AT356824B - Verfahren zur herstellung von jodierbaren bindungsanalogstoffen fuer radioimmunologische versuche - Google Patents

Description

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 in der X für eine nucleofuge Gruppe steht, mit einem Alkylolamid der allgemeinen Formel 
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 in der die Ri die obigen Bedeutungen haben, umsetzt. 



   Als Hydroxybenzylrest wird vorzugsweise der p-Hydroxybenzylrest, als Dihydroxybenzylrest vorzugsweise der 3, 4-Dihydroxybenzylrest verwendet. Geeignete Monohydroxyalkylreste mit 1 oder 2 bzw. Dihydroxyalkylreste mit 2 bis 4 C-Atomen sind   z. B.   der Methylol-, Äthylol-, 1, 3-Dihydroxypropyl-,   1, 4-Dihydroxybutyl-   sowie der   Dihydroxy-tert. butyl-Rest.   



   Besonders bevorzugte Alkylolamide sind Tyrosyläthanolamid-hydrochlorid und Histidyläthanolamid-hydrochlorid. 



   Die erfindungsgemäss erhältlichen Stoffe sind hydrophil, in Wasser und physiologischen Flüssigkeiten leicht löslich und auf Grund ihrer reaktiven Aminogruppe leicht zu jodierbaren TracerSubstanzen konjugierbar, insbesondere mit Säurederivaten unter Bildung einer Amidbindung kuppelbar, und somit zur Herstellung von Reagentien für immunologische Tests in wässeriger oder physiologischer Lösung besonders geeignet. Besonders vorteilhaft ist die Verwendung der erfindungsgemäss verwendbaren Verbindungen zur Herstellung von Reagentien zur Untersuchung von Herzglykosiden (Digitalisglykosiden). Zu diesem Zweck werden die erfindungsgemäss verwendbaren Alkylolamide mit Digoxin-, Digoxingenin-, Digitoxin- oder Digitoxigenin-Derivaten,   z. B.   mit den Digoxin- oder Digitoxin-Dicarbonsäureestern gemäss der DE-OS 2537129 umgesetzt.

   Bei der Verwendung der erfindungsgemäss erhältlichen Stoffe zur Herstellung solcher Reagentien treten keine unerwünschten Nebenreaktionen,   z. B.   mit dem Probenserum beim Radioimmunotest, auf, unter anderem deshalb, weil die erfindungsgemäss erhältlichen Alkylolamide keine freie Carboxylgruppe im Molekül enthalten. 



   Bevorzugter Weise werden solche Alkylolamine eingesetzt, bei denen als Schutzgruppe die Trifluoracetyl- oder die Carbobenzoxygruppe und als reaktive, aminolytisch abspaltbare Verbindung ein N-Hydroxysuccinimid verwendet werden. 



   Die Erfindung wird an Hand der Beispiele weiter erläutert. 



   A) Herstellung der erfindungsgemäss verwendeten Alkylolamide :
Beispiel   l : Tyrosyläthanolamid-hydrochlorid :   a) Nach der Originalliteraturvorschrift von F. Weygand und   R. Geiger, Chem. Ber. 89, S. 647   (1956) wurde N-Trifluoracetyl-tyrosin durch Umsetzung von Tyrosin mit Trifluoressigsäureanhydrid in einem Gemisch aus Trifluoressigsäure und Diäthyläther hergestellt. b) Zu einer Lösung von 10 g (36 mMol) Trifluoracetyl-tyrosin und 4, 6 g (40   mMol)   N-Hydroxysuccinimid in absol. Tetrahydrofuran wurde unter Rühren und Eiskühlung eine Lösung von 8, 5 g   (41, 2 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid   in absol. Tetrahydrofuran getropft.

   Anschliessend wurde 12 h lang bei Raumtemperatur gerührt, danach von ausgefallenem Dicyclohexylharnstoff abfiltriert, das Filtrat eingeengt und in Essigester aufgenommen. Die Essigesterlösung wurde mit Wasser, Bicarbonatlösung und wieder mit Wasser ausgeschüttelt, über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. 



  Der ausgefallene N-Trifluoracetyl-tyrosyl-hydroxysuccinimidester wurde aus Petroläther umkristallisiert. 



     Ausbeute : 11, 3   g (84%   d. Th.) ;   Fp. 145 bis   147 C.   



   Analyse   : ClsH"O. N. F3 (374, 27)   
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<tb> 
<tb> C <SEP> H <SEP> N
<tb> berechnet <SEP> : <SEP> 48, <SEP> 14 <SEP> 3, <SEP> 50 <SEP> 7, <SEP> 48 <SEP> 
<tb> gefunden <SEP> : <SEP> 48, <SEP> 68 <SEP> 3, <SEP> 23 <SEP> 7, <SEP> 28 <SEP> 
<tb> 
 c) 7, 6 g   (20, 3 mMol) N-Trifluoracetyl-tyrosyl-hydroxysuccinimidester   wurden in 60 ml Dioxan gelöst und mit einer Lösung von 2, 1 g   (34,4 Mol)   Äthanolamin in Wasser versetzt.

   Die Lösung 
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<tb> 
<tb> iger <SEP> KzCO3-LösungC <SEP> H <SEP> N
<tb> berechnet <SEP> : <SEP> 48, <SEP> 75 <SEP> 4, <SEP> 72 <SEP> 8, <SEP> 74 <SEP> 
<tb> gefunden <SEP> : <SEP> 47, <SEP> 91 <SEP> 4, <SEP> 07 <SEP> 8, <SEP> 40 <SEP> 
<tb> 
 

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 d) 4, 3 g   (13,4 Mol)   N-Trifluoracetyl-tyrosyl-äthanolamid wurden in 30 ml absol. Äthanol gelöst und mit 2 g (53 mMol) Natriumborhydrid versetzt und 1 h lang gerührt. Dann wurde mit 30 ml Aceton versetzt und 30 min weitergerührt. Die Reaktionslösung wurde dann eingeengt, in Wasser aufgenommen und mit wenig Essigester ausgeschüttelt. Die wässerige Lösung wurde zur Trockne eingeengt und in einem Gemisch aus Äthanol und Chloroform aufgenommen, abfiltriert und eingeengt. Der Rückstand wurde in Äthanol aufgenommen.

   In diese Lösung wurde dann Chlorwasserstoff eingeleitet, wobei das Hydrochlorid des Tyrosyläthanolamids ausfiel. 
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 a) Nach der Originalliteraturvorschrift von Patchornik,   A., Berger, A.   und Kathalski,   E.,     J. Am. Chem. Soo. 79,   6416 (1957) wurde   l. N-Dioarbobenzoxy-L-histidin   durch Umsetzung von L-Histidin mit Carbobenzoxychlorid hergestellt. b)   l. N-Dicarbobenzoxy-L-histidin-hydroxysuocinimidester   wurde analog Beispiel 1 b) dargestellt. 



   Ansatz : 
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<tb> 
<tb> I, <SEP> N-Dicarbobenzoxy-L-histidin <SEP> 27, <SEP> 5 <SEP> mMol <SEP> = <SEP> 12, <SEP> 5 <SEP> g
<tb> N-Hydroxysuccinimid <SEP> 30,0 <SEP> Mol <SEP> = <SEP> 3, <SEP> 5 <SEP> g
<tb> Dicyclohexylcarbodiimid <SEP> 30, <SEP> 0 <SEP> mMol <SEP> = <SEP> 6, <SEP> 2 <SEP> g
<tb> 
 
 EMI3.3 
 
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<tb> 
<tb> : <SEP> 10, <SEP> 2C <SEP> H <SEP> N
<tb> berechnet <SEP> : <SEP> 60, <SEP> 0 <SEP> 4, <SEP> 61 <SEP> 10, <SEP> 76 <SEP> 
<tb> gefunden <SEP> : <SEP> 60, <SEP> 44 <SEP> 4, <SEP> 55 <SEP> 10, <SEP> 54
<tb> 
 c) 9, 8 g   (18, 7 mMol) I, N-Dicarbobenzoxy-L-histidin-hydroxysuccinimidester   wurden in 80 ml 
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 und zweimal mit Chloroform ausgeschüttelt. Die wässerige Lösung wurde eingeengt und der ölige Rückstand getrocknet. 



   Das so erhaltene Öl wurde unter Rühren mit 20 ml 40%iger Bromwasserstoffsäure in absol. Eisessig versetzt und 1/2 h bei Raumtemperatur gerührt. Die Lösung wurde mit 100 ml absol. Äther versetzt, wobei sich ein Öl abschied, das in wenig Wasser gelöst wurde und mit   5%-K. C03   auf PH = 8,0 eingestellt wurde. 



   Die Lösung wurde eingeengt, der Rückstand in absol. Methanol aufgenommen, von ausgeschiedenem Salz abfiltriert, und die Lösung eingeengt. 



   Der Rückstand wurde an der Ölpumpe getrocknet und schliesslich in absol. Äthanol aufgenommen. In die Lösung wurde dann Chlorwasserstoff eingeleitet, wobei das Hydrochlorid des Histidyl- äthanolamids ausfiel. 



     Ausbeute : 2, 9   g (51%   d. Th.) ;   Fp. 290 bis   300 C   (Zers.). 



   B) Anwendungsbeispiel :
Verwendung der Verbindung gemäss Beispiel 1 zur Herstellung eines radiojodierbaren Reagenzes zur Untersuchung von Herzglykosiden : 
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 DE-OS 2537129 wurden in 20 ml absol. Äthanol gelöst und mit 60 mg des gemäss Beispiel 1 hergestellten   Tyrosyl-äthanolamid-hydrochlorids   in 5 ml Wasser versetzt. Die Lösung wurde sodann mit   5%-K, C03-Lösung   auf PH = 8, 0 eingestellt und 3 Tage bei Raumtemperatur gerührt. Danach wurde eingeengt, in absol. Äthanol aufgenommen, abfiltriert und erneut eingeengt. Aus dem zurückbleibenden Öl fiel das Produkt bei Zugabe von Wasser aus, das abfiltriert und getrocknet wurde. Zur 

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 Reinigung wurde das Produkt in einer Mischung aus Äthanol und Essigester aufgenommen und über eine Kieselgelsäule chromatographiert.

   Die Verunreinigung wurde mit Essigester, das Reinprodukt mit Äthanol eluiert. 



   Ausbeute : 135 mg (63%   d.     Th.).   



   Analyse   : C s7H 8sM. 019 (1101)   
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<tb> 
<tb> C <SEP> H <SEP> N
<tb> berechnet <SEP> : <SEP> 62.1 <SEP> 7.7 <SEP> 2,5
<tb> gefunden <SEP> : <SEP> 60,84 <SEP> 7,78 <SEP> 2.21
<tb> 
 
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 Bestimmung von Digoxin in wässeriger oder physiologischer Lösung dar.

Claims (1)

1. PATENTANSPRUCH : Verfahren zur Herstellung von jodierbaren Bindungsanalogstoffen für radioimmunologische Versuche (RIAs) der allgemeinen Formel EMI4.3 in der x = 2 bis 5, R, = 4-Hydroxybenzyl-, 3, 4-Dihydroxybenzyl-, Imidazol-4-yl-methyl-, R = Monohydroxyalkyl mit 1 oder 2 C-Atomen, Dihydroxyalkyl mit 2 bis 4 C-Atomen, R, = Digoxin, Digoxigenin, Digitoxin, Digitoxigenin bedeuten, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung der allgemeinen Formel EMI4.4 in der X für eine nucleofuge Gruppe steht, mit einem Alkylolamid der allgemeinen Formel EMI4.5 in der die Ri die obigen Bedeutungen haben, umsetzt.