BR112014020052B1 - Partícula do tipo vírus, composições, método de produção de anticorpo e uso da referida partícula - Google Patents

Partícula do tipo vírus, composições, método de produção de anticorpo e uso da referida partícula Download PDF

Info

Publication number
BR112014020052B1
BR112014020052B1 BR112014020052-1A BR112014020052A BR112014020052B1 BR 112014020052 B1 BR112014020052 B1 BR 112014020052B1 BR 112014020052 A BR112014020052 A BR 112014020052A BR 112014020052 B1 BR112014020052 B1 BR 112014020052B1
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
virus
polypeptide
antigen
particle
seq
Prior art date
Application number
BR112014020052-1A
Other languages
English (en)
Other versions
BR112014020052B8 (pt
BR112014020052A2 (pt
Inventor
Ryuji Ueno
Wataru Akahata
Original Assignee
Vlp Therapeutics, Llc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=48984367&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=BR112014020052(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Vlp Therapeutics, Llc filed Critical Vlp Therapeutics, Llc
Publication of BR112014020052A2 publication Critical patent/BR112014020052A2/pt
Publication of BR112014020052B1 publication Critical patent/BR112014020052B1/pt
Publication of BR112014020052B8 publication Critical patent/BR112014020052B8/pt

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C07K14/08—RNA viruses
    • C07K14/18—Togaviridae; Flaviviridae
    • C07K14/1808—Alphaviruses or Group A arboviruses, e.g. sindbis, VEE, EEE, WEE, semliki forest virus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0008—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/525—Tumour necrosis factor [TNF]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70521—CD28, CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5258—Virus-like particles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
    • C07K2319/735—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a domain for self-assembly, e.g. a viral coat protein (includes phage display)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
    • C12N2770/24122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/36011—Togaviridae
    • C12N2770/36111—Alphavirus, e.g. Sindbis virus, VEE, EEE, WEE, Semliki
    • C12N2770/36122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/36011—Togaviridae
    • C12N2770/36111—Alphavirus, e.g. Sindbis virus, VEE, EEE, WEE, Semliki
    • C12N2770/36123—Virus like particles [VLP]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/36011—Togaviridae
    • C12N2770/36111—Alphavirus, e.g. Sindbis virus, VEE, EEE, WEE, Semliki
    • C12N2770/36134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/36011—Togaviridae
    • C12N2770/36111—Alphavirus, e.g. Sindbis virus, VEE, EEE, WEE, Semliki
    • C12N2770/36141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2770/36143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

PARTÍCULA DO TIPO VÍRUS, COMPOSIÇÕES, MÉTODO DE PRODUÇÃO DE ANTICORPO E USO DA REFERIDA PARTÍCULA. A presente invenção refere-se a uma partícula capaz de ser automontada, compreendendo um polipeptídeo e pelo menos um antígeno, em que o referido polipeptídeo compreende pelo menos um primeiro local de ligação e o referido pelo menos um antígeno que compreende pelo menos um segundo local de ligação, e em que o referido polipeptídeo e o referido antígeno está ligado, através do referido pelo menos um primeiro e o referido pelo menos um segundo local de ligação, e em que a distância física entre o resíduo do terminal N com o resíduo do terminal C do antígeno é de 30 A ou menos. Além disso, a presente invenção refere-se a uma composição compreendendo a dita partícula.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA AOS PEDIDOS DE PATENTE RELACIONADOS
[001] Este pedido de patente reivindica o benefício do Pedido de Patente Provisório U.S. N °: 61 / 599, 746 depositado em 16 de fevereiro de 2012, todo o conteúdo do qual é incorporado na presente invenção por meio de referência.
CAMPO TÉCNICO
[002] A presente invenção refere-se a uma partícula que compreende um polipeptídeo e pelo menos um antígeno, e uma composição que compreende o mesmo.
ANTECEDENTES DA TÉCNICA
[003] As partículas do tipo vírus (VLPs) são estruturas multiproteína que imitam a organização e a conformação de vírus nativos autênticos, mas não possuem o genoma viral, potencialmente produzindo os candidatos de vacinas mais seguros e mais econômicos. Um punhado de vacinas baseadas em VLP profiláticas é atualmente comercializado em todo o mundo: GlaxoSmithKline’s Engerix ® (vírus da hepatite B) e Cervarix ® (papilomavírus humano) e Merck and Co. e Inc. 's Recombivax HB ® (vírus da hepatite B) e Gardasil ® (papilomavírus humano) são alguns exemplos. Outros candidatos a vacinas baseadas em VLP estão em ensaios clínicos ou submetidos a avaliação pré-clínica, tais como, vírus da gripe, o parvovírus, Norwalk e várias partículas VLP quiméricas. Muitos outros ainda estão restritos a investigação fundamental em pequena escala, apesar de seu sucesso em testes pré-clínicos. As implicações da produção VLP em grande escala são discutidas no contexto de controle de processos, monitorização e otimização. Os principais desafios técnicos de alto e baixo fluxo são identificados e discutidos em conformidade. Blockbusters de vacinas baseadas em VLP bem sucedidos são brevemente apresentados concomitantemente com os últimos resultados dos ensaios clínicos e os recentes desenvolvimentos na tecnologia baseada em VLP quimérico tanto para a vacinação terapêutica quanto a vacinação profilática (Expert Rev. Vacinas 9 (10), 1149 a 1176, 2010).
[004] O vírus Chikungunya (CHIKV) já infectou milhões de pessoas na África, Europa e Ásia desde que este alfavirus ressurgiu do Quênia, em 2004. A gravidade da doença e a propagação deste vírus epidêmico constitui uma ameaça grave de saúde pública, na ausência de vacinas ou terapias antivirais. É relatado que a vacina VLP para epidemia do vírus Chikungunya protege primatas não humanos contra a infecção (Nat Med 2010; 16 de Março (3): 334 a 338). A publicação da patente U.S. n ° 2012 / 0003266 descreve uma partícula semelhante a vírus (VLP), que compreende os polipeptídeos estruturais de um ou mais vírus Chikungunya, que é útil para a formulação de uma vacina ou composição antigênica para Chikungunya que induz a imunidade a uma infecção ou pelo menos um sintoma do mesmo. WO2012 / 106356 descreve os alfavírus modificados ou as partículas do tipo vírus de flavivirus (VLPs) e métodos para aumentar a produção de VLP modificados para utilização na prevenção ou no tratamento de alfavírus e doenças mediadas por flavivírus. (estas referências citadas são incorporadas na presente invenção por meio de referência).
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[005] No primeiro aspecto, a presente invenção proporciona uma partícula que é capaz de ser automontada, que compreende um polipeptídeo e pelo menos um antígeno, em que o referido polipeptídeo compreende pelo menos um primeiro local de ligação e o referido pelo menos um antígeno que compreende pelo menos um segundo local de ligação, e em que o referido polipeptídeo e o referido antígeno está ligado, através do referido pelo menos um primeiro e o referido pelo menos um segundo local de ligação.
[006] No segundo aspecto, a presente invenção proporciona uma molécula de ácido nucleico que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma partícula fornecida no primeiro aspecto da presente invenção.
[007] No terceiro aspecto, a presente invenção proporciona uma composição que compreende a partícula fornecida no primeiro aspecto da presente invenção e / ou a molécula de ácido nucleico fornecida no segundo aspecto da presente invenção.
[008] No quarto aspecto, a presente invenção proporciona um método de produção de um anticorpo, que compreende o contato da partícula fornecida no primeiro aspecto da presente invenção e / ou a molécula de ácido nucleico fornecido no segundo aspecto da presente invenção a um mamífero.
[009] No quinto aspecto, a presente invenção proporciona um método de imunomodulação, um método de tratamento de uma doença autoimune, um método para induzir e / ou aumentar a resposta imunitária contra um antígeno, em um mamífero, e um método de tratar o câncer que compreende a administração da composição fornecida no terceiro aspecto da presente invenção a um mamífero.
[010] No sexto aspecto, a presente invenção proporciona um método de imunização passiva, que compreende a administração do anticorpo apresentada no quarto aspecto da presente invenção a um mamífero.
[011] No sétimo aspecto, a presente invenção proporciona um método de apresentação de um antígeno em macrófagos, que compreende contactar a partícula fornecida no primeiro aspecto da presente invenção e / ou a molécula de ácido nucleico fornecida no segundo aspecto da presente invenção a um mamífero.
[012] Em oitavo aspecto, a presente invenção proporciona um método para produzir a partícula fornecida no primeiro aspecto da presente invenção, que compreende a preparação de um gene que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica a referida partícula; a cultura de uma célula que seja transfectada com o referido gene para expressar a referida partícula ; e a recuperação da referida partícula.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[013] A Figura 1 mostra a modificação da sequência de TNF alfa a ser inserida no polipeptídeo estrutural do vírus da Encefalite Equina Venezuelana (VEEV).
[014] A Figura 2 mostra resultados de Western Blot que indica que o TNF alfa VLP conjugado foi expresso.
[015] A Figura 3 mostra o vetor VLP_CHI 512.
[016] Figura 4 mostra o vetor VLP_CHI 532.
[017] A Figura 5 mostra o vetor VLP_CHI 520.
[018] A Figura 6 mostra o vetor VLP_VEEV VLP 518.
[019] A Figura 7 mostra o vetor VLP_VEEV VLP 519.
[020] A Figura 8 mostra o vetor VLP_VEEV VLP 538.
[021] A figura 9 mostra a detecção de anticorpos anti-TNF alfa induzidos por partícula do tipo vírus conjugadas ao peptídeo derivado de TNF alfa.
[022] A figura 10 mostra a detecção de anticorpos anti-CD20 humanos induzido por partícula do tipo vírus conjugadas ao peptídeo derivado de CD20.
[023] A figura 11 mostra a detecção dos anticorpos CD20 anticamundongo induzido por partícula do tipo vírus conjugadas ao peptídeo derivado de CD20.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA PRESENTE INVENÇÃO Uma partícula que compreende um polipeptídeo e pelo menos um antígeno
[024] No primeiro aspecto, a presente invenção proporciona uma partícula que é capaz de ser automontada, que compreende um polipeptídeo e pelo menos um antígeno, em que o referido polipeptídeo compreende pelo menos um primeiro local de ligação e o referido pelo menos um antígeno que compreende pelo menos um segundo local de ligação, e em que o referido polipeptídeo e o referido antígeno está ligado, através do referido pelo menos um primeiro e o referido pelo menos um segundo local de ligação.
[025] Tal como usado na presente invenção, "uma partícula que é capaz de ser automontada" refere-se a uma partícula formada por meio de pelo menos um constituinte que é montado de forma espontânea. O componente pode ser um polipeptídeo ou um composto químico não peptídico. Em uma modalidade, "uma partícula que é capaz de ser automontada" pode ser uma partícula que compreende ou consiste em pelo menos um polipeptídeo. O pelo menos um polipeptídeo consiste em um ou mais tipos de peptídeos. Em uma modalidade, a referida partícula tem um diâmetro de pelo menos 10 nm, por exemplo, pelo menos 20 nm, preferencialmente pelo menos 50 nm. Em uma modalidade, o peso molecular da referida partícula é de 100 kDa a 100000 kDa, preferivelmente de 400kDa a 30.000 kDa.
[026] Um polipeptídeo usado na presente invenção não é limitado, desde que ele seja montado de forma espontânea. O polipeptídeo pode ser um polipeptídeo estrutural do vírus. Dessa maneira, a partícula proporcionada pela presente invenção pode ser uma partícula do tipo vírus.
[027] Um polipeptídeo estrutural do vírus pode ser um polipetídeo viral que ocorre de forma natural ou um polipeptídeo modificado do mesmo. Em uma modalidade, o polipeptídeo modificado tem pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % ou 98 % de identidade de sequência de aminoácidos de um polipeptídeo estrutural viral que ocorre de forma natural incluindo capsídeo e a proteína do invólucro. Em uma modalidade, o polipeptídeo modificado é um mutante em que, no máximo, 10 % dos aminoácidos são eliminados, substituídos e / ou adicionados a um polipeptídeo estrutural viral que ocorre de forma natural incluindo o capsídeo e a proteína do invólucro.
[028] Em uma modalidade, o polipeptídeo estrutural do vírus usado para a presente invenção consiste em, ou compreende capsídeo e / ou proteína do envelope ou um fragmento do mesmo. Por exemplo, uma proteína do invólucro compreende pelo menos um selecionado de um grupo que consiste em E3, E2, E1 e 6K. O polipeptídeo estrutural de vírus usado para a presente invenção pode ser derivado a partir de Alphavirus Flavivirus. Dessa maneira, a partícula proporcionada pela presente invenção pode ser uma partícula do tipo vírus derivada de Alphavirus Flavivirus.
[029] Exemplos de Alphavirus e Flavivirus incluem, mas não se limitando a, vírus Aura, vírus Babanki, virus Barmah Forest (BFV), vírus Bebaru, vírus Cabassou, vírus Chikungunya (CHIKV), vírus da encefalite equina do Leste (EEEV), vírus Eilat, vírus Everglades , vírus Fort Morgan, vírus Getah, vírus Highlands J, vírus Kyzylagach, vírus Mayaro, vírus me Tri, vírus Middelburg, vírus Mosso das Pedras, vírus Mucambo, vírus Ndumu, vírus O'nyong-nyong, vírus Pixuna, vírus Rio Negro, vírus Ross Rivide (RRV), vírus da doença de salmão pâncreas, vírus Semliki Forest, vírus Sindbis, vírus elefante-marinho do Sul, vírus Tonate, vírus Trocará, vírus Una, vírus da encefalite equina venezuelana (VEEV), vírus da encefalite equina ocidental (WEEV), vírus Whataroa, vírus do Nilo Ocidental, vírus da dengue, vírus da encefalite transmitida por carrapatos e vírus da febre amarela.
[030] Tal como usado na presente invenção, o termo "antígeno" refere-se a uma molécula capaz de ser ligada por um anticorpo ou um receptor de células T (TCR), se apresentados por meio das moléculas MHC. O termo "antígeno", tal como usado na presente invenção, também abrange os epitopos de células T. Um epitopo de célula T é reconhecido por um receptor de células T no contexto de uma classe I do MHC, presente em todas as células do corpo, exceto eritrócitos, ou classe II, presentes em células imunitárias e antígenos, em particular, as células apresentadoras. Este caso de reconhecimento conduz à ativação de células T e os mecanismos efetores subsequentes, tais como a proliferação das células T, a secreção de citocina, a secreção de perforina etc. Um antígeno é adicionalmente capaz de ser reconhecido por meio do sistema imune e / ou sendo capaz de induzir uma resposta imune humoral e / ou resposta imune celular levando à ativação de linfócitos B e / ou T. Isto pode, no entanto, exigir que, pelo menos em certos casos, o antígeno contenha, ou esteja ligado a um epítopo de célula TH e seja administrado em adjuvante. Um antígeno pode ter um ou mais epitopos (epitopos B e T). A reação específica referida acima pretende indicar que o antígeno vai reagir, de preferência, normalmente de uma maneira altamente seletiva, com o seu anticorpo correspondente, ou TCR e não com a multidão de outros anticorpos ou TCRs que possam ser evocados por meio de outros antígenos. Os antígenos tal como usados na presente invenção também podem ser misturas de vários antígenos individuais. Os antígenos, como usado na presente invenção, incluem, mas não estão limitados aos alérgenos, antígenos próprios, haptenos, antígenos do câncer (isto é, antigenos de tumores) e antígenos de doenças infecciosas, bem como pequenas moléculas orgânicas, tais como drogas de abuso (como a nicotina), e fragmentos e derivados dos mesmos. Além disso, os antígenos usados para a presente invenção podem ser peptídeos, proteínas, hidratos de carbono, domínios, alcaloides, lipídios ou moléculas pequenas tais como, por exemplo, hormonas esteroides e fragmentos e derivados dos mesmos, autoanticorpos e citocinas em si.
[031] Exemplos de citocinas incluem, mas não estão limitados a, interleucina (IL), incluindo mais de 30 tipo, tais como IL-1α, IL-1β, IL-2, -3, -4, -5, -6, -7, -8 , -9, -10, -11 a -37; interferona (IFN) tais como IFN- α, IFN-e IFN-β Y; O fator de necrose tumoral (TNF) tal como TNF-α e TNF-β; fator de crescimento transformante (TGF) tais como TGF-e TGF- α β; fator estimulante de colônia (CSF), tais como fator estimulante de colônias de granulócitos (G-CSF), fator estimulante de colônias de granulócitos e macrófagos (GM-CSF), fator estimulante de colônias de macrófago (M-CSF), eritropoietina (EPO), fator de células estaminais (SCF) e fator ativador e monócitos quimiotáticos (MCAF); fator de crescimento (GF), tais como o fator de crescimento epidérmico (EGF), fator de crescimento de fibroblastos (FGF), fator de crescimento semelhante à insulina (IGF), fator de crescimento do nervo (NGF), fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF), fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), fator de crescimento de hepatócitos (HGF), fator de crescimento de queratinócitos (KGF), trombopoietina (TPO), e proteína morfogênica do osso (BMP); e outros fatores de polipeptídeos, incluindo LIF, kit ligante (KL), MPO (mieloperoxidase) e CRP (proteína C reativa); COX (ciclo- oxigenase), tais como inibidores da COX-1, COX-2 e COX-3, NOS (óxido nítrico-sintetase), tais como NOS-1, NOS-2 e NOS-3; e assim por diante.
[032] As citocinas também incluem as quimiocinas que são citocinas que induzem a quimiotaxia. Existem duas classes principais de quimiocinas CXC e CC. As quimiocinas CXC, tais como a proteína de ativação de neutrófilos 2 (NAP-2) e a proteína da atividade estimuladora de crescimento do melanoma (AECM) são principalmente quimiotácticas para neutrófilos e linfócitos T, ao passo que as quimiocinas CC, tais como RANTES, proteína inflamatória de macrófago (PIM) incluindo MIP-lα e MIP-lβ, derivado de queratinócito quimiocina (KC), as proteínas quimiotácticas dos monócitos (MCP-1, MCP-2, MCP-3, MCP-4 e MCP-5) e as eotaxinas (-1 e -2) são quimiotácticas para, entre outros tipos de células, macrófagos, linfócitos T, eosinófilos, neutrófilos, células dendríticas, e basófilos. Existem também as quimiocinas linfotatina-1, linfotatina-2 (ambas quimiocinas C) e fractalcina (quimiocinas CX3C) que não se enquadram em nenhuma das principais subfamílias de quimiocinas.
[033] Tal como usado na presente invenção, o termo "determinante antigênico" pretende referir-se àquela porção de um antígeno que é reconhecida especificamente por meio de qualquer um dos linfócitos T ou B. Os linfócitos B respondem a determinantes antigênicos estrangeiros através da produção de anticorpos, enquanto que os linfócitos T são os mediadores da imunidade celular. Deste modo, os determinantes antigênicos ou epitopos são as partes de um antígeno, que são reconhecidos por meio dos anticorpos, ou no contexto de um MHC, por meio dos receptores das células T. Um determinante antigênico contém um ou mais epítopos.
[034] Tal como usado na presente invenção, o termo "anticorpo" refere-se a moléculas que são capazes de se ligar a um epitopo ou determinante antigênico. O termo pretende incluir os anticorpos inteiros e os fragmentos de ligação ao antígeno, incluindo os anticorpos de cadeia simples. Tais anticorpos incluem os antígenos humanos e os fragmentos de anticorpos de ligação incluem, mas não estão limitados a, fragmentos Fab, Fab 'e F (ab') 2, Fd, Fvs de cadeia simples (scFv), anticorpos de cadeia simples, Fvs ligados por dissulfureto (sdFv) e fragmentos que compreende um domínio ou VL ou VH. Os anticorpos podem ser de qualquer origem animal, incluindo as aves e os mamíferos. De preferência, os anticorpos são, por exemplo, de mamífero humano, murino, coelho, cabra, cobaia, camelo, cavalo e semelhantes, ou de outros animais apropriados, por exemplo, ave. Tal como usado na presente invenção, os anticorpos "humanos" incluem anticorpos que possuem a sequência de aminoácidos de uma imunoglobulina humana e incluem os anticorpos isolados de bibliotecas de imunoglobulinas humanas ou de animais transgênicos para uma ou mais imunoglobulinas humanas e que não expressam imunoglobulinas endógenas, como descrito, por exemplo , na Patente U.S. No. 5.939.598, cuja divulgação é incorporada na presente invenção por meio de referência na sua totalidade.
[035] O antígeno pode ser uma substância (por exemplo, proteínas), que não é derivada de vírus (por exemplo, o vírus Chikungunya, vírus da encefalite equina venezuelana).
[036] Em uma modalidade, o antígeno que é usado para a presente invenção é, pelo menos, um alvo ou um polipeptídeo tal como listado na Tabela 1. Tabela 1
Figure img0001
Figure img0002
Figure img0003
Figure img0004
Figure img0005
Figure img0006
Figure img0007
Figure img0008
Figure img0009
[037] Em uma modalidade, o antígeno que é usado para a presente invenção é, pelo menos, uma proteína ou um polipeptídeo daí selecionado a partir do grupo que consiste em CTLA-4, DP-1, TIM-3, BTLA, VISTA, a LAG-3, CD28, OX40 , GITR, CD137, CD27, HVEM e. CTLA-4, DP-1, TIM-3, BTLA, VISTA e LAG-3 são os receptores inibitórios para a estimulação de células T e CD28, OX40, GITR, CD137, CD27, HVEM e são receptores para a estimulação de células T de ativação (vide Mellman et al., Nature 480, 480 a 489 (2011)).
[038] O antígeno usado para a presente invenção pode ser polipetídeo modificado derivado de uma proteína que ocorre de forma natural. O polipeptídeo modificado pode ser um fragmento da proteína que ocorre de forma natural. Em uma modalidade, o polipeptídeo modificado tem pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % ou 98 % de identidade de sequência de aminoácidos de um polipeptídeo derivado de uma proteína que ocorre de forma natural. Em uma modalidade, o polipeptídeo modificado derivado é um mutante em que, no máximo, 10 % dos aminoácidos são eliminados, substituídos, e / ou adicionados com base em um polipeptídeo derivado da proteína que ocorre de forma natural.
[039] Em partícula, tal como previsto pela presente invenção, um polipeptídeo e um antígeno podem ser ligados por meio de pelo menos um primeiro local de ligação, que está presente no polipeptídeo e pelo menos um segundo local de ligação, que está presente no antígeno.
[040] Tal como usado na presente invenção, cada um dos "um primeiro local de ligação" e "um segundo local de ligação" refere-se a um local em que mais do que uma substância está ligada a outra.
[041] Em uma modalidade, o polipeptídeo e o antígeno são diretamente fundidos. De uma maneira alternativa, um ou dois ligantes podem intervir entre o resíduo Do terminal N do antígeno e o polipeptídeo e / ou entre o resíduo do terminal C do antígeno e o polipeptídeo.
[042] O antígeno ou o polipeptídeo pode ser truncado e substituído por meio de ligantes curtos. Em algumas modalidades, o antígeno ou o polipeptídeo inclui um ou mais ligantes de peptídeos. Tipicamente, um ligante consiste em 2 a 25 aminoácidos. Geralmente, é de 2 a 15 aminoácidos de comprimento, embora em certas circunstâncias, pode ser apenas um, tal como um único resíduo de glicina.
[043] Em uma modalidade, uma molécula de ácido nucleico, em que o polinucleotídeo que codifica o polipeptídeo é fundido geneticamente com o polinucleotídeo que codifica para o antígeno, é expresso em uma célula hospedeira, de modo que o primeiro local de ligação e o segundo local de ligação estão ligados através de uma ligação peptídica. Neste caso, o polipeptídeo e o antígeno estão ligados através de uma ligação peptídica. Relativo a esta modalidade, o primeiro local de ligação e / ou o segundo local de ligação podem ser geneticamente modificados a partir do polipeptídeo original ou antígeno. Por exemplo, o primeiro local de ligação é modificado a partir do polipeptídeo de modo a que através de um peptídeo ligante incluindo SG, GS, SGG, GGS e SGSG, o polipeptídeo é conjugado com o antígeno.
[044] Quando o polipeptídeo é conjugado quimicamente com o antígeno, o primeiro local de ligação e o segundo local de ligação podem ser ligados através de um agente de reticulação química, que é um composto químico.
[045] Exemplos do agente de reticulação incluem, mas não estão limitados a, SMPH, Sulfo-MBS, Sulfo-EMCS, Sulfo-GMBS, Sulfo-SIAB, Sulfo-SMPB, Sulfo-SMCC, SVSB, SIA e outros agentes de ligação cruzados disponíveis a partir da Companhia química Pierce.
[046] Em uma modalidade, as partículas fornecidas pela presente invenção compreendem um polipeptídeo ligado a um antígeno, em que a distância física entre o resíduo Do terminal N com o resíduo Do terminal C do antígeno é 30Á ou menos, quando a distância é determinada em um cristal do antígeno ou uma proteína que ocorre de forma natural contendo o antígeno ou proteína modificada deste.
[047] O antígeno usado para a presente invenção pode ser concebido por meio de uma pessoa que é versada na técnica. Por exemplo, o antígeno usado para a presente invenção pode ser uma proteína que ocorre de forma natural ou um fragmento do mesmo. De uma maneira alternativa, o antígeno usado para a presente invenção pode ser uma proteína modificada a partir de uma proteína que ocorre de forma natural ou um fragmento do mesmo. Uma pessoa que é versada na técnica pode desenhar o antígeno de modo que a distância física entre o resíduo Do terminal N com o resíduo Do terminal C do antígeno seja de 30Á ou menos, quando a distância é determinada em um cristal do antígeno ou de uma proteína que ocorre de forma natural contendo o antígeno ou proteína modificada deste. Por exemplo, o antígeno usado para a partícula proporcionado pela presente invenção pode ser concebido usando um software livre incluindo PyMOL (por exemplo PyMOL v0.99: http:/www.pymol.org). Em uma modalidade, a distância física entre o resíduo Do terminal N com o resíduo Do terminal C do antígeno é de 30Á (angstrom) ou menos, 20Á ou menos, ou 10Á ou menos (por exemplo, de 5 Á a 15 Á, a partir de 5 Á a 12 Á, a partir de 5 Á a 11 Á, a partir de 5 Á a 10 Á, de 5 Á a 8 Á, de 8 Á a 15 Á, de 8 Á a 13 Á, de 8 Á a 12 Á, de 8 Á a 11 Á, a partir de 9 a 12 Á Á, a partir de 9 Á a 11 Á, a partir de 9 Á a 10 Á ou de 10 Á a 11 Á). 2A partícula do tipo Vírus Chikungunya ou de uma partícula do tipo vírus da encefalite equina venezuelana
[048] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona um partícula do tipo vírus Chikungunya ou uma partícula do tipo vírus de encefalite equina venezuelana que compreende um polipeptídeo estrutural do vírus Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana e pelo menos um antígeno, em que o referido polipeptídeo estrutural do vírus Chikungunya ou o referido polipeptídeo estrutural do vírus da encefalite equina venezuelana compreende pelo menos um primeiro local de ligação e o referido pelo menos um antígeno que compreende pelo menos um segundo local de ligação, e em que o referido polipeptídeo estrutural do vírus Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana e o referido pelo menos um antígeno que estão ligados através do referido pelo menos um primeiro e pelo menos um referido segundo local de ligação.
[049] Em uma modalidade, a distância física entre o resíduo Do terminal N com o resíduo Do terminal C do antígeno pode ser Á 30 ou menos; 25 Á ou menos; 20 Á ou menos; 15 Á ou menos; 14 Á ou menos; 13 Á ou menos; 12 Á ou menos; 11 Á ou menos; 10 Á ou menos; 9 Á ou menos; ou 8 Á ou menos (por exemplo, de 5 Á a 15 Á, a partir de 5 Á a 12 Á, a partir de 5 Á a 11 Á, a partir de 5 Á a 10 Á, de 5 Á a 8 Á, de 8 Á a 15 Á, a partir 8 Á a 13 Á, de 8 a 12 Á Á, de 8 Á a 11 Á, a partir de 9 Á a 12 Á, a partir de 9 Á a 11 Á, a partir de 9 Á a 11 Á ou de 10 Á a 11 Á) quando o distância é determinada em um cristal do antígeno ou uma proteína que ocorre de forma natural contendo o antígeno ou proteína modificada do mesmo.
[050] Em uma modalidade, o antígeno é ligado ao polipeptídeo estrutural do vírus Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana por meio do agente de ligação cruzado químico, ou como uma proteína de fusão produzida através de engenharia genética.
[051] Um polipeptídeo estrutural do vírus Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana usado na presente invenção pode compreender um vírus Chikungunya ou encefalite equina venezuelana da proteína do envelope e / ou um capsídeo.
[052] Exemplos de vírus Chikungunya incluem, mas não estão limitados a, cepas de 37997 e LR2006 OPY-1.
[053] Exemplos de vírus da encefalite equina venezuelana incluem, mas não estão limitados a, TC-83.
[054] O polipeptídeo estrutural do vírus Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana usado na presente invenção pode ocorrer, de forma natural, no polipeptídeo estrutural do vírus ou polipeptídeo modificado da mesma. O polipeptídeo modificado pode ser um fragmento do polipeptídeo estrutural do vírus que ocorre de forma natural. Em uma modalidade, o polipeptídeo modificado tem pelo menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % ou 98 % de identidade de sequência de aminoácidos para um capsídeo viral e / ou proteína do envelope que ocorre de forma natural. Em uma modalidade, o polipeptídeo modificado é um mutante em que, no máximo, 10 % dos aminoácidos são eliminados, substituídos, e / ou adicionadoss com base em um capsídeo viral e / ou proteína do envelope que ocorre de forma natural. Por exemplo, K64A ou K64N mutatation pode ser introduzido em uma capsídeo de polipeptídeo de vírus da encefalite equina venezuelana estrutural usado na presente invenção.
[055] A proteína do envelope do vírus Chikungunya ou encefalite equina venezuelana pode compreender, pelo menos, um selecionado de um grupo que consiste em E3, E2, El e 6K.
[056] Exemplos de polipeptídeo estrutural do vírus Chikungunya incluem, mas não estão limitados a, E3-E2-6k-E1 da cepa do vírus Chikungunya 37997, Capsídeo-E3-E2-6k-E1 da cepa do vírus Chikungunya 37997, E3-E2-6k-E1 cepa do vírus Chikungunya LR2006 OPY-1 e Capsídeo-E3-E2-6K-E1 do vírus Chikungunya LR2006 OPY- 1.
[057] Exemplos de polipeptídeo estrutural do vírus da encefalite equina Venezuela, incluem, mas não estão limitados a, E3-E2-6k-E1, de cepa de vírus da encefalite equina venezuelana TC-83 e capsídeo- E3-E2-6k-E1, de cepa de vírus da encefalite equina venezuelana TC- 83.
[058] Uma sequência de polipeptídeo estrutural do vírus Chikungunya exemplar é fornecida pelo número de acesso GenBank ABX40006.1, o qual é descrito a seguir (SEQ ID N °: 1): mefiptqtfynrryqprpwtprptiqvirprprpqrqagqlaqlisavπkltmravpqq kprrnrknkkqkqkqqapqnntnqkkqppkkkpaqkkkkpgrrermcmkiendcifevk hegkvtgyaclvgdkvmkpahvkgtidnadlaklafkrsskydlecaqipvhmksdask f thekpegyynwhhgavqysggrf tiptgagkpgdsgrpifdnkgrwaivlgganega rtalswtwnkdivtkitpegaeewslaipvmcllanttfpcsqppctpccyekepeet Irmlednvmrpgyyqllqasltcsphrqrrstkdnfnvykatrpylahcpdcgeghsch spvalerirneatdgtlkiqvslqigiktddshdwtklrymdnhmpadaeraglfvrts apctitgtmghfilarcpkgetltvgftdsrkishscthpfhhdppvigrekfhsrpqh gkelpcstyvqstaatteeievhmppdtpdrtImsqqsgnvkitvngqtvrykcncggs negltttdkvinnckvdqchaavtnhkkwqynsplvprnaelgdrkgkihipfplanvt crvpkarnptvtygknqviml lypdhpt 1 lsyrnmgeepnyqeewvmh.kkevvl tvpte glevtwgnnepykywpqlstngtahghphe i i lyyye lyptmtwwsvat f i 11 smvg maagmcmcarrrcitpyeltpgatvpfilsliceirtakaatyqeaaiylwneqqpIfw Iqaliplaalivlcnclrllpcccktlaflavmsvgahtvsayehvtvipntvgvpykt lvnrpgyspmvlemellsvtleptlsldyitceyktvipspyvkccgtaeckdknlpdy sckvftgvypfmwggaycfcdaentqlseahveksescktefasayrahtasasaklrv lyqgnnitvtayangdhavtvkdakf ivgpmssawtpf dnkiwykgdvynmdyppf ga grpgqfgdiqsrtpeskdvyantqlvlqrpavgtvhvpysqapsgfkywlkergaslqh tapf gcqiatnpvravncavgnmpisidipeaaf trwdapsltdmscevpacthssdf ggvaiikyaaskkgkcavhsmtnavtireaeievegnsqlqisfstalasaefrvqvcs tqvhcaaechppkdhivnypashttlgvqdisatamswvqkitggvglwavaaliliv vlcvsfsrh .
[059] Uma outra sequência de polipeptídeo estrutural do vírus Chikungunya exemplar é fornecida pelo número de acesso GenBank ABX40011.1, o qual é descrito a seguir (SEQ ID N °: 2): mefiptqtfynrryqprpwaprptiqvirprprpqrqagqlaqlisavnkltmravpqq kprrnrknkkqrqkkqapqndpkqkkqppqkkpaqkkkkpgrrermcmkien.de if evk hegkvmgyaclvgdkvmkpahvkgtidnadlaklafkrsskydlecaqipvhmksdask f thekpegyynwhhgavqysggrf tiptgagkpgdsgrpif dnkgrwaivlgganega rtalswtwnkdivtkitpegaeewslalpvlcllanttfpcsqppctpccyekepest IrmlednvπirpgyyqlIkasltcsphrqrrstkdnfnvykatrpylahcpdcgeghsch spialerirneatdgtlkiqvslqigiktddshdwtklrymdshtpadaeragllvrts apctitgtmghfilarcpkgetltvgftdsrkishtcthpfhheppvigrerfhsrpqh gkelpcstyvqstaataeeievhmppdtpdrtlmtqqsgnvkitvngqtvrykcncggs negltttdkvinnckidqchaavtnhknwqynsplvprnaelgdrkgkihipfplanvt crvpkarnptvtygknqvtmllypdhptllsyrnmgqepnyheewvthkkevtltvpte glevtwgnnepykywpqmstngtahghpheiilyyyelyptmtwivsvasfvllsmvg tavgmcvcarrrcitpyeltpgatvpfllsllccvrttkaatyyeaaaylwneqqplfw Iqaliplaalivlcnclkllpcccktlaflavmsigahtvsayehvtvipntvgvpykt Ivnrpgyspmvlemelqsvtleptlsldyitceyktvipspyvkccgtaeckdkslpdy sckvftgvypfmwggaycfcdaentqlseahveksescktefasayrahtasasaklrv lyqgnnitvaayangdhavtvkdakfwgpmssawtpfdnkiwykgdvynmdyppfga grpgqfgdiqsrtpeskdvyantqlvlqrpaagtvhvpysqapsgfkywlkergaslqh tapf gcqiatnpvravncavgnipisidipdaaf trwdapsvtdmscevpacthssdf ggvaiikytaskkgkcavhsmtnavtireadvevegnsqlqisfstalasaefrvqvcs tqvhcaaachppkdhivnypashttlgvqdisttamswvqkitggvglivavaaliliv vlcvsfsrh.
[060] Um polipeptídeo estrutural do vírus da encefalite equina venezuelana exemplar é descrito a seguir (SEQ ID N °: 3): mfpfqpmypmqpmpyrnpfaaprrpwfprtdpflamqvqeltrsmanltfkqrrdappe gpsaakpkkeasqkqkgggqgkkkknqgkkkaktgppnpkaqngnkkktnkkpgkrqrm vmklesdktfpimlegkingyacwggklf rpmhvegkidndvlaalktkkaskydley advpqnmradtfkythekpqgyyswhhgavqyengrftvpkgvgakgdsgrpildnqgr wai vlggvnegsrtalswmwnekgvtvkytpenceqwslvt tmcllanvtfpcaqpp icydrkpaetlamlsvnvdnpgydelleaavkcpgrkrrsteelfneykltrpymarci rcavgschspiaieavksdghdgyvrlqtssqygldssgnlkgrtmrydmhgtikeipl hqvslytsrpchivdghgyfllarcpagdsitmefkkdsvrhscsvpyevkfnpvgreL ythppehgveqacqvyahdaqnrgayvemhlpgs evdss1vs1sgs svtvtppdgt sa1 vececggtkisetinktkqfsqctkkeqcrayrlqndkwvynsdklpkaagatlkgklh vpflladgkctvplapepmitfgfrsvslklhpknptylitrqladephythelisepa vrnftvtekgwefvwgnhppkrfwaqetapgnphglphevithyyhrypmstilglsic aaiatvsvaastwlf crsrvacltpyrltpnaripf clavlccartaraettwes.ldhl wnnnqqmf wiqlliplaalivvtrllrαvccwpf Ivmagaagagayehattmpsqagi syntivnragyaplpisitptkikliptvnleyvtchyktgnidspaikccgsqectpty rpdeqckvftgvypfmwggaycfcdtentqvskayvmksddcladhaeaykahtasvqa fInitvgehsivttvyvngetpvnfngvkitagplstawtpfdrkivqyageiynydfp eygagqpgafgdiqsrtvsssdlyantnlvlqrpkagaihvpytqapsgfeqwkkdkap slkftapfgceiytnpiraencavgsiplafdipdalftrvsetptlsaaectlnecvy ssdfggiatvkysasksgkcavhvpsgtatlkeaavelteqgsatihfstanihpefrl qictsyvtckgdchppkdhivthpqyhaqtftaavsktawtwltsllggsaviiiiglv 1a t ivamyvlt nqkhn.
[061] Em uma modalidade, um primeiro local de ligação compreende um grupo amino, preferencialmente um grupo amino de um resíduo de lisina. Em uma modalidade, o segundo local de ligação compreende o grupo sulfidrila, de preferência, um grupo sulfidrila de uma cisteína.
[062] Em uma modalidade, a conjugação de mais de duas substâncias (por exemplo, o antígeno e o polipeptídio estrutural do virus Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana) através de um primeiro local de ligação ou um segundo local de ligação é conseguida usando um ligante transversal químico. Exemplos do agente de reticulação incluem, mas não estão limitados a, SMPH, Sulfo-MBS, Sulfo-EMCS, Sulfo-GMBS, Sulfo-SIAB, Sulfo-SMPB, Sulfo-SMCC, SVSB, SIA e outros agentes de ligação cruzada disponíveis a partir da Companhia química Pierce.
[063] De acordo com a presente invenção, pode ser fornecida uma partícula do tipo vírus de Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana que compreende um polipeptídeo estrutural do vírus Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana e um antígeno, em que o referido polipeptídeo estrutural do vírus Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana e o referido antígeno são expressos como uma proteína de fusão.
[064] Em uma modalidade, o antígeno pode ser fundido com qualquer local do polipeptídeo estrutural do vírus Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana. Por exemplo, o antígeno pode ser diretamente ou indiretamente ligado ao terminal N ou C do polipeptídeo estrutural do vírus dChikungunya ou da encefalite equina venezuelana (por exemplo, da capsídeo, E3, E2, 6K ou E1), ou o antígeno pode ser inserido na proteína estrutural do vírus de Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana (por exemplo capsídeo, E3, E2, 6K, ou E1).
[065] Em uma modalidade, pelo menos, um antígeno é inserido em E2 na proteína estrutural do vírus de Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana. Por exemplo, em relação a proteínas estruturais do vírus Chikungunya, pelo menos, um antígeno é inserido entre os resíduos 519 e 520 da SEQ ID Nos.1 ou 2 (ou seja, entre 519-G na posição Q e na posição 520 da SEQ ID 2 ou Nos.1 ); entre os resíduos 530 e 531 da SEQ ID Nos.1 ou 2 (ou seja, entre G na posição 530 e S- 531 na posição de SEQ ID Nos.1 ou 2); entre os resíduos 531 e 532 da SEQ ID Nos.1 ou 2 (ou seja, entre 531e S na posição 532 e N na posição da SEQ ID Nos.1 ou 2); entre os resíduos 529 e 530 da SEQ ID Nos.1 ou 2 (ou seja, entre 529 e G na posição 530 da SEQ ID Nos.1 ou 2); ou entre os resíduos 510 e 511 da SEQ ID Nos.1 ou 2 (ou seja, entre 510e S na posição 511 e G na posição de SEQ ID Nos.1 ou 2); ou entre os resíduos 511 e 512 da SEQ ID Nos.1 ou 2 (ou seja, entre G na posição 511 e N-512 na posição de SEQ ID Nos.1 ou 2); ou entre os resíduos 509 e 510 da SEQ ID Nos.1 ou 2 (ou seja, entre 509-Q na posição S e na posição 510 da SEQ-ID Nos.1 ou 2).
[066] Por exemplo, em relação a proteínas estruturais do vírus da encefalite equina venezuelana, pelo menos, um antígeno é inserido entre os resíduos 517 e 518 da SEQ ID No. 3 (ou seja, entre G na posição 517 e S na posição 518 de SEQ ID No.3); entre os resíduos 518 e 519 da SEQ ID No.3 (ou seja, entre 518e S na posição e S em 519 posições de SEQ ID No.3); entre os resíduos 519 e 520 da SEQ ID No. 3 (ou seja, entre 519 e S na posição V e na posição 520 da SEQ ID No. 3); entre os resíduos 515 e 516 da SEQ ID No. 3 (isto é, entre L na posição 515 e S na posição 516 da SEQ ID No.3); entre os resíduos 516 e 517 da SEQ ID No. 3 (ou seja, entre 516 na posição S e G na posição 517 da SEQ ID No. 3); entre os resíduos 536 e 537 da SEQ ID No. 3 (ou seja, entre C na posição 536 e L na posição 537 de SEQ ID No.3); entre os resíduos 537 e 538 da SEQ ID No. 3 (ou seja, entre G na posição 537 e G na posição 538 da SEQ ID No.3); entre os resíduos 538 e 539 da SEQ ID No. 3 (isto é, entre a L na posição 538 e T na posição 539 da SEQ ID No. 3).
[067] A proteína de fusão pode ser expressa usando um método convencional na técnica. Uma variedade de sistemas de expressão pode ser usada para a expressão da proteína de fusão. Por exemplo, a proteína de fusão pode ser expressa em células 293, células Sf9 ou E. coli.
[068] Em uma modalidade, o antígeno é uma substância (por exemplo, proteína), que não é derivada do vírus de Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana. O antígeno pode ser, pelo menos, um selecionado de um grupo que consiste em antígenos próprios e os antígenos do câncer. Por exemplo, o antígeno é um polipeptídeo derivado de TNF-α, CD20 ou CTLA4. Dessa maneira, exemplos de combinações de polipeptídeo e o antígeno usados para a presente invenção incluem, mas não estão limitados a, i) um polipeptídeo derivado do vírus Chikungunya (CHIKV) e um polipeptídeo derivado de TNF-α; ii) um polipeptídeo derivado do vírus Chikungunya (CHIKV) e um polipeptídeo derivado de CD20; iii) um polipeptídeo derivado do vírus da encefalite equina venezuelana (VEEV) e um polipeptídeo derivado de TNF-α; ou iv) um polipeptídeo derivado do vírus da encefalite equina venezuelana (VEEV) e um polipeptídeo derivado de CD20 v) um polipeptídeo derivado do vírus da encefalite equina venezuelana (VEEV) e um polipeptídeo derivado de CTLA4.
[069] Um polipeptídeo derivado do vírus Chikungunya (CHIKV) ou vírus da encefalite equina venezuelana (VEEV) pode ser um polipeptídeo viral que ocorre de forma natural ou polipeptídeo modificado do mesmo. Além disso, um polipeptídeo derivado de TNF-α, CD20 ou CTLA4 pode ser um polipeptídeo que ocorre de forma natural ou polipeptídeo modificado do polipeptídeo que ocorre de forma natural ou um fragmento do polipeptídeo que ocorre de forma natural ou o peptídeo modificado. O polipeptídeo modificado pode ser um fragmento do polipeptídeo estrutural do vírus que ocorre de forma natural.
[070] Em uma modalidade, o polipeptídeo modificado, derivado a partir de TNF-α, CD20 ou CTLA4, tem, pelo menos, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % ou 98 % de identidade de sequência de aminoácidos de um polipeptídeo que ocorre de forma natural. Em uma modalidade, o peptídeo modificado, derivado a partir de TNF-α, CD20 ou CTLA4 é um mutante em que, no máximo, 10 % dos aminoácidos são eliminados, substituídos, e / ou adicionadoss com base em um polipeptídeo que ocorre de forma natural derivado de TNF-α, CD20 ou CTLA4.
[071] Quando um polipeptídeo derivado de um vírus é conjugado com um polipeptídeo derivado de um antígeno, um peptídeo ligante incluindo SG, GS, SGG, GGS SGSG TRGGS e pode ser usado. Exemplos de conjugação do polipeptídeo derivado de um vírus (referido como "PFV" abaixo) com o polipeptídeo derivado do antígeno (referidos como "PFA" abaixo) incluem, mas não se limitando a: PFV-PFA-SG-GS- PFV; PFV-SG-PFA-GGS-PFV; PFV-SSG-PFA-GS-PFV; PFV-SGG- PFA-GGS-PFV; PFV-SGSG-PFA-GS-PFV; e PFA-SGG-PFA-TRGGS- PFV.
[072] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona uma partícula do tipo vírus que compreende i) uma proteína de fusão de um polipeptídeo derivado do vírus Chikungunya (CHIKV) e um polipeptídeo derivado de TNF-α, que consiste em uma sequência de aminoácidos representada por meio da SEQ ID No. 4; ii) uma proteína de fusão de um polipeptídeo derivado do vírus Chikungunya (CHIKV) e um polipeptídeo derivado de CD20, que consiste em uma sequência de aminoácidos representada por meio da SEQ ID No. 5; iii) uma proteína de fusão de um polipeptídeo derivado do vírus da encefalite equina venezuelana (VEEV) e um polipeptídeo derivado de TNF-α, que consiste em uma sequência de aminoácidos representada por meio da SEQ ID No. 6; ou iv) uma proteína de fusão de um polipeptídeo derivado do vírus da encefalite equina venezuelana (VEEV) e um polipeptídeo derivado de CD20, que consiste em uma sequência de aminoácidos representada por meio da SEQ ID N ° 7; v) uma proteína de fusão de um polipeptídeo derivado do vírus da encefalite equina venezuelana (VEEV) e um polipeptídeo derivado de CTLA4, que consiste em uma sequência de aminoácidos representada por meio da SEQ ID No. 8.
[073] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona uma partícula do tipo vírus que compreende uma proteína de fusão, que é modificada a partir da proteína de fusão possuindo uma sequência de aminoácidos representada por meio de qualquer uma das SEQ ID Nos.4 a 8. A proteína de fusão modificada pode ter, pelo menos, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % ou 98 % de identidade de sequência de aminoácidos para a proteína de fusão possuindo uma sequência de aminoácidos representada por meio de qualquer uma das SEQ ID N ° s 4-8. Além disso, a proteína de fusão pode ser modificada de um mutante em que, no máximo, 10 % dos aminoácidos são eliminados, substituídos, e / ou adicionados com base na proteína de fusão possuindo uma sequência de aminoácidos representada por meio de qualquer uma das SEQ ID Nos.4 a 8 .
(2) Nucleotídeo, Vetor, célula hospedeira
[074] No segundo aspecto, a presente invenção proporciona uma molécula de ácido nucleico que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma partícula, tal como previsto no primeiro aspecto da presente invenção.
[075] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona uma molécula de ácido nucleico que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica a partícula do tipo virus de Chikungunya ou vírus da encefalite equina venezuelana, como descrito acima.
[076] Exemplos da sequência de nucleotídeos que codifica a partícula do tipo virus de Chikungunya ou vírus da encefalite equina venezuelana incluem, mas não estão limitados a, uma sequência de nucleotídeos que codifica E3-E2-6k-E1 da cepa do vírus Chikungunya 37997, uma sequência de nucleotídeos que codifica Capsídeo-E3-E2 - 6K-E1 da cepa do vírus Chikungunya 37997, uma sequência de nucleotídeos que codifica E3-E2-6k-E1 da cepa do vírus Chikungunya LR2006 OPY-1, uma sequência de nucleotídeos que codifica Capsídeo- E3-E2-6k-E1 do vírus Chikungunya LR2006 OPY-1, uma sequência de nucleotídeos que codifica E3-E2-6k-E1, de cepa de vírus da encefalite equina venezuelana TC-83 e uma sequência de nucleotídeos que codifica Capsídeo-E3-E2-6k-E1 do vírus da encefalite equina venezuelana TC-83.
[077] Quanto ao vírus Chikungunya, uma sequência exemplar de nucleotídeos que codifica E3-E2-6k-E1 é descrita abaixo (SEQ ID No: 9): Atgagccicgccctcccggtcttgtgccigttggcaaacactacaucccctgctctcagcxgccttgcacnccctgcigctacgaaaaggaaccgg aaagcaccitgcgcatgcttgaggacaacgtgaigagacccggatactaccagclactaaaagcatcgctgacttgctctccccaccgccaaagac gcagtactaaggacaattttaatgtclai aaagcca caagaccatatctagcicattgt cctgaci gc ggagaagggcattc gt gccacagccctatc gcattggagcgcatcagaaaigaagcaacggacggaacgclgaaaatccaggtctctttgcagatcgggataaagaeagaigacagccacgaltg gaccaagctgcgctatatggatagccatacgccagcggacgcggagcgagccggattgcttgiaaggacttcagcaccgtgcacgalcaccggg accntgggacacittauctcgcccgatgcccgaaaggagagacgcfgacagigggatuacggacagcagaaagatcagccacacatgcacaca cccguccβtcatgaaccacctgtgataggtagggagaggitccactctcgaccacaacatggtaaagagttaccttgcagcacgiacgtgcagag caccgctgccactgctgaggagatagaggtgcaiatgcccccagatactcctgaccgcacgctgatgacgcagcagictggcaacglgaagalca cngtlaa1gggcagacggtgcggtacaagtgcanctgcgg'ggctcaaacgagggacigacaaccacagacaaagtga(caataactgcaaaatl gates gtgccatgclgcagtcactaatcacaagaaπggcaatacaactcccctttagtcccgcgcaacgctgaactcggggaccgtaaaggaaag atccacatcccaUcccattggcaaacgtgacttgcagagtgccaaaagcaagaaaccctacagtaacttacggaaaaaaecaagtcaccatgclg ciglalcclgaccatccgacactcttgtcttaecgtaacatgggacaggaaccaaattaccacgaggagtgggtgacacaeaagaaggaggttacct tgaccglgcclactgagggtctggagglcacltggggcaacaacgaaccalacaagtactggccgcagatglclacgaacgglaclgclcalggtc acccacatgagataatcttgtactauaigagctgtaccccacliilgactgtagtcattgtgtcggtggcctcgltcgtgcltctgtcgatggtgggcaca gcaglgggaatgtgtgtgtgcgcacggcgcagatgcattacaccatatgaattaacaccaggagccaetgttccctlcclgctcagcctgctalgctg cgtcagaacgaccaaggcggccacataltacgaggctgcggcatatctatggaacgaacagcagcccctgttctggltgcaggctcltatcccgct ggccgccttgatcgtcctgtgcaactgtctgaaactctigccatgctgctgiaagβccctggcttmtagccgtaatgagcatcggtgcccacactgtg agcgcgtacgaacacgtaacagtgatcccgaacacggtgggagtaccgtataagactcttgtcaacagaccgggttacagwxcatggigttgEa galggaÊCtacaatcagtcaccttggaaccaacactgtcacttgactacatcacgtgcgagtacaaaactgtcatcccclccccgtacgtgaagtget gtggtacagcagag1gcaaggacaagagcut3ecagactacagctgcaaggtctttactggagtctacccattiatglggggcggegcctaetgctt ttgcgacgccgaaaatacgcaattgagcgaggcacatgtagagaaatctgaatcttgcaaaacagagittgcatcggcctacagagcccacaccg eatcggcgtcggcgaagctccgcgtcctttaccaβggaaacaαcartaccgtagctgcctacgctaacggtgaccatgccgtcacagtaaaggac gccaagtttgtcgtgggeccaatgtcctccgcctggacacctWgacaacaaaatcgtggtglacaaaggegacgtctacaacatggactacccac cntlggcgcBggaagaccaggacaatttggtgacaUcaaagtcgtacaccggaHaglaaagacgtttatgccaacfflctcagWggtactacagag gccagcagcaggcacgglacatgtaccataciclcaggcaccatctggc(tcaagiattggcigaaggaacgaggagcatcgciacagcacacgg caccgtKggt1gccagattgcgacaaacccggtaagngctgtaaattgcgctgtggggaacataccaatttccatcgacataccggatgcggcctt tactagggttgicgatgcacxxtctgtaacggacatgicatgcgaagtaccagcctgcactcactcctccgactttgggggcgtcgccatcatcaaat acacagctagcaagaaaggtaaalgtgcagtacattcgatgaccaaegccgltãccatlcgagaagccgacgtagaagtagaggggaactccca gctgcaaatatcctictcaacagccctggcaagcgccgagtttcgcgtgcaagtgtgctccacacaagtacaclgcgcagccgcalgccaccelcc aaaggaccacataglcaattacccagcatcacacaccacecttggggtccaggatatalccacaacggcaatgteilgggtgcagaagattacggg aggaglaggattaattgttgctgltgctgccttaattiiaMtgtggtgclatgcgtgtcglttagcaggcac
[078] Quanto ao vírus Chikungunya, uma outra sequência exemplar de nucleotídeos que codifica E3-E2-6k-E1 é descrita abaixo (SEQ ID N °: 10): Atβagtcitgccatcccagttalgtgcclgttggcaaacaccacgttcccctgctcccagcccccttgcacgccctgctgctacgaaaaggaaccgg aggaaaccctacgcatgcttgaggacaacgtcatgagacctgggtaciatcagctgctacaagcatccitaacalgttc(ccccáccgccagcgac gcagcaccaaggacaacttcaalgictataaagccacaagaccatacUagctcacigIcccgacfgtggagaagggcactcgigccatagtcccg tagc3ctagaacgcatcagaaatgaagcgacagacgggacgctgaaaatccaggtctccttgcaaatcggaataaagacggBtgacagccacga (tggaccaagctgcgttatatggacaaccacatgccagcagacgcagagagggcggggctattlgtaagaacatcagcaccgtgtacgattactgg aacaalgggacactlcalcctggcccgaigtccaaaaggggaaactctgacggtgggatlcactgacagtaggaíigattagtcadcalgtacgca cccatttcaccacgaccctcctgtgataggtcgggaaaaattccatlcccgaccgcagcacggtaaagagctaccltgcagcncgtacgtgcagag caccgccgcaactaccgaggagatagaggtacacatgicccccagacacccctgalcgcacaUaatgtcacaacagtccggcaacgtaaagatc acagtcaatggccagacggtgcggtacaagtgtaattgcggtggctcaaatgaaggaclaacaactacagacaaagtgattaataactgcaaggtt gatcaatglcalgccgcgglcaccaatcacaaaaagtggcaglaiaacicccclctggtcccgcgtafllgctgaacUggggaccgaaaaggaaaa atlcacatcccgtltccgclggcaaMgtaacalgcagggtgcclaaagcaaggaaccccaccgtgacgtacgggaaaaaccaaglcalcaigcta ctgtalcclgaccacccaacactcctgtcctaccggaatatgggagaagaaccaaactatcaagaagagtggglgatgcataagaaggaaglcgtg ctaaccgtgcceaclgaaeggctcgaggtcacgtggggcaacaacgagccgtataagtattggccgcagtlatctacαaacggtacagcccatgg ccacccgcatgagataattctgtatíatlatgagctgtaccccactatgactgtagtagttgtgtcagtggccacgttcatactcctgtcgatggtgggta tggcagcggggatgtgcalgtgtgcacgacgcagatgcatcacaccgtatgaactgacaccaggagctaccgtccctttcctgcttagcciaaiaig ctgcatCágaacagc!aaagcggccacataccaagagBCtgcgatatacc1glggaacgagcagcaacctttgttttggctacangcccttattccg ctggcagccctgaltgttctatgcaactgKtgagactcttaccatgctgctgtaaaacgttggcttttttagccgtaatgagcgtcgglgcccacactgt gagcgcgtacgaacacgiaacagtgatcccgaacacggtgggagiaccgtataagactciagtcaaiagacctggctacagccccaigglattgg agatggaaclactgtcagtcactttggagccaacactatcgcttgatlacaicacgtgcgagtacaaaaccgtcatcccgtctccgtacgtgaagtgct gcggtacagcagagtgcaaggacaaaaacclacctgac(acagclglaaggtctlcaccggcgtctaeccatttaigfggggcggcgec(aclgc« ctgcgacgclgaaaacaegcagttgagcgaagcacacgtggagaagtccgaalcatgeaaaacagaatttgcatcagcatacagggctcataccg catctgcatcagctaagctccgcgtccttlaccaaggaaataacatcactgtaaogcctatgcaaacggcgaccalgccgtcacagtlaaggacgc caaattcattgtggggccaalgtcttcagcctggacaccUtcgacaacaaaaUgtggtglacaaaggtgacgtctalaacalggnctacccgcccU tggcgcaggaagaccaggacaatttggcga1.atccaaagtcgcacacctgagagiaaagacgtctatgc1aatacácaactggtactgcagagac cggelgtgggtacggtEícacgigccatactctcaggcaccatctggctttaaglHttggctaaaíTgaacgcggggcgtcgdgcagcacacagcac cdltggctgccaaatagcaacaaacccggtaagagcggtgaaclgcgccglagggaacatgcccatctccatcgacalaccggaagcggccltc actagggtcgtcgacgcgccctctttaacggacalgtcglgcgaggtaccagccigcacccallcctcagactttgggggcgtcgccattattaaata Igcagccagcaagaaaggcaaglgtgcggtgcaucgatgactaacgccglcaciattcgggaagcigagaiagaagttgaagggaauclcagct gcaaatctcütctcgacggccttagccagcgccgaaitccgcgtacaagtctgttctacacaagtacactgtgcagccgagtgccaccccccgaag gaccacatagicaactacccggcgtcacataccaccctcggggtccaggacatctccgctacggcgatglcatgggtgcagaagaicacgggag gtStgggactggtlgttgclgttgccgcactgaltctaatcglgglgctalgcgtgtcgttcageaggcac
[079] Quanto ao vírus Chikungunya, uma sequência exemplar de nucleotídeos que codifica um da Capsídeo-E3-E2-6k-E1 é descrita abaixo (SEQ ID N °: 11): atggaçjttcatcccgacgcaaactttctataacagaaggtaccaaccccgaccctçjggc cccacgccctacaattcaagtaattagacctagaccacgtccacagaggcaggctgggc aactcgcccagctgatctccgcagtcaacaaattgaccatgcgcgcggtacctcaacag aagcctcgcagaaatcggaaaaacaagaagcaaaggcagaagaagcaggcgccgcaaaa cgacccaaagcaaaagaagcaaceaccacaaaagaagccggctcaaaagaagaagaaac caggccgtagggagagaatgtgcatgaaaattgaaaatgattgcatcttcgaagtcaag catgaaggcaaagtgatgggctacgcatgcctggtgggggataaagtaatgaaaccagc acatgtgaagggaactatcgacaatgccgatctggctaaactggcctttaagcggtcgt ctaaatacgatcttgaatgtgcacagatacaggtgcacatgaagtctgatgcctcgaag tttacccacgagaaacccgaggggtactataactggcatcacggagçagtgcagtattc aggaggccggttcactatcccgacgggtgcaggcaagccgggagacagcggcagaccga tcttcgacaacaaaggacgggtggtggccatcgtcctaggaggggccaacgaaggtgcc cgcacggccctctccgtggtgacgtggaacaaagacatcgtcacaaaaattacccctga gggagccgaagagtggagcctcgccctcccggtcttgtgcctgttggcaaacactacat tcccctgctctcagccgccttgcacaccctgctgctacgaaaaggaaccggaaagcacc ttgcgcatgcttgaggacaacgtgatgagacccggatactaccagctactaaaagcatc gctgacttgctctccccaccgccaaagacgcagtactaaggacaattttaatgtctata aagccacaagaccatatctagctcattgtcctgactgcggagaagggcattcgtgccac agccctatcgcattggagcgcatcagaaatgaagcaacggacggaacgctgaaaatcca ggtctctttgcagatcgggataaagacagatgacagccacgattggaccaagctgcgct atatggatagccatacgccagcggacgcggagcgagccggattgcttgtaaggacttca gcaccgtgcacgatcaccgggaccatgggacactttattctcgcccgatgcccgaaagg agagacgctgacagtgggatttacggacagcagaaagatcagccacacatgcacacacc cgttccatcatgaaccacctgtgataggtagggagaggttccactctcgaccacaacat ggtaaagagttaccttgcagcacgtacgtgcagagcaccgctgccactgctgaggagat agaggtgcatatgcccccagatactcctgaccgcacgctgatgacgcagcagtctggca acgtgaagatcacagttaatgggcagacggtgcggtacaagtgcaactgcggtggctca aacgagggactgacaaccacagacaaagtgatcaataactgcaaaattgatcagtgcca tgctgcagtcactaatcacaagaattggcaatacaactcccctttagtcccgcgcaacg ctgaactcggggaccgtaaaggaaagatccacatcccattcccattggcaaacgtgact tgcagagtgccaaaagcaagaaaccctacagtaacttacggaaaaaaccaagtcaccat gctgctgtatcctgaccatccgaαaαtcttgtcttaccgtaacatgggacaggaaccaa attaccacgaggagtgggtgaαacacaagaaggaggttaccttgaccgtgcctactgag ggtctggaggtcacttggggcaacaacgaaccatacaagtactggccgcagatgtctac gaacggtactgctcatggtcacccacatgagataatcttgtactattatgagctgtacc ccactatgactgtagtcattgtgtcggtggcctcgttcgtgcttctgtcgatggtgggc acagcagtgggaatgtgtgtgtgcgcacggcgcagatgcattacaccatatgaattaac accaggagccactgttcccttcctgctcagcctgctatgctgcgtcagaacgaccaagg cggccacatattacgaggctgcggcatatctatggaacgaacagcagcccctgttctgg ttgcaggctcttatcccgctggccgccttgatcgtcctgtgcaactgtctgaaactctt gccatgctgctgtaagaccctggcttttttagccgtaatgagcatcggtgcccacactg tgagcgαgtacgaacacgtaacagtgatcccgaacacggtgggagtaccgtataagact cttgtcaacagaccgggttacagccccatggtgttggagatggagctacaatcagtcac cttggaaccaacactgtcacttgactacatcacgtgcgagtacaaaactgtcatcccct ccccgtacgtgaagtgctgtggtacagcagagtgcaaggacaagagcctaccagactac agotgcaaggtctttactggagtctaccαatttatgtggggcggcgcctactgcttttg cgacgccgaaaatacgcaattgagcgaggcacatgtagagaaatctgaatcttgcaaaa cagagtttgcatcggcctacagagcccacaccgcatcggcgtcggcgaagctccgcgtc ctttaccaaggaaacaacattaccgtagctgcctacgctaacggtgaccatgccgtcac agtaaaggacgccaagtttgtcgtgggcccaatgtcctccgcctggacaccttttgaca acaaaatcgtggtgtacaaaggcgacgtctacaacatggactacccaccttttggcgca ggaagaccaggacaatttggtgacattcaaagtcgtacaccggaaagtaaagacgttta tgccaacactcagttggtactacagaggccagcagcaggcacggtacatgtaccatact αtcaggcaccatctggcttcaagtattggctgaaggaacgaggagcatcgctacagcac acggcaccgttcggttgccagattgcgacaaacccggtaagagctgtaaattgcgctgt ggggaacataccaatttccatcgacataccggatgcggcctttactagggttgtcgatg cacαctctgtaacggacatgtcatgαgaagtaccagcctgcactcactcctccgacttt gggggcgtcgccatcatcaaatacacagctagcaagaaaggtaaatgtgcagtacattc gatgaccaacgccgttaccattcgagaagccgacgtagaagtagaggggaactcccagc tgcaaatatccttctcaacagccctggcaagcgccgagtttcgcgtgcaagtgtgctcc acacaagtacactgcgcagccgcatgccaccctccaaaggaccacatagtcaattaccc agcatcacacaccacccttggggtccaggatatatccacaacggcaatgtcttgggtgc agaagattacgggaggagtaggattaattgttgctgttgctgccttaattttaattgtg gtgctatgcgtgtcgtttagcaggcactaa.
[080] Quanto ao vírus Chikungunya, uma outra sequência exemplar de nucleotídeos que codifica um da Capsídeo-E3-E2-6k-E1 é descrita abaixo (SEQ ID N °: 12): atggagttcatcccaacccaaactttttacaataggaggtaccagcctcgaccctggac tccgcgccctactatccaagtcatcaggcccagaccgcgccctcagaggcaagctgggc aacttgcccagctgatctcagcagttaataaactgacaatgcgcgcggtaccacaacag aagccacgcaggaatcggaagaataagaagcaaaagcaaaaacaacaggcgccacaaaa caacacaaatcaaaagaagcagccacctaaaaagaaaccggctcaaaagaaaaagaagc cgggccgcagagagaggatgtgcatgaaaatcgaaaatgattgtattttcgaagtcaag cacgaaggtaaggtaacaggttacgcgtgcctggtgggggacaaagtaatgaaaccagc acacgtaaaggggaccatcgataacgcggacctggccaaactggcctttaagcggtcat ctaagtatgaccttgaatgcgcgcagatacccgtgcacatgaagtccgacgcttcgaag ttcacccatgagaaaccggaggggtactacaactggcaccacggagcagtacagtactc aggaggccggttcaccatccctacaggtgctggcaaaccaggggacagcggcagaccga tcttcgacaacaagggacgcgtggtggccatagtcttaggaggagctaatgaaggagcc cgtacagccctctcggtggtgacctggaataaagacattgtcactaaaatcacccccga gggggccgaagagtggagtcttgccatcccagttatgtgcctgttggcaaacaccacgt tcccctgctcccagcccccttgcacgccctgctgctacgaaaaggaaccggaggaaacc ctacgcatgcttgaggacaacgtcatgagacctgggtactatcagctgctacaagcatc cttaacatgttctccccaccgccagcgacgcagcaccaaggacaacttcaatgtctata aagccacaagaccatacttagctcactgtcccgactgtggagaagggcactcgtgccat agtcccgtagcactagaacgcatcagaaatgaagcgacagacgggacgçtgaaaatcca ggtctccttgcaaatcggaataaagacggatgacagccacgattggaccaagctgcgtt atatggacaaccacatgccagcagacgcagagagggcggggctatttgtaagaacatca gcaccgtgtacgattactggaacaatgggacacttcatcctggcccgatgtccaaaagg ggaaactctgacggtgggattcactgacagtaggaagattagtcactcatgtacgcacc catttcaccacgaccctcctgtgataggtcgggaaaaattccattcccgaccgcagcac ggtaaagagctaccttgcagcacgtacgtgcagagcaccgccgcaactaccgaggagat agaggtacaGatgcccccagacacccctgatcgcacattaatgtcacaacagtccggca acgtaaagatcacagtcaatggccagacggtgcggtacaagtgtaattgcggtggctca aatgaaggactaacaactacagacaaagtgattaataactgcaaggttgatcaatgtca tgccgcggtcaccaatcacaaaaagtggcagtataactcccctctggtcccgcgtaatg ctgaacttggggaccgaaaaggaaaaattcacatcccgtttccgctggcaaatgtaaca tgcagggtgcctaaagcaaggaaccccaccgtgacgtacgggaaaaaccaagtcatcat gctactgtatcctgaccacccaacactcctgtcctaccggaatatgggagaagaaccaa actatcaagaagagtgggtgatgcataagaaggaagtcgtgctaaccgtgccgactgaa gggctcgaggtcacgtggggcaacaacgagccgtataagtattggccgcagttatctac aaacggtacagcccatggccacccgcatgagataattctgtattattatgagctgtacc ccactatgactgtagtagttgtgtcagtggccacgttcatactcctgtcgatggtgggt atggcagcggggatgtgcatgtgtgcacgacgcagatgcatcacaccgtatgaactgac accaggagctaccgtccctttcctgcttagcctaatatgctgcatcagaacagctaaag cggccacataccaagaggctgcgatatacctgtggaacgagcagcaacctttgttttgg ctacaagcccttattccgctggcagccctgattgttctatgcaactgtctgagactctt accatgctgctgtaaaacgttggcttttttagccgtaatgagcgtcggtgcccacactg tgagcgcgtacgaacacgtaacagtgatcccgaacacggtgggagtaccgtataagact ctagtcaatagacctggctacagccccatggtattggagatggaactactgtcagtcac tttggagccaacactatcgcttgattacatcacgtgcgagtacaaaaccgtcatcccgt ctccgtacgtgaagtgctgcggtacagcagagtgcaaggacaaaaacctacctgactac agctgtaaggtcttcaccggcgtctacccatttatgtggggcggcgcctactgcttctg cgacgctgaaaacacgcagttgagcgaagcacacgtggagaagtccgaatcatgcaaaa cagaatttgcatcagcatacagggctcataccgcatctgcatcagctaagctccgcgtc ctttaccaaggaaataacatcactgtaactgcctatgcaaacggcgaccatgccgtcac agttaaggacgccaaattcattgtggggccaatgtcttcagcctggacacctttcgaca acaaaattgtggtgtacaaaggtgacgtctataacatggactacccgccctttggcgca ggaagaccaggacaatttggcgatatccaaagtcgcaca.cctgagagtaaagacgtcta tgctaatacacaactggtactgcagagaccggctgtgggtacggtacacgtgccatact ctcaggcaccatctggctttaagtattggctaaaagaacgcggggcgtcgctgcagcac acagcaccatttggctgccaaatagcaacaaacccggtaagagcggtgaactgcgccgt sgggaacatgcccatctccatcgacataccggaagcggccttcactagggtcgtcgacg cgccctctttaacggacatgtcgtgcgaggtaccagcctgcacccattcctcagacttt gggggcgtcgccattattaaatatgcagccagcaagaaaggcaagtgtgcggtgcattc gatgactaacgccgtcactattcgggaagctgagatagaagttgaagggaattctcagc tgcaaatctctttctcgacggccttagccagcgccgaattccgcgtacaagtctgttct acacaagtacactgtgcagccgagtgccaccccccgaaggaccacatagtcaactaccc ggcgtcacataccaccctcggggtccaggacatctccgctacggcgatgtcatgggtgc agaagatcacgggaggtgtgggactggttgttgctgttgccgcactgattctaatcgtg gtgctàtgcgtgtcgttcagcaggcactaa. .
[081] Em uma modalidade, a presente invenção fornece um vetor que compreende a molécula de ácido nucleico como acima descrito, em que o vetor compreende, de uma forma opcional , uma sequência de controle de expressão ligada operativamente à molécula de ácido nucleico.
[082] Exemplos de uma sequência de controle de expressão incluem, mas não estão limitados a, promotor tal como o promotor de CMV, o promotor do fago lambda PL, lac de E. coli, promotores de phoA e tac, os promotores de SV40 precoce e tardia, e os promotores de LTRs retrovirais.
[083] Os vetores de expressão podem ser preparados por meio de uma pessoa que é versada na técnica com base em WO / 2012 / 006180, todo o conteúdo do qual é incorporada na presente invenção por meio de referência. Exemplos de vetores que podem ser usados para expressar uma proteína de fusão de um polipeptídeo derivado do vírus Chikungunya (CHIKV) e um polipeptídeo de antígeno inclui um vetor mostrado no vetor VLP_CHI 512 (SEQ ID No: 23) contendo polinucleotídeo CHIKV VLP (SEQ ID n ° 28; corresponde à sequência de aminoácidos representada por meio da SEQ ID No.: 29); e vetor VLP_CHI 532 (SEQ ID No: 24) contendo polinucleotídeo CHIKV VLP (SEQ ID N ° 30; sequência de aminoácidos correspondente representada por meio da SEQ ID No.: 31).
[084] Os vetores de expressão podem ser preparados por meio de uma pessoa que é versada na técnica com base em US2012 / 0003266, todo o conteúdo do qual é incorporada na presente invenção por meio de referência. Exemplos de vetores que podem ser usados para expressar uma proteína de fusão de um polipeptídeo derivado do vírus da encefalite equina venezuelana (VEEV) e um polipeptídeo de antígeno inclui um vetor mostrado na VLP_VEEV VLP 518 vetor (SEQ ID No: 25) contendo polinucleotídeo VEEV VLP (SEQ ID n ° 32; correspondente a sequência de aminoácidos representada por meio da SEQ ID No.: 33); vetor VLP_VEEV VLP 519 (SEQ ID No.26) contendo polinucleotídeo VEEV VLP (SEQ ID N ° 34; corresponde à sequência de aminoácidos representada por meio da SEQ ID No.: 35); e vetor VLP_VEEV VLP 538 (SEQ ID No: 27) contendo polinucleotídeo VEEV VLP (SEQ ID N ° 36; sequência de aminoácidos correspondente representada por meio da SEQ ID No.: 37).
[085] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona (1) uma molécula de ácido nucleico que codifica uma proteína de fusão de um polipeptídeo derivado do vírus Chikungunya (CHIKV) e um polipeptídeo derivado de TNF-α, que consiste em uma sequência de nucleotídeos representada por meio da SEQ ID N ° 13; (2) ) uma molécula de ácido nucleico que codifica uma proteína de fusão de um polipeptídeo derivado do vírus Chikungunya (CHIKV) e um polipeptídeo derivado de CD20, que consiste em uma sequência de nucleotídeos representada por meio da SEQ ID No.14; (3) i) uma molécula de ácido nucleico que codifica uma proteína de fusão de um polipeptídeo derivado do vírus da encefalite equina venezuelana (VEEV) e um polipeptídeo derivado de TNF-α, que consiste em uma sequência de nucleotídeos representada por meio da SEQ ID No. 15; (4) uma molécula de ácido nucleico que codifica uma proteína de fusão de um polipeptídeo derivado do vírus da encefalite equina venezuelana (VEEV) e um polipeptídeo derivado de CD20, que consiste em uma sequência de nucleotídeos representada por meio da SEQ ID No. 16; ou (5) uma molécula de ácido nucleico que codifica uma proteína de fusão de um polipeptídeo derivado do vírus da encefalite equina venezuelana (VEEV) e um polipeptídeo derivado de CTLA4, que consiste em uma sequência de nucleotídeos representada por meio da SEQ ID No. 17.
[086] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona uma molécula de ácido nucleico que é modificada a partir da molécula de ácido nucleico possuindo uma sequência de nucleotídeos representada por meio de qualquer uma das SEQ ID Nos.13 a 17. A molécula de ácido nucleico modificada pode ter, pelo menos, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % ou 98 % de identidade de sequência de nucleotídeos da molécula de ácido nucleico possuindo uma sequência de nucleotídeos representada por meio de qualquer uma das SEQ ID N ° s 13 a 17. Além disso, a molécula de ácido nucleico modificada pode ser um mutante em que, no máximo, 10 % dos aminoácidos são eliminados, substituídos, e / ou adicionados com base na molécula de ácido nucleico possuindo uma sequência de nucleotídeos representada por meio de qualquer uma das SEQ ID-Nos.13 a 17.
(3) Composição
[087] No terceiro aspecto, a presente invenção proporciona uma composição que compreende a partícula fornecida no primeiro aspecto da presente invenção e / ou a molécula de ácido nucleico fornecido no segundo aspecto da presente invenção.
[088] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona uma composição que compreende a partícula do tipo do vírus Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana, tal como descrito acima ou a molécula de ácido nucleico tal como descrito acima.
[089] A composição pode ainda compreender um veiculo e / ou adjuvante farmaceuticamente aceitável. Exemplos de adjuvantes incluem, mas não estão limitados a solução de Ribi (sistema adjuvante Sigma, Sigma-Aldrich).
[090] A composição farmacêutica da presente invenção pode conter um único ingrediente ativo ou uma combinação de dois ou mais princípios ativos, na medida em que não sejam contrários aos objetivos da presente invenção. Por exemplo, citocinas, incluindo quimiocinas, anticorpo de citocinas, tais como anticorpo anti-TNF (por exemplo infliximab, adalimumab), um anticorpo anti-VEGF (por exemplo, o bevacizumab e ranibizumab), antagonista do receptor de citocina, tais como o anticorpo anti HER2 (por exemplo, trastuzumab), anti-EGF anticorpo para o receptor (por exemplo, cetuximab), anti aptâmero de VEGF (por exemplo, pegaptanib) e imunomodulador tal como ciclosporina, tacrolimus, ubenimex podem ser usados para a terapia de combinação.
[091] Em uma combinação de ingredientes ativos plurais, os seus respectivos conteúdos podem ser adequadamente aumentados ou diminuídos em consideração os seus efeitos terapêuticos e de segurança.
[092] O termo "combinação" usado na presente invenção, significa dois ou mais ingredientes ativos que são administrados a um paciente simultaneamente na forma de uma única entidade ou dosagem, ou são ambos administrados a um paciente como entidades separadas quer simultaneamente ou sequencialmente, sem limites de tempo específicos, em que tal administração proporciona níveis terapeuticamente eficazes dos dois componentes do corpo, preferencialmente, ao mesmo tempo.
[093] Em uma modalidade, a composição é uma composição de vacina incluindo uma vacina de DNA. Em uma modalidade, a vacina de DNA proporcionada por meio da presente invenção compreende oligonucleotídeos contendo CpG.
(4) Método de produção de um anticorpo, o método de imunomodulação, Método de tratamento de uma doença autoimune, Método de induzir e / ou aumentar a resposta imunitária contra um antígeno, em um mamífero, método de tratamento do câncer, método de imunização passiva, Método de apresentar um antígeno em macrófagos, e Método para a produção de uma partícula
[094] No quarto aspecto, a presente invenção proporciona um método de produção de um anticorpo, que compreende o contato da partícula fornecida no primeiro aspecto da presente invenção e / ou a molécula de ácido nucleico fornecida no segundo aspecto da presente invenção a um mamífero.
[095] O anticorpo produzido no quarto aspecto da presente invenção, pode ser humanizado usando uma técnica convencional. Dessa maneira , em uma modalidade, o método fornecido no quarto aspecto da presente invenção compreende ainda uma etapa de humanização de mamífero não humano do anticorpo produzido.
[096] A partícula fornecida no primeiro aspecto da presente invenção e / ou a molécula de ácido nucleico fornecida no segundo aspecto da presente invenção pode ser administrada diretamente no paciente, no órgão afetado ou sistemicamente, ou aplicada ex vivo a células derivadas no paciente ou uma linha celular humana que são subsequentemente administradas ao paciente, ou usada in vitro para selecionar uma subpopulação de células imunes, tais como células B e células T derivadas do doente, que são então re-administradas ao paciente.
[097] De acordo com a presente invenção, a partícula do tipo vírus pode ser aplicada para a terapia imunológica.
[098] No quinto aspecto, a presente invenção proporciona um método de imunomodulação, um método de tratamento de uma doença autoimune, um método para induzir e / ou aumentar a resposta imunitária contra um antígeno, em um mamífero, e um método de tratar o câncer que compreende a administração da composição fornecida no terceiro aspecto da presente invenção a um mamífero.
[099] No sexto aspecto, a presente invenção proporciona um método de imunização passiva, que compreende a administração do anticorpo apresentado no quarto aspecto da presente invenção a um mamífero.
[0100] No sétimo aspecto, a presente invenção proporciona um método de apresentação de um antígeno em macrófagos, que compreende contactar a partícula fornecida no primeiro aspecto da presente invenção e / ou a molécula de ácido nucleico fornecida no segundo aspecto da presente invenção a um mamífero.
[0101] No oitavo aspecto, a presente invenção proporciona um método para produzir a partícula fornecida no primeiro aspecto da presente invenção, que compreende a preparação de um gene que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica a referida partícula; a cultura de uma célula que seja transfectada com o referido gene para expressar a referida partícula; e a recuperação da referida partícula.
[0102] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona um método de produção de um anticorpo, que compreende o contato da partícula do tipo vírus de Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana, tal como descrito acima e / ou a molécula de ácido nucleico como acima descrito a um mamífero. O anticorpo pode ser produzido a partir de um anticorpo que pode ligar-se especificamente ao antígeno compreendido na partícula do tipo virus do Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana, ou o antígeno codificado por meio da molécula de ácido nucleico. O método de produção de um anticorpo proporcionado pela presente invenção pode ser um método útil para a produção de um anticorpo monoclonal ou policlonal contra um antígeno (por exemplo, TNFa, CD20 e CLTA4).
[0103] Em uma modalidade, o anticorpo obtido por meio do método de produção de um anticorpo de acordo com a presente invenção é usado para a imunização passiva. O método de imunização passiva pode compreender a administração do anticorpo obtido de um mamífero.
[0104] De acordo com a presente invenção, a composição da presente invenção é útil para a imunomodulação. Especialmente, a referida imunomodulação é para o tratamento de doença autoimune, doença neural, doença inflamatória, tal como a doença inflamatória do pulmão, incluindo a síndrome do desconforto respiratório agudo, doença pulmonar obstrutiva crônica e asma, doenças associadas a angiogênese, incluindo neoplasia.
[0105] Em uma modalidade preferida, a imunomodulação proporcionado pela presente invenção é induzir e / ou aumentar a resposta imunitária contra um antígeno, em um mamífero. Dessa maneira, em uma modalidade, a presente invenção proporciona um método para induzir e / ou aumentar a resposta imunitária contra um antígeno, em um mamífero, que compreende a administração de uma quantidade eficaz da composição como descrito acima, para o mamífero. Exemplos de mamíferos incluem, mas não estão limitados a, um ser humano.
[0106] Uma vez que muitos anticorpos são úteis para o tratamento da doença, o método e a composição que são fornecidos pela presente invenção podem ser úteis para o tratamento de doenças. Por exemplo, um anticorpo que se liga especificamente ao alvo, como listado na Tabela 1 ou um anticorpo que se liga a um epitopo no alvo, como listado na Tabela 1 é útil para o tratamento da doença, conforme listado na Tabela 1.
[0107] Em uma modalidade, pelo menos um antígeno que é usado para a presente invenção é pelo menos um alvo, conforme listado na Tabela 1. Quando pelo menos um antígeno que é usado para a presente invenção é pelo menos um alvo, conforme listado na Tabela 1, a partícula, o ácido nucleico isolado, o vetor, a composição e o método proporcionado pela presente invenção podem ser úteis para o tratamento da doença ou condição, conforme listado na Tabela 1 (vide "uso" da Tabela 1).
[0108] Por exemplo, quando, pelo menos, um antígeno usado para a presente invenção é um ou mais antígeno do câncer, a partícula, o ácido nucleico isolado, o vetor, a composição e o método proporcionado pela presente invenção podem ser úteis para o tratamento de câncer.
[0109] Exemplos de antígenos do câncer incluem, mas não estão limitados a, VEGF, receptor do fator de crescimento epidérmico, CD33, CD20 e ErbB2. Quando a composição da presente invenção, que compreende dois ou mais antígenos de câncer é administrada a um mamífero, os anticorpos dirigidos para os dois ou mais antígenos de câncer podem atacar o câncer.
[0110] Por exemplo, quando, pelo menos, um antígeno usado para a presente invenção é β amiloides, o ácido nucleico isolado, o vetor, a composição e o método proporcionado pela presente invenção podem ser úteis para o tratamento da doença de Alzheimer.
[0111] Por exemplo, quando, pelo menos, um antígeno usado para a presente invenção é o TNF alfa, o ácido nucleico isolado, o vetor, a composição e o método proporcionado pela presente invenção podem ser úteis para o tratamento de inflamação; doença autoimune, incluindo artrite reumatoide; a psoríase, a doença de Crohn; colite ulcerosa, etc .
[0112] Por exemplo, quando, pelo menos, um antígeno usado para a presente invenção é o CD20, o ácido nucleico isolado, o vetor, a composição e o método proporcionado pela presente invenção podem ser úteis para o tratamento de doença autoimune, incluindo artrite reumatoide e lúpus; câncer, incluindo o linfoma não Hodgkin, etc
[0113] Por exemplo, quando, pelo menos, um antígeno usado para a presente invenção é CTLA4, o ácido nucleico isolado, o vetor, a composição e o método proporcionado pela presente invenção podem ser úteis para o tratamento de câncer, incluindo o melanoma; e úteis para a ativação de células T, etc
[0114] Dado o sintoma de pacientes infectados com Chikungunya ou encefalite equina venezuelana, juntamente com a grande molécula incomum de Chikingunya ou encefalite equina venezuelana, este VLP pode atuar de forma eficaz e eficiente para atingir os macrófagos e sua composição, tais como citocinas e compostos imunomodulativos.
[0115] Em um aspecto, a presente invenção proporciona um método de apresentação de um antígeno em macrófagos, que compreende a administração a partícula do tipo vírus de Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana, tal como descrito acima e / ou a molécula de ácido nucleico como acima descrito a um mamífero. A partícula do tipo vírus de Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana prevista pela presente invenção é bom para direcionar macrófago. Em uma modalidade, a partícula do tipo virus de Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana proporcionada pela presente invenção é um tipo de sistema de entrega de pelo menos um antígeno, que é constituído na partícula do tipo vírus de Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana, para os macrófagos.
[0116] Em uma modalidade, a presente invenção proporciona um método para a produção da partícula do tipo vírus de Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana fornecida no primeiro aspecto da presente invenção, que compreende a preparação de um gene que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica a referida partícula; a cultura de uma célula que seja transfectada com o referido gene para expressar a referida partícula; e a recuperação da referida partícula. Nesta modalidade, a transfecção pode ser realizada usando um método convencional. As células usadas para a transfecção podem ser células 293. A Recuperação de VLP pode incluir a recolha de um meio condicionado após as células terem sido transfectadas com um plasmídeo que compreende um gene, e pode incluir ainda purificar VLPs a partir do meio condicionado por meio da ultracentrifugação. Em uma modalidade, uma etapa adicional pode ser incluída no processo para a produção da partícula do tipo vírus de Chikungunya ou da encefalite equina venezuelana fornecida no oitavo aspecto da presente invenção, em que um polinucleotídeo que codifica um antígeno é concebido de modo a que a distância física entre o resíduo Do terminal N e o resíduo Do terminal C do antígeno é de 30Á ou menos (por exemplo, de 5 Á a 15 Á, a partir de 5 Á a 12 Á, a partir de 5 Á a 11 Á, a partir de 5 Á a 10 Á, de 5 Á a 8 Á, a partir 8 Á a 15 Á, de 8 Á a 13 Á, de 8 Á a 12 Á, de 8 Á a 11 Á, a partir de 9 Á a 12 Á, a partir de 9 Á a 11 Á, a partir de 9 Á a 10 Á, ou a partir de 10 Á a 11 Á) quando a distância é determinada em um cristal do antígeno ou uma proteína que ocorre de forma natural contendo o antígeno ou proteína modificada do mesmo.
[0117] O sistema imunológico evolui a reconhecer antígenos estranhos para matar os agentes patogênicos, como vírus ou bactérias. Ele também evolui não reconhecer as proteínas para autoproteger as proteínas independentes. É o chamado sistema de tolerância imunológica. Portanto, é difícil induzir anticorpos contra o autoantígeno através de métodos tradicionais de imunização. Para ultrapassar a tolerância imunológica, foi desenvolvido um método usando uma nova vacina de subunidade de automontagem contendo um autoantígeno. A subunidade de automontagem agrega-se espontaneamente e forma uma unidade estável organizada que apresenta antígenos altamente repetitivos na superfície. Os antígenos altamente repetitivos imunógenos fortalecem as vias de sinalização em células B e resultam em estimulação da resposta imunológica do que antígeno imunógeno único, tais como os métodos tradicionais de imunização. Aplicando este mecanismo para o desenvolvimento de vacinas, não só aumenta as respostas dos anticorpos contra imunogênios alvo, mas também ultrapassa a tolerância a autoantígenos.
[0118] A presente invenção será descrita em detalhe com referência ao exemplo a seguir, que, no entanto, não se destina a limitar o âmbito da presente invenção.
EXEMPLOS (1) Preparação de partícula do tipo vírus de Chikungunya que compreende um polipeptídeo estrutural do vírus e um fragmento de TNF alfa humano
[0119] Espera-se que um monômero de polipeptídeo TNF alfa fundido com polipeptídeo estrutural do vírus Chikungunya seja difícil de ser expresso de forma estável, porque o TNF-alfa é encontrado como um trimero em condições naturais. No entanto, o uso de uma proteína de fusão, em que o monômero de polipeptídeo TNF alfa (um fragmento de monômero de polipeptídeo TNF alfa) é fundido com o polipeptídeo estrutural do vírus Chikungunya através de elementos de ligação no terminal N e no terminal C de peptídeo TNF-alfa derivado para fixar o peptídeo TNF alfa derivado para o polipeptídeo estrutural do vírus Chikungunya, o que resultou na expressão estável de uma partícula do tipo vírus de Chikungunya que compreende um polipeptídeo estrutural do vírus e peptídeo derivado de monômero TNF alfa.
[0120] Em detalhe, o polinucleotídeo que codifica TNF alfa humano original foi modificado para preparar um polinucleotídeo que codifica o peptídeo derivado de monômero TNF alfa o onde RTPSD que é a sequência Do terminal N do derivado de peptídeo TNF-alfa original que é substituído por SGG TRGGS e está ligado ao terminal C do TNF alfa (vide a SEQ ID Nos.18 a 20, tal como mostrado na Figura 1). O polinucleotídeo resultante foi inserido entre os códons que codificam para G na posição 519 e Q na posição 520 de SEQ ID No. 2 para a construção de um plasmídeo (a seguir referido como CHIKV-TNFa4) para a expressão do partícula do tipo vírus de Chikungunya, onde o Derivado de peptíde de TNF alfa modificado é inserido E2 do polipeptídeo estrutural do vírus de Chikungunya (C-E3-E2-6k-E1). Subsequentemente, as células 293F (1.5x106 células / ml) foram transfectadas com 250 ug de CHIKV-TNFa4. Após a cultura durante 4 dias, o sobrenadante foi recolhido. O sobrenadante obtido foi colocado sobre Opti Prep (Sigma D1556) seguido por ser ultracentrifugado (20000rpm, 120 min) usando um rotor SW28 da concentração de VLP (ou seja , as partícula do tipo vírus). VLP concentrado foi misturado com Opti Prep para formar gradiente de densidade, seguido por meio da ultracentrifugação (75000rpm, 4 horas) usando rotor NVT100. Após a ultracentrifugação, VLP purificada foi recolhida. A expressão de VLPs contendo TNF alfa conjugado com polipeptídeo estrutural do vírus de Chikungunya foi confirmada por Western Blot usando um anticorpo específico para CHIVK (ATCC: VR-1241AF) e um anticorpo específico para o TNF alfa (Cell Signal: # 6945).
[0121] A distância espacial entre o resíduo Do terminal N com o resíduo Do terminal C do peptídeo derivado de alfa-TNF é 8.27Á quando a distância é determinada em um cristal de TNF alfa.
(2) Preparação da partícula do tipo vírus da encefalite equina venezuelana semelhante que compreende um polipeptídeo estrutural do vírus e Peptídeo derivado de TNF alfa humano (referido como "VEEV-TNFa VLP")
[0122] De acordo com o (1), a codificação de polinucleotídeos de peptídeo derivado de TNF-alfa modificado descrita acima fundida com polinucleotídeo que codifica o polipeptídeo estrutural do vírus da encefalite equina venezuelana foi preparada (vide SEQ ID n ° 15) para construir um vetor de expressão, seguido por meio da transfecção em células 293F.
[0123] VEEV-TNFa VLP foram purificadas por meio do gradiente de densidade de centrífuga. Como se vê na pista 4, o Peptídeo derivado de TNF alfa e a expressão VEEV foi confirmada por Western blot usando o anticorpo monoclonal de TNFa (painel superior) e os anticorpos policlonais VEEV (painel inferior), respectivamente (vide a Figura 2).
[0124] A distância espacial entre o resíduo Do terminal N com o resíduo Do terminal C do peptídeo derivado de alfa-TNF é 8.27Á quando a distância é determinada em um cristal de TNF alfa.
(3) A detecção do anticorpo anti-TNF alfa humano em camundongo imunizado
[0125] Os camundongos foram divididos em três grupos (n = 5 para cada grupo). A partícula do tipo vírus de Chikungunya que compreende um polipeptídeo estrutural do vírus e polipeptídeo derivado de TNF-alfa humano preparado de acordo com (1) descrito acima (referido como "alfa-TNF CHIKV" abaixo), a partícula do tipo virus de Chikungunya, sem que compreenda o Peptídeo derivado de TNF alfa (referido como "CHIKV-VLP" abaixo), partícula do tipo vírus da encefalite equina venezuelana que compreende um polipeptídeo estrutural do vírus e Peptídeo derivado de TNF alfa humano preparado de acordo com o (2) descrito acima (referido como "TNF-VEEV alfa "abaixo), partícula do tipo vírus da encefalite equina venezuelana, sem que compreenda os polipeptídeos derivados de TNF-alfa humanos (referido como" VEEV- VLP "abaixo) ou do veículo (por exemplo, PBS) foram administrados por via intramuscular a cada grupo de camundongos. Os camundongos foram administrados no início da experiência (referido como "0 semanas" abaixo) e três semanas após a primeira administração (referida como "três semanas" abaixo), tal como descrito abaixo: Grupo 1: VEEV-TNF alfa (0 semana), CHIKV TNF-alfa (3 semanas); Grupo 2: VEEV-VLP (0 semana), CHIKV-VLP (3 semanas); e Grupo 3: PBS (0 semana), PBS (3 semanas).
[0126] 6 semanas após o início da experiência, a amostra de sangue foi obtida a partir de cada camundongo e o soro foi preparado. O anticorpo anti-TNF alfa humano produzido foi detectado por meio de ELISA, onde a proteína TNF alfa foi revestida na placa ELISA. Os resultados mostram que a partícula do tipo vírus que compreende um polipeptídeo estrutural do vírus e Peptídeo derivado de TNF alfa humano induziu aos anticorpos TNF alfa anti-humano de camundongo (vide Figura 9).
(4) Preparação de partícula do tipo vírus da encefalite equina venezuelana que compreende um polipeptídeo estrutural do vírus e um fragmento de CD20 humano
[0127] De acordo com o acima descrito (1) e (2), CD20-VEEV VLP foram purificados por meio do gradiente de densidade de centrífuga, e um fragmento de CD20 e expressão VEEV foi confirmada por Western blot. IYNCEPANPSEKNSPSTQYCYSIQ (SEQ ID N °: 21), que é um fragmento de CD20, foi usado como um antígeno fundido com polipeptídeo estrutural do vírus da encefalite equina venezuelana.
[0128] A distância espacial entre o resíduo Do terminal N com o resíduo Do terminal C do fragmento de CD20 é de 10.07Á quando a distância é determinada em um cristal de CD20.
(5) Preparação da partícula do tipo vírus da encefalite equina venezuelana que compreende um polipeptídeo estrutural vírus e um fragmento de CTLA4 humano
[0129] Um fragmento de CTLA4: CKVELMYPPPYYLGIG (SEQ ID N °: 22) foi selecionado com base na sequência do aminoácido de CTLA4 de comprimento completo, de modo que a distância física entre o resíduo Do terminal N e o resíduo do terminal C do fragmento, o qual é fundido com o polipeptídeo estrutural do vírus da encefalite equina venezuelano\a E2, é de cerca de 5.6Á quando a distância é determinada em um cristal de CLTA4.
[0130] Um polinucleotídeo que codifica para o fragmento de CTLA4 foi introduzido no vetor VLP_VEEV VLP 518 para a construção de um plasmídeo para a expressão do fragmento de CTLA4 fundido com polipeptídeo estrutural do vírus da encefalite equina venezuelana que consiste na sequência de aminoácidos deaSEQ ID No.: 8.
(6) Preparação da partícula do tipo do vírus da encefalite equina venezuelana que compreende um polipeptídeo estrutural do vírus e comprimento total CTLA4 humano
[0131] Um polinucleotídeo que codifica um CTLA4 humano de comprimento total foi introduzido no vetor VLP_VEEV VLP 518 para a construção de um plasmídeo para a expressão da proteína CTLA4 fundido com polipeptídeo estrutural do vírus da encefalite equina venezuelana.
[0132] A distância espacial entre o resíduo Do terminal N e o resíduo Do terminal C de CTLA4 humano de comprimento total é cerca de 39.6Á quando a distância é determinada em um cristal de CLTA4.
[0133] A expressão de CTLA4 fundido com polipeptídeo estrutural do vírus da encefalite equina da Venezuela, não foi capaz de ser detectada por meio de ELISA após a transfecção de células 293 com o plasmídeo preparado.
(7) Preparação de partícula do tipo vírus de Chikungunya que compreende um polipeptídeo estrutural do vírus e um fragmento de CD20 humano ou de camundongo e detecção de anticorpos anti-CD20 humano ou de camundongo
[0134] A partícula do tipo virus de Chikungunya que compreende um polipeptídeo estrutural do vírus e um fragmento de CD20 humano ou de camundongo foi preparada usando o vetor VLP_CHI 532 e um fragmento de anticorpo TNF alfa humano ou de camundongo. O fragmento de anticorpo TNF alfa humano e do camundongo é descrito abaixo: CD20 humano iyncepanpseknspstqycysiq (SEQ ID No.: 21); CD20 de camundongo ydcepsnsseknspstqycnsi (SEQ ID No.: 41).
[0135] Os ligantes (por exemplo SGG, SG, GS ou GGS) foram usados para inserir o fragmento de CD20 tal como descrito abaixo entre G na posição 519 e Q na posição 520 de SEQ ID No. 2:
[0136] CD20 Humano: SGGiyncepanpseknspstqycysiqGS (SEQ ID No.: 42)
[0137] CD20 de camundongo version2: SGydcepsnsseknspstqycnsiGGS (SEQ ID N °: 43)
[0138] CD20 de camundongo version3: SGGydcepsnsseknspstqycnsiGS (SEQ ID No.: 44).
[0139] Plasmídeos: VLP_CHI VLP 532 CD20H, VLP_CHI VLP 532 CD20-2 de camundongo e VLP_CHI VLP 532 CD20-3 de camundongo foram usados para a expressão de partícula do tipo vírus de Chikungunya que compreendem um polipeptídeo estrutural do vírus e um fragmento de CD20 humana ou de camundongo (SEQ ID N ° 45 (a sequência de aminoácidos do polipeptídeo expresso é representada por meio da SEQ ID No.: 46), SEQ ID N °: 47 (a sequência de aminoácidos do polipeptídeo expresso é representada por meio da SEQ ID No.: 48) e SEQ ID n °: 49 (a sequência de aminoácidos do polipeptídeo expresso é representada por meio da SEQ ID No.: 50).
[0140] As partículas tipo vírus foram purificadas de acordo com o método tal como descrito em (1). Os camundongos foram imunizados uma vez com 100 ug de VLP purificado; 100 ug do fragmento de CD20 humano ou de camundongo; ou PBS (controle). Dez dias após a imunização, a amostra de sangue foi obtida a partir dos camundongos e o soro foi preparado. O anticorpo anti-CD20 humano induzido por meio da imunização foi detectado por meio de ELISA revestido com o fragmento de CD20 humano e CD20 de anticamundongo induzido por meio da imunização que foi detectada por meio de ELISA revestido com o fragmento de camundongo CD20. Os resultados mostraram que os anticorpos anti-CD20 humano e anticorpos CD20 anticamundongo foram adequadamente induzidos por meio da administração da partícula do tipo vírus de Chikungunya que compreende o fragmento de CD20 humano ou de camundongo fundidos com polipeptídeo estrutural do vírus. Além disso, os resultados mostraram que o anticorpo específico para um antígeno próprio pode ser adequadamente induzido por meio da administração de partícula do tipo vírus de Chikungunya que compreende um fragmento do antígeno próprio fundido com polipeptídeo estrutural do vírus (vide a figura 10 e a Figura 11.).

Claims (10)

1. Partícula do tipo vírus da encefalite equina venezuelana ou Chikungunya, caracterizada pelo fato de que compreende um polipeptídeo estrutural do vírus e, pelo menos, um antígeno exógeno, em que o dito polipeptídeo estrutural do vírus compreende pelo menos um primeiro local de ligação e o dito pelo menos um antígeno exógeno compreende pelo menos um segundo local de ligação, e em que o polipeptídeo estrutural do vírus e o antígeno são ligados através do pelo menos um primeiro e o pelo menos um segundo local de ligação, e em que o dito polipeptídeo estrutural do vírus é um polipeptídeo do vírus da Chikungunya ou do vírus da encefalite equina venezuelana, em que pelo menos o dito pelo menos um antígeno exógeno é uma proteína não derivada do vírus da Chikungunya ou do vírus da encefalite equina venezuelana.
2. Partícula do tipo vírus, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a distância espacial entre o resíduo do terminal N e o resíduo do terminal C do antígeno exógeno é de 30 Á ou menos quando a distância é determinada em um cristal do antígeno ou em uma proteína de ocorrência natural contendo o antígeno ou proteína modificada a partir dele.
3. Partícula do tipo vírus de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o referido pelo menos um antígeno exógeno é inserido no E2 da proteína de envelope.
4. Partícula do tipo vírus de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que o o dito antígeno exógeno é um polipeptídeo de CTLA4, CD20 ou TNF-α,.
5. Partícula do tipo vírus de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o dito polipeptídeo e o dito pelo menos um antígeno exógeno são: i) um polipeptídeo derivado do vírus Chikungunya (CHIKV) e um polipeptídeo de CD20; ii) um polipeptídeo derivado do vírus Chikungunya (CHIKV) e um polipeptídeo de TNF-α; iii) um polipeptídeo derivado do vírus da encefalite equina venezuelana (VEEV) e um polipeptídeo de CTLA4; iv) um polipeptídeo derivado do vírus da encefalite equina venezuelana (VEEV) e um polipeptídeo de CD20; e v) um polipeptídeo derivado do vírus da encefalite equina venezuelana (VEEV) e um polipeptídeo de TNF-α.
6. Partícula do tipo vírus de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que o dito pelo menos um antígeno exógeno é inserido entre resíduos 519 e 520 de SEQ ID NO: 1 ou 2, entre resíduos 530 e 531 de SEQ ID NO: 1 ou 2, entre resíduos 531 e 532 de SEQ ID NO: 1 ou 2, ou entre resíduos 532 e 533 de SEQ ID NO: 1 ou 2.
7. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende: (a) a partícula do tipo vírus como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 6; e (b) um veículo farmaceuticamente aceitável.
8. Composição de vacina, caracterizada pelo fato de que compreende a partícula do tipo vírus como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 6.
9. Uso de partícula do tipo vírus como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que é na preparação de um medicamento para uso no tratamento de uma doença autoimune ou de um câncer.
10. Partícula do tipo vírus de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 e 6, caracterizada pelo fato de que o dito pelo menos um antígeno exógeno é um auto-antígeno ou um antígeno de câncer.
BR112014020052A 2012-02-16 2013-02-15 Partícula do tipo vírus, composições, método de produção de anticorpo e uso da referida partícula BR112014020052B8 (pt)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261599746P 2012-02-16 2012-02-16
US61/599,746 2012-02-16
PCT/JP2013/054422 WO2013122262A1 (en) 2012-02-16 2013-02-15 Virus like particle composition

Publications (3)

Publication Number Publication Date
BR112014020052A2 BR112014020052A2 (pt) 2017-07-04
BR112014020052B1 true BR112014020052B1 (pt) 2022-06-21
BR112014020052B8 BR112014020052B8 (pt) 2023-04-18

Family

ID=48984367

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BR112014020052A BR112014020052B8 (pt) 2012-02-16 2013-02-15 Partícula do tipo vírus, composições, método de produção de anticorpo e uso da referida partícula

Country Status (17)

Country Link
US (2) US9249191B2 (pt)
EP (1) EP2814847B1 (pt)
JP (2) JP6306518B2 (pt)
KR (1) KR102181258B1 (pt)
CN (2) CN113248626A (pt)
AP (1) AP2014007864A0 (pt)
AR (1) AR092796A1 (pt)
AU (1) AU2013221187B9 (pt)
BR (1) BR112014020052B8 (pt)
CA (1) CA2863695C (pt)
MX (1) MX357202B (pt)
NZ (2) NZ628206A (pt)
RU (1) RU2705301C2 (pt)
SG (2) SG10201606635SA (pt)
TW (1) TWI695844B (pt)
WO (1) WO2013122262A1 (pt)
ZA (1) ZA201405694B (pt)

Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX357202B (es) 2012-02-16 2018-06-28 Vlp Therapeutics Llc Composicion de particula tipo virus.
EP2712871A1 (en) * 2012-09-27 2014-04-02 Institut Pasteur Recombinant Measles virus expressing Chikungunya virus polypeptides and their applications
WO2014152211A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
CA2913832C (en) * 2013-06-03 2023-07-04 Vlp Therapeutics, Llc A virus-like particle comprising a malaria antigen and use thereof as a malaria vaccine
TWI676636B (zh) 2013-07-12 2019-11-11 Ｖｌｐ醫療股份有限公司 包含ｐｄ－１抗原或ｐｄ－１配體抗原的類病毒粒子
US20160194368A1 (en) 2013-09-03 2016-07-07 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
AU2014315287A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
US10323076B2 (en) 2013-10-03 2019-06-18 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
US10385101B2 (en) 2014-08-08 2019-08-20 Vlp Therapeutics, Llc Virus like particle comprising modified envelope protein E3
WO2016021209A1 (en) 2014-08-08 2016-02-11 Vlp Therapeutics, Llc Virus like particle comprising modified envelope protein e3
CA2960102C (en) 2014-09-11 2023-10-24 Vlp Therapeutics, Llc Flavivirus virus like particle
GB2535753A (en) * 2015-02-26 2016-08-31 The Native Antigen Company Particles comprising fusion proteins
US10166281B2 (en) * 2015-09-04 2019-01-01 Vlp Therapeutics, Llc Method and composition for modulating immune response
CN105176936B (zh) * 2015-10-23 2019-01-11 中国科学院武汉物理与数学研究所 复制耐受型的西门利克森林病毒的亚克隆及制备方法和应用
CA3009799A1 (en) * 2016-01-04 2017-07-13 Cour Pharmaceuticals Development Company Inc. Particles encapsulating fusion proteins containing linked epitopes
KR101875055B1 (ko) * 2016-10-19 2018-07-06 연세대학교 원주산학협력단 융합 단백질 및 그의 용도
AU2018266705B2 (en) 2017-05-08 2023-05-04 Gritstone Bio, Inc. Alphavirus neoantigen vectors
CA3063723A1 (en) 2017-05-18 2018-11-22 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding tethered interleukin-12 (il12) polypeptides and uses thereof
AU2019205330A1 (en) 2018-01-04 2020-08-27 Iconic Therapeutics Llc Anti-tissue factor antibodies, antibody-drug conjugates, and related methods
JP2021512966A (ja) * 2018-02-07 2021-05-20 イミュジーン、リミテッドＩｍｕｇｅｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ ワクチン組成物およびその使用
WO2019156223A1 (ja) * 2018-02-09 2019-08-15 国立大学法人大阪大学 チクングニアウイルスに対する抗体またはその抗原結合断片、およびその用途
JP6906207B2 (ja) * 2018-02-09 2021-07-21 国立大学法人大阪大学 チクングニアウイルス検出用免疫クロマト分析装置
BR122024002387A2 (pt) 2019-05-30 2024-03-12 Gritstone Bio, Inc. Vetores de adenovírus, composição farmacêutica, sequência de nucleotídeo isolada, célula isolada, vetor, kit, usos de um vetor, método para fabricar o vetor, métodos para produzir um vírus e vetor viral
CN112852852B (zh) * 2019-11-27 2023-07-25 中国医学科学院医学生物学研究所 一种ox40抗原表位重组病毒样颗粒及其制备方法和应用
EP4141110A1 (en) 2020-04-24 2023-03-01 Obshchestvo S Ogranichennoy Otvetstvennost'yu "Ingenik" Method for producing particles of bacteriophages of the genus levivirus
AU2021320896A1 (en) 2020-08-06 2023-03-23 Gritstone Bio, Inc. Multiepitope vaccine cassettes
US20220193225A1 (en) * 2020-08-31 2022-06-23 Bruce Lyday Compositions and methods for sars-2 vaccine with virus replicative particles and recombinant glycoproteins
WO2024015890A1 (en) 2022-07-13 2024-01-18 Modernatx, Inc. Norovirus mrna vaccines

Family Cites Families (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8923123D0 (en) 1989-10-13 1989-11-29 Connaught Lab A vaccine for human immunodeficiency virus
AU633698B2 (en) 1990-01-12 1993-02-04 Amgen Fremont Inc. Generation of xenogeneic antibodies
DK0614465T3 (da) 1991-11-16 1999-09-27 Smithkline Beecham Biolog Hybridprotein mellem CS fra Plasmodium og HBsAg
US5580773A (en) * 1992-06-17 1996-12-03 Korea Green Cross Corporation Chimeric immunogenic gag-V3 virus-like particles of the human immunodeficiency virus (HIV)
JPH07291996A (ja) 1994-03-01 1995-11-07 Yuu Honshiyo ヒトにおけるプログラムされた細胞死に関連したポリペプチド、それをコードするｄｎａ、そのｄｎａからなるベクター、そのベクターで形質転換された宿主細胞、そのポリペプチドの抗体、およびそのポリペプチドまたはその抗体を含有する薬学的組成物
EP0854929A1 (en) * 1995-09-27 1998-07-29 Medical Research Council Recombinant viruses incorporating a protease cleavable protein
AU3289199A (en) 1998-02-11 1999-08-30 Maxygen, Inc. Antigen library immunization
MXPA02001877A (es) 1999-08-23 2002-08-20 Dana Farber Cancer Inst Inc Pd-1, un receptor para b7-4, y usos del mismo.
US20110262389A1 (en) * 2001-02-13 2011-10-27 Mosca Joseph D Tumor-derived Biological Antigen Presenting Particles
JP4080423B2 (ja) 2001-05-30 2008-04-23 トランジェーヌ、ソシエテ、アノニム アデノウイルスタンパク質ｉｘ、ならびにキャプシドアセンブリー、転写活性および核再組織化に関与するそのドメイン
FI2206517T3 (fi) 2002-07-03 2023-10-19 Ono Pharmaceutical Co Immuunopotentioivia koostumuksia käsittäen anti-PD-L1 -vasta-aineita
WO2004043399A2 (en) 2002-11-13 2004-05-27 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods and compositions for inducing immune responses and protective immunity by priming with alphavirus replicon vaccines
CA2527636A1 (en) 2003-05-29 2005-01-06 United States Army Medical Research Institute For Infectious Diseases, A Research Laboratory Owned And Operated By The United States Government A Live attenuated viral vaccines for eastern equine encephalitis virus
AU2004265232A1 (en) * 2003-06-05 2005-02-24 Wyeth Holdings Corporation Immunogenic compositions comprising venezuelan equine encephalitis virus replicon vectors and paramyxovirus protein antigens
US20050214321A1 (en) 2003-12-01 2005-09-29 Dow Global Technologies Inc. Recombinant icosahedral virus like particle production in pseudomonads
AU2005286475A1 (en) * 2004-09-21 2006-03-30 Cytos Biotechnology Ag Virus-like particles comprising a fusion protein of the coat protein of AP205 and an antigenic polypeptide
CN101023103A (zh) * 2004-09-21 2007-08-22 赛托斯生物技术公司 包含ap205外壳蛋白和抗原性多肽的融合蛋白的病毒样颗粒
WO2006040334A1 (en) 2004-10-14 2006-04-20 Crucell Holland B.V. Malaria prime/boost vaccines
EP1849799A4 (en) 2005-02-16 2009-05-20 Tokyo Inst Tech MODIFIED VIRUS CAPSID PROTEIN AND APPLICATION THEREOF
MX349137B (es) 2005-06-08 2017-07-13 Dana-Farber Cancer Inst Metodos y composiciones para el tratamiento de infecciones persistentes y cancer por inhibicion de la ruta de muerte celular programada (pd-1).
GB0513421D0 (en) 2005-06-30 2005-08-03 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccines
CU23586A1 (es) 2005-11-22 2010-10-30 Ct Ingenieria Genetica Biotech Métodos y proteínas para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de los cuatro serotipos del virus de dengue y otros flavivirus
US8216996B2 (en) 2006-03-03 2012-07-10 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Multimer of extracellular domain of cell surface functional molecule
US20100120092A1 (en) 2006-08-30 2010-05-13 Hepgenics Pty Ltd. Recombinant proteins and virus like particles comprising l and s polypeptides of avian hepadnaviridae and methods, nucleic acid constructs, vectors and host cells for producing same
EP2225374B1 (en) 2007-11-26 2013-08-14 Novartis AG Methods of generating alphavirus particles
MY161495A (en) 2008-11-26 2017-04-14 Government Of The Us Secretary Dept Of Health And Human Services Virus like particle compositions and methods of use
CN102695524B (zh) 2009-09-18 2014-07-09 弗劳恩霍费尔美国股份有限公司 包含与植物病毒衣壳蛋白融合的靶蛋白的病毒样颗粒
WO2012006180A1 (en) 2010-06-29 2012-01-12 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Hiv immunogens
WO2012023995A1 (en) 2010-08-18 2012-02-23 Takayuki Shiratsuchi Modification of recombinant adenovirus capsid protein with immunogenic plasmodium circumsporozoite protein epitopes
WO2012106356A2 (en) 2011-01-31 2012-08-09 GOVERNMENT OF THE USA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH & HUMAN SERVICES Virus-like particles and methods of use
DK3138581T3 (en) 2011-03-17 2019-04-15 Univ Birmingham REDIRECTED IMMUNTERY
AU2012269907B2 (en) 2011-06-17 2017-05-18 Bharat Biotech International Limited Vaccine composition comprising an inactivated chikungunya virus strain
CN102321639B (zh) 2011-09-08 2013-06-26 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 基孔肯雅病毒病毒样颗粒的制备方法和应用
WO2013063248A1 (en) 2011-10-25 2013-05-02 Florida Gulf Coast University Vaccines and methods for creating a vaccine for inducing immunity to all dengue virus serotypes
MX357202B (es) 2012-02-16 2018-06-28 Vlp Therapeutics Llc Composicion de particula tipo virus.
WO2013151764A1 (en) 2012-04-02 2013-10-10 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods and compositions for dengue virus epitopes
EP3388835B1 (en) 2012-05-16 2020-04-01 Immune Design Corp. Vaccines for hsv-2
CA2913832C (en) 2013-06-03 2023-07-04 Vlp Therapeutics, Llc A virus-like particle comprising a malaria antigen and use thereof as a malaria vaccine
TWI676636B (zh) 2013-07-12 2019-11-11 Ｖｌｐ醫療股份有限公司 包含ｐｄ－１抗原或ｐｄ－１配體抗原的類病毒粒子
WO2015139784A1 (en) 2014-03-18 2015-09-24 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Distinguishing flavivirus infection using a recombinant mutant envelope protein
WO2016021209A1 (en) 2014-08-08 2016-02-11 Vlp Therapeutics, Llc Virus like particle comprising modified envelope protein e3
US10385101B2 (en) 2014-08-08 2019-08-20 Vlp Therapeutics, Llc Virus like particle comprising modified envelope protein E3
US9363353B1 (en) 2014-12-04 2016-06-07 Hon Man Ashley Chik Mobile phone docks with multiple circulating phone connectors
IL253187B (en) 2014-12-31 2022-07-01 Us Health New vaccines based on multivalent nanoparticles
JPWO2016199936A1 (ja) 2015-06-12 2018-04-05 国立大学法人三重大学 ヒトパラインフルエンザ２型ウイルスベクター及びワクチン
US10799575B2 (en) 2015-06-25 2020-10-13 Technovax, Inc. Flavivirus and alphavirus virus-like particles (VLPS)
KR20220144415A (ko) 2015-07-16 2022-10-26 브하라트 바이오테크 인터내셔날 리미티드 백신 조성물
ES2937963T3 (es) 2015-07-21 2023-04-03 Modernatx Inc Vacunas de enfermedad infecciosa
CN106085974B (zh) 2016-06-07 2019-08-09 博奥生物集团有限公司 一种寨卡病毒假病毒颗粒及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
TWI695844B (zh) 2020-06-11
JP6306518B2 (ja) 2018-04-04
AU2013221187A1 (en) 2014-08-28
AP2014007864A0 (en) 2014-08-31
AU2013221187B9 (en) 2018-01-04
AR092796A1 (es) 2015-05-06
US20160090403A1 (en) 2016-03-31
CN113248626A (zh) 2021-08-13
ZA201405694B (en) 2020-05-27
CN104220462A (zh) 2014-12-17
EP2814847B1 (en) 2018-04-18
SG10201606635SA (en) 2016-10-28
JP2015508648A (ja) 2015-03-23
JP2018064556A (ja) 2018-04-26
CA2863695C (en) 2023-01-17
BR112014020052B8 (pt) 2023-04-18
BR112014020052A2 (pt) 2017-07-04
RU2014133527A (ru) 2016-03-10
NZ717682A (en) 2017-10-27
US9249191B2 (en) 2016-02-02
US20130251744A1 (en) 2013-09-26
TW201345926A (zh) 2013-11-16
KR102181258B1 (ko) 2020-11-20
SG11201404711WA (en) 2014-09-26
RU2705301C2 (ru) 2019-11-06
AU2013221187B2 (en) 2017-11-30
WO2013122262A1 (en) 2013-08-22
EP2814847A1 (en) 2014-12-24
MX357202B (es) 2018-06-28
NZ628206A (en) 2016-03-31
EP2814847A4 (en) 2015-10-14
CA2863695A1 (en) 2013-08-22
US11345726B2 (en) 2022-05-31
MX2014009916A (es) 2015-06-02
KR20140134289A (ko) 2014-11-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BR112014020052B1 (pt) Partícula do tipo vírus, composições, método de produção de anticorpo e uso da referida partícula
TWI720946B (zh) 包含改質套膜蛋白質ｅ３之類病毒粒子
JP6557208B2 (ja) Ｐｄ−１抗原またはｐｄ−１リガンド抗原を含むウイルス様粒子
AU2014275772B2 (en) Malaria vaccine
US20160200775A1 (en) Virus like particle comprising modified envelope protein e3
OA17353A (en) Virus like particle composition.

Legal Events

Date Code Title Description
B07D Technical examination (opinion) related to article 229 of industrial property law [chapter 7.4 patent gazette]
B06F Objections, documents and/or translations needed after an examination request according [chapter 6.6 patent gazette]
B07E Notification of approval relating to section 229 industrial property law [chapter 7.5 patent gazette]

Free format text: NOTIFICACAO DE ANUENCIA RELACIONADA COM O ART 229 DA LPI

B06U Preliminary requirement: requests with searches performed by other patent offices: procedure suspended [chapter 6.21 patent gazette]
B09A Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette]
B16A Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette]

Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 15/02/2013, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS

B25D Requested change of name of applicant approved

Owner name: VLP THERAPEUTICS, INC. (US)