CN112119077A - 激酶抑制剂 - Google Patents

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CN112119077A CN201980032307.0A CN201980032307A CN112119077A CN 112119077 A CN112119077 A CN 112119077A CN 201980032307 A CN201980032307 A CN 201980032307A CN 112119077 A CN112119077 A CN 112119077A
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彼得·菲舍尔
克里斯托夫·弗罗蒙特
布雷特·史蒂文森
萨姆·巴特沃斯
格雷格·艾科比尼
格拉齐拉·格雷科
米格尔·加松·桑兹
休林·琼斯
迪夫内特·考尔
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Abstract

本发明涉及某些4‑(取代的苯胺)‑2‑(取代的哌啶‑1‑基)嘧啶‑5‑甲酰胺化合物，其可用于治疗或预防通过CaMK1同种型的信号传导介导的疾病或医学病况。例如，此类化合物及其盐可用于治疗或预防多种不同的癌症、代谢性疾病(包括2型糖尿病)和/或免疫介导的疾病。

Description

激酶抑制剂
技术领域
本发明涉及化合物。更具体地，本发明涉及用作CaMK1家族(包括CaMK1A(CaMK1)、CaMK1B(PNCK)、CaMK1D(CKLIK)和/或CaMK1G)的钙调蛋白依赖性激酶的抑制剂的化合物。具体地，本发明考虑了CaMK1A(CaMK1)、CaMK1B(PNCK)、CaMK1D(CKLIK)和/或CaMK1G的抑制剂。另外，本发明考虑了包含这些化合物的药物组合物、制备这些化合物的方法以及这些化合物的用途。
背景
CaMK1家族激酶在细胞钙信号传导的传播中起关键作用，从而调节细胞过程，包括转录激活剂活性、细胞周期、激素产生、细胞分化、肌动蛋白丝组织和钙介导的粒细胞功能，包括呼吸爆发。因此，CaMK1信号传导涉及多种人类疾病，包括癌症、糖尿病和炎性疾病。
CaMK1激酶家族可以被几种钙依赖性机制激活。例如，在正常情况下，CaMK1D信号传导受至少两种机制控制；(1)钙/钙调蛋白复合物激活上游CaMKK2激酶，导致CaMK1D激活环的磷酸化，从而即使在不存在钙/钙调蛋白的情况下，蛋白质也具有基础激酶活性，(2)钙/钙调蛋白也可以直接激活CaMK1D，形成复合物，可进一步提高酶的催化活性。活性CaMK1D直接或间接控制下游蛋白的激活，包括转录因子CREB和AFT1，以及转录调节剂CDK9。其他CAMK1家族成员的激活也导致CREB和AFT1以及参与转录调控的其他蛋白(包括eIF4G3/eIF4GII)的激活。
CaMK1D的异常过表达与多种癌症，特别是乳腺癌的患者的肿瘤发生和进展有关。CaMK1B和CaMK1D的表达与介导针对HER2阳性乳腺癌中已建立的靶向ERBB2(HER2)信号传导的乳腺癌化学疗法的抗性有关。此类疗法的示例包括曲妥珠单抗(HerceptinTM)和拉帕替尼(Tykerb/TyverbTM)。
在多个全基因组关联研究中，激活CaMK1D基因座中的多态性与2型糖尿病相关。当被引入肝细胞中时，最高度验证的多形体会导致转录增强子活性增加，而siRNA实验表明，在没有胰岛素暴露的情况下，肝细胞中CaMK1D表达降低会导致CRCT2信号传导改变和糖原形成增加。
发明目的
本发明某些实施方案的目的是提供相对于现有技术化合物，显示出增强的抑制CaMK1激酶家族的活性的化合物。
本发明某些实施方案的目的是提供相对于现有技术化合物，对CaMK1激酶家族的抑制活性增强，并且相对于非CaMK1家族激酶，抑制CaMK1家族激酶的选择性提高的化合物，特别是在抑制脾酪氨酸激酶(SYK)方面。
本发明某些实施方案的特定目的是提供相对于现有技术化合物，显示出增强的抑制CaMK1D激酶活性的化合物。
本发明的一些实施方案的另一特定目的是提供相对于现有技术化合物，对CaMK1D激酶家族的抑制活性增强，并且相对于非CaMK1D家族激酶，抑制CaMK1家族激酶的选择性提高的化合物，特别是在抑制SYK激酶方面。
本发明的某些实施方案满足上述目的中的一些或全部。
发明内容
根据第一方面，本发明提供了式I的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0002776695470000021
其中：
R1选自由以下组成的组：H、C1-3烷基、C1-3卤代烷基、卤素、-OR2、-NR2R2、C3环烷基和C3卤代环烷基；
每个R2独立地选自由以下组成的组：H、C1-3烷基和C1-3卤代烷基；
每个R3独立地选自由以下组成的组：C1-3烷基、C1-3卤代烷基、卤素、-OR2、-NR2R2、C3环烷基和C3卤代环烷基；
n为1或2；
m为0至3；
W是
Figure BDA0002776695470000031
和X是
Figure BDA0002776695470000032
或W是
Figure BDA0002776695470000033
和X是
Figure BDA0002776695470000034
或W是
Figure BDA0002776695470000035
和X是
Figure BDA0002776695470000036
或W是
Figure BDA0002776695470000037
和X是
Figure BDA0002776695470000038
R4选自由以下组成的组：C3-6烷基、C3-6杂烷基、C3-6卤代烷基、C3-6杂卤代烷基、C3-6烯基，其中(i)位于与烯烃键合的环的β位的碳原子被碳顺式取代；并且(ii)位于与烯烃键合的环的α位的碳原子被以下部分取代：碳、C3-6环烷基、C4-6环烯基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烯基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、-NRB1aRB2a、-NRB3aC(O)RB2a、-C(O)NRB2aRB2a、-C(O)-(包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统)、-NRB3aC(O)ORB2a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB2a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB2a和-S(O)(＝NRB3a)RB2a；
R5选自由以下组成的组：H、C1-6烷基、C1-6杂烷基、C1-6卤代烷基、C1-6杂卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C4-6环烯基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烯基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、-O-芳基、-O-杂芳基、卤素、-ORB2a、-NRB3aRB3a、-SRB2a、-CN、-NRB3aC(O)RB2a、-C(O)NRB2aRB2a、-CRB3a(＝NRB3a)、-NRB3aC(O)ORB2a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB2a-S(O)(＝NRB3a)RB2a和-C(O)ORB2a；
R6选自由以下组成的组：H、C1-6烷基、C1-6杂烷基、C1-6卤代烷基、C1-6杂卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C4-6环烯基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烯基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、-O-芳基、-O-杂芳基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-CRB3a(＝NRB3a)、-SRB3a、-CN、-NRB3aC(O)RB2a、-C(O)NRB2aRB2a、-NRB3aC(O)ORB2a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB2a、-S(O)(＝NRB3a)RB2a和-C(O)ORB2a
其中RB1a选自由以下组成的组：C3-4烷基、C3-4杂烷基、C3-4卤代烷基、C3-4卤代杂烷基、C3-6环烷基、C1-4烷基C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统；
其中RB2a选自由以下组成的组：C1-4烷基、C1-4杂烷基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代杂烷基、C3-6环烷基、C1-4烷基C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统；
其中RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4杂烷基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代杂烷基、C3-6环烷基、C1-4烷基C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统；
其中C3-4烷基、C3-4杂烷基、C3-4卤代烷基、C3-4卤代杂烷基、C1-4烷基、C1-4杂烷基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代杂烷基、C3-6环烷基、C1-4烷基C3-6环烷基和包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统可以任选地被以下取代：C1-4烷基、C1-4杂烷基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代杂烷基、C3-6环烷基、C1-4烷基C3-6环烷基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)、＝O、-NH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2或(C1-3烷基)-NH2、-(C1-3烷基)-NH(C1-3烷基)或-(C1-3烷基)-N(C1-3烷基)2；
其中在特定的基团-NRB1aRB2a、-NRB3aRB3a、-C(O)NRB2aRB2a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a和-SO2NRB3aRB3a中，RB1a/RB2a、RB3a/RB3a和RB2a/RB2a对，与它们所键合的氮原子一起，可以形成4至12元单环或稠合、桥接或螺双环系统，其可选地包含1、2或3个选自N、O或S的杂原子；
或者，其中R4为C1-6-烷基或C3-6环烷基，并且R6为-NRB3aC(O)RB2a，其中不存在末端RB2a，并且R4和R6经由羰基碳连接，从而R4和R6与它们所键合的碳原子一起形成5或6元环；
或者，其中R5是-NRB3aRB3a并且R6是-CRB3a(＝NRB3a)，其中不存在-CRB3a(＝NRB3a)的末端RB3a并且不存在-NRB3aRB3a中的一个RB3a，并且R5和R6经由亚胺氮原子连接，从而R5和R6与它们所键合的碳原子一起形成5元环；
条件是，当R4是芳基或包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基，并且R5不存在或是H时，以下一项或两项为真：(i)芳基或包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基被Rsub部分邻位取代；或(ii)R6不是H；
其中上述C3-6烷基、C1-6烷基、C3-6杂烷基、C3-6卤代烷基、C1-6卤代烷基、C3-6杂卤代烷基、C1-6杂卤代烷基、C3-6烯基、C2-6烯基、C3-6环烷基、C4-6环烯基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烯基、芳基、杂芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统和C2-6炔基中的每一个可以任选地被1、2或3个Rsub部分取代，其中每个Rsub部分独立地选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6杂烷基、C1-6卤代烷基、C1-6杂卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、卤素、-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。
根据第二方面，本发明提供了用于治疗可通过调节或抑制CaMK1家族激酶而治疗的病症的化合物，该化合物为如第一方面所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐。
根据第三方面，本发明提供了一种治疗由CaMK1家族激酶调节的病症的方法，该方法包括向需要治疗的受试者施用治疗上有益量的如第一方面所定义的式I化合物或其药学上可接受的盐。
本发明提供了能够抑制CaMK1家族信号，特别是通过抑制CaMK1A、CaMK1B、CaMK1D和/或CaMK1G激酶活性来抑制CaMK1家族信号传导的化合物。
在一个实施方案中，相对于现有技术化合物，本发明化合物对CaMK1激酶家族的抑制活性增强，并且相对于非CaMK1家族激酶，本发明化合物抑制CaMK1家族激酶的选择性提高，特别是在抑制SYK激酶方面。
在一个实施方案中，相对于现有技术化合物，本发明的化合物表现出增强的抑制CaMK1D激酶的活性。
在一个实施方案中，相对于现有技术化合物，本发明化合物对CaMK1D激酶的抑制活性增强，并且相对于非CaMK1家族激酶，本发明化合物抑制CaMK1D激酶的选择性提高，特别是在抑制SYK激酶方面。
在另一方面，本发明提供了一种药物制剂，其包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂。
在另一方面，本发明提供了用作药物的本发明化合物或其药学上可接受的盐。
在另一方面，本发明提供了合成本发明化合物或其药学上可接受的盐的方法。
在另一方面，本发明提供了本文所定义的新型中间体，其适用于本文所述的任何一种合成方法。
附图概述：
图1-如实施例143所述，在急性和慢性(14天)给药后口服葡萄糖耐量试验(OGTT)的结果。A：单次给药后来自OGTT的葡萄糖和胰岛素AUC(基线)，B：给药14天后来自OGTT的葡萄糖和胰岛素AUC(距B2的基线)。显著差异表示为*p<0.05，**p<0.01和***p<0.001。
具体实施方式
以下实施方案大体上适用于本发明的所有方面。本发明的任何一个特定方面的优选的、合适的和任选的特征也是任何其他方面的优选的、合适的和可选的特征。
在一个实施方案中，R1是H。
在一个实施方案中，R1选自由以下组成的组：C1-3烷基、C1-3卤代烷基、卤素、-OR2和-NR2R2。优选地，R2选自由以下组成的组：H和C1-3烷基。更优选地，R2选自由以下组成的组：H和Me。
在一个实施方案中，R1选自由以下组成的组：C1-3烷基、卤素、-OR2和-NR2R2。优选地，R2选自由以下组成的组：H和C1-3烷基。更优选地，R2选自由以下组成的组：H和Me。
在一个实施方案中，R1选自由以下组成的组：C1-3烷基、F、Cl、-OR2和-NR2R2。优选地，R2选自由以下组成的组：H和C1-3烷基。更优选地，R2选自由以下组成的组：H和Me。
在一个实施方案中，R1选自由以下组成的组：Me、F、Cl、-OH和-NH2。
在一个实施方案中，m为0或1。
在一个实施方案中，R3选自由以下组成的组：C1-3烷基、C1-3卤代烷基、卤素、-OR2和-NR2R2。优选地，R2选自由以下组成的组：H和C1-3烷基。更优选地，R2选自由以下组成的组：H和Me。
在一个实施方案中，R3选自由以下组成的组：C1-3烷基、卤素、-OR2和-NR2R2。优选地，R2选自由以下组成的组：H和C1-3烷基。更优选地，R2选自由以下组成的组：H和Me。
在一个实施方案中，R3选自由以下组成的组：C1-3烷基、F、Cl、-OR2和-NR2R2。优选地，R2选自由以下组成的组：H和C1-3烷基。更优选地，R2选自由以下组成的组：H和Me。
在一个实施方案中，R3选自由以下组成的组：Me、F、Cl、-OH和-NH2。
在一个优选的实施方案中，m为0(即R3不存在)。
在一个实施方案中，n为2。在一个优选的实施方案中，n为1。
在一个实施方案中，m为0，n为1并且R1为H。
在一个实施方案中，m为0，n为1，并且R1选自由以下组成的组：C1-3烷基、C1-3卤代烷基、卤素、-OR2和-NR2R2。优选地，R2选自由以下组成的组：H和C1-3烷基。更优选地，R2选自由以下组成的组：H和Me。
在一个实施方案中，m为0，n为1，并且R1选自由以下组成的组：C1-3烷基、卤素、-OR2和-NR2R2。优选地，R2选自由以下组成的组：H和C1-3烷基。更优选地，R2选自由以下组成的组：H和Me。
在一个实施方案中，m为0，n为1，并且R1选自由以下组成的组：C1-3烷基、F、Cl、-OR2和-NR2R2。优选地，R2选自由以下组成的组：H和C1-3烷基。更优选地，R2选自由以下组成的组：H和Me。
在一个实施方案中，m为0，n为1，并且R1选自由以下组成的组：Me、F、Cl、-OH和-NH2。
在一个实施方案中，m为0，n为2并且R1为H。
在一个实施方案中，m为0，n为2，并且R1选自由以下组成的组：C1-3烷基、C1-3卤代烷基、卤素、-OR2和-NR2R2。优选地，R2选自由以下组成的组：H和C1-3烷基。更优选地，R2选自由以下组成的组：H和Me。
在一个实施方案中，m为0，n为2，并且R1选自由以下组成的组：C1-3烷基、卤素、-OR2和-NR2R2。优选地，R2选自由以下组成的组：H和C1-3烷基。更优选地，R2选自由以下组成的组：H和Me。
在一个实施方案中，m为0，n为2，并且R1选自由以下组成的组：C1-3烷基、F、Cl、-OR2和-NR2R2。优选地，R2选自由以下组成的组：H和C1-3烷基。更优选地，R2选自由以下组成的组：H和Me。
在一个实施方案中，m为0，n为2，并且R1选自由以下组成的组：Me、F、Cl、-OH和-NH2。
具有相同分子式但其原子键合的性质或顺序或其原子在空间中的排列不同的化合物称为“异构体”。其原子在空间中的排列不同的异构体被称为“立体异构体”。彼此不是镜像的立体异构体被称为“非对映异构体”，而彼此是不可重叠的镜像的立体异构体被称为“对映异构体”。当化合物具有不对称中心时，例如，它与四个不同的基团键合，可能有一对对映异构体。对映异构体的特征在于其不对称中心的绝对构型，并由Cahn和Prelog的R-和S-排序规则描述，或由分子旋转偏振光平面的方式描述，并称为右旋或左旋(即，分别为(+)或(-)-异构体)。手性化合物可以以单独的对映异构体或以其混合物存在。含有等比例对映异构体的混合物被称为“外消旋混合物”。当本发明的化合物具有两个或多个立体中心时，可以考虑(R)和(S)立体异构体的任何组合。(R)和(S)立体异构体的组合可以导致非对映异构体混合物或单一非对映异构体。本发明的化合物可以作为单一立体异构体存在，或者可以是立体异构体的混合物，例如外消旋混合物和其他对映异构体混合物，以及非对映异构体混合物。在混合物是对映异构体的混合物的情况下，对映异构体过量可以是以上公开的那些中的任何一种。在化合物是单一立体异构体的情况下，化合物可以仍然包含其他非对映异构体或对映异构体作为杂质。因此，单一立体异构体不必需具有100％的对映异构体过量(e.e.)或非对映异构体过量(d.e.)，但是e.e.或d.e.可以为约至少85％。
本发明的化合物可以具有一个或多个不对称中心；因此，这类化合物可以作为单独的(R)-立体异构体或(S)-立体异构体或其混合物生产。除非另有说明，否则说明书和权利要求书中特定化合物的描述或命名旨在包括单个对映异构体及其混合物(外消旋或其他形式)。立体化学的测定方法和立体异构体的分离是本领域众所周知的(参见“AdvancedOrganic Chemistry”第4章，第四版，J.March，John Wiley and Sons，New York，2001中的讨论)，例如通过由光学活性起始材料合成或通过消旋形式的解析。本发明的某些化合物可以具有几何异构中心(E异构体和Z异构体)。应当理解，本发明包括具有所需活性的所有光学、非对映异构体和几何异构体及其混合物。
在一个实施方案中，式I的化合物由以下式II表示，其中*所示的碳原子为R-构型或S-构型：
Figure BDA0002776695470000091
在一个优选的实施方案中，式I的化合物由以下式IIA表示，其中*表示的碳原子为R-构型或S-构型：
Figure BDA0002776695470000092
在一个实施方案中，式II的化合物具有式IIB、IIC、IID或IIE的结构：
Figure BDA0002776695470000101
下列实施方案适用于具有如上定义的式I、II、IIA、IIB、IIC、IIC、IID或IIE中任一项的结构的化合物：
在一个实施方案中，W是
Figure BDA0002776695470000111
和X是
Figure BDA0002776695470000112
因此该化合物具有式IIIA：
Figure BDA0002776695470000113
在一个实施方案中，W是
Figure BDA0002776695470000114
和X是
Figure BDA0002776695470000115
因此该化合物具有式IIIB：
Figure BDA0002776695470000116
在一个实施方案中，W是
Figure BDA0002776695470000117
和X是
Figure BDA0002776695470000118
因此该化合物具有式IIIC：
Figure BDA0002776695470000119
在一个实施方案中，W是
Figure BDA0002776695470000121
和X是
Figure BDA0002776695470000122
因此该化合物具有式IIID：
Figure BDA0002776695470000123
R4：
在一个实施方案中，R4选自由以下组成的组：C3-6烷基、C3-6卤代烷基、C3-6烯基，其中(i)位于与烯烃键合的环的β位的碳原子被碳顺式取代；并且(ii)位于与烯烃键合的环的α位的碳原子被以下取代：碳、C3-6环烷基、C4-6环烯基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、-NRB3aC(O)RB2a、-C(O)NRB2aRB2a、-C(O)-(包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统)、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB2a和-S(O)(＝NRB3a)RB2a；其中RB2a和RB3a基团如在第一方面中所定义；并且其中上述C3-6烷基、C3-6卤代烷基、C3-6烯基、C3-6环烷基、C4-6环烯基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、杂芳基和包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统中的每一个可以根据第一方面任选地被取代。
在一个实施方案中，R4是C3-6烷基(例如C3、C4、C5或C6烷基)。优选地，R4选自由异丙基和叔丁基组成的组。C3-6烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。优选地，C3-6烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。更优选地，C3-6烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。最优选地，C3-6烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a和-CN。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。
在一个实施方案中，R4是-C(O)NRB2aRB2a，其中每个RB2a独立地选自由以下组成的组：C1-4烷基、C1-4杂烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统。在一个实施方案中，每个RB2a独立地选自由以下组成的组：C1和C2烷基。C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)、＝O、-NH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2或(C1-3烷基)-NH2、-(C1-3烷基)-NH(C1-3烷基)或-(C1-3烷基)-N(C1-3烷基)2。优选地，C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：-OH、-O(C1-3烷基)、-NH2、-NH(C1-3烷基)或-N(C1-3烷基)2。
在一个实施方案中，R4是-C(O)NRB2aRB2a，其中每个RB2a独立地选自由以下组成的组：C1-4烷基和C1-4杂烷基，其中RB2a部分与它们所键合的氮原子一起形成4至7元环系统，其任选地包含1、2或3个选自N、O和S的另外的杂原子，如下结构所示，其中环A是4至7元环系统，其任选地包括1、2或3个选自N、O和S的其他杂原子：
Figure BDA0002776695470000131
C1-4烷基和C1-4杂烷基基团的任选取代基包括：C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-6环烷基、-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)、＝O、-NH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2或(C1-3烷基)-NH2、-(C1-3烷基)-NH(C1-3烷基)或-(C1-3烷基)-N(C1-3烷基)2。优选地，C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：C1-4烷基、C1-4卤代烷基、-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)和＝O。示例性结构包括：
Figure BDA0002776695470000132
Figure BDA0002776695470000141
在一个实施方案中，R4是C3-6环烷基(例如C3环烷基、C4环烷基、C5环烷基或C6环烷基)。C3-6环烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a和-C(O)NRB3aRB3a。优选地，C3-6环烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：卤素、-ORB3a和-CN。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基和C1-4卤代烷基。取代基可以与C3-6环烷基部分的任何原子键合，包括使C3-6环烷基基团与化合物的其余部分键合的原子。示例性的C3-6环烷基基团包括：
Figure BDA0002776695470000142
在一个实施方案中，R4为-SO2RB2a，其中RB2a为C1-4烷基(例如，C1、C2、C3或C4烷基)。
在一个实施方案中，R4是-SO2NRB3aRB3a，其中每个RB3a独立地选自由以下组成的组：H、C1-4烷基和C1-4杂烷基。在一个实施方案中，每个RB3a独立地选自由以下组成的组：H和C1-4烷基(例如C1、C2、C3或C4)烷基。C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)、＝O、-NH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2或(C1-3烷基)-NH2、-(C1-3烷基)-NH(C1-3烷基)或-(C1-3烷基)-N(C1-3烷基)2。优选地，C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：-OH、-O(C1-3烷基)、-NH2、-NH(C1-3烷基)或-N(C1-3烷基)2。
在一个实施方案中，R4是-SO2NRB3aRB3a，其中每个RB3a独立地选自由以下组成的组：C1-4烷基和C1-4杂烷基，其中RB3a部分与它们所键合的氮原子一起可以形成4至7元环系统，其任选地包含1、2或3个选自N、O和S的另外的杂原子，如下结构所示，其中环B是4至7元环系统，其任选地包括1、2或3个选自N、O和S的其他杂原子：
Figure BDA0002776695470000151
在一个实施方案中，每个RB3a独立地为C1-4烷基(例如，C1、C2、C3或C4)烷基。C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)、＝O、-NH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2或(C1-3烷基)-NH2、-(C1-3烷基)-NH(C1-3烷基)或-(C1-3烷基)-N(C1-3烷基)2。优选地，C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：-OH、-O(C1-3烷基)、-NH2、-NH(C1-3烷基)或-N(C1-3烷基)2。在一个实施方案中，
Figure BDA0002776695470000152
选自由以下组成的组：
Figure BDA0002776695470000153
在一个实施方案中，R4是芳基或包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基。芳基或杂芳基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。优选地，芳基或杂芳基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。更优选地，芳基或杂芳基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基(例如C1、C2、C3或C4烷基)、C1-6卤代烷基(例如C1、C2、C3或C4卤代烷基，例如CF3)、卤素和-ORB3a(例如-O-C1-4烷基，例如-O-CH3，或-O-C1-4卤代烷基，例如-O-CF3)。
在一个实施方案中，R4是C3-6烯基部分，其中(i)位于与烯烃键合的环的β位的碳原子被碳顺式取代；并且(ii)位于与烯烃键合的环的α位的碳原子被碳取代。优选地，R4是C3-4烯基部分。示例性的C3-6烯基部分包括：
Figure BDA0002776695470000161
Figure BDA0002776695470000162
在一个实施方案中，R4是包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基。4至6元杂环烷基可以通过碳原子或通过杂原子与分子的其余部分连接。4至6元杂环烷基的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、卤素、-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)NRB3aRB3a。优选地，4至6元杂环烷基的任选取代基选自由以下组成的组：包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、卤素、-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)RB3a,和-C(O)NRB3aRB3a。更优选地，4至6元杂环烷基的任选取代基选自由以下组成的组：芳基、＝O、-NRB3aRB3a和-C(O)RB3a。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。示例性结构包括：
Figure BDA0002776695470000171
在一个实施方案中，R4是-C(O)-(包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统)。该部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-NRB3aC(O)RB3a和-C(O)NRB3aRB3a。优选地，该部分的任选取代基选自由以下组成的组：芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-NRB3aC(O)RB3a和-C(O)NRB3aRB3a。更优选地，该部分的任选取代基选自由以下组成的组：芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基和-ORB3a。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基，优选C1-4烷基。示例性的R4部分包括：
Figure BDA0002776695470000181
在一个实施方案中，R4为-S(O)(＝NRB3a)RB2a，其中RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基和C1-4卤代烷基，并且RB2a选自由以下组成的组：C1-4烷基和C1-4卤代烷基。优选地，RB3a选自由以下组成的组：H和C1-4烷基(例如C1、C2、C3或C4烷基)。优选地，RB3a是C1-4烷基(例如C1、C2、C3或C4烷基)。
在一个实施方案中，R4为-NRB3aC(O)RB2a，其中RB3a选自由以下组成的组：C1-4烷基、C1-4杂烷基和C1-4卤代烷基，并且RB2a选自由以下组成的组：C1-4烷基和C1-4卤代烷基。优选地，RB3a选自由以下组成的组：C1-4烷基(例如C1、C2、C3或C4烷基)和C1-4卤代烷基(例如C1、C2、C3或C4卤代烷基)。优选地，RB2a选自由以下组成的组：(例如C1、C2、C3或C4烷基)和C1-4卤代烷基(例如C1、C2、C3或C4卤代烷基)。
在一个实施方案中，R4是C4-6环烯基。C4-6环烯基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-NRB3aC(O)RB3a和-C(O)NRB3aRB3a。优选地，C4-6环烯基部分的任选取代基选自由以下组成的组：卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-NRB3aC(O)RB3a和-C(O)NRB3aRB3a。更优选地，C4-6环烯基部分的任选取代基是卤素。示例性的R4部分包括：
Figure BDA0002776695470000191
在一个实施方案中，R4是C3-6卤代烷基。优选地，R4选自由C3和C4卤代烷基组成的组。C3-6卤代烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。优选地，C3-6卤代烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。更优选地，C3-6卤代烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。
R5：
在一个实施方案中，R5是H。
在一个实施方案中，R5是R4(即R5如以上涉及R4的任何实施方案中所定义)。
在一个实施方案中，R5选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6杂烷基、C1-6卤代烷基、C1-6杂卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-O-芳基、-O-杂芳基、卤素、-ORB2a、-NRB3aRB3a、-SRB2a、-CN、-CRB3a(＝NRB3a)、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a和-C(O)ORB2a。优选地，R5选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-O-芳基、-O-杂芳基、卤素、-ORB2a、-NRB3aRB3a、-SRB2a、-CN、-CRB3a(＝NRB3a)、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a和-C(O)ORB2a。更优选地，R5选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、卤素和-C(O)ORB2a。
在一个实施方案中，R5是C1-6烷基(例如C1、C2、C3、C4、C5或C6烷基)。优选地，R5选自由以下组成的组：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。优选地，R5选自由以下组成的组：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。C1-6烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。优选地，C1-6烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。更优选地，C1-6烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。
在一个实施方案中，R5是C1-6卤代烷基(例如C1、C2、C3、C4、C5或C6卤代烷基)。优选地，R5选自由以下组成的组：被卤素原子取代的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。更优选地，R5选自由以下组成的组：-CF3和-CF(CH3)2。C1-6卤代烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。优选地，C1-6卤代烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。更优选地，C1-6卤代烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。
在一个实施方案中，R5为-C(O)ORB2a，其中RB2a选自由以下组成的组：C1-4烷基和C1-4卤代烷基。优选地，B2a是C1-4烷基(例如C1、C2、C3或C4烷基)。
在一个实施方案中，R5为C2-6烯基部分。任选地，(i)位于与烯烃键合的环的β位的碳原子被碳顺式取代；和/或(ii)位于与烯烃键合的环的α位的碳原子被碳取代。优选地，R4是C3-4烯基部分。示例性的C3-6烯基部分包括：
Figure BDA0002776695470000201
Figure BDA0002776695470000211
在一个实施方案中，R5是卤素(例如F、Cl或Br)。
R6：
在一个实施方案中，R6是H。
在一个实施方案中，R6是R4(即R6如以上涉及R4的任何实施方案中所定义)。
在一个实施方案中，R6选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6杂烷基、C1-6卤代烷基、C1-6杂卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-O-芳基、-O-杂芳基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB2a、-CN、-CRB3a(＝NRB3a)、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a和-C(O)ORB2a。优选地，R6选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-O-芳基、-O-杂芳基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB2a、-CN、-CRB3a(＝NRB3a)、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a和-C(O)ORB2a。更优选地，R6选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、卤素、-ORB3a和-CN。
在一个实施方案中，R6是C1-6烷基(例如C1、C2、C3、C4、C5或C6烷基)。优选地，R6选自由以下组成的组：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。C1-6烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。优选地，C1-6烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。更优选地，C1-6烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。
在一个实施方案中，R6是C1-6卤代烷基(例如C1、C2、C3、C4、C5或C6卤代烷基)。优选地，R6选自由以下组成的组：被卤素原子取代的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。更优选地，R6选自由以下组成的组：-CF3和-CF(CH3)2。C1-6卤代烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。优选地，C1-6卤代烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。更优选地，C1-6卤代烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。
在一个实施方案中，R6是卤素(例如F、Cl或Br)。
在一个实施方案中，R6是-ORB3a，其中RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基和C1-4卤代烷基。优选地，RB3a选自由以下组成的组：H和C1-4烷基(例如C1、C2、C3或C4烷基)。
在一个实施方案中，R6是-CN。
R4和R6：
在一个实施方案中，R4为C1-6-烷基或C3-6环烷基，并且R6为-NRB3aC(O)RB2a，其中不存在末端RB2a，并且R4和R6经由羰基碳连接，从而R4和R6与它们所键合的碳原子一起形成5或6元环，该结构是：
Figure BDA0002776695470000221
优选地，RB3a是H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-6环烷基、C1-4烷基C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统。更优选地，RB3a是H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。示例性结构包括：
Figure BDA0002776695470000231
Figure BDA0002776695470000232
R5和R6：
在一个实施方案中，R5是-NRB3aRB3a并且R6是-CRB3a(＝NRB3a)，-CRB3a(＝NRB3a)的末端RB3a不存在并且不存在-NRB3aRB3a中的一个RB3a，并且R5和R6经由亚胺氮原子连接，从而R5和R6与它们所键合的碳原子一起形成5元环，该结构是：
Figure BDA0002776695470000233
优选地，RB3a是H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-6环烷基、C1-4烷基C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统。更优选地，RB3a是H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。示例性结构包括：
Figure BDA0002776695470000241
R4/R5/R6：
(i)[0055]至[0070]段中的任何一段的实施方式(关于R4)；(ii)[0071]至[0078]段中的任何一段的实施方式(关于R5)；(iii)[0079]至[0085]段中的任何一段的实施方式(关于R6)可以以任何组合方式组合。
特别地，以下实施方案是特别优选的实施方案：
在一个实施方案中，R4如[0055]至[0070]段中的任何一段所定义，R5是H并且R6是H。
在一个实施方案中，R4是C3-6烷基(例如C3、C4、C5或C6烷基)，并且R5是C1-6烷基(例如C1、C2、C3、C4、C5或C6烷基)。优选地，R4选自由异丙基和叔丁基组成的组，并且R5选自由以下组成的组：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。优选地，烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。更优选地，烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。最优选地，C3-6烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a和-CN。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。
在一个实施方案中，R4是-C(O)NRB2aRB2a，其中每个RB2a独立地选自由以下组成的组：C1-4烷基、C1-4杂烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统，并且R5选自由以下组成的组：被卤素原子取代的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。在一个实施方案中，每个RB2a独立地选自由以下组成的组：C1和C2烷基，并且R5选自由以下组成的组：-CF3和-CF(CH3)2。C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)、＝O、-NH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2或(C1-3烷基)-NH2、-(C1-3烷基)-NH(C1-3烷基)或-(C1-3烷基)-N(C1-3烷基)2。优选地，C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：-OH、-O(C1-3烷基)、-NH2、-NH(C1-3烷基)或-N(C1-3烷基)2。
在一个实施方案中，R4是-C(O)NRB2aRB2a，其中每个RB2a独立地选自由以下组成的组：C1-4烷基和C1-4杂烷基，其中RB2a部分与它们所键合的氮原子一起形成4至7元环系统，其任选地包含1、2或3个选自N、O和S的另外的杂原子，如下结构所示，其中环A是4至7元环系统，其任选地包括1、2或3个选自N、O和S的其他杂原子：
Figure BDA0002776695470000251
并且R5选自由以下组成的组：被卤素原子取代的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。C1-4烷基和C1-4杂烷基基团的任选取代基包括：C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-6环烷基、-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)、＝O、-NH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2或(C1-3烷基)-NH2、-(C1-3烷基)-NH(C1-3烷基)或-(C1-3烷基)-N(C1-3烷基)2。优选地，C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：C1-4烷基、C1-4卤代烷基、-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)和＝O。
Figure BDA0002776695470000252
的示例性结构包括：
Figure BDA0002776695470000253
Figure BDA0002776695470000261
Figure BDA0002776695470000262
并且R5优选地选自由以下组成的组：-CF3和-CF(CH3)2。
在一个实施方案中，R4和R5各自独立地为C3-6环烷基(例如C3环烷基、C4环烷基、C5环烷基或C6环烷基)。C3-6环烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a和-C(O)NRB3aRB3a。优选地，C3-6环烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：卤素、-ORB3a和-CN。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基和C1-4卤代烷基。取代基可以与C3-6环烷基部分的任何原子键合，包括使C3-6环烷基基团与化合物的其余部分键合的原子。R4和R5各自的示例性C3-6环烷基包括：
Figure BDA0002776695470000263
Figure BDA0002776695470000264
在一个实施方案中，R4是-SO2NRB3aRB3a，其中每个RB3a独立地选自由以下组成的组：C1-4烷基和C1-4杂烷基，其中RB3a部分与它们所键合的氮原子一起可以形成4至7元环系统，其任选地包含1、2或3个选自N、O和S的另外的杂原子，如下结构所示，其中环B是4至7元环系统，其任选地包括1、2或3个选自N、O和S的其他杂原子：
Figure BDA0002776695470000271
并且，R6选自由以下组成的组：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。在一个实施方案中，每个RB3a独立地为C1-4烷基(例如，C1、C2、C3或C4)烷基。C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)、＝O、-NH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2或(C1-3烷基)-NH2、-(C1-3烷基)-NH(C1-3烷基)或-(C1-3烷基)-N(C1-3烷基)2。优选地，C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：-OH、-O(C1-3烷基)、-NH2、-NH(C1-3烷基)或-N(C1-3烷基)2。在一个实施方案中，
Figure BDA0002776695470000272
选自由以下组成的组：
Figure BDA0002776695470000273
在一个实施方案中，R4是-SO2NRB3aRB3a，其中每个RB3a独立地选自由以下组成的组：C1-4烷基和C1-4杂烷基，其中RB3a部分与它们所键合的氮原子一起可以形成4至7元环系统，其任选地包含1、2或3个选自N、O和S的另外的杂原子，如下结构所示，其中环B是4至7元环系统，其任选地包括1、2或3个选自N、O和S的其他杂原子：
Figure BDA0002776695470000274
并且，R5选自由以下组成的组：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。在一个实施方案中，每个RB3a独立地为C1-4烷基(例如，C1、C2、C3或C4)烷基。C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)、＝O、-NH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2或(C1-3烷基)-NH2、-(C1-3烷基)-NH(C1-3烷基)或-(C1-3烷基)-N(C1-3烷基)2。优选地，C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：-OH、-O(C1-3烷基)、-NH2、-NH(C1-3烷基)或-N(C1-3烷基)2。在一个实施方案中，
Figure BDA0002776695470000281
选自由以下组成的组：
在一个实施方案中，R4是-SO2NRB3aRB3a，其中每个RB3a独立地选自由以下组成的组：H、C1-4烷基和C1-4杂烷基，并且R5选自由以下组成的组：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。在一个实施方案中，每个RB3a独立地选自由以下组成的组：H和C1-4烷基(例如C1、C2、C3或C4)烷基。C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)、＝O、-NH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2或(C1-3烷基)-NH2、-(C1-3烷基)-NH(C1-3烷基)或-(C1-3烷基)-N(C1-3烷基)2。优选地，C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：-OH、-O(C1-3烷基)、-NH2、-NH(C1-3烷基)或-N(C1-3烷基)2。
在一个实施方案中，R4是-C(O)NRB2aRB2a，其中每个RB2a独立地选自由以下组成的组：C1-4烷基、C1-4杂烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统，并且R5选自由以下组成的组：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。在一个实施方案中，每个RB2a独立地选自由以下组成的组：C1和C2烷基。C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)、＝O、-NH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2或(C1-3烷基)-NH2、-(C1-3烷基)-NH(C1-3烷基)或-(C1-3烷基)-N(C1-3烷基)2。优选地，C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：-OH、-O(C1-3烷基)、-NH2、-NH(C1-3烷基)或-N(C1-3烷基)2。
在一个实施方案中，R4是-C(O)NRB2aRB2a，其中每个RB2a独立地选自由以下组成的组：C1-4烷基和C1-4杂烷基，其中RB2a部分与它们所键合的氮原子一起形成4至7元环系统，其任选地包含1、2或3个选自N、O和S的另外的杂原子，如下结构所示，其中环A是4至7元环系统，其任选地包括1、2或3个选自N、O和S的其他杂原子：
Figure BDA0002776695470000291
并且R5选自由以下组成的组：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。C1-4烷基和C1-4杂烷基基团的任选取代基包括：C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-6环烷基、-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)、＝O、-NH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2或(C1-3烷基)-NH2、-(C1-3烷基)-NH(C1-3烷基)或-(C1-3烷基)-N(C1-3烷基)2。优选地，C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：C1-4烷基、C1-4卤代烷基、-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)和＝O。
Figure BDA0002776695470000292
的示例性结构包括：
Figure BDA0002776695470000293
Figure BDA0002776695470000294
在一个实施方案中，R4为-SO2RB2a，其中RB2a为C1-4烷基(例如，C1、C2、C3或C4烷基)，并且R5选自由以下组成的组：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。
在一个实施方案中，R4和R5各自独立地为-SO2RB2a，其中RB2a为C1-4烷基(例如，C1、C2、C3或C4烷基)。
在一个实施方案中，R4是C3-6烷基(例如C3、C4、C5或C6烷基)，并且R5为-C(O)ORB2a，其中RB2a选自由以下组成的组：C1-4烷基和C1-4卤代烷基。优选地，B2a是C1-4烷基(例如C1、C2、C3或C4烷基)。C3-6烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。优选地，C3-6烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。更优选地，C3-6烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。
在一个实施方案中，R4是-C(O)NRB2aRB2a，其中每个RB2a独立地选自由以下组成的组：C1-4烷基和C1-4杂烷基，其中RB2a部分与它们所键合的氮原子一起形成4至7元环系统，其任选地包含1、2或3个选自N、O和S的另外的杂原子，如下结构所示，其中环A是4至7元环系统，其任选地包括1、2或3个选自N、O和S的其他杂原子：
Figure BDA0002776695470000301
并且R5是芳基或包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基。C1-4烷基和C1-4杂烷基基团的任选取代基包括C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-6环烷基、-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)、＝O、-NH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2或(C1-3烷基)-NH2、-(C1-3烷基)-NH(C1-3烷基)或-(C1-3烷基)-N(C1-3烷基)2。优选地，C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：C1-4烷基、C1-4卤代烷基、-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)和＝O。芳基或杂芳基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。优选地，芳基或杂芳基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。更优选地，芳基或杂芳基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基(例如C1、C2、C3或C4烷基)、C1-6卤代烷基(例如C1、C2、C3或C4卤代烷基)、卤素和-ORB3a(例如-O-C1-4烷基，例如-O-CH3，或-O-C1-4卤代烷基，例如-O-CF3)。
Figure BDA0002776695470000311
的示例性结构包括：
Figure BDA0002776695470000312
Figure BDA0002776695470000313
在一个实施方案中，R4是-SO2NRB3aRB3a，其中每个RB3a独立地选自由以下组成的组：C1-4烷基和C1-4杂烷基，其中RB3a部分与它们所键合的氮原子一起可以形成4至7元环系统，其任选地包含1、2或3个选自N、O和S的另外的杂原子，如下结构所示，其中环B是4至7元环系统，其任选地包括1、2或3个选自N、O和S的其他杂原子：
Figure BDA0002776695470000321
R5选自由以下组成的组：被卤素原子取代的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。在一个实施方案中，每个RB3a独立地为C1-4烷基(例如，C1、C2、C3或C4)烷基。C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)、＝O、-NH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2或(C1-3烷基)-NH2、-(C1-3烷基)-NH(C1-3烷基)或-(C1-3烷基)-N(C1-3烷基)2。优选地，C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：-OH、-O(C1-3烷基)、-NH2、-NH(C1-3烷基)或-N(C1-3烷基)2。在一个实施方案中，
Figure BDA0002776695470000322
选自由以下组成的组：
Figure BDA0002776695470000323
并且R5优选地选自由以下组成的组：-CF3和-CF(CH3)2。
在一个实施方案中，R4是-SO2NRB3aRB3a，其中每个RB3a独立地选自由以下组成的组：H、C1-4烷基和C1-4杂烷基，并且，R5选自由以下组成的组：被卤素原子取代的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。在一个实施方案中，每个RB3a独立地选自由以下组成的组：H和C1-4烷基(例如C1、C2、C3或C4)烷基，并且R5优选地选自由以下组成的组：-CF3和-CF(CH3)2。
在一个实施方案中，R4和R5各自独立地为C3-6烯基部分，其中，(i)位于与烯烃键合的环的β位的碳原子被碳顺式取代；并且(ii)位于与烯烃键合的环的α位的碳原子被碳取代。优选地，R4和R5各自独立地为C3-4烯基部分。示例性的C3-6烯基部分包括：
Figure BDA0002776695470000324
在一个实施方案中，R4为-SO2RB2a，其中RB2a为C1-4烷基(例如，C1、C2、C3或C4烷基)，并且，R5选自由以下组成的组：被卤素原子取代的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。R5优选地选自由以下组成的组：-CF3和-CF(CH3)2。
在一个实施方案中，R4是包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基，并且，R5选自由以下组成的组：被卤素原子取代的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。4至6元杂环烷基可以通过碳原子或通过杂原子与分子的其余部分连接。4至6元杂环烷基的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、卤素、-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a和-C(O)NRB3aRB3a。优选地，4至6元杂环烷基的任选取代基选自由以下组成的组：包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、卤素、-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)RB3a和-C(O)NRB3aRB3a。更优选地，4至6元杂环烷基的任选取代基选自由以下组成的组：芳基、＝O和-NRB3aRB3a。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。示例性结构包括：
Figure BDA0002776695470000331
Figure BDA0002776695470000332
Figure BDA0002776695470000333
并且R5优选地选自由以下组成的组：-CF3和-CF(CH3)2。
在一个实施方案中，R4是包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基，并且R5选自由以下组成的组：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。4至6元杂环烷基可以通过碳原子或通过杂原子与分子的其余部分连接。4至6元杂环烷基的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、卤素、-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)RB3a、和-C(O)NRB3aRB3a。优选地，4至6元杂环烷基的任选取代基选自由以下组成的组：包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、卤素、-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)RB3a、和-C(O)NRB3aRB3a。更优选地，4至6元杂环烷基的任选取代基选自由以下组成的组：芳基、＝O、-NRB3aRB3a和-C(O)RB3a。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。示例性结构包括：
Figure BDA0002776695470000341
Figure BDA0002776695470000342
Figure BDA0002776695470000351
并且R5优选选自由以下组成的组：异丙基、仲丁基、异丁基和叔丁基，最优选异丙基。
在一个实施方案中，R4是C3-6烷基(例如C3、C4、C5或C6烷基)，并且，R5选自由以下组成的组：被卤素原子取代的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。C3-6烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。优选地，C3-6烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。更优选地，C3-6烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。R5优选地选自由以下组成的组：-CF3和-CF(CH3)2。
在一个实施方案中，R4是-C(O)NRB2aRB2a，其中每个RB2a独立地选自由以下组成的组：C1-4烷基和C1-4杂烷基，其中RB2a部分与它们所键合的氮原子一起形成4至7元环系统，其任选地包含1、2或3个选自N、O和S的另外的杂原子，如下结构所示，其中环A是4至7元环系统，其任选地包括1、2或3个选自N、O和S的其他杂原子：
Figure BDA0002776695470000352
并且R5是卤素。C1-4烷基和C1-4杂烷基基团的任选取代基包括：C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C3-6环烷基、-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)、＝O、-NH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2或(C1-3烷基)-NH2、-(C1-3烷基)-NH(C1-3烷基)或-(C1-3烷基)-N(C1-3烷基)2。优选地，C1-4烷基和C1-4杂烷基的任选取代基选自由以下组成的组：C1-4烷基、C1-4卤代烷基、-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)和＝O。
Figure BDA0002776695470000361
的示例性结构包括：
Figure BDA0002776695470000362
Figure BDA0002776695470000363
在一个实施方案中，R4是C4-6环烯基，并且R6是卤素(例如F、Cl或Br)。C4-6环烯基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-NRB3aC(O)RB3a和-C(O)NRB3aRB3a。优选地，C4-6环烯基部分的任选取代基选自由以下组成的组：卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-NRB3aC(O)RB3a和-C(O)NRB3aRB3a。更优选地，C4-6环烯基部分的任选取代基是卤素。示例性的R4部分包括：
Figure BDA0002776695470000364
在一个实施方案中，R4是C3-6环烷基(例如C3环烷基、C4环烷基、C5环烷基或C6环烷基)，并且R5是卤素。C3-6环烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a和-C(O)NRB3aRB3a。优选地，C3-6环烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：卤素、-ORB3a和-CN。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基和C1-4卤代烷基。取代基可以与C3-6环烷基部分的任何原子键合，包括使C3-6环烷基基团与化合物的其余部分键合的原子。示例性的C3-6环烷基基团包括：
Figure BDA0002776695470000371
Figure BDA0002776695470000372
在一个实施方案中，R4是芳基或包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基，并且R6不是H。优选地，R6是-ORB3a，其中RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基和C1-4卤代烷基。优选地，RB3a选自由以下组成的组：H和C1-4烷基(例如C1、C2、C3或C4烷基)。芳基或杂芳基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。优选地，芳基或杂芳基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。更优选地，芳基或杂芳基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基(例如C1、C2、C3或C4烷基)、C1-6卤代烷基(例如C1、C2、C3或C4卤代烷基，例如CF3)、卤素和-ORB3a(例如-O-C1-4烷基，例如-O-CH3，或-O-C1-4卤代烷基，例如-O-CF3)。
在一个实施方案中，R4是C3-6环烷基(例如C3环烷基、C4环烷基、C5环烷基或C6环烷基)，并且R5选自由以下组成的组：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。C3-6环烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a和-C(O)NRB3aRB3a。优选地，C3-6环烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：卤素、-ORB3a和-CN。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基和C1-4卤代烷基。取代基可以与C3-6环烷基部分的任何原子键合，包括使C3-6环烷基基团与化合物的其余部分键合的原子。示例性的C3-6环烷基基团包括：
Figure BDA0002776695470000381
Figure BDA0002776695470000382
优选地，R5选自由以下组成的组：异丙基、仲丁基、异丁基和叔丁基。
在一个实施方案中，R4是C3-6烷基(例如C3、C4、C5或C6烷基)，R5是C1-6烷基(例如C1、C2、C3、C4、C5或C6烷基)，并且R6是-ORB3a，其中RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基和C1-4卤代烷基。烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。优选地，烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。更优选地，烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。优选地，R4选自由异丙基和叔丁基组成的组，R5选自由以下组成的组：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基，并且RB3a选自由以下组成的组：H和C1-4烷基(例如C1、C2、C3或C4烷基)。
在一个实施方案中，R4是C3-6烷基(例如C3、C4、C5或C6烷基)，并且R5选自由以下组成的组：芳基和包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基。烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。优选地，烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。更优选地，烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。最优选地，C3-6烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a和-CN。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。芳基或杂芳基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。优选地，芳基或杂芳基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。更优选地，芳基或杂芳基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基(例如C1、C2、C3或C4烷基)、C1-6卤代烷基(例如C1、C2、C3或C4卤代烷基，例如CF3)、卤素和-ORB3a(例如-O-C1-4烷基，例如-O-CH3，或-O-C1-4卤代烷基，例如-O-CF3)。
在一个实施方案中，R4是C3-6环烷基(例如C3环烷基、C4环烷基、C5环烷基或C6环烷基)，并且，R5选自由以下组成的组：被卤素原子取代的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。C3-6环烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a和-C(O)NRB3aRB3a。优选地，C3-6环烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：卤素、-ORB3a和-CN。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基和C1-4卤代烷基。取代基可以与C3-6环烷基部分的任何原子键合，包括使C3-6环烷基基团与化合物的其余部分键合的原子。示例性的C3-6环烷基基团包括：
Figure BDA0002776695470000401
Figure BDA0002776695470000402
并且R5优选地选自由以下组成的组：-CF3和-CF(CH3)2。
在一个实施方案中，R4是C3-6卤代烷基，并且R5选自由以下组成的组：被卤素原子取代的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。在一个实施方案中，R4和R5各自独立地为C3-6卤代烷基。优选地，R4和R5各自为-CF(CH3)2。
在一个实施方案中，R4和R5各自独立地为芳基或包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基，并且R6不是H。芳基或杂芳基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。优选地，芳基或杂芳基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。更优选地，芳基或杂芳基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基(例如C1、C2、C3或C4烷基)、C1-6卤代烷基(例如C1、C2、C3或C4卤代烷基)、卤素和-ORB3a(例如-O-C1-4烷基，例如-O-CH3，或-O-C1-4卤代烷基，例如-O-CF3)。
在一个实施方案中，R4是C4-6环烯基，并且R5为C1-6烷基(例如，C1、C2、C3、C4、C5或C6烷基)。C4-6环烯基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-NRB3aC(O)RB3a和-C(O)NRB3aRB3a。优选地，C4-6环烯基部分的任选取代基选自由以下组成的组：卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-NRB3aC(O)RB3a和-C(O)NRB3aRB3a。更优选地，C4-6环烯基部分的任选取代基是卤素。示例性的R4部分包括：
Figure BDA0002776695470000411
和
Figure BDA0002776695470000412
优选地，R5选自由以下组成的组：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。优选地，烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。更优选地，烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。
在一个实施方案中，R4为C3-6烯基部分，其中(i)位于与烯烃键合的环的β位的碳原子被碳顺式取代；并且(ii)位于与烯烃键合的环的α位的碳原子被碳取代，并且R5选自由以下组成的组：被卤素原子取代的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。优选地，R4是C3-4烯基部分。示例性的C3-6烯基部分包括：
Figure BDA0002776695470000413
R5优选地选自由以下组成的组：-CF3和-CF(CH3)2。
在一个实施方案中，R4是芳基或包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基，并且，R5选自由以下组成的组：被卤素原子取代的甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基。芳基或杂芳基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。优选地，芳基或杂芳基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。更优选地，芳基或杂芳基部分的任选取代基选自由以下组成的组：C1-6烷基(例如C1、C2、C3或C4烷基)、C1-6卤代烷基(例如C1、C2、C3或C4卤代烷基)、卤素和-ORB3a(例如-O-C1-4烷基，例如-O-CH3，或-O-C1-4卤代烷基，例如-O-CF3)。R5优选地选自由以下组成的组：-CF3和-CF(CH3)2。
在一个实施方案中，R4和R5各自独立地为C3-6烷基(例如C3、C4、C5或C6烷基)，并且R6为卤素。烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。优选地，烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。更优选地，烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。优选地，R4和R5各自独立地选自异丙基和叔丁基，并且R6选自由以下组成的组：F、Cl或Br。
在一个实施方案中，R4和R5各自独立地为C3-6烷基(例如C3、C4、C5或C6烷基)，并且R6为CN。烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。优选地，烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。更优选地，烷基基团的任选取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。在一个实施方案中，RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。优选地，R4和R5各自独立地选自异丙基和叔丁基，并且R6是CN。
还提供了选自以下实施例中所述的化合物的化合物或其药学上可接受的盐。
定义
除非另有说明，否则说明书和权利要求书中使用的下列术语具有以下含义。
应当理解，对“治疗”的提及包括预防以及减轻所确定的病况。因此，对状态、病症或病况进行“治疗”包括：(1)预防或延迟可能患有或易患该状态、病症或病况但尚未经历或未显示该状态、病症或病况的临床或亚临床症状的人中该状态、病症或病况的临床症状的出现；(2)抑制该状态、病症或病况，即阻止、减少或延迟该疾病或其复发的发展(在维持治疗的情况下)或其至少一种临床或亚临床症状，或(3)缓解或减轻该疾病，即引起该状态、病症或病况或至少一种其临床或亚临床症状的消退。
“治疗有效量”包括化合物的量，当施用于哺乳动物以治疗疾病时，其足以对该疾病实现这种治疗。“治疗有效量”将根据化合物、疾病及其严重程度以及待治疗的哺乳动物的年龄、体重等而变化。
术语“卤代”或“卤素”包括卤素(即，周期表的第17族)之一。特别地，该术语包括氟、氯、溴和碘。
术语Cm-n是指具有m至n个碳原子的基团。
术语“C1-6烷基”包括含有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链烃链，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和正己基。术语“C1-4烷基”包括含至多4个碳原子的基团。亚烷基基团包括二价烷基基团，并且同样可以是直链或支链的，并且与分子的其余部分具有两个连接点。此外，亚烷基基团可以例如对应于本段中列出的那些烷基基团之一。烷基和亚烷基基团可以未被取代或被一个或多个取代基取代。可能的取代基描述如下。烷基基团的取代基可以是卤素(例如氟、氯、溴和碘)、OH、C1-C4烷氧基。可替代性地使用烷基基团的其他取代基。
术语“C1-6卤代烷基”，例如“C1-4卤代烷基”包括被至少一个卤素原子取代的烃链，所述卤素原子在每次出现时独立选择，例如氟、氯、溴和碘。卤素原子可以存在于烃链上的任何位置。例如，C1-6卤代烷基可以指氯甲基、氟甲基、三氟甲基、氯乙基例如1-氯甲基和2-氯乙基、三氯乙基例如1,2,2-三氯乙基、2,2,2-三氯乙基、氟乙基例如1-氟甲基和2-氟乙基、三氟乙基例如1,2,2-三氟乙基和2,2,2-三氟乙基、氯丙基、三氯丙基、氟丙基或三氟丙基。
术语“杂烷基”包括其中烃链具有至少一个中断烃链的杂原子(选自氮、氧和/或硫原子)的烷基。杂原子可以存在于烃链的任何位置。例如，C1-6杂烷基可以指醚、硫醚或胺化合物，例如CH3CH2OCH2CH3、CH3NHCH2CH3或CH3SCH3。杂亚烷基基团包括与分子其余部分具有两个连接点的二价杂烷基。基团-CH2CH2OCH2CH2-、-CH2NHCH2CH2-或-CH2SCH2-是杂亚烷基的实例。杂烷基和杂亚烷基基团可以未被取代或被一个或多个取代基取代。可能的取代基描述如下。烷基基团的取代基可以是卤素(例如氟、氯、溴和碘)、OH、C1-C4烷氧基。可替代性地使用杂烷基基团的其他取代基。
术语“C2-6烯基”包括含有至少一个双键并具有2、3、4、5或6个碳原子的支链或直链烃链。双键可以以E或Z异构体的形式存在。双键可以在烃链的任何可能的位置。例如，“C2-6烯基”可以是乙烯基、丙烯基、丁烯基、丁二烯基、戊烯基、戊二烯基、己烯基和己二烯基。
术语“C2-6炔基”包括含有至少一个三键并具有2、3、4、5或6个碳原子的支链或直链烃链。三键可以在烃链的任何可能的位置。例如，“C2-6炔基”可以是乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基和己炔基。
术语“C3-6环烷基”包括含有3、4、5或6个碳原子的饱和烃环体系。例如，“C3-C6环烷基”可以是环丙基、环丁基、环戊基、环己基、双环[2.1.1]己烷或双环[1.1.1]戊烷。
术语“杂环基”、“杂环的”或“杂环”包括非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥连或螺环双环杂环体系。单环杂环可在环中包含约3至12个(适当地3至7个)环原子，具有1至5个(适当地1、2或3个)选自氮、氧或硫的杂原子。双环杂环可以在环中包含7至17个成员原子，适宜地，7至12个原子。双环杂环可以是稠环、螺环或桥环体系。杂环基基团的实例包括环醚例如环氧乙烷基(oxiranyl)、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、二噁烷基和取代的环醚。在环位置中包含至少一个氮的杂环包括，例如，氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、四氢三嗪基、四氢吡唑基、四氢吡啶基、高哌啶基、高哌嗪基、3,8-二氮杂-双环[3.2.1]辛基、8-氮杂-双环[3.2.1]辛基、2,5-二氮杂-双环[2.2.1]庚基等等。典型的含硫杂环包括四氢噻吩基、二氢-1,3-二硫醇、四氢-2H-噻喃和六氢噻呯(hexahydrothiepine)。其他杂环包括二氢氧硫杂环戊烯基(dihydro oxathiolyl)、四氢噁唑基、四氢-噁二唑基、四氢二噁唑基、四氢氧杂噻唑基、六氢三嗪基、四氢噁嗪基、四氢嘧啶基、二氢间二氧杂环戊烯基(dioxolinyl)、八氢苯并呋喃基、八氢苯并咪唑基和八氢苯并噻唑基。对于含硫的杂环，还包括含SO或SO2基团的氧化的硫杂环。实例包括四氢噻吩基和硫代吗啉基的亚砜和砜形式，例如四氢噻吩1,1-二氧化物和硫代吗啉基1,1-二氧化物。用于具有1个或2个氧代(＝O)的杂环基团的合适的值例如2-氧代吡咯烷基、2-氧代咪唑烷基、2-氧代哌啶基、2,5-二氧代吡咯烷基、2,5-二氧代咪唑烷基或2,6-二氧代哌啶基。特定的杂环基基团是含有1、2或3个选自氮、氧或硫的杂原子的饱和单环3至7元杂环基，例如氮杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、吡咯烷基、吗啉基、四氢噻吩基、四氢噻吩基1,1-二氧化物、硫代吗啉基、硫代吗啉基1,1-二氧化物、哌啶基、高哌啶基、哌嗪基或高哌嗪基。如技术人员将理解的，任何杂环可以通过任何合适的原子(例如通过碳或氮原子)与另一个基团连接。例如，术语“哌啶基(piperidino)”和“吗啉基(morpholino)”是指通过环氮连接的哌啶-1-基或吗啉-4-基环。
术语“桥环体系”包括其中两个环共享多于两个原子的环体系，参见例如JerryMarch的Advanced Organic Chemistry，第四版，Wiley Interscience，第131-133页，1992。桥接的杂环基环体系的实例包括氮杂-双环[2.2.1]庚烷、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷、氮杂-双环[2.2.2]辛烷、氮杂-双环[3.2.1]辛烷和奎宁环。
术语“螺双环环体系”包括其中两个环体系共享一个共同的螺碳原子的环体系，即杂环通过单个共同的螺碳原子与另外的碳环或杂环连接。螺环体系的实例包括3,8-二氮杂-双环[3.2.1]辛烷、2,5-二氮杂-双环[2.2.1]庚烷、6-氮杂螺[3.4]辛烷、2-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷、2-氮杂螺[3.3]庚烷、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷、6-氧杂-2-氮杂螺[3.4]辛烷、2,7-二氮杂-螺[4.4]壬烷、2-氮杂螺[3.5]壬烷、2-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬烷和2-氧杂-6-氮杂螺[3.5]壬烷。
“杂环基-Cm-n烷基”包括共价连接于Cm-n亚烷基基团的杂环基基团，两者均在本文中定义。
术语“芳香族”当整体上应用于取代基时包括单环或多环系统，其中在该环或环系统内的共轭π系统中具有4n+2个电子，其中所有对共轭π系统有贡献的原子均在同一个平面上。
术语“芳基”包括芳族烃环体系。该环系统在一个环中的共轭π系统中具有4n+2个电子，其中所有对共轭π系统有贡献的原子均在同一个平面上。例如，“芳基”可以是苯基和萘基。芳基系统本身可以被其他基团取代。
术语“杂芳基”包括结合有一个或多个(例如1-4个，特别是1、2或3个)选自氮、氧或硫的杂原子的芳族单环或双环。该环或环系统在共轭π系统中具有4n+2个电子，其中所有对共轭π系统有贡献的原子均在同一个平面上。
杂芳基基团的实例是含有五个至十二个环成员，且更通常地含有五个至十个环成员的单环和双环基团。杂芳基基团可以是例如5元或6元单环或9元或10元双环，例如由稠合的五元环和六元环或两个稠合的六元环形成的双环结构。每个环可以含有至多约四个通常选自氮、硫和氧的杂原子。通常，杂芳基环将含有至多3个杂原子，更通常含有至多2个杂原子，例如含有单个杂原子。在一个实施方案中，杂芳基环含有至少一个环氮原子。杂芳基环中的氮原子可以是碱性的(如在咪唑或吡啶的情况下)或基本上非碱性的(如在吲哚或吡咯氮的情况下)。通常，存在于杂芳基基团(包含环的任何氨基取代基)中的碱性氮原子的数目将小于五个。
杂芳基的实例包括呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1,3,5-三氮烯基、苯并呋喃基、吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噻唑基、吲唑基、嘌呤基、苯并呋咱基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、噌啉基、蝶啶基、萘啶基、咔唑基、吩嗪基、苯并异喹啉基、吡啶并吡嗪基、噻吩并[2,3-b]呋喃基、2H-呋喃并[3,2-b]-吡喃基、5H-吡啶并[2,3-d]噁嗪基、1H-吡唑并[4,3-d]-噁唑基、4H-咪唑并[4,5-d]噻唑基、吡嗪并[2,3-d]哒嗪基、咪唑并[2,1-b]噻唑基和咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪基。在环位置中包含至少一个氮的杂芳基基团的实例包括吡咯基、噁唑基、异噁唑基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、1,3,5-三氮烯基、吲哚基、异吲哚基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噻唑基、吲唑基、嘌呤基、苯并呋咱基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、噌啉基和蝶啶基。“杂芳基”还覆盖部分芳族的双环或多环环体系，其中至少一个环是芳族环并且其他环中的一个或多个是非芳族饱和或部分饱和的环，条件是至少一个环含有一个或多个选自氮、氧或硫的杂原子。部分芳族的杂芳基基团的实例包括例如四氢异喹啉基、四氢喹啉基、2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并呋喃基、2,3-二氢-苯并[1,4]二噁英基、苯并[1,3]间二氧杂环戊烯基(dioxolyl)、2,2-二氧代-1,3-二氢-2-苯并噻吩基、4,5,6,7-四氢苯并呋喃基、吲哚啉基、1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶基、1,2,3,4-四氢吡啶并[2,3-b]吡嗪基和3,4-二氢-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪基。
五元杂芳基基团的实例包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、呋咱基、噁唑基、噁二唑基、噁三唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、三唑基和四唑基基团。
六元杂芳基基团的实例包括但不限于吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基和三嗪基。
含有与五元环稠合的六元环的双环杂芳基基团的具体实例包括但不限于苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、异苯并呋喃基、吲哚基、异吲哚基、吲哚嗪基(indolizinyl)、吲哚啉基、异吲哚啉基、嘌呤基(例如腺嘌呤基、鸟嘌呤基)、吲唑基、苯并间二氧杂环戊烯基(benzodioxolyl)、吡咯并吡啶基和吡唑并吡啶基基团。
含有两个稠合的六元环的双环杂芳基基团的具体实例包括但不限于喹啉基、异喹啉基、色满基(chromanyl)、硫代色满基、色烯基(chromenyl)、异色烯基、色满基、异色满基、苯并二噁烷基、喹嗪基、苯并噁嗪基、苯并二嗪基、吡啶并吡啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、萘啶基和蝶啶基基团。
“杂芳基-Cm-n烷基-”包括共价连接于Cm-n亚烷基的杂芳基，两者均在本文中定义。杂芳烷基基团的实例包括吡啶-3-基甲基等。
术语“任选地被取代的”包括被取代的基团、结构或分子和未被取代的基团、结构或分子。
当任选的取代基选自“一个或多个”基团时，应理解该定义包括选自指定基团之一的所有取代基或选自指定基团中的两个或更多个的取代基。
短语“本发明的化合物”是指大体上和具体地在本文公开的那些化合物。
以
Figure BDA0002776695470000481
结尾的键表示该键连接至结构中未示出的另一个原子。终止于环状结构内部而不终止于环结构的原子的键表示该键可以在化合价允许的情况下连接至环结构中的任何原子。
在一个部分被取代的情况下，可以在化学上可能并且与原子化合价要求相一致的情况下，在该部分上的任意点处被取代。该部分可以被一个或更多个取代基例如1个、2个、3个或4个取代基取代；任选地，在一个基团上存在1个或2个取代基。在存在两个或更多个取代基的情况下，取代基可以是相同的或不同的。
取代基仅存在于化学上合理的位置，本领域技术人员能够不费力地(实验性地或在理论上)决定哪些取代是化学上合理的，哪些不是。
邻位、间位和对位取代是本领域众所周知的术语。毫无疑问，“邻位”取代是其中相邻碳拥有取代基的取代方式，无论取代基是简单基团，例如以下实例中的氟基，还是分子的其他部分，如以
Figure BDA0002776695470000491
结构的键所示。
Figure BDA0002776695470000492
“间位”取代是一种取代模式，其中两个取代基在彼此距离一个碳的碳上，即，在取代的碳之间具有单个碳原子。换句话说，在远离具有一个取代基的原子的第二个原子上存在另一个取代基。例如，以下基团是被间位取代的。
Figure BDA0002776695470000493
“对位”取代是一种取代模式，其中两个取代基在彼此距离两个碳的碳上，即，在取代的碳之间具有两个碳原子。换句话说，在远离具有一个取代基的原子的第三个原子上存在另一个取代基。例如，以下基团是被对位取代的。
Figure BDA0002776695470000494
术语“酰基”包括通过除去羟基基团衍生自例如有机酸的有机自由基，例如具有式R-C(O)-的自由基，其中R可以选自H、C1-6烷基、C3-8环烷基、苯基、苄基或苯乙基基团，例如R是H或C1-3烷基。在一个实施方案中，酰基是烷基-羰基。酰基基团的实例包括但不限于甲酰基、乙酰基、丙酰基和丁酰基。一个特定的酰基是乙酰基(也称为Ac)。
在本说明书的整个说明书和权利要求书中，词语“包含”和“含有”及其变体意指“包括但不限于”，并且它们不旨在(并且不)排除其他部分、添加物、组分、整数或步骤。在本说明书的整个说明书和权利要求书中，除非上下文另有要求，否则单数形式包含复数形式。特别地，在使用不定冠词的情况下，除非上下文另有要求，否则说明书应被理解为考虑多个以及单个(singularity)。
结合本发明的特定方面、实施方案或实施例描述的特征、整数、特性、化合物、化学部分或基团应理解为适用于本文描述的任意其他方面、实施方案或实施例，除非与其不相容。本说明书(包括任何所附权利要求、摘要和附图)中公开的所有特征，和/或如此公开的任何方法或过程的所有步骤，可以以任意组合进行组合，除了这些特征和/或步骤中的至少一些是相互排斥的组合之外。本发明不限于任何前述实施方案的细节。本发明扩展到本说明书(包括任何所附权利要求、摘要和附图)中公开的任何一个新颖特征，或特征的任意新颖的组合，或如此公开的任意方法或过程的任意一个新颖步骤，或步骤的任意新颖的组合。
读者的注意力被导向到与本说明书同时提交或在本说明书之前提交的与本申请相关的所有论文和文献，所有这些论文和文献与本说明书一起可公开查阅，并且所有这些论文和文献的内容通过引用并入本文。
通常选择构成本发明化合物的各种官能团和取代基，使得化合物的分子量不超过1000。更通常地，化合物的分子量小于750，例如小于700，或小于650，或小于600，或小于550。更有选地，分子量小于525。
本发明的任何化合物的合适或优选的特征也可以是任何其他方面的合适的特征。
化合物的方法和用途：
在一个实施方案中，可通过调节或抑制CaMK1家族激酶信号传导而治疗的病况选自由以下组成的组：癌症、肉瘤、癌、母细胞瘤、淋巴瘤和白血病。更具体地，由CaMK1D调节的病况可以选自由以下组成的组：癌症、肉瘤、癌、母细胞瘤、淋巴瘤和白血病。可以通过抑制CaMK1家族激酶信号传导而治疗的特定病况选自由以下组成的组：基底细胞癌、髓母细胞瘤、横纹肌肉瘤、软骨肉瘤、黑素瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、B细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、脑癌、食道癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌、结直肠癌、肝癌、肾癌、头颈癌、间皮瘤、软组织肉瘤、骨肉瘤、睾丸癌、前列腺癌、胰腺癌、骨癌、骨转移、急性白血病、慢性白血病、神经胶质瘤、霍奇金病、皮肤黑色素瘤、膀胱癌、内分泌系统癌、甲状旁腺癌、甲状腺癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、皮肤癌、肾细胞癌、垂体腺瘤、脊柱肿瘤、子宫癌、胃癌和胆道癌。乳腺癌是可以通过抑制CaMK1家族激酶信号传导而治疗的特定特异性病况的一个实例。可以通过抑制CaMK1家族激酶信号传导而治疗的乳腺癌的具体实例是HER2阳性乳腺癌和三阴性乳腺癌。
还可以通过抑制CaMK1家族激酶信号传导而治疗的其他病况可以选自由以下组成的组：急性和慢性炎性病况或免疫系统介导的其他病况(例如类风湿关节炎、慢性阻塞性肺疾病、急性呼吸窘迫综合征、肝硬化、肺纤维化、肾小球肾炎、多发性硬化症、牛皮癣、良性前列腺肥大(BPH)、皮肤过敏反应、动脉粥样硬化和再狭窄、过敏性哮喘、糖尿病性视网膜病和糖尿病性肾病)以及与急性或慢性高血糖相关的病况(例如，胰岛素依赖性/1型糖尿病、非胰岛素依赖性/2型糖尿病、压力引起的高血糖)。
与第一方面有关的实施方案也适用于本发明的所有其他方面，包括上述第二和第三方面。
药物组合物：
本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以单独使用，但通常以药物组合物的形式施用，其中本发明的化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体缔合。
用于选择和制备合适的药物制剂的常规方法在例如"Pharmaceuticals-TheScience of Dosage Form Designs",M.E.Aulton,Churchill Livingstone,1988中有所描述。
取决于本发明化合物的施用方式，用于施用本发明化合物的药物组合物将优选包含0.05至99％w/w的本发明化合物，更优选0.05至80％w/w的本发明化合物，更优选0.10至70％w/w的本发明化合物，甚至更优选0.10至50％w/w的本发明化合物，所有重量百分比均基于总组合物。
药物组合物可以以例如乳膏剂、凝胶剂、洗剂、溶液剂、混悬剂的形式局部施用(例如向皮肤)，或全身施用，例如以片剂、胶囊剂、糖浆剂、散剂或颗粒剂的形式口服施用；或以用于注射(包括静脉内、皮下、肌内、血管内或输注)的无菌溶液、混悬剂或乳剂的形式肠胃外施用；以栓剂或灌肠剂的形式直肠施用；或以气雾剂的形式吸入。
对于口服施用，可以将本发明的化合物与佐剂或载体混合，所述佐剂或载体例如乳糖，蔗糖，山梨糖醇，甘露糖醇；淀粉，例如马铃薯淀粉，玉米淀粉或支链淀粉；纤维素衍生物；粘合剂，例如明胶或聚乙烯吡咯烷酮；和/或润滑剂，例如硬脂酸镁，硬脂酸钙，聚乙二醇，蜡，石蜡等，然后压制成片剂。如果需要对片剂包衣，可以用浓缩糖溶液对如上所述制备的核心进行包衣，所述浓缩糖溶液可以含有例如阿拉伯树胶、明胶、滑石粉和二氧化钛。或者，可以用溶解在易挥发有机溶剂中的合适的聚合物对片剂包衣。
为了制备软明胶胶囊，本发明的化合物可以与例如植物油或聚乙二醇混合。硬明胶胶囊可以含有化合物颗粒，使用上述片剂的赋形剂。也可将本发明化合物的液体或半固体制剂填充入硬明胶胶囊中。用于口服应用的液体制剂可以是糖浆剂或混悬剂的形式，例如含有本发明化合物的溶液，其余为糖和乙醇、水、甘油和丙二醇的混合物。任选地，这样的液体制剂可以含有着色剂、调味剂、甜味剂(例如糖精)、防腐剂和/或作为增稠剂的羧甲基纤维素或本领域技术人员已知的其他赋形剂。
对于静脉内(肠胃外)施用，本发明化合物可以作为无菌水性或油性溶液施用。
根据众所周知的医学原理，本发明化合物用于治疗目的的剂量大小将根据病况的性质和严重程度、动物或患者的年龄和性别以及施用途径而自然变化。
预期本发明化合物的剂量水平、给药频率和治疗持续时间根据制剂和临床适应症、患者的年龄和共患疾病(co-morbid medical condition)而不同。
对于上文提及的本发明的化合物，施用的剂量当然将随着所采用的化合物、施用方式、期望的治疗和适用的病症而变化。在将本发明化合物用于治疗或预防目的时，通常将其施用使得每日剂量在例如选自0.1mg/kg至100mg/kg、1mg/kg至75mg/kg、1mg/kg至50mg/kg、1mg/kg至20mg/kg或5mg/kg至10mg/kg体重的每日剂量的范围内，如果需要，以分剂量给予。通常，当采用肠胃外途径时，将施用较低剂量。因此，例如，对于静脉内或腹膜内施用，通常使用的剂量范围为例如0.1mg/kg至30mg/kg体重。类似地，对于吸入施用，将使用例如0.05mg/kg至25mg/kg体重的剂量。合适地，口服施用本发明的化合物，例如以片剂或胶囊剂型的形式施用。口服施用的日剂量可以是例如选自1mg至1000mg、5mg至1000mg、10mg至750mg或25mg至500mg的总日剂量。通常，单位剂型含有约0.5mg至0.5g的本发明化合物。
药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、复合物、多晶型物、互变异构体、前药、异构 体、同位素标记的化合物、代谢产物、对映异构体、中间体等：
本发明考虑本发明化合物的药学上可接受的盐。这些药学上可接受的盐可以包括化合物的酸加成盐和碱盐。
合适的酸加成盐由形成无毒盐的酸形成。实例包括乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐(camsylate)、柠檬酸盐、乙二磺酸盐(edisylate)、乙磺酸盐(esylate)、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、六氟磷酸盐、海苯酸盐(hibenzate)、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘化物、羟乙基磺酸盐(isethionate)、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基磺酸盐、萘酸盐、1,5-萘二磺酸盐、2-萘磺酸盐(2-napsylate)、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、蔗糖盐(saccharate)、硬脂酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。
合适的碱盐由形成无毒盐的碱形成。实例包括铝盐、精氨酸盐、苄星青霉素(benzathine)盐、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二乙醇胺盐(diolamine)、甘氨酸盐、赖氨酸盐、镁盐、葡甲胺盐、乙醇胺盐(olamine)、钾盐、钠盐、氨丁三醇(tromethamine)盐和锌盐。还可以形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐和半钙盐。关于合适的盐的综述，参见Stahl和Wermuth"Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use"(Wiley-VCH,Weinheim,Germany,2002)。
优选地，盐是酸加成盐。盐可以是甲酸盐或盐酸盐。
本发明化合物的药学上可接受的盐可以通过以下三种方法中的一种或更多种来制备：
(i)通过使本发明的化合物与所需的酸或碱反应；
(ii)通过使用所需的酸或碱，从本发明化合物的合适的前体除去对酸或碱不稳定的保护基团，或使合适的环状前体(例如内酯或内酰胺)开环；或者
(iii)通过与合适的酸或碱反应或借助于合适的离子交换柱将本发明化合物的一种盐转化为另一种盐。
所有三种反应均通常在溶液中进行。所得的盐可能沉淀出来并通过过滤收集，或者可以通过蒸发溶剂来回收。所得盐中的电离程度可以从完全电离到几乎不电离。
本发明的化合物可以以未溶剂化形式和溶剂化形式两者存在。本文使用术语‘溶剂化物’来描述一种分子络合物，该分子络合物包含本发明的化合物和化学计量量的一种或更多种药学上可接受的溶剂分子，例如乙醇。当所述溶剂是水时，采用术语‘水合物’。应理解，本发明涵盖具有CaMK1家族抑制活性的所有这些溶剂化形式。
本发明的范围包括络合物，例如笼形包合物(clathrate)、药物-宿主包含络合物，其中与此前提及的溶剂化物相比，药物和宿主以化学计量量或非化学计量量存在。还包括包含两种或更多种有机组分和/或无机组分的药物络合物，这些有机组分和/或无机组分可以是化学计量量或非化学计量量。得到的络合物可以是电离的、部分电离的或非电离的。对于此类络合物的综述，参见Haleblian的J Pharm Sci,64(8),1269-1288(1975年8月)。
本发明的化合物包括如本文定义的许多式的化合物，包括如在下文中定义的其全部多晶型物和晶癖(crystal habit)、其前药和异构体(包括光学异构体、几何异构体和互变异构异构体)以及同位素标记的本发明的化合物。
在本说明书中描述的化合物和盐可以被同位素标记(或“放射性标记”)。因此，一个或多个原子被原子质量或质量数与自然界中通常发现的原子质量或质量数不同的原子取代。可掺入的放射性核素的实例包括2H(也写为“D”，氘)、3H(也写为“T”，氚)、11C、13C、14C、15O、17O、18O、18F等。所使用的放射性核素将取决于该放射性标记的衍生物的具体应用。例如，对于体外竞争试验，3H或14C通常是有用的。对于放射性成像应用，11C或18F通常是有用的。在一些实施方案中，放射性核素是3H。在一些实施方案中，放射性核素是14C。在一些实施方案中，放射性核素是11C。并且在一些实施方案中，放射性核素是18F。
还应理解，本发明的某些化合物可表现出多晶型，并且本发明涵盖具有CaMK1家族抑制活性的所有这些形式。
本发明的化合物可以以多种不同的互变异构形式存在，并且对本发明的化合物的提及包括所有这些形式。为避免疑问，如果化合物可以以几种互变异构形式之一存在，并且只具体描述或示出了一种，则本发明的化合物仍然包含所有其他互变异构形式。互变异构形式的实例包括酮-、烯醇-和烯醇盐形式，例如，以下互变异构对：酮/烯醇(如下所示)、亚胺/烯胺、酰胺/亚氨基醇、脒/脒、亚硝基/肟、硫酮/烯硫醇(enethiol)和硝基/酸式硝基(aci-nitro)。
Figure BDA0002776695470000561
本发明的化合物的体内作用可部分地由施用本发明的化合物后在人体或动物体内形成的一种或多种代谢物发挥。
取决于所使用的合成方法，在纯化之前，本发明的化合物可以以对映异构体的混合物存在。对映异构体可以通过本领域已知的常规技术来分离。因此，本发明涵盖单独的对映异构体以及其混合物。
此外，本发明的化合物以及用于其制备的中间体可以根据各种熟知的方法例如结晶或色谱法来纯化。
组合疗法：
根据本发明的治疗方法或如本文定义的用于治疗可以通过调节或抑制CaMK1家族激酶而治疗的病况的化合物可以用作单独疗法或与另外的活性剂一起用作组合疗法。
根据本发明的治疗方法或如本文定义的用于治疗可以通过调节或抑制CaMK1家族激酶而治疗的病况的化合物，除本发明的化合物外，还可以包括常规手术或放疗或化疗。此类化疗可能包括以下所列的一种或多种以下特定抗肿瘤剂，或以下所列的一种或多种类别的抗肿瘤剂：
(i)抗增殖药/抗肿瘤药及其组合，例如，烷基化剂(例如，顺铂、奥沙利铂、卡铂、环磷酰胺、氮芥、苯达莫司汀、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、卡培他滨、替莫唑胺、异环磷酰胺(ifosamide)、二溴甘露醇、卡巴醌、塞替派、雷莫司汀、尼莫斯汀、AMD-473、六甲蜜胺、AP-5280、阿帕奇醌(apaziquone)、brostallicin、卡莫斯汀、雌莫司汀、福莫司汀、gulfosfamide、KW-2170、马磷酰胺、二溴卫矛醇、etaplatin络铂、奈达铂、strrplatin和亚硝基脲)；抗代谢物(例如，吉西他滨和抗叶酸剂例如氟嘧啶如5-氟尿嘧啶和替加氟、雷替曲塞、氨甲蝶呤、培美曲塞、胞嘧啶阿拉伯糖苷、6-巯基嘌呤核苷、亚叶酸(leucovarin)、UFT、去氧氟尿苷、carmoflur、阿糖胞苷、依诺他滨S-1、5-阿扎胞苷、卡培他滨(cepecitabine)、氯法拉滨、地西他滨、依氟鸟氨酸、ethynlcytidine、TS-1、奈拉滨、诺拉曲特、ocosfate、pelitrexol、triapine、三甲曲沙、阿糖腺苷和羟基脲)；抗生素(例如，蒽环霉素如阿霉素、博来霉素、多柔比星、道诺霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素-C、更生霉素、光辉霉素、阿柔比星、放线菌素D、氨柔比星、安那霉素、依沙芦星、加柔比星、奈莫柔比星、新制癌菌素(neocarzinostatin)、培洛霉素、piarubicin、蝴蝶霉素、stimalamer、链脲霉素、戊柔比星和净司他丁)；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱如长春新碱、长春花碱、长春地辛和长春瑞滨以及紫杉烷如紫杉醇、多西他赛(Taxotere)和泰素和polo激酶抑制剂)；蛋白酶体抑制剂例如卡非佐米和硼替佐米；干扰素疗法；和拓扑异构酶抑制剂(例如，表鬼臼毒素如依托泊苷和替尼泊苷、阿柔比星、氨萘非特、贝洛替康、10-羟基喜树碱、9-氨基喜树碱、二氟替康、edotecarin、依沙替康、吉马替康、勒托替康、吡柔比星、匹杉琼、鲁比替康、索布佐生、SN-38、tafluposide、安吖啶、拓扑替康、米托蒽醌和喜树碱)以及与这些疗法结合使用的佐剂，例如亚叶酸；
(ii)细胞抑制剂如抗雌激素剂(例如他莫昔芬、氟维司群、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、拉索昔芬和碘氧基芬)、抗雄激素剂(例如比卡鲁胺、米非司酮、氟他胺、尼鲁米特、康士得和醋酸环丙孕酮)、LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)、孕激素(例如醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑(vorazole)和依西美坦)和5α-还原酶抑制剂如非那雄胺；
(iii)抗侵入剂，例如达沙替尼和博舒替尼(SKI-606)和金属蛋白酶抑制剂、尿激酶型纤溶酶原激活剂受体功能抑制剂或肝素酶抗体；
(iv)生长因子功能抑制剂：例如，此类抑制剂包括生长因子抗体和生长因子受体抗体，例如抗erbB2抗体曲妥珠单抗[HerceptinTM]、抗EGFR抗体帕尼单抗、抗erbB1抗体西妥昔单抗、酪氨酸激酶抑制剂例如表皮生长因子家族抑制剂(例如，EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂例如吉非替尼、埃罗替尼和6-丙烯酰胺基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代丙氧基)-喹唑啉-4-胺(CI 1033)、erbB2酪氨酸激酶抑制剂(例如拉帕替尼/GW-572016)；ErbB2抑制剂(例如GW-28297、2C4、帕妥珠单抗、TAK-165、AR-209和2B-1)；肝细胞生长因子家族的抑制剂；
胰岛素生长因子家族的抑制剂；细胞凋亡的蛋白调节物的调节剂(例如Bcl-2抑制剂)；血小板衍生的生长因子家族的抑制剂，例如伊马替尼和/或尼罗替尼(AMN107)；丝氨酸/苏氨酸激酶的抑制剂(例如，Ras/Raf信号传送抑制剂，例如法尼基转移酶抑制剂，例如索拉非尼、替吡法尼和洛那法尼)；通过MEK和/或AKT激酶的细胞信号传导抑制剂、c-kit抑制剂、abl激酶抑制剂、PI3激酶抑制剂、Plt3激酶抑制剂、CSF-1R激酶抑制剂、IGF受体激酶抑制剂；极光激酶抑制剂和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂例如CDK2和/或CDK4抑制剂；(v)抗血管生成剂，例如抑制血管内皮生长因子作用的那些抗血管生成剂，例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗(AvastinTM)；COXII抑制剂(例如Arcoxia(依托考昔)、Bextra(伐地考昔)、Celebrex(塞来昔布)、Paracoxib Vioxx(罗非昔布))；MMP抑制剂(例如MMP-2抑制剂、MMP-9抑制剂、AG-3340、RO 32-3555和RS 13-0830)；沙利度胺；来那度胺；和例如VEGF受体(例如SU-1 1248、SU-5416、SU-6668和angiozyme)、酪氨酸激酶抑制剂(例如凡德他尼、瓦他拉尼、舒尼替尼、阿西替尼和帕唑帕尼)；依曲替酸；芬维A胺；唑来膦酸；血管抑素；aplidine；西仑吉肽(cilengtide)；A-4；内皮抑素；常山酮(halofuginome)；rebimastat；removab；来那度胺(revlimid)；角鲨胺(squalamine)；ukrain；和vitaxincombretastatin；
(vi)基因治疗方法，包括例如替代异常基因的方法，例如异常p53或异常BRCA1或BRCA2
(vii)免疫疗法，包括例如抗体治疗，例如阿仑单抗、利妥昔单抗、替伊莫单抗
Figure BDA0002776695470000581
和奥法木单抗；干扰素，例如干扰素α；白细胞介素例如IL-2(阿地白介素)；白细胞介素抑制剂例如IRAK4抑制剂；癌症疫苗，包括预防性疫苗和治疗疫苗，例如HPV疫苗，例如加德西、Cervarix、Oncophage和Sipuleucel-T(Provenge)；干扰素，例如干扰素α、干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素β、干扰素γ-1a和干扰素γ-n；PF3512676；Filgrastim(Neupogen)；香菇多糖；sizofilan；TheraCys；乌苯美司；WF-10；BAM-002；达卡巴嗪；达利珠单抗；地尼白介素；吉姆单抗；奥佐米星；咪喹莫特；来格司亭；黑素瘤疫苗(Corixa)；莫拉司丁；OncoVAX-CL；沙格司亭；他索纳明；tecleukin；胸腺法新(thymalasin)；托西莫单抗；Virulizin；Z-100；依帕珠单抗；米妥莫单抗；奥戈伏单抗(oregovomab)；pemtumomab；和toll样受体调节剂，例如TLR-7或TLR-9拮抗剂；和
(viii)细胞毒性剂，例如氟达拉滨(福达华)、克拉屈滨、喷司他丁(NipentTM)、edotecarin、SU-1 1248、泰素、爱必妥(Erbitux)、和伊立替康；
(ix)类固醇如皮质类固醇，包括糖皮质激素和盐皮质激素，例如阿氯米松、阿氯米松双丙酸酯、醛固酮、安西奈德、倍氯米松、倍氯米松双丙酸酯、倍他米松、倍他米松双丙酸酯、倍他米松磷酸钠、倍他米松戊酸酯、布地奈德、氯倍他松、氯倍他松丁酸酯、氯倍他索丙酸酯、氯泼尼醇、可的松、醋酸可的松、可的伐唑、去氧皮质酮、地奈德、去羟米松、地塞米松、地塞米松磷酸钠、地塞米松异烟酸酯、二氟可龙、氟氯洛龙、氟米松、氟尼缩松、氟轻松、氟轻松安奈德、醋酸氟轻松、氟考丁酯、氟可的松、氟可龙、氟可龙己酸酯、氟可龙新戊酸酯、氟米龙、氟泼尼定、氟泼尼定乙酸酯、氟氢缩松、氟替卡松、氟替卡松丙酸酯、哈西奈德、氢化可的松、氢化可的松乙酸酯、氢化可的松丁酸酯、氢化可的松醋丙酯、氢化可的松丁丙酸酯、氢化可的松戊酸酯、艾可米松、醋丁艾可米松、甲泼尼松、甲泼尼龙、莫米松帕拉米松、糠酸莫米他松一水合物、泼尼卡酯、泼尼松龙、泼尼松、替可的松、替可的松新戊酸酯、曲安奈德、醋酸曲安奈德、曲安奈德醇及其各自药学上可接受的衍生物。可以使用类固醇的组合，例如本段中提及的两种或更多种类固醇的组合；
(x)靶向疗法，例如PI3Kd抑制剂，例如艾达拉西布和哌福辛；
(xi)调节DNA损伤反应的药物，例如PARP、DNAPK、ATM、ATR的抑制剂，例如奥拉帕尼、尼拉帕尼、iniparib、talazoparib和维利帕尼。
(xii)以及其他活性剂，例如磷酸雌莫司汀、磷酸氟达拉滨、法呢基转移酶抑制剂、PDGFr、链脲霉素、锶-89、苏拉明(suramin)、荷尔蒙疗法(例如Lupron、度骨化醇、法倔唑、福美斯坦和曲普瑞林(trelstar))、支持性护理产品(例如，Filgrastim(Neupogen)、昂丹司琼(Zofran)、Fragmin、Procrit、Aloxi和Emend)、生物反应调节剂(例如Krestin、香菇多糖、西索菲兰、毕西巴尼和乌苯美司)、阿利维甲酸、安普利近、阿曲生坦(atrasenten)、贝沙罗汀、波生坦、骨化三醇、exisulind、福莫司汀、伊班膦酸、米替福新、l-天冬酰胺酶、甲基苄肼、达卡巴嗪、羟基脲、培门冬酶、他扎罗汀(tazarotne)、TLK-286、Velcade、Tarceva、维甲酸。
本文定义的联合治疗可以通过同时、依次或分开施用治疗物的各个组分来实现。这种组合产品使用本文所述治疗有效量的剂量范围内的本发明化合物和其批准剂量范围内的其它药物活性剂。
本文中，在使用术语“组合”时，应理解这是指同时、分开或依次施用。在本发明的一个方面，“组合”是指同时施用。在本发明的另一个方面，“组合”是指分开施用。在本发明的另一方面，“组合”是指依次施用。当施用是依次或分开时，施用第二组分的延迟不应该失去该组合物的有益效果。
在使用组合治疗的一些实施方案中，当组合时，本发明化合物的量和其他(多种)药物活性剂的量在治疗上有效治疗患者的靶标病症。在这种情况下，如果组合量(当组合时)足以减轻或完全缓解病症的症状或其他不利影响；治愈病症；逆转、完全停止或减缓病症的进展；或降低病症恶化的风险，则其为“治疗有效量”。通常，这种量可以由本领域技术人员确定，通过例如从本说明书中描述的本发明化合物的剂量范围和其他(多种)药物活性化合物的批准或以其他方式公开的(多个)剂量范围开始。
根据本发明的另一方面，提供了一种药物产品，其包含如本文所定义的本发明化合物或其药学上可接受的盐，以及用于治疗由CaMK1家族激酶信号传导调节的病况的另外的活性剂。所述另外的活性剂可以是如本文定义的抗肿瘤剂。
在一个实施方案中，提供了一种药物产品，其包含如本文所定义的本发明化合物或其药学上可接受的盐，以及用于治疗由CaMK1D激酶信号传导调节的病况的另外的活性剂。所述另外的活性剂可以是如本文定义的抗肿瘤剂。
根据本发明的另一方面，提供了一种治疗由CaMK1家族激酶信号传导调节的病况的方法，该方法包括向需要此治疗的患者施用治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐，与如本文定义的另外的抗肿瘤剂同时、相继或分别施用。
在一个实施方案中，所述病况是由CaMK1D调节的病况。
根据本发明的另一方面，提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其用于与如本文定义的另外的抗肿瘤剂同时、相继或分别施用，来治疗由CaMK1家族激酶信号传导调节的病况。在一个实施方案中，所述病况是由CaMK1D调节的病况。
根据本发明的另一方面，提供了本发明的化合物与如本文所述的抗肿瘤剂组合的用途。本发明的化合物可以与另外的抗肿瘤剂同时、相继或分别使用。该使用可以是包含本发明的化合物和抗肿瘤剂的单一组合产品。
根据另一方面，提供了提供组合产品的方法，其中该方法包括与如本文所定义的抗肿瘤剂同时、相继或分别提供本发明的化合物。该方法可以包括将本发明的化合物和抗肿瘤剂组合为单一剂型。或者，该方法可以包括作为单独的剂型提供抗肿瘤剂。
本发明的化合物也可以与放射疗法组合使用。合适的放射疗法包括例如X射线疗法、质子束疗法或电子束疗法。放射疗法也可以包括使用放射性核素剂，例如131I、32P、90Y、89Sr、153Sm或223Ra。这种放射性核素疗法是众所周知的并且可商购。
根据本发明的另一方面，提供了如上定义的本发明化合物或其药学上可接受的盐，其用于与放射疗法联合治疗癌症。
根据本发明的另一方面，提供了一种治疗患有癌症的人或动物受试者的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐，同时、依次或分别施用放射疗法。
合成
在本文描述的合成方法的描述中以及在用于制备起始材料的参考合成方法中，应理解，所有提出的反应条件，包括溶剂的选择、反应气氛、反应温度、实验的持续时间和后处理程序，可以由本领域技术人员选择。
有机合成领域的技术人员应理解，分子的各个部分上存在的官能度必须与所使用的试剂和反应条件相容。
必要的起始原料可以通过有机化学的标准方法获得。结合以下代表性的方法变体并在所附的实施例中描述了这些原料的制备。或者，必要的起始原料可以通过与所示的那些方法类似的方法获得，这在普通有机化学技术人员的范围内。
所有本文描述的反应和前述方法中使用的新原料的制备都是常规的，并且对于它们的性能或制备以及用于分离所需产物的方法的合适试剂和反应条件，在本领域技术人员参考文献先例以及本文的实施例和制备的情况下是众所周知的。
应当理解，在以下定义的方法中合成本发明化合物的过程中，或在某些起始原料的合成过程中，可能希望保护某些取代基团以防止其不希望的反应。熟练的化学家将理解何时需要这种保护，以及如何将这种保护基团放置到位，然后再除去。在这样的情况下，可以使用任何相容的保护基团。特别地，可以使用例如T.W.GREENE(Protective Groups inOrganic Synthesis,A.Wiley-Interscience Publication,1981)或P.J.Kocienski(Protecting groups,Georg Thieme Verlag,1994)描述的那些保护和脱保护的方法。可以通过文献中描述的或熟练的化学家已知的适合于除去所讨论的保护基团的任何方便的方法除去保护基团，选择这样的方法以实现保护基团的去除，而最低程度地影响分子中其他地方的基团。
因此，如果反应物包括例如氨基、羧基或羟基之类的基团，可能需要在本文提及的某些反应中保护该基团。
举例来说，用于氨基或烷基氨基基团的合适的保护基团是，例如，酰基基团，例如烷酰基基团，例如乙酰基或三氟乙酰基，烷氧基羰基，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基或叔丁氧基羰基，芳基甲氧基羰基基团，例如苄氧基羰基，或芳酰基基团，例如苯甲酰基。上述保护基团的脱保护条件必然随保护基团的选择而变化。因此，例如，可以通过例如用合适的碱，例如碱金属氢氧化物，例如锂或氢氧化钠进行水解来除去酰基基团例如烷酰基或烷氧基羰基基团或芳酰基基团。或者，可以例如通过用合适的酸如盐酸、硫酸或磷酸或三氟乙酸处理来除去酰基基团如叔丁氧基羰基基团，并且可以例如通过经催化剂例如钯碳进行氢化，或通过用路易斯酸例如BF3.OEt2处理来除去芳基甲氧基羰基基团例如苄氧基羰基基团。伯氨基基团的合适的替代性保护基团是例如邻苯二甲酰基基团，其可以通过用烷基胺例如二甲基氨基丙胺或用肼处理来除去。
羟基基团的合适的保护基团是，例如，酰基基团，例如烷酰基基团，例如乙酰基，芳酰基基团，例如苯甲酰基，或芳基甲基基团，例如苄基。上述保护基团的脱保护条件将必然随保护基团的选择而变化。因此，例如，可以例如通过用合适的碱，例如碱金属氢氧化物，例如锂、氢氧化钠或氨进行水解，来除去酰基基团，例如烷酰基或芳酰基基团。或者，可以例如通过经催化剂如钯碳进行氢化来除去芳基甲基基团如苄基基团。
羧基基团的合适的保护基团是，例如，酯化基团，例如甲基或乙基基团，其可以例如通过用碱例如氢氧化钠进行水解来除去，或者例如是叔丁基基团，其可以例如通过用酸例如有机酸如三氟乙酸处理来除去，或者例如是苄基基团，其可以例如通过经催化剂如钯碳进行氢化来除去。
树脂也可以用作保护基团。
实施例
HPLC方法1
在与Applied Biosystems API2000联接的Shimadzu UFLCXR系统上执行。柱保持在40℃。色谱柱：Phenomenex Gemini-NX3 m-1-110AC18，50x2mm。总流速为0.5mL/min。在220nm(通道2)和254nm(通道1)处进行UV检测。梯度：以5％B预平衡1分钟；然后运行如下方法：2分钟内5至98％溶剂B，98％B保持2分钟，0.5分钟内98至5％B，然后5％保持1分钟。酸法：溶剂A＝0.1％甲酸的水溶液；溶剂B＝0.1％甲酸的MeCN溶液。
HPLC方法2
在安捷伦HPLC上进行。色谱柱：Waters X-Select C18 2.5μm，4.6x30 mm，使用标准酸性(0.1％甲酸)4min方法，5-95％MeCN/水，在254nm处进行UV检测)。
HPLC方法3
在带有PDA检测器的Waters ACQUITY UPLC上执行，PDA检测器在210-400nm之间扫描。使用Waters ACQUITY QDa检测器以正(ES+)和负(ES-)模式在m/z 100-650之间扫描来获得质谱数据。使样品通过与Waters ACQUITY UPLC BEH C18 VanGuard预柱2.1x 5mm联接的Waters ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm 2.1x 50mm色谱柱。梯度：以5％B预平衡30s；然后运行如下方法：2分钟内5至95％溶剂B，95％B保持30s，6s内95至5％B，然后5％B保持54s。使柱保持在40℃。酸法：溶剂A＝0.1％甲酸的水溶液；溶剂B＝MeCN。碱法：溶剂A＝0.1％氢氧化铵的水溶液；溶剂B＝MeCN。
HPLC方法4
在安捷伦HPLC上进行。色谱柱：Waters X-Bridge C18 2.5μm，4.6x30 mm，使用标准碱性(0.1％碳酸氢铵)4min方法，5-95％MeCN/水，在254nm处进行UV检测)。
实施例1：2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤1-1：2-氯-4-(2,3,5,6-四氟苯氧基)嘧啶-5-甲酰胺。将2,3,5,6-四氟苯酚(2.42g，14.58mmol)添加到2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(3.11g，16.20mmol)和DIPEA(3.39mL，19.44mmol)的DMF(20mL)溶液中。将反应物在环境温度(以下称为RT)下搅拌。起始原料完全消耗后(1h后反应完成)，将反应物用水(30mL)和EtOAc(30mL)稀释；分层，将水层再次用EtOAc(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤、干燥(Na2SO4)并在减压下浓缩。无需进一步纯化。(5.21g，95％)。m/z(ES+)(M+H)+322；tR＝1.82min。HPLC方法2。
步骤1-2：2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-(2,3,5,6-四氟苯氧基)嘧啶-5-甲酰胺。将哌啶3-胺，2HCl(0.220g，1.271mmol)添加到2-氯-4-(2,3,5,6-四氟苯氧基)嘧啶-5-甲酰胺(0.389g，1.211mmol)的CH2Cl2(下文称为DCM，100mL)溶液中。将反应在室温搅拌1h，过滤，用DCM(100mL)洗涤，得到2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-(2,3,5,6-四氟苯氧基)嘧啶-5-甲酰胺(0.300g，61.1％)。m/z(ES+)(M+H)+386.2；tR＝1.06min。HPLC方法2。
步骤1-3：2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将3-(叔丁基)苯胺(0.058g，0.389mmol)装入微波容器中，该微波容器含有2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-(2,3,5,6-四氟苯氧基)嘧啶-5-甲酰胺(0.06g，0.156mmol)在二噁烷(1mL)和1MHCl(水溶液)(0.5mL)中的溶液。将反应混合物在微波(CEM，150℃，全W)中加热45分钟。将粗混合物加载到SCX柱上，用MeOH(4倍柱体积)洗涤，并用1％NH3的MeOH溶液(4倍柱体积)洗脱。将氨的MeOH层在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化((10％0.7M氨/MeOH)/DCM)，得到标题化合物。(3mg，5％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.54(s,1H),7.72(s,1H),7.41(d,J＝7.8Hz,1H),7.28(t,J＝7.9Hz,1H),7.14(dd,J＝7.8,2.0Hz,1H),4.62(dd,J＝12.6,3.9Hz,1H),4.53(d,J＝13.2Hz,1H),3.18-3.12(m,1H),2.96(dd,J＝12.7,9.4Hz,1H),2.85-2.78(m,1H),2.07-1.99(m,1H),1.84-1.77(m,1H),1.63-1.39(m,2H),1.36(s,9H)；m/z(ES+)(M+H)+369；tR＝2.01min。HPLC方法2。
实施例2：2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-二-叔丁基苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
通过与实施例1类似的方法，由2-((2-氨基乙基)(甲基)氨基)-4-(2,3,5,6-四氟苯氧基)嘧啶-5-甲酰胺制备(3mg，4％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.53(s,1H),7.50(d,J＝1.7Hz,2H),7.20(t,J＝1.7Hz,1H),4.66-4.51(m,2H),3.19-3.12(m,1H),2.97(dd,J＝12.7,9.3Hz,1H),2.86-2.78(m,1H),2.09-1.98(m,1H),1.84-1.78(m,1H),1.59-1.41(m,2H),1.36(s,18H)；m/z(ES+)(M+H)+425；tR＝2.47min。HPLC方法2。
实施例3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-二-叔丁基苯基)氨基)嘧啶-5-甲 酰胺
步骤3-1：2-氯-4-((3,5-二-叔丁基苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。
向2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(2mmol，384mg)的THF(10mL)溶液中加入3,5-二叔丁基苯胺(2.2mmol，452mg)，然后加入DIPEA(2.2mmol，385uL)，并将悬浮液在50℃下加热24h。加入饱和NH4Cl，将粗产物用EtOAc(3×)萃取。合并有机相，用盐水洗涤并在Na2SO4上干燥。过滤有机相，并在真空下蒸发溶剂。粗物质通过硅胶色谱法纯化(使用梯度DCM/THF)，得到标题化合物，为白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)11.39(s,1H),8.76(s,1H),8.42(s,1H),7.92(s,1H),7.48(d,J＝1.6Hz,2H),7.18(br t,J＝1.5Hz,1H),1.29(s,9H).m/z(ES+)(M+H)+361.2/363.3；tR＝3.27min。HPLC方法1。
步骤3-2：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((3,5-二-叔丁基苯基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。向2-氯-4-((3,5-二-叔丁基苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(0.5mmol)在THF(8mL)中的悬浮液中加入DIPEA(0.55mmol，100uL)，然后加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.5mmol，100mg)。将形成的悬浮液在室温搅拌60h。加入饱和NH4Cl，将粗产物用EtOAc(3×)萃取。合并有机相，用盐水洗涤并在Na2SO4上干燥。过滤有机相，并在真空下蒸发溶剂，得到标题化合物，其直接用于步骤3-3。m/z(ES+)(M+H)+525.3；tR＝3.22min。HPLC方法1。
步骤3-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-二-叔丁基苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((3,5-二-叔丁基苯基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯溶于DCM(1mL)中，并加入过量的HCl的二噁烷(4M，5mL)溶液。1h后，加入Et2O(过量)以沉淀出产物，为HCl盐。将固体离心并弃去上清液。将固体重悬在纯Et2O中，然后再次离心(2x)。将固体真空干燥，得到标题化合物的盐酸盐，为白色固体(0.032g，63％)。1HNMR(400MHz,MeOD)δ8.54(s,1H),7.50(d,J＝1.7Hz,2H),7.20(t,J＝1.7Hz,1H),4.67-4.54(m,2H),3.19-3.14(m,1H),3.00-2.96(m,1H),2.86-2.80(m,1H),2.08-1.99(m,1H),1.83-1.78(m,1H),1.63-1.41(m,2H),1.36(s,18H).m/z(ES+)(M+H)+425；tR＝1.81min。HPLC方法2。
实施例4-10通过与实施例3类似的方法制备。
实施例4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(2-氰基丙烷-2-基)苯基)氨基)嘧 啶-5-甲酰胺
(0.040g，73.3％)。1H NMR(400MHz,MeOD)8.56(s,1H),8.08(t,J＝2.0Hz,1H),7.47-7.36(m,2H),7.21(ddd,J＝7.4,2.0,1.3Hz,1H),4.67-4.60(m,1H),4.54(d,J＝13.2Hz,1H),3.19-3.09(m,1H),2.96(dd,J＝12.7,9.4Hz,1H),2.81-2.79(m,1H),2.03(brs,1H),1.84(br s,1H),1.77(s,6H),1.64-1.52(m,1H),1.49-1.36(m,1H)；m/z(ES+)(M+H)+380；tR＝1.66min。HPLC方法2。
实施例5：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(甲基磺酰基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲 酰胺
(5mg，45.1％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ9.08(s,1H),8.61(s,1H),7.67-7.55(m,2H),7.49(s,1H),4.78(s,1H),4.62(s,1H),3.16-3.10(m,4H),2.99-2.92(m,2H),2.09(brs,1H),1.89-1.86(m,1H),1.65-1.59(m,1H),1.53-1.44(m,1H)；m/z(ES+)(M+H)+391；tR＝1.30min。HPLC方法2。
实施例6：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((4-甲基-3-(哌啶-1-基磺酰基)苯基)氨 基)嘧啶-5-甲酰胺
(0.025g，19.2％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.99(s,1H),8.57(s,1H),7.39-7.22(m,2H),4.80(s,1H),4.63(d,J＝13.3Hz,1H),3.25-2.96(m,6H),2.87-2.83(m,2H),2.59(s,3H),2.07-2.03(m,1H),1.89-1.82(m,1H),1.65-1.52(m,6H),1.46-1.38(m,1H).；m/z(ES+)(M+H)+474；tR＝1.89min。HPLC方法2。
实施例7：(R)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-二-叔丁基苯基)氨基)嘧啶-5-甲 酰胺盐酸盐
步骤1：THF，DIPEA，50℃，24h；步骤2：THF，DIPEA，16h，RT；步骤3：HCl的二噁烷溶液(4M)，RT。m/z(ES+)(M+H)+425.3；tR＝2.44min。HPLC方法1。
实施例8：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-(叔丁基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5- 甲酰胺
步骤1：THF，DIPEA，12h，RT(48mg，43％)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.59(s,1H),8.32(d,J＝5.4Hz,1H),7.74(s,1H),7.49(s,1H),4.63(d,J＝11.6Hz,2H),4.50(d,J＝13.3Hz,1H),3.19(t,J＝10.9Hz,1H),3.08–2.95(m,1H),2.86(s,1H),2.06(d,J＝10.6Hz,1H),1.82(s,1H),1.67–1.43(m,3H),1.38(s,9H)；m/z(ES HRMS)C19H28N7O计算值370.2355，实测值[MH]+370.2354。
实施例9:(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-双(甲基磺酰基)苯基)氨基)嘧啶- 5-甲酰胺盐酸盐
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.19(s,1H),8.80(s,1H),8.60(d,J＝1.4Hz,2H),8.25(br s,3H),8.04(s,1H),7.60(br s,1H),3.61(br s,1H),4.23(d,J＝11.7Hz,1H),3.35(s,6H),3.20(br s,1H),2.09-2.01(m,1H),1.87-1.78(m,1H),1.75-1.64(m,1H),1.62-1.51(m,1H).m/z(ES+)(M+H)+469.3；tR＝1.96min。HPLC方法1。
实施例10：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2'-甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基) 嘧啶-5-甲酰胺
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.51(s,1H),7.90(s,1H),7.44–7.31(m,2H),7.28–7.16(m,4H),6.97(dt,J＝7.0,1.6Hz,1H),4.69–4.38(m,2H),3.07–2.86(m,1H),2.84–2.50(m,2H),2.24(s,3H),2.06–1.84(m,1H),1.80–1.55(m,1H),1.54–1.22(m,2H)。HRMS m/z[M+H]+C23H27N6O计算值403.2246，实测值403.2252。
实施例11：4-((3,5-二-叔丁基苯基)氨基)-2-((3S,5R)-3,5-二氨基哌啶-1-基) 嘧啶-5-甲酰胺二盐酸盐
使用Boc-顺式-3,5二氨基哌啶(根据D.Wall et al.Bioorg.&Med.Chem.Lett.17(2007)1206–1210制备)，通过与实施例3类似的方法制备。m/z(ES+)(M+H)+440.5；tR＝2.12min。HPLC方法1。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.58(s,1H),7.39-7.37(m,3H),3.58-3.42(m,2H),3.30-3.13(m,2H),2.67–2.57(m,2H),1.97-1.77(m,2H),1.36(s,18H)。
实施例12：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(2-氧代哌啶-1-基)苯基)氨基)嘧 啶-5-甲酰胺
将1-(3-氨基-苯基)-哌啶-2-酮(0.099g，0.52mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.100g，0.52mmol)和三乙胺(0.16mL，1.15mmol)溶解在无水二噁烷(10mL)和DMF(1mL)中。将混合物在50℃加热3h，然后冷却至室温。加入三乙胺(0.16mL，1.15mmol)和叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.104g，0.52mmol)，并将混合物加热至50℃再保持2h。加入EtOAc(40mL)，并依次用水(5×20mL)和盐水(20mL)洗涤该溶液。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，由两次置换得到粗产物，其不需要进一步纯化即可使用。将粗产物(0.054g，0.126mmol)溶解在二噁烷(5.4mL)中，然后逐滴添加4M HCl的二噁烷(1mL)溶液。将反应混合物在室温搅拌8h。加入己烷(20mL)，将所得固体过滤，并用另外的己烷(3×10mL)洗涤，得到标题化合物的盐酸盐，为白色固体(0.025g，11％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.00(brs,1H),8.74(s,1H),8.63–8.28(m,4H),7.90–7.55(m,2H),7.52–7.38(m,1H),7.33(d,J＝12.0Hz,1H),7.17–7.00(m,1H),3.68–3.58(m,2H),3.46–3.17(m,3H),2.48–2.37(m,2H),2.11–1.99(m,1H),1.93–1.79(m,5H),1.79–1.65(m,1H),1.63–1.49(m,1H),1.31–1.2(m,1H),0.89–0.79(m,1H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+410.0；tR＝1.67min。HPLC方法3(酸)。
实施例13：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(2-氧代吡咯烷-1-基)苯基)氨基) 嘧啶-5-甲酰胺
将1-(3-氨基苯基)吡咯烷-2-酮(0.100g，0.52mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.100g，0.52mmol)和三乙胺(0.16mL，1.15mmol)溶解在无水二噁烷(10mL)和DMF(1mL)中。将混合物在50℃加热2h，然后冷却至室温。加入EtOAc(40mL)，并依次用水(5×20mL)和盐水(20mL)洗涤该溶液。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，由一次置换得到粗产物(0.100g，58％)，其不需要进一步纯化即可用于下一步。将粗产物、2-氯-4-((3-(2-氧代吡咯烷-1-基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(80mg，0.24mmol)、叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.049g，0.24mmol)和三乙胺(0.04mL，0.29mmol)溶于无水DMF(5mL)中，并加热至50℃保持2h。使反应混合物冷却至室温，随后沉淀出白色固体。加入己烷(20mL)，并将悬浮液搅拌10分钟。将固体过滤并溶于Et2O(5mL)中，加入4M HCl的二噁烷(1mL)溶液，并将混合物在室温搅拌64h。将所得悬浮液过滤，将固体用己烷(10mL)洗涤并干燥，得到标题化合物的盐酸盐，为白色固体(0.040g，18％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.01(br s,1H),8.72(s,1H),8.57–8.08(m,4H),7.80–7.50(m,1H),7.47–7.35(m,1H),7.35–7.21(m,2H),4.50(app d,J＝16Hz,1H),4.34–3.95(m,2H),3.86(t,J＝8.0Hz,2H),3.55–3.46(m,1H),3.41(app t,J＝10.4Hz,1H),3.36–3.19(m,1H),2.53(t,J＝8.0Hz,2H),2.13–2.00(m,3H),1.90–1.79(m,1H),1.79–1.66(m,1H),1.64–1.50(m,1H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+396.0；tR＝1.64min。HPLC方法3(酸)。
实施例14：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(3-甲基-2-氧代咪唑烷-1-基)苯 基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
将1-(3-氨基苯基)-3-甲基咪唑烷-2-酮(0.100g，0.52mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.100g，0.52mmol)、三乙胺(0.16mL，1.15mmol)溶解在无水二噁烷(9mL)和DMF(2mL)中。将混合物在50℃加热2h，然后冷却至室温。加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.104g，0.52mmol)和三乙胺(0.16mL，1.15mmol)，并将反应混合物在50℃再加热1.5h。使反应混合物冷却至室温，随后沉淀出白色固体。将固体过滤，用MeOH(5mL)洗涤，干燥，得到粗产物，其无需进一步纯化即可使用(0.134g，50％)。将粗产物(0.113g，0.22mmol)溶解在Et2O(10mL)中，然后逐滴添加4M HCl的二噁烷(2.0mL)溶液。将所得混合物在室温搅拌过夜，并将悬浮液过滤，得到标题化合物的盐酸盐，为白色固体(0.098g，99％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.19(br s,1H),8.74(s,1H),8.67–8.37(m,3H),8.36–8.13(m,1H),7.41–7.29(m,1H),7.23–7.06(m,2H),4.40(app d,J＝11.6Hz,1H),4.15–4.05(m,1H),3.81(t,J＝8.0Hz,2H),3.74–3.62(m,1H),3.61–3.51(m,1H),3.47(t,J＝8.4Hz,2H),3.39–3.26(m,1H),2.78(s,3H),2.11–2.00(m,1H),1.93–1.72(m,2H),1.67–1.53(m,1H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+411.0；tR＝1.66min。HPLC方法3(酸)。
实施例15：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(2-氧代噁唑烷-3-基)苯基)氨基) 嘧啶-5-甲酰胺
将3-(3-氨基苯基)噁唑烷-2-酮(0.093g，0.52mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.100g，0.52mmol)、三乙胺(0.16mL，1.15mmol)溶解在无水二噁烷(9mL)和DMF(2mL)中。将混合物在50℃加热2h，然后冷却至室温。加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.104g，0.52mmol)和三乙胺(0.16mL，1.15mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。加入EtOAc(40mL)，并依次用水(5×20mL)和盐水(20mL)洗涤该溶液。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，由两次置换得到粗产物，其不需要进一步纯化即可使用。将粗产物溶解在Et2O(10mL)中，然后逐滴添加4M HCl的二噁烷(5.0mL)溶液。将悬浮液在室温搅拌4h，过滤并干燥，得到标题化合物的盐酸盐，为白色固体(0.195g，83％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.13(br s,1H),8.75(s,1H),8.54–8.29(m,3H),8.08(s,1H),7.50–7.37(m,1H),7.29(app t,J＝9.2Hz,1H),4.46(t,J＝11.2Hz,2H),4.48–4.38(m,1H),4.24–4.13(m,1H),4.09(t,J＝10.8Hz,2H),3.63–3.52(m,1H),3.45(app t,J＝13.2Hz,1H),3.36–3.20(m,1H),2.12–1.96(m,1H),1.92–1.67(m,2H),1.66–1.47(m,1H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+398.0；tR＝1.56min。HPLC方法3(酸)。
实施例16：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((6-甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-基)氨 基)嘧啶-5-甲酰胺
将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(81mg，0.42mmol)、6-甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-胺盐酸盐(100mg，0.42mmol)和三乙胺(0.17mL，0.92mmol)在1,4-二噁烷(8mL)中的混合物在50℃下搅拌5h。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(84mg，0.42mmol)和三乙胺(0.07mL，0.46mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。使所得混合物达到室温，在减压下浓缩，干式加载至柱中，并通过快速色谱法[己烷：EtOAc(3：7)]纯化，得到叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((6-甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯，为白色固体(100mg，46％)。将其悬浮在二噁烷∶Et2O(1∶1，4mL)的混合物中，并加入4N HCl的二噁烷(2mL)溶液。将悬浮液在室温搅拌过夜。加入Et2O(约4mL)，并将沉淀物减压过滤，用Et2O(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。分离出标题化合物的盐酸盐，为白色固体(80mg，99％)。1HNMR(400MHz,MeOD)δ8.52(s,1H),7.63-7.48(m,4H),7.41(app.t,J＝7.6Hz,2H),7.37-7.29(m,1H),7.19(d,J＝8.8Hz,1H),4.40-4.27(m,1H),4.11–4.00(m,1H),3.85(s,3H),3.78-3.67(m,1H),3.65-3.46(m,2H),2.25–2.15(m,1H),2.02-1.66(m,3H)；m/z(ES+)(M+H)+419.0；tR＝2.31min。HPLC方法3(碱)。
实施例17:(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-甲基-5-(吗啉-4-羰基)苯基)氨基) 嘧啶-5-甲酰胺
步骤17-1：(3-甲基-5-硝基苯基)(吗啉代)甲酮。将3-甲基-5-硝基苯甲酸(0.368g，2.03mmol)溶于亚硫酰氯(5.0mL，过量)中，并将混合物在氩气气氛下加热至回流2h。减压除去过量的亚硫酰氯，并将酰氯溶解在无水DCM(5.0mL)中。在0℃下，将酰氯溶液滴加到含有吗啉(0.20mL，2.29mmol)、三乙胺(0.31mL，2.22mmol)和无水DCM(5.0mL)的烧瓶中。除去冷却浴，并将反应混合物在室温搅拌3h。加入DCM(20mL)，有机溶液依次用水(2×20mL)、NH4Cl饱和溶液(20mL)和NaHCO3饱和溶液(20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，将其通过快速柱色谱法纯化(EtOAc)，得到标题化合物，为白色固体(0.415g，82％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.09(s,1H),8.04(s,1H),7.56(s,1H),3.94–3.29(m,8H),2.50(s,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ168.1,148.2,141.0,136.9,134.0,125.3,119.5,66.9,48.4(加宽),42.8(加宽),21.5。
步骤17-2：(3-氨基-5-甲基苯基)(吗啉代)甲酮。将铁粉(0.124g，2.22mmol)分批添加到EtOH(2.0mL)中，然后再加入浓HCl(水溶液)(0.04mL)。将混合物在65℃加热2h，然后冷却至50℃。逐滴添加25％NH4Cl(水溶液)溶液(0.64mL)，然后添加(3-甲基-5-硝基苯基)(吗啉代)甲酮(0.200g，0.80mmol)的EtOH(4.0mL)溶液。将混合物再加热至65℃保持4h，然后冷却至室温。使用MeOH(30mL)在减压下通过
Figure BDA0002776695470000721
垫过滤反应混合物。将滤液减压浓缩，将粗产物通过快速柱色谱法纯化(1：4己烷：EtOAc)，得到标题化合物，为无色半固体(0.086，49％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.55(s,1H),6.52(s,1H),6.48(s,1H),95–3.3(m,8H),2.25(s,3H)。LCMS:m/z(ES+)(M+H)+221.0；tR＝1.51min。HPLC方法3(酸)。
步骤17-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-甲基-5-(吗啉-4-羰基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。
将(3-氨基-5-甲基苯基)(吗啉代)甲酮(0.127g，0.58mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.111g，0.58mmol)、三乙胺(0.16mL，1.15mmol)溶于无水二噁烷(9mL)和DMF(2mL)中。将混合物在50℃加热1h，然后冷却至室温。加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.116g，0.58mmol)和三乙胺(0.16mL，1.15mmol)，并将反应混合物在50℃加热2h。加入EtOAc(3mL)，并用己烷(30mL)沉淀两次置换的粗产物。将得到的产物过滤并干燥，无需进一步纯化即可用于下一步(0.144g，46％)。将粗产物(0.098g，0.18mmol)溶解在二噁烷(10mL)中，并逐滴加入4M HCl的二噁烷(2.0mL)溶液。将反应混合物在室温搅拌过夜，并加入己烷(20mL)。将得到的固体过滤，用另外的己烷(3×5mL)洗涤，干燥，得到标题化合物的盐酸盐，为白色固体(0.087g，定量)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.96(br s,1H),8.77(s,1H),8.65–8.32(m,3H),8.00–7.65(m,1H),7.58(s,1H),7.47(s,1H),7.01(s,1H),4.46–4.29(m,1H),4.21–3.97(m,1H),3.73–3.17(m,11H),2.35(s,3H),2.12–1.97(m,1H),1.92–1.67(m,2H),1.66–1.49(m,1H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+440.0；tR＝1.66min。HPLC方法3(酸)。
实施例18：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-溴-5-(吗啉-4-羰基)苯基)氨基)嘧 啶-5-甲酰胺
步骤18-1:(S)-甲基3-溴-5-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)苯甲酸酯。向2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(1.11g，5.78mmol)和DIPEA(1.11mL，6.36mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的搅拌溶液中加入甲基3-氨基-5-溴苯甲酸酯(1.397g，6.07mmol)。将反应加热至80℃并搅拌2h，然后冷却至RT。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(1.216g，6.07mmol)和DIPEA(1.108mL，6.36mmol)，并将溶液再加热至80℃保持30分钟，然后再次冷却。将反应混合物用水(50mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(8-10％MeOH/DCM)，得到(S)-甲基3-溴-5-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)苯甲酸酯。(1.3g，40.9％)。m/z(M+H)+(ES+)549.1,551.1；tR＝2.45min。HPLC方法2。
步骤18-2:(S)-3-溴-5-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)苯甲酸。
向(S)-甲基3-溴-5-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)苯甲酸酯(0.648g，1.179mmol)在THF(10mL)和甲醇(1mL)中的搅拌溶液中加入氢氧化锂(0.282g，11.79mmol)的水(10mL)溶液，并将得到的混合物在室温搅拌18h。将反应物用1M HCl(50mL)稀释，并用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。将该材料直接用于下一步，假定为100％。m/z(M+H)+(ES+)535.0,536.9；tR＝2.08min。HPLC方法2。
步骤18-3:(S)-叔丁基(1-(4-((3-溴-5-(吗啉-4-羰基)苯基)氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。向(S)-3-溴-5-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)苯甲酸(0.631g，1.179mmol)和HATU(0.493g，1.296mmol)在DMF(10mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.412mL，2.357mmol)，然后加入吗啉(0.112mL，1.296mmol)。将反应在室温搅拌4h，然后用水(50mL)稀释。将混合物用乙酸乙酯(3×50mL)萃取，将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-10％MeOH/DCM)，得到(S)-叔丁基(1-(4-((3-溴-5-(吗啉-4-羰基)苯基)氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。(0.501g，69％)。m/z(M+H)+(ES+)604.0,606.0；tR＝1.94min。HPLC方法2。
步骤18-4:(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-溴-5-(吗啉-4-羰基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。向(S)-叔丁基(1-(4-((3-溴-5-(吗啉-4-羰基)苯基)氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(0.03g，0.050mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的搅拌溶液中加入氯化氢(4M的1,4-二噁烷溶液，0.248mL，0.993mmol)，并将溶液在室温搅拌20h。将反应混合物真空浓缩，并通过硅胶色谱法纯化(0-10％(0.7M氨/MeOH)/DCM)，得到(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-溴-5-(吗啉-4-羰基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。(7mg，25％)。1HNMR(400MHz,MeOD)δ8,59(s,1H),8.08(br s,1H),7.82(br s,1H),7.27(t,1H,J＝1.6Hz),4.69-4.62(m,1H),4.57-4.46(m,1H),3.90-3.40(br m,8H),3.18-3.06(m,1H),2.99-2.80(m,2H),2.11-2.02(m,1H),1.90-1.80(m,1H),1.66-1.53(m,1H),1.52-1.41(m,1H).m/z(M+H)+(ES+)504.1,506.2；tR＝1.59min。HPLC方法2。
实施例19：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2'-氯-5-(吗啉-4-羰基)-[1,1'-联苯 基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤19-1：(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((2'-氯-5-(吗啉-4-羰基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将(S)-叔丁基(1-(4-((3-溴-5-(吗啉-4-羰基)苯基)氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(0.054g，0.089mmol)、碳酸氢钠(0.023g，0.268mmol)和(2-氯苯基)硼酸(0.015g，0.098mmol)在1,4-二噁烷(1.5mL)和水(0.5mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫10分钟。加入PdCl2dppf(3.27mg，4.47μmol)，并再继续吹扫10分钟。然后将反应加热至90℃，在氮气下搅拌4h，然后冷却。将混合物用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-10％(0.7M氨/MeOH)/DCM)，得到(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((2'-氯-5-(吗啉-4-羰基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。(0.028g，48.8％)。m/z(M+H)+(ES+)636.0,638.1；tR＝2.12min。HPLC方法2。
步骤19-2：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2'-氯-5-(吗啉-4-羰基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与实施例18类似的方法制备(0.012mg，47.5％)。1HNMR(400MHz,MeOD)δ8.58(s,1H),8.01(br s,1H),7.78(br s,1H),7.56-7.52(m,1H),7.48-7.36(m,3H),7.16(t,1H,J＝1.5Hz),6.69-4.60(m,1H),4.58-4.41(m,1H),3.92-3.48(brm,8H),3.11-3.00(m,1H),2.94-2.77(m,2H),2.08-1.98(m,1H),1.82-1.70(m,1H),1.60-1.36(m,2H).m/z(M+H)+(ES+)536.2；tR＝1.42min。HPLC方法2。
实施例20：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2',6'-二甲基-5-(吗啉-4-羰基)-[1, 1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤20-1：(S)-甲基5-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-羧酸酯。通过与步骤19-1类似的方法，使用(2,6-二甲基苯基)硼酸(1.1当量)、90℃、1h制备。(0.139g，41.4％)。m/z(M+H)+(ES+)575.1；tR＝2.69min。HPLC方法2。
步骤20-2：(S)-5-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-羧酸。向(S)-甲基5-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-羧酸酯(0.139g，0.24mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中加入氢氧化钠(0.097g，2.42mmol)的水(5mL)溶液。加入甲醇(1mL)，并将溶液在室温搅拌16h。通过添加1M磷酸至pH4-5来淬灭反应混合物，然后用水(20mL)稀释。混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到(S)-5-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)-2',6'-二甲基-[1,1'-联苯基]-3-羧酸。(0.125g，89％)。m/z(M+H)+(ES+)561.3；tR＝2.31min。HPLC方法2。
步骤20-3：(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((2',6'-二甲基-5-(吗啉-4-羰基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。通过与步骤18-3类似的方法制备。(3h，RT)。(0.11g，79％)。m/z(M+H)+(ES+)630.3；tR＝2.24min。HPLC方法2。
步骤20-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2',6'-二甲基-5-(吗啉-4-羰基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与步骤18-4类似的方法制备。(18h，RT)。(0.03g，31.4％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.58(s,1H),7.91(br s,1H),7.65(s,1H),7.21-7.11(m,3H),6.88(t,1H,J＝1.5Hz),4.64-4.56(m,1H),4.56-4.40(m,1H),4.90-3.45(m,8H),3.04-2.94(m,1H),2.90-2.68(m,2H),2.09(d,6H,J＝2.3Hz),2.05-1.96(m,1H),1.78-1.65(m,1H),1.56-1.29(m,2H).m/z(M+H)+(ES+)530.3；tR＝1.45min。HPLC方法2。
实施例21：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((5-(吗啉-4-羰基)-[1,1'-联苯基]-3- 基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤21-1：5-硝基-[1,1'-联苯基]-3-羧酸。将溴苯(1.669mL，15.89mmol)、(3-(甲氧基羰基)-5-硝基苯基)硼酸(3.25g，14.45mmol)和碳酸氢钠(3.64g，43.3mmol)在1,4-二噁烷(100mL)和水(30mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫10分钟。然后加入PdCl2dppf(0.521g，0.722mmol)，并再继续吹扫10分钟。将反应加热至100℃，并在氮气下搅拌6h。然后使反应冷却，用1M HCl(100mL)稀释，并用乙酸乙酯(2×100mL)和DCM(100mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-50％EtOAc/异己烷)，得到5-硝基-[1,1'-联苯基]-3-羧酸。(1.755g，49％)。m/z(M+H)+(ES+)244.0；tR＝2.38min。HPLC方法2。
步骤21-2：吗啉代(5-硝基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲酮。
向5-硝基-[1,1'-联苯基]-3-羧酸(0.825g，3.39mmol)和HATU(1.419g，3.73mmol)在DMF(20mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(1.185mL，6.78mmol)，然后加入吗啉(0.322mL，3.73mmol)。将反应在室温搅拌1h。将混合物用水(50mL)稀释，并用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有几层用1M HCl(200mL)、饱和碳酸氢钠(200mL)和盐水(2x 200mL)洗涤。然后将有机相用硫酸镁干燥，过滤并在真空下浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-50％EtOAc/异己烷)，得到吗啉代(5-硝基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲酮。(0.863g，81％)。m/z(M+H)+(ES+)313.1；tR＝2.08min。HPLC方法2。
步骤21-3：(5-氨基-[1,1'-联苯基]-3-基)(吗啉代)甲酮。将氯化铵(0.059g，1.105mmol)、铁(1.543g，27.6mmol)和吗啉代(5-硝基-[1,1'-联苯基]-3-基)甲酮(0.863g，2.76mmol)在EtOH(40mL)、水(5mL)和THF(5mL)中的搅拌溶液/悬浮液加热至回流并搅拌1h。使反应冷却，并通过
Figure BDA0002776695470000771
垫过滤，用乙醇(2×50mL)冲洗。将滤液真空浓缩，得到(5-氨基-[1,1'-联苯基]-3-基)(吗啉代)甲酮。(0.607g，78％)。m/z(M+H)+(ES+)283.1；tR＝1.58min。HPLC方法2。
步骤21-4：(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((5-(吗啉-4-羰基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。向DIPEA(0.143mL，0.816mmol)和(5-氨基-[1,1'-联苯基]-3-基)(吗啉代)甲酮(0.22g，0.779mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的搅拌溶液中加入2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.142g，0.74mmol)，并将反应加热至50℃并搅拌3h。使反应混合物冷却至室温，然后添加(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.074g，0.37mmol)和DIPEA(0.143mL，0.82mmol)。将反应再加热至50℃保持30min，冷却并在真空下浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-10％(0.7M氨/MeOH)/DCM)，得到(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((5-(吗啉-4-羰基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。(0.099g，21.3％)。m/z(M+H)+(ES+)602.3；tR＝2.13min。HPLC方法2。
步骤21-5：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((5-(吗啉-4-羰基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。向(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((5-(吗啉-4-羰基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(0.099g，0.17mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的搅拌溶液中加入HCl(4M的1,4-二噁烷溶液，0.823mL，3.29mmol)，然后将反应在室温搅拌20h。将反应混合物在真空下浓缩，溶解于甲醇(1mL)中，并加载到SCX(约1g)上。将其用甲醇(3×20mL)洗脱，然后用0.7M氨的甲醇溶液(3×20mL)洗脱。将合并的氨馏分在真空下浓缩，得到(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((5-(吗啉-4-羰基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。(0.04g，43.6％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6,90℃)δ11.62(s,1H),8.04-8.02(m,1H),7.72-7.66(m,3H),7.51-7.46(m,2H),7.42-7.38(m,1H),7.34(br s,1H),7.30-7.28(m,1H),4.50-4.44(m,1H),4.43-4.36(m,1H),3.66-3.60(m,4H),3.59-3.52(m,4H),3.11-3.04(m,1H),2.83(dd,1H,J＝12.6,9.3Hz),2.74-2.67(m,1H),1.93-1.87(m,1H),1.76-1.69(m,1H),1.56-1.40(m,2H),1.36-1.20(m,2H).m/z(M+H)+(ES+)502.3；tR＝1.78min。HPLC方法2。
实施例22：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(吡咯烷-1-羰基)苯基)氨基)嘧啶- 5-甲酰胺
步骤22-1：甲基(S)-3-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)苯甲酸酯。使用3-氨基苯甲酸甲酯，通过与步骤3-1类似的方法合成标题中间体。白色固体(2.1g，88.9％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.78(s,1H),8.76(s,1H),8.65(s,1H),7.99(s,1H),7.61(d,J＝7.1Hz,1H),7.48–7.31(m,2H),6.95(d,J＝7.8Hz,1H),4.51(dd,J＝39.0,12.5Hz,2H),3.86(s,3H),3.21–2.71(m,1H),1.81–1.79(m,2H),1.39(s,9H),1.29–1.15(m,2H).m/z(ES+)(M+H)+471。
步骤22-2：(S)-3-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)苯甲酸。向甲基(S)-3-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)苯甲酸酯(0.5g，1.06mmol)在THF(6.2mL)、EtOH(6.2mL)和H2O(1mL)中的溶液中加入1N NaOH水溶液(2eq)。将反应混合物在75℃加热6h。然后加入1NHCl，并将反应混合物减压浓缩。将残余物在水中研磨，并将所得沉淀物通过过滤回收，得到纯产物，为白色固体(0.28g，58％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.93(s,1H),8.66(s,1H),8.21(s,1H),7.65(d,J＝7.6Hz,1H),7.47(t,J＝7.9Hz,1H),6.98(s,1H),4.63–4.02(m,2H),3.52–3.26(m,1H),3.26–2.81(m,2H),1.94–1.67(m,2H),1.59(s,J＝49.1Hz,2H),1.46–1.21(m,9H).m/z(ES+)(M+H)+457。
步骤22-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(吡咯烷-1-羰基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。向(S)-3-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)苯甲酸(0.15g，0.328mmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入HBTU(0.136g)、DIPEA(0.17mL)和吡咯烷(0.03mL)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将残余物用DCM(5mL)稀释，并用TFA(1.8mL)处理。将反应混合物在室温搅拌2.5h。减压除去溶剂，并将残余物通过梯度RP-HPLC(CH3CN/H2O)纯化，得到标题化合物，为白色固体(30mg，22％)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.56(s,1H),8.34(s,1H),7.48–7.32(m,2H),7.25(d,J＝7.0Hz,2H),4.74–4.68(m,1H),4.38–4.32(m,1H),3.61–3.51(m,4H),3.40–3.33(m,2H)2.17–2.12(m,1H),2.01–1.79(m,5H),1.72–1.59(m,2H).HRMS m/z[M+H]+C21H28N7O2计算值410.2304，实测值410.2303。
实施例23：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(二甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧 啶-5-甲酰胺
通过与实施例22类似的方法制备。(0.030g，32％)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.55(s,1H),8.15(s,1H),7.43–7.31(m,2H),7.17(d,J＝7.1Hz,1H),4.68–4.64(m,1H),4.24–4.19(m,1H),3.40–4.32(m,3H),3.07(d,J＝15.5Hz,6H),2.16–2.10(m,1H),1.89–1.84(m,1H),1.70–1.62(m,2H)。HRMS m/z[M+H]+C19H26N7O2计算值384.2148，实测值384.2147。
实施例24：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(吗啉-4-羰基)苯基)氨基)嘧啶-5- 甲酰胺通过与实施例22类似的方法制备，并通过梯度快速色谱法(MeOH/DCM；1:9,2:8)分离。白色固体(80mg，35％)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.60(s,1H),8.18(s,1H),7.44–7.42(m,2H),7.15–7.12(m,1H),4.69–4.65(m,1H),4.36–4.31(m,1H),3.84–3.82(m,3H),3.77(bs,2H),3.68–3.62(m,2H),3.54–3.52(m,1H),3.14–3.11(m,3H),2.20–2.10(m,1H),1.89–1.81(m,1H),1.74–1.62(m,2H).HRMS m/z[M+H]+C21H28N7O3计算值426.2254，实测值426.2253。
实施例25：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨 基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
通过与实施例22类似的方法制备，并通过梯度RP-HPLC(CH3CN/H2O)分离。白色固体(25mg，17％)1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.57(s,1H),8.09(s,1H),7.43–7.38(m,2H),7.22–7.16(m,1H),4.75–4.71(m,1H),4.39–4.36(m,1H),3.88(br s,2H),3.27–3.17(m,3H),3.11(s,3H),2.79(s,5H),2.68(s,1H),2.37(s,2H),2.28(s,1H),2.21–2.18(m,1H),1.89–1.82(m,1H),1.78–1.71(m,1H),1.67–1.60(m,1H).HRMS m/z[M+H]+C22H33N8O2计算值441.2726，实测值441.2727。
实施例26：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(哌啶-1-羰基)苯基)氨基)嘧啶-5- 甲酰胺
通过与实施例22类似的方法制备，并通过用SCX柱过滤，用MeOH洗涤(3倍柱体积)，并用2M NH3的MeOH溶液(3倍柱体积)洗脱而分离。白色固体(60mg，32％)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.46(s,1H),8.01(s,1H),7.35–7.28(m,2H),6.98–6.95(m,1H),4.60–4.57(m,1H),4.40–4.36(m,1H),3.62(br s,2H),3.34(br s,1H),3.00–2.96(m,2H),2.89–2.82(m,2H),1.99–1.96(m,1H),1.70–1.59(m,6H),1.49–1.42(m,3H).HRMS m/z[M+H]+C22H30N7O2计算值424.2461，实测值424.2462。
实施例27:(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(二甲基氨基甲酰基) 苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤27-1：3-(叔丁基)-5-(甲氧基羰基)苯甲酸。将5-(叔丁基)间苯二甲酸(6g，27mmol)的THF/MeOH(4：1，180mL)溶液在回流下搅拌4h。除去溶剂，粗固体通过快速柱色谱法纯化(梯度：己烷/二乙醚＝(4∶1)至(2∶1))，得到期望的产物(2.5g，40％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.61(t,J＝1.6Hz,1H),8.35(d,J＝1.5Hz,2H),3.99(s,3H),1.42(s,9H)；m/z(ES)C13H16O4[MH]+237.1。
步骤27-2：甲基3-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(叔丁基)苯甲酸酯。将3-(叔丁基)-5-(甲氧基羰基)苯甲酸(472mg，2mmol)、DPPA(520μL，2.5mmol)和DIPEA(440μL，2.5mmol)在tBuOH/二噁烷(3：2，10mL)中的溶液在80℃搅拌4h。起始原料完全消耗后，使混合物达到室温，将混合物用EtOAc稀释并依次用NaHCO3(1×15mL)和盐水(1×15mL)洗涤，用MgSO4干燥，并浓缩。粗产物通过快速柱色谱法纯化(梯度：己烷/乙酸乙酯＝(3∶1)至(1∶1))，得到所需产物，为澄清油状物(530mg，86％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.82(s,1H),7.66(t,J＝1.6Hz,1H),7.61(s,1H),3.80(s,3H),1.23(s,9H)；m/z(ES)C17H25NO4[MNa]+308.1。
步骤27-3：甲基3-氨基-5-(叔丁基)苯甲酸酯。向甲基3-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-(叔丁基)苯甲酸酯(530mg，1.72mmol)的DCM(10mL)溶液中一次性加入TFA(2mL)，并将混合物在室温搅拌2h。然后将反应混合物用NaHCO3(2×15mL)和盐水(1×15mL)洗涤，用MgSO4干燥，并浓缩。粗产物通过快速柱色谱法纯化(梯度：己烷/乙酸乙酯＝(3∶1)至(1∶1))，得到所需产物，为澄清油状物(268mg，75％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.50(t,J＝1.6Hz,1H),7.21(dd,J＝2.3,1.4Hz,1H),6.94–6.90(m,1H),3.91(s,3H),3.71(s,2H),1.33(s,9H)；m/z(ES)C12H17NO2[MH]+208.1。
步骤27-4：甲基(S)-3-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)-5-(叔丁基)苯甲酸酯。通过与实施例3类似的方法制备。(步骤3：THF，DIPEA，12h，室温)，使用甲基3-氨基-5-(叔丁基)苯甲酸酯(如实施例27中所述制备)。白色固体(686mg，72％)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.55(s,1H),8.41(s,1H),7.77(d,J＝1.5Hz,2H),4.57(d,J＝10.5Hz,1H),4.46(d,J＝11.4Hz,1H),3.93(s,3H),3.55(d,J＝8.8Hz,1H),3.30–3.09(m,2H),2.05–1.96(m,1H),1.91–1.77(m,1H),1.65–1.50(m,2H),1.42(s,9H),1.38(s,9H)；m/z(ES)C27H38N6O5[MH]+527.3。
步骤27-5：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(二甲基氨基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与实施例22类似的方法由甲基(S)-3-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)-5-(叔丁基)苯甲酸酯制备，并通过反相HPLC(H2O：MeOH梯度)分离。白色固体(20.7mg，24％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.48(s,1H),7.83(s,1H),7.39(s,1H),7.09(t,J＝1.5Hz,1H),4.59(d,J＝10.7Hz,1H),4.31(d,J＝12.7Hz,1H),3.22–3.08(m,2H),3.04(s,3H),2.97(s,2H),2.03(d,J＝9.3Hz,1H),1.74(dd,J＝9.0,4.1Hz,1H),1.61–1.42(m,2H),1.27(s,9H)；m/z(ES HRMS)C23H34N7O2计算值440.2774，实测值[MH]+440.2772。
实施例28：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(吡咯烷-1-羰基)苯 基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
通过与实施例22类似的方法由甲基(S)-3-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)-5-(叔丁基)苯甲酸酯制备，并通过反相HPLC(H2O：MeOH梯度)分离。白色固体(18.2mg，20％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.48(s,1H),7.98(s,1H),7.37(s,1H),7.21(s,1H),4.62(s,1H),4.31(d,J＝13.0Hz,1H),3.53(t,J＝6.9Hz,2H),3.47–3.40(m,2H),3.22–3.13(m,2H),3.12–3.04(m,1H),2.04(d,J＝9.6Hz,1H),1.97–1.88(m,2H),1.83(dt,J＝15.3,4.6Hz,2H),1.75(dd,J＝9.3,4.1Hz,1H),1.63–1.47(m,2H),1.28(s,9H)；m/z(ES HRMS)C25H36N7O2计算值466.2930，实测值[MH]+466.2926
实施例29：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(吗啉-4-羰基)苯基) 氨基)嘧啶-5-甲酰胺
通过与实施例22类似的方法由甲基(S)-3-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)-5-(叔丁基)苯甲酸酯制备，并通过反相HPLC(H2O：MeOH梯度)分离。白色固体(15.4mg，17％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.49(s,1H),7.81(s,1H),7.44(s,1H),7.07(t,J＝1.6Hz,1H),4.58(d,J＝10.8Hz,1H),4.30(d,J＝12.7Hz,1H),3.69(s,4H),3.55(s,2H),3.43(s,2H),3.21–3.11(m,2H),3.11–3.00(m,1H),2.04(d,J＝9.0Hz,1H),1.80–1.69(m,1H),1.62–1.49(m,2H),1.27(s,9H)；m/z(ES HRMS)C25H36N7O3计算值482.2880，实测值[MH]+482.2876
实施例30：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(3,3-二甲基吗啉-4-羰基)苯基)氨 基)嘧啶-5-甲酰胺
通过与实施例22类似的方法制备，并通过快速色谱法(MeOH/DCM 1：99)分离。白色固体(65g，28％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.53(s,1H),8.17(s,1H),7.45–7.36(m,2H),7.08(d,J＝7.2Hz,1H),4.70–4.67(m,1H),4.54–4.50(m,1H),3.74–372(m,2H),3.49(s,2H),3.43–3.42(m,2H),3.07–3.01(m,1H),2.87–2.79(m,2H),2.04–2.01(m,1H),1.83–1.79(m,1H),1.51(s,7H),1.45–1.35(m,1H).HRMS m/z[M+H]+C23H32N7O3计算值454.2567，实测值458.2568。
实施例31：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(哌啶-1-羰基)-5-(三氟甲基)苯 基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤31-1：甲基3-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酸酯。使用3-氨基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯，通过与实施例3类似的方法(步骤1：THF，DIPEA，12h，RT)合成标题中间体。白色固体(0.79g，定量)。1HNMR(300MHz,MeOD)δ8.58(s,2H),8.30(s,1H),7.86(s,1H),6.71(d,J＝7.8Hz,1H),4.54(d,J＝12.2Hz,1H),4.40(d,J＝12.9Hz,1H),3.96(s,3H),3.62–3.45(m,1H),3.24–3.10(m,2H),2.07–1.90(m,1H),1.90–1.74(m,1H),1.62–1.50(m,2H),1.41(s,9H).m/z(ES)[M+H]+539.4。
步骤32-2：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(哌啶-1-羰基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与实施例22类似的方法由甲基3-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酸酯制备，并通过快速色谱法(MeOH/DCM 2：8)分离。无色油状物(50mg，32％)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.58(s,1H),8.19(s,1H),7.94(s,1H),7.32(s,1H),4.64-4.61(m,1H),4.51-4.47(m,1H),3.72(bs,2H),3.40(bs,2H),3.11-3.04(m,1H),2.88-2.80(m,2H),2.04(bs,1H),1.83–1.39(m,9H).HRMS m/z[M+H]+C23H29F3N7O2计算值492.2335，实测值492.2332。
实施例32：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(3,3-二甲基吗啉-4-羰基)-5-(三 氟甲基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤32-1：甲基3-((5-氨基甲酰基-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酸酯。向2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.662g)和乙基3-氨基-5-(三氟甲基)苯甲酸酯(0.76g)的溶液中加入DIPEA(0.7mL，1.25eq)。将反应混合物在室温搅拌16h。减压蒸发溶剂，并将残余物溶于乙腈中，并用Et2O沉淀。通过过滤回收纯产物。白色固体(0.557g，43％)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.76(s,1H),8.47(s,2H),8.02(s,1H),3.98(s,3H)。
步骤32-2：甲基3-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酸酯。向甲基3-((5-氨基甲酰基-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酸酯(0.557g，1.47mmol)的DCM(6mL)溶液中加入DIPEA(0.26mL)和叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.3g)。将反应混合物在室温搅拌72h。减压蒸发溶剂，将残余物在Et2O中研磨，并将所得沉淀物通过过滤回收，得到纯产物，为白色固体(0.79g，定量)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.58(s,2H),8.30(s,1H),7.86(s,1H),6.71(d,J＝7.8Hz,1H),4.54(d,J＝12.2Hz,1H),4.40(d,J＝12.9Hz,1H),3.96(s,3H),3.62–3.45(m,1H),3.24–3.10(m,2H),2.07–1.90(m,1H),1.90–1.74(m,1H),1.62–1.50(m,2H),1.41(s,9H)。
步骤32-3:3-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酸。向甲基3-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酸酯(0.79g，1.47mmol)在THF(8.5mL)、EtOH(8.5mL)和H2O(1.38mL)的溶液中加入1N NaOH水溶液(2.9mL)。将反应混合物在75℃加热6h。然后加入1N HCl，并将反应混合物减压浓缩。将残余物在水中研磨，并将所得沉淀物通过过滤回收，得到纯产物，为白色固体(0.587g，75.4％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.51(s,1H),12.00(s,1H),8.69(s,1H),8.44(s,1H),8.04(s,1H),7.79(s,1H),7.46(s,1H),6.93(s,1H),4.66–4.25(m,2H),3.18–2.83(m,2H),1.79(d,J＝31.3Hz,2H),1.48–1.11(m,12H)。
步骤32-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(3,3-二甲基吗啉-4-羰基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。向3-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酸(115mg，0.355mmol)的DCM(2mL)溶液中加入HBTU(0.390mmol)、DIPEA(0.390mmol)和3,3-二甲基吗啉(0.390mmol)。将反应混合物在室温搅拌72h，然后加入TFA(2.5mL)。将反应混合物在室温搅拌2.5h。减压除去溶剂。将残余物用SCX柱过滤，用MeOH(3倍柱体积)洗涤，并用2M NH3的MeOH溶液(3倍柱体积)洗脱并浓缩。残余物用Et2O洗涤以除去DIPEA的残余物。白色固体(20mg，10％)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.58(s,1H),8.15–7.09(m,2H),7.33(s,1H),4.70–4.50(m,1H),4.43–4.17(m,1H),3.84–3.61(m,2H),3.49(s,2H),3.37(t,J＝5.0Hz,2H),3.14–2.92(m,3H),2.03-1.97(m,1H),1.86–1.77(m,1H),1.57–1.55(m,1H),1.50(s,6H),1.15(t,J＝7.0Hz,1H).HRMS m/z[M+H]+C24H31F3N7O3计算值522.2440，实测值522.2437。
实施例33：2-((S)-3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-((3S,5R)-3,5-二甲基吗啉-4-羰 基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺盐酸盐。
步骤33-1：叔丁基((S)-1-(5-氨基甲酰基-4-((3-((3S,5R)-3,5-二甲基吗啉-4-羰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。向(S)-3-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)苯甲酸(0.09g，0.197mmol)和DIPEA(0.069mL，0.394mmol)的搅拌溶液中加入2-(3H-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基异脲六氟磷酸盐(V)(0.079g，0.207mmol)，然后加入(3R,5S)-3,5-二甲基吗啉(0.024g，0.207mmol)。将反应在室温搅拌18h，然后用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(2×20mL)和DCM(1×20mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-5％(0.7M氨/MeOH)/DCM)，得到叔丁基((S)-1-(5-氨基甲酰基-4-((3-((3S,5R)-3,5-二甲基吗啉-4-羰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。(0.038g，33.8％)。m/z(M+H)+(ES+)554.3；tR＝1.84min。HPLC方法2。
步骤33-2：2-((S)-3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-((3S,5R)-3,5-二甲基吗啉-4-羰基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺盐酸盐。向叔丁基((S)-1-(5-氨基甲酰基-4-((3-((3S,5R)-3,5-二甲基吗啉-4-羰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(0.038g，0.069mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的搅拌溶液中加入氯化氢(0.343mL，1.373mmol)(4M的1,4-二噁烷溶液)，并将反应在室温搅拌16h。将反应混合物真空浓缩，得到标题化合物的盐酸盐。(0.028g，79％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.53(s,1H),7.94,(s,1H),7.50(t,1H,J＝7.8Hz),7.46-7.39(m,1H),7.28(d,1H,J＝7.4Hz),4.68-4.52(br m,1H),4.32-3.94(m,3H),3.77-3.52(m,6H),3.50-3.35(br m,3H),2.24-2.12(br m,1H),2.02-1.90(br m,1H),1.84-1.68(br m,2H),1.41-1.30(m,8H)；m/z(M+H)+(ES+)454.1；tR＝1.44min。HPLC方法4
实施例34：2-((S)-3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-((R)-八氢吡咯[1,2-a]吡嗪-2-羰 基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
通过与实施例33类似的方法制备。步骤2纯化：将产物溶于甲醇(1mL)中，并加载到SCX柱上，用MeOH(3倍柱体积)洗涤，并用1％NH3的MeOH溶液(3倍柱体积)洗脱。将氨馏分在减压下浓缩。产物通过硅胶色谱法(0-10％0.7M氨/MeOH)/DCM)进一步纯化。(0.054g，48％)。1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.56(s,1H),8.16(br s,1H),7.55-7.46(m,1H),7.46.7.41(m,1H),7.12-7.07(m,1H),4.82-4.62(m,2H),4.53(br d,1H,J＝12.3Hz),3.94-3.74(m,1H),3.32-2.94(m,5H),2.92-2.77(m,2H),2.33-2.14(m,2H),2.12-1.95(m,2H),1.92-1.72(m,4H),1.62-1.25(m,3H)；m/z(M+H)+(ES+)454.1；tR＝1.44min。HPLC方法4。
实施例35：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(5-甲氧基异吲哚啉-2-羰基)苯基) 氨基)嘧啶-5-甲酰胺
通过与实施例33类似的方法制备。步骤2纯化：产物通过硅胶色谱法纯化(0-10％0.7M氨/MeOH)/DCM)。(0.041g，39.8％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,100℃)δ11.47(s,1H),8.62(s,1H),8.10-8.07(m,1H),7.59-7.54(m,1H),7.43(t,1H,J＝7.7Hz),7.29-7.18(m,4H),6.94-6.89(br m,1H),6.86(dd,1H,J＝8.4,2.4Hz),4.80(s,2H),4.75(s,2H),4.47-4.41(m,1H),4.39-4.31(m,1H),3.77(s,3H),3.09-3.00(m,1H),2.81(dd,1H,J＝12.4,9.2Hz),2.74-2.65(m,1H),1.90-1.81(m,1H),1.80-1.62(m,3H),1.46-1.34(m,1H),1.32-1.20(m,1H).m/z(M+H)+(ES+)488.1；tR＝1.63min。HPLC方法4。
实施例36：2-((S)-3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-((R)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-羰 基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺盐酸盐
通过与实施例33类似的方法制备，得到盐酸盐。(0.029g，59.0％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6,90℃)δ11.60(s,1H),8.70(s,1H),8.25(br s,3H),7.89-7.85(m,1H),7.64-7.59(m,1H),7.47-7.41(m,1H),7.20-7.16(m,1H),4.60-4.50(m,1H),4.29-4.21(brm,1H),4.20-4.15(m,1H),3.56-3.31(m,6H),3.30-3.18(br m,4H),2.13-2.05(m,1H),2.04-1.97(m,1H),1.96-1.70(m,5H),1.61-1.50(m,1H).m/z(M+H)+(ES+)454.1；tR＝1.48min。HPLC方法4。
实施例37：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(3-(2-羟基丙烷-2-基)氮杂环丁 烷-1-羰基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺盐酸盐
通过与实施例33类似的方法制备，得到盐酸盐。(0.012g，30％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.63(br s,1H),8.57(s,1H),7.55-7.48(m,2H),7.46-7.38(br m,1H),4.85-4.70(br m,2H),4.51-4.29(m,2H),4.20-4.05(m,3H),3.59-3.45(m,3H),2.81-2.72(m,1H),2.31-2.20(br m,1H),2.08-1.97(br m,1H),1.90-1.76(br m,2H),1.20-1.13(m,6H).m/z(M+H)+(ES+)454.1；tR＝1.30min。HPLC方法4。
实施例38：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(4-甲基-3-氧代哌嗪-1-羰基)苯 基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺盐酸盐
通过与实施例33类似的方法制备，得到盐酸盐。(0.058g，88％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6,90℃)δ11.60(s,1H),8.70(s,1H),8.21(br s,3H),7.82-7.80(m,1H),7.69-7.65(m,1H),7.47(t,1H,J＝7.8Hz),7.16-7.12(m,1H),4.58-4.52(m,1H),4.23-4.17(m,1H),4.09(s,2H),3.77-3.69(m,2H),3.56-3.49(m 1H),3.46-3.41(m,1H),3.39(t,2H,J＝5.5Hz),3.35-3.27(m,1H),3.23(br s,1H),2.89(s,3H),2.12-2.04(m,1H),1.86-1.79(m,1H),1.78-1.69(m,1H),1.60-1.49(m,1H).m/z(M+H)+(ES+)453.1；tR＝1.19min。HPLC方法4。
实施例39：2-((S)-3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-((2R,6S)-2,6-二甲基吗啉-4-羰 基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
通过与实施例33类似的方法制备。步骤2纯化：产物通过硅胶色谱法纯化(0-10％0.7M氨/MeOH)/DCM)。(0.036g，54％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6,100℃)δ11.46(s,1H),8.62(s,1H),7.89(t,1H,J＝1.9Hz),7.55-7.51(m,1H),7.39(t,1H,J＝7.8Hz),7.25(br s,2H),7.05-7.01(m,1H),4.48-4.41(m,1H),4.39-4.32(m,1H),4.00-3.86(m,2H),3.60-3.50(m,2H),3.12-3.04(m,1H),2.84(dd,1H,J＝12.6,9.2Hz),2.77-2.69(m,1H),2.69-2.60(m,2H),1.96-1.86(m,1H),1.78-1.62(m,3H),1.50-1.38(m,1H),1.37-1.26(m,1H),1.09(d,6H,J＝6.2Hz).m/z(M+H)+(ES+)454.1；tR＝1.42min。HPLC方法4。
实施例40：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(4-(噻唑-2-基)哌嗪-1-羰基)苯 基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺盐酸盐
通过与实施例33类似的方法制备，得到盐酸盐。(0.026g，92％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6,90℃)δ11.65(s,1H),8.71(s,1H),8.28(br s,3H),7.82-7.78(m,1H),7.71-7.65(m,1H),7.68(d,1H,J＝7.5Hz),7.52-7.46(m,1H),7.23(d,1H,J＝3.8Hz),7.16(d,1H,J＝7.5Hz),6.90(d,1H,J＝3.8Hz),4.58-4.50(m,1H),4.24-4.16(m,1H),3.74-3.63(m,4H),3.60-3.53(m,4H),3.50-3.44(m,1H),3.38-3.31(m,1H),3.29-3.19(m,1H),2.12-2.04(m,1H),1.87-1.70(m,2H),1.61-1.51(m,1H).m/z(M+H)+(ES+)508.2；tR＝1.09min。HPLC方法2。
实施例41：2-((S)-3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-((R)-3-苯基哌啶-1-羰基)苯基)氨 基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与实施例33类似的方法制备。产物通过硅胶色谱法纯化(0-10％0.7M氨/MeOH)/DCM)。(0.011g，16.73％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.57(s,1H),8.17(br s,1H),7.52-7.10(m,8H),4.75-4.63(m,2H),4.60-4.46(m,1H),3.92-3.76(m,1H),3.25-3.03(m,2H),3.00-2.73(m,4H),2.12-1.38(m,8H).m/z(M+H)+(ES+)500.1；tR＝1.45min。HPLC方法2。
实施例42：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(二甲基氨基甲酰基)-5-(三氟甲 基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤42-1：3-氨基-N,N-二甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺。将盐酸二甲胺(0.239g，2.92mmol)添加到HATU(0.667g，1.75mmol)、三乙胺(0.612mL，4.39mmol)和3-氨基-5-(三氟甲基)苯甲酸(0.300g，1.46mmol)的DMF(5mL)溶液中。将反应在室温搅拌4h。用水(10mL)淬灭反应，并用EtOAc(2×20mL)萃取水层。将合并的有机层干燥(Na2SO4)并减压浓缩。残余物通过硅胶色谱法纯化(EtOAc/己烷)。(0.298g，74％)。m/z(ES+)(M+H)+233；tR＝1.48min。HPLC方法2。
步骤42-2：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(二甲基氨基甲酰基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。使用3-氨基-N,N-二甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺，通过与实施例3类似的方法制备。(0.0256g，58％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.62-8.60(m,1H),7.41-7.39(m,1H),4.66-4.45(m,2H),3.24-2.92(m,9H),2.09(br s,1H),1.89-1.85(m,1H),1.66-1.46(m,2H).m/z(ES+)(M+H)+452；tR＝1.20min。HPLC方法2。
实施例43：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(吗啉-4-羰基)-5-(三氟甲基)苯 基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
使用(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)(吗啉代)甲酮，通过与实施例42类似的方法制备。(0.052g，73％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.61(s,1H),8.28(br s,2H),7.47-7.33(m,1H),4.66(d,1H),4.53(s,1H),3.83-3.63(m,6H),3.54-3.44(m,2H),3.17-2.78(m,3H),2.09-2.01(m,1H),1.88-1.81(m,1H),1.64-1.40(m,2H).m/z(ES+)(M+H)+494；tR＝1.19min。HPLC方法2。
实施例44：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2'-甲基-5-(吗啉-4-羰基)-[1,1'-联 苯基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤44-1：(2'-甲基-5-硝基-[1,1'-联苯基]-3-基)(吗啉代)甲酮。向6-甲基-3'-硝基-[1,1'-联苯基]-2-羧酸(0.3g，1eq)的DCM(5mL)溶液中加入HBTU(0.486g)、DIPEA(0.223mL)和吗啉(0.112mL)。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后在真空下浓缩。残余物通过梯度快速色谱法纯化(EtOAc/PE 4:6)。白色固体(0.3g，79％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.31–8.20(m,2H),7.70(t,J＝1.5Hz,1H),7.39–7.29(m,3H),7.22(d,J＝7.1Hz,1H),4.04–3.30(m,8H),2.29(s,3H)。
步骤44-2：(5-氨基-2'-甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)(吗啉代)甲酮。向(2'-甲基-5-硝基-[1,1'-联苯基]-3-基)(吗啉代)甲酮(40mg)的MeOH/EtOAc(1：1，10mL)溶液中加入Pd/C催化剂。将反应在室温在H2气氛(80psi)下搅拌12h。滤出Pd/C，蒸发溶剂，得到纯产物，为白色固体(35mg)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ7.24–7.20(m,2H),7.19–7.13(m,2H),6.71(dd,2.2,1.5Hz,1H),6.68(dd,J＝2.2,1.5Hz,1H),6.56(t,J＝1.5Hz,1H),3.79–3.35(m,5H),3.25–3.06(m,3H),2.24(s,3H)。
步骤44-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2'-甲基-5-(吗啉-4-羰基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将(5-氨基-2'-甲基-[1,1'-联苯基]-3-基)(吗啉代)甲酮、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺和DIPEA的CH3CN溶液在80℃下加热48h。将反应物冷却，加入DIPEA和(S)-哌啶-3-胺盐酸盐。将反应混合物在80℃加热下搅拌12h。真空除去溶剂，并将残余物在Et2O中研磨。通过过滤收集得到的沉淀物。灰色固体(20mg，34％)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.59(s,1H),8.12(s,1H),7.42(s,1H),7.32–7.25(m,2H),7.24–7.20(m,1H),7.05(s,1H),4.74–4.56(m,1H),4.32–4.15(m,1H),3.78–3.71(m,3H),3.65–3.58(m,2H),2.91–2.82(m,1H),2.27(s,3H),2.13–1.96(m,2H),1.86–1.52(m,6H).HRMS m/z[M+H]+C28H34N7O3计算值516.2723，实测值516.2722。
实施例45：甲基(S)-3-((2-(3-氨基哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)- 5-(2-氰基丙-2-基)苯甲酸酯
使用甲基3-氨基-5-(2-氰基丙烷-2-基)苯甲酸酯(按照WO2006040568制备)，通过与实施例3类似的方法制备1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.7(br s,1H),8.54(s,1H),7.84-7.78(m,2H),4.72-4.50(m,2H),3.29(s,3H)3.14-3.03(m,1H)2.96-2.72(m,2H),2.07-1.98(m,1H),1.89-1.72(m,7H),1.63-1.30(m,2H).m/z(ES+)(M+H)+438.3。
实施例46：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(2-氰基丙烷-2-基)-5-(二甲基氨 基甲酰基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
通过与实施例22类似的方法，在步骤1中使用甲基3-氨基-5-(2-氰基丙烷-2-基)苯甲酸酯(按照WO2006040568制备)，在步骤3中使用二甲胺来制备。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.56-8.52(m,1H),7.86(br s,2H),7.24-7.21(m,1H),4.70-4.48(m,2H),3.16–2.99(m,7H),2.90-2.71(m,2H),2.07-1.98(m,1H),1.86-1.72(m,7H),1.63-1.30(m,2H).m/z(ES+)(M+H)+451.3。
实施例47：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(2-氰基丙烷-2-基)-5-(吡咯烷-1- 羰基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
通过与实施例46类似的方法，在步骤3中使用吡咯烷来制备。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.56(s,1H),8.03-7.81(m,2H),7.31-7.29(m,1H),4.70-4.48(m,2H),3.60(t,2H),3.49(t,3H),3.12-3.00(m,1H),2.92-2.66(m,2H),2.08-72(m,11H),1.63-1.30(m,2H).m/z(ES+)(M+H)+477.3。
实施例48：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(2-氰基丙烷-2-基)-5-(吗啉-4-羰 基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
通过与实施例46类似的方法，在步骤3中使用吗啉来制备。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.58-8.52(m,1H),7.88(br s,2H),7.22-7.19(m,1H),4.70-4.48(m,2H),3.65(t,4H),3.14-3.00(m,1H),2.92-2.70(m,6H),2.07-1.98(m,1H),1.86-1.72(m,7H),1.63-1.30(m,2H).m/z(ES+)(M+H)+493.3。
实施例49：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-氯-5-(吗啉-4-羰基)苯基)氨基)嘧 啶-5-甲酰胺
步骤49-1：(3-氯-5-硝基苯基)(吗啉代)甲酮。通过与实施例17步骤1类似的方法，使用3-氯l-5-硝基苯甲酸(0.500g，2.48mmol)、亚硫酰氯(5.0mL)、三乙胺(0.35mL，2.5mmol)、吗啉(0.22mL，2.52mmol)和DCM(10mL)制备，无需进一步纯化即可得到标题化合物，为浅黄色粘性油状物(0.477g，71％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.27(s,1H),8.15(s,1H),7.73(s,1H),4.09–3.80(m,8H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ166.4,148.7,138.2,136.2,133.3,125.0,120.5,66.7,48.3(加宽),42.8(加宽)。
步骤49-2：(3-氨基-5-氯苯基)(吗啉代)甲酮。通过与实施例17步骤2类似的方法，使用铁粉(0.407g，7.29mmol)、EtOH(2.35mL)、浓HCl(水溶液)(0.06mL)、25％NH4Cl(水溶液)溶液(1.18mL)和(3-氯-5-硝基苯基)(吗啉代)甲酮(0.168g，0.621mmol)制备，通过快速柱色谱法纯化(EtOAc)，得到标题化合物，为无色油状物(0.139g，93％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.68(app s,2H),6.53(s,1H),4.17–3.29(m,10H)。LCMS:m/z(ES+)(M+H)+241.0；tR＝1.78min。HPLC方法3(酸)。
步骤49-3:(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-氯-5-(吗啉-4-羰基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将(3-氨基-5-氯苯基)(吗啉代)甲酮(0.112g，0.46mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.090g，0.47mmol)、三乙胺(0.14mL，1.01mmol)溶于无水二噁烷(10mL)和DMF(2mL)中。将混合物在50℃加热7h，然后冷却至室温。加入另外的三乙胺(0.14mL，1.01mmol)和2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.090g，0.47mmol)，并将混合物在50℃下搅拌过夜。加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.093g，0.46mmol)和三乙胺(0.14mL，1.01mmol)，并将反应混合物在50℃加热24h。加入EtOAc(40mL)，并依次用水(5×20mL)和盐水(20mL)洗涤该溶液。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，由两次置换得到粗产物，将其通过快速柱色谱法纯化(EtOAc)，由两次置换得到产物(0.082g，32％)。将该产物的一部分(0.030g，0.12mmol)溶解在Et2O(5.0mL)中，并逐滴加入4M HCl的二噁烷(5.0mL)溶液。将混合物在室温搅拌2h，并加入己烷(20mL)，将固体过滤并干燥，得到标题化合物的盐酸盐，为白色固体(0.027g，定量)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.60(s,1H),7.98(br s,1H),7.60(br s,1H),7.36(s,1H),4.71–4.56(m,1H),4.09(app d,J＝13.6Hz,1H),3.87–3.93(m,11H),2.29–2.17(m,1H),2.07–1.95(m,1H),1.88–1.74(m,2H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+460.2；tR＝1.95min。HPLC方法3(酸)。
实施例50：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-双(2-氰基丙烷-2-基)苯基)氨 基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤50-1：N,N-二苄基-3,5-二溴苯胺。向3,5-二溴苯胺(2.50g，9.96mmol)、碳酸钾(4.13g，29.88mmol)和苄基溴(3.55mL，29.89mmol)中添加MeCN(40mL)。将混合物加热至回流，并搅拌过夜。使混合物冷却至室温后，减压除去MeCN，并加入EtOAc(60mL)。将有机溶液用水(3×50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，将其首先通过快速柱色谱法纯化(95：5己烷：EtOAc)，然后通过从含有少量EtOAc的沸腾热己烷中重结晶(趁热过滤并冷却)进行纯化，得到标题化合物，为白色固体(3.13g，73％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.35(app t,J＝7.2Hz,4H),7.31–7.25(m,2H),7.19(d,J＝7.6Hz,4H),6.97(s,1H),6.79(s,2H),4.59(s,4H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+431.8；tR＝3.24min.HPLC方法3(酸)。
步骤50-2：2,2'-(5-(二苄基氨基)-1,3-亚苯基)双(2-甲基丙烷腈)和2-(3-溴-5-(二苄基氨基)苯基)-2-甲基丙烷腈。将N,N-二苄基-3,5-二溴苯胺(1.00g，2.32mmol)、Xantphos(0.160g，0.28mmol)、Pd2烯丙基2Cl2(0.037g，4mol％)和2-氰基-2-甲基丙酸钾(0.840g，5.55mmol)加入压力容器中，该压力容器通过隔膜用N2冲洗15分钟。引入均三甲苯(5.5mL)，将隔膜迅速用螺帽替换，并且将混合物在室温剧烈搅拌5分钟。将烧瓶降低到预热至140℃的油浴中，并剧烈搅拌过夜。冷却后，在EtOAc(20mL)的帮助下将粗反应混合物转移到圆底烧瓶中，并在减压下浓缩。所得残余物通过二氧化硅快速柱色谱纯化(己烷，然后是7：1己烷：EtOAc，然后是6：1，最后是5：1)，得到2,2'-(5-(二苄基氨基)-1,3-亚苯基)双(2-甲基丙烷腈)，为浅黄色油状物，其静置时固化(0.500g，53％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34(app t,J＝7.6Hz,4H),7.31–7.22(m,6H),6.83(s,1H),6.75(d,J＝2.0Hz,2H),4.70(s,4H),1.60(s,12H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+408.3；tR＝2.88min。HPLC方法3(酸)。
还分离出了淡黄色油状的2-(3-溴-5-(二苄基氨基)苯基)-2-甲基丙烷腈，其在静置时固化(0.20g，20％)。m/z(M+H)+(ES+)419.3,421.2；tR＝3.14min。HPLC方法2(碱)。；1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.40–7.33(m,4H),7.32–7.23(m,6H),6.90(app.t,J＝1.6Hz,1H),6.85(dd,J＝2.4,1.6Hz,1H),6.73(app.t,J＝2.0Hz,1H),4.67(s,4H),1.58(s,6H)。
步骤50-3：2,2'-(5-氨基-1,3-亚苯基)双(2-甲基丙烷腈)。向烧瓶中加入2,2'-(5-(二苄基氨基)-1,3-亚苯基)双(2-甲基丙烷腈)(3.05g，7.48mmol)，将其用N2冲洗10分钟。加入Pd(OH)2(1.05g，10–20％Pd基底)、DCM(8.0mL)，最后加入MeOH(30.0mL)，并用H2吹扫烧瓶。将混合物在室温下剧烈搅拌3h，然后将烧瓶在空气中打开，并将混合物在减压下通过
Figure BDA0002776695470000921
垫过滤。滤饼用另外的MeOH(30mL)和DCM(30mL)洗涤，将滤液减压浓缩，并将粗产物通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(1∶1己烷∶EtOAc)，得到标题化合物，为浅黄色油状物，其静置后会慢慢固化(1.68g，98％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.85(t,J＝2.0Hz,1H),6.73(d,J＝2.4Hz,1H),3.36–2.78(br s,2H),1.70(s,12H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+228.2；tR＝2.15min。HPLC方法3(酸)。
步骤50-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-双(2-氰基丙烷-2-基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将2,2'-(5-氨基-1,3-亚苯基)双(2-甲基丙烷腈)(0.764g，3.36mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.822g，4.28mmol)、三乙胺(1.01mL，7.25mmol)溶于无水二噁烷(35mL)中。将混合物在50℃加热3h，然后冷却至室温。加入另外的2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.061g，0.32mmol)和三乙胺(0.09mL，0.65mmol)，并将混合物加热至50℃保持另外1.5h。使反应混合物冷却至室温，并加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.726g，3.62mmol)和三乙胺(1.01mL，7.25mmol)，并将反应混合物在50℃加热75分钟。加入EtOAc(60mL)，并依次用水(5×30mL)和盐水(30mL)洗涤该溶液。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，由两次置换得到粗产物，将其通过快速柱色谱法纯化(1：2己烷：EtOAc，然后是1：3)，由两次置换得到产物(1.30g，71％)。加入二噁烷(30mL)，然后逐滴加入4M HCl的二噁烷(15mL)溶液，并将反应混合物在室温搅拌24h。加入己烷(30mL)，将固体过滤并用Et2O研磨以除去残留的二噁烷。将得到的固体过滤并干燥，得到标题化合物的盐酸盐，为浅黄色粉末(1.12g，98％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.60(s,1H),7.83(d,J＝1.6Hz,2H),7.50(t,J＝1.6Hz,1H),4.39(dd,J＝13.6,3.2Hz,1H),4.14–3.95(m,1H),3.89–3.77(m,1H),3.68–3.62(m,1H),3.57–3.49(m,1H),2.23–2.13(m,1H),2.07–1.95(m,1H),1.89–1.80(m,1H),1.79(s,12H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+447.0；tR＝1.91min。HPLC方法3(酸)。
实施例51：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-双(1-氰基环丙基)苯基)氨基)嘧 啶-5-甲酰胺
步骤51-1：1,1'-(5-(二苄基氨基)-1,3-亚苯基)双(环丙烷-1-腈)。将消旋BINAP(0.116g，0.19mmol)和Pd2dba3(0.088g，5mol％)添加到配有隔垫的100mL圆底烧瓶中，用N2冲洗15分钟。加入预先脱气的THF(8.0mL)，并将悬浮液在室温搅拌20分钟。在N2气氛下向另一个烧瓶中添加环丙烷腈(0.28mL，3.80mmol)、N,N-二苄基-3,5-二溴苯胺(0.400g，0.93mmol)和环戊基甲基醚(20mL)，并将溶液用N2脱气15分钟。此后，通过注射器将催化剂在THF中的悬浮液转移至反应烧瓶中。在搅拌下逐滴加入LiHMDS(1M的THF溶液，3.72mL，3.72mmol)，加完后将反应混合物加热至80℃保持1.5h。将反应混合物用EtOAc(30mL)稀释，并依次用水(3×20mL)和盐水(20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，将其通过快速柱色谱纯化(9∶1己烷∶EtOAc，然后是4.5∶1)，然后第二次纯化(50∶1甲苯∶EtOAc)，得到标题化合物，为白色固体(0.299g，80％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.35(app t,J＝7.2Hz,4H),7.28(t,J＝7.2Hz,2H),7.24(d,J＝7.2Hz,4H),4.68(s,4H),1.62–1.55(m,4H),1.25–1.20(m,1H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+404.0；tR＝2.86min。HPLC方法3(酸)。
步骤51-2：1,1'-(5-氨基-1,3-亚苯基)双(环丙烷-1-腈)。向烧瓶中加入1,1'-(5-(二苄基氨基)-1,3-亚苯基)双(环丙烷-1-腈)(0.100g，0.25mmol)，将其用N2冲洗10分钟。加入10％Pd/C(0.027g，10mol％)和MeOH(2.0mL)，并将烧瓶用H2吹扫。将混合物在室温下剧烈搅拌过夜。用N2吹扫反应混合物，并添加另外的10％Pd/C(0.027g，10mol％)和DCM(2.0mL)。将反应混合物再次用H2吹扫，并在室温搅拌2h，然后将烧瓶通向空气，并将混合物在减压下通过
Figure BDA0002776695470000931
垫过滤。滤饼用另外的MeOH(15mL)和EtOAc(15mL)洗涤，并将滤液减压浓缩，得到粗产物，将其通过二氧化硅柱色谱法纯化(甲苯)，得到标题化合物(0.020g，36％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.54(d,J＝1.2Hz,2H),6.48–6.43(m,1H),3.94–3.68(br s,2H),1.71–1.63(m,4H),1.40–1.33(m,4H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+224.1；tR＝2.05min。HPLC方法3(酸)。
步骤51-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-双(1-氰基环丙基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将1,1'-(5-氨基-1,3-亚苯基)双(环丙烷-1-腈)(0.020g，0.09mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.017g，0.09mmol)、三乙胺(0.02mL，0.15mmol)溶于无水二噁烷(2.0mL)和DMF(0.5mL)中。将混合物在50℃加热1h，然后冷却至室温。加入另外的2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(3mg，0.02mmol)和三乙胺(0.01mL，0.07mmol)，并将混合物加热至50℃过夜。加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.018g，0.09mmol)和三乙胺(0.02mL，0.15mmol)，并将反应混合物在50℃加热1.5h。将反应混合物用EtOAc(15mL)稀释，依次用水(3×10mL)和盐水(10mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥、过滤并减压浓缩。加入Et2O(2.0mL)，然后逐滴加入4M HCl的二噁烷(2.0mL)溶液，并将混合物在室温搅拌3h。加入己烷(10mL)，将所得固体过滤并干燥，得到标题化合物的盐酸盐，其为白色粉末(0.033g，77％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.59(s,1H),7.71(s,2H),6.96(s,1H),4.45(app d,J＝12.4Hz,1H),4.14–3.92(m,1H),3.83–3.73(m,1H),3.68–3.58(m,1H),3.58–3.45(m,1H),2.45–2.11(m,1H),2.10–1.95(m,1H),1.91–1.72(m,7H),1.61–1.53(m,4H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+443.0；tR＝1.87min。HPLC方法3(酸)。
实施例52：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-双(1-氰基环丁基)苯基)氨基)嘧 啶-5-甲酰胺
步骤52-1：1,1'-(5-(二苄基氨基)-1,3-亚苯基)双(环丁烷-1-腈)。如实施例51步骤1中一样，使用外消旋BINAP(0.087g，0.14mmol)、Pd2dba3(0.066g，5mol％)、THF(6.0mL)、环丁腈(0.26mL，2.78mmol)、N,N-二苄基-3,5-二溴苯胺(0.300g，0.70mmol)、环戊基甲基醚(15mL)和LiHMDS(1M的THF溶液，2.79mL，2.79mmol)。粗产物通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(50：1甲苯：EtOAc)，得到标题化合物，为白色固体(0.226g，75％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.35(app t,J＝7.2Hz,4H),7.30–7.23(m,6H),6.68(t,J＝1.6Hz,1H),6.63(d,J＝1.6Hz,2H),4.69(s,4H),2.75–2.65(m,4H),2.49–2.39(m,4H),2.39–2.26(m,2H),1.98–1.87(m,2H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+432.0；tR＝2.99min。HPLC方法3(酸)。
步骤52-2：1,1'-(5-氨基-1,3-亚苯基)双(环丁烷-1-腈)。如实施例51步骤2中所述，使用1,1'-(5-(二苄基氨基)-1,3-亚苯基)双(环丁烷-1-腈)(0.100g，0.23mmol)、10％Pd/C(0.035g，14mol％)、MeOH(2.0mL)和DCM(2.0mL)，得到粗产物，将其通过二氧化硅快速色谱纯化(甲苯)，得到标题化合物，为黄色油状物(0.030g，52％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.76(t,J＝1.6Hz,1H),6.63(d,J＝1.6Hz,2H),3.95–3.78(br s,2H),2.83–2.73(m,4H),2.60(app dq,J＝9.6,2.4Hz,4H),2.49–2.35(m,2H),2.11–1.99(m,2H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+252.1；tR＝2.24min。HPLC方法3(酸)。
步骤52-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-双(1-氰基环丁基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将1,1'-(5-氨基-1,3-亚苯基)双(环丁烷-1-腈)(0.030g，0.12mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.023g，0.12mmol)、三乙胺(0.02mL，0.15mmol)溶于无水二噁烷(2.0mL)和DMF(0.5mL)中。将混合物在50℃加热3h，然后冷却至室温。加入另外的2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(8mg，0.04mmol)和三乙胺(0.01mL，0.07mmol)，并将混合物加热至50℃过夜。加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.024g，0.12mmol)和三乙胺(0.02mL，0.15mmol)，并将反应混合物在50℃加热1.5h。将反应混合物用EtOAc(15mL)稀释，依次用水(3×10mL)和盐水(10mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥、过滤并减压浓缩。加入Et2O(2.0mL)，然后逐滴加入4M HCl的二噁烷(2.0mL)溶液，并将混合物在室温搅拌3h。加入己烷(10mL)，将所得固体过滤并干燥，得到标题化合物的盐酸盐，其为白色粉末(0.045g，75％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.59(s,1H),7.70(s,2H),7.40(s,1H),4.42(app d,J＝12.4Hz,1H),4.11–3.97(m,1H),3.80–3.69(m,1H),3.66–3.56(m,1H),3.56–3.44(m,1H),2.89–2.69(m,9H),2.52–2.37(m,2H),2.23–2.06(m,3H),2.06–1.94(m,1H),1.89–1.74(m,1H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+470.9；tR＝1.98min。HPLC方法3(酸)。
实施例53：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-二环丙基苯基)氨基)嘧啶-5-甲 酰胺
步骤53-1：3,5-二环丙基苯胺。将三环己基膦(0.112g，0.399mmol)、二乙酰氧基钯(0.045g，0.199mmol)、3,5-二溴苯胺(0.500g，1.993mmol)、环丙基硼酸(0.856g，9.96mmol，5eq)和磷酸钾(3.38g，15.94mmol，8eq)在甲苯(18mL)和水(2mL)中的溶液用N2脱气。将反应在100℃下加热6h，并在室温下放置12h。将反应物用水(10mL)稀释，并用EtOAc(3×20mL)萃取。将合并的有机层干燥(Na2SO4)并减压浓缩。将残余物加载到SCX柱上，用MeOH(3倍柱体积)洗涤，并用1％NH3的MeOH溶液(3倍柱体积)洗脱。将氨的MeOH在减压下浓缩，不需要进一步纯化。(0.300g，85％)。m/z(ES+)(M+H)+174；tR＝1.74min。HPLC方法2。
步骤53-2：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-二环丙基苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与实施例3类似的方法，使用如所述制备的3,5-二环丙基苯胺制备。(0.063g，定量)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.52(s,1H),7.14(s,2H),6.63(s,1H),4.62-4.56(m,1H),4.50(d,J＝13.2Hz,1H),3.17(s,1H),3.01-2.92(m,1H),2.90-2.78(m,1H),2.05(d,J＝12.5Hz,1H),1.92-1.78(m,3H),1.68-1.53(m,1H),1.52-1.42(m,1H),1.01-0.90(m,4H),0.75-0.62(m,4H).m/z(ES+)(M+H)+393；tR＝1.51min。HPLC方法2。
实施例54：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶- 5-甲酰胺盐酸盐
步骤54-1：2,6-二(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺。将碳酸氢钠(0.367g，4.37mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(0.933mL，4.96mmol)和2,6-二溴吡啶-4-胺(0.500g，1.985mmol)在1,4-二噁烷(7mL)和水(3mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫10min。加入PdCl2dppf(0.145g，0.198mmol)，并再继续吹扫10分钟。然后将反应加热至90℃，并在氮气下搅拌4h。冷却后，将溶液用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-50％EtOAc/异己烷)，得到2,6-二(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺。(0.200g，54％)。m/z(M+H)+(ES+)175.2；tR＝0.62min。HPLC方法2
步骤54-2：2,6-二异丙基吡啶-4-胺将2,6-二(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺(0.2g，1.148mmol)的甲醇(4mL)溶液在H-Cube(10％Pd/C，30x4 mm，全氢气，40℃，1mL/min)中氢化，并减压浓缩，得到2,6-二异丙基吡啶-4-胺。(0.155g，75％)。m/z(M+H)+(ES+)179.2；tR＝1.13min。HPLC方法4。
步骤54-3：2-氯-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。向2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.965g，5.02mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的搅拌溶液中加入2,6-二异丙基吡啶-4-胺(0.689g，3.86mmol)和DIPEA(1.346mL，7.73mmol)。将反应加热至110℃并搅拌7h。使混合物冷却并在真空下浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-2％(0.7M氨/MeOH)/DCM)，得到2-氯-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。(0.91g，67％)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.66(s,1H),8.86(s,1H),8.50(s,1H),8.04(s,1H),7.40(s,2H),2.95(sept,2H,J＝6.9Hz),1.24(d,12H,J＝6.9Hz).m/z(M+H)+(ES+)334.2；tR＝2.26min。HPLC方法4。
步骤54-4：(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。向2-氯-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(0.9g，2.70mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的搅拌溶液中加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.567g，2.83mmol)和DIPEA(0.494mL，2.83mmol)。将反应加热至90℃并搅拌30min，然后冷却并在真空下浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0.7M氨/MeOH)/DCM)，得到(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。(1.19g，88％)。m/z(M+H)+(ES+)498.5；tR＝2.49min。HPLC方法4。
步骤54-5：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺盐酸盐。向(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(1.19g，2.391mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的搅拌溶液中加入盐酸(4M的1,4-二噁烷溶液，11.96mL，47.8mmol)，并将该反应在室温搅拌4h。然后将反应混合物在真空下浓缩。将得到的残余物在乙酸乙酯(10mL)中浆化，并通过过滤收集，得到(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺盐酸盐。(0.851g，78％)。1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.67(s,1H),7.50(s,1H),4.51(br d,1H,J＝13.0Hz),4.27-4.18(m,1H),3.77-3.66(m,2H),3.41-3.31(m,1H),3.06(sept,2H,J＝7.0Hz),2.23-2.11(br m,1H),1.95-1.86(m,1H),1.85-1.68(m,2H),1.32(d,12H,J＝7.0Hz).m/z(M+H)+(ES+)398.3；tR＝1.79min。HPLC方法4。
实施例55：(R)-2-(3-氨基氮杂环庚烷-1-基)-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基)氨 基)嘧啶-5-甲酰胺
用2,6-二异丙基吡啶-4-胺，用与实施例3类似的方法制备(步骤3：二噁烷，DIPEA，105℃，20h)，得到2-氯-4-(2,6-二异丙基吡啶-4-基-氨基)嘧啶-5-甲酰胺，将其通过二氧化硅(40g)色谱纯化，用梯度DCM/MECN(0、10、20、25％)洗脱。将从色谱中回收的灰白色固体进一步从DCM和石油醚中重结晶，得到四氢噻吩化合物(1.31g，47％)。1H NMR(300MHz,d6DMSO)δ11.67(s,1H),8.85(s,1H),8.50(s,1H),8.03(s,1H),7.39(s,1H),2.94(sept,J＝6.8Hz,1H),1.23(d,J＝7.1Hz,12H),m/z(ES+)(M+H)+334.2/336.2；tR＝2.10min。HPLC方法1。使2-氯-4-(2,6-二异丙基吡啶-4-基-氨基)嘧啶-5-甲酰胺中间体与(R)-叔丁基氮杂环庚烷-3-基氨基甲酸酯反应(步骤C2：CH3CN DIPEA，70℃，1h)，得到相应的叔丁基(R)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)氮杂环庚烷-3-基)氨基甲酸酯。(m/z(ES+)(M+H)+512.1；tR＝2.34min。HPLC方法1)。Boc脱保护，得到标题化合物的盐酸盐。1H NMR(300MHz,DMSO-d6+D2O)δ8.84(s,1H),7.90(s,1H),4.25(dd,J＝14.3,5.0Hz,1H),3.92-3.85(m,1H),3.80-3.71(m,2H),3.46-3.40(m,1H),1.94-1.66(m,5H),1.65-1.35(m,2H),1.31(d,J＝7.0Hz,6H),m/z(ES+)(M+H)+412.4；tR＝1.93min。HPLC方法1。
实施例56：(S)-2-(3-氨基氮杂环庚烷-1-基)-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基)氨 基)嘧啶-5-甲酰胺。
使用与实施例55类似的方法，使用(S)叔丁基氮杂环庚烷-3-基氨基甲酸酯来制备，得到盐酸盐。1H NMR(300MHz,DMSO-d6+D2O)δ8.84(s,1H),7.90(s,1H),4.25(dd,J＝14.3,5.0Hz,1H),3.92-3.85(m,1H),3.80-3.71(m,2H),3.46-3.40(m,1H),1.94-1.66(m,5H),1.65-1.35(m,2H),1.31(d,J＝7.0Hz,6H),m/z(ES+)(M+H)+412.4；tR＝1.93min。HPLC方法1。
实施例57：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-(丙-1-烯-2-基)-6-(三氟甲基)吡 啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤57-1：2-(丙-1-烯-2-基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-胺
将2-三氟甲基-6-氯吡啶-4-胺(1mmol，200mg)溶于二噁烷(10mL)，然后添加4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(376uL,2mmol)、KOAc(3.0mmol，300mg)。用氮气冲洗溶液，然后加入PdCl2(dppf)(5％mol，0.05mmol，40mg)。将该溶液在90℃下搅拌。加入硼酸酯(100uL)，将溶液再次脱气，然后添加PdCl2(dppf)(20mg)。将反应在90℃下再加热8h。通过二氧化硅垫(2-3g)过滤粗产物，并用DCM洗涤。将粗溶液蒸发至干，并通过二氧化硅(25g)色谱法使用100％DCM纯化，得到澄清的油状物(60mg，30％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.75(s,1H),5.89(s,1H),5.28(s,1H),4.41(br s,2H),2.15,m/z(ES+)(M+H)+203.1；tR＝3.29min。HPLC方法1。
步骤57-2：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-(丙-1-烯-2-基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与实施例3类似的方法，用2-(丙-1-烯-2-基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-胺和(S)-3-NBoc-氨基哌啶制备(步骤1：CH3CN，二乙基苯胺，105℃，16h；步骤2：CH3CN DIPEA，60℃，3h)，得到中间体(S)-叔丁基1-(5-氨基甲酰基-4-(2-(丙-1-烯-2-基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基氨基甲酸酯，将其使用梯度洗脱液PET(100％)至DCM(100％)/乙腈(25，50％乙腈)，通过二氧化硅柱(10g)色谱法纯化。Rf(50％乙腈/DCM)＝0.75(荧光蓝UV)，得到固体(浅棕色/橙色)(110mg，84％)，m/z(ES+)(M+H)+522.3/466.2；tR＝3.17min。(HPLC方法1)，Boc脱保护之前，得到标题化合物的盐酸盐，为灰白色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6+D2O)δ8.78(s,1H),8.16(s,1H),7.91(s,1H),5.98(s,1H),5.40(s,1H),4.51(br s,1H),4.07(d,J＝11.2Hz,1H),3.62-3.34(m,2H),3.23(br s,1H),2.13(s,3H),2.09-2.01(m,1H),1.86-1.67(m,2H),1.63-1.52(m,1H),m/z(ES+)(M+H)+422.4；tR＝2.40min.(HPLC方法1)。
实施例58：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-异丙基-6-苯基吡啶-4-基)氨基)嘧 啶-5-甲酰胺
步骤58-1：4-硝基-2-苯基-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶向2,6-二溴-4-硝基吡啶(281mg，1.0mmol)、苯基硼酸(121mg，1.0mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(168mg，1mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和水(3mL)中的溶液中加入Pd(PPh3)4(231mg，0.2mmol)和K2CO3(414mg，3.0mmol)，并将反应在N2下在100℃搅拌5h。将所得混合物用水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过二氧化硅色谱法纯化(0-40％DCM/石油醚)。＝63％；HPLC(方法1)：tR＝3.19min,m/z(ES+)(M+H)+241.2。
步骤58-2:2-异丙基-6-苯基吡啶-4-胺。向10％的4-硝基-2-苯基-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶(150mg，0.625mmol)的MeOH溶液中添加Pd/C(10％)，并将反应在H2气下在室温搅拌2h。过滤除去Pd/C，将溶液浓缩至干，粗混合物无需进一步纯化即可用于下一步。＝70％，HPLC(方法1)：tR＝1.97min,m/z(ES+)(M+H)+213.3。
步骤58-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-异丙基-6-苯基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。使用如所述制备的2-异丙基-6-苯基吡啶-4-胺，通过与实施例3类似的方法制备，得到标题化合物的盐酸盐。HPLC(方法1)：tR＝1.94min,m/z(ES+)(M+H)+432.2；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.81(s,1H),8.25(s,1H),8.03(s,1H),7.83-87.81(m,2H),7.70-7.61(m,3H),4.45-4.42(br s,1H),3.60-3.45(br m,2H),3.42-3.34(m,2H),3.27-3.19(br m,1H),2.09-2.00(br m,1H),1.75-1.62(br m,2H),1.60-1.49(br m,2H),1.36-1.32(m,6H)1.27-1.24(d,1H)。
实施例59：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-异丙基-6-(三氟甲基)吡啶-4-基) 氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤59-1：(S)-叔丁基1-(5-氨基甲酰基-4-(2-异丙基-6-(三氟甲基)吡啶-4-基氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基氨基甲酸酯：
向(S)-叔丁基1-(5-氨基甲酰基-4-(2-(丙-1-烯-2-基)-6-(三氟甲基)吡啶-4-基氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基氨基甲酸酯(70mg)在MeOH(和THF至完全溶解)中的溶液中加入Pd/C。使用真空和N2填充循环(3x)将悬浮液脱气，然后将其置于氢气氛下。6h后，将粗反应混合物通过
Figure BDA0002776695470001001
垫过滤，真空浓缩，并通过二氧化硅(5g)色谱纯化，用梯度DCM和乙腈100％DCM，然后用乙腈(10,25％)洗脱，得到白色固体(52mg,74％)，m/z(ES+)(M+H)+524.3/468.2；tR＝3.09min。HPLC方法1。
步骤59-2：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-异丙基-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。使用与步骤3-3类似的方法制备，得到标题化合物的盐酸盐，为灰白色固体。1H NMR(300MHz,D6 DMSO+D2O)δ8.77(s,1H),8.16(s,1H),7.64(s,1H),4.50(br s,1H),4.09(d,J＝12.2Hz,1H),3.59-3.37(m,2H),3.23(br s,1H),3.04(hept.,J＝6.8Hz,1H),2.08-2.00(m,1H),1.86-1.65(m,2H),1.64-1.52(m,1H),1.23(d,J＝6.8Hz,6H).m/z(ES+)(M+H)+424.4；tR＝2.26min。HPLC方法1。
实施例60：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((4-苯基-1H-吲唑-6-基)氨基)嘧啶-5- 甲酰胺
步骤60-1：4-苯基-1H-吲唑-6-胺。将碳酸钠(0.126g，1.19mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-苯基-1,3,2-二氧杂硼烷(0.134g，0.66mmol)和4-氯-1H-吲唑-6-胺(0.1g，0.60mmol)在1,4-二噁烷(3mL)和水(1mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫10分钟。加入PdCl2dppf(0.044g，0.06mmol)，并再继续吹扫10分钟。然后将反应加热至90℃，并在氮气下搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩，得到4-苯基-1H-吲唑-6-胺(0.018g，10％)。m/z(M+H)+(ES+)210.1；tR＝1.72min。HPLC方法4。
步骤60-2：(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((4-苯基-1H-吲唑-6-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。向4-苯基-1H-吲唑-6-胺(0.018g，0.086mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的搅拌溶液中加入2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.017g，0.086mmol)和DIPEA(0.03mL，0.172mmol)。将反应加热至100℃并搅拌1h，然后冷却至RT。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.017g，0.086mmol)和DIPEA(0.03mL，0.172mmol)，并将反应再加热至100℃保持30分钟。冷却后，将混合物真空浓缩并通过硅胶色谱法纯化(10-5％(0.7M氨/MeOH)/DCM)，得到(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((4-苯基-1H-吲唑-6-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(0.019g，38％)。m/z(M+H)+(ES+)529.4；tR＝2.19min。HPLC方法4。
步骤60-3：2：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((4-苯基-1H-吲唑-6-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。向(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((4-苯基-1H-吲唑-6-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(0.018g，0.034mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的搅拌溶液中加入盐酸(4M的1,4-二噁烷溶液，0.170mL，0.681mmol)，并将该反应在室温搅拌24h。将反应混合物真空浓缩并通过硅胶色谱法纯化(0-10％(0.7M氨/MeOH)/DCM)，得到(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((4-苯基-1H-吲唑-6-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。(8mg，49％)。1H NMR(500Mhz,DMSOd-6)δ13.27(s,1H),12.50(s,1H),8.71(s,1H),8.49-8.41(m,1H),8.15-9.76(m,2H),7.80-7.65(m,2H),7.53-7.44(m,3H),7.42.-7.37(m,2H),4.65-4.50(m,1H),4.49-4.40(m,1H),3.15-3.02(m,1H),2.91-2.84(m,1H),2.78-2.71(m,1H),1.95-1.86(m,1H),1.77-1.69(m,1H),1.56-1.41(m,1H),1.40-1.26(m,1H).m/z(M+H)+(ES+)429.3；tR＝1.25min。HPLC方法2。
实施例61：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((1-异丙基-4-苯基-1H-吲唑-6-基)氨 基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤61-1：4-氯-1-异丙基-1H-吲唑-6-胺。
向4-氯-1H-吲唑-6-胺(0.150g，0.895mmol)在甲醇(2mL)中的搅拌溶液中加入苯甲醛(0.096mL，0.940mmol)。将反应在室温下搅拌2h，然后在真空下浓缩。将残余物重新溶解在DMF(2mL)中，冷却至0℃，并添加氢化钠(60％，0.107g，2.69mmol)。20分钟后，加入2-溴丙烷(0.101mL，1.074mmol)，并使反应物温热至室温，并搅拌20h。将反应混合物冷却至0℃，并通过逐滴添加1M HCl(5mL)淬灭，并在室温搅拌4h。加入碳酸氢钠饱和溶液使混合物的pH值为7，并用乙酸乙酯(3x 10mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-50％EtOAc/异己烷)，得到4-氯-1-异丙基-1H-吲唑-6-胺(0.075g，26％)。m/z(M+H)+(ES+)429.3；tR＝1.25min。HPLC方法2。
步骤61-2：1-异丙基-4-苯基-1H-吲唑-6-胺。将4,4,5,5-四甲基-2-苯基-1,3,2-二氧杂硼烷(0.082g，0.40mmol)、4-氯-1-异丙基-1H-吲唑-6-胺(0.07g，0.33mmol)和碳酸氢钠(0.084g，1.00mmol)在1,4-二噁烷(1.5mL)和水(0.5mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫10分钟。加入PdCl2dppf(0.024g，0.03mmol)，并再继续吹扫10分钟。然后将反应加热至回流，并在氮气下搅拌2h。冷却后，将反应混合物用水(10mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-3％(0.7M氨/MeOH)/DCM)，得到1-异丙基-4-苯基-1H-吲唑-6-胺(0.01g，9％)。m/z(M+H)+(ES+)252.2；tR＝2.17min。HPLC方法4。
步骤61-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((1-异丙基-4-苯基-1H-吲唑-6-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。使用1-异丙基-4-苯基-1H-吲唑-6-胺通过与实施例3类似的方法制备。(3mg，36％)。1H NMR(500MHz,DMSO d6)δ12.51(s,1H),8.72(s,1H),8.47(br s,1H),8.08(br s,1H),8.02(s,1H),7.82-7.73(br m,2H),7.62(s,1H),7.54-7.46(m,2H),7.42-7.37(m,1H),5.11(sept,1H,J＝6.5Hz),4.65-4.40(m,2H),3.18-3.08(br m,1H),2.96-2.88(m,1H),2.84-2.74(br m,1H),1.97-1.86(br m,1H),1.78-1.71(br m,1H),1.51(d,6H,J＝6.5Hz),1.44-1.31(br m,2H).m/z(M+H)+(ES+)471.3；tR＝2.07min。HPLC方法4。
实施例62
步骤62-1：(S)-叔丁基(1-(4-((3-溴苯基)氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。向2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(6.2g，32.3mmol)在1,4-二噁烷(100mL)中的搅拌溶液中加入3-溴苯胺(3.52mL，32.3mmol)和DIPEA(11.28mL，64.6mmol)。将反应加热至90℃并搅拌2h，然后冷却至RT。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(6.79g，33.9mmol)和DIPEA(11.28mL，64.6mmol)，并将混合物再次加热至90℃保持2h，然后冷却至室温。将反应混合物用水(200mL)稀释，并用乙酸乙酯(2×200mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。将粗残余物在MTBE/己烷(1：1，150mL)中制浆，并通过过滤收集，得到(S)-叔丁基(1-(4-((3-溴苯基)氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(11.43g，72％)。m/z(ES+)(M+H)+491.3,493.2；tR＝2.45min。HPLC方法4。
步骤62-2：(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((2',3'-二氟-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将(S)-叔丁基(1-(4-((3-溴苯基)氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(0.1g，0.204mmol)、碳酸氢钠(0.068g，0.81mmol)和(2,3-二氟苯基)硼酸(0.035g，0.22mmol)的搅拌溶液用氮气吹扫10分钟。然后加入PdCl2dppf(0.015g，0.02mmol)，并再继续吹扫10分钟。然后将反应加热至90℃，在氮气下搅拌1h，然后冷却至室温。将混合物用盐水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-5％(0.7M氨/MeOH)/DCM)，得到(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((2',3'-二氟-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。(0.075g，70％)。m/z(ES+)(M+H)+525.3；tR＝2.60min。HPLC方法4。
步骤62-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2',3'-二氟-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。向(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((2',3'-二氟-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(0.072g，0.14mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的搅拌溶液中加入氯化氢(4M的1,4-二噁烷溶液，0.686mL，2.75mmol)，然后将反应在室温搅拌16h。将混合物在真空下浓缩，再溶解于甲醇(1mL)中，并加载到SCX(约1g)上。将其用甲醇(20mL)洗涤，然后用氨溶液(0.7M的甲醇溶液)洗脱。将氨流分(fraction)在真空下浓缩，得到(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2',3'-二氟-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。(0.055g，90％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6,90℃)δ11.55(s,1H),8.63(s,1H),8.08-8.07(m,1H),7.55-7.51(m,1H),7.46(t,1H J＝7.8Hz),7.43-7.26(m,5H),7.24.7.21(m,1H),4.45-4.39(m,1H),4.37.4.31(m,1H),3.09-3.02(m,1H),2.82(dd,1H,J＝12.6,9.2Hz),2.72-2.64(m,1H),1.91-1.83(m,1H),1.78-1.23(m,5H).m/z(ES+)(M+H)+425.3；tR＝1.99min。HPLC方法4。
实施例63：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2'-氯-5'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-3- 基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
通过与实施例62类似的方法制备。步骤2：使用(2-氯-5-甲氧基苯基)硼酸。(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((2'-氯-5'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。(0.075g，65％)。m/z(ES+)(M+H)+553.4,555.3；tR＝2.64min。HPLC方法4。步骤3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2'-氯-5'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺.(0.058g，87％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.50(s,1H),8.61(s,1H),7.89(t,1H,J＝2.0Hz),7.55-7.51(m,1H),7.45-7.36(m,2H),7.29(br s,2H),7.10-7.06(m,1H),7.00-6.93(m,2H),4.43-4.36(m,1H),4.35-4.29(m,1H),3.81(s,3H),3.06-2.99(m,1H),2.79(dd,1H,J＝12.6,9.2Hz),2.69-2.62(m,1H),1.89-1.82(m,1H),1.69-1.61(m,1H),1.56-1.20(m,4H).m/z(ES+)(M+H)+453.3,455.2；tR＝2.03min。HPLC方法4。
实施例64：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2,6-双(2-氰基丙烷-2-基)吡啶-4- 基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤64-1：2,6-二溴-N,N-双(4-甲氧基苄基)吡啶-4-胺。向烧瓶中加入2,6-二溴吡啶-4-胺(3.0g，11.91mmol)，然后用N2冲洗15分钟。加入无水DMF(25mL)，并将混合物冷却至0℃。加入氢化钠(在矿物油中的60％分散体，1.06g，26.5mmol)，并将反应混合物搅拌30分钟。逐滴加入4-甲氧基苄基氯(3.41mL，25.15mmol)，除去冷却浴，并将混合物在室温搅拌1h。将反应混合物用EtOAc(40mL)稀释，依次用水(6×30mL)和盐水(20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，将其通过重结晶纯化(将热己烷与少量EtOAc一起煮沸，然后冷却至室温，最后在冰箱中放置过夜)，得到标题化合物，为浅蓝色针状物(4.70g，80％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.06(d,J＝8.4Hz,4H),6.89(d,J＝8.4Hz,4H),6.73(s,2H),4.50(s,4H),3.81(s,6H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+493.0；tR＝3.01min。HPLC方法3(酸)。
步骤64-2：2,2'-(4-(双(4-甲氧基苄基)氨基)吡啶-2,6-二基)双(2-甲基丙烷腈)。如实施例7步骤2中一样，使用2,6-二溴-N,N-双(4-甲氧基苄基)吡啶-4-胺(0.671g，1.36mmol)、Xantphos(0.094g，0.16mmol)、Pd2烯丙基2Cl2(0.022g，4mol％)、2-氰基-2-甲基丙酸钾(0.494g，3.27mmol)和均三甲苯(3.2mL)，将其通过二氧化硅快速柱色谱纯化(己烷，然后用5：1己烷：EtOAc)，得到标题化合物，为无色粘稠油状物，其在静置时固化(0.463g，73％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.14(d,J＝8.8Hz,4H),6.88(d,J＝8.8Hz,4H),6.81(s,2H),4.62(s,4H),3.80(s,6H),1.64(s,12H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+469.4；tR＝3.06min。HPLC方法3(酸)。
步骤64-3：2,2'-(4-氨基吡啶-2,6-二基)双(2-甲基丙烷腈)。将三氟乙酸(22.0mL，过量)逐滴添加到2,2'-(4-(双(4-甲氧基苄基)氨基)吡啶-2,6-二基)双(2-甲基丙烷腈)(0.463g，0.988mmol)的DCM(20.0mL)溶液。将反应混合物加热至50℃持续48h；LCMS分析表明主要产物来自单4-甲氧基苄基脱保护。通过滴加NaHCO3饱和溶液来中和反应混合物(最终pH＝8–9)，并用DCM(30mL)稀释。用水(2×20mL)洗涤有机层，并用DCM(15mL)萃取初始水相。合并的有机萃取物经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗混合物。向粗混合物中加入Pd(OH)2(0.600g，10–20％Pd基底)、DCM(3.0mL)，最后加入MeOH(3.0mL)，并用H2吹扫烧瓶。将混合物在室温下剧烈搅拌3h，然后将烧瓶在空气中打开，并将混合物在减压下通过
Figure BDA0002776695470001051
垫过滤。将滤饼用另外的MeOH(20mL)和DCM(20mL)洗涤，将滤液减压浓缩，并将粗产物通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(6：1己烷：EtOAc，然后用5：1)，得到标题化合物，为无色油状物(0.070g，31％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.75(s,2H),4.43–4.28(br s,2H),1.69(s,12H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+229.2；tR＝2.42min。HPLC方法3(酸)。
步骤64-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2,6-双(2-氰基丙烷-2-基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将2,2'-(4-氨基吡啶-2,6-二基)双(2-甲基丙烷腈)(0.051g，0.22mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.043g，0.22mmol)、三乙胺(0.06mL，0.43mmol)溶于无水二噁烷(5.0mL)和DMF(0.5mL)中。将混合物在50℃加热过夜，然后冷却至室温。加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.042g，0.21mmol)和三乙胺(0.06mL，0.43mmol)，并将反应混合物在50℃加热2h。将反应混合物用EtOAc(15mL)稀释，依次用水(3×10mL)和盐水(10mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，将其通过二氧化硅快速柱色谱纯化(2：1己烷：EtOAc，然后用1：1、1:2和EtOAc)，由两次置换得到产物(0.026g，21％)。将中间体溶解在二噁烷(2.0mL)中，并逐滴加入4M HCl的二噁烷(2.0mL)溶液，并将混合物在室温下搅拌过夜。加入己烷(15mL)，将沉淀物过滤并干燥，得到标题化合物的盐酸盐，为白色粉末(0.018g，78％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.69(s,1H),7.93(s,2H),4.47(app d,J＝12.4Hz,1H),4.20–4.03(m,1H),3.99–3.82(m,1H),3.77–3.62(m,2H),2.28–2.14(m,1H),2.12–1.97(m,1H),1.91–1.82(m,2H),1.79(s,12H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+448.3；tR＝2.26min。HPLC方法3(酸)。
实施例65：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,3-二甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨 基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤65-1:3,3-二甲基吲哚啉-2-酮。在惰性气氛下，在-78℃下将nBuLi(1.6M的己烷溶液，9.3mL，14.95mmol)添加到3-甲基吲哚啉-2-酮(1.0g，6.79mmol)的无水THF(23mL)溶液中。将混合物在-78℃下搅拌30min。逐滴加入甲基碘(0.47mL，7.47mmol)，并将混合物在-78℃下搅拌另外30min，然后使其升温至室温并搅拌1.5h。将反应混合物用饱和的NH4Cl溶液(约40mL)淬灭，并用EtOAc(3×30mL)萃取。将有机相合并，用盐水洗涤，经MgSO4干燥、过滤并减压浓缩。残余物通过快速色谱法纯化[己烷：EtOAc(4：1)]，得到标题产物，为白色固体(477mg，44％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.75(s,1H),7.25-7.15(m,2H),7.04(app.t,J＝7.3Hz,1H),6.94(d,J＝8.1Hz,1H),1.41(s,6H)；m/z(ES-)(M-H)+160.0；tR＝1.96min。HPLC方法3(酸)。
步骤65-2：3,3-二甲基-5-硝基吲哚啉-2-酮。将3,3-二甲基吲哚啉-2-酮(477mg，2.96mmol)和H2SO4(95-98％，3.75mL)的混合物冷却至-40℃，同时剧烈搅拌。在-40℃下逐滴加入浓HNO3(90％，0.14mL，2.96mmol)的H2SO4(0.7mL)溶液。使反应混合物达到室温，并搅拌5h。将混合物倒入冰冷却的水(约150mL)溶液中，沉淀出浅绿色固体，将其通过过滤分离，用水(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。将沉淀物溶解在EtOAc(约30mL)中，有机相经MgSO4干燥，过滤，减压浓缩，干式装入柱中，并通过快速色谱法[己烷：EtOAc(3:2)]纯化，得到标题产物，为白色固体(253mg，41％)1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),8.16(br.s,1H),8.10(d,J＝2.3Hz,1H),7.00(d,J＝8.6Hz,1H),1.46(s,6H)；m/z(ES-)(M-H)+205.0；tR＝1.98min。HPLC方法3(酸)。
步骤65-3：5-氨基-3,3-二甲基吲哚啉-2-酮。将铁粉(341mg，6.11mmol)加入到HCl(36％，0.05mL，0.61mmol)的EtOH(2.00mL)溶液中。将悬浮液在65℃下搅拌2h。使悬浮液冷却至55℃，并添加NH4Cl溶液(25％，1.50mL)。将3,3-二甲基-5-硝基吲哚啉-2-酮(214mg，1.22mmol)的EtOH(1mL)溶液滴加到反应混合物中，并在55℃下搅拌30分钟。使混合物达到室温，并用EtOH(4mL)稀释，通过
Figure BDA0002776695470001071
过滤，并用更多EtOH(约40mL)洗涤。使用饱和的NaHCO3水溶液将滤液调至中性pH，并减压除去溶剂。将残余物溶于EtOAc(约20mL)中，并用饱和的NaHCO3水溶液(约10mL)和盐水(约10mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到黄色固体，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.01(br.s,1H),6.72(d,J＝8.1Hz,1H),6.59(d,J＝2.2Hz,1H),6.52(dd,J＝8.1,2.2Hz,1H),3.54(br.s,2H),1.36(s,6H)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ184.1,141.9,137.7,131.9,113.9,110.9,110.5,45.0,24.4。
步骤65-4：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((3,3-二甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(55mg，0.28mmol)、5-氨基-3,3-二甲基吲哚啉-2-酮(50mg，0.28mmol)和三乙胺(0.04mL，0.31mmol)在1,4-二噁烷(5.6mL)和DMF(1mL)中的混合物在50℃下搅拌5h。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(56mg，0.28mmol)和三乙胺(0.04mL，0.31mmol)，并将反应混合物在50℃加热3h。使所得混合物达到室温，并在减压下浓缩。将残余物溶于EtOAc(20mL)中，并用盐水(3×20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，干式装入柱中，并通过快速色谱法[梯度己烷：EtOAc(3:7→1:9)]纯化，得到标题产物，为白色固体(62mg，45％)。该化合物直接用于下一步。
步骤65-5：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,3-二甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((3,3-二甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(49mg，0.10mmol)悬浮在二噁烷(5mL)中，并加入4N HCl的二噁烷(3mL)溶液。将悬浮液在室温搅拌过夜。加入Et2O(约4mL)，并将沉淀物减压过滤，用Et2O(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。分离出标题产物，为白色固体(35mg，89％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.51(br,s,1H),7.52(br.s,1H),7.45-7.35(m,1H),6.99(d,J＝8.3Hz,1H),4.35-4.24(m,1H),4.12–3.91(m,1H),3.76-3.62(m,1H),3.62–3.52(m,1H),3.50–3.40(m,1H),2.22-2.10(m,1H),1.99-1.86(m,1H),1.85-1.69(m,2H),1.36(s,6H)；m/z(ES+)(M+H)+396.3；tR＝1.90min。HPLC方法3(碱)。
实施例66：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((7-溴-3,3-二甲基-2-氧代吲哚啉-5- 基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤66-1：7-溴-3,3-二甲基-5-硝基吲哚啉-2-酮。在室温下将NBS(267mg，1.50mmol)分批添加到3,3-二甲基-5-硝基吲哚啉-2-酮(206mg，1.00mmol)的H2SO4(2mL)溶液中，并搅拌1.5h。将反应混合物倒入冰冷却的水(约150mL)溶液中，沉淀出米色固体，将其通过过滤分离，用水(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。将沉淀物溶解在EtOAc(约30mL)中，有机相经MgSO4干燥，过滤，减压浓缩，干式装入柱中，并通过快速色谱法[己烷：EtOAc(7:3)]纯化，得到标题产物，为白色固体(103mg，36％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.73(br.s,1H),8.35(d,J＝2.1Hz,1H),8.04(d,J＝2.1Hz,1H),1.48(s,6H)；m/z(ES-)(M-H)+282.2(对于79Br)；tR＝2.23min。HPLC方法3(碱)。
步骤66-2：5-氨基-7-溴-3,3-二甲基吲哚啉-2-酮。将锌粉(157mg，2.40mmol)分批添加到7-溴-3,3-二甲基-5-硝基吲哚啉-2-酮(84mg，0.30mmol)和NH4Cl(253mg，4.73mmol)在THF:H2O(5：1，5mL)中的冰冷却溶液中。使混合物达到室温，并搅拌30分钟。将反应混合物通过
Figure BDA0002776695470001081
过滤，并用EtOAc(约20mL)洗涤。滤液经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到黄色固体，其无需进一步纯化即可用于下一步骤(75mg，98％)。1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ7.89(s,1H),6.73(s,1H),6.66(s,1H),1.30(s,6H)；m/z(ES+)(M+H)+255.0；tR＝0.81min。HPLC方法3(酸)。
步骤66-3：叔丁基(S)-(1-(4-((7-溴-3,3-二甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(50mg，0.26mmol)、5-氨基-7-溴-3,3-二甲基氧代吲哚啉-2-酮(66mg，0.26mmol)和三乙胺(0.04mL，0.29mmol)在1,4-二噁烷(5.2mL)和DMF(1mL)中的混合物在50℃下搅拌2.5h。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(52mg，0.26mmol)和三乙胺(0.04mL，0.29mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。使所得混合物达到室温，并在减压下浓缩。将残余物溶于EtOAc(20mL)中，并用盐水(3×20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，干式装入柱中，并通过快速色谱法[梯度己烷：EtOAc(1：1→1：4)]纯化，得到标题产物，为白色固体(75mg，50％)。该化合物直接用于下一步。
步骤66-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((7-溴-3,3-二甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将叔丁基(S)-(1-(4-((7-溴-3,3-二甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(75mg，0.13mmol)悬浮于二噁烷(5mL)中，并加入4N HCl的二噁烷(3mL)溶液。将悬浮液在室温搅拌过夜。加入Et2O(约4mL)，并将沉淀物减压过滤，用Et2O(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。分离出标题产物的盐酸盐，为白色固体(60mg，91％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.64(s,1H),10.68(s,1H),8.71(s,1H),8.31(br.s,2H),7.70(s,1H),7.58(s,1H),4.78-4.14(m,3H),4.09-3.95(m,1H),3.67-3.34(m,2H),3.24(app.br.s,1H),2.02(app.br.s,1H),1.91-1.66(m,2H),1.58(app.br.s,1H),1.28(s,6H)；m/z(ES+)(M+H)+473.9(对于79Br)；tR＝1.75min。HPLC方法3(酸)。
实施例67：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((7-异丙基-3,3-二甲基-2-氧代吲哚 啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤67-1：3,3-二甲基-5-硝基-7-(丙-1-烯-2-基)吲哚啉-2-酮。将7-溴-3,3-二甲基-5-硝基吲哚啉-2-酮(100mg，0.35mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(0.13mL，0.70mmol)和K2CO3(145mg，1.05mmol)在二噁烷：H2O(4：1，6mL)中的混合物用N2气流吹扫20分钟。加入双(三苯基膦)二氯化钯(II)(25mg，0.04mmol)，并将反应混合物在100℃下搅拌1h。将所得混合物在减压下浓缩，并将残余物溶于EtOAc(约30mL)中，并用盐水(3×20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，在减压下浓缩，并通过快速色谱法[己烷∶EtOAc(4∶1)]纯化，得到标题产物，为无色油状物(68mg，79％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.48(br.s,1H),8.09(d,J＝2.3Hz,1H),7.98(d,J＝2.3Hz,1H),5.46(app.s,1H),5.26-5.18(m,1H),2.18(s,3H),1.46(s,6H)；m/z(ES-)(M-H)+245.0；tR＝2.31min。HPLC方法3(酸)。
步骤67-2：5-氨基-7-异丙基-3,3-二甲基吲哚啉-2-酮。将3,3-二甲基-5-硝基-7-(丙-1-烯-2-基)吲哚啉-2-酮(68mg，0.28mmol)和碳载钯(10wt.％，100mg，0.09mmol)在EtOH(6mL)中的混合物在室温在H2气氛(1atm)下搅拌2h。。将反应混合物用Ar冲洗，通过
Figure BDA0002776695470001091
过滤，并用MeOH(约20mL)洗涤。将滤液减压浓缩，残余物不经进一步纯化直接用于下一步(60mg，99％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.90(br.s,1H),6.66-6.14(m,2H),3.26(br.s,2H),2.97-2.82(m,1H),1.36(s,6H),1.23(d,J＝6.9Hz,6H)；m/z(ES+)(M+H)+219.0；tR＝0.77min。HPLC方法3(酸)。
步骤67-3：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((7-异丙基-3,3-二甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(54mg，0.28mmol)、5-氨基-7-异丙基-3,3-二甲基吲哚啉-2-酮(61mg，0.28mmol)和三乙胺(0.04mL，0.31mmol)在1,4-二噁烷(5.0mL)和DMF(1mL)中的混合物在50℃下搅拌过夜。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(56mg，0.28mmol)和三乙胺(0.04mL，0.31mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。使所得混合物达到室温，并在减压下浓缩。将残余物溶于EtOAc(20mL)中，并用盐水(3×20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，干式装入柱中，并通过快速色谱法[梯度己烷：EtOAc(3:7→1:9)]纯化，得到标题产物，为白色固体(84mg，56％)。该化合物直接用于下一步。
步骤67-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((7-异丙基-3,3-二甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((7-异丙基-3,3-二甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(84mg，0.16mmol)悬浮于二噁烷(5mL)中，并加入4N HCl的二噁烷(3mL)溶液。将悬浮液在室温搅拌过夜。加入Et2O(约4mL)，并将沉淀物减压过滤，用Et2O(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。分离出标题产物的盐酸盐，为白色固体(55mg，81％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.73(br.s,1H),10.46(s,1H),8.70(s,1H),8.48-8.32(m,3H),7.69(br.s,1H),7.41(s,1H),7.29(s,1H),4.06-3.91(m,1H),3.82-3.51(m,2H),3.29(app.br.s,1H),3.11(sept,J＝6.5Hz,1H),2.08-1.94(m,1H),1.92-1.69(m,2H),1.70-1.50(m,1H),1.26(s,6H),1.18(d,J＝6.5Hz,6H)；m/z(ES+)(M+H)+438.0；tR＝1.77min。HPLC方法3(酸)。
实施例68：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((7-环己基-3,3-二甲基-2-氧代吲哚 啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤68-1：7-(环己-1-烯-1-基)-3,3-二甲基-5-硝基吲哚啉-2-酮。将7-溴-3,3-二甲基-5-硝基吲哚啉-2-酮(150mg，0.53mmol)、环己-1-烯-1-基硼酸(133mg，1.06mmol)和K2CO3(221mg，1.59mmol)在二噁烷：H2O(4：1，10mL)中的混合物用氮气流脱气20分钟。加入双(三苯基膦)二氯化钯(II)(37mg，0.05mmol)，并将反应混合物在100℃下搅拌2h。将所得混合物在减压下浓缩，并将残余物溶于EtOAc(约30mL)中，并用盐水(3×20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，在减压下浓缩，并通过快速色谱法[己烷∶EtOAc(4∶1)]纯化，得到标题产物，为无色油状物(101mg，67％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.50(br.s,1H),8.03(d,J＝2.2Hz,1H),7.95(d,J＝2.2Hz,1H),6.00-5.94(m,1H),2.40-2.31(m,2H),2.32-2.22(m,2H),1.90-1.79(m,2H),1.80-1.69(m,2H),1.44(s,6H)；m/z(ES-)(M-H)+284.9；tR＝2.59min。HPLC方法3(碱)。
步骤68-2：5-氨基-7-环己基-3,3-二甲基吲哚啉-2-酮。将7-(环己-1-烯-1-基)-3,3-二甲基-5-硝基吲哚啉-2-酮(60mg，0.21mmol)和钯碳(10wt.％，23mg，0.02mmol)在DCM∶MeOH(1∶1，4mL)中的混合物在室温下在H2气氛(1atm)下搅拌2h。将反应混合物用Ar冲洗，通过
Figure BDA0002776695470001111
过滤，并用MeOH(约10mL)和DCM(约10mL)洗涤。将滤液减压浓缩，残余物快速变黑，将其不经进一步纯化直接用于下一步(54mg，99％)。
步骤68-3：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((7-环己基-3,3-二甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(40mg，0.21mmol)、5-氨基-7-环己基-3,3-二甲基吲哚啉-2-酮(54mg，0.21mmol)和三乙胺(0.03mL，0.23mmol)在1,4-二噁烷(4.0mL)中的混合物在50℃下搅拌过夜。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(42mg，0.21mmol)和三乙胺(0.03mL，0.23mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。使所得混合物达到室温，在减压下浓缩，干式加载至柱中，并通过快速色谱法[梯度己烷：EtOAc(2：3→1：4)]纯化，得到标题产物，为白色固体(46mg，38％)。该化合物直接用于下一步。
步骤68-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((7-环己基-3,3-二甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((7-环己基-3,3-二甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(46mg，0.08mmol)悬浮于二噁烷∶Et2O(1∶1，4mL)中，并加入4N HCl的二噁烷(2mL)溶液。将悬浮液在室温搅拌过夜。加入Et2O(约4mL)，并将沉淀物减压过滤，用Et2O(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。将所得固体溶于MeOH(约5mL)中，并减压浓缩，得到标题产物的盐酸盐，为白色固体(36mg，95％)。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.72(br.s,1H),10.50(br.s,1H),8.70(br.s,1H),8.54-8.20(m,3H),7.75-7.55(m,1H),7.42-7.25(m,2H),4.50-4.10(m,3H),4.06-3.89(m,2H),3.78-3.47(m,2H),3.29(app.br.s,1H),2.73(app.br.s,1H),2.11-1.94(m,1H),1.87-1.64(m,6H),1.59(app.br.s,1H),1.51-1.28(m,3H),1.25(s,6H)；m/z(ES+)(M+H)+478.0；tR＝2.17min。HPLC方法3(碱)。
实施例69：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((7-(环己-1-烯-1-基)-3,3-二甲基-2- 氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤69-1：5-氨基-7-(环己-1-烯-1-基)-3,3-二甲基吲哚啉-2-酮。将锌粉(99mg，1.52mmol)分批添加到7-(环己-1-烯-1-基)-3,3-二甲基-5-硝基吲哚啉-2-酮(55mg，0.19mmol)和NH4Cl(165mg，3.08mmol)在THF:H2O(5：1，3mL)中的冰冷却溶液中。使混合物达到室温，并搅拌5h。将反应混合物通过
Figure BDA0002776695470001121
过滤，并用EtOAc(约20mL)洗涤。滤液经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到黄色固体，其无需进一步纯化即可用于下一步骤(51mg，99％)。1HNMR(300MHz,氯仿-d)δ8.25(br.s,1H),6.51(d,J＝2.2Hz,1H),6.44(d,J＝2.2Hz,1H),5.88-5.76(m,1H),3.58(br.s,2H),2.31-2.10(m,4H),1.82-1.59(m,4H),1.33(s,6H)；m/z(ES+)(M+H)+257.1；tR＝2.14min。HPLC方法3(碱)。
步骤69-2：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((7-(环己-1-烯-1-基)-3,3-二甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(38mg，0.20mmol)、5-氨基-7-(环己-1-烯-1-基)-3,3-二甲基吲哚啉-2-酮(51mg，0.20mmol)和三乙胺(0.03mL，0.22mmol)在1,4-二噁烷(4.0mL)中的混合物在50℃下搅拌过夜。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(40mg，0.20mmol)和三乙胺(0.03mL，0.22mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。使所得混合物达到室温，在减压下浓缩，干式加载至柱中，并通过快速色谱法[梯度己烷：EtOAc(2：3→3：7)]纯化，得到标题产物，为白色固体(57mg，50％)。该化合物直接用于下一步。
步骤69-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((7-(环己-1-烯-1-基)-3,3-二甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((7-(环己-1-烯-1-基)-3,3-二甲基-2-氧代吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(57mg，0.10mmol)悬浮于二噁烷∶Et2O(1∶1，4mL)中，并加入4N HCl的二噁烷(2mL)溶液。将悬浮液在室温搅拌过夜。加入Et2O(约4mL)，并将沉淀物减压过滤，用Et2O(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。分离出标题产物的盐酸盐，为白色固体(45mg，94％)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.53(br.s,1H),7.44(br.s,1H),7.23(br.s,1H),5.93-5.73(m,1H),4.33-4.22(m,1H),4.07(app.br.s,1H),3.77(app.br.s,1H),3.66-3.58(m,1H),3.57-3.44(m,1H),2.37-2.28(m,2H),2.29-2.15(m,3H),2.02-1.90(m,1H),1.90-1.69(m,6H),1.39(s,6H)；m/z(ES+)(M+H)+476.0；tR＝2.17min。HPLC方法3(碱)。
实施例70：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,3-二甲基-2-氧代-7-苯基吲哚啉- 5-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤70-1：3,3-二甲基-5-硝基-7-苯基吲哚啉-2-酮。将7-溴-3,3-二甲基-5-硝基吲哚啉-2-酮(206mg，0.72mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-苯基-1,3,2-二氧杂硼烷(166mg，0.81mmol)和K2CO3(170mg，1.23mmol)在二噁烷：H2O(4：1，7mL)中的混合物用氮气流脱气20分钟。加入双(三苯基膦)二氯化钯(II)(29mg，0.04mmol)，并将反应混合物在100℃下搅拌2h。将所得混合物在减压下浓缩，并将残余物溶于EtOAc(约30mL)中，并用盐水(3×20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，在减压下浓缩，并通过快速色谱法[己烷∶EtOAc(4∶1)]纯化，得到标题产物，为黄色固体(171mg，84％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.23(d,J＝2.2Hz,1H),8.08(d,J＝2.2Hz,1H),8.00(br.s,1H),7.57-7.51(m,2H),7.50-7.43(m,3H),1.49(s,6H)；m/z(ES-)(M-H)+280.9；tR＝2.43min。HPLC方法3(碱)。
步骤70-2：5-氨基-3,3-二甲基-7-苯基吲哚啉-2-酮。将锌粉(185mg，2.84mmol)分批添加到3,3-二甲基-5-硝基-7-苯基吲哚啉-2-酮(100mg，0.35mmol)和NH4Cl(300mg，5.60mmol)在THF:H2O(5：1，6mL)中的冰冷却溶液中。使混合物达到室温，并搅拌5h。将反应混合物通过
Figure BDA0002776695470001131
过滤，并用EtOAc(约20mL)洗涤。滤液经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到黄色固体，其无需进一步纯化即可用于下一步骤(85mg，99％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.63(br.s,1H),7.47-7.39(m,4H),7.38-7.32(m,1H),6.62-6.54(m,2H),3.50(br.s,2H),1.39(s,6H)；m/z(ES+)(M+H)+253.0；tR＝2.00min。HPLC方法3(碱)。
步骤70-3：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((3,3-二甲基-2-氧代-7-苯基吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(67mg，0.35mmol)、5-氨基-3,3-二甲基-7-苯基吲哚啉-2-酮(98mg，0.35mmol)和三乙胺(0.05mL，0.38mmol)在1,4-二噁烷(7.0mL)中的混合物在50℃下搅拌2h。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(70mg，0.35mmol)和三乙胺(0.05mL，0.38mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。使所得混合物达到室温，在减压下浓缩，干式加载至柱中，并通过快速色谱法[梯度己烷：EtOAc(2：3→1：4)]纯化，得到标题产物，为白色固体(129mg，65％)。该化合物直接用于下一步。
步骤70-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,3-二甲基-2-氧代-7-苯基吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((3,3-二甲基-2-氧代-7-苯基吲哚啉-5-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(129mg，0.23mmol)悬浮于二噁烷∶Et2O(1∶1，4mL)中，并加入4N HCl的二噁烷(2mL)溶液。将悬浮液在室温搅拌过夜。加入Et2O(约4mL)，并将沉淀物减压过滤，用Et2O(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。分离出标题产物的盐酸盐，为白色固体(79mg，74％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.86(br.s,1H),10.29(s,1H),8.73(s,1H),8.54-8.27(m,3H),7.79-7.58(m,2H),7.55-7.43(m,5H),7.43-7.32(m,1H),4.30(app.br.s,2H),4.05-3.87(m,1H),3.72(app.br.s,1H),3.31(app.br.s,1H),2.13-1.94(m,1H),1.89-1.70(m,2H),1.64-1.51(m,1H),1.32(s,6H)；m/z(ES+)(M+H)+471.9；tR＝2.07min。HPLC方法3(碱)。
实施例71：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2'-氧代螺[环己烷-1,3'-吲哚啉]- 5'-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤71-1：螺[环己烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮。在-78℃下，将双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂(1M的己烷溶液，50mL，50mmol)滴加到2-氧吲哚(3.0g，23mmol)的无水THF(70mL)溶液中。将混合物升至-50℃，并在该温度下搅拌30分钟。将混合物冷却至-78℃，并加入1,5-二溴戊烷(3.0mL，23mmol)。将反应混合物在室温搅拌3h，然后在回流下搅拌4h。冷却后，将混合物在Et2O和饱和NH4Cl之间分层。将有机层浓缩，并通过快速色谱法[己烷∶EtOAc(95∶5)]纯化，得到标题化合物，为白色固体(2.7g，58％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.06(br.s,1H),7.45(d,J＝7.5Hz,1H),7.21(app.td,J＝7.7,1.3Hz,1H),7.02(app.td,J＝7.6,1.2Hz,1H),6.91(d,J＝7.7Hz,1H),2.01-1.55(m,10H)；m/z(ES+)(M+H)+200.1；tR＝2.34min。HPLC方法3(酸)。
步骤71-2：5'-硝基螺[环己烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮。将螺[环己烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(750mg，3.73mmol)和H2SO4(95-98％，5.0mL)的混合物冷却至-20℃，同时剧烈搅拌。在-20℃下逐滴加入浓HNO3(90％，0.17mL，3.73mmol)的H2SO4(0.7mL)溶液。使反应混合物达到室温，并搅拌2h。将混合物倒入冰冷却的水(约150mL)溶液中，沉淀出浅绿色固体，将其通过过滤分离，用水(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。将沉淀物溶解在EtOAc(约30mL)中，有机相经MgSO4干燥，过滤，减压浓缩，干式装入柱中，并通过快速色谱法[己烷：EtOAc(4：1)]纯化，得到标题产物，为灰白色固体(340mg，37％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.56(br.s,1H),8.34(s,1H),8.24(d,J＝8.6Hz,1H),7.08(d,J＝8.6Hz,1H),2.15-1.50(m,10H)；m/z(ES-)(M-H)+245.0；tR＝2.34min。HPLC方法3(酸)。
步骤71-3：5'-氨基螺[环己烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮。将锌粉(212mg，3.25mmol)分批添加到5'-硝基螺[环己烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(100mg，0.41mmol)和NH4Cl(348mg，6.50mmol)在THF:H2O(5：1，7mL)中的冰冷却溶液中。使混合物达到室温，并搅拌2h。将反应混合物通过
Figure BDA0002776695470001151
过滤，并用EtOAc(约20mL)洗涤。滤液经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到黄色固体，其无需进一步纯化即可用于下一步骤(89mg，99％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.75(br.s,1H),6.87(d,J＝2.2Hz,1H),6.72(d,J＝8.1Hz,1H),6.55(dd,J＝8.1,2.2Hz,1H),3.48(br.s,2H),2.01-1.80(m,4H),1.77-1.52(m,6H)；m/z(ES+)(M+H)+217.0；tR＝1.84min。HPLC方法3(酸)。
步骤71-4：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((2'-氧代螺[环己烷-1,3'-吲哚啉]-5'-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(79mg，0.41mmol)、5'-氨基螺[环己烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(88mg，0.41mmol)和三乙胺(0.06mL，0.45mmol)在1,4-二噁烷(7mL)中的混合物在50℃下搅拌2h。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(82mg，0.41mmol)和三乙胺(0.06mL，0.41mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。使所得混合物达到室温，在减压下浓缩，干式加载至柱中，并通过快速色谱法[梯度己烷：EtOAc(2：3→3：7)]纯化，得到标题产物，为白色固体(89mg，40％)。该化合物直接用于下一步。
步骤71-5：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2'-氧代螺[环己烷-1,3'-吲哚啉]-5'-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((2'-氧代螺[环己烷-1,3'-吲哚啉]-5'-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(89mg，0.17mmol)悬浮于二噁烷∶Et2O(1∶1，4mL)中，并加入4N HCl的二噁烷(2mL)溶液。将悬浮液在室温搅拌过夜。加入Et2O(约4mL)，并将沉淀物减压过滤，用Et2O(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。分离出标题产物的盐酸盐，为白色固体(60mg，83％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.84(br.s,1H),10.44(s,1H),8.71(s,1H),8.64-8.37(m,4H),7.90-7.18(m,2H),7.05-6.85(m,1H),4.36-4.15(s,1H),4.10-3.92(m,1H),3.79-3.45(m,2H),3.38-3.23(m,1H),3.10-2.99(m,1H),2.12-1.95(m,1H),1.95-1.73(m,3H),1.74-1.46(m,9H)；m/z(ES+)(M+H)+436.0；tR＝1.99min。HPLC方法3(酸)。
实施例72：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((7'-异丙基-2'-氧代螺[环己烷-1,3'- 吲哚啉]-5'-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤72-1：7'-溴-5'-硝基螺[环己烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮。在室温下将NBS(320mg，1.86mmol)分批添加到5'-硝基螺[环己烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(200mg，0.82mmol)的H2SO4(95-98％，5mL)溶液中，并搅拌48h。将反应混合物倒入冰冷却的水(约150mL)溶液中，沉淀出米色固体，将其通过过滤分离，用水(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。将沉淀物溶解在EtOAc(约30mL)中，有机相经MgSO4干燥，过滤，减压浓缩，干式装入柱中，并通过快速色谱法[己烷：EtOAc(4：1)]纯化，得到标题产物，为淡橙色固体(250mg，93％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.63(br.s,1H),8.36(d,J＝2.0Hz,1H),8.22(d,J＝2.0Hz,1H),2.06-1.96(m,2H),1.96-1.87(m,2H),1.74-1.66(m,6H)；m/z(ES-)(M-H)+322.8(对于79Br)；tR＝2.45min。HPLC方法3(碱)。
步骤72-2：5'-硝基-7'-(丙-1-烯-2-基)螺[环己烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮。将7'-溴-5'-硝基螺[环己烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(93mg，0.29mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(0.08mL，0.43mmol)和K2CO3(120mg，0.87mmol)在二噁烷：H2O(4：1，5mL)中的混合物用氮气流脱气20分钟。加入双(三苯基膦)二氯化钯(II)(21mg，0.03mmol)，并将反应混合物在100℃下搅拌2h。将所得混合物在减压下浓缩，并将残余物溶于EtOAc(约30mL)中，并用盐水(3×20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，在减压下浓缩，并通过快速色谱法[己烷∶EtOAc(9∶1)]纯化，得到标题产物，为棕色固体(72mg，87％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.30(br.s,1H),8.17(d,J＝2.2Hz,1H),8.10(d,J＝2.2Hz,1H),5.48-5.41(m,1H),5.20-5.16(m,1H),2.17(s,3H),2.10-1.96(m,2H),1.96-1.84(m,2H),1.83-1.63(m,6H)；m/z(ES-)(M-H)+245.0；tR＝2.57min。HPLC方法3(碱)。
步骤72-3：5'-氨基-7'-(丙-1-烯-2-基)螺[环己烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮。在室温在H2气氛(1atm)下将5'-硝基-7'-(丙-1-烯-2-基)螺[环己烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(72mg，0.25mmol)和钯碳(10wt.％，26mg，0.02mmol)在DCM∶MeOH(1∶1，4mL)中的混合物搅拌过夜。在这段时间之后，LCMS分析表明仅硝基被还原，而异戊二烯保持不变。将反应混合物用Ar冲洗，通过
Figure BDA0002776695470001171
过滤，并用MeOH(约10mL)和DCM(约10mL)洗涤。将滤液减压浓缩，残余物不经进一步纯化直接用于下一步。
步骤72-4：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((2'-氧代-7'-(丙-1-烯-2-基)螺[环己烷-1,3'-吲哚啉]-5'-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(48mg，0.25mmol)、5'-氨基-7'-(丙-1-烯-2-基)螺[环己烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(64mg，0.25mmol)和三乙胺(0.04mL，0.27mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的混合物在50℃下搅拌1h。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(50mg，0.25mmol)和三乙胺(0.04mL，0.27mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。使所得混合物达到室温，在减压下浓缩，干式加载至柱中，并通过快速色谱法[梯度己烷：EtOAc(2：3→3：7)]纯化，得到标题产物，为白色固体(59mg，40％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.88(br.s,1H),8.41(br.s,1H),8.25(s,1H),7.55(s,1H),7.34(s,1H),6.22(br.s,2H),5.30-5.26(m,1H),5.12-5.08(m,1H),4.79-4.57(m,1H),4.38-3.86(m,2H),3.76-3.29(m,3H),2.50-2.22(m,1H),2.01-1.80(m,4H),1.79-1.48(m,10H),1.40(s,9H)；m/z(ES+)(M+H)+576.3；tR＝2.56min。HPLC方法3(碱)。
步骤72-5：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((7'-异丙基-2'-氧代螺[环己烷-1,3'-吲哚啉]-5'-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。在室温下在H2气氛(1atm)下将叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((2'-氧代-7'-(丙-1-烯-2-基)螺[环己烷-1,3'-吲哚啉]-5'-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(59mg，0.10mmol)和钯碳(10wt.％，15mg，0.01mmol)的DCM∶MeOH(1∶1，4mL)溶液搅拌2h。将反应混合物用Ar冲洗，通过
Figure BDA0002776695470001172
过滤，并用MeOH(约10mL)和DCM(约10mL)洗涤。将滤液减压浓缩，并将残余物悬浮在二噁烷∶Et2O(1∶1，4mL)中，并加入4N HCl的二噁烷溶液(2mL)。将悬浮液在室温搅拌过夜。加入Et2O(约4mL)，并将沉淀物减压过滤，用Et2O(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。分离出标题产物的盐酸盐，为白色固体(31mg，67％)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.50(br.s,1H),7.46(s,1H),7.32(s,1H),4.29-4.19(m,1H),4.14-3.98(m,1H),3.81-3.68(m,1H),3.64-3.55(s,1H),3.52-3.43(m,1H),3.06(sept,J＝6.8Hz,1H),2.22-2.12(s,1H),2.02-1.89(s,3H),1.91-1.54(m,10H),1.25(d,J＝6.8Hz,6H)；m/z(ES-)(M-H)+478.4；tR＝2.16min。HPLC方法3(酸)。
实施例73：2-((S)-3-氨基哌啶-1-基)-4-(((3-甲基磺酰亚胺基)苯基)氨基)嘧 啶-5-甲酰胺
步骤73-1：3-(甲基亚磺酰基)苯胺。将3-(甲基硫)苯胺(714mg，5.48mmol)在H2O2(30v/v％的水溶液，0.58mL，5.64mmol)中的混合物在70℃搅拌1h。将所得混合物用NaCl饱和，并用EtOAc(3×25mL)萃取。将合并的有机萃取物用饱和的Na2S2O3水溶液(15mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥、过滤并减压浓缩。残余物通过快速色谱法纯化[DCM∶MeOH(20∶1)]，得到标题产物，为无色油状物(268mg，34％)。该化合物直接用于下一步。
步骤73-2：(rac)-(3-氨基苯基)(亚胺基)(甲基)-λ6-硫酮(sulfanone)。在室温下，将叠氮化钠(250mg，3.84mmol)添加到3-(甲基亚磺酰基)苯胺(307mg，1.98mmol)在Eaton试剂(五氧化二磷，7.7wt.％的甲磺酸溶液，4.5mL)中的混合物中。将混合物在50℃下搅拌，释放出N2。2h后。将混合物冷却至0℃，并滴加饱和的NaHCO3水溶液直至中性pH。将混合物用DCM∶MeOH(10∶1，5×20mL)萃取，用盐水(约20mL)洗涤，经MgSO4干燥、过滤并在减压下浓缩。残余物通过快速色谱法纯化[DCM∶MeOH(20∶1)]，得到标题产物，为灰白色固体(125mg，37％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.32-7.21(m,3H),6.88-6.80(m,1H),3.47(br.s,1H),3.05(s,3H)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ147.5,144.2,130.2,119.1,116.9,113.3,46.0。
步骤73-3：叔丁基((3S)-1-(5-氨基甲酰基-4-((3-(S-甲基磺酰亚胺基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(100mg，0.52mmol)、(3-氨基苯基)(亚胺基)(甲基)-λ6-硫酮(89mg，0.52mmol)和三乙胺(0.08mL，0.57mmol)在1,4-二噁烷(10mL)和DMF(1mL)中的混合物在50℃下搅拌2h。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(104mg，0.52mmol)和三乙胺(0.08mL，0.57mmol)，并将反应混合物在50℃加热2h。使所得混合物达到室温，在减压下浓缩。将残余物溶于EtOAc(20mL)中，并用盐水(3×20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，干式装入柱中，并通过快速色谱法[DCM∶MeOH(95∶5)]纯化，得到标题产物，为非对映异构体的混合物。该化合物直接用于下一步。
步骤73-4：2-((S)-3-氨基哌啶-1-基)-4-(((3-甲基磺酰亚胺基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将叔丁基((3S)-1-(5-氨基甲酰基-4-((3-(S-甲基磺酰亚胺基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(69mg，0.14mmol)悬浮于二噁烷(5mL)中，并加入4N HCl的二噁烷(3mL)溶液。将悬浮液在室温搅拌过夜。加入Et2O(约4mL)，并将沉淀物减压过滤，用Et2O(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。分离出标题产物的盐酸盐，为非对映异构体的不可分离混合物(49mg，88％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.27(br.s,1H),9.00-8.22(m,7H),8.10-7.73(s,3H),4.70-4.09(m,2H),4.00(s,3H),3.77-3.04(m,3H),2.13-1.99(m,1H),1.96-1.65(m,2H),1.65-1.45(m,1H)；m/z(ES+)(M+H)+390.0；tR＝1.43min。HPLC方法3(酸)。
实施例74：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((4-羟基-3,5-二异丙基苯基)氨基)嘧 啶-5-甲酰胺
步骤74-1：2,6-二异丙基-4-硝基苯酚。将2,6-二异丙基苯酚(2.0mL，10.79mmol)溶解在己烷(10mL)中，并冷却至0℃。在搅拌下缓慢逐滴加入70％硝酸(0.7mL)，然后除去冷却浴，并将反应混合物在室温搅拌1h。将得到的沉淀物过滤并干燥，得到标题化合物，为浅黄色固体(2.02g，84％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.88(s,2H),4.09–3.87(br s,1H),3.34(sept,J＝6.8Hz,2H),1.19(d,J＝6.8Hz,12H).LCMS:m/z(ES-)(M-H)+222.0；tR＝1.65min。HPLC方法3(酸)。
步骤74-2：2,6-二异丙基-4-氨基苯酚。按照实施例5步骤2的方法制备，使用铁粉(1.12g，20.05mmol)、EtOH(6.50mL)、浓HCl(水溶液)(0.17mL)、25％NH4Cl(水溶液)(3.26mL)和2,6-二异丙基-4-硝基苯酚(0.400g，1.79mmol)，通过快速柱色谱法纯化(4：1己烷：EtOAc)，得到标题化合物(0.090g，35％)，为黄色粘性油，其颜色迅速变黑(样品储存在冰箱冰柜中，并在24h内使用)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.44(s,2H),3.12(sept,J＝6.8Hz,2H),1.23(d,J＝6.8Hz,12H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+194.1；tR＝2.12min。HPLC方法3(酸)。
步骤74-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((4-羟基-3,5-二异丙基苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将2,6-二异丙基-4-氨基苯酚(0.085g，0.44mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.084g，0.44mmol)、三乙胺(0.13mL，0.93mmol)溶于无水二噁烷(5.0mL)和DMF(1.0mL)。将混合物在50℃加热2h，然后冷却至室温。加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.088g，0.44mmol)和三乙胺(0.13mL，0.93mmol)，并将反应混合物在50℃加热1h。将反应混合物用EtOAc(15mL)稀释，依次用水(3×10mL)和盐水(10mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，将其通过二氧化硅快速柱色谱纯化(1：4己烷：EtOAc)，由两次置换得到产物。将中间体溶解在Et2O(10.0mL)中，并逐滴加入4M HCl的二噁烷(5.0mL)溶液，并将混合物在室温下搅拌过夜。加入己烷(15mL)，将沉淀物过滤并干燥，得到标题化合物的盐酸盐，为淡黄色粉末(0.154g，80％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.48(s,1H),7.22(s,2H),4.26(dd,J＝13.6,3.2Hz,1H),4.18–3.97(m,1H),3.84–3.71(m,1H),3.65–3.77(m,1H),3.54–3.44(m,1H),3.36(sept,J＝6.8Hz,2H),2.23–2.13(m,1H),1.98–1.89(m,1H),1.88–1.71(m,2H),1.23(d,J＝6.8Hz,12H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+440.0；tR＝1.93min。HPLC方法3(酸)。
实施例75：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-二异丙基-4-甲氧基苯基)氨基) 嘧啶-5-甲酰胺
步骤75-1：1,3-二异丙基-2-甲氧基-5-硝基苯。将2,6-二异丙基-4-氨基苯酚(0.287g，1.29mmol)加入到烧瓶中，然后将其用N2冲洗15分钟。加入无水DMF(5.0mL)，并将混合物冷却至0℃。加入氢化钠(在矿物油中的60％分散体，0.154g，3.85mmol)，并将反应混合物搅拌30分钟。逐滴加入甲基碘(0.24mL，3.86mmol)，除去冷却浴，并将混合物在室温搅拌过夜。将反应混合物用EtOAc(40mL)稀释，依次用水(7×30mL)和盐水(20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥、过滤并减压浓缩，得到粗产物，不需要进一步纯化(0.315g，定量)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.99(s,2H),3.80(s,3H),3.36(sept,J＝6.8Hz,2H),1.27(d,J＝6.8Hz,12H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ160.3,143.8,120.3,62.6,27.1,23.9。
步骤75-2：3,5-二异丙基-4-甲氧基苯胺。将1,3-二异丙基-2-甲氧基-5-硝基苯(0.315g，1.01mmol)溶解于THF(16.4mL)和水(3.6mL)中。将溶液冷却至0℃，然后加入氯化铵(0.859g，16.1mmol)和锌(0.534g，8.17mmol)。除去冷却浴，并将反应混合物在室温搅拌2.5h。使用EtOAc(30mL)在减压下通过
Figure BDA0002776695470001211
垫过滤反应混合物。滤液用水(2×30mL)洗涤、经MgSO4干燥、过滤并减压浓缩，得到粗产物，不需要进一步纯化(0.208g，76％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.43(s,2H),3.67(s,3H),3.27(sept,J＝6.8Hz,2H),1.20(d,J＝6.8Hz,12H)。LCMS:m/z(ES+)(M+H)+208.1；tR＝2.49min。HPLC方法3(酸)。
步骤75-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-二异丙基-4-甲氧基苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将3,5-二异丙基-4-甲氧基苯胺(0.056g，0.27mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.053g，0.28mmol)、三乙胺(0.08mL，0.57mmol)溶于无水二噁烷(5.0mL)和DMF(1.0mL)。将混合物在50℃加热2h，然后冷却至室温。加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.054g，0.27mmol)和三乙胺(0.08mL，0.57mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。将反应混合物用EtOAc(15mL)稀释，依次用水(3×10mL)和盐水(10mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，由两次置换得到粗产物，将其溶解于Et2O(10.0mL)中，并逐滴加入4MHCl的二噁烷(5.0mL)溶液，并将混合物在室温搅拌6h。加入己烷(15mL)，将悬浮液过滤，得到粘性物质，将其收集并溶于MeOH(1.0mL)。加入Et2O(10mL)和己烷(10mL)，并将混合物研磨过夜。将得到的粉末过滤并干燥，得到标题化合物的盐酸盐，为浅黄色粉末(0.022g，18％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.52(s,1H),7.32(s,2H),4.28(app d,J＝13.6Hz),4.18–4.10(m,1H),3.82–3.71(m,1H),3.75(s,3H),3.70–3.58(m,1H),3.56–3.44(m,1H),3.38(sept,J＝6.8Hz,2H),2.24–2.13(m,1H),2.01–1.89(m,1H),1.88–1.70(m,3H),1.25(d,J＝6.8Hz,12H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+427.1；tR＝2.52min。HPLC方法3(酸)。
实施例76：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((1,5-二异丙基-6-氧代-1,6-二氢吡 啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤76-1：3-溴-1-异丙基-5-硝基吡啶-2(1H)-酮。将3-溴-2-羟基-5-硝基吡啶(1.0g，4.57mmol)、2-溴丙烷(1.29mL，13.71mmol)和氟化铯(2.0g，13.71mmol)在DMF(40mL)中的混合物在50℃下搅拌3天。使所得混合物达到室温，在EtOAc(约40mL)和水(30mL)之间分层，并用盐水(3×30mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，在减压下浓缩，并通过快速色谱法[己烷∶EtOAc(4∶1)]纯化，得到标题产物，为淡绿色固体(720mg，61％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.62(d,J＝2.9Hz,1H),8.49(d,J＝2.9Hz,1H),5.24(sept,J＝6.8Hz,1H),1.46(d,J＝6.8Hz,6H)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ157.7,136.6,134.7,130.6,114.0,51.5,21.6。
步骤76-2：1-异丙基-5-硝基-3-(丙-1-烯-2-基)吡啶-2(1H)-酮。将3-溴-1-异丙基-5-硝基吡啶-2(1H)-酮(150mg，0.57mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(0.22mL，1.15mmol)和K2CO3(236mg，1.71mmol)在二噁烷：H2O(4：1，10mL)中的混合物用氮气流脱气20分钟。加入双(三苯基膦)二氯化钯(II)(40mg，0.06mmol)，并将反应混合物在100℃下搅拌1h。将所得混合物在减压下浓缩，并将残余物溶于EtOAc(约30mL)中，并用盐水(3×20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，在减压下浓缩，并通过快速色谱法[己烷∶EtOAc(4∶1)]纯化，得到标题产物，为无色油状物(126mg，99％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.57(d,J＝3.0Hz,1H),8.05(d,J＝3.0Hz,1H),5.86-5.81(m,1H),5.36-5.33(m,1H),5.26(sept,J＝6.8Hz,1H),2.12(s,3H),1.44(d,J＝6.8Hz,6H)；13C NMR(101MHz,氯仿-d)δ160.1,139.3,133.5,131.2,130.5,128.3,119.2,48.7,22.1,22.0。
步骤76-3：5-氨基-1,3-二异丙基吡啶-2(1H)-酮。将1-异丙基-5-硝基-3-(丙-1-烯-2-基)吡啶-2(1H)-酮(126mg，0.57mmol)和碳载钯(10wt.％，60mg，0.06mmol)在EtOH(5mL)中的混合物在室温下在H2气氛(1atm)下搅拌3h。将反应混合物用Ar冲洗，通过
Figure BDA0002776695470001221
过滤，并用MeOH(约20mL)洗涤。将滤液减压浓缩，残余物不经进一步纯化直接用于下一步(108mg，97％)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ6.85(d,J＝2.9Hz,1H),6.70(d,J＝2.9Hz,1H),5.31(sept,J＝6.9Hz,1H),3.20(sept,J＝6.9Hz,1H),1.28(d,J＝6.9Hz,6H),1.14(d,J＝6.9Hz,6H)；m/z(ES-)(M-H)+196.0；tR＝1.67min。HPLC方法3(酸)。
步骤76-4：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((1,5-二异丙基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(106mg，0.55mmol)、5-氨基-1,3-二异丙基吡啶-2(1H)-酮(108mg，0.55mmol)和三乙胺(0.08mL，0.58mmol)在1,4-二噁烷(8.0mL)中的混合物在50℃下搅拌5h。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(110mg，0.55mmol)和三乙胺(0.08mL，0.58mmol)，并将反应混合物在50℃搅拌过夜。使所得混合物达到室温，在减压下浓缩，干式加载至柱中，并通过快速色谱法[梯度己烷：EtOAc(2：3→3：7)]纯化，得到标题产物，为白色固体(103mg，37％)。该化合物直接用于下一步。
步骤76-5：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((1,5-二异丙基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((1,5-二异丙基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(95mg，0.18mmol)悬浮于二噁烷∶Et2O(1∶1，4mL)中，并加入4N HCl的二噁烷(2mL)溶液。将悬浮液在室温搅拌过夜。加入Et2O(约4mL)，并将沉淀物减压过滤，用Et2O(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。将所得粘性固体溶于MeOH(约5mL)中，并通过加入Et2O(约3mL)沉淀。除去母液，将所得固体减压干燥，得到纯的标题产物的盐酸盐，为米色固体(78mg，98％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.24(br.s,1H),8.69(s,1H),8.54-8.10(m,3H),7.83(d,J＝2.6Hz,1H),7.63(br.s,1H),7.40(d,J＝2.6Hz,1H),5.15(sept,J＝6.8Hz,1H),4.35-4.18(m,1H),3.99-3.89(m,1H),3.71-3.56(m,1H),3.55-3.40(m,1H),3.29-3.19(m,1H),3.08(sept,J＝6.9Hz,1H),2.08-1.95(m,1H),1.91-1.69(m,2H),1.60-1.51(m,1H),1.29(app.dd,J＝6.8,3.0Hz,6H),1.11(app.dd,J＝6.9,2.3Hz,6H)；m/z(ES-)(M-H)+414.2；tR＝1.95min。HPLC方法3(碱)。
实施例77：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((1-异丙基-6-氧代-5-苯基-1,6-二氢 吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤77-1：1-异丙基-5-硝基-3-苯基吡啶-2(1H)-酮。将3-溴-1-异丙基-5-硝基吡啶-2(1H)-酮(70mg，0.27mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-苯基-1,3,2-二氧杂硼烷(110mg，0.54mmol)和K2CO3(113mg，0.81mmol)在二噁烷：H2O(4：1，5mL)中的混合物用氮气流脱气20分钟。加入双(三苯基膦)二氯化钯(II)(19mg，0.03mmol)，并将反应混合物在100℃下搅拌1h。将所得混合物在减压下浓缩，并将残余物溶于EtOAc(约30mL)中，并用盐水(3×20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，在减压下浓缩，并通过快速色谱法[己烷∶EtOAc(4∶1)]纯化，得到标题产物，为无色油状物(52mg，78％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.65(d,J＝3.0Hz,1H),8.22(d,J＝3.0Hz,1H),7.72-7.64(m,2H),7.53-7.34(m,3H),5.31(sept,J＝6.8Hz,1H),1.49(d,J＝6.8Hz,6H)；m/z(ES+)(M+H)+259.0；tR＝2.46min。HPLC方法3(碱)。
步骤77-2：5-氨基-1-异丙基-3-苯基吡啶-2(1H)-酮。将锌粉(101mg，1.55mmol)分批添加到1-异丙基-5-硝基-3-苯基吡啶-2(1H)-酮(50mg，0.19mmol)和NH4Cl(166mg，3.10mmol)在THF：H2O(5：1，4.5mL)中的冰冷却溶液中。使混合物达到室温，并搅拌30分钟。将反应混合物通过
Figure BDA0002776695470001241
过滤，并用EtOAc(约20mL)洗涤。将滤液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到无色油，其迅速变黑。残余物不经进一步纯化直接用于下一步。
步骤77-3：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((1-异丙基-6-氧代-5-苯基-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(37mg，0.19mmol)、5-氨基-1-异丙基-3-苯基吡啶-2(1H)-酮(44mg，0.19mmol)和三乙胺(0.03mL，0.21mmol)在1,4-二噁烷(3.0mL)中的混合物在50℃下搅拌2h。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(38mg，0.19mmol)和三乙胺(0.03mL，0.21mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。使所得混合物达到室温，在减压下浓缩，干式加载至柱中，并通过快速色谱法[梯度己烷：EtOAc(2：3→1：4)]纯化，得到标题产物，为白色固体(77mg，73％)。该化合物直接用于下一步。
步骤77-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((1-异丙基-6-氧代-5-苯基-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((1-异丙基-6-氧代-5-苯基-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(77mg，0.14mmol)悬浮于二噁烷∶Et2O(1∶1，4mL)中，并加入4N HCl的二噁烷(2mL)溶液。将悬浮液在室温搅拌过夜。加入Et2O(约4mL)，并将沉淀物减压过滤，用Et2O(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。将所得粘性固体溶于MeOH(约5mL)中，并通过加入Et2O(约3mL)沉淀。除去母液，将所得固体减压干燥，得到标题产物的盐酸盐，为淡黄色固体(45mg，72％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.35(br.s,1H),8.71(s,1H),8.51-8.31(m,4H),8.04(d,J＝2.8Hz,1H),7.75(d,J＝2.8Hz,1H),7.71(d,J＝7.2Hz,2H),7.40(app.t,J＝7.5Hz,2H),7.37-7.30(m,1H),5.22(sept,J＝6.8Hz,1H),4.35-4.23(m,1H),3.99-3.90(m,1H),3.72-3.60(m,1H),3.61-3.48(m,1H),3.34-3.24(m,1H),2.07-1.93(m,1H),1.79-1.70(m,2H),1.56-1.48(m,1H),1.35(app.dd,J＝6.8,3.7Hz,6H)；m/z(ES-)(M-H)+446.0；tR＝2.02min。HPLC方法3(碱)。
实施例78：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((5-(4-氯苯基)-1-异丙基-6-氧代-1, 6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤78-1：3-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-硝基吡啶-2(1H)-酮。将3-溴-1-异丙基-5-硝基吡啶-2(1H)-酮(80mg，0.31mmol)、(4-氯苯基)硼酸(62mg，0.40mmol)和K2CO3(129mg，0.93mmol)在二噁烷：H2O(4：1，5mL)中的混合物用氮气流脱气20分钟。加入双(三苯基膦)二氯化钯(II)(22mg，0.03mmol)，并将反应混合物在100℃下搅拌1h。将所得混合物在减压下浓缩，并将残余物溶于EtOAc(约30mL)中，并用盐水(3×20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，在减压下浓缩，并通过快速色谱法[己烷∶EtOAc(9∶1)]纯化，得到标题产物，为无色油状物(71mg，78％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.58(d,J＝3.0Hz,1H),8.13(d,J＝3.0Hz,1H),7.57(d,J＝8.6Hz,2H),7.33(d,J＝8.6Hz,2H),5.22(sept,J＝6.8Hz,1H),1.41(d,J＝6.8Hz,6H)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ160.3,134.9,134.2,133.4,130.9,130.0,129.8,129.4,128.6,49.3,22.0。
步骤78-2：5-氨基-3-(4-氯苯基)-1-异丙基吡啶-2(1H)-酮。将锌粉(127mg，1.93mmol)分批添加到3-(4-氯苯基)-1-异丙基-5-硝基吡啶-2(1H)-酮(71mg，0.24mmol)和NH4Cl(205mg，3.84mmol)在THF:H2O(5：1，5.0mL)中的冰冷却溶液中。使混合物达到室温，并搅拌1.5h。将反应混合物通过
Figure BDA0002776695470001251
过滤，并用EtOAc(约20mL)洗涤。将滤液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到无色油，其迅速变黑。残余物不经进一步纯化直接用于下一步。
步骤78-3：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((5-(4-氯苯基)-1-异丙基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(44mg，0.23mmol)、5-氨基-3-(4-氯苯基)-1-异丙基吡啶-2(1H)-酮(62mg，0.23mmol)和三乙胺(0.03mL，0.25mmol)在1,4-二噁烷(4.0mL)中的混合物在50℃下搅拌5h。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(46mg，0.23mmol)和三乙胺(0.03mL，0.25mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。使所得混合物达到室温，在减压下浓缩，干式加载至柱中，并通过快速色谱法[梯度己烷：EtOAc(2：3→3：7)]纯化，得到标题产物，为白色固体(51mg，38％)。该化合物直接用于下一步。
步骤78-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((5-(4-氯苯基)-1-异丙基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((5-(4-氯苯基)-1-异丙基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(51mg，0.09mmol)悬浮于二噁烷∶Et2O(1∶1，4mL)中，并加入4N HCl的二噁烷(2mL)溶液。将悬浮液在室温搅拌过夜。加入Et2O(约4mL)，并将沉淀物减压过滤，用Et2O(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。将所得粘性固体溶于MeOH(约5mL)中，并通过加入Et2O(约3mL)沉淀。除去母液，将所得固体减压干燥，得到标题产物的盐酸盐，为淡黄色固体(43mg，99％)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.55(s,1H),8.03(d,J＝2.4Hz,1H),7.83(d,J＝2.4Hz,1H),7.67(d,J＝8.2Hz,2H),7.42(d,J＝8.2Hz,2H),5.32(sept,J＝6.8Hz,1H),4.36-4.25(m,1H),4.07-3.98(m,1H),3.76-3.63(m,1H),3.63-3.51(m,2H),2.21-2.16(m,1H),2.02-1.63(m,3H),1.45(app.dd,J＝6.8,2.3Hz,6H)；m/z(ES+)(M+H)+482.3；tR＝2.26min。HPLC方法3(碱)。
实施例79：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((1-异丙基-6-氧代-5-(4-(三氟甲基) 苯基)-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤79-1：1-异丙基-5-硝基-3-(4-(三氟甲基)苯基)吡啶-2(1H)-酮。将3-溴-1-异丙基-5-硝基吡啶-2(1H)-酮(100mg，0.39mmol)、(4-(三氟甲基)苯基)硼酸(109mg，0.57mmol)和K2CO3(163mg，1.17mmol)在二噁烷：H2O(4：1，6mL)中的混合物用氮气流脱气20分钟。加入双(三苯基膦)二氯化钯(II)(27mg，0.04mmol)，并将反应混合物在100℃下搅拌1h。将所得混合物在减压下浓缩，并将残余物溶于EtOAc(约30mL)中，并用盐水(3×20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，在减压下浓缩，并通过快速色谱法[己烷∶EtOAc(85∶15)]纯化，得到标题产物，为无色油状物(130mg，99％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.69(d,J＝3.0Hz,1H),8.26(d,J＝3.0Hz,1H),7.81(d,J＝8.1Hz,2H),7.69(d,J＝8.1Hz,2H),5.30(sept,J＝6.8Hz,1H),1.49(d,J＝6.8Hz,6H)；m/z(ES+)(M+H)+327.1；tR＝2.77min。HPLC方法3(酸)。
步骤79-2：5-氨基-1-异丙基-3-(4-(三氟甲基)苯基)吡啶-2(1H)-酮。将锌粉(209mg，3.20mmol)分批添加到1-异丙基-5-硝基-3-(4-(三氟甲基)苯基)吡啶-2(1H)-酮(130mg，0.40mmol)和NH4Cl(342mg，6.40mmol)在THF:H2O(5：1，8.0mL)中的冰冷却溶液中。使混合物达到室温，并搅拌2.5h。将反应混合物通过
Figure BDA0002776695470001261
过滤，并用EtOAc(约20mL)洗涤。将滤液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到无色油，其迅速变黑。残余物不经进一步纯化直接用于下一步。
步骤79-3：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((1-异丙基-6-氧代-5-(4-(三氟甲基)苯基)-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(75mg，0.39mmol)、5-氨基-1-异丙基-3-(4-(三氟甲基)苯基)吡啶-2(1H)-酮(115mg，0.39mmol)和三乙胺(0.06mL，0.43mmol)在1,4-二噁烷(5.0mL)中的混合物在50℃下搅拌2h。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(78mg，0.39mmol)和三乙胺(0.06mL，0.43mmol)，并将混合物在50℃下搅拌过夜。使所得混合物达到室温，在减压下浓缩，干式加载至柱中，并通过快速色谱法[梯度己烷：EtOAc(2：3→3：7)]纯化，得到标题产物，为淡绿色固体(150mg，63％)。该化合物直接用于下一步。
步骤79-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((1-异丙基-6-氧代-5-(4-(三氟甲基)苯基)-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((1-异丙基-6-氧代-5-(4-(三氟甲基)苯基)-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(150mg，0.24mmol)悬浮于二噁烷∶Et2O(1∶1，4mL)中，并加入4N HCl的二噁烷(2mL)溶液。将悬浮液在室温搅拌过夜。加入Et2O(约4mL)，并将沉淀物减压过滤，用Et2O(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。将所得粘性固体溶于MeOH(约5mL)中，并通过加入Et2O(约3mL)沉淀。除去母液，将所得固体减压干燥，得到标题产物的盐酸盐，为淡黄色固体(120mg，98％)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.55(s,1H),8.05(d,J＝2.6Hz,1H),7.93-7.84(m,3H),7.73(d,J＝8.2Hz,2H),5.34(sept,J＝6.8Hz,1H),4.36-4.29(m,1H),4.06-3.98(m,1H),3.74-3.62(m,1H),3.60-3.47(m,2H),2.22-2.14(m,1H),1.95-1.86(m,1H),1.86-1.65(m,2H),1.46(app.dd,J＝6.8,1.7Hz,6H)；m/z(ES+)(M+H)+516.3；tR＝2.35min。HPLC方法3(碱)。
实施例80：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((5-(4,4-二氟环己-1-烯-1-基)-1-异 丙基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤80-1：3-(4,4-二氟环己-1-烯-1-基)-1-异丙基-5-硝基吡啶-2(1H)-酮。将3-溴-1-异丙基-5-硝基吡啶-2(1H)-酮(0.299g，1.15mmol)、2-(4,4-二氟环己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(0.281g，1.15mmol)和碳酸钾(0.318g，2.30mmol)溶于二噁烷(9.0mL)和水(2.0mL)中。将反应混合物用N2脱气20分钟，并快速加入Pd(PPh3)2Cl2，然后用N2再吹扫烧瓶10分钟。将反应混合物加热至100℃保持2h，然后冷却至室温。反应混合物用EtOAc(40mL)稀释，用水(3×20mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，将其通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(4：1己烷∶EtOAc，然后3∶1)，得到标题化合物，为浅黄色油状物(0.298g，87％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.57(d,J＝3.2Hz,1H),8.00(d,J＝2.8Hz,1H),6.34–6.28(m,1H),5.23(sept,J＝6.8Hz,1H),2.77–2.60(m,4H),2.21–2.08(m,2H),1.44(d,J＝6.8Hz,6H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+299.1；tR＝2.62min。HPLC方法3(酸)。
步骤80-2：5-氨基-3-(4,4-二氟环己-1-烯-1-基)-1-异丙基吡啶-2(1H)-酮。如步骤75-2所述制备，但在室温下搅拌过夜，使用3-(4,4-二氟环己-1-烯-1-基)-1-异丙基-5-硝基吡啶-2(1H)-酮(0.151g，0.51mmol)、THF(7.0mL)、水(1.5mL)、锌(0.271g，4.14mmol)和NH4Cl(0.43g，8.04mmol)，得到标题化合物，为绿色粘稠油状物(0.100g，74％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ7.16–7.13(m,2H),5.93–5.86(m,1H),5.24(sept,J＝6.8Hz,1H),4.92–4.76(br s,2H),2.72–2.58(m,4H),2.19–2.06(m,2H),1.34(d,J＝6.8Hz,6H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+269.2；tR＝2.03min。HPLC方法3(酸)。
步骤80-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((5-(4,4-二氟环己-1-烯-1-基)-1-异丙基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将5-氨基-3-(4,4-二氟环己-1-烯-1-基)-1-异丙基吡啶-2(1H)-酮(0.069g，0.26mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.050g，0.26mmol)、三乙胺(0.07mL，0.50mmol)溶于无水二噁烷(5.0mL)和DMF(0.5mL)中。将混合物在50℃加热1.5h，然后冷却至室温。加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.052g，0.26mmol)和三乙胺(0.07mL，0.50mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。将反应混合物用EtOAc(15mL)稀释，依次用水(3×10mL)和盐水(10mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，由两次置换得到粗产物，将其通过二氧化硅快速柱色谱纯化(1:3己烷：EtOAc，然后用EtOAc)。将中间体溶解在Et2O(2.5mL)中，并逐滴加入4M HCl的二噁烷(2.5mL)溶液，并将混合物在室温下搅拌2h。加入己烷(15mL)，将固体过滤并干燥，得到标题化合物的盐酸盐，为淡棕色粉末(0.039g，48％)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.60–8.44(br s,1H),7.95–7.76(m,1H),7.64–7.47(m,1H),5.37–5.17(m,1H),4.36–4.18(m,1H),4.17–3.99(m,1H),3.80–3.66(m,1H),3.63–3.46(m,1H),3.04–2.91(m,1H),2.28–2.08(m,2H),2.07–1.72(m,7H),1.70–1.50(m,2H),1.50–1.35(m,6H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+488.3；tR＝2.15min。HPLC方法3(酸)。
实施例81：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((1-异丙基-5-吗啉代-6-氧代-1,6-二 氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤81-1：1-异丙基-3-吗啉代-5-硝基吡啶-2(1H)-酮。将3-溴-1-异丙基-5-硝基吡啶-2(1H)-酮(100mg，0.38mmol)、吗啉(0.03mL，0.38mmol)、乙酸钯(II)(4mg，0.02mmol)、Xantphos(11mg，0.02mmol)和碳酸铯(146mg，0.76mmol)在干燥且脱气的二噁烷(3.0mL)中的混合物在惰性气氛下于105℃搅拌过夜。将所得混合物在减压下浓缩，并将残余物溶于EtOAc(约30mL)中，并用盐水(3×20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，在减压下浓缩，并通过快速色谱法[己烷∶EtOAc(3∶1)]纯化，得到标题产物，为黄色固体(70mg，69％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(d,J＝2.8Hz,1H),7.31(d,J＝2.8Hz,1H),5.25(sept,J＝6.8Hz,1H),3.92-3.82(m,4H),3.28-3.13(m,4H),1.42(d,J＝6.8Hz,6H)；m/z(ES+)(M+H)+268.0；tR＝2.05min。HPLC方法3(碱)。
步骤81-2：5-氨基-1-异丙基-3-吗啉代吡啶-2(1H)-酮。将锌粉(117mg，1.80mmol)分批添加到1-异丙基-3-吗啉代-5-硝基吡啶-2(1H)-酮(60mg，0.22mmol)和NH4Cl(188mg，3.52mmol)在THF:H2O(5：1，4.0mL)中的冰冷却溶液中。使混合物达到室温，并搅拌10分钟。将反应混合物通过
Figure BDA0002776695470001291
过滤，并用EtOAc(约20mL)洗涤。将滤液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到无色油，其迅速变黑。残余物不经进一步纯化直接用于下一步。
步骤81-3：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((1-异丙基-5-吗啉代-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(42mg，0.22mmol)、5-氨基-1-异丙基-3-吗啉代吡啶-2(1H)-酮(52mg，0.22mmol)和三乙胺(0.03mL，0.24mmol)在1,4-二噁烷(4.0mL)中的混合物在50℃下搅拌1.5h。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(44mg，0.22mmol)和三乙胺(0.03mL，0.24mmol)，并将反应混合物在50℃搅拌过夜。使所得混合物达到室温，在减压下浓缩，干式加载至柱中，并通过快速色谱法[EtOAc(100％)]纯化，得到标题产物，为深棕色固体(74mg，60％)。该化合物直接用于下一步。
步骤81-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((1-异丙基-5-吗啉代-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((1-异丙基-5-吗啉代-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(74mg，0.13mmol)悬浮于二噁烷∶Et2O(1∶1，4mL)中，并加入4N HCl的二噁烷(2mL)溶液。将悬浮液在室温搅拌过夜。加入Et2O(约4mL)，并将沉淀物减压过滤，用Et2O(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。将所得粘性固体溶于MeOH(约5mL)中，并通过加入Et2O(约3mL)沉淀。除去母液，将所得固体在减压下干燥，得到标题产物的盐酸盐，为红色固体(60mg，98％)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.58(s,1H),8.33(s,1H),8.11(s,1H),5.26(sept,J＝6.8Hz,1H),4.39-4.31(m,1H),4.17-4.12(m,4H),4.00-3.88(m,1H),3.86-3.71(m,5H),3.67-3.60(m,1H),3.58-3.46(m,1H),2.23-2.16(m,1H),2.02-1.93(m,1H),1.92-1.70(m,2H),1.46(d,J＝6.8Hz,6H)；m/z(ES-)(M-H)+456.2；tR＝1.58min。HPLC方法3(碱)。
实施例82：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((5-环己基-1-异丙基-6-氧代-1,6-二 氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤82-1：3-(环己-1-烯-1-基)-1-异丙基-5-硝基吡啶-2(1H)-酮。将3-溴-1-异丙基-5-硝基吡啶-2(1H)-酮(180mg，0.69mmol)、环己-1-烯-1-基硼酸(174mg，1.38mmol)和K2CO3(286mg，2.07mmol)在二噁烷：H2O(4：1，11mL)中的混合物用氮气流脱气20分钟。加入双(三苯基膦)二氯化钯(II)(48mg，0.07mmol)，并将反应混合物在100℃下搅拌2.5h。将所得混合物在减压下浓缩，并将残余物溶于EtOAc(约30mL)中，并用盐水(3×20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，在减压下浓缩，并通过快速色谱法[己烷∶EtOAc(85∶15)]纯化，得到标题产物，为无色油状物(179mg，99％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(d,J＝3.0Hz,1H),7.95(d,J＝3.0Hz,1H),6.46(t,J＝2.0Hz,1H),5.25(sept,J＝6.8Hz,1H),2.39-2.30(m,2H),2.27-2.19(m,2H),1.80-1.72(m,2H),1.71-1.57(m,2H),1.43(d,J＝6.8Hz,6H)；m/z(ES+)(M+H)+261.1；tR＝2.66min。HPLC方法3(碱)。
步骤82-2：5-氨基-3-环己基-1-异丙基吡啶-2(1H)-酮。将3-(环己-1-烯-1-基)-1-异丙基-5-硝基吡啶-2(1H)-酮(80mg，0.31mmol)和碳载钯(10wt.％，32mg，0.03mmol)在DCM:MeOH(1：1，5mL)中的混合物在室温下在H2气氛(1atm)下搅拌1h。将反应混合物用Ar冲洗，通过
Figure BDA0002776695470001301
过滤，并用MeOH(约20mL)洗涤。将滤液减压浓缩，得到无色油，其迅速变黑。残余物不经进一步纯化直接用于下一步。
步骤82-3：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((5-环己基-1-异丙基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(58mg，0.30mmol)、5-氨基-3-环己基-1-异丙基吡啶-2(1H)-酮(70mg，0.30mmol)和三乙胺(0.05mL，0.33mmol)在1,4-二噁烷(4.0mL)中的混合物在50℃下搅拌1h。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(60mg，0.30mmol)和三乙胺(0.05mL，0.33mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。使所得混合物达到室温，在减压下浓缩，干式加载至柱中，并通过快速色谱法[梯度己烷：EtOAc(2：3→3：7)]纯化，得到标题产物，为白色固体(81mg，49％)。该化合物直接用于下一步。
步骤82-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((5-环己基-1-异丙基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((5-环己基-1-异丙基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(81mg，0.15mmol)悬浮于二噁烷∶Et2O(1∶1，4mL)中，并加入4N HCl的二噁烷(2mL)溶液。将悬浮液在室温搅拌过夜。加入Et2O(约4mL)，并将沉淀物减压过滤，用Et2O(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。将所得粘性固体溶于MeOH(约5mL)中，并通过加入Et2O(约3mL)沉淀。除去母液，将所得固体在减压下干燥，得到标题产物的盐酸盐，为白色固体(66mg，99％)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.53(s,1H),7.82(d,J＝2.2Hz,1H),7.50(d,J＝2.2Hz,1H),5.28(sept,J＝6.7Hz,1H),4.33-4.24(m,1H),4.11-4.01(m,1H),3.76-3.64(m,1H),3.63-3.43(m,2H),2.91-2.84(m,1H),2.27-2.11(m,1H),1.95-1.75(m,7H),1.52-1.43(m,2H),1.40(app.dd,J＝6.8,1.6Hz,6H),1.35-1.21(m,4H)；m/z(ES-)(M-H)+452.0；tR＝2.14min。HPLC方法3(碱)。
实施例83：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((5-(4,4-二氟环己基)-1-异丙基-6-氧 代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤83-1：5-氨基-3-(4,4-二氟环己基)-1-异丙基吡啶-2(1H)-酮。通过类似于步骤82-2的方法制备，使用3-(4,4-二氟环己-1-烯-1-基)-1-异丙基-5-硝基吡啶-2(1H)-酮(0.119g，0.40mmol)、10％Pd/C(0.050g，12mol％)、MeOH(10.0mL)和DCM(3.0mL)，得到标题化合物，为白色固体，无需纯化(0.041g，38％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.84(d,J＝2.4Hz,1H),6.71(d,J＝3.2Hz,1H),5.29(sept,J＝6.8Hz,1H),3.00(app t,J＝12Hz,1H),2.22–2.01(m,2H),1.99–1.90(m,3H),1.83(tt,J＝13.2,4Hz,1H),1.59–1.45(m,2H),1.30(d,J＝6.8Hz,6H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+271.2；tR＝2.02min。HPLC方法3(酸)。
步骤83-2：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((5-(4,4-二氟环己基)-1-异丙基-6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与实施例3类似的方法制备，使用5-氨基-3-(4,4-二氟环己基)-1-异丙基吡啶-2(1H)-酮(0.041g，0.15mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.031g，0.16mmol)、三乙胺(0.05mL，0.38mmol)、二噁烷(5.0mL)、DMF(0.5mL)、叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.031g，0.15mmol)和三乙胺(0.05mL，0.38mmol)，得到标题化合物的盐酸盐，为棕色粉末(中间体在相同条件下纯化)(0.041g，51％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.53(br s,1H),7.91–7.78(m,1H),7.65–7.47(m,1H),5.35–5.19(m,1H),4.35–4.19(m,1H),4.18–3.99(m,1H),3.81–3.62(m,1H),3.62–3.44(m,1H),3.05–2.90(m,1H),2.28–2.06(m,3H),2.07–1.71(m,7H),1.72–1.50(m,2H),1.49–1.34(m,6H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+490.3；tR＝2.14min。HPLC方法3(酸)。
实施例84：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((1-异丙基-6-氧代-5-(哌啶-1-羰基)- 1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤84-1：1-异丙基-5-硝基-3-(哌啶-1-羰基)吡啶-2(1H)-酮。将3-溴-1-异丙基-5-硝基吡啶-2(1H)-酮(100mg，0.38mmol)、哌啶-1-甲醛(1.9mL，17.10mmol)、乙酸钯(II)(4mg，0.02mmol)、Xantphos(22mg，0.04mmol)和三氯氧化磷(0.07mL，0.76mmol)在惰性气氛下在压力容器中合并，并在165℃下搅拌24h。将所得混合物溶于EtOAc(约30mL)中，并用盐水(3×20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，在减压下浓缩，并通过快速色谱法[己烷∶EtOAc(4∶1)]纯化，得到标题产物，为无色油状物(40mg，36％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.63(d,J＝3.0Hz,1H),8.16(d,J＝3.0Hz,1H),5.18(sept,J＝6.8Hz,1H),3.75-3.62(m,2H),3.27-3.20(m,2H),1.72-1.59(m,6H),1.43(d,J＝6.8Hz,6H)；m/z(ES+)(M+H)+294.2；tR＝2.16min。HPLC方法3(酸)。
步骤84-2：5-氨基-1-异丙基-3-(哌啶-1-羰基)吡啶-2(1H)-酮。将锌粉(71mg，1.09mmol)分批添加到1-异丙基-5-硝基-3-(哌啶-1-羰基)吡啶-2(1H)-酮(40mg，0.14mmol)和NH4Cl(120mg，2.24mmol)在THF:H2O(5：1，3.0mL)中的冰冷却溶液中。使混合物达到室温，并搅拌30分钟。将反应混合物通过
Figure BDA0002776695470001321
过滤，并用EtOAc(约20mL)洗涤。将滤液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到无色油，其迅速变黑。残余物不经进一步纯化直接用于下一步。
步骤84-3：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((1-异丙基-6-氧代-5-(哌啶-1-羰基)-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(27mg，0.14mmol)、5-氨基-1-异丙基-3-(哌啶-1-羰基)吡啶-2(1H)-酮(37mg，0.14mmol)和三乙胺(0.02mL，0.15mmol)在1,4-二噁烷(4.0mL)中的混合物在50℃下搅拌3h。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(28mg，0.14mmol)和三乙胺(0.02mL，0.15mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。使所得混合物达到室温，在减压下浓缩，干式加载至柱中，并通过快速色谱法[梯度DCM:MeOH(99：1→9：1)]纯化，得到标题产物，为无色油状物(33mg，40％)。该化合物直接用于下一步。
步骤84-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((1-异丙基-6-氧代-5-(哌啶-1-羰基)-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((1-异丙基-6-氧代-5-(哌啶-1-羰基)-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(33mg，0.06mmol)悬浮于二噁烷∶Et2O(1∶1，4mL)中，并加入4N HCl的二噁烷(2mL)溶液。将悬浮液在室温搅拌过夜。加入Et2O(约4mL)并除去母液。将所得固体减压干燥，得到标题产物的盐酸盐，为白色固体(26mg，90％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.55(br.s,1H),8.19-7.99(m,1H),7.94(br.s,1H),5.23-5.16(m,1H),4.72-4.50(m,1H),4.14-4.05(m,1H),3.78-3.65(m,2H),3.60-3.41(m,3H),2.36-2.15(m,1H),2.08-1.98(m,1H),1.93-1.75(m,2H),1.76-1.54(m,8H),1.42(d,J＝6.8,6H)；m/z(ES+)(M+H)+483.3；tR＝1.99min。HPLC方法3(酸)。
实施例85：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((5-异丙基-6-氧代-1-苯基-1,6-二氢 吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤85-1：5-硝基-3-(丙-1-烯-2-基)吡啶-2(1H)-酮。通过与步骤80-1类似的方法制备，使用3-溴-1-异丙基-5-硝基吡啶-2(1H)-酮(0.500g，2.78mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(0.86mL，4.57mmol)、二噁烷(18.0mL)、水(4.0mL)、碳酸钾(0.946g，6.85mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(0.160g，0.23mmol)在100℃加热一个周末。粗产物通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(2：1己烷：EtOAc)，得到标题化合物，为黄色固体(0.170g，41％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.54(d,J＝3.2Hz,1H),8.16(d,J＝2.8Hz,1H),5.89–5.87(m,1H),5.33(app pent,J＝2.8Hz,1H),2.12(dd,J＝0.8,0.4Hz,3H).LCMS:m/z(ES-)(M-H)+178.9；tR＝0.95min。HPLC方法3(酸)。
步骤85-2：5-硝基-1-苯基-3-(丙-1-烯-2-基)吡啶-2(1H)-酮。在氩气下向烧瓶中加入5-硝基-3-(丙-1-烯-2-基)吡啶-2(1H)-酮(0.090g，0.50mmol)、CuCl(5mg，10mol％)、三乙胺(0.14mL，1.00mmol)、三氟甲磺酸二苯基碘鎓(0.280g，0.651mmol)和甲苯(5.0mL)。将反应混合物在室温搅拌2h，然后减压浓缩，得到粗产物，将其通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(3：1己烷：EtOAc)，得到标题化合物，为黄色固体(0.106g，83％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.60(d,J＝3.2Hz,1H),8.17(d,J＝3.2Hz,1H),7.58–7.57(m,3H),7.42–7.36(m,2H),5.99–5.95(m,1H),5.38(app pent,J＝1.2Hz,1H),2.17–2.14(m,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ160.3,139.8,138.8,137.8,131.9,130.6,129.8,129.8,129.2,126.5,120.0,22.3。
步骤85-3：5-氨基-3-异丙基-1-苯基吡啶-2(1H)-酮。如实施例8步骤2所述，使用5-硝基-1-苯基-3-(丙-1-烯-2-基)吡啶-2(1H)-酮(0.075g，0.29mmol)、10％Pd/C(0.035g，11mol％)、MeOH(10.0mL)和DCM(3.0mL)，得到标题化合物，为绿色残余物，其立即开始呈现更深的颜色(0.065g，98％)。该产物无需表征即可快速用于下一步反应。LCMS:m/z(ES+)(M+H)+229.2；tR＝1.79min。HPLC方法3(酸)。
步骤85-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((5-异丙基-6-氧代-1-苯基-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将5-氨基-3-异丙基-1-苯基吡啶-2(1H)-酮(0.065g，0.28mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.055g，0.29mmol)、三乙胺(0.08mL，0.57mmol)溶于无水二噁烷(5.0mL)和DMF(0.5mL)中。将混合物在50℃加热1h，然后冷却至室温。加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.057g，0.28mmol)和三乙胺(0.07mL，0.57mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。将反应混合物用EtOAc(15mL)稀释，依次用水(3×10mL)和盐水(10mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，由两次置换得到粗产物，将其通过二氧化硅快速柱色谱纯化(1:2己烷：EtOAc，然后是1：4)。将中间体溶解在Et2O(5.0mL)中，并逐滴加入4M HCl的二噁烷(5.0mL)溶液，并将混合物在室温下搅拌过夜。加入己烷(15mL)，将固体过滤并干燥，得到标题化合物的盐酸盐，为白色粉末(0.065g，47％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),7.91(s,1H),7.63(s,1H),7.57(app t,J＝7.2Hz,2H),7.50(t,J＝7.2Hz,1H),7.45(d,J＝7.2Hz,2H),4.25(app d,J＝12.4Hz,1H),4.10–3.91(m,1H),3.77–3.64(m,1H),3.62–3.45(m,1H),3.21(sept,J＝6.8Hz,1H),2.23–2.11(m,1H),1.95–1.64(m,3H),1.25(d,J＝6.8Hz,6H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+448.3；tR＝2.05min。HPLC方法3(酸)。
实施例86：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((6-氧代-1,5-二苯基-1,6-二氢吡啶- 3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤86-1：3-溴-5-硝基-1-苯基吡啶-2(1H)-酮。在氩气下向烧瓶中加入3-溴-1-异丙基-5-硝基吡啶-2(1H)-酮(90mg，0.50mmol)、CuCl(5mg，0.05mmol)、三乙胺(0.14mL，1.00mmol)、三氟甲磺酸二苯基碘鎓(280mg，0.65mmol)和甲苯(5.0mL)。将反应混合物在室温搅拌2h，然后减压浓缩，得到粗产物，将其通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(3：1己烷：EtOAc)，得到标题化合物，为黄色固体(0.106g，83％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.60(d,J＝3.2Hz,1H),8.17(d,J＝3.2Hz,1H),7.58-7.57(m,3H),7.42-7.36(m,2H)；m/z(ES+)(M+H)+296.2(对于79Br)；tR＝2.54min。HPLC方法3(碱)。
步骤86-2：5-硝基-1,3-二苯基吡啶-2(1H)-酮。将3-溴-5-硝基-1-苯基吡啶-2(1H)-酮(88mg，0.30mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-苯基-1,3,2-二氧杂硼烷(91mg，0.45mmol)和K2CO3(125mg，0.90mmol)在二噁烷：H2O(4：1，6mL)中的混合物用氮气流脱气20分钟。加入双(三苯基膦)二氯化钯(II)(21mg，0.03mmol)，并将反应混合物在100℃下搅拌1.5h。将所得混合物在减压下浓缩，并将残余物溶于EtOAc(约30mL)中，并用盐水(3×20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，在减压下浓缩，并通过快速色谱法[己烷∶EtOAc(4∶1)]纯化，得到标题产物，为灰白色固体(60mg，69％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.68(d,J＝3.0Hz,1H),8.33(d,J＝3.0Hz,1H),7.74(d,J＝7.3Hz,2H),7.61-7.50(m,3H),7.49-7.35(m,5H)；m/z(ES+)(M+H)+293.1；tR＝2.51min。HPLC方法3(碱)。
步骤86-3：5-氨基-1,3-二苯基吡啶-2(1H)-酮。将锌粉(107mg，1.64mmol)分批添加到5-硝基-1,3-二苯基吡啶-2(1H)-酮(60mg，0.21mmol)和NH4Cl(178mg，3.36mmol)在THF:H2O(5：1，4.0mL)中的冰冷却溶液中。使混合物达到室温，并搅拌30分钟。将反应混合物通过
Figure BDA0002776695470001351
过滤，并用EtOAc(约20mL)洗涤。将滤液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到无色油，其迅速变黑。残余物不经进一步纯化直接用于下一步。
步骤86-4：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((6-氧代-1,5-二苯基-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(38mg，0.20mmol)、5-氨基-1,3-二苯基吡啶-2(1H)-酮(52mg，0.20mmol)和三乙胺(0.03mL，0.22mmol)在1,4-二噁烷(4.0mL)中的混合物在50℃下搅拌3h。加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(40mg，0.20mmol)和三乙胺(0.03mL，0.22mmol)，并将反应混合物在50℃搅拌过夜。使所得混合物达到室温，在减压下浓缩，干式加载至柱中，并通过快速色谱法[梯度己烷：EtOAc(2：3→3：7)]纯化，得到标题产物，为白色固体(27mg，23％)。该化合物直接用于下一步。
步骤86-5：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((6-氧代-1,5-二苯基-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((6-氧代-1,5-二苯基-1,6-二氢吡啶-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(27mg，0.04mmol)悬浮于二噁烷∶Et2O(1∶1，4mL)中，并加入4N HCl的二噁烷(2mL)溶液。将悬浮液在室温搅拌过夜。加入Et2O(约4mL)，并将沉淀物减压过滤，用Et2O(约10mL)洗涤，并在空气中干燥。将所得粘性固体溶于MeOH(约5mL)中，并通过加入Et2O(约3mL)沉淀。除去母液，将所得固体在减压下干燥，得到标题产物的盐酸盐，为淡绿色固体(20mg，89％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.54(s,1H),8.11-8.00(m,1H),7.91(d,J＝2.9Hz,1H),7.73-7.68(m,2H),7.62-7.55(m,2H),7.56-7.47(m,3H),7.46-7.40(m,2H),7.39-7.33(m,1H),4.29(app.dd,J＝13.6,3.8Hz,1H),4.12-3.81(m,1H),3.73-3.58(m,1H),3.57-3.38(m,2H),2.30-2.02(m,1H),1.93-1.58(m,3H)；m/z(ES-)(M-H)+482.3；tR＝2.09min。HPLC方法3(碱)。
实施例87：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-异丙基-5-(2-甲氧基丙烷-2-基)苯 基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤87-1：甲基3-溴-5-(二苄基氨基)苯甲酸酯。将甲基3-氨基-5-溴苯甲酸酯(10.00g，43.5mmol)和DIPEA(15.94mL，91mmol)在乙腈(200mL)中的搅拌溶液加热至80℃，然后在1h内逐滴添加苄基溴(10.86mL，91mmol)。然后将反应搅拌24h，然后冷却至室温，用饱和碳酸氢钠溶液(400mL)稀释，并用乙酸乙酯(2×400mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-30％EtOAc/异己烷)。(14.68g，78％)。m/z(M+H)+(ES+)410.1,412.1；tR＝3.07min。HPLC方法2。
步骤87-2：2-(3-溴-5-(二苄基氨基)苯基)丙-2-醇。在0℃下向甲基3-溴-5-(二苄基氨基)苯甲酸酯(7.38g，17.99mmol)在THF(100mL)中的搅拌溶液中滴加甲基溴化镁(3M的THF溶液，14.99mL，45.0mmol)。然后将反应在0℃搅拌2h，然后用饱和氯化铵溶液(100mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将合并的有机层用水(300mL)洗涤，经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。(7.20g，93％)。m/z(M+H)+(ES+)410.2,412.2；tR＝2.86min。HPLC方法2。
步骤87-3：N,N-二苄基-3-溴-5-(2-甲氧基丙烷-2-基)苯胺。向2-(3-溴-5-(二苄基氨基)苯基)丙-2-醇(2g，4.87mmol)在THF(40mL)中的搅拌溶液中分批加入氢化钠(0.390g，9.75mmol)。20分钟后，加入碘甲烷(0.366mL，5.85mmol)，并将溶液在室温搅拌24h。将反应用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭，并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-20％EtOAc/异己烷)(1.75g，80％)。m/z(M+H)+(ES+)424.2,426.1；tR＝3.16min。HPLC方法2。
步骤87-4：N,N-二苄基-3-(2-甲氧基丙烷-2-基)-5-(丙-1-烯-2-基)苯胺。将4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(0.125mL，0.665mmol)、碳酸氢钠(0.140g，1.661mmol)和N,N-二苄基-3-溴-5-(2-甲氧基丙烷-2-基)苯胺(0.235g，0.554mmol)在1,4-二噁烷(3mL)和水(1mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫10分钟。加入PdCl2dppf(0.041g，0.055mmol)，并再继续吹扫10分钟。然后将溶液加热至90℃，并在氮气下搅拌2h。然后将反应冷却至室温，用水(10mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-10％EtOAc/异己烷)。(0.123g，55.9％)。m/z(M+H)+(ES+)386.7；tR＝3.17min。HPLC方法2。
步骤87-5：3-异丙基-5-(2-甲氧基丙烷-2-基)苯胺。将N,N-二苄基-3-(2-甲氧基丙烷-2-基)-5-(丙-1-烯-2-基)苯胺(0.123g，0.319mmol)在甲醇(10mL)中的溶液在H-Cube(110％Pd/C，30x4 mm，全氢气，40℃，1mL/min)中氢化，并真空浓缩。(0.055g，58.2％)。m/z(M+H)+(ES+)208.2；tR＝1.49min。HPLC方法2@215nm。
步骤87-6：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-异丙基-5-(2-甲氧基丙烷-2-基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。向3-异丙基-5-(2-甲氧基丙烷-2-基)苯胺(0.055g，0.265mmol)和2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.051g，0.265mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.093mL，0.531mmol)。将溶液加热至90℃，搅拌2h，然后冷却至室温。加入(S)-哌啶-3-胺(0.027g，0.265mmol)和DIPEA(0.093mL，0.531mmol)，并将该溶液再加热至90℃再保持30分钟。使反应冷却至室温，并在真空下浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-10％0.7M氨/MeOH)/DCM)。(0.035g，28％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.52(s,1H),8.59(s,1H),8.10-7.15(br m,5H),6.92-6.90(m,1H),4.64-4.46(m,2H),3.03-2.82(m,5H),2.78-2.57(m,2H),2.10-1.80(m,3H),1.74-1.65(m,1H),1.50-1.35(m,6H),1.32-1.13(m,7H).m/z(M+H)+(ES+)427.3；tR＝1.51min。HPLC方法2。
实施例88：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(2-羟基丙烷-2-基)-5-异丙基苯 基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤88-1：2-(3-氨基-5-异丙基苯基)丙-2-醇.由2-(3-溴-5-(二苄基氨基)苯基)丙烷-2-基通过与步骤87-4和87-5类似的方法制备。m/z(M+H)+(ES+)194.3；tR＝1.03min。HPLC方法2。
步骤88-2：(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((3-(2-羟基丙烷-2-基)-5-异丙基苯基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。向2-(3-氨基-5-异丙基苯基)丙烷-2-基(0.03g，0.15mmol)和DIPEA(0.054mL，0.31mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的搅拌溶液中加入2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.030g，0.155mmol)。将反应加热至80℃并搅拌2h。使反应冷却至室温，然后添加(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.031g，0.15mmol)和DIPEA(0.054mL，0.31mmol)。将反应加热至50℃保持10min，冷却并在真空下浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0.7M氨/MeOH)/DCM)，得到(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((3-(2-羟基丙烷-2-基)-5-异丙基苯基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。(0.053g，65％)。m/z(M+H)+(ES+)513.4；tR＝2.04min。HPLC方法2。
步骤88-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(2-羟基丙烷-2-基)-5-异丙基苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。向(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((3-(2-羟基丙烷-2-基)-5-异丙基苯基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(0.053g，0.103mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的搅拌溶液中加入氯化氢(4M的1,4-二噁烷溶液，0.517mL，2.068mmol)，并将反应在室温下搅拌16h。将反应真空浓缩，并通过硅胶色谱法纯化(0-10％(0-10％(0.7M氨/MeOH)/DCM)，得到(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(2-羟基丙烷-2-基)-5-异丙基苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。(0.02g，42％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.53,(s,1H),7.85(br s,1H),7.28(br s,1H),7.10-7.05(m,1H),4.73-4.64(m,1H),4.59-4.50(m,1H),3.19-3.10(m,1H),3.00-2.89(m,2H),2.88-2.79(m,1H),2.09-2.00(m,1H),1.86-1.78(m,1H),1.65-1.52(m,7H),1.51-1.39(m,1H),1.29(dd,6H,J＝6.9,0.7Hz),m/z(M+H)+(ES+)413.3；tR＝1.33min。HPLC方法2。
实施例89：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(2-羟基丙烷-2-基)-5-(三氟甲基) 苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤89-1：2-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)丙-2-醇)。将N,N-二苄基-3-(2-甲氧基丙烷-2-基)-5-(丙-1-烯-2-基)苯胺(J.Org.Chem.,Vol.56,No.13,1991)溶于乙醇中并脱气，然后加入Pd/C。将混合物在室温在氢气氛下搅拌过夜(16h)。将该悬浮液通过
Figure BDA0002776695470001391
过滤。将滤液浓缩至干，得到浅棕色固体。m/z(ES+)(M+H)+219.8；tR＝2.48min。HPLC方法1。
步骤89-2：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(2-羟基丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与实施例3类似的方法，用2-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)丙烷-2-基)(步骤1：CH3CN，DIPEA，60℃，3h)制备，得到2-氯-4-((3-(2-羟基丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)嘧啶-5-羧酰胺，将其通过二氧化硅色谱法纯化，使用梯度PET/EtOAc(80％)，得到白色固体(88mg(52％)，m/z(ES+)(M+H)+375.0；tR＝2.74min。HPLC方法1)。使用未保护的(S)-3-氨基哌啶(步骤2：CH3CN DIPEA，RT，16h)，得到标题化合物，为白色固体(63mg，81％)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.55(s,1H),8.02(br s,2H),7.42(s,1H),4.64(br d,J＝13.2Hz,1H),4.48(br d,J＝13.9Hz,1H),3.11(t,J＝11.1Hz,1H),2.94(dd,J＝9.6,12.6Hz,1H),2.86-2.79(m,1H),2.06–1.99(m,1H),1.84-1.76(m,1H),1.61-1.49(m,1H)1.56(s,6H),1.49-1.38(m,1H),m/z(ES+)(M+H)+439.2；tR＝2.17min。HPLC方法1。
实施例90：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-双(2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨 基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤90-1：2,2'-(5-(二苄基氨基)-1,3-亚苯基)双(丙烷-2-基)。用与步骤87-2类似的方法，使5-(二苄氨基)间苯二甲酸二甲酯与甲基锂反应，纯化后得到标题化合物(325mg，81％)，1H NMR(300MHz,MeOD)δ7.30–7.26(m,8H),7.23-7.17(m,2H),6.93(t,J＝1.5Hz,1H),6.79(d,J＝1.5Hz,2H),4.65(s,4H),1.40(s,12H).m/z(ES+)(M+H)+390.0；tR＝2.94min。HPLC方法1。
步骤90-2：2,2'-(5-氨基-1,3-亚苯基)双(丙-2-醇)。通过与步骤87-5类似的方法制备。(1H NMR(300MHz,MeOD)δ6.99(t,J＝1.5Hz,1H),6.76(d,J＝1.5Hz,2H),1.50(s,12H).m/z(ES+)(M+H)+210.4；tR＝0.46min。HPLC方法1)。
步骤90-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-双(2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与实施例3类似的方法，用2,2'-(5-氨基-1,3-亚苯基)双(丙-2-醇)制备(步骤1：CH3CN，DIPEA，70℃，3h)，得到4-((3,5-双(2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基)-2-氯嘧啶-5-甲酰胺。使用未保护的(S)-3-氨基哌啶(步骤C2：CH3CN DIPEA，RT，16h)，得到标题化合物，为淡黄色固体(55mg，49％)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.50(s,1H),7.75(s,2H),7.29(s,1H),4.71(br d,J＝11.9Hz,1H),4.53(br d,J＝13.2Hz,1H),3.12-3.05(m,1H),2.93-2.87(m,1H),2.85-2.78(m,1H),2.04-1.98(m,1H),1.82-1.75(m,1H),1.61-1.48(m,1H),1.55(s,6H),1.45-1.36(m,1H).m/z(ES+)(M+H)+429.3；tR＝1.95min。HPLC方法1。
实施例91：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)苯 基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤91-1：2-(3-氨基-5-(叔丁基)苯基)丙烷-2-基。使用甲基3-氨基-5-(叔丁基)苯甲酸酯，通过与步骤88-1类似的方法制备。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.93(s,1H),6.69(s,1H),6.64(s,1H),1.55(s,6H),1.29(s,9H).m/z(ES+)(M+H)+208.1；tR＝2.84min。HPLC方法1)。
(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(2-羟基丙烷-2-基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与实施例3类似的方法制备(步骤1：CH3CN，DIPEA，70℃，3h)。在步骤2中使用未保护的(S)-3-氨基哌啶(CH3CN DIPEA，RT，16h)得到化合物的盐酸盐，为淡黄色固体(144mg，64％)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.50(s,1H),7.82(br s,1H),7.39(br s,1H),7.25(s,1H),4.65(d,J＝12.2Hz,1H),4.51(d,J＝14.1Hz,1H),3.14-3.07(m,1H),2.93(dd,J＝9.4,12.7Hz,1H),2.85-2.78(m,1H),2.03-1.97(m,1H),1.81-1.74(m,1H),1.60-1.50(m,1H),1.55(d,J＝1.0Hz,6H),1.43-1.39(m,1H),1.33(s,9H).m/z(ES+)(M+H)+427.4；tR＝2.18min。HPLC方法1。
实施例92：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-双(2-氟丙烷-2-基)苯基)氨基) 嘧啶-5-甲酰胺
步骤92-1：N,N-二苄基-3,5-双(2-氟丙烷-2-基)苯胺。将2,2'-(5-(二苄基氨基)-1,3-亚苯基)双(丙-2-醇)(0.500g，1.28mmol)添加到配有磁力搅拌棒和隔膜的预干燥烧瓶中，然后将烧瓶用N2冲洗20分钟。加入无水DCM(20mL)，并将溶液冷却至0℃。逐滴添加DAST(0.92mL，6.96mmol)，将反应混合物搅拌1h，然后除去冷却浴，并将混合物在室温搅拌过夜。逐滴添加NaHCO3饱和溶液(水溶液，10mL)，分离有机层，并将水层用另外的DCM(2×20mL)萃取两次。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物(0.516g)，通过LCMS分析，其由标题化合物和N,N-二苄基-3-(2-氟丙烷-2-基)-5-(丙-1-烯-2-基)苯胺的7：3混合物组成。将该混合物不经进一步纯化即用于下一步骤，直至标题化合物在二氧化硅上不稳定。
步骤92-2：3,5-双(2-氟丙烷-2-基)苯胺。使用与步骤50-3类似的方法，使用步骤92-1的混合物(0.516g)、Pd(OH)2(0.500g，10–20％Pd基底)、DCM(2.0mL)MeOH(10.0mL)和H2(1个大气压)制备。粗产物通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(7：1己烷:EtOAc，然后是6：1和5：1)，得到标题化合物，为无色粘稠油状物(0.105g，27％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.74(t,J＝1.6Hz,1H),6.64(d,J＝1.6Hz,2H),3.89–3.58(br s,2H),1.66(d,J＝22.0Hz,12H).13CNMR(101MHz,CDCl3)δ147.5,147.3,146.4,109.8–109.6(m),96.0(d,J＝68.7Hz),29.4(d,J＝26.3Hz)。
步骤92-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-双(2-氟丙烷-2-基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将3,5-双(2-氟丙烷-2-基)苯胺(0.056g，0.26mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.051g，0.26mmol)、三乙胺(0.07mL，0.50mmol)溶于无水二噁烷(5.0mL)和DMF(1.0mL)。将混合物在50℃加热1.5h，然后冷却至室温。加入(S)-哌啶-3-胺(0.046g，0.26mmol)和三乙胺(0.06mL，0.50mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。将反应混合物用EtOAc(10mL)稀释，并用水(2×10mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，将其与己烷(20mL)一起研磨，随后沉淀出白色粉末。将固体过滤并干燥，得到标题化合物，为白色固体(0.060g，53％)。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),7.71(s,2H),7.07(s,1H),4.65(app d,J＝13.2Hz,1H),4.52(app d,J＝13.2Hz,1H),3.13(app t,J＝12.9Hz,1H),2.96(app t,J＝12.0Hz,1H),2.89–2.76(m,1H),2.10–1.95(m,1H),1.89–1.75(m,1H),1.68(d,J＝21.9Hz,12H),1.60–1.36(m,2H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+433.4；tR＝2.36min.HPLC方法3(酸)。
实施例93：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-双(2-甲氧基丙烷-2-基)苯基)氨 基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤93-1：二甲基5-(二苄基氨基)间苯二甲酸。通过与步骤50-1类似的方法，使用5-氨基间苯二甲酸二甲酯(5.00g，23.90mmol)、碳酸钾(9.89g，71.67mmol)、苄基溴(8.53mL，71.72mmol)和MeCN(80mL)制备。粗产物通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(5：1己烷:EtOAc)，得到标题化合物，为淡黄色固体(7.54g，81％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.01(t,J＝1.2Hz,1H),7.64(d,J＝1.2Hz,2H),7.34(app t,J＝7.6Hz,4H),7.31–7.21(m,6H),4.71(s,4H),3.87(s,6H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+390.0；tR＝2.88min.HPLC方法3(酸)。
步骤93-2：2,2'-(5-(二苄基氨基)-1,3-亚苯基)双(丙烷-2-基)。将5-(二苄基氨基)间苯二甲酸二甲酯(1.0g，2.57mmol)加入装有磁力搅拌棒和隔垫的预干燥烧瓶中。用N2冲洗烧瓶20分钟，加入无水THF(20mL)，并将溶液冷却至0℃。在搅拌下逐滴加入MeMgCl溶液(3M的THF溶液，2.60mL，7.80mmol)。添加完成后，除去冷却浴，并将反应混合物在室温下放置过夜。TLC分析表明反应不完全，因此在0℃下逐滴加入另一份MeMgCl(3M的THF溶液，2.00mL，6.00mmol)。除去冷却浴，并将反应混合物在室温搅拌另外2h。将反应混合物用EtOAc(40mL)稀释，依次用水(5×15mL)和盐水(15mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，将其通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(5:3己烷：EtOAc，然后是EtOAc)，得到标题化合物，为淡黄色固体(0.738g，74％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.39–7.22(m,10H),6.99(t,J＝1.2Hz,1H),6.83(d,J＝1.2Hz,2H),4.70(s,4H),1.52(s,12H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+390.0；tR＝2.77min.HPLC方法3(酸)。
步骤93-3：N,N-二苄基-3,5-双(2-甲氧基丙烷-2-基)苯胺。通过与步骤75-2类似的方法，使用2,2'-(5-(二苄基氨基)-1,3-亚苯基)双(丙烷-2-基)(0.500g，1.28mmol)、氢化钠(在矿物油中的60％分散体，0.154g，3.85mmol)、无水DMF(5.0mL)和甲基碘(0.24mL，3.86mmol)制备。粗产物通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(5：1己烷:EtOAc)，得到标题化合物，为无色油状物(0.189g，35％)，1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38–7.30(m,8H),7.30–7.24(m,2H),6.80–7.78(m,1H),6.78–6.76(m,2H),4.70(s,4H),2.99(s,6H),1.48(s,12H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+418.1；tR＝3.06min.HPLC方法3(酸)。还分离了2-(3-(二苄基氨基)-5-(2-甲氧基丙烷-2-基)苯基)丙-2-醇，为无色油状物(0.186g，36％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38–7.30(m,8H),7.30–7.24(m,2H),6.86(app d,J＝1.6Hz,2H),6.75(app t,J＝1.6Hz,1H),4.70(s,4H),2.97(s,3H),1.85–1.74(br s,1H),1.53(s,6H),1.47(s,6H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+404.1；tR＝2.81min.HPLC方法3(酸)。
步骤93-4：3,5-双(2-甲氧基丙烷-2-基)苯胺。通过与步骤50-2类似的方法，使用N,N-二苄基-3,5-双(2-甲氧基丙烷-2-基)苯胺(0.209g，0.50mmol)、Pd(OH)2,(0.25g，10–20％Pd基底)、DCM(2.0mL)MeOH(5.0mL)和H2(1个大气压)制备，得到标题化合物，无需进一步纯化(0.118g，定量)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.84(t,J＝1.2Hz,1H),6.64(d,J＝1.2Hz,2H),3.72–3.58(br s,2H),3.07(s,6H),1.50(s,12H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+238.1；tR＝2.09min.HPLC方法3(酸)。
步骤93-5：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-双(2-甲氧基丙烷-2-基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将3,5-双(2-甲氧基丙烷-2-基)苯胺(0.051g，0.21mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.041g，0.21mmol)、三乙胺(0.06mL，0.43mmol)溶于无水二噁烷(5.0mL)和DMF(1.0mL)。将混合物在50℃加热2.5h，然后冷却至室温。加入(S)-哌啶-3-胺(0.037g，0.21mmol)和三乙胺(0.06mL，0.43mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。将反应混合物用EtOAc(5mL)和己烷(25mL)稀释，过滤，并将滤液用NaHCO3饱和溶液(20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，将其溶于EtOAc(2.5mL)中。将该溶液与己烷(20mL)一起研磨，随后沉淀出白色粉末。将固体过滤并干燥，得到标题化合物，为白色固体(0.020g，20％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.58(s,1H),7.71(s,2H),7.16(s,1H),4.63(appd,J＝12.0Hz,1H),4.37(app d,J＝13.2Hz,1H),3.54–3.38(m,2H),3.31–3.24(m,1H),3.11(s,6H),2.21–2.12(m,1H),1.91–1.82(m,1H),1.79–1.61(m,2H),1.55(app d,J＝2.0Hz,12H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+457.0；tR＝2.24min.HPLC方法3(酸)。
实施例94：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(2-羟基丙烷-2-基)-5-(2-甲氧基 丙-2-基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤94-1：2-(3-氨基-5-(2-甲氧基丙烷-2-基)苯基)丙-2-醇。将2-(3-(二苄基氨基)-5-(2-甲氧基丙烷-2-基)苯基)丙-2-醇(在步骤93-3中分离，0.14g，0.347mmol)在甲醇(10mL)中的溶液在H-Cube(110％Pd/C，30x4 mm，全氢气，40℃，1mL/min)中氢化，并真空浓缩，得到2-(3-氨基-5-(2-甲氧基丙烷-2-基)苯基)丙烷-2-基。(0.05g，50％)。m/z(M+H)+(ES+)224.3；tR＝0.98min。HPLC方法2。
步骤93-2：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(2-羟基丙烷-2-基)-5-(2-甲氧基丙烷-2-基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。使用2-(3-氨基-5-(2-甲氧基丙烷-2-基)苯基)丙-2-醇，通过与实施例3类似的方法制备。(0.038g，33％)；1H NMR(500MHz,DMSO-d6,90℃)δ11.38(s,1H),8.59(s,1H),7.63-7.61(m,1H),7.59(t,1H,J＝1.8Hz),7.26(br s,1H),7.19(t,1H,J＝1.5Hz),4.56-4.50(m,1H),4.44(dt,1H,J＝13.1,4.2Hz),3.12-3.05(m,1H),3.04(s,3H),2.85(dd,1H,J＝12.6,9.2Hz),2.77-2.70(m,1H),1.94-1.87(m,1H),1.77-1.69(m,1H),1.50-1.40(m,13H),1.36-1.24(m,1H).m/z(M+H)+(ES+)443.3；tR＝1.15min。HPLC方法2。
实施例95：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(2-甲氧基丙烷-2-基)-5-(三氟甲 基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤95-1：3-(2-甲氧基丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯胺。N,N-二苄基-3-(2-甲氧基丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯胺(J.Org.Chem.,Vol.56,No.13,1991)溶于乙醇中并脱气，然后加入Pd/C。将混合物在室温在氢气氛下搅拌过夜(16h)。将该悬浮液通过
Figure BDA0002776695470001441
过滤。将滤液浓缩至干，得到浅棕色固体(53mg，83％)，m/z(ES+)(M+H)+233.9；tR＝2.79min。HPLC方法1。
步骤95-2：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(2-甲氧基丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺.用与实施例3类似的方法，用3-(2-甲氧基丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯胺制备(步骤1：CH3CN，DIPEA，70℃，3h)，得到2-氯-4-(3-(2-甲氧基丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶-5-甲酰胺，为淡黄色固体，m/z(ES+)(M+H)+389.1/391.1；tR＝2.96min。HPLC方法1。使用未保护的(S)-3-氨基哌啶二盐酸盐来避免Boc脱保护阶段(步骤2：CH3CN DIPEA，RT，16h)，得到标题化合物，为黄色固体，将其通过二氧化硅色谱法纯化(5g)，依次用梯度DCM/THF(0、50、100％)和DCM/1N NH3的甲醇溶液洗脱(5mg，10％)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.57(s,1H),8.00(br s,2H),7.32(s,1H),4.68(br d,J＝11.6Hz,1H),4.53(br d,J＝12.3Hz,1H),3.12(d,J＝1Hz,3H),2.98-2.90(m,1H),2.88-2.80(m,1H),2.07-2.00(m,1H),1.85-1.77(m,1H),1.62-1.51(m,1H),1.56(d,J＝1.7Hz,6H).1.50-1.33(m,1H),1.31-1.27(m,1H).m/z(ES+)(M+H)+453.1；tR＝2.28min。HPLC方法1。
实施例96：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(2-氟丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯 基)氨基)-嘧啶-5-甲酰胺
步骤96-1：N,N-二苄基-3-(2-氟丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯胺。向冷却至0℃的溶解在DCM(24mL)中的2-(3-(二苄基氨基)-5-(三氟甲基)苯基)丙-2-醇(201mg，0.5mmol)的搅拌溶液中，逐滴加入DAST(0.65mmol，86uL)的DCM(10mL)溶液。使反应温热至室温，并搅拌1h。将反应物用饱和NaHCO3水溶液(20mL)稀释，并用DCM(2×25mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥、过滤并真空浓缩。将粗产物在二氧化硅(5g)上以缓慢梯度纯化(PET/DCM(2％、4％、10％)，以分离出N,N-二苄基-3-(2-氟丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯胺，为无色油状物(30mg)；和副产物N,N-二苄基-3-(丙-1-烯-2-基)-5-(三氟甲基)苯胺，也为无色油(43mg)。
N,N-二苄基-3-(丙-1-烯-2-基)-5-(三氟甲基)苯胺:1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.40–7.34(m,4H),7.33-7.26(m,6H),7.06(s,1H),6.97(s,1H),6.93(s,1H),5.25(s,1H),5.07(s,1H),4.72(s,4H),2.06(s,3H).m/z(ES+)(M+H)+382.2；tR＝3.47min。HPLC方法1。
N,N-二苄基-3-(2-氟丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯胺1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.42–7.37(m,4H),7.35-7.29(m,6H),7.00(s,1H),6.98(s,2H),4.74(s,4H),1.66(s,3H),1.61(s,3H).m/z(ES+)(M+H)+401.9；tR＝3.38min。HPLC方法1。
步骤96-2:3-(2-氟丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯胺
向N,N-二苄基-3-(2-氟丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯胺(130mg，0.325mmol)在MeOH(25mL)中的溶液中加入Pd/C，使用真空/N2冲洗(2x)循环对悬浮液进行脱气，最后将其置于H2气氛下。将悬浮液在室温下搅拌16h。粗产物通过硅藻土垫过滤，蒸发至干，得到黄色油状产物(43mg)，其含有40％氢化前不存在的脱氟化合物。该物质无需进一步纯化即可使用。
步骤96-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(2-氟丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-嘧啶-5-甲酰胺。使用与实施例3类似的方法，用3-(2-氟丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯胺制备(步骤1：CH3CN，DIPEA，65℃，16h)，得到2-氯-4-(3-(2-氟丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯基氨基)嘧啶-5-甲酰胺，将其进一步与(S)-3-氨基哌啶二盐酸盐反应(步骤2：CH3CN DIPEA，RT，64h)，得到粗化合物，将其通过制备型HPLC(phenomenex 20 mmx100mmC18 5m色谱柱)纯化，并使用缓慢梯度水/MECN(在10分钟内5％至40％)，得到标题化合物。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.63(s,1H),8.14(s,1H),7.86(s,1H),7.36(s,1H),4.48(d,J＝12.9Hz,1H),4.20-4.13(m,1H),3.71-3.59(m,2H),2.20-2.11(m,1H),1.91-1.82(m,1H),1.82-1.6(m,3H),1.74(s,3H),1.68(s,3H).m/z(ES+)(M+H)+441.4；tR＝3.89min。HPLC方法1。
实施例97：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-异丙基苯基)氨基)嘧 啶-5-甲酰胺
步骤97-1：N,N-二苄基-3-(叔丁基)-5-(丙-1-烯-2-基)苯胺。向冷却至0℃的2-(3-(叔丁基)-5-(二苄基氨基)苯基)丙-2-醇(140mg，0.36mmol)在DCM(20mL)中的搅拌溶液中滴加DAST(0.47mmol，62uL溶于DCM(10mL)。在0℃下30分钟后，反应完成，但是有2种产物(目标产物和脱水的副产物异戊二烯)。将反应物用饱和NaHCO3水溶液(20mL)稀释，并用EtOAc(2×25mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥、过滤并真空浓缩。使用多梯度系统(0-100％PET/DCM/EtOAc)使用二氧化硅(50g)色谱法纯化粗产物，得到标题化合物(50mg)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.39-7.26(m,10H),6.92(s,1H),6.78(s,1H),6.76(s,1H),5.26(s,1H),5.03(s,1H),4.71(s,4H),2.11(s,3H),1.27(s,9H).m/z(ES+)(M+H)+370.1；tR＝3.69min。HPLC方法1。
步骤97-2:3-(叔丁基)-5-异丙基苯胺。通过与步骤54-2类似的方法制备(MeOH，Pd/C，RT，2h)。粗品不经纯化即用于步骤97-3。m/z(ES+)(M+H)+192.0；tR＝2.45min。HPLC方法1
步骤97-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-异丙基苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。使用与实施例3类似的方法，用3-(叔丁基)-5-异丙基苯胺和(S)-3-NBoc-氨基哌啶二盐酸盐制备(步骤1：CH3CN，DIPEA，75℃，2h；步骤2：CH3CN DIPEA，RT，64h)，得到(R)-叔丁基1-(4-(3-叔丁基-5-异丙基苯基氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-2-基)哌啶-3-基氨基甲酸酯，通过二氧化硅(5g)色谱法使用洗脱液DCM/THF(5％，10％)纯化。Rf(10％THF/DCM)＝0.25，得到浅黄色固体(125mg，82％)。Boc脱保护(步骤3：HCl的二噁烷溶液(4M)，RT)，得到标题化合物的盐酸盐，为灰白色固体(114mg，100％)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.54(s,1H),7.42(s,1H),7.31(s,1H),7.20(s,1H),4.28(br d,J＝13.5Hz,1H),4.10(br s,1H),3.84-3.75(m,1H),3.70-3.59(m,1H),3.51(br s,1H),2.95(hept.,J＝6.9Hz,1H),2.23-2.16(m,1H),1.98-1.90(m,1H),1.88-1.74(m,2H),1.35(s,9H),1.28(d,J＝6.8Hz,6H).m/z(ES+)(M+H)+411.4；tR＝2.36min。HPLC方法1。
实施例98：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((4-氟-3,5-二异丙基苯基)氨基)嘧啶- 5-甲酰胺
步骤98-1：2-氟-5-硝基-1,3-二(丙-1-烯-2-基)苯。通过与步骤80-1类似的方法制备，在100℃加热1.5h，使用1,3-二溴-2-氟-5-硝基苯(0.200g，0.67mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(0.32mL，1.70mmol)、二噁烷(12.0mL)、水(1.2mL)、碳酸钾(0.556g，4.03mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(0.048g，0.07mmol)。粗产物通过二氧化硅快速柱色谱法(己烷)纯化，得到标题化合物，为无色油状物(0.140g，95％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.10(d,J＝8.0Hz,2H),5.36(app s,2H),5.30(app s,2H),2.17(s,6H)。
步骤98-2：4-氟-3,5-二异丙基苯胺。通过与步骤51-2类似的方法制备，使用2-氟-5-硝基-1,3-二(丙-1-烯-2-基)苯(0.165g，0.73mmol)、10％Pd/C(0.078g，10mol％)、MeOH(5.0mL)和DCM(1.0mL)制备，得到标题化合物，为无色油状物(0.065g，98％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.40(d,J＝6.0Hz,2H),3.51–3.39(br s,2H),3.17(sept,J＝6.8Hz,2H),1.22(d,J＝6.8Hz,12H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+196.2；tR＝2.29min.HPLC方法3(酸)。
步骤98-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((4-氟-3,5-二异丙基苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将4-氟-3,5-二异丙基苯胺(0.105g，0.54mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.124g，0.65mmol)、三乙胺(0.18mL，1.29mmol)溶于无水二噁烷(4.0mL)中。将混合物在50℃加热6h，然后冷却至室温。加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.108g，0.54mmol)和三乙胺(0.18mL，1.29mmol)，并将反应混合物在50℃加热2h。将反应混合物用EtOAc(30mL)稀释，并用水(5×20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，将其通过二氧化硅快速柱色谱纯化(1：2己烷：EtOAc)，由两次置换得到产物(0.164g)。将中间体溶解在二噁烷(2.50mL)中，并逐滴加入4M HCl的二噁烷(2.50mL)溶液。将反应混合物在室温搅拌4h，然后加入己烷(20mL)。将得到的悬浮液过滤，将固体干燥，得到标题化合物的盐酸盐，为白色粉末(0.82g，34％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),7.35(d,J＝6.4Hz,2H),4.28(dd,J＝13.6,3.6Hz,1H),4.18–4.00(m,1H),3.83–3.70(m,1H),3.67–3.56(m,1H),3.55–3.46(m,1H),3.28(sept,J＝6.8Hz,2H),2.24–2.13(m,1H),1.99–1.90(m,1H),1.90–1.72(m,2H),1.27(d,J＝6.8Hz,12H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+415.4；tR＝2.88min.HPLC方法3(酸)。
实施例99：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-异丙基-6-(哌啶-1-基)吡啶-4-基) 氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤99-1：2-氯-6-(哌啶-1-基)吡啶-4-胺。将2,6-二氯-4-胺(500mg，3.07mmol)在哌啶(2.42mL，27.60mmol)中的混合物在140℃的压力容器中搅拌4h。将混合物在EtOAc和水之间分层，并将有机相用盐水(3×30mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤，在减压下浓缩，并通过快速色谱法[己烷∶EtOAc(4∶1)]纯化，得到标题产物，为灰白色固体(500mg，77％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.94(s,1H),5.69(s,1H),3.99(br.s,2H),3.49-3.40(m,4H),1.69-1.51(m,6H)；m/z(ES+)(M+H)+212.3；tR＝2.25min.HPLC方法3(酸)。
步骤99-2：2-(哌啶-1-基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺。将2-氯-6-(哌啶-1-基)吡啶-4-胺(250mg，1.18mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(0.33mL，1.78mmol)和K2CO3(489mg，3.54mmol)在二噁烷：H2O(4：1，20mL)中的混合物用氮气流脱气20分钟。加入双(三苯基膦)二氯化钯(II)(41mg，0.06mmol)，并将反应混合物在100℃下搅拌2天。将所得混合物在减压下浓缩，并将残余物溶于EtOAc(约30mL)中，并用盐水(3×20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥、过滤、减压浓缩。残余物不经进一步纯化直接用于下一步。
步骤99-3：2-异丙基-6-(哌啶-1-基)吡啶-4-胺。将2-(哌啶-1-基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺(151mg，0.70mmol)和钯碳(10wt.％，100mg，0.07mmol)在DCM∶MeOH(1∶1，10mL)中的混合物在室温下在H2气氛(1atm)下搅拌3h。将反应混合物用Ar冲洗，通过
Figure BDA0002776695470001481
过滤，并用MeOH(约20mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩，并通过快速色谱法[甲苯∶EtOAc(1∶1)]纯化，得到标题产物，为无色油状物(61mg，44％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.87(d,J＝1.7Hz,1H),5.73(d,J＝1.7Hz,1H),3.83(br.s,2H),3.53-3.39(m,4H),2.76(sept,J＝6.9Hz,1H),1.70-1.52(m,6H),1.22(d,J＝6.9Hz,6H)；m/z(ES+)(M+H)+220.3；tR＝1.80min.HPLC方法3(酸)。
步骤99-4：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((2-异丙基-6-(哌啶-1-基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(80mg，0.42mmol)、2-异丙基-6-(哌啶-1-基)吡啶-4-胺(61mg，0.28mmol)和DIPEA(0.06mL，0.34mmol)在1,4-二噁烷(4.0mL)中的混合物在100℃下搅拌4h。使所得混合物达到室温，在减压下浓缩，干式加载至柱中，并通过快速色谱法[己烷：EtOAc(1：1)]纯化，得到白色固体，将其再溶于1,4-二噁烷(4.0mL)中。将(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(40mg，0.20mmol)和DIPEA(0.04mL，0.22mmol)加入到混合物中，并在50℃下搅拌过夜。使所得混合物达到室温，在减压下浓缩，干式加载至柱中，并通过快速色谱法[梯度己烷：EtOAc(2：3→3：7)]纯化，得到标题产物，为白色固体(80mg，75％)。该化合物直接用于下一步。
步骤99-5：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-异丙基-6-(哌啶-1-基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((2-异丙基-6-(哌啶-1-基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(80mg，0.15mmol)悬浮于二噁烷∶Et2O(1∶1，4mL)中，并加入4N HCl的二噁烷(2mL)溶液。将悬浮液在室温搅拌过夜。加入Et2O(约4mL)并除去母液。将所得固体减压干燥，得到标题产物的盐酸盐，为白色固体(30mg，46％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.76(s,1H),7.58(s,1H),6.98(s,1H),4.49-4.40(m,1H),4.25-4.07(m,1H),3.98-3.85(m,1H),3.82-3.68(m,5H),3.62-3.52(m,1H),3.30-3.22(m,1H),2.27-2.19(m,1H),2.05-1.96(m,1H),1.95-1.74(s,8H),1.37(d,J＝6.8Hz,6H)；m/z(ES-)(M-H)+437.3；tR＝2.00min.HPLC方法3(酸)。
实施例100：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((6-氟-2',3',4',5'-四氢-[1,1'-联 苯基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤100-1：6-氟-2',3',4',5'-四氢-[1,1'-联苯基]-3-胺。通过与步骤80-1类似的方法制备，在100℃下加热1h，使用2-溴-1-氟-4-硝基苯(0.200g，1.05mmol)、环己烯基硼酸(0.136g，1.08mmol)、二噁烷(12.0mL)、水(3.0mL)、碳酸钾(0.436g，3.15mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(0.048g，0.11mmol)。粗产物通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(3∶1己烷∶EtOAc)，得到标题化合物，为无色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.80(dd,J＝14,11.6Hz,1H),6.54(dd,J＝8.4,4.0Hz,1H),6.48(app dt,J＝11.2,4.0Hz,1H),5.93–5.80(m,1H),3.65–3.35(br s,2H),2.39–2.27(m,2H),2.24–2.13(m,2H),1.79–1.56(m,4H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+192.1；tR＝2.08min.HPLC方法3(酸)。
步骤100-2：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((6-氟-2',3',4',5'-四氢-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将6-氟-2',3',4',5'-四氢-[1,1'-联苯基]-3-胺(0.103g，0.54mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.103g，0.54mmol)、三乙胺(0.16mL，1.15mmol)溶于无水二噁烷(8.0mL)和DMF(2.0mL)。将混合物在50℃加热2.5h，然后冷却至室温。加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.108g，0.54mmol)和三乙胺(0.16mL，1.15mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。将反应混合物用EtOAc(30mL)稀释，并用水(5×20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，将其溶解于Et2O(10mL)中，并逐滴加入4M HCl的二噁烷(5.0mL)溶液。将反应混合物在室温搅拌48h，然后加入己烷(20mL)。将得到的悬浮液过滤，将固体干燥，得到标题化合物的盐酸盐，为白色粉末(0.194g，80％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.73(s,1H),6.79–6.67(m,1H),6.66–6.53(m,1H),6.35(dd,J＝10.4,9.2Hz,1H),5.17–5.12(m,1H),3.51(dd,J＝13.6,3.2Hz,1H),2.91(dd,J＝13.6,8.4Hz,1H),2.86–2.83(m,1H),2.83–2.65(m,2H),1.61–1.52(m,2H),1.46–1.34(m,3H),1.21–1.01(m,1H),1.09–0.94(4H),0.94–0.85(m,2H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+411.0；tR＝2.09min.HPLC方法3(酸)。
实施例101：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-环己基-4-氟苯基)氨基)嘧啶-5- 甲酰胺步骤101-1：3-环己基-4-氟苯胺。通过与步骤51-2类似的方法制备，使用6-氟-2',3',4',5'-四氢-[1,1'-联苯基]-3-胺(0.100g，0.58mmol)、10％Pd/C(0.090g，10mol％)、EtOH(3.0mL)和H2(1个大气压)制备，得到标题化合物，为无色油状物(0.064g，64％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.79(dd,J＝12.8,11.6Hz,1H),6.54(dd,J＝8.0,3.6Hz,1H),6.48–6.39(m,1H),3.58–3.31(br s,2H),2.87–2.67(m,1H),1.93–1.68(m,5H),1.52–1.13(m,5H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+194.1；tR＝2.18min.HPLC方法3(酸)。
步骤101-2：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-环己基-4-氟苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将3-环己基-4-氟苯胺(0.072g，0.37mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.072g，0.37mmol)、三乙胺(0.12mL，0.86mmol)溶于无水二噁烷(7.0mL)和DMF(1.0mL)。将混合物在50℃加热2h，然后冷却至室温。加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.075g，0.37mmol)和三乙胺(0.12mL，0.86mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。将反应混合物用EtOAc(30mL)稀释，并用水(5×20mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，将其溶解于Et2O(10mL)中，并逐滴加入4M HCl的二噁烷(5.0mL)溶液。将反应混合物在室温搅拌48h，然后加入己烷(20mL)。将得到的悬浮液过滤，将固体干燥，得到标题化合物的盐酸盐，为白色粉末(0.141，84％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.54(s,1H),7.56–7.37(m,2H),7.14(app t,J＝9.2Hz,1H),4.32(app d,J＝15.2Hz,1H),4.14–3.94(m,1H),3.70(dd,J＝13.6,8.8Hz,1H),3.64–3.54(m,1H),3.54–3.45(m,1H),2.97–2.84(m,1H),2.26–2.12(m,1H),2.04–1.90(m,1H),1.90–1.71(m,7H),1.54–1.39(m,4H),1.39–1.24(m,1H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+413.1；tR＝2.12min.HPLC方法3(酸)。
实施例102：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(1-氰基环丙基)-5-异丙基苯基) 氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤102-1：N,N-二苄基-3-溴-5-氯苯胺。通过与步骤50-1类似的方法，使用3-溴-5-氯苯胺(5.00g，24.22mmol)、碳酸钾(11.71g，84.73mmol)、苄基溴(10.0mL，84.08mmol)和MeCN(80mL)制备。粗产物通过二氧化硅快速柱色谱法(己烷)纯化，得到标题化合物，为白色固体(7.02g，75％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38(app t,J＝7.6Hz,4H),7.31(t,J＝7.6Hz,2H),7.21(d,J＝7.2Hz,4H),6.85(app t,J＝1.6Hz,1H),6.79(app t,J＝1.6Hz,1H),6.66(app t,J＝1.6Hz,1H),4.62(s,4H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+387.8；tR＝3.21min.HPLC方法3(酸)。
步骤102-2：1-(3-氯-5-(二苄基氨基)苯基)环丙烷-1-甲腈。通过与步骤51-1类似的方法，使用外消旋BINAP(0.063g，0.10mmol)、Pd2(dba)3(0.044g，5mol％)、THF(6.0mL)、环丙基甲腈(0.11mL，1.49mmol)、N,N-二苄基-3-溴-5-氯苯胺(0.359g，0.93mmol)、环戊基甲基醚(20mL)和LiHMDS(1M的THF溶液，1.39mL，1.39mmol)，将其通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(8∶1己烷∶EtOAc)，得到标题化合物，为白色固体(0.266g，77％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34(app t,J＝7.6Hz,4H),7.29(t,J＝7.2Hz,2H),7.22(d,J＝6.8Hz,4H),6.63(app t,J＝1.6Hz,1H),6.56–6.53(m,2H),4.65(s,4H),1.63–1.58(m,2H),1.26–1.20(m,2H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+373.0；tR＝3.00min.HPLC方法3(酸)。
步骤102-3：1-(3-(二苄基氨基)-5-(丙-1-烯-2-基)苯基)环丙烷-1-甲腈。将1-(3-氯-5-(二苄基氨基)苯基)环丙烷-1-甲腈(0.128g，0.34mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(0.13mL，0.69mmol)和碳酸钾(0.142g，1.03mmol)溶于二噁烷(4.6mL)和水(1.2mL)中。将反应混合物用氮气脱气20分钟，快速加入(2-二环己基膦-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联苯基)[2-(2′-氨基-1,1′-联苯基)]钯(II)甲磺酸酯(0.028g，10mol％)，然后再用氮气吹扫烧瓶10分钟。将反应混合物加热至100℃保持3.5h，然后冷却至室温。反应混合物用EtOAc(40mL)稀释，用水(3×20mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，将其通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(15：1己烷∶EtOAc，然后3∶1)，得到标题化合物，为浅黄色油状物(0.053g，41％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.38(app t,J＝6.8Hz,4H),7.34–7.27(m,6H),6.80–6.77(m,2H),6.60(app t,J＝2.0Hz,1H),5.25–5.22(m,1H),5.05(app pent,J＝1.2Hz,1H),4.72(s,4H),2.06(s,3H),1.65–1.60(m,2H),1.31–1.26(m,2H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+379.0；tR＝3.05min.HPLC方法3(酸)。
步骤102-4：1-(3-氨基-5-异丙基苯基)环丙烷-1-甲腈。通过与步骤50-3类似的方法，使用1-(3-(二苄基氨基)-5-(丙-1-烯-2-基)苯基)环丙烷-1-腈(0.060g，0.16mmol)、Pd(OH)2,(0.04g，10–20％Pd基底)、DCM(1.0mL)MeOH(2.0mL)和H2(1个大气压)制备。粗产物通过二氧化硅快速柱色谱法(DCM)纯化，得到标题化合物，为无色残余物(0.021g，66％)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ6.52–6.50(m,1H),6.48–6.46(m,1H),6.44(app t,J＝2.0Hz),3.79–3.59(br s,2H),2.79(sept,J＝6.8Hz,1H),1.68–1.62(m,2H),1.40–1.34(m,2H),1.21(d,J＝6.8Hz,6H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+201.1；tR＝2.32min.HPLC方法3(酸)。
步骤102-5：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(1-氰基环丙基)-5-异丙基苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将1-(3-氨基-5-异丙基苯基)环丙烷-1-腈(0.021g，0.10mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.021g，0.11mmol)、三乙胺(0.02mL，0.14mmol)溶于无水二噁烷(2.0mL)和DMF(0.5mL)中。将混合物在50℃加热1.5h，然后冷却至室温。加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.021g，0.10mmol)和三乙胺(0.02mL，0.14mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。将反应混合物用EtOAc(10mL)稀释，并用水(5×10mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，由两次置换得到粗产物，将其通过二氧化硅快速柱色谱纯化(1：4己烷:EtOAc)。将中间体溶解在Et2O(6mL)中，并逐滴加入4M HCl的二噁烷(2.0mL)溶液。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后加入己烷(10mL)。将得到的悬浮液过滤，将固体干燥，得到标题化合物的盐酸盐，为白色粉末(0.010，22％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.92(s,1H),8.35–8.14(m,1H),7.64–7.50(m,1H),7.35–7.26(m,1H),4.79(app d,J＝10.0Hz,1H),4.52–4.30(m,1H),4.25–4.08(m,1H),4.07–3.94(m,1H),3.94–3.80(1H),2.63–2.46(m,1H),2.43–2.27(m,1H),2.27–2.08(3H),1.95–1.82(m,2H),1.62(d,J＝6.8Hz,6H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+420.0；tR＝2.34min.HPLC方法3(酸)。
实施例103：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(吡咯烷-1-基磺酰 基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤103-1:3-(叔丁基)-5-硝基苯磺酰氯。向1-(叔丁基)-3-硝基苯(179mg，1mmol)在CHCl3(15mL)中的溶液中一次性加入氯磺酸(167μL，2.5mmol)，并将混合物回流搅拌48h。
原料完全消耗后，添加水(15mL)和DCM(15mL)，粗产物分层，水层用DCM(2x20 mL)萃取，合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。粗产物通过快速柱色谱法纯化(梯度：己烷/乙酸乙酯＝(9∶1)至(3∶1))，得到所需产物，为棕色油状物(235mg，85％)1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.73(t,J＝1.9Hz,1H),8.62(t,J＝1.9Hz,1H),8.35(t,J＝1.9Hz,1H),1.48(s,9H)；m/z(ES)[M+Na]+300.0。
步骤103-2:1-((3-(叔丁基)-5-硝基苯基)磺酰基)吡咯烷将3-(叔丁基)-5-硝基苯磺酰氯(415mg，1.5mmol)和仲胺(3.4mmol)在THF(7mL)中的溶液在室温搅拌2h。原料完全消耗后，加入水(7mL)，蒸发溶剂，并将所需产物过滤并收集为白色固体。(0.240g，48％)。1HNMR(300MHz,CDCl3)δ8.50–8.47(m,1H),8.46(t,J＝2.0Hz,1H),8.16(t,J＝1.7Hz,1H),3.31(ddd,J＝6.8,4.4,2.6Hz,4H),1.90–1.80(m,4H),1.44(s,9H)；m/z(ES)[M+Na]+335.1。
步骤103-3：3-(叔丁基)-5-(吡咯烷-1-基磺酰基)苯胺。将1-((3-(叔丁基)-5-硝基苯基)磺酰基)吡咯烷(1eq)和碳载钯(一匙)在MeOH(4mL)中的溶液在5atm氢气下搅拌过夜。然后将混合物通过
Figure BDA0002776695470001541
过滤，将溶剂蒸发，将粗产物通过快速柱色谱法纯化(梯度：己烷/乙酸乙酯＝(4∶1)至(2∶1))，得到所需产物，为白色固体(0.142g，60％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.10(t,J＝1.6Hz,1H),6.90–6.85(m,1H),6.83–6.79(m,1H),3.78(s,1H),3.15(ddd,J＝6.8,4.4,2.7Hz,4H),1.70–1.62(m,4H),1.22(s,9H)；m/z(ES)[M+Na]+305.1。
步骤103-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(吡咯烷-1-基磺酰基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与实施例3类似的方法(步骤1：THF，DIPEA，12h，RT)，使用3-(叔丁基)-5-(吡咯烷-1-基磺酰基)苯胺并直接代替步骤2中的(S)-哌啶-3-胺盐酸盐来制备(7.9mg，8％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.75(s,1H),8.65(s,1H),7.54(t,J＝1.6Hz,1H),7.51(s,1H),4.70(s,1H),4.37(s,1H),3.50(s,2H),3.43–3.35(m,1H),3.27(t,J＝6.8Hz,4H),2.19(s,1H),1.94(dd,J＝9.2,4.0Hz,1H),1.83–1.63(m,6H),1.40(s,9H)；HRMSm/z[M+H]+C24H36N7O3S计算值502.2600，实测值502.2610。
实施例104：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(吗啉代磺酰基)苯 基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤104-1：3-(叔丁基)-5-(吗啉-1-基磺酰基)苯胺。通过与步骤103-1至103-3类似的方法制备(0.350g，87％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.00(t,J＝1.6Hz,1H),6.84–6.81(m,1H),6.81–6.77(m,1H),3.94(s,2H),3.71–3.60(m,4H),2.91(dd,J＝5.6,3.9Hz,4H),1.22(s,9H)；m/z(ES)[M+Na]+321.1。
步骤104-2：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(吗啉代磺酰基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与实施例3类似的方法制备(步骤1：THF，DIPEA，12h，RT)，使用3-(叔丁基)-5-(吗啉代磺酰基)苯胺并直接代替步骤2中的(S)-哌啶-3-胺盐酸盐来制备(0.083g，43％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.65(s,1H),8.63(s,1H),7.57(s,1H),7.46(t,J＝1.6Hz,1H),4.65(s,1H),4.35(s,1H),3.77–3.66(m,4H),3.51(s,2H),3.41–3.36(m,1H),3.02–2.95(m,4H),2.18(s,1H),1.92(dd,J＝9.4,3.8Hz,1H),1.84–1.64(m,2H),1.41(s,9H)；HRMS m/z[M+H]+C24H36N7O4S计算值518.2549，实测值[MH]+518.2554。
实施例105：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(N,N-二甲基氨磺酰 基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤105-1：3-(叔丁基)-5-(二甲基胺-1-基磺酰基)苯胺。通过与步骤103-1至103-3类似的方法制备(0.250g，70％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.03(t,J＝1.6Hz,1H),6.84–6.80(m,1H),3.93(s,2H),2.61(s,6H),1.22(s,9H)；m/z(ES)[M+H]+257.1。
(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(N,N-二甲基氨磺酰基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与实施例3类似的方法制备(步骤1：THF，DIPEA，12h，RT)，使用3-(叔丁基)-5-(二甲基胺-1-基磺酰基)苯胺并直接代替步骤2中的(S)-哌啶-3-胺盐酸盐来制备(0.015g，5％)。1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.65(s,2H),7.54(s,1H),7.47(t,J＝1.6Hz,1H),4.66(s,1H),4.36(s,1H),3.54(s,2H),3.42–3.34(m,1H),2.72(s,6H),2.27–2.11(m,1H),1.99–1.87(m,1H),1.84–1.62(m,2H),1.40(s,9H)；HRMS m/z[M+H]+C22H34N7O3S计算值476.2444，实测值476.2436。
实施例106：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(甲基磺酰基)苯基) 氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤106-1：3-(叔丁基)-5-硝基苯硫醇。向3-(叔丁基)-5-硝基苯磺酰氯(277mg，1mmol)在甲苯(8mL)中的溶液中分批加入三苯基膦(786mg，3mmol)，并将反应在室温搅拌10分钟。原料完全消耗后，加入水(4mL)，将混合物分层。有机层用NaOH水溶液(10％，2×15mL)萃取，水层用EtOAc(2×15mL)洗涤，用浓HCl酸化并用DCM(2×15mL)萃取。合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩，得到所需产物，为澄清油状物(152mg，72％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.94(t,J＝1.9Hz,1H),7.87(t,J＝1.9Hz,1H),7.49(t,J＝1.9Hz,1H),3.62(s,1H),1.27(s,9H)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ177.5,154.1,133.1,132.0,121.0,117.9,35.2,31.0；m/z(ES)C10H13NO2S[M]+211.1。
步骤106-2：(3-(叔丁基)-5-硝基苯基)(甲基)硫烷。向3-(叔丁基)-5-硝基苯硫醇(210mg，1mmol)在EtOH(5mL)中的溶液中加入NaOH(48mg，1.2mmol)，并将混合物在室温搅拌2h。加入甲基碘(69μL，1.1mmol)，并使混合物反应过夜。将反应用水和EtOAc稀释，用EtOAc(2×10mL)萃取，将合并的有机层用盐水(1×15mL)洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。粗产物通过快速柱色谱法纯化(梯度：己烷/乙酸乙酯＝(5∶1)至(3∶1))，得到所需产物，为无色油状物(220mg，98％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.92(t,J＝1.8Hz,1H),7.79(t,J＝1.8Hz,1H),7.48(t,J＝1.8Hz,1H),2.49(s,3H),1.28(s,9H)。
步骤106-3：1-(叔丁基)-3-(甲基磺酰基)-5-硝基苯。在室温下向(3-(叔丁基)-5-硝基苯基)(甲基)硫烷(420mg，1.88mmol)的DCM(4mL)0℃溶液中一次性加入mCPBA(1.1g，4.7mmol)。将混合物温热至室温并反应2h。原料完全消耗后，将混合物用NaHCO3(2×10mL)和盐水(1×10mL)洗涤，用MgSO4干燥并浓缩。将粗产物通过快速柱色谱法纯化(梯度：己烷/乙酸乙酯＝(4∶1)至(2∶1))，得到所需产物，为白色固体(333mg，73％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.64–8.58(m,1H),8.52(t,J＝1.9Hz,1H),8.28(t,J＝1.9Hz,1H),3.16(s,3H),1.44(s,9H)。
步骤106-4：3-(叔丁基)-5-(甲基磺酰基)苯胺将1-(叔丁基)-3-(甲基磺酰基)-5-硝基苯(333mg，1.3mmol)和碳载钯(一匙)在MeOH(6mL)中的溶液在5atm氢气下搅拌过夜。然后将混合物通过硅藻土过滤，将溶剂蒸发，将粗产物通过快速柱色谱法纯化(梯度：己烷/乙酸乙酯＝(4∶1)至(2∶1))，得到所需产物，为白色固体(230mg，76％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.31(t,J＝1.6Hz,1H),7.05(dd,J＝2.1,1.7Hz,1H),6.95–6.93(m,1H),4.02(s,1H),3.04(s,3H),1.32(s,9H)；m/z(ES)C11H17NO2S[MH]+228.1。
步骤106-5：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(甲基磺酰基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与实施例3类似的方法制备(步骤1：THF，DIPEA，12h，RT)，使用3-(叔丁基)-5-(甲基磺酰基)苯胺，得到白色固体(32mg，10％)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.79(s,1H),8.62(s,1H),7.68(t,J＝1.6Hz,1H),7.55(s,1H),4.71(s,1H),4.38(d,J＝11.8Hz,1H),3.60–3.36(m,3H),3.21(s,3H),2.21(d,J＝4.3Hz,1H),1.93(dd,J＝10.3,5.0Hz,1H),1.86–1.65(m,2H),1.40(s,9H)；m/z(ES HRMS)C21H30N6O3S计算值447.2178，实测值[MH]+447.2174。
实施例107：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(吡咯烷-1-基磺酰基)-5-(三氟甲 基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤107-1：3-(吡咯烷-1-基磺酰基)-5-(三氟甲基)苯胺。通过与步骤103-1至103-3类似的方法，使用3-硝基-5-(三氟甲基)苯磺酰氯制备，得到白色固体。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.30(s,1H),7.19(s,1H),6.98(s,1H),4.14(br s,2H),3.21–3.16(m,4H),1.75–1.70(m,4H)。
步骤107-2：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(吡咯烷-1-基磺酰基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与实施例3类似的方法(步骤1：THF，DIPEA，16h，RT)，使用3-(吡咯烷-1-基磺酰基)-5-(三氟甲基)苯胺并直接代替步骤2中的(S)-哌啶-3-胺盐酸盐来制备。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.99(br s,1H),8.62(s,1H),7.95(br s,1H),7.69(s,1H),4.78–4.60(m,1H),4.58–4.33(m,1H),3.34–3.27(m,4H),3.28–3.19(m,2H),3.11–2.88(m,1H),2.14–1.96(m,1H),1.93–1.82(m,1H),1.85–1.63(m,4H),1.70–1.43(m,2H).HRMSm/z[M+H]+
C21H27N7O3F3S计算值514.1848，实测值514.1847。
实施例108：2-氯-4-((3-(N-甲基氨磺酰基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲 酰胺
步骤108-1：N-甲基-3-硝基-5-(三氟甲基)苯磺酰胺。通过与步骤107-1类似的方法制备。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.41(s,1H),7.29(s,1H),7.04(s,1H),4.49(br s,1H),4.18(br s,2H),2.69(d,J＝3.6Hz,3H)。
步骤108-2：2-氯-4-((3-(N-甲基氨磺酰基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与实施例3类似的方法(步骤1：二噁烷，没有基底，48h，100℃)，使用3-(吡咯烷-1-基磺酰基)-5-(三氟甲基)苯胺并直接代替步骤2中的(S)-哌啶-3-胺盐酸盐来制备。HNMR(300MHz,MeOD)δ9.09(s,1H),8.78(s,1H),8.43(s,1H),8.37(s,1H),8.04(s,1H),7.83(s,1H),2.64(s,3H)。
实施例109：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(氮杂环丁烷-1-基)-5-(三氟甲 基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺盐酸盐
步骤109-1：3-(氮杂环丁烷-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺。根据改编自WO2011035332的Ullman反应制备。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.28(br s,1H),6.08(br s,1H),5.84(br s,1H),3.86(tr,J＝7.3Hz,4H),3.70(br s,2H),2.35(pent.,J＝7.3Hz,2H).m/z(ES+)(M+H)+217.2；tR＝2.68min。HPLC方法1。
步骤109-2：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(氮杂环丁烷-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺盐酸盐。通过与实施例3类似的方法，使用3-(氮杂环丁烷-1-基)-5-(三氟甲基)苯胺制备，得到盐酸盐(步骤1：nBuOH，DIPEA，50℃，1h，步骤2：nBuOH，DIPEA，50℃，15分钟；步骤3：HCl的二噁烷溶液(4M)，RT)。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.58(s,1H),7.39(br s,1H),7.14(br s,1H),6.90(s,1H),4.33(dd,J＝13.6,3.7Hz,1H),4.07(br s,1H),3.83-3.75(m,1H),3.72(tr,J＝6.4Hz,2H),3.67-3.60(m,1H),3.57-3.51(m,1H),3.36(tr,J＝6.8Hz,2H),2.24-2.17(m,1H),2.13(pent,J＝6.6Hz,2H),2.02-1.94(br s,1H),1.90-1.77(m,2H).m/z(ES+)(M+H)+436.2；tR＝2.32min。HPLC方法1。
实施例110：4-((3-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2-(3- 氨基哌啶-1-基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤110-1：叔丁基(S)-(1-(4-((3-溴-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。使用3-溴-5-(三氟甲基)苯胺，按照与步骤3-1和3-2类似的方法制备(步骤1：nBuOH，DIPEA，70℃，3h)。m/z(ES+)(M+H)+451。
步骤110-2：叔丁基(S)-(1-(4-((3-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)氮杂环丁烷-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。向叔丁基(1-(4-((3-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)氮杂环丁烷-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(50mg，0.1mmol)、叔丁基氮杂环丁烷-3-基氨基甲酸酯(17.2mg，0.100mmol)在1,4-二噁烷中的溶液中加入Pd2(dba)3(0.004mmol，4mg)、Xant-phos(0.012mmol，8mg)和Cs2CO3(0.3mmol，98mg)。将反应在N2下在100℃下搅拌。5h后，加入另一当量的试剂，并将反应回流过夜。加入水，混合物用乙酸乙酯萃取，有机层用碳酸氢钠和氯化钠洗涤，并用硫酸钠干燥。除去溶剂，并使用硅胶色谱法，用石油醚-DCM(0-100％)和DCM-THF(0-10％)的梯度纯化所需产物。HPLC:tR＝3.04min,m/z(ES+)(M+H)+651.3.方法1。
步骤110-3：4-((3-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2-(3-氨基哌啶-1-基)嘧啶-5-甲酰胺。向叔丁基(S)-(1-(4-((3-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)氮杂环丁烷-1-基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(20mg)在1,4-二噁烷(1mL)中的溶液中加入4N HCl的1,4-二噁烷(2mL)溶液，并将反应混合物在室温搅拌1h。向反应混合物中加入乙醚，并将固体过滤，得到标题化合物的二盐酸盐(10mg，71％)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.57(s,1H),7.54(s,1H),7.03(s,1H),6.86(s,1H),4.37-4.33(br m,1H),4.09(br s,1H),3.99-3.80(m,2H),3.84-3.71(br m,2H),3.65(s,1H),3.60-3.48(m,2H),2.23-2.21(br m,1H),2.01-1.91(br m,1H),1.88-1.75(br m,2H)。
实施例111：(S)-4-((3-(2-乙酰氨基丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2- (3-氨基哌啶-1-基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤111-1：N-(2-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)丙烷-2-基)乙酰胺。根据J.Med.Chem.2011,54,1836-1846由2-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)丙烷-2-基)制备(106mg，89％)，m/z(ES+)(M+H)+260.9；tR＝2.40min。HPLC方法1。
步骤111-2：(S)-4-((3-(2-乙酰氨基丙-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2-(3-氨基哌啶-1-基)嘧啶-5-甲酰胺。使用N-(2-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)丙烷-2-基)乙酰胺，通过与实施例3类似的方法制备(步骤1：CH3CN，DIPEA，60℃，3h)，在步骤2中使用(S)-3-氨基哌啶二盐酸盐(31mg，47％)。1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.56(s,1H),8.17(s,1H),7.64(s,1H),7.32(s,1H),4.67-4.62(m,1H),4.54-4.49(m,1H),3.10(br t,J＝12.0Hz,1H),2.93-2.89(m,1H),2.82-2.77(m,1H),2.06-2.00(m,1H),1.95(s,3H),1.83-1.78(m,1H),1.67(s,3H),1.65(s,3H),1.60-1.51(m,1H),1.46-1.39(m,1H).m/z(ES+)(M+H)+480.2；tR＝2.16min。HPLC方法1。
实施例112：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(2-氨基丙烷-2-基)-5-(三氟甲 基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤112-1：叔丁基(2-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)丙烷-2-基)氨基甲酸酯。根据J.Med.Chem.2011,54,1836-1846由3-(2-氨基丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯胺制备。m/z(ES+)(M+H)+319.1；tR＝2.89min。HPLC方法1。
步骤112-2:(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(2-氨基丙烷-2-基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。使用叔丁基(2-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)丙烷-2-基)氨基甲酸酯，通过与实施例3类似的方法制备，得到盐酸盐(步骤1：CH3CN，DIPEA，60℃，3h)，(54mg，96％)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.65(s,1H),8.32(br s,1H),7.86(s,1H),7.72(s,1H),4.36(dd,＝13.6,3.5Hz,1H),4.09(br s,1H),3.82-3.71(m,1H),3.68-3.56(m,1H),3.55-3.48(m,1H),2.25-2.16(m,1H),2.03-1.92(m,1H),1.90-1.74(m,1H),1.82(s,6H).m/z(ES+)(M+H)+438.1；tR＝1.91min。HPLC方法1。
实施例113：(S)-4-((3-(2-乙酰氨基丙烷-2-基)-5-(叔丁基)苯基)氨基)-2-(3- 氨基哌啶-1-基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤113-1：叔丁基(2-(3-氨基-5-(叔丁基)苯基)丙烷-2-基)氨基甲酸酯。由2-(3-氨基-5-(叔丁基)苯基)丙-2-基)通过与步骤111-1类似的方法制备。
步骤113-2：(S)-4-((3-(2-乙酰氨基丙烷-2-基)-5-(叔丁基)苯基)氨基)-2-(3-氨基哌啶-1-基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与实施例3类似的方法，使用N-(2-(3-氨基-5-(叔丁基)苯基)丙烷-2-基)乙酰胺(步骤1：CH3CN,DIPEA,70℃,3h)来制备(95mg，67％)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.50(s,1H),7.47(br s,1H),7.16(s,1H),4.65(br d,J＝11.6Hz,1H),4.52(br d,J＝13.8Hz,1H),3.76-3.56(m,2H),3.15-3.07(m,1H),2.97-2.92(m,1H),2.87-2.79(m,1H),2.05-1.98(m,1H),1.94(s,3H),1.82-1.74(m,1H),1.66(s,3H),1.63(s,3H),1.33(s,9H).m/z(ES+)(M+H)+468.3；tR＝2.17min。HPLC方法1。)。
实施例114：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(氮杂环丁烷-3-基)-5-(三氟甲 基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤114-1：叔丁基3-(3-氯-5-(三氟甲基)苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸酯。
将叔丁基3-(2-((4-甲氧基苯基)磺酰基)肼基)氮杂环丁烷-1-羧酸酯(2.2mmol，750mg)、(3-氯-5-(三氟甲基)苯基)硼酸(4.5mmol，1g)和碳酸铯(3.3mmol，1.08g)置于烘箱干燥的微波容器中。加入干燥的1,4-二噁烷(20mL)。通过鼓入氮气使溶液脱气。将管密封并通过微波加热至120℃保持7h。将粗产物用乙酸乙酯稀释，并用饱和NH4Cl水溶液、饱和NaHCO3水溶液、盐水洗涤，最后在Na2SO4上干燥。滤出硫酸钠，真空蒸发溶剂，得到粗残余物，使用梯度PET/DCM将其通过二氧化硅色谱法纯化，得到标题化合物，为浅黄色油状物(225mg，30％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.51(br s,2H),7.43(br s,1H),4.36(tr,J＝8.8Hz,2H),3.94(dd,J＝8.8,5.9Hz,1H),3.79-3.72(m,1H),1.47(s,9H).m/z(ES+)(M+H)+336.1；tR＝3.22min。HPLC方法1。
步骤114-2：叔丁基3-(3-(苄基氨基)-5-(三氟甲基)苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸酯。向微波容器中的叔丁基3-(3-氯-5-(三氟甲基)苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸酯(140mg，0.42mmol)的1,4-二噁烷(6mL)溶液加入苄基胺(0.5mmol，55uL)、Xant-phos配体(0.12mmol，70mg)和Cs2CO3(0.5mmol，160mg)。将该悬浮液用N2脱气5分钟，并添加Pd(dba)2(0.04mmol，35mg)。将容器加盖并通过微波加热到105℃保持1h，然后在110℃保持3h。粗产物用EtOAc萃取，并用饱和NH4Cl水溶液、饱和NaHCO3水溶液、盐水洗涤，最后在Na2SO4上干燥。滤出硫酸钠，真空蒸发溶剂，得到粗残余物，使用梯度DCM(100％)/THF(1％，5％，10％)将其通过二氧化硅色谱法纯化，得到黄色油状物(68mg，40％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.37-7.27(m,5H),6.86(br s,1H),6.75(br s,1H),6.70(br s,1H),4.35(s,2H),4.29(tr,J＝8.7Hz,2H),3.92(dd,J＝8.7,6.0Hz,1H),3.69-3.62(m,1H),1.47(s,9H).m/z(ES+)(M+H)+407.0；tR＝3.23min。HPLC方法1。
步骤114-3：叔丁基3-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸酯。
向叔丁基3-(3-(苄基氨基)-5-(三氟甲基)苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸酯(68mg，0.17mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入Pd/C，使用真空/N2冲洗(2x)循环对悬浮液进行脱气，最后将其置于H2气氛下。将悬浮液在室温下搅拌18h。粗产物通过硅藻土垫过滤，蒸发至干，得到黄色油状物(47mg，87％)。粗品不经进一步纯化即使用，m/z(ES+)(M+H)+317.0；tR＝2.95min。HPLC方法1。
步骤114-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(氮杂环丁烷-3-基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与实施例3类似的方法，用叔丁基3-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸酯制备，得到二盐酸盐(步骤1：CH3CN，DIPEA，75℃，3h)。1HNMR(300MHz,MeOD)δ8.63(d,J＝1.1Hz,1H),8.17(br d,J＝20.3Hz,1H),7.82(br d,J＝16.5Hz,1H),7.61(br d,J＝7.4Hz,1H),4.50-4.41(m,2H),4.39-4.28(m,2H),4.07(br s,1H),4.00-3.89(m,1H),3.85-3.75(m,1H),3.57-3.51(m,2H),2.25-2.18(m,1H),2.03-1.94(m,1H),1.90-1.77(m,2H).m/z(ES+)(M+H)+436.1；tR＝0.60min。HPLC方法1。
实施例115：(R)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(1-羟基环丙基)-5-(三氟甲基)苯 基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤115-1：1-(3-(二苄基氨基)-5-(三氟甲基)苯基)环丙-1-醇。在N2下，在室温下，在10分钟内，向甲基3-(二苄基氨基)-5-(三氟甲基)苯甲酸酯(通过与步骤87-1类似的方法，由甲基3-(三氟甲基)-5-氨基苯甲酸酯制备，1.16g)的无水THF(20mL)溶液中滴加四异丙氧基钛(0.45mmol，0.135mL)。搅拌15分钟后，在30分钟内滴加乙基溴化镁(THF溶液，6.62mmol，0.762mL)。将反应在室温搅拌3h。将所得混合物用NH4Cl淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-30％DCM/石油醚)得到标题化合物(39％)。HPLC(方法1)：tR＝3.21min,m/z(ES+)(M+H)+398.1。
步骤115-2：1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)环丙-1-醇。向(3-(二苄基氨基)-5-(三氟甲基)苯基)环丙-1-醇的甲醇溶液中添加Pd/C(10％)，并将反应在H2气下在室温搅拌2h。过滤Pd/C，除去甲醇，并使用硅胶色谱法，用0-30％DCM的石油醚溶液纯化粗混合物，得到标题化合物(84％)。HPLC(方法1)：tR＝2.47min,m/z(ES+)(M+H)+218.2。
(R)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(1-羟基环丙基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与实施例3类似的方法，在步骤1中使用1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)环丙-1-醇，并在步骤2中使用(R)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯来制备。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.8(s,1H),8.69(S,1H),8.19-7.87(m,2H),7.41-7.18(m,2H),4.64-4.57(brs,1H),3.04-3.29(br m,1H),2.82-2.27(br m,1H),2.27-2.26(br m,1H),1.99-1.93(brm,1H),1.75-1.67(br m,2H),1.37-1.29(m,2H),1.22-1.18(m,2H),1.10-1.04(m,2H),0.88-0.82(m,2H)；HPLC(方法1)：tR＝2.19min,m/z(ES+)(M+H)+437.3。
实施例116：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(1-羟基环丙基)-5-(三氟甲基)苯 基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
使用1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)环丙-1-醇通过与实施例3类似的方法制备。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.8(s,1H),8.69(S,1H),8.19-7.87(m,2H),7.41-7.18(m,2H),4.64-4.57(br s,1H),3.04-3.29(br m,1H),2.82-2.27(br m,1H),2.27-2.26(br m,1H),1.99-1.93(br m,1H),1.75-1.67(br m,2H),1.37-1.29(m,2H),1.22-1.18(m,2H),1.10-1.04(m,2H),0.88-0.82(m,2H)；HPLC(方法1)：tR＝2.20min,m/z(ES+)(M+H)+437.2
实施例117：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(1-羟基环丙基)苯 基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤117-1 1-(3-(叔丁基)-5-(二苄基氨基)苯基)环丙-1-醇。在N2下，在室温下，在10分钟内，向甲基3-(叔丁基)-5-(二苄基氨基)苯甲酸酯(通过与步骤87-1类似地方法，由甲基3-(叔丁基)-5-氨基苯甲酸酯制备，1.16g，3mmol)的无水THF(20mL)溶液中滴加四异丙氧基钛(0.45mmol，0.135mL)。搅拌15分钟后，在30分钟内滴加EtMgBr(THF溶液，6.62mmol，0.762mL)。将反应在室温搅拌3h。将所得混合物用NH4Cl淬灭，并用乙酸乙酯萃取。。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-30％DCM/石油醚)得到标题化合物(52％)。HPLC(方法1)：tR＝3.30min,m/z(ES+)(M+H)+385.9。
步骤117-2：1-(3-氨基-5-(叔丁基)苯基)环丙-1-醇向1-(3-(叔丁基)-5-(二苄基氨基)苯基)环丙-1-醇(30mg)在MeOH(5mL)中的溶液中加入Pd(OH)2/C，使用真空/N2冲洗循环(2x)进行脱气，然后将其置于H2气氛下保持30min。过滤Pd(OH)2/C，除去甲醇，得到1-(3-氨基-5-(叔丁基)苯基)环丙-1-醇和1-(3-氨基-5-(叔丁基)苯基)丙-1-醇的混合物，其不进行进一步纯化直接使用。
步骤117:3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(1-羟基环丙基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与实施例3类似的方法，使用粗品1-(3-氨基-5-(叔丁基)苯基)环丙-1-醇制备(步骤1：CH3CN，DIPEA，80℃，2h)，得到产物混合物，将其通过制备型HPLC(phenomenex 20mm x 100mm C18 5m色谱柱)纯化，使用缓慢梯度的水/MECN(10分钟内5至40％)，得到标题化合物。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ8.57(s,1H),8.31(br s,3H),7.76(br s,1H),7.30(s,1H),7.03(s,1H),4.56(d,J＝13.0Hz,1H),4.24(br d,J＝15.9Hz,1H),3.62-3.54(m,2H),2.20-2.11(m,1H),1.91-1.81(m,1H),1.81-1.62(m,2H),1.33(s,9H),1.22–1.17
实施例118：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(1-甲氧基环丙基)苯 基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤118-1：N,N-二苄基-3-(叔丁基)-5-(1-甲氧基环丙基)苯胺。向化合物(300mg，1.28mmol)在7mL无水THF中的溶液中添加NaH(40mg，1.6mmol)和MeI(65μl，0.9mmol)，并将该反应在室温搅拌16h。除去THF，并使用硅胶色谱法，用0-20％DCM的石油醚溶液纯化粗品，得到标题化合物(50％)。HPLC(方法1)：tR＝3.58min,m/z(ES+)(M+H)+399.8,401.2。
步骤118-2：3-(叔丁基)-5-(1-甲氧基环丙基)苯胺。通过与步骤115-2类似的方法，使用N,N-二苄基-3-(叔丁基)-5-(1-甲氧基环丙基)苯胺制备。HPLC(方法1)：tR＝2.42min,m/z(ES+)(M+H)+220.1。
步骤118-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(1-甲氧基环丙基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。使用1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)环丙-1-醇通过与实施例3类似的方法制备。HPLC(方法1)：tR＝2.35min,m/z(ES+)(M+H)+439.4。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.36(s,1H),9.4(s,1H),8.38-8.11(br m,3H),7.80-7.78(m,2H),3.98(s,3H),3.97(s,2H),3.95(s,1H),2.83-2.73(br s,1H),2.57-2.49(brm,2H),2.33-2.22(br s,2H),2.11(s,9H),2.04(br s,2H),1.96-1.93(m,2H),1.81-1.75(br m,2H),1.67-1.62(m,2H)。
实施例119：2-((S)-3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(1-羟基丙基)苯基) 氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤119-1:1-(3-氨基-5-(叔丁基)苯基)丙-1-醇。使用与步骤117-2类似的方法，由1-(3-(叔丁基)-5-(二苄基氨基)苯基)环丙-1-醇制备(Pd/C，乙醇，RT 16h)。1H NMR(300MHz,MeOD)δ6.77(dd,J1＝J2＝1.5Hz,1H),6.73(dd,J1＝J2＝1.9Hz,1H),6.56(dd,J1＝J2＝1.7Hz,1H),4.40(tr,J＝6.6Hz,1H),1.80-1.62(m,2H),1.28(s,9H),0.88(tr,J＝7.4Hz,3H),m/z(ES+)(M+H)+207.8；tR＝2.27min(HPLC方法1)。
步骤119-2：2-((S)-3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(1-羟基丙基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。使用叔丁基(3R)-1-(4-(3-叔丁基-5-(1-羟基-丙基)苯基氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-2-基)哌啶-3-基氨基甲酸酯(步骤1)和(S)-3-氨基哌啶二盐酸盐(步骤2)通过与实施例3类似的方法制备。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.54(s,1H),7.77(br s,1H),7.35(s,1H),7.06(s,1H),4.63(tr,J＝14.1Hz,1H),4.53(tr,J＝6.5Hz,1H),4.43(tr,J＝11.8Hz,1H),3.27-3.10(m,2H),3.03-2.94(m,1H),2.07(br s,1H),1.85-1.68(m,3H),1.63–1.50(m,2H),1.33(s,9H),0.94-0.88(m,3H),m/z(ES+)(M+H)+427.0；tR＝2.24min。HPLC方法1。
实施例120：2-((R)-3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(1-羟基丙基)苯基) 氨基)嘧啶-5-甲酰胺
使用叔丁基(3R)-1-(4-(3-叔丁基-5-(1-羟基-丙基)苯基氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-2-基)哌啶-3-基氨基甲酸酯(步骤1)和(R)-3-氨基哌啶二盐酸盐(步骤2)通过与实施例3类似的方法制备。1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.54(s,1H),7.77(br s,1H),7.35(s,1H),7.06(s,1H),4.63(tr,J＝14.1Hz,1H),4.53(tr,J＝6.5Hz,1H),4.43(tr,J＝11.8Hz,1H),3.27-3.10(m,2H),3.03-2.94(m,1H),2.07(br s,1H),1.85-1.68(m,3H),1.63–1.50(m,2H),1.33(s,9H),0.94-0.88(m,3H),m/z(ES+)(M+H)+427.3；tR＝2.23min。HPLC方法1。
实施例121：2-((S)-3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(1-甲氧基丙基)苯 基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤121-1；N,N-二苄基-3-(叔丁基)-5-(1-甲氧基丙基)苯胺。向N,N-二苄基-3-(叔丁基)-5-(1-甲氧基环丙基)苯胺(150mg，0.38mmol)的甲醇溶液中添加Pd/C(10％)，并将反应在H2气下在室温搅拌4h。过滤Pd/C，除去甲醇，并使用硅胶色谱法，用0-30％DCM的石油醚溶液纯化粗混合物，得到标题化合物(24％)。HPLC(方法1)：tR＝2.26min,m/z(ES+)(M+H)+222.1。
步骤121-2：2-((S)-3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(叔丁基)-5-(1-甲氧基丙基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。使用N,N-二苄基-3-(叔丁基)-5-(1-甲氧基丙基)苯胺，通过与实施例3类似的方法制备。1H NMR(500MHz,MeOD-d4)δ8.54(s,1H),7.92-7.68(br s,1H),7.44-7.28(br s,1H),7.07(s,1H)4.71-4.64(br m,1H),4.54-4.49(br m,1H),4.32-4.28(t,3H),3.23-3.15(m,1H),3.08-2.99(m,1H),2.93-2.87(m,1H),2.10-2.02(br m,1H),1.96-1.90(m,1H),1.84-1.80(m,1H),1.63-1.55(m,1H),1.52-1.45(m,1H),1.35(s,9H),1.31(s,2H),1.04-1.02(d,3H),0.83-0.80(t,3H).HPLC(方法1)：tR＝2.29min,m/z(ES+)(M+H)+441.4,
实施例122(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(1-甲氧基环丙基)-5-(三氟甲基) 苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤122-1:N,N-二苄基-3-(1-甲氧基环丙基)-5-(三氟甲基)苯胺。向1-(3-氨基-5-(三氟甲基)苯基)环丙-1-醇(150mg，0.4mmol)在7mL无水THF中的溶液中加入NaH(20mg，0.4mmol)和MeI(35μL，0.6mmol)。16h后，去除THF，使用硅胶色谱法，用0-20％DCM的石油醚溶液纯化粗产物，得到标题化合物(99mg，64％)。HPLC(方法1)：tR＝3.44min,m/z(ES+)(M+H)+412.1
步骤122-2：3-(1-甲氧基环丙基)-5-(三氟甲基)苯胺。通过与步骤115-2类似的方法使用N,N-二苄基-3-(1-甲氧基环丙基)-5-(三氟甲基)苯胺制备。HPLC(方法1)：tR＝2.82min,m/z(ES+)(M+H)+231.8。
步骤122-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3-(1-甲氧基环丙基)-5-(三氟甲基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。使用3-(1-甲氧基环丙基)-5-(三氟甲基)苯胺，通过与实施例3类似的方法制备。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.8(s,1H),8.69(s,1H),8.09-8.00(m,2H),7.20(s,1H),4.53-4.37(br s,2H),3.18(s,3H),2.35-2.33(m,1H),1.92-1.85(m,1H),1.74-1.69(m,2H),1.69-1.51(br s,1H),1.27-1.23(m,2H),1.23-1.19(m,2H),1.13-1.08(m,2H)；HPLC(方法1)：tR＝2.31min,m/z(ES+)(M+H)+451.3。
实施例123：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-异丙基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基) 吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤123-1：2-溴-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺。将碳酸钾(7.5g，53.7mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(3.88mL，23.3mmol)和2,6-二溴吡啶-4-胺(4.0g，17.9mmol)在1,4-二噁烷(200mL)和水(40mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫10min。加入PdCl2(PPh3)2(0.78g，1.3mmol)，并再继续吹扫10分钟。然后将反应加热至80℃，并在氮气下搅拌1h。冷却后，将溶液用水(30mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(50％CH2Cl2/己烷)，得到标题化合物(1.58g，42％)m/z(M+H)+(ES+)213.09；tR＝02.22min。HPLC方法2.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.61(d,1H,J＝1.7Hz),6.59(d,1H,J＝1.7Hz),5.86(m,1H),5.23(m,1H),4.19(brs,2H),2.11(s,3H)。
步骤123-2：2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺。将碳酸钾(1.9g，14.20mmol)、2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(1.3g，6.13mmol)和2-溴-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺(1.0g，4.72mmol)在1,4-二噁烷(40mL)和水(10mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫10分钟。加入PdCl2(PPh3)2(0.17g，0.24mmol)，并再继续吹扫10分钟。然后将反应加热至100℃，并在氮气下搅拌1h。冷却后，将溶液用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(40％AcOEt的己烷溶液)，得到标题化合物(1.0g，98％)。m/z(M+H)+(ES+)217.2；tR＝2.3min。HPLC方法2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.75-6.68(m,1H),6.61(d,J＝1.9Hz,1H),6.50(d,J＝1.9Hz,1H),5.90-5.83(m,1H),5.27-5.19(m,1H),4.35(app.q,J＝2.8Hz,2H),4.08(s,2H),3.92(t,J＝5.5Hz,2H),2.65-2.58(m,2H),2.17(dd,J＝1.6,0.8Hz,3H)。
步骤123-3：2-氯-4-((2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。向2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.82g，4.26mmol)在1,4-二噁烷(30mL)中的搅拌溶液中加入2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺(0.71g，0.3.27mmol)和DIPEA(0.77mL，4.41mmol)。将反应加热至90℃并搅拌18h。使混合物冷却并在真空下浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(50-100％EtOAc/己烷)，得到标题化合物(0.65g，53％)m/z(M+H)+(ES+)372.2；tR＝2.85min。HPLC方法2。
步骤123-4：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。向2-氯-4-((2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(80mg，0.22mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的搅拌溶液中加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(48mg，0.24mmol)和DIPEA(0.04mL，0.24mmol)。将反应加热至90℃并搅拌18h。使混合物冷却并在真空下浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(50-100％EtOAc/己烷)，得到标题化合物(31mg，26％)。m/z(M+H)+(ES+)535.3；tR＝2.28min。HPLC方法2。
步骤123-5：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((2-异丙基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。向叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(31mg，0.06mmol)在CH2Cl2(1mL)和MeOH(2mL)中的搅拌溶液中加入Pd/C(10％Pd,9mg)。将混合物置于H2气氛(1atm)下，搅拌18h。将粗混合物通过
Figure BDA0002776695470001671
垫过滤，并在真空下浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(5％MeOH/CH2Cl2)，得到标题化合物(30mg，96％)。m/z(M+H)+(ES+)540.3；tR＝2.25min。HPLC方法2。
步骤123-6：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-异丙基-6-(四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。向叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((3-异丙基-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(30mg，0.058mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的搅拌溶液中加入4N HCl的二噁烷(1mL)溶液，并将混合物搅拌18h。将混合物减压浓缩，得到标题化合物的盐酸盐(20mg，79％)。m/z(M+H)+(ES+)440.4；tR＝1.62min。HPLC方法2.1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.80(s,1H),8.04(s,1H),7.92(s,1H),4.58-4.48(m,1H),4.19(br.s,1H),4.14-4.00(m,2H),3.85-3.68(m,2H),3.67-3.49(m,3H),3.44(br.s,1H),3.21(br.s,1H),2.18(br.s,1H),2.03-1.70(m,7H),1.49-1.35(m,6H)。
实施例124：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-(1,1-二氧四氢-2H-硫吡喃-4- 基)-6-异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤124-1：2-(3,6-二氢-2H-硫吡喃-4-基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺。将碳酸钾(0.76g，5.5mmol,),2-(3,6-二氢-2H-硫吡喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(0.54g，2.4mmol)和2-溴-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺(0.40g，1.8mmol)在1,4-二噁烷(15mL)和水(3mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫10分钟。加入PdCl2(PPh3)2(0.13g，0.2mmol)，并再继续吹扫10分钟。然后将反应加热至100℃，并在氮气下搅拌1h。冷却后，将溶液用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(20-50％EtOAc/己烷)，得到标题化合物(0.30g，70％)。.m/z(M+H)+(ES+)233.28；tR＝2.48min。HPLC方法2.1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.78(m,1H),6.61(d,1H,J＝2.0Hz),6.51(d,1H,J＝2.0Hz),5.86(m,1H),5.21(m,1H),4.05(br s,2H),3.39-3.35(m,2H),2.90-2.86(m,2H),2.85-2.80(m,2H),2.16(s,3H)。
步骤124-2：4-(4-氨基-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-2-基)-3,6-二氢-2H-硫吡喃1,1-二氧化物。在0℃下向2-(3,6-二氢-2H-硫吡喃-4-基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺(0.1g，0.4mmol)在CH2Cl2(10mL)中的搅拌溶液中加入m-CPBA(0.3g，1.7mmol)。将混合物在0℃搅拌2h，然后通过添加Na2S2O3水溶液(10mL)淬灭。分离各层，有机层用NaHCO3水溶液(10mL)洗涤，合并的水层用CH2Cl2(3×10mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(40-75％EtOAc/异己烷)，得到标题化合物(48mg，42％)。m/z(M+H)+(ES+)265.27；tR＝2.02min。HPLC方法2.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.65(d,1H,J＝1.9Hz),6.54(d,1H,J＝1.9Hz),6.42(m,1H),5.85(m,1H),5.24(m,1H),4.13(br s,2H),3.84-3.78(m,2H),3.37-3.31(m,2H),3.25-3.19(m,2H),2.16(s,3H)。
步骤124-3：2-氯-4-((2-(1,1-二氧-3,6-二氢-2H-硫吡喃-4-基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。向2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.05g，0.25mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的搅拌溶液中加入4-(4-氨基-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-2-基)-3,6-二氢-2H-硫吡喃1,1-二氧化物(0.05g，0.18mmol)和DIPEA(3.4μL，0.20mmol)。将反应加热至70℃并搅拌18h。使混合物冷却并在真空下浓缩。粗产物通过二氧化硅色谱法纯化(50-100％EtOAc/己烷)，得到标题化合物(35mg，46％)。m/z(M–H)-(ES-)418.18；tR＝2.32min。HPLC方法2。
步骤124-4：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((2-(1,1-二氧-3,6-二氢-2H-硫吡喃-4-基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。向2-氯-4-((2-(1,1-二氧-3,6-二氢-2H-硫吡喃-4-基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(35mg，0.083mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的搅拌溶液中加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(mg，0.083mmol)和DIPEA(1.6μL，0.09mmol)。将反应加热至50℃并搅拌18h，然后冷却并在真空下浓缩。该物质无需进一步纯化即可用于下一步。m/z(M+H)+(ES+)584.39；tR＝2.55min。HPLC方法2。
步骤124-5：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((2-(1,1-二氧四氢-2H-硫吡喃-4-基)-6-异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。向叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((2-(1,1-二氧-3,6-二氢-2H-硫吡喃-4-基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(48mg，0.083mmol)在CH2Cl2(1mL)和MeOH(2mL)中的搅拌溶液中加入Pd/C(10％Pd，9mg)。将混合物置于H2气氛下，搅拌18h。将粗混合物通过硅藻土垫过滤，并在真空下浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(5％MeOH/CH2Cl2)，得到标题化合物(20mg，41％)。m/z(M+H)+(ES+)588.34；tR＝2.46min。HPLC方法2。
步骤124-6：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-(1,1-二氧四氢-2H-硫吡喃-4-基)-6-异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。向叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((2-(1,1-二氧四氢-2H-硫吡喃-4-基)-6-异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(20mg，0.034mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的搅拌溶液中加入4N HCl的二噁烷(1mL)溶液，并将混合物搅拌18H。将混合物减压浓缩，得到标题化合物的盐酸盐(17mg，99％)。m/z(M+H)+(ES+)488.32；tR＝2.07min。HPLC方法2.1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.84(s,1H),8.38(s,1H),7.77(s,1H),4.57(br,1H),4.22(br,1H),3.90-3.74(m,2H),3.55-3.37(m,5H),3.29-3.24(m,2H),2.52-2.37(m,4H),2.23(m,1H),2.05(m,1H),1.92-1.80(m,2H),1.47(d,6H,J＝7.1Hz)。
实施例125：2-((S)-3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-异丙基-6-((顺式)-4-甲氧基环己 基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤125-1：2-溴-4-硝基-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶。将碳酸氢钠(2.75g，32.8mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(2.156mL，11.47mmol)和2,6-二溴-4-硝基吡啶(3.08g，10.93mmol)在1,4-二噁烷(45mL)和水(15mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫10min。加入PdCl2dppf.CH2Cl2(0.892g，1.093mmol)，并再继续吹扫10分钟。然后将反应加热至90℃，在氮气下搅拌2h，然后冷却至室温。将混合物用水(100mL)稀释，并用乙酸乙酯(2×200mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(80g柱，0-50％EtOAc/异己烷)，得到标题化合物(1.958g，56.8％收率)。m/z(M+H)+(ES+)243.1,245.1；tR＝2.44min。HPLC方法2。
步骤125-2：2-(4-甲氧基环己-1-烯-1-基)-4-硝基-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶。将碳酸氢钠(0.265g，3.15mmol)、2-(4-甲氧基环己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(0.25g，1.050mmol)和2-溴-4-硝基-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶(0.255g，1.050mmol)在1,4-二噁烷(3mL)和水(1mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫10min。加入PdCl2dppf.CH2Cl2(0.086g，0.105mmol)，并再继续吹扫10分钟。然后将反应加热至90℃，并在氮气下搅拌2h。冷却后，将反应混合物用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(40g柱，0-10％(0.7M氨/MeOH)/DCM)，得到标题化合物(0.19g，64.7％收率)。m/z(M+H)+(ES+)275.0；tR＝3.00min.HPLC方法2。
步骤125-3：2-异丙基-6-(4-甲氧基环己基)吡啶-4-胺。将2-(4-甲氧基环己-1-烯-1-基)-4-硝基-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶(0.19g，0.693mmol)在甲醇(10mL)中的溶液在H-Cube(10％Pd/C，30x4 mm，全氢气，40℃，1mL/min)中氢化，然后真空浓缩，得到标题化合物(0.135g，0.538mmol，78％收率，非对映异构体的混合物)。m/z(M+H)+(ES+)249.1；tR＝1.40,1.45min。HPLC方法4。
步骤125-4：2-氯-4-((2-异丙基-6-((顺式)-4-甲氧基环己基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。向2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.136g，0.707mmol)和2-异丙基-6-(4-甲氧基环己基)吡啶-4-胺(0.135g，0.544mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.190mL，1.087mmol)。将反应加热至100℃并搅拌4h，然后冷却并在真空下浓缩。粗产物通过硅胶色谱法(12g柱，0-10％MeOH/DCM)纯化，得到标题化合物，为非对映异构体的混合物。将残余物在DCM(5mL)中浆化，并通过过滤收集所得固体，得到标题化合物(0.067g，29.0％收率)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.65(s,1H),8.85(s,1H),8.49(s,1H),8.04(s,1H),7.39(d,1H,J＝1.9Hz),7.37(d,1H,J＝1.9Hz),3.47-3.43(m,1H),3.24(s,3H),2.95(app.p,1H,J＝6.9Hz),2.70-2.62(m,1H),1.96-1.89(m,2H),1.85-1.75(m,2H),1.66-1.58(m,2H),1.57-1.48(m,2H),1.23(d,6H,J＝6.9Hz).m/z(M+H)+(ES+)404.0；tR＝2.59min。HPLC方法4。
步骤125-5：叔丁基((S)-1-(5-氨基甲酰基-4-((2-异丙基-6-((顺式)-4-甲氧基环己基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。
向2-氯-4-((2-异丙基-6-((顺式)-4-甲氧基环己基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(0.032g，0.079mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的搅拌溶液中加入(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.017g，0.087mmol)和DIPEA(0.028mL，0.158mmol)。将反应加热至100℃并搅拌1h，然后冷却并在真空下浓缩。粗产物通过硅胶色谱法(12g柱，0-5％(0.7M氨/MeOH)/DCM)纯化，得到标题化合物(0.041g，86％收率)。m/z(M+H)+(ES+)568.4；tR＝1.73min。HPLC方法2。
步骤125-6：2-((S)-3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-异丙基-6-((顺式)-4-甲氧基环己基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。向叔丁基((S)-1-(5-氨基甲酰基-4-((2-异丙基-6-((顺式)-4-甲氧基环己基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(0.04g，0.070mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的搅拌溶液中加入HCl(4M的1,4-二噁烷溶液)(0.352mL，1.409mmol)，并将反应在室温搅拌16h。然后将反应混合物在真空下浓缩，并加载到在MeOH中的SCX(1g)的柱上。用MeOH洗涤该柱，然后用0.7M氨的MeOH溶液洗脱产物。将得到的混合物真空浓缩。产物通过硅胶色谱法(12g柱，0-10％(0.7M氨/MeOH)/DCM)进一步纯化，得到标题化合物(0.022g，63.4％收率)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.60(s,1H),7.64(d,1H,J＝1.9Hz),7.26(s,1H),4.69-4.61(m,1H),4.59-4.51(m,1H),3.58-3.54(m,1H),3.36(s,3H),3.26-3.18(m,1H),3.02(app.sept.,2H,J＝6.6Hz),2.89-2.80(m,1H),2.75(tt,1H,J＝12.0,3.6Hz),2.13-2.03(m,3H),1.95-1.78(m,3H),1.77-1.67(m,2H),1.66-1.55(m,3H),1.52-1.42(m,1H),1.35-1.26(m,7H)。缺少4个可交换质子。m/z(M+H)+(ES+)468.0；tR＝1.94min。HPLC方法4。
实施例126：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-异丙基-6-(哌啶-4-基)吡啶-4- 基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤126-1：叔丁基4-氨基-6-(丙-1-烯-2-基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸酯。将碳酸钾(0.5g，3.51mmol)、N-Boc-1,2,3,6-四氢吡啶-4-硼酸频哪醇酯(0.5g，1.53mmol)和2-溴-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺(0.25g，1.17mmol)在1,4-二噁烷(8mL)和水(2mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫10分钟。加入PdCl2(PPh3)2(0.08g，0.12mmol)，并再继续吹扫10分钟。然后将反应加热至100℃，并在氮气下搅拌1h。冷却后，将溶液用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(40％AcOEt的己烷溶液)，得到标题化合物(0.3g，81％)。m/z(M+H)+(ES+)316.3；tR＝2.66min。HPLC方法2(碱)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.64(br.s,1H),6.61(d,J＝1.9Hz,1H),6.52–6.48(m,1H),5.86(d,J＝2.1,Hz,1H),5.29–5.16(m,1H),4.15–4.04(m,4H),3.68–3.58(m,2H),2.65–2.59(m,2H),2.17(s,3H),1.48(s,9H)。
步骤126-2：叔丁基4-((5-氨基甲酰基-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-6-(丙-1-烯-2-基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸酯。向2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(79mg，0.42mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的搅拌溶液中加入叔丁基4-氨基-6-(丙-1-烯-2-基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸酯(100mg，0.32mmol)和DIPEA(0.06mL，0.35mmol)。将反应加热至70℃并搅拌48h。使混合物冷却并在真空下浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(梯度50-70％EtOAc的己烷溶液)，得到标题化合物(114mg，76％)。m/z(M+H)+(ES+)471.4；tR＝2.92min。HPLC方法2(碱)。
步骤126-3：叔丁基(S)-4-(4-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)-6-异丙基吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸酯。
向叔丁基4-((5-氨基甲酰基-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-6-(丙-1-烯-2-基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸酯(57mg，0.12mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的搅拌溶液中加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(24mg，0.12mmol)和DIPEA(0.02mL，0.14mmol)。将反应加热至50℃过夜。使混合物冷却并在真空下浓缩。m/z(M+H)+(ES+)635.5；tR＝3.05min。HPLC方法2(碱)。在N2气氛下将粗产物溶解于CH2Cl2(2mL)和MeOH(3mL)中，并添加Pd/C(10％Pd，30mg)。将混合物置于H2气氛(1atm)下，搅拌1h。将粗混合物通过硅藻土垫过滤，在真空下浓缩，无需进一步纯化即可用于下一步。m/z(M+H)+(ES+)639；tR＝2.95min。HPLC方法2。
步骤126-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-异丙基-6-(哌啶-4-基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。向叔丁基(S)-4-(4-((2-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)-5-氨基甲酰基嘧啶-4-基)氨基)-6-异丙基吡啶-2-基)哌啶-1-羧酸酯(73mg，0.11mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的搅拌溶液中加入4N HCl的二噁烷(1mL)溶液，并将混合物搅拌18h。将混合物减压浓缩，得到标题化合物的盐酸盐(60mg，99％)。m/z(M+H)+(ES+)439.5；tR＝2.30min。HPLC方法2(碱)；1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.81(s,1H),8.15–7.93(m,2H),4.49(app.dd,J＝13.3,3.5Hz,1H),4.23–4.04(m,1H),3.98–3.89(m,1H),3.85–3.74(m,1H),3.65–3.58(m,2H),3.54–3.49(m,1H),3.48–3.36(m,2H),3.29–3.17(m,2H),2.37–2.26(m,2H),2.26–2.08(m,3H),2.08–1.98(m,1H),1.96–1.76(m,2H),1.45(d,J＝6.9Hz,6H)。
实施例127：(S)-4-((2-(1-乙酰基哌啶-4-基)-6-异丙基吡啶-4-基)氨基)-2-(3- 氨基哌啶-1-基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤127-1：6-(丙-1-烯-2-基)-1',2',3',6'-四氢-[2,4'-联吡啶]-4-胺向叔丁基4-氨基-6-(丙-1-烯-2-基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-羧酸酯(0.27g，0.87mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的搅拌溶液中加入4N HCl的二噁烷(2mL)溶液，并将混合物搅拌18h。将混合物减压浓缩，并通过硅胶快速色谱法纯化(20％MeOH的DCM溶液)，得到标题化合物，为白色固体(0.17g，90％)。m/z(M+H)+(ES+)216.3；tR＝2.08min。HPLC方法2(碱)；1H NMR(500MHz,MeOD)δδ6.86–6.78(m,2H),6.54–6.49(m,1H),5.79(s,1H),5.60(s,1H),3.99-3.94(m,2H),3.51(app.t,J＝5.4Hz,2H),2.85(s,2H),2.21(s,3H)。
步骤127-2：1-(4-氨基-6-(丙-1-烯-2-基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)乙烷-1-酮。在0℃向6-(丙-1-烯-2-基)-1',2',3',6'-四氢-[2,4'-联吡啶]-4-胺(0.16g，0.74mmol)在DCM(10mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.28mL，1.63mmol)和乙酰氯(0.03mL，0.74mmol)。将混合物搅拌1h，然后用DCM(10mL)稀释，并用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤。浓缩有机相，并将粗产物使用反相色谱法纯化(梯度5-100％乙腈的H2O溶液，含0.1％甲酸)，得到标题化合物，为无色油状物(109mg，57％)。m/z(M+H)+(ES+)253.3；tR＝2.11min。HPLC方法2(碱)。
步骤127-3：4-((1'-乙酰基-6-(丙-1-烯-2-基)-1',2',3',6'-四氢-[2,4'-联吡啶]-4-基)氨基)-2-氯嘧啶-5-甲酰胺向2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(46mg，0.24mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的搅拌溶液中加入1-(4-氨基-6-(丙-1-烯-2-基)-3',6'-二氢-[2,4'-联吡啶]-1'(2'H)-基)乙烷-1-酮(40mg，0.19mmol)和DIPEA(0.04mL，0.21mmol)。将反应加热至70℃并搅拌24h。使混合物冷却并在真空下浓缩。产物无需进一步纯化即可用于下一步。m/z(M+H)+(ES+)413.3；tR＝2.34min。HPLC方法2。步骤127-4：叔丁基(S)-(1-(4-((2-(1-乙酰基哌啶-4-基)-6-异丙基吡啶-4-基)氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯向先前步骤得到的粗品在1,4-二噁烷(4mL)中的搅拌溶液中加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(33mg，0.16mmol)和DIPEA(0.04mL，0.21mmol)。将反应加热至50℃过夜。使混合物冷却并在真空下浓缩。m/z(M+H)+(ES+)577.4；tR＝2.56min。HPLC方法2。
在N2气氛下将粗产物溶解于CH2Cl2(2mL)和MeOH(3mL)中，并添加Pd/C(10％Pd，30mg)。将混合物置于H2气氛下，搅拌2h。将粗混合物通过硅藻土垫过滤，真空浓缩，并通过硅胶快速色谱法纯化(5％MeOH的DCM溶液)，得到标题化合物，为无色油状物(24mg，17％，分四个步骤)。m/z(M+H)+(ES+)581.4；tR＝2.42min。HPLC方法2。
步骤127-5：(S)-4-((2-(1-乙酰基哌啶-4-基)-6-异丙基吡啶-4-基)氨基)-2-(3-氨基哌啶-1-基)嘧啶-5-甲酰胺向叔丁基(S)-(1-(4-((2-(1-乙酰基哌啶-4-基)-6-异丙基吡啶-4-基)氨基)-5-氨基甲酰基嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(24mg，0.04mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的搅拌溶液中加入4N HCl的二噁烷(1mL)溶液，并将混合物搅拌18h。将混合物减压浓缩，得到标题化合物的盐酸盐(20mg，99％)。m/z(M+H)+(ES+)481.4；tR＝2.07min。HPLC方法2(碱)；HPLC方法2.1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.84(s,1H),8.06(d,J＝5.4Hz,1H),7.97(app.s,1H),4.78(app.d,J＝13.5Hz,1H),4.64–4.53(m,1H),4.28–4.08(m,2H),3.92–3.67(m,3H),3.49–3.39(m,1H),3.36–3.28(m,1H),2.81(app.t,J＝12.8Hz,1H),2.29–2.07(m,7H),2.05–1.94(s,1H),1.92–1.68(m,5H),1.46(d,J＝6.9Hz,6H)。
实施例128：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-(4,4-二氟环己基)-6-异丙基吡 啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤128-1：2-(4,4-二氟环己-1-烯-1-基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺。将4-氨基-2,6-二溴吡啶(0.206g，0.82mmol)、2-(4,4-二氟环己-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(0.100g，0.41mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(0.08mL，0.43mmol)、二噁烷(8.5mL)、水(2.0mL)和碳酸钾(0.189g，1.37mmol)的溶液用氮气吹扫10min。加入Pd(PPh3)2Cl2(0.032g，0.05mmol)，并将混合物在90℃下加热。1h后，加入另外的4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(0.08mL，0.43mmol)，并将混合物在90℃下再搅拌1h。粗产物通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(3：1己烷：EtOAc，然后2.5：1，最后2：1)，得到标题化合物，纯度约为90％(通过LCMS分析显示存在10％4-氨基-2,6-二异丙烯基吡啶)，为黄色固体(0.070g，34％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.60(d,J＝2.0Hz,1H),6.53–6.48(m,1H),6.50(d,J＝2.0Hz,1H),5.88–5.85(m,1H),5.24–5.21(m,1H),4.09(br s,2H),2.83–2.67(m,4H),2.22–2.09(m,2H),2.17(app s,3H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+251.2；tR＝2.16min。HPLC方法1(酸)。
步骤128-2：2-(4,4-二氟环己基)-6-异丙基吡啶-4-胺。使用上一步中的2-(4,4-二氟环己-1-烯-1-基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺(0.070g，0.28mmol)、10％碳载钯(0.060g，20mol％)、MeOH(5.0mL)、DCM(1.0mL)和H2(1个大气压)，得到标题化合物，为无色油状物(0.064g，64％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.28(d,J＝2.0Hz,1H),6.24(d,J＝2.0Hz,1H),4.17(br s,2H),2.91(sept,J＝6.8Hz,1H),2.70(tt,J＝11.6,3.2Hz,1H),2.23–2.12(m,2H),2.05–1.96(m,2H),1.94–1.83(m,1H),1.83–1.70(m,3H),1.23(d,J＝6.8Hz,6H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+255.2；tR＝2.19min。HPLC方法1(酸)。
步骤128-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-(4,4-二氟环己基)-6-异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺:将2-(4,4-二氟环己基)-6-异丙基吡啶-4-胺(0.065g，0.26mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.074g，0.39mmol)、三乙胺(0.07mL，0.50mmol)溶于无水二噁烷(3.5mL)中。将混合物在90℃加热3.5h，然后冷却至室温。将反应混合物用EtOAc(10mL)稀释，并用水(5×10mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，由一次置换得到粗产物，将其通过二氧化硅快速柱色谱纯化(1：1己烷:EtOAc)，由一次置换得到产物(0.030g)，无需进一步表征即可使用。将中间体(0.030g，0.07mmol)溶解在无水二噁烷(1.0mL)中，然后加入三乙胺(0.02mL，0.14mmol)和叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.015g，0.07mmol)并将混合物在50℃下搅拌1.5h。将反应混合物用EtOAc(10mL)稀释，并用水(5×10mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，由两次置换得到粗产物，将其通过二氧化硅快速柱色谱纯化(1:2己烷：EtOAc，然后是1:3)。将中间体溶解在二噁烷(2.0mL)中，并逐滴加入4M HCl的二噁烷(2.0mL)溶液。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后加入己烷(10mL)。将得到的悬浮液过滤，将固体干燥，得到标题化合物，为白色粉末，通过LCMS分析，含有6％实施例54(0.023g，18％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.72(s,1H),8.01(brs,1H),7.82(s,1H),4.43–427(m,1H),3.78–3.61(m,2H),3.49–3.40(m,1H),3.29(sept,J＝5.6Hz,1H),3.14(app t,J＝9.2Hz,1H),2.22–2.05(m,5H),2.03–1.85(m,4H),1.85–1.68(m,4H),1.36(d,J＝5.6Hz,6H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+474.3；tR＝1.93min。HPLC方法1(酸)。
实施例129：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-异丙基-6-(4-(三氟甲基)苯基)吡 啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤129-1：2-(丙-1-烯-2-基)-6-(4-(三氟甲基)苯基)吡啶-4-胺。使用4-氨基-2,6-二溴吡啶(0.350g，1.39mmol)、(4-(三氟甲基)苯基)硼酸(0.290g，1.53mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(0.26mL，1.38mmol)、二噁烷(13.0mL)、水(3.0mL)和碳酸钾(0.576g，4.17mmol)用氮气吹扫10min。加入Pd(PPh3)2Cl2(0.054g，0.07mmol)，并将混合物在90℃下加热。3h后，加入另外的4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(0.10mL，0.05mmol)，并将混合物在90℃下再搅拌1h。粗产物通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(DCM，然后是5：1DCM：EtOAc)，得到标题化合物，为白色固体(0.112g，29％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.11(d,J＝8.0Hz,2H),7.69(d,J＝8.0Hz,2H),6.91–6.86(m,1H),6.73–6.68(m,1H),5.97(app s,1H),5.30(app s,1H),4.26–4.14(br s,2H),2.22(s,3H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+279.1；tR＝2.05min。HPLC方法1(酸)。
步骤129-2：2-异丙基-6-(4-(三氟甲基)苯基)吡啶-4-胺。使用2-(丙-1-烯-2-基)-6-(4-(三氟甲基)苯基)吡啶-4-胺(0.112g，0.40mmol)、10％碳载钯(0.043g，10mol％)、MeOH(7.5mL)、DCM(1.5mL)和H2(1个大气压)，得到标题化合物，为无色油状物(0.111g，99％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.07(d,J＝8.0Hz,2H),7.67(d,J＝8.0Hz,2H),6.80(app s,1H),6.42(app s,1H),4.20–4.08(br s,2H),3.01(sept,J＝6.8Hz,1H),1.32(d,J＝6.8Hz,6H).LCMS:m/z(ES+)(M+H)+281.9；tR＝2.00min。HPLC方法1(酸)。
步骤129-3：2-氯-4-((2-异丙基-6-(4-(三氟甲基)苯基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将2-异丙基-6-(4-(三氟甲基)苯基)吡啶-4-胺(0.116g，0.41mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.119g，0.62mmol)、DIPEA(0.15mL，0.86mmol)溶于无水二噁烷(4.0mL)中。将混合物在90℃加热6h，然后冷却至室温。将反应混合物用EtOAc(10mL)稀释，并用水(5×10mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，由一次置换得到粗产物，将其通过二氧化硅快速柱色谱纯化(1：1己烷：EtOAc，然后用EtOAc)，由一次置换得到产物，2-氯-4-((2-异丙基-6-(4-(三氟甲基)苯基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(0.116g，65％)，其无需进一步表征即可使用。
步骤129-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-异丙基-6-(4-(三氟甲基)苯基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺:将2-氯-4-((2-异丙基-6-(4-(三氟–甲基)苯基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(0.078g，0.18mmol)溶解在无水二噁烷(4.0mL)中，然后加入三乙胺(0.05mL，0.14mmol)和叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.036g，0.18mmol)并将混合物在50℃下搅拌2.0h。将反应混合物用EtOAc(10mL)稀释，并用水(5×10mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，由两次置换得到粗产物，将其通过二氧化硅快速柱色谱纯化(1：1己烷:EtOAc)，将中间体溶解在二噁烷(2.5mL)中，并逐滴加入4M HCl的二噁烷(2.5mL)溶液。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后加入己烷(10mL)。将得到的悬浮液过滤，将固体干燥，得到标题化合物，为白色粉末(0.038g，40％)。m/z(ES+)(M+H)+500.3；tR＝2.97min。HPLC方法1(碱)；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.85(s,1H),8.41(app s,1H),8.20(app s,1H),8.13(d,J＝7.2Hz,2H),8.01(d,J＝7.2Hz,2H),4.47(app d,J＝11.2Hz,1H),4.31–3.90(m,2H),3.88–3.71(m,1H),3.61–3.45(m,2H),2.30–2.14(m,1H),2.07–1.75(m,3H),1.52(d,J＝6.4Hz,6H)。
实施例130：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-环戊基-6-异丙基吡啶-4-基)氨 基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤130-1：2,6-二溴-N,N-双(4-甲氧基苄基)吡啶-4-胺:将2,6-二溴-4-氨基吡啶(1.00g，3.97mmol)和氢化钠(0.35g，8.73mmol)在DMF(20mL)中的混合物在0℃下搅拌1h。加入4-甲氧基苄基氯(1.18mL，8.73mmol)，并将混合物在室温搅拌2h。将混合物用AcOEt(30mL)萃取，用盐水(5×30mL)洗涤，经MgSO4干燥，并在减压下浓缩。通过在热的己烷：AcOEt中重结晶来纯化粗产物，得到标题化合物，为浅紫色固体(1.08g.55％)。m/z(M+H)+(ES+)491.0,493.0,495.0,496.0；tR＝3.09min。HPLC方法2；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.1–7.04(m,4H),6.96–6.86(m,4H),6.76(s,2H),4.53(s,4H),3.84(s,6H)。
步骤130-2：2-溴-N,N-双(4-甲氧基苄基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺:将碳酸钾(1.60g，11.60mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(0.95mL，5.03mmol)和2,6-二溴-N,N-双(4-甲氧基苄基)吡啶-4-胺(1.90g，3.87mmol)在1,4-二噁烷(80mL)和水(20mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫10min。加入PdCl2(PPh3)2(0.09g，0.15mmol)，并再继续吹扫10分钟。然后将反应加热至80℃，并在氮气下搅拌2h。冷却后，将溶液用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0.5％AcOEt的甲苯溶液)，得到标题化合物(0.91g，52％)。m/z(M+H)+(ES+)453.2,455.2；tR＝3.38min。HPLC方法2(碱)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.12(d,J＝8.4Hz,4H),6.90(d,J＝8.4Hz,4H),6.70(d,J＝1.4Hz,2H),5.81–5.73(m,1H),5.26–5.15(m,1H),4.57(s,4H),3.83(s,6H),2.05(app.d,J＝1.2Hz,3H)。
步骤130-3:2-(环戊-1-烯-1-基)-N,N-双(4-甲氧基苄基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺。使用2-溴-N,N-双(4-甲氧基苄基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺(0.547g，1.21mmol)、2-(环戊-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(0.258g，1.33mmol)、二噁烷(22.0mL)、水(5.0mL)和碳酸钾(0.500g，3.62mmol)用氮气吹扫10分钟。加入Pd(PPh3)2Cl2(0.085g，0.12mmol)，并将混合物在90℃下加热1h。粗产物通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(4：1己烷:EtOAc)，得到标题化合物，为无色油状物(0.438g，82％)。m/z(ES+)(M+H)+441.3；tR＝2.47min。HPLC方法1(酸)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.15(d,J＝8.4Hz,4H),6.88(d,J＝8.4Hz,4H),6.69(d,J＝2.0Hz,1H),6.62(d,J＝2.0Hz,1H),6.60–6.56(m,1H),5.80(app d,J＝1.2Hz,1H),5.18(app pent,J＝1.2Hz,1H),4.61(s,4H),3.80(s,6H),2.73–2.66(m,2H),2.56–2.49(m,2H),2.15(s,3H),2.00(app pent,J＝7.6Hz,2H)。
步骤130-4：2-环戊基-6-异丙基-N,N-双(4-甲氧基苄基)吡啶-4-胺。使用2-(环戊-1-烯-1-基)-N,N-双(4-甲氧基苄基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺(0.438g，0.99mmol)、10％碳载钯(0.210g，20mol％)、MeOH(9.0mL)、DCM(1.8mL)和H2(1个大气压)得到标题化合物，为无色油状物，其放置后固化(0.339g，77％)。m/z(ES+)(M+H)+445.3；tR＝2.49min。HPLC方法1(酸)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.04(d,J＝8.8Hz,2H),6.82(d,J＝8.4Hz,2H),6.37(d,J＝2.4Hz,1H),6.35(d,J＝2.4Hz,1H),4.58(s,4H),3.72(s,4H),3.36(pent,J＝8.8Hz,1H),3.29(sept,J＝6.8Hz,1H),2.11–2.01(m,2H),1.68–1.45(m,6H),1.17(d,J＝6.8Hz,6H)。
步骤130-5：2-环戊基-6-异丙基吡啶-4-胺。将2-环戊基-6-异丙基-N,N-双(4-甲氧基苄基)吡啶-4-胺(0.339g，0.25mmol)溶解在DCM(2.50mL)中，并逐滴加入TFA(2.50mL)。将混合物在50℃加热2h，然后冷却至室温。通过滴加NaHCO3饱和溶液来中和反应混合物(最终pH＝8–9)。将混合物用EtOAc(3×20mL)萃取，并用水(10mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，将其通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(1：1己烷：EtOAc然后是1:2，EtOAc，最终为5％MeOH的DCM溶液)，得到标题化合物，为无色油状物(0.147g，94％)。m/z(ES+)(M+H)+205.3；tR＝1.91min。HPLC方法1(酸)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.28(d,J＝2.0Hz,1H),6.25(d,J＝2.0Hz,1H),3.03(pent,J＝8.0Hz,1H),2.91(sept,J＝7.2Hz,1H),2.08–1.94(m,2H),1.81–1.70(m,2H),1.70–1.55(m,4H),1.21(d,J＝7.2Hz,6H)。
步骤130-6：2-氯-4-((2-环戊基-6-异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将2-环戊基-6-异丙基吡啶-4-胺(0.147g，0.72mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.207g，1.08mmol)、Hünig’s碱(0.25mL，1.44mmol)溶于无水二噁烷(6.0mL)中。将混合物在90℃加热3h，然后冷却至室温。将反应混合物用EtOAc(10mL)稀释，并用水(5×10mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，由一次置换得到粗产物，将其通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(1:2己烷：EtOAc，然后是EtOAc)，得到标题化合物(0.125g，48％)，其无需进一步表征即可使用。
步骤130-7：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-环戊基-6-异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺:将2-氯-4-((2-环戊基-6-异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(0.080g，0.22mmol)溶解在无水二噁烷(2.5mL)中，然后加入三乙胺(0.06mL，0.43mmol)和叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.045g，0.22mmol)并将混合物在50℃下搅拌2h。将反应混合物用EtOAc(20mL)稀释，并用水(5×10mL)洗涤。有机相经MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，由两次置换得到粗产物，将其通过二氧化硅快速柱色谱纯化(EtOAc)。将中间体溶解在二噁烷(2.5mL)中，并逐滴加入4M HCl的二噁烷(2.5mL)溶液。将反应混合物在室温搅拌3.5h，然后加入己烷(10mL)。将得到的悬浮液过滤，将固体干燥，得到标题化合物，为白色粉末(0.075g，80％)。m/z(ES+)(M+H)+424.4；tR＝2.51min。HPLC方法1(碱)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.82(s,1H),8.01(app s,1H),7.96(app s,1H),4.47(app d,J＝11.6Hz,1H),4.33–4.04(m,1H),4.04–3.70(m,2H),3.58–3.49(m,1H),3.43(pent,J＝8.8Hz,1H),3.36(sept,J＝6.8Hz,1H),2.37–2.15(m,3H),2.07–1.75(m,9H),1.45(d,J＝6.8Hz,6H)。
实施例131：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-环己基-6-异丙基吡啶-4-基)氨 基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤131-1:2-(环己-1-烯-1-基)-N,N-双(4-甲氧基苄基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺。在90℃加热2h，使用2-溴-N,N-双(4-甲氧基苄基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺(0.595g，1.31mmol)、环己基硼酸(0.182g，1.44mmol)、二噁烷(22.0mL)、水(5.0mL)、碳酸钾(0.543g，3.93mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(0.092g，0.13mmol)。粗产物通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(4：1己烷:EtOAc)，得到标题化合物，为无色油状物(0.360g，60％)。m/z(ES+)(M+H)+455.4；tR＝2.65min。HPLC方法1(酸)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.14(d,J＝8.8Hz,4H),6.87(d,J＝8.8Hz,4H),6.71–6.68(m,1H),6.69(d,J＝2.4Hz,1H),6.63(d,J＝2.4Hz,1H),5.78(app d,J＝1.2Hz,1H),5.17–5.14(m,1H),4.59(s,4H),3.79(s,6H),2.47–2.41(m,2H),2.50–2.17(m,2H),2.13(s,3H),1.79–1.70(m,2H),1.69–1.60(m,2H)。
步骤131-2:2-环己基-6-异丙基-N,N-双(4-甲氧基苄基)吡啶-4-胺。使用2-(环己-1-烯-1-基)-N,N-双(4-甲氧基苄基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺(0.358g，0.79mmol)、10％碳载钯(0.170g，20mol％)、MeOH(9.0mL)、DCM(1.8mL)和H2(1个大气压)得到标题化合物，为无色油状物(0.333g，92％)。m/z(ES+)(M+H)+459.4；tR＝2.41min。HPLC方法1(酸)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.03(d,J＝8.8Hz,4H),6.81(d,J＝8.8Hz,4H),6.34(apps,2H),4.55(s,4H),3.71(s,6H),3.23(sept,J＝6.8Hz,1H),2.89(app t,J＝11.6Hz,1H),1.88(app d,J＝12.0Hz,2H),1.69(app d,J＝12.8Hz,2H),1.61(app d,J＝12.4Hz,1H),1.42–1.19(m,4H),1.15(d,J＝6.8Hz,6H).步骤131-3：2-环己基-6-异丙基吡啶-4-胺。使用2-环己基-6-异丙基-N,N-双(4-甲氧基苄基)吡啶-4-胺(0.348g，0.76mmol)、DCM(2.5mL)、TFA(2.5mL)，得到粗产物，将其通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(1：1己烷：EtOAc然后是1:2，EtOAc，最终为5％MeOH的DCM溶液)，得到标题化合物，为无色油状物(0.099g，60％)。m/z(ES+)(M+H)+219.3；tR＝2.01min。HPLC方法1(酸)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.57(d,J＝2.4Hz,1H),6.56(d,J＝2.4Hz,1H),5.10–4.98(br s,2H),3.02(sept,J＝6.8Hz,1H),2.69(tt,J＝11.6,3.2Hz,1H),1.99–1.91(m,2H),1.91–1.83(m,2H),1.81–1.73(m,1H),1.54–1.36(m,5H),1.31(d,J＝6.8Hz)。
步骤131-4：2-氯-4-((2-环己基-6-异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。使用2-环己基-6-异丙基吡啶-4-胺(0.099g，0.45mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.130g，0.68mmol)、DIPEA(0.16mL，0.92mmol)和无水二噁烷(5.0mL)，在90℃下加热7h。粗产物通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(1：2己烷：EtOAc，然后用EtOAc)，得到标题化合物(0.080g，47％)，其无需进一步表征即可使用。
步骤131-5：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-环己基-6-异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。使用2-氯-4-((2-环己基-6-异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(0.040g，0.11mmol)、无水二噁烷(2.0mL)、三乙胺(0.03mL，0.22mmol)和叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.023g，0.11mmol)，将反应在50℃加热4h。粗产物通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(1∶2.5己烷∶EtOAc)。将中间体溶解在二噁烷(2.0mL)中，并逐滴加入4M HCl的二噁烷(2.0mL)溶液。将反应混合物在室温搅拌2h，然后加入己烷(10mL)。将得到的悬浮液过滤，将固体干燥，得到标题化合物，为白色粉末(0.018g，36％)m/z(ES+)(M+H)+438.4；tR＝2.62min。HPLC方法1(碱)；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.82(s,1H),8.04–7.92(m,2H),4.43(appd,J＝12.4Hz,1H),4.35–3.89(m,2H),3.89–3.74(m,1H),3.64–3.53(m,1H),3.38(sept,J＝6.8Hz,1H),3.06(app t,J＝11.2Hz,1H),2.30–2.18(m,1H),2.13–1.79(m,8H),1.69–1.48(m,4H),1.45(d,J＝6.8Hz,6H),1.42–1.33(m,1H)。
实施例132：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-异丙基-6-(4-甲氧基苯基)吡啶- 4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤132-1:2-(4-甲氧基苯基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺。将碳酸氢钠(0.483g，5.74mmol)、(4-甲氧基苯基)硼酸(0.306g，2.011mmol)和2-溴-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺(0.408g，1.915mmol)在1,4-二噁烷(9mL)和水(3mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫10分钟。加入PdCl2dppf.CH2Cl2(0.156g，0.191mmol)，并再继续吹扫10分钟。将反应加热至回流，并在氮气下搅拌2h，然后冷却。将混合物用盐水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(40g柱，0-50％EtOAc/异己烷)，得到标题化合物(0.285g，61.3％收率)。(M+H)+(ES+)m/z 241.2；tR＝1.61min。HPLC方法2。
步骤132-2：2-异丙基-6-(4-甲氧基苯基)吡啶-4-胺。将2-(4-甲氧基苯基)-6-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺(0.285g，1.186mmol)在甲醇(10mL)中的溶液在H-Cube(10％Pd/C，30x4 mm，全氢气，40℃，1mL/min)中氢化，并真空浓缩，得到标题化合物(0.195g，64.5％收率)。1H NMR(500MHz,DMSO d-6)δ7.89-7.85(m,2H),7.01-7.6.96(m,2H),6.76(d,1H,J＝1.7Hz),6.29(d,1H,J＝1.7Hz),5.89(s,2H),3.79(s,3H),2.81(sept,1H,J＝6.9Hz),1.21(d,6H,J＝6.9Hz).m/z(M+H)+(ES+)243.0；tR＝1.94min。HPLC方法4。
步骤132-3：2-氯-4-((2-异丙基-6-(4-甲氧基苯基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺.向2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.201g，1.046mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的搅拌溶液中加入2-异丙基-6-(4-甲氧基苯基)吡啶-4-胺(0.195g，0.805mmol)和DIPEA(0.281mL，1.609mmol)。将反应加热至100℃并搅拌3h，然后冷却至RT。将混合物在真空下浓缩，并粗产物通过硅胶色谱法纯化(24柱，0-5％(0.7M氨/MeOH)/DCM)，得到标题化合物(0.226g，63.5％收率)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.73(s,1H),8.88(s,1H),8.52(s,1H),8.08-8.01(m,4H),7.50(s,1H),7.08-7.03(m,2H),3.82(s,3H),3.04(app.p,1H,J＝6.9Hz),1.30(d,6H,J＝6.9Hz).m/z(M+H)+(ES+)398.2,400.2；tR＝1.56min。HPLC方法2。
步骤132-4：(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((2-异丙基-6-(4-甲氧基苯基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。向2-氯-4-((2-异丙基-6-(4-甲氧基苯基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(0.08g，0.201mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.070mL，0.402mmol)和(S)-叔丁基哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.042g，0.211mmol)。将反应加热至90℃保持1h，然后冷却至RT。将混合物在真空下浓缩，将粗产物通过硅胶色谱法纯化(12g柱，0-10％(0.7M氨/MeOH)/DCM)，得到标题化合物(0.105g，92％收率)m/z(M+H)+(ES+)562.4；tR＝1.77min。HPLC方法2
步骤132-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-异丙基-6-(4-甲氧基苯基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。向(S)-叔丁基(1-(5-氨基甲酰基-4-((2-异丙基-6-(4-甲氧基苯基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(0.110g，0.196mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的搅拌溶液中加入氯化氢(4M的1,4-二噁烷溶液)(0.979mL，3.92mmol)，并将反应在室温搅拌16h。然后将混合物在真空下浓缩，并加载到在MeOH中的SCX(2g)的柱上。用MeOH洗涤该柱，然后用0.7M氨的MeOH溶液洗脱产物。将所得混合物真空浓缩并通过硅胶色谱法纯化(12g柱，0-10％(0.7M氨/MeOH)/DCM)，得到(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-异丙基-6-(4-甲氧基苯基)吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(0.06g，63.1％收率)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.60(s,1H),7.98(s,1H),7.89-7.84(m,2H),7.38(s,1H),7.04-7.00(m,2H),4.66-4.58(m,1H),4.50(dt,1H,J＝13.3,4.4Hz),3.86(s,3H),3.30-3.20(m,1H),3.13-3.02(m,2H),2.93-2.85(m,1H),2.10-2.01(m,1H),1.89-1.80(m,1H),1.67-1.56(m,1H),1.55-1.45(m,1H),1.36(d,6H,J＝7.0Hz)。缺少5个可交换质子。m/z(M+H)+(ES+)462.3；tR＝1.09min.HPLC方法2。
实施例133：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((5-(2-羟基丙-2-基)-4'-甲氧基-[1, 1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤133-1：甲基3-溴-5-(二苄基氨基)苯甲酸酯。向甲基3-氨基-5(三氟甲基)苯甲酸酯(4.34mmol，1g)在乙腈(20mL)中的溶液中加入DIPEA(10.85mmol，1.9mL)和苄基溴(9.1mmol，1.11mL)。将混合物回流24h。将所得混合物用NH4Cl淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-30％DCM/石油醚)得到标题化合物(80％)。HPLC(方法1)：tR＝3.41min,m/z(ES+)(M+H)+410.2。
步骤133-2：甲基5-(二苄基氨基)-4'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-羧酸酯。向甲基3-溴-5-(二苄基氨基)苯甲酸酯(0.61mmol，250mg)和(4-甲氧基苯基)硼酸(10.73mmol，112mg)在1,4-二噁烷：水(8：2mL)中的溶液中加入Pd(PPh3)4(0.0305mmol，35mg)和K2CO3(1.83mmol，252mg)，并将反应在N2下在100℃搅拌3h。将所得混合物用NH4Cl淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-60％DCM/石油醚)得到标题化合物。HPLC(方法1)：tR＝3.44min,m/z(ES+)(M+H)+438.3。
步骤133-3：2-(5-(二苄基氨基)-4'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-基)丙-2-醇。将化合物甲基5-(二苄基氨基)-4'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-羧酸酯(390mg，0.9mmol)溶解在THF中，并在氮气下冷却至-78℃。然后逐滴加入甲基锂(1.6M的乙醚溶液，4.5mmol，11mL)。将混合物在-78℃搅拌1h，然后用饱和氯化铵水溶液淬灭。然后将有机层用乙酸乙酯萃取，并将有机相用NaHCO3水溶液、盐水洗涤，最后用无水硫酸钠干燥。蒸发溶剂，并通过硅胶色谱法纯化粗产物(0-20％DCM/石油醚)，得到标题化合物(20％)。HPLC(方法1)：tR＝3.19min,m/z(ES+)(M+H)+438.2。
步骤133-4：2-(5-氨基-4'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-基)丙-2-醇。向2-(5-(二苄基氨基)-4'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-基)丙-2-醇(73mg，0.17mmol)的甲醇(10mL)溶液中，加入10％Pd/C，并将反应在H2下在室温搅拌2h。将溶液过滤并除去甲醇。粗化合物(75％))无需进一步纯化即可用于下一步。HPLC(方法1)：tR＝2.28min,m/z(ES+)(M+H)+258.3。
步骤133-5：2-氯-4-((5-(2-羟基丙烷-2-基)-4'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与步骤3-1类似的方法，使用乙腈、70℃、16h来制备。化合物无需进一步纯化即可用于下一步。HPLC(方法1)：tR＝2.85min,m/z(ES+)(M+H)+413.2。
步骤133-6：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((5-(2-羟基丙-2-基)-4'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺.将2-氯-4-((5-(2-羟基丙-2-基)-4'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺溶解于乙腈(10mL)中。向该溶液中添加DIPEA(0.4mmol，70μl)和(S)-3-(氨基)哌啶(10.14mmol，25mg)，并将反应在室温搅拌12h。然后将有机层用乙酸乙酯萃取，并将有机相用NaHCO3水溶液、盐水洗涤，最后用无水硫酸钠干燥。蒸发溶剂，并将粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-20％乙腈/DCM)，得到标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.57(s,1H),7.74-7.58(br s,4H),7.33(s,1H),7.06(br s,2H),4.56-4.47(dd,1H),3.82(s,3H),2.97(br s,1H),2.75-2.64(m,2H),1.95-1.85(m,2H),1.22(brs,1H),1.46(s,6H),1.16(s,H),1.14(br s,3H)；HPLC(方法1)：tR＝2.29min,m/z(ES+)(M+H)+477.4。
实施例134：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((5-异丙基-4'-甲氧基-[1,1'-联苯 基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤134-1：1-溴-3-硝基-5-(丙-1-烯-2-基)苯。向2,6-二溴-4-硝基吡啶(2g，7.14mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(1.4g，8.6mmol)在1,4-二噁烷：水(8:2,10mL)中的溶液中加入Pd(PPh3)4(0.142mmol，164mg)和K2CO3(21.4mmol，3g)，并将反应在N2下在100℃下搅拌3h。将所得混合物用NH4Cl淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-60％DCM/石油醚)得到标题化合物。步骤134-2：4'-甲氧基-3-硝基-5-(丙-1-烯-2-基)-1,1'-联苯基.1-硝基-3,5-二(丙-1-烯-2-基)苯(0.83mmol，200mg)、(4-甲氧基苯基)硼酸(0.99mmol，150mg)、Pd(PPh3)4(0.016mmol，20mg)、K2CO3(2.5mmol，345mg)。粗产物通过硅胶色谱法纯化(0-40％DCM/石油醚)得到标题化合物(53％)。
步骤134-3：5-异丙基-4'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-胺。向4'-甲氧基-3-硝基-5-(丙-1-烯-2-基)-1,1'-联苯基(0.44mmol，119mg)的甲醇(10mL)溶液中加入10％Pd/C，并将反应在H2下在室温搅拌2h。将溶液过滤并除去甲醇。粗化合物(98％))无需进一步纯化即可用于下一步。HPLC(方法1)：tR＝2.67min,m/z(ES+)(M+H)+241.7。
步骤134-4：2-氯-4-((5-异丙基-4'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与步骤3-1类似的方法，使用乙腈、70℃、16h来制备。化合物无需进一步纯化即可用于下一步。HPLC(方法1)：tR＝3.22min,m/z(ES+)(M+H)+396.6。
步骤134-5：叔丁基(S)-(1-(5-氨基甲酰基-4-((5-异丙基-4'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-2-基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。通过与步骤3-3类似的方法，使用乙腈、60℃、16h来制备。HPLC(方法1)：tR＝3.08min,m/z(ES+)(M+H)+561.7。
步骤134-6：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((5-异丙基-4'-甲氧基-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。通过与步骤3-4类似的方法，使用N HCl的1,4-二噁烷溶液、RT、1h来制备。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.70(s,1H),7.71(s,1H),7.61-7.58(d,2H),7.43(s,1H),7.25(s,1H),7.05-7.02(d,2H),4.35(br s,1H),4.05(br s,1H),3.79(s,3H),3.31(br s,1H),3.00-2.92(m,1H),2.08-2.00(br s,1H),1.88-1.71(m,2H),1.64-1.56(m,1H),1.26-1.23(d,6H)；HPLC(方法1)：tR＝2.38min,m/z(ES+)(M+H)+460.8。
实施例135：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((5-(2-氰基丙-2-基)-[1,1'-联苯 基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤135-1：2-(5-(二苄基氨基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-甲基丙烷腈。将碳酸钾(0.20g，1.44mmol)、苯基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(0.15g，0.71mmol)和2-(3-溴-5-(二苄基氨基)苯基)-2-甲基丙烷腈(来自步骤50-2,0.20g，0.48mmol)在1,4-二噁烷(8mL)和水(2mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫10分钟。加入PdCl2(PPh3)2(34mg，0.05mmol)，并再继续吹扫10分钟。然后将反应加热至100℃，并在氮气下搅拌1h。冷却后，将溶液用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(20％AcOEt的己烷溶液)，得到标题产物(0.14g，74％)。m/z(M+H)+(ES+)417.3；tR＝3.14min。HPLC方法2(碱)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.52-7.44(m,2H),7.44-7.25(m,13H),7.02(d,J＝1.5Hz,1H),6.92(app.t,J＝1.9Hz,1H),6.82(app.t,J＝2.1Hz,1H),4.75(s,4H),1.66(s,6H)。
步骤135-2：2-(5-氨基-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-甲基丙烷腈。向烧瓶中加入2-(5-(二苄基氨基)-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-甲基丙烷腈(0.14g，0.34mmol)，将其用N2冲洗10分钟。加入Pd(OH)2(0.04g，10–20％Pd基底)、DCM(3.0mL)，最后加入MeOH(3.0mL)，并用H2吹扫烧瓶。将混合物在室温下剧烈搅拌1h，然后将烧瓶在空气中打开，并将混合物在减压下通过
Figure BDA0002776695470001861
垫过滤。将滤饼用另外的MeOH(30mL)和DCM(30mL)洗涤，将滤液减压浓缩，并将粗产物通过二氧化硅快速柱色谱法纯化(20％AcOEt的己烷溶液)，得到标题化合物，为无色油状物(60mg，88％)。.m/z(M+H)+(ES+)237.2；tR＝2.42min。HPLC方法2(碱)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.61-7.54(m,2H),7.51-7.42(m,2H),7.41-7.35(m,1H),7.05(app.t,J＝1.6Hz,1H),6.86(app.t,J＝1.8Hz,1H),6.82(app.t,J＝2.0Hz,1H),1.77(s,6H)。
步骤135-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((5-(2-氰基丙烷-2-基)-[1,1'-联苯基]-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将2-(5-氨基-[1,1'-联苯基]-3-基)-2-甲基丙烷–腈(60mg，0.26mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(49mg，0.26mmol)、DIPEA(0.05mL，0.29mmol)溶于无水二噁烷(5mL)中。将混合物在50℃加热过夜，然后冷却至室温。加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(52mg，0.26mmol)和DIPEA(0.05mL，0.29mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。将混合物减压浓缩，由两次置换得到粗产物，将其通过快速柱色谱法纯化(60％EtOAc的己烷溶液)，得到标题产物(50mg，34％)。m/z(M+H)+(ES+)556.3；tR＝2.69min。HPLC方法2(碱)。加入二噁烷(4mL)，然后逐滴加入4N HCl的二噁烷(1mL)溶液，并将反应混合物在室温搅拌24h。加入己烷(30mL)，将固体过滤并用Et2O研磨以除去残留的二噁烷。将得到的固体过滤并干燥，得到标题化合物的盐酸盐，为白色粉末(30mg，73％)。m/z(M+H)+(ES+)456.3；tR＝2.23min。HPLC方法2(碱)；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.61(s,1H),8.04(br.s,1H),7.72(br.s,1H),7.70-7.66(m,2H),7.62(app.t,J＝1.7Hz,1H),7.54-7.49(m,2H),7.46-7.39(m,1H),4.42(app.dd,J＝14.0,3.7Hz,1H),4.08(br.s,1H),3.82(br.s,1H),3.69-3.60(m,1H),3.57-3.48(m,1H),2.27-2.14(m,1H),2.05-1.94(m,1H),1.88-1.79(m,8H。
实施例136：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((4-氰基-3,5-二异丙基苯基)氨基)嘧 啶-5-甲酰胺
步骤136-1：4-硝基-2,6-二(丙-1-烯-2-基)苄腈。将1,3-二溴-2-氟-5-硝基苯(0.25g，0.84mmol)在DMSO(2mL)中的溶液冷却至0℃。加入氰化钾(0.06g，0.88mmol)，并将混合物搅拌2h。粗产物用AcOEt(15mL)稀释，并用盐水(2×20mL)洗涤。将有机相干燥，浓缩，并将粗产物通过硅胶快速色谱法纯化(5％AcOEt的己烷溶液)，得到标题化合物，为浅粉红色固体(90mg，35％)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.49(s,2H)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ149.5,127.8,126.7,124.4,114.6。
步骤136-2：4-硝基-2,6-二(丙-1-烯-2-基)苄腈。将碳酸钾(0.19g，1.3mmol)、4-硝基-2,6-二(丙-1-烯-2-基)苄腈(0.14g，0.5mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(0.22mL，0.8mmol)在1,4-二噁烷(80mL)和水(20mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫10min。加入PdCl2(PPh3)2(0.03g，0.05mmol)，并再继续吹扫10分钟。然后将反应加热至100℃，并在氮气下搅拌2h。冷却后，将溶液用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(5％AcOEt的己烷溶液)，得到标题化合物(75mg，66％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.07(s,2H),5.52-5.48(m,2H),5.33-5.28(m,2H),2.23(dd,J＝1.5,0.9Hz,6H)；13C NMR(101MHz,CDCl3)δ150.4,149.3,141.0,121.3,120.1,115.9,114.5,23.2。
步骤136-3：4-氨基-2,6-二异丙基苄腈。向4-硝基-2,6-二(丙-1-烯-2-基)苄腈(88mg，0.39mmol)在CH2Cl2(1mL)和MeOH(3mL)中的搅拌溶液中加入Pd/C(10％Pd,50mg)。将混合物置于H2气氛下，搅拌18h。将粗混合物通过硅藻土垫过滤，并在真空下浓缩。将粗产物浓缩，不经进一步纯化直接用于下一步m/z(M+H)+(ES+)203.3；tR＝2.44min。HPLC方法2(碱)。
步骤136-4：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((4-氰基-3,5-二异丙基苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将4-氨基-2,6-二异丙基苄腈(71mg，0.35mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(67mg，0.35mmol)、三乙胺(0.05mL，0.39mmol)溶于无水二噁烷(5mL)中。将混合物在50℃加热过夜，然后冷却至室温。加入叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(70mg，0.35mmol)和三乙胺(0.05mL，0.39mmol)，并将反应混合物在50℃加热过夜。将混合物减压浓缩，由两次置换得到粗产物，将其通过快速柱色谱法纯化(40％EtOAc的己烷溶液)，得到标题产物(80mg，44％)。m/z(M+H)+(ES+)522.3；tR＝2.82min。HPLC方法2(碱)。加入二噁烷(4mL)，然后逐滴加入4N HCl的二噁烷(1mL)溶液，并将反应混合物在室温搅拌24h。加入己烷(30mL)，将固体过滤并用Et2O研磨以除去残留的二噁烷。将得到的固体过滤并干燥，得到标题化合物的盐酸盐，为白色粉末(55mg，87％)。m/z(M+H)+(ES+)422.4；tR＝2.30min。HPLC方法2(碱)；1H NMR(400MHz,CD3ODδ8.64(s,1H),7.60(s,2H),4.37(dd,J＝13.5,3.7Hz,1H),4.25–4.06(s,1H),3.86–3.75(m,1H),3.75–3.64(m,1H),3.56–3.45(m,1H),3.43(p,J＝6.8Hz,2H),2.27–2.15(m,1H),2.05–1.92(m,1H),1.91–1.76(m,2H),1.36(app.dd,J＝6.9,2.0Hz,12H)。
实施例137：2-(反式-3-氨基-5-羟基哌啶-1-基)-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基) 氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤137-1：(反式)-苄基3-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-((三乙基甲硅烷基)氧基)哌啶-1-羧酸酯。在室温下向叔丁基(5-羟基哌啶-3-基)氨基甲酸酯(1g，4.62mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(0.056g，0.462mmol)在DCM(20mL)中的搅拌混合物中加入三乙胺(0.968mL，6.94mmol)，然后加入碳酰氯苄酯(0.680mL，4.62mmol)。将反应混合物在室温搅拌16h，然后用饱和氯化铵溶液(20mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。将残余物溶于DMF(25mL)中，并冷却至0℃。加入氯代三乙基硅烷(0.842mL，5.02mmol)和1H-咪唑(0.342g，5.02mmol)，使反应混合物温热至室温并搅拌16h。然后将混合物用水(100mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(80g柱，0-50％MTBE的己烷溶液)，得到(反式)-苄基3-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-((三乙基甲硅烷基)氧基)哌啶-1-羧酸酯(1.328g，59.5％收率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6,90℃)δ7.38-7.28(m,5H),6.42(s,1H),5.11(d,1H,J＝12.8Hz),5.03(d,1H,J＝12.8Hz),4.08-4.02(m,1H),3.81-3.68(m,2H),3.54-3.44(m,1H),3.57-3.42(m,1H),3.05-2.90(m,1H),1.77-1.70(m,1H),1.69-1.62(m,1H),1.39(s,9H),0.92(t,9H,J＝7.9Hz),0.57(q,6H,J＝7.9Hz)。还分离出第二种异构体，(顺式)-苄基3-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-((三乙基甲硅烷基)氧基)哌啶-1-羧酸酯(0.524g，23.5％收率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6,90℃)δ7.38-7.28(m,5H),6.41(d,1H,J＝6.4Hz),5.12(d,1H,J＝12.7Hz),5.06(d,1H,J＝12.7Hz),3.83-3.69(m,3H),3.48-3.40(m,1H),2.91-2.83(m,2H),2.05-1.97(m,1H),1.45(dt,1H,J＝12.7,9.2Hz),1.39(s,9H),0.93(t,9H,J＝7.9Hz),0.58(q,6H,J＝7.9Hz)。
步骤137-2:叔丁基((反式)-5-((三乙基甲硅烷基)氧基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将(反式)-苄基3-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-((三乙基甲硅烷基)氧基)哌啶-1-羧酸酯(0.5g，1.076mmol)和碳载氢氧化钯(0.05g，0.356mmol)在甲醇(5mL)中的混合物在氢气氛(1巴)下在室温搅拌16h。然后将混合物通过
Figure BDA0002776695470001891
过滤，用甲醇(2×20mL)冲洗，并在真空下浓缩，得到标题化合物(0.316g，84％收率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ6.71(d,1H,J＝7.9Hz),3.84-3.79(m,1H),3.57(s,1H),3.45-2.99(br m,1H),2.67(d,2H,J＝12.9Hz),2.42-2.34(m,2H),1.78-1.66(m,1H),1.58-1.48(m,1H),1.38(s,9H),0.91(t,9H,J＝7.9Hz),0.54(q,6H,J＝7.9Hz)。
步骤137-3：叔丁基((反式)-1-(5-氨基甲酰基-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)-5-((三乙基甲硅烷基)氧基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。向叔丁基((反式)-5-((三乙基甲硅烷基)氧基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(0.065g，0.198mmol)和2-氯-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(0.06g，0.180mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的搅拌溶液中加入DIPEA(0.063mL，0.359mmol)。将反应加热至50℃并搅拌2h。将混合物冷却，真空浓缩，并通过硅胶色谱法纯化(12g柱，0-10％(0.7M氨/MeOH)/DCM)，得到标题化合物(0.077g，66.9％收率)。m/z(M+H)+(ES+)628.5；(M-H)-(ES-)626.3.tR＝2.21min。HPLC方法2。
步骤137-4：2-((反式)-3-氨基-5-羟基哌啶-1-基)-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。向叔丁基((反式)-1-(5-氨基甲酰基-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)-5-((三乙基甲硅烷基)氧基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(0.075g，0.119mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的搅拌溶液中加入盐酸(4M的1,4-二噁烷溶液)(0.597mL，2.389mmol)，并将反应在室温下搅拌16h。将混合物在真空下浓缩，溶解于甲醇(1mL)中，并加载到SCX(约2g)上。将SCX先后用甲醇(3x10 mL)和氨溶液(0.7M的甲醇溶液，3x10 mL)冲洗。将氨流分合并并真空浓缩，得到标题化合物(0.043g，78％收率)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.63(s,1H),7.48(s,2H),4.60-4.48(m,1H),4.44-4.30(m,1H),4.14-4.09(m,1H),3.65(app.d,1H,J＝13.3Hz),3.39-3.33(m,1H),3.05(sept,2H,J＝7.0Hz),2.09-2.01(m,1H),1.81-1.73(m,1H),1.37-1.28(m,13H)。缺少6个可交换质子。m/z(M+H)+(ES+)414.4；tR＝0.80min。HPLC方法2。
实施例138：2-(顺式-3-氨基-5-羟基哌啶-1-基)-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基) 氨基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤138-1:叔丁基((顺式)-5-((三乙基甲硅烷基)氧基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。将(顺式)-苄基3-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-((三乙基甲硅烷基)氧基)哌啶-1-羧酸酯(0.3g，0.646mmol)和氢氧化钯(0.03g，0.214mmol)在甲醇(5mL)的混合物在氢气氛(1巴)下在室温搅拌16h。然后将混合物通过
Figure BDA0002776695470001901
过滤，用甲醇(2×20mL)冲洗，并在真空下浓缩，得到标题化合物(0.194g，86％收率)。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ6.70(d,1H,J＝8.2Hz),3.57-3.49(m,1H),3.38-3.22(m,2H),2.86-2.76(m,2H),2.06(dd,1H,J＝11.9,9.5Hz),2.00(app.t,1H,J＝11.1Hz),1.96-1.87(m,1H),1.37(s,9H),1.25-1.13(m,1H),0.91(t,9H,J＝7.9Hz),0.54(q,6H,J＝7.9Hz)。
步骤138-2：叔丁基((顺式)-1-(5-氨基甲酰基-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)-5-((三乙基甲硅烷基)氧基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯。向叔丁基((顺式)-5-((三乙基甲硅烷基)氧基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(0.065g，0.198mmol)和2-氯-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(0.06g，0.180mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的搅拌溶液中加入N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(0.063mL，0.359mmol)。将反应加热至50℃保持2h，然后冷却并在真空下浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(12g柱，0-5％(0.7M氨/MeOH)/DCM)，得到标题化合物(0.08g，63.8％收率)。m/z(M+H)+(ES+)628.5；tR＝2.29min。HPLC方法2。
步骤138-3：2-((顺式)-3-氨基-5-羟基哌啶-1-基)-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。向叔丁基((3R,5S)-1-(5-氨基甲酰基-4-((2,6-二异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-2-基)-5-((三乙基甲硅烷基)氧基)哌啶-3-基)氨基甲酸酯(0.078g，0.124mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的搅拌溶液中加入氯化氢(4M的1,4-二噁烷)(0.621mL，2.484mmol)，将反应在室温搅拌4h。然后将混合物在真空下浓缩。将粗产物加载到SCX(2g)的MeOH溶液的柱上。用MeOH洗涤该柱，然后用0.7M氨的MeOH溶液洗脱产物。合并氨层并真空浓缩，得到标题化合物(0.046g，85％收率)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.63(s,1H),7.46(s,2H),4.75-4.64(m,2H),3.75-3.68(m,1H),3.10-2.95(m,4H),2.94-2.88(m,1H),2.31-2.24(m,1H),1.50-1.41(m,1H),1.34(d,12H,J＝6.9Hz)。缺少6个可交换质子。m/z(M+H)+(ES+)414.1；tR＝1.65min。HPLC方法4。
实施例139：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-(叔丁基)-6-异丙基吡啶-4-基)氨 基)嘧啶-5-甲酰胺
步骤139-1：2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺。将碳酸钾(0.95g，6.90mmol)、2-溴吡啶-4-胺(0.40g，2.30mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂硼烷(0.65mL，3.45mmol)在1,4-二噁烷(16mL)和水(4mL)中的搅拌溶液用氮气吹扫10分钟。加入XPhos Pd G3(0.19g，0.23mmol)，并再继续吹扫10分钟。然后将反应加热至100℃，并在氮气下搅拌过夜。冷却后，将溶液用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化(5％MeOH的CH2Cl2溶液)，得到标题化合物(100mg，33％)。m/z(M+H)+(ES+)135.2；tR＝1.68min。HPLC方法2(碱)。
步骤139-2：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将2-(丙-1-烯-2-基)吡啶-4-胺(0.10g，0.76mmol)、2,4-二氯嘧啶-5-甲酰胺(0.19g，0.98mmol)、DIPEA(0.15mL，0.84mmol)溶解于无水二噁烷(5mL)中。将混合物在70℃加热过夜，然后冷却至室温。将粗产物浓缩，并通过硅胶快速色谱法纯化(30％的己烷的AcOEt溶液)。m/z(M+H)+(ES+)290.2；tR＝2.16min。HPLC方法2(碱)。将得到的白色固体(0.12mg，0.40mmol)溶解在二噁烷(5mL)中，并且添加叔丁基(S)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(0.08g，0.40mmol)和DIPEA(0.08mL，0.44mmol)。将反应混合物在50℃加热过夜。将所得混合物减压浓缩，由两次置换得到粗产物。m/z(M+H)+(ES+)454.4；tR＝2.47min。HPLC方法2(碱)。在N2气氛下将粗产物溶解于CH2Cl2(2mL)和MeOH(3mL)中，并添加Pd/C(10％Pd，30mg)。将混合物置于H2气氛下，搅拌2h。将粗混合物通过硅藻土垫过滤，真空浓缩，并通过硅胶快速色谱法纯化(20％己烷的AcOEt溶液)，得到标题产物，为白色固体(133mg，39％，分3个步骤)。m/z(M+H)+(ES+)456.4；tR＝2.43min。HPLC方法2(碱)。将固体(40mg，0.09mmol)溶解于二噁烷(5mL)中，然后逐滴加入4N HCl的二噁烷溶液(2mL)，并将反应混合物在室温搅拌24h。加入己烷(30mL)，将固体过滤并用Et2O研磨以除去残留的二噁烷。将得到的固体过滤并干燥，得到标题化合物的盐酸盐，为白色粉末(30mg，94％)。m/z(M+H)+(ES+)356.3；tR＝2.00min。HPLC方法2(碱)；
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.78(s,1H),8.66(br.s,1H),8.37(br.s,1H),7.92(br.s,1H),4.50(dd,J＝13.7,3.7Hz,1H),4.22–4.04(m,1H),3.85–3.73(m,1H),3.73–3.61(m,1H),3.58–3.48(m,1H),3.34–3.26(m,1H),2.25–2.15(m,1H),2.07–1.95(m,1H),1.93–1.74(m,2H),1.42(d,J＝7.0Hz,6H)。
步骤139-3：(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-(叔丁基)-6-异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺。将(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((2-异丙基吡啶-4-基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(25mg，0.07mmol)、1,3-二氧代异吲哚啉-2-基新戊酸酯(87mg，0.35mmol)和TFA(54μL、0.70mmol)溶于DMSO(1mL)中。加入4-CzIPN(3mg，3.5μmol)。通过鼓入N2气球使溶液脱气20分钟，然后在室温下在蓝色LED照射下搅拌3h。将混合物通过SCX柱过滤，首先用MeOH(10mL)洗涤，然后用7M NH3的MeOH(10mL)溶液洗涤。将NH3馏分减压浓缩，并将粗产物通过反相柱色谱法纯化(10至100％MeCN的H2O溶液梯度，含0.1％NH4OH改性剂)，得到标题化合物，为白色粉末(5mg，25％)。m/z(M+H)+(ES+)412.38；tR＝2.80min。HPLC方法2(碱)；1H NMR(500MHz,CD3OD)δ8.60(1H,s),7.51(1H,d,J 1.60Hz),7.36(1H,d,J 1.60Hz),4.64(1H,dd,J 12.8,3.8Hz),4.55(1H,m),3.25(1H,m),3.09–2.97(2H,m),2.87(1H,m),2.05(1H,m),1.85(1H,m),1.61(1H,m),1.62(1H,m),1.50(1H,m),1.37(9H,s),1.31(6H,d,J 6.7Hz)。
实施例140：Tm-变化测定
构建体以及蛋白质表达和纯化：从合成来源获得编码两种激酶[CAMK1D和SYK]的DNA，并将其用作模板扩增含有激酶结构域的序列，并使用非连接依赖性克隆进一步亚克隆到两种不同的表达载体中(Strain-Damerell et al.,2014)。
在大肠杆菌中的表达：将CAMK1D(aa 1-333)克隆到pNIC28-Bsa4[pET表达载体，在22aa-N-末端融合肽中具有His6标签，具有TEV蛋白酶切割位点，(Kan+)]中，并在大肠杆菌BL21(DE3)-R3细胞中与λ-磷酸酶共表达。首先将转化的细胞在补充了50μg/mL适当抗生素的Luria-Bertami(LB)培养基中培养(来自过夜预培养)，在37℃，180rpm的条件下培养至OD600约为0.4，然后继续生长，同时冷却至18℃至OD600约为0.7，然后用0.5mM IPTG诱导，过夜。每批次培养8升。通过离心(JLA8,100转子Beckman Coulter，Avanti J-20XP离心机)收集细胞，并在-20℃冷冻。在蛋白酶抑制剂混合物(1μl/mL)的存在下，将表达His6标签蛋白的细胞重悬于裂解缓冲液中：15mL缓冲液/1L培养细胞的沉淀(50mM HEPES pH 7.5，500mMNaCl，10mM咪唑，5％甘油和0.5mM TCEP(Tris(2-羧乙基)膦盐酸盐)，并使用750W SonicsVibra-Cell超声仪超声裂解，振幅设置为35％，开启5秒-关闭10秒，持续5分钟，在冰上进行。加入PEI(聚乙烯亚胺)至终浓度为0.15％，并将裂解物转移至离心管中，并使用JA-25.50转子在53,000×g下于4℃离心至少45分钟。离心后，将澄清的上清液通过5mL Ni-Sepharose树脂IMAC(GE Healthcare)的重力柱，该重力柱事先用裂解缓冲液平衡。首先用50mL含有1M NaCl和30mM咪唑的裂解缓冲液洗涤树脂，然后用25mL含有100mM咪唑的裂解缓冲液洗涤，最后用25mL含300mM咪唑的裂解缓冲液洗脱蛋白质。收集洗脱的蛋白质，并在4℃下用TEV(烟草蚀刻病毒)蛋白酶处理过夜，以去除N末端标签。将消化的蛋白质再次上样至镍柱上，以去除所使用的裂解的六组氨酸表达标签蛋白酶。收集含有裂解蛋白的流通液，并使用浓缩器(Amicon)浓缩至5mL体积，然后注入AKTA系统(GE Healthcare)上的Superdex75(16/60)凝胶过滤柱上，该凝胶过滤柱预先平衡到GF缓冲液(50mM HEPES pH7.5，300mMNaCl，5％甘油和0.5mM TCEP)。对所得的纯蛋白质进行定量，然后将其储存在-80℃的50mMHEPES，pH 7.5，300mM NaCl，0.5mM TCEP和5％甘油中。
在草地贪夜蛾(Sf9)中的表达：将SYK(aa 356-635)克隆到PFB-LIC-Bse[杆状病毒转移载体，在22aa-N-末端融合肽中具有His6标签，具有TEV蛋白酶切割位点，(Amp+)]中，并将构建体DNA转化到DH10Bac大肠杆菌菌株(Invitrogen)中。转座后，纯化重组杆状病毒质粒DNA，并直接用于转染昆虫细胞(Sf9)(使用杆状病毒表达载体系统)。重组杆状病毒是基于Bac-to-
Figure BDA0002776695470001941
系统(Invitrogen)根据已建立的规程(Pravin等人，2014)生产的。Sf9细胞按照常规在27℃下，在100rpm的振荡设定下，在Sf-900TMII SFM(1x)(Invitrogen)中以悬浮液生长。为了大规模表达，用重组杆状病毒以2×106/mL的密度感染细胞(10mL病毒原液/1L培养细胞)。感染后72h，收集培养物，并在Avanti J-20XP上使用JLA8.1000转子在4℃以900×g离心20分钟。将细胞沉淀重悬于冷的裂解缓冲液(25mL/来自1L培养物的沉淀)中，裂解缓冲液由以下组成：50mM HEPES[pH 7.5]，500mM NaCl，5mM咪唑，5％甘油，0.5mM TCEPtris(2-羧乙基)膦和蛋白酶抑制剂混合物III(1：1000稀释，Calbiochem)。裂解细胞悬浮液，并按照与上述用于纯化CAMK1的相同的IMAC-树脂方法纯化蛋白质，不同之处在于不裂解His-tag。收集His标记的SYK蛋白馏分，浓缩至5mL体积，并注入到Superdex 75(16/60)凝胶过滤柱中，作为最后的精炼步骤，然后定量并保存在-80℃的50mM HEPES，pH 7.5，300mMNaCl，0.5mM TCEP和5％甘油中。
通过Agilent 1100系列LC/MSD TOF(Agilent Technologies有限公司–加利福尼亚州帕洛阿尔托)证实了所有蛋白质构建物的正确质量和纯度。
Tm-变化测定：使用Stratagene Mx3005p实时PCR机(Agilent Technologies)进行了热熔实验。将蛋白质溶于10mM HEPES，pH 7.5，500mM NaCl中，并在96孔板中以2μM的终浓度以20μl的体积进行测定。加入的化合物的最终浓度为10μM(DMSO的最终浓度为0.025％)。加入SYPRO Orange(分子探针)作为荧光探针，稀释比例为1：1,000(v/v)。SYPRO-Orange染料的激发和发射滤光片分别设置为465nm和590nm。以每分钟3℃的步骤将温度从25℃升高到96℃，并在每个间隔获取荧光读数。观察到的温度变化ΔTmobs记录为同一板中样品和参考孔(含有蛋白而不包含配体)的过渡中点之间的差异，并通过非线性最小二乘拟合来确定，以℃为单位。实验一式三份进行，并按照先前的描述分析数据[Fedorov等人(2011)、(2012)]。
参考文献
Strain-Damerell C,Mahajan P,Gileadi O,Burgess-Brown NA.(2014)Medium-throughput production of recombinant human proteins:ligation-independentcloning.Methods Mol Biol.1091:55-72.
Mahajan P,Strain-Damerell C,Gileadi O,Burgess-Brown NA.(2014)Medium-throughput production of recombinant human proteins:protein production ininsect cells.Methods Mol Biol.1091:95-121.
Fedorov O,Huber K,Eisenreich A,Filippakopoulos P,King O,Bullock AN,Szklarczyk D,Jensen LJ,Fabbro D,Trappe J,Rauch U,Bracher F,Knapp S.(2011)Specific CLK inhibitors from a novel chemotype for regulation of alternativesplicing.Chem Biol.18(1):67-76.
Fedorov O,Niesen FH,Knapp S.(2012)Kinase inhibitor selectivityprofiling using differential scanning fluorimetry.Methods Mol Biol.795:109-18.
实施例141：生化CaMK1D酶活性测定
以下描述了ADP-Glo KinaseTM Assay，该方法可测量由激酶反应形成的ADP；将所生成的ADP转换为ATP，并用于在萤光素酶反应中产生光。该测定法用于评估化合物对纯化的CaMK1D活性的影响。
材料和方案：
除非另有说明，否则所有试剂均来自Sigma-Aldrich。ADP-Glo Kinase Assay(Promega，V9102)。带His标签的CaMK1D_1-385(Fisher Scientific，PR6770A)。Autocamtide-2(SignalChem，A15-58)。钙调蛋白(Merck，208694)。1M Tris-HCl pH7.5(Fisher Scientific，10123722)。1M DTT(Fisher Scientific，10674545)。氯化钙(C1016)。氯化镁(M8266)。DMSO(D8418)。
Autocamtide-2以冻干粉形式提供，并在MilliQ水中制成10mM储备液。
RB：50mM Tris-HCl pH 7.5，10mM MgCl2，0.1CaCl2，使用前添加1M DTT至终浓度2mM。
测定方案：将7.88μL反应混合物(包括：RB中的钙调蛋白、Autocamtide-2、CaMK1D)与12μL受试化合物的100％DMSO溶液孵育。为了开始反应，加入4μL ATP混合物。最终测定浓度：3nM CaMK1D，1μM钙调蛋白，125μM Autocamtide-2和10μM ATP。将板在25℃孵育2h，然后1：1添加ADP-Glo试剂。将板再孵育1h，然后1：1添加ADP-Glo底物。30分钟后，使用Luminescence 700用
Figure BDA0002776695470001951
Multilabel Plate Reader读板。使用4参数方程式确定化合物IC50，以nM表示。
实施例142：实施例的生物学数据
使用实施例140和141中所述的测定法产生以下数据。
Figure BDA0002776695470001961
Figure BDA0002776695470001971
Figure BDA0002776695470001981
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Figure BDA0002776695470002021
Figure BDA0002776695470002031
Figure BDA0002776695470002041
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Figure BDA0002776695470002131
Figure BDA0002776695470002141
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Figure BDA0002776695470002161
Figure BDA0002776695470002171
Figure BDA0002776695470002181
Figure BDA0002776695470002191
Figure BDA0002776695470002201
Figure BDA0002776695470002211
Figure BDA0002776695470002221
Figure BDA0002776695470002231
实施例143：急性和慢性(14天)给药后的口服葡萄糖耐量试验(OGTT)。
将从Charles River UK(Margate，Kent，UK)获得的7-8周龄雄性C57Bl/6J小鼠分组饲养16周(每个笼子中n＝3)，正常明/暗循环(亮灯：07:00–19:00h)，自由获取高脂肪饮食(D12451饮食，45％千卡的脂肪，35％的碳水化合物；Research Diets，New Jersey，USA)和过滤水。将动物分配到给药组，使得各组在平均体重上尽可能接近地平衡。
OGTT的前一天，从大约16.45开始，对所有动物断食(但不断水)。第二天早晨，给小鼠口服给予媒介物或10mg/kg、25kg/kg或50mg/kg的(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-双(2-氰基丙烷-2-基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(实施例50)(在DMSO(最终体积为10％)和20％(2-羟丙基)-β-环糊精(最终体积为90％)的媒介物中配制)(从08.45开始)。给药后四个小时，取血样(B1)，并在3分钟后给予葡萄糖(口服2g/kg)。葡萄糖给药后10、30、60和90分钟进一步采集血样。在采血之间，将动物放回自由饮水(但不能进食)的家笼中。将血液样品(约30μL)收集到肝素化锂试管(Sarstedt Microvette CB300LH)中，并通过离心分离血浆以产生等分的血浆，将其冷冻(约-80℃)，然后测定葡萄糖(一式两份；ThermoelectronInfinity葡萄糖试剂TR15498)和胰岛素(单次重复；Alpco小鼠超灵敏胰岛素试剂盒80-INSMSU-E10)。
OGTT完成后，在慢性研究的基线阶段开始之前，将所有动物单独饲养两周，按照上文提供食物。在OGTT后单独饲养后，将小鼠置于反相亮暗循环中(熄灯：09：30–17:30)。在此期间之后，使动物经历5天的基线期，在该阶段中，每天在大约08:45和16:45向它们每天两次施用媒介物。在基线阶段快要结束时，将小鼠分配到给药组，使得研究中的各组在体重、食物和水的摄入以及先前处理方面尽可能地接近平衡。
从第二阶段的第一天开始，在第1-6天，每天对所有小鼠口服给药两次25kg/kg(S)-2-(3-氨基哌啶-1-基)-4-((3,5-双(2-氰基丙烷-2-基)苯基)氨基)嘧啶-5-甲酰胺(实施例50)(在DMSO(最终体积为10％)和20％(2-羟丙基)-β-环糊精(最终体积为90％)的媒介物中配制)，在随后的几天中以5ml/kg的剂量给予1％甲基纤维素，或每天两次单独口服媒介物，或通过皮下途径给予0.1mg/kg利拉鲁肽(Bachem)(在pH 7.4磷酸盐缓冲溶液中配制)。口服给药大约在08:45和16.45开始，皮下给药仅在08:45开始。
给药一直持续到第14天早上，大约在16:45开始去除食物。禁食后约16h，将动物移至单独的房间，该房间保持在正常光照下，并以常规方式以定时方式给予媒介物或测试化合物，4h后给予葡萄糖挑战(口服2.0g/kg)。在给药前立即(B1)、葡萄糖给药前立即(B2)以及葡萄糖给药后15、30、60和90分钟采集血样。将所有血液样品(约30μl)放入肝素锂包裹的试管(Sarstedt CB300LH)中，并在离心机中尽快离心。将血浆样品冷冻(约-80℃)保存，直至测定血浆葡萄糖(一式两份；Thermoelectron Infinity葡萄糖试剂TR15498)和胰岛素(单次重复；Alpco小鼠超灵敏胰岛素试剂盒80-INSMSU-E10)。
通过稳健回归来分析OGTT的血浆葡萄糖和胰岛素数据，以治疗为主要因素，以出血顺序和第1天体重作为协变量。通过梯形法则计算0至60分钟和0至90分钟的AUC(作为总AUC和距基线的AUC)，并通过相同的方法进行分析。在所有情况下，此分析后均进行适当的比较(双尾)，以确定与媒介物组之间的显著差异。
该实施例的结果在图1中提供，其中A：单次给药后来自OGTT的葡萄糖和胰岛素AUC(基线)，B：给药14天后来自OGTT的葡萄糖和胰岛素AUC(距B2的基线)。化合物给药组和媒介物给药组之间的显著差异表示为*p<0.05，**p<0.01和***p<0.001。

Claims (37)

1.式I的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0002776695460000011
其中：
R1选自由以下组成的组：H、C1-3烷基、C1-3卤代烷基、卤素、-OR2、-NR2R2、C3环烷基和C3卤代环烷基；
每个R2独立地选自由以下组成的组：H、C1-3烷基和C1-3卤代烷基；
每个R3独立地选自由以下组成的组：C1-3烷基、C1-3卤代烷基、卤素、-OR2、-NR2R2、C3环烷基和C3卤代环烷基；
n为1或2；
m为0至3；
W是
Figure FDA0002776695460000012
和X是
Figure FDA0002776695460000013
或W是
Figure FDA0002776695460000014
和X是
Figure FDA0002776695460000015
或W是
Figure FDA0002776695460000016
和X是
Figure FDA0002776695460000017
或W是
Figure FDA0002776695460000018
和X是
Figure FDA0002776695460000019
R4选自由以下组成的组：C3-6烷基、C3-6杂烷基、C3-6卤代烷基、C3-6杂卤代烷基、C3-6烯基，其中(i)位于与烯烃键合的环的β位的碳原子被碳顺式取代；并且(ii)位于与烯烃键合的环的α位的碳原子被以下取代：碳、C3-6环烷基、C4-6环烯基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烯基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、-NRB1aRB2a、-NRB3aC(O)RB2a、-C(O)NRB2aRB2a、-C(O)-(包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统)、-NRB3aC(O)ORB2a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB2a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB2a和-S(O)(＝NRB3a)RB2a；
R5选自由以下组成的组：H、C1-6烷基、C1-6杂烷基、C1-6卤代烷基、C1-6杂卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C4-6环烯基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烯基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、-O-芳基、-O-杂芳基、卤素、-ORB2a、-NRB3aRB3a、-SRB2a、-CN、-NRB3aC(O)RB2a、-C(O)NRB2aRB2a、-CRB3a(＝NRB3a)、-NRB3aC(O)ORB2a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB2a-S(O)(＝NRB3a)RB2a和-C(O)ORB2a；
R6选自由以下组成的组：H、C1-6烷基、C1-6杂烷基、C1-6卤代烷基、C1-6杂卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C4-6环烯基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烯基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、-O-芳基、-O-杂芳基、卤素、-ORB3a、-NRB3aRB3a、-CRB3a(＝NRB3a)、-SRB3a、-CN、-NRB3aC(O)RB2a、-C(O)NRB2aRB2a、-NRB3aC(O)ORB2a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB2a、-S(O)(＝NRB3a)RB2a和-C(O)ORB2a
其中RB1a选自由以下组成的组：C3-4烷基、C3-4杂烷基、C3-4卤代烷基、C3-4卤代杂烷基、C3-6环烷基、C1-4烷基C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统；
其中RB2a选自由以下组成的组：C1-4烷基、C1-4杂烷基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代杂烷基、C3-6环烷基、C1-4烷基C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统；
其中RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4杂烷基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代杂烷基、C3-6环烷基、C1-4烷基C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统；
其中C3-4烷基、C3-4杂烷基、C3-4卤代烷基、C3-4卤代杂烷基、C1-4烷基、C1-4杂烷基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代杂烷基、C3-6环烷基、C1-4烷基C3-6环烷基和包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统可以任选地被以下取代：C1-4烷基、C1-4杂烷基、C1-4卤代烷基、C1-4卤代杂烷基、C3-6环烷基、C1-4烷基C3-6环烷基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、-OH、-O(C1-3烷基)、-(C1-3烷基)-OH、-(C1-3烷基)-O(C1-3烷基)、＝O、-NH2、-NH(C1-3烷基)、-N(C1-3烷基)2或(C1-3烷基)-NH2、-(C1-3烷基)-NH(C1-3烷基)或-(C1-3烷基)-N(C1-3烷基)2；
其中在特定的基团-NRB1aRB2a、-NRB3aRB3a、-C(O)NRB2aRB2a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a和-SO2NRB3aRB3a中，RB1a/RB2a对、RB3a/RB3a对和RB2a/RB2a对，与它们所键合的氮原子一起，可以形成4至12元单环或稠合、桥接或螺双环系统，其可选地包含1、2或3个选自N、O或S的杂原子；
或者，其中R4为C1-6-烷基或C3-6环烷基，并且R6为-NRB3aC(O)RB2a，其中不存在末端RB2a，并且R4和R6经由羰基碳连接，从而R4和R6与它们所键合的碳原子一起形成5或6元环；
或者，其中R5是-NRB3aRB3a并且R6是-CRB3a(＝NRB3a)，其中不存在-CRB3a(＝NRB3a)的末端RB3a并且不存在-NRB3aRB3a中的一个RB3a，并且R5和R6经由亚胺氮原子连接，从而R5和R6与它们所键合的碳原子一起形成5元环；
条件是，当R4是芳基或包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基，并且R5不存在或是H时，以下一项或两项为真：(i)芳基或包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基被Rsub部分邻位取代；或(ii)R6不是H；
其中上述C3-6烷基、C1-6烷基、C3-6杂烷基、C3-6卤代烷基、C1-6卤代烷基、C3-6杂卤代烷基、C1-6杂卤代烷基、C3-6烯基、C2-6烯基、C3-6环烷基、C4-6环烯基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烯基、芳基、杂芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统和C2-6炔基中的每一个可以任选地被1、2或3个Rsub部分取代，其中每个Rsub部分独立地选自由以下组成的组：C1-6烷基、C1-6杂烷基、C1-6卤代烷基、C1-6杂卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、卤素、-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中式I的化合物具有式IIA的结构：
Figure FDA0002776695460000041
其中*表示的碳原子为R-构型或S-构型。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中R1为H。
4.根据权利要求1或2所述的化合物，其中R1选自由以下组成的组：C1-3烷基、卤素、-OR2和-NR2R2。
5.根据权利要求4所述的化合物，其中R2选自由以下组成的组：H和C1-3烷基。
6.前述任何一项权利要求所述的化合物，其中m为0。
7.前述任何一项权利要求所述的化合物，其中n为1。
8.前述任何一项权利要求所述的化合物，其中，W是
Figure FDA0002776695460000042
并且X是
Figure FDA0002776695460000043
因此该化合物具有式IIIA：
Figure FDA0002776695460000051
9.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中，W是
Figure FDA0002776695460000052
和X是
Figure FDA0002776695460000053
因此该化合物具有式IIIC：
Figure FDA0002776695460000054
10.前述任何一项权利要求所述的化合物，其中R4选自由以下组成的组：C3-6烷基、C3-6卤代烷基、C3-6烯基，其中(i)位于与烯烃键合的环的β位的碳原子被碳顺式取代；并且(ii)位于与烯烃键合的环的α位的碳原子被以下取代：碳、C3-6环烷基、C4-6环烯基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、-NRB3aC(O)RB2a、-C(O)NRB2aRB2a、-C(O)-(包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统)、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB2a和-S(O)(＝NRB3a)RB2a；其中RB2a和RB3a基团如权利要求1中所定义；并且其中上述C3-6烷基、C3-6卤代烷基、C3-6烯基、C3-6环烷基、C4-6环烯基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、杂芳基和包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统中的每一个可以根据权利要求1任选地被取代。
11.根据权利要求10所述的化合物，其中R4是C3-6烷基。
12.根据权利要求11所述的化合物，其中C3-6烷基基团的取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。
13.根据权利要求12所述的化合物，其中C3-6烷基基团的取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。
14.根据权利要求12或13所述的化合物，其中RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。
15.根据权利要求11至14中任一项所述的化合物，其中R4选自由异丙基和叔丁基组成的组。
16.根据权利要求10所述的化合物，其中R4是C3-6卤代烷基。
17.根据权利要求16所述的化合物，其中，R4选自由C3和C4卤代烷基组成的组。
18.前述任何一项权利要求所述的化合物，其中R5选自由以下组成的组：C3-6烷基、C3-6卤代烷基、C3-6烯基，其中(i)位于与烯烃键合的环的β位的碳原子被碳顺式取代；并且(ii)位于与烯烃键合的环的α位的碳原子被以下取代：碳、C3-6环烷基、C4-6环烯基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基、-NRB3aC(O)RB2a、-C(O)NRB2aRB2a、-C(O)-(包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统)、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB2a和-S(O)(＝NRB3a)RB2a；其中RB2a和RB3a基团如权利要求1中所定义；并且其中上述C3-6烷基、C3-6卤代烷基、C3-6烯基、C3-6环烷基、C4-6环烯基、包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基、芳基、杂芳基和包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至12元非芳族饱和或部分饱和的单环或稠合、桥接或螺双环杂环系统中的每一个可以根据权利要求1任选地被取代。
19.根据权利要求18所述的化合物，其中R5是C3-6烷基。
20.根据权利要求19所述的化合物，其中C3-6烷基基团的取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、＝O、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN、-NO2、-NRB3aC(O)RB3a、-C(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)ORB3a、-OC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(O)NRB3aRB3a、-NRB3aC(NRB3a)NRB3aRB3a、-NRB3aSO2RB3a、-SO2NRB3aRB3a、-SO2RB3a、-C(O)RB3a和-C(O)ORB3a。
21.根据权利要求20所述的化合物，其中C3-6烷基基团的取代基选自由以下组成的组：-ORB3a、-NRB3aRB3a、-SRB3a、-CN和-NRB3aC(O)RB3a。
22.根据权利要求20或21所述的化合物，其中RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和C3-6环烷基。
23.根据权利要求18至22中任一项所述的化合物，其中R5选自由异丙基和叔丁基组成的组。
24.根据权利要求18所述的化合物，其中R5是C3-6卤代烷基。
25.根据权利要求24所述的化合物，其中，R5选自由C3和C4卤代烷基组成的组。
26.根据权利要求18所述的化合物，其中R5是包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的4至6元杂环烷基，其可以任选地被选自以下的基团取代：芳基、＝O、-NRB3aRB3a和-C(O)RB3a。
27.根据权利要求26所述的化合物，其中，所述4至6元杂环烷基选自由以下组成的组：
Figure FDA0002776695460000071
Figure FDA0002776695460000081
28.根据权利要求18所述的化合物，其中R5是C3-6环烷基，其可以任选地被选自以下的基团取代：卤素、-ORB3a和-CN，任选地，其中RB3a选自由以下组成的组：H、C1-4烷基和C1-4卤代烷基。
29.根据权利要求28所述的化合物，其中C3-6环烷基选自由以下组成的组：
Figure FDA0002776695460000082
30.根据权利要求18所述的化合物，其中R5是芳基或包括1、2或3个选自N、O或S的杂原子的杂芳基，其可以任选地被选自以下的基团取代：C1-6烷基(例如C1、C2、C3或C4烷基)、C1-6卤代烷基(例如C1、C2、C3或C4卤代烷基，例如CF3)、卤素和-ORB3a(例如-O-C1-4烷基，例如-O-CH3，或-O-C1-4卤代烷基，例如-O-CF3)。
31.根据权利要求1至8或10至30中任一项所述的化合物，其中R6为H。
32.根据权利要求1至8或10至30中任一项所述的化合物，其中R6是CN。
33.前述任一项权利要求所述的化合物，其用于治疗可通过调节或抑制CaMK1家族激酶而治疗的病况。
34.一种药物制剂，其包含权利要求1至32中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的赋形剂。
35.权利要求1-32中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其用作药物。
36.权利要求1-32中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗选自以下的病况：癌症、肉瘤、癌、母细胞瘤、淋巴瘤和白血病；优选地，病况选自由以下组成的组：基底细胞癌、髓母细胞瘤、横纹肌肉瘤、软骨肉瘤、黑素瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、B细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、脑癌、食道癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌、结直肠癌、肝癌、肾癌、头颈癌、间皮瘤、软组织肉瘤、骨肉瘤、睾丸癌、前列腺癌、胰腺癌、骨癌、骨转移、急性白血病、慢性白血病、神经胶质瘤、霍奇金病、皮肤黑色素瘤、膀胱癌、内分泌系统癌、甲状旁腺癌、甲状腺癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、皮肤癌、肾细胞癌、垂体腺瘤、脊柱肿瘤、子宫癌、胃癌和胆道癌。
37.权利要求1-32中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗选自以下的病况：急性和慢性炎性病况或免疫系统介导的其他病况以及与急性或慢性高血糖相关的病况；优选地，其中所述急性和慢性炎性病况或免疫系统介导的其他病况选自由以下组成的组：类风湿关节炎、慢性阻塞性肺疾病、急性呼吸窘迫综合征、肝硬化、肺纤维化、肾小球肾炎、多发性硬化症、牛皮癣、良性前列腺肥大(BPH)、皮肤过敏反应、动脉粥样硬化和再狭窄、过敏性哮喘、糖尿病性视网膜病和糖尿病性肾病；并且其中所述与急性或慢性高血糖相关的病况选自由以下组成的组：胰岛素依赖性/1型糖尿病、非胰岛素依赖性/2型糖尿病、压力引起的高血糖。
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