, ou um grupo 5-fenilpentila.
10. Derivado polimérico de um antimetabólito de citidina, de a-cordo com a reivindicação 3, em que R representa um grupo metila; A repre-senta um grupo acetila; m representa 10 a 60 como um valor médio; n repre-senta 100 a 300 como um valor médio; o antimetabólito de citidina represen- ta citarabina, gencitabina, ou 5'-deóxi-5-fluorocitidina; e o substituinte hidro-fóbico representa um grupo benzilóxi, um grupo 4-fenilbutóxi, um grupo (1-benziloxicarbonil-2-metil)propilamino, ou um grupo (1-benziloxicarbonil-2-fenil)etilamino.
11. Um agente anti-tumor compreendendo o derivado polimérico de um antimetabólito de citidina, de acordo com qualquer uma das reivindi-cações 1 a 10, como um ingrediente medicinal.
12. Agente antiviral compreendendo o derivado polimérico de umantimetabólito de citidina de acordo com qualquer uma das reivindicações 1a 10, como um ingrediente medicinal.
13. Um método para produzir o derivado polimérico de um anti-metabólito de citidina de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a·10, compreendendo ligação por amida, usando um agente de condensação ' por desidratação em um solvente orgânico, um. grupo amino de um antime-tabólito de citidina a um grupo carboxila em uma cadeia lateral de um com-posto polimérico constituído de uma porção de polietileno glicol e uma por-ção polímera tendo grupos carboxila nas cadeias laterais.
BRPI0609095-8A 2005-05-11 2006-04-27 derivado polimérico de antagonista metabólico de citidina, agente antitumor e antiviral e método para produzir o referido derivado BRPI0609095A2 (pt)

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