AR022630A1 - Proteina de fusion recombinante con glucosa-deshidrogenasa; dna que condifica para esta proteina de fusion; un vector de expresion que contiene este dna;la celula huesped que contiene este vector de expresion; el empleo de la glucosa deshidrogenasa para detectar una proteina/un polipeptido recombina - Google Patents

Proteina de fusion recombinante con glucosa-deshidrogenasa; dna que condifica para esta proteina de fusion; un vector de expresion que contiene este dna;la celula huesped que contiene este vector de expresion; el empleo de la glucosa deshidrogenasa para detectar una proteina/un polipeptido recombina

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Abstract

Una proteína de fusion recombinante compuesta por al menos una primera y una segunda secuencia de aminoácidos, en donde la primera secuencia presenta laactividad biologica de la glucosa deshidrogenasa. En particular, la segunda secuencia es una proteína/un polipéptido X recombinante cualquiera o presentapartes de la/el misma/o. La proteína de fusion también puede presentar adicionalmente al menos una secuencia de reconocimiento diferente (secuencia-Tag) quesea adecuada para la deteccion. El DNAque codifica para una proteína de fusion como la descripta más arriba, el vector de expresion que contiene dicho DNA yla célula huésped para la expresion de proteínas/polipéptidos recombinantes que contiene dicho vector de expresion. El empleo de laglucosa deshidrogenasa parala determinacion simple y eficiente de una proteína/polipéptido recombinante cualquiera en geles de SDS-PAGE y para la optimacion rápida de sistemas deexpresion que pueden expresar la proteína/el polipéptido mencionado. Elempleo de un vector de expresion como el mencionado más arriba para optimar laexpresion de una proteína/polipéptido X recombinante en un procedimiento recombinante de preparacion. El empleo de una célula huésped como la mencionada másarriba para optimar la expresion de una proteína/un polipéptido X recombinante en un procedimiento recombinante de preparacion. Un procedimiento paradeterminar rápidamente una proteína/un polipéptido recombinante cualquiera por medio de la electroforesis en gel, enel cual se prepara una proteína de fusioncomo la mencionada más arriba, se la separa por medio de la electroforesis en gel y se visualiza la proteína/el polipéptido recombinante a ser identificada/oen el gel a través de la actividad enzimática de laglucosa deshidrogenasa. En este caso la GlcDH, o la secuencia que exhibe la actividad biologica de la GlcDHadopta el papel de una proteína marcadora o de deteccion. Esta enzima tiene la particularidad de poseer una estabilidad excepcional frente a los agentesdesnaturalizantes tales como el SDS. La GlcDH misma no exhibe disminucion alguna en su actividad enzimática cuando actua como proteína marcadora o de deteccion
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