BR112016020333B1 - Compostos orgânicos de monobactam, seus usos, composições e combinações farmacêuticas - Google Patents

Compostos orgânicos de monobactam, seus usos, composições e combinações farmacêuticas Download PDF

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Abstract

COMPOSTOS ORGÂNICOS DE MONOBACTAM PARA O TRATAMENTO DE INFECÇÕES BACTERIANAS Esta invenção pertence geralmente aos compostos antibacterianos de Fórmula I, (I) como também descrito aqui, e sais farmaceuticamente aceitáveis e formulações dos mesmos. Em certos aspectos, a invenção pretence aos métodos de usar tais compostos para tratar infecções tais como aquelas causadas por bactérias Gram-negativas.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO
[001] Esta invenção se refere a novos compostos de β-lactam, e sua preparação e uso. Em particular, a invenção se refere a novos compostos de β-lactam onde o anel de lactam é monocíclico, e seus usos para tratar infecções bacterianas, especialmente aquelas causadas por bactérias Gram-negativas.
ANTECEDENTE
[002] Ao longo das últimas décadas, a frequência da resistência antimicrobiana e sua associação com doenças infecciosas graves aumentaram em taxas alarmantes. A prevalência crescente de resistência entre os patógenos nosocomiais é particularmente desconcertante. Dos mais de 2 milhões de infecções nosocomiais que ocorrem a cada ano nos Estados Unidos, de 50 a 60% são causadas por cepas resistentes aos antimicrobianos de bactérias. A elevada taxa de resistência aos agentes antibacterianos geralmente usados aumenta a morbidez, mortalidade e custos associados com infecções nosocomiais. Nos Estados Unidos, pensa-se que as infecções nosocomiais contribuem ou causam mais de 77.000 mortes por ano e custos de aproximadamente $5 a $10 billhões por ano.
[003] Causas importantes de resistência Gram-negativa incluem beta-lactamases de amplo espectro (ESBLs), serina carbapenemases (KPCs) e metalo-β-lactamases (por exemplo, NDM-1) em Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, e Proteus mirabilis, cefalosporina de terceira geração de alto nível (AmpC) resistência à β-lactamase entre espécie de Enterobacter e Citrobacter freundii, e genes de resistência a múltiplos fármacos observados em Pseudomonas, Acinetobacter, e Stenotrophomonas. O problema de resistência antibacteriana é composto pela existência de cepas bacterianas resistentes a múltiplos agentes antibacterianos. Por exemplo, Klebsiella pneumonia abrigando NDM-1 metalo-β-lactamase transporta frequentemente serina-β- lactamases adicionais no mesmo plasmídeo que transporta a NDM-1.
[004] Desse modo, existe uma necessidade quanto a novos agentes antibacterianos, particularmente compostos antibacterianos que são efetivos contra os micróbios resistentes a fármaco existentes, ou são menos suscetíveis ao desenvolvimento de nova resistência bacteriana. A presente invenção fornece tais compostos.
SUMÁRIO
[005] A invenção inclui novos compostos, formulações farmacêuticas incluindo os compostos, e métodos de usar tais compostos e composições para o tratamento de pacientes com infecções bacterianas. Os compostos são monobactans, que compreendem um anel de beta-lactam monocíclico, e que tipicamente age por inibição de proteínas de ligação de penicilina (PBPs), que estão envolvidas na biossíntese de peptidoglicanos requeridos para as paredes celulares bacterianas normais. Alguns membros conhecidos desta classe incluem aztreonam e carumonam. Outros compostos de monobactam são descritos em WO2013/110643 e WO2012/073138. Os compostos são principalmente efetivos contra bactérias Gram- negativas.
[006] Os compostos da invenção podem ser usados para tratar infecção causada por Enterobacteriaceae, incluindo Salmonella, E. coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus, Enterobacter, Serratia, e Citrobacter, incluindo patógenos tal como KPC produzindo Klebsiella pneumoniae que são menos suscetíveis aos monobactans anteriores como aztreonam, bem como bactérias não fermentadoras, incluindo Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter, Burkholderia, Moraxella e Stenotrophomonas.
[007] Os compostos da invenção podem ser usados sozinhos ou em combinação com outros antibióticos, e podem ser usados em combinação com os compostos tais como inibidores de betalactamase que potencializam a atividade dos compostos da invenção contra certos patógenos ou reduzem a frequência ou extensão da resistência bacteriana aos compostos da invenção contra certos patógenos. Inibidores de beta-lactamase adequados para uso em combinação com os compostos da invenção incluem avibactam, tazobactam, sulbactam e ácido clavulânico.
[008] Em um aspecto, a invenção fornece compostos de Fórmula (I):
Figure img0001
[009] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo,
[0010] em que:
[0011] Z é CR4 ou N;
[0012] R1 é H ou C1-C4 alquila;
[0013] R2 é selecionado a partir do grupo consistindo em H, C1-C4 alquila, e -COOH
[0014] ou R1 e R2 empregados juntamente com o carbono ao qual eles são ligados formam um anel selecionado a partir de um anel C3- C6 cicloalquila e um anel heterocíclico de 4-6 membros contendo até dois heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como membros no anel;
[0015] R3 é selecionado a partir de H, -COOH, e -L1-W-(CH2)0-2-X- R5;
[0016] R4 é H ou halo;
[0017] cada L1 é independentemente um C1-4 alquileno de cadeia linear ou ramificada;
[0018] W é uma ligação, O, NH ou S;
[0019] X é fenila, ou um anel de heteroarila de 5-6 membros contendo 1-3 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como membros no anel; onde as fenila e heteroarila de 5-6 membros são opcionalmente substituídas com um ou dois grupos selecionados a partir de C1-4 alquila, hidróxi, -CN, F, C1-4 alcóxi, -NH2, -NH(C1-4 alquila) e -N(C1-4 alquila)2;
[0020] R5 é selecionado a partir de
Figure img0002
[0021] em que R1b, R2b, e R3b são independentemente hidrogênio, hidróxi, CN, (C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, ou heterociclila de 4, 5, 6 ou 7 membros contendo N, O ou S como um membro no anel, em que cada (C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, (C3- C6)cicloalquila, ou heterociclila de 4, 5, 6 ou 7 membros contendo N, O ou S como um membro no anel pode ser substituído por um, dois ou três substituintes selecionados independentemente a partir de Y,
[0022] e em que R2b e R3b juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual eles são ligados podem opcionalmente formar uma heterociclila de 5 a 7 membros incluindo 0 ou 1 heteroátomo adicional selecionado a partir de N, O e S, a referida heterociclila opcionalmente substituída por Y;
[0023] Y é selecionado a partir de F, CN, -NH2, Q, -L2-C(O)NR10- L2-Q, -L2-NR10-C(O)-L2-Q, -L2-OR10, -L2-N(R10)2, -L2-N+(R11)3, -L2-NR10- C(O)R10, -L2-NR10-L2-N(R10)2, -L2-O-C(O)OR10, -L2-O-C(O)-N(R10)2, -L2- NR10-C(O)-N(R10)2, -L2-NR10-C(O)-OR11, -L2-C(=NR10)-N(R10)2,- CON(R10)2, -L2-NR10-C(=NR10)-N(R10)2,-L2-NR10-C(=NR10)-R10, -L2- C(O)N(R10)2, -L2-O-SO3R10 ;
[0024] L2 é independentemente em cada ocorrência uma ligação ou um C1-4 alquileno de cadeia linear ou ramificada, opcionalmente substituído por NH2, OH, ou F;
[0025] Het é um anel heterocíclico ou de heteroarila de 4-6 membros, onde os anéis de heteroarila contêm 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como membros no anel e é opcionalmente substituído por um ou dois grupos selecionados a partir de Y, OH, NH2,-C(O)NR102, e C1-4 alquila opcionalmente substituída por um ou dois Y; e o anel heterocíclico contém 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como membros no anel e é opcionalmente substituído por até três grupos selecionados a partir de halo, Y, C1-4 alquila opcionalmente substituída por um ou dois grupos selecionados a partir de Y, =NR10, =N-OR10, =N-CN, e oxo;
[0026] e Het é opcionalmente fundido em um anel de heteroarila ou heterocíclico de 5 ou 6 membros contendo até dois heteroátomos selecionados a partir de N-R10, O e S como membros no anel, e opcionalmente substituído por um ou dois R16;
[0027] R10 e R12 são independentemente H ou C1-4 alquila opcionalmente substituída por um ou dois grupos selecionados a partir de OH, NH2 ou Q;
[0028] Q é selecionado a partir de -L2-N(R13)2, -L2-N+(R14)3, -L2- NR13-C(=NR13)-N(R13)2, -L2-NR13- CR13(=NR13), -L2-NR13-L2-Cy, -L2- NR13-C(=NR13)-NR13-L2-Cy, -L2-NR13-C(=NR13)-L2-Cy, -L2-Cy-L2-R13 , - L2-Cy-L2-N(R13)2, -L2-NR13-SO2-N(R13)2, -L2-SO2-N(R13)2, -L2-NR13-SO2- R13, -L2-NR13-L2-Ar, -L2-S-L2-Cy, -L2-NR13-(C=O)-O-R13,
Figure img0003
[0029] cada Cy é independentemente uma cicloalquila de 3-6 membros ou heterociclila de 3-6 membros contendo um ou dois heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como um membro no anel e opcionalmente fundido em um anel de arila ou heteroarila de 56 membros, em que cada Cy é opcionalmente substituído por um ou dois grupos selecionados a partir de halo, C1-3 haloalquila, R14, hidróxi, C1-4 alcóxi, -NH2, -NH(C1-4 alquila) ou -N(C1-4 alquila)2;
[0030] Ar é fenila, opcionalmente substituída por um ou dois grupos selecionados a partir de halo, C1-3 haloalquila, R14, hidróxi, C1-4 alcóxi, -NH2, -NH(C1-4 alquila) ou -N(C1-4 alquila)2;
[0031] R11 é independentemente em cada ocorrência C1-4 alquila;
[0032] e dois R10, ou dois R11, ou dois R12 no mesmo N podem ciclizar para formar um anel heterocíclico de 4-6 membros opcionalmente substituído por C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, hidróxi, ou oxo;
[0033] R13 é independentemente em cada ocorrência H ou C1-4 alquila opcionalmente substituída por hidróxi, C1-4 alcóxi, -NH2, -NH(C1- 4 alquila) ou -N(C1-4 alquila)2;
[0034] R14 é independentemente em cada ocorrência C1-4 alquila opcionalmente substituída por hidróxi, C1-4 alcóxi, -NH2, -NH(C1-4 alquila) ou -N(C1-4 alquila)2;
[0035] em que dois R13 ou dois R14 no mesmo N podem ciclizar para formar um anel heterocíclico de 4-6 membros opcionalmente substituído por C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, hidróxi, amino ou oxo;
[0036] R15 é H, halo, C1-4alquila, CN, ou -O(C1-4 alquila);
[0037] cada R16 é independentemente halo, C1-4 alquila, -NH2, CN, ou -O(C1-4 alquila);
[0038] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo;
[0039] incluindo variantes de tais compostos descritos aqui.
[0040] Em outro aspecto, a invenção fornece um método de inibir o crescimento bacteriano ou modular a virulência de uma infecção bacteriana, em que o método compreende administrar a um paciente em necessidade de tal inibição de um composto de fórmula (I).
[0041] Em outro aspecto, a invenção fornece um método para tratar um indivíduo tendo uma infecção bacteriana Gram-negativa, que compreende administrar ao indivíduo em necessidade do mesmo uma quantidade antibacteriana efetiva de um composto de fórmula (I), opcionalmente em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável. Em certas modalidades, o indivíduo é um mamífero e em algumas modalidades, o indivíduo é um ser humano.
[0042] As bactérias Gram-negativas podem ser de um gênero selecionado de Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Salmonella, Serratia, Pseudomonas, Acinetobacter, Bacteroides, Burkholderia, Campylobacter, Neisseria, e Stenotrophomonas. Em particular, a infecção bacteriana causada por uma espécie de Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Salmonella, Serratia, Pseudomonas, ou Acinetobacter é tratável. Espécies bacterianas particulares para tal tratamento incluem Citrobacter freundii, Citrobacter koseri, Enterobacter cloacae, Enterobacter faecalis, Enterobacter faecium, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca, Morganella morganii, Proteus mirabilis, Salmonella species, Serratia marcescens, Pseudomonas aeruginosa, e Acinetobacter baumanii, bem como Bacteroides bivius, Bacteroides fragilis, Burkholderia cepacia, Campylobacter jejuni, Neisseria gonorrhoeae, e Stenotrophomonas maltophilia.
[0043] Em outro aspecto, a invenção fornece um método de administrar uma quantidade inibidora de um composto de fórmula (I) às bactérias Gram-negativas fermentadoras ou não fermentadoras. Em certa modalidade do método de administrar uma quantidade inibidora de um composto de fórmula (I) às bactérias Gram-negativas fermentadoras ou não fermentadoras, as bactérias Gram-negativas são espécies de Burkholderia, Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Neisseria, Proteus, Salmonella, Serratia, Pseudomonas, e Acinetobacter. Espécies bacterianas particulares para tais métodos incluem Citrobacter freundii, Citrobacter koseri, Enterobacter cloacae, Enterobacter faecalis, Enterobacter faecium, Escherichia coli, Klebsiella pneumonia, Klebsiella oxytoca, Neisseria meningiditis and Burkholderia cepacia, Morganella morganii, Proteus mirabilis, Salmonella species, Serratia marcescens, Pseudomonas aeruginosa, e Acinetobacter baumanii, bem como Bacteroides bivius, Bacteroides fragilis, Burkholderia cepacia, Campylobacter jejuni, Neisseria gonorrhoeae, e Stenotrophomonas maltophilia.
[0044] Em outra modalidade, a invenção fornece um método de administrar uma quantidade inibidora de um composto de fórmula (I) às bactérias Gram-negativas, tal como an Enterobacteriaceae; em algumas modalidades, as bactérias Gram-negativas são selecionadas a partir do grupo consistindo em espécies de Citrobacter, Entero- bacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Salmonella, Serratia, Pseudomonas, e Acinetobacter.
[0045] Outra modalidade da invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade efetiva de um composto de Fórmula (I) combinado com um veículo ou excipiente farmaceuti- camente aceitável. Uma 'quantidade efetiva quando aqui usada se refere a uma quantidade suficiente para reduzir a severidade ou sintomas de uma infecção, ou uma quantidade efetiva para reduzir a carga bacteriana no paciente.
[0046] Composições farmacêuticas de acordo com a presente invenção são fornecidas as quais incluem quaisquer dos compostos descritos aqui e um veículo farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, a composição inclui um agente terapêutico adicional ou um inibidor de beta lactamase.
[0047] Em outro aspecto, a invenção fornece uma combinação farmacêutica compreendendo um composto da invenção e um agente terapêutico adicional ou um inibidor de beta lactamase ou opcionalmente ambos.
[0048] A presente invenção fornece novos compostos, métodos para inibir a sobrevivência e crescimento da população de bactérias Gram-negativas, e novos métodos e composições para tratar infecções bacterianas em mamíferos, particularmente em indivíduos humanos. Os compostos fornecidos aqui podem ser formulados em formulações farmacêuticas e medicamentos que são úteis em métodos para inibir o crescimento bacteriano ou severidade ou duração de uma infecção bacteriana, ou para tratar um indivíduo tendo uma infecção bacteriana que está suscetível à inibição pelos compostos de Fórmula (I). A invenção da mesma forma fornece o uso dos compostos na preparação de medicamentos e formulações farmacêuticas, para uso dos compostos na inibição do crescimento bacteriano, e para uso dos compostos no tratamento de infecções bacterianas em um indivíduo em necessidade de tal tratamento, por exemplo, um indivíduo infectado com a bactérias Gram-negativas ou em risco especialmente alto para tal infecção.
[0049] Outros aspectos da invenção são discutidos aqui.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0050] Para propósitos de interpretação desta especificação, a seguintes definições aplicam-se a menos que especificado de outra maneira ou claramente contradito pelo contexto. Sempre que apropriado, os termos utilizados no singular irão também incluir o plural e vice-versa.
Definições
[0051] Os termos usados no relatório descritivo têm os seguintes significados:
[0052] Quando aqui usado, o termo "indivíduo" se refere a um animal. Em certos aspectos, o animal é um mamífero. Um indivíduo da mesma forma se refere a, por exemplo, primatas (por exemplo, humanos), vacas, ovelhas, cabras, cavalos, cães, gatos, coelhos, ratos, camundongos, peixes, aves e similares. Em certas modalidades, o indivíduo é um ser humano.
[0053] Quando aqui usado, o termo "inibição" ou "inibindo" se refere à redução ou supressão de uma determinada condição, sintoma ou transtorno, ou doença, ou uma diminuição significante na atividade de referência de um processo ou atividade biológica, ou diminuição na viabilidade, número ou taxa de crescimento de uma população bacteriana.
[0054] Quando aqui usado, o termo "tratando" ou "tratamento" de qualquer doença ou transtorno se refere em uma modalidade, à melhora da doença ou transtorno (isto é, retardando ou interrompendo ou reduzindo o desenvolvimento da doença ou pelo menos um dos sintomas clínicos dos mesmos). Em outra modalidade "tratando" ou "tratamento" se refere ao alívio ou melhora de pelo menos um parâmetro físico incluindo aqueles que podem não ser discerníveis pelo paciente. Em ainda outra modalidade, "tratando" ou "tratamento" se refere à modulação da doença ou transtorno, fisicamente, (por exemplo, estabilização de um sintoma discernível), fisiologicamente, (por exemplo, estabilização de um parâmetro físico), ou ambos. Em ainda outra modalidade, "tratando" ou "tratamento" se refere à prevenção ou retardo do início ou desenvolvimento ou progresso da doença ou transtorno.
[0055] Quando aqui usado, o termo "um", "uma", "a/o" e termos similares usados no contexto da presente invenção (especialmente no contexto das reivindicações) deve ser interpretado para abranger igualmente o singular e plural a menos que de outra maneira indicado aqui ou claramente contradito pelo contexto.
[0056] Todos os métodos descritos aqui podem ser realizados em qualquer ordem adequada a menos que de outra maneira indicado aqui ou claramente contradito pelo contexto. O uso de qualquer e todos os exemplos, ou linguagem exemplar (por exemplo, "tal como") fornecidos aqui é destinado somente para melhor iluminar a invenção e não pôr uma limitação no escopo da invenção de outra maneira reivindicado.
[0057] O termo "agente antibacteriano" se refere aos agentes sintetizados ou modificados no laboratório que têm atividade bactericida ou bacteriostática. Um "agente ativo" neste contexto inibirá o crescimento de P. aeruginosa e/ou outras bactérias Gram-negativas. O termo "inibição do crescimento" indica que a taxa de aumento nos números de uma população de uma bactéria particular é reduzida. Desse modo, o termo inclui situações em que a população bacteriana aumenta, porém, em uma taxa reduzida, bem como situações onde o crescimento da população é interrompido, bem como situações onde os números das bactérias na população são reduzidos ou a população até mesmo eliminada.
[0058] "Opcionalmente substituído" significa que o grupo referido pode ser substituído em uma ou mais posições por qualquer uma ou qualquer combinação dos radicais listadas depois disso. Tal substituição envolve a substituição de um átomo de hidrogênio do grupo não substituído por outra porção; desse modo o número de substituintes que podem ser adicionados a qualquer grupo não substituído é igual ao número de átomos de hidrogênio no grupo não substituído. Se não especificado de outra maneira, 'opcionalmente substituído' significa que até três grupos substituintes sem hidrogênio podem ser adicionados.
[0059] "Halo" ou "halogênio", quando aqui usado, pode ser flúor, cloro, bromo ou iodo.
[0060] "C1-C6 alquila", ou "C1-6 alquila" quando aqui usado, denota alquila de cadeia linear ou ramificada tendo 1-6 átomos de carbono. Se um número diferente de átomos de carbono é especificado, tal como C8 ou C3, em seguida a definição deve ser interpretada consequentemente, tal como "C1-C4 alquila" incluirá metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butila e terc-butila.
[0061] "C1-C6 alcóxi", ou "C1-6 alcóxi" quando aqui usado, denota alcóxi de cadeia linear ou ramificada tendo 1-6 átomos de carbono. Se um número diferente de átomos de carbono é especificado, tal como C8 ou C3, em seguida a definição deve ser interpretada consequentemente, por exemplo, "C1-C4 alcóxi" representará metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, butóxi, isobutóxi, sec-butóxi e terc-butóxi.
[0062] "C1-C4-Haloalquila" ou "C1-4 haloalquila" quando aqui usado, denota alquila de cadeia linear ou ramificada tendo 1-4 átomos de carbono, em que pelo menos um hidrogênio foi substituído por um halogênio. Se um número diferente de átomos de carbono é especificado, tal como C6 ou C3, em seguida a definição deve ser interpretada consequentemente, desse modo "C1-C4-Haloalquila" representará metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butila e terc-butila que têm pelo menos um hidrogênio substituído por halogênio, tal como onde o halogênio é flúor: CF3CF2-, (CF3)2CH-, CH3-CF2-, CF3CF2-, CF3, CF2H-, CF3CF2CHCF3 ou CF3CF2CF2CF2-.
[0063] "C3-C8-cicloalquila" ou "C3-8 cicloalquila" quando aqui usado se refere a um anel de hidrocarboneto monocíclico saturado de 3 a 8 átomos de carbono. Exemplos de tais grupos incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila e cicloexila. Se um número diferente de átomos de carbono é especificado, tal como C3-C6, em seguida a definição deve ser interpretada consequentemente.
[0064] "Heterociclila de 4 a 8 membros", "heterociclila de 5 a 6 membros", "heterociclila de 3 a 10 membros", "heterociclila de 3 a 14 membros", "heterociclila de 4 a 14 membros" e "heterociclila de 5 a 14 membros", se refere, respectivamente, a anéis heterocíclicos de 4 a 8 membros, 5 a 6 membros, 3 a 10 membros, 3 a 14 membros, 4 a 14 membros e 5 a 14 membros contendo 1 a 7, 1 a 5 ou 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir do grupo consistindo em nitrogênio, oxigênio e enxofre, que podem ser saturados ou parcialmente saturados. "Heterocíclico" pode ser usado alternadamente com "heterociclila". O grupo heterocíclico pode ser ligado em um heteroátomo ou um átomo de carbono. O termo "heterociclila" inclui grupos de anel simples, grupos de anel fundidos e grupos em ponte. Exemplos de tal heterociclila incluem, porém, não são limitados à pirrolidina, piperidina, piperazina, oxazolidina, pirrolidinona, morfolina, tetra-hidrofurano, tetra-hidrotiofeno, tetra-hidrotiopirano, tetra- hidropirano, 1,4-dioxano, 1,4-oxatiano, 8-aza-biciclo[3.2.1]octano, 3,8- diazabiciclo[3.2.1]octano, 3-Oxa-8-aza-biciclo[3.2.1]octano, 8-Oxa-3- aza-biciclo[3.2.1]octano, 2-Oxa-5-aza-biciclo[2.2.1]heptano, 2,5-Diaza- biciclo[2.2.1]heptano, azetidina, etilenodioxo, oxtano e tiazolidina. Preferivelmente, um grupo heterocíclico ou de heterociclila é um grupo monocíclico saturado ou parcialmente saturado a menos que de outra maneira especificado, e contém 5-7 átomos no anel com até dois heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como membros no anel. Em algumas modalidades, um grupo heterocíclico também inclui sistemas de anel bicíclicos contendo 1 ou 2 heteroátomos tal como N, O ou S como membros no anel e compreendendo dois anéis de 3, 4, 5, ou 6 membros fundidos, tais como 3-azabiciclo[3.1.0]hexano, 8-aza- biciclo[3.2.1]octano, 3,8-diazabiciclo[3.2.1]octano, 3-Oxa-8-aza- biciclo[3.2.1]octano, 8-Oxa-3-aza-biciclo[3.2.1]octano, 2-Oxa-5-aza- biciclo[2.2.1]heptano, 2,5-Diaza-biciclo[2.2.1]heptano.
[0065] "Heteroarila" é um anel completamente insaturado (aromático). O termo "heteroarila" se refere a um sistema de anel aromático monocíclico ou bicíclico ou tricíclico de 5-14 membros, tendo 1 a 8 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S. Tipicamente, a heteroarila é um sistema de anel de 5-10 membros (por exemplo, monociclo de 5-6 membros ou um biciclo de 8-10 membros) ou um sistema de anel de 5-6 membros. A menos que de outra maneira especificado, uma heteroarila é preferivelmente um anel de 56 membros isolado contendo até 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como membros no anel. Grupos heteroarila típicos incluem furano, isotiazol, tiadiazol, oxadiazol, indazol, indol, quinolina, 2- ou 3-tienila; 2- ou 3-furila; 2- ou 3-pirrolila; 1-, 2-, 4-, ou 5-imidazolila; 1, 3-, 4-, ou 5- pirazolila; 2-, 4-, ou 5-tiazolila, 3-, 4-, ou 5-isotiazolila, 2, 4-, ou 5-oxazolila, 3-, 4-, ou 5-isoxazolila, 3- ou 5-(1,2,4-triazolil), 4- ou 5-(1,2, 3-triazolil), tetrazolila, triazina, pirimidina, 2-, 3-, ou 4-piridila, 3- ou 4-piridazinila, 3-, 4-, ou 5-pirazinila, 2-pirazinila, e 2-, 4-, ou 5- pirimidinila.
[0066] O termo "hidróxi" ou "hidroxila" se refere ao grupo -OH, ou quando usado como parte de um nome de grupo tal como hidroxialquila, se refere ao grupo nomeado substituído por um -OH.
[0067] Várias modalidades da invenção são descritas aqui. Será reconhecido que aspectos especificados em cada modalidade podem ser combinados com outros aspectos especificados para fornecer outras modalidades. As seguintes modalidades numeradas são representativas de alguns aspectos da invenção.
[0068] 1. Um composto de Fórmula (I):
Figure img0004
[0069] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo,
[0070] em que:
[0071] Z é CR4 ou N;
[0072] R1 é H ou C1-C4 alquila;
[0073] R2 é selecionado a partir do grupo consistindo em H, C1-C4 alquila, e -COOH
[0074] ou R1 e R2 empregados juntamente com o carbono ao qual eles são ligados formam um anel selecionado a partir de um anel de C3-C6 cicloalquila e um anel heterocíclico de 4-6 membros contendo até dois heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como membros no anel;
[0075] R3 é selecionado a partir de H, -COOH, e -L1-W-(CH2)0-2-X- R5;
[0076] R4 é H ou halo;
[0077] cada L1 é independentemente um C1-4 alquileno de cadeia linear ou ramificada;
[0078] W é uma ligação, O, NH ou S;
[0079] X é fenila, ou um anel de heteroarila de 5-6 membros contendo 1-3 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como membros no anel; onde as fenila e heteroarila de 5-6 membros são opcionalmente substituídas com um ou dois grupos selecionados a partir de C1-4 alquila, hidróxi, -CN, F, C1-4 alcóxi, -NH2, -NH(C1-4 alquila) e -N(C1-4 alquila)2;
[0080] R5 é selecionado a partir de
Figure img0005
[0081] em que R1b, R2b, e R3b são independentemente hidrogênio, hidróxi, CN, (C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, ou heterociclila de 4, 5, 6 ou 7 membros contendo N, O ou S como um membro no anel, em que cada (C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, (C3- C6)cicloalquila, ou heterociclila de 4, 5, 6 ou 7 membros contendo N, O ou S como um membro no anel pode ser substituído por um, dois ou três substituintes selecionados independentemente a partir de Y,
[0082] e em que R2b e R3b juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual eles são ligados podem opcionalmente formar uma heterociclila de 5 a 7 membros incluindo 0 ou 1 heteroátomo adicional selecionado a partir de N, O e S, a referida heterociclila opcionalmente substituída por Y;
[0083] Y é selecionado a partir de F, CN, -NH2, Q, -L2-C(O)NR10- L2-Q, -L2-NR10-C(O)-L2-Q, -L2-OR10, -L2-N(R10)2, -L2-N+(R11)3, -L2-NR10- C(O)R10, -L2-NR10-L2-N(R10)2, -L2-O-C(O)OR10, -L2-O-C(O)-N(R10)2, -L2- NR10-C(O)-N(R10)2, -L2-NR10-C(O)-OR11, -L2-C(=NR10)-N(R10)2,- CON(R10)2, -L2-NR10-C(=NR10)-N(R10)2,-L2-NR10-C(=NR10)-R10, -L2- C(O)N(R10)2, -L2-O-SO3R10 ;
[0084] L2 é independentemente em cada ocorrência uma ligação ou um C1-4 alquileno de cadeia linear ou ramificada, opcionalmente substituído por NH2, OH, ou F;
[0085] Het é um anel heterocíclico ou de heteroarila de 4-6 membros, onde os anéis de heteroarila contêm 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como membros no anel e é opcionalmente substituído por um ou dois grupos selecionados a partir de Y, OH, NH2,-C(O)NR102, e C1-4 alquila opcionalmente substituída por um ou dois Y; e o anel heterocíclico contém 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como membros no anel e é opcionalmente substituído por até três grupos selecionados a partir de halo, Y, C1-4 alquila opcionalmente substituída por um ou dois grupos selecionados a partir de Y, =NR10, =N-OR10, =N-CN, e oxo;
[0086] e Het é opcionalmente fundido em um anel de heteroarila ou heterocíclico de 5 ou 6 membros contendo até dois heteroátomos selecionados a partir de N-R10, O e S como membros no anel, e opcionalmente substituído por um ou dois R16;
[0087] R10 e R12 são independentemente H ou C1-4 alquila opcionalmente substituída por um ou dois grupos selecionados a partir de OH, NH2 ou Q;
[0088] Q é selecionado a partir de -L2-N(R13)2, -L2-N+(R14)3, -L2- NR13-C(=NR13)-N(R13)2, -L2-NR13- CR13(=NR13), -L2-NR13-L2-Cy, -L2- NR13-C(=NR13)-NR13-L2-Cy, -L2-NR13-C(=NR13)-L2-Cy, -L2-Cy-L2-R13 , - L2-Cy-L2-N(R13)2, -L2-NR13-SO2-N(R13)2, -L2-SO2-N(R13)2, -L2-NR13-SO2- R13, -L2-NR13-L2-Ar, -L2-S-L2-Cy, -L2-NR13-(C=O)-O-R13,
Figure img0006
[0089] cada Cy é independentemente uma cicloalquila de 3-6 membros ou heterociclila de 3-6 membros contendo um ou dois heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como um membro no anel e opcionalmente fundido em um anel de arila ou heteroarila de 56 membros, em que cada Cy é opcionalmente substituído por um ou dois grupos selecionados a partir de halo, C1-3 haloalquila, R14, hidróxi, C1-4 alcóxi, -NH2, -NH(C1-4 alquila) ou -N(C1-4 alquila)2;
[0090] Ar é fenila, opcionalmente substituída por um ou dois grupos selecionados a partir de halo, C1-3 haloalquila, R14, hidróxi, C1-4 alcóxi, -NH2, -NH(C1-4 alquila) ou -N(C1-4 alquila)2;
[0091] R11 é independentemente em cada ocorrência C1-4 alquila;
[0092] e dois R10, ou dois R11, ou dois R12 no mesmo N podem ciclizar para formar um anel heterocíclico de 4-6 membros opcionalmente substituído por C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, hidróxi, ou oxo;
[0093] R13 é independentemente em cada ocorrência H ou C1-4 alquila opcionalmente substituída por hidróxi, C1-4 alcóxi, -NH2, -NH(C1- 4 alquila) ou -N(C1-4 alquila)2; opcionalmente, quando R13 é C1-4 alquila ele pode ser substituído por -OR14, -NHR14, hidróxi, C1-4 alcóxi, -NH2, - NH(C1-4 alquila) ou -N(C1-4 alquila)2;
[0094] R14 é independentemente em cada ocorrência C1-4 alquila opcionalmente substituída por hidróxi, C1-4 alcóxi, -NH2, -NH(C1-4 alquila) ou -N(C1-4 alquila)2;
[0095] em que dois R13 ou dois R14 no mesmo N podem ciclizar para formar um anel heterocíclico de 4-6 membros opcionalmente substituído por C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, hidróxi, amino ou oxo;
[0096] R15 é H, halo, C1-4alquila, CN, ou -O(C1-4 alquila);
[0097] cada R16 é independentemente halo, C1-4 alquila, -NH2, CN, ou -O(C1-4 alquila);
[0098] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[0099] É entendido que cada um dos compostos na Tabela B, incluindo os compostos dos Exemplos 1-156, é uma modalidade da invenção e pretende-se que inclua no escopo da modalidade 1.
[00100] 2. Um composto de Fórmula (IA):
Figure img0007
[00101] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo,
[00102] em que:
[00103] Z é CR4 ou N;
[00104] R1 é H ou C1-C4 alquila;
[00105] R2 é selecionado a partir do grupo consistindo em H, C1-C4 alquila, e -COOH
[00106] ou R1 e R2 empregados juntamente com o carbono ao qual eles são ligados formam um anel selecionado a partir de um anel de C3-C6 cicloalquila e um anel heterocíclico de 4-6 membros contendo até dois heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como membros no anel;
[00107] R3 é selecionado a partir de H, -COOH, e -L1-W-(CH2)0-2-X- R5;
[00108] R4 é H ou halo;
[00109] cada L1 é independentemente um C1-4 alquileno de cadeia linear ou ramificada;
[00110] W é uma ligação, O, NH ou S;
[00111] X é fenila, ou um anel de heteroarila de 5-6 membros contendo 1-3 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como membros no anel; onde as fenila e heteroarila de 5-6 membros são opcionalmente substituídas com um ou dois grupos selecionados a partir de C1-4 alquila, hidróxi, -CN, F, C1-4 alcóxi, -NH2, -NH(C1-4 alquila) e -N(C1-4 alquila)2;
[00112] R5 é selecionado a partir de
Figure img0008
[00113] em que R1b, R2b, e R3b são independentemente hidrogênio, hidróxi, CN, (C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, ou heterociclila de 4, 5, 6 ou 7 membros, em que cada (C1-C4)alquila, (C1- C4)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, ou heterociclila de 4, 5, 6 ou 7 membros pode ser substituído por um, dois ou três substituintes selecionados independentemente a partir de Y,
[00114] e em que R2b e R3b juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual eles são ligados podem opcionalmente formar uma heterociclila de 5 a 7 membros incluindo 0 ou 1 heteroátomo adicional selecionado a partir de N, O e S, a referida heterociclila opcionalmente substituída por Y;
[00115] Y é selecionado a partir de F, CN, -NH2, Q, -L2-C(O)NR10- L2-Q, -L2-NR10-C(O)-L2-Q, -L2-OR10, -L2-N(R10)2, -L2-N+(R11)3, -L2-NR10- C(O)R10, -L2-NR10-L2-N(R10)2, -L2-O-C(O)OR10, -L2-O-C(O)-N(R10)2, -L2- NR10-C(O)-N(R10)2, -L2-NR10-C(O)-OR11, -L2-C(=NR10)-N(R10)2,- CON(R10)2, -L2-NR10-C(=NR10)-N(R10)2,-L2-NR10-C(=NR10)-R10, -L2- C(O)N(R10)2, -L2-O-SO3R10 ;
[00116] L2 é independentemente em cada ocorrência uma ligação ou um C1-4 alquileno de cadeia linear ou ramificada;
[00117] Het é um anel heterocíclico ou de heteroarila de 5-6 membros, onde os anéis de heteroarila contêm 1 a 4 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como membros no anel e é opcionalmente substituído por um ou dois grupos selecionados a partir de Y, C1-4 alquila opcionalmente substituída por um ou dois Y, NH2, e - C(O)NR102, e o anel heterocíclico contém 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como membros no anel e é opcionalmente substituído por até três grupos selecionados a partir de halo, Y, C1-4 alquila opcionalmente substituída por um ou dois grupos selecionados a partir de Y, =NR10, =N-OR10, =N-CN, e oxo;
[00118] e Het é opcionalmente fundido em um anel de heteroarila ou heterocíclico de 5 ou 6 membros contendo até dois heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como membros no anel, e opcionalmente substituído por um ou dois R16;
[00119] R10 e R12 são independentemente H ou C1-4 alquila opcionalmente substituída por Q;
[00120] Q é selecionado a partir de -L2-N(R13)2, -L2-N+(R14)3, -L2- NH-C(=NH)-NH2, -L2-C(=NH)-NH2,
Figure img0009
[00121] R11 é independentemente em cada ocorrência C1-4 alquila;
[00122] e dois R10, ou dois R11, ou dois R12 no mesmo N podem ciclizar para formar um anel heterocíclico de 4-6 membros opcionalmente substituído por C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, hidróxi, ou oxo;
[00123] R13 é independentemente em cada ocorrência H ou C1-4 alquila opcionalmente substituída por hidróxi, C1-4 alcóxi, -NH2, -NH(C1- 4 alquila) ou -N(C1-4 alquila)2;
[00124] R14 é independentemente em cada ocorrência C1-4 alquila opcionalmente substituída por hidróxi, C1-4 alcóxi, -NH2, -NH(C1-4 alquila) ou -N(C1-4 alquila)2;
[00125] em que dois R13 ou dois R14 no mesmo N podem ciclizar para formar um anel heterocíclico de 4-6 membros opcionalmente substituído por C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, hidróxi, amino ou oxo;
[00126] R15 é H, halo, C1-4alquila, CN, ou -O(C1-4 alquila);
[00127] cada R16 é independentemente halo, C1-4 alquila, -NH2, CN, ou -O(C1-4 alquila);
[00128] ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00129] Em certas modalidades dos compostos de Fórmula (I) ou (IA), o grupo representado por -O-CR1R2R3 é selecionado a partir de
Figure img0010
[00130] 3. O composto de modalidade 1 ou modalidade 2, em que R1 e R2 são cada um metila e R3 é -COOH.
[00131] 4. O composto de modalidade 1 ou modalidade 2, em que R1 e R2 juntamente com o carbono ao qual eles são ambos ligados formam um anel de ciclopropano e R3 é -COOH.
[00132] 5. O composto de modalidade 1 ou modalidade 2, em que R1 e R2 são ambos H e R3 é -COOH.
[00133] 6. O composto de quaisquer das modalidades precedentes, em que Z é CH.
[00134] 7. O composto de quaisquer das modalidades 1-6, em que Z é N.
[00135] 8. O composto de quaisquer das modalidades precedentes, em que Het é um anel de heteroarila de 5 membros contendo 1-4 átomos de nitrogênio como membros no anel e é opcionalmente substituído por Y. Em algumas tais modalidades, Het é triazol opcionalmente substituído por Y.
[00136] 9. O composto de modalidade 8, em que Het é selecionado a partir de pirrol, pirazol, 1,2,3-triazol, 1,2,4-triazol, 1,3,4-triazol, e 1,2,3,4-tetrazol e é opcionalmente substituído como fornecido na modalidade 8.
[00137] 10. O composto de modalidade 8, em que Het é um grupo 1,2,3-triazol-2-ila que é opcionalmente substituído por -L2-N(R10)2 ou L2-NR10-C(=NR10)-N(R10)2.
[00138] 11. O composto de modalidade 8, que é da fórmula:
Figure img0011
[00139] em que R17 é selecionado a partir de -CH2-G1-(CH2)1-4-G2 e -CH2-G1-Rx-(CH2)0-2-G2,
[00140] G1 é selecionado a partir de -NH-, -NMe-, -NH-C(=NH)-, e - NH-C(=NH)-NH-,
[00141] G2 é selecionado a partir de -NH2, -NHMe, -NH-C(=NH)- NH2, azetidina, e pirrolidina;
[00142] e Rx é um anel selecionado a partir de ciclobutila, azetidina, e pirrolidina.
[00143] 12. O composto de modalidade 8, em que Het é um grupo 1,2,3-triazol-1-ila que é opcionalmente substituído por -L2-N(R10)2 ou L2-NR10-C(=NR10)-N(R10)2.
[00144] 13. O composto de modalidade 8, em que Het é um grupo 1,2,4-triazol-1-ila que é opcionalmente substituído por -L2-N(R10)2 ou L2-NR10-C(=NR10)-N(R10)2.
[00145] 14. O composto de quaisquer das modalidades 1-7, em que Het é um anel saturado substituído por oxo e opcionalmente também substituído por Y.
[00146] 15. O composto de modalidade 14, em que Het é selecionado a partir de pirrolidina-2-ona, oxazolidin-2-ona, e imidazolidin-2-ona, e é opcionalmente substituído por Y. Em modalidades particulares destes compostos, Het é selecionado a partir de:
Figure img0012
[00147] , onde a ligação tracejada indica o ponto de ligação de Het ao restante da Fórmula (I) ou (IA), e (Y)0-1 representa um substituinte opcional Y que pode ser ligado em qualquer posição disponível no anel.
[00148] 16. O composto de modalidade 14, em que Het é oxazolidin-2-ona e é opcionalmente substituído por -L2-N(R10)2 ou L2- NR10-C(=NR10)-N(R10)2
[00149] 17. O composto de modalidade 14, em que Het é oxazolidin-2-ona que é substituído na posição 5 com -L2-N(R10)2 ou L2- NR10-C(=NR10)-N(R10)2 na configuração R
[00150] 18. O composto de quaisquer das modalidades precedentes, tendo a estrutura de Fórmula (II):
Figure img0013
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[00151] 19. O composto de modalidade 1 ou modalidade 2, que é da fórmula (IIIa) ou (IIIb):
Figure img0014
[00152] em que R17 é Y ou C1-4 alquila opcionalmente substituída por um ou dois Y.
[00153] 20. O composto de modalidade 1 ou modalidade 2, em que ---O-CR1R2R3 é selecionado a partir de
Figure img0015
e
Figure img0016
[00154] 21. O composto de modalidade 1 ou modalidade 20, em que Het é selecionado a partir de
Figure img0017
Figure img0018
[00155] 22. O composto de quaisquer das modalidades 1-16, em que L2 é -(CH2)1-3-.
[00156] 23. O composto de modalidade 18, em que Het é selecionado a partir de:
Figure img0019
[00157] 24. O composto de modalidade 18, em que Het é selecionado a partir de
Figure img0020
[00158] 25. O composto de modalidade 19, 23, ou 25, em que Y é selecionado a partir de Q, -L2-OR10, -L2-N(R10)2, -L2-N+(R11)3, -L2-NR10- C(O)R10, -, -L2-O-C(O)OR10, -L2-O-C(O)-N(R10)2, -L2-NR10-C(O)- N(R10)2, -L2-C(=NR10)-N(R10)2, -CON(R10)2, -L2-NR10-C(=NR10)-N(R10)2, e -L2-NR10-C(=NR10)-R10.
[00159] Alternativamente, o composto de modalidade 19, 23 ou 24, em que Y é de fórmula -L2-NR10-L2-N(R10)2, por exemplo Y pode ser um grupo tal como -CH2-NR10-(CH2)2-3-N(R10)2; em modalidades particulares destes compostos, R10 é H.
[00160] 26. O composto de quaisquer das modalidades 6-25, em
Figure img0021
que R3 é da fórmula
[00161] 27. O composto de modalidade 26, em que R3 é
Figure img0022
onde R3b é selecionado a partir de H, azetidina, pirrolidina e piperidina.
[00162] 28. O composto de quaisquer das modalidades precedentes, que é um sal farmaceuticamente aceitável.
[00163] 29. A composição farmacêutica compreendendo um composto de quaisquer das modalidades precedentes e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.
[00164] 30. Um método para tratar uma infecção bacteriana Gram- negativa, que compreende administrar a um indivíduo em necessidade de tal tratamento um composto de quaisquer das modalidades 1-27, ou uma composição farmacêutica de modalidade 29.
[00165] 31. O método de modalidade 30, em que a infecção bacteriana é causada por uma espécie de Burkholderia, Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Meningitidis, Morganella, Pseudomonas, Proteus, Salmonella, Serratia, Acinetobacter, Bacteroides, Campylobacter, Neisseria, ou Stenotrophomonas bacteria.
[00166] 32. O método de modalidade 30, em que a infecção bacteriana é pneumonia nosocomial, uma infecção intra-abdominal, ou uma infecção no trato urinário causada por uma espécie de Enterobacteriaceae.
[00167] 33. A composto de acordo com quaisquer das modalidades 1-27, para uso como um medicamento.
[00168] 34. O composto de modalidade 33, em que o medicamento é um agente antibacteriano.
[00169] 35. O composto de modalidade 33, em que o agente antibacteriano é para o tratamento de uma infecção bacteriana Gram- negativa causada por uma espécie de Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Pseudomonas, Proteus, Salmonella, Serratia, Acinetobacter, Bacteroides, Burkholderia, Campylobacter, Neisseria, ou Stenotrophomonas.
[00170] 36. A combinação farmacêutica, compreendendo um composto de acordo com quaisquer das modalidades 1-27 e um segundo agente terapêutico.
[00171] Em compostos de Fórmula (I) e várias modalidades descritas acima, a oxima é preferivelmente da configuração mostrada aqui:
Figure img0023
[00172] Em alguns exemplos de quaisquer das modalidades descritas acima, a menos que de outra maneira especificado, um porém não ambos de R2 e R3 representa -COOH.
[00173] Em muitas modalidades dos compostos descritos acima, Het não é piridina. Em modalidades preferidas, Het é um anel heterocíclico ou de heteroarila de 5 membros.
[00174] Onde R3 em quaisquer das modalidades acima é de fórmula -L1-W-(CH2)0-2-X-R5, X pode ser fenila. Em algumas destas modalidades, L1 é CH2. Em algumas tais modalidades, W é O. Em algumas destas modalidades, R5 é um grupo da fórmula
Figure img0024
[00175] em que R1b, R2b e R3b são como descrito para a modalidade 1 acima. Em certas destas modalidades, R5 é de fórmula
Figure img0025
em que R1b e R2b representam cada um H, e R3b pode ser H, ou um grupo heterocíclico tal como 4-piperidinila. Adequadamente, nestas modalidades R1 é H e R2 é H ou COOH.
[00176] Em um outro aspecto, a invenção fornece:
[00177] • Uma combinação farmacêutica compreendendo (a) um primeiro agente terapêutico que é um composto da invenção, por exemplo um composto de fórmula (I) ou qualquer subfórmula do mesmo descrita aqui, e (b) um segundo agente terapêutico como descrito acima.
[00178] • Um método como definido acima compreendendo a coadministração, por exemplo, simultaneamente ou em sequência, de uma quantidade terapeuticamente efetiva de um composto da invenção, por exemplo, um composto de fórmula (I) ou qualquer subfórmula do mesmo que é descrita aqui, e um segundo agente terapêutico como descrito acima.
[00179] Os termos "coadministração" ou "administração combinada" ou similares quando utilizados aqui estão destinados a abranger a administração dos agentes terapêuticos selecionados a um paciente isolado, e são destinados a incluir os regimes de tratamento em que os agentes não são necessariamente administrados pela mesma via de administração ou ao mesmo tempo. Combinações fixadas estão da mesma forma dentro do escopo da presente invenção. A administração de uma combinação farmacêutica da invenção resulta em um efeito benéfico, por exemplo, um efeito terapêutico sinergístico, comparado a uma monoterapia aplicando apenas um de seus ingredientes farmaceuticamente ativos.
[00180] Cada componente de uma combinação de acordo com esta invenção pode ser administrado separadamente, juntamente, ou em qualquer combinação do mesmo.
[00181] O composto da invenção e qualquer agente adicional pode ser formulado em formas de dosagem separadas. Alternativamente, para diminuir o número de formas de dosagem administradas a um paciente, o composto da invenção e qualquer agente adicional podem ser formulados juntos em qualquer combinação. Por exemplo, o composto do inibidor de invenção pode ser formulado em uma forma de dosagem e o agente adicional pode ser formulado junto em outra forma de dosagem. Qualquer forma de dosagem separada pode ser administrada ao mesmo tempo ou em tempos diferentes.
[00182] Alternativamente, uma composição desta invenção compreende um agente adicional como descrito aqui. Cada componente pode estar presente em composições individuais, composições de combinação, ou em uma única composição.
[00183] Os compostos da invenção podem ser sintetizados pelas rotinas sintéticas gerais abaixo, exemplos específicos dos quais são descritos em mais detalhes nos Exemplos.
[00184] Os compostos da presente invenção e intermediários podem da mesma forma ser convertidos um ao outro de acordo com os métodos geralmente conhecidos por aqueles versados na na técnica.
[00185] Dentro do escopo deste texto, apenas um grupo facilmente removível que não é um constituinte do produto final desejado particular dos compostos da presente invenção é designado um "grupo protetor", a menos que o contexto indique de outra maneira. A proteção dos grupos funcionais por tais grupos protetores, os próprios grupos protetores, e suas reações de clivagem são descritas por exemplo em trabalhos de referência padrão, tais como J. F. W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London and New York 1973, in T. W. Greene and P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", Third edition, Wiley, New York 1999, in "The Peptides"; Volume 3 (editors: E. Gross and J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981, in "Methoden der organischen Chemie" (Methods of Organic Chemistry), Houben Weyl, 4th edition, Volume 15/I, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, in H.-D. Jakubke and H. Jeschkeit, "Aminosauren, Peptide, Proteine" (Amino acids, Peptides, Proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, and Basel 1982, and in Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate" (Chemistry of Carbohydrates: Monosaccharides and Derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974. Uma característica dos grupos protetores é que eles podem ser removidos facilmente (isto é, sem a ocorrência de undesired reações secundárias indesejadas) por exemplo, por solvólise, redução, fotólise ou alternativamente sob condições fisiológicas (por exemplo, por clivagem enzimática).
[00186] Sais dos compostos da presente invenção tendo pelo menos um grupo de formação de sal podem ser preparados de uma maneira conhecida por aqueles versados na ténica. Por exemplo, os sais dos compostos da presente invenção tendo grupos ácidos podem ser formados, por exemplo, tratando-se os compostos com compostos de metal, tais como sais de metal de álcali de ácidos carboxílicos orgânicos adequados, por exemplo, o sal sódico de ácido 2-etilexanoico, com compostos de metal de álcali ou de metal alcalino terroso orgânicos, tais como os hidróxidos, carbonatos ou hidrogenocarbonatos correspon-dentes, tal como hidróxido de sódio ou potássio, carbonato ou hidrogeno- carbonato, com compostos de cálcio correspondentes ou com amônia ou uma amina orgânica adequada, quantidades estequiométricas ou apenas um pequeno excesso do agente de formação de sal que é preferivel-mente usado. Sais de adição de ácido dos compostos da presente invenção são obtidos de maneira habitual, por exemplo, tratando-se os compostos com um ácido ou um reagente de troca de ânion adequado. Sais internos dos compostos da presente invenção contendo grupos de formação de sal básicos e ácidos, por exemplo, um grupo carbóxi livre e um grupo amino livre, podem ser formados, por exemplo, pela neutralização de sais, tais como sais de adição de ácido, ao ponto isoelétrico, por exemplo, com bases fracas, ou por tratamento com trocadores de íons.
[00187] Os sais podem ser convertidos nos compostos livres de acordo com os métodos conhecidos por aqueles versados na técnica. Metal e sais de amônio podem ser convertidos, por exemplo, por tratamento com ácidos adequados e sais de adição de ácida, por exemplo, por tratamento com um agente básico adequado.
[00188] Misturas de isômeros obteníveis de acordo com a invenção geralmente podem ser separados de uma maneira conhecida por aqueles versados na técnica nos isômeros individuais; diastereoisô- meros podem ser separados, por exemplo, dividindo-se entre as misturas de solvente polifásicas, recristalização e/ou separação cromatográfica, por exemplo, em sílica-gel ou por, por exemplo, cromatografia líquida de média pressão em uma coluna de fase reversa, e os racematos podem ser separados, por exemplo, pela formação de sais com reagentes de formação de sal oticamente puros e separação da mistura de diastereoisômeros assim obteníveis, por exemplo, por meio de cristalização fracionária, ou por cromatografia em materiais de coluna oticamente ativos.
[00189] Intermediários e produtos finais podem ser preparados e/ou purificados de acordo com os métodos padrão, por exemplo, usando métodos cromatográficos, métodos de distribuição, (re-)cristalização, e similares.
[00190] O seguinte aplica-se em geral a todos os processos mencionados aqui anteriormente e em seguida.
[00191] Todas as etapas de processo para preparar os compostos da invenção podem ser realizadas sob condições reacionais que são conhecidas por aqueles versados na técnica, incluindo aquelas especificamente mencionadas, na ausência ou, habitualmente, na presença de solventes ou diluentes, incluindo, por exemplo, solventes ou diluentes que são inertes para os reagentes usados e que os dissolvem, na ausência ou presença de catalisadores, agentes de condensação ou neutralização, por exemplo, trocadores de íons, tais como trocadores de cátion, por exemplo, na forma de H+, dependendo da natureza da reação e/ou dos reagentes em temperatura reduzida, normal ou elevada, por exemplo, em uma faixa de temperatura de cerca de -100 °C a cerca de 190 °C, incluindo, por exemplo, de aproximadamente -80 °C a cerca de 150 °C, por exemplo, de -80 a -60 °C, em temperatura ambiente, de -20 a 40 °C ou em temperatura de refluxo, sob pressão atmosférica ou em um recipiente fechado, onde apropriado sob pressão, e/ou em uma atmosfera inerte, por exemplo, sob uma atmosfera de argônio ou nitrogênio.
[00192] Em todos os estágios das reações, misturas de isômeros que são formadas podem ser separadas nos isômeros individuais, por exemplo, diastereoisômeros ou enantiômeros, ou em quaisquer misturas desejadas de isômeros, por exemplo, racematos ou misturas de diastereoisômeros.
[00193] Os solventes dos quais aqueles solventes que são adequadas para qualquer reação particular podem ser selecionados incluem aqueles especificamente mencionados ou, por exemplo, água, ésteres, tais como alquila inferior-alcanoatos inferiores, por exemplo, acetato de etila, éteres, tais como éteres alifáticos, por exemplo, éter de dietila, ou éteres cíclicos, por exemplo, tetra-hidrofurano ou dioxano, hidrocarbonetos aromáticos líquidos, tal como benzeno ou tolueno, alcoóis, tal como metanol, etanol ou 1- ou 2-propanol, nitrilas, tal como acetonitrila, hidrocarbonetos halogenados, tal como cloreto de metileno ou clorofórmio, amidas ácidas, tal como dimetilformamida ou dimetil acetamida, bases, tais como bases de nitrogênio heterocíclicas, por exemplo, piridina ou N-metilpirrolidin-2-ona, anidridos de ácido carboxílico, tais como anidridos de ácido alcanoico inferiores, por exemplo, anidrido acético, hidrocarbonetos cíclicos, lineares ou ramificados, tal como cicloexano, hexano ou isopentano, meticicloexano, ou misturas desses solventes, por exemplo, soluções aquosas, a menos que de outra maneira indicado na descrição dos processos. Tais misturas de solvente podem da mesma forma ser usadas na preparação, por exemplo, por cromatografia ou divisão.
[00194] Os compostos da presente invenção, incluindo seus sais, podem da mesma forma ser obtidos na forma de hidratos, ou seus cristais podem, por exemplo, incluir o solvente usado para cristalização. Formas cristalinas diferentes podem estar presentes.
[00195] Todos os materiais de partida, blocos de construção, reagentes, ácidos, bases, agentes de desidratação, solventes e catalisadores utilizados para sintetizar os compostos da presente invenção estão comercialmente disponíveis ou podem ser produzidos por métodos de síntese orgânica conhecidos por alguém de experiência ordinária na técnica.
[00196] O termo "isômero ótico" ou "um estereoisômero" se refere a quaisquer das várias configurações estereoisoméricas que podem existir para um determinado composto da presente invenção e podem incluir isômeros geométricos. É compreendido que um substituinte pode ser ligado em um centro quiral de um átomo de carbono. O termo "quiral" se refere às moléculas que têm a propriedade de não sobreponibilidade em seu par de imagem refletida, enquanto o termo "aquiral" se refere às moléculas que são sobreponíveis em seu par de imagem refletida. Portanto, a invenção inclui enantiômeros, diastereômeros ou racematos do composto. "Enantiômeros" é um par de estereoisômeros que são imagens refletidas não sobreponíveis enre si. Uma mistura de 1:1 de um par de enantiômeros é uma "mistura racêmica". O termo é usado para designar uma mistura racêmica onde apropriado. "Diastereoisômeros" são estereoisômeros que têm pelo menos dois átomos assimétricos, mas que não são imagens refletidas entre si. A estereoquímica absoluta é especificada de acordo com o sistema de R-S de Cahn- lngold- Prelog. Quando um composto é um enantiômero puro, a estereoquímica em cada carbono quiral pode ser especificada por R ou S. Compostos resolvidos cuja configuração absoluta é desconhecida podem ser designados (+) ou (- ) dependendo da direção (dextro ou levogiratória) que eles giram o plano de luz polarizada no comprimento de onda da linha D de sódio. Certos compostos descritos aqui contêm um ou mais centros ou eixos assimétricos e podem desse modo dar origem aos enantiômeros, diastereômeros e outras formas estereoisoméricas que podem ser definidas, em termos de estereoquímica absoluta, como (R)- ou (S)-.
[00197] Dependendo da escolha dos materiais de partida e procedimentos, os compostos podem estar presentes na forma de um dos possíveis isômeros ou como misturas dos mesmos, por exemplo, como isômeros óticos puros, ou como misturas de isômero, tais como misturas de racematos e diastereoisômeros, dependendo do número de átomos de carbono assimétricos. A presente invenção é pretendida incluir todos os tais possíveis estereoisômeros, incluindo misturas racêmicas, misturas diasterioméricas e formas oticamente puras. Isômeros (R)- e (S)- oticamente ativos podem ser preparados usando sintons quirais ou reagentes quirais, ou resolvidos usando técnicas convencionais. Se o composto contém uma ligação dupla, o substituinte pode ser a configuração E ou Z. Se o composto contém uma cicloalquila dissubstituída, o substituinte de cicloalquila pode ter uma configuração cis ou trans. Pretende-se que todas as formas tautoméricas sejam da mesma forma incluídas.
[00198] Quaisquer misturas resultantes de isômeros podem ser separadas com base nas diferenças fisicoquímicas dos constituintes, nos isômeros geométricos ou óticos puros ou substancialmente puros, diastereômeros, racematos, por exemplo, por cromatografia e/ou cristalização fracional.
[00199] Quaisquer racematos resultante de produtos finais ou intermediários podem ser resolvidos nos antípodas óticos por métodos conhecidos, por exemplo, por separação dos sais diastereoméricos dos mesmos, obtidos com um ácido ou base oticamente ativo, e liberando o composto ácido ou básico oticamente ativo. Em particular, uma porção básica pode desse modo ser empregada para resolver os compostos da presente invenção em seus antípodas óticos, por exemplo, por cristalização fracional de um sal formada com um ácido oticamente ativo, por exemplo, ácido tartárico, ácido dibenzoil tartárico, ácido diacetil tartárico, ácido di-O,O'-p-toluoil tartárico, ácido mandélico, ácido málico ou ácido canfor-10-sulfônico. Produtos racêmicas podem da mesma forma ser resolvidos por cromatografia quiral, por exemplo, cromatografia líquida de alta pressão (HPLC) usando um absorvente quiral.
[00200] Além disso, os compostos da presente invenção, incluindo seus sais, podem da mesma forma ser obtidos na forma de seus hidratos, ou incluem outros solventes usados para sua cristalização. Os compostos da presente invenção podem inerentemente ou por projeto formar solvatos com solventes farmaceuticamente aceitáveis (incluindo água); portanto, é pretendido que a invenção abranja igualmente as formas solvatadas e não solvatadas. O termo "solvato" se refere a um complexo molecular de um composto da presente invenção (incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo) com uma ou mais moléculas solventes. Tais moléculas solventes são aquelas geralmente usadas na técnica farmacêutica que é conhecida por ser inócua ao recipiente, por exemplo, água, etanol, e similares. O termo "hidrato" se refere ao complexo onde a molécula solvente é água.
[00201] Os compostos da presente invenção, incluindo sais, hidratos e solvatos dos mesmos, podem inerentemente ou por projeto formar polimorfos.
[00202] Quando aqui usado, os termos "sal" ou "sais" referem-se a um sal de adição de ácido ou de adição de base de um composto da presente invenção. "Sais" incluem em particular "sais farmaceuticamente aceitáveis". O termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" se refere aos sais que mantêm a efetividade biológica e propriedades dos compostos desta invenção e, que não são tipicamente biologicamente ou de outra maneira indesejáveis. Em muitos casos, os compostos da presente invenção são capazes de formar ácido e/ou base em virtude da presença de grupos amino e/ou carboxila ou grupos similares a estes.
[00203] Sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados com ácidos inorgânicos e ácidos orgânicos, por exemplo, sais de acetato, aspartato, benzoato, besilato, brome- to/bromidrato, bicarbonato/carbonato, bissulfato/sulfato, canforsul- fonato, cloreto/cloridrato, clorteofilonato, citrato, etandissulfonato, fumarato, gluceptato, gliconato, glicuronato, hipurato, hidroio- deto/iodeto, isetionato, lactato, lactobionato, laurilsulfato, malato, maleato, malonato, mandelato, mesilato, metilsulfato, naftoato, napsilato, nicotinato, nitrato, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/hidrogenofosfato/di-hidrogenofosfato, poligalacturo- nato, propionato, estearato, sucinato, sulfossalicilato, tratarato, tosilato e trifluoroacetato.
[00204] Ácidos inorgânicos dos quais os sais podem ser derivados incluem, por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e similares.
[00205] Ácidos orgânicos dos quais os sais podem ser derivados incluem, por exemplo, ácido acético, ácido propiônico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malônico, ácido sucínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido mandélico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido toluenossulfônico, ácido sulfossalicílico, e similares. Sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados com bases inorgânicas e orgânicas.
[00206] Bases inorgânicas das quais sais podem ser derivados incluem, por exemplo, sais de amônio e metais das colunas I a XII da tabela periódica. Em certas modalidades, os sais são derivados de sódio, potássio, amônio, cálcio, magnésio, ferro, prata, zinco, e cobre; sais particularmente adequadas incluem sais de amônio, potássio, sódio, cálcio e magnésio.
[00207] Bases orgânicas das quais os sais podem ser derivados incluem, por exemplo, aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas incluindo aminas substituídas de ocorrência natural, aminas cíclicas, resinas de troca de íon básicas e similares. Certas aminas orgânicas incluem isopropilamina, benzatina, colinato, dietanolamina, dietilamina, lisina, meglumina, piperazina e trometamina.
[00208] Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser sintetizados de uma porção básica ou ácida, por métodos químicos convencionais. Geralmente, tais sais podem ser preparados reagindo-se formas de ácido livre destes compostos com uma quantidade estequiométrica da base apropriada (tal como Na, Ca, Mg, ou hidróxido de K, carbonato, bicarbonato ou similares), ou reagindo- se formas de base livre destes compostos com uma quantidade estequiométrica do ácido apropriado. Tais reações são realizadas tipicamente em água ou em um solvente orgânico, ou em uma mistura dos dois. Geralmente, o uso de meios não aquosos como éter, acetato de etila, etanol, isopropanol, ou acetonitrila é desejável, onde praticável. Sais adequados adicionais podem ser encontrados, por exemplo, em "Remington's Pharmaceutical Sciences", 20° ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); e em "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" por Stahl e Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002).
[00209] Qualquer fórmula dada aqui é da mesma pretendido representar formas não rotuladas bem como formas isotopicamente rotuladas dos compostos da presente invenção. Compostos isotopicamente rotulados têm estruturas descritas pelas fórmulas dadas aqui a não ser que um ou mais átomos sejam substituídos por um átomo tendo uma massa atômica ou número de massa selecionado. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados em compostos da invenção incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, flúor e cloro, tais como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl, 125I respectivamente. A invenção inclui vários compostos isotopicamente rotulados da presente invenção, por exemplo, aqueles em que os isótopos radioativos, tais como 3H e 14C, ou aqueles em que os isótopos não radioativos, tais como 2H e 13C estão presentes. Tais compostos isotopicamente rotulados são úteis em estudos metabólicos (com 14C), estudos cinéticos de reação (com, por exemplo 2H ou 3H), detecção ou técnicas de imageamento, tal como tomografia por emissão de pósitrons (PET) ou tomografia computadorizada por emissão fotônica única (SPECT) incluindo ensaios de distribuição de tecido de substrato ou fármaco, ou no tratamento radioativo de pacientes. Em particular, um composto rotulado de 18F da presente invenção pode ser particularmente desejável para estudos por PET ou SPECT. Compostos isotopicamente rotulados da presente invenção geralmente podem ser preparados por técnicas convencionais conhecidas por aqueles versados na técnica ou por processos análogos àqueles descritos nos Exemplos e Preparações acompanhantes usando um reagente isotopicamente rotulado apropriado no lugar do reagente não rotulado previamente empregado.
[00210] Além disso, a substituição com isótopos mais pesados, particularmente deutério (isto é, 2H ou D) pode proporcionar certas vantagens terapêuticas resultantes da maior estabilidade metabólica, por exemplo, meia-vida in vivo aumentada ou exigências de dosagem reduzidas ou uma melhoria no índice terapêutico. É compreendido que deutério neste contexto é considerado como um substituinte de um composto da presente invenção. A concentração de um tal isótopo mais pesado, especificamente deutério, pode ser definida pelo fator de enriquecimento isotópico. O termo "fator de enriquecimento isotópico" quando aqui usado significa a relação entre a abundância isotópica e a abundância natural de um isótopo especificado. Se um substituinte em um composto desta invenção é denotado deutério, tal composto tem um fator de enriquecimento isotópico para cada átomo de deutério designado de pelo menos 3500 (52,5% de incorporação de deutério em cada átomo de deutério designado), pelo menos 4000 (60% de incorporação de deutério), pelo menos 4500 (67,5% de incorporação de deutério), pelo menos 5000 (75% de incorporação de deutério), pelo menos 5500 (82,5% de incorporação de deutério), pelo menos 6000 (90% de incorporação de deutério), pelo menos 6333,3 (95% de incorporação de deutério), pelo menos 6466,7 (97% de incorporação de deutério), pelo menos 6600 (99% de incorporação de deutério), ou pelo menos 6633,3 (99,5% de incorporação de deutério).
[00211] Solvatos farmaceuticamente aceitáveis de acordo com a invenção incluem aqueles em que o solvente de cristalização pode ser isotopicamente substituído, por exemplo, D2O, d6-acetona, d6-DMSO.
[00212] Compostos da presente invenção que contêm grupos capazes de agir como doadores e/ou aceptores para ligações de hidrogênio podem ser capazes de formar cocristais com formadores de cocristal adequados. Estes cocristais podem ser preparados de compostos da presente invenção por procedimentos de formação de cocristal conhecido. Tais procedimentos incluem moagem, aquecimento, co-sublimação, cofusão, ou contato em compostos de solução da presente invenção com o formador de cocristal sob condições de cristalização e isolamento de cocristais desse modo formados. Formadores de cocristal adequadas incluem aqueles descritos em WO 2004/078163. Consequentemente, a invenção também fornece cocristais compreendendo um composto da presente invenção.
[00213] Todos os métodos descritos aqui podem ser realizados em qualquer ordem adequada a menos que de outra maneira indicado aqui ou de outra maneira claramente contradito pelo contexto. O uso de quaisquer e todos os exemplos, ou linguagem exemplar (por exemplo, "tal como") fornecidos aqui é pretendido para somente iluminar melhor a invenção e não pôr uma limitação no escopo da invenção de outra maneira reivindicada.
[00214] A presente invenção fornece novos compostos, formulações farmacêuticas incluindo os compostos, e métodos de tratar infecções bacterianas Gram-negativas. Particularmente, os compostos são adequados para uso para tratar infecções causadas por bactérias Burkholderia, Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Meningitidis, Morganella, Pseudomonas, Proteus, Salmonella, Serratia, Acinetobacter, Bacteroides, Campylobacter, Neisseria ou Stenotrophomonas, incluindo espécies nomeadas aqui.
[00215] A substituição com isótopos mais pesados tal como deutério, isto é, 2H, pode proporcionar certas vantagens terapêuticas resultantes da maior estabilidade metabólica, por exemplo, meia-vida in vivo aumentada ou exigências de dosagem reduzidas, e consequentemente pode ser preferido em algumas circunstâncias. Por exemplo, a substituição de deutério em ligações de hidrocarboneto não trocáveis (por exemplo, C-H) podem retardar a epimerização e/ou oxidação metabólica in vivo.
[00216] Compostos isotopicamente rotulados da invenção, isto é, compostos de fórmula (I), geralmente podem ser preparados por técnicas convencionais conhecidas por aqueles versados na técnica ou por processos análogos àqueles descritos nos Exemplos e Seções de Preparações acompanhantes usando um reagente isotopicamente rotulado apropriado no lugar do reagente não rotulado previamente.
[00217] Em ainda outro aspecto, a invenção fornece um método para tratar um indivíduo com uma infecção bacteriana Gram-negativa, o método compreendendo a etapa de administrar ao indivíduo em necessidade do mesmo uma quantidade antibacterialmente efetiva de um composto da invenção, por exemplo, um composto de Fórmula I ou sal do mesmo com um veículo farmaceuticamente aceitável.
[00218] Os compostos da invenção são da mesma forma úteis no tratamento de pacientes que sofrem de ou estão suscetíveis à pneumonia, sepse, fibrose cística, ferimento, pé diabético complicado ou infecções do trato urinário complicadas e doenças sexualmente transmitidas causadas por patógenos Gram-negativos. Os compostos da invenção são da mesma forma úteis nas condições que são causadas por uma espécie de Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Salmonella, Serratia, Pseudomonas, Acinetobacter, Bacteroides, Burkholderia, Campylobacter, Neisseria, ou Stenotrophomonas. Em particular, uma infecção bacteriana causada por uma espécie de Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Salmonella, Serratia, Pseudomonas, ou Acinetobacter é tratável por métodos aqui. Espécies bacterianas particulares para tal tratamento incluem Citrobacter freundii, Citrobacter koseri, Enterobacter cloacae, Enterobacter faecalis, Enterobacter faecium, Escherichia coli, Klebsiella pneumonia, Klebsiella oxytoca, Morganella morganii, Proteus mirabilis, espécie de Salmonella, Serratia marcescens, Pseudomonas aeruginosa, e Acinetobacter baumanii, bem como Bacteroides bivius, Bacteroides fragilis, Burkholderia cepacia, Campylobacter jejuni, Neisseria gonorrhoeae, eStenotrophomonas maltophilia.
[00219] Um composto da presente invenção pode da mesma forma ser usado em combinação com outros agentes, por exemplo, um agente antibiótico adicional que é ou não é de fórmula I, para o tratamento de uma infecção bacteriana em um indivíduo, ou um composto que aumenta a atividade antibacteriana dos compostos da invenção, incluindo potencializadores tais como inibidores de betalactamase (BLIs). BLIs adequadas para uso em combinação com os compostos da invenção, incluindo os compostos de Fórmula (I) e subgêneros dos mesmos, incluem avibactam, ácido clavulânico, sulbactam, tazobactam, e outros compostos da fórmula
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[00220] em que M é H ou um cátion farmaceuticamente aceitável, e R representa CN,-C(O)NR1R2, ou um grupo heterocíclico ou de heteroarila de 5-6 membros opcionalmente substituído. Amidas adequadas incluem aquelas R1 é H ou C1-4 alquila, e R2 é C1-4 alquila opcionalmente substituída, C1-4 alcóxi opcionalmente substituído, C1-4 alquilamino opcionalmente substituído, um grupo C5-6 heterocíclico opcionalmente substituído, ou -NH-C(O)-R3, onde R3 é C1-4 alquila opcionalmente substituída, C1-4 alcóxi opcionalmente substituído, C1-4 alquilamino opcionalmente substituído, um grupo C5-6 heterocíclico opcionalmente substituído. Cada grupo heterocíclico ou de heteroarila nestes compostos contém 1-2 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como membros no anel, e cada grupo opcionalmente substituído pode ser substituído por 1-2 grupos selecionados a partir de CN, halo, -OH, C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, amino, C1-4 alquilamino, di(C1-4 alquil)amino, -COO(CI-4 alquil), e grupos heterocíclicos de 5-6 membros. Compostos adequados desta fórmula são descritos em WO2008/039420, WO2009/091856, WO2013/122888, WO2010/126820, WO2009/091856, WO2013/038330, US2013/0225554, WO2013149121, WO2013149136, WO2014141132 e WO2014/033560.
[00221] Pelo termo "combinação", é significado uma combinação fixa em uma forma de unidade de dosagem, ou um kit ou instruções para a administração combinada onde um composto da presente invenção e um par de combinação podem ser administrados independentemente ao mesmo tempo ou separadamente dentro de intervalos de tempo que especialmente permitem que os pares de combinação mostrem uma cooperativa, por exemplo, efeito sinergístico, ou qualquer combinação do mesmo.
[00222] Uma modalidade da presente invenção fornece compostos da presente invenção em uma combinação farmacêutica com um segundo agente terapêutico. Em algumas modalidades, o segundo agente terapêutico é um agente antibacteriano. Exemplos não limitantes de agentes antibacterianos para uso em combinações farmacêuticas da invenção podem ser selecionados dos seguintes grupos:
[00223] (1) Macrolídeos ou cetolídeos tais como eritromicina, azitromicina, claritromicina, e telitromicina;
[00224] (2) beta-lactans incluindo penicilina tais como penicilina G, penicilina V, meticilina, oxacilina, cloxacilina, dicloxacilina, nafcilina, ampicilina, amoxicilina, carbenicilina, ticarcilina, mezlocilina, piperacilina, azlocilina, temocilina, cefalosporina tais como cefalotina, cefapirina, cefradina, cefaloridina, cefazolina, cefamandol, cefuroxima, cefalexina, cefprozil, cefaclor, loracarbefe, cefoxitina, cefotaxima, ceftizoxima, ceftriaxona, cefoperazona, cefixima, cefpodoxima, ceftibuteno, cefdinir, cefpiroma, cefixima, cefpodoxima, ceftibuteno, cefdinir, cefpiroma, cefepima, e carbapenens tais como doripenem, imipenem, meropenem e PZ-601;
[00225] (3) Glicopeptídeos tais como vancomicina e teicoplanina;
[00226] (4) Quinolonas tais ácido asnalidíxico, ácido oxolínico, norfloxacino, pefloxacino, enoxacino, ofloxacino, levofloxacino, ciprofloxacino, temafloxacino, lomefloxacino, fleroxacino, grepafloxacino, esparfloxacino, trovafloxacino, clinafloxacino, gatifloxacino, moxifloxacino, sitafloxacino, ganefloxacino, gemifloxacino e pazufloxacino;
[00227] (5) Sulfonamidas antibacterianas e antibacterianas, incluindo ácido para-aminobenzoico, sulfadiazina, sulfisoxazol, sulfametoxazol e sulfatalidina;
[00228] (6) Aminoglicosídeos tais como estreptomicina, neomicina, canamicina, paromicina, gentamicina, tobramicina, amicacina, netilmicina, espectinomicina, sisomicina, dibecalina e isepamicina;
[00229] (7) Tetraciclinas tais como tetraciclina, clortetraciclina, demeclociclina, minociclina, oxitetraciclina, metaciclina, doxiciclina, tigeciclina;
[00230] (8) Rifamicinas tais como rifampicina (também chamada de rifampina), rifapentina, rifabutina, bezoxazinorifamicina e rifaximina;
[00231] (9) Lincosamidaes tais como lincomicina e clindamicina;
[00232] (10) Estreptograminas tais como quinupristina e daflopristina;
[00233] (11) Oxazolidinonas tal como linezolida ou tedizolida;
[00234] (12) Polimixina, colistina e colimicina;
[00235] (13) Trimetoprim e bacitracina;
[00236] (14) Inibidores de bomba de efluxo;
[00237] (15) Inibidores de beta-lactamase, incluindo avibactam e análogos do mesmo, e aqueles descritos acima.
[00238] O segundo agente antibacteriano pode ser administrado em combinação com os compostos das presentes invenções em que o segundo agente antibacteriano é administrado antes de, simultaneamente, ou depois do composto ou compostos da presente invenção. Quando a administração simultânea de um composto da invenção com um segundo agente é desejada e a via de administração é a mesma, em seguida um composto da invenção pode ser formulado com um segundo agente na mesma forma de dosagem. Um exemplo de uma forma de dosagem contendo um composto da invenção e um segundo agente é uma administração intravenosa. Um exemplo alternativo é uma adiministração intramuscular de uma solução compreendendo um composto da invenção e um segundo agente.
[00239] Os compostos e composições descritos aqui podem ser usados ou administrados em combinação com um ou mais agentes terapêuticos que agem como imunomoduladores, por exemplo, um ativador de uma molécula coestimuladora, ou um inibidor de uma molécula imunoinibidora, ou uma vacina. A proteína de Morte Programada 1 (PD-1) é um membro inibidor da família de CD28/CTLA4 estendida de reguladores de célula T (Okazaki et al. (2002) Curr Opin Immunol 14: 391779-82; Bennett et al. (2003) J. Immunol. 170:711-8). PD-1 é expressa em células B ativadas, células T, e monócitos. PD-1 é uma proteína imunoinibidora que negativamente regula os sinais de TCR (Ishida, Y., et al. (1992) EMBO J. 11:3887-3895; Blank, C., et al. (Epub 2006 Dec. 29) Immunol. Immunother. 56(5):739-745), e é super-regulado em infecções crônicas. A interação entre PD-1 e PD-L1 pode agir como um ponto de checagem imune, que pode levar a, por exemplo, uma diminuição em linfócitos de infiltração, uma diminuição na proliferação mediada por receptor de célula T, e/ou evasão imune por células cancerosas ou infectadas (Dong et al. (2003) J. Mol. Med. 81:281-7; Blank et al. (2005) Cancer Immunol. Immunother. 54:307-314; Konishi et al. (2004) Clin. Cancer Res. 10:5094-100). A supressão imune pode ser revertida inibindo-se a interação local de PD-1 com PD-L1 ou PD-L2; o efeito é aditivo quando a interação de PD-1 com PD-L2 é bloqueada também (Iwai et al. (2002) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 99:12293-7; Brown et al. (2003) J. Immunol. 170:1257-66). A imunomodulação pode ser alcançado ligando-se à proteína imunoinibidora (por exemplo, PD-1) ou às proteínas de ligação que modulam a proteína inibidora (por exemplo, PD-L1, PD-L2).
[00240] Em uma modalidade, as terapias de combinação da invenção incluem um imunomodulador que é um inibidor ou antagonista de uma molécula inibidora de uma molécula de ponto de checagem imune. Em outra modalidade, o imunomodulador liga-se a uma proteína que naturalmente inibe a molécula de ponto de checagem imunoinibidora. Quando usados em combinação com os compostos antibacterianos, estes imunomoduladores podem realçar a resposta antimicrobiana, e desse modo realçar a eficácia em relação ao tratamento com o composto antibacteriano.
[00241] O termo "pontos de checagem imunes" referem-se a um grupo de moléculas na superfície celular de células T CD4 e CD8. Estas moléculas podem servir efetivamente como "freios" para submodular ou inibir uma resposta imune adaptável. As moléculas de ponto de checagem imunes incluem, porém, não estão limitadas a, Morte Programada 1 (PD-1), Antígeno de Linfócito T Citotóxico 4 (CTLA-4), B7H1, B7H4, OX-40, CD137, CD40, e LAG3 que diretamente inibem as células imunes. Os agentes imunoterapêuticos que podem agir como inibidores de ponto de checagem imunes úteis nos métodos da presente invenção, incluem, porém, não estão limitados a, inibidores de PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 e/ou TGFR beta. A inibição de uma molécula inibidora pode ser realizada por inibição no nível de DNA, RNA ou proteína. Em algumas modalidades, um ácido nucleico inibidor (por exemplo, um dsRNA, siRNA ou shRNA), pode ser usado para inibir a expressão de uma molécula inibidora. Em outras modalidades, o inibidor de um sinal inibidor é um polipeptídeo, por exemplo, um ligante solúvel ou um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, que liga-se à molécula inibidora.
[00242] Por "em combinação com," não se pretende implicar que a terapia ou os agentes terapêuticos devem ser administrados ao mesmo tempo e/ou formulados para liberar juntamente, embora estes métodos de liberação estejam dentro do escopo descrito aqui. O imunomodulador pode ser administrado simultaneamente com, antes de, ou subsequente a, um ou mais compostos da invenção, e opcionalmente uma ou mais terapias adicionais ou agentes terapêuticos. Os agentes terapêuticos na combinação podem ser administrados em qualquer ordem. Em geral, cada agente será administrado em uma dose e/ou em um horário de determinado para esse agente. Será também apreciado que os agentes terapêuticos utilizados nesta combinação podem ser administrados juntamente em uma única composição ou administrados separadamente em composições diferentes. Em geral, espera-se que cada um dos agents terapêuticos utilizados em combinação sejam utilizados em níveis que não excedam os níveis em que eles são utilizados individualmente. Em algumas modalidades, os níveis utilizados em combinação serão menores do que aqueles utilizados individualmente.
[00243] Em certas modalidades, os compostos antibacterianos descritos aqui são administrados em combinação com um ou mais imunomoduladores que são inibidores de PD-1, PD-L1 e/ou PD-L2. Cada tal inibidor pode ser um anticorpo, um fragmento de ligação de antígeno do mesmo, uma imunoadesina, uma proteína de fusão, ou um oligopeptídeo. Exemplos de tais imunomoduladores são conhecidos na técnica.
[00244] Em algumas modalidades, o imunomodulador é um anticorpo anti-PD-1 escolhido de MDX-1106, Merck 3475 ou CT- 011.
[00245] Em algumas modalidades, o imunomodulador é uma imunoadesina (por exemplo, uma imunoadesina compreendendo uma porção de ligação extracelular ou de PD-1 de PD-Ll or PD-L2 fundido em uma região constante (por exemplo, uma região de Fc de uma sequência de imunoglobulina).
[00246] Em algumas modalidades, o imunomodulador é um inibidor de PD-1 tal como AMP-224.
[00247] Em algumas modalidades, o imunomodulador é um inibidor de PD-Ll tal como anticorpo anti-PD-Ll.
[00248] Em algumas modalidades, o imunomodulador é um agonista de ligação anti-PD-Ll escolhido de YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0010718C, ou MDX-1105. MDX-1105, da mesma forma conhecido como BMS-936559, é um anticorpo anti- PD-Ll descrito em WO2007/005874. Anticorpo YW243.55.S70 é um anti-PD-Ll descrito em WO 2010/077634.
[00249] Em algumas modalidades, o imunomodulador é nivolumabe (Número de Registro de CAS: 946414-94-4). Nomes alternativos para nivolumabe incluem MDX-1106, MDX-1106-04, ONO-4538, ou BMS- 936558. Nivolumabe é um anticorpo monoclonal de IgG4 completamente humano que especificamente bloqueia PD-1. Nivolumabe (clone 5C4) e outros anticorpos monoclonais humanos que especificamente ligam-se a PD-1 são descritos em US 8.008.449, EP2161336 e WO2006/121168.
[00250] Em algumas modalidades, o imunomodulador é um anticorpo anti-PD-1 Pembrolizumab. Pembrolizumabe (da mesma forma referido como Lambrolizumabe, MK-3475, MK03475, SCH- 900475 ou KEYTRUDA®; Merck) é um anticorpo monoclonal de IgG4 humanizado que liga-se a PD-1. Pembrolizumabe e outros anticorpos anti-PD-1 humanizados são descritos em Hamid, O. et al. (2013) New England Journal of Medicine 369 (2): 134-44, US 8.354.509, WO2009/114335, e WO2013/079174.
[00251] Em algumas modalidades, o imunomodulador é Pidilizumabe (CT-011; Cure Tech), um anticorpo monoclonal de IgG1k humanizado que liga-se a PD1. Pidilizumabe e outros anticorpos monoclonais anti-PD-1 humanizados são descritos em WO2009/101611.
[00252] Outros anticorpos anti-PD1 úteis como imunomoduladores para uso nos métodos descritos aqui incluem AMP 514 (Amplimmune), e anticorpos anti-PD1 descritos em US 8.609.089, US 2010028330, e/ou US 20120114649. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD- L1 é MSB0010718C. MSB0010718C (da mesma forma referido como A09-246-2; Merck Serono) é um anticorpo monoclonal que liga-se a PD-L1.
[00253] Em algumas modalidades, o imunomodulador é MDPL3280A (Genentech / Roche), um anticorpo monoclonal de IgG1 otimizado de Fc humano que liga-se a PD-L1. MDPL3280A e outros anticorpos monoclonais humanos para PD-L1 são descritos na Patente U.S. No.: 7.943.743 e Publicação U.S. No.: 20120039906. Outros agentes de ligação anti-PD-L1 úteis como imunomoduladores para métodos da invenção incluem YW243.55.S70 (veja WO2010/077634), MDX-1105 (da mesma forma referido como BMS-936559), e agentes de ligação anti-PD-L1 descritos em WO2007/005874.
[00254] Em algumas modalidades, o imunomodulador é AMP-224 (B7-DCIg; Amplimmune; por exemplo, descrito em WO2010/027827 e WO2011/066342), é um receptor solúvel de fusão de Fc de PD-L2 que bloqueeia a interação entre PD1 e B7-H1.
[00255] Em algumas modalidades, o imunomodulador é um anticorpo anti-LAG-3 tal como BMS-986016. BMS-986016 (da mesma forma referido como BMS986016) é um anticorpo monoclonal que ligase a LAG-3. BMS-986016 e outros anticorpos anti-LAG-3 humanizados são descritos em US 2011/0150892, WO2010/019570, e WO2014/008218.
[00256] Em certas modalidades, as terapias de combinação descritas aqui incluem um modulador de uma molécula coestimuladora ou uma molécula inibidora, por exemplo, um ligante ou receptor coinibidor.
[00257] Em uma modalidade, o modulador coestimulador, por exemplo, agonista, de uma molécula coestimuladora é escolhido de um agonista (por exemplo, um anticorpo agonístico ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, ou fusão solúvel) de ligante OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4- 1BB (CD137), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3 ou CD83.
[00258] Em outra modalidade, as terapias de combinação descritas aqui incluem um imunomodulador que é uma molécula coestimuladora, por exemplo, um agonista associado com um signal positivo que inclui um domínio coestimulador de CD28, CD27, ICOS e/ou GITR.
[00259] Agonistas de GITR exemplares incluem, por exemplo, proteínas de fusão de GITR e anticorpos anti-GITR (por exemplo, anticorpos anti-GITR bivalentes), tal como, uma proteína de fusão de GITR descrita na Patente U.S. No.: 6.111.090, Patente Europeia No.: 090505B1, Patente U.S. No.: 8.586.023, Publicação PCT Nos.: WO 2010/003118 e 2011/090754, ou um anticorpo anti-GITR descrito, por exemplo, na Patente U.S. No.: 7.025.962, Patente Europeia No.: 1947183B1, Patente U.S. No.: 7.812.135, Patente U.S. No.: 8.388.967, Patente U.S. No.: 8.591.886, Patente Europeia No.: EP 1866339, Publicação PCT No.: WO 2011/028683, Publicação PCT No.: WO 2013/039954, Publicação PCT No.: WO2005/007190, Publicação PCT No.: WO 2007/133822, Publicação PCT No.: WO2005/055808, Publicação PCT No.: WO 99/40196, Publicação PCT No.: WO 2001/03720, Publicação PCT No.: WO99/20758, Publicação PCT No.: WO2006/083289, Publicação PCT No.: WO 2005/115451, Patente U.S. No.: 7.618.632, e Publicação PCT No.: WO 2011/051726.
[00260] Em uma modalidade, o imunomodulador usado é um ligante solúvel (por exemplo, um CTLA-4-Ig), ou um anticorpo ou fragmento de anticorpo que liga-se a PD-L1, PD-L2 ou CTLA4. Por exemplo, a molécula de anticorpo anti-PD-1 pode ser administrada em combinação com um anticorpo anti-CTLA-4, por exemplo, ipilimumabe, por exemplo. Anticorpos anti-CTLA4 exemplares incluem Tremelimumabe (anticorpo monoclonal de IgG2 disponível de Pfizer, anteriormente conhecido como ticilimumabe, CP-675,206); e Ipilimumabe (anticorpo CTLA-4, da mesma forma conhecido como MDX-010, CAS No. 477202-00-9).
[00261] Em uma modalidade, uma molécula de anticorpo anti-PD-1 é administrada após o tratamento com um composto da invenção como descrito aqui.
[00262] Em outra modalidade, uma molécula de anticorpo anti-PD-1 ou PD-L1 é administrado em combinação com um anticorpo anti-LAG- 3 ou um fragmento de ligação de antígeno do mesmo. Em outra modalidade, a molécula de anticorpo anti-PD-1 ou PD-L1 é administrada em combinação com um anticorpo anti-TIM-3 ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo. Em ainda outras modalidades, a molécula de anticorpo anti-PD-1 ou PD-L1 é administrada em combinação com um anticorpo anti-LAG-3 e um anticorpo anti-TIM-3, ou fragmentos de ligação de antígeno dos mesmos. A combinação de anticorpos relacionados aqui pode ser administrada separadamente, por exemplo, como anticorpos separados, ou ligados, por exemplo, como uma molécula de anticorpo biespecífica ou triespecífica. Em uma modalidade, um anticorpo biespecífico que inclui uma molécula de anticorpo anti-PD-1 ou PD-L1 e um anticorpo anti-TIM-3 ou anti-LAG-3, ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, é administrado. Em certas modalidades, a combinação dos anticorpos relacionados aqui é usada para tratar um câncer, por exemplo, um câncer como descrito aqui (por exemplo, um tumor sólido). A eficácia das combinaçãos supracitadas pode ser testada em modelos animais conhecidos na técnica. Por exemplo, os modelos animais para testar o efeito sinergístico de anti-PD-1 e antiLAG-3 são descritos, por exemplo, em Woo et al. (2012) Cancer Res. 72(4):917-27).
[00263] Imunomoduladores exemplares que podem ser usados nas terapias de combinação incluem, porém, não estão limitados a, por exemplo, afutuzumabe (disponível de Roche®); pegfilgrastim (Neulasta®); lenalidomida (CC-5013, Revlimid®); talidomida (Thalomid®), actimida (CC4047); e citocinas, por exemplo, IL-21 ou IRX-2 (mistura de citocinas humanas incluindo interleucina 1, interleucina 2, e interferona Y, CAS 951209-71-5, disponíveis de IRX Therapeutics).
[00264] Doses exemplares de tais imunomoduladores que podem ser usados em combinação com os compostos antibacterianos da invenção incluem uma dose de molécula de anticorpo anti-PD-1 de cerca de 1 a 10 mg/kg, por exemplo, 3 mg/kg, e uma dose de um anticorpo anti-CTLA-4, por exemplo, ipilimumabe, de cerca de 3 mg/kg.
[00265] Exemplos de modalidades dos métodos de usar os compostos antibacterianos da invenção em combinação com um imunomodulator incluem estes:
[00266] Um método para tratar uma infecção bacteriana em um indivíduo, compreendendo administrar ao indivíduo um composto de Fórmula (I) como descrito aqui, e um imunomodulador.
[00267] O método de modalidade i, em que o imunomodulador é um ativador de uma molécula coestimuladora ou um inibidor de uma molécula de ponto de checagem imune.
[00268] O método de qualquer uma das modalidades i e ii, em que o ativador da molécula coestimuladora é um agonista de um ou mais dos ligantes OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), ICOS (CD278), 4-1BB (CD137), GITR, CD30, CD40, BAFFR, HVEM, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3 e CD83.
[00269] O método de quaisquer das modalidades i-iii acima, em que o inibidor da molécula de ponto de checagem imune é escolhido de PD-1, PD-L1, PD-L2, CTLA4, TIM3, LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 e TGFR beta.
[00270] O método de quaisquer das modalidades i-iii, em que o inibidor da molécula de ponto de checagem imune é escolhido de um inibidor de PD-1, PD-L1, LAG-3, TIM-3 ou CTLA4, ou qualquer combinação dos mesmos.
[00271] O método de quaisquer das modalidades i-v, em que o inibidor da molécula de ponto de checagem imune é um ligante solúvel ou um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo, que liga-se à molécula de ponto de checagem imune.
[00272] O método de quaisquer das modalidades i-vi, em que o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo é de um IgG1 ou IgG4 (por exemplo, IgG1 ou IgG4 humano).
[00273] O método de quaisquer das modalidades i-vii, em que o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno do mesmo é alterado, por exemplo, mutado, para aumentar ou diminuir um ou mais de: ligação do receptor de Fc, glicosilação deo anticorpo, o número de resíduos de cisteína, função da célula efetora, ou função de complemento.
[00274] O método de quaisquer das modalidades i-viii, em que a molécula de anticorpo é uma molécula de anticorpo biespecífica ou multiespecífica que tem uma primeira especificidade de ligação para PD-1 ou PD-L1 e uma segunda especificidade de ligação para TIM-3, LAG-3, ou PD-L2.
[00275] O método de quaisquer das modalidades i-ix, em que o imunomodulador é um anticorpo anti-PD-1escolhido de Nivolumabe, Pembrolizumabe ou Pidilizumabe.
[00276] O método de quaisquer das modalidades i-x, em que o imunomodulador é um anticorpo anti-PD-L1 escolhido de YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0010718C, ou MDX- 1105.
[00277] O método de quaisquer das modalidades i-x, em que o imunomodulador é uma molécula de anticorpo anti-LAG-3.
[00278] O método de modalidade xii, em que a molécula de anticorpo anti-LAG-3 é BMS-986016,
[00279] O método de quaisquer das modalidades i-x, em que o imunomodulador é uma molécula de anticorpo anti-PD-1 administrado por injeção (por exemplo, subcutaneamente ou intravenosamente) em uma dose de cerca de 1 a 30 mg/kg, por exemplo, cerca de 5 a 25 mg/kg, cerca de 10 a 20 mg/kg, cerca de 1 a 5 mg/kg, ou cerca de 3 mg/kg., por exemplo, uma vez por semana a uma vez a cada 2, 3, ou 4 semanas.
[00280] O método de modalidade xiv, em que a molécula de anticorpo anti-PD-1 é administrada em uma dose de cerca de 10 a 20 mg/kg a cada duas semanas.
[00281] O método de modalidade xv, em que a molécula de anticorpo anti-PD-1, por exemplo, nivolumabe, é administrada intravenosamente em uma dose de cerca de 1 mg/kg a 3 mg/kg, por exemplo, cerca de 1 mg/kg, 2 mg/kg ou 3 mg/kg, a cada duas semanas.
[00282] O método de modalidade xv, em que a molécula de anticorpo anti-PD-1, por exemplo, nivolumabe, é administrada intravenosamente em uma dose de cerca de 2 mg/kg em intervalos de 3 semanas.
[00283] A linguagem "quantidade efetiva" do composto é aquela quantidade necessária ou suficiente para tratar ou prevenir uma infecção bacteriana e/ou uma doença ou condição descrita aqui. Em um exemplo, uma quantidade efetiva do composto é uma quantidade suficiente para tratar a infecção bacteriana em um indivíduo. Em outro exemplo, uma quantidade efetiva do composto é uma quantidade suficiente para tratar uma infecção bacteriana, tal como, porém, não limitada a Pseudomonas aeruginosa e similares em um indivíduo. A quantidade efetiva pode variar dependendo de tais fatores como o tamanho e peso do indivíduo, o tipo de doença ou o composto particular da invenção. Por exemplo, a escolha do composto da invenção pode afetar o que constitui uma "quantidade efetiva". Alguém de experiência ordinária na técnica pode estudar os fatores contidos aqui e fazer a determinação em relação à quantidade efetiva dos compostos da invenção sem experimentação indevida.
[00284] O regime de administração pode afetar o que constitui uma quantidade efetiva. O composto da invenção pode ser administrado ao indivíduo antes de ou após o começo de uma infecção bacteriana. Tipicamente, o composto é administrado a um indivíduo diagnosticado como tendo uma infecção bacteriana e em necessidade de tratamento por conseguinte. Além disso, várias dosagens divididas, bem como dosagens alternadas, podem ser administradas diariamente ou consecutivamente, ou a dose pode ser infundida continuamente, ou pode ser uma injeção de bolo. Além disso, as dosagens do(s) composto(s) da invenção podem ser proporcionalmente aumentadas ou diminuídas como indicado pelas exigências da situação terapêutica ou profilática. Tipicamente, o composto da invenção seria administrado em um curso de pelo menos 5 dias, mais geralmente pelo menos 7 dias ou pelo menos 10 dias ou pelo menos 14 dias.
[00285] Os compostos da invenção podem ser usados no tratamento de estados, transtornos ou doenças como descrito aqui, ou para a fabricação das composições farmacêuticas para uso no tratamento destas doenças. A invenção fornece métodos de uso de compostos da presente invenção no tratamento destas doenças ou preparações farmacêuticas tendo compostos da presente invenção para o tratamento destas doenças.
[00286] A linguagem "composição farmacêutica" inclui preparações adequadas para administração aos mamíferos, por exemplo, humanos. Quando os compostos da presente invenção são administrados como farmacêuticos aos mamíferos, por exemplo, humanos, eles podem ser dados de per si ou como uma composição farmacêutica contendo, por exemplo, 0,1 a 99,5% (mais preferivelmente, 0,5 a 90%) de ingrediente ativo em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável.
[00287] A frase "veículo farmaceuticamente aceitável " é reconhecida na técnica e inclui um material, composição ou veículo farmaceuticamente aceitável, adequado para administrar os compostos da presente invenção aos mamíferos. Os veículos incluem carga líquida ou sólida, diluente, excipiente, solvente ou material de encapsulamento, envolvido no carregamento ou transporte do agente objeto de um órgão, ou porção do corpo, para outro órgão, ou porção do corpo. Cada portador deve ser "aceitável" no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não prejudiciais ao paciente. Alguns exemplos de materiais que podem servir como veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem: açúcares, tais como lactose, glicose e sacarose; amidos, tais como amido de milho e amido de batata; celulose, e seus derivados, tais como carboximetil celulose sódica, etil celulose e acetato de celulose; tragacanto pulverizado; malte; gelatina; talco; excipientes, tais como manteiga de cacau e cera de supositório; óleos, tais como óleo de amendoim, óleo de caroço de algodão, óleo de cártamo, óleo de gergelim, azeite de oliva, óleo de milho e óleo de soja; glicóis, tal como propileno glicol; polióis, tais como glicerina, sorbitol, manitol e polietileno glicol; ésteres, tais como oleato de etilo e laurato de etila; ágar; agentes de tamponamento, tais como hidróxido de magnésio e hidróxido de alumínio; ácido algínico; água sem pirogênio; solução salina isotônica; solução de Ringer; álcool etílico; soluções de tampão de fosfato; e outras substâncias compatíveis não tóxicas empregadas em formulações farmacêuticas. Em algumas modalidades, um portador farmaceuticamente aceitável é esterilizado antes da combinação com o composto da invenção.
[00288] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica da invenção compreende um composto de quaisquer das modalidades numeradas e pelo menos um portador ou excipiente farmaceuti- camente aceitável. Em certas modalidades, a composição farmacêutica da invenção compreende um composto de quaisquer das modalidades numeradas e pelo menos dois veículos ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis.
[00289] Os agentes de umectação, emulsificadores e lubrificantes, tais como lauril sulfato de sódio e estearato de magnésio, bem como agentes corantes, agentes de liberação, agentes de revestimento, adoçantes, agentes flavorizantes e perfumantes, conservantes e antioxidantes podem da mesma forma estar presentes nas composições.
[00290] Exemplos de antioxidantes farmaceuticamente aceitáveis incluem: antioxidantes solúveis em água, tais como ácido ascórbico, cloridrato de cisteína, bissulfato de sódio, metabissulfito de sódio, sulfito de sódio e similares; antioxidantes solúveis em óleo, tais como palmitato de ascorbila, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, galato de propila, α-tocoferol, e similares; e agentes de quelação de metal, tais como ácido cítrico, ácido etilenediamina tetraacético (EDTA), sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico, e similares.
[00291] Formulações da presente invenção incluem aquelas adequadas para administração oral, nasal, por inalação, tópica, transdérmica, bucal, sublingual, retal, vaginal e/ou parenteral. Tipicamente, os compostos da invenção seriam administrados intravenosamente, na forma de uma solução que é frequentemente isotônica, tal como uma solução salina ou solução de glicose. As formulações podem ser apresentadas convenientemente em forma de dosagem unitária e podem ser preparadas por qualquer método bem conhecido na técnica de farmácia. A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinado com um material veículo para produzir uma forma de dosagem única geralmente será aquela quantidade do composto que produz um efeito terapêutico. Geralmente, de cem cento, esta quantidade variará de cerca de 1 por cento a cerca de noventa e nove por cento de ingrediente ativo, preferivelmente de cerca de 5 por cento a cerca de 70 por cento, preferivelmente de cerca de 10 por cento a cerca de 30 por cento.
[00292] Os métodos de preparar estas formulações ou composições incluem a etapa de trazer em associação um composto da presente invenção com o veículo e, opcionalmente, um ou mais ingredientes adicionais. Em geral, as formulações são preparadas trazendo uniformemente e intimamente em associação um composto da presente invenção com veículos líquidos, ou veículos sólidos finamente divididos, ou ambos, e em seguida, se necessário, moldando-se o produto.
[00293] As formulações da invenção adequadas para administração oral pode ser na forma de cápsulas, selos, pílulas, comprimidos, pastilhas (usando uma base aromatizada, normalmente sacarose e acácia ou tragacanto), pós, grânulos, ou como uma solução ou uma pasta fluida em um líquido aquoso ou não aquoso, ou como uma emulsão líquida de óleo-em-água ou água-em-óleo, ou como um elixir ou xarope, ou como pastilhas (usando uma base inerte, tais como gelatina e glicerina, ou sacarose e acácia) e/ou como antissépticos bucais e similares, cada um contendo uma quantidade pré- determinada de um composto da presente invenção como um ingrediente ativo. Um composto da presente invenção pode da mesma forma ser administrado como um bolo, eletuário ou pasta.
[00294] Em formas de dosagem sólidas da invenção para administração oral (cápsulas, comprimidos, pílulas, drágeas, pós, grânulos e similares), o ingrediente ativo é misturado com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis, tal como citrato de sódio ou fosfato de dicálcio, e/ou quaisquer dos seguintes: cargas ou extensores, tais como amidos, lactose, sacarose, glicose, manitol e/ou ácido silícico; aglutinantes, tais como, por exemplo, carboximetilcelulose, alginatos, gelatina, polivinil pirrolidona, sacarose e/ou acácia; umectantes, tal como glicerol; agentes de desintegração, tal como ágar-ágar, carbonato de cálcio, amido de batata ou tapioca, ácido algínico, certos silicatos, e carbonato de sódio; agentes retardantes de solução, tal como parafina; aceleradores de absorção, tais como compostos de amônio quaternários; agentes de umectação, tais como, por exemplo, álcool cetílico e monoestearato de glicerol; absorventes, tais como caulim e argila bentonita; lubrificantes, tais como talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietileno glicóis sólidos, lauril sulfato de sódio, e misturas dos mesmos; e agentes corantes. No caso de cápsulas, comprimidos e pílulas, as composições farmacêuticas podem da mesma forma compreender os agentes de tamponamento. Composições sólidas de um tipo similar podem da mesma forma ser empregadas como cargas em cápsulas de gelatina preenchidas macias e duras usando tais excipientes como lactose ou açúcares do leite, bem como polietileno glicóis de alto peso molecular e similares.
[00295] Um comprimido pode ser feito por compressão ou moldagem, opcionalmente com um ou mais ingredientes adicionais. Os comprimidos prensados podem ser preparados usando aglutinante (por exemplo, gelatina ou hidroxipropilmetil celulose), lubrificante, diluente inerte, conservante, desintegrante (por exemplo, glicolato de amido de sódio ou carboximetil celulose sódica reticulada), agente tensaotivo ou de dispersão. Comprimdos moldados podem ser feitas moldando-se em uma máquina adequada uma mistura do composto pulverizado umedecido com um diluente líquido inerte.
[00296] Os comprimidos, e outras formas de dosagem sólidas das composições farmacêuticas da presente invenção, tais como drágeas, cápsulas, pílulas e grânulos, podem opcionalmente ser marcados ou preparados com camadas e cascas, tais como camadas entéricas e outras camadas bem conhecidas na técnica de formulação farmacêutica. Eles podem da mesma forma ser formulados para fornecer liberação cobtrolada ou lenta do ingrediente ativo nesta usando, por exemplo, hidroxipropilmetil celulose em proporções variadas para fornecer o perfil de liberação desejado, outras matrizes de polímero, lipossomas e/ou microsferas. Eles podem ser esterilizados, por exemplo, por filtração por um filtro de retenção de bactéria, ou por incorporando dos agentes de esterilização na forma de composições sólidas estéreis que podem ser dissolvidas em água estéril, ou algum outro meio injetável estéril imediatamente antes do uso. Estas composições podem da mesma forma opcionalmente conter os agentes de opacificação e podem ser de uma composição que eles libertam o(s) ingrediente(s) ativo(s) sozinho(s), ou preferencialmente, em uma certa porção do trato gastrointestinal, opcionalmente, de uma maneira atrasada. Exemplos de composições de inclusão que podem ser usados incluem substâncias poliméricas e ceras. O ingrediente ativo pode da mesma forma ser em forma microencapsulada, se apropriado, com um ou mais do excipients acima descrito.
[00297] A forma de dosagem líquida para administração oral dos compostos da invenção incluem emulsões farmaceuticamente aceitáveis, microemulsões, soluções, pastas fluida, xaropes e elixires. Além do ingrediente ativo, as formas de dosagem líquidas podem conter diluente inerte geralmente usado na técnica, tal como, por exemplo, água ou outros solventes, agentes de solubilização e emulsificadores, tais como álcool etílico, álcool isopropílico, carbonato de etila, acetato de etila, álcool benzílico, benzoato de benzila, propileno glicol, 1,3-butileno glicol, óleos (em particular, óleo de caroço de algodão, amendoim, milho, germe, azeitona, rícino e gergelim), glicerol, álcool tetra-hidrofurílico, polietileno glicóis e ésteres de ácido graxo de sorbitano, e misturas dos mesmos.
[00298] Além dos diluentes inertes, as composições orais podem da mesma forma incluir adjuvantes tais como agentes de umectação, agentes de emulsificação e pasta fluida, agentes adoçantes, flavorizantes, corantes, perfumantes e conservantes.
[00299] As pastas fluida, além dos compostos ativos, podem conter os agentes de pasta fluida como, por exemplo, alcoóis isoestearílicos etoxilados, polioxietileno sorbitol e ésteres de sorbitano, celulose microcristalina, metaidróxido de alumínio, bentonita, ágar-ágar e tragacanto, e misturas dos mesmos.
[00300] Formulações das composições farmacêuticas da invenção para administração retal ou vaginal podem ser apresentadas como um supositório, que pode ser preparado misturando-se um ou mais compostos da invenção com um ou mais excipientes ou veículos não irritantes adequados compreendendo, por exemplo, manteiga de cacau, polietileno glicol, uma cera de supositório ou um salicilato, e que é sólido em temperatura ambiente, porém, líquido em temperatura corporal e, portanto, derreterá no reto ou cavidade vaginal e liberará o composto ativo.
[00301] As formulações da presente invenção que são adequadas para administração vaginal da mesma forma incluem pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espumas ou formulações em spray contendo tais veículos como são conhecidos na técnica a ser apropriada.
[00302] Formas de dosagem para a administração tópica ou transdérmica de um composto desta invenção incluem pós, sprays, unguentos, pastas, cremes, loções, géis, soluções, emplastros e inalantes. O composto ativo pode ser misturado sob condições estéreis com um veículo farmaceuticamente aceitável, e com qualquer conservante, tampões, ou propelentes que podem ser requeridos.
[00303] Os unguentos, pastas, cremes e géis podem conter, além de um composto ativo desta invenção, excipientes, tais como gorduras animal e vegetal, óleos, ceras, parafinas, amido, tragacanto, derivados de celulose, polietileno glicóis, silicones, bentonitas, ácido silícico, talco e óxido de zinco, ou misturas dos mesmos.
[00304] Pós e sprays podem conter, além de um composto desta invenção, excipientes tais como lactose, talco, ácido silícico, hidróxido de alumínio, silicatos de cálcio e pó de poliamida, ou misturas destas substâncias. Sprays podem adicionalmente conter propelentes habituais, tais como clorofluoroidrocarbonos e hidrocarbonetos não substituídos voláteis, tais como butano e propano.
[00305] Emplastros transdérmicos têm a vantagem adicionada de fornecer liberação controlada de um composto da presente invenção ao corpo. Tais formas de dosagem podem ser feitas dissolvendo-se ou dispersando-se o composto no próprio meio. Os realçadores de absorção podem da mesma forma ser usados para aumentar o fluxo do composto pela pele. A taxa de tal fluxo pode ser controlada fornecendo uma membrana de controle de taxa ou dispersando o composto ativo em uma matriz de polímero ou gel.
[00306] As formulações oftálmicas, unguentos de olho, pós, soluções e similares, são da mesma forma contempladas como estando dentro do escopo desta invenção.
[00307] As composições farmacêuticas desta invenção adequadas para administração parenteral compreendem um ou mais compostos da invenção em combinação com um ou mais soluções aquosas ou não aquosas isotônicas estéreis farmaceuticamente aceitáveis, dispersões, pastas fluida ou emulsões, ou pós estéreis que só podem ser reconstituídos em soluções ou dispersões injetáveis estéreis antes do uso, que podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostatos, solutos que tornam a formulação isotônico com o sangue do recipiente planejado ou agentes de pasta fluida ou espessantes.
[00308] Exemplos de veículos aquosos e não aquosos adequados que podem ser empregados nas composições farmacêuticas da invenção incluem água, etanol, polióis (tais como glicerol, propileno glicol, polietileno glicol, e similares), e misturas adequadas dos mesmos, óleos vegetais, tal como azeite de oliva, e ésteres orgânicos injetáveis, tal como oleato de etila. A própria fluidez pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de materiais de revestimento, tal como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula requerido no caso de dispersões, e pelo uso de tensoativos.
[00309] Estas composições podem da mesma forma conter adjuvantes tais como conservantes, agentes de umectação, agentes de emulsificação e agentes de dispersão. A prevenção da ação de micro-organismos pode ser garantida pela inclusão de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabeno, clorobutanol, ácido fenol sórbico e similares. Pode da mesma forma ser desejável incluir os agentes isotônicos, tais como açúcares, cloreto de sódio e similares nas composições. Além disso, a absorção prolongada da forma farmacêutica injetável pode ser realizada pela inclusão de agentes que retardam a absorção tais como monoestearato de alumínio e gelatina.
[00310] Em alguns casos, para prolongar o efeito de um fármaco, é desejável reduzir a absorção do fármaco de injeção subcutânea ou intramuscular. Isto pode ser realizado pelo uso de uma pasta fluida líquida de material cristalino ou amorfo tendo solubilidade em água inferior. A taxa de absorção do fármaco em seguida depende de sua taxa de dissolução que, por sua vez, pode depender do tamanho de cristal e forma cristalina. Alternativamente, a absorção retardada de uma forma de fármaco parenteralmente administrado é realizada dissolvendo-se ou suspendendo-se o fármaco em um veículo oleoso.
[00311] Formas de depósito injetáveis são feitas formando-se matrizes de microencapsulação dos compostos objeto em polímeros biodegradáveis tal como polilactídeo-poliglicolído. Dependendo da relação de fármaco para polímero, e a natureza do polímero particular empregado, a taxa de liberação de fármaco pode ser controlada. Exemplos de outros polímeros biodegradáveis incluem po- li(ortoésteres) e poli(anidridos). Formulações injetáveis de depósito são da mesma forma preparadas atraindo-se o fármaco em lipossomas ou microemulsões que são compatíveis com tecido do corpo.
[00312] As preparações da presente invenção podem ser administradas oralmente, parenteralmente, topicamente ou retalmente. Elas são, claro, administradas por formas adequadas para cada via de administração. Por exemplo, elas são administradas em comprimidos ou forma de cápsula, por injeção, inalação, loção ocular, unguento, supositório, etc., administração por injeção, infusão ou inalação; tópica por loção ou unguento; e retal por supositórios. A administração intravenosa é preferida.
[00313] As frases "administração parenteral" e "administrado parenteralmente" quando aqui usadas significa modos de administração diferentes de administração enteral e tópica, normalmente por injeção, e inclui, sem limitação, injeção e infusão intravenosa, intramuscular, intra-arterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutânea, subcuticular, intra-articular, subcapsular, subaracnoide, intraespinhal e intrasternal.
[00314] As frases "administração sistêmica", "administrado sistemicamente", "administração periférica" e "administrado perifericamente" quando aqui usadas significa a administração de um composto, fármaco ou outro material diferente de diretamente no sistema nervoso central, tal que entra no sistema do paciente e, desse modo, é submetido ao metabolismo e outros processos similares, por exemplo, administração subcutânea.
[00315] Estes compostos podem ser administrados aos humanos e outros animais para terapia por qualquer via adequada de administração, incluindo oralmente, nasalmente, como por, por exemplo, um spray, retalmente, intravaginalmente, parenteralmente, intracisternalmente e topicamente, como por pós, unguentos ou gotas, incluindo bucalmente e sublingualmente.
[00316] Independente da via de administração selecionada, os compostos da presente invenção, que podem ser usados em uma forma hidratada adequada e/ou as composições farmacêuticas da presente invenção, são formulados em formas de dosagem farmaceuticamente aceitáveis por métodos convencionais conhecidos por aqueles de experiência na técnica.
[00317] Os níveis de dosagem atuais dos ingredientes ativos nas composições farmacêuticas desta invenção podem ser variados para obter uma quantidade do ingrediente ativo que é efetiva para alcançar a resposta terapêutica desejada para um paciente particular, composição, e modo de administração, sem ser tóxico ao paciente.
[00318] O nível de dosagem selecionado dependerá de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto particular da presente invenção empregada, ou do éster, sal ou amida do mesmo, a via de administração, o tempo de administração, a taxa de excreção do composto particular empregado, a duração do tratamento, outros fármacos, compostos e/ou materiais usados em combinação com o composto particular empregado, a idade, sexo, peso, condição, saúde geral e história médica anterior do paciente a ser tratado, e fatores semelhantes conhecidos nas técnicas médicas.
[00319] Em geral, uma dose diária adequada de um composto da invenção será aquela quantidade do composto que é a dose efetiva para produzir um efeito terapêutico. Uma tal dose efetiva geralmente dependerá dos fatores descritos acima. Geralmente, doses intravenosas e subcutâneas dos compostos desta invenção para um paciente, quando usadas para os efeitos antibacterianos indicados, variará de cerca de 5 a cerca de 150 mg por quilograma de peso corporal por dia, mais preferivelmente de cerca de 15 a cerca de 115 mg por kg por dia, e ainda mais preferivelmente de cerca de 20 a cerca de 85mg por kg por dia. Uma quantidade efetiva é aquela quantidade que trata uma infecção bacteriana.
[00320] Se desejado, a dose diária efetiva do composto ativo pode ser administrada como duas, três, quatro, cinco, seis ou mais subdoses administradas separadamente em intervalos apropriados ao longo do dia, opcionalmente, em formas de dosagem unitária, ou como infusão contínua.
[00321] Enquanto for possível para um composto da presente invenção ser administrado sozinho, é preferível administrar o composto como uma composição farmacêutica.
[00322] Os compostos como definido nas modalidades podem ser sintetizados pelas rotinas sintéticas gerais abaixo, exemplos específicos dos quais são descrito em mais detalhes nos Exemplos.
Esquemas Sintéticos Gerais
[00323] Um método para sintetizar os compostos com fórmula (I) é descrito no Esquema A. Um álcool A-1 pode ser convertido em A-2 seguindo o protocolo de "Mitsunobu", contanto que o heterociclo seja suficientemente ácido para engatar em uma reação de Misunobu. A sulfonilação de A-2 fornece A-3, que pode ser desprotegido com TFA ou ácido fórmico para produzir A-4. Esquema A
Figure img0027
[00324] Análogos de 1,2,3 triazol ligados a 1 do intermediário A3 podem ser determinados como descrito no Esquema B. O álcool em A-1 é convertido em um grupo de saída e o grupo de saída é substituído por azida para produzir B-2, que pode ser sulfonilada e reagida com uma alcina sob condições de "química click" de acordo com o método por Sharpless, para produzir B-4. Alternativamente, "química click" pode ser realizada com B-2, antes da sulfonilação. Esquema B
Figure img0028
[00325] Intermediários heterocíclicos A-2 podem da mesma forma ser obtidos como descrito no Esquema C, por alquilação de uma amina tal como C-1. Reagentes de alquilação adequados incluem alquil haletos ou epóxidos. Alquilação de C-1 pode da mesma forma ser realizada por aminação redutiva com um aldeído apropriadamente funcionalizado e protegido. A ciclização de C-2 pode ser realizada usando um agente de carbonilação como CDI. Exemplos do grupo Y nestes compostos incluem oxigênio ou NR5, por exemplo, NH. Esquema C
Figure img0029
[00326] As aminas funcionalizadas C-2 foram alternativamente obtidas de B-1 por alquilação com uma amina funcionalizada. Um heterociclo de lactam pode analogamente ser obtido por alquilação de C-1 com ésteres carboxílicos bromados, seguido por ciclização catalisada por base.
[00327] Um heterociclo pode ser introduzido para produzir o Intermediário A-2, por substituição de um grupo de saída em um intermediário de azetidinona apropriadamente protegido. Grupos de proteção adequados incluem Cbz para a amina e DMB para a azetidinona. A deproteção do grupo Cbz seguido por acilação com ácidos apropriadamente funcionalizados e protegidos D-6 produziu A- 2, como descrito no Esquema D. Esquema-D
Figure img0030
[00328] Intermediários protegidos tal como D-1 foram da mesma forma usados para introdução do heterociclo sob condições de Mitsunobu, como descrito no Esquema A. D-1 foi da mesma forma convertido à azida correspondente, que foi usada para "química click" para introduzir 1,2,3 triazóis ligados a 1 seguindo uma sequência similar como descrito no Esquema B. D-1 pode da mesma forma ser usado para produzir derivados de amina funcionalizados que podem ser convertidos aos heterociclos, como descrito no Esquema C.
[00329] Intermediários do tipo A-3 podem da mesma forma ser reunidos pela sequência descrita no Esquema E, pela qual uma porção de oxima é introduzida após a etapa de acoplamento. Esquema-E
Figure img0031
[00330] Os compostos da Fórmula (I) são preparados de compostos geralmente disponíveis usando estes esquemas gerais e procedimentos conhecidos por aqueles versados na técnica junto com os métodos e exemplos fornecidos aqui.
EXEMPLOS
[00331] A invenção é também ilustrada pelos seguintes exemplos, que não devem ser interpretados como limitantes também. Os ensaios usados em todos os Exemplos são aceitos. A demonstração da eficácia nestes ensaios é preditiva de eficácia em indivíduos.
Condições Gerais
[00332] Espectros de massa foram adquiridos em sistemas de LC- MS, SFC-MS, ou GC-MS usando eletrovaporização, métodos de ionização de impacto de electron e químicos de uma faixa de instrumentos das seguintes configurações: sistema Waters ACQUITY UPLC e equipado com um sistema ZQ 2000 ou SQD MS onde (M+1) se refere ao íon molecular protonado de espécies químicas, (M+) se refere ao cátion de amônio quaternário não protonado, (M+Na) se refere ao íon incorporado com sódio e (M-1) se refere ao íon molecular desprotonado das espécies químicas.
[00333] Espectros de RMN foram conduzidos em espectrômetros Bruker AVANCE 500MHz ou Varian 400MHz RMN usando ICON- RMN, sob o controle de programa TopSpin. Os espectros foram medidos em 298K, a menos que de outra maneira indicado, e foram referenciados em relação à ressonância de solvente.
Instrumentação
[00334] Métodos de MS: Usando sistemas de HPLC Agilent 1100 com um Espectrômetro de Massa Agilent 6110 Método 2macídico: Coluna Kinetex C18 50 x 2,1 mm, 2,6 μm Temperatura da Coluna 50 °C Eluentes A: H2O, B: acetonitrila, ambos contendo 0,1% de TFA Taxa de Fluxo 1,2 mL/min Gradiente 2% a 88% de B em 1,30 min, 0,15 min 95% de B Método 2m_acídico_polar: Coluna Kinetex C18 50 x 2,1 mm, 2,6 μm Temperatura da Coluna 50 °C Eluentes A: H2O, B: acetonitrila, ambos contendo 0,1% de TFA Taxa de Fluxo 1,2 mL/min Gradiente 1% a 30% de B em 1,30 min, 0,15 min 98% de B Abreviações: ACN acetonitrila aq aquoso app aparente ATP 5'-trifosfato de adenosina BINAP 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftila racêmico Boc butil carbóxi terciário br amplo brs singleto amplo BSA albumina de soro bovina CDI 1,1‘-carbonildiimidazol d dubleto dd dubleto de dubletos DCM diclorometano DCE 1,2-dicloroetano DIAD diisopropilazodicarboxilato DIPEA diisopropiletilamina DME 1,4-dimetoxietano DMF N,N-dimetilformamida DMSO dimetilsulfóxido EDTA ácido etilenodiamina tetraacético ESI ionização por eletrovaporização EtOAc acetato de etila g grama h hora(s) HATU Hexafluorofosfato de 1- [bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3- triazolo[4,5-b]piridínio 3-óxido HBTU Hexafluorofosfato de 1- [bis(dimetilamino)metileno]-1H-benzotriazólio (1-) 3-óxido HCl ácido hidroclórico HOBt 1-hidroxibenzotriazol HPLC cromatografia líquida de alto desempenho LCMS cromatografia líquida e espectrometria de massa m multipleto m-CPBA ácido 3-cloroperbenzoico MeOH metanol MS espectrometria de massa mg min miligrama minutos mL mililitro mmol milimol m/z relação de massa para carga RMN ressonância magnética nuclear p PdCl2(dppf)-CH2Cl2 penteto complexo de dicloreto 1,1'- Bis(difenilfosfino)ferrocene-paládio(II) diclorometano PPh3 trifenilfosfina ppm PyBOP partes por milhão hexafluorofosfato de benzotriazol-1- iloxitripirrolidinofosfônio q quarteto rac racêmico ta temperatura ambiente Ta tempo de retenção s singleto satd saturado t tripleto TBAF fluoreto de tetrabutilamônio TBME metil terc-butil éter TFA ácido trifluoroacético THF tetra-hidrofurano Tris•HCl cloridrato de aminotris(hidroximetil)metano Preparação de Intermediários Intermediário A: ((2S, 3S )-3-(((benzilóxi)carbonil)amino)-1-(2,4- dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-2-il)metil metanossulfonato.
Figure img0032
[00335] A uma solução de benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2- (hidroximetil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (5,37 g, 13,41 mmol) e TEA (3,72 mL, 26,8 mmol) em DCM a 0°C foi adicionado MsCl (1,15 mL, 14,75 mmol). Depois de agitar a 0 °C durante 1 h, foi diluída com água/DCM, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com DCM (2x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi apreendido em tolueno e concentrado (2x), proporcionando o composto do título como um sólido esbranquiçado. Foi usado como tal em reações subsequentes. LCMS : Ta = 0,86 min, m/z = 479,2 (M+1) Método 2 m_acídico. Intermediário B: terc-Butil ((2H-tetrazol-5-il)metil)carbamato.
Figure img0033
[00336] A um frasco carregado com (2H-tetrazol-5-il)metilamina (1,67 g, 16,85 mmol), anidrido de Boc (3,86, 17,70 mmol) e água (16,85 mL) foi adicionado NaOH (4 N, 4,42 mL, 17,70 mmol). A pasta fluida resultante foi agitada em ta durante 12 h, em seguida resfriada a 0 °C, e então HCl (1N) foi adicionado até o pH = 4-5. O precipitado foi coletado por filtração, e o líquido mãe foi resfriado a 0 °C e reacidificado com HCl (1N) até o pH = 4-5. A maior parte do precipitado foi coletada e combinada com a primeira batelada, lavando o lote com heptano para proporcionar o composto do título (2,74 g, 82%) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,38 min, m/z = 200,2 (M+1) Método 2 m_acídico. Intermediário C: terc-Butil ((1H-1,2,4-triazol-3-il)metil)carbamato.
Figure img0034
[00337] A uma solução de cloridrato de 2H-[1,2,4]triazol-3-il- metilamina (583 mg, 4,33 mmol) e anidrido de Boc (993 mg, 4,55 mmol) em água (5,78 mL) foi adicionado NaOH (4N, 1,137 mL, 4,55 mmol). Depois de agitar durante 48 h, o precipitado branco foi coletado por filtração. O sólido foi suspenso em heptano, sonicado, em seguida filtrado, lavando a massa filtrante com heptano. LCMS : Ta = 0,41 min, m/z = 199,2 (M+1) Método 2 m_acídico. Intermediário D:3-(((2 R ,3 S )-3-amino-4-oxoazetidin-2- il)metil)oxazolidin-2-ona.
Figure img0035
[00338] Etapa 1: Benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-(((2- hidroxietil)amino)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. A uma solução de ((2S,3S)-3-(((benzilóxi)carbonil)amino)-1-(2,4-dimetoxi- benzil)-4-oxoazetidin-2-il)metil metanossulfonato (6,43 g, 13,4 mmol) em Acetonitrila (44,8 mL) foi adicionado etanolamina (8,13 mL, 134 mmol) seguido por DIPEA (7,0 mL, 40 mmol). A solução foi aquecida a 80°C durante 20 h, e então foi resfriada em ta, diluída com EtOAc, lavada com água, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo, para proporcionar o composto do título (4,47 g, 75%) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,60 min, m/z = 444,2 (M+1).
[00339] Etapa 2: Benzil ((3S,4R)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-oxo- 4-((2-oxooxazolidin-3-il)metil)azetidin-3-il)carbamato. A uma solução de benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-(((2-hidro- xietil)amino)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (4,47 g, 10,08 mmol) em clorofórmio (50 mL) foi adicionado CDI (4,90 g, 30,2 mmol). Depois de agitar em ta durante 30 min foi concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 0-5%), proporcionando o composto do título (3,84 g, 81%) como uma espuma branca. LCMS : Ta = 0,76 min, m/z = 470,1 (M+1).
[00340] Etapa 3: Benzil ((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3- il)metil)azetidin-3-il)carbamato. Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapa 2 usando benzil ((3S,4R)-1-(2,4- dimetoxibenzil)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3-il)metil)azetidin-3- il)carbamato (3,84 g, 8,18 mmol), K2S2O8 (3,10 g, 11,5 mmol) e K2HPO4 (1,852 g, 10,6 mmol) em ACN:água (2:1, 136 mL) ao mesmo tempo que aquecendo durante 40 min a 90 °C. Mais K2S2O8 (663 g, 2,45 mmol) e K2HPO4 (370 mg, 2,13 mmol) foram adicionados e aquecidos durante outras 3 h. Mais K2S2O8 (332 mg, 1,23 mmol) e K2HPO4 (185 mg, 1,06 mmol) foram adicionados e aquecidos durante um adicional de 2 h, e então foi concentrados em vácuo, removendo a maior parte de ACN. A mistura foi diluída com salmoura/EtOAc, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x), e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0-100%, em seguida MeOH-DCM, 10%) para proporcionar o composto do título (1,61 g, 62%) como uma espuma bege. LCMS : Ta = 0,51 min, m/z = 320,0 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00341] Etapa 4: 3-(((2 R ,3 S )-3-amino-4-oxoazetidin-2- il)metil)oxazolidin-2-ona. Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapa 3 usando benzil ((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin- 3-il)metil)azetidin-3-il)carbamato (96 mg, 0,30 mmol) e Pd/C 10% tipo Degussa 101 (10%, 64 mg) em EtOH:MeOH (4:1, 1,5 mL) durante 1 h. O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,11 min, m/z = 186,0 (M+1) Método 2 m_acídico. Intermediário E: terc-Butil (4-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1-il)metil)- 4-oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoacetil)tiazol-2-il)carbamato.
Figure img0036
[00342] A uma pasta fluida de ácido 2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoacético (2,72 g, 9,99 mmol) e HATU (3,80, 10,0 mmol) em DCM:DMF (3:1, 33,3 mL) a 0 °C foi adicionado DIPEA (2,91 mL, 16,7 mmol). Uma solução de (3S,4R)-4- ((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-aminoazetidin-2-ona (1,39 g, 8,33 mmol) em DCM:DMF (1:1, 32 mL) foi adicionada, seguido por uma lavagem com DMF (3 mL). Depois de agitar durante 48 h, a solução escura foi diluída com EtOAc (150 mL)/salmoura (140 mL), e as camadas foram separadas. A aquosa foi extraída com EtOAc (3x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (70 mL). A lavagem de camada de salmoura foi re-extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 0-10%), proporcionando o composto do título (2,38 g, 68%) como um sólido vermelho. LCMS : Ta = 0,59 min, m/z = 422,0 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,85 (s, 1 H), 9,70 (d, J = 9,3 Hz, 1 H), 8,52 (d, J = 1,6 Hz, 1 H), 8,48 (s, 1 H), 8,44 (s, 1 H), 7,96 (s, 1 H), 5,28 (ddd, J = 9,3, 5,2, 1,5 Hz, 1 H), 4,45 (dd, J = 14,2, 5,3 Hz, 1 H), 4,36 (dd, J = 14,1, 7,6 Hz, 1 H), 4,18 (dt, J = 7,6, 5,3 Hz, 1 H), 1,47 (s, 9H). Intermediário F: ácido (2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-(2-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoacetamido)-4-oxoazetidina- 1-sulfônico.
Figure img0037
[00343] A uma solução de terc-Butil (4-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4- triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoacetil)tiazol-2- il)carbamato (200 mg, 0,475 mmol) em DMF (4,75 mL) a 0 °C foi adicionado SO3^DMF (367 mg, 2,40 mmol). Depois de 16 h de agitação, foi concentrada em vácuo e purificada com resina HP21 (ACN-água, 0-50%), proporcionando o composto do título (110 mg, 46%) como um sólido amarelo pálido. LCMS : Ta = 0,54 min, m/z = 501,9 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,87 (s, 1 H), 9,75 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 8,94 (s, 1 H), 8,44 (s, 1 H), 8,34 (s, 1 H), 5,25 (dd, J = 9,1, 5,4 Hz, 1 H), 4,75 (dd, J = 14,3, 4,9 Hz, 1 H), 4,61 (dd, J = 14,4, 7,6 Hz, 1 H), 4,43 (dt, J = 7,6, 5,2 Hz, 1 H), 1,49 (s, 9H). Intermediário G: Benzil ((2S, 3S )-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-(hidroximetil)- 4-oxoazetidin-3-il)carbamato
Figure img0038
[00344] Etapa 1: (R, E)-1-(2,4-dimetoxifenil)-N-((2,2-dimetil-1,3- dioxolan-4-il)metileno)metanamina. Preparado de acordo com o procedimento descrito por Hubschwerlen, C. e Schmid, G. Helv. Chim. Acta 1983, 66, 2206-2209 com a adição de MgSO4. A uma pasta fluida de (S)-2,2-dimetil-1,3-dioxolano-4-carbaldeído (Carbosint LLC, 346 g, 43% em DCM, 1,143 mol) e MgSO4 (278 g) em DCM (1,5 L) a 0 °C foi adicionado 2,4-dimetoxibenzilamina (193 g, 1,154 mol) durante 20 min. Depois de agitar em ta durante 2 h foi filtrada, lavando a massa filtrante com DCM (2 x 250 mL). O líquido mãe foi usado diretamente na etapa 2.
[00345] Etapa 2: 2-(( 2S, 3S )-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-(( R )-2,2- dimetil-1,3-dioxolan-4-il)-4-oxoazetidin-3-il)isoindolina-1,3-diona. Preparado de acordo com o procedimento descrito por Hubschwerlen, C. e Schmid, G. Helv. Chim. Acta 1983, 66, 2206-2209. Depois de adição de TEA (322 mL, 2,31 mol) ao líquido mãe bruto da etapa 1, foi resfriada a 0 °C seguido por adição de uma solução de cloreto de 2- (1,3-dioxoisoindolin-2-il)acetila (284,3 g, 1,272 mol) em DCM (1 L) durante um período de 30 min. A mistura foi permitida aquecer em ta e agitada durante um adicional de 16 h, e então foi lavada com água (2 x 1L), NaHCO3 saturado (aq, 1L), salmoura (1L), secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo, proporcionando o composto do título bruto (631 g, quantitativo assumido) como um sólido amarelo pálido. A 1H RMN de uma amostra purificada (EtOAc-Heptano, 40-60%) foi uma comparação idêntica aos dados relatados da literatura.
[00346] Etapa 3: (3S,4S)-3-amino-1-(2,4-dimetoxibenzil)-4-((R)- 2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)azetidin-2-ona. A uma solução de 2- ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-((R)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)-4- oxoazetidin-3-il)isoindolina-1,3-diona bruto (631 g, 1,143 mol, conversão quantitativa assumida da etapa 2) em EtOH (8,2 L) foi adicionado hidrato de hidrazina (235 mL, 50-60%, ~4 mol) durante 20 min. A mistura resultante foi aquecida em refluxo durante 3 h, resfriada em ta, filtrada, lavada com EtOH e concentrada em vácuo. O resíduo foi suspenso em EtOAc (4 L), filtrado e lavado com água (2 x 1 L).
[00347] Etapa 4: Benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-((R)-2,2- dimetil-1,3-dioxolan-4-il)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. À solução orgânica bruta da etapa 3 (EtOAc, 4 L) resfriada a 0 °C foi adicionado NaHCO3 saturado (aq, 2,05 L) seguido por cloroformiato de benzila (205 mL, 1,43 mol), gota a gota durante 1 h. Depois de agitar em ta durante 2 h, as camadas foram separadas, e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi tratado com MeOH (2 L), filtrado e lavado com MeOH (2 x 200 mL) para proporcionar o composto do título puro (155 g) como um sólido branco. O líquido mãe foi resfriado a -20 °C durante 12 h, e o precipitado resultante foi coletado por filtração, proporcionando composto do título adicional (90 g) durante um rendimento de 45% combinado em 4 etapas. LCMS : m/z = 471,1 (M+1) .
[00348] Etapa 5: Benzil ((2S,3S)-2-((R)-1,2-di-hidroxietil)-1-(2,4- dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. A uma solução de benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-((R)-2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4- il)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (267 g, 0,567 mol) em THF (3 L) foi adicionado uma solução de TsOH^O (43,6 g, 0,229 mol) em água (0,75 L). A bicamada foi aquecida a 70 °C durante 16 h, em seguida resfriada em ta, neutralizada em pH = 7 com NaHCO3 saturado (aq) e concentrada em vácuo. A mistura resultante foi filtrada, lavada com água e secada para proporcionar o composto do título (240 g, 98%) como um sólido amarelo pálido. LCMS : m/z = 431,1 (M+1).
[00349] Etapa 6: Benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-formil- 4-oxoazetidin-3-il)carbamato. A uma solução de benzil ((2S,3S)-2- ((R)-1,2-di-hidroxietil)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-3- il)carbamato (240 g, 0,557 mol) em EtOAc (4,5 L) foi adicionado uma solução de periodato de sódio (132 g, 0,617 mol) em água (1,125 L), e a bicamada foi aquecida a 50 °C durante 2 h, e então foi resfriada em ta, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (500 mL), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo para proporcionar o composto do título (218 g, 98%) como um sólido amarelo pálido. LCMS : m/z = 399,0 (M+1). 1H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 9,32 (d, J = 3,2 Hz, 1 H), 8,19 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,39-7,23 (m, 5 H), 7,16 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 6,53 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 6,47 (dd, J = 8,3, 2,4 Hz, 1 H), 5,00-4,96 (m, 2 H), 4,90 (dd, J = 8,5, 5,8 Hz, 1 H), 4,38 (d, J = 14,5 Hz, 1 H), 4,29 (d, J = 14,5 Hz, 1 H), 4,05 (dd, J = 5,9, 3,3 Hz, 1 H), 3,73 (s, 3 H), 3,70 (s, 3H).
[00350] Etapa 7: Benzil ((2S, 3S )-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2- (hidroximetil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. A uma solução de benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-formil-4-oxoazetidin-3- il)carbamato (218 g, 0,546 mol) em uma mistura de DCM:MeOH (4:1, 2,25 L) a 0 °C foi adicionado boroidreto de sódio (41,3 g, 1,09 mol), em porções. A mistura resultante foi agitada a 0 °C durante 2 h, e então foi extinguida com água fria (1 L) durante 30 min, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com DCM (3 x 200 mL), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo para proporcionar o composto do título (208 g, 95%) como um sólido esbranquiçado. LCMS : m/z = 401,2 (M+1); 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 7,37-7,29 (m, 5 H), 7,21-7,18 (m, 1 H), 6,46-6,49 (m, 2 H), 5,82 (bd, J = 9,6 Hz, 1 H), 5,18-5,08 (m, 3 H), 4,45 (d, J = 14,4 Hz, 1 H), 4,28 (d, J = 14,4 Hz, 1 H), 3,83 (s, 3 H), 3,79 (s, 3 H), 3,76-3,72 (m, 1 H), 3,63-3,52 (m, 2 H), 1,87 (dd, J = 9,6, 4,0 Hz, 1H). Intermediário H terc -Butil 2-((( Z)-(1-(2-((terc- butoxiçarbonil)amino)tiazo^4-il)-2-(((2S,3S)-2-(hidroximetiJ):4- oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato
Figure img0039
[00351] Etapa 1: Benzil ((2S,3S)-2-(hidroximetil)-4-oxoazetidin-3- il)carbamato. Preparado de acordo com Mastalerz et al. J. Med. Chem,1988, 31, 1190. A uma solução de intermediário G (208 g, 0,529 mol) em ACN (4 L) foi adicionado persulfato de potássio (243 g, 0,899 mol) seguido por uma solução de fosfato de dipotássio (147,4 g, 0,846 mol) em água (2 L). A mistura resultante foi aquecida a 90 °C durante 4 h, em seguida resfriada em ta e concentrada em vácuo, removendo a maior parte de ACN. A mistura foi extraída com EtOAc (1L, 2 x 200 mL), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc- Hexanos, 50-100%), proporcionando o composto do título (86g, 65%) como um sólido branco. Os dados analíticos foram uma comparação idêntica àquela relatada na literatura.
[00352] Etapa 2: acetato de (2S, 3S )-2-(hidroximetil)-4- oxoazetidin-3-amônio. A uma solução de benzil ((2S,3S)-2- (hidroximetil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (25 g, 100 mmol) em MeOH (350 mL) foi adicionado Pd em C (10% de umidade, 2,5 g) seguido por AcOH (11,4 mL, 200 mmol). A mistura foi evacuada e recarregada com H2 (3x), levando a pressão final para 3,51 kg/cm2 (50 psi). Foi agitada em ta durante 2 h, em seguida descarregada, filtrada em celite e concentrada em vácuo, proporcionando o composto do título bruto (22 g) como uma óleo marrom claro, que foi usado diretamente na etapa 3.
[00353] Etapa 3: terc -Butil 2-((( Z)-(1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2S,3S)-2-(hidroximetil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato. A uma solução de (Z)-terc-butil 2-(((2- (benzo[d]tiazol-2-iltio)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)-tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (85 g, 116,4 mmol) em DMF (200 mL) a 0 °C foi adicionado uma solução de acetato de (2S,3S)-2- (hidroximetil)-4-oxoazetidin-3-amônio (22 g, 100 mmol, quantitativo assumido da etapa 2) em DMF (100 mL) seguido por DIPEA (52,2 mL, 300 mmol). A mistura foi permitida aquecer em ta e agitada durante um adicional de 16 h, e então foi concentrada em vácuo e purificada por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Hexanos, 25-100%), proporcionando o composto do título bruto (44 g, 83%) como um sólido amarelo pálido. LCMS : m/z = 526,1 (M-1); 1H RMN (400 MHz, CDCl3): δ 8,94 (s, 1 H), 8,02 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,30 (s, 1 H), 6,48 (s, 1 H), 5,43 (dd, J = 7,4, 4,7 Hz, 1 H), 4,25 (m, 1 H), 4,02 (dd, J = 8,6, 4,3 Hz, 1 H), 3,86 (m, 2 H), 1,56 (s, 3 H), 1,55 (s, 3 H), 1,52 (s, 9 H), 1,44 (9H, s). Intermediário I: (Z)-terc-Butil 2-(((2-(benzo[d]tiazol-2-iltio)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato
[00354] A uma pasta fluida de ácido (Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1- oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (50 g, 116,4 mmol) e dissulfeto de 2,2'-dibenzotiazolila (54,2 g, 163 mmol) em DCM (1 L) foi adicionado trifenilfosfina (44,3 g, 168,8 mmol) seguido por adição gota a gota de TEA (22,7 mL, 163 mmol). Depois de agitar durante 16 h, a mistura foi concentrada e usada diretamente na preparação de intermediário H. LCMS : m/z = 579,0 (M+1). Intermediário J: terc-Butil 2-((( Z)-(2-((( 2R, 3S )-2-(azidometil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-(( terc -butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato
Figure img0040
[00355] Etapa 1: terc-Butil 2-((( Z)-(1-(2-(( terc-butoxicarbonil)- amino)tiazol-4-il)-2-(((2S,3S)-2-(iodometil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)- 2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato. A uma solução de inter-mediário H (44,0 g, 83,4 mmol), trifenilfosfina (43,7 g, 166,8 mmol) e imidazol (11,4 g, 166,8 mmol) em DCM foi adicionado iodo (42,3 g, 166,8 mmol) em porções durante 5 min. Depois de agitar em ta durante 16 h foi diluída com DCM (300 mL), lavada com Na2S2O3 saturado (aq, 200 mL), água, salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia de coluna (EtOAc-Hexa- nos, 25-75%), proporcionando o composto do título (33 g, 62%) como um sólido amarelo. LCMS : m/z = 638,0 (M-1). Os dados de 1H RMN foram uma comparação idêntica àquela descrita em WO2012073138 (A1).
[00356] Etapa 2: terc-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(azidometil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato. A uma solução de terc-butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- (((2S,3S)-2-(iodometil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (24,0 g, 37,6 mmol) em THF (200 mL) a 0 °C foi adicionado TEA (10,5 mL, 75,2 mmol) seguido por azida de tetrabutilamônio (13,9 g, 48,9 mmol). A mistura foi permitida aquecer em ta e agitada durante um adicional de 16 h, e então foi vertida em gelo-água (200 mL) e extraída com EtOAc (3 x 100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel, proporcionando o composto do título (17,0 g, 82%) como um sólido amarelo pálido. LCMS : m/z = 551,0 (M-1) . Os dados de 1H RMN foram uma comparação idêntica àquela descrita em WO2012073138 (A1). Intermediário K: Ácido (2R, 3S )-2-(azidometil)-3-(( Z)-2-(((1-( terc-butóxi)- 2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-(( terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidina-1-sulfônico
Figure img0041
[00357] A uma solução de intermediário J (500 mg, 0,905 mmol) em DMF (8 mL) foi adicionado SO3^DMF (1,38 g, 9,05 mmol). Depois de agitar em ta durante 4 h, foi diluída com EtOAc (50 mL) e lavada com água, seguido por salmoura até o pH = 7. A camada orgânica foi secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo, proporcionando o composto do título (500 mg, 87%) como um sólido amarelo claro. LCMS : m/z = 629,85 (M-1); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,85 (s, 1 H), 9,10 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 8,63 (s, 1 H), 7,27 (d, J = 11,1 Hz, 1 H), 6,55 (s, 1 H), 5,37 - 5,13 (m, 1 H), 3,83 - 3,54 (m, 2 H), 1,46 - 1,41 (m, 4 H), 1,43 - 1,35 (m, 7H). Intermediário L: terc-Butil 2-((( Z)-(2-((( 2R, 3S )-2-(aminometil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-(( terc -butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato
Figure img0042
[00358] A uma solução de intermediário J (17,0 g, 30,8 mmol) em EtOH (300 mL) foi adicionado Pd em C (10%, wet, 2,0 g) sob nitrogênio. A mistura foi evacuada e recarregada com H2 (3x), levando a pressão final para 3,51 kg/cm2 (50 psi). Foi agitada em ta durante 2 h, em seguida descarregada, filtrada em celite e concentrada em vácuo, proporcionando o composto do título bruto (15,5 g, 96%) como um sólido amarelo pálido. LCMS : m/z = 527,1 (M-1). Os dados de 1H RMN foram uma comparação idêntica àquela descrita em WO2012073138 (A1). Intermediário M: terc-Butil 4-(but-3-in-1-il)piperazina-1-carboxilato
Figure img0043
[00359] A uma solução de 1-Boc-piperazina (0,5 g, 2,68 mmol) em acetonitrila (2,5 mL) foi adicionado K2CO3 (0,55 g, 4,02 mmol) seguido por 4-bromo-1-butina (0,39 g, 2,95 mmol). A mistura foi aquecida a 60 °C durante 6 h, permitida alcançar a temperatura ambiente, diluída com água e extraída com EtOAc (2 x 15 mL). As camadas orgânicas combinadas lavadas com água, salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas sob vácuo para proporcionar o composto do título (0,55 g, 86%); LCMS : m/z = 239,10 (M+1). Método 2 minLowp. Intermediário N: Brometo de N,N,N-trimetil-2-oxo-2-(prop-2-in-1- ilamino)etanamínio
Figure img0044
[00360] Etapa 1: 2-Bromo-N-(prop-2-in-1-il)acetamida A uma solução de brometo de bromoacetila (2,1 g, 10,34 mmol) e trietilamina (1,5 mL, 10,34 mmol) em DCM (20 mL) resfriada a 0 °C, foi adicionado uma solução de propargilamina (0,57 g, 10,34 mmol) em DCM (10 mL) gota a gota durante um período de 5 min, mantendo a agitação do princípio ao fim. A mistura foi agitada a 0 °C durante 2 h, e então os sólidos foram filtrados, e o filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia de coluna (sílica de malha 60-120, 50% EtOAc: Hexano), proporcionando o composto do título (1,3 g, 72%) como um sólido esbranquiçado; LCMS : m/z = 176,2 (M+1); 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 6,68 (brs, 1 H), 4,09 (dd, J = 5,4, 2,6 Hz, 2 H), 3,90 (s, 2 H), 2,28 (t, J = 2,6 Hz, 1H).
[00361] Etapa 2: Brometo de N,N,N-trimetil-2-oxo-2-(prop-2-in-1- ilamino)etanamínio. A uma solução de 2-bromo-N-(prop-2-in-1- il)acetamida (0,6 g, 3,4 mmol) em acetonitrila (5 mL) foi adicionado trimetilamina (30% em MeOH, 5 mL). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 16 h e concentrada em vácuo. O resíduo resultante foi triturado com éter, resultando no composto do título (780 mg, 97%); LCMS : m/z = 155,1 (M+1); 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 9,03 (t, J = 5,3 Hz, 1 H), 4,17 (s, 2 H), 3,95 (dd, J = 5,4, 2,6 Hz, 2 H), 3,23 (s, 9 H), 2,09 (s, 1H). Intermediário O: 2-(4-metilpiperazin-1-il)-N-(prop-2-in-1-il)acetamida
Figure img0045
[00362] A uma solução de 2-bromo-N-(prop-2-in-1-il)acetamida (0,7 g, 3,98 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionado N-metil piperazina (0,66 mL, 5,96 mmol) gota a gota. A mistura reacional foi agitada em ta durante 16 h, diluída com DCM e lavada com água e salmoura. A camada orgânica foi secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi triturado com éter-pentano, proporcionando o composto do título (0,38 g, 49%); LCMS : m/z = 196,15 (M+1); 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,06 (d, J = 6,1 Hz, 1 H), 3,86 (dd, J = 5,9, 2,5 Hz, 2 H), 3,07 (t, J = 2,5 Hz, 1 H), 2,91 (s, 2 H), 2,47 - 2,25 (m, 8 H), 2,15 (s, 3H). Intermediário P: Trifluorometanossulfonato de 4-etinil-1-metilpiridin-1-io
Figure img0046
[00363] Preparado de acordo com Rubinsztajn et al. Tetrahedron Lett, 1992, 33, 14, 1821-1824. A uma pasta fluida de cloridrato de 4- etinilpiridina (500 mg, 3,58 mmol) em DCM (50 mL) a 0 °C foi lentamente adicionado solução de NaHCO3 (aq, saturada, 10 mL). Depois de agitar durante 5 min, as camadas foram separadas, e a aquosa foi extraída com DCM (2 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, concentradas em vácuo e submetidas a alto vácuo durante 10 min. O resíduo bruto foi dissolvido em DCM (10 mL), resfriado a 0 °C e triflato de metila (450 μL, 3,94 mmol) foi adicionado gota a gota. Depois de agitar durante 30 min a 0 °C, éter foi adicionado, e o precipitado foi coletado e secado, proporcionando o composto do título (870 mg, 91%) como um sólido marrom claro. Os dados analíticos foram idênticos aos valores de literatura relatados. Intermediário Q: Trifluorometanossulfonato de 4-etinil-1,3-dimetilpiridin- 1-io
Figure img0047
[00364] Etapa 1: 3-Metil-4-((trimetilsilil)etinil)piridina. A uma solução de cloridrato de 4-bromo-3-metil piridina (5,0 g, 24,0 mmol) em THF (desgaseificada, 80 mL) foram adicionados iodeto de cobre (450 mg, 2,40 mmol) e trietilamina (20,0 mL, 143,9 mmol). Depois de desgaseificar durante 15 min, tetracis trifenilfosfina de paládio (830 mg, 0,72 mmol) e trimetilsililacetileno (6,10 mL, 43,16 mmol) foram adicionados. A mistura foi aquecida a 50 °C durante 16 h, em seguida resfriada em ta e filtrada. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Hexanos, 10%) para proporcionar o composto do título (3,95 g, 87%) como um óleo transparente, mas escuro.
[00365] Etapa 2: 4-Etinil-3-metilpiridina. Preparado de acordo com o método descrito em WO2013/028590. A uma solução de 4- etinil-3-metilpiridina (3,79 g, 20 mmol) em THF (50 mL) foi adicionado TBAF (1M em THF, 40 mL, 40 mmol). Depois de agitar em ta durante 1 h, a solução foi concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Hexanos, 20-40%) proporcionando o composto do título (1,70 g, 72%) como um sólido esbranquiçado.
[00366] Etapa 3: Trifluorometanossulfonato de 4-etinil-1,3- dimetilpiridin-1-io
[00367] Preparado de acordo com Rubinsztajn et al. Tetrahedron Lett, 1992, 33, 14, 1821-1824. A uma solução de 4-etinil-3-metilpiridina (420 mg, 3,58 mmol) em DCM (10 mL) a 0 °C foi adicionado triflato de metila (450 μL, 3,94 mmol), gota a gota. Depois de agitar durante 30 min a 0 °C, éter foi adicionado, e o precipitado foi coletado e secado, proporcionando o composto do título (863 mg, 86%) como um sólido marrom claro. Intermediário R: terc-Butil ((2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)carbamato
Figure img0048
[00368] A uma solução de N-Boc-propargil amina (1,60 g, 10,3 mmol) em uma mistura de DMF:MeOH (4:1, 10 mL) foram adicionados trimetilsililazida (2,0 mL, 15,2 mmol) e CuI (95 mg, 0,50 mmol). A mistura resultante foi aquecida a 100 °C durante 16 h, e então foi concentrada em vácuo e purificada por meio de cromatografia em sílica-gel, proporcionando o composto do título (2,0 g, 99%) como um óleo amarelo claro; LCMS : m/z = 196,9 (M-1) . Intermediário S:
Figure img0049
[00369] Etapa 1: Benzil ((2 S ,3 S )-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2- (iodometil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. A uma solução de intermediário G (10 g, 25 mmol), trifenilfosfina (19,6 g, 75 mmol) e imidazol (5,1 g, 75 mmol) em DCM (150 mL) a 0 °C foi adicionado iodo (19 g, 75 mmol) em porções durante 10 min. Depois de agitar em ta durante 4 h, foi lavada com solução de Na2S2O3 (aq) saturada, água, salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi suspenso em EtOAc (150 mL) e agitado durante 16 h e então foi filtrado, em seguida lavado com acetona e MeOH, proporcionando o composto do título (9,8 g, 77%) como um sólido branco. LCMS : m/z = 510,8 (M+1).
[00370] Etapa 2: Benzil ((2 R ,3 S )-2-(azidometil)-1-(2,4- dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. A uma solução de benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-(iodometil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (5,00 g, 9,80 mmol) em THF (100 mL) a 0 °C foi adicionado TEA (2,73 g, 19,6 mmol) seguido por uma solução de azida de tetrabutilamônio (3,62 g, 12,7 mmol) em THF. Depois de agitar em ta durante 16 h, foi filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 2%), proporcionando o composto do título (3,4 g, 81%) como um sólido branco.
[00371] Etapa 3: A uma solução de benzil ((2R,3S)-2-(azidometil)- 1-(2,4-dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (3,00 g, 7,06 mmol) em DCM (6 mL) foi adicionado DMSO: água: terc-butanol (1: 1: 1, 6 mL) terc-butil but-3-in-1-il carbamato (2,19 g, 14,1 mmol), CuSO4 (56 mg, 0,35 mmol) e L-ascorbato de sódio (2,01 mg, 10,6 mmol). Depois de agitar em ta durante 3 h, a mistura foi parcialmente concentrada, e água foi adicionada, e então os sólidos foram coletados por filtração. A massa filtrante foi suspensa em DCM, filtrada, e o filtrado concentrado, proporcionando o composto do título (quantitativo assumido) como um sólido amarelo claro.
[00372] Etapa 4: A uma solução do produto da etapa 3 (7,06 mmol) em ACN (50 mL) foi adicionado persulfato de potássio (3,82 g, 14,1 mmol) seguido por uma solução de fosfato de dipotássio (3,08 g, 17,7 mmol) em água (25 mL). A mistura resultante foi aquecida a 90 °C durante 4 h, em seguida resfriada em ta, filtrada e concentrada em vácuo, removendo a maior parte de ACN. O filtrado foi extraído com EtOAc e concentrado em vácuo. O resíduo bruto foi lavado com hexanos e acetona, proporcionando o composto do título (1,72 g, 57% durante 2 etapas) como um sólido branco. LCMS : m/z = 431,1 (M+1). Intermediário T
Figure img0050
[00373] Etapa 1: O procedimento geral para a reação de Mitsunobu foi seguido. A uma solução de intermediário G (5,00 g, 12,5 mmol), terc-butil ((2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)carbamato (2,97 mg, 15,0 mmol), trifenilfosfina (3,93 mg, 15,0 mmol) e DIAD (3,0 mL, 15 mmol) em THF (100 mL). Purificada por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH- DCM, 2-5%), proporcionando o composto do título (12,6 g, contaminado com óxido de trifenilfosfina) como uma espuma branca.
[00374] Etapa 2: A uma solução do produto da etapa 1 (12,5 mmol) em ACN (150 mL) foi adicionado uma solução de persulfato de potássio (6,76 g, 25,0 mmol) e fosfato de dipotássio (5,44 g, 31,2 mmol) em água (75 mL). A mistura resultante foi aquecida a 90 °C durante 4 h, em seguida resfriada em ta, diluída com água e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi concentrada em vácuo, e o resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel, proporcionando o composto do título (2,23 g, 41% durante 2 etapas) como um sólido branco. LCMS : m/z = 428,9 (M-1). Intermediário U:
Figure img0051
[00375] Etapa 1: Benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-((1,3- dioxoisoindolin-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. O proce-dimento geral para a reação de Mitsunobu foi seguido usando o intermediário G (5,00 g, 12,5 mmol), ftalimida (1,83 g, 12,5 mmol), trifenilfosfina (3,93 g, 15,0 mmol), DIAD (3,03 g, 15,0 mmol) e THF (150 mL). Depois de agitar durante 16 h, o precipitado formado foi filtrado, proporcionando o composto do título (5,67 g, 85%) como um sólido branco.
[00376] Etapa 2: Benzil ((2 R ,3 S )-2-(aminometil)-1-(2,4- dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. A uma solução de benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-((1,3-dioxoisoindolin-2- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (4,40 g, 8,31 mmol) em DCM:MeOH (5:1, 60 mL) foi adicionado hidrato de hidrazina (1,50 g, 25,0 mmol). Depois de agitar durante 16 h, o precipitado foi filtrado, e o filtrado foi concentrado, proporcionando o composto do título (quantitativo) como um sólido branco.
[00377] Etapa 3: A uma solução de benzil ((2 R ,3 S )-2- (aminometil)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (8,31 mmol) em DCM:MeOH (13:1, 43 mL) foi adicionado (R)-terc- butil (oxiran-2-ilmetil)carbamato. Depois de agitar durante 16 h, foi concentrada em vácuo e purificada por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 2-10%), proporcionando o composto do título (2,2 g, 46%) como uma espuma branca.
[00378] Etapa 4: A uma solução do produto da etapa 3 (2,20 g, 3,85 mmol) em DCM (100 mL) a 0 °C foi adicionado CDI (1,12 g, 6,92 mmol). Depois de agitar a 15 °C durante 2 h, a solução foi concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 1-5%) para proporcionar o composto do título (2,10 g, 91%) como uma espuma branca.
[00379] Etapa 5: A uma solução do produto da etapa 4 (2,10 g, 3,51 mmol) em ACN (40 mL) foi adicionado uma solução de persulfato de potássio (1,89 g, 7,02 mmol) e fosfato de dipotássio (1,52 g, 8,75 mmol) em água (20 mL). A mistura resultante foi aquecida a 90 °C durante 4 h, em seguida resfriada em ta e filtrada. O filtrado foi concentrado, extraído com EtOAc, e a camada orgânica foi concentrada. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 2-5%), proporcionando o composto do título (660 mg, 42%) como um sólido amarelo pálido. LCMS : m/z = 449,09 (M+1). Intermediário V:
Figure img0052
[00380] Etapa 1: (1H-1,2,3-triazol-4-il)metanol. A uma solução de álcool propargílico (11,2 g, 200 mmol) em DMF (160 mL) e MeOH (40 mL) foram adicionados CuI (1,9 g, 10 mmol) e trimetilsilil azida (34,6 g, 300 mmol). Depois de aquecer a 100 °C durante 16h, a mistura reacional foi resfriada em ta e filtrada através de celite. O filtrado foi concentrado em vácuo para proporcionar o composto do título (quantitativo assumido). O composto bruto foi usado como tal na etapa seguinte.
[00381] Etapa 2: 4-((( terc -butildimetilsilil)óxi)metil)-1H-1,2,3- triazol. A uma solução de (1H-1,2,3-triazol-4-il)metanol (30 g, 200 mmol) em DCM (160 mL) foi adicionado imidazol (20,4 g, 300 mmol) seguido por TBDMS-Cl (33,3 g, 220 mmol) como um sólido em porções. Depois de agitar em ta durante 16 h, a mistura reacional foi filtrada através de celite, e o filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo foi dissolvido em EtOAc (500 mL) e lavado com água, salmoura, secado em Na2SO4 e concentrado em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc- hexanos, 5-30%) para proporcionar o composto do título (30,2 g, 71%) como um sólido amarelo pálido.
[00382] Etapa 3: Benzil ((2 R ,3 S )-2-((4-((( terc-butildimetil- silil)óxi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-4- oxoazetidin-3-il)carbamato. A uma solução de benzil ((2S,3S)-1-(2,4- dimetoxibenzil)-2-(hidroximetil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (0,94 g, 2,34 mmol), 4-(((terc-butildimetilsilil)óxi)metil)-1H-1,2,3-triazol (0,5 g, 2,34 mmol) e PPh3 (0,74 g, 2,81 mmol) em THF (20 mL) a 0 °C foi adicionado DIAD (0,57 g, 2,81 mmol) lentamente. Depois de agitar em ta durante 16 h, a mistura reacional foi concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-hexanos, 20-30%) para proporcionar o composto do título (1,25 g, 89%) como um sólido amarelo pálido. LCMS : m/z = 594,3 (M-1).
[00383] Etapa 4: Benzil ((2 R ,3 S )-2-((4-((( terc-butildimetil- silil)óxi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)carbamato. A uma solução de benzil ((2R,3S)-2-((4-(((terc- butildimetilsilil)óxi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-(2,4- dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (1,25 g, 2,1 mmol) em CH3CN (20 mL) foi adicionado K2S2O8 (0,73 g, 2,7 mmol) seguido por uma solução de K2HPO4 (0,84 g, 4,8 mmol) em água (10 mL). Depois de agitar a 90 °C durante 1 h, mais K2S2O8 (0,23 g, 0,84 mmol) foi adicionado. Depois de aquecer a 90 °C durante adicional de 2 h, a mistura reacional foi concentrada em vácuo. O resíduo foi extraído com EtOAc (2 x 30 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, salmoura, secadas com Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 1-3%) para proporcionar o composto do título (0,44 g, 47%) como um sólido amarelo pálido. LCMS : m/z = 446,2 (M+1).
[00384] Etapa 5: Benzil ((2R,3S)-2-((4-(hidroximetil)-2H-1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. A uma solução de benzil ((2R,3S)-2-((4-(((terc-butildimetilsilil)óxi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (10,8 g, 24,4 mmol) em THF (100 mL) foi adicionado TBAF (1 M em THF, 26,6 mL, 26,6 mmol) lentamente durante um período de 15 min. Depois de agitar em ta durante 1,5 h, a mistura reacional foi concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH- DCM, 1-5%) para proporcionar o composto do título (6,8 g, 85%) como um sólido amarelo pálido. LCMS : m/z = 330,0 (M+1).
[00385] Etapa 6: (3S,4R)-3-amino-4-((4-(hidroximetil)-2H-1,2,3- triazol-2-il)metil)azetidin-2-ona. A uma solução de benzil ((2R,3S)-2- ((4-(hidroximetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)carbamato (1,54 g, 4,65 mmol) em EtOH (50 mL) e EtOH (25 mL) foi adicionado Pd/C (10%, 0,51 g, 4,65 mmol). Depois de agitar em ta durante 4 h, a mistura reacional foi filtrada através de uma almofada de celite, e o filtrado foi concentrado em vácuo para proporcionar o composto do título (quantitativo assumido). A bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,12 min, m/z = 198,0 (M+1) Método 2 m_acídico. Intermediário W: cloreto de 3-(amoniometil)-1-metilpiridin-1-io
Figure img0053
[00386] Etapa 1: N-(piridin-3-ilmetil)acetamida
[00387] Preparado de acordo com Plater et al. Org. Biomol. Chem, 2009, 7, 1633. A uma solução de piridin-3-ilmetanamina (9,42 mL, 92 mmol) em água (103 mL) a 10°C foi adicionado anidrido acético (10,47 mL, 111 mmol), agitada a uma taxa onde a temperatura interna não subiu acima de 25°C. Depois de um adicional de 18 h de agitação, a solução foi concentrada em vácuo, em seguida coevaporada com tolueno (3x) para proporcionar o composto do título (14,22 g, quantitativo) como um óleo transparente. LCMS : Ta = 0,12 min, m/z = 151,1 (M+1) Método 2 m_acídico. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,49 (d, J = 2,4 Hz, 2H) 7,65 (dd, J = 7,8, 1,6 Hz, 1H) 7,30-7,24- (m, 1 H) 6,59-6,49 (m, 1 H) 4,43 (d, J = 6,0 Hz, 2H) 2,02 (s, 3H).
[00388] Etapa 2: iodeto de 3-(acetamidometil)-1-metilpiridin-1-io
[00389] A uma solução de N-(piridin-3-ilmetil)acetamida (13,89 g, 92 mmol) em DCM a 0°C foi adicionado iodeto de metila (8,10 mL, 129 mmol). O banho de resfriamento foi removido depois de 10 min, e a solução foi agitada em ta durante 19 h, e então foi concentrada em vácuo e usada como bruto na etapa 3. LCMS : Ta = 0,18 min, m/z = 164,9 (M+) Método 2 m_acídico. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,918,87 (m, 2H) 8,58 (brs, 1H) 8,42 (d, J = 8,0 Hz, 1H) 8,09 (t, J = 7,0 Hz, 1H) 4,43 (d, J = 5,9 Hz, 2H) 4,35 (s, 3H) 1,92 (s, 3H)
[00390] Etapa 3: cloreto de 3-(amoniometil)-1 -metilpiridin-1 -io
[00391] Uma pasta fluida de iodeto de 3-(acetamidometil)-1- metilpiridin-1-io (26,9 g, 92 mmol) em HCl (6N,307 mL, 1,84 mol) foi aquecida a 100 °C durante 3 h. A solução foi concentrada sob pressão reduzida (temperatura de banho 80°C). O óleo vermelho resultante solidificou durante a noite e foi triturado com MeOH e filtrado para proporcionar o composto do título (8,76g, 49%) como um sólido esbranquiçado. O filtrado foi concentrado até um óleo vermelho, que depois de repousar durante 4 dias, o sólido formado foi coletado e lavado com MeOH frio, proporcionando uma segunda coleita (6,5 g, 36%). LCMS : Ta = 0,11 min, m/z = 123,0 (M+) Método 2 m_acídico. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9,18 (s, 1H) 9,03 (d, J = 6,0 Hz, 1H) 8,66 (d, J = 8,1 Hz, 1H) 8,45 (brs, 3H) 8,24 (t, J = 7,0 Hz, 1H) 4,38 (s, 3H) 4,30 (s, 2H).
[00392] Os Intermediários descritos acima, e compostos similares feitos pelos mesmos métodos, podem ser usados para preparar compostos de Fórmula (I) pelos esquemas de síntese fornecidos aqui. Os seguintes Exemplos ilustram a síntese de compostos de Fórmula (I) selecionados e fornecem métodos que podem ser adaptados à síntese de outros compostos de Fórmula (I).
Exemplo 1. Ácido 2-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2-((( 3S, 4R )-2- oxo-4-((2-oxopirrolidin-1 -il)metil)-1 -sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00393] Etapa 1: terc-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)a- mino)tiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxopirrolidin-1- il)metil)azetidin-3-il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato. A solução de Intermediário L (100 mg, 0,190 mmol), metil-4- bromobutirato (25 μL, 0,194 mmol) e TEA (27 μL, 0,194 mmol) em DMF (1,3 mL) foi aquecida a 70 °C durante 16 h, ao mesmo tempo que agitando, e então o aquecimento foi, em seguida aumentado para 90 °C. Depois de 6 h de aquecimento adicional, foi diluída com HCl (1N) e EtOAc. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução de LiCl (5% aq), salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc- Heptano, 50-100%, em seguida MeOH-EtOAc, 0-7%), proporcionando o composto do título (21 mg, 18%) como uma espuma. LCMS : Ta = 0,88 min, m/z = 595,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00394] Etapa 2: Ácido (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-oxo-4-((2-oxopirrolidin-1-il)metil)azetidina-1- sulfônico. terc-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxopirrolidin-1-il)metil)azetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (43 mg, 0,072 mmol) em DMF (725 μL) foi tratado com SO3^DMF (111 mg, 0,725 mmol). A solução foi agitada em ta durante 30 min, em seguida diluída com EtOAc e vertida em solução de LiCl (5% aq). A aquosa foi extraída com EtOAc (2x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo, proporcionando o composto do título bruto (55 mg) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,77 min, m/z = 675,3 (M+1) Método 2 m_acídico. Foi usado na etapa 3 sem outra purificação.
[00395] Etapa 3: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2- (((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxopirrolidin-1-il)metil)-1-sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0054
[00396] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-oxo-4-((2-oxopirrolidin-1- il)metil)azetidina-1-sulfônico (55 mg, 0,072 mmol), DCM (720 μL) e TFA (333 μL, 4,32 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC preperativa de fase reversa (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min), proporcionando o composto do título (6 mg, 16%) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,35 min, m/z = 519,0 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,17 (s, 1 H), 5,46 (d, J = 5,8 Hz, 1 H), 4,71-4,64 (m, 1 H), 3,92 (dd, J = 14,7, 8,7 Hz, 1 H), 3,71-3,55 (m, 2 H), 3,49 (dd, J = 14,7, 4,1 Hz, 1 H), 2,42 (td, J = 8,0, 4,8 Hz, 2 H), 2,08 (p, J = 7,6 Hz, 2 H), 1,55 (s, 3 H), 1,54 (s, 3H).
Exemplo 2: Ácido 2-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2-((( 3S, 4R )-2- oxo-4-((2-oxooxazolidin-3-il)metil)-1-sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00397] Etapa 1: terc-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)a- mino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((2-((terc- butildimetilsilil)óxi)etil)amino)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato. Uma solução de Intermediário L (500 mg, 0,949 mmol) e (2-bromoetóxi)(terc- butil)dimetilsilano (204 μl, 0,949 mmol) em ACN (3,2 mL) foi aquecida a 80°C em um micro-ondas durante 30 min, em seguida mantida em ta durante 12 h. Foi reaquecida a 100°C durante 45 min no micro-ondas, em seguida mantida em ta durante 12 h, e então foi diluída com EtOAc e lavada com carbonato de sódio (2M, aq), secada em sulfato de sódio e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0-100%, em seguida MeOH-DCM, 10%) para proporcionar o composto do título (111 mg, 17%). LCMS : Ta = 1,03 min, m/z = 685,4 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,17 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,30 (s, 1 H), 6,30 (br s, 1H) 5,57-5,50 (m, 1H) 4,09-4,01 (m, 1H) 3,77-3,61 (m, 3H) 3,09 (dd, J = 12,6, 3,7 Hz, 1H) 2,87-2,71 (m, 3H) 1,56 (s, 6H) 1,53 (s, 9H) 1,44 (s, 9H) 0,86 (s, 9H) 0,03 (s, 3 H), 0,03 (s, 3H).
[00398] Etapa 2: terc-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)a- mino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((2-hidroxietil)amino)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato. Preparado de acordo com Seki et al. Sinlett 1995, 609-611. A uma solução de terc-butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((2-((terc- butildimetilsilil)óxi)etil)amino)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (111 mg, 0,162 mmol) em DMF:NMP (2,7:1, 1,62 mL) foi adicionado hidrofluoreto de fluoreto de amônio (37,0 mg, 0,648 mmol). Depois de agitar durante 65 h, a solução foi diluída com água e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi secada em sulfato de sódio e concentrada em vácuo para proporcionar o composto do título bruto (92 mg, 99%). O material bruto foi usado diretamente na etapa 3. LCMS : Ta = 0,76 min, m/z 571,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00399] Etapa 3: terc-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)a- mino)tiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3- il)metil)azetidin-3-il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato. Preparado de acordo com PCT Int. Appl. 2011061760. Uma solução de terc-butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- (((2R,3S)-2-(((2-hidroxietil)amino)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (92 mg, 0,161 mmol) em Clorofórmio (806 μl) foi tratada com CDI (131 mg, 0,806 mmol). Depois de agitar em ta durante 3 h foi diluída com EtOAc, lavada com água, salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 010%), proporcionando o composto do título (91 mg, 95%) como um óleo laranja. LCMS : Ta = 0,86 min, m/z = 597,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00400] Etapa 4: Ácido (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3-il)metil)azetidina-1- sulfônico. Uma solução de terc-butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbo- nil)amino)tiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3- il)metil)azetidin-3-il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (91 mg, 0,153 mmol) em DMF (Volume: 763 μl) foi tratada com SOβ^DMF (234 mg, 1,525 mmol). Depois de agitar em ta durante 1 h foi diluída com EtOAc, lavada com salmoura (3x), secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo, proporcionando o composto do título (100 mg, 97%) como um sólido laranja. LCMS : Ta = 0,78 min, m/z = 677,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00401] Etapa 5: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2- (((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3-il)metil)-1-sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0055
[00402] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin- 3-il)metil)azetidina-1-sulfônico (100 mg, 0,148 mmol), DCM (1,5 mL) e TFA (569 μl, 7,39 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN- água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min), proporcionando o composto do título (10 mg, 12%) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,32 min, m/z = 521,0 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,33 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,89 (s, 1 H), 5,22 (dd, J = 8,8, 5,7 Hz, 1 H), 4,23-4,11 (m, 3 H), 3,753,62 (m, 2H assumido; obscurecido por água), 3,60-3,51 (m, 1H assumido; obscurecido por água), 3,34 (dd, J = 14,6, 5,5 Hz, 1 H), 1,44 (s, 3 H), 1,40 (s, 3H).
Exemplo 3: Ácido 2-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2-((( 3S, 4R )-2- oxo-4-((2-oxoimidazolidin-1-il)metil)-1-sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00403] Etapa 1: terc-Butil 2-((( Z)-(2-((( 2R, 3S )-2-(((2-((((9H- fluoren-9-il)metóxi)carbonil)amino)etil)amino)metil)-4-oxoazetidin- 3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato. Uma solução de Intermediário L (650 mg, 1,234 mmol) e (9H-fluoren-9-il)metil (2- oxoetil)carbamato (365 mg, 1,234 mmol) em DCE (12,3 mL) foi tratada com triacetoxiboroidreto de sódio (1,377 g, 6,17 mmol). Depois de agitar em ta durante 18 h foi extinguida com NaHCO3 (aq) saturado e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 010%), proporcionando o composto do título (435 mg, 45%) como um sólido branco. LCMS : Ta = 1,00 min, m/z = 792,3 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,11 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 8,35 (s, 1 H), 7,89 (d, J = 7,7 Hz, 2 H), 7,67 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,41 (t, J = 7,2 Hz, 2 H), 7,32 (td, J = 7,4, 1,2 Hz, 2 H), 7,27 (s, 1 H), 7,19 (t, J = 5,7 Hz, 1 H), 5,20 (dd, J = 9,1, 5,0 Hz, 1 H), 4,30 (d, J = 6,8 Hz, 2 H), 4,24-4,17 (m, 1 H), 3,76 (ddd, J = 8,8, 5,3, 3,7 Hz, 1 H), 3,11-2,97 (m, 2 H), 2,76 (dd, J = 12,5, 3,7 Hz, 1 H), 2,63-2,52 (m, 3 H), 1,45 (s, 9 H), 1,42 (s, 3 H), 1,39 (s, 3 H), 1,38 (s, 9H).
[00404] Etapa 2: terc-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-aminoetil)a- mino)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato. Uma solução de terc-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2- ((((9H-fluoren-9-il)metóxi)carbonil)amino)etil)amino)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (435 mg, 0,549 mmol) em DMF (2,75 mL) foi tratada com piperidina (1,1 mL, 11 mmol). Depois de agitar em ta durante 1 h foi diluída com tolueno e concentrada (3x). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min), proporcionando o composto do título (238 mg, 64%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,68 min, m/z = 570,3 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,12 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 8,38 (s, 1 H), 8,31 (s, 1 H), 7,21 (s, 1 H), 5,17 (dd, J = 8,3, 4,9 Hz, 1 H), 3,76 (dt, J = 8,7, 4,7 Hz, 1 H), 2,81-2,51 (m, 6 H), 1,44 (s, 9 H), 1,41 (s, 3 H), 1,39 (s, 3 H), 1,38 (s, 9H).
[00405] Etapa 3: terc-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)a- mino)tiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxoimidazolidin-1- il)metil)azetidin-3-il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato. A uma solução de terc-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-aminoetil)a- mino)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato (100 mg, 0,151 mmol) em clorofórmio (756 μl) foi adicionado CDI (98 mg, 0,604 mmol) seguido por TEA (105 μl, 0,756 mmol). Depois de agitar em ta durante 1 h foi diluída com EtOAc, lavada com água, salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo para proporcionar o composto do título (73 mg, 81%) como um sólido branco. Foi usado como bruto na etapa 4. LCMS : Ta = 0,70 min, m/z = 596,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00406] Etapa 4: Ácido (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-oxo-4-((2-oxoimidazolidin-1-il)metil)azetidina-1- sulfônico. Uma solução de terc-butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicar- bonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxoimidazolidin- 1-il)metil)azetidin-3-il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (73 mg, 0,123 mmol) em DMF (613 μl) foi tratada com SOβ^DMF (94 mg, 0,613 mmol). Depois de agitar em ta durante 2 h foi diluída com EtOAc, lavada com salmoura (3x), secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo para proporcionar o composto do título (99 mg) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,74 min, m/z = 676,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00407] Etapa 5: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2- (((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxoimidazolidin-1-il)metil)-1-sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0056
[00408] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-oxo-4-((2- oxoimidazolidin-1-il)metil)azetidina-1-sulfônico (99 mg, 0,147 mmol), DCM (1,47 mL) e TFA (566 μl, 7,35 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min), proporcionando o composto do título (4,8 mg) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,31 min, m/z = 520,0 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,25 (dd, J = 9,0, 5,0 Hz, 1 H), 6,83 (s, 1 H), 5,21 (dd, J = 9,0, 5,8 Hz, 1 H), 4,06-4,00 (m, 1 H), 3,65 (dd, J = 14,5, 4,7 Hz, 1 H), 3,33-3,30 (m, 1H assumido; obscurecido por água), 3,25 (dd, J = 14,5, 6,9 Hz, 2H assumido; obscurecido por água), 3,17 (ddd, J = 16,7, 8,6, 6,7 Hz, 2 H), 1,43 (s, 3 H), 1,42 (s, 3H).
Exemplo 4: Ácido 2-((( Z)-(2-((( 2R, 3S )-2-((5-(aminometil)-2 H - tetrazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00409] Etapa 1: Um vaso de pressão de 75 mL foi carregado com o Intermediário A (1,50 g, 3,13 mmol), intermediário B (1,108 g, 4,70 mmol), K2CO3 (1,733 g, 12,54 mmol), NaI (564 mg, 3,76 mmol) e DMF (10 mL), em seguida aquecido a 70 °C com agitação. Depois de 3 h, mais intermediário B (1,108 g, 4,70 mmol), K2CO3 (1,733 g, 12,54 mmol) e NaI (394 mg, 2,63 mmol) foram adicionados e o aquecimento foi continuado. Depois de 8 h de aquecimento total, foi resfriado em ta, diluído com EtOAc/salmoura, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (3x), secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi combinado com outra amostra de escala e procedimento idênticos e purificado por meio de cromatografia em sílica- gel (Acetona-DCM, 0-30%), proporcionando a 2H-tetrazol isômero (2,15 g, 60%) e 1H-tetrazol isômero (443 mg, 12%) como sólidos brancos. A- LCMS : Ta = 0,97 min, m/z = 582,3 (M+1) Método 2 m_acídico; B-LCMS : Ta = 0,93 min, m/z = 582,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00410] Etapa 2: Preparado de acordo com Mastalerz et al. J. Med. Chem, 1988, 31, 1190. A uma solução de 2H-tetrazol isômero (2,15 g, 3,70 mmol) da etapa 1 em ACN:água (2:1, 61,5 mL) foi adicionado K2S2O8 (1,40 g, 5,18 mmol) seguido por K2HPO4 (837 mg, 4,81 mmol). A mistura resultante foi aquecida a 90 °C durante 1,5 h, e então mais K2S2O8 (300 mg, 1,11 mmol) e K2HPO4 (167 mg, 0,961 mmol) foram adicionados. Depois de 3,5 h de aquecimento adicional a 90 °C, foi diluída com ACN e concentrada em vácuo, removendo a maior parte de ACN. A mistura foi diluída com água/EtOAc, e as camadas separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (5x), e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (Acetona-DCM, 50%), para proporcionar o composto do título (785 mg, 49%). LCMS : Ta = 0,77 min, m/z = 432,3 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (500 MHz, ACN-d3) δ 7,49-7,30 (m, 5 H), 6,76 (br s, 1 H), 6,55-6,41 (m, 1 H), 5,85 (brs, 1 H), 5,03-5,21 (m, 3 H), 4,88-4,71 (m, 2 H), 4,52-4,43 (m, 3 H), 4,39-4,24 (m, 1 H), 1,50-1,35 (m, 9H).
[00411] Etapa 3: terc-Butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2- il)metil)-2H-tetrazol-5-il)metil)carbamato. Preparado de acordo com o procedimento descrito em Malmstromet al. Bioorg. Med. Chem. Lett, 2012, 22, 5293. Uma solução de composto da etapa 2 (785 mg, 1,819 mmol) em EtOAc:MeOH (5:1, 65 mL) foi evacuada e carregada outra vez com argônio (2x) seguido por adição de Pd em C (10%, 581 mg). O sistema foi evacuado e carregado outra vez com H2 (3x). Depois de 21 h de agitação, a mistura foi filtrada em celite, lavando com MeOH, concentrada em vácuo, apreendida em tolueno e reconcentrada (3x). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,37 min, m/z = 298,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00412] Etapa 4: terc-Butil 2-((( Z)-(2-((( 2R, 3S )-2-((5-((( terc - butoxicarbonil)amino)metil)-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato.
[00413] A uma solução de ácido (Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1- oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acético (938 mg, 2,18 mmol) em DCM:DMF (5:1, 8,5 mL) a 0 °C foi adicionado DIPEA (953 μL, 5,46 mmol) seguido por HATU (830 mg, 2,18 mmol). À solução resultante foi adicionado uma solução de terc- butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-tetrazol-5-il)me- til)carbamato (541 mg, 1,82 mmol) em DCM:DMF (5:1, 8,5 mL). A solução foi agitada em ta durante 1 h, em seguida concentrada em vácuo, dissolvida em EtOAc e lavada com salmoura. A camada aquosa foi extraída com EtOAc, e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (3x), secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromato- grafia em sílica-gel (Acetona-DCM, 30-50%), proporcionando o composto do título (897 mg, 70%) como um sólido púrpura. LCMS : Ta = 1,01 min, m/z = 709,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00414] Etapa 5: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-((5-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)-2H- tetrazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico.
[00415] terc-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((terc-butoxicarbonil)ami- no)metil)-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato (200 mg, 0,282 mmol) em DMF (2 mL) foi tratado com SO3^DMF (432 mg, 2,82 mmol). A solução púrpura tornou-se imediata-mente verde. Depois de 20 min de agitação, mais SO3^DMF (432 mg, 2,82 mmol) foi adicionado. Depois de um adicional de 20 min, mais SO3^DMF (432 mg, 2,82 mmol) foi adicionado. Depois de 20 min, a solução foi diluída com EtOAc/salmoura, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x), e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo para proporcionar o composto do título (185 mg, 83%). LCMS : Ta = 0,91 min, m/z = 789,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00416] Etapa 6: Ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(aminometil)-2H- tetrazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0057
[00417] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-(((terc- butoxicarbonil)amino)metil)-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1- sulfônico (185 mg, 0,234 mmol), DCM (2,34 mL) e TFA (1,08 mL, 14,06 mmol) durante 1,5 h. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min), proporcionando o composto do título (55,5 mg, 45%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,30 min, m/z = 533,0 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,34 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 8,55 (br s, 3 H), 7,34 (br s, 2 H), 6,73 (s, 1 H), 5,37 (dd, J = 8,7, 5,5 Hz, 1 H), 5,19-5,13 (m, 1 H), 5,01-4,94 (m, 1 H), 4,62-4,57 (m, 1 H), 4,434,37 (m, 2 H), 1,38 (s, 3H) 1,34 (s, 3H). Exemplo 5: Ácido 2-(((Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5- (guanidinometil)-2 H -tetrazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0058
[00418] A uma solução de ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5- (aminometil)-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico (20 mg, 0,038 mmol) e cloridrato de pirazol-1-carboxamidina (11,6 mg, 0,079 mmol) em DMF (376 μL) foi adicionado DIPEA (26,2 μL, 0,150 mmol). Depois de agitar em ta durante 12 h, a solução foi concentrada em vácuo. Tolueno foi adicionado e foi reconcentrado (3x). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min), proporcionando o composto do título (11 mg, 45%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,31 min, m/z = 575,2 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 7,49-7,04 (m, 5 H), 6,74 (br s, 1 H), 5,26 (br s, 1 H), 5,14-5,07 (m, 1 H), 4,98-4,90 (m, 1 H), 4,65 (br s, 2 H), 4,59-4,52 (m, 1 H), 1,36 (s, 3 H), 1,34 (s, 3H).
Exemplo 6: Ácido 2-((( Z-(2-((( 2R, 3S )-2-((5-(aminometil)-1 H - tetrazol-1 -il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1 -(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00419] Etapa 1: Preparado de uma maneira análoga ao Exemplo 4, etapa 2 usando o 1H-tetrazol isômero apropriado obtido na Etapa 1 no Exemplo 4 (442 mg, 0,760 mmol), K2S2O8 (288 mg, 1,064 mmol) e K2HPO4 (172 mg, 0,988 mmol) em ACN:água (2:1, 12,6 mL) a 90 °C durante 1,5 h. Mais K2S2O8 (62 mg, 0,228 mmol) e K2HPO4 (42 mg, 0,198 mmol) foram adicionados e aquecidos durante um adicional de 3,5 h, em seguida resfriados em ta, diluídos com ACN e concentrados em vácuo, removendo a maior parte de ACN. A mistura foi diluída com água/EtOAc, e as camadas separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (5x), e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (Acetona-DCM, 50%), para proporcionar o composto do título (179 mg, 54%). LCMS : Ta = 0,72 min, m/z = 432,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00420] Etapa 2: terc-Butil ((1-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2- il)metil)-1H-tetrazol-5-il)metil)carbamato. Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapa 3, usando o produto de Etapa 1 (179 mg, 0,415 mmol) e Pd em C (10%, 132 mg) em EtOAc:MeOH (10:1, 13,8 mL) durante 21 h. O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,37 min, m/z = 298,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00421] Etapa 3: terc-Butil 2-((( Z)-(2-((( 2R, 3S )-2-((5-((( terc - butoxicarbonil)amino)metil)-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato.
[00422] Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapa 3 usando ácido (Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imi- no)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (214 mg, 0,498 mmol), DIPEA (953 μL, 5,46 mmol) e HATU (830 mg, 2,18 mmol) em DCM:DMF (5:1, 3,6 mL) a 0 °C seguido por uma solução de terc-butil ((1-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2-il)metil)-1H-tetrazol-5- il)metil)carbamato (123 mg, 0,415 mmol) em DCM:DMF (4,3:1, 3,7 mL). Depois de agitar em ta durante 1 h foi submetida a uma preparação idêntica, em seguida purificada por meio de cromatografia em sílica-gel (Acetona-DCM), proporcionando o composto do título (174 mg, 59%) como um sólido púrpura claro. LCMS : Ta = 1,03 min, m/z = 709,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00423] Etapa 4: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-((5-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)-1H- tetrazol-1-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico.
[00424] Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapa 4 usando terc-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((terc-butoxicarbonil)ami- no)metil)-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato (100 mg, 0,141 mmol) e SOa^DMF (216 mg, 1,41 mmol) em DMF (1,4 mL) durante 20 min em ta. Submetido à preparação idêntica para proporcionar o composto do título (100 mg, 89%). LCMS : Ta = 0,91 min, m/z = 789,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00425] Etapa 5: Ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(aminometil)-1 H- tetrazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0059
[00426] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-(((terc- butoxicarbonil)amino)metil)-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oxoazetidina-1- sulfônico (100 mg, 0,126 mmol), DCM (1,26 mL) e TFA (584 μL, 7,58 mmol) durante 1,5 h. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN- água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min), proporcionando o composto do título (18,7 mg, 28%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,31 min, m/z = 533,2 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,21 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,28 (s, 2 H), 6,79 (s, 1 H), 5,35 (dd, J = 8,8, 5,8 Hz, 1 H), 4,79-4,61 (m, 2 H), 4,59-4,53 (m, 1 H), 4,47-4,35 (m, 2 H), 1,36 (br s, 6H).
Exemplo 7: Ácido 2-(((Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5- metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00427] Etapa 1, Composto 1: Benzil ((2R, 3S )-1-(2,4- dimetoxibenzil)-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)carbamato.
[00428] Etapa 1, Composto 2: Benzil ((2R, 3S )-1-(2,4- dimetoxibenzil)-2-((5-metil-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)carbamato.
[00429] Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapa 1 usando o Intermediário A (1,0 g, 2,1 mmol), 5-metil-2H-tetrazol (527 mg, 6,27 mmol), K2CO3 (1,44 g, 10,5 mmol), NaI (470 mg, 3,13 mmol) em DMF (10 mL) a 70 °C durante 4 h. Nenhuma outra adição de reagente foi necessário. Depois de resfriar em ta foi diluído com EtOAc, lavado com salmoura, secado em Na2SO4 e concentrado em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (Acetona-DCM), proporcionando o composto do título 1 (680 mg, 70%) e composto do título 2 (221 mg, 23%) como sólidos. 1-LCMS : Ta = 0,87 min, m/z = 467,2 (M+1) Método 2 m_acídico; 2-LCMS : Ta = 0,80 min, m/z = 467,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00430] Etapa 2: Benzil ((2R, 3S )-2-((5-metil-2 H -tetrazol-2- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapa 2 usando benzil ((2R,3S)-1-(2,4- dimetoxibenzil)-2-((5-metil-2H-tetrazol-1-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)carbamato (202 mg, 0,433 mmol), K2S2O8 (164 mg, 0,606 mmol) e K2HPO4 (98 mg, 0,563 mmol) em ACN:água (2:1, 7,4 mL) a 90 °C durante 1,5 h. Mais K2S2O8 (35 mg, 0,13 mmol) e K2HPO4 (20 mg, 0,11 mmol) foram adicionados e aquecidos durante um adicional de 30 min, em seguida resfriados em ta, em seguida concentrados em vácuo. A mistura foi diluída com EtOAc, lavada com salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 0-10%), para proporcionar o composto do título (111 mg, 81%). LCMS : Ta = 0,58 min, m/z = 317,2 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,43-7,30 (m, 5 H), 6,34 (br s, 1 H), 6,01 (br s, 1 H), 5,28-5,21 (m, 1 H), 5,20-5,12 (m, 3 H), 4,92 (dd, J = 14,3, 3,9 Hz, 1 H), 4,68 (dd, J = 14,2, 7,9 Hz, 1 H), 4,48-4,27 (m, 2 H), 2,53 (s, 3H).
[00431] Etapa 3: (3S, 4R )-3-amino-4-((5-metil-2 H -tetrazol-2- il)metil)azetidin-2-ona. Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapa 3 usando benzil ((2R,3S)-2-((5-metil-2H-tetrazol-2- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (111 mg, 0,351 mmol) e Pd em C (10%, 50 mg) em EtOAc:MeOH (5:1, 7,0 mL) durante 3 h. O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,14 min, m/z = 183,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00432] Etapa 4: terc-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato. Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapa 3 usando ácido (Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2- il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (130 mg, 0,302 mmol), DIPEA (158 μL, 0,906 mmol) e HATU (138 mg, 0,362 mmol) em DCM:DMF (2:1, 3,0 mL) a 0 °C seguido por uma solução de (3S,4R)-3-amino-4-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)azetidin-2-ona (55 mg, 0,30 mmol) em DCM:DMF (2:1, 3,0 mL). Depois de agitar em ta durante 1 h foi concentrada em vácuo, dissolvida em EtOAc, lavada com água, em seguida salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (Acetona-DCM), proporcionando o composto do título (179 mg, 99%) como um sólido. LCMS : Ta = 0,93 min, m/z = 594,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00433] Etapa 5: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1- sulfônico.
[00434] Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapa 4 usando terc-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- (((2R,3S)-2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (179 mg, 0,302 mmol) e SO3^DMF (462 mg, 3,02 mmol) em DMF (3,0 mL) durante 1 h em ta. A solução foi diluída com EtOAc, lavada com salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo para proporcionar o composto do título (quantitativo assumido). LCMS : Ta = 0,80 min, m/z = 674,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00435] Etapa 6: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)- 2-((5-metil-2H-tetrazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)- 2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico. Foi seguido o proce-dimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2- (2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-metil-2H- tetrazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (203 mg, 0,302 mmol), DCM (3,0 mL) e TFA (1,39 mL, 18,1 mmol) durante 2 h. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min), proporcionando o composto do título (37 mg, 24%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,35 min, m/z = 518,1 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,03 (s, 1 H), 5,37 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 5,08-4,97 (m, 1 H), 4,90-4,80 (m, 2 H), 2,35 (s, 3 H), 1,32 (s, 3 H), 1,31 (s, 3H).
Exemplo 8: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5- metil-1 H -tetrazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00436] Etapa 1: Benzil ((2R, 3S )-2-((5-metil-1 H -tetrazol-1- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapa 2 usando benzil ((2R,3S)-1-(2,4- dimetoxibenzil)-2-((5-metil-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)carbamato (221 mg, 0,474 mmol), K2S2O8 (179 mg, 0,663 mmol) e K2HPO4 (107 mg, 0,616 mmol) em ACN:água (2:1, 7,9 mL) a 90 °C durante 1,5 h. Mais K2S2O8 (38,4 mg, 0,142 mmol) e K2HPO4 (21,5 mg, 0,123 mmol) foram adicionados e aquecidos durante um adicional de 30 min, em seguida resfriados em ta, em seguida concentrados em vácuo. A mistura foi diluída com EtOAc, lavada com salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 0-10%), para proporcionar o composto do título (97 mg, 65%). LCMS : Ta = 1,00 min, m/z = 317,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00437] Etapa 2: (3S, 4R )-3-amino-4-((5-metil-1 H -tetrazol-1- il)metil)azetidin-2-ona.
[00438] Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapa 3 usando benzil ((2R,3S)-2-((5-metil-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oxoazetidin- 3-il)carbamato (97 mg, 0,31 mmol) e Pd em C (10%, 50 mg) em EtOH:MeOH (5:1, 3,0 mL) durante 3 h. O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,11 min, m/z = 183,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00439] Etapa 3: terc-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5-metil-1H-tetrazol-1-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato. Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapa 3 usando ácido (Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2- il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (130 mg, 0,302 mmol), DIPEA (158 μL, 0,906 mmol) e HATU (115 mg, 0,302 mmol) em DCM:DMF (2:1, 3,0 mL) a 0 °C seguido por uma solução de (3S,4R)-3-amino-4-((5-metil-1H-tetrazol-1-il)metil)azetidin-2-ona (55 mg, 0,30 mmol) em DCM:DMF (2:1, 3,0 mL). Depois de agitar em ta durante 1 h foi concentrado em vácuo, dissolvido em EtOAc, lavado com água, em seguida salmoura, secado em Na2SO4 e concentrado em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (Acetona-DCM), proporcionando o composto do título (133 mg, 74%) como um sólido. LCMS : Ta = 0,92 min, m/z = 594,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00440] Etapa 4: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-((5-metil-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oxoazetidina-1- sulfônico. Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapa 4 usando terc-butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- (((2R,3S)-2-((5-metil-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (133 mg, 0,224 mmol) e SO3^DMF (343 mg, 2,24 mmol) em DMF (2,24 mL) durante 1 h em ta. A solução foi diluída com EtOAc, lavada com salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo para proporcionar o composto do título (quantitativo assumido). LCMS : Ta = 0,85 min, m/z = 674,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00441] Etapa 5: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)- 2-((5-metil-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)- 2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0060
[00442] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-((5-metil-1H-tetrazol-1-il)metil)-4-oxoazetidina-1- sulfônico (151 mg, 0,224 mmol), DCM (2,24 mL) e TFA (1,04 mL, 13,45 mmol) durante 2 h. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min), proporcionando o composto do título (14,4 mg, 11%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,55 min, m/z = 518,1 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,04 (s, 1 H), 5,37 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 4,83-4,77 (m, 1 H), 4,76-4,54 (m, 2H assumido; obscurecido por solvente), 2,48 (s, 3 H), 1,35 (s, 3 H), 1,33 (s, 3H).
Exemplo 9:Áçido 2z(((Z)z(2z(((2R13Sl:2z((1H:1l2i4:triazolz1:il)metil}z 4-oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1 -(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00443] Etapa 1: benzil ((2R,3S):2:((1H-1,2,4:trlazol:1:il)metil):1: (2,4:dimetoxibenzil):4:oxoazetidin:3:il)carbamato. Um frasconete de micro-ondas de 20 mL foi carregado com o Intermediário A (250 mg, 0,522 mmol), 1,2,4-triazol (54 mg, 0,784 mmol), K2CO3 (215 mg, 1,56 mmol), NaI (94 mg, 0,63 mmol) e DMF (2 mL), em seguida aquecido a 70 °C com agitação. Depois de 4 h, mais 1,2,4-triazol (54 mg, 0,784 mmol), K2CO3 (215 mg, 1,56 mmol) e NaI (94 mg, 0,63 mmol) foram adicionados e o aquecimento foi continuado. Depois de 7 h de aquecimento total, foi resfriado em ta, diluído com DCM/salmoura, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com DCM, e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. Tolueno foi adicionado, e foi concentrado em vácuo (banho a 40 °C). O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (Acetona-Heptano, 50%) para proporcionar o composto do título (156 mg, 66%). LCMS : Ta = 0,77 min, m/z = 452,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00444] Etapa 2: Benzil ((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4:triazol:1-il)metil):4: oxoazetidin:3:il)carbamato. Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapa 2 usando benzil ((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (101 mg, 0,224 mmol), K2S2O8 (85 mg, 0,313 mmol) e K2HPO4 (50,7 mg, 0,291 mmol) em ACN:água (2:1, 61,5 mL) ao mesmo tempo que aquecendo durante 2 h a 90 °C. Mais K2S2O8 (18,1 mg, 0,067 mmol) e K2HPO4 (10,1 mg, 0,058 mmol) foram adicionados e aquecidos durante outras 1,5 h. Mais K2S2O8 (18,1 mg, 0,067 mmol) e K2HPO4 (10,1 mg, 0,058 mmol) foram adicionados e aquecidos durante outra hora. Foram diluídos com ACN e concentrados em vácuo, removendo a maior parte de ACN. A mistura foi diluída com água/DCM, em seguida adicionado EtOAc, e as camadas separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (5x), e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 10%) para proporcionar o composto do título (38 mg, 56%). LCMS : Ta = 0,50 min, m/z = 302,2 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (500 MHz, ACN-d3) δ 8,17 (s, 1 H), 7,92 (s, 1 H), 7,49-7,31 (m, 4 H), 6,82-6,74 (m, 1 H), 6,67 (br s, 1 H), 5,18-5,01 (m, 3 H), 4,49-4,42 (m, 1 H), 4,37-4,30 (m, 1 H), 4,21 (q, J = 5,4 Hz, 1H).
[00445] Etapa 3: (3S,4R)-4-((1 H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-aminoa- zetidin-2-ona. A uma solução de benzil ((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol- 1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (38 mg, 0,126 mmol) em MeOH (5 mL) foi adicionado negro de Pd (6,7 mg, 0,063 mmol) seguido por ácido fórmico (339 μL, 8,83 mmol). Depois de 1 h de agitação, a mistura foi filtrada em celite, lavando com MeOH, e o filtrado foi concentrado em vácuo. A solução foi liofilizada, e o material bruto foi usado diretamente na etapa subsequente. LCMS : Ta = 0,14 min, m/z = 168,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00446] Etapa 4: terc-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol- 1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato. A uma pasta fluida de ácido (Z)-2-(((1-(terc-butóxi)- 2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (81 mg, 0,19 mmol) em DCM (800 μL) a 0 °C foi adicionado DIPEA (88 μL, 0,504 mmol) seguido por HATU (72 mg, 0,190 mmol). Algumas gotas de DMF foram adicionadas para homogeneizar a mistura. À solução resultante foi adicionado uma solução de (3S,4R)-4-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3- aminoazetidin-2-ona (21 mg, 0,126 mmol) em DCM (1 mL). Depois de 1,5 h de agitação, foi diluída com água/DCM, e as camadas separadas. A camada aquosa foi extraída com DCM, e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (Acetona-DCM) para proporcionar o composto do título (47 mg, 65%). LCMS : Ta = 0,88 min, m/z = 579,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00447] Etapa 5: Ácido (2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3- ((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidina- 1-sulfônico.
[00448] terc-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)- 4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (44 mg, 0,076 mmol) em DMF (760 μL) foi tratado com SO3^DMF (116 mg, 0,760 mmol). Depois de 1 h de agitação, a solução foi diluída com EtOAc/salmoura, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x), e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo para proporcionar o composto do título (quantitativo assumido) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,81 min, m/z = 659,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00449] Etapa 6: Ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0061
[00450] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2- (2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidina-1- sulfônico (50,1 mg, 0,076 mmol), DCM (760 μL) e TFA (351 μl, 4,56 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min), proporcionando o composto do título (14,8 mg, 34%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,31 min, m/z = 503,1 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,39 (d, J = 8,83 Hz, 1 H), 8,52 (s, 1 H), 8,02 (s, 1 H), 6,74 (s, 1 H), 5,28 (dd, J = 8,8, 5,4 Hz, 1 H), 4,74-4,64 (m, 1 H), 4,58 (d, J = 6,9 Hz, 1 H), 4,32 (d, J = 5,7 Hz, 1 H), 1,37 (s, 3H) 1,41 (s, 3H).
Exemplo 10: Ácido 2-((( Z-(2-(((2 R ,3 S )-2-((3-(aminometil)-1 H -1,2,4- triazol-1 -il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1 -(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00451] Etapa 1: ((2 S ,3 S )-3-(((benzilóxi)carbonil)amino)-1-(2,4- dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-2-il)metil metanossulfonato (3,10 g, 6,48 mmol), terc-butil ((1H-1,2,4-triazol-3-il)metil)carbamato (1,926 g, 9,72 mmol), K2CO3 (1,35 g, 9,72 mmol) e NaI (1,165 g, 7,78 mmol) foram suspensos em DMF (20 mL) e aquecidos a 70 °C com agitação. Depois de 3 h, mais terc-butil ((1H-1,2,4-triazol-3-il)metil)carbamato (1,926 g, 9,72 mmol), K2CO3 (1,35 g, 9,72 mmol) e NaI (777 mg, 8,10 mmol) foram adicionados e foram aquecidos um adicional de 4 h, e então foi diluídos com EtOAc/água, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (3x), secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (Acetona-Heptano, 0-70%) para proporcionar o isômero 3-substituído (1,16 g, 31%) juntamente com o isômero 5-substituído (375 mg, 10%). A-LCMS : Ta = 0,87 min, m/z = 581,2 (M+1) Método 2 m_acídico; B-LCMS : Ta = 0,94 min, m/z = 581,2 (M+1) Método 2 m_acídico; B-1H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 7,86 (s, 1 H), 7,44-7,31 (m, 4 H), 7,29 (s, 3 H), 6,90 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 6,49-6,37 (m, 2 H), 5,25-5,04 (m, 3 H), 4,54-4,43 (m, 2 H), 4,43-4,22 (m, 3 H), 4,13 (d, J = 5,4 Hz, 1 H), 3,90-3,71 (m, 7 H), 1,36-1,51 (m, 9H).
[00452] Etapa 2: Preparado de uma maneira análoga ao Exemplo 4, etapa 2 usando o isômero 3-substituído da Etapa 1 (1,16 g, 2,00 mmol), K2S2O8 (756 mg, 2,80 mmol) e K2HPO4 (452 mg, 2,60 mmol) em ACN:água (2:1, 33,3 mL) ao mesmo tempo que aquecendo durante 1,5 h a 90 °C. Mais K2S2O8 (162 mg, 0,599 mmol) e K2HPO4 (90 mg, 0,52 mmol) foram adicionados e aquecidos durante outras 3,5 h, e então foi concentrados em vácuo, removendo a maior parte de ACN. A mistura foi diluída com água/EtOAc, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (5x), e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (Acetona- DCM, 0-100%) para proporcionar o composto do título (416 mg, 48%). LCMS : Ta = 0,71 min, m/z = 431,3 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (500 MHz, ACN-d3) δ 8,08 (s, 1 H), 7,49-7,25 (m, 5 H), 6,82-6,60 (m, 2 H), 5,81-5,62 (m, 1 H), 5,21-5,03 (m, 3 H), 4,48-4,07 (m, 6 H), 1,46-1,33 (m, 9H).
[00453] Etapa 3: terc-butil ((1-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2- il)metil)-1H-1,2,4-triazol-3-il)metil)carbamato. Preparado de acordo com o procedimento descrito em Malmstromet al. Bioorg. Med. Chem. Lett, 2012, 22, 5293. Uma solução do produto de Etapa 2 (416 mg, 0,966 mmol) em EtOAc:MeOH (5:1, 32,2 mL) foi evacuada e carregada outra vez com argônio (2x) seguido por adição de Pd em C (10%, 103 mg). O sistema foi evacuado e carregado outra vez com H2 (3x). Depois de 21 h de agitação, MeOH (282 μL) foi adicionado. Depois de um adicional de 4 h de agitação, a mistura foi filtrada em celite, lavando com MeOH, concentrada em vácuo, apreendida em tolueno e reconcentrada (3x). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,33 min, m/z = 297,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00454] Etapa 4: terc-Butil 2-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((3-((( terc - butoxicarbonil)amino)metil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato.
[00455] A uma pasta fluida de ácido (Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acético (47 mg, 0,109 mmol) em DCM:DMF (12:1, 6,5 mL) a 0 °C foi adicionado DIPEA (505 μL, 2,89 mmol) seguido por HATU (440 mg, 1,16 mmol). À solução resultante foi adicionado uma solução de terc- butil ((1-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,4-triazol-3- il)metil)carbamato (286 mg, 0,964 mmol) em DCM:DMF (14:1, 7,5 mL). Depois de 1 h de agitação, foi diluída com água/EtOAc, e as camadas separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc, e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (3x), secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (Acetona-DCM, 70%) para proporcionar o composto do título (428 mg, 63%). LCMS : Ta = 0,99 min, m/z = 708,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00456] Etapa 5: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-((3-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)-1H-1,2,4- triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. terc-Butil 2-(((Z)-(2- (((2R,3S)-2-((3-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)-1H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato (200 mg, 0,283 mmol) em DMF (2,0 mL) foi tratado com SO3^DMF (433 mg, 2,83 mmol). Depois de 20 min de agitação, a solução foi diluída com EtOAc/salmoura, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x), e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo para proporcionar o composto do título (quantitativo assumido) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,91 min, m/z = 788,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00457] Etapa 6: Ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(aminometil)-1 H- 1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0062
[00458] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((3-(((terc- butoxicarbonil)amino)metil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidina- 1-sulfônico (223 mg, 0,283 mmol), DCM (2,89 mL) e TFA (1,31 mL, 16,98 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min), proporcionando o composto do título (99 mg, 65%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,31 min, m/z = 532,2 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,45 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 8,53 (s, 1 H), 8,39 (br s, 3 H), 7,32 (s, 2 H), 6,74 (s, 1 H), 5,23 (dd, J = 8,5, 5,7 Hz, 1 H), 4,76-4,65 (m, 1 H), 4,62-4,55 (m, 1 H), 4,32-4,27 (m, 1 H), 4,16-4,08 (m, 2 H), 1,36 (s, 3H) 1,43 (s, 3H). Exemplo 11: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((3- (guanidinometil)-1 H -1,2,4-triazol-1 -il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0063
[00459] A uma solução de ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3- (aminometil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoico (25 mg, 0,047 mmol) e cloridrato de pirazol-1- carboxamidina (10,9 mg, 0,099 mmol) em DMF (470 μL) foi adicionado DIPEA (33 μL, 0,188 mmol). Depois de agitar em ta durante 12 h, a solução foi concentrada em vácuo. Tolueno foi adicionado e foi reconcentrado (3x). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN- água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min), proporcionando o composto do título (16 mg, 52%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,31 min, m/z = 574,3 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,45 (br s, 1 H), 8,47 (s, 1 H), 7,86 (br s, 1 H), 7,31 (br s, 3 H), 6,74 (br s, 1 H), 6,55 (s, 1 H), 5,22 (br s, 1 H), 4,69-4,59 (m, 1 H), 4,60-4,50 (m, 1 H), 4,45-4,36 (m, 2 H), 4,34-4,26 (m, 1 H), 1,35 (s, 3H) 1,41 (s, 3H).
Exemplo 12: Ácido 2-((( Z)-(2-((( 2R, 3S )-2-((5-(aminometil)-1 H -1,2,4- triazol-1 -il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1 -(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00460] Etapa 1: Preparado de uma maneira análoga ao Exemplo 4, etapa 2 usando o isômero 5-substituído da Etapa 1 no Exemplo 10 (361 mg, 0,622 mmol), K2S2O8 (235 mg, 0,870 mmol) e K2HPO4 (115 mg, 0,808 mmol) em ACN:água (2:1, 10,4 mL) ao mesmo tempo que aquecendo durante 1,5 h a 90 °C. Mais K2S2O8 (50 mg, 0,187 mmol) e K2HPO4 (23 mg, 0,162 mmol) foram adicionados e aquecidos durante outras 3,5 h, e então foram concentrados em vácuo, removendo a maior parte de ACN. A mistura foi diluída com água/EtOAc, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (5x), e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (Acetona-DCM, 0-100%) para proporcionar o composto do título (155 mg, 58%). LCMS : Ta = 0,71 min, m/z = 431,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00461] Etapa 2: terc-Butil ((1 -(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2- il)metil)-1H-1,2,4-triazol-5-il)metil)carbamato. Preparado de acordo com Exemplo 7, etapa 3. Uma solução do produto de Etapa 1 (134 mg, 0,311 mmol) em EtOAc:MeOH (5:1, 10,4 mL) foi evacuada e carregada outra vez com argônio (2x) seguido por adição de Pd em C (10%, 33 mg). O sistema foi evacuado e carregado outra vez com H2 (3x). Depois de 21 h de agitação, MeOH (282 μL) foi adicionado. Depois de um adicional de 4 h de agitação, a mistura foi filtrada em celite, lavando com MeOH, concentrada em vácuo, apreendida em tolueno e reconcentrada (3x). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,38 min, m/z = 297,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00462] Etapa 3: terc-Butil 2-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((5-((( terc - butoxicarbonil)amino)metil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato.
[00463] A uma pasta fluida de ácido (Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acético (160 mg, 0,373 mmol) em DCM:DMF (30:1, 3,1 mL) a 0 °C foi adicionado DIPEA (163 μL, 0,933 mmol) seguido por HATU (142 mg, 0,373 mmol). À solução resultante foi adicionado uma solução de terc- butil ((1-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,4-triazol-5- il)metil)carbamato (92 mg, 0,311 mmol) em DCM:DMF (30:1, 3,1 mL). Depois de 1 h de agitação, foi concentrada em vácuo e apreendida em EtOAc/salmoura. As camadas foram separadas, e a camada aquosa foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (3x), secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (Acetona-DCM, 70%) para proporcionar o composto do título (128 mg, 58%). LCMS : Ta = 0,97 min, m/z = 708,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00464] Etapa 4: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-((5-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)-1H-1,2,4- triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. terc-Butil 2-(((Z)-(2- (((2R,3S)-2-((5-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)-1H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato (128 mg, 0,181 mmol) em DMF (1,3 mL) foi tratado com SO3^DMF (277 mg, 1,81 mmol). Depois de 20 min de agitação, a solução foi diluída com EtOAc/salmoura, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x), e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo para proporcionar o composto do título (quantitativo assumido) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,90 min, m/z = 788,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00465] Etapa 5: Ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(aminometil)-1 H- 1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0064
[00466] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-(((terc- butoxicarbonil)amino)metil)-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidina- 1-sulfônico (143 mg, 0,181 mmol), DCM (1,81 mL) e TFA (837 μl, 10,9 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min), proporcionando o composto do título (60 mg, 62%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,28 min, m/z = 532,2 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,23 (d, J = 9,1 Hz, 1 H), 8,40 (br s, 3 H), 8,06 (s, 1 H), 7,59-7,27 (m, 2 H), 6,84 (s, 1 H), 5,37 (dd, J = 9,0, 5,5 Hz, 1 H), 4,614,51 (m, 1 H), 4,49-4,34 (m, 3 H), 4,25 (dd, J = 15,3, 5,8 Hz, 1 H), 1,37 (s, 6H). Exemplo 13: Ácido 2-(((Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5- (guanidinometil)-l H -1,2,4-triazol-1 -il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0065
[00467] A uma solução ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(aminometil)- 1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico (25 mg, 0,047 mmol) e cloridrato de pirazol-1-carboxamidina (10,9 mg, 0,099 mmol) em DMF (470 μL) foi adicionado DIPEA (33 μL, 0,188 mmol). Depois de agitar em ta durante 12 h, a solução foi concentrada em vácuo. Tolueno foi adicionado e foi reconcentrado (3x). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min), proporcionando o composto do título (13 mg, 42%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,29 min, m/z = 574,2 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 7,96-7,78 (m, 1 H), 7,41-6,96 (m, 5 H), 6,80-6,71 (m, 1 H), 6,55 (s, 1 H), 5,425,32 (m, 1 H), 4,75-4,63 (m, 1 H), 4,62-4,42 (m, 1 H), 4,39-4,28 (m, 1 H), 1,38 (s, 3H) 1,34 (s, 3H).
Exemplo 14: Ácido 2-((( Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3 S ,4 R )- 2-oxo-4-((2-oxopiperidin-1-il)metil)-1-sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00468] Etapa 1: Benzil ((3S,4R)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-oxo-4- ((2-oxopiridin-1 (2H)-il)metil)azetidin-3-il)carbamato. ((2S,3S)-3- (((benzilóxi)carbonil)amino)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-2- il)metil metanossulfonato (860 mg, 1,80 mmol), piridin-2 (1H)-ona (855 mg, 8,99 mmol), K2CO3 (1,74 g, 12,6 mmol) e NaI (746 mg, 4,49 mmol) foram suspensos em DMF (6,9 mL) e aquecidos a 80 °C com agitação. Depois de 4 h, foram resfriados em ta, diluídos com EtOAc e lavados com salmoura. A camada orgânica foi secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (Acetona-DCM) para proporcionar o composto do título (304 mg, 35%). LCMS : Ta = 0,79 min, m/z = 478,2 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 7,39-7,28 (m, 6 H), 7,07 (d, J = 5,9 Hz, 1 H), 6,93-6,85 (m, 1 H), 6,55 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 6,40 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 6,35 (dd, J = 8,2, 2,4 Hz, 1 H), 6,10-6,02 (m, 1 H), 5,87 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 5,10 (s, 2 H), 4,93 (br s, 1 H), 4,63 (d, J = 14,5 Hz, 1 H), 4,27-4,10 (m, 1 H), 3,97 (d, J = 9,0 Hz, 2 H), 3,88 (d, J = 14,5 Hz, 1 H), 3,78 (s, 3 H), 3,76 (s, 3H).
[00469] Etapa 2: Benzil ((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxopiridin-1 (2H)- il)metil)azetidin-3-il)carbamato. Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapa 2 usando Benzil ((3S,4R)-1-(2,4-dimetoxibenzil)- 2-oxo-4-((2-oxopiridin-1 (2H)-il)metil)azetidin-3-il)carbamato (361 mg, 0,622 mmol), K2S2O8 (225 mg, 0,833 mmol) e K2HPO4 (135 mg, 0,773 mmol) em ACN:água (2:1, 9,9 mL) ao mesmo tempo que aquecendo durante 1,5 h a 90 °C. Mais K2S2O8 (45 mg, 0,17 mmol) e K2HPO4 (26,9 mg, 0,155 mmol) foram adicionados e aquecidos durante outras 30 min, e então foram concentrados, redissolvidos em EtOAc, lavados com salmoura, secados em Na2SO4 e concentrados em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 0-10%) para proporcionar o composto do título (157 mg, 81%). LCMS : Ta = 0,56 min, m/z = 328,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00470] Etapa 3, Composto 1:1 -(((2 R ,3 S )-3-amino-4-oxoazetidin- 2-il)metil)piridin-2 (1H)-ona.
[00471] Etapa 3, Composto 2:1 -(((2 R ,3 S )-3-amino-4-oxoazetidin- 2-il)metil)piperidin-2-ona. Preparado de acordo com exemplo 7, etapa 3. Uma solução de benzil ((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxopiridin-1 (2H)- il)metil)azetidin-3-il)carbamato (157 mg, 0,480 mmol) em EtOH:MeOH (5:1, 4,8 mL) foi evacuado e carregado outra vez com argônio (2x) seguido por adição de Pd em C (10%, 33 mg). O sistema foi evacuado e carregado outra vez com H2 (3x). Depois de 3 h de agitação, a mistura foi filtrada em celite, lavando com MeOH e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte.
[00472] Etapa 4, Composto 1: terc-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((2- oxopiridin-1 (2H)-il)metil)azetidin-3-il)amino)etilideno)amino)óxi)- 2-metilpropanoato.
[00473] Etapa 4, Composto 2: terc-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((2- oxopiperidin-1-il)metil)azetidin-3-il)amino)etilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato.
[00474] A uma pasta fluida de ácido (Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acético (60 mg, 0,14 mmol) em DCM:DMF (1:1, 1,4 mL) a 0 °C foi adicionado DIPEA (73 μL, 0,42 mmol) seguido por HATU (63,7 mg, 0,168 mmol). À solução resultante, depois de 20 min, foi adicionado uma solução de mistura de 1-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2- il)metil)piridin-2 (1H)-ona e 1-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2- il)metil)piperidin-2-ona (90 mg, ~0,46 mmol) em DCM (200 μL). Depois de 1 h de agitação, foi concentrada em vácuo e apreendida em EtOAc, lavada com água, salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (Acetona-DCM) para proporcionar os composto do título 1 (54 mg) e composto do título 2 (30 mg). 1-LCMS : Ta = 0,88 min, m/z = 605,2 (M+1) Método 2 m_acídico; 2-LCMS : Ta = 0,90 min, m/z = 609,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00475] Etapa 5: Ácido (3 S ,4 R )-3-(( Z)-2-(((1-( terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)acetamido)-2-oxo-4-((2-oxopiperidin-1-il)metil)aze- tidina-1-sulfônico. terc-butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)a- mino)tiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxopiperidin-1- il)metil)azetidin-3-il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (30 mg, 0,049 mmol) em DMF (493 μL) foi tratado com SOa^DMF (151 mg, 0,986 mmol). Depois de 1 h de agitação, a solução foi diluída com EtOAc, lavada com salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo para proporcionar o composto do título (quantitativo assumido) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,78 min, m/z = 689,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00476] Etapa 6: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2- (((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxopiperidin-1-il)metil)-1-sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0066
[00477] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)- 2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)acetamido)-2-oxo-4-((2-oxopiperidin-1-il)metil)azetidina- 1-sulfônico (34 mg, 0,049 mmol), DCM (494 μL) e TFA (228 μl, 2,96 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (5,2 mg, 17%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,63 min, m/z = 533,1 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,02 (s, 1 H), 5,27 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 4,59-4,48 (m, 1 H), 3,61 (d, J = 4,7 Hz, 2 H), 3,48-3,37 (m, 1 H), 3,32 (d, J = 5,9 Hz, 1 H), 2,34-2,13 (m, 2 H), 1,78-1,57 (m, 4 H), 1,39 (br s, 6H). Exemplo 15: Ácido 2-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3 S ,4 R )- 2-oxo-4-((2-oxopiridin-1(2 H )-il)metil)-1-sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0067
[00478] Etapa 1: Ácido (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-oxo-4-((2-oxopiridin-1 (2H)-il)metil)azetidina-1- sulfônico. terc-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxopiridin-1 (2H)-il)metil)azetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (54 mg, 0,089 mmol) em DMF (893 μL) foi tratado com SOa^DMF (205 mg, 1,34 mmol). Depois de 1 h de agitação, a solução foi diluída com EtOAc, lavada com salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo para proporcionar o composto do título (quantitativo assumido) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,76 min, m/z = 685,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00479] Etapa 2: Ácido 2-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2- (((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxopiridin-1 (2H)-il)metil)-1-sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico. Foi seguido o proce-dimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-oxo-4-((2-oxopiridin-1 (2 H)-il)metil)azetidina-1-sulfônico (61 mg, 0,089 mmol), DCM (891 μL) e TFA (412 μl, 5,35 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (9,6 mg, 19%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,57 min, m/z = 529,1 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,59 (d, J = 6,7 Hz, 1 H), 7,56-7,48 (m, 1 H), 7,05 (s, 1 H), 6,50 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 6,39 (t, J = 6,7 Hz, 1 H), 5,30 (d, J = 5,9 Hz, 1 H), 4,47 (dd, J = 14,5, 2,7 Hz, 1 H), 4,07 (dd, J = 14,5, 8,6 Hz, 1 H), 1,37 (s, 3 H), 1,36 (s, 3H).
Exemplo 16: Ácido 2-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((1 H -1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1 -(5-amino-1,2,4- tiadiazol-3-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00480] Etapa 1: (3 S ,4 R )-4-((1 H -1,2,4-triazol-1-il)metil)-3- aminoazetidin-2-ona. Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapa 3 usando benzil ((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (250 mg, 0,830 mmol) e Pd em C (10%, 125 mg) em EtOH:MeOH (4:1, 8,3 mL) durante 3 h. O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,13 min, m/z = 168,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00481] Etapa 2: terc-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol- 1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(5-((terc- butoxicarbonil)amino)-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato. A uma pasta fluida de ácido (Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(5- ((terc-butoxicarbonil)amino)-1,2,4-tiadiazol-3-il)acético (129 mg, 0,299 mmol) em DCM:DMF (1:1, 3 mL) a 0 °C foi adicionado DIPEA (157 μL, 0,897 mmol) seguido por HATU (136 mg, 0,359 mmol). À solução resultante, depois de 20 min, foi adicionado uma solução de (3S,4R)-4- ((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-aminoazetidin-2-ona (50 mg, 0,299 mmol) em DCM. Depois de 2 h de agitação, foi concentrada em vácuo e apreendida em EtOAc, lavada com água, salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (Acetona-DCM) para proporcionar o composto do título (100 mg, 58%). LCMS : Ta = 0,82 min, m/z = 580,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00482] Etapa 3: Ácido (2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3- ((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(5- ((terc-butoxicarbonil)amino)-1,2,4-tiadiazol-3-il)acetamido)-4- oxoazetidina-1-sulfônico. terc-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4- triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(5-((terc- butoxicarbonil)amino)-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato (100 mg, 0,173 mmol) em DMF (1,7 mL) foi tratado com SO3^DMF (396 mg, 2,59 mmol). Depois de 1 h de agitação, a solução foi diluída com EtOAc, lavada com salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo para proporcionar o composto do título (quantitativo assumido) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,74 min, m/z = 660,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00483] Etapa 4: Ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(5-amino-1,2,4- tiadiazol-3-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0068
[00484] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2- (5-((terc-butoxicarbonil)amino)-1,2,4-tiadiazol-3-il)acetamido)-4- oxoazetidina-1-sulfônico (114 mg, 0,173 mmol), DCM (1,7 mL) e TFA (800 μl, 10,4 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN- água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (46 mg, 46%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,42 min, m/z = 504,0 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,42 (d, J = 8,6Hz, 1 H), 8,65 (s, 1H),8,21 (br s, 2H),8,10 (s, 1 H), 5,22 (dd, J = 8,6, 5,5 Hz, 1 H), 4,67-4,58 (m, 1 H), 4,56-4,47 (m, 1 H), 4,28 (q, J = 5,5 Hz, 1 H), 1,39 (s, 3 H), 1,34 (s, 3H).
Exemplo 17: Ácido 2-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((1 H -1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)acético.
[00485] Etapa 1: terc-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol- 1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)acetato. A uma solução de ácido (Z)-2-((2-(terc-butóxi)-2-oxoetóxi)imino)-2-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (108 mg, 0,269 mmol) em DCM (2,7 mL) a 0 °C foi adicionado DIPEA (141 μL, 0,808 mmol) seguido por HATU (113 mg, 0,296 mmol). À solução resultante, depois de 20 min, foi adicionado uma solução de (3S,4R)-4-((1H-1,2,4-triazol- 1-il)metil)-3-aminoazetidin-2-ona (50 mg, 0,299 mmol) em DCM. Depois de 1 h de agitação, foi diluída com EtOAc, lavada com água, salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (Acetona- DCM) para proporcionar o composto do título (106 mg, 72%). LCMS : Ta = 0,78 min, m/z = 551,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00486] Etapa 2: Ácido (2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3- ((Z)-2-((2-(terc-butóxi)-2-oxoetóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidina-1- sulfônico. terc-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)- 4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)acetato (100 mg, 0,182 mmol) em DMF (1,8 mL) foi tratado com SO3^DMF (278 mg, 1,82 mmol). Depois de 1 h de agitação, a solução foi diluída com EtOAc, lavada com água gelada, salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo, proporcionando o composto do título (quantitativo assumido) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,71 min, m/z = 631,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00487] Etapa 3: Ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)acético.
Figure img0069
[00488] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3- ((Z)-2-((2-(terc-butóxi)-2-oxoetóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (97 mg, 0,154 mmol), DCM (1,54 mL) e TFA (711 μl, 9,23 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (22,7 mg, 22%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,28 min, m/z = 475,0 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,50 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 8,56 (s, 1 H), 8,07 (s, 1 H), 6,80 (s, 1 H), 5,25 (dd, J = 9,0, 5,9 Hz, 1 H), 4,69-4,49 (m, 4 H), 4,36 (dt, J = 7,4, 4,9 Hz, 1H).
Exemplo 18: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((1 H -1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
[00489] Etapa 1: Benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol- 1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma solução de ácido (Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (preparado de acordo com Yamawaki et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2007, 15, 6716-6732) (150 mg, 0,279 mmol) em DCM:DMF (1:1, 2,8 mL) a 0 °C foi adicionado DIPEA (146 μL, 0,837 mmol) seguido por HATU (127 mg, 0,335 mmol). À solução resultante, depois de 20 min, foi adicionado uma solução de (3S,4R)-4-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-aminoazetidin-2- ona (51 mg, 0,31 mmol) em DCM. Depois de 1 h de agitação, foi diluída com EtOAc, lavada com água, salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (Acetona-DCM) para proporcionar o composto do título (147 mg, 77%). LCMS : Ta = 0,98 min, m/z = 687,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00490] Etapa 2: Ácido (2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3- ((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidina-1- sulfônico. Benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)- 4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (147 mg, 0,214 mmol) em DMF (2,14 mL) foi tratado com SOa^DMF (328 mg, 2,14 mmol). Depois de 1 h de agitação, a solução foi diluída com EtOAc, lavada com água gelada, salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo, proporcionando o composto do título (quantitativo assumido) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,89 min, m/z = 767,0 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00491] Etapa 3: Ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0070
[00492] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidina-1- sulfônico (164 mg, 0,214 mmol), DCM (2,14 mL) e TFA (989 μl, 12,8 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (50 mg, 41%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,29 min, m/z = 501,1 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,31 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 8,59 (s, 1 H), 8,09 (s, 1 H), 6,83 (s, 1 H), 5,26 (dd, J = 9,0, 5,5 Hz, 1 H), 4,67 (dd, J = 14,5, 4,3 Hz, 1 H), 4,49-4,39 (m, 1 H), 4,33 (ddd, J = 7,4, 5,5, 4,3 Hz, 1 H), 1,34-1,27 (m, 4H).
Exemplo 19: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-(aminometil)-2 H -1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotia- zol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
[00493] Etapa 1: terc-Butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2- il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)carbamato. Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapa 3 usando o Intermediário T(1,20 g, 2,79 mmol) e Pd em C (10%, 830 mg) em EtOAc:MeOH (5:1, 24 mL) durante 19 h. O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,41 min, m/z = 297,0 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00494] Etapa 2: Benzidril 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((( terc - butoxicarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma solução de ácido (Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2- (2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (preparado de acordo com Yamawaki et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2007, 15, 6716-6732) (1,50 g, 2,79 mmol) em DCM (15 mL) a 0 °C foram adicionados DIPEA (1,22 mL, 6,98 mmol) e HATU (1,11 g, 2,93 mmol). Depois de aquecer em ta, uma solução de terc-butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin- 2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)carbamato (827 mg, 2,79 mmol) em DCM:DMF (1,7:1, 12,7 mL). Depois de 1 h de agitação, foi diluída com DCM e lavada com água, salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0-90%), para proporcionar o composto do título (1,92 g, 84%) como um óleo púrpura. LCMS : Ta = 1,08 min, m/z = 816,5 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00495] Etapa 3: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)car- bonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. Benzidril 1-(((Z)-(2- (((2R,3S)-2-((4-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (1,92 g, 2,35 mmol) em DMF (20 mL) foi tratado com SO3^DMF (3,60 g, 23,5 mmol). Depois de 30 min de agitação, a solução foi diluída com EtOAc/água, e as camadas foram separadas. A aquosa foi extraída com EtOAc, e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo, proporcionando o composto do título (1,98 g, 94%) como uma espuma púrpura. LCMS : Ta = 0,99 min, m/z = 896,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00496] Etapa 4: Ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H- 1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)- ciclopropanocarboxílico.
Figure img0071
[00497] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1- ((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((terc- butoxicarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina- 1-sulfônico (1,98 g, 2,21 mmol), DCM (18,4 mL) e TFA (10,2 mL, 133 mmol). Metade do resíduo bruto foi purificada por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (300 mg, aproximadamente 50%) como um pó esbranquiçado. LCMS : Ta = 0,29 min, m/z = 530,1 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,69 (s, 1 H), 7,04 (br s, 1 H), 5,43 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 4,93-4,78 (m, 2 H), 4,74-4,67 (m, 1 H), 4,22-4,12 (m, 2 H), 1,36-1,20 (m, 2 H), 1,20-1,00 (m, 2H). Exemplo 20: Ácido 1-(((Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4- (guanidinometil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-ciclopropanocarboxílico.
Figure img0072
[00498] A uma solução de ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4- (aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)- ciclopropanocarboxílico (582 mg, 1,10 mmol) em DMF (12 mL) a 0 °C foi adicionado cloridrato de pirazol-1-carboxamidina (322 mg, 2,20 mmol) e DIPEA (1,54 mL, 8,80 mmol). Depois de 16 h de agitação em ta, a solução foi diluída com tolueno (60 mL), fazendo com que um óleo denso se separe. A camada superior foi decantada, e o óleo restante foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (240 mg, 37%) como um pó esbranquiçado. LCMS : Ta = 0,31 min, m/z = 572,2 (M+H) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,59 (s, 1 H), 6,99 (br s, 1 H), 5,43 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 4,91-4,75 (m, 2H assumido; obscurecido por pico residual de solvente), 4,70 (dd, J = 8,2, 6,3 Hz, 1 H), 4,41-4,34 (m, 2 H), 1,20 (br s, 2 H), 1,05 (br s, 2H). E-isômero foi da mesma forma obtido. LCMS : Ta = 0,33 min, m/z = 572,2 (M+H) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,58 (s, 1 H), 7,46 (br. s., 1 H), 5,45 (br. s., 1 H), 4,84 (s, 3 H), 4,37 (s, 2 H), 1,33-1,08 (m, 4H)..
Exemplo 21: Ácido 2-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3 S ,4 R )- 2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3-il)metil)-1-sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)acético.
[00499] Etapa 1: terc-Butil 2-((( Z)-(1-(2-(( terc - butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((2- oxooxazolidin-3-il)metil)azetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)acetato. A uma solução de ácido (Z)- 2-((2-(terc-butóxi)-2-oxoetóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (100 mg, 0,249 mmol), Intermediário D(51 mg, 0,27 mmol) e HATU (123 mg, 0,324 mmol) em DMF (1,25 mL) foi adicionado DIPEA (131 μL, 0,747 mmol). Depois de 4 h de agitação, foi diluída com EtOAc, lavada com água, salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (0-10% MeOH-DCM) para proporcionar o composto do título (118 mg, 83%). LCMS : Ta = 0,81 min, m/z = 569,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00500] Etapa 2: Ácido (3 S ,4 R )-3-(( Z)-2-((2-( terc-butóxi)-2- oxoetóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3-il)metil)azetidina-1- sulfônico. terc-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3-il)metil)azetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)acetato (118 mg, 0,208 mmol) em DMF (2,14 mL) foi tratado com SOa^DMF (159 mg, 1,04 mmol). Depois de 30 min de agitação, a solução foi diluída com EtOAc, lavada com salmoura gelada, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo, proporcionando o composto do título (quantitativo assumido) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,72 min, m/z = 649,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00501] Etapa 3: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2- (((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3-il)metil)-1-sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)acético.
Figure img0073
[00502] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (3S,4R)-3-((Z)-2-((2-(terc-butóxi)-2- oxoetóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)- 2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3-il)metil)azetidina-1-sulfônico (135 mg, 0,208 mmol), DCM (1,04 mL) e TFA (801 μl, 10,4 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min), proporcionando o composto do título (25 mg, 23%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,25 min, m/z = 493,0 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,41 (d, J = 9,1 Hz, 1H) 6,86 (s, 1H) 5,24 (dd, J = 9,0, 5,8 Hz, 1H) 4,62 (s, 2H) 4,20-4,11 (m, 3H) 3,72-3,63 (m, 2H) 3,40-3,31 (m, 2H assumido; obscurecido por água).
Exemplo 22: Ácido 1-((( Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3 S ,4 R )- 2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3-il)metil)-1-sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
[00503] Etapa 1: Benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3- il)metil)azetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma solução de ácido (Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2- (2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (854 mg, 1,59 mmol), Intermediário D(324 mg, 1,75 mmol) e HATU (785 mg, 2,07 mmol) em DMF (7,9 mL) foi adicionado DIPEA (832 μL, 4,77 mmol). Depois de 1 h de agitação, foi vertida em água e extraída com EtOAc. Salmoura foi adicionada à camada aquosa, e também foi extraída com EtOAc (3x). As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (0-10% MeOH-DCM) para proporcionar o composto do título (1,09 g, 97%) como uma espuma bege. LCMS : Ta = 0,97 min, m/z = 705,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00504] Etapa 2: Ácido (3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbo- nil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3-il)metil)azetidina-1- sulfônico. Benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3-il)metil)azetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (1,00 g, 1,42 mmol) em DMF (7,0 mL) a 0 °C foi tratado com SO3^DMF (448 mg, 2,84 mmol). Depois de 2 h de agitação em ta, a solução foi vertida em salmoura gelada e extraída com EtOAc (3x). As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentrada em vácuo, proporcionando o composto do título (quantitativo assumido) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,90 min, m/z = 785,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00505] Etapa 3: Ácido 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2- (((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3-il)metil)-1-sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0074
[00506] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbo- nil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3-il)metil)azetidina-1-sulfônico (1,10 g, 1,40 mmol), DCM (7,0 mL) e TFA (5,39 mL, 70,0 mmol). TFA adicional (3,24 mL, 42,0 mmol) foi adicionado depois de 1 h em ta, e a solução foi diluída com DCM e concentrada em vácuo depois de um adicional de 30 min. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (178 mg, 23%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,30 min, m/z = 518,9 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 9,27 (d, J = 9,0 Hz, 1H) 6,92 (s, 1H) 5,23 (dd, J = 9,1, 5,7 Hz, 1H) 4,12-4,23 (m, 3H) 3,72-3,62 (m, 2H assumido; obscurecido por água) 3,61-3,52 (m, 1H assumido; obscurecido por água) 3,26 (dd, J = 14,5, 5,9 Hz, 1H) 1,36 (s, 4H). 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,23 (s, 1 H), 5,48 (d, J = 5,8 Hz, 1 H), 4,71-4,65 (m, 1 H), 4,44 (t, J = 8,2 Hz, 2 H), 3,89-3,73 (m, 3 H), 3,54 (dd, J = 14,9, 4,9 Hz, 1 H), 1,65-1,56 (m, 2 H), 1,56-1,46 (m, 2H).
Exemplo 23: Ácido 2-((( Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2 R ,3 S )-2-((( R )- 5-metil-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico
[00507] Etapa 1: terc-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)a- mino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((((R)-2-hidroxipropil)amino)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato. Uma solução de Intermediário L (500 mg, 0,949 mmol) e óxido de (R)-propileno (996 μl, 14,2 mmol) em DCM (1,9 mL) foi agitada em ta durante 16 h e então precipitação foi observada. Mais óxido de (R)-propileno (332 μl, 4,75 mmol) foi adicionado. Depois de um adicional de 3 h, mais óxido de (R)-propileno (500 μl, 7,14 mmol) foi adicionado. Depois de outras 24 h de agitação, foi concentrada em vácuo, e o resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (185 mg, 33%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,82 min, m/z = 585,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00508] Etapa 2: terc-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-metil-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato. A uma solução de terc-butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((((R)-2-hidroxipropil)ami- no)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpro- panoato (185 mg, 0,316 mmol) em clorofórmio (3,16 mL) foi adicionado CDI (257 mg, 1,58 mmol). Depois de agitar em ta durante 20 min, a solução foi diluída com EtOAc/água, e as camadas separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc, e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (Acetona-DCM, 0-100%) para proporcionar o composto do título (81 mg, 42%). LCMS : Ta = 0,92 min, m/z = 611,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00509] Etapa 3: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-(((R)-5-metil-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4- oxoazetidina-1-sulfônico. terc-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbo- nil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-metil-2-oxooxazolidin-3- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato (81 mg, 0,133 mmol) em DMF (1,33 mL) foi tratado com SO3^DMF (203 mg, 1,33 mmol). Depois de 20 min de agitar em ta, a solução foi diluída com EtOAc/salmoura, e as camadas separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x), e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo, proporcionando o composto do título (quantitativo assumido) como um sólido. LCMS : Ta = 0,84 min, m/z = 691,0 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00510] Etapa 4: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)- 2-(((R)-5-metil-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico
Figure img0075
[00511] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-(((R)-5-metil-2- oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (92 mg, 0,133 mmol), DCM (1,33 mL) e TFA (615 μL, 7,98 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (18,6 mg, 23%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,39 min, m/z = 535,1 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,29 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,85 (s, 1 H), 5,22 (dd, J = 8,8, 5,7 Hz, 1 H), 4,55 (dt, J = 13,5, 6,5 Hz, 1 H), 4,15 (q, J = 6,0 Hz, 1 H), 3,72-3,63 (m, 2 H), 3,343,27 (m, 2 H), 1,46 (s, 3 H), 1,42 (s, 3 H), 1,28 (d, J = 6,3 Hz, 3H). Exemplo 24: Ácido 2-((( Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2 R ,3 S )-2-((( R )- 5-(guanidinometil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoico.
Figure img0076
[00512] A uma solução de ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5- (aminometil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoico (30,1 mg, 0,055 mmol) e cloridrato de pirazol-1- carboxamidina (16,1 mg, 0,110 mmol) em DMF (548 μl) foi adicionado DIPEA (38,3 μl, 0,219 mmol). Depois de 5 h de agitação em ta, a solução foi concentrada em vácuo e purificada por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (17,5 mg, 49%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,30 min, m/z = 592,2 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 6,97 (s, 1 H), 5,31 (d, J = 5,9 Hz, 1 H), 4,74 (dtd, J = 9,3, 5,9, 3,2 Hz, 1 H), 4,55 (ddd, J = 9,2, 5,9, 3,1 Hz, 1 H), 3,86 (t, J = 9,3 Hz, 1 H), 3,66 (dd, J = 15,0,9,5 Hz, 1 H), 3,53 (dd, J = 15,5, 3,2 Hz, 1 H), 3,47-3,34 (m, 3 H), 1,39 (s, 3 H), 1,37 (s, 3H).
Exemplo 25: Ácido 1-((( Z-(2-(((2 R ,3 S )-2-((( R )-5-(aminometil)-2- oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)- ciclopropanocarboxílico.
[00513] Etapa 1: terc-Butil (((R)-3-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoaze- tidin-2-il)metil)-2-oxooxazolidin-5-il)metil)carbamato. Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapa 3 usando o Intermediário U (1,16 g, 2,28 mmol) e Pd em C (10%, 246 mg) em EtOH:MeOH (5:1, 3 mL) durante 19 h. O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte.
[00514] Etapa 2: Benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(((terc- butoxicarbonil)amino)metil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)-tiazol-4- il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma solução de ácido (Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2- (2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (1,29 g, 2,28 mmol) e HATU (909 mg, 2,39 mmol) em DMF:DCM (3:1, 9,0 mL) a 0 °C foi adicionado DIPEA (1,0 mL, 5,72 mmol). Depois de 15 min de agitação a 0 °C, terc-butil (((R)-3-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2- oxooxazolidin-5-il)metil)carbamato (715 mg, 2,28 mmol) foi adicionado como uma solução em DMF:DCM (1:1, 9 mL) seguido por uma lavagem com DMF (1,5 mL). Depois de 1,2 h em ta foi diluída com EtOAc e lavada com LiCl (5% aq). A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com LiCl (5% aq), NaHCO3 (aq saturada), salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 5-90%) para proporcionar o composto do título (1,357 g, 72%) como um sólido branco. LCMS : Ta = 1,04 min, m/z = 834,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00515] Etapa 3: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)car- bonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-(((R)-5-(((terc-butoxicarbonil)amino)-metil)-2- oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. Benzidril 1- (((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)-2- oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)-tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (1,357 g, 1,627 mmol) em DMF (8,1 mL) a 0 °C foi tratado com SO3^DMF (748 mg, 4,88 mmol). Depois de 2 h de agitação em ta, a solução foi diluída com EtOAc/LiCl (5% aq), e as camadas separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com LiCl (5% aq), salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo, proporcionando o composto do título (quantitativo assumido) como um sólido. LCMS : Ta = 0,96 min, m/z = 914,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00516] Etapa 4: Ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(aminometil)- 2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)- ciclopropanocarboxílico.
Figure img0077
[00517] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)car- bonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-(((R)-5-(((terc-butoxicarbonil)amino)-metil)-2-oxooxazo- lidin-3-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (725 mg, 0,794 mmol), DCM (8,0 mL) e TFA (3,7 mL, 48,0 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (231 mg, 52%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,41 min, m/z = 548,1 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,18 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 8,00 (t, J = 5,8 Hz, 3 H), 6,83 (s, 1 H), 5,22 (dd, J = 8,8, 5,9 Hz, 1 H), 4,68 (tdd, J = 9,0, 5,8, 3,4 Hz, 1 H), 4,24 (ddd, J = 9,3, 5,9, 3,6 Hz, 1 H), 3,75 (t, J = 8,8 Hz, 1H assumido; obscurecido por água), 3,61 (dd, J = 8,7, 5,8 Hz, 1H assumido; obscurecido por água), 3,41 (dd, J = 14,7, 9,0 Hz, 1 H), 3,30 (dd, J = 14,7, 3,7 Hz, 1 H), 3,25-3,05 (m, 2 H), 1,40-1,27 (m, 4 H), 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,18 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 5,45 (d, J = 5,8 Hz, 1 H), 5,02-4,93 (m, 1 H), 4,70 (ddd, J = 9,2, 5,8, 3,7 Hz, 1 H), 4,04 (t, J = 9,2 Hz, 1 H), 3,78 (dd, J = 15,0, 9,0 Hz, 1 H), 3,60-3,56 (m, 1 H), 3,54 (dd, J = 11,3, 3,6 Hz, 1 H), 3,40 (s, 1 H), 3,38 (d, J = 2,0 Hz, 1 H), 1,57-1,49 (m, 2 H), 1,49-1,40 (m, 2H). Exemplo 26: Ácido 1-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2 R ,3 S )-2-((( R )- 5-(guanidinometil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)- ciclopropanocarboxílico.
Figure img0078
[00518] A uma solução de ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5- (aminometil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropano- carboxílico (0,795 mmol) e cloridrato de pirazol-1-carboxamidina (234,8 mg, 1,602 mmol) em DMF (7,0 mL) foi adicionado DIPEA (1,20 mL, 8,06 mmol). Depois de 19 h de agitação em ta, a solução foi concentrada em vácuo e purificada por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (177 mg, 37%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,47 min, m/z = 590,1 (M+H) Método 2 m_acídico_polar; ; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,15 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 7,62 (br s, 1 H), 7,24 (s, 3 H), 6,81 (s, 1 H), 5,23 (dd, J = 8,9, 5,9 Hz, 1 H), 4,60-4,51 (m, 1 H), 4,23 (ddd, J = 9,0, 5,8, 3,7 Hz, 1 H), 3,70 (t, J = 8,8 Hz, 1 H), 3,52 (dd,J = 8,8, 5,4 Hz, 1 H), 3,49-3,44 (m, 1 H), 3,43-3,34 (m, 3 H), 1,381,24 (m, 4H).
Exemplo 27: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-(aminometil)-1 H -1,2,3- triazol-1 -il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1 -(2-aminotia- zol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
[00519] Etapa 1: terc-Butil ((1-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2- il)metil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)carbamato. A uma pasta fluida de paládio em carbono (823 mg, 0,774 mmol) em EtOAc/MeOH (5:1, 16,8 mL) foi adicionado o Intermediário S (1,11 g, 2,58 mmol) em uma porção. O sistema foi evacuado e carregado outra vez com H2 (3x). Depois de agitar durante 19 h, a mistura foi diluída com EtOAc, filtrada através de celite, lavando com MeOH-EtOAc (20%, 100 mL x3) e concentrada em vácuo, proporcionando o composto do título bruto (730 mg) como um pó esbranquiçado. LCMS : Ta = 0,37 min, m/z = 297,0 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00520] Etapa 2: Benzidril 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((( terc - butoxicarbonil)amino)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma pasta fluida de ácido (Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (1,32 g, 2,46 mmol) em DCM (12 mL) a 0 °C foi adicionado DIPEA (1,08 mL, 6,16 mmol) seguido por HATU (0,984 g, 2,59 mmol). A mistura reacional foi aquecida em temperatura ambiente e terc-butil ((1-(((2R,3S)-3-amino- 4-oxoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)carbamato (0,73 g, 2,5 mmol) foi adicionado como uma solução em DCM:DMF (1,7:1, 9,6 mL). Depois de agitar durante 1,3 h, uma alteração de cor a partir de amarelo para púrpura escuro foi observada, e então foi diluída com DCM, lavada com água, salmoura, secada em sulfato de sódio e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0-90%), proporcionando o composto do título (1,62 g, 81%) como uma espuma púrpura. LCMS : Ta = 1,05 min, m/z = 816,5 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00521] Etapa 3: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbo- nil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)-1H-1,2,3- triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)-1H- 1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (1,58 g, 1,94 mmol) em DMF (15 mL) foi adicionado complexo de SO3^DMF (2,97 g, 19,4 mmol). Depois de 45 min de agitação, foi diluída com EtOAc (120 mL), salmoura (80 mL), água (40 mL), e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 20 mL), e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo para proporcionar o composto do título (quantitativo assumido) como uma espuma púrpura. LCMS : Ta = 0,96 min, m/z = 896,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00522] Etapa 4: Ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-1 H- 1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-ciclopropanocarboxílico.
Figure img0079
[00523] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)car- bonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)-1H-1,2,3-triazol-1- il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (1,74 g, 1,94 mmol), DCM (19,4 mL) e TFA (8,95 mL, 116 mmol). Depois de 3 h em ta, foi resfriada a 0 °C e mais TFA (200 μL, 2,6 mmol) foi adicionado e então foi permitida aquecer em ta. Depois de outra 1 h em ta, foi resfriada a 0 °C e mais TFA (200 μL, 2,6 mmol) foi adicionado, novamente permitindo aquecer em ta. Depois de um adicional de 1 h em TA, foi diluída com DCM e concentrada em vácuo. Metade do resíduo bruto foi purificada por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (140 mg, aproximadamente 23%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,27 min, m/z = 530,1 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 8,07 (s, 1 H), 7,08-6,99 (m, 1H) 5,42-5,31 (m, 1 H), 4,88-4,74 (m, 2H assumido; parcialmente obscurecido por pico residual de solvente), 4,74-4,68 (m, 1 H), 4,20 (s, 2 H), 1,36-1,23 (m, 2 H), 1,23-1,07 (m, 2H). Exemplo 28: Ácido 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4- (guanidinometil)-l H-1,2,3-triazoM -il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-ciclopropanocarboxílico.
Figure img0080
[00524] A uma solução de ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4- (aminometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2 oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropano- carboxílico (559 mg, 1,06 mmol) e cloridrato de pirazol-1-carboxami- dina (310 mg, 2,12 mmol) em DMF (12 mL) foi adicionado DIPEA (1,48 mL, 8,45 mmol). Depois de 16 h de agitação em ta, a solução foi diluída com tolueno (20 mL), fazendo com que um óleo denso se separe. A camada superior foi decantada, e o óleo restante foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (240 mg, 39%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,28 min, m/z = 572,0 (M+H) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 8,09 (s, 1 H), 7,18 (s, 1 H), 5,52 (d, J = 5,4 Hz, 1 H), 4,97 (dd, J = 14,1, 5,5 Hz, 1 H), 4,91 (q, J = 5,5 Hz, 1 H), 4,84-4,76 (m, 1H assumido; parcialmente obscurecido por pico residual de solvente), 4,55 (s, 2 H), 1,49-1,36 (m, 2 H), 1,341,23 (m, 2H). E-isômero foi da mesma forma obtido. LCMS : Ta = 0,32 min, m/z = 572,0 (M+H) Método 2 m_acídico. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,37 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 8,11 (s, 1 H), 7,41 (s, 1 H), 7,13 (s, 2 H), 6,50 (s, 1 H), 5,18 (dd, J = 9,6, 5,3 Hz, 1 H), 4,97 (d, J = 13,5 Hz, 1 H), 4,76-4,58 (m, 1 H), 4,52 (dd, J = 16,11, 7,70 Hz, 1 H), 4,264,05 (m, 2 H), 1,86-2,08 (m, 1 H), 1,34-1,07 (m, 6 H).
Exemplo 29: Ácido (S)-2-(((Z-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)propanoico.
[00525] Etapa 1: (R)-terc-Butil 2-cloropropanoato. Preparado de acordo com Wright et al.Tetrahedron Lett,1997, 38, 7345. Uma bomba de vidro de 500 mL foi carregada com sulfato de magnésio (4,21 g, 35,0 mmol) e DCM (43,8 mL). A esta pasta fluida foi adicionado ácido sulfúrico (486 μL, 8,75 mmol), gota a gota com agitação vigorosa. Depois de 15 min de agitação, ácido (R)-2-cloropropanoico (950 mg, 8,75 mmol) foi adicionado seguido por terc-butanol (4,20 mL, 43,8 mmol). A bomba foi selada e agitada em ta durante 19 h, e então bicarbonato de sódio (aq saturada, 100 mL) foi cuidadosamente adicionado, no ponto em que todos os sólidos se dissolveram. As camadas foram separadas, e a camada aquosa foi extraída com DCM (2x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo (banho a 20 °C, 50 mBar) para proporcionar o composto do título (1,36g, 94%) como um óleo cor-de-rosa claro. 1H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 4,29 (q, J = 6,9 Hz, 1H) 1,65 (d, J = 6,9 Hz, 3H) 1,49 (s, 9H).
[00526] Etapa 2: (S)-terc -butil 2-((1,3-dioxoisoindolin-2- il)óxi)propanoato. Preparado de acordo com Yamawaki et al. Bioorg. Med. Chem, 2007, 15, 6716. A uma pasta fluida de N-hidroxiftalimida (517 mg, 3,17 mmol) e carbonato de potássio (657 mg, 4,76 mmol) em DMF (4,5 mL) foi adicionado (R)-terc-butil 2-cloropropanoato (522 mg, 3,17 mmol). DMF adicional (4,5 mL) foi adicionado depois que a pasta fluida se tornou viscosa. Depois de agitar durante 5 d, foi diluída com EtOAc e vertida em solução de LiCl (5% aq, 90 mL). A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com LiCl (5% aq), salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0-50%), proporcionando o composto do título (348 mg, 38%) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,89 min, m/z = 314,0 (M+23) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,87-7,81 (m, 2 H), 7,75 (dd, J = 5,5, 3,1 Hz, 2 H), 4,79 (q, J = 6,8 Hz, 1 H), 1,61 (s, 3 H), 1,46 (s, 9H).
[00527] Etapa 3: (S)-terc-butil 2-(aminoóxi)propanoato. A uma solução de (S)-terc-butil 2-((1,3-dioxoisoindolin-2-il)óxi)propanoato (73,3 mg, 0,252 mmol) em DCM (Volume: 500 μL) a 0 °C foi adicionado metil hidrazina (13,5 μL, 0,252 mmol). Depois de agitar durante 3 h a 0 °C, os sólidos foram filtrado, e o filtrado foi concentrado em vácuo, proporcionando o composto do título (quantitativo assumido) como um óleo transparente.
[00528] Etapa 4: (S)-terc-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4- triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)- propanoato. A uma solução de Intermediário E (62,2 mg, 0,148 mmol) em MeOH (1 mL) a 0 °C foi adicionado uma solução de (S)-terc-butil 2- (aminoóxi)propanoato (24 mg, 0,15 mmol) em DCM (300 μL). Depois de agitar durante 6 d, ácido acético (8,5 μl, 0,15 mmol) foi adicionado. Depois de 4 d, mais ácido acético (8,5 μl, 0,15 mmol) foi adicionado. Depois de um adicional de 24 h, foi parcialmente concentrada em vácuo, em seguida diluída com EtOAc/água. As camadas foram separadas, e a camada orgânica foi lavada com salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 0-10%), proporcionando o composto do título (20,2 mg, 24%) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,81 min, m/z = 565,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00529] Etapa 5: Ácido (2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3- ((Z)-2-((((S)-1-(terc-butóxi)-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidina-1- sulfônico. A uma solução de (S)-terc-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H- 1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)propanoato (20,2 mg, 0,036 mmol) em DMF (400 μl) foi adicionado SOa^DMF (54,8 mg, 0,358 mmol). Depois de 2,5 h de agitação, foi diluída com EtOAc/LiCl (5% aq), e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com LiCl (5% aq), salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo, proporcionando o composto do título (quantitativo assumido) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,74 min, m/z = 645,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00530] Etapa 6: Ácido (S )-2-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((1 H -1,2,4- triazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)propanoico.
Figure img0081
[00531] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-3-((Z)-2-((((S)-1-(terc-butóxi)-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidina-1- sulfônico (23 mg, 0,036 mmol), DCM (357 μL) e TFA (165 μL, 2,14 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min), proporcionando o composto do título (7,9 mg, 36%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,40 min, m/z = 489,0 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 8,69 (s, 1 H), 8,18 (s, 1 H), 7,20 (s, 1 H), 5,54 (d, J = 5,7 Hz, 1 H), 4,96-4,67 (m, 4H assumido; parcialmente obscurecido por pico residual de solvente), 1,44 (d, J = 7,0 Hz, 3H).
Exemplo 30: Ácido (R)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)propanoico.
[00532] Etapa 1: (S)-terc-Butil 2-cloropropanoato. Preparado de acordo com Wright et al.Tetrahedron Lett, 1997, 38, 7345. Uma bomba de vidro de 500 mL foi carregada com sulfato de magnésio (21,7 g, 181 mmol) e DCM (182 mL). A esta pasta fluida foi adicionado ácido sulfúrico (2,5 mL, 45 mmol), gota a gota com agitação vigorosa. Depois de 15 min de agitação, ácido (S)-2-cloropropanoico (5,0 g, 45 mmol) foi adicionado seguido por terc-butanol (21,6 mL, 226 mmol). A bomba foi selada e agitada em ta durante 19 h, e então foi resfriada a 0 °C e bicarbonato de sódio (aq saturada, 350 mL) foi cuidadosamente adicionado, no ponto em que todos os sólidos se dissolveram. As camadas foram separadas, e a camada aquosa foi extraída com DCM (2x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo (banho a 20 °C, 50 mBar) para proporcionar o composto do título (7,64 g, 96%) como um óleo amarelo claro (93% de pureza). Os dados de 1H RMN foram uma comparação idêntica ao enantiômero previamente preparado.
[00533] Etapa 2: (R )-terc-butil 2-((1,3-dioxoisoindolin-2- il)óxi)propanoato. A uma pasta fluida de N-hidroxiftalimida (3,71 g, 22,1 mmol) e carbonato de potássio (4,58 g, 33,1 mmol) em DMF (55 mL) foi adicionado (S)-terc-butil 2-cloropropanoato (4,30 g, 24,3 mmol). Depois de 72 h de agitação, a pasta fluida foi aquecida a 40 °C durante um adicional de 16 h, no ponto em que foi diluída com EtOAc/LiCl (5% aq), e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com LiCl (5% aq), salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo, proporcionando o composto do título (5,45 g, 85%) como um sólido esbranquiçado. LCMS : Ta = 0,88 min, m/z = 313,9 (M+23) Método 2 m_acídico.
[00534] Etapa 3: (R)-terc-butil 2-(aminoóxi)propanoato. A uma solução de (R)-terc-butil 2-((1,3-dioxoisoindolin-2-il)óxi)propanoato (69,6 mg, 0,239 mmol) em DCM (478 μL) a 0 °C foi adicionado metil hidrazina (12,8 μL, 0,239 mmol). Depois de agitar durante 3 h a 0 °C, os sólidos foram filtrado, e o filtrado foi concentrado em vácuo, proporcionando o composto do título (quantitativo assumido) como um óleo transparente.
[00535] Etapa 4: Ácido (2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3- ((Z)-2-((((R)-1-(terc-butóxi)-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidina-1- sulfônico. A uma solução de Intermediário F (110 mg, 0,219 mmol) em MeOH (2 mL) a 0 °C foi adicionado uma solução de (R)-terc-butil 2- (aminoóxi)propanoato (38,5 mg, 0,239 mmol) em DCM:MeOH (2:1, 600 μL) seguido por uma lavagem com DCM (400 μL). Depois de agitar durante 16 h, foi parcialmente concentrada em vácuo, em seguida diluída com EtOAc/água, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2x), e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo, proporcionando o composto do título (quantitativo assumido) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,74 min, m/z = 645,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00536] Etapa 5: Ácido (R )-2-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((1 H -1,2,4- triazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)propanoico.
Figure img0082
[00537] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-3-((Z)-2-((((R)-1-(terc-butóxi)-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidina-1- sulfônico (141 mg, 0,219 mmol), DCM (2,19 mL) e TFA (1,0 mL, 13 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (35,5 mg, 29%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,42 min, m/z = 489,0 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 8,58 (s, 1 H), 8,06 (s, 1 H), 7,06 (s, 1 H), 5,41 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,81-4,52 (m, 4H assumido; parcialmente obscurecido por pico de solvente), 1,29 (d, J = 7,0 Hz, 3H).
Exemplo 31: Ácido (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazoM- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-3-(4-(N-(piperidin-4-il)carbamimidoil)- fenóxi)propanoico.
[00538] Etapa 1: terc-Butil 4-(4-((S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1 H- 1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-3- (benzidrilóxi)-3-oxopropóxi)benzimidamido)piperidina-1- carboxilato. A uma solução de ácido (S,Z)-2-(((1-(benzidrilóxi)-3-(4- (N-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)carbamimidoil)fenóxi)-1- oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acético (Preparada de acordo com WO2013110643, 72 mg, 0,085 mmol), (3S,4R)-4-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-aminoazetidin-2-ona (15,7 mg, 0,094 mmol) e HATU (42,2 mg, 0,111 mmol) em DMF (854 μL) foi adicionado DIPEA (44,8 μL, 0,256 mmol). Depois de agitar a durante 3 h, foi diluída com EtOAc, lavada com água, NaHCO3 (aq saturada), salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo, proporcionando o composto do título (82 mg, 87%) como uma película olivácea. LCMS : Ta = 0,97 min, m/z = 992,5 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00539] Etapa 2: Ácido (2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3- ((Z)-2-((((S)-1-(benzidrilóxi)-3-(4-(N-(1-(terc- butoxicarbonil)piperidin-4-il)carbamimidoil)fenóxi)-1-oxopropan-2- il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. terc-Butil 4-(4-((S)-2-(((Z)- (2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1- (2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-3- (benzidrilóxi)-3-oxopropóxi)benzimidamido)piperidina-1-carboxilato (99 mg, 0,10 mmol) em DMF (500 μL) foi tratado com SOa^DMF (45,9 mg, 0,299 mmol). Depois de agitar durante 40 min, mais SOβ^DMF (45,9 mg, 0,299 mmol) foi adicionado. Depois de 1,3 h, mais SOβ^DMF (45,9 mg, 0,299 mmol) foi adicionado. Depois de agitar durante um adicional de 30 min, a solução foi vertida em salmoura gelada e extraída com EtOAc. As camadas foram separadas, e a camada orgânica foi secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo, proporcionando o composto do título (quantitativo assumido) como um sólido esbranquiçado. LCMS : Ta = 0,97 min, m/z = 1073,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00540] Etapa 3: Ácido (S )-2-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((1 H -1,2,4- triazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-3-(4-(N-(piperidin-4- il)carbamimidoil)-fenóxi)propanoico.
Figure img0083
[00541] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-2-((1H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-3-((Z)-2-((((S)-1-(benzidrilóxi)-3-(4-(N-(1-(terc- butoxicarbonil)piperidin-4-il)carbamimidoil)fenóxi)-1-oxopropan-2- il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4- oxoazetidina-1-sulfônico (0,085 mmol), DCM (850 μL) e TFA (327 μL, 4,25 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 19 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min), proporcionando o composto do título (12 mg, 17%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,41 min, m/z = 706,2 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,55 (d, J = 7,4 Hz, 1H) 9,40 (br s, 1H) 9,01 (br s, 1H) 8,53-8,71 (m, 1H) 8,41 (s, 1H) 7,92 (s, 1H) 7,67 (d, J = 9,0 Hz, 2H) 7,21 (br s, 2H) 7,03 (d, J = 7,8 Hz, 1H) 6,76 (s, 1H) 5,175,24 (m, 1H) 4,94 (d, J = 3,9 Hz, 1H) 4,46-4,53 (m, 2H) 4,37-4,45 (m, 1H) 4,25-4,32 (m, 1H) 3,88 (br s, 1H) 3,39 (br s, 4H) 2,92 (t, J = 11,5 Hz, 2H) 2,05-2,14 (m, 2H) 1,79 (d, J = 11,0 Hz, 2H). Exemplo 32: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((1 H -1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclobutanecarboxílico.
Figure img0084
[00542] LCMS : Ta = 0,58 min, m/z = 515,0 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 8,75 (s, 1 H), 8,22 (s, 1 H), 7,23 (s, 1 H), 5,56 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,95-4,85 (m, 2 H), 4,864,82 (m, 1H assumido; parcialmente obscurecido por pico residual de solvente), 4,78-4,70 (m, 1H assumido; parcialmente obscurecido por pico residual de solvente), 2,61-2,46 (m, 2 H), 2,38-2,27 (m, 2 H), 2,001,89 (m, 2H). Exemplo 33: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4- (cianometil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0085
[00543] LCMS: Ta = 0,57 min, m/z = 542,1 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,19 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 7,71 (s, 1 H), 6,65 (s, 1 H), 5,43-5,23 (m, 1 H), 4,93-4,84 (m, 1 H), 4,76-4,67 (m, 1 H), 4,47 (ddd, J = 8,71, 5,4, 3,5 Hz, 1 H), 4,07 (d, J = 1,6 Hz, 2 H), 1,35 (s, 6H). Exemplo 34: Ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-amino-1 H-pirazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0086
[00544] LCMS : Ta = 0,50 min, m/z = 517,3 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,54 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 6,97 (s, 1 H), 6,00 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 5,40 (d, J = 5,8 Hz, 1 H), 4,69 (q, J = 5,5 Hz, 1 H), 4,43 (d, J = 5,4 Hz, 2 H), 1,31 (d, J = 1,8 Hz, 6H). Exemplo 35: Ácido 2-(((Z-(2-(((2R,3S)-2-((4-amino-1 H-pirazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0087
[00545] LCMS : Ta = 0,39 min, m/z = 517,1 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,86 (s, 1 H), 7,56 (s, 1 H), 6,90 (s, 1 H), 5,35 (d, J = 5,9 Hz, 1 H), 4,72-4,67 (m, 1 H), 4,544,49 (m, 2 H), 1,28 (s, 3 H), 1,27 (s, 3H). Exemplo 36: (2R,3 S )-3-(( Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2-carboxi- propan-2-il)óxi)imino)acetamido)-2-((4-((1-metilpirrolidin-1 -io-1 - il)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfonato.
Figure img0088
[00546] LCMS : Ta = 0,55 min, m/z = 600,3 (M+) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,50 (s, 1 H), 9,34 (s, 1 H), 7,94 (s, 1 H), 7,27 (s, 2 H), 6,72 (s, 1 H), 5,33 (dd, J = 8,6, 5,6 Hz, 1 H), 4,82 (dd, J = 15,1, 9,2 Hz, 1 H), 4,69-4,53 (m, 4 H), 3,60-3,50 (m, 2 H), 3,46-3,33 (m, 2 H), 2,95 (s, 3 H), 2,14-2,00 (m, 4 H), 1,35 (s, 3 H), 1,29 (s, 3H). Exemplo 37: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4- ((carbamoilóxi)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1 - sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoico.
Figure img0089
[00547] LCMS : Ta = 0,53 min, m/z = 576,0 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,23 (d, J = 9,3 Hz, 1 H), 7,70 (s, 1 H), 6,74 (s, 1 H), 6,59 (br s, 2 H), 5,31 (dd, J = 9,2, 5,4 Hz, 1 H), 4,94 (s, 2 H), 4,91 (dd, J = 14,3, 3,2 Hz, 1 H), 4,72 (dd, J = 14,2, 9,0 Hz, 1 H), 4,42 (ddd, J = 8,8, 5,5, 3,1 Hz, 1 H), 1,38 (s, 3 H), 1,37 (s, 3H). Exemplo 38: Ácido 2-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3 S ,4 R )- 2-oxo-1 -sulfo-4-((4-((sulfoóxi)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2- il)metil)azetidin-3-il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0090
[00548] LCMS : Ta = 0,43 min, m/z = 612,9 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,71 (s, 1 H), 6,96-7,11 (m, 1 H), 5,40 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 4,98 (s, 2 H), 4,93-4,65 (m 3H assumido; parcialmente obscurecido por pico residual de solvente), 1,34 (s, 6H). Exemplo 39: Ácido 2-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((2-amino-4,5-di-hidro-1 H - imidazol-1 -il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1 -(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0091
[00549] LCMS : Ta = 0,30 min, m/z = 520,1 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,63 (br s, 1H) 9,12 (d, J = 8,6 Hz, 1H) 7,74 (d, J = 15,3 Hz, 3H) 7,31-7,49 (m, 2H) 6,77 (s, 1H) 5,22 (dd, J = 8,5, 5,8 Hz, 1H) 4,24 (dt, J = 7,1, 5,3 Hz, 1H) 3,76-3,85 (m, 1H) 3,59-3,73 (m, 2H) 3,43-3,55 (m, 3H) 1,43 (s, 3H) 1,41, (s, 3H). Exemplo 40: Ácido 2-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2 R ,3 S )-2-((( E - 2-(cianoimino)imidazolidin-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0092
[00550] LCMS : Ta = 0,33 min, m/z = 544,0 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,29 (d, J = 9,1 Hz, 1H) 7,74 (br s, 1H) 6,85 (s, 1H) 5,20 (dd, J = 8,8, 5,7 Hz, 1H) 4,10-4,17 (m, 1H) 3,72-3,81 (m, 1H) 3,62 (dd, J = 14,7, 6,8 Hz, 1H) 3,48-3,56 (m, 1H) 3,31-3,42 (m, 3H) 1,43 (s, 3H) 1,41, (s, 3H). Exemplo 41i Áçido 2zíííZlzí2zííí2R13Slz2z((4:(2:aminoetil}z1Hz1l2i3z triazol-1 -il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1 -(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico
Figure img0093
[00551] Etapa 1: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-((4-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)etil)-1H-1,2,3- triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. A uma mistura de Intermediário K (100 mg, 0,158 mmol) e terc-butil but-3-in-1-il carbamato (54 mg, 0,32 mmol) em DMSO: água: terc-butanol (1: 1: 1, 3 mL) foram adicionados CuSO4 (13 mg, 0,079 mmol) e L-ascorbato de sódio (32 mg, 0,16 mmol). Depois de agitar durante a noite, a mistura foi diluída com EtOAc e água. As camadas foram separadas, e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi lavado com dietil éter/pentano, proporcionando o composto do título (80 mg, 63%) como um sólido branco. LCMS : m/z = 799,8 (M-1).
[00552] Etapa 2: Ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(2-aminoetil)-1H- 1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico. A uma solução de ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1- oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)etil)-1H-1,2,3-triazol- 1-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (110 mg, 0,137mmol) em DCM (1,4 mL) a 0 °C adicionado TFA : DCM (1:1, 4,2 mL) seguido por trietilsilano (65 μL, 0,411 mmol). A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 30 min e lentamente aquecida em temperatura ambiente. Depois de 2 h em TA, foi concentrada em vácuo e triturada com MTBE:Heptano (1:2) e então um sólido foi observado. O sólido bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (coluna C18, sistema de solvente de acetonitrila : água com 0,1% de modificador de ácido fórmico) para proporcionar o composto do título (5 mg, 7%); LCMS : m/z = 543,9 (M-1); 1H RMN (400 MHz, MeOH-d4) δ 8,06 (s, 1 H), 6,95 (s, 1 H), 5,44 (d, J = 5,8 Hz, 1 H), 4,66 (q, J = 6,0 Hz, 1 H), 4,95-4,83 (m, 2H assumido; obscurecido por água), 3,29-3,24 (m, 2 H), 3,07 (t, J = 6,5 Hz, 2 H), 1,54 (s, 3 H), 1,52 (s, 3H).
Exemplo 42: Ácido 2-((( Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3 S ,4 R )- 2-oxo-4-((4-(2-(piperazin-1 -il)etil)-1 H -1,2,3-triazol-1 -il)metil)-1 - sulfoazetidin-3-il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico
[00553] Etapa 1: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-((4-(2-(4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1-il)etil)- 1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. A uma solução de Intermediário K (90 mg, 0,142 mmol) e terc-butil 4-(but-3-in- 1-il)piperazina-1-carboxilato (34 mg, 0,14 mmol) em uma mistura de DMSO:água: terc-butanol (1:1:1, 2,16 mL) foram adicionados CuSO4 (2,5 mg, 0,016 mmol) e L-ascorbato de sódio (5 mg, 0,15 mmol). Depois de agitar durante a noite, a mistura foi diluída com EtOAc e água. As camadas foram separadas, e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi lavado com dietil éter/pentano, proporcionando o composto do título (120 mg, bruto); LCMS : m/z = 871,4 (M+1).
[00554] Etapa 2: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2- (((3S,4R)-2-oxo-4-((4-(2-(piperazin-1-il)etil)-1H-1,2,3-triazol-1- il)metil)-1-sulfoazetidin-3-il)amino)etilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoico
Figure img0094
[00555] A uma solução de ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)- 2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(2-(4-(terc-butoxicarbonil)piperazin-1- il)etil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (120 mg, 0,138 mmol) em DCM (1,4 mL) a 0 °C, foi adicionado TFA : DCM (1:1, 4,2 mL) seguido por trietilsilano (65 μL, 0,411 mmol). A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 30 min e lentamente aquecida em temperatura ambiente. Depois de 2 h em ta, foi concentrada em vácuo e triturada com MTBE: Heptano (1:2) e então um sólido foi observado. O sólido bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (coluna C18, sistema de solvente de acetonitrila : água com 0,1% de modificador de ácido fórmico) para proporcionar o composto do título (9,3 mg, 11%); LCMS : m/z = 612,8 (M-1); 1H RMN (400 MHz, DMSO- d6) δ 9,67 (s, 1 H), 7,99 (s, 1 H), 7,30 (s, 2 H), 6,66 (s, 1 H), 5,27 (dd, J = 8,8, 5,5 Hz, 1 H), 4,82 (dd, J = 14,7, 4,0 Hz, 1 H), 4,68 (dd, J = 14,7, 6,6 Hz, 1 H), 4,24 (td, J = 5,9, 4,2 Hz, 1 H), 3,10 (t, J = 5,2 Hz, 4 H), 2,76 (t, J = 7,0 Hz, 2 H), 2,64-2,54 (m, 6 H), 1,37 (s, 3 H), 1,30 (s, 3H).
Exemplo 43: (3 S, 4R )-3-(( Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2- carboxipropan-2-il)óxi)imino)acetamido)-2-oxo-4-((4-((2- (trimetilamônio)acetamido)metil)-1H-1,2,3-triazol-1 - il)metil)azetidina-1-sulfonato.
[00556] Etapa 1: Brometo de 2-(((1-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc- butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxo-1-sulfoazetidin- 2-il)metil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)amino)-N,N,N-trimetil-2- oxoetanamônio. A uma solução de Intermediário K (100 mg, 0,158 mmol) e brometo de N,N,N-trimetil-2-oxo-2-(prop-2-in-1-ilamino)etana- mônio (50 mg, 0,212 mmol) em uma mistura de DMSO: água: terc- butanol (1:1:1, 3 mL) foram adicionados CuSO4 (2,5 mg, 0,016 mmol) e L-ascorbato de sódio (5 mg, 0,15 mmol). A mistura foi agitada durante a noite e extinguida com água gelada, e então os sólidos resultantes foram filtrados e secados em vácuo para proporcionar o composto do título bruto (50 mg, 40%); LCMS : m/z = 784,85 (M-1).
[00557] Etapa 2: (3 S, 4R )-3-(( Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2- carboxipropan-2-il)óxi)imino)acetamido)-2-oxo-4-((4-((2- (trimetilamônio)acetamido)metil)-1H-1,2,3-triazol-1- il)metil)azetidina-1-sulfonato.
Figure img0095
[00558] A uma pasta fluida de brometo de 2-(((1-(((2R,3S)-3-((Z)-2- (((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxo-1-sulfoazetidin-2- il)metil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)amino)-N,N,N-trimetil-2- oxoetanamínio (50 mg, 0,0635 mmol) em DCM (640 μL) a 0 °C foi adicionado TFA : DCM (1:1, 1,92 mL) seguido por trietilsilano (31 μL, 0,19 mmol). A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 30 min e lentamente aquecida em temperatura ambiente. Depois de 2 h em ta, foi concentrada em vácuo e triturada com MTBE:Heptano (1:2) e então um sólido foi observado. O sólido bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (coluna C18, sistema de solvente de acetonitrila : água com 0,1% de modificador de ácido fórmico) para proporcionar o composto do título (11 mg, 27%). LCMS : m/z = 630,9 (M-1); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,40 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 9,06 (t, J = 5,6 Hz, 1 H), 8,06 (s, 1 H), 7,32 (s, 2 H), 6,71 (s, 1 H), 5,28 (dd, J = 8,6, 5,5 Hz, 1 H), 4,89-4,64 (m, 2 H), 4,38 (t, J = 5,1 Hz, 2 H), 4,22 (q, J = 5,3 Hz, 1 H), 4,08 (s, 2 H), 3,22 (s, 9 H), 1,33 (s, 3 H), 1,26 (s, 3H).
Exemplo 44: Ácido 2-((( Z-(2-((( 2R, 3S )-2-((4-(aminometil)-1H- 1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00559] Etapa 1: Ácido (2R, 3S )-3-(( Z)-2-(((1-( terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((terc- butoxicarbonil)amino)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4- oxoazetidina-1-sulfônico. A uma solução de Intermediário K (100 mg, 0,158 mmol) em uma mistura de DMSO: água: terc-butanol (1:1:1, 1,5 mL) a 0 °C foram adicionados N-Boc-propargil amina (50 mg, 0,321 mmol), CuSO4 (13 mg, 0,079 mmol) e L-ascorbato de sódio (48 mg, 0,237 mmol). A mistura resultante foi gradualmente trazida para a ta e agitada durante 3 h. Foi em seguida diluída com EtOAc e salmoura, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, em seguida concentradas em vácuo para proporcionar o composto do título bruto (120 mg, 96%); LCMS : m/z = 787,95 (M+1).
[00560] Etapa 2: Ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)- 1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0096
[00561] A uma pasta fluida de ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc- butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbo- nil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((terc-butoxicarbonil)ami- no)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (120 mg, 0,15 mmol) em DCM (1,5 mL) a 0 °C foi adicionado TFA:DCM (1:1, 4,5 mL) seguido por trietilsilano (72 μL, 0,45 mmol). A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 30 min e lentamente aquecida em temperatura ambiente. Depois de 2 h em ta, foi concentrada em vácuo e triturada com MTBE:Heptano (1:2) e então um sólido foi observado. O sólido bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (coluna C18, sistema de solvente de acetonitrila : água com 0,1% de modificador de ácido fórmico) para proporcionar o composto do título (11,3 mg, 14%). LCMS : m/z = 528,9 (M-1); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,47 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 8,25 (s, 1 H), 7,30 (s, 2 H), 6,75 (s, 1 H), 5,27 (dd, J = 8,6, 5,6 Hz, 1 H), 4,82 (qd, J = 14,9, 5,0 Hz, 2 H), 4,23 (q, J = 5,1 Hz, 1 H), 4,09 (s,2 H), 1,37 (s, 3 H), 1,32 (s, 3H). Exemplo 45^Áçido 2zíííZlzí1-í2:aminotiazol:4:il}:2z(((2R13Sl:2z((4z (guanidinometil)-1H-1,2,3-triazol-1 -il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0097
[00562] Etapa 1: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)- 2-((4-((2,3-bis(terc-butoxicarbonil)guanidino)metil)-1H-1,2,3-triazol- 1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico. A uma solução de trifluoroacetato de ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(amoniometil)-1H- 1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico (150 mg, 0,122 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionado DIPEA (100 μL, 0,610 mmol) seguido por N,N-di-Boc-1H-pirazol-1-carboxamidina (42 mg, 0,134 mmol). A solução foi agitada em TA durante a noite e então foi concentrada em vácuo, água foi adicionada, e foi liofilizada durante 72 h para proporcionar o composto do título bruto (210 mg, conversão quantitativa assumida). LCMS : m/z = 772,1 (M-1).
[00563] Etapa 2: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)- 2-((4-(guanidinometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoico.
[00564] Procedimento Geral para Desproteção Mediada por Ácido. A uma solução de ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2- (((2R,3S)-2-((4-((2,3-bis(terc-butoxicarbonil)guanidino)metil)-1H-1,2,3- triazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico (0,15 mmol, conversão quantitativa assumida) em DCM (1,5 mL) a 0 °C foi adicionado TFA (689 μL, 9 mmol). O banho frio foi removido depois de 10 min. Depois de 4 h em ta, foi diluída com DCM (1,5 mL) e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (X- Bridge, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; acetonitrila-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 1 mL/min) para proporcionar o composto do título (2,7 mg, 3%). LCMS : m/z = 572,0 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,91 (s, 1 H), 6,80 (s, 1 H), 5,31 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 4,54 (s, 1 H), 4,35 (s, 2 H), 3,50-3,35 (m, 2 H), 1,19 (s, 3 H), 1,18 (s, 3H).
Exemplo 46: Ácido 2-(((Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4- ((2-(4-metilpiperazin-1 -il)acetamido)metil)-1H-1,2,3-triazol-1 - il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00565] Etapa 1: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-((4-((2-(4-metilpiperazin-1-il)acetamido)metil)-1H- 1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. A uma solução de Intermediário K (100 mg, 0,158 mmol) em uma mistura de DMSO: água: terc-butanol (1:1:1, 1 mL) a 0 °C foram adicionados 2-(4- metilpiperazin-1-il)-N-(prop-2-in-1-il)acetamida (47 mg, 0,24 mmol), CuSO4 (13 mg, 0,079 mmol) e L-ascorbato de sódio (48 mg, 0,237 mmol). A mistura resultante foi gradualmente trazida para temperatura ambiente e agitada durante 3 h. Foi em seguida diluída com EtOAc e salmoura, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, em seguida concentradas em vácuo para proporcionar o composto do título bruto (110 mg, 84%); LCMS : m/z = 829,1 (M+1).
[00566] Etapa 2: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)- 2-((4-((2-(4-metilpiperazin-1-il)acetamido)metil)-1H-1,2,3-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0098
[00567] A uma pasta fluida de ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc- butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-((2-(4-metilpiperazin- 1-il)acetamido)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidina-1- sulfônico (120 mg, 0,13 mmol) em DCM (1,3 mL) a 0 °C foi adicionado TFA : DCM (1:1, 3,9 mL) seguido por trietilsilano (62 μL, 0,39 mmol). A mistura reacional foi agitada a 0°C durante 30 min e lentamente aquecida em temperatura ambiente. Depois de 2 h em ta, foi concentrada em vácuo e triturada com MTBE : Heptano (1:2) e então um sólido foi observado. O sólido bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (coluna C18, sistema de solvente de ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico) para proporcionar o composto do título (9 mg). LCMS : m/z = 669,75 (M-1); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,40 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 8,25 (s, 1 H), 8,00 (s, 1 H), 7,33 (s, 2 H), 6,71 (s, 1 H), 5,29 (dd, J = 8,7, 5,6 Hz, 1 H), 4,88-4,60 (m, 2 H), 4,34 (d, J = 5,7 Hz, 2 H), 4,24 (q, J = 5,3 Hz, 1 H), 3,20-2,87 (m, 8 H), 2,77 (s, 3 H), 1,34 (s, 3 H), 1,30 (s, 3H).
Exemplo 47: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4- (hidroximetil)-1H-1,2,3-triazol-1 -il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00568] Etapa 1: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-((4-(hidroximetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4- oxoazetidina-1-sulfônico. A uma solução de Intermediário K (126 mg, 0,20 mmol) em uma mistura de DMSO: água: terc-butanol (1:1:1, 1,5 mL) a 0 °C foram adicionados álcool propargílico (24 μL, 0,40 mmol), CuSO4 (16 mg, 0,10 mmol) e L-ascorbato de sódio (59 mg, 0,30 mmol). A mistura resultante foi gradualmente trazida para a ta e agitada durante 3 h. Foi em seguida congelada e liofilizada. O resíduo bruto foi purificado com resina HP21 (ACN-água, 10-100%) para proporcionar o composto do título como um sólido marrom claro (100 mg, 73%); LCMS : m/z = 687,1 (M-1).
[00569] Etapa 2: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)- 2-((4-(hidroximetil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoico.
Figure img0099
[00570] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(hidroximetil)-1H- 1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (100 mg, 0,145 mmol), DCM (4 mL) e TFA (1 mL, 13 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (T3, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; acetonitrila-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 1 mL/min), proporcionando o composto do título (22 mg, 29%) como um sólido branco. LCMS : m/z = 530,9 (M-1); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,50 (br s, 1 H), 9,36 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 7,97 (s, 1 H), 7,50 (br s, 2 H), 6,70 (s, 1 H), 5,28 (dd, J = 8,8, 5,2, Hz, 1 H), 4,86 (dd, J = 14,4,4,0 Hz, 1 H), 4,69 (dd, J = 14,8,7,2 Hz, 1 H), 4,48 (s, 2 H), 4,27-4,21 (m, 1 H), 1,35 (s, 3 H), 1,34 (s, 3H).
Exemplo 48: Ácido (2R, 3S )-3-(( Z-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2- carboxipropan-2-il)óxi)imino)acetamido)-2-((4-(1-metilpiridin-1-io- 4-il)-1H-1,2,3-triazol-1 -il)metil)-4-oxoazetidina-1 -sulfonato.
[00571] Etapa 1: 4-(1-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)-1- metilpiridin-1-io trifluorometanossulfonato. A uma solução de Intermediário K (85 mg, 0,134 mmol) em uma mistura de DMSO: água: terc-butanol (1:1:1, 1,0 mL) a 0 °C foi adicionado 4-etinil-1-metilpiridin- 1-io trifluorometanossulfonato (72 μL, 0,27 mmol), CuSO4 (11 mg, 0,067mmol) e L-ascorbato de sódio (40 mg, 0,201 mmol). A mistura resultante foi gradualmente trazida para a ta e agitada durante 3 h e então foi diluída com água (5 mL). O precipitado resultante foi lavado com água (2 mL) e secado por meio de corrente de N2, proporcionando o composto do título (80 mg) como uma mistura com seu análogo de azetidinona N-sulfonilado como um sólido marrom claro; LCMS : m/z = 748,1 (M-1).
[00572] Etapa 2: (2R, 3S )-3-(( Z)-2-(((1-( terc-butóxi)-2-metil-1- oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-(1-metilpiridin-1-io-4-il)-1H-1,2,3-triazol-1- il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfonato. 4-(1-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc- butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-1H- 1,2,3-triazol-4-il)-1-metilpiridin-1-io trifluorometanossulfonato (70 mg, 0,10 mmol) em DMF (1 mL) foi tratado com SO3^DMF (80 mg, 0,52 mmol). A mistura reacional foi agitada em ta durante 16 h, em seguida concentrada em vácuo e purificada por resina HP21 (ACN-água, 10-100%), proporcionando o composto do título (24 mg, 31%) como um sólido bege. LCMS : m/z = 748,1 (M-1).
[00573] Etapa 3: (2R, 3S )-3-(( Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2- carboxipropan-2-il)óxi)imino)acetamido)-2-((4-(1-metilpiridin-1-io- 4-il)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfonato.
Figure img0100
[00574] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1- oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-(1-metilpiridin-1-io-4-il)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4- oxoazetidina-1-sulfonato (24 mg, 0,032 mmol), DCM (1,2 mL) e TFA (0,3 mL, 3,9 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XBridge, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 1 mL/min), proporcionando o composto do título (7,9 mg, 41%) como um sólido branco. LCMS : m/z = 592,0 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 8,76 (s, 1 H), 8,62 (d, J = 6,8 Hz, 2 H), 8,19 (d, J = 6,4 Hz, 2 H), 6,76 (s, 1 H), 5,42 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 4,98-4,81 (m, 2H; parcialmente obscurecido por pico de solvente residual), 4,66-4,54 (m, 1H assumido: obscurecido por pico de solvente residual), 4,22 (s, 3 H), 1,30 (s, 3 H), 1,27 (s, 3H).
Exemplo 49: (2R, 3S )-3-(( Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2-carboxi- propan-2-il)óxi)imino)acetamido)-2-((4-(1,3-dimetilpiridin-1-io-4-il)- 1H-1,2,3-triazol-1 -il)metil)-4-oxoazetidina-1 -sulfonato.
[00575] Etapa 1: (2R, 3S )-3-(( Z)-2-(((1-( terc-butóxi)-2-metil-1- oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-(1,3-dimetilpiridin-1-io-4-il)-1H-1,2,3-triazol-1- il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfonato. A uma solução de intermediário K (120 mg, 0,19 mmol) em uma mistura de DMSO: água: terc-butanol (1:1:1, 1,5 mL) a 0 °C foram adicionados 4-etinil-1,3-dimetilpiridin-1-io trifluorometanossulfonato (107 mg, 0,38 mmol), CuSO4 (15 mg, 0,095 mmol) e L-ascorbato de sódio (56 mg, 0,285 mmol). A mistura resultante foi gradualmente trazida para a ta e agitada durante 3 h e então foi diluída com água (10 mL). O precipitado resultante foi lavado com água (5 mL) e secado. O resíduo bruto foi purificado com resina HP21 (ACN-água, 10-100%), proporcionando o composto do título (80 mg, 55%) como um sólido marrom claro; LCMS : m/z = 762,2 (M-1).
[00576] Etapa 2: (2R, 3S )-3-(( Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2- carboxipropan-2-il)óxi)imino)acetamido)-2-((4-(1,3-dimetilpiridin-1- io-4-il)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfonato.
Figure img0101
[00577] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1- oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-(1,3-dimetilpiridin-1-io-4-il)-1H-1,2,3-triazol-1- il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfonato (24 mg, 0,032 mmol), DCM (1,2 mL) e TFA (0,3 mL, 3,9 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (T3, 30 x 150 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 1 mL/min), proporcionando o composto do título (12 mg, 62%) como um sólido branco. LCMS : m/z = 606,1 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 8,65 (s, 1 H), 8,57 (s, 1 H), 8,49 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 8,27 (d, J = 6,8 Hz, 1 H), 6,74 (br s, 1 H), 5,47 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 4,97-4,88 (m, 3 H), 4,21 (s, 3 H), 2,46 (s, 3 H), 1,30 (s, 3 H), 1,28 (s, 3H).
Exemplo 50: Ácido 2-((( Z)-(2-((( 2R, 3S )-2-((1H-1,2,3-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00578] Etapa 1: terc-Butil 2-((( Z)-(1-(2-(( terc-butoxicarbo- nil)amino)tiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((4-(trimetilsilil)-1H- 1,2,3-triazol-1-il)metil)azetidin-3-il)amino)etilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato. A uma solução de Intermediário J (120 mg, 0,19 mmol) em uma mistura de DMSO:água: terc-butanol (1:1:1, 2,0 mL) a 0 °C foram adicionados trimetilsililacetileno (100 μL, 0,724 mmol), CuSO4 (29 mg, 0,181 mmol) e L-ascorbato de sódio (108 mg, 0,543 mmol). A mistura resultante foi gradualmente trazida para a ta e agitada durante 4 h, e então foi diluída com salmoura (5 mL) e extraída com EtOAc (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 7%), proporcionando o composto do título (170 mg, 72%) como um sólido marrom claro; LCMS : m/z = 651,2 (M+1).
[00579] Etapa 2: terc-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,3-triazol- 1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato. Preparado de acordo com o método descrito em WO2013/028590. A uma solução de terc-butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((4- (trimetilsilil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)azetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (140 mg, 0,261 mmol) em THF (4 mL) foi adicionado TBAF (1M em THF, 860 μL, 0,86 mmol). Depois de agitar em ta durante 16 h, TBAF adicional (1M em THF, 1,0 mL, 1,0 mmol) foi adicionado. Depois de agitar durante outras 48 h, a solução foi concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 7%) proporcionando o composto do título (84 mg, 68%) como um sólido esbranquiçado. LCMS : m/z = 579,2 (M+1).
[00580] Etapa 3: Ácido (2R,3S)-2-((1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-3- ((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidina- 1-sulfônico. terc-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,3-triazol-1- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato (84 mg, 0,145 mmol) em DMF (2 mL) foi tratado com SO3^DMF (222 mg, 1,45 mmol). A mistura reacional foi agitada em ta durante 16 h, em seguida diluída com EtOAc (50 mL) e água. As camadas foram separadas, e a camada orgânica foi lavada com salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo, proporcionando o composto do título bruto como um sólido amarelo claro (84 mg, 88%). LCMS : m/z = 657,1 (M-1) .
[00581] Etapa 4: Ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1H-1,2,3-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0102
[00582] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-2-((1H-1,2,3-triazol-1- il)metil)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)- 2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4- oxoazetidina-1-sulfônico (80 mg, 0,121 mmol), DCM (4 mL) e TFA (1 mL, 13 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (T3, 30 x 150 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 1 mL/min), proporcionando o composto do título (12 mg, 20%) como um sólido branco. LCMS : m/z = 500,9 (M-1) ; 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,95 (s, 1 H), 7,67 (s, 1 H), 7,04 (s, 1 H), 5,38 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,88-4,80 (m, 1 H), 4,78-4,70 (m, 2H assumido; obscurecido por pico residual de solvente), 1,34 (s, 6H).
Exemplo 51:Áçido.lz(((2R13Slz3z((Z)z2z(2zaminotiazolz4zil)z2zf((2z carboxipropan-2-il)óxi)imino)acetamido)-4-oxo-1-sulfoazetidin- 2-il)metil)-1H-1,2,3-triazol-4-carboxílico.
[00583] Etapa 1: Ácido (2R, 3S )-3-(( Z)-2-(((1-( terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(terc- butoxicarbonil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidina-1- sulfônico. A uma solução de Intermediário K (157 mg, 0,248 mmol) em uma mistura de DMSO: água: terc-butanol (1:1:1, 2,0 mL) a 0 °C foram adicionados terc-butil propiolato (68 μL, 0,496 mmol), CuSO4 (20 mg, 0,124 mmol) e L-ascorbato de sódio (198 mg, 0,372 mmol). A mistura resultante foi gradualmente trazida para temperatura ambiente e agitada durante 3 h, e então foi diluída com água (20 mL) e extraída com EtOAc (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, concentradas em vácuo, dissolvidas em água e liofilizadas, proporcionando o composto do título (180 mg, 96%) como um sólido amarelo claro; LCMS : m/z = 759,3 (M+1).
[00584] Etapa 2: Ácido 1-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2- (((2-carboxipropan-2-il)óxi)imino)acetamido)-4-oxo-1- sulfoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,3-triazol-4-carboxílico.
Figure img0103
[00585] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tia- zol-4-il)acetamido)-2-((4-(terc-butoxicarbonil)-1H-1,2,3-triazol-1- il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (180 mg, 0,237 mmol), DCM (8 mL) e TFA (2 mL, 26 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (T3, 30 x 150 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 1 mL/min), proporcionando o composto do título (35 mg, 27%) como um sólido branco. LCMS : m/z = 544,9 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 8,43 (s, 1 H), 6,99 (s, 1 H), 5,38 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 4,92-4,71 (m, 3H; parcialmente obscurecido por pico residual de solvente), 1,33 (s, 6H).
Exemplo 52: Ácido 2-((( Z-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-(aminometil)-2 H -1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1 -(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00586] Etapa 1: terc-butil 2-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((( terc - butoxicarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato.
[00587] Geral procedimento para a reação de Mitsunobu. A uma solução de Intermediário H (300 mg, 0,569 mmol), terc-butil ((2H-1,2,3- triazol-4-il)metil)carbamato (135 mg, 0,682 mmol) e trifenilfosfina (178 mg, 0,682 mmol) em THF (10 mL) a 0 °C foi adicionado DIAD (145 mg, 0,682 mmol), gota a gota. Depois de agitar em ta durante 16 h, a solução foi concentrada e purificada por cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 2-5%), proporcionando o composto do título (300 mg, 75%) como uma espuma amarela. LCMS : m/z = 706,2 (M+1).
[00588] Etapa 2: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-((4-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. terc-Butil 2-(((Z)-(2- (((2R,3S)-2-((4-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato (220 mg, 0,311 mmol) em DMF (5 mL) foi tratado com SO3^DMF (476 mg, 3,11 mmol). A solução foi agitada em ta durante 48 h, em seguida concentrada em vácuo e purificada com resina HP21 (ACN-água, 10-50%), proporcionando o composto do título (82 mg, 33%). LCMS : m/z = 786,2 (M-1).
[00589] Etapa 3: Ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H- 1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0104
[00590] Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopro- pan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol- 2-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (82 mg, 0,104 mmol) foi agitado com ácido fórmico (2,0 mL) em ta durante 5 h, que removeu os grupos Boc. Depois de concentração em vácuo, o material foi dissolvido em DCM (1,5 mL), resfriado a 0 °C e tratado com TFA (0,5 mL, 6,5 mmol) durante 1 h, e então foi concentrado em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (T3, 30 x 150 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 1 mL/min), proporcionando o composto do título (17,2 mg, 31%) como um sólido branco. LCMS : m/z = 529,9 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,67 (s, 1 H), 6,92 (s, 1 H), 5,39 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,86-4,74 (m, 3H assumido; obscurecido por pico residual de solvente), 4,16 (s, 2 H), 1,25 (s, 3 H), 1,23 (3H, s). Exemplo 53^Áçido 2zíííZlzí1-í2:aminotiazol:4:il}:2z(((2R13Sl:2z((4z (guanidinometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0105
[00591] A uma solução de ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4- (aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)ami- no)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico (60 mg, 0,089 mmol) e cloridrato de pirazol-1-carboxamida (16 mg, 0,11 mmol) em DMF (3 mL) foi adicionado DIPEA (45 μL, 0,27 mmol). Depois de agitar durante 16 h, a solução foi concentrada e lavada com éter. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XBridge, 30 x 150 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 1 mL/min), proporcionando o composto do título (7,5 mg, 15%) como um sólido branco. LCMS : m/z = 571,9 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,55 (s, 1 H), 6,78 (s, 1 H), 5,38 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 4,82-4,76 (m, 1H assumido; obscurecido por pico residual de solvente), 4,76-4,72 (m, 2H assumido; obscurecido por pico residual de solvente), 4,32 (s, 2 H), 1,15 (s, 3 H), 1,14 (s, 3H).
Exemplo 54: Ácido 2-((( Z)-(2-((( 2R, 3S )-2-((2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00592] Etapa 1: terc-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((2H-1,2,3-triazol- 2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato. O procedimento geral para a reação de Mitsunobu foi seguido usando o Intermediário H (300 mg, 0,569 mmol), 1,2,3- triazol (47 mg, 0,682 mmol), trifenilfosfina (178 mg, 0,682 mmol), DIAD (145 mg, 0,682 mmol) e THF (10 mL). Purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 2-5%), proporcionando o composto do título (320 mg, 97%) como uma espuma amarela. LCMS : m/z = 579,2 (M+1).
[00593] Etapa 2: Ácido (2R,3S)-2-((2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-3-((Z)- 2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidina-1- sulfônico. terc-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (320 mg, 0,553 mmol) em DMF (5 mL) foi tratado com SOa^DMF (846 mg, 5,53 mmol). A solução foi agitada em ta durante 24 h, em seguida concentrada em vácuo e purificada com resina HP21 (ACN-água, 10-50%), proporcionando o composto do título (70 mg, 19%). LCMS : m/z = 657,1 (M-1).
[00594] Etapa 3: Ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0106
[00595] (2R,3S)-2-((2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-3-((Z)-2-(((1-(terc- butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicar- bonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (70 mg, 0,11 mmol) foi agitada com ácido fórmico (2,0 mL) em ta durante 4 h, em seguida concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XBridge, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 1 mL/min), proporcionando o composto do título (8,1 mg, 1 5%) como um sólido branco. LCMS : m/z = 500,9 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,60 (s, 2 H), 6,94 (s, 1 H), 5,39 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), ), 4,834,78 (m, 2 H), 4,78-4,68 (m, 1H assumido; obscurecido por pico residual de solvente), 1,26 (s, 3 H), 1,25 (s, 3H).
Exemplo 55: Ácido 2-((( Z )-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2 R ,3 S )-2-((4- metil-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00596] Etapa 1: terc-Butil 2-((( Z)-(1-(2-(( terc-butoxicarbo- nil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-metil-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato. O procedimento geral para a reação de Mitsunobu foi seguido usando o Intermediário H (300 mg, 0,569 mmol), 4-metil-1,2,3-triazol (83 mg, 0,683 mmol), trifenilfosfina (179 mg, 0,683 mmol), DIAD (138 mg, 0,648 mmol) e THF (8 mL). Purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 24%), proporcionando o composto do título (160 mg, 47%) como uma espuma amarela. LCMS : m/z = 591 (M-1).
[00597] Etapa 2: Ácido (2R,3 S )-3-(( Z)-2-(((1-( terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-metil-2H-1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. terc-Butil 2-(((Z)-(1- (2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-metil-2H- 1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (160 mg, 0,270 mmol) em DMF (5 mL) foi tratado com SO3^DMF (413 mg, 2,70 mmol). A solução foi agitada em ta durante 16 h, em seguida concentrada em vácuo e purificada com resina HP21 (ACN-água, 10-50%), proporcionando o composto do título (77 mg, 43%). LCMS : m/z = 671,1 (M-1).
[00598] Etapa 3: Ácido 2-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2- (((2R,3S)-2-((4-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoico.
Figure img0107
[00599] Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1- oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1- sulfônico (67 mg, 0,10 mmol) foi agitado com ácido fórmico (1,5 mL) em ta durante 3,5 h, em seguida concentrado em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XBridge, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 1 mL/min), proporcionando o composto do título (13,7 mg, 27%) como um sólido branco. LCMS : m/z = 514,9 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,39 (s, 1 H), 6,94 (s, 1 H), 5,38 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,80-4,60 (m, 3H assumido; obscurecido por pico residual de solvente), 2,10 (s, 3 H), 1,26 (s, 3 H), 1,25 (s, 3H).
Exemplo 56: Ácido 2-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4 H -1,2,4-triazol-4- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00600] Etapa 1: terc-Butil 2-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4 H -1,2,4- triazol-4-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato. Uma solução de hidrazida de ácido fórmico (27,4 mg, 0,456 mmol) e ortoformiato de trietila (67,6 mg, 0,456 mmol) em MeOH (5 mL) foi aquecida em refluxo durante 4 h. Depois de resfriar a 40 °C, o Intermediário L (120 mg, 0,228 mmol) foi adicionado, e a mistura foi aquecida em refluxo durante um adicional de 20 h. Ao resfriar em ta, o solvente foi evaporado em vácuo, e o resíduo resultante foi dissolvido em EtOAc, lavado com água, salmoura, secado em Na2SO4 e concentrado em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (0-10% de MeOH- EtOAc), proporcionando o composto do título (95 mg, 72%) como uma espuma. LCMS : m/z = 529,1 (M+1).
[00601] Etapa 2: Ácido (2R,3S)-2-((4H-1,2,4-triazol-4-il)metil)-3- ((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4- oxoazetidina-1-sulfônico. terc-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4H- 1,2,4-triazol-4-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato (95 mg, 0,16 mmol) em DMF (2 mL) foi tratado com SO3^DMF (251 mg, 1,64 mmol). A solução foi agitada em ta durante 24 h e então mais SO3^DMF (502 mg, 3,28 mmol) foi adicionado, e a solução agitada durante um adicional de 72 h. Foi diluída com água e extraída com EtOAc (2x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (2x), secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo, proporcionando o composto do título (77 mg) como um sólido. LCMS : m/z = 657,1 (M-1).
[00602] Etapa 3: Ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4H-1,2,4-triazol- 4-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)- 2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0108
[00603] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-2-((4H-1,2,4-triazol-4-il)metil)-3- ((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (77 mg, 0,117 mmol), DCM (3 mL) e TFA (1 mL, 13,0 mmol) durante 2 h. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XBridge, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 1 mL/min), proporcionando o composto do título (5,6 mg, 10%) como um pó branco. LCMS : m/z = 500,8 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 8,52 (s, 2 H), 6,90 (s, 1 H), 5,30 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,56 (m, 2 H), 4,42 (q, 1 H), 1,30 (s, 6H).
Exemplo 57: Ácido 2-((( Z-(2-(((2 R ,3 S )-2-((( R )-5-(aminometil)-2- oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00604] Etapa 1: terc-Butil 2-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-(((( S )-3-(( terc - butoxicarbonil)amino)-2-hidroxipropil)amino)metil)-4-oxoazetidin-3- il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilide- no)amino)óxi)-2-metilpropanoato. Uma solução de Intermediário L (250 mg, 0,475 mmol) e (R)-terc-butil (oxiran-2-ilmetil)carbamato (410 mg, 2,38 mmol) em DCM (3 mL) foi agitada em ta durante 16 h, em seguida concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 4-10%), proporcionando o composto do título (250 mg, 75%) como um sólido branco. LCMS : m/z = 698,1 (M-1).
[00605] Etapa 2: terc-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(((terc- butoxicarbonil)amino)metil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato. A uma solução de terc-butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- (((2R,3S)-2-((((R)-2-hidroxipropil)amino)metil)-4-oxoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (250 mg, 0,357 mmol) em DCM (10 mL) a 0 °C foi adicionado CDI (104 mg, 0,643 mmol). Depois de agitar a 15 °C durante 2 h, a solução foi concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 3-5%) para proporcionar o composto do título (155 mg, 60%). LCMS : m/z = 724,0 (M-1).
[00606] Etapa 3: Ácido (2R,3 S )-3-((Z)-2-(((1-( terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-(((R)-5-(((terc- butoxicarbonil)amino)metil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4- oxoazetidina-1-sulfônico. terc-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5- (((terc-butoxicarbonil)amino)metil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (155 mg, 0,213 mmol) em DMF (1 mL) foi tratado com SO3^DMF (130 mg, 0,854 mmol). A solução foi agitada em ta durante 2 h e então foi concentrada em vácuo e purificada com resina HP21 (ACN-água, 10-50%), proporcionando o composto do título (160 mg, 93%) como um sólido branco. LCMS : m/z = 804,0 (M-1).
[00607] Etapa 4: Ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-(aminometil)-2- oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0109
[00608] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-(((R)-5-(((terc- butoxicarbonil)amino)metil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxoazetidina- 1-sulfônico (160 mg, 0,199 mmol), DCM (1,5 mL) e TFA (500 μL, 6,49 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (85,8 mg, 78%) como um pó branco. LCMS : m/z = 548,0 (M+1); 1H RMN (400 MHz, D2O) δ ppm 6,93 (s, 1 H), 5,23 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,76-4,69 (m, 1 H), 4,54-4,49 (m, 1 H), 3,84 (t, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,56 (dd, J = 14,8, 9,6 Hz, 1 H), 3,41-3,34 (m, 2 H), 3,21-3,11 (m, 2 H), 1,34 (s, 3 H), 1,32 (s, 3H).
Exemplo 58: Ácido 2-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((( S )-5-(aminometil)-2- oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00609] Etapa 1: terc-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((((R)-3-((terc- butoxicarbonil)amino)-2-hidroxipropil)amino)metil)-4-oxoazetidin- 3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato. Uma solução de Intermediário L (400 mg, 0,760 mmol) e (S)-terc-butil (oxiran-2- ilmetil)carbamato (658 mg, 3,80 mmol) em DCM (4 mL) foi agitada em ta durante 16 h, em seguida concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 4-10%), proporcionando o composto do título (390 mg, 73%) como um sólido branco. LCMS : m/z = 700,1 (M+1).
[00610] Etapa 2: terc-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((S)-5-(((terc- butoxicarbonil)amino)metil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato. A uma solução de terc-Butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((((R)-3-((terc-butoxicarbonil)amino)-2- hidroxipropil)amino)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato (390 mg, 0,557 mmol) em DCM (20 mL) a 0 °C foi adicionado CDI (162 mg, 1,00 mmol). Depois de agitar a 15 °C durante 2 h, a solução foi concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 3-5%) para proporcionar o composto do título (168 mg, 41%). LCMS : m/z = 726,1 (M+1).
[00611] Etapa 3: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-(((S)-5-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)-2- oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. terc-Butil 2- (((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((S)-5-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)-2- oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato (168 mg, 0,231 mmol) em DMF (1 mL) foi tratado com SO3^DMF (142 mg, 0,926 mmol). A solução foi agitada em ta durante 2 h e então foi concentrada em vácuo e purificada com resina HP21 (ACN-água, 10-50%), proporcionando o composto do título (155 mg, 83%) como um sólido branco. LCMS : m/z = 804,0 (M-1).
[00612] Etapa 4: Ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((S)-5-(aminometil)- 2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0110
[00613] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-(((S)-5-(((terc- butoxicarbonil)amino)metil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxoazetidina- 1-sulfônico (155 mg, 0,192 mmol), DCM (1,5 mL) e TFA (500 μL, 6,49 mmol). Metade do resíduo bruto foi purificada por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (21,8 mg, aproximadamente 82%) como um pó branco. LCMS : m/z = 547,8 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O) δ ppm 6,96 (s, 1 H), 5,27 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 4,80-4,78 (m, 1 H), 4,524,47 (m, 1 H), 3,75-3,66 (m, 2 H), 3,49-3,45 (m, 1 H), 3,32-3,16 (m, 3 H), 1,37 (s, 3 H), 1,35 (s, 3H). Exemplo 59: Ácido 2-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2 R ,3 S )-2-((( S )- 5-(guanidinometil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoico.
Figure img0111
[00614] A uma solução de ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((S)-5- (aminometil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoico (0,096 mmol) e cloridrato de pirazol-1-carboxamidina (21 mg, 0,144 mmol) em DMF (3 mL) foi adicionado DIPEA (100 μL, 0,576 mmol). Depois de 16 h de agitação em ta, a solução foi concentrada em vácuo e lavada com éter. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (29 mg, 51%) como um sólido branco. LCMS m/z = 589,8 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O) δ ppm 6,93 (s, 1 H), 5,26 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 4,65-4,55 (m, 1 H), 4,52-4,45 (m, 1 H), 3,69-3,61 (m, 2 H), 3,44-3,30 (m, 4 H), 1,34 (s, 3 H), 1,32 (s, 3H).
Exemplo 60: Ácido 2-(((Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((3- metil-1 H -1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00615] Etapa 1, Composto A: Benzil ((2 R ,3 S )-1-(2,4- dimetoxibenzil)-2-((3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)carbamato.
[00616] Etapa 1, Composto B: Benzil ((2 R ,3 S )-1-(2,4- dimetoxibenzil)-2-((5-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)carbamato.
[00617] ((2S,3S)-3-(((benzilóxi)carbonil)amino)-1-(2,4- dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-2-il)metil metanossulfonato (3,74 g, 8,0 mmol), 3-metil-1H-1,2,4-triazol (2,00 g, 24,0 mmol), K2CO3 (6,64 g, 48,0 mmol) e NaI (2,88 g, 17,2 mmol) foram suspensos em DMF (16 mL) e aquecidos a 70 °C com agitação. Depois de 24 h, a mistura foi concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 2%) para proporcionar os compostos título (1,64 g, 44% combinada) como um sólido esbranquiçado (mistura inseparável). LCMS : m/z = 466,2 (M+1).
[00618] Etapa 2, Composto A: Benzil ((2R,3S)-2-((3-metil-1 H- 1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato.
[00619] Etapa 2, Composto B: Benzil ((2R,3S)-2-((5-metil-1 H- 1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato.
[00620] Preparado de acordo com Mastalerz et al. J. Med. Chem, 1988, 31, 1190. A uma solução de compostos A/B, etapa 1 (1,60 g, 3,44 mmol) em ACN:água (2:1, 45 mL) foi adicionado K2S2O8 (1,86 g, 6,88 mmol) seguido por K2HPO4 (1,50 g, 8,60 mmol). A mistura resultante foi aquecida a 90 °C durante 4 h, e então foi resfriada em ta, em seguida diluída com EtOAc, e as camadas separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3 x), e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 10%), para proporcionar os compostos título (mistura, 670 mg, 62%) como um sólido branco. A mistura também foi purificada por meio de HPLC quiral (Chiralcel-OJ, 2 x 25 cm, EtOH-Hexanos, 18%), proporcionando o composto A (250 mg) e composto B (240 mg).
[00621] Etapa 3: (3S,4R)-3-amino-4-((3-metil-1 H-1,2,4-triazol-1- il)metil)azetidin-2-ona.
[00622] Uma pasta fluida de benzil ((2R,3S)-2-((3-metil-1H-1,2,4- triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (250 mg, 0,79 mmol) e Pd em C (10%, 100 mg) em MeOH (20 mL) foi evacuada e carregada outra vez com H2 (3x), levando a pressão final para 2,46 kg/cm2 (35 psi) . Depois de 2 h de agitação, a mistura foi filtrada em celite, lavando com MeOH, e o filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte.
[00623] Etapa 4: terc-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato. A uma solução de ácido (Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (310 mg, 0,72 mmol), (3S,4R)- 3-amino-4-((3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)azetidin-2-ona (130 mg, 0,72 mmol) e EDCI (150 mg, 0,79 mmol) em DMF (5 mL) a 0 °C foi adicionado piridina (64 μL, 0,79 mmol). Depois de agitar em ta durante 24 h, mais ácido (Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2- il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (310 mg, 0,72 mmol) e EDCI (150 mg, 0,79 mmol) foram adicionados, juntamente com HOBt (110 mg, 0,79 mmol) e DIPEA (250 μL, 1,44 mmol). Depois de um adicional de 16 h de agitação, foram concentrados em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 5%), proporcionando o composto do título (230 mg, 54%) como um sólido branco. LCMS : m/z = 593,0 (M+1).
[00624] Etapa 5: Ácido (2R,3 S )-3-(( Z)-2-(((1-( terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)acetamido)-2-((3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4- oxoazetidina-1-sulfônico. terc-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbo- nil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((3-metil-1H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato (230 mg, 0,388 mmol) em DMF (4 mL) foi tratado com SO3^DMF (594 mg, 3,88 mmol). Depois de 24 h de agit ação, a solução foi concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado com resina HP21 (ACN-água, 5-50%), proporcionando o composto do título (100 mg, 38%) como um sólido amarelo pálido. LCMS : m/z = 673,1 (M+1).
[00625] Etapa 6: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)- 2-((3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0112
[00626] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)acetamido)-2-((3-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4- oxoazetidina-1-sulfônico (100 mg, 0,149 mmol), DCM (4,0 mL) e TFA (1,0 mL, 13,0 mmol) durante 3 h. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (50 mg, 65%) como um pó branco. LCMS : m/z = 514,7 (M-1); 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,40 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 8,72 (br s, 1 H), 6,78 (s, 1 H), 5,25 (dd, J = 8,8, 5,6 Hz, 1 H), 4,61 (dd, J = 14,4, 5,2 Hz, 1 H), 4,47 (dd, J = 14,4, 6,0 Hz, 1 H), 4,33 (dd, J = 6,0, 5,2 Hz, 1 H), 2,30 (s, 3 H), 1,42 (s, 3 H), 1,38 (s, 3H).
Exemplo 61: Ácido 2-(((Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5- metil-1 H -1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00627] Etapa 1: (3S,4R)-3-amino-4-((5-metil-1 H-1,2,4-triazol-1- il)metil)azetidin-2-ona.
[00628] Uma pasta fluida de benzil ((2R,3S)-2-((5-metil-1H-1,2,4- triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (240 mg, 0,76 mmol) e Pd em C (10%, 100 mg) em MeOH (20 mL) foi evacuada e carregada outra vez com H2 (3x), levando a pressão final para 2,46 kg/cm2 (35 psi). Depois de 2 h de agitação, a mistura foi filtrada em celite, lavando com MeOH, e o filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte.
[00629] Etapa 2: terc-Butil 2-((( Z)-(1-(2-(( terc - butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5-metil-1H-1,2,4- triazol-1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)ami- no)óxi)-2-metilpropanoato. A uma solução de ácido (Z)-2-(((1- (terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (310 mg, 0,72 mmol), (3S,4R)-3-amino-4-((5-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)azetidin-2-ona (130 mg, 0,72 mmol) e EDCI (150 mg, 0,79 mmol) em DMF (5 mL) a 0 °C foi adicionado piridina (64 μL, 0,79 mmol). Depois de agitar em ta durante 24 h, foi concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 10%), proporcionando o composto do título (190 mg, 45%) como um sólido branco. LCMS : m/z = 593,0 (M+1).
[00630] Etapa 3: Ácido (2R,3 S )-3-(( Z)-2-(((1-( terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)a- mino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)- 4-oxoazetidina-1-sulfônico. terc-Butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicar- bonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((5-metil-1H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metil- propanoato (180 mg, 0,304 mmol) em DMF (4 mL) foi tratado com SOa^DMF (466 mg, 3,04 mmol). Depois de 24 h de agitação, a solução foi concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado com resina HP21 (ACN-água, 0-50%), proporcionando o composto do título (80 mg, 39%) como um sólido branco. LCMS : m/z = 671,0 (M+1).
[00631] Etapa 4: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)- 2-((5-metil-1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0113
[00632] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((5-metil-1H-1,2,4-triazol- 1-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (80 mg, 0,119 mmol), DCM (4,0 mL) e TFA (1,0 mL, 13,0 mmol) durante 3 h. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (15 mg, 24%) como um pó branco. LCMS : m/z = 514,8 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,86 (s, 1 H), 6,89 (s, 1 H), 5,36-5,28 (m, 1 H), 4,78-4,66 (m, 1H assumido; obscurecido por pico residual de solvente), 4,544,44 (m, 1 H), 4,42-4,30 (m, 1 H), 2,35 (s, 3 H), 1,25 (s, 6H). Exemplo 62: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4- (formimidamidometil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoico.
Figure img0114
[00633] A uma solução de ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4- (aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoico (100 mg, 0,159 mmol) e cloridrato de etilformamidato (17,4 mg, 0,159 mmol) em DMF (1 mL) foi adicionado DIPEA (41 mg, 0,32 mmol). Depois de 2 h de agitação, mais cloridrato de etilformamidato (9,0 mg, 0,082 mmol) e DIPEA (20 mg, 0,16 mmol) foram adicionados. Depois de um adicional de 4 h, a solução foi concentrada e lavada com éter. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (15,5 mg, 18%) como mistura de tautômeros de amidina. LCMS : m/z = 556,8 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,73 (s, 0,4 H), 7,65 (s, 0,6 H), 7,57 (m, 1 H), 6,83 (s, 1 H), 5,37 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,80-4,61 (m, 3H assumido; obscurecido por pico residual de solvente) 4,48 (s, 0,4 H), 4,45 (s, 0,6 H), 1,17 (s, 3 H), 1,15 (s, 3H).
Exemplo 63: Ácido 2-((( Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2 R ,3 S )-2-((( S )- 5-(hidroximetil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00634] Etapa 1: Terc-butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)a- mino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((S)-9-hidróxi-2,2-dimetil-5,7-dioxa- 11-aza-2-siladodecan-12-il)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato. A uma solução de terc- butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(aminometil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato (500 mg, 0,95 mmol) em DCM (5 mL) foi adicionado (S)-trimetil (2-((oxiran-2-ilmetóxi)metóxi)etil)silano (485 mg, 2,38 mmol). Depois de agitar em ta durante 12 h, outros 2,5 equiv de (S)- trimetil (2-((oxiran-2-ilmetóxi)metóxi)etil)silano foram adicionados. Depois de agitar em ta durante adicional de 12 h, a mistura reacional foi concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 2-10%) para proporcionar o composto do título (155 mg, 22%). LCMS : m/z = 731,4 (M+1).
[00635] Etapa 2: Terc-butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-(((S)-2-oxo-5-(((2- (trimetilsilil)etóxi)metóxi)metil)oxazolidin-3-il)metil)azetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato. A uma solução de terc-butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2- ((S)-9-hidróxi-2,2-dimetil-5,7-dioxa-11-aza-2-siladodecan-12-il)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (155 mg, 0,21 mmol) em DCM (10 mL) a 0 °C foi adicionado CDI (62 mg, 0,38 mmol). Depois de agitar a <15 °C durante 2 h, a mistura reacional foi concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 3-5%) para proporcionar o composto do título (130 mg, 81%). LCMS : m/z = 755,3 (M-1).
[00636] Etapa 3: Ácido (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-oxo-4-(((S)-2-oxo-5-(((2- (trimetilsilil)etóxi)metóxi)metil)oxazolidin-3-il)metil)azetidina-1- sulfônico. A uma solução de terc-butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-(((S)-2-oxo- 5-(((2-(trimetilsilil)etóxi)metóxi)metil)oxazolidin-3-il)metil)azetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (130 mg, 0,17 mmol) em DMF (1 mL) foi adicionado SOa^DMF (105 mg, 0,69 mmol). Depois de agitar em ta durante 2 h, a mistura reacional foi concentrada em vácuo. A mistura bruta foi purificada por meio de resina HP21 (ACN- água, 10-50%) para proporcionar o composto do título (140 mg, 97%). LCMS : m/z = 705,42 (M-SEM).
[00637] Etapa 4: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)- 2-(((S)-5-(hidroximetil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoico.
Figure img0115
[00638] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (3S,4R)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)acetamido)-2-oxo-4-(((S)-2-oxo-5-(((2-(trimetilsilil)etó- xi)metóxi)metil)oxazolidin-3-il)metil)azetidina-1-sulfônico (140 mg, 0,17 mmol), DCM (2 mL) e TFA (1 mL) durante 3 h. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (28 mg, 30%) LCMS : m/z = 549,0 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,00 (s, 1 H), 5,23 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 4,80-4,70 (m, 1 H), 4,45-4,40 (m, 1 H), 4,10-3,95 (m, 2 H), 3,77 (t, J = 9,2 Hz, 1 H), 3,49 (t, J = 7,6 Hz, 2 H), 3,39 (m, 1 H), 1,39 (s, 3 H), 1,38 (s, 3H).
Exemplo 64: (S)-2-(((Z-(1 -(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2- oxo-4-((2-oxooxazolidin-3-il)metil)azetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)-3-(4-( N -(piperidin-4- il)carbamimidoil)fenóxi)propanoico.
[00639] Etapa 1: terc-Butil (4-(2-oxo-2-(((3 S ,4 R )-2-oxo-4-((2- oxooxazolidin-3-il)metil)azetidin-3-il)amino)acetil)tiazol-2- il)carbamato. Preparado de uma maneira análoga ao intermediário E, usando o intermediário D (0,776 g, 4,19 mmol), ácido 2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoacético (1,141 g, 4,19 mmol), HATU (3,071 g, 8,08 mmol) em DMF (20 mL) seguido por DIPEA (3,66 mL, 20,95 mmol). LCMS : Ta = 0,60 min, m/z = 440,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00640] Etapa 2: Ácido (3S,4R)-3-(2-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)-2-oxoacetamido)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3- il)metil)azetidina-1-sulfônico. Preparado de uma maneira análoga ao intermediário F, usando terc-butil (4-(2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((2- oxooxazolidin-3-il)metil)azetidin-3-il)amino)acetil)tiazol-2-il)carbamato (500 mg, 1,138 mmol), SOa^DMF (523 mg, 3,41 mmol) em DMF (5,7 mL). LC/MS: Ta = 0,54 min; m/z = 520,0 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00641] Etapa 3: Ácido (3S,4R)-3-((Z)-2-((((S)-1-(benzidrilóxi)-3- (4-(N-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4-il)carbamimidoil)fenó- xi)-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)acetamido)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3-il)metil)a- zetidina-1-sulfônico. A uma solução de ácido (3S,4R)-3-(2-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoacetamido)-2-oxo-4-((2- oxooxazolidin-3-il)metil)azetidina-1-sulfônico (170 mg, 0,328 mmol) em CHCl3 (2 mL, relação: 1) e EtOH (6 mL, relação: 3) foi adicionado (S)-terc-butil 4-(4-(2-(aminoóxi)-3-(benzidrilóxi)-3-oxopropó- xi)benzimidamido)piperidina-1-carboxilato (preparado de acordo com WO2013110643, 193 mg, 0,328 mmol). Depois de agitar durante 2 h, AcOH (19 μL, 0,328 mmol) foi adicionado. Depois de 12 h, mais solução de (3S,4R)-3-(2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoacetamido)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3-il)metil)azetidina-1- sulfônico (170 mg, 0,328 mmol) em 3:1 CHCl3:EtOH foi adicionado. Depois de agitar durante 45 h, foi concentrada em vácuo, e o resíduo bruto foi purificado com resina HP21 (10-100% ACN-água), proporcionando o composto do título (117 mg, 33%) como um sólido esbranquiçado. LCMS : Ta = 0,96 min, m/z = 1091,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00642] Etapa 4: Ácido (S)-2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2- (((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin-3-il)metil)-1-sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)-3-(4-(N-(piperidin-4- il)carbamimidoil)fenóxi)propanoico.
Figure img0116
[00643] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (3S,4R)-3-((Z)-2-((((S)-1- (benzidrilóxi)-3-(4-(N-(1-(terc-butoxicarbonil)piperidin-4- il)carbamimidoil)fenóxi)-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-oxo-4-((2-oxooxazolidin- 3-il)metil)azetidina-1-sulfônico (117 mg, 0,107 mmol), DCM (5,3 mL) e TFA (0,413 mL, 5,37 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 μM, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (23 mg, 28%) como um pó branco. LC/MS: Ta = 0,42 min, m/z = 724,5 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 9,53 (d, J = 7,57 Hz, 1 H),9,43-9,36 (m, 2 H), 9,01 (br s, 1 H),8,53-8,36 (m, 2 H), 7,72 (d, J = 8,5 Hz, 3 H), 7,26 (br s, 2 H), 7,15 (d, J = 8,8 Hz, 2 H), 6,82 (s, 1 H), 5,19 (dd, J = 8,7, 5,8 Hz, 1 H), 5,02 (t, J = 3,8 Hz, 1 H), 4,51-4,42 (m, 2 H), 4,12-3,96 (m, 3 H), 3,90-3,81 (m, 1 H), 3,73 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 3,69-3,62 (m, 1 H), 3,58-3,53 (m, 1 H), 3,20-3,16 (m, 1 H), 2,98-2,85 (m, 1H) 2,13-2,04 (m, 1 H), 1,85-1,72 (m, 1H). Exemplo 65: Ácido 2-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3 S ,4 R )- 2-oxo-4-((4-((sulfamoilamino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-1- sulfoazetidin-3-il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0117
[00644] Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 53, usando sal de TFA de ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)- 2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico, composto bruto (200 mg, 0,318 mmol), terc-butil clorossulfonil carbamato (68 mg, 0,318 mmol), DIPEA (113 mL, 0,636 mmol) e DMF (1 mL). LCMS : m/z = 609,1 (M-1), 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,65 (s, 1 H), 6,98 (s, 1 H), 5,40 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 4,85-4,83 (m, 1 H), 4,76-4,74 (m, 2 H), 4,13 (s, 2 H), 1,26 (s, 3 H), 1,25 (s, 3H).
[00645] Preparação de terc-butil clorossulfonil carbamato: A uma solução de terc-butanol (3,2 g, 36,9 mmol) em benzeno (13 mL) foi adicionado cloreto de sulfurisocianatidoíla (3,5 mL, 36,6 mmol). Depois de agitar em ta durante 2 h, a mistura reacional foi extinguida com hexano. A mistura foi resfriada em um banho com gelo, que resultou em precipitação de sólido branco. O sólido foi filtrado, lavado com hexano, secado e usado na próxima etapa imediatamente (3,2 g, 41%). Exemplo 66: Ácido (S )-3-(4-( N -(2-aminoetil)carbamimidoil)fenóxi)- 2-((( Z-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-(aminometil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1 -(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)propanoico.
Figure img0118
[00646] Preparado de maneira análoga ao exemplo 31, usando terc-butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3- triazol-4-il)metil)carbamato e ácido (S,Z)-2-(((1-(benzidrilóxi)-3-(4-(N- (2-((terc-butoxicarbonil)amino)etil)carbamimidoil)fenóxi)-1-oxopropan- 2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (preparado de acordo com WO2013110643). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 μM, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min). LCMS : Ta = 0,25 min, m/z = 695,2 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,48 (s, 3 H), 8,99 (s, 1 H), 8,21 (s, 4 H), 7,89 (s, 4 H), 7,82-7,77 (m, 2 H), 7,71 (s, 1 H), 7,22 (dd, J = 10,5, 8,2 Hz, 4 H), 6,72 (s, 1 H), 5,33 (dd, J = 9,3, 5,5 Hz, 1 H), 4,99 (dd, J = 5,7, 3,3 Hz, 1 H), 4,90 (ddd, J = 12,8, 8,0, 3,9 Hz, 1 H), 4,78-4,68 (m, 2 H), 4,51-4,36 (m, 3 H), 4,08 (s, 3 H), 3,13 (s, 2H). Exemplo 67: Ácido (S)-2-(((Z-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-3-(4-( N -(2- aminoetil)carbamimidoil)fenóxi)propanoico.
Figure img0119
[00647] Preparado de maneira análoga ao exemplo 66, usando (3S,4R)-4-((1H-1,2,4-triazol-1-il)metil)-3-aminoazetidin-2-ona. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 μM, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min). LCMS : Ta = 0,25 min, m/z = 666,1 (M+1) Método 2 m_acídico. Exemplo 68: (S )-2-((( Z-(2-(((2 R ,3 S )-2-((1 H -1,2,4-triazol-1-il)metil)-4- oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1 -(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-3-(4-( N -(azetidin-3- il)carbamimidoil)fenóxi)propanoico.
Figure img0120
[00648] Preparado de maneira análoga ao exemplo 64, usando o intermediário F e (S)-terc-butil 3-(4-(2-(aminoóxi)-3-(benzidrilóxi)-3- oxopropóxi)benzimidamido)azetidina-1-carboxilato (preparado de acordo com WO2013110643). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 μM, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min). LCMS : Ta = 0,35 min, m/z = 678,2 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6): δ 13,68-13,03 (m, 1 H), 10,02 (d, J = 5,9Hz, 1 H), 9,57-9,51 (m, 2 H), 9,05 (brs, 1 H), 8,91-8,76 (m, 2 H), 8,39 (s, 1 H), 7,91 (s, 1 H), 7,69 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,30 (br s, 2 H), 6,92 (d, J = 8,8 Hz, 2 H), 6,80 (s, 1 H), 5,12-5,04 (m, 2 H), 4,74-4,66 (m, 1 H), 4,54 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 4,49-4,35 (m, 3 H), 4,31-4,16 (m, 5 H). Exemplo 69: Composto de ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((3- aminopropil)amino)metil)-1 H -1,2,3-triazol-1 -il)metil)-4-oxo-1 - sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico com ácido fórmico (1:1).
Figure img0121
[00649] Preparado de maneira análoga ao exemplo 28, usando ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-1H-1,2,3-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico (20 mg, 0,038 mmol), terc-butil (3 bromopropil)carbamato (60 mg, 0,252 mmol), DIPEA (0,1 mL, 0,572 mmol), e DMF (0,5 mL). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (Xselect CSH, 19 x 100 mm, 5 μM, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min). LCMS : Ta = 0,29 min, m/z = 587,1 (M+1) Método 2 m_acídico,1H RMN (500 MHz, D2O) δ 8,31 (s, 1 H), 8,14 (s, 1 H), 6,93 (s, 1 H), 5,32 (d, J = 5,1 Hz, 1 H), 4,86-4,78 (m, 2 H), 4,73-4,66 (m, 1H assumido; obscurecido por pico residual de solvente), 4,29 (s, 2 H), 3,04-3,01 (m, 2 H), 2,97-2,92 (m, 2 H), 1,96 (p, J = 7,9 Hz, 2 H), 1,22-1,11 (m, 2 H), 1,10-0,96 (m, 2H).
Exemplo 70: Ácido 2-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((3-(2-aminoetil)-2- oxoimidazolidin-1 -il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1 -(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00650] Etapa 1: Terc-butil 2-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)a- mino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(11,11-dimetil-9-oxo-10-oxa-2,5,8- triazadodecil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato. A uma solução de terc-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-aminoetil)amino)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (100 mg, 0,176 mmol) em DCE (1,8 mL) foi adicionado terc-butil (2-oxoetil)carbamato (27,9 mg, 0,176 mmol). Depois de agitar durante 2 h, triacetoxiboroidreto de sódio (112 mg, 0,527 mmol) foi adicionado. Depois de 12 h, a mistura reacional foi extinguida com NaHCO3 (aq) saturado e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. Foi usada como bruta na etapa 2.
[00651] Etapa 2: Terc-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)etil)-2-oxoimidazolidin-1-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato. Preparado de maneira análoga ao exemplo 3, etapa 3, usando terc-butil 2-(((Z)-(1- (2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-(11,11- dimetil-9-oxo-10-oxa-2,5,8-triazadodecil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (135 mg, 0,189 mmol), CDI (46,1 mg, 0,284 mmol), TEA (132 μl, 0,947 mmol) e clorofórmio (1,9 mL). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LC/MS: Ta = 1,02 min, m/z = 739,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00652] Etapa 3: Ácido (2R,3 S )-3-(( Z)-2-(((1-( terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((3-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)etil)-2-oxoimidazolidin-1-il)metil)-4- oxoazetidina-1-sulfônico. Preparado de maneira análoga ao exemplo 3, etapa 4, usando terc-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)etil)-2-oxoimidazolidin-1-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (60 mg, 0,081 mmol), SO3^DMF (124 mg, 0,812 mmol), DMF (812 μl). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LC/MS: Ta = 0,94 min, m/z = 819,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00653] Etapa 4: Ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((3-(2-aminoetil)-2- oxoimidazolidin-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0122
[00654] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)- 2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((3-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)etil)-2-oxoimidazolidin-1-il)metil)-4- oxoazetidina-1-sulfônico (42 mg, 0,051 mmol), TFA (237 μl, 3,08 mmol) em DCM (500 μL). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 μM, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min) para proporcionar o composto do título (1,2 mg, 4%). LC/MS: Ta = 0,35 min, m/z = 563,2 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 1H RMN 6,99 (s, 1 H), 5,32 (d, J = 5,9 Hz, 1 H), 4,564,50 (m, 1 H), 3,70 (dd, J = 15,1, 9,6 Hz, 1 H), 3,59-3,49 (m, 1 H), 3,46 3,30 (m, 4 H), 3,29-3,20 (m, 2 H), 3,08-3,02 (m, 2 H), 1,40 (s, 3 H), 1,38 (s, 3 H). Exemplo 71: Ácido (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-3-(4-( N -((S )-pirrolidin-3- il)carbamimidoil)fenóxi)propanoico.
Figure img0123
[00655] Preparado de maneira análoga ao exemplo 64, usando o intermediário F e (R)-terc-butil 3-(4-((S)-2-(aminoóxi)-3- (benzidrilóxi)-3-oxopropóxi)benzimidamido)pirrolidina-1-carboxilato (preparado de acordo com WO2013110643). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 μM, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min). LCMS : Ta = 0,39 min, m/z = 692,3 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6): δ 9,52 (d, J = 7,6Hz, 3 H), 9,11 (brs, 1 H), 8,92-8,78 (m, 2 H), 8,40 (s, 1 H), 7,92 (s, 1 H), 7,67 (d, J = 8,8 Hz, 2 H), 7,30 (brs, 2 H), 6,90 (d, J = 9,1 Hz, 2 H), 6,80 (s, 1 H), 5,11-5,04 (m, 2 H), 4,58-4,51 (m, 1 H), 4,48-4,35 (m, 4 H), 4,25-4,20 (m, 1 H), 3,53-3,44 (m, 1 H), 2,35-2,25 (m, 1 H), 2,20-2,11 (m,1 H).
Exemplo 72: Ácido 2-(((Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2- (((R )-5-(hidroximetil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoico.
[00656] Etapa 1: Terc-butil 2-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-(((( R )-3- (benzilóxi)-2-hidroxipropil)amino)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)- 1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)ami- no)óxi)-2-metilpropanoato. Preparado de maneira análoga ao exemplo 63, etapa 1, usando terc-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(aminometil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (200 mg, 0,38 mmol), (R)-2- ((benzilóxi)metil)oxirano (623 mg, 3,8 mmol), DCM ( 2 mL). O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH- DCM, 4-10%) para proporcionar o composto do título (126 mg, 48%). LCMS : m/z = 691,3 (M+1).
[00657] Etapa 2: Terc-butil 2-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((( R )-5- ((benzilóxi)metil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato. Preparado de maneira análoga ao exemplo 63 etapa 2, usando terc-butil 2-(((Z)-(2- (((2R,3S)-2-((((R)-3-(benzilóxi)-2-hidroxipropil)amino)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (126 mg, 0,182 mmol), CDI (53 mg, 0,33 mmol), DCM (5 mL). O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 3-5%) para proporcionar o composto do título (76 mg, 58%). LCMS : m/z = 715,3 (M-1).
[00658] Etapa 3: Terc-butil 2-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((( R )-5- ((benzilóxi)metil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (2R,3S)-2-(((R)-5- ((benzilóxi)metil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-3-((Z)-2-(((1-(terc- butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidina-1- sulfonato. Preparado de maneira análoga ao exemplo 63 etapa 3, usando terc-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5-((benzilóxi)metil)-2- oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato (76 mg, 0,11 mmol), SO3^DMF (65 mg, 0,42 mmol), DMF (1 mL). O resíduo bruto foi purificado por meio de resina HP21 (CH3CN-água, 10-50%) para proporcionar o composto do título (80 mg, 95%). LCMS : m/z = 797,3 (M+1).
[00659] Etapa 4: Ácido 2-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2- (((2R,3S)-2-(((R)-5-(hidroximetil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4- oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoico.
Figure img0124
[00660] A uma solução de terc-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-5- ((benzilóxi)metil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (2R,3S)-2-(((R)-5- ((benzilóxi)metil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-3-((Z)-2-(((1-(terc- butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidina-1- sulfonato (80 mg, 0,1 mmol) em DCM (10 mL) foi adicionado BCl3 (1 M em DCM, 0,6 mL). Depois de agitar em ta durante 15 min, a mistura reacional foi extinguida com EtOH e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (1,1 mg, 2%). LCMS : m/z = 549,0 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 6,96 (s, 1 H), 5,29 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 4,48 (m, 2 H), 3,73-3,35 (m, 6 H), 1,36 (s, 3 H), 1,35 (s, 3H). Exemplo 73: Ácido (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-3-(4-( N -((R )-pirrolidin-3- il)carbamimidoil)fenóxi)propanoico.
Figure img0125
[00661] Preparado de maneira análoga ao exemplo 64, usando o intermediário F e (S)-terc-butil 3-(4-((S)-2-(aminoóxi)-3-(benzidrilóxi)-3- oxopropóxi)benzimidamido)pirrolidina-1-carboxilato (preparado de acordo com WO2013110643). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 μM, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min). LCMS : Ta = 0,39 min, m/z = 692,3 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6): δ 9,52 (d, J = 7,6Hz, 3 H), 9,11 (br s, 1 H), 8,92-8,78 (m, 2 H), 8,40 (s, 1 H), 7,92 (s, 1 H) 7,67 (d, J = 8,8 Hz, 2 H), 7,30 (br s, 2 H), 6,90 (d, J = 9,1 Hz, 2 H), 6,80 (s, 1 H), 5,11-5,04 (m, 2 H), 4,51-4,58 (m, 1 H), 4,48-4,35 (m, 4 H), 4,25-4,19 (m, 1 H), 3,53-3,44 (m, 1 H), 2,35-2,26 (m, 1 H), 2,29-2,11 (m, 1 H). Exemplo 74: Ácido 2-(((Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((3- carbamoil-1 H -1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0126
[00662] Preparado de maneira análoga ao exemplo 4, usando terc- butil (1-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,4-triazol-3- carbonil)carbamato. LCMS : m/z = 544,0 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 8,41 (s, 1 H), 6,94 (s, 1 H), 5,36-5,32 (m, 1 H), 4,75-4,50 (m, 3H, parcialmente obscurecido por pico residual de solvente), 1,23 (s, 6H). Exemplo 75: Ácido (S)-2-(((Z-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1 -(5-amino-1,2,4- tiadiazol-3-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-3-(4-( N -(piperidin-4- il)carbamimidoil)fenóxi)propanoico.
Figure img0127
[00663] Preparado de maneira análoga ao exemplo 31, usando ácido 2-(5-((terc-butoxicarbonil)amino)-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2-oxoacético. LCMS : Ta = 0,305 min, m/z = 707,4 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (500 MHz, D2O): δ 8,02 (s, 1 H), 7,66 (s, 1 H), 7,43 (d, J = 8,8 Hz, 2 H), 6,77 (d, J = 9,1 Hz, 2 H), 5,24 (d, J = 5,9 Hz, 1 H), 5,10-5,06 (m, 1 H), 4,44-4,29 (m, 4 H), 4,01-3,88 (m, 1 H), 3,49 (d, J = 13,6Hz, 2 H), 3,21-2,99 (m, 2 H), 2,33-2,23 (m, 2 H), 1,92-1,80 (m, 2H). Exemplo 76: Ácido 2-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((( S )-3-amino-2- oxopirrolidin-1 -il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1 -(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0128
[00664] Preparado de maneira análoga ao exemplo 1, usando (S)- metil 4-bromo-2-((terc-butoxicarbonil)amino)butanoato. LCMS : m/z = 532,0 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 6,99 (s, 1 H), 5,31 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 4,70-4,58 (m, 1 H), 4,02 (t, J = 9,6, 9,2 Hz, 1 H), 3,85 (dd, J = 9,6, 9,2 Hz, 1 H), 3,59 (m, 1 H), 3,47 (m, 1 H), 3,34 (dd, J = 14,8, 2,4 Hz, 1 H), 2,48 (m, 1 H), 2,01 (m, 1 H), 1,39 (s, 3 H), 1,37 (s, 3H). Exemplo 77: Ácido (S)-2-(((Z-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-3-(4-( N -((1 r,3 S )-3- aminociclobutil)carbamimidoil)fenóxi)propanoico.
Figure img0129
[00665] Preparado de maneira análoga ao exemplo 31, usando (S)-benzidril 2-(aminoóxi)-3-(4-(N-((1r,3S)-3-((terc-butoxicarbo- nil)amino)ciclobutil)carbamimidoil)fenóxi)propanoato LCMS : Ta = 0,39 min, m/z = 692,1 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,83-9,76 (m, 1 H), 9,51 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 9,33 (brs, 1 H), 8,71 (brs, 1 H), 8,39 (s, 1 H), 8,05-7,97 (m, 3 H), 7,91 (s, 1 H), 7,66 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,30 (brs, 2 H), 6,89 (d, J = 9,2 Hz, 2 H), 6,80 (s, 1 H), 5,13-5,04 (m, 2 H), 4,55-4,49 (m, 1 H), 4,47-4,33 (m, 3 H), 4,24-4,16 (m, 2 H), 3,97-3,86 (m,1 H), 2,69-2,52 (m, 4H). Exemplo 78: Ácido (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-3-(4-( N -(3- aminopropil)carbamimidoil)fenóxi)propanoico.
Figure img0130
[00666] Preparado de maneira análoga ao exemplo 67, usando (S)- benzidril 2-(aminoóxi)-3-(4-(N-(3-((terc-butoxicarbonil)amino)propil)car- bamimidoil)fenóxi)propanoato (preparado de acordo com WO2013110643). LCMS : Ta = 0,38 min, m/z = 680,2 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,59-9,47 (m, 2 H), 9,34 (s, 1 H), 8,88 (s, 1 H), 8,37 (s, 1 H), 7,90 (s, 1 H), 7,79-7,67 (m, 3 H), 7,66-7,62 (m, 2 H), 7,29 (s, 2 H), 6,94-6,88 (m, 2 H), 6,80 (s, 1 H), 5,10 (dd, J = 8,1, 5,5 Hz, 1 H), 5,06 (dd, J = 5,0, 2,7 Hz, 1 H), 4,56-4,48 (m, 1 H), 4,48-4,35 (m, 3 H), 4,264,19 (m, 1 H), 2,90 (dd, J = 8,9, 5,5 Hz, 3 H), 1,96-1,83 (m, 2H). Exemplo 79: Ácido (S)-2-(((Z-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-3-((6-( N-(piperidin-4- il)carbamimidoil)piridin-3-il)óxi)propanoico.
Figure img0131
[00667] Preparado de maneira análoga ao exemplo 68, usando o intermediário F e (R)-terc-butil 4-(5-(2-(aminoóxi)-3-(benzidrilóxi)-3- oxopropóxi)picolinimidamido)piperidina-1-carboxilato (preparado de acordo com WO2013110643). LCMS : Ta = 0,29 min, m/z = 707,0 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 9,71 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 9,58 (brs, 1 H), 9,24 (brs, 1 H), 8,45-8,40 (m, 1 H), 8,36 (s, 1 H), 8,27-8,21 (m, 1 H), 8,12 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 7,84 (s, 1 H), 7,65-7,59 (m, 1 H), 7,24 (br s, 2 H), 6,77 (s, 1 H), 6,50 (s, 1 H), 5,185,11 (m, 1 H), 5,09-5,03 (m, 1 H), 4,64-4,58 (m, 1 H), 4,55-4,49 (m, 1 H), 4,48-4,42 (m, 1 H), 4,23 (q, J = 5,5 Hz, 1 H), 3,96-3,85 (m, 1 H), 3,45-3,40 (m, 2 H), 2,94-2,83 (m, 2 H), 2,10-2,02 (m, 2 H), 1,92-1,81 (m, 2H). Exemplo 80: Ácido 2-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2 R ,3 S )-2-((( S )- 3-guanidino-2-oxopirrolidin-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0132
[00668] Preparado de maneira análoga ao exemplo 20 usando 2- (((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((S)-3-amino-2-oxopirrolidin-1-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoicoand 1H-pirazol-1- carboximidamida HCl. LCMS : m/z = 576,2 (M+1); 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 6,95 (s, 1 H), 5,31 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 4,72-4,57 (m, 1 H), 4,27 (t, J = 9,6 & 9,2 Hz, 1 H), 3,85 (dd, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,59 (t, J = 9,2, 8,8 Hz, 1 H), 3,49 (q, 1 H), 3,34 (dd, 1 H), 2,46 (m, 1 H), 1,88 (m, 1 H), 1,35 (s, 3 H), 1,33 (s, 3H). Exemplo 81: Ácido (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-3-(4-( N -((1R ,5 S ,6 s )-3- azabiciclo[3.1.0]hexan-6-il)carbamimidoil)fenóxi)propanoico.
Figure img0133
[00669] Preparado de maneira análoga ao exemplo 31, usando hidrato de (1R,5S,6s)-terc-butil 6-(4-((R)-2-(aminoóxi)-3-(benzidrilóxi)- 3-oxopropóxi)benzimidamido)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-carboxilato. LCMS : Ta = 0,42 min, m/z = 704,2 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,70 (brs, 1 H), 9,56-9,45 (m, 2 H), 9,148,96 (m, 2 H), 8,54 (br s, 1 H), 8,36 (s, 1 H), 7,88 (s, 1 H), 7,63 (d, J = 7,9 Hz, 2 H), 7,28 (brs, 2 H), 6,88 (d, J = 9,6 Hz, 2 H), 6,78 (s, 1 H), 5,10-5,02 (m, 2 H), 4,54-4,48 (m, 1 H), 4,45-4,35 (m, 3 H), 4,23-4,17 (m, 1 H), 3,61-3,54 (m, 4 H), 2,73-2,68 (m, 1 H), 2,25 (brs, 2H).
Exemplo 82: Ácido 2-((( Z-(2-(((2 R ,3 S )-2-((5-(aminometil)isoxazol-3- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00670] Etapa 1: Benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-((E)-2- metoxivinil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. A uma pasta fluida de cloreto de (metoximetil)trifenilfosfônio (10,34 g, 30,2 mmol) em THF (100 mL) a -78 °C foi adicionado KHMDS (em tolueno) (66,3 mL, 33,1 mmol) lentamente. Depois de agitar durante 30 min, a solução de ilida acima preparada foi adicionada a uma solução de benzil ((2S,3S)-1- (2,4-dimetoxibenzil)-2-formil-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (3 g, 7,53 mmol) em THF (38 mL) a -78 °C. Depois de 3 h, a mistura reacional foi extinguida com NaHCO3 saturado (aq, 60 mL), e foi agitada durante a noite. A mistura foi diluída com EtOAc, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas com Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 060%) para proporcionar o composto do título (1,6 g, 49%) juntamente com o trans-isômero (0,8 g, 25%). LCMS : Ta = 0,91 min, m/z = 427,0 (M+1). Método 2 m_acídico.
[00671] Etapa 2: Benzil ((3S,4R)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-oxo-4- (2-oxoetil)azetidin-3-il)carbamato. A uma solução de benzil ((2R,3S)- 1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-((E)-2-metoxivinil)-4-oxoazetidin-3- il)carbamato (1,58 g, 3,70 mmol) em dioxano (37 mL) foi adicionado HCl (7,4 mL, 7,4 mmol) e aquecida a 50 °C durante 4 h. Depois de resfriar em ta, a mistura reacional foi extinguida com NaHCO3 (aq) saturado e extraída com EtOAc (3x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas com Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0-80%) para proporcionar o composto do título (0,89 g, 58%). LCMS : Ta = 0,86 min, m/z = 413,0 (M+1). Método 2 m_acídico.
[00672] Etapa 3: Benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-((E)-2- (hidroxiimino)etil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. A uma solução de cloridrato de hidroxilamina (160 mg, 2,25 mmol) e bicarbonato de sódio (2,4 mL, 2,23 mmol) em água (6 mL) foi adicionado uma solução de benzil ((3S,4R)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-oxo-4-(2-oxoetil)azetidin-3- il)carbamato (886 mg, 2,15 mmol) em EtOH (200 μL) seguido por uma lavagem com EtOH (200 μL). Depois de agitar durante 20 h, a mistura reacional foi parcialmente concentrada em vácuo e dividida entre DCM e salmoura. A camada aquosa foi extraída com DCM (2x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,76 min, m/z = 428,1 (M+1). Método 2 m_acídico.
[00673] Etapa 4: A uma solução de benzil ((2R,3S)-1-(2,4- dimetoxibenzil)-2-((E)-2-(hidroxiimino)etil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (403 mg, 0,94 mmol) e N-Boc-propargilamina (156 mg, 0,97 mmol) em DCM (12 mL) a 0 °C foi adicionado hipoclorito de sódio (5%, 2,6 mL, 1,89 mmol) gota a gota. Depois de agitar durante 18 h, a mistura reacional foi diluída com DCM e água. A camada aquosa foi extraída com DCM (2x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 080%), proporcionando o composto do título (127 mg, 23%). LCMS : Ta = 0,96 min, m/z = 581,2 (M+1). Método 2 m_acídico.
[00674] Etapa 5: A uma solução de intermediário da etapa 4 (279 mg, 0,48 mmol) em acetonitrila (4,6 mL, relação: 2) e água (2,3 mL, relação: 1) foi adicionado peroxidissulfato de potássio (169 mg, 0,62 mmol), e fosfato de potássio, dibásico (192 mg, 1,1 mmol) e aquecida a 90 °C. Depois de 3 h, mais peroxidissulfato de potássio (81 mg, 0,3 mmol) foi adicionado e aquecido a 90 °C. Depois de 2 h de aquecimento adicional, a mistura reacional foi extinguida com NaHCO3 e extraída com EtOAc (3x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0-80%), proporcionando o composto do título (71 mg, 34%). LCMS : Ta = 0,77 min, m/z = 431,0 (M+1). Método 2 m_acídico.
[00675] Etapa 6: Terc-butil ((Z)-4-amino-5-((2R,3S)-3-amino-4- oxoazetidin-2-il)-2-oxopent-3-en-1-il)carbamato. A uma solução de intermediário da etapa 5 (84 mg, 0,20 mmol) em EtOH (1,9 mL, relação: 2) e MeOH (0,93 mL, relação: 1) foi adicionado Pd-C (22 mg, 20 μmol) e purgada com N2. O frasco foi equipado com um balão de H2, evacuado e carregado outra vez com H2 (3x). Depois de 1,5 h, a mistura reacional foi filtrada através de celite com lavagem com MeOH (3x). O filtrado foi concentrado em vácuo e azeotropado com tolueno. O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,39 min, m/z = 229,1 (M+1). Método 2 m_acídico.
[00676] Etapa 7: Terc-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((Z)-2-amino-5- ((terc-butoxicarbonil)amino)-4-oxopent-2-en-1-il)-4-oxoazetidin-3- il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato.
[00677] Preparado de maneira análoga ao exemplo 4, etapa 4, usando ácido (Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2- (2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (100 mg, 0,23 mmol), HATU (89 mg, 0,23 mmol), DIPEA (68 μl, 0,39 mmol), terc-butil ((Z)-4- amino-5-((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2-il)-2-oxopent-3-en-1- il)carbamato (58 mg, 0,19 mmol) e DCM:DMF (3:1, 2 mL). 79 mg. LCMS : Ta = 0,98 min, m/z = 710,4 (M+1). Método 2 m_acídico.
[00678] Etapa 8: Terc-butil 2-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((5-((( terc - butoxicarbonil)amino)metil)isoxazol-3-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilide- no)amino)óxi)-2-metilpropanoato. A uma solução de terc-butil 2- (((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((Z)-2-amino-5-((terc-butoxicarbonil)amino)-4-oxo- pent-2-en-1-il)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (77 mg, 0,108 mmol) ) em etanol (0,4 mL) foram adicionados cloridrato de hidroxilamina (19 mg, 0,27 mmol) e carbonato de potássio (18 mg, 0,13 mmol) e aquecidos a 60 °C. Depois de 6 h, a mistura reacional foi parcialmente concentrada em vácuo e dividida entre EtOAc e água. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia de coluna (EtOAc-Heptano, 5-90%) para proporcionar o composto do título (13 mg, 17%). LCMS : Ta = 1,04 min, m/z = 708,3 (M+1). Método 2 m_acídico.
[00679] Etapa 9: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-((5-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)isoxazol-3- il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico.
[00680] Preparado de maneira análoga ao exemplo 4, etapa 5, usando terc-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((5-(((terc-butoxicarbonil)ami- no)metil)isoxazol-3-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoato (13 mg, 18 μmol), SOβ^DMF (16,8 mg, 0,11 mmol), DMF (200 μl). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,94 min, m/z = 788,4 (M+1). Método 2 m_acídico.
[00681] Etapa 10: Ácido 2-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((5-(aminome- til)isoxazol-3-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0134
[00682] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2- metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((5-(((terc butoxicarbonil)amino)metil)isoxazol-3-il)metil)-4- oxoazetidina-1-sulfônico (10,9 mg, 14 μmol), TFA (70 μl, 0,91 mmol), e DCM (0,2 mL). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (Xselect CSH, 19 x 100 mm, 5 μM, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min) para proporcionar o composto do título (1,7 mg, 17%). LCMS : Ta = 0,48 min, m/z = 532,1 (M+1). Método 2 m_acídico_polar,1H RMN (400 MHz, D2O) δ 6,85 (s, 1 H), 6,52 (s, 1 H), 5,38 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,26 (s, 2 H), 3,22 (dd, J = 16,2, 7,1 Hz, 2 H), 3,10 (dd, J = 16,2, 6,0 Hz, 1 H), 1,33 (s, 3 H), 1,29 (s, 3H). Exemplo 83: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4- ((benzil(metil)amino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoico.
Figure img0135
[00683] Preparado de maneira análoga ao exemplo 52, usando N- ((2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-N-metil-1-fenilmetanamina. LCMS : m/z = 634,1 (M-1), 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,79 (s, 1 H), 7,40-7,31 (m, 5 H), 6,89 (s, 1 H), 5,43 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 4,96-4,89 (m, 1 H), 4,874,83 (m, 2 H), 4,70-4,60 (m, 2H, parcialmente sobreposto com sinal de D2O), 4,36 (s, 2 H), 2,64 (s, 3 H), 1,28 (s, 3 H), 1,27 (s, 3H). Exemplo 84: Ácido (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H- 1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1 -(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-3-(4-( N -(piperidin-4- il)carbamimidoil)fenóxi)propanoico.
Figure img0136
[00684] Preparado de maneira análoga ao exemplo 31, usando terc-butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3- triazol-4-il)metil)carbamato. LCMS : Ta = 0,44 min, m/z = 735,3 (M+1). Método 2 m_acídico. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,63-9,48 (m, 1 H), 9,45-9,33 (m, 2 H), 9,02 (s, 1 H), 8,56 (brs,1 H), 8,44 (brs, 1 H), 8,22 (s, 3 H), 7,74-7,67 (m, 3 H), 7,26 (brs, 2 H), 7,19 (d, J = 8,6 Hz, 2 H), 6,72 (s, 1 H), 5,38-5,30 (m, 1 H), 5,01-4,96 (m, 1 H), 4,93-4,86 (m, 1 H), 4,77-4,68 (m, 1 H), 4,49-4,35 (m, 3 H), 4,08 (brs, 2 H), 3,85 (brs, 2 H), 2,96-2,84 (m, 2 H), 2,13-2,03 (m, 2 H), 1,83-1,70 (m, 2H).
Exemplo 85: Ácido 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4- (((azetidin-3-ilmetil)amino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
[00685] Etapa 1: Benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(hidroximetil)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma solução de ácido (Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (218 mg, 0,39 mmol) em DCM (5 mL) e DMF (1 mL) a 0 °C foram adicionados DIPEA (0,11 mL, 0,61 mmol), HATU (170 mg, 0,446 mmol) e (3S,4R)-3-amino-4-((4- (hidroximetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)azetidin-2-ona (80 mg, 0,41 mmol). Depois de agitar a 0 °C durante 1 h, a mistura reacional foi diluída com DCM, lavada com água, salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 0-5%), proporcionando o composto do título (250 mg, 86%). LCMS : Ta= 0,98 min, m/z = 717,3 (M+1). Método 2 m_acídico.
[00686] Etapa 2: Benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocar- boxilato. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbo- nil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(hidroximetil)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropa- nocarboxilato (440 mg, 0,614 mmol) em THF (4 mL) foi adicionado MnO2 (1,2 g, 13,51 mmol). Depois de agitar em ta durante 20 h, a mistura reacional foi filtrada através de uma almofada de celite com lavagem com THF (20 mL). O filtrado foi concentrado, e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 0-5%) para proporcionar o composto do título (300 mg, 68%). LCMS : Ta = 1,04 min, m/z = 715,3 (M+H). Método 2 m_acídico.
[00687] Etapa 3: Terc-butil 3-((((2-(((2 R ,3 S )-3-(( Z)-2-((1- ((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidin-2- il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)amino)metil)azetidina-1- carboxilato. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (150 mg, 0,21 mmol) em DCE (4 mL) a 0°C foram adicionados terc-butil 3-(aminometil)aze- tidina-1-carboxilato (78 mg, 0,420 mmol), triacetoxiboroidreto de sódio (66,7 mg, 0,315 mmol) e DMF (0,4 mL). Depois de agitar em ta durante 3 h, a mistura reacional foi extinguida com NaHCO3 (aq) saturado e diluída com 10% de EtOH/DCM (40 mL). A camada orgânica foi separada, secada com Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,55 min, m/z = 885,5 (M+1). Método 2 m_acídico.
[00688] Etapa 4: Terc-butil 3-((((2-(((2 R ,3 S )-3-(( Z)-2-((1- ((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidin-2- il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)(terc- butoxicarbonil)amino)metil)azetidina-1-carboxilato. A uma solução de terc-butil 3-((((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ci- clopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetami- do)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)amino)metil)aze- tidina-1-carboxilato (186 mg, 0,21 mmol) e NaHCO3 saturado (aq, 4 mL, 0,210 mmol) em DCM (4 mL) foi adicionado Boc2O (137 mg, 0,630 mmol). Depois de agitar em ta durante 12 h, as camadas de mistura reacional foram separadas. A camada aquosa foi extraída com DCM, e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Hept, 5080%) para proporcionar o composto do título (120 mg, 58%). LCMS : Ta = 1,24 min, m/z = 985,7 (M+1). Método 2 m_acídico.
[00689] Etapa 5: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)car- bonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)ti- azol-4-il)acetamido)-2-((4-(((terc-butoxicarbonil) ((1-(terc- butoxicarbonil)azetidin-3-il)metil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. Preparado de maneira análoga ao exemplo 19, etapa 3, usando terc-butil 3-((((2-(((2R,3S)- 3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidin-2-il)metil)- 2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)(terc-butoxicarbonil)amino)metil)azetidina- 1-carboxilato (120 mg, 0,122 mmol), SO3^DMF (192 mg, 1,22 mmol) e DMF (1,2 mL). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 1,12 min, m/z = 1065,7 (M+1). Método 2 m_acídico.
[00690] Etapa 6: Ácido 1-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2- (((2R,3S)-2-((4-(((azetidin-3-ilmetil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol- 2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0137
[00691] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1- ((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((terc-butoxicarbonil) ((1-(terc-butoxicarbonil)azetidin-3-il)metil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol- 2-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (130 mg, 0,122 mmol), TFA (0,56 mL, 7,32 mmol), e DCM (1,5 mL). 6,3 mg. LCMS : Ta = 0,47 min, m/z = 599,3 (M+1). Método 2 m_acídico_polar,1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,82 (s, 1 H), 7,10 (s, 1 H), 5,61 (d, J = 5,9 Hz, 1 H), 5,01 (q, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,95-4,85 (m, 2 H), 4,36 (s, 2 H), 4,26-4,15 (m, 2 H) 4,11-3,97 (m, 2 H), 3,46-3,30 (m, 3 H), 1,26 (s, 2 H), 1,20 - 1,05 (m, 2 H). Exemplo 86: Ácido 2-((( Z-(2-(((2 R ,3 S )-2-((( R )-3-amino-2- oxopirrolidin-1 -il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1 -(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0138
[00692] Preparado de maneira análoga ao exemplo 76, usando (R)- metil 4-bromo-2-((terc-butoxicarbonil)amino)butanoato. LCMS : m/z = 532,0 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 6,96 (s, 1 H), 5,28 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 4,53 (m, 1 H), 3,96 (t, J = 10,0 & 9,2 Hz, 1 H), 3,85 (dd, J = 10,4 & 10,0 Hz, 1 H), 3,58 (m, 1 H), 3,44 (m, 1 H), 3,31 (dd, 1 H), 2,47 (m, 1 H), 1,96 (m, 1 H), 1,34 (s, 3 H), 1,34 (s, 3H).
Exemplo 87: Ácido 2-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3 S ,4 R )- 2-oxo-4-((2-oxo-2,3-di-hidro-1 H -imidazol-1-il)metil)-1-sulfoazetidin- 3-il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
[00693] Etapa 1: Benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-((2,5- dioxoimidazolidin-1-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. O procedimento geral para a reação de Mitsunobu foi seguido usando o intermediário G (10,0 g, 25 mmol), imidazolidina-2,4-diona (2,5 g, 25 mmol), trifenilfosfina (7,9 g, 30 mmol), DIAD (6,1 g, 30 mmol) e THF (200 mL). O precipitado resultante (8,3 g, 69%) que foi ligeiramente contaminado com óxido de trifenilfosfina, foi coletado por filtração. LCMS : m/z = 481,0 (M-1).
[00694] Etapa 2: terc-Butil 3-(((2R,3S)-3-(((benzilóxi)carbonil)a- mino)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2,4- dioxoimidazolidina-1-carboxilato. A uma solução de benzil ((2R,3S)- 1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-((2,5-dioxoimidazolidin-1-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)carbamato (4,60 g, 9,54 mmol) e di-terc- butildicarbonato (2,30 g, 10,5 mmol) em DCM (55 mL) foi adicionado DMAP (0,150 g, 1,33 mmol). Depois de 3 h em ta, água foi adicionada, e então as camadas foram separadas. A camada orgânica foi secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel, proporcionando o composto do título (4,20 g, 75%).
[00695] Etapa 3: terc-Butil 3-(((2R,3S)-3-(((benzilóxi)carbo- nil)amino)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2,4-dioxoimidazolidina-1- carboxilato. Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapa 2 usando terc-butil 3-(((2R,3S)-3-(((benzilóxi)carbonil)amino)-1-(2,4- dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2,4-dioxoimidazolidina-1- carboxilato (900 mg, 1,70 mmol) K2S2O8 (280 mg, 2,89 mmol) e K2HPO4 (680 mg, 2,91 mmol) em ACN:água (2:1, 30 mL) ao mesmo tempo que aquecendo a 90 °C durante 4 h. Depois de resfriar em ta, a mistura foi filtrada, e o filtrado foi concentrado em vácuo, removendo a maior parte de ACN. A mistura foi diluída com água/EtOAc, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc, e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM,2-6%) para proporcionar o composto do título (170 mg, 23%). LCMS : m/z = 431,0 (M-1).
[00696] Etapa 4: terc-Butil 3-(((2 R ,3 S )-3-(((benzilóxi)car- bonil)amino)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-4-hidróxi-2- oxoimidazolidina-1-carboxilato. A uma solução de terc-butil 3- (((2R,3S)-3-(((benzilóxi)carbonil)amino)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2,4- dioxoimidazolidina-1-carboxilato (170 mg, 0,390 mmol) em EtOH (10 mL) a 0 °C foi adicionado boroidreto de sódio (30 mg, 0,78 mmol). Depois de 3 h a 0 °C, a mistura foi extinguida com NH4Cl saturado (aq) e parcialmente concentrada em vácuo. A bicamada foi extraída com DCM, e a camada orgânica foi secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo resultante foi usado como tal na etapa 5. LCMS : m/z = 457,1 (M+Na).
[00697] Etapa 5: terc-Butil 3-(((2 R ,3 S )-3-(((benzilóxi)carbo- nil)amino)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2-oxo-2,3-di-hidro-1H-imidazol- 1-carboxilato. A uma solução de terc-butil 3-(((2R,3S)-3- (((benzilóxi)carbonil)amino)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-4-hidróxi-2- oxoimidazolidina-1-carboxilato (160 mg, 0,368 mmol) em DCM (5 mL) a 0 °C foi adicionado cloreto de metanossulfonila (31 μL, 0,41 mmol) seguido por TEA (0,15 mL, 1,1 mmol). Depois de agitar durante 1 h a 0 °C, a solução foi concentrada em vácuo e purificada por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 2-5%), proporcionando o composto do título (100 mg, 65%). LCMS : m/z = 415,1 (M-1); 1H RMN (400 MHz, CDCl3): δ 8,02 (s, 1 H), 7,41-7,27 (m, 5 H), 7,06 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 6,61 (d, J = 3,2 Hz, 1 H), 6,15 (d, J = 3,2 Hz, 1 H), 5,21-5,09 (m, 3 H), 4,30 (dd, J = 14,4, 9,6 Hz, 1 H), 4,01-3,94 (m, 1 H), 3,49 (dd, J = 14,8, 3,2 Hz, 1 H), 1,46 (s, 9H).
[00698] Etapa 6: terc-Butil 3-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2- il)metil)-2-oxo-2,3-di-hidro-1H-imidazol-1-carboxilato. Uma mistura de terc-Butil 3-(((2R,3S)-3-(((benzilóxi)carbonil)amino)-4-oxoazetidin-2- il)metil)-2-oxo-2,3-di-hidro-1H-imidazol-1-carboxilato (490 mg, 1,18 mmol) e Paládio em carbono (10% em peso, 140 mg) em MeOH (60 mL) foi evacuada e carregada outra vez com H2 (3x), levando a pressão final até 2,11 kg/cm2 (30 psi). Depois de 2 h de agitação, a mistura foi filtrada através de celite e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 6%), proporcionando o composto do título (50 mg, 25%).
[00699] Etapa 7: terc-Butil 3-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)- 2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidin-2- il)metil)-2-oxo-2,3-di-hidro-1H-imidazol-1-carboxilato. Preparado de maneira análoga ao exemplo 4 etapa 4, usando ácido (Z)-2-(((1-(terc- butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (117 mg, 0,276 mmol), HATU (105 mg, 0,276 mmol), DIPEA (36 mg, 0,28 mmol), terc-butil 3- (((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2-oxo-2,3-di-hidro-1H- imidazol-1-carboxilato (65 mg, 0,23 mmol) e DMF (5 mL). O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH- DCM, 3%), proporcionando o composto do título (140 mg, 88%). LCMS: m/z = 694,0 (M+1).
[00700] Etapa 8: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-Butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-((3-(terc-butoxicarbonil)-2-oxo-2,3-di-hidro-1H- imidazol-1-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. A uma solução de terc-butil 3-(((2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2- il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4- oxoazetidin-2-il)metil)-2-oxo-2,3-di-hidro-1H-imidazol-1-carboxilato (140 mg, 0,202 mmol) em DMF (1,0 mL) foi adicionado SO3^DMF (185 mg, 1,21 mmol). Depois de 4 h em ta, a solução foi concentrada em vácuo e purificada em resina HP21 (ACN-água, 10-50%), proporcionando o composto do título (90 mg, 58%). LCMS : m/z = 772,3 (M-1).
Figure img0139
[00701] Etapa 9: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2- (((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxo-2,3-di-hidro-1H-imidazol-1-il)metil)-1- sulfoazetidin-3-il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico. Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando terc-butil 3-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2- oxo-2,3-di-hidro-1H-imidazol-1-carboxilato (preparado a partir de terc- butil 3-(((2R,3S)-3-(((benzilóxi)carbonil)amino)-4-oxoazetidin-2-il)metil)- 2,4-dioxoimidazolidina-1-carboxilato) (90 mg, 1,16 mmol), TFA (0,5 mL, 6,4 mmol) e DCM (1,5 mL). O resíduo bruto foi purificado por meio de HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min) para proporcionar o composto do título (15,6 mg, 60%) como um sólido esbranquiçado. LCMS : m/z = 516,0 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 6,98 (s, 1 H), 6,41 (d, J = 2,8 Hz, 1 H), 6,30 (d, J = 2,8 Hz, 1 H), 5,30 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 4,54-4,52 (m, 1 H), 4,00-3,95 (m, 1 H), 3,84-3,79 (m, 1 H), 1,35 (s, 3 H), 1,34 (s, 3H). Exemplo 88: Ácido 2-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2 R ,3 S )-2-((( R )- 3-guanidino-2-oxopirrolidin-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0140
[00702] Preparado de maneira análoga ao exemplo 20, usando 2- (((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((R)-3-amino-2-oxopirrolidin-1-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoicoand 1H-pirazol-1- carboximidamida HCl . LCMS : m/z = 574,1 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 6,93 (s, 1 H), 5,28 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,53 (m, 1 H), 4,24 (t, J = 9,6 & 9,2 Hz, 1 H), 3,85 (dd, J = 9,2 & 9,2 Hz, 1 H), 3,51 (m, 1 H), 3,40 (t, J = 9,2 & 8,8 Hz, 1 H), 3,32 (dd, 1 H), 3,34 (dd, 1 H), 2,43 (m, 1 H), 1,87 (m, 1 H), 1,36 (s, 3 H), 1,32 (s, 3H). Exemplo 89: Ácido 1-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3 S ,4 R )- 2-oxo-4-((4-((( R )-pirrolidin-3-ilamino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2- il)metil)-1-sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0141
[00703] Preparado de maneira análoga ao exemplo 85, usando (R)- terc-butil 3-aminopirrolidina-1-carboxilato. LCMS : Ta = 0,46 min, m/z = 599,3 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,86 (s, 1 H), 7,16 (s, 1 H), 5,60 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 4,99 (s, 1 H), 4,90 (d, J = 3,9 Hz, 2 H), 4,46 (d, J = 5,1 Hz, 2 H), 4,20-4,14 (m, 1 H), 3,82 (dd, J = 13,1, 8,0 Hz, 1 H), 3,65-3,38 (m, 2 H), 2,67 - 2,57 (m, 1 H), 2,31-2,20 (m, 1 H), 1,34 (t, J = 4,3 Hz, 3 H), 1,25-1,19 (m, 2 H).
Exemplo 90: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-(((3-aminopropil)a- mino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
[00704] Etapa 1: Benzidril 1-((( Z)-(1-(2-(( terc-butoxicar- bonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(hidroximetil)-2H-1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma solução de ácido (Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (2,5 g, 4,43 mmol) em DCM (78 mL) e DMF (15 mL) a 0 °C foi adicionado DIPEA (1,2 mL, 7,00 mmol), HATU (1,9 g, 5,13 mmol), e (3S,4R)-3-amino-4-((4-(hidroximetil)-2H- 1,2,3-triazol-2-il)metil)azetidin-2-ona (0,92 g, 4,67 mmol). Depois de agitar a 0 °C durante 1 h, a mistura reacional foi diluída com DCM, lavada com água, salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 0-5%), proporcionando o composto do título (2,5 g, 75%). LCMS : Ta = 0,98 min, m/z = 717,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00705] Etapa 2: Benzidril 1-((( Z)-(1-(2-(( terc-butoxicarbo- nil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ci- clopropanocarboxilato. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(1-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(hidroximetil)- 2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)ami- no)óxi)ciclopropanocarboxilato (1,8 g, 2,57 mmol) em THF (21 mL) foi adicionado MnO2 (4,9 g, 56,5 mmol). Depois de agitar em ta durante 20 h, a mistura reacional foi filtrada através de uma almofada de celite com lavagem com THF (250 mL). O filtrado foi concentrado, e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH- DCM, 0-5%) para proporcionar o composto do título (1,4 g, 76%). LCMS : Ta = 1,04 min, m/z = 715,3 (M+H). Método 2 m_acídico.
[00706] Etapa 3: Benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-((terc- butoxicarbonil)amino)propil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- (((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (370 mg, 0,52 mmol) em DCE (4 mL) a 0 °C foram adicionados terc-butil (3- aminopropil)carbamato (180 mg, 1,04 mmol) e triacetoxiidroborato de sódio (165 mg, 0,78 mmol) sequencialmente. Depois de agitar em ta durante 16 h, a mistura reacional foi diluída com DCM, lavada com NaHCO3 saturado (aq), salmoura, secada em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para produzir o composto do título (quantitativo assumido). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,99 min, m/z = 873,2 (M+1). Método 2 m_acídico.
[00707] Etapa 4: Benzidril 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((( terc - butoxicarbonil) (3-((terc-butoxicarbonil)amino)propil)ami- no)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1- (2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-((terc-butoxicarbonil)ami- no)propil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (0,45 g, 0,52 mmol) em DMF (6 mL) a 0 °C foi adicionado anidrido de Boc (0,24 mL, 1,04 mmol). Depois de agitar em ta durante 18 h, DIPEA (0,18 mL, 1,04 mmol) foi adicionado. Depois de agitar durante 36 h, a mistura reacional foi vertida em água e extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 5% de LiCl, salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc- Heptano, 0-60%) para proporcionar o composto do título (0,40 g, 80%). LCMS : Ta = 1,26 min, m/z = 973,3 (M+H). Método 2 m_acídico.
[00708] Etapa 5: Ácido (2R,3 S )-3-(( Z)-2-((1-((benzidriló- xi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(((terc- butoxicarbonil) (3-((terc-butoxicarbonil)amino)propil)amino)metil)- 2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((terc-butoxicarbonil) (3- ((terc-butoxicarbonil)amino)propil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (0,40 g, 0,41 mmol) em DMF (5 mL) a 0 °C foi adicionado SO3^DMF (0,63 g, 4,12 mmol). Depois de agitar em ta durante 1 h, a mistura reacional foi diluída com EtOAc, lavada com 5% de LiC (aq), salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo para produzir o composto do título (0,42 g, 97%). LCMS : Ta = 1,10 min, m/z = 1053,6 (M+H). Método 2 m_acídico.
[00709] Etapa 6: Ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((3-aminopro- pil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0142
[00710] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)car- bonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-(((terc-butoxicarbonil) (3-((terc-butoxicarbonil)ami- no)propil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1- sulfônico (0,5 g, 0,48 mmol), DCM (2,5 mL) e TFA (1 mL, 13 mmol) durante 1,5 h. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min) proporcionando o composto do título (123 mg, 42%). LCMS : Ta = 0,31 min, m/z = 587,2 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 9,39 (br s, 1 H), 7,76 (s, 1 H), 7,22 (s, 2 H), 6,73 (s, 1 H), 5,33 (dd, J = 9,0, 5,5 Hz, 1 H), 4,84 (dd, J = 14,3, 4,5 Hz, 1 H), 4,73-4,61 (m, 1 H), 4,61-4,48 (m, 1 H), 4,27-4,14 (m, 2 H), 3,02-2,89 (m, 3 H), 2,85 (t, J = 7,4 Hz, 3 H), 1,85 (p, J = 7,5 Hz, 3H) 1,32-1,04 (m, 6 H); 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,90 (s, 1 H), 7,15 (s, 1 H), 5,67 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 5,125,04 (m, 1 H), 5,04-4,88 (m, 2 H), 4,45 (s, 2 H), 3,30-3,22 (m, 2 H), 3,16 (t, J = 7,6 Hz, 2 H), 2,24-2,08 (m, 2 H), 1,37-1,26 (m, 2 H), 1,261,08 (m, 2H). Exemplo 91: Ácido 1-((( Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3 S ,4 R )- 2-oxo-4-((4-((( S )-pirrolidin-3-ilamino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2- il)metil)-1-sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0143
[00711] Preparado de maneira análoga ao exemplo 90, usando (S)-terc-butil 3-aminopirrolidina-1-carboxilato e benzidril 1-(((Z)-(1- (2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H- 1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)ami- no)óxi)ciclopropanocarboxilato na etapa 3. LCMS : Ta = 0,3 min, m/z = 599,0 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 9,18 (d, J = 9,0 Hz, 1 H),9,04-8,59 (m, 2 H), 7,79 (s, 1 H), 7,24 (br s, 2 H), 6,72 (s, 1 H), 5,35 (dd, J = 9,0, 5,5Hz, 1 H), 4,93-4,81 (m, 1 H), 4,68-4,60 (m, 1 H), 4,55 (s, 1 H), 4,24 (br s, 2 H), 3,95-3,79 (m, 1 H), 2,27-2,11 (m, 1 H), 2,04-1,90 (m, 1 H), 1,38-1,06 (m, 4 H). Exemplo 92: Ácido 1-(((Z-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(aminometil)azeti- din-1-il)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0144
[00712] Preparado de maneira análoga ao exemplo 90, usando terc-butil (azetidin-3-ilmetil)carbamatoand benzidril 1-(((Z)-(1-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H- 1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)ami- no)óxi)ciclopropanocarboxilato na etapa 3. LCMS : Ta = 0,46 min, m/z = 599,4 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,84 (s, 1 H) 7,11 (s, 1 H) 5,56 (d, J = 5,5Hz, 1 H) 5,00 (m, 1 H) 4,89 (m, 2 H) 4,52 (s, 2 H) 4,35 (m, 2 H) 4,23-4,03 (m, 2 H) 3,38- 3,21 (m, 3 H) 1,31 (m, 2 H) 1,18 (m, 2 H). Exemplo 93: Ácido 1-((( Z-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((((1 r,3 R )-3- aminociclobutil)amino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0145
[00713] Preparado de maneira análoga ao exemplo 90, usando terc-butil ((1r,3r)-3-aminociclobutil)carbamatoand benzidril 1-(((Z)-(1- (2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H- 1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato na etapa 3. LCMS : Ta = 0,46 min, m/z = 599,3 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,82 (s, 1 H), 7,09 (s, 1 H), 5,58 (d, J = 5,9Hz, 1 H), 5,04-4,84 (m, 3 H), 4,31 (s, 2 H), 4,14-4,00 (m, 2 H), 2,81-2,60 (m, 4 H) 1,26 (s, 2 H), 1,19-1,06 (m, 2 H). Exemplo 94: Ácido (((Z)-(1-(5-amino-1,2,4-tiadiazol-3-il)-2- (((2 R ,3 S )-2-((4-(((3-aminopropil)amino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0146
[00714] Preparado de maneira análoga ao exemplo 90, usando ácido (Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(5-((terc- butoxicarbonil)amino)-1,2,4-tiadiazol-3-il)acético. LCMS : Ta = 0,29 min, m/z = 588,0 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 9,53-9,29 (m, 1 H), 8,15 (s, 2 H), 7,75 (s, 1 H) 5,40-5,28 (m, 1 H), 4,82-4,69 (m, 1 H), 4,63 (s, 2 H), 4,21 (d, J = 5,1 Hz, 2 H), 3,00-2,91 (m, 2 H), 2,85 (s, 2 H), 1,91-1,74 (m, 2 H), 1,37-1,04 (m, 4 H). Exemplo 95: Ácido 1-((( Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2 R ,3 S )-2-((2,4- dioxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0147
[00715] Preparado de maneira análoga ao exemplo 54, usando benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- (((2S,3S)-2-(hidroximetil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)ami- no)óxi)ciclopropanocarboxilato e oxazolidina-2,4-diona. LCMS : Ta = 0,31 min, m/z = 533,0 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,23 (s, 1 H), 5,42 (d, J = 5,9Hz, 1 H), 4,86-4,83 (m, 3 H), 4,07 (dd, J = 14,5, 9,8Hz, 1 H), 3,72 (dd, J = 14,5,3,9 Hz, 1 H), 1,58-1,52 (m, 2 H), 1,51-1,45 (m, 2 H). Exemplo 96: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((5-(((3- aminopropil)amino)metil)-2 H -tetrazol-2-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0148
[00716] Preparado de maneira análoga ao procedimentos descrito nos exemplos 54 e 90, usando benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2S,3S)-2-(hidroximetil)-4-oxoazeti- din-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato e 5- (((terc-butildimetilsilil)óxi)metil)-2H-tetrazol. LCMS : Ta = 0,31 min, m/z = 588,4 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,41 (br s, 1 H), 7,78 (s, 1 H), 7,24 (s, 1 H), 6,75 (s, 1 H), 5,38-5,32 (m, 1 H), 4,86 (dd, J = 14,3, 4,5 Hz, 1 H), 4,72-4,63 (m, 1 H), 4,61-4,55 (m, 1 H), 4,28-4,16 (m, 1 H), 3,01-2,94 (m, 1 H), 2,87 (t, J = 7,4 Hz, 1 H), 1,92-1,82 (m, 1 H), 1,33-1,18 (m, 2 H), 1,18-1,08 (m, 1 H). Exemplo 97: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((( R )-5-(((2- aminoetil)amino)metil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0149
[00717] Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 26, usando terc-butil (2-bromoetil)carbamato. LCMS : Ta = 0,380 min, m/z = 591,1 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 6,93 (s, 1 H), 5,28 (d, J = 5,8 Hz, 1 H), 3,85 (t, J = 9,3 Hz, 1 H), 3,68 (dd, J = 15,0, 8,1 Hz, 1 H), 3,46-3,36 (m, 2 H), 3,25-3,01 (m, 5 H), 2,60 (s, 1 H), 1,30-1,21 (m, 2 H), 1,18-1,09 (m, 2H). Exemplo 98:Acido 2∑(((Zl∑f1:(2∑aminotiazol∑4∑il)∑2∑f((2R13Sl∑2z((4z metil-5-oxo-4,5-di-hidro-1 H -1,2,4-triazol-1 -il)metil)-4-oxo-1 - sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoico.
Figure img0150
[00718] Preparado de maneira análoga ao exemplo 31, usando 1- (((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2-il)metil)-4-metil-1H-1,2,4-triazol-5 (4H)-ona e ácido (Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2- il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético. LCMS : m/z = 531,0 (M-1); 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,67 (s, 1 H), 7,02 (s, 1 H), 5,36 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,70 - 4,60 (m, 1H, parcialmente obscurecido por pico residual de solvente), 4,14 (dd, J = 15,2 e 7,6 Hz, 1 H), 3,96 (dd, J = 15,2 e 4,8 Hz, 1 H), 3,14 (s, 3 H), 1,37 (s, 3 H), 1,35 (s, 3H). Exemplo 99;Acido2∑(((Zl∑f1:(2∑aminotiazol∑4∑il)∑2∑f((2R13Sl∑2z((4z ((dimetilamino)metil)-2H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1 - sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoico.
Figure img0151
[00719] Preparado de maneira análoga ao exemplo 54, usando N,N-dimetil-1-(2H-1,2,3-triazol-4-il)metanamina. LCMS : m/z = 560,2 (M+1); 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,80 (s, 1 H), 6,98 (s, 1 H), 5,43 (d, J = 4,8 Hz, 1 H), 4,94-4,88 (m, 1 H), 4,85-4,80 (m, 2 H), 4,32 (s, 2 H), 2,75 (s, 6 H), 1,28 (s, 6H). Exemplo 100: Ácido 2-((( Z)-(l-β-aminotiazoM-il^-OT 2R, 3S )-2-((4- ((metilamino)metil)-2 H -U^-triazoi^-IDmetiiM-oxo-l - sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2- metilpropanoico.
Figure img0152
[00720] Preparado de maneira análoga ao exemplo 54, usando terc-butil ((2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)(metil)carbamato. LCMS : m/z = 544,1 [M-H]-; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,73 (s, 1 H), 7,02 (s, 1 H), 5,42 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,92-4,86 (m, 1 H), 4,82-4,78 (m, 2 H), 4,22 (s, 2 H), 2,60 (s, 3 H), 1,30 (s, 6H). Exemplo 101: Ácido 2-((( Z)-(2-((( 2R, 3S )-2-((1-(2-aminoetil)-1 H -1,2,3- triazol-4-il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1 -(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0153
[00721] Etapa 1: Benzil ((2R, 3S )-2-(3,3-dibromoallil)-1-(2,4- dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-3-il) (4-metoxibenzil)carbamato. A uma solução de PPh3 (302,4 mg, 1,15 mmol) em DCM (1 mL) a 0 °C foi adicionado CBr4 (192 mg, 0,58 mmol). Depois de 10 min, uma solução de benzil ((3S,4R)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-oxo-4-(2- oxoetil)azetidin-3-il) (4-metoxibenzil)carbamato (152,7 mg, 0,29 mmol) em DCM (800 μL) foi adicionada gota a gota, seguido por lavagem com DCM (800 μL). Depois de 20 min, a mistura reacional foi diluída com DCM e água, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com DCM (2x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (0-40% de EtOAc-Hept) para proporcionar o composto do título (162 mg, 82%). LCMS : Ta = 1,2 min, m/z = 689,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00722] Preparação de benzil ((3S,4R)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-oxo- 4-(2-oxoetil)azetidin-3-il) (4-metoxibenzil)carbamato: A uma solução de benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-((E)-2-metoxivinil)-4-oxoazeti- din-3-il)carbamato (exemplo 82, etapa 1, 1,44 g, 3,38 mmol) em DMF (33,8 mL) a -10 °C (banho com sal-gelo) foi adicionado hidreto de sódio (60%, 162 mg, 4,05 mmol). Depois de agitar durante 30 min, cloreto de p -metoxibenzila (506, μL, 3,71 mmol) foi adicionado. Depois de aquecer a 0 °C e agitar durante um adicional de 30 min, foi extinguida com NH4Cl (aq, saturada), em seguida diluída com EtOAc e LiCl (5% aq). As camadas foram separadas, e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com LiCl (5% aq), salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O material bruto foi submetido a condições descritas no exemplo 82, etapa 2, em seguida purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Hept, 0-70%) para proporcionar o composto do título (684 mg, 38%). LCMS : Ta = 0,97 min, m/z = 533,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00723] Etapa 2: Benzil ((3S,4R)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-oxo-4- (prop-2-in-1-il)azetidin-3-il) (4-metoxibenzil)carbamato. terc-Butillítio (0,291 mL, 0,494 mmol) foi adicionado à solução de benzil ((2R,3S)-2- (3,3-dibromoallil)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-3-il) (4- metoxibenzil)carbamato (162 mg, 0,235 mmol) em THF (Volume: 3,4 mL) a -78 °C. Depois de 15 min, a mistura reacional foi extinguida com NH4Cl e diluída com água e EtOAc. As camadas foram separadas, e a camada orgânica foi extraída com EtOAc (2x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Hept, 0-40%) para proporcionar o composto do título (98 mg, 79%). LCMS : Ta = 1,08 min, m/z = 529,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00724] Etapa 3: Benzil ((2R,3S)-2-((1-(2-((terc-butoxicarbonil)a- mino)etil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-4- oxoazetidin-3-il) (4-metoxibenzil)carbamato. A uma solução de benzil ((3S,4R)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-oxo-4-(prop-2-in-1-il)azetidin- 3-il) (4-metoxibenzil)carbamato (95,6 mg, 0,18 mmol) em uma mistura de DMSO (1,2 mL), terc-butanol (1,2 mL) e água (1,2 mL), foram adicionados pentaidrato de sulfato de cobre (II) (4,5 mg, 0,018 mmol), L-ascorbato de sódio (35,8 mg, 0,18 mmol) e N-Boc-2-azidoetilamina (76 mg, 0,39 mmol). Depois de agitar durante 12 h, mais pentaidrato de sulfato de cobre (II) (10,6 mg, 0,23 equiv), L-ascorbato de sódio (37,4 mg, 1,04 equiv) e N-Boc-2-azidoetilamina (82,1 mg, 2,44 equiv) foram adicionados. Depois de agitar durante 4 dias totais, a mistura reacional foi diluída com EtOAc e água. As camadas foram separadas, e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com LiCl (5% aq), salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Hep, 040%) para proporcionar o composto do título (57,2 mg, 44%). LCMS : Ta = 1,06 min, m/z = 715,5 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00725] Etapa 4: Benzil ((2R,3S)-2-((1-(2-((terc-butoxicarbonil)a- mino)etil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il) (4-metoxi- benzil)carbamato. Preparado de maneira análoga ao exemplo 82 etapa 5, usando benzil ((2R,3S)-2-((1-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)etil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin- 3-il) (4-metoxibenzil)carbamato (57,2 mg, 0,080 mmol), CH3CN (762 μl), água (381 μl), peroxidissulfato de potássio (31 mg, 0,12 mmol) e fosfato de potássio, dibásico (19 mg, 0,109 mmol). 20,2 mg. LCMS : Ta = 0,89 min, m/z = 565,3 (M+1). Método 2 m_acídico.
[00726] Etapa 5: Terc-butil (2-(4-((( 2R, 3S )-3-amino-4- oxoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)etil)carbamato. A uma pasta fluida de benzil ((2R,3S)-2-((1-(2-((terc-butoxicarbo- nil)amino)etil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il) (4-metoxi- benzil)carbamato (20,2 mg, 0,036 mmol) em MeOH (0,68 mL) foram adicionados negro de Pd (19 mg, 0,018 mmol) e ácido fórmico (31 μl, 0,711 mmol). Depois de agitar em ta durante 3 h, mais negro de Pd (9,7 mg) foi adicionado. Depois de agitar em ta durante adicional de 5,5 h, a mistura reacional foi filtrada através de celulose com eluente de MeOH, e o filtrado foi concentrado em vácuo. Foi usado na etapa 6 sem outra purificação. LCMS : Ta = 0,396 min, m/z = 311,1 (M+1). Método 2 m_acídico.
[00727] Etapa 6: Terc-butil 2-((( Z)-(2-((( 2R, 3S )-2-((1-(2-(( terc - butoxicarbonil)amino)etil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4-oxoazetidin- 3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato.
[00728] Preparado de maneira análoga ao exemplo 82 etapa 7, usando ácido (Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2- il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (18,55 mg, 0,043 mmol), HATU (17,7 mg, 0,047 mmol), DCM:DMF (1:3, 800 μl), DIPEA (18,86 μl, 0,108 mmol), terc-butil (2-(4-(((2R,3S)-3-amino-4- oxoazetidin-2-il)metil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)etil)carbamato (11,17 mg, 0,036 mmol). 6,5 mg. LCMS : Ta = 0,971 min, m/z = 722,4 (M+1). Método 2 m_acídico,1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 7,82 (s, 1 H), 7,32 (s, 1 H), 5,34 (d, J = 4,9 Hz, 1 H), 4,43 (t, J = 5,9 Hz, 3 H), 4,19 (dt, J = 9,3, 4,5 Hz, 1 H), 4,09 (q, J = 7,1 Hz, 1 H), 3,54-3,45 (m, 3 H), 3,13 (ddd, J = 15,0, 11,8, 6,0 Hz, 2 H), 2,93 (dd, J = 15,2, 9,6 Hz, 1 H), 2,01 (s, 2 H), 1,53 (d, J = 1,4 Hz, 14 H), 1,49 (s, 7 H), 1,46 (d, J = 1,7 Hz, 15 H), 1,38 (s, 14 H), 1,23 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
[00729] Etapa 7: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil- 1-oxopropan-2-il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-((1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)etil)-1H-1,2,3- triazol-4-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. Preparado de maneira análoga ao exemplo 82, etapa 9, usando terc-butil 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)- 2-((1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)etil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoato (6,5 mg, 9,00 μmol), DMF (200 μl), SO3^DMF (5,8 mg, 0,037 mmol). Foi usado na etapa 8 sem outra purificação. LCMS : Ta = 0,911 min, m/z = 802,1 (M+1). Método 2 m_acídico.
[00730] Etapa 8: Ácido 2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1-(2-aminoetil)-1 H- 1,2,3-triazol-4-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico. Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido, usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(((1-(terc-butóxi)-2-metil-1-oxopropan-2- il)óxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2- ((1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)etil)-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-4- oxoazetidina-1-sulfônico (7,22 mg, 9,00 μmol), DCM (200 μl) e TFA (50 μl, 649 μmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 19x100 mm, 5 μm, coluna C18; AcN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min) proporcionando o composto do título (1,2 mg, 24%). LCMS : Ta = 0,487min, m/z = 546,2 (M+1). Método 2 m_acídico. Exemplo 102: Ácido 1-((( Z)-(2-((( 2R, 3S )-2-((4-(((2- aminoetil)amino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1 - sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0154
[00731] Preparado de maneira análoga ao exemplo 90, usando terc-butil (2-aminoetil)carbamatoand benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato na etapa 3. LCMS : Ta = 0,31 min, m/z = 573,2 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,24 (d, J = 9,0Hz, 1,0 H), 7,75 (s, 1 H), 7,22 (s, 2 H), 6,71 (s, 1 H), 5,42-5,28 (m, 1 H), 4,86 (dd, J = 14,3, 4,1 Hz, 1 H), 4,72-4,59 (m, 1 H), 4,53 (ddd, J = 7,4, 5,5, 4,3 Hz, 1 H), 4,24-4,09 (m, 2 H), 3,10-2,97 (m, 5 H), 1,34-1,19 (m, 3 H), 1,19-1,06 (m, 1H). Exemplo 103: Ácido 1-((( Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-((( 2R, 3S )-2-((4- ((azetidin-3-ilamino)metil)-2 H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0155
[00732] Preparado de maneira análoga ao exemplo 90, usando terc-butil 3-aminoazetidina-1-carboxilatoand benzidril 1-(((Z)-(1-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato na etapa 3. LCMS : Ta = 0,31 min, m/z = 585,2 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (500 MHz, D2O) δ 7,84 (s, 1 H), 7,14 (s, 1 H), 5,60 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 5,044,87 (m, 3 H), 4,52-4,36 (m, 5 H), 4,35 (s, 1 H), 1,35-1,29 (m, 2 H), 1,24-1,14 (m, 2H). Exemplo 104: Ácido 1-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-((( 2R, 3S )-2- (((R )-5-(formimidamidometil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0156
[00733] Preparado de maneira análoga ao exemplo 26, usando formamidato de etila-HCl. LCMS : Ta = 0,29 min, m/z = 575,0 (M+1) Método 2 m_acídico. Exemplo 105: Ácido 2-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-((( 2R, 3S )-2-((3- ciano-1 H -1,2,4-triazol-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)- 2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0157
[00734] Preparado de maneira análoga ao exemplo 54, usando 1H- 1,2,4-triazol-3-carbonitrila. LCMS : m/z = 526,0 [M-H]; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 8,57 (s, 1 H), 6,90 (s, 1 H), 5,34 (br s, 1 H), 5,20-4,77 (m, 3 H), 1,31 (s, 6H). Exemplo 106: Ácido 1-((( Z)-(2-((( 2R, 3S )-2-((4-((3-aminoazetidin-1- il)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0158
[00735] Preparado de maneira análoga ao exemplo 90, usando terc-butil (2-oxoetil)carbamato e benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ci- clopropanocarboxilato na etapa 3, a não ser que não houvesse uma preparação adicional na etapa sulfonilação. O produto de sulfonilação bruto foi tratado com piridina em MeOH a 40 °C durante 1 h para remover o produto de supersulfonilação em azetidina. LCMS : Ta = 0,30 min, m/z = 585,2 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (500 MHz, D2O) δ 7,76 (s, 1 H), 7,03 (s, 1 H), 5,50 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 4,97-4,89 (m, 1 H), 4,89-4,77 (m, 2 H), 4,56-4,48 (m, 3 H), 4,46-4,35 (m, 3 H), 1,29-1,18 (m, 2 H), 1,15-1,08 (m, 2 H). Exemplo 107: Ácido (S)-2-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((1 H-1,2,4-triazol-1- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)-3-(4-carbamimidoilfenóxi)propanoico.
Figure img0159
[00736] Preparado de maneira análoga ao exemplo 68, usando (R)- benzidril 2-(aminoóxi)-3-(4-(N-(terc-butoxicarbonil)carbamimidoil)fenó- xi)propanoato (preparado de acordo com WO2013110643). LCMS : Ta = 0,30 min, m/z = 623,4 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 9,14 (s, 2 H), 8,68 (brs, 2 H), 8,37 (s, 1 H), 7,90 (s, 1 H), 7,77-7,70 (m, 2 H), 7,28 (br s, 2 H), 6,95 (brs, 1 H), 6,79 (s, 1 H), 6,55 (br s, 1 H), 5,19-5,11 (m, 1 H), 5,07-4,98 (m, 1 H), 4,54-4,39 (m, 3 H), 4,28-4,22 (m, 1H).
Exemplo 108: Ácido 1-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2- (((SSj^Rl-∑-oxo-^-d^oxoimidazoHdin-l-iljmetHj-l-sulfoazetidin-S- il)amino)etilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
[00737] Etapa 1: Benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)-2-(((2S,3S)-2-(hidroximetil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)- 2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma solução de ácido (Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (6,66 g, 12,38 mmol) a 0 °C em DCM (61,9 mL, relação: 1) e DMF (61,9 mL, relação: 1) foram adicionados DIPEA (6,49 mL, 37,2 mmol) e HATU (5,65 g, 14,86 mmol). Depois de 20 min, (3S,4S)-3-amino-4-(hidroximetil)azetidin-2- ona (1,44 g, 12,38 mmol) foi adicionado. Depois de agitar durante 2 h em ta, a mistura reacional foi concentrada em vácuo e diluída com EtOAc. A camada orgânica foi lavada com água, salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (Acetona-DCM) para proporcionar o composto do título (4,4 g, 56%). LCMS : Ta = 0,97 min, m/z = 636,1 (M+1), Método 2 m_acídico,1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 11,80 (brs, 1 H), 9,08 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 8,41 (s, 1 H), 7,48-7,32 (m, 5 H), 7,32-7,15 (m, 6 H), 6,84 (s, 1 H), 5,20 (ddd, J = 9,2, 5,1, 0,9 Hz, 1 H), 4,77 (t, J = 5,3 Hz, 1 H), 3,76-3,70 (m, 1 H), 3,623,48 (m, 1 H), 3,47-3,33 (m, 1 H), 1,56-1,33 (m, 13 H).
[00738] Etapa 2: Benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)-2-(((2S,3S)-2-(((metilsulfonil)óxi)metil)-4-oxoazetidin- 3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)-2-(((2S,3S)-2-(hidroximetil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (1g, 1,57 mmol) a 0 °C em THF (15,7 mL) foram adicionados TEA (0,66 mL, 4,7 mmol) e MsCl (25 μl, 0,32 mmol). Depois de 2 h, a mistura reacional foi diluída com EtOAc, lavada com salmoura, secada em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo, proporcionando o composto do título (quantitativo assumido). LCMS : Ta = 0,99 min, m/z = 714,1 (M+1), Método 2 m_acídico.
[00739] Etapa 3: Benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(azidometil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)- 2-(((2S,3S)-2-(((metilsulfonil)óxi)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (1,3 g, 1,82 mmol) em DMF (20 mL) foram adicionados NaI (0,82 g, 5,5 mmol) e azida de sódio (0,83 g, 12,8 mmol). Depois de agitar a 60 °C durante 6 h, a mistura reacional foi extinguida com água gelada e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, salmoura, secadas em Na2SO4 anidroso, concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-heptano) para proporcionar o composto do título (689 mg, 57%). LCMS : Ta = 1,02 min, m/z = 661,1 (M+1), Método 2 m_acídico.
[00740] Etapa 4: Benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(aminometil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(azidometil)-4-oxoazetidin-3- il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (689 mg, 1,04 mmol) em THF (10 mL) e MeOH (1,3 mL) foi adicionado Ph3P (301 mg, 1,15 mmol). Depois de 12 h, a mistura reacional foi concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 0-100%) para proporcionar o composto do título (369 mg, 56%). LCMS : Ta = 0,88 min, m/z = 635,1 (M+1), Método 2 m_acídico.
[00741] Etapa 5: Benzidril 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-(((2-((((9H- fluoren-9-il)metóxi)carbonil)amino)etil)amino)metil)-4-oxoazetidin- 3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(aminometil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)- 1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (199 mg, 0,29 mmol) em DCE (2,9 mL) foram adicionados (9H-fluoren-9-il)metil (2- oxoetil)carbamato (84 mg, 0,30 mmol) e triacetoxiboroidreto de sódio (181 mg, 0,86 mmol). Depois de 12 h, a mistura reacional foi extinguida com NaHCO3 saturado (aq), diluída com EtOAc, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc, e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH- DCM, 0-100%) para proporcionar o composto do título (150 mg, 58%). LCMS : Ta = 1,10 min, m/z = 900,0 (M+1), Método 2 m_acídico,1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 9,16 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 8,35 (s, 1 H), 7,87 (d, J = 7,4 Hz, 2 H), 7,66 (d, J = 7,4 Hz, 2 H), 7,45-7,18 (m, 16 H), 6,83 (s, 1 H), 5,24-5,17 (m, 1 H), 4,28 (d, J = 6,7 Hz, 2 H), 4,19 (d, J = 6,3 Hz, 1 H), 3,79-3,67 (m, 1 H), 3,03-2,95 (m, 2 H), 2,73-2,63 (m, 1 H), 1,54-1,37 (m, 13H).
[00742] Etapa 6: Benzidril 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-(((2- aminoetil)amino)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2-((((9H-fluoren-9-il)metóxi)carbonil)ami- no)etil)amino)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (150 mg, 0,167 mmol) em DCM (1,7 mL) foi adicionado piperidina (16,50 μl, 0,167 mmol). Depois de 2 h, a mistura reacional foi concentrada em vácuo e liofilizada em CH3CN/água mistura para proporcionar o composto do título (quantitativo assumido). LCMS : Ta = 0,93 min, m/z = 678,5 (M+1), Método 2 m_acídico.
[00743] Etapa 7: Benzidril 1-((( Z)-(1-(2-(( terc-butoxicarbonil)a- mino)tiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxoimidazolidin-1- il)metil)azetidin-3-il)amino)etilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxi- lato. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-(((2- aminoetil)amino)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicar- bonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (90 mg, 0,133 mmol) em clorofórmio (2,7 mL) foram adicionados CDI (43,1 mg, 0,266 mmol) e TEA (111 μl, 0,797 mmol). Depois de 12 h, a mistura reacional foi concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 0-100%) para proporcionar o composto do título (46 mg, 49%). LCMS : Ta = 0,95 min, m/z = 704,0 (M+1), Método 2 m_acídico.
[00744] Etapa 8: Ácido (3 S ,4 R)-3-(( Z) -2-((1-((benzidrilóxi)car- bonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-oxo-4-((2-oxoimidazolidin-1-il)metil)azetidina-1- sulfônico, ácido (3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopro- póxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2- oxo-4-((3-oxo-1,2,4-triazinan-1-il)metil)azetidina-1-sulfônico. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxoimidazolidin-1-il)metil)azetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (46 mg, 65 μmol) em DMF (654 μl) foi adicionado SO3^DMF (100 mg, 0,654 mmol). Depois de agitar em ta durante 2 h, a mistura reacional foi diluída com EtOAc, lavada com salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo para proporcionar o composto do título (50 mg, 98%). LCMS : Ta = 0,84 min, m/z = 784,0 (M+1), Método 2 m_acídico. O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte.
[00745] Etapa 9: Ácido 1-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2- (((3S,4R)-2-oxo-4-((2-oxoimidazolidin-1-il)metil)-1-sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0160
[00746] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carb- onil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-oxo-4-((2-oxoimidazolidin-1-il)metil)azetidina-1-sulfônico, ácido (3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-oxo-4-((3-oxo-1,2,4- triazinan-1-il)metil)azetidina-1-sulfônico (48 mg, 61 μmol), DCM (0,61 mL) e TFA (0,28 mL, 3,7 mmol) durante 4 h. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; AcN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min) proporcionando o composto do título (3,6 mg, 10%). LCMS : Ta = 0,45 min, m/z = 518,1 (M+1), Método 2 m_acídico; 1H RMN (500 MHz, D2O): δ 7,01 (s, 1 H), 5,32 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 4,53-4,39 (m, 1 H), 3,61 (dd, J = 14,8, 6,9 Hz, 1 H), 3,56- 3,41 (m, 2 H), 3,35-3,21 (m, 3 H), 1,46-1,19 (m, 4 H).
Exemplo 109: Ácido 1-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-((( 2R, 3S )-2-((4,5- bis(aminometil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
[00747] Etapa 1: A uma solução de di-terc-butiliminodicarbonato (1,02 g, 4,60 mmol) em DMF (14 mL) a 0 °C foi adicionado hidreto de sódio (0,19 g, 4,83 mmol). O banho frio foi removido, e mais DMF (20 mL) foi adicionado. Depois de agitar durante 15 min, 1,4-diclorobut-2- ina (0,91 mL, 9,20 mmol) foi rapidamente adicionado. Depois de agitar em ta durante 12 h, a mistura reacional foi vertida em uma solução fria de LiCl (5% aq.). A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com LiCl (5% aq.), salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0-10%) para proporcionar o composto do título (467 mg, 33%). LCMS : Ta = 1,07 min, m/z = 326,0 (M+Na), Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 4,13 (t, J = 1,9 Hz, 2 H) 4,40 (t, J = 1,9 Hz, 2 H), 1,57-1,51 (m, 18H).
[00748] Etapa 2: Preparado de acordo com o procedimento descrito em Sharpless, K. B. Synthesis. 2005, 9, 1514. A uma solução de intermediário da etapa 1 (466 mg, 1,53 mmol) em 1,4-dioxano (5,8 mL) e água (1,9 mL) foi adicionado azida de sódio (401 mg, 6,17 mmol) seguido por cloreto de amônio (167,8 mg, 3,14 mmol). Depois de aquecer a 75 °C durante 11 h, a mistura reacional foi vertida em funil separador, e as camadas foram separadas. A aquosa foi extraída com EtOAc (3x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Hep, 0-40%) para proporcionar o composto do título (224 mg, 41%). LCMS : Ta = 0,90 min, m/z = 354,1 (M+1), Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 4,87 (s, 2 H), 4,56 (s, 2 H), 1,50 (s, 18H).
[00749] Etapa 3: Benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(azidometil)-5- ((bis(terc-butoxicarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma pasta fluida de benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- (((2S,3S)-2-(hidroximetil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (202 mg, 0,32 mmol), intermediário da etapa 2 (136 mg, 0,38 mmol) e trifenilfosfina (100 mg, 0,38 mmol) em THF (4 mL) a 0 °C foi adicionado DIAD (0,079 mL, 0,38 mmol) gota a gota. Depois de agitar em ta durante 12 h, a mistura reacional foi diluída com DCM e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Hep, 070%) para proporcionar o composto do título. LCMS : Ta = 1,27 min, m/z = 971,5 (M+1), Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,38 (d, J = 9,1 Hz, 1 H), 8,56 (d, J = 1,7 Hz, 1 H), 7,45 - 7,38 (m, 5 H), 7,32 - 7,20 (m, 7 H), 6,84 (s, 1 H), 5,41 (dd, J = 9,0, 5,2 Hz, 1 H), 4,78 (d, J = 1,5 Hz, 2 H), 4,51 (d, J = 1,2 Hz, 2 H), 4,48 - 4,42 (m, 2 H), 4,37 - 4,30 (m, 1 H), 1,42 (d, J = 39,1 Hz, 31H).
[00750] Etapa 4: Ácido (2R,3S)-2-((4-(azidometil)-5-((bis( terc - butoxicarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-3-((Z)-2-((1- ((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicar- bonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(azidometil)-5-((bis(terc- butoxicarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)ami- no)óxi)ciclopropanocarboxilato (103 mg, 0,11 μmol) em DMF (530 μl) a 0 °C foi adicionado SOa^DMF (33,5 mg, 0,21 mmol). Depois de agitar em ta durante 3 h, a mistura reacional foi diluída com EtOAc, lavada com LiCl (5% aq.), salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo para proporcionar o composto do título (quantitativo assumido). LCMS : Ta = 1,16 min, m/z = 1051,6 (M+1), Método 2 m_acídico. O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte.
[00751] Etapa 5: Ácido (2R,3 S )-2-((4-(aminometil)-5-((bis( terc - butoxicarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-3-((Z)-2-((1- ((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbo- nil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. A uma solução de ácido (2R,3S)-2-((4-(azidometil)-5-((bis(terc-butoxicarbo- nil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)car- bonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (111 mg, 0,11 mmol) em EtOAc (1,1 mL) e EtOH (0,22 mL) sob N2 foi adicionado Pd-C (22 mg, 0,021 mmol). O sistema foi evacuado e carregado outra vez com H2 (3x). Depois de agitar em ta durante 4 h, a mistura reacional foi filtrada através de celite com EtOAc e lavagem com EtOH. O filtrado foi concentrado em vácuo para proporcionar o composto do título (quantitativo assumido). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 1,06 min, m/z = 1025,7 (M+1), Método 2 m_acídico.
[00752] Etapa 6: Ácido 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2- ((4,5-bis(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin- 3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0161
[00753] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-2-((4-(aminometil)-5- ((bis(terc-butoxicarbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-3-((Z)- 2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (109 mg, 0,11 μmol), DCM (1,1 mL) e TFA (0,49 mL, 6,36 mmol) durante 2 h. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min) proporcionando o composto do título (12 mg, 19%). LCMS : Ta = 0,46 min, m/z = 559,2 (M+1), Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,16 (s, 1 H), 5,61 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 5,07-4,88 (m, 3 H), 4,34 (s, 4 H), 1,39-1,13 (m, 4H). Exemplo 110: Ácido 2-((( Z)-(2-((( 2R, 3S )-2-((4-(aminometil)-2 H -1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1 -(2- aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)-3-(4- carbamimidoilfenóxi)propanoico.
Figure img0162
[00754] Preparado de maneira análoga ao exemplo 107, usando terc-butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3- triazol-4-il)metil)carbamato. LCMS : Ta = 0,29 min, m/z = 652,1 (M+1), Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,53 (d, J = 8,9 Hz, 2 H), 7,43 (s, 1 H), 7,03 (s, 1 H), 6,82 (d, J = 8,9 Hz, 2 H), 5,35-5,28 (m, 1 H), 4,97-4,91 (m, 1 H), 4,77-4,70 (m, 1 H), 4,61-4,55 (m, 2 H), 4,384,29 (m, 1 H), 4,27-4,19 (m, 1 H), 4,00 (s, 2H). Exemplo 111: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((( R )-5-((3-(2-aminoetil)u- reído)metil)-2-oxooxazolidin-3-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0163
[00755] Preparado de maneira análoga ao exemplo 26, usando terc-butil (2-(1H-imidazol-1-carboxamido)etil)carbamato. LCMS : Ta = 0,31 min, m/z = 634,3 (M+1), Método 2 m_acídico; 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6): δ 9,18 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,68 (br s, 2 H), 7,28 (brs, 2 H), 6,82 (s, 1 H), 6,41 (t, J = 5,9 Hz, 1 H), 6,31-6,20 (m, 1 H), 5,23 (dd, J = 8,9, 5,83 Hz, 1 H), 4,52-4,44 (m, 1 H), 4,24-4,12 (m, 1 H), 3,69-3,58 (m, 1 H), 2,90-2,75 (m, 2 H), 1,38-1,27 (m, 4H). Exemplo 112: Ácido 1-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2- (((3 S ,4 R )-2-oxo-4-((4-((piperidin-4-ilamino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2- il)metil)-1-sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0164
[00756] Preparado de maneira análoga ao 90, usando terc-butil 4- aminopiperidina-1-carboxilato e benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbo- nil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato na etapa 3. LCMS : Ta = 0,31 min, m/z = 613,5 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,73 (s, 1 H), 7,00 (s, 1 H), 5,49 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,90 (q, J = 5,5Hz, 1 H), 4,85-4,74 (m, 2 H), 4,33 (s, 2 H), 3,53-3,37 (m, 2 H), 3,09-2,88 (m, 2 H), 2,29 (t, J = 12,5 Hz, 2 H), 1,871,66 (m, 2 H), 1,25-1,12 (m, 2 H), 1,11-0,95 (m, 2 H). Exemplo 113: Ácido 2-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2- (((3 S ,4 R )-2-oxo-4-((2-oxoazetidin-1-il)metil)-1-sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0165
[00757] Preparado de maneira análoga ao exemplo 1, usando 3- bromopropanoico. LCMS : m/z = 503,0 [M-H]; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 6,95 (s, 1 H), 5,27 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 4,52-4,43 (m, 1 H), 3,66-3,60 (m, 1 H), 3,36-3,31 (m, 2 H), 3,28 (m, 1 H), 2,76 (t, J = 3,6 Hz, 2 H), 1,36 (s, 3 H), 1,35 (s, 3H). Exemplo 114: Ácido 1-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2 R ,3 S )-2-((4- (((3-guanidinopropil)amino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo- 1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0166
[00758] Preparado de maneira análoga ao exemplo 90, usando N- (3-aminopropil)-N'-terc-butoxicarbonil guanidineand benzidril 1-(((Z)-(1- (2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H- 1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato na etapa 3. LCMS : Ta = 0,55 min, m/z = 629,4 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,80 (s, 1 H), 7,05 (s, 1 H), 5,68-5,57 (m, 1 H), 5,054,90 (m, 2 H), 4,84-4,79 (m, 1 H), 4,34 (s, 2 H), 3,29-3,21 (m, 2 H), 3,19-3,08 (m, 2 H), 2,02-1,91 (m, 2 H), 1,29-0,94 (m, 4 H). Exemplo 115: Ácido 1-((( Z-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-(((3-aminopropil) (metil)amino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1 - sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0167
[00759] Preparado de maneira análoga ao exemplo 90, usando terc-butil (3-(metilamino)propil)carbamato e benzidril 1-(((Z)-(1-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato na etapa 3.. LCMS : Ta = 0,53 min, m/z = 601,4 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,91 (s, 1 H), 7,06 (s, 1 H), 5,55 (d, 1 H, J = 6,1 Hz), 5,06-4,88 (m, 3 H), 4,49 (s, 2 H), 3,26-3,15 (m, 2 H), 3,06 (t, 2 H, J = 7,5 Hz), 2,89 (s, 3 H), 2,20-2,07 (m, 2 H), 1,30-1,07 (m, 4H). Exemplo 116: Ácido 1-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2 R ,3 S )-2-((4- (((3-(metilamino)propil)amino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0168
[00760] Preparado de maneira análoga ao exemplo 90, usando terc-butil (3-aminopropil) (metil)carbamato e benzidril 1-(((Z)-(1-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato na etapa 3. LCMS : Ta = 0,48 min, m/z = 601,4 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,82 (s, 1 H), 7,09 (s, 1 H), 5,66-5,53 (m, 1 H), 5,034,87 (m, 3 H), 4,37 (s, 2 H), 3,21-3,05 (m, 4 H), 2,68 (s, 3 H), 2,17-2,02 (m, 2 H), 1,30-1,04 (m, 4 H). Exemplo 117: Ácido 1-((( Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2 R ,3 S )-2-((4- (((2-(metilamino)etil)amino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo- 1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0169
[00761] Preparado de maneira análoga ao exemplo 90, usando terc-butil (2-aminoetil)(metil)carbamato e benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato na etapa 3. LCMS : Ta = 0,44 min, m/z = 587,2 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,82 (s, 1 H), 7,09 (s, 1 H), 5,58 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 5,02-4,82 (m, 3 H), 4,42 (s, 2 H), 3,55-3,40 (m, 4 H), 2,75 (s, 3 H), 1,30-1,04 (m, 4 H). Exemplo 118: Ácido 1-(((Z-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((4-aminobutil)ami- no)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0170
[00762] Preparado de maneira análoga ao exemplo 90, usando terc-butil (4-aminobutil)carbamato e benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-tria- zol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclo- propanocarboxilato na etapa 3. LCMS : Ta = 0,32 min, m/z = 601,3 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,71 (s, 1 H), 6,99 (s, 1 H), 5,48 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,95-4,69 (m, 3 H), 4,24 (s, 2 H), 3,00 (t, J = 7,3 Hz, 2 H), 2,87 (t, J = 7,1 Hz, 2 H), 1,77-1,51 (m, 4 H), 1,23-1,12 (m, 2 H), 1,12-0,90 (m, 2 H).
Exemplo 119: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((3-(3-aminopro- pil)guanidino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1 - sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
[00763] Etapa 1: Terc-butil (3-(3-benzoiltioureído)propil)car- bamato. Preparado de acordo com o procedimento descrito por Jubian a al. Angew.Chem, 1995, 107, 1343 e Rasmussen et al. Synthesis, 1988, 456. A uma solução de isotiocianato de benzoíla (0,93 g, 5,70 mmol) em acetona (10 mL) foi adicionado terc-butil (3- aminopropil)carbamato (0,95 g, 5,45 mmol). Depois de aquecer a 60 °C durante 2,5 h, a mistura reacional foi concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-heptano, 0-40%), proporcionando o composto do título (0,83 g, 43%). LCMS : Ta = 0,93 min, m/z = 338,0 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00764] Etapa 2: Terc-butil (3-tioureídopropil)carbamato. A uma solução de terc-butil (3-(3-benzoiltioureído)propil)carbamato (0,83 g, 2,45 mmol) em MeOH (15 mL) foi adicionado solução aquosa de hidróxido de sódio (1,96 mL, 2,45 mmol). Depois de agitar em ta durante 2 h, a mistura reacional foi concentrada em vácuo e azeotropada com tolueno. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 9% com 1% de NH4O H), proporcionando o composto do título (0,83 g, 43%). LCMS : Ta = 0,47 min, m/z = 234,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00765] Etapa 3: Terc-butil (3-((imino(metiltio)metil)amino)pro- pil)carbamato. A uma solução de terc-butil (3-tioureídopropil)carba- mato (0,29 g, 1,28 mmol) em MeOH (8 mL) foi adicionado iodometano (80 μL, 1,29 mmol). Depois de agitar em ta durante 18 h, bicarbonato em suporte de polímero (0,5 g, 3,5 mmol NaCO3/g de resina) foi adicionado à mistura reacional. Depois de 30 min, a mistura reacional foi filtrada, e o filtrado foi concentrado em vácuo para produzir o produto desejado juntamente com o produto N-metilado, terc-butil (3- (3-metiltioureído)propil)carbamato (0,28 g, 87%, relação 2:1). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,44 min e 0,49 min, m/z = 248,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00766] Etapa 4: Ácido 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)- 2-((4-(3-imino-11,11-dimetil-9-oxo-10-oxa-2,4,8-triazadodecil)-2H- 1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico. A uma solução de terc-butil (3-((imino(metiltio)metil)amino)propil)carbamato (32,1 mg, 87 μmol) em dioxano (1 mL, relação: 2) em ta foram adicionados trietilamina (30 μL, 0,22 mmol), ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4- (aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico (exemplo 19, 23 mg, 43 μmol), e DMF (0,5 mL, relação: 1). Depois de aquecida a 60 °C durante 17 h, a mistura reacional foi diluída com EtOAc e água. A camada aquosa foi separada, concentrada em vácuo, azeotropada com tolueno e secada em alto vácuo para produzir o composto do título (quantitativo assumido). LCMS : Ta = 0,51 min, m/z = 729,6 (M+1), Método 2 m_acídico.
[00767] Etapa 5: Ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(3-aminopro- pil)guanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0171
[00768] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2- (((2R,3S)-2-((4-(3-imino-11,11-dimetil-9-oxo-10-oxa-2,4,8- triazadodecil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico (37 mg, 15 μmol), DCM (0,8 mL), e TFA (0,2 mL, 2,60 mmol) durante 1,5 h. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 19x100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min) proporcionando o composto do título (5,2 mg, 20%). LCMS : Ta = 0,39 min, m/z = 629,2 (M+1), Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,77 (s, 1 H), 7,15 (s, 1 H), 5,63 (d, J = 5,7 Hz, 1 H), 5,06-4,99 (m, 1 H), 4,98-4,89 (m, 2 H), 4,57 (s, 2 H), 3,39-3,34 (m, 2 H), 3,14-3,06 (m, 2 H), 2,01 (p, J = 7,2 Hz, 2 H), 1,39-1,29 (m, 2 H), 1,26-1,15 (m, 2H). Exemplo 120: Ácido 1-((( Z-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((3-(3- aminopropil)guanidino)metil)-1 H -1,2,3-triazol-1-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0172
[00769] Preparado de maneira análoga ao exemplo 119, usando terc-butil (3-((imino(metiltio)metil)amino)propil)carbamato. LCMS : Ta = 0,30 min, m/z = 629,1 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (500 MHz, D2O) δ 7,97 (s, 1 H), 7,05 (s, 1 H), 5,42 (d, J = 5,4Hz, 1 H), 4,87-4,78 (m, 1 H), 4,45 (s, 1 H), 3,24 (t,J = 6,9Hz, 1 H), 2,98-2,93 (m, 1 H), 2,64 (s, 1 H), 1,87 (dt, J = 14,9, 7,18 Hz, 3 H), 1,33-1,25 (m, 3 H), 1,21-1,10 (m, 4 H). Exemplo 121: Ácido 2-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2- ((2,5-dioxopirrolidin-1-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)- 2-oxoetilideno)amino)óxi)-2-metilpropanoico.
Figure img0173
[00770] Preparado de maneira análoga ao exemplo 54, usando pirrolidina-2,5-diona. LCMS : Ta = 0,55 min, m/z = 533,3 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6:D2O (1:1)): δ 6,94 (s, 1 H), 5,18 (d, J = 5,9 Hz, 1 H), 4,53-4,43 (m, 1 H), 3,96-3,86 (m, 1 H), 3,36-3,25 (m, 1 H) 2,53 (s, 4 H), 1,40 (s, 3 H) 1,37 (s, 3 H). Exemplo 122: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-(aminometil)-2- oxoimidazolidin-1 -il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1 -(2- aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico
Figure img0174
[00771] Preparado de maneira análoga ao exemplo 108, usando benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((((S)-2-((((9H-fluoren-9- il)metóxi)carbonil)amino)-3-((terc butoxicarbonil)amino)propil)amino)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1- (2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato.
[00772] Diastereômero A: 3,1 mg. LCMS : Ta = 0,65 min, m/z = 547,1 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,12 (s, 1 H), 5,39 (d, J = 6,8 Hz, 1 H), 4,60-4,56 (m, 1 H), 3,84 (t, J = 9,9 Hz, 1 H), 3,59-3,53 (m, 1 H), 3,48-3,41 (m, 2 H), 3,21-3,09 (m, 3 H), 1,46 (brs,3 H), 1,36 (brs, 3H).
[00773] Diastereômero B: 2,9 mg, LCMS : Ta = 0,65 min, m/z = 547,1 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,12 (s, 1 H), 5,42 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,61-4,54 (m, 1 H), 4,16-4,08 (m, 1 H), 3,82-3,72 (m, 2 H), 3,55-3,49 (m, 1 H), 3,27-3,15 (m, 3 H), 1,47 (brs, 3 H), 1,37 (brs, 3H). Exemplo 123: 3-(((2-(((2 R ,3 S )-3-(( Z) -2-(2-aminotiazol-4-il)-2-((1- carboxiciclopropóxi)imino)acetamido)-4-oxo-1-sulfoazetidin-2- il)metil)-2 H -1,2,3-triazol-4-il)metil)amino)- N, N, N -trimetilpropan-1- amínio.
Figure img0175
[00774] Preparado de maneira análoga ao exemplo 90, usando N1,N1,N1-trimetilpropano-1,3-diamínio 2,2,2-trifluoroacetato.. LCMS : Ta = 0,51 min, m/z = 629,5 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,81 (s, 1 H), 7,09 (s, 1 H), 5,70-5,63 (m, 1 H), 5,03-4,93 (m, 3 H), 4,83-4,82 (m, 1 H), 4,37 (s, 2 H), 3,44-3,37 (m, 2 H), 3,22-3,16 (m, 2 H), 3,07 (s, 9 H), 2,26-2,17 (m, 2 H), 1,29-1,10 (m, 4 H).
Exemplo 124: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((4-aminobuta- namido)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
[00775] Etapa 1: Benzidril 1-((( Z)-(1-(2-(( terc-butoxicarbo- nil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((metilsulfonil)óxi)metil)- 2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- (((2R,3S)-2-((4-(hidroximetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazeti- din-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (178 mg, 0,25 mmol) e DIPEA (65 μL, 0,37 mmol) em DCM (2,5 mL) a 0 °C foi adicionado MsCl (25 μL, 0,32 mmol). Depois de 1 h a 0 °C, a mistura reacional foi diluída com DCM (10 mL), lavada com HCl a 0,2 N e NaHCO3 saturado (aq). A camada orgânica foi secada em Na2SO4, concentrada em vácuo para proporcionar o composto do título (190 mg, 96%). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 1,05 min, m/z = 795,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00776] Etapa 2: Benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)- 2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclo- propanocarboxilato. A uma solução de NH4OH aq. (2 mL, 28-30% em peso) em EtOH (2 mL, relação:1) e THF (2 mL, relação:1) foi adicionado uma solução de benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbo- nil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((metilsulfonil)óxi)metil)-2H- 1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)ami- no)óxi)ciclopropanocarboxilato (190 mg, 0,24 mmol) em THF (1 mL) a - 5 °C gota a gota. Depois de agitar a -5 °C durante 1 h e ta durante 12 h, a mistura reacional foi diluída com 40 mL de DCM e lavada com 10 mL de NaHCO3 saturado aq. (aq), secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 5-10%) para proporcionar o composto do título (120 mg, 49%). LCMS : Ta = 0,87 min, m/z = 716,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00777] Etapa 3: Benzidril 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((4-(( terc - butoxicarbonil)amino)butanamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma solução de ácido 4-((terc-butoxicarbonil)amino)butanoico (30,7 mg, 0,15 mmol) em DCM (2 mL) a 0 °C foram adicionados DIPEA (35 μL, 0,20 mmol) e HATU (65 mg, 0,17 mmol). Depois de 10 min, benzidril 1-(((Z)-(2- (((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (90 mg, 0,10 mmol) foi adicionado. Depois de agitar a 0 °C durante 1 h, a mistura reacional foi diluída com DCM (40 mL), lavada com Na2CO3 aq. a 2M (20 mL), salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH- DCM, 5-10%) para proporcionar o composto do título (42 mg, 46%). LCMS : Ta = 1,07 min, m/z = 901,5 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00778] Etapa 4: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)car- bonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tia- zol-4-il)acetamido)-2-((4-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)butana- mido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfô- nico. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((4-((terc- butoxicarbonil)amino)butanamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (42 mg, 47 μmol) em DMF (0,47 mL) foi adicionado SO3^DMF (74 mg, 0,47 mmol). Depois de agitar em ta durante 5 h, outros 10 eq de SO3^DMF foram adicionados e agitados em ta durante 2 h. A mistura reacional foi diluída com EtOAc (60 mL) e salmoura (40 mL), e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (40 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para proporcionar o composto do título (45,3 mg, 99%). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,96 min, m/z = 981,6 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00779] Etapa 5: Ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((4-aminobu- tanamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin- 3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0176
[00780] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidriló- xi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tia- zol-4-il)acetamido)-2-((4-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)butana- mido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (47 mg, 48 μmol), DCM (0,5 mL) e TFA (0,2 mL, 2,87 mmol) durante 2 h. A mistura reacional foi concentrada em vácuo, e o resíduod foi dividido entre DCM e água gelada. A camada aquosa foi purificada por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; AcN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min) proporcionando o composto do título LCMS : Ta = 0,53 min, m/z = 615,3 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,63 (s, 1 H), 7,05 (s, 1 H), 5,58-5,49 (m, 1 H), 4,964,83 (m, 3 H), 4,41 (brs, 2 H), 3,06-2,90 (m, 2 H), 2,44-2,28 (m, 2 H), 1,98-1,83 (m, 2 H), 1,38-1,04 (m, 4 H). Exemplo 125: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((3-((1 r,3 R )-3- aminociclobutil)guanidino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0177
[00781] Preparado de maneira análoga ao exemplo 119, usando terc-butil ((1r,3r)-3-((imino(metiltio)metil)amino)ciclobutil)carbamato. LCMS : Ta = 0,33 min, m/z = 641,0 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,72 (s, 1 H), 7,10 (s, 1 H), 5,58 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 5,01-4,95 (m, 1 H), 4,89-4,85 (m, 2 H), 4,53 (s, 2 H), 4,25-4,17 (m, 1 H), 4,05-3,95 (m, 1 H), 2,69-2,59 (m, 2 H), 2,58-2,48 (m, 2 H), 1,34-1,27 (m, 2 H), 1,19-1,12 (m, 2H).
Exemplo 126: Ácido 1-((( Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2 R ,3 S )-2-((4- ((3-(azetidin-3-ilmetil)guanidino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
[00782] Etapa 1: Terc-butil 3-((3-((2-(((2R,3S)-3-(((benzilóxi)car- bonil)amino)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)- 1,2-bis(terc-butoxicarbonil)guanidino)metil)azetidina-1- carboxilato.
[00783] Preparação de 2,2,2-trifluoroacetato de benzil ((2R,3S)-2- ((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)carbamato. A uma solução de NH-Boc [benzil ((2R,3S)-2-((4- (aminometil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato] (368 mg, 0,86 mmol) em DCM (4 mL) foi adicionado TFA (1,05 mL, 13,68 mmol). Depois de agitar em ta durante 1 h, a mistura reacional foi concentrada em vácuo para produzir o composto do título como sal de TFA (quantitativo assumido). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,43 min, m/z = 331,0 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00784] Preparação de terc-butil 3-((N,N'-bis(terc-butoxicarbonil)- 1H-pirazol-1-carboximidamido)metil)azetidina-1-carboxilato. A uma solução de Bis-Boc-pirazolcarboxamidina (2,49 g, 8,01 mmol), N-Boc- 3-hidroximetilazetidina (1,50 g, 8,01 mmol) e trifenilfosfina (2,10 g, 8,01 mmol) em THF (80 mL) a 0 °C foi adicionado DIAD (1,62 g, 8,01 mmol) gota a gota. Depois de agitar em ta durante 12 h, a mistura reacional foi concentrada em vácuo, e o resíduo foi dissolvido em 10% de EtOAc/heptano para triturar óxido de trifenilfosfina. O filtrado foi concentrado em vácuo e cromatografado por meio de cromatografia em sílica-gel de coluna (EtOAc-heptano, 0-35%) para proporcionar o composto do título (1,6 g, 41%). LCMS : Ta = 1,12 min, m/z = 480,0 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00785] Preparação de terc-butil 3-((3-((2-(((2R,3S)-3- (((benzilóxi)carbonil)amino)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4- il)metil)-1,2-bis(terc-butoxicarbonil)guanidino)metil)azetidina-1- carboxilato. A uma solução de benzil ((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H- 1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato 2,2,2-trifluoroa- cetato (340 mg, 0,77 mmol) em dioxano (6 mL) foram adicionados DIPEA (0,147 mL, 0,842 mmol) e uma solução de terc-butil 3-((N,N'- bis(terc-butoxicarbonil)-1H-pirazol-1-carboximidamido)metil)azetidina- 1-carboxilato (367 mg, 0,765 mmol) em dioxano (1 mL). Depois de aquecer a 60 °C durante 12 h, a mistura reacional foi concentrada em vácuo e purificada por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc- heptano, 0-95%) para proporcionar o composto do título (390 mg, 69%). LCMS : Ta = 0,94 min, m/z = 742,5 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00786] Etapa 2: Terc-butil 3-((3-((2-(((2 R ,3 S )-3-amino-4- oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-1,2-bis(terc- butoxicarbonil)guanidino)metil)azetidina-1-carboxilato. A uma solução de terc-butil 3-((3-((2-(((2R,3S)-3-(((benzilóxi)carbonil)amino)- 4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-1,2-bis(terc- butoxicarbonil)guanidino)metil)azetidina-1-carboxilato (390 mg, 0,526 mmol) em EtOH (10 mL) e MeOH (10,00 mL) foram adicionados Pd/C (5%, 112 mg, 53 μmol) e balão de hidrogênio depois de evacuação e carregada outra vez com H2. Depois de 1 h, a mistura reacional foi filtrada em almofada de celite, e o filtrado foi concentrado em vácuo para proporcionar o composto do título (302 mg, 95%). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,74 min, m/z = 608,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00787] Etapa 3: Terc-butil 3-((3-((2-(((2 R ,3 S )-3-(( Z)-2-((1- ((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbo- nil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3- triazol-4-il)metil)-1,2-bis(terc-butoxicarbonil)guanidino)metil)azeti- dina-1-carboxilato. A uma solução de terc-butil 3-((3-((2-(((2R,3S)-3- amino-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-1,2-bis(terc- butoxicarbonil)guanidino)metil)azetidina-1-carboxilato (309 mg, 0,51 mmol) e ácido (Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (273 mg, 0,51 mmol) em DMF (6 mL, relação: 1) e DCM (6 mL, relação: 1) foi adicionado HATU (232 mg, 0,61 mmol) seguido por DIPEA (0,22 mL, 1,27 mmol). Depois de agitar em ta durante 12 h, EtOAc foi adicionado à mistura reacional e lavado com água, salmoura, secado em Na2SO4, filtrao e concentrado em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-heptano, 0-95%) para proporcionar o composto do título (330 mg, 58%). LCMS : Ta = 1,15 min, m/z = 1127,8 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00788] Etapa 4: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbo- nil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-((2,3-bis(terc-butoxicarbonil)-3-((1-(terc- butoxicarbonil)azetidin-3-il)metil)guanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol- 2-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. A uma solução de terc-butil 3- ((3-((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)- 2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidin-2- il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-1,2-bis(terc- butoxicarbonil)guanidino)metil)azetidina-1-carboxilato (330 mg, 0,29 mmol) em DMF (2 mL) a 0 °C foi adicionado uma solução de SO3^DMF (359 mg, 2,34 mmol) em DMF (1 mL). Depois de agitar em ta durante 5 h, a mistura reacional foi diluída com EtOAc e lavada com salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo para proporcionar o composto do título (300 mg, 85%). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 1,25 min, m/z = 1208,7 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00789] Etapa 5: Ácido 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)- 2-((4-((3-(azetidin-3-ilmetil)guanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0178
[00790] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1- ((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-((2,3-bis(terc- butoxicarbonil)-3-((1-(terc-butoxicarbonil)azetidin-3- il)metil)guanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1- sulfônico (300 mg, 0,248 mmol), DCM (3 mL) e TFA (1,90 mL, 24,85 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 19x100 mm, 5 μm, coluna C18; AcN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 24 mL/min) proporcionando o composto do título (19 mg, 12%). LCMS : Ta = 0,32 min, m/z = 641,3 (M+1), Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,26 (br s, 1 H), 8,79 (br s, 3 H), 7,78-7,54 (m, 3 H), 7,14 (s, 2 H), 6,84 (s, 1 H), 5,06 (br s, 1 H), 4,88 (dd, J = 14,1, 3,94 Hz, 1 H), 4,70-4,59 (m, 1 H), 4,54-4,46 (m, 1 H), 4,35 (d, J = 3,8 Hz, 2 H), 4,00-3,89 (m, 2 H), 3,76-3,65 (m, 2 H), 3,08-2,94 (m, 1 H), 1,30-1,09 (m, 4H).
Exemplo 127: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((3-(aminometil)aze- tidina-1 -carboximidamido)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1 - sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
[00791] Etapa 1: Benzil ((2R,3S)-2-((4-(hidroximetil)-2H-1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. A uma solução de benzil ((2R,3S)-2-((4-(((terc-butildimetilsilil)óxi)metil)-2H-1,2,3-triazol- 2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (1,8 g, 4,04 mmol) em MeOH (60 mL) foi adicionado resina DOWEX-50W-X4 100-200 pré-lavada com MeOH (3,60 g, 4,04 mmol). Depois de agitar em ta durante 2 h, a mistura reacional foi filtrada, e o filtrado foi concentrado em vácuo para produzir o composto do título (quantitativo assumido). LCMS : Ta = 0,52 min, m/z = 332,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00792] Etapa 2: Terc-butil ((2-(((2R,3S)-3-(((benzilóxi)carbo- nil)amino)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)me- til)(((terc-butoxicarbonil)imino)(1H-pirazol-1-il)metil)carbamato. A uma solução de benzil ((2R,3S)-2-((4-(hidroximetil)-2H-1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (1,33 g, 4,01 mmol) e bis-Boc-pirazolcarboxamidina (1,37 g, 4,42 mmol) em THF (50 mL) foi adicionado trifenilfosfina (1,16 g, 4,42 mmol) seguido por DIAD (0,89 g, 4,42 mmol). Depois de agitar em ta durante 12 h, a mistura reacional foi concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-heptano, 0-90%) para proporcionar o composto do título (1,73 g, 69%). LCMS : Ta = 0,99 min, m/z = 624,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00793] Etapa 3: A uma solução de terc-butil ((2-(((2R,3S)-3- (((benzilóxi)carbonil)amino)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol- 4-il)metil)(((terc-butoxicarbonil)imino)(1 H-pirazol-1-il)metil)carbamato (320 mg, 0,51 mmol) em CH3CN (2 mL) foi adicionado Boc- aminometilazetidina (105 mg, 0,56 mmol). Depois de aquecer a 70 °C durante 1 h, a reação mistura foi concentrada em vácuo para proporcionar o composto do título. O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,91 min, m/z = 742,5 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00794] Etapa 4: Terc-butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazeti- din-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)((3-(((terc- butoxicarbonil)amino)metil)azetidin-1-il) ((terc-butoxicarbonil)i- mino)metil)carbamato. A uma solução de composto da etapa 3 (570 mg, 0,77 mmol) em EtOH (10 mL) e MeOH (10 mL) foram adicionados Pd/C (5%, 16,35 mg, 77 μmol) e balão de hidrogênio depois de evacuação e carregada outra vez com H2. Depois de 4 h, a mistura reacional foi filtrada em almofada de celite, e o filtrado foi concentrado em vácuo para proporcionar o composto do título (302 mg, 95%). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,68 min, m/z = 608,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00795] Etapa 5: Benzidril 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-(( N, N - bis(terc-butoxicarbonil)-3-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)a- zetidina-1-carboximidamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. Preparado de maneira análoga ao exemplo 126 etapa 3, usando terc-butil ((2- (((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4- il)metil)((3-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)azetidin-1-il) ((terc- butoxicarbonil)imino)metil)carbamato (460 mg, 0,76 mmol),ácido (Z)-2- ((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (407 mg, 0,76 mmol), DMF (8 mL), DCM (8 mL), HATU (345 mg, 0,91 mmol) e DIPEA (0,33 μL, 1,89 mmol). O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-heptano, 0-100%) para proporcionar o composto do título (0,65 g, 76%). LCMS : Ta = 1,15 min, m/z = 1127,9 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00796] Etapa 6: Ácido (2R,3 S )-3-(( Z)-2-((1-((benzidriló- xi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-((N,N'-bis(terc- butoxicarbonil)-3-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)azetidina-1- carboximidamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina- 1-sulfônico. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4- ((N,N'-bis(terc-butoxicarbonil)-3-(((terc- butoxicarbonil)amino)metil)azetidina-1-carboximidamido)metil)-2H- 1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (650 mg, 0,58 mmol) em DMF (3 mL) a 0 °C foi adicionado uma solução de SOβ^DMF (883 mg, 5,77 mmol) em DMF (1 mL) a 0 °C. Depois de agitar em ta durante 12 h, a mistura reacional foi diluída com EtOAc e lavada com salmoura, secada em Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo para proporcionar o composto do título (quantitativo assumido). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 1,18 min, m/z = 1208,5 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00797] Etapa 7: Ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(Aminome- til)azetidina-1-carboximidamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0179
[00798] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1- ((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-((N,N'-bis(terc- butoxicarbonil)-3-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)azetidina-1- carboximidamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1- sulfônico (690 mg, 0,57 mmol), DCM (3 mL) e TFA (2,1 mL, 27,4 mmol). O resíduo bruto foi purificado por meio de HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min) proporcionando o composto do título (98 mg, 27%). LCMS : Ta = 0,32 min, m/z = 641,3 (M+1), Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,73 (s, 1 H), 8,06 (s, 1 H), 7,72-7,54 (m, 3 H), 7,18 (s, 2 H), 6,74 (s, 1 H), 5,25 (dd, J = 8,9, 5,5 Hz, 1 H), 4,88 (dd, J = 14,2, 4,3 Hz, 1 H), 4,65 (dd, J = 14,2, 7,7 Hz, 1 H), 4,53 (ddd, J = 7,6, 5,6, 4,4 Hz, 1 H), 4,46-4,31 (m, 2 H), 4,15 (td, J = 8,7, 5,0 Hz, 2 H), 3,96-3,81 (m, 2 H), 3,11 (d, J = 7,3 Hz, 2H assumido; parcialmente obscurecido por água), 2,91 (p, J = 6,8 Hz, 1 H), 1,261,11 (m, 2 H), 1,08-0,95 (m, 2H). Exemplo 128: Ácido 1-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2- (((3 S ,4 R )-2-oxo-4-((4-((3-(piperidin-4-il)guanidino)metil)-2 H -1,2,3- triazol-2-il)metil)-1-sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0180
[00799] Preparado de maneira análoga ao exemplo 119, usando terc-butil 4-((imino(metiltio)metil)amino)piperidina-1-carboxilato. LCMS : Ta = 0,32 min, m/z = 655,1 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,73 (s, 1 H), 7,14 (s, 1 H), 5,59 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 5,014,94 (m, 1 H), 4,90-4,84 (m, 1 H), 4,80 (s, 1 H), 4,54 (s, 2 H), 3,80-3,71 (m, 1 H), 3,48 (d, J = 13,4 Hz, 2 H), 3,10 (t, J = 12,5 Hz, 2 H), 2,21 (d, J = 12,9 Hz, 2 H), 1,85-1,71 (m, 2 H), 1,38-1,31 (m, 2 H), 1,24-1,16 (m, 2 H). Exemplo 129: Ácido 1-((( Z-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((3-(2- aminoetil)guanidino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0181
[00800] Preparado de maneira análoga ao exemplo 119, usando terc- butil (2-((imino(metiltio)metil)amino)etil)carbamato. LCMS : Ta = 0,31 min, m/z = 615,4 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,63 (s, 1 H), 7,02 (s, 1 H), 5,49 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,88 (q, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,77 (d, J = 5,6 Hz, 2 H), 4,44 (s, 2 H), 3,48 (t, J = 5,9 Hz, 2 H), 3,14 (t, J = 5,9 Hz, 2 H), 1,28-1,15 (m, 2 H), 1,12-1,00 (m, 2 H).
Exemplo 130: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((1-(3- aminopropil)guanidino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
[00801] Etapa 1: Benzil ((2R,3S)-2-((4-(hidroximetil)-2H-1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. A uma solução de benzil ((2R,3S)-2-((4-(((terc-butildimetilsilil)óxi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (500 mg, 1,12 mmol) em MeOH (15 mL) foi adicionado resina DOWEX-50W-X4 100-200 (1 g, 1,12 mmol). Depois de agitar em ta durante 3 h, a mistura reacional foi filtrada, e o filtrado foi concentrado em vácuo para produzir o composto do título (quantitativo assumido). LCMS : Ta = 0,51 min, m/z = 332,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00802] Etapa 2: Benzil ((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. A uma solução de benzil ((2R,3S)-2-((4-(hidroximetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazeti- din-3-il)carbamato (385 mg, 1,16 mmol) em THF (10 mL) foi adicionado dióxido manganês (2,0 g, 23 mmol). Depois de agitar em ta durante 12 h, outro 1 g de MnO2 foi adicionado e agitado durante outra 1 h. A mistura reacional foi filtrada em celite com lavagem com MeOH. O filtrado foi concentrado em vácuo para produzir o composto do título (340 mg, 89%). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,61 min, m/z = 330,0 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00803] Etapa 3: A uma solução de benzil ((2R,3S)-2-((4-formil- 2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (340 mg, 1,03 mmol) e Boc-1,3-diaminopropano (360 mg, 2,07 mmol) em DCE (16 mL) e THF (6 mL) a 0 °C foi adicionado triacetoxiboroidreto de sódio (328 mg, 1,55 mmol). Depois de agitar em ta durante 18 h, a mistura reacional foi concentrada em vácuo, re-dissolvida em DCM, lavada com 5% de bicarbonato de sódio, salmoura, secada em MgSO4, filtrada e concentrada em vácuo para produzir o composto do título (470 mg, 93%). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,64 min, m/z = 488,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00804] Etapa 4: A uma solução de DIPEA (0,17 mL, 0,96 mmol) e produto da etapa 3 (470 mg, 0,96 mmol) em dioxano (15 mL) foi adicionado bis-Boc-pirazolcarboxamidina (359 mg, 1,16 mmol). Depois de aquecida a 60 °C durante 3 h, a mistura reacional foi concentrada em vácuo e purificada por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc- Heptano, 20-100%) para proporcionar o composto do título (130 mg, 18%). LCMS : Ta = 0,93 min, m/z = 730,5 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00805] Etapa 5: Preparado de maneira análoga ao exemplo 126 etapa 2, usando produto da etapa 4 (130 mg, 0,178 mmol), EtOH (5 mL) e metanol (3 mL), Pd/C (5%, 37,9 mg, 18 μmol). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte (100 mg, 94%). LCMS : Ta = 0,70 min, m/z = 596,0 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00806] Etapa 6: Benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((2,3-bis(terc- butoxicarbonil)-1-(3-((terc- butoxicarbonil)amino)propil)guanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. Preparado de maneira análoga ao exemplo 126 etapa 3, usando o produto da etapa 5 (100 mg, 0,168 mmol), terc-butil 3-((3-((2-(((2R,3S)-3-amino-4- oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)-1,2-bis(terc- butoxicarbonil)guanidino)metil)azetidina-1-carboxilato (309 mg, 0,51 mmol) e ácido (Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (90 mg, 0,17 mmol), DMF (3 mL), DCM (2 mL), HATU (83 mg, 0,22 mmol) e DIPEA (73 μL, 0,42 mmol). O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-heptano, 15-90%) para proporcionar o composto do título (110 mg, 59%) juntamente com o produto de bis-Boc. LCMS : Ta = 1,13 min, m/z = 1115,7 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00807] Etapa 7: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)car- bonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-((2,3-bis(terc-butoxicarbonil)-1-(3-((terc- butoxicarbonil)amino)propil)guanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. Preparado de maneira análoga ao exemplo 126 etapa 4, usando benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4- ((2,3-bis(terc-butoxicarbonil)-1-(3-((terc- butoxicarbonil)amino)propil)guanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)- 4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (110 mg, 99 μmol), DMF (2 mL), uma solução de SO3^DMF (121 mg, 0,79 mmol) em DMF (1 mL) seguido por outros 140 mg de SO3^DMF. O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte (quantitativo assumido). LCMS : Ta = 1,15 min, m/z = 1195,9 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00808] Etapa 8: Ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((1-(3-aminopro- pil)guanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazeti- din-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ci- clopropanocarboxílico.
Figure img0182
[00809] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)car- bonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-((2,3-bis(terc-butoxicarbonil)-1-(3-((terc- butoxicarbonil)amino)propil)guanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)- 4-oxoazetidina-1-sulfônico (118 mg, 99 μmol), DCM (2 mL) e TFA (2,0 mL, 26 mmol). O resíduo bruto foi purificado por meio de HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN- água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min) proporcionando o composto do título (5,1 mg, 8%). LCMS : Ta = 0,28 min, m/z = 629,4 (M+1). Método 2 m_acídico. Exemplo 131: Ácido 1-((( Z-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-(((3-amino-3- metilbutil)amino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1 - sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0183
[00810] Preparado de maneira análoga ao exemplo 90, usando terc-butil (4-amino-2-metilbutan-2-il)carbamato. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min). LCMS : Ta = 0,33 min, m/z = 615,3 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,76 (s, 1 H), 7,03 (s, 1 H), 5,52 (d, J = 5,6 Hz, 1 H), 4,97-4,90 (m, 1 H), 4,88-4,74 (m, 2 H), 4,31 (s, 2 H), 3,18-3,08 (m, 2 H), 2,04-1,94 (m, 2 H), 1,29 (s, 6 H), 1,23-1,18 (m, 2 H), 1,14-0,99 (m, 2 H). Exemplo 132: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-(((4-amino-2- metilbutan-2-il)amino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0184
[00811] Preparado de maneira análoga ao exemplo 90, usando terc-butil (3-amino-3-metilbutil)carbamato (proteção por Boc não foi necessária devido à amina impedida). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min). LCMS : Ta = 0,49 min, m/z = 615,3 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O): δ 7,86 (s, 1 H), 7,16 (s, 1 H), 5,62 (d, J = 5,4Hz, 1 H), 5,07-4,91 (m, 2 H), 4,88-4,79 (m, 3 H), 4,40 (s, 2 H), 3,23-3,13 (m, 2 H), 2,22-2,12 (m, 2 H), 1,49 (s, 6 H), 1,391,11 (m, 4H).
Exemplo 133: Ácido 1-((( Z-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((((2- aminoetóxi)carbonil)amino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
[00812] Etapa 1: 2-(( terc-butoxicarbonil)amino)etil 1H - imidazol-1-carboxilato. A uma solução de CDI (218 mg, 1,30 mmol) em DCM (4 mL) foi adicionado uma solução de terc-butil (2- hidroxietil)carbamato (0,22 mL, 1,37 mmol) em DCM (1 mL). Depois de agitar em ta durante 1 h, a mistura reacional foi usada diretamente em DCM para a próxima etapa.
[00813] Etapa 2: Benzidril 1-(((Z)-(1-(2-(( terc-butoxicarbo- nil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(10,10-dimetil-3,8-dioxo- 4,9-dioxa-2,7-diazaundecil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-2H-1,2,3-triazol- 2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (90 mg, 0,13 mmol) em DCM (2 mL) a 0 °C foi adicionado uma solução de ácido 2-((terc- butoxicarbonil)amino)etil 1 H-imidazol-1-carboxilato (0,59 mL, 0,19 mmol) em DCM (0,6 mL). Depois de agitar em ta durante 12 h, outros 3 equiv de 2-((terc-butoxicarbonil)amino)etil 1 H-imidazol-1- carboxilato (1,18 mL, 0,38 mmol) foram adicionados. Depois de agitar em ta durante adicional de 60 h, a mistura reacional foi dividida entre DCM (40 mL) e água (20 mL). A camada orgânica foi secada com Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH- DCM, 0-5%) para proporcionar o composto do título (64 mg, 56%). LCMS : Ta = 1,09 min, m/z = 903,5 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00814] Etapa 3: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)car- bonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-(10,10-dimetil-3,8-dioxo-4,9-dioxa-2,7- diazaundecil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1- sulfônico. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(10,10-dimetil-3,8- dioxo-4,9-dioxa-2,7-diazaundecil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (108 mg, 0,120 mmol) em DMF (1,2 mL) foi adicionado SO3^DMF (189 mg, 1,20 mmol). Depois de agitar em ta durante 5 h, a mistura reacional foi diluída com EtOAc (60 mL) e salmoura (20 mL). A camada aquosa foi extraída com EtOAc (20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secadas com Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo para produzir o composto do título (68 mg, 58%). O resíduo bruto foi usado como tal na etapa seguinte. LCMS : Ta = 0,96 min, m/z = 983,6 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00815] Etapa 4: Ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((((2-aminoetó- xi)carbonil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0185
[00816] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1- ((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-(10,10-dimetil-3,8- dioxo-4,9-dioxa-2,7-diazaundecil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxoazetidina-1-sulfônico (68 mg, 69 μmol), DCM (0,7 mL) e TFA (0,32 mL, 4,15 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (19 mg, 44%). LCMS : Ta = 0,54 min, m/z = 617,3 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,67 (s, 1 H), 7,10 (s, 1 H), 5,60-5,52 (m, 1 H), 5,01-4,84 (m, 3 H), 4,43-4,37 (s, 2 H), 4,35-4,27 (m, 2 H), 3,33-3,25 (m, 2 H), 1,36-1,13 (m, 4 H). Exemplo 134: Ácido 1-((( Z-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((2-aminoace- tamido)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclo- propanocarboxílico.
Figure img0186
[00817] Preparado de maneira análoga ao exemplo 124, usando ácido 2-((terc-butoxicarbonil)amino)acético. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSelect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min). LCMS : Ta = 0,48 min, m/z = 587,2 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,68 (s, 1 H), 7,12 (s, 1 H), 5,57-5,53 (m, 1 H), 4,96 (m, 3 H), 4,51 (s, 2 H), 3,84 (s, 2 H), 1,35 (m, 4 H). Exemplo 135: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((3-(2- aminoetil)ureído)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1 - sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0187
[00818] Preparado de maneira análoga ao exemplo 133, usando terc-butil (2-(1H-imidazol-1-carboxamido)etil)carbamato (sem base adicional) na etapa 2. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN- água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min). LCMS : Ta = 0,51 min, m/z = 616,3 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,62 (s, 1 H), 7,07 (s, 1 H), 5,55-5,49 (m, 1 H), 4,974,86 (m, 3 H), 4,34 (s, 2 H), 3,44-3,35 (m, 2 H), 3,12-3,03 (m, 2 H), 1,36-1,10 (m, 4H). Exemplo 136: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((3-(3- aminopropil)ureído)metil)-2 H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0188
[00819] Preparado de maneira análoga ao exemplo 133, terc-butil (3-(1H-imidazol-1-carboxamido)propil)carbamato (sem base adicional) na etapa 2. O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (Xselect CSH, 30x 100 mm, 5 μm, coluna C18; AcN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min). LCMS : Ta = 0,52 min, m/z = 630,4 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,60 (s, 1 H), 7,07 (s, 1 H), 5,57-5,48 (m, 1 H), 4,97-4,86 (m, 3 H), 4,32 (s, 2 H), 3,18 (m, 2 H), 2,97 (m, 2 H), 1,79 (m, 2 H), 1,33 (m, 4H).
Exemplo 137: Ácido (2R,3 S )-3-(( Z) -2-(2-aminotiazol-4-il)-2-((1- carboxiciclopropóxi)-imino)acetamido)-2-((4-((((1-metilpiridin-1-io- 3-il)metil)amino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1- sulfonato.
[00820] Etapa 1: Cloreto de 3-((((2-(((2 R ,3 S )-3-(( Z)-2-((1- ((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidin-2- il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)amino)metil)-1-metilpiridin-1-io.
[00821] A uma pasta fluida de 3-(amoniometil)-1-metilpiridin-1-io (147 mg, 0,755 mmol) em THF:EtOH (1:1, 1,26 mL) foi adicionado trietilamina (175 μl, 1,26 mmol) seguido por uma solução de benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4- (((metilsulfonil)óxi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropano-carboxilato (200 mg, 0,252 mmol) em THF (500uL), gota a gota. Depois de agitar em ta durante 20 h, a mistura foi concentrada em vácuo, em seguida redissolvida em DMSO e purificada por HPLC prep de fase reversa (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (50 mg, 23%) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,85 min, m/z = 821,3 (M+) Método 2 m_acídico.
[00822] Etapa 2: Cloreto de 3-((((2-(((2 R ,3 S )-3-(( Z)-2-((1- ((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidin-2- il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)(terc- butoxicarbonil)amino)metil)-1-metilpiridin-1-io.
[00823] Preparado em uma maneira análoga ao exemplo 85, etapa 4 usando cloreto de 3-((((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbo- nil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4- il)metil)amino)metil)-1-metilpiridin-1-io (50 mg, 0,058 mmol), anidrido de Boc (0,027 mL, 0,115 mmol), NaHCO3 (aq. saturada, 1,22 mL) e DCM (1,15 mL). LCMS : Ta = 0,99 min, m/z = 921,3 (M+) Método 2 m_acídico.
[00824] Etapa 3: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbo- nil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-(((terc-butoxicarbonil)((1-metilpiridin-1-io-3- il)metil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1- sulfonato.
[00825] Preparado de maneira análoga ao exemplo 19, etapa 3 usando cloreto de 3-((((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbo- nil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)(terc- butoxicarbonil)-amino)metil)-1-metilpiridin-1-io (49 mg, 0,051 mmol), SO3^DMF (78 mg, 0,51 mmol) e DMF (1 mL). LCMS : Ta = 0,99 min, m/z = 1002 (M+) Método 2 m_acídico.
[00826] Etapa 4: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-((1- carboxiciclopropóxi)-imino)acetamido)-2-((4-((((1-metilpiridin-1-io- 3-il)metil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1- sulfonato.
Figure img0189
[00827] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)car- bonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-(((terc-butoxicarbonil) ((1-metilpiridin-1-io-3- il)metil)amino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1- sulfonato (53 mg, 0,053 mmol), TFA (81 μl, 1,1 mmol) e DCM (72 mL). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (13 mg, 35%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,30 min, m/z = 635,3 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 9,00 (s, 1 H), 8,78-8,67 (m, 2 H), 7,97 (t, J = 7,1 Hz, 1 H), 7,86 (s, 1 H), 6,93 (s, 1 H), 5,75 (d, J = 5,3 Hz, 1 H), 5,11 (dd, J = 14,4, 3,7 Hz, 1 H), 5,064,99 (m, 1 H), 4,70-4,46 (m, 4 H), 4,38 (s, 3 H), 3,77-3,62 (m, 1 H), 1,35-1,26 (m, 1 H), 1,20-1,10 (m, 2 H), 0,93-0,82 (m, 1H).
Exemplo 138: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((4-aminopiperidin-1- il)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
[00828] Etapa 1: Benzidril 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((4-(( terc - butoxicarbonil)amino)piperidin-1-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato.
[00829] Benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)- 2-(((2R,3S)-2-((4-(((metilsulfonil)óxi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (64 mg, 0,081 mmol) e iodeto de sódio (18,1 mg, 0,121 mmol) foram agitados em DMF (700 μL) durante 14 h, e então carbonato de césio (33,4 mg, 0,103 mmol) e terc-butil piperidin-4-il carbamato (17,7 mg, 0,089 mmol) foram adicionados. Depois de 3 h de agitação adicional, a mistura foi diluída com EtOAc e solução de LiCl (5% aq). A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução de LiCl (5% aq), salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (1-8% de MeOH-DCM), proporcionando o composto do título (52,6 mg, 73%) como um sólido esbranquiçado. LCMS : Ta = 0,98 min, m/z = 899,7 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00830] Etapa 2: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)car- bonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-((4-((terc-butoxicarbonil)amino)piperidin-1- il)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((4-((terc- butoxicarbonil)amino)piperidin-1-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (53 mg, 59 μmol) em DMF (293 μL) a 0 °C foi adicionado SOa^DMF (24,3 mg, 0,159 mmol). Depois de agitar durante 2 h em ta, mais SOβ^DMF (24,3 mg, 81 μmol) foi adicionado. Depois de agitação adicional durante 16h, a solução foi concentrada em vácuo. O material bruto foi usado diretamente na etapa 3. LCMS : Ta = 0,97 min, m/z = 979,9 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00831] Etapa 3: Ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((4-aminopi- peridin-1-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0190
[00832] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidri- lóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4-((4-((terc- butoxicarbonil)amino)piperidin-1-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)- 4-oxoazetidina-1-sulfônico (58 mg, 59 μmol), DCM (590 μL), anisol (13 μL, 0,12 mmol) andTFA (273 μL, 3,54 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (2,7 mg, 7,3%) como um pó esbranquiçado. LCMS : Ta = 0,50 min, m/z = 613,4 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,93 (s, 1 H), 7,12 (s, 1 H), 5,59 (d, J = 5,5 Hz, 1 H), 5,07-5,00 (m, 1 H), 4,99-4,96 (m, 1 H), 4,93-4,90 (m, 1 H), 4,39 (s, 2 H), 3,75-3,62 (m, 2 H), 3,63-3,51 (m, 1 H), 3,28-3,08 (m, 2 H), 2,33 (d, J = 13,7 Hz, 2 H), 2,04-1,89 (m, 2 H), 1,38-1,11 (m, 4H).
Exemplo 139: (2R,3 S )-3-(( Z-2-(2-aminotiazol-4-il)-2-((1 -carboxici- clopropóxi)imino)acetamido)-2-((4-(((6,7-di-hidro-5 H - pirazolo[1,2-a][1,2,4]triazol-4-io-6-il)tio)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfonato.
[00833] Etapa 1: Cloreto de 6-(((2-(((2 R ,3 S )-3-(( Z)-2-((1- ((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidin-2- il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)tio)-6,7-di-hidro-5H- pirazolo[1,2-a][1,2,4]triazol-4-io.
[00834] Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 138, etapa 1 usando benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2-((4-(((metilsulfonil)óxi)metil)-2H-1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (54 mg, 0,068 mmol), iodeto de sódio (17,2 mg, 0,115 mmol), carbonato de césio (24,5 mg, 0,075 mmol), cloreto de 6-mercapto-6,7-di-hidro-5H- pirazolo[1,2-a][1,2,4]triazol-4-io (13,4 mg, 0,075 mmol) e DMF (600 μL). A pasta fluida foi concentrada em vácuo, e o resíduo bruto foi purificado por meio de HPLC prep de fase reversa (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (19,7 mg, 34%) como sólido branco. LCMS : Ta = 0,91 min, m/z = 840,4 (M+) Método 2 m_acídico.
[00835] Etapa 2: (2R,3 S )-3-(( Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)- ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-(((6,7-di-hidro-5H-pirazolo[1,2-a][1,2,4]triazol- 4-io-6-il)tio)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1- sulfonato.
[00836] Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 138, etapa 2 usando cloreto de 6-(((2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidriló- xi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidin-2-il)metil)- 2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)tio)-6,7-di-hidro-5H-pirazolo[1,2- a][1,2,4]triazol-4-io (21 mg, 0,025 mmol), DMF (250 μL), SOβ^DMF (18,9 mg, 0,123 mmol), em seguida SOa^DMF adicional (22,3 mg, 0,146 mmol). O material bruto foi usado diretamente na etapa 3. LCMS : Ta = 0,92 min, m/z = 921,7 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00837] Etapa 3: (2R,3 S )-3-(( Z) -2-(2-aminotiazol-4-il)-2-((1- carboxiciclopropóxi)imino)-acetamido)-2-((4-(((6,7-di-hidro-5H- pirazolo[1,2-a][1,2,4]triazol-4-io-6-il)tio)metil)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfonato.
Figure img0191
[00838] Preparado de maneira análoga ao exemplo 138, etapa 3 usando (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imi- no)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-((4- (((6,7-di-hidro-5H-pirazolo[1,2-a][1,2,4]triazol-4-io-6-il)tio)metil)-2H- 1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfonato (23 mg, 0,025 mmol), anisol (5,5 μL, 0,050 mmol), TFA (116 μL, 1,50 mmol) e DCM (300 μL). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (Xselect CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (1,5 mg, 8%). LCMS : Ta = 0,60 min, m/z = 654,4 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 9,02 (d, J = 4,8 Hz, 2 H), 7,84 (s, 1 H), 7,17 (s, 1 H), 5,65 (d, J = 5,8 Hz, 1 H), 5,12-4,97 (m, 3 H), 4,94-4,89 (m, 1 H), 4,64-4,50 (m, 4 H), 4,09 (s, 2 H), 1,48-1,36 (m, 2 H), 1,32-1,24 (m, 2H). Exemplo 140: Ácido 1-((( Z-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((3-((1s,3 S )-3- aminociclobutil)guanidino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico
Figure img0192
[00839] Preparado de maneira análoga ao exemplo 119, usando terc-butil ((1S,3S)-3-((imino(metiltio)metil)amino)ciclobutil)carbama- to. LCMS : Ta = 0,49 min, m/z = 641,2 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ ppm 7,61 (s, 1H)7,00 (s, 1H)5,47 (d, J = 5,6 Hz, 1H)4,91-4,84 (m, 1H)4,79-4,76 (m, 3H) 4,41 (s, 3H) 3,78 (t, J = 7,6 Hz, 1H) 3,51 (t, J = 8,0 Hz, 1H) 2,84-2,67 (m, 1H) 2,12 (d, J = 9,7 Hz, 1H) 1,23-1,19 (m, 2H) 1,05 (d, J = 4,5 Hz, 2H). Exemplo 141: Ácido 1-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2- (((3 S ,4 R )-2-oxo-4-((4-((3-(( S )-pirrolidin-3-il)guanidino)metil)-2 H - 1,2,3-triazol-2-il)metil)-1 -sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico
Figure img0193
[00840] Preparado de maneira análoga ao exemplo 119, usando (S)-terc-butil 3-((imino(metiltio)metil)amino)pirrolidina-1-carboxilato. LCMS : Ta = 0,49 min, m/z = 640,8 (M+1) Método 2 m_acídico; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ ppm 7,62 (s, 1H)7,00 (s, 1H) 5,49 (d, J = 5,6 Hz, 1H) 4,83 - 4,91 (m, 1H) 4,80-4,75 (m, 2H) 4,44 (s, 2H) 4,30 (t, J = 4,0 Hz, 1H)3,60-3,18 (m, 5H)2,38-2,24 (m, 1H) 2,04 (dq, J = 12,5, 6,5 Hz, 1H)1,24-1,12 (m, 2H)1,04 (br s, 2H). Exemplo 142: Ácido 1-((( Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxo-2- (((3 S ,4 R )-2-oxo-4-((4-((3-(( R )-pirrolidin-3-il)guanidino)metil)-2 H - 1,2,3-triazol-2-il)metil)-1 -sulfoazetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico
Figure img0194
[00841] Preparado de maneira análoga ao exemplo 119, usando (R)-terc-butil 3-((imino(metiltio)metil)amino)pirrolidina-1-carboxilato. LCMS : Ta = 0,29 min, m/z = 641,1 (M+1) Método 2 m; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ ppm 7,62 (s, 1H)7,01 (s, 1H) 5,49 (d, J = 5,6 Hz, 1H) 4,87 (q, J = 5,7 Hz, 1H) 4,80-4,75 (m, 2H)4,44 (s, 2H)4,31 (t, J = 4,0 Hz, 1H)3,61-3,20 (m, 4H)2,41-2,21 (m, 1H)2,08-2,00 (m, 1H) 1,18 (m, 2H) 1,14 (m, 2H).
Exemplo 143: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-(aminometil)-5-metil- 2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1 -sulfoazetidin-3-il)amino)-1 -(2- aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico
[00842] Etapa 1: 4-(azidometil)-5-metil-2H-1,2,3-triazol A uma solução de 1-bromo-2-butina (640 μL, 7,31 mmol) em 1,4-dioxano /Água (3:1, 36 mL) foi adicionado azida de sódio (1,901 g, 29,2 mmol) seguido por cloreto de amônio (782 mg, 14,6 mmol). A pasta fluida foi aquecida a 75 °C durante 8 h. As camadas foram separadas, e a aquosa foi extraída com EtOAc (3x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo para produzir um material bruto (833 mg, 78%) que foi usado diretamente na etapa 2. LCMS : Ta = 0,35 min, m/z = 138,9 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00843] Etapa 2: terc -Butil ((5-metil-2H-1,2,3-triazol-4- il)metil)carbamato Uma pasta fluida de 4-(azidometil)-5-metil-2H- 1,2,3-triazol (803 mg, 5,81 mmol), anidrido de Boc (1,36 mL, 5,88 mmol) e Pd-C (157 mg, 0,148 mmol) em EtOH (39 mL) foi evacuada e recarregada com H2 (3x). A mistura reacional foi agitada sob H2 durante 1h 45 min. A pasta fluida preta resultante foi filtrada através de celite e eluída com EtOAc. O filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0-60%) para proporcionar o composto do título (878 mg, 71%). LCMS : Ta = 0,82 min, m/z = 213,0 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00844] Etapa 3: A uma solução de benzil ((2S,3S)-1-(2,4- dimetoxibenzil)-2-(hidroximetil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (331 mg, 0,826 mmol), terc-butil ((5-metil-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)carbamato (235,3 mg, 1,109 mmol) e trifenilfosfina (265,6 mg, 1,013 mmol) em THF (8,3 mL) a 0 °C foi adicionado DIAD (0,210 mL, 1,016 mmol), gota a gota. Depois de agitar em temperatura ambiente durante 2 h, a mistura reacional foi concentrada em sílica-gel. A purificação por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0-60%) proporcionou o composto desejado (360 mg, 73%). LCMS : Ta = 0,99 min, m/z = 595,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00845] Etapa 4: Uma pasta fluida do produto a partir da etapa acima (etapa 4) (396,8 mg, 0,667 mmol), K2S2O8 (243 mg, 0,870 mmol) e K2HPO4 (268,1 mg, 1,539 mmol) em ACN/água (2:1, 9,4 mL) foi aquecida a 90 °C durante 2 h. K2S2O8 adicional (55,6 mg, 0,200 mmol) foi adicionado e o aquecimento continuado durante um adicional de 2 h. A mistura reacional foi parcialmente concentrada em vácuo, em seguida extinguida com NaHCO3 e extraída com EtOAc (3x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. A purificação por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0-90%), em seguida HPLC (OBD C18, 5 μ, 30x100 mm, 30-70% ACN/H2O p/0,1% de tampão de TFA em 18 min, 60 mL/min), proporcionou o composto desejado (157 mg, 53%) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,80 min, m/z = 445,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00846] Etapa 5: terc-Butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2- il)metil)-5-metil-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil)carbamato. Em um frasco estimulado com N2 contendo o produto da etapa acima (93,2 mg, 0,210 mmol) e Pd-C (18 mg) foi adicionado etanol (1,6 mL) seguido por metanol (0,4 mL). A pasta fluida foi evacuada e carregada outra vez com H2 (3x). A mistura reacional foi agitada sob H2 durante 2 h. A pasta fluida preta resultante foi filtrada através de celite, eluindo com metanol. O filtrado foi concentrado em vácuo e o resíduo bruto foi usado como tal na etapa 6. LCMS : Ta = 0,46 min, m/z = 311,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00847] Etapa 6: Benzidril 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((( terc - butoxicarbonil)amino)metil)-5-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma solução de ácido (Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2- (2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (120 mg, 0,213 mmol), terc-butil ((2-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2-il)metil)-5-metil-2H- 1,2,3-triazol-4-il)metil)carbamato (65,2 mg, 0,210 mmol) e HATU (86 mg, 0,22 mmol) em DMF (2,1 mL) a 0 °C, foi adicionado DIPEA (0,073 mL, 0,420 mmol). Depois de agitar durante 16 h, a mistura reacional foi diluída com EtOAc e lavada com solução de LiCl (5% aq). A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução de LiCl (5% aq), NaHCO3 saturado (aq), salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. A purificação do resíduo bruto por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0-90%) proporcionou o composto do título (144 mg, 82%). LCMS : Ta = 1,12 min, m/z = 830,5 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00848] Etapa 7: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbo- nil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)-5-metil-2H- 1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((terc-butoxicarbonil)amino)me- til)-5-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (140 mg, 0,170 mmol) em DMF (848 μl) a 0 °C foi adicionado SO3^DMF (54,4 mg, 0,355 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 2,5 h, e então SO3^DMF adicional (27,4 mg, 0,170 mmol) foi adicionado. Depois de um adicional de 22 h, a solução foi diluída com EtOAc e vertida na solução fria de LiCl (5%, aq). As camadas foram separadas, e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com LiCl (5% aq), salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo para proporcionar 163,1 mg do material bruto que foi usado na etapa 8 sem outra purificação. LCMS : Ta = 1,01 min, m/z = 910,5 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00849] Etapa 8: Ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-5- metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1- (2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico
Figure img0195
[00850] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)car- bonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)-5-metil-2H-1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (155 mg, 0,170 mmol), DCM (1,70 mL), anisol (37 μL, 0,34 mmol) anf TFA (0,787 mL, 10,2 mmol). O material bruto foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (XSELECT C18, 5 μ, 30x100 mm, ACN-H2O p/0,1% de tampão de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (55 mg, 57%) como um sólido esbranquiçado. LCMS : Ta = 0,49 min, m/z = 544,1 (M+1) Método 2 m_acídico_polar,1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,04 (s, 1H), 5,46 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,91-4,84 (m, 1H), 4,84-4,76 (m, 1H), 4,62-4,56 (m, 1H assumido; obscurecido por pico residual de solvente), 4,13 (s, 2H), 2,16 (s, 3H), 1,32-1,18 (m, 2H), 1,18-1,00 (m, 2H).
Exemplo 144: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((3-(3-aminopro- pil)guanidino)metil)-5-metil-2 H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico
[00851] Etapa 1: terc-Butil (3-((terc-butoxicarbonil)amino)propil) (((terc-butoxicarbonil)imino) (1H-pirazol-1-il)metil)carbamato. A uma solução gelada de terc-butil (((terc-butoxicarbonil)amino) (1H- pirazol-1-il)metileno)carbamato (500 mg, 1,611 mmol), terc-butil (3- hidroxipropil)carbamato (282 mg, 1,611 mmol) e trifenilfosfina (634 mg, 2,417 mmol) dissolvida em THF (16 mL) foi adicionado DIAD (470 μl, 2,417 mmol) e agitada durante 16 h. A mistura reacional foi concentrada em vácuo e o resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano) para proporcionar o composto do título (600 mg, 80%). LCMS : Ta = 1,02 min, m/z = 468,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00852] Etapa 2: Ácido 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)- 2-((4-((Z)-4-(terc-butoxicarbonil)-3-((terc-butoxicarbonil)imino)- 11,11-dimetil-9-oxo-10-oxa-2,4,8-triazadodecil)-5-metil-2H-1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico. A uma solução de ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-5-metil-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico (33,9 mg, 0,062 mmol) e terc-butil (3-((terc-butoxicarbonil)amino)propil) (((terc-butoxicar- bonil)imino) (1H-pirazol-1-il)metil)carbamato (54,2 mg, 0,116 mmol) em DMF (624 μl) a 0 °C foi adicionado DIPEA (32,7 μl, 0,187 mmol). Depois de agitar em ta durante 16 h, a solução foi concentrada em vácuo e usada como tal sem outra purificação. LCMS : Ta = 0,75 min, m/z = 943,7 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00853] Etapa 3: Ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(3-aminopro- pil)guanidino)metil)-5-metil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico
Figure img0196
[00854] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)-2- ((4-((Z)-4-(terc-butoxicarbonil)-3-((terc-butoxicarbonil)imino)-11,11- dimetil-9-oxo-10-oxa-2,4,8-triazadodecil)-5-metil-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico (58,5 mg, 0,062 mmol), DCM (621 μL), anisol (20,4 μL, 0,186 mmol) e TFA (427 μL, 4,55 mmol). A mistura reacional foi diluída com água gelada (1 mL), e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi extraída com água (1 mL), e a camada aquosa combinada foi lavada com DCM (1 mL) e, em seguida purificada por HPLC preparativa de fase reversa (XSELECT C18, 5 μ, 30x100 mm, 1-20% ACN/H2O p/0,1% de tampão de ácido fórmico em 18 min, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (19 mg, 44%) como um sólido esbranquiçado. LCMS : Ta = 0,54 min, m/z = 643,2 (M+1) Método 2 m_acídico_polar,1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,11 (s, 1H), 5,62 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,01-4,94 (m, 1H), 4,91-4,74 (m, 2H assumido; obscurecido por pico residual de solvente), 4,50 (br s, 2H), 3,36 (t, J = 6,9 Hz, 2H), 3,11 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 2,29 (s, 3H), 2,01 (p, J = 7,2 Hz, 2H), 1,35-1,25 (m, 2H), 1,21-1,05 (m, 2H).
Exemplo 145: Ácido 1-((( Z-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-(1-(3-(3-aminopro- pil)guanidino)etil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin- 3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico
[00855] Etapa 1: 1-(2H-1,2,3-triazol-4-il)etanol. A uma solução de but-3-in-2-ol (3,63 g, 50,2 mmol) em DMF (40 mL) e MeOH (10 mL) foi adicionado azidotrimetilsilano (10,22 mL, 75 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 100 oC durante 16 h. A reação foi resfriada e filtrada através de uma almofada de celite. O filtrado foi concentrado a ~25 mL e usado diretamente na próxima etapa. LCMS : Ta = 0,16 min, m/z = 113,8 (M+1) Método 2 m_acídico_polar.
[00856] Etapa 2: 4-(1-(( terc -butildifenilsilil)óxi)etil)-1 H -1,2,3- triazol. A uma solução de 1-(1H-1,2,3-triazol-4-il)etanol (50,2 mmol) e imidazol (5,13 mg, 75 mmol) em DCM (50 mL) 0 oC foi adicionado TBDPSCl (14,6 mL, 55,2 mmol). Depois de agitar em temperatura ambiente durante a noite, a mistura foi filtrada através de uma almofada de celite e, em seguida concentrada até a secura. O resíduo resultante foi dissolvido em EtOAc, lavado com água, salmoura, secado com sulfato de sódio e concentrado. A purificação do resíduo bruto por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 5-25%) proporcionou o composto do título (8,16 g, 46%) como um óleo amarelo. LCMS : Ta = 1,09 min, m/z = 352,1 (M+1) Método 2 m_acídico,1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,71 (d, J = 6,5 Hz, 2H) 7,64-7,54 (m, 3 H) 7,49-7,28 (m, 6H) 5,14 (q, J = 6,3 Hz, 1H) 1,46 (dd, J = 6,3, 3,0 Hz, 3H) 1,08 (s, 9H).
[00857] Etapa 3: Benzil ((2 R ,3 S )-2-((4-(1-(( terc-butildifenil- silil)óxi)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-4- oxoazetidin-3-il)carbamato. A uma solução de 4-(1-((terc-butildifenil- silil)óxi)etil)-1H-1,2,3-triazol (2,42 g, 6,88 mmol),benzil ((2S,3S)-1-(2,4- dimetoxibenzil)-2-(hidroximetil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (2,76 g, 6,88 mmol) , e PPh3 (2,17 mg, 8,26 mmol) em THF (35 mL) a 0°C foi adicionado DIAD (1,60 mL, 8,26 mmol) gota a gota. A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 5 h, em seguida concentrada em vácuo. A purificação do resíduo bruto por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 30-60%) proporcionou o composto do título (4,32 g, 85%) como um sólido. LCMS : Ta = 1,12 min, m/z = 734 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00858] Etapa 4: Benzil ((2 R ,3 S )-2-((4-(1-(( terc-butildifenil- silil)óxi)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbama- to. A uma solução de benzil ((2R,3S)-2-((4-(1-((terc-butildifenilsi- lil)óxi)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-4- oxoazetidin-3-il)carbamato (2,50 g, 3,41 mmol) em ACN/água (2:1, 45 mL) em temperatura ambiente foi adicionado K2S2O8 (1,57 mg, 5,79 mmol) e K2HPO4 (949 mg, 5,45 mmol). A mistura foi aquecida a 90 °C sob nitrogênio com agitação durante 6 h. A mistura reacional foi concentrada em vácuo para remover ACN. À pasta fluida resultante foram adicionados EtOAc e água. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (2x). As porções orgânicas foram combinadas, secadas com Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. A purificação do resíduo bruto por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 30-60%) proporcionou o composto do título (1,35 g, 68%). LCMS : Ta = 1,18 min, m/z = 584,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00859] Etapa 5: Benzil ((2 R ,3 S )-2-((4-(1-hidroxietil)-2 H-1,2,3- triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. Uma mistura de ((2R,3S)-2-((4-(1-((terc-butildifenilsilil)óxi)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)carbamato (1,35 g, 2,31 mmol) e TBAF (1 M em THF, 4,63 mL, 4,63 mmol) em THF (23 mL) foi agitada em temperatura ambiente 3 h. O solvente foi removido, e o resíduo foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano) para proporcionar o composto do título (450 mg, 56%) como um sólido amarelo claro. LCMS : Ta = 0,53 min, m/z = 346,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00860] Etapa 6: terc-Butil (1-(2-(((2R,3S)-3-(((benzilóxi)carbo- nil)amino)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)etil) ((Z)- ((terc-butoxicarbonil)imino) (1H-pirazol-1-il)metil)carbamato. A uma solução de benzil ((2R,3S)-2-((4-(1-hidroxietil)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (460 mg, 1,33mmol ), (E)-terc- butil (((terc-butoxicarbonil)imino) (1H-pirazol-1-il)metil)carbamato (455 mg, 1,465 mmol), e trifenilfosfina (419 mg, 1,60 mmol) em THF (7 mL) a 0°C foi adicionado DIAD (0,311 mL, 1,598 mmol) gota a gota. A reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e concentrada até a secura. A purificação do resíduo bruto por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 30-60%) proporcionou o composto do título (190 mg, 22%) como um sólido amarelo claro. LCMS : Ta = 0,99 min, m/z = 638,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00861] Etapa 7: Uma mistura de terc-butil (1-(2-(((2R,3S)-3- (((benzilóxi)carbonil)amino)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4- il)etil) ((Z)-((terc-butoxicarbonil)imino) (1H-pirazol-1-il)metil)carbamato (190 mg, 0,298 mmol) e terc-butil (3-aminopropil)carbamato (57,1 mg, 0,328 mmol) em ACN (1490 μl) foi agitada em temperatura ambiente durante 16 h. O solvente foi, em seguida removido em vácuo, e o resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 50-80%), proporcionando o composto desejado (100 mg, 45%). LCMS : Ta = 0,91 min, m/z = 744,5 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00862] Etapa 8: Uma mistura do produto obtido da etapa 7 (100 mg, 0,134 mmol) e 10% de Pd-C (30 mg, 0,134 mmol) em EtOH (2 mL) e MeOH (1 mL) foi agitada sob hidrogênio durante 4 h. Paládio foi filtrado através de uma almofada de celite, e o solvente foi removido para produzir o material bruto que foi usado na etapa 9 sem outra purificação. LCMS : Ta = 0,68 min, m/z = 610,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00863] Etapa 9: Benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((E)-3-(terc- butoxicarbonil)-4-((terc-butoxicarbonil)imino)-12,12-dimetil-10- oxo-11-oxa-3,5,9-triazatridecan-2-il)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. A uma solução de ácido (Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2- (2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (76 mg, 0,13 mmol) e DIPEA (35,1 μl, 0,201 mmol) em DCM/DMF (2:1, 1,34 mL) a 0 oC foi adicionado HATU (61,1 mg, 0,161 mmol). Esta mistura foi agitada a 0 oC durante 30 min. A isto foi adicionado o produto obtido da etapa 8 (82 mg, 0,13 mmol). A mistura reacional foi agitada a 0 oC durante 30 min, em seguida diluída com EtOAc(60 mL), lavada com Na2CO3 aquoso saturado, salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. A purificação do resíduo bruto por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 40-60%) proporcionou um composto do título (150 mg, 99%) como um sólido amarelo claro. LCMS : Ta = 1,12 min, m/z = 1129,8 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00864] Etapa 10: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbo- nil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-((E)-3-(terc-butoxicarbonil)-4-((terc-butoxicar- bonil)imino)-12,12-dimetil-10-oxo-11-oxa-3,5,9-triazatridecan-2-il)- 2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico A uma solução de benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((E)-3-(terc-butoxicarbonil)-4- ((terc-butoxicarbonil)imino)-12,12-dimetil-10-oxo-11-oxa-3,5,9-triazatri- decan-2-il)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2- ((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclo- propanocarboxilato (150 mg, 0,133 mmol) em DMF (1 mL) a 0 oC foi adicionado o complexo de SOβ^DMF (203 mg, 1,33 mmol). Depois de agitar em ta durante 2,5 h, a solução foi diluída com EtOAc, lavada com salmoura fria, secada com Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi usado como tal na etapa 11. LCMS : Ta = 1,15 min, m/z = 1210,5 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00865] Etapa 11: Ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(1-(3-(3-amino- propil)guanidino)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazeti- din-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ci- clopropanocarboxílico
Figure img0197
[00866] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidri- lóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-((4-((E)-3-(terc-butoxicarbonil)-4-((terc-butoxicarbo- nil)imino)-12,12-dimetil-10-oxo-11-oxa-3,5,9-triazatridecan-2-il)-2H- 1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (0,133 mmol), TFA (41 0 μl, 5,32 mmol) anisol (29 μL, 0,27 mmol) e DCM (1,33 mL). A mistura reacional foi resfriada a 0 °C e diluída com DCM e água gelada, em que as camadas foram separadas. A camada aquosa foi purificada por HPLC preparativa de fase reversa (XSELECT, C18 5um 30x100 mm; ACN-água com 0,1% de ácido fórmico), proporcionando o composto do título (34 mg, 39%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,52 min, m/z = 643,2 (M+1) Método 2 m_acídico_polar, 1H RMN (400 MHz, D2O, relatado como uma mistura de 1:1 de diastereômeros) δ 7,79 (s, 1H) 7,77 (s, 1H), 7,12 (s, 1H), 7,12 (s, 1H), 5,64 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,61 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,05-4,73 (m, 8H assumido; parcialmente obscurecido por pico residual de solvente), 3,39-3,32 (m, 4H), 3,133,05 (m, 4H), 2,00 (p, J = 7,0 Hz, 4H), 1,64 (d, J = 3,6 Hz, 3H), 1,63 (d, J = 3,7 Hz, 3H), 1,37-1,28 (m, 4H), 1,21-1,12 (m, 4H).
Exemplo 146: Ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((S)-1-((3-aminopro- pil)amino)etil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico
[00867] Etapa 1: (R)-But-3-in-2-il metanossulfonato. A uma solução de R-(+)-3-butin-2-ol (1000 mg, 14,27 mmol) e DIPEA (3,72 mL, 21,4 mmol) em DCM (50 mL) a 0 °C foi adicionado cloreto de metanossulfonila (1,44 mL, 18,6 mmol). A mistura foi agitada a 0 °C durante 2 h, em seguida diluída com DCM, lavada com HCl (0,2 N, aq) seguido por NaHCO3 saturado (aq). A camada orgânica foi secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo, fornecendo o composto do título (2,093 g, 99%) como um óleo laranja claro,1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5,28 (m, J = 6,7, 2,1 Hz, 1H) 3,12 (s, 3H) 2,71 (d, J = 2,2 Hz, 1H) 1,66 (d, J = 6,7 Hz, 3H).
[00868] Etapa 2: (S)-terc -Butil (3-(but-3-in-2-ilamino)pro- pil)carbamato. Uma solução de (R)-but-3-in-2-il metanossulfonato (2189 mg, 14,77 mmol) em ACN (10 mL) foi adicionada gota a gota a uma pasta fluida de terc-butil (3-aminopropil)carbamato (2831 mg, 16,25 mmol) e carbonato de potássio (2446 mg, 17,72 mmol) em ACN (50 mL). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 24 h, e, então, a pasta fluida foi filtrada, e o filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 0-8%) para proporcionar o composto do título (570 mg, 17%) como um óleo laranja claro. LCMS : Ta = 0,43 min, m/z = 227,0 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00869] Etapa 3: (S)-terc-Butil but-3-in-2-il(3-((terc-butoxicarbo- nil)amino)propil)carbamato. Uma mistura de (S)-terc-butil (3-(but-3- in-2-ilamino)propil)carbamato (570 mg, 2,52 mmol), di-terc-butil dicarbonato (1,10 g, 5,04 mmol) e NaHCO3 saturado (aq, 17 mL) em DCM (16,8 mL) foi agitada em ta durante 16 h, e, então, as duas camadas foram separadas, e a camada orgânica foi secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. A purificação por meio de cromatografia em sílica-gel (MeOH-DCM, 0-5%) proporcionou o composto do título (710 mg, 86%) como um óleo viscoso. LCMS : Ta = 0,99 min, m/z = 327,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00870] Etapa 4: (S)-terc-butil (1-(2H-1,2,3-triazol-4-il)etil) (3- ((terc-butoxicarbonil)amino)propil)carbamato. Uma mistura de (S)- terc-butil but-3-in-2-il(3-((terc-butoxicarbonil)amino)propil)carbamato (710 mg, 2,18 mmol), azidotrimetilsilano (452 μl, 3,26 mmol) e iodeto de cobre (I) (21 mg, 0,11 mmol) em DMF/MeOH (1:1, 3,4 mL) foi aquecida a 100 oC durante 8 h. No resfriamento, a mistura foi filtrada através de uma almofada de celite, e o filtrado foi concentrado em vácuo e purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc- Heptano, 30-80%) para proporcionar o composto do título (636 mg, 79%) como um óleo. LCMS : Ta = 0,78 min, m/z = 370,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00871] Etapa 5: A uma solução de (S)-terc-butil (1-(1 H-1,2,3- triazol-4-il)etil) (3-((terc-butoxicarbonil)amino)propil)carbamato (636 mg, 1,72 mmol), benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-(hidroximetil)- 4-oxoazetidin-3-il)carbamato (689 mg, 1,72 mmol) e trifenilfosfina (542 mg, 2,07 mmol) em THF (8,6 mL) a 0°C foi adicionado DIAD (402 μl, 2,07 mmol), gota a gota. Depois de agitar em ta durante 5 h, a mistura foi concentrada em vácuo. A purificação por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 30-60%) proporcionou o composto desejado (970 mg, 75%) como um sólido branco. LCMS : Ta = 1,08 min, m/z = 752,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00872] Etapa 6: Uma mistura do produto obtido etapa 5 (970 mg, 1,29 mmol), K2S2O8 (611 mg, 2,19 mmol) e K2HPO4 (360 mg, 2,06 mmol) em ACN/água (2:1, 15 mL) foi aquecida a 90 °C sob nitrogênio com durante 4 h. A mistura reacional foi concentrada em vácuo para remover ACN. A mistura foi dividida entre EtOAc/água, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com EtOAc, e as porções orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas em vácuo. A purificação por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 50-100%) proporcionou o composto desejado (443 mg, 57%). LCMS : Ta = 0,95 min, m/z = 602,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00873] Etapa 7: terc-Butil ((S)-1-(2-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoaze- tidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)etil) (3-((terc-butoxicarbonil)a- mino)propil)carbamato. Uma mistura do produto obtido da etapa 6 (443 mg, 0,736 mmol) e 10% de Pd/C (100 mg) em EtOH/MeOH (2:1, 15 mL) foi agitada sob hidrogênio durante 4 h, e, então, a mistura foi filtrada em celite, e o solvente foi removido em vácuo para produzir o composto do título (quantitativo assumido) que foi usado diretamente sem outra purificação. LCMS : Ta = 0,68 min, m/z = 468,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00874] Etapa 8: Benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((S)-1-((terc- butoxicarbonil) (3-((terc-butoxicarbonil)amino)propil)amino)etil)- 2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato
[00875] A uma mistura de ácido (Z)-2-((1-((benzidrilóxi)car- bonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acético (416 mg, 0,736 mmol), terc-butil ((S)-1-(2-(((2R,3S)-3-amino- 4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)etil) (3-((terc-butoxicar- bonil)amino)propil)carbamato (0,736 mmol) e DIPEA (193 μl, 1,10 mmol) em DCM/DMF (5:1, 7,3 mL) a 0 oC foi adicionado HATU (308 mg, 0,810 mmol). Depois de agitar a 0 oC durante 1 h, foi diluída com EtOAc, lavada com água, salmoura, secada em sulfato de sódio e concentrada em vácuo. A purificação por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 50-90%) proporcionou o composto desejado (700 mg, 96%) como um sólido vermelho. LCMS : Ta = 1,17 min, m/z = 987,7 (M+1) Método 2 m_acídico. Análise de SFC quiral (SFC-X5, CO2/EtOH=90/10 , SFC=5mL/min, coluna AD, Ta = 12,28 min) confirmada foi um diastereômero simples.
[00876] Etapa 9: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)car- bonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-((S)-1-((terc-butoxicarbonil) (3-((terc-butoxicar- bonil)amino)propil)amino)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxoazetidina-1-sulfônico. A benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((S)- 1-((terc-butoxicarbonil) (3-((terc-butoxicarbonil)amino)propil)amino)etil)- 2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (700 mg, 0,709 mmol) em DMF (3,5 mL) a 0 °C foi adicionado SOa^DMF (760 mg, 4,96 mmol). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 2 h, e, então, um adicional de 3 equiv de SOa^DMF foi adicionado e agitado durante mais 2 h. A mistura reacional foi diluída com EtOAc, lavada com LiCl (5%, aq, 2x), salmoura, secada com Na2SO4, filtrada e concentrada em vácuo para produzir o composto do título (quantitativo assumido) que foi usado como tal sem outra purificação. LCMS : Ta = 1,07 min, m/z = 1067,6 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00877] Etapa 10: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-(( S )-1-((3- aminopropil)amino)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico
Figure img0198
[00878] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidri- lóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-((4-((S)-1-((terc-butoxicarbonil) (3-((terc-butoxicarbo- nil)amino)propil)amino)etil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1- sulfônico (0,709 mmol), anisol (153 mg, 1,42 mmol), TFA (273 μl, 35,5 mmol) e DCM (7,1 mL). A mistura reacional foi resfriada a 0 °C e diluída com DCM e água gelada. Depois da agitação vigorosa, as duas camadas foram separadas, e a camada aquosa foi purificada por HPLC preparatória de fase reversa (XSELECT, C18, 5um 30x100 mm ACN-água com 0,1 de ácido fórmico), proporcionando o composto do título (110 mg, 25%) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,50 min, m/z = 601,3 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,87 (s, 1H) 7,04 (s, 1H) 5,61 (d, J = 5,6 Hz, 1H) 5,04-4,97 (m, 1 H) 4,89 (d, J = 5,4 Hz, 2H) 4,69-4,62 (m, 1H) 3,13-3,00 (m, 4H) 2,04 (t, J = 4,0 Hz, 2H) 1,68 (d, J = 6,9 Hz, 3H) 1,23 (t, J = 3,9 Hz, 2H) 1,111,02 (m, 2H). Exemplo 147: Ácido 1-(((Z-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(2-(2-aminoetó- xi)etil)guanidino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico
Figure img0199
[00879] Preparado de maneira análoga ao exemplo 119, usando terc-butil (2-(2-((imino (metiltio)metil)amino)etóxi)etil)carbamato. LCMS : Ta = 0,31 min, m/z = 659,0 (M+1) Método 2 m_acídico. 1H RMN (500 MHz, D2O) δ ppm 7,61 (s, 1H), 6,99 (s, 1H), 5,47 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 4,87 (q, J = 5,6 Hz, 1H), 4,81-4,70 (m, 2H assumido; parcialmente obscurecido por pico residual de solvente), 4,42 (s, 2H), 3,66-3,54 (m, 4H), 3,32 (t, J = 5,0 Hz, 2H), 3,13-3,06 (m, 2H), 1,28-0,93 (m, 4H).
Exemplo 148: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((3-(3-aminopropil)-1- metilguanidino)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1 - sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico
[00880] Etapa 1: terc-Butil (3-((terc-butoxicarbonil)amino)propil) (((terc-butoxicarbonil)imino) (1H-pirazol-1-il)metil)carbamato. A uma solução gelada de terc-butil (((terc-butoxicarbonil)amino) (1H- pirazol-1-il)metileno)carbamato (500 mg, 1,61 mmol), terc-butil (3- hidroxipropil)carbamato (282 mg, 1,611 mmol) e trifenilfosfina (634 mg, 2,42 mmol) em THF (16 mL) foi adicionado DIAD (470 μl, 2,42 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 16 h, e, então, os voláteis foram removido em vácuo. A purificação por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0-100%) proporcionou um composto do título (600 mg, 80%). LCMS : Ta = 1,02 min, m/z = 468,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00881] Etapa 2: Benzil ((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. Uma mistura de benzil ((2R,3S)-2-((4-(hidroximetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)carbamato (360 mg, 1,09 mmol) e MnO2 (2,36 g, 27,2 mmol) em THF (11 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante 2 h, e, então, a mistura foi filtrada através de celite e concentrada. O material resultante (340 mg, 95%) foi usado como tal na etapa 3.
[00882] Etapa 3: Benzil ((2R,3S)-2-((4-((metilamino)metil)-2H- 1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. A uma solução de benzil ((2R,3S)-2-((4-formil-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin- 3-il)carbamato (340 mg, 1,03 mmol) em DCE (10 mL) foi adicionado MeNH2 (1032 μl, 2,065 mmol). Depois de agitar durante 1 h em ta, triacetoxiboroidreto de sódio (438 mg, 2,07 mmol) foi adicionado, e a mistura foi agitada durante a noite, e, então, foi extinguida com NaHCO3 saturado (aq) a 0 °C e extraída com EtOAc (2x). Os extratos orgânicos foram combinados, lavados com salmoura, secados em Na2SO4, filtrados e concentrados em vácuo. O material bruto resultante (quantitativo assumido) foi usado como tal na etapa 4.
[00883] Etapa 4: Uma solução de benzil ((2 R ,3 S )-2-((4- ((metilamino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)carbamato (93 mg, 0,27 mmol), terc-butil (3-((terc-butoxicarbo- nil)amino)propil) (((terc-butoxicarbonil)imino) (1H-pirazol-1-il)metil)car- bamato (152 mg, 0,324 mmol), DIPEA (94 μl, 0,540 mmol) em ACN (1800 μl) foi aquecida a 90 °C durante a noite. Todos os voláteis foram removidos em vácuo e a purificação do resíduo bruto por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano) proporcionou o produto desejado. LCMS : Ta = 0,94 min, m/z = 744,6 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00884] Etapa 5: Uma mistura do produto da etapa 4 (46 mg, 0,062 mmol) e Pd em C (10% em p, 23 mg) em EtOH/MeOH (4:1, 620 μL) foi agitada sob hidrogênio durante 16 h. A mistura reacional foi filtrada através de uma almofada de celite e concentrada e o material resultante (quantitativo assumido) foi usado como tal sem outra purificação.
[00885] Etapa 6: Benzidril 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-(4-( terc - butoxicarbonil)-3-((terc-butoxicarbonil)imino)-2,11,11-trimetil-9- oxo-10-oxa-2,4,8-triazadodecil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato. Uma solução de ácido (Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (30,9 mg, 0,057 mmol), DIPEA (30,1 μl, 0,172 mmol) e HATU (26,2 mg, 0,069 mmol) em DCM/DMF (1:1, 574 μl) foi agitada durante 20 min, e então o produto da etapa 5 (35 mg, 0,057 mmol) foi adicionado. A mistura resultante foi agitada durante um adicional de 2 h, ponto em que os voláteis foram removido em vácuo, e o material foi diluído com EtOAc, lavado com salmoura, secado em Na2SO4, filtrado e concentrado em vácuo. A purificação por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano) proporcionou o composto do título. LCMS : Ta = 1,11 min, m/z = 1029,9 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00886] Etapa 7: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbo- nil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((4-(4-(terc-butoxicarbonil)-3-((terc-butoxicarbo- nil)imino)-2,11,11-trimetil-9-oxo-10-oxa-2,4,8-triazadodecil)-2H- 1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. A uma solução gelada de benzidril 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(4-(terc-butoxicarbonil)-3- ((terc-butoxicarbonil)imino)-2,11,11-trimetil-9-oxo-10-oxa-2,4,8-triaza- dodecil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)amino)-1-(2-((terc- butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropa- nocarboxilato (32 mg, 0,028 mmol) em DMF (283 μl) foi adicionado SOa^DMF (43,4 mg, 0,283 mmol). Depois de agitar durante 2 h, a mistura reacional foi diluída com EtOAc, lavada com salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. Este resíduo bruto foi usado na próxima etapa sem outra purificação.
[00887] Etapa 8: Ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-((3-(3-aminopro- pil)-1-metilguanidino)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico
Figure img0200
[00888] Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidri- lóxi)carbonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol- 4-il)acetamido)-2-((4-(4-(terc-butoxicarbonil)-3-((terc-butoxicarbonil)imi- no)-2,11,11-trimetil-9-oxo-10-oxa-2,4,8-triazadodecil)-2H-1,2,3-triazol- 2-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (27 mg, 0,022 mmol), TFA (103 μl, 1,34 mmol) e DCM (223 μl). O material bruto foi purificado por HPLC preparativa de fase reversa (XSELECT C18, 5 μ, 30x100 mm, ACN/H2O p/0,1% de tampão de ácido fórmico), proporcionando o composto do título (1,1 mg, 7%) como um sólido branco. LCMS : Ta = 0,32 min, m/z = 643,3 (M+1) Método 2 m_acídico,1H RMN (500 MHz, D2O) δ ppm 7,65 (s, 1H)7,00 (s, 1H) 5,48 (d, J = 5,7 Hz, 1H) 4,89-4,83 (m, 1H)4,60-4,45 (m, 2H)3,25 (td, J = 6,9, 3,6 Hz, 2H)2,95 (t, J = 7,7 Hz, 2H)2,91 (s, 3H)1,98-1,74 (m, 2H)1,23-1,10 (m, 2H)1,05-1,00 (m, 2H). Exemplo 149: Ácido 1-((( Z-(2-(((2 R ,3S)-2-((4-(((3-(aminometil)azeti- dina-1 -carbonil)óxi)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1 - sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0201
[00889] Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 126 usando (2-(((2R,3S)-3-(((benzilóxi)carbonil)amino)-4-oxoazetidin-2- il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil 3-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)a- zetidina-1-carboxilato na etapa 2. LCMS : Ta = 0,52 min, m/z = 643,2 (M+1) Método 2 m_acídico_polar,1H RMN (400 MHz, D2O) δ 7,83 (s, 1H), 7,11 (s, 1H), 5,61 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 5,25-5,16 (m, 2H), 5,08-4,97 (m, 2H), 4,93-4,86 (m, 1H assumido; parcialmente obscurecido pelo pico residual de solvente), 4,22 (t, J = 8,6 Hz, 2H), 3,89-3,77 (m, 2H), 3,32 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 3,07-2,95 (m, 1H), 1,49-1,37 (m, 2H), 1,341,19 (m, 2H).
[00890] Preparação de (2-(((2R,3S)-3-(((benzilóxi)carbonil)amino)- 4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil 3-(((terc-butoxicarbo- nil)amino)metil)azetidina-1-carboxilato. Preparado de uma maneira análoga como o exemplo 4, etapa 2 usando (2-(((2R,3S)-3- (((benzilóxi)carbonil)amino)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-2- il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil 3-(((terc-butoxicarbonil)amino)me- til)azetidina-1-carboxilato (410 mg, 0,591 mmol), K2S2O8 (272 mg, 1,01 mmol) e K2HPO4 (165 mg, 0,946 mmol) em ACN:água (2:1, 7,2 mL) ao mesmo tempo que aquecendo durante 5 h a 90 °C. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 30-90%), proporcionando o composto do título (80 mg, 25%) como um sólido. LCMS : Ta = 0,78 min, m/z = 544,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00891] Preparação de (2-(((2R,3S)-3-(((benzilóxi)carbonil)amino)- 1-(2,4-dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4- il)metil 3-(((terc-butoxicarbonil)amino)metil)azetidina-1-carboxilato. Um frasconete de cintilação de 20 mL foi carregada com benzil ((2R,3S)-1- (2,4-dimetoxibenzil)-2-((4-(hidroximetil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxoazetidin-3-il)carbamato (660 mg, 1,37 mmol, obtido como um subproduto durante a preparação do intermediário V), CDI (252 mg, 1,51 mmol) e DCM (11,4 mL). Depois de agitar durante 2 h, terc-butil (azetidin-3-ilmetil)carbamato (383 mg, 2,06 mmol) foi adicionado e foi agitado durante um adicional de 16 h. A mistura foi concentrada em vácuo e purificada por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc- Heptano, 40-90%), proporcionando o composto do título (410 mg, 43%) como um sólido. Ta = 0,94 min, m/z = 694,3 (M+1) Método 2 m_acídico. Exemplo 150: Ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((S)-3-aminopirro- lidina-1 -carboximidamido)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1 - sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0202
[00892] Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 127 usando (S)-terc-butil pirrolidin-3-il carbamato na etapa 3. Ta = 0,25 min, m/z = 641,4 (M+1) Método 2 m_acídico. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,55-10,15 (m, 1H), 8,06-7,78 (m, 1H), 7,66 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 7,59 (br s, 2H), 7,20 (s, 2H), 6,74 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 5,23 (ddd, J = 14,6, 8,8, 5,5 Hz, 1H), 4,90 (dt, J = 13,8, 3,7 Hz, 1H), 4,714,60 (m, 1H), 4,59-4,35 (m, 3H), 3,90 (br s, 1H), 3,70-3,38 (m, 3H assumido; sobreposições com pico de água), 2,30-2,15 (m, 1H), 2,091,98 (m, 1H), 1,30-1,13 (m, 2H), 1,13-0,98 (m, 2H). Exemplo 151: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-(1-((3-aminopro- pil)amino)etil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0203
[00893] Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 146 usando 3-bromobut-1-ina na etapa 2. LCMS : Ta = 0,50 min, m/z = 601,2 (M+1) Método 2 m_acídico_polar,1H RMN (400 MHz, D2O, relatado como uma mistura de 1,3:1 de diastereômeros) δ 7,94 (s, 0,75H), 7,90 (s, 1H), 5,69 (d, J = 5,6 Hz, 0,75H), 5,64 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,08 (q, J = 5,5 Hz, 1,8H), 4,97 (q, J = 9,3, 7,7 Hz, 3,9H), 4,764,68 (m, 1,7H assumido; parcialmente obscurecido por pico residual de solvente), 3,24-3,02 (m, 7,5H), 2,21-2,02 (m, 3,8H), 1,76 (d, J = 7,0 Hz, 2,35H), 1,73 (d, J = 6,9 Hz, 3,1H), 1,41-1,21 (m, 4,9H), 1,20-1,08 (m, 2,5H).
Exemplo 152: Ácido 1-(((Z)-(2-(((2R,3S)-2-((4-(((2-aminoetil)sulfo- nil)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
[00894] Etapa 1: (2-(((2 R ,3 S )-3-(((benzilóxi)carbonil)amino)-4- oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)metil metanossulfonato. A uma solução de benzil ((2R,3S)-2-((4-(hidroximetil)-2H-1,2,3-triazol- 2-il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (100 mg, 0,302 mmol, obtido durante a preparação de intermediário V) em DCM (3,0 mL) a 0 °C foi adicionada TEA (84 μL, 0,60 mmol) seguido por cloreto de metanossulfonila (28,2 μL, 0,362 mmol). Depois de agitar em ta durante 2 h, a solução foi diluída com DCM, lavada com NaHCO3 saturado (aq), salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi usado sem purificação adicional. LCMS : Ta = 0,66 min, m/z = 410,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00895] Etapa 2: Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 138, etapa 1 usando o produto da etapa 1 (525 mg, 1,28 mmol), terc- butil (2-mercaptoetil)carbamato (273 mg, 1,53 mmol), iodeto de sódio (192 mg, 1,28 mmol) e carbonato de césio (836 mg, 2,56 mmol) em DMF (12,8 mL). O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano) para proporcionar o produto (190 mg, 30%). LCMS : Ta = 0,80 min, m/z = 491,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00896] Etapa 3: A uma solução do produto (190 mg, 0,387 mmol) da etapa 2 em DCM (3,9 mL) a 0 °C foi adicionado m-CPBUA (147 mg, 0,852 mmol). Depois de agitar durante 1 h, foi dividido entre água/DCM. A camada aquosa foi extraída com DCM, e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano), proporcionando o produto (148 mg, 73%). LCMS : Ta = 0,72 min, m/z = 523,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00897] Etapa 4: Ácido 1-((( Z)-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-(((2-aminoe- til)sulfonil)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3- il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopro- panocarboxílico.
Figure img0204
[00898] Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 4, etapas 3-6. LCMS : Ta = 0,31 min, m/z = 622,1 (M+1) Método 2 m_acídico. 1H RMN (500 MHz, D2O) δ 7,90 (s, 1H), 7,15 (s, 1H), 5,59 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 5,03 (q, J = 5,6 Hz, 1H), 4,91 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 4,78 (s, 2H assumido; obscurecido por pico residual de solvente), 3,63-3,58 (m, 2H), 3,54-3,50 (m, 2H), 1,41-1,33 (m, 2H), 1,24 (t, J = 3,2 Hz, 2H). Exemplo 153: Ácido 1-((( Z )-(2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((( R )-3-aminopirro- lidina-1-carboximidamido)metil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4- oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-1-(2-aminotiazol-4-il)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0205
[00899] Preparado de uma maneira análoga ao exemplo 127 usando (R)-terc-butil pirrolidin-3-il carbamato na etapa 3. Ta = 0,30 min, m/z = 641,4 (M+1) Método 2 m_acídico. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,519,87 (m, 1H), 8,07-7,75 (m, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,59 (br s, 2H), 7,20 (s, 2H), 6,73 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 5,22 (ddd, J = 15,1, 8,8, 5,4 Hz, 1H), 4,94-4,85 (m, 1H), 4,70-4,59 (m, 1H), 4,59-4,36 (m, 3H), 3,97-3,83 (m, 1H), 3,70-3,38 (m, 3H assumido; sobreposições com pico de água), 2,29-2,17 (m, 1H), 2,08-1,98 (m, 1H), 1,27-1,15 (m, 2H), 1,13-1,01 (m, 2H).
Exemplo 154: Ácido 1-((( Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2 R ,3 S )-2- ((5,6-di-hidropirrolo[3,4-d][1,2,3]triazol-2 (4 H-il)metil)-4-oxo-1 - sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
[00900] Etapa 1: terc-Butil((4-clorobut-2-in-1-il)óxi)difenilsilano. A uma solução de imidazol (691 mg, 10,2 mmol) e terc- butilclorodifenilsilano (2,65 mL, 10,1 mmol) em DCM (15,3 mL) a 0 °C foi adicionado 4-clorobut-2-in-1-ol (824 μL, 9,18 mmol). Depois de 2 h de agitação em ta foi diluído com DCM/água, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com DCM (2x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto dissolvido em dioxano e reconcentrado (2x), em seguida usado diretamente sem outra purificação.
[00901] Etapa 2: 5-(azidometil)-4-(((terc-butildifenilsilil)óxi)me- til)-1H-1,2,3-triazol. A uma solução de terc-butil((4-clorobut-2-in-1- il)óxi)difenilsilano (3,15 g, 9,18 mmol) em dioxano/água (46 mL, 3:1) foi adicionado cloreto de amônio (982 mg, 18,4 mmol) seguido por azida de sódio (2,39 g, 36,8 mmol). A solução bifásica foi aquecida a 75 °C durante 33 h, e, então, as camadas foram separadas, e a aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0-35%) para proporcionar o composto do título (1,692 g, 47%) como um sólido branco. Ta = 1,11 min, m/z = 393,2 (M+1) Método 2 m_acídico. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 11,54 (s, 1H), 7,71-7,63 (m, 4H), 7,49-7,36 (m, 6H), 4,87 (s, 2H), 4,46 (s, 2H), 1,58 (s, 2H), 1,07 (s, 9H).
[00902] Etapa 3: terc-butil ((4-(((terc-butildifenilsilil)óxi)metil)- 1H-1,2,3-triazol-5-il)metil)carbamato. Uma frasco foi carregado com 5-(azidometil)-4-(((terc-butildifenilsilil)óxi)metil)-1H-1,2,3-triazol (1,044 g, 2,420 mmol), anidrido de Boc (581 mg, 2,66 mmol) e Pd-C (5%, 200 mg). Depois da estimulação do sistema com N2, EtOH (24,2 mL) foi adicionado. A mistura foi, em seguida evacuada e recarregada com H2 (3x). Depois de vigorosamente agitar durante 17 h, o sistema foi purgado com N2, e a pasta fluida foi filtrada em celite e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0-50%) para proporcionar o composto do título (777 mg, 69%) como um sólido branco. Ta = 1,12 min, m/z = 467,1 (M+1) Método 2 m_acídico. 1H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 7,717,64 (m, 4H), 7,49-7,36 (m, 6H), 4,87 (s, 2H), 4,40 (br s, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,08 (s, 9H).
[00903] Etapa 4: A uma solução de benzil ((2S,3S)-1-(2,4- dimetoxibenzil)-2-(hidroximetil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (674 mg, 1,68 mmol), terc-butil ((4-(((terc-butildifenilsilil)óxi)metil)-1H-1,2,3- triazol-5-il)metil)carbamato (777 mg, 1,67 mmol) e trifenilfosfina (525 mg, 2,00 mmol) em THF (16,7 mL) a 0 °C foi adicionado DIAD (414 μL, 1,10 mmol), gota a gota. Depois de agitar em ta durante 11 h, a mistura foi concentrada em sílica-gel e purificada por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0-50%) para proporcionar o produto (1,196 g, 85%) como um sólido branco. Ta = 1,31 min, m/z = 849,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00904] Etapa 5: Benzil ((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-5-(((terc- butildifenilsilil)óxi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-(2,4- dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. A uma solução do produto da etapa 4 (265 mg, 0,312 mmol) em DCM (3,1 mL) a 0 °C foi adicionado TFA (721 μL, 9,36 mmol). Depois de agitar a 0 °C durante 3 h, foi diluído com DCE e concentrado em vácuo. O resíduo foi redissolvido em DCM e lavado com NaHCO3 saturado (aq). A camada aquosa foi extraída com DCM (3x), e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi usado como tal sem outra purificação. Ta = 1,03 min, m/z = 749,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00905] Etapa 6: Benzil ((2R,3S)-2-((4-(((terc-butildifenilsilil)ó- xi)metil)-5-((2-nitrofenilsulfonamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. A uma solução de benzil ((2R,3S)-2-((4-(aminometil)-5-(((terc-butildifenilsilil)ó- xi)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-4- oxoazetidin-3-il)carbamato (234 mg, 0,312 mmol) em DCM (3,1 mL) a 0 °C foi adicionado cloreto de 2-nitrobenzeno-1-sulfonila (77,2 mg, 0,338 mmol) seguido por TEA (87 μL, 0,62 mmol). Depois de 2,2 h de agitação em ta, foi diluído com DCM e lavado com KHSO4 (2%, aq). A camada aquosa foi extraída com DCM (3x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0-60%), proporcionando o composto do título (252 mg, 87%) como um sólido esbranquiçado. Ta = 1,24 min, m/z = 934,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00906] Etapa 7: Benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-((4- (hidroximetil)-5-((2-nitrofenilsulfonamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. A uma solução de benzil ((2R,3S)-2-((4-(((terc-butildifenilsilil)óxi)metil)-5-((2- nitrofenilsulfonamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-1-(2,4- dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato (252 mg, 0,270 mmol) em THF (2,8 mL) a 0 °C foi adicionado TBAF (1,0 M em THF, 270 μL, 0,270 mmol). Depois de agitar durante 2,6 h, a solução foi diluída com EtOAc e parcialmente concentrada em vácuo. EtOAc adicional foi adicionado juntamente com KHSO4 (2%, aq) e água. As camadas foram separadas, e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0100%), proporcionando o composto do título (165 mg, 88%) como um sólido branco. Ta = 0,83 min, m/z = 696,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00907] Etapa 8: Benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-((5-((2- nitrofenil)sulfonil)-5,6-di-hidropirrolo[3,4-d][1,2,3]triazol-2 (4H)- il)metil)-4-oxoazetidin-3-il)carbamato. A uma solução de benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-((4-(hidroximetil)-5-((2- nitrofenilsulfonamido)metil)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxoazetidin-3- il)carbamato (165 mg, 0,237 mmol), e trifenilfosfina (91,6 mg, 0,349 mmol) em THF (11,9 mL) a 0 °C foi adicionado DIAD (72 μL, 0,35 mmol), gota a gota. Depois de 3 h, mais trifenilfosfina (46,4 mg, 0,177 mmol) foi adicionada, e, então, foi resfriada a 0 °C seguido por adição de DIAD (37 μL, 0,18 mmol). Depois de agitar em ta durante 2,5 h foi concentrada em vácuo e purificada por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0-100%) para proporcionar o composto do título (318 mg), que foi contaminado com óxido de trifenilfosfina. Ta = 0,93 min, m/z = 678,3 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00908] Etapa 9: terc-Butil 2-(((2R,3S)-3-(((benzilóxi)carbonil)a- mino)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-4,6-di- hidropirrolo[3,4-d][1,2,3]triazol-5(2H)-carboxilato. A uma pasta fluida de benzil ((2R,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-((5-((2-nitrofenil)sul- fonil)-5,6-di-hidropirrolo[3,4-d][1,2,3]triazol-2 (4H)-il)metil)-4-oxoaze- tidin-3-il)carbamato (241 mg, ~50%/p, ~0,178 mmol) e carbonato de potássio (77,4 mg, 0,560 mmol) em DMF (3,0 mL) foi adicionado tiofenol (23,8 μl, 0,231 mmol). Depois de agitar em ta durante 2 h, anidrido de Boc (78 mg, 0,36 mmol) foi adicionado. Depois de um adicional de 2 h, a pasta fluida foi diluída com EtOAc e lavada com NaHCO3 saturado (aq). A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com LiCl (5% aq), salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi combinado com o resíduos a partir de 2 trasformações similares (escalas de 15 mg e 20 mg) e purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0-100%) para proporcionar o composto do título (85,5 mg, 81% combinada). Ta = 0,96 min, m/z = 593,2 (M+1) Método 2 m_acídico,1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,21 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 7,40-7,27 (m, 5H), 6,92 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,49 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 6,40 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,04 (s, 2H), 5,00 (dd, J = 9,6, 5,1 Hz, 1H), 4,65 (dd, J = 14,0, 7,1 Hz, 1H), 4,56 (dd, J = 4,1, 6,2 Hz, 1H), 4,38-4,24 (m, 5H), 4,12 (q, J = 6,2 Hz, 1H), 3,86 (d, J = 15,1 Hz, 1H), 3,74 (s, 3H), 3,72 (s, 3H), 1,46 (s, 9H).
[00909] Etapa 10: terc-Butil 2-(((2R,3S)-3-(((benzilóxi)carbo- nil)amino)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-4,6-di-hidropirrolo[3,4- d][1,2,3]triazol-5(2H)-carboxilato. Suspendeu-se terc-Butil 2- (((2R,3S)-3-(((benzilóxi)carbonil)amino)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-4- oxoazetidin-2-il)metil)-4,6-di-hidropirrolo[3,4-d][1,2,3]triazol-5(2H)- carboxilato (85,5 mg, 0,144 mmol), peroxidissulfato de potássio (51,8 mg, 0,186 mmol) e fosfato de potássio, dibásico (57 mg, 0,33 mmol) em ACN/água (2 mL, 2:1) durante 5 min, em seguida aquecidos a 90 °C durante 1,5 h. Mais peroxidissulfato de potássio (13,9 mg, 0,050 mmol) foi adicionado e aquecido durante um adicional de uma hora. Mais peroxidissulfato de potássio (12,1 mg, 0,043 mmol) foi adicionado e foi aquecida durante um adicional de uma hora, e, então, a pasta fluida foi parcialmente concentrada em vácuo, em seguida dividida entre NaHCO3 (aq) saturado e EtOAc. Depois de separar as camadas, a aquosa foi extraída com EtOAc (3x). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano, 0-100%) para proporcionar produto contaminado (33 mg), que foi repurificado por HPLC de fase reversa (XSELECT CSH, C18, 5 μ, 30x100 mm, ACN/H2O com 0,1% de tampão de ácido fórmico, 60 mL/min). O composto do título (12,1 mg, 19%) foi obtido como um sólido branco. Ta = 0,78 min, m/z = 433,2 (M+1) Método 2 m_acídico,1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,40 (s, 1H), 8,17 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 7,42-7,26 (m, 5H), 5,05 (s, 2H), 5,04-4,99 (m, 1H), 4,58 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 4,40 (d, J = 4,7 Hz, 4H), 4,22 (q, J = 6,5 Hz, 1H), 1,45 (s, 9H).
[00910] Etapa 11: terc-Butil 2-(((2R,3S)-3-amino-4-oxoazetidin-2- il)metil)-4,6-di-hidropirrolo[3,4-d][1,2,3]triazol-5(2H)-carboxilato. Suspendeu-se terc-butil 2-(((2R,3S)-3-(((benzilóxi)carbonil)amino)-4- oxoazetidin-2-il)metil)-4,6-di-hidropirrolo[3,4-d][1,2,3]triazol-5(2H)- carboxilato (11,8 mg, 0,027 mmol) e Pd-C (5%, 2,3 mg) em MeOH/EtOH (740 μl, 1,7:1) sob N2, e, então, o sistema foi evacuado e carregado outra vez com H2 (3x). Depois de agitação vigorosa durante 1,7 h, o sistema foi purgado com N2, e os sólidos foram filtrados por um filtro de seringa de 0,45 μ. O filtrado foi concentrado em vácuo e usado como tal sem outra purificação.
[00911] Etapa 12: terc-Butil 2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidriló- xi)carbonil)-ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)- tiazol-4-il)acetamido)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-4,6-di- hidropirrolo[3,4-d][1,2,3]triazol-5(2H)-carboxilato. A uma pasta fluida resfriada (0 °C) de ácido (Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbo- nil)ciclopropóxi)-imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acético (15,3 mg, 0,028 mmol), terc-butil 2-(((2R,3S)-3-amino-4- oxoazetidin-2-il)metil)-4,6-di-hidropirrolo[3,4-d][1,2,3]triazol-5(2H)- carboxilato (8,3 mg, 0,027 mmol) e HATU (11,4 mg, 0,029 mmol) em DMF (500 μL) foi adicionado DIPEA (9,5 μL, 0,054 mmol). Depois de agitar em ta durante 16 h, foi diluído com EtOAc e lavado com LiCl (5%, aq). A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano) para proporcionar o composto do título (18,1 mg, 81%) como um sólido branco. Ta = 1,08 min, m/z = 828,5 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00912] Etapa 13: Ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)car- bonil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-((5-(terc-butoxicarbonil)-5,6-di-hidropirrolo[3,4- d][1,2,3]triazol-2 (4H)-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico. A uma solução de terc-butil 2-(((2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbo- nil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-4-oxoazetidin-2-il)metil)-4,6-di-hidropirrolo[3,4- d][1,2,3]triazol-5(2H)-carboxilato (18,1 mg, 0,022 mmol) em DMF (300 μL) a 0 °C foi adicionado SO3^DMF (12,3 mg, 0,078 mmol). Depois de agitar em ta durante 2 h, a solução foi resfriada a 0 °C e mais SO3^DMF (22,2 mg, 0,141 mmol) foi adicionado. Depois de um adicional de 4 h em ta foi diluído com EtOAc e lavado com LiCl (5% aq). A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2x), e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. Foi usada como tal (quantitativo assumido) sem outra purificação. Ta = 0,96 min, m/z = 908,4 (M+1) Método 2 m_acídico.
Figure img0206
[00913] Etapa 14: Ácido 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2R,3S)- 2-((5,6-di-hidropirrolo[3,4-d][1,2,3]triazol-2 (4H)-il)metil)-4-oxo-1- sulfoazetidin-3-il)amino)-2-oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropano- carboxílico. Foi seguido o procedimento geral para a desproteção mediada por ácido usando ácido (2R,3S)-3-((Z)-2-((1-((benzidri- lóxi)carbonil)-ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tia- zol-4-il)acetamido)-2-((5-(terc-butoxicarbonil)-5,6-di-hidropirrolo[3,4- d][1,2,3]triazol-2 (4H)-il)metil)-4-oxoazetidina-1-sulfônico (20 mg, 0,022 mmol), anisol (5 μl, 0,046 mmol), DCM (300 μL) e TFA (51 μL, 0,66 mmol). O resíduo bruto foi purificado por HPLC prep de fase reversa (XSELECT CSH, 30x100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto do título (7,3mg, 60%) como um pó branco. LCMS : Ta = 0,37 min, m/z = 542,1 (M+1) Método 2 m_acídico_polar; 1H RMN (500 MHz, D2O) δ 7,18 (s, 1H), 5,51 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 5,01-4,92 (m, 2H), 4,87 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 4,61-4,35 (m, 4H), 1,42-1,32 (m, 2H), 1,321,23 (m, 2H).
Exemplo 155: Ácido 1-((( Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2 R ,3 S )-2-((4-((S )-1,3-diaminopropil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1 - sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico Exemplo 156: Ácido 1-((( Z-(1-(2-aminotiazol-4-il)-2-(((2 R ,3 S )-2-((4- ((R )-1,3-diaminopropil)-2 H -1,2,3-triazol-2-il)metil)-4-oxo-1 - sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico
[00914] Etapa 1: (S)-terc -butil (1-((terc-butildifenilsilil)óxi)-4- oxobutan-2-il)carbamato A uma solução de (S)-terc-butil (1-((terc- butildifenilsilil)óxi)-4-hidroxibutan-2-il)carbamato (preparado de acordo com o procedimento descrito em WO2013124826 A1 usando ácido L- aspártico) (15,0 g, 33,8 mmol) e DIPEA (29,5 mL, 169 mmol) em DCM (50 mL) a 0 °C foi adicionada uma pasta fluida de DMSO (7,20 mL, 101 mmol) e complexo de sulfurtrióxido piridina (16,14 g, 101 mmol) em DCM (50 mL). Depois de agitar em ta durante 1,5 h, a mistura foi diluída com NaHCO3 (aq) saturado, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com DCM, e as porções orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo para proporcionar o composto do título (16,9 g, quantitativo assumido) como uma óleo marrom claro. Foi usado como tal sem outra purificação. LCMS : Ta = 1,20 min, m/z = 442,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00915] Etapa 2: (S)-terc-butil (4-(benzilamino)-1-((terc-butildife- nilsilil)óxi)butan-2-il)carbamato. Ao (S)-terc-butil (1-((terc-butildife- nilsilil)óxi)-4-oxobutan-2-il)carbamato (14,93 g, 33,8 mmol) em DCE (100 mL) a 0 °C foi adicionado benzilamina (3,69 mL, 33,8 mmol) e triacetoxiidroborato de sódio (8,60 g, 40,6 mmol) sequencialmente. Depois de agitar em ta 18 h, foi extinguido por adição de NaHCO3 saturado (aq, 300 mL) e agitado durante um adicional de 30 min. As fases foram separadas, e a fase aquosa foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O material bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano) para proporcionar o composto do título (8 g, 44%). LCMS : Ta = 1,08 min, m/z = 533,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00916] Etapa 3: (S)-terc-butil (4-amino-1-(( terc-butildifenil- silil)óxi)butan-2-il)carbamato. Ao (S)-terc-butil (4-(benzilamino)-1- ((terc-butildifenilsilil)óxi)butan-2-il)carbamato (8,0 g, 15,0 mmol) em MeOH (100 mL) foi adicionado formiato de amônio (9,47 g, 150 mmol) e Pd(OH)2 (1,054 g, 1,502 mmol). A mistura reacional foi agitada a 70 °C durante 1,5 h em seguida resfriada em ta e filtrada através de uma celite, eluindo com MeOH/EtOAc (1:2, ~800 mL). O filtrado foi concentrado em vácuo para proporcionar o composto do título (7 g) de um resíduo marrom claro que foi usado como tal sem outra purificação. LCMS : Ta = 0,95 min, m/z = 443,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00917] Etapa 4: (S )-di-terc-butil (4-(( terc-butildifenilsi- lil)óxi)butano-1,3-diil)dicarbamato. Ao (S)-terc-butil (4-amino-1- ((terc-butildifenilsilil)óxi)butan-2-il)carbamato (6,65 g, 15,02 mmol) em DCM (75 mL) foi adicionado NaHCO3 saturado (aq, 50 mL) e di-terc- butil dicarbonato (5,24 g, 24,03 mmol), sequencialmente. Depois de agitar durante 16 h, as camadas foram separadas, e a camada orgânica foi lavada com salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano) para proporcionar o composto do título (6,25 g, 77%). LCMS : Ta = 1,31 min, m/z = 543,2 (M+1) Método 2 m_acídico. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,70-7,58 (m, 4H) 7,497,34 (m, 6H) 5,29-5,12 (m, 1H) 4,83-4,56 (m, 1H) 3,72 (d, J = 8,4 Hz, 2H) 3,63-3,51 (m, 1H) 3,48-3,27 (m, 1H) 3,04-2,73 (m, 1H) 1,58 (d, J = 4,9 Hz, 2H) 1,44 (s, 9H) 1,43, (s, 9H), 1,06 (s, 9H).
[00918] Etapa 5: (S )-di-terc-butil (4-hidroxibutano-1,3- diil)dicarbamato. A uma solução de (S)-di-terc-butil (4-((terc- butildifenilsilil)óxi)butano-1,3-diil)dicarbamato (6,25 g, 11,51 mmol) em MeOH (100 mL) foi adicionado hidróxido de sódio (1,38 g, 34,5 mmol) em água (20,0 mL). A mistura foi aquecida a 70 °C durante 18 h, em seguida resfriada em temperatura ambiente e parcialmente concentrada em vácuo. DCM foi, em seguida adicionada, e a mistura foi resfriada a 0 °C, e, então, ácido acético (2,31 mL, 40,3 mmol) foi adicionado. A camada orgânica foi, em seguida separada, lavada com NaHCO3 (aq) saturado e salmoura. As porções aquosas combinadas foram extraídas com DCM e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano) para proporcionar o composto do título (1,67 g, 48%). LCMS : Ta = 0,67 min, m/z = 305,1 (M+1) Método 2 m_acídico,1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ ppm 5,06 (br s, 1H) 4,83 (br s, 1H) 3,82-3,64 (m, 2H) 3,61 (dd, J = 10,3, 4,9 Hz, 1H) 3,43-3,25 (m, 1H) 3,11-2,93 (m, 1H) 2,18 (br s, 1H) 1,79-1,65 (m, 1H) 1,64-1,58 (m, 1H) 1,51-1,36 (m, 18H).
[00919] Etapa 6: (S )-di-terc -butil (4-oxobutano-1,3-diil)dicar- bamato. A uma solução de (S)-di-terc-butil (4-oxobutano-1,3- diil)dicarbamato (1,67 g, 5,49 mmol) e DIPEA (3,83 mL, 21,95 mmol) em DCM (20 mL) a 0 °C foi adicionada uma pasta fluida de DMSO (1,061 mL, 13,72 mmol) e complexo de trióxido de enxofre-piridina (2,183 g, 13,72 mmol) em DCM (20 mL). Depois de agitar em ta durante 30 min, a mistura foi diluída com NaHCO3 (aq) saturado, e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com DCM, e as camadas orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas em vácuo. O resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano) para proporcionar o composto do título (1,47 g, 89%). LCMS : Ta = 0,70 min, m/z = 325,0 (M+Na) Método 2 m_acídico.
[00920] Etapa 7: (S)-di-terc-butil pent-4-ina-1,3-diildicarbamato. A uma solução de (S)-di-terc-butil (4-oxobutano-1,3-diil)dicarbamato (1,47 g, 4,86 mmol) em MeOH (30 mL) foi adicionado carbonato de potássio (1,680 g, 12,15 mmol) e dimetil (1-diazo-2-oxopropil)fosfonato (1,40 mL, 7,29 mmol), sequencialmente. Depois de agitar durante 15 h, a mistura foi diluída com EtOAc, lavada com água, salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O material bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano) para proporcionar o composto do título (0,943 g, 65%). LCMS : Ta = 0,81 min, m/z = 321,1 (M+Na) Método 2 m_acídico.
[00921] Etapa 8: (S )-di-terc -butil (1-(2 H -1,2,3-triazol-4-il)pro- pano-1,3-diil)dicarbamato. A uma solução de (S)-di-terc-butil pent-4- ina-1,3-diildicarbamato em DMF/MeOH (3,7 mL, 1,2:1) foi adicionado azidotrimetilsilano (330 μL, 2,38 mmol) e iodeto de cobre (15 mg, 0,079 mmol). A mistura foi aquecida a 100 oC durante 16 h, resfriada em ta, em seguida filtrada através de celite. O filtrado foi concentrado em vácuo, e o resíduo bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc -Heptano) para proporcionar o composto do título. LCMS : Ta = 0,68 min, m/z = 342,1 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00922] Etapa 9: A uma solução de (S)-di-terc-butil (1-(2H-1,2,3- triazol-4-il)propano-1,3-diil)dicarbamato (852 mg, 2,50 mmol), benzil ((2S,3S)-1-(2,4-dimetoxibenzil)-2-(hidroximetil)-4-oxoazetidin-3- il)carbamato (1,05 g, 2,62 mmol) e PPh3 (785 mg, 2,99 mmol) em THF (13 mL) a 0°C foi adicionado DIAD (0,582 mL, 2,99 mmol), gota a gota. Depois de agitar em ta durante 7 h, foi concentrado em vácuo e purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc -Heptano) para proporcionar o produto (1,24 g, 68%). LCMS : Ta = 1,01 min, m/z = 724,5 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00923] Etapa 10: Ao produto da etapa 9 (1,240 g, 1,713 mmol) em acetonitrila (20 mL) foi adicionado K2S2O8 (621 mg, 2,227 mmol) e uma solução de K2HPO4 (477 mg, 2,74 mmol) em água (10 mL), sequencialmente. Depois de aquecer a 90 °C com agitação vigorosa durante 1 h, K2S2O8 adicional (185 mg, 0,685 mmol) foi adicionado juntamente com K3PO4 (363 mg, 1,71 mmol). A mistura foi aquecida a 90 °C durante 5 h, em seguida resfriada em ta e diluída com EtOAc (120 mL). As camadas foram separadas, e a camada orgânica foi lavada com salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo. O material bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano) para proporcionar o produto (590 mg, 60%). LCMS : Ta = 0,85 min, m/z = 574,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00924] Etapa 11: Di-terc -butil ((S )-1-(2-(((2 R ,3 S )-3-amino-4- oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)propano-1,3- diil)dicarbamato. Suspendeu-se o produto da etapa 10 (590 mg, 1,03 mmol) e Pd-C (10% 200 mg) em EtOH/MeOH (21 mL, 2:1), e, então, o sistema foi evacuado e recarregado com H2 (3x). Depois de 4 h de agitação vigorosa, a mistura foi filtrada através de celite, lavando com EtOH/DCM. O filtrado foi concentrado em vácuo, proporcionando o composto do título (quantitativo assumido) como um sólido amarelo claro que foi usado como tal sem outra purificação. LCMS : Ta = 0,61 min, m/z = 440,2 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00925] Etapa 12: Benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)ami- no)tiazol-4-il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((4-((S)-2,2,12,12-tetrametil- 4,10-dioxo-3,11-dioxa-5,9-diazatridecan-6-il)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)azetidin-3-il)amino)etilideno)amino)óxi)ciclopro- panocarboxilato. Uma mistura de ácido (Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbo- nil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acético (582 mg, 1,028 mmol), DIPEA (0,269 mL, 1,543 mmol) e HATU (430 mg, 1,131 mmol) em DCM/DMF (12 mL, 5:1) foi agitada a 0 °C durante 30 min. A esta mistura foi adicionado di-terc-butil ((S)-1-(2-(((2R,3S)-3- amino-4-oxoazetidin-2-il)metil)-2H-1,2,3-triazol-4-il)propano-1,3- diil)dicarbamato (1,03 mmol). Depois de agitar durante um adicional de 30 min a 0 °C, foi diluído com EtOAc, lavado com água, salmoura, secado em Na2SO4 e concentrado em vácuo. O material bruto foi purificado por meio de cromatografia em sílica-gel (EtOAc-Heptano) para proporcionar o composto do título (760 mg, 77%). LCMS : Ta = 1,12 min, m/z = 959,6 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00926] Etapa 13: Ácido (3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbo- nil)ciclopropóxi)imino)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)acetamido)-2-oxo-4-((4-((S)-2,2,12,12-tetrametil-4,10-dioxo-3,11- dioxa-5,9-diazatridecan-6-il)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)azetidina-1- sulfônico. Ao benzidril 1-(((Z)-(1-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4- il)-2-oxo-2-(((3S,4R)-2-oxo-4-((4-((S)-2,2,12,12-tetrametil-4,10-dioxo-3,11- dioxa-5,9-diazatridecan-6-il)-2H-1,2,3-triazol-2-il)metil)azetidin-3- il)amino)etilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxilato (760 mg, 0,792 mmol) em DMF (4 mL) a 0 °C foi adicionado SO3^DMF (850 mg, 5,55 mmol). Depois de agitar durante 2 h em ta, a solução foi diluída com EtOAc, lavada com LiCl (5% aq), salmoura, secada em Na2SO4 e concentrada em vácuo para proporcionar o composto do título (quantitativo assumido) como um óleo laranja que foi usado diretamente sem outra purificação. LCMS : Ta = 1,01 min, m/z = 1039,6 (M+1) Método 2 m_acídico.
[00927] Etapa 14, Composto 1: Ácido 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4- il)-2-(((2R,3S)-2-((4-((S)-1,3-diaminopropil)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0207
[00928] Etapa 14, Composto 2: Ácido 1-(((Z)-(1-(2-aminotiazol-4- il)-2-(((2R,3S)-2-((4-((R)-1,3-diaminopropil)-2H-1,2,3-triazol-2- il)metil)-4-oxo-1-sulfoazetidin-3-il)amino)-2- oxoetilideno)amino)óxi)ciclopropanocarboxílico.
Figure img0208
[00929] Ao (3S,4R)-3-((Z)-2-((1-((benzidrilóxi)carbonil)ciclopropóxi)imi- no)-2-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)tiazol-4-il)acetamido)-2-oxo-4-((4- ((S)-2,2,12,12-tetrametil-4,10-dioxo-3,11-dioxa-5,9-diazatridecan-6-il)-2H- 1,2,3-triazol-2-il)metil)azetidina-1-sulfônico (5,55 mmol) em ácido fórmico (4 mL) a 0 °C foi adicionado anisol (173 μL, 1,58 mmol). A solução foi aquecida a 40 °C durante 2 h, e, então, foi resfriada em ta e concentrada em vácuo. Ao resíduo resultante foi adicionado DCM (15 mL), em seguida água gelada (12 mL) e esta foi vigorosamente agitada durante 1 h. As camadas foram separadas, e a camada aquosa foi diretamente purificada por HPLC de fase reversa (XSELECT CSH, 30 x 100 mm, 5 μm, coluna C18; ACN-água com 0,1% de modificador de ácido fórmico, 60 mL/min), proporcionando o composto 1 (170 mg, 37%) e composto 2 (21 mg, 5%) como sólidos brancos. Pensa-se que o Composto 2 tenha surgido a partir da leve epimerização do estereocentro durante a etapa 7. 1-LCMS : Ta = 0,31 min, m/z = 573,3 (M+1) Método 2 m_acídico_polar,1H RMN (400 MHz, D2O) δ ppm 7,86 (s, 1H) 7,07 (s, 1H) 5,60 (d, J = 5,6 Hz, 1H) 5,03-4,82 (m, 4H assumido; parcialmente obscurecido por pico residual de solvente) 3,12-2,85 (m, 2H) 2,54-2,34 (m, 2H) 1,28-1,08 (m, 4H). 2-LCMS : Ta = 0,30 min, m/z = 573,3 (M+1) Método 2 m_acídico_polar,1H RMN (400 MHz, D2O) δ ppm 7,86 (s, 1H) 7,07 (s, 1H) 5,58 (d, J = 5,5 Hz, 1H) 5,07-4,85 (m, 4H assumido; parcialmente obscurecido por pico residual de solvente) 3,12-2,84 (m, 2H) 2,53-2,34 (m, 2H) 1,30-1,03 (m, 4H).
Avaliações Bacterianas e Culturas
[00930] Isolados bacterianos foram cultivados de matérias-primas congeladas a -70°C por duas passagens durante a noite sucessivas a 35°C em ar ambiente em ágar de sangue a 5% (Remel, Lenexa, Kans.). Controle de qualidade e P. aeruginosa ATCC 27853) é da American Type Culture Collection (ATCC; Rockville, Md.) e PAO1 foi recebido de Dr. K. Poole.
[00931] Construção de cepas isogênicas de Escherichia coli NB27273-CDY0026 (origem), NB27273-CDY0033 (KPC2) e NB27273- CDY0030 (SHV12)
[00932] Cepa NB27273 (BW25113 pspB::Kmr) foi obtida da coleta de inserção de elementos transponíveis de Keio. A cepa foi o gene pspB substituído por um marcador de resistência à canamicina (BW25113 pspB::Kmr). Esta cepa foi curada dos elementos transponíveis em pspB via FLP recombinase usando a metodologia publicada. A cepa resultante, BW25113 pspB, foi usada como um hospedeiro para vetores de múltiplas cópias expressando as β-lactamases principais. Os plasmídeos de múltiplas cópias que direcionam a expressão constitutiva de β- lactamases foram estabelecidos como segue: Genes otimizados de códon, sintéticos codificando E. coli KPC2 e SHV12 β-lactamases foram feitos por DNA2.0 (Palo Alto, CA). Cada um dos fragmentos sintéticos foi projetado para conter sítios de restrição NotI e NcoI em suas terminações, permitindo a ligação em um derivado de pET28a(+) digerido de NotI/NcoI para expressão de proteína. As inserções nestes vetores serviram como DNA padrão para amplificação de PCR do gene codificando KPC2 e SHV12, usando pares de iniciador E225 (tcgcCTCGAGgcgactgcgctgacgaatttgg) (SEQ ID NO:1) e E202 (aatcGAATTCttactgaccattaacgcccaagc) (SEQ ID NO:2) e E227 (tcgcCTCGAGgcgagcccgcaaccgctgga) (SEQ ID NO:3) e E204 (aatcGAATTCttaacgctgccagtgctcaatc) (SEQ ID NO:4), respectivamente. As sequências de nucleotídeo otimizadas de códon e informação de reconhecimento de iniciador pertinente são mostradas abaixo: SHV12 ATC-GGCGATQATCATCATCATCAQAGCAGCGGCCTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCCGCGAG CCGGCAACOTJCTCGAC .ZAGAT. A A. .’• .ZA .I'TCTG A:.' A:.’f.Z ZZA.Z CTGAGCCJSCGC-TGTGG ~IATÇ.Z A DZZXJAiZA TC-CATCTGCCTTCGCGCCGTACCCTGACGCCATCGCGTGCCGACGAAGGTTTCCCXJATGATGTΠJACC TTTAAAGTTGTTCTGTGTGGTGCGGTCTTGGCÃCGTGTAC-ACSCSSGTC-ACC-AACAAGTS-GAC-CGCAA GATÇCATTACCG.TCAjiCAGGjACTTGGTCG/iCTÍLCA^CCC^TTTTÍL^iT^AAJjLACALr.TP^CCGGÍLTGGTA T C-AOCüTGGGTGAATTGGGCGCCGCTGC GATTAÇGAT .'AZZ GGAC AA.~AC-CG CAZ-ZZ CT AATGTC-CTGTTG GmACCüTTGGTrjGCCCAGCGGGGTTGAGCGCATTTGTGCGTGAAATCGSCGATAArüTTAOGLVJTCT ÜÜATCGCTGGGAAACGGAGCTGAACGAGGCACrGCCGGgl^GATGCCOÜ-l^-AlACCACGA^rCClGCEA GCATGG€AGCGACCC7GCGTAaACTGCTGftCCAGCCAGCC-TCrGASC!GCAÜC-TAGCCAAC!GC!CAG€TG CTGt^TGGATGGTGGÀGGACCGCGTGGCGGGTCCGCTGATCCGCTCCXTrCCTC-CCAGgAGGITrGGTT CATTGCOGACAAAACTGGTGCCTCTAAGCGTGGTGOGCGTGGTATCGTOGCGCTGCZrGGGTCCC-AACA ACAAAGCCGAACGTA?TGTGGTTATCTA?C?GCGCGACACCCCGGCAAC-CATC<-CGGAGOGCAACCAG CAAATrÜCGGGCATTGGTGCGGCACTGATTGAGCACTGGCAGCGTTAACC-CCC-C-CÜ (S E Q ID NO ;5) E227 TCGCOTCGAGGCGAGCCCGCAACCGCTGGA (SEQ IP NO;0) E2 0 4 AMCGAA’FrCi ^AACGCi GCCAGTGCTCAATC (SEQ I □ NQ:7 f REV, POMP. E2 04 GATTOAGCACTGGCAGCGTTAAGAATTCGATT (SEQ|DNO:5) KPC2 ATGGGCCA7CATCA7CATCATC ACAG CAG CGCCCTCGAAGTTXnXiTTCCMGGG CCO3CGACTGCGCTGA OGAfiTTTGGTGGCCGAGCCGTTOGCGAAATTGGlAgCAAGATTrTGGTGGTTOaATCagrGTCTAGGOgAT (JGACACCCGTAGCGCTOCCAGCGTGAGCTAgCGTGCOGAAgAG CCTTTTCCGCTGTGTAS CTCTTTCAAC iWTTTTCT«CqOCAGOKTGCligqCACGCAOCCAACa3CAMCgGGtt.-rGCTGGACftCCCcaRTOCO-1‘ ACGGCAAAAAIÜ CG CTGGTICCG7GGAGCCÇGATTAG ^AAAACTAPCTGAíCA CCcJGÇATGACGGTGGC OGAGTTGAGCGCTGOXXXKTTCACTATTCCCifirAACGCTtjCGGCAAATCTGCTGCrGAAACAACTOGOC GGTT CAGCGGGTCTOJ.aGGLZTTTCÀTGCCTT CT ATTGGCGACA PC ATCTTTOGLZTTCGAC rnCTGGGftr. 7 'TCGAGCTCAACAGCGCGATT rCGCGCCACCC ACCTG AT ACCAC TAGCCCGCGTG TAC"GA CCGAC AGCCT GCAGAAGCTGAGCCTGCqCftCCGGACTGt?CCGCACCG<aCCC:CCAAgAyrT0GTgGA7TCGCTGftAiQGGT AAGACGACCGGTAACCATCGTATTCGPGCAGCGGTCCCGGCTGATTGGGCAGTTGGTGACAAGACTGGTA nGTGCGGCGTTTftTGGTACGGCGAATGACTACGCgGTTG'TT'TnGCCTAmGnTCGTGCGCCGATCrrTCCT GGgGGTGTATAgCCGTGCTCCGAAÇAAAGACGArAAA-CfiCTCCGAAGCOGTCATCGCCGÇAGCAGgGCgT CTÍ^CGCTt^AAGGCTrgGGCG-TT-aATGGTCAGTAaCGCCGGCg (SEQ ID NCS) E225 TCGCCTCGAGGCGAÇTGCGCTGACGAATTTGG (SEQ IO N0:10) E2 ü 2 AAT2GAATTC2' ACTGfiCCATTAaCGCCÇAAGÇ JSEQ I □ N0;11; RRV, COMP, F2 02 GCT GGGCGTTAATGGTÇAGTAÃGAATTCGATT (SECJID NÚ:12) SUBLINHADO = DNA CODIFICANDO BL
[00933] Os produtos de PCR foram em seguida digeridos com XhoI e EcoRI e ligados em plasmídeo similarmente digerido pAH63- pstS(BlaP). Plasmídeo pAH63-pstS(BlaP) é um derivado de plasmídeo pAH63 (J Bacteriol:183(21): 6384-6393) feito clonando-se o promotor TEM-1 (bla) e peptídeo de sinal codificando a região do plasmídeo pBAD (J Bacteriol. 1995 Jul. 177(14):4121-30) em plasmídeo pAH63. Este fragmento foi amplificado por PCR de pBAD usando o par de iniciador E192 (ttcaCTGCAGtgaacgttgcgaagcaacggC) (SEQ ID NO:13) e E194 (TCGAggatcctcgagagcaaaaacaggaaggcaaaatgccg) (SEQ ID NO:14), digerido com PstI e BamHI e inserido no plasmíde similarmente digerido pAH63. Portanto, a expressão de β-lactamases de construções com base em pAH63-pstS(BlaP) é constitutiva e a sequência de sinal é fornecida para direcionar estas proteínas ao periplasma. Os vetores com base em plasmídeo pAH63 são usados para inserção no genoma em cópia única, porém, para fornecer níveis de expressão mais altos para permitir a detecção mais sensível da suscetibilidade dos compostos às β-lactamases, as inserções de expressão contidas nestes vetores foram movidas ao vetor de múltiplas cópias replicativo pBAD-Kan (J Bacteriol. 1995 Jul. 177(14):4121-30). Para realizar isto, as inserções abrangendo os genes de β-lactamase, com o promotor de TEM associado e sequências de sinal, foram amplificadas por PCR a partir de seus vetores correspondentes usando o iniciador E269 (ccgTCTAGAcggatggcctttttgcgtttc) (SEQ ID NO:15) e E202 (aatcGAATTCttactgaccattaacgcccaagc) (SEQ ID NO:16) para a construção de KPC2 e E204 (aatcGAATTCttaacgctgccagtgctcaatc) (SEQ ID NO:17) para a construção de SHV12. Estes fragmentos foram em seguida digeridos com XbaI e EcoRI, e cada um foi inserido em pBAD18-kan que foi digerido com as mesmas enzimas para gerar um par de vetores de múltiplas cópias expressando KPC2 e SHV12 respectivamente. Estes vetores foram transformados em BW25113 pspB para gerar cepas NB27273-CDY0033 (expressando KPC2) e NB27273-CDY0030 (expressando SHV12). O vetor pBAD18-kan da mesma forma contém a região de promotor TEM e sequência de sinal, (mas necessita de quaisquer genes de β-lactamase intactos) e foi transformado em BW25113 pspB usando os protocolos padrão para gerar a cepa de controle NB27273-CDY0026. A expressão das β- lactamases foi confirmada verificando-se a suscetibilidade diminuída aos antibióticos de teste de exemplo que são substratos conhecidos de KPC2 ou SHV12.
Teste de Suscetibilidade
[00934] As concentrações inibidoras mínimas (MICs) foram determinadas pelo método de microdiluição de caldo de acordo com as diretrizes de Clinical and Laboratories Institute (CLSI). Em resumo, as culturas bacterianas da noite frescas foram suspensas em solução salina estéril, e ajustadas em um padrão de turvação de McFarland 0,5. Pastas fluida bacterianas foram em seguida diluídas em Caldo de Mueller-Hinton ajustado por cátion (MHB II; BBL) para produzir um inoculo final de aproximadamente 5x105 unidades de formação de colônia (CFU)/mL. Uma placa mestre de antibióticos foi preparada em uma concentração equivalente a cem vezes a concentração final desejada mais alta em 100% de dimetil sulfóxido (DMSO). A placa de antibiótico mestre foi em seguida diluída por diluição dupla serial com uma pipeta de múltiplos canais. As séries de diluição resultantes dos compostos foram diluídas 1:10 com água estéril levando a uma concentração final de DMSO a 10%. Um volume de 10 μL das séries de diluição de fármaco foi transferido para placas de ensaio de 96 cavidades. As placas de ensaio foram inoculadas com 90 μL de pastas fluida bacterianas e incubadas a 35-37°C durante 20 hrs. As placas de ensaio foram lidas usando um leitor de placa de microtítulo (Molecular Devices) em 600nm bem como por observação visual com um espelho de leitura. A concentração mais baixa do composto que preveniu o crescimento visível foi registrada como a MIC. O desempenho do ensaio foi monitorado testando-se aztreonam contra as cepas de controle de qualidade de laboratório de acordo com as diretrizes de CLSI.
[00935] Compostos de referência: para comparação, os seguintes compostos de monobactam conhecidos são aqui usados:
[00936] Composto de referência 1: Aztreonam
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[00937] Composto de referência 2: Carumonam
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[00938] Composto de referência 3: BAL30072
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[00939] Composto de referência 4: Aicuris WO2013110643
Figure img0212
Tabela A: Concentrações Inibidoras Mínimas (MIC) em relação às cepas isogênicas de E. coli, carregando vários determinantes de resistência.
Figure img0213
[00940] Cepa 1: E.coli N B27273-CDY0 026 (origem)
[00941] Cepa 2: E.coli NB27273-CDY0033 (KPC2)
[00942] Cepa 3: E.coli NB27273-CDY0030 (SHV12)
[00943] Os dados na tabela A mostra que os compostos da invenção têm boa potência antibacteriana contra E. coli, incluindo cepas que mostram resistência forte aos vários antibióticos de monobactam e sulfactam conhecidos.
[00944] Os dados da atividade para compostos selecionados da invenção são fornecidos na seguinte tabela. Os compostos foram testados em cepa 25922 de E. coli e E. coli contendo KPC-2 (uma carbapenemase conhecida de Klebsiella pneumoniae), para determinar as Concentrações Inibidoras Mínimas (MIC), em mg/L. Note que os compostos identificados como sais de formiato foram submetidos à liofilização durante o isolamento, que em alguns casos removeram algum ácido fórmico, assim o teor de formiato daqueles sais pode ser menor do que o estequiométrico. Tabela B. Atividade dos Compostos nos Exemplos. Digitador, formatar tabela conforme original a partir da pag 248
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[00945] Pelos mesmos métodos descritos aqui, compostos adicionais podem facilmente ser preparados de materiais de partida conhecidos com uso da experiência ordinária. Exemplos destes compostos que esperam-se ter atividade biológica similar incluem:
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[00946] Aqueles versados na técnica reconhecerão, ou serão capazes de determinar o uso de não mais do que a experimentação de via, muitos equivalentes às modalidades específicas e métodos descritos aqui. Tais equivalentes destinam-se a ser abrangidos pelo escopo das seguintes reivindicações.

Claims (15)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula (I):
Figure img0241
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na qual Z é CR4 ou N; R1 é H ou C1-C4 alquila; R2 é selecionado a partir do grupo consistindo em H, C1-C4 alquila, e -COOH ou R1 e R2 empregados juntamente com o carbono ao qual eles são ligados formam um anel selecionado a partir de um C3-C6 cicloalquila anel e um anel heterocíclico de 4-6 membros contendo até dois heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como membros no anel; R3 é selecionado a partir de H, -COOH, e -L1-W-(CH2)0-2-X- R5; R4 é H ou halo; cada L1 é independentemente um C1-4 alquileno de cadeia linear ou ramificada; W é uma ligação, O, NH ou S; X é fenila, ou um anel de heteroarila de 5-6 membros contendo 1-3 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como membros no anel; onde as fenila e heteroarila de 5-6 membros são opcionalmente substituídas com um ou dois grupos selecionados a partir de C1-4 alquila, hidróxi, -CN, F, C1-4 alcóxi, -NH2, -NH(C1-4 alquila) e -N(C1-4 alquila)2 ; R5 é selecionado a partir de
Figure img0242
na qual R1b, R2b, e R3b são independentemente hidrogênio, hidróxi, CN, (C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, (C3-C6)cicloalquila, ou heterociclila de 4, 5, 6 ou 7 membros contendo N, O ou S como um membro no anel, em que cada (C1-C4)alquila, (C1-C4)alcóxi, (C3- C6)cicloalquila, ou heterociclila de 4, 5, 6 ou 7 membros contendo N, O ou S como um membro no anel pode ser substituído por um, dois ou três substituintes selecionados independentemente a partir de Y, na qual R2b e R3b juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual eles são ligados podem opcionalmente formar uma heterociclila de 5 a 7 membros incluindo 0 ou 1 heteroátomo adicional selecionado a partir de N, O e S, a referida heterociclila opcionalmente substituída por Y; Y é selecionado a partir de F, CN, -NH2, Q, -L2-C(O)NR10- L2-Q, -L2-NR10-C(O)-L2-Q, -L2-OR10, -L2-N(R10)2, -L2-N+(R11)3, -L2-NR10- C(O)R10, -L2-NR10-L2-N(R10)2, -L2-O-C(O)OR10, -L2-O-C(O)-N(R10)2, -L2- NR10-C(O)-N(R10)2, -L2-NR10-C(O)-OR11, -L2-C(=NR10)-N(R10)2, - CON(R10)2, -L2-NR10-C(=NR10)-N(R10)2, -L2-NR10-C(=NR10)-R10, -L2- C(O)N(R10)2, -L2-O-SO3R10 ; L2 é independentemente em cada ocorrência uma ligação ou um C1-4 alquileno de cadeia linear ou ramificada, opcionalmente substituído por NH2, OH, ou F; Het é um anel heterocíclico saturado de 4-6 membros, sendo que o anel heterocíclico contém 1 ou 2 heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como membros no anel e é substituído com oxo e opcionalmente substituído ainda com Y; R10 é independentemente H ou C1-4 alquila opcionalmente substituída por um ou dois grupos selecionados a partir de OH, NH2 ou Q; Q é selecionado a partir de -L2-N(R13)2, -L2-N+(R14)3, -L2- NR13-C(=NR13)-N(R13)2, -L2-NR13- CR13(=NR13), -L2-NR13-L2-Cy, -L2- NR13-C(=NR13)-NR13-L2-Cy, -L2-NR13-C(=NR13)-L2-Cy, -L2-Cy-L2-R13 , - L2-Cy-L2-N(R13)2, -L2-NR13-SO2-N(R13)2, -L2-SO2-N(R13)2, -L2-NR13-SO2- R13, -L2-NR13-L2-Ar, -L2-S-L2-Cy, -L2-NR13-(C=O)-O-R13,
Figure img0243
cada Cy é independentemente uma cicloalquila de 3-6 membros ou heterociclila de 3-6 membros contendo um ou dois heteroátomos selecionados a partir de N, O e S como um membro no anel e opcionalmente fundido em um anel de arila ou heteroarila de 56 membros, em que cada Cy é opcionalmente substituído por um ou dois grupos selecionados a partir de halo, C1-3 haloalquila, R14, hidróxi, C1-4 alcóxi, -NH2, -NH(C1-4 alquila) ou -N(C1-4 alquila)2; Ar é fenila, opcionalmente substituída por um ou dois grupos selecionados a partir de halo, C1-3 haloalquila, R14, hidróxi, C1-4 alcóxi, -NH2, -NH(C1-4 alquila) ou -N(C1-4 alquila)2; R11 é independentemente em cada ocorrência C1-4 alquila; sendo que dois R10, ou dois R11, no mesmo N, podem ciclizar para formar um anel heterocíclico de 4-6 membros opcionalmente substituído por C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, hidróxi, ou oxo; R13 é independentemente em cada ocorrência H ou C1-4 alquila opcionalmente substituída por hidróxi, -OR14, -NHR14, C1-4 alcóxi, -NH2, -NH(C1-4 alquila) ou -N(C1-4 alquila)2; R14 é independentemente em cada ocorrência C1-4 alquila opcionalmente substituída por hidróxi, C1-4 alcóxi, -NH2, -NH(C1-4 alquila) ou -N(C1-4 alquila)2; sendo que dois R13 ou dois R14 no mesmo N podem ciclizar para formar um anel heterocíclico de 4-6 membros opcionalmente substituído por C1-4 alquila, C1-4 alcóxi, hidróxi, amino ou oxo; R15 é H, halo, C1-4 alquila, CN, ou -O(C1-4 alquila).
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 e R2 juntamente com o carbono ao qual eles são ambos ligados formam um anel de ciclopropano e R3 é - COOH.
3. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que Z é CH.
4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que Het é selecionado a partir de pirrolidina-2-ona, oxazolidin-2-ona, e imidazolidin-2-ona, e é opcionalmente substituído por Y.
5. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1 a 4, caracterizado pelo fato de que apresenta a estrutura de Fórmula (II):
Figure img0244
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
6. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que ---O-CR1R2R3 é selecionado a partir de:
Figure img0245
7. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 6, carac- terizado pelo fato de que Het é selecionado dentre:
Figure img0246
8. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1 a 6, caracterizado pelo fato de que é um sal farmaceuticamente aceitável.
9. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é selecionado a partir de:
Figure img0247
Figure img0248
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Figure img0250
e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
10. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é:
Figure img0251
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
11. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto, como definido em qualquer das reivindica-ções 1 a 10, e pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável.
12. Uso de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, ou de uma composição farmaceuticamente aceitável, como definida na reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que é para fabricação de um medicamento para tratar uma infecção bacteriana Gram-negativa em um indivíduo em necessidade de tal tratamento.
13. Uso, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que a infecção bacteriana é pneumonia nosocomial, uma infecção intra-abdominal, ou uma infecção no trato urinário causada por uma espécie de Enterobacteriaceae.
14. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1 a 10, caracterizado pelo fato de que é para uso em terapia.
15. Combinação farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, e um segundo agente terapêutico.
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