JPS60141299A - 脱水素酵素の活性度測定法 - Google Patents
脱水素酵素の活性度測定法Info
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- JPS60141299A JPS60141299A JP58251883A JP25188383A JPS60141299A JP S60141299 A JPS60141299 A JP S60141299A JP 58251883 A JP58251883 A JP 58251883A JP 25188383 A JP25188383 A JP 25188383A JP S60141299 A JPS60141299 A JP S60141299A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明け、脱水素酵素の活性度測定法に関する。
更に詳しくは、Ｎ Ａ、 Ｄ にコチンアミトアデニン
ジヌクレオチド）又はＮＡ、ＤＰにコチンアミドアデニ
／ジヌクレオチドリン酸）を補酵素とし、テトラゾリウ
ム塩を発色剤とする脱水素酵素の活性度測定法に於て、
酵素反応停止Ｆ剤として、デシル硫酸又はその塩、ラウ
リル硫酸又はその塩、及びラウリルベンゼンスルホン酸
又はその塩から成る群より選ばれた１種又は２種以上の
化合物を用いる、脱水素酵素の活性度測定法に関する。
ジヌクレオチド）又はＮＡ、ＤＰにコチンアミドアデニ
／ジヌクレオチドリン酸）を補酵素とし、テトラゾリウ
ム塩を発色剤とする脱水素酵素の活性度測定法に於て、
酵素反応停止Ｆ剤として、デシル硫酸又はその塩、ラウ
リル硫酸又はその塩、及びラウリルベンゼンスルホン酸
又はその塩から成る群より選ばれた１種又は２種以上の
化合物を用いる、脱水素酵素の活性度測定法に関する。
ＮＡＤ又はＮＡＤＰ−ｉ水素受容体とする脱水素酵素、
例えば乳酸脱水素酵素（以下、Ｌ Ｄ Ｉ−Ｔと略称ス
ル。）、グルコース−６−リン酸脱水素酵素、グリセリ
ン−３−リン酸脱水素酵素、α−ヒドロキシ酪酸脱水素
酵素（以下、α−ＨＢ Ｄと略称する。）、３α−ヒド
ロキシステロイド脱水素酵素（以下、３α−ｒ−Ｉ Ｓ
Ｄと略称する。）々と、の活性を測定するには、夫々
の基質と脱水素酵素との酵素反応により生成するＮＡ、
ＤＩ−Ｔ（還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチ
ド）又はＮ Ａ Ｄ Ｐ Ｈ（還元型ニコチンアミドア
デニンジヌクレオチドリン酸）の３４０ｎｍに於ける吸
光度の増加を測定するＵＶ法や、生成したＮ Ａ Ｄ
Ｔ−Ｔ又はＮＡＤＰｌｌにより、電子伝達体又はジアホ
ラーゼの助けをかりて、テトラゾリウム塩を還元し、生
成するホルマザン色素の色を比色する可視比色法等が用
いられている。
例えば乳酸脱水素酵素（以下、Ｌ Ｄ Ｉ−Ｔと略称ス
ル。）、グルコース−６−リン酸脱水素酵素、グリセリ
ン−３−リン酸脱水素酵素、α−ヒドロキシ酪酸脱水素
酵素（以下、α−ＨＢ Ｄと略称する。）、３α−ヒド
ロキシステロイド脱水素酵素（以下、３α−ｒ−Ｉ Ｓ
Ｄと略称する。）々と、の活性を測定するには、夫々
の基質と脱水素酵素との酵素反応により生成するＮＡ、
ＤＩ−Ｔ（還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチ
ド）又はＮ Ａ Ｄ Ｐ Ｈ（還元型ニコチンアミドア
デニンジヌクレオチドリン酸）の３４０ｎｍに於ける吸
光度の増加を測定するＵＶ法や、生成したＮ Ａ Ｄ
Ｔ−Ｔ又はＮＡＤＰｌｌにより、電子伝達体又はジアホ
ラーゼの助けをかりて、テトラゾリウム塩を還元し、生
成するホルマザン色素の色を比色する可視比色法等が用
いられている。
この可視土色法の原理？ Ｌ Ｄ Ｉ−１の活性度の測
定の場合を例にとって示せば、 であり、これらの反応は定量的且つ特異的に進行するか
ら、生成するホルマザ／の色濃度を定量することによっ
て、Ｔ、 Ｄ Ｉ−１の活性度を測定することができる
。
定の場合を例にとって示せば、 であり、これらの反応は定量的且つ特異的に進行するか
ら、生成するホルマザ／の色濃度を定量することによっ
て、Ｔ、 Ｄ Ｉ−１の活性度を測定することができる
。
ＵＶ法は、通常、一定時間内の３４０ ｎ ｍの吸収の
増加率を測定する方法、いわゆるレート法として甲いら
れており、また〈可視比色法は、一定時間酵素反応を行
なった後、酵素反応停止剤を加えて反応を停止させ、そ
の間に生成したＮ Ａ Ｄ Ｈに相当する色素量を比色
定量する方法が用いられている。
増加率を測定する方法、いわゆるレート法として甲いら
れており、また〈可視比色法は、一定時間酵素反応を行
なった後、酵素反応停止剤を加えて反応を停止させ、そ
の間に生成したＮ Ａ Ｄ Ｈに相当する色素量を比色
定量する方法が用いられている。
本発明は後者の方法に係るものである。
現在用いられている反応停止］−法としては、液性を強
酸性として酵素反応を停止させる方法が最も一般的であ
る。
酸性として酵素反応を停止させる方法が最も一般的であ
る。
酸性化剤としては、通常無機酸、例えば塩酸などが用い
られている。しか１−１この方法では生成したホルマザ
ン（又はジホルマザン）色素が光により褪色し易く、溶
角イ度が低いため、ホルマザンの種順によっては析出し
て濁りや沈澱を生ずることがあり、試験管やキュベツト
に染着１７て誤差の原因になったり、更に検体として乳
ビ血清を用いた場合には、濁すのため検体盲検が犬とな
り、検体盲検をとらない日常検査では誤差の原因となる
ことがあるなど種々の欠点があり、これらの改良が要望
されていた。
られている。しか１−１この方法では生成したホルマザ
ン（又はジホルマザン）色素が光により褪色し易く、溶
角イ度が低いため、ホルマザンの種順によっては析出し
て濁りや沈澱を生ずることがあり、試験管やキュベツト
に染着１７て誤差の原因になったり、更に検体として乳
ビ血清を用いた場合には、濁すのため検体盲検が犬とな
り、検体盲検をとらない日常検査では誤差の原因となる
ことがあるなど種々の欠点があり、これらの改良が要望
されていた。
本発明者らは、先に、この染着防市の技術に関して、テ
トラゾリウム塩溶液にゼラチンを共存させることにより
、テトラゾリウム塩類が還元されて生成する色素である
ホルマザン化合物による染色を防止することができるこ
とを見出し、特許出願している。（特願昭５８−０８９
７１４号）しかしながら、上記発明に於ても、反応停止
剤としては、塩酸などの酸性停止液を用いているので、
ゼラチンが徐々に加水分解してくるため、長期保存の点
からはけっして満足のいくものではなかった。
トラゾリウム塩溶液にゼラチンを共存させることにより
、テトラゾリウム塩類が還元されて生成する色素である
ホルマザン化合物による染色を防止することができるこ
とを見出し、特許出願している。（特願昭５８−０８９
７１４号）しかしながら、上記発明に於ても、反応停止
剤としては、塩酸などの酸性停止液を用いているので、
ゼラチンが徐々に加水分解してくるため、長期保存の点
からはけっして満足のいくものではなかった。
本発明者らは、これら従来法の欠点を更に改良すべく鋭
意研究の結果、反応停止剤として塩酸等の無機酸の代り
に、テンル竹酸又はその塩、ラウリル硫酸又はその塩、
及びラウリルベンゼンスルホン酸又はそのｐｇから成る
群より選ばれた１種又は２種以」−の化合物を用いるこ
とにより、これらの欠点がＩＩＩ！ｉ！消できることを
見出し、本発明を完成するに至った。
意研究の結果、反応停止剤として塩酸等の無機酸の代り
に、テンル竹酸又はその塩、ラウリル硫酸又はその塩、
及びラウリルベンゼンスルホン酸又はそのｐｇから成る
群より選ばれた１種又は２種以」−の化合物を用いるこ
とにより、これらの欠点がＩＩＩ！ｉ！消できることを
見出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は、ＮＡＴ）又はＮＡＴ）Ｐ、テトラゾリ
ウム塩の共存下で、基質と脱水素酵素とヲ一定時間反応
させた後、デシル硫酸又ｄ、その塩、ラウリル硫酸又は
その塩、及びラウリルベンゼンスルホン酸又はその塩か
ら成る群より選ばれた１種又は２種以上の化合物を含む
反応停止液を加えて、酵素反応を停止させることを特徴
とする、脱水素酵素活性度測定法である。
ウム塩の共存下で、基質と脱水素酵素とヲ一定時間反応
させた後、デシル硫酸又ｄ、その塩、ラウリル硫酸又は
その塩、及びラウリルベンゼンスルホン酸又はその塩か
ら成る群より選ばれた１種又は２種以上の化合物を含む
反応停止液を加えて、酵素反応を停止させることを特徴
とする、脱水素酵素活性度測定法である。
本発明の方法によれば、脱水素酵素反応の至適ｐ １１
範囲内でも酵素反応は完全に停止ヒし、生成してくるホ
ルマザン又はジホルマザン色素の析出防止、染着防止に
効果が認められるのみならず、驚くべきことに、呈色安
定性の向−ヒ、呈色増強などの点にも大きな効果が認め
られる。
範囲内でも酵素反応は完全に停止ヒし、生成してくるホ
ルマザン又はジホルマザン色素の析出防止、染着防止に
効果が認められるのみならず、驚くべきことに、呈色安
定性の向−ヒ、呈色増強などの点にも大きな効果が認め
られる。
デシル硫酸又はその塩、ラウリル硫酸又はその塩、及び
ラウリルベンゼンスルホ／酸又ｆｄ ７Ｃ（７） ＋＝
の最終呈色液中の濃度は、１．５ ｍｍｏｌｅ／ｌ以」
二で゛あれば充分その機能を発揮するが、通常３〜１０
０ｍ ｍｏｌｅ ／ ｌ が好ましく用いられる。
ラウリルベンゼンスルホ／酸又ｆｄ ７Ｃ（７） ＋＝
の最終呈色液中の濃度は、１．５ ｍｍｏｌｅ／ｌ以」
二で゛あれば充分その機能を発揮するが、通常３〜１０
０ｍ ｍｏｌｅ ／ ｌ が好ましく用いられる。
また、本発明の方法に於ては、反応停止液が中性伺近の
液性で使用できるため、反応停市液にもゼラチンを添加
できるので尚一層の利点となる。
液性で使用できるため、反応停市液にもゼラチンを添加
できるので尚一層の利点となる。
即ち、従来の酸性停止液を用いた場合（ｒ！、ゼラチン
が徐々に加水分解してくるため、長期の保存ができなか
ったが、本発明に係る停止液、即ち、デシル硫酸又はそ
の塩、ラウリル硫酸又はその塩、及びラウリルベンゼン
スルホン酸又はその塩から成る群より選ばれた１種又は
２種以上を用いた場合はゼラチンの分解は無く、従って
、本発明の方法に於て、酵素反応液にゼラチンを加えた
場合には、更にホルマザン又はジホルマザン色素の析出
防止効果及び染着防止効果を増すことができるので、優
れた実施傅様となる。尚、この場合の反応停止液の液性
はｐ Ｈ６〜９が好ましい。
が徐々に加水分解してくるため、長期の保存ができなか
ったが、本発明に係る停止液、即ち、デシル硫酸又はそ
の塩、ラウリル硫酸又はその塩、及びラウリルベンゼン
スルホン酸又はその塩から成る群より選ばれた１種又は
２種以上を用いた場合はゼラチンの分解は無く、従って
、本発明の方法に於て、酵素反応液にゼラチンを加えた
場合には、更にホルマザン又はジホルマザン色素の析出
防止効果及び染着防止効果を増すことができるので、優
れた実施傅様となる。尚、この場合の反応停止液の液性
はｐ Ｈ６〜９が好ましい。
本発明に於て、特に効果的なゼラチンは、その平均分子
量が、２ｏ、ｏｏｏ〜１５０．ＯＣ１ｏであるようなゼ
ラチンであるが、特にこれに限定されるものではなく、
いずれのものでもよい。
量が、２ｏ、ｏｏｏ〜１５０．ＯＣ１ｏであるようなゼ
ラチンであるが、特にこれに限定されるものではなく、
いずれのものでもよい。
ゼラチンは通常溶液中に存在させる。溶液中で効果的な
ゼラチン濃度は、通常、０１〜０７重量／容量係、好ま
しくは０．２〜０．５重量／容量係である。
ゼラチン濃度は、通常、０１〜０７重量／容量係、好ま
しくは０．２〜０．５重量／容量係である。
本発明は、ＮＡＤ又はＮＡＤＰを補酵素として、基質に
脱水素酵素を作用させて生成するＮＡＤＨ又はＮ Ａ
Ｄ Ｐ Ｈにより、電子伝達体の存在下で、テトラゾリ
ウム塩類が還元されてホルマザン化合物が生成する反応
を利用する種々の定量方法に適用することができる。
脱水素酵素を作用させて生成するＮＡＤＨ又はＮ Ａ
Ｄ Ｐ Ｈにより、電子伝達体の存在下で、テトラゾリ
ウム塩類が還元されてホルマザン化合物が生成する反応
を利用する種々の定量方法に適用することができる。
典型的−例としては、基質又は脱水素酵素が体液成分で
あるような、被検試料中の基質又はＩＩＱ水素酵素を定
量する方法が挙げられる。
あるような、被検試料中の基質又はＩＩＱ水素酵素を定
量する方法が挙げられる。
この基質の一例としては、乳酸、α−ヒドロキシ酪酸、
コレステロール、胆汁酸、グリセリン、グリセリン−３
−リン酸、グルコース−６−リン酸、アルデヒド又はア
セトアルデヒド等が挙げられ、脱水素酵素の一例として
は、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、α−ヒドロキシ酪酸脱
水素酵素（α−ＨＢＤ）、コレスラロール脱水素酵素、
３α−ヒドロキブステロイドデヒドロゲナーゼ（３α−
Ｈ８Ｄ）、グリセリン−３−リン酸脱水素酵素、グルコ
ース−６−リン酸脱水素酵素、アルデヒド脱水素酵素又
はホルムアルデヒド脱水素酵素等が挙げられる。
コレステロール、胆汁酸、グリセリン、グリセリン−３
−リン酸、グルコース−６−リン酸、アルデヒド又はア
セトアルデヒド等が挙げられ、脱水素酵素の一例として
は、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、α−ヒドロキシ酪酸脱
水素酵素（α−ＨＢＤ）、コレスラロール脱水素酵素、
３α−ヒドロキブステロイドデヒドロゲナーゼ（３α−
Ｈ８Ｄ）、グリセリン−３−リン酸脱水素酵素、グルコ
ース−６−リン酸脱水素酵素、アルデヒド脱水素酵素又
はホルムアルデヒド脱水素酵素等が挙げられる。
電子伝達体又はジアホラーゼは、通常、歯元型補酵素に
よってテトラゾリウム塩が還元されてホルマザン化合物
が生成する反応に、用いられる。
よってテトラゾリウム塩が還元されてホルマザン化合物
が生成する反応に、用いられる。
そのような電子伝達体の例としては、フェナジンメトサ
ルフェート （ＰＭＳ）、１−メトキシフェナジンメト
サ７１／７エート（１−Ｍｅｔｈｏｘｙ ＰＭＳ）又は
９−ジメチルアミノベ／シーα−フエナゾキソニウムク
ロライド（メルトラブル−）等が挙げられる。
ルフェート （ＰＭＳ）、１−メトキシフェナジンメト
サ７１／７エート（１−Ｍｅｔｈｏｘｙ ＰＭＳ）又は
９−ジメチルアミノベ／シーα−フエナゾキソニウムク
ロライド（メルトラブル−）等が挙げられる。
本−明に用いるテトラゾリウム化合物としては、例えば
、３−（ｒ−ヨウドフェニル）−２−（？’−二トロフ
ェニル）−５−フェニル−２Ｈテトラゾリウム クロラ
イド（ＩＮＴ）、 ３− （４−，５−ジメチル−２−
４−ｙゾリル）−２，５−ジフェニル−２８テトラゾリ
ウム ブロマイド（ＭＴＴ） 、３，３−（４，４−ビ
フェニレン）−ビス（２，５−ジフェニル−２Ｈテトラ
ゾリウム クロライド） （Ｎｅｏ−’［’ １３ ）
、３．３’ −（３，３’−ジメトキシ−４，４−ビフ
ェニレン）−ビス［２−（Ｐ−ニトロフェニル）−５−
フェニル−２Ｈテトラゾリウム塩ｏ ライト］ （Ｎｉ
ｔｒｏ−ＴＢ） 、３．３’−（３，３′−ジメトキ７
−４．４’−ビフエニレ／）−ビス（２，５−ジフェニ
ル−２１−１テトラゾリウム クロライド） （Ｔ Ｈ
） 、３．３’ −（３，３知ジメトキシ−，４，４’
−ビフェニレン）−ビス〔２，５−ビス（Ｐ−ニトロフ
ェニル’Ｉ −２ｆ−１テトラゾリウム クロライド’
：１（ＴＮＴＩ３）等自体公知のテトラゾリウム塩のい
ずれにてもよく、また、最近新しく開発された水溶性テ
トラゾリウム塩である、２−（２−ベンゾチアゾリル）
−３−（０−カルボキシフェニル） ’−５−ＣＰ −
（ヒドロキシ・ポリ（オキシ−１，２−エタンジイル）
）フェニル１−２ Ｔ−Ｉテトラゾリウム クロライド
等も同様に用い得ることはいうまでもない。
、３−（ｒ−ヨウドフェニル）−２−（？’−二トロフ
ェニル）−５−フェニル−２Ｈテトラゾリウム クロラ
イド（ＩＮＴ）、 ３− （４−，５−ジメチル−２−
４−ｙゾリル）−２，５−ジフェニル−２８テトラゾリ
ウム ブロマイド（ＭＴＴ） 、３，３−（４，４−ビ
フェニレン）−ビス（２，５−ジフェニル−２Ｈテトラ
ゾリウム クロライド） （Ｎｅｏ−’［’ １３ ）
、３．３’ −（３，３’−ジメトキシ−４，４−ビフ
ェニレン）−ビス［２−（Ｐ−ニトロフェニル）−５−
フェニル−２Ｈテトラゾリウム塩ｏ ライト］ （Ｎｉ
ｔｒｏ−ＴＢ） 、３．３’−（３，３′−ジメトキ７
−４．４’−ビフエニレ／）−ビス（２，５−ジフェニ
ル−２１−１テトラゾリウム クロライド） （Ｔ Ｈ
） 、３．３’ −（３，３知ジメトキシ−，４，４’
−ビフェニレン）−ビス〔２，５−ビス（Ｐ−ニトロフ
ェニル’Ｉ −２ｆ−１テトラゾリウム クロライド’
：１（ＴＮＴＩ３）等自体公知のテトラゾリウム塩のい
ずれにてもよく、また、最近新しく開発された水溶性テ
トラゾリウム塩である、２−（２−ベンゾチアゾリル）
−３−（０−カルボキシフェニル） ’−５−ＣＰ −
（ヒドロキシ・ポリ（オキシ−１，２−エタンジイル）
）フェニル１−２ Ｔ−Ｉテトラゾリウム クロライド
等も同様に用い得ることはいうまでもない。
次に本発明の方法を実施するだめの具体例として、血清
中の乳酸脱水素酵素（Ｌ Ｄ Ｈ）の活性度測定の場合
について記す。
中の乳酸脱水素酵素（Ｌ Ｄ Ｈ）の活性度測定の場合
について記す。
Ｄ’Ｌ−乳酸リチウム’Ｏ，１１，ｒｔ＋ｏ：１＋ｅ１
／ｃＬ％Ｎ Ａ Ｄ ０．２係、ジアホラーゼ ２００
ｕｎ ｉ ｔ／ｄ１．ニドｏテトラゾリウムブルー（
ＮＯ２−ＴＢ）００２％を含む０１Ｍトリス−塩酸緩衝
液（ｐＨ８３）を予め３７℃に予備加温し、血清′ｏ、
０５ ｍＬ ｖｃ対し ０．５ｍＬｔ加え、３７℃恒
温槽中正確に１０分間加温反応せしめた後、０３％ラウ
リル硫酸ナトリウム水溶液５、０ ｍｌ ｆ加えて混和
し、試薬盲検を対照として５６０ ｎｍ に於ける吸光
度を測定し、別に標準血清（Ｌ Ｄ Ｉ−１活性値既知
）を用いて同一操作を行なって得た検量線と対比して、
血清中のＬ Ｄ Ｈ活性値をめる。０３係ラウリル硫酸
ナトリウム水溶液の代りに、従来法の０． Ｉ Ｎ塩酸
５ ｍｌを用いたときは、吸光度定量用ガラスセルは数
十検体の測定で染着が認められるが、本発明のラウリル
硫酸塩を用いた試液でば、殆んど染着は認められず、ま
た、呈色度及び呈色安定性に於ても、本発明の効果が認
められる。
／ｃＬ％Ｎ Ａ Ｄ ０．２係、ジアホラーゼ ２００
ｕｎ ｉ ｔ／ｄ１．ニドｏテトラゾリウムブルー（
ＮＯ２−ＴＢ）００２％を含む０１Ｍトリス−塩酸緩衝
液（ｐＨ８３）を予め３７℃に予備加温し、血清′ｏ、
０５ ｍＬ ｖｃ対し ０．５ｍＬｔ加え、３７℃恒
温槽中正確に１０分間加温反応せしめた後、０３％ラウ
リル硫酸ナトリウム水溶液５、０ ｍｌ ｆ加えて混和
し、試薬盲検を対照として５６０ ｎｍ に於ける吸光
度を測定し、別に標準血清（Ｌ Ｄ Ｉ−１活性値既知
）を用いて同一操作を行なって得た検量線と対比して、
血清中のＬ Ｄ Ｈ活性値をめる。０３係ラウリル硫酸
ナトリウム水溶液の代りに、従来法の０． Ｉ Ｎ塩酸
５ ｍｌを用いたときは、吸光度定量用ガラスセルは数
十検体の測定で染着が認められるが、本発明のラウリル
硫酸塩を用いた試液でば、殆んど染着は認められず、ま
た、呈色度及び呈色安定性に於ても、本発明の効果が認
められる。
上記と同じ方法により、乳ビ血隋について測定したとき
の検体盲検値を第１表に示す。
の検体盲検値を第１表に示す。
第 １ 表
＊）ＳＴ）Ｓニラウリル硫酸ナトリウム−に配光より明
らかなように、本発明の方法によれば、乳ビ面清の検体
盲検値は従来法の２／３〜Ｖ３に抑えることができる。
らかなように、本発明の方法によれば、乳ビ面清の検体
盲検値は従来法の２／３〜Ｖ３に抑えることができる。
本発明は、ＮＡＤ又はＮＡＤＰを補酵素とし、テトラゾ
リウム塩を発色剤とする脱水素酵素の活性度測定及び、
それによる基質の定量に於て、反応停止剤として、デシ
ル硫酸又（はその塩、ラウリル硫酸又はその塩、及びラ
ウリルベンゼンスルホン酸又はその塩から成る群より選
ばれた１種又は２種以上の化合物を用いることにより、
テトラゾリウム塩類が還元されて生成する色素であるホ
ルマザン化合物の析出停市、染着防市、呈色安定性の向
−ヒ及び呈色増強等の優れた効果が得られる点に特徴を
有する発明であり、斯業に貢献する所、極めて犬なるも
のがある。
リウム塩を発色剤とする脱水素酵素の活性度測定及び、
それによる基質の定量に於て、反応停止剤として、デシ
ル硫酸又（はその塩、ラウリル硫酸又はその塩、及びラ
ウリルベンゼンスルホン酸又はその塩から成る群より選
ばれた１種又は２種以上の化合物を用いることにより、
テトラゾリウム塩類が還元されて生成する色素であるホ
ルマザン化合物の析出停市、染着防市、呈色安定性の向
−ヒ及び呈色増強等の優れた効果が得られる点に特徴を
有する発明であり、斯業に貢献する所、極めて犬なるも
のがある。
以下に本発明に係る実施例を述べるが、本発明はこれら
に限定されるものではない。
に限定されるものではない。
実施例１ 血清中のα−ヒドロキシ酪酸脱水素酵素活性
度測定法 α−ヒドロキシ酪酸リチウム Ｏ，１，５ｍｏｌｅ／
ｌ。
度測定法 α−ヒドロキシ酪酸リチウム Ｏ，１，５ｍｏｌｅ／
ｌ。
ＮＡＤ ２ ｇ ／ｌ 、ＰＭＳ ３０ ？ｎｑ／ｌ、
Ｎ１ｔｒ。
Ｎ１ｔｒ。
−ＴＢ Ｏ，８，？／１（Ｄｅａ度になル、Ｊ： ウニ
、０．１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐｌ−１８，５） ｖ
ｃ溶解し、基質液とする。
、０．１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐｌ−１８，５） ｖ
ｃ溶解し、基質液とする。
また、０３チラウリル硫酸ナトリウム水溶′ｒｊ、全調
製し、これ全反応停止剤とする。
製し、これ全反応停止剤とする。
血清 ０．０５ ｍｌをとり、予め３７°Ｃにした基質
液 ０．５ ｍｅ ｆ加え、３７℃恒温槽中で正確に２
０分間卯票した後、反応停止Ｆ剤５．０ ｍｌを加えて
混和し、試薬盲検を対照として波長５６０ ｎｍの吸光
度を測定する。
液 ０．５ ｍｅ ｆ加え、３７℃恒温槽中で正確に２
０分間卯票した後、反応停止Ｆ剤５．０ ｍｌを加えて
混和し、試薬盲検を対照として波長５６０ ｎｍの吸光
度を測定する。
別に標鵡血清（α−）Ｉ Ｂ Ｄ活性値間知）ケ用いて
、同一操作を行なって得た検量線と対比して、血清中の
α−Ｈ１３０活性値をめる。
、同一操作を行なって得た検量線と対比して、血清中の
α−Ｈ１３０活性値をめる。
比較例１
実施例１．と同一の基質液を使用し、反応停止剤として
Ｏ，１Ｎ塩酸を用いた以外は、実施例１と全く同じ方法
により血清中のα−Ｉ−Ｉ ＨＤ活性度を測定する。
Ｏ，１Ｎ塩酸を用いた以外は、実施例１と全く同じ方法
により血清中のα−Ｉ−Ｉ ＨＤ活性度を測定する。
実施例１．と比較例１の結果を１２表に示す。
第 ２ 表
第２表より明らかなように、本発明に係る反応停止剤を
用いた場合は、酵素反応は完全に停止し３時間後も呈色
度は変化しない。また、比較例１に比べて呈色度は４〜
５係高く、試験管への染着も認められない。
用いた場合は、酵素反応は完全に停止し３時間後も呈色
度は変化しない。また、比較例１に比べて呈色度は４〜
５係高く、試験管への染着も認められない。
実施例２．血清中のα−ヒドロキシ酪酸脱水素酵素活性
度測定法 基質液及び血清試料は実施例１．と同じもの企用い、反
応停止剤は０．３φデシル硫酸す） ＩＪウム水溶液を
用いる。
度測定法 基質液及び血清試料は実施例１．と同じもの企用い、反
応停止剤は０．３φデシル硫酸す） ＩＪウム水溶液を
用いる。
実施例１．に従って、血清中のα−Ｉ−１ ＋３ Ｄ活
性度を測定し、実施例１゜と同様の結果を慢た。
性度を測定し、実施例１゜と同様の結果を慢た。
実施例３ 血清中のＬ Ｄ Ｈ活性度測定法Ｄ Ｌ−乳
酸リチウムＱ、 １− ｍｏｌｅ／ｌ、 Ｎ Ａ Ｄ
０．２係、ジアホラーゼ２００ ｕｎ ｉ ｔ／ｄノ、
Ｎ１ｔｒｏ−ＴＢＯ９０２％、ゼラチン０１係の濃度如
なるように０１Ｍトリス−塩酸緩衝に／Ｌ（ｐＴ−１８
，３）に票解し、基質液とする。
酸リチウムＱ、 １− ｍｏｌｅ／ｌ、 Ｎ Ａ Ｄ
０．２係、ジアホラーゼ２００ ｕｎ ｉ ｔ／ｄノ、
Ｎ１ｔｒｏ−ＴＢＯ９０２％、ゼラチン０１係の濃度如
なるように０１Ｍトリス−塩酸緩衝に／Ｌ（ｐＴ−１８
，３）に票解し、基質液とする。
また、ラウリル硫酸ナトリウム０３％、ゼラチン０２係
を含む水溶液を調製し、反応停止剤とする。
を含む水溶液を調製し、反応停止剤とする。
血清０．０５ｍｅｉとり、予め３７℃にした基質液０、
５ ｍｌ！ ｆ ｌｙ’ｇえ、３７°Ｃ恒温槽中で正確
に１０分間υ口温反応せしめた後、反応停止剤５． Ｏ
ｍｌを加えて混和し、試薬盲検を対照として波長５５
Ｑ ｎｍの吸光度全測定する。
５ ｍｌ！ ｆ ｌｙ’ｇえ、３７°Ｃ恒温槽中で正確
に１０分間υ口温反応せしめた後、反応停止剤５． Ｏ
ｍｌを加えて混和し、試薬盲検を対照として波長５５
Ｑ ｎｍの吸光度全測定する。
別て標準血清（Ｌ Ｄ Ｈ活性値既知）を用いて、同一
操作を行なって得た検量線と対比して、血清中のＴ、
Ｄ Ｈ活性値をめる。
操作を行なって得た検量線と対比して、血清中のＴ、
Ｄ Ｈ活性値をめる。
比較例２
実施例１と同一の基質液を使用し、反応停止剤として、
ゼラチン０．２％を含むＯ，］、 Ｎ塩酸を用いる以外
は、実施例３と全く同一の方法により血清中のＬ Ｄ
Ｉ−１活性度を測定する。
ゼラチン０．２％を含むＯ，］、 Ｎ塩酸を用いる以外
は、実施例３と全く同一の方法により血清中のＬ Ｄ
Ｉ−１活性度を測定する。
実施例３と比較例２．の結果を第３表に示す。
第３表
第３表から明らかなように、実施例３．は比較例２、に
比し、呈色度に於て４〜５係の向、−ヒを示し、呈色安
定性は実施例３が３時間後も全く吸光度の変化を示さな
いのに対し、比較例２でｉｄ４〜５チの呈色低下が認め
られる。しかし、試験管への染着は、ゼラチン添加の効
果てより、実施例３１、比較例２．とも２４時間後も全
く認められない。しかし、実施例３及び比較例２の反応
停止剤を、それぞれ室温で１ケ月保存したものを使用し
たとき、比較例２ではゼラチンの加水分解が生じ、最終
呈色液を３日間放置した場合染着が認められたが、実施
例３の反応停止剤では、全く認められなかった。
比し、呈色度に於て４〜５係の向、−ヒを示し、呈色安
定性は実施例３が３時間後も全く吸光度の変化を示さな
いのに対し、比較例２でｉｄ４〜５チの呈色低下が認め
られる。しかし、試験管への染着は、ゼラチン添加の効
果てより、実施例３１、比較例２．とも２４時間後も全
く認められない。しかし、実施例３及び比較例２の反応
停止剤を、それぞれ室温で１ケ月保存したものを使用し
たとき、比較例２ではゼラチンの加水分解が生じ、最終
呈色液を３日間放置した場合染着が認められたが、実施
例３の反応停止剤では、全く認められなかった。
実施例４ 血清中のＬ Ｄ Ｈ活性度測定法Ｄ Ｌ−乳
酸リチウム０．１ ｍｏｌｅ ／ ｌ 、 ＮＡＤｏ、
２係、ジアホラーゼ２００ ｕｎｉｔ ／ ｄＬ、Ｔ
Ｎ Ｔ Ｏ，０２５係の濃度ｌてなるようｔｃ ０．１
Ｍ ） ＩＪスス−酸緩衝液（ｐＨ８，３）＋で溶解
し、基質液とする。
酸リチウム０．１ ｍｏｌｅ ／ ｌ 、 ＮＡＤｏ、
２係、ジアホラーゼ２００ ｕｎｉｔ ／ ｄＬ、Ｔ
Ｎ Ｔ Ｏ，０２５係の濃度ｌてなるようｔｃ ０．１
Ｍ ） ＩＪスス−酸緩衝液（ｐＨ８，３）＋で溶解
し、基質液とする。
ラウリル硫酸ナトリウム１係を含む０１Ｍトリス−塩酸
緩衝液（ｐｒ−１８０）を調製し、反応停市液とする。
緩衝液（ｐｒ−１８０）を調製し、反応停市液とする。
実施例３に従って、面ｆＩｔ中のＬ Ｄ Ｔ■活性度を
測定する。但し、測定波長は５００ ｎｍ とする。
測定する。但し、測定波長は５００ ｎｍ とする。
比較例３
実施例４．と同一の基質液を使用し、反応停止剤として
ｏ、１Ｎ塩酸を用いる以外は実施例４と全く同一方法に
より血清中のＬ Ｄ Ｈ活性度を測定する。
ｏ、１Ｎ塩酸を用いる以外は実施例４と全く同一方法に
より血清中のＬ Ｄ Ｈ活性度を測定する。
但し、測定波長は４９２１ｍ とする。
実施例４と比較例３．の結果を第４表に示す。
第 ４ 表
第４表から明らかなように、実施例４はトヒ較例３、に
対し、呈色度に於て６〜７係の向上を示し、呈色安定性
については、比較例３が３時間で５〜７％呈色低下を示
しているのに対し、実施例４では全く低下していない。
対し、呈色度に於て６〜７係の向上を示し、呈色安定性
については、比較例３が３時間で５〜７％呈色低下を示
しているのに対し、実施例４では全く低下していない。
また、ＩＮＴはＮ１ｔｒｏ−ＴＢに比べて染着性が弱い
ので、本実験て於ては染着は認めなかった。
ので、本実験て於ては染着は認めなかった。
尚、実施例４と比較例３で測定波長が異なるのは、この
２例のそれぞれの極大波長で測定しているためであり、
ラウリル硫酸ナトリウムの添加により、極太吸収波長が
／フ卜したためである。
２例のそれぞれの極大波長で測定しているためであり、
ラウリル硫酸ナトリウムの添加により、極太吸収波長が
／フ卜したためである。
実施例５ 血清中のＬ Ｄ Ｈ活性度測定法基質液及び
血清試料は実施例４と同じものを用い、反応停止剤はラ
ウリルベンゼンスルホン酸ナトリウム １％を含む０．
１ Ｍ ）リス−塩酸緩衝液（１）８８．０）を用いる
。
血清試料は実施例４と同じものを用い、反応停止剤はラ
ウリルベンゼンスルホン酸ナトリウム １％を含む０．
１ Ｍ ）リス−塩酸緩衝液（１）８８．０）を用いる
。
実施例３に従って、血清中のＬ Ｄ Ｈ活性度を測定し
、実施例４と同様な結果を得た。
、実施例４と同様な結果を得た。
実施例６ ラウリル硫酸ナトリウムのホルマザン安定化
効果 ３種のテトラゾリウム塩を一定量のＮ、Ａ、ＤＨ４］−
Ｍｅｔｈｏｘｙ Ｐ Ｍ Ｓで還元し、ホルマザン（又
はジホルマザン）を生成させた後、ラウリル硫酸す）
ＩＪウムを加えた場合と加えなかった場合で、同−ｐ）
−１に於て色素に対する安定化効果を調べた。
効果 ３種のテトラゾリウム塩を一定量のＮ、Ａ、ＤＨ４］−
Ｍｅｔｈｏｘｙ Ｐ Ｍ Ｓで還元し、ホルマザン（又
はジホルマザン）を生成させた後、ラウリル硫酸す）
ＩＪウムを加えた場合と加えなかった場合で、同−ｐ）
−１に於て色素に対する安定化効果を調べた。
テトラゾリウム塩はＮ１ｔｒｏ−Ｔ Ｂ、Ｔ ＮＴ、Ｎ
ｅ。
ｅ。
−ＴＢを用い、それぞれＱ、 ５ ｍ’ｍｏｌｅ ／
ｌノ濃度に０．１ Ｍ トリス−塩酸緩衝液（ｐｉ−１
８，０）に溶解腰Ｎ１ｔｒｏ−ＴＢ、ＴＮ’Ｔ溶液には
トリ）７Ｘ−１００’ｆｆ１０．０２’％、Ｎｅｏ −
ＴＩ３溶液には０．１％全添加したものを発色試液とし
た。
ｌノ濃度に０．１ Ｍ トリス−塩酸緩衝液（ｐｉ−１
８，０）に溶解腰Ｎ１ｔｒｏ−ＴＢ、ＴＮ’Ｔ溶液には
トリ）７Ｘ−１００’ｆｆ１０．０２’％、Ｎｅｏ −
ＴＩ３溶液には０．１％全添加したものを発色試液とし
た。
ＮＡＤ）１． ２．６ｍｍｏｌｅ／１ｅ５０／Ｌｌ と
り、発色Ｅ 液２ ｍｌ ｆ ）Ｊｎ エ、１７Ｍｅｔ
ｈｏｘｙ Ｐ Ｍ ８ １．５ｍｇ ／ ｄＬ ｋ含む
０．１Ｍトリス−塩酸緩衝Ｗ （ｐＴ−Ｉ８．０）ｉ１
ｍｊ加える。３７℃恒温槽中で１０分１ｓ５加温した後
、ラウリル硫酸ナトリウム ５２ ｍｍｏｌｅ／ｌを含
む０１Ｍトリス−塩酸緩衝液（Ｔ）Ｉ（８，０）”ｌ
ｍｌ、又は０．１ Ｍ トリス−塩酸緩衝液（ｐ）ｌ
ｓ、 ｏ）のみ２ｍ１ｆ加え、試薬盲検を対照として、
それぞれの極太吸収波長で吸光度を測定後、更に３７°
Ｃ恒温槽中で２時間加温後、吸光度−！ｚ ｉｌｌ定す
る。
り、発色Ｅ 液２ ｍｌ ｆ ）Ｊｎ エ、１７Ｍｅｔ
ｈｏｘｙ Ｐ Ｍ ８ １．５ｍｇ ／ ｄＬ ｋ含む
０．１Ｍトリス−塩酸緩衝Ｗ （ｐＴ−Ｉ８．０）ｉ１
ｍｊ加える。３７℃恒温槽中で１０分１ｓ５加温した後
、ラウリル硫酸ナトリウム ５２ ｍｍｏｌｅ／ｌを含
む０１Ｍトリス−塩酸緩衝液（Ｔ）Ｉ（８，０）”ｌ
ｍｌ、又は０．１ Ｍ トリス−塩酸緩衝液（ｐ）ｌ
ｓ、 ｏ）のみ２ｍ１ｆ加え、試薬盲検を対照として、
それぞれの極太吸収波長で吸光度を測定後、更に３７°
Ｃ恒温槽中で２時間加温後、吸光度−！ｚ ｉｌｌ定す
る。
第 ５ 表
第５表の結果から明らかなように、同一液性に於て比較
した場合、本発明のラウリル硫酸ナトリウムを加えるこ
とによる呈色安定化効果及び呈色増強効果が顕著にあら
れれて（・る。
した場合、本発明のラウリル硫酸ナトリウムを加えるこ
とによる呈色安定化効果及び呈色増強効果が顕著にあら
れれて（・る。
手続補正書
ｌ 事件の表示
２ 発明の名称
３ 補正をする者
事件との関係 特許出願人
郵便番号 ５４１
連絡先 特許！！（東京） 置 ０３−２７０−１１５
７１５ 軸工の列２象 叩傘化筈のｉ弱ｖ月の省ギ非鴇た゛省ム毛め欄。
７１５ 軸工の列２象 叩傘化筈のｉ弱ｖ月の省ギ非鴇た゛省ム毛め欄。
６、ミニの灼胎
（１）叱庖嘗り貢２イイ目ｈ＼ら）４貝３將鴇１１＼ｌ
’Ｊて省已載の１７１＜鼻鮎素鑑ノ隨庄謬憚裁７゛ある
。」ｔ′脱水素−末法・１度（γ１（養プの良童法の渓
ｗｌで島るりＹ補正する。
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ｗｌで島るりＹ補正する。
（２＞ ｅｆａ奔題奢 ’ｌ ＩＥ ’Ｉ ’６ 目
＋ｓ紀Ｋｑ ’人％ ｆ、１１力釆力象゛制めらヒるり
の伏（；嬉丁して撚の文章１挿入する。
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２杢く、イ娑く明６り万ジノで【；７Δト＾ヒーノＥ＋
ｈ ｔ ｓ 、 し事；’ｌｔ＝ 動１く□鈎ヒφし暢
七亭ミバ不キｎ′）′ ろ こ 乙 ）ζ Ｊ ７１
郵こ ろ脱ノ）く１（酵素ｉξな２．Ｅヌ１亭止ざくろ
０と１ｊ吻苫窃のこし、）川崎に、ヱ啄、几型輔−素が
゛、連子Ｉ云４Ｉ不メ１クジアホラーンの嵌６下でゝテ
トラーノリウＡＸ＊４を還元するν応・１わＡやＩＺ陣
者する。
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七亭ミバ不キｎ′）′ ろ こ 乙 ）ζ Ｊ ７１
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０と１ｊ吻苫窃のこし、）川崎に、ヱ啄、几型輔−素が
゛、連子Ｉ云４Ｉ不メ１クジアホラーンの嵌６下でゝテ
トラーノリウＡＸ＊４を還元するν応・１わＡやＩＺ陣
者する。
即ち、ＪＩＪわ１ゴ、ＮＡしＨ又１ゴＮＡ［）ＰＨヒ！
−Ｈｅｔｈｏｘｙ −Ｐ Ｍ Ｓメ１コシ゛アホ・ラー
ビに分む禮衝寂園隼 〉ト１コ子トラ・ノソツ人ブルー
（Ｎｉｔ、ｒｏ−丁Ｂ）天カロわろと工ち１（是几さ［
１、）＠色の汀・ノンマデンＬ但しろパ、わらかしめラ
ウソルノ、儲少ナトリウムＬイオむ木表０１身グ１；、
Ｎ１１ｏ−丁Ｂ玄カロえ４【９易ｈ１て１づ々〉く鐙
色１コふｅめらいろ゛い・甫・ 二の塙合・ ＮｉけＣ
）−ＴＢ＠ＨＪＬｒＪい１”ＮＡｒ）Ｈメ１ゴＮＡＤＰ
Ｈｅ＞３φ０ｎｎ１１；於する扱光度玄経１約ト連鮪・
する乙、いずＨの塙・召トわ吸光度１グ蒔４φ勺１ｊ／
切し、ＭＡり目ＸげＮＡｔ）ｌ）Ｈｔｒ）分解燃゛姫殿
さ区ろ。ごのこｂＩＪ、ラウリル石Ｉ更ナトリ１クム漬
父、ＮＡ ＤＨス＋３ＮＡＤＰＨＦ ｒ ６ Ｎ１ｔｒ
Ｏ−丁Ｂ ｎ＃ｈｓｐｔｓＰ且書スる炉゛、ＮＡｔ））
−１又１ゴＮＡＩ）ＰＨｆ）０乙分解１ｚは関Ｇ しｆ
ｈ゛イこヒ１示し７（１ろ。
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１、）＠色の汀・ノンマデンＬ但しろパ、わらかしめラ
ウソルノ、儲少ナトリウムＬイオむ木表０１身グ１；、
Ｎ１１ｏ−丁Ｂ玄カロえ４【９易ｈ１て１づ々〉く鐙
色１コふｅめらいろ゛い・甫・ 二の塙合・ ＮｉけＣ
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する乙、いずＨの塙・召トわ吸光度１グ蒔４φ勺１ｊ／
切し、ＭＡり目ＸげＮＡｔ）ｌ）Ｈｔｒ）分解燃゛姫殿
さ区ろ。ごのこｂＩＪ、ラウリル石Ｉ更ナトリ１クム漬
父、ＮＡ ＤＨス＋３ＮＡＤＰＨＦ ｒ ６ Ｎ１ｔｒ
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艮Ｐ５．７４５−ｐ小＝ｉ＃る反威・、φ１し’ｎ＝、
漬弓１１、眺永素酩ラド、斥〜’ｔ−，Ｉ＃上さシろの
とｒＪ゛らず、硬列斗Ｊ云到矛トメ１５゛ヱ往１ラー１
１〔よるイトラー７′り曳り／＼す仏キ（舜岳への）改
Ｊ引体地１り且正し７すトラグリウムナ晶の遜多ｆｔ
〆ｒｔ イ亭ｉ さ也るｉＮ’、ＮＡＤ（’ｆｉ、１ｊ
ＮＡｂｌ’）？＝２ＮＡＤＩ−１１又 ＋ｊＮＡＤＰＪ
ゴ） の厘１℃ １ζ１ゴ多＃ピ゛ｈ月−トレｆＪい。
漬弓１１、眺永素酩ラド、斥〜’ｔ−，Ｉ＃上さシろの
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瞳・ １・縛硅釣な還元り舖縛素の水触斥灼・（；診て
、’＠’ｒ、ｌ云鐘フイ本メ１ゴシ゛゛ア本ラービのｎ
７作下ド、デトラヅリウム描玄用い７一定岬Ｐｊｌ＋帽
；於りろ蓮形梨精鱈東の・生へ童γ木めんとする４企１
；（コ、本発明 １ミイ１ト、ろ 反ｈ４毫］二創 て
１月 し＼ ト丈１ゴゞ、 ｊ向Ｊ！Ｊ５ ＩＣ！
／７ 巨イ内４ｔ−媛起しｆイろ。ｅρち、木淫明に、
Ｊ余ろ反ル４辛上肴りｔＶａいｒコｌる今１；１ゴ、
禎？政２ｙ補典４１歳ｎ注入反β議１ゴ糸庄、斥９ヒ的
１；礁廿し１し１ろ１：４／オカ←らず、テＹラゾソウ
ム愼のに−ｒ反虞（プトラ・グリラム点→本ルマザン）
／））ｆｆＪ”Ｋ璧１ｃ７１正、さ ト１７、＋ ｎ
＞１ ｈｆ−Ｑ ｔ ｊｙｈしｆ、ｒ ｌ、 Ｉ）’
ろ／１７゛、冷のＹ化を比色ノしくスる二とにより、上
會己目会勺−ｆｉＮ’鈑苅１ｚ旦１ｊ力、刃（介勺１；
璋せら（１、る、。
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禎？政２ｙ補典４１歳ｎ注入反β議１ゴ糸庄、斥９ヒ的
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（ｑ）ｅｕ＃ｌ−ｔ ｒＩ頁１ ｏ＠ｏ ＋＜４ｂｌｌ
’ｘノ’ ｆ ＞ｔｐ４ｅｌメＸ１ηの点・ 」の討１
コ１本死明の反塵停止利７゛あろ」１挿＼する。
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（旧 １５鴇舎６ 頁１３．−行目１こ扼べの１つしみ
ラロ−Ｊｌ／ｌＩ兇水素酵素、」 １１コレステロ−ノ
リ％ ７］＜ 素ｖｔ４素、」し袖工１ろ。
ラロ−Ｊｌ／ｌＩ兇水素酵素、」 １１コレステロ−ノ
リ％ ７］＜ 素ｖｔ４素、」し袖工１ろ。
（５） 口呂産１ｊ ３貢卒竹目 １１乙への １抑λ
７ろこ とが゛で゛きる。」。糟１ζど対１し？犬の文
穿玉押き寸ろ。
７ろこ とが゛で゛きる。」。糟１ζど対１し？犬の文
穿玉押き寸ろ。
１ま「二、 〉ト・ ラ６；ミ明６り刀乏刀（シ、＃□
Ｌニイ）１」が゛、 にお【子イｉミｔイントス１Ｊシ
ア庄・ラーゼ１；Ｊるテトラ・ノリラム疼への電子の３
云正エア旦止して、テトラゾ＋１ウム鳩列達例」！頑′
’（イ４吐、υユ く（ぜ ４る こし ヒ づこ〕を
苔、召・ し ｒζ 火１西づヒ例 ｋ ツノ、丁 １
；乃り′）“・與験剖 Ｑ ） Ｓ２テトラークリウムブルー（Ｎ１ｔｒＯ，−
ＴＢ ）θ、ｏ２％、ジ゛アホラービ ｌダ０φス１ユ
１−Ｍｅｔムｏｘｙ−ＦＭＳ ｏ、ｏｏ２’ｌ、ト１ノ
ト ＞×−１０゜θ、バ２、ラウリルカダヂトソク人
ρ・５滑分むρ、ＩＦＩＩ−Ｉノス −ナＪＬｍ失、
確全所表ＩＰ／−／ り・り）３−１こ、 １廖Ｍ、２
ヶＨのＮＡρｔ−ｔ ｙｋ：＃欧 ρ、り０ｍｌ炎カロ
Ｌ、 ３ ７ ’ＣｆＱ５Ａ槽す Ｉ＝ＩＯ＃ルｎｈ１
コＪ＆ ｈ ； ＜ ｒ；ネ麦、ぜ入栗堪オ火玄プ寸已
ｙレマダ乙０ア開１こ方へ１仲例光７Ｘｓ シ貝ｊ１４
しＦご。
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ト ＞×−１０゜θ、バ２、ラウリルカダヂトソク人
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確全所表ＩＰ／−／ り・り）３−１こ、 １廖Ｍ、２
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コＪ＆ ｈ ； ＜ ｒ；ネ麦、ぜ入栗堪オ火玄プ寸已
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Ｈ−、五犯反〜城業中からラウリル硫吐ナトリウム支Ｍ
５ヅ： ＃ｈ派”ｔ ７叩い、 １杷Ｖ＞司酵シににＪ
り反７〜、死・色させで、ｊ４不ｔ１；吸光兼上ラメ
・１定しｒり９］肉４ 比す灸を多 ｔａ＋二カ４゜ ・箔 ２ 表 榮２−１りよ１胛月ら力＼なようｊ；、ネｇ日月１ｚイ
糸る反メヤＳイ命正ａ１．１−ｉ １ν１ ｆ： １肴
ｒＦ ｌｊ、ＮＡ Ｄ Ｈ９，ｒＸＮＡ Ｄ ＰＨｆ度
Ｊ、ｆｆ、↓イネＬｌｆｆジ゛ア庄・ラーゼの肋１ブｉ
’すＺテトラシリウム媒玄摩ｆＧｆろ反ハ乞Ｌ、完全１
斗止Ｊ也４イろニヒパ゛ｂｈ＼ろ、」 Ｊズ上
５ヅ： ＃ｈ派”ｔ ７叩い、 １杷Ｖ＞司酵シににＪ
り反７〜、死・色させで、ｊ４不ｔ１；吸光兼上ラメ
・１定しｒり９］肉４ 比す灸を多 ｔａ＋二カ４゜ ・箔 ２ 表 榮２−１りよ１胛月ら力＼なようｊ；、ネｇ日月１ｚイ
糸る反メヤＳイ命正ａ１．１−ｉ １ν１ ｆ： １肴
ｒＦ ｌｊ、ＮＡ Ｄ Ｈ９，ｒＸＮＡ Ｄ ＰＨｆ度
Ｊ、ｆｆ、↓イネＬｌｆｆジ゛ア庄・ラーゼの肋１ブｉ
’すＺテトラシリウム媒玄摩ｆＧｆろ反ハ乞Ｌ、完全１
斗止Ｊ也４イろニヒパ゛ｂｈ＼ろ、」 Ｊズ上
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１，）ＮＡＤにコチンアミドアデニンジズクレオチド
）又はＮＡＤＩ）にコチンアミドアデニンジヌクレオチ
ドリン酸）を補酵素とし、テトラゾリウム塩を発色剤と
する脱水素酵素の活性度測定法に於て、酵素反応停止剤
として、デシル硫酸又はその塩、ラウリル硫酸又はその
塩、及びラウリルベンゼンスルホン酸又はその塩から成
る群より選ばれた１種又は２種以上の化合物を用いるこ
とを特徴とする、脱水素酵素の活性度測定法。 ＋２） Ｎ Ａ Ｄ又はＮＡＤＰを補酵素とし、テトラ
ゾリウム塩を発色剤とする脱水素酵素の活性度測定法に
於て、酵素反応停止剤として、デシル硫酸又はその塩、
ラウリル硫酸又はその塩、及びラウリルベンゼンスルホ
ン酸又はその塩から成る群より選ばれた１種又は２種以
上の化合物を用い、これと併用してゼラチンを用いるこ
とを特徴とする、脱水素酵素の活性度測定法。 （３）基質に特異的に作用する脱水素酵素を用い、ＮＡ
Ｄ又Ｉ″１ＮＡＤＰを補酵素とし、テトラゾリウム塩を
発色剤とする基質の定量法（て於て、酵素反応停止剤と
して、デ／ル硫酸又はその塩、ラウリル硫酸又はその塩
、及びラウリルベンゼンスルボン酸又はその塩から成る
群より選ばれた１種又は２種以上の化合物を用いること
を特徴とする、基質の定量法。 （４）基質に特異的に作用する脱水素酵素を用い、Ｎ
Ａ、 Ｄ又けＮＡＤＰを補酵素と１−、テトラゾリウム
塩を発色剤とする基質の定量法に於て、酵素反応停ｊに
剤として、デシル硫酸又はその塩、ラウリル硫酸又はそ
の塩、及びラウリルベンゼンスルボン酸又はその塩から
成る群より選ばれた１種又は２種以上の化合物を用い、
これと併用してゼラチンを用いることを特徴とする、基
質の定量法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58251883A JPS60141299A (ja) | 1983-12-28 | 1983-12-28 | 脱水素酵素の活性度測定法 |
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| EP84116437A EP0149853B1 (en) | 1983-12-28 | 1984-12-28 | Process for measuring activity of dehydrogenase |
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| JP58251883A JPS60141299A (ja) | 1983-12-28 | 1983-12-28 | 脱水素酵素の活性度測定法 |
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