WO2019189867A1 - ビスイミノビオチン化合物の薬物送達用の用途 - Google Patents

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鈴木　常司
昴裕 真野
戸谷　由之
洋平 清水
暁 杉山
雅信 塚越
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三井化学株式会社
国立大学法人東京大学
サヴィッド・セラピューティックス株式会社
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Definitions

  • the present invention relates to a drug delivery use of a bisiminobiotin compound, which is a compound useful in the field of medicine.
  • Iminobiotin (represented by the following formula 2) is one of modified biotins, and is a compound in which the cyclic urea structure of biotin is converted to cyclic guanidine.
  • Iminobiotin is used as a structure capable of adjusting the binding force with streptavidin
  • a biiminobiotin compound represented by general formula 3 is known as a structure that can be used for a pretargeting drug (Patent Document 1).
  • some side chains W bonded to the spacer V of the biiminobiotin compound represented by the general formula 3 have a polyethylene glycol or amide bond, and the terminal thereof is an active ingredient of a fluorescent compound or a drug.
  • Those having amines or carboxylic acids for binding compounds have been reported. However, when attaching a fluorescent compound or the like to these ends, it was necessary to protect a highly reactive functional group and deprotect it later.
  • the bisiminobiotin compounds represented by the following formulas 4 and 5 described in Patent Document 1 have a fluorophore and a drug in the molecule, and are useful for drug delivery and diagnostic techniques based on the pretargeting method. It is reported.
  • the synthesis of these molecules requires multiple steps, and functional group-selective modification at the end of the synthesis and attachment / detachment of protecting groups may be problematic.
  • the technical problem of the present invention is to provide a bisiminobiotin compound useful for drug delivery to a substance labeled with streptavidin, which has a structure for simply binding a bisiminobiotin moiety to a drug or a fluorescent compound. There is.
  • the present inventors have devised a molecular design utilizing the click reaction defined by K. B. Sharpless.
  • the Hüsgen cyclization in which the alkyne reacts with an azide group to form a triazole in the Click reaction, is one of the most used reactions.
  • the present inventor completed the present invention by obtaining the molecular structure of the bisiminobiotin compound according to the present invention based on the above points.
  • the biiminobiotin compound according to the present invention is represented by the following general formula 9.
  • A, D, and E are spacers connecting two bicyclo rings, and E represents a branched structure, each of which may have a substituent, or may form a ring structure.
  • J represents a functional group for performing a click reaction
  • G represents a spacer for bonding E and J
  • R represents hydrogen, acetyl group, benzyl group, trifluoroacetyl group or tertiary butoxycarbonyl [hereinafter, Boc] group.
  • Boc tertiary butoxycarbonyl
  • the bisiminobiotin compound represented by the above general formula 9 is useful as a substrate for drug delivery to a substance labeled with streptavidin.
  • the drug-bound biiminobiotin compound obtained by binding a drug to the bisiminobiotin compound represented by the above general formula 9 can be used as a drug delivery agent for a substance labeled with streptavidin.
  • a method for delivering a drug to a substance labeled with streptavidin using the biiminobiotin compound represented by the above general formula 9 includes binding a drug to a drug delivery substrate, and for drug delivery to which the drug is bound Binding a substrate to the streptavidin-labeled substance, and binding the drug to the streptavidin-labeled substance via the drug delivery substrate,
  • the drug delivery base material is a bisiminobiotin compound represented by the above general formula 9.
  • the bisiminobiotin compound represented by the above general formula 9 can be used as a drug delivery substrate in a method for producing a drug delivery agent for drug delivery to a substance labeled with streptavidin.
  • a method for producing a drug delivery agent for drug delivery to a substance labeled with streptavidin using the biiminobiotin compound represented by the above general formula 9 is functionalized on the bisiminobiotin compound represented by the general formula 9.
  • a group J to bind the drug.
  • the drug a bioactive substance or a fluorescent compound can be used.
  • a bisiminobiotin compound useful for drug delivery to a substance labeled with streptavidin, which has a structure for simply binding a bisiminobiotin moiety to a drug. .
  • the following reaction is possible.
  • a bisiminobiotin compound useful as a drug delivery substrate is represented by the following general formula 9.
  • A, D, and E are spacers connecting two bicyclo rings, and E represents a branched structure, each of which may have a substituent, or may form a ring structure.
  • J represents a functional group for performing a click reaction
  • G represents a spacer for bonding E and J
  • R represents hydrogen, an acetyl group, a benzyl group, a trifluoroacetyl group, or a Boc group.
  • the following compounds 10-24 and 10-25 are excluded from the bisiminobiotin compounds represented by the above general formula 9.
  • a drug delivery substrate characterized by being used for drug delivery to a substance labeled with streptavidin containing the biiminobiotin compound represented above.
  • bonds with A, D, and G of E a nitrogen atom, a carbon atom, an amide group, a benzene ring or a heterocyclic ring (For example, a furan ring, a pyrimidine ring, a pyrrole ring, a pyridine ring etc.) can be used preferably.
  • the ring structure and substituents of A, D and E can be selected within a range in which the objective effect of the present invention can be obtained.
  • A is composed of a1-a2-a3-a4
  • D is composed of d1-d2-d3-d
  • AED is a1-a2-a3-a4-E.
  • “bond” described in Tables 1 to 4 means a direct bond directly bonding adjacent groups.
  • AED is preferably a structure selected from combinations 1 to 113 in Tables 2 to 4 below.
  • Examples of more preferred biiminobiotin compounds according to the present invention include compounds represented by the following general formulas (10-1) to (10-38).
  • G is a linking group that links E and J, and is represented by g1-g2-g3-g4-g5-g6-g7, and g1, g2, g3, g4, g5, g6 and g7 are each independently A linking group selected from each column of Table 4 is preferred.
  • Examples of the heterocycle in Table 5 include a furan ring, a pyrimidine ring, a pyrrole ring, and a pyridine ring.
  • Preferred examples of the linking group for G include linking groups represented by general formulas (3-1) to (3-22) shown below. In each of the following general formulas, J and E are displayed in order to indicate the coupling position with J and E, but G is a portion excluding J and E.
  • J is a functional group for performing a click reaction.
  • a functional group include an azide group, a group having an alkyne structure, a tetrazine group, and a trans-cyclooctyne group.
  • the group which has an azide group and an alkyne structure is preferable, and can be selected and used according to the structure of the coupling
  • Examples of the group having an alkyne structure include an alkynyl group, an alkynyloxy group, an alkynylamino group, and the alkynyl group contained in these groups includes an alkynyl group having 2 to 3 carbon atoms such as an ethynyl group and a propargyl group.
  • Preferred examples of the azide group and the group having an alkyne structure include groups represented by the following formulas (4-1) to (4-10).
  • the position where G is displayed in each of the following formulas indicates a coupling position with G.
  • R, A, D, E, G, and J can be selected within a range in which the objective effect of the present invention is obtained.
  • R a hydrogen atom can be preferably used.
  • a and D are more preferably one structure selected from the six structures shown in Table 6 below having an alkyl chain or an alkyl chain having a substituent.
  • E is more preferably one structure selected from the following three structures having diaminobenzoic acid, monoaminodibenzoic acid or benzylamine as a central skeleton (where (A) represents a bond to A; D) represents a bond to D, and (G) represents a bond to G).
  • G is more preferably one structure selected from the six structures shown in Table 7 below having ethylene glycol.
  • J is more preferably one structure selected from the following three structures having an alkynyl group or an azide group (provided that (G) represents a bond to G).
  • E as the spacer structure is particularly preferably the following structure (provided that (A) represents a bond to A, (D) represents a bond to D, and (G) represents a bond to G). To express).
  • the above compounds 13-1, 13-2, 13-4 and 13-6 can be mentioned.
  • the drug delivery agent according to the present invention contains drug-bound biiminobiotin represented by the following general formula 14 as an active ingredient.
  • the drug used for derivatization is not particularly limited as long as it is a drug that has a structure capable of binding to the compound of the general formula 9 using the functional group J of the general formula 9 and can be used for pretargeting.
  • the drug can include a bioactive substance or a fluorescent compound.
  • the biologically active substance include anticancer agents, central nervous system drugs, immune disease drugs, cardiovascular drugs, and the like.
  • Specific examples of the fluorescent compound include coumarin analogs, cyanine analogs, rhodamine analogs, fluorescein analogs, and the like.
  • the drug delivery agent may contain a pharmaceutical carrier, an excipient, a diluent such as a solvent, and the like.
  • the drug delivery agent enables delivery of the drug to a substance or site labeled with streptavidin in vivo such as animals including humans or in vitro.
  • the ester bond and amide bond in the structure of the general formula 9 can be formed by the following reaction.
  • the amide of the general formula 17 can be formed by the condensation of the amine represented by the general formula 15 and the carboxylic acid represented by the general formula 16.
  • the amide bond or ester bond of E and G in the structure of the general formula 9 can be formed by condensation of the general formulas 17 and 18.
  • the conditions for the condensation reaction that can be used for the production of general formula 9 are described below.
  • the solvent used in the condensation reaction N, N-dimethylformamide, acetonitrile, tetrahydrofuran, tetrahydropyran, dichloromethane, 1,4-dioxane, chloroform, toluene, benzene, or a combination of two or more of these Can be used.
  • the solvent is preferably one of N, N-dimethylformamide, acetonitrile, tetrahydrofuran, dichloromethane, 1,4-dioxane, or a combination of two or more thereof.
  • N, N-dimethylformamide, acetonitrile, tetrahydrofuran, dichloromethane or 1,4-dioxane is used as a single solvent as a solvent. More preferably, N, N-dimethylformamide, acetonitrile or tetrahydrofuran is used as the solvent as a single solvent.
  • a carbodiimide condensing agent for example, N, N′-dicyclohexylcarbodiimide, N, N′-diisopropylcarbodiimide, 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride, etc.
  • Benzotriazole condensing agents for example, O- (7-azabenzotriazol-1-yl) -N, N, N ′, N′-tetramethyluronium hexafluorophosphate, O- (benzotriazol-1-yl) ) -N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate, etc.
  • triazole condensing agent for example, 4- (4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl) ) -4-methylmorpholinium chloride), uronium
  • any one of a carbodiimide condensing agent, a benzotriazole condensing agent, a triazole condensing agent, and a uronium condensing agent is used as the condensing agent. More preferably, any one of a carbodiimide condensing agent, a benzotriazole condensing agent, and a uronium condensing agent is used as the condensing agent.
  • O- (7-azabenzotriazol-1-yl) -N, N, N ′, N′-tetramethyluronium hexafluorophosphate O- (benzotriazol-1-yl) -N, N, N ', N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate, (1-cyano-2-ethoxy-2-oxoethylideneaminooxy) dimethylamino-morpholino-carbenium hexafluorophosphate Use one of them.
  • acid halides for example, acid chlorides, acid fluorides, acid bromides, etc.
  • active esters for example, N-hydroxysuccinimide ester, N-hydroxysulfosuccinimide ester
  • 1-acyloxy-7-azabenzotriazole 1-acyloxybenzotriazole, etc.
  • at least one of an acid halide, a succinic acid ester, and an active ester is used for activating the carboxylic acid.
  • At least one of acid chloride, N-hydroxysuccinimide ester, and N-hydroxysulfosuccinimide ester is used for activating the carboxylic acid. More preferably, at least one of acid chloride and N-hydroxysuccinimide ester is used for the activation of carboxylic acid.
  • any one of tertiary amines eg, triethylamine, diisopropylethylamine, trimethylamine
  • 4-dimethylaminopyridine imidazole, or a combination of two or more thereof
  • any one of triethylamine, diisopropylethylamine, trimethylamine, 4-dimethylaminopyridine, or a combination of two or more thereof is used as an additive.
  • any one of triethylamine, diisopropylethylamine, trimethylamine, and 4-dimethylaminopyridine is used as an additive.
  • the reaction temperature of the condensation reaction can be selected from the range of ⁇ 78 ° C. or higher and 150 ° C. or lower, preferably 0 ° C. or higher and 150 ° C. or lower, more preferably 0 ° C. or higher and 50 or lower.
  • the reaction substrate concentration for the condensation reaction can be selected from the range of 0.001 mol / L to no solvent, preferably from the range of 0.01 mol / L to 10 mol / L.
  • the reaction time of the condensation reaction can be selected from the range of 1 minute to 100 hours, more preferably from the range of 30 minutes to 24 hours.
  • crystallization, filtration washing, silica gel column chromatography, gel filtration chromatography and the like can be used.
  • a preferred purification method at least one of crystallization, filtration washing and silica gel column chromatography is used.
  • the bond between G and K in general formula 14 can be formed by the following reaction.
  • the structure represented by the general formula 18 is formed by reacting the azide represented by the general formula 7.
  • a structure represented by the general formula 20 is formed by reacting the azide represented by the general formula 19.
  • Y and Z represent the structures of biologically active substances and fluorescent compounds that bind to alkyne or azide.
  • Solvents used in the cyclization reaction include N, N-dimethylformamide, acetonitrile, tetrahydrofuran, tetrahydropyran, dichloromethane, 1,4-dioxane, dimethyl sulfoxide, chloroform, toluene, benzene, water, acetic acid, methanol, ethanol, Any one of isopropanol, normal-butyl alcohol, and tertiary-butyl alcohol, or a combination of two or more thereof can be used.
  • the solvent is preferably N, N-dimethylformamide, acetonitrile, tetrahydrofuran, 1,4-dioxane, chloroform, toluene, benzene, water, acetic acid, methanol, ethanol, isopropanol, normal-butyl alcohol, or tertiary-butyl alcohol. One or two or more of these are used in combination. More preferably, the solvent is N, N-dimethylformamide, acetonitrile, 1,4-dioxane, water, acetic acid, methanol, ethanol, tertiary-butyl alcohol, or a combination of two or more thereof. .
  • any one of N, N-dimethylformamide, acetonitrile, 1,4-dioxane, water, acetic acid, ethanol, and tertiary-butyl alcohol is used as the solvent.
  • Catalysts used in the cyclization reaction include monovalent copper salts (eg, copper (I) chloride, copper (I) bromide, copper iodide (I), copper acetate (I), etc.), Copper salts (eg, copper (II) chloride, copper (II) bromide, copper (II) iodide, copper (II) acetate, copper (II) sulfate), silver salts (silver chloride, silver bromide, iodine) And any one of ruthenium salts or a combination of two or more thereof can be used.
  • monovalent copper salts eg, copper (I) chloride, copper (I) bromide, copper iodide (I), copper acetate
  • the cyclization reaction may be performed without adding a catalyst.
  • the catalyst is preferably a monovalent copper salt, a divalent copper salt, a silver salt, or a combination of two or more thereof. More preferably as a catalyst, copper (I) chloride, copper bromide (I), copper iodide (I), copper acetate (I), copper chloride (II), copper bromide (II), copper iodide (II) ), Copper acetate (II), or copper sulfate (II).
  • any one of ascorbic acid, sodium ascorbate, potassium ascorbate, calcium ascorbate, or a combination of two or more thereof can be used.
  • the cyclization reaction may be performed without adding an additive.
  • any one of ascorbic acid, sodium ascorbate, and potassium ascorbate is used as the additive. More preferably, sodium ascorbate is used as an additive.
  • the reaction temperature of the cyclization reaction can be selected from the range of ⁇ 78 ° C. to 150 ° C., preferably the range of 0 ° C. to 100 ° C., and more preferably the range of 0 ° C. to 60 ° C.
  • the concentration of the reaction substrate for the cyclization reaction can be selected from the range of 0.001 mol / L to no solvent, preferably from the range of 0.01 mol / L to 10 mol / L.
  • the reaction time of the cyclization reaction can be selected from the range of 1 minute to 168 hours, preferably from the range of 30 minutes to 24 hours.
  • crystallization, filtration washing, silica gel column chromatography, and gel filtration chromatography can be used.
  • As a preferred purification method at least one of crystallization, filtration and washing, and silica gel column chromatography is used.
  • NMR analysis values were measured using EX-270 (270 MHz) manufactured by JEOL.
  • the HPLC analysis was performed under the following two conditions.
  • (Analysis condition A) ⁇ Column: YMC-Pack ODS-AM 150 * 6 mm ⁇ Flow rate: 1 mL / min.
  • analysis condition B Column: YMC Triart C18 75 * 2 mm ⁇ Flow rate: 0.3 mL / min.
  • Example 1-1 instead of using 135 mg of bis (Boc-iminobiotin) 22 and 36 mg of amine 23, 500 mg (0.49 mmol) of bis (Boc-iminobiotin) 22 and 36 mg (1.27 The reaction was carried out using an equivalent amount of amine 29 according to the synthesis method described in Example 1-1 to obtain 128 mg of bis (Boc-iminobiotin) 30.
  • Example 1-2 instead of using 15 mg (11.6 ⁇ mol) of amide 25, 15 mg (13.5 ⁇ mol) of bis (Boc-iminobiotin) -acetylene 30 synthesized in Example 2-1 was used. The reaction was carried out according to the synthesis method described in Example 1-2 to obtain 13.8 mg of trifluoroacetate salt of bisiminobiotin 31.
  • Example 1-1 instead of using 135 mg bis (Boc-iminobiotin) 22 and 36 mg amine 23, 355 mg (355 ⁇ mol) bis (Boc-iminobiotin) 32 and 55.2 ⁇ L (1.5 equivalents) ) was used according to the synthesis method described in Example 1-1 to obtain 55.6 mg of bis (Boc-iminobiotin) 33 as a target reaction product.
  • Example 3-1 Instead of using 15 mg (11.6 ⁇ mol) of amide 25 in Example 1-2, 5.1 mg (4.7 ⁇ mol) of bis (Boc-iminobiotin) 33 synthesized in Example 3-1 was used. The reaction was carried out according to the synthesis method described in 1-2 to obtain 5.2 mg of trifluoroacetate salt of bisiminobiotin 34.
  • Example 1-1 instead of using 135 mg of bis (Boc-iminobiotin) 22 and 36 mg of amine 23, 50 mg (50 ⁇ mol) of bis (Boc-iminobiotin) 32 and 15.0 ⁇ L (1.5 The reaction was carried out according to the synthesis method described in Example 1-1 to obtain 16.0 mg of bis (Boc-iminobiotin) -azide 36.
  • Example 1-2 instead of using 15 mg (11.6 ⁇ mol) of amide 25, 16 mg (13 ⁇ mol) of bis (Boc-iminobiotin) -azide 36 synthesized in Example 4-1 was used. The reaction was carried out according to the synthesis method described in Example 1-2 to obtain 14.5 mg of bis-biomino-azide trifluoroacetate salt.

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Abstract

本発明の技術課題は、ビスイミノビオチン部分と薬剤や蛍光化合物を簡便に結合するための構造を有する、ストレプトアビジンで標識化された物質への薬物送達用として有用なビスイミノビオチン化合物を提供することにある。本発明の技術課題を達成するビスイミノビオチン化合物は、下記一般式９で表される。 （式中、Ａ、Ｄ、Ｅは２つのビシクロ環を結合するスペーサーであり、Ｅは分岐をとることのできる構造を表し、それぞれ置換基を有してもよく、環構造を形成してもよい。Ｊはクリック反応を行うための官能基を表し、ＧはＥとＪを結合するスペーサーを表し、Ｒは、水素、アセチル基、ベンジル基、トリフルオロアセチル基またはＢｏｃ基を表す。）

Description

ビスイミノビオチン化合物の薬物送達用の用途
　本発明は、医薬の分野で有用な化合物である、ビスイミノビオチン化合物の薬物送達用の用途に関する。
　ビオチン（下記式１で表される）は生体内に存在する分子の一つであり、ストレプトアビジンと強固に結合する（Kd = 10-15 M）ことが知られ、生物学的研究に広く用いられている。
　これらの強力な相互作用を利用し、結合力が調整された改変型ビスビオチンとストレプトアビジンを利用した医薬への利用が知られている。
　イミノビオチン（下記式２で表される）は改変型ビオチンの一つであり、ビオチンの環状ウレア構造が環状グアニジンとなった化合物である。イミノビオチンはストレプトアビジンとの結合力を調整できる構造として用いられ、さらに一般式３で表されるビスイミノビオチン化合物が、プレターゲティング医薬に利用可能な構造として知られている（特許文献１）。
　現在までに、一般式３で表されるビスイミノビオチン化合物のスペーサーＶに結合する側鎖Ｗにはポリエチレングリコールやアミド結合を有するものがあり、その末端には蛍光化合物や薬剤の有効成分としての化合物を結合するためのアミンやカルボン酸を有するものが報告されている。しかしこれらの末端に蛍光化合物などを付ける際に、反応性の高い官能基を保護し、後から脱保護する必要があった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
　例えば、特許文献１記載の以下の式４、式５で表されるビスイミノビオチン化合物は分子内に蛍光団や薬剤を有しており、プレターゲッティング法に基づくドラッグデリバリーや診断技術に有用であると報告されている。しかしそれらの分子の合成には多段階を要し、合成終盤での官能基選択的な修飾や保護基の着脱が問題となる場合がある。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
　そのため、ビスイミノビオチン部分は共通で末端のみを簡便に変換可能な化合物の開発が必要であった。そこで、ビスイミノビオチン化合物の合成が多段階となり、工業的生産の観点からは改良の余地があり、ビスイミノビオチン部分と薬剤や蛍光化合物をより簡便に結合する手法が求められていた。
国際公開第２０１５／１２５８２０号
　しかしながら、ビスイミノビオチン部分と薬剤や蛍光化合物を簡便に結合するための手法は、従来技術には開示されていないのが現状である。
　本発明の技術課題は、ビスイミノビオチン部分と薬剤や蛍光化合物を簡便に結合するための構造を有する、ストレプトアビジンで標識化された物質への薬物送達用として有用なビスイミノビオチン化合物を提供することにある。
　本発明の課題を解決するために、本発明者らはK. B. Sharplessにより定義されるクリック反応を利用した分子デザインを考案した。
　クリック反応の中でアルキンとアジド基を反応させトリアゾールを形成するヒュスゲン環化は最も用いられる反応の一つである。ビスイミノビオチン末端にアルキンやアジド基を有した化合物を合成することで、煩雑な保護基の着脱なしで側鎖の末端を簡便に修飾することが可能になると考えた。
　本発明者は、以上の点に基づいて本発明にかかるビスイミノビオチン化合物の分子構造を得て本発明を完成した。
　本発明にかかるビスイミノビオチン化合物は、下記一般式９で表されることを特徴とする。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
（式中、Ａ、Ｄ、Ｅは２つのビシクロ環を結合するスペーサーであり、Ｅは分岐をとることのできる構造を表し、それぞれ置換基を有してもよく、環構造を形成してもよい。Ｊはクリック反応を行うための官能基を表し、ＧはＥとＪを結合するスペーサーを表し、Ｒは、水素、アセチル基、ベンジル基、トリフルオロアセチル基またはターシャリーブトキシカルボニル[以下、Ｂｏｃ]基を表す。）
　但し、以下の化合物１０－２４及び化合物１０－２５は、上記一般式９で示されるビスイミノビオチン化合物から除かれる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
　上記一般式９で表されるビスイミノビオチン化合物は、ストレプトアビジンで標識化された物質への薬物送達用基材として有用である。
　上記一般式９で表されるビスイミノビオチン化合物に薬物を結合させて得られる、薬物結合ビスイミノビオチン化合物は、ストレプトアビジンで標識化された物質への薬物送達剤としての使用することができる。
　上記一般式９で表されるビスイミノビオチン化合物を用いる、ストレプトアビジンで標識化された物質への薬物送達方法は、薬物送達用基材に薬物を結合させること、該薬物が結合した薬物送達用基材を前記ストレプトアビジンで標識化された物質に結合させて、該薬物送達用基材を介して前記ストレプトアビジンで標識化された物質に該薬物を結合すること、を含み、
　前記薬物送達用基材が、上記一般式９で表されるビスイミノビオチン化合物である、ことを特徴とする。
　上記一般式９で表されるビスイミノビオチン化合物は、ストレプトアビジンで標識化された物質への薬物送達用の薬物送達剤の製造方法における、薬物送達用基材として使用することができる。
　上記一般式９で表されるビスイミノビオチン化合物を用いる、ストレプトアビジンで標識化された物質への薬物送達用の薬物送達剤の製造方法は、一般式９で表されるビスイミノビオチン化合物に官能基Ｊを利用して薬物を結合させること、を含むことを特徴とする。
　薬物としては、生物活性物質又は蛍光化合物を用いることができる。
　本発明によれば、ビスイミノビオチン部分と薬剤を簡便に結合するための構造を有し、ストレプトアビジンで標識化された物質への薬物送達用として有用なビスイミノビオチン化合物を提供することができる。
　本発明にかかるビスイミノビオチン化合物の一形態によれば、以下の反応が可能となる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
　上記の反応において、式６で表されるビスイミノビオチン化合物のアルキン構造を有する末端と、式７で表される化合物のアジド基からなる末端を、銅触媒条件下に付すことで反応させることにより、トリアゾール環を有する末端を有する式８で表されるビスイミノビオチン化合物が得られる。
　式７、式８のＹとして、生物活性物質や蛍光化合物などの薬物を用いることができる。式８の化合物はその分子構造から、前述の式４や式５と同様に、プレターゲッティングや標的探索に利用可能である。
　クリック反応で頻繁に利用されるヒュスゲン環化反応は官能基選択的に起こることから、上記の反応における式６や式７の他の部分に保護基などの修飾を必要としない。そのため合成の最後に二つの分子を結合させることが可能となる。さらにビスイミノビオチン部分を共構造とし、アルキン構造とアジド基を入れ替えた化合物でも同様に反応できることから、化合物に合わせた柔軟な合成が可能となる。
　よって、式８の薬物送達剤の有効成分として有用なビスイミノビオチン化合物を合成するためには、薬物送達用基材としての式６のような化合物が必要となる。
　以下、本発明について詳細に説明する。
　薬物送達用基材として有用なビスイミノビオチン化合物は、以下の一般式９で表される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
（式中、Ａ、Ｄ、Ｅは２つのビシクロ環を結合するスペーサーであり、Ｅは分岐をとることのできる構造を表し、それぞれ置換基を有してもよく、環構造を形成してもよい。Ｊはクリック反応を行うための官能基を表し、ＧはＥとＪを結合するスペーサーを表し、Ｒは、水素、アセチル基、ベンジル基、トリフルオロアセチル基またはＢｏｃ基を表す。）
　但し、以下の化合物１０－２４及び化合物１０－２５は、上記一般式９で示されるビスイミノビオチン化合物から除かれる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
　上記で表されるビスイミノビオチン化合物を含み、ストレプトアビジンで標識化された物質への薬物送達に利用されることを特徴とする薬物送達用基材である。
　ＥのＡ、Ｄ及びＧと結合する部分としては、窒素原子、炭素原子、アミド基、ベンゼン環またはヘテロ環（例えばフラン環、ピリミジン環、ピロール環、ピリジン環など）を好ましく用いることができる。
　Ａ、Ｄ及びＥが有する環構造や置換基は、本発明の目的効果が得られる範囲において選択することができる。
　Ａ、Ｄ及びＥからなる部分としては、Ａがａ１－ａ２－ａ３－ａ４からなり、Ｄがｄ１－ｄ２－ｄ３－ｄ４からなり、Ａ－Ｅ－Ｄがａ１－ａ２－ａ３－ａ４－Ｅ－ｄ１－ｄ２－ｄ３－ｄ４で表され、ａ１、ａ２、ａ３、ａ４、Ｅ、ｄ１、ｄ２、ｄ３及びｄ４がそれぞれ独立して以下の表１の各欄から選択される部分が好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000026
　本発明において表１～表４に記載される「結合」は、隣接する基を直接結合する直接結合を意味する。
　Ａ－Ｅ－Ｄとしては、以下の表２～表４の組合せ１～１１３から選択される構造が好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000027
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000028
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000029
　本発明にかかるより好ましいビスイミノビオチン化合物として、以下の一般式（１０－１）～（１０－３８）で示される化合物を挙げることができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
　Ｇは、ＥとＪを連結する連結基であり、ｇ１－ｇ２－ｇ３－ｇ４－ｇ５－ｇ６－ｇ７で表され、ｇ１、ｇ２、ｇ３、ｇ４、ｇ５、ｇ６及びｇ７はそれぞれ独立して以下の表４の各欄から選択される連結基が好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000038
　表５におけるヘテロ環としては、例えばフラン環、ピリミジン環、ピロール環、ピリジン環などを挙げることができる。
　Ｇとして好ましい連結基として、以下に示す一般式（３－１）～（３－２２）で表される連結基を挙げることができる。
　なお、以下の各一般式では、Ｊ及びＥとの結合位置を示すために、Ｊ及びＥを表示しているが、ＧはこのＪ及びＥを除いた部分である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
　上記一般式３－１～３－２２において、－（ＣＨ２）ｍ－におけるｍはそれぞれ独立して１～６の整数を表し、－（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ－におけるｎはそれぞれ独立して１～９の整数を表す。
　Ｊはクリック反応を行うための官能基である。かかる官能基としては、アジド基、アルキン構造を有する基、テトラジン基、トランス－シクロオクチン基などを挙げることができる。これらの中では、アジド基及びアルキン構造を有する基が好ましく、ＧのＪとの結合部位の構造に応じて選択して用いることができる。
　アルキン構造を有する基としては、アルキニル基、アルキニルオキシ基、アルキニルアミノ基等を挙げることができ、これらの基に含まれるアルキニル基としてはエチニル基、プロパギル基等の炭素数２～３のアルキニル基を挙げることができる。
　好ましいアジド基及びアルキン構造を有する基としては、以下の式（４－１）～（４－１０）で表される各基を挙げることができる。なお、下記各式においてＧが表示されている位置はＧとの結合位置を示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
　化６の化合物でＲ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊの構造や置換基が本発明の目的効果が得られる範囲において選択することができる。
　Ｒとしては水素原子を好ましく用いることができる。
　Ａ、Ｄとしては、アルキル鎖もしくは置換基を持つアルキル鎖を有する以下の表６に示す６つの構造から選択された一つの構造であることがさらに好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000041
　Ｅとしては、ジアミノ安息香酸、モノアミノジ安息香酸またはベンジルアミンを中心骨格とする、以下の３つの構造から選択された一つの構造がさらに好ましい（但し、（Ａ）はＡへの結合を表し、（Ｄ）はＤへの結合を表し、（Ｇ）はＧへの結合を表す）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000042
　Ｇとしては、エチレングリコールを有する以下の表７に示す６つの構造から選択される一つの構造がさらに好ましい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000043
　Ｊとしては、アルキニル基またはアジド基を有する以下の３つの構造から選択される一つの構造がさらに好ましい（但し、（Ｇ）はＧへの結合を表す）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000044
　本発明にかかるビスイミノビオチン化合物としてさらに好ましい化合物を、以下の化合物１３－１～１３－２３に示す。
 
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000045
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000046
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000047
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000048
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000049
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000050
　スペーサー構造としてのＥは、以下の構造であることが特に好ましい（但し、（Ａ）ではＡへの結合を表し、（Ｄ）はＤへの結合を表し、（Ｇ）はＧへの結合を表す）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000051
　スペーサー構造として上記の構造からなるＥを有する、さらに好ましい化合物としては、上記の化合物１３－１、１３－２、１３－４及び１３－６を挙げることができる。
　本発明にかかる薬物送達剤は有効成分として、以下の一般式１４で表される薬物結合ビスイミノビオチンを含む。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000052
（式中、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｒは一般式９と同様に定義され、Ｋは薬物を表す。）
　誘導化に用いる薬物は、一般式９の官能基Ｊを利用して一般式９の化合物に結合可能な構造を有し、かつプレターゲティングに利用できる薬物なら特に限定されることはない。薬物としては生物活性物質または蛍光化合物を挙げることができる。
　生物活性物質の具体例としては、抗がん剤や中枢神経系用薬、免疫疾患薬、循環器用薬などがあげられる。
　また、蛍光化合物の具体例としては、クマリン類縁体やシアニン類縁体、ローダミン類縁体、フルオレセイン類縁体などがあげられる。
　薬物送達剤は、一般式９で表される化合物に加えて、製剤用の担体、賦形剤、溶媒等の希釈剤等を含んでもよい。　薬物送達剤によって、ヒトを含む動物等の生体内、または生体外にあるストレプトアビジンで標識化された物質あるいは部位への薬物の送達が可能となる。
　以下、一般式９で表される化合物の製造方法について説明する。
　一般式９の構造中のエステル結合やアミド結合は以下の反応によって形成することができる。
　一般式１５で表されるアミンと一般式１６で表されるカルボン酸との縮合により一般式１７のアミドを形成することができる。
　また、一般式９の構造中のＥとＧのアミド結合またはエステル結合は一般式１７と１８の縮合により形成することができる。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000053
　以下に一般式９の製造に利用し得る縮合反応の条件について記述する。
　縮合反応で使用される溶剤としては、N,N-ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、ジクロロメタン、1,4-ジオキサン、クロロホルム、トルエン、ベンゼンの何れか一つまたはこれらの２種以上を併用して用いることができる。
　溶媒として好ましくは、N,N-ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、1,4-ジオキサンの何れか一つまたはこれらの２種以上を併用して用いる。
　溶媒としてより好ましくは、N,N-ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタンまたは1,4-ジオキサンを単一溶媒として用いる。
　溶媒としてさらに好ましくは、N,N-ジメチルホルムアミド、アセトニトリルまたはテトラヒドロフランを単一溶媒として用いる。
　縮合反応の縮合剤としては、カルボジイミド系縮合剤（例えば、N,N'-ジシクロヘキシルカルボジイミド、N,N'-ジイソプロピルカルボジイミド、1-エチル-3-（3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩など）、ベンゾトリアゾール系縮合剤（例えば、O-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N′,N′-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、O-(ベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N′,N′-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファートなど）、トリアゾール系縮合剤（例えば、4-(4,6-ジメトキシ-1,3,5-トリアジン-2-イル)-4-メチルモルホリニウムクロリドなど）、ウロニウム型縮合剤（例えば、(1-シアノ-2-エトキシ-2-オキソエチリデンアミノオキシ)ジメチルアミノ-モルホリノ-カルベニウムヘキサフルオロリン酸塩など）の何れか一つまたはこれらの２種以上を併用して用いることができる。
　縮合剤として好ましくは、カルボジイミド系縮合剤、ベンゾトリアゾール系縮合剤、トリアゾール系縮合剤、ウロニウム型縮合剤の何れか一つを用いる。
　縮合剤としてより好ましくは、カルボジイミド系縮合剤、ベンゾトリアゾール系縮合剤、ウロニウム型縮合剤の何れか一つを用いる。
　縮合剤としてさらに好ましくは、O-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N′,N′-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、O-(ベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N′,N′-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート、(1-シアノ-2-エトキシ-2-オキソエチリデンアミノオキシ)ジメチルアミノ-モルホリノ-カルベニウムヘキサフルオロリン酸塩の何れか一つを用いる。
　縮合反応におけるカルボン酸の活性化には、酸ハロゲン化物（例えば、酸塩化物や酸フッ化物、酸臭化物など）、活性エステル（例えば、N-ヒドロキシコハク酸イミドエステル、N-ヒドロキシスルホコハク酸イミドエステル、1-アシルオキシ-7-アザベンゾトリアゾール、1-アシルオキシベンゾトリアゾールなど）の少なくとも１種を用いることができる。
　カルボン酸の活性化に、好ましくは、酸ハロゲン化物、コハク酸エステル、活性エステルの少なくとも１種を用いる。
　カルボン酸の活性化に、より好ましくは、酸塩化物、N-ヒドロキシコハク酸イミドエステル、N-ヒドロキシスルホコハク酸イミドエステルの少なくとも１種を用いる。
　カルボン酸の活性化に、さらに好ましくは、酸塩化物、N-ヒドロキシコハク酸イミドエステルの少なくとも１種を用いる。
　縮合反応の添加剤としては、3級アミン（例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリメチルアミンなど）、4-ジメチルアミノピリジン、イミダゾールの何れか一つまたはこれらの２種以上を併用して用いることができる。
　添加剤として好ましくは、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリメチルアミン、4-ジメチルアミノピリジンの何れか一つまたはこれらの２種以上を併用して用いる。
　添加剤としてより好ましくは、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、トリメチルアミン、4-ジメチルアミノピリジンの何れか一つを用いる。
　添加剤としてさらに好ましくは、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンを用いる。
　縮合反応の反応温度は、－78℃以上150℃以下、好ましくは、0℃以上150℃以下、更に好ましくは0℃以上50以下の範囲から選択することができる。
　縮合反応の反応基質濃度としては0.001 mol/Lから無溶媒の範囲、好ましくは、0.01 mol/Lから10 mol/Lの範囲から選択することができる。
　縮合反応の反応時間は1分から100時間の範囲、さらに好ましくは30分から24時間の範囲から選択することができる。
　縮合反応の精製には、結晶化、ろ過洗浄、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー等を用いることができる。
　好ましい精製方法として、結晶化、ろ過洗浄及びシリカゲルカラムクロマトグラフィーの少なくとも１種を用いる。
　以下、一般式１４で表される薬物送達用の化合物の製造方法について説明する。
　一般式１４のＧとＫの間の結合は以下の反応により形成することができる。
　例えば、一般式９’の構造中のＪがアルキンの場合には、一般式７で表されるアジドを反応させることで、一般式１８で表される構造を形成する。または一般式９’’の構造中のＪがアジドの場合には、一般式１９で表されるアジドを反応させることで一般式２０で表される構造を形成する。（但し、Ｙ、Ｚはアルキンまたはアジドと結合する生物活性物質や蛍光化合物の構造を表す）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000054
　以下に一般式１４の製造に利用し得る環化反応の条件について記述する。
　環化反応で使用される溶剤としては、N,N-ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、ジクロロメタン、1,4-ジオキサン、ジメチルスルホキシド、クロロホルム、トルエン、ベンゼン、水、酢酸、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ノルマル-ブチルアルコール、ターシャリー-ブチルアルコールの何れか一つまたはこれらの２種以上を併用して用いることができる。
　溶剤として好ましくは、N,N-ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、1,4-ジオキサン、クロロホルム、トルエン、ベンゼン、水、酢酸、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ノルマル-ブチルアルコール、ターシャリー-ブチルアルコールの何れか一つまたはこれらの２種以上を併用して用いる。
　溶剤としてより好ましくは、N,N-ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、1,4-ジオキサン、水、酢酸、メタノール、エタノール、ターシャリー-ブチルアルコールの何れか一つまたはこれらの２種以上を併用して用いる。
　溶剤としてさらに好ましくは、N,N-ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、1,4-ジオキサン、水、酢酸、エタノール、ターシャリー-ブチルアルコールの何れか一つを用いる。
　環化反応で使用される触媒としては、一価の銅塩（例えば、塩化銅(I)、臭化銅(I)、ヨウ化銅(I)、酢酸銅(I)など）、二価の銅塩（例えば、塩化銅(II)、臭化銅(II)、ヨウ化銅(II)、酢酸銅(II)、硫酸銅(II)など）、銀塩（塩化銀、臭化銀、ヨウ化銀、酢酸銀など）、ルテニウム塩の何れか一つまたはこれらの２種以上を併用して用いることができる。
　あるいは触媒を添加せずに環化反応を行ってもよい。
　触媒として好ましくは、一価の銅塩、二価の銅塩、銀塩の何れか一つまたはこれらの２種以上を併用して用いる。
　触媒としてさらに好ましくは、塩化銅(I)、臭化銅(I)、ヨウ化銅(I)、酢酸銅(I)、塩化銅(II)、臭化銅(II)、ヨウ化銅(II)、酢酸銅(II)、硫酸銅(II) の何れか一つを用いる。
　環化反応の添加剤としては、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸カリウム、アスコルビン酸カルシウムの何れか一つまたはこれらの２種以上を併用して用いることができる。あるいは、添加剤を添加せずに環化反応を行ってもよい。
　添加剤として好ましくは、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸カリウムの何れか一つを用いる。
　添加剤としてさらに好ましくは、アスコルビン酸ナトリウムを用いる。
　環化反応の反応温度は、－78℃以上150℃の範囲、好ましくは、0℃以上100℃以下の範囲、さらに好ましくは0℃以上60℃以下の範囲から選択することができる。
　環化反応の反応基質濃度は、0.001 mol/Lから無溶媒の範囲、好ましくは、0.01 mol/Lから10 mol/Lの範囲から選択することができる。
　環化反応の反応時間は、1分から168時間の範囲、好ましくは30分から24時間の範囲から選択することができる。
　環化反応の精製には、結晶化、ろ過洗浄、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィーを用いることができる。
　好ましい精製方法として、結晶化、ろ過洗浄、シリカゲルカラムクロマトグラフィーの少なくとも１種を用いる。
　以下に、本発明の実施例を記載するが、本発明はこれらによって制限されるものではない。NMR分析値は日本電子社製EX-270（270 MHz）を用いて測定した。
HPLC分析は、以下の2条件で分析を行った。
（分析条件Ａ）
・カラム：YMC-Pack　ODS-AM　150*6 mm
・流速：1 mL/min.
・カラム温度：40 ℃
・検出波長：254 nm
・移動相：0.1%トリフルオロ酢酸水溶液/アセトニトリル
（分析条件Ｂ）
・カラム：YMC Triart C18　75*2 mm
・流速：0.3 mL/min.
・カラム温度：35℃
・検出波長：254 nm
・移動相：0.1%トリフルオロ酢酸水溶液/アセトニトリル
　グラジュエント条件は、例えば0.1%トリフルオロ酢酸水溶液/アセトニトリル = 85/15（12分）35/65と記載するが、0.1%トリフルオロ酢酸水溶液を85%から35%に12分かけて減少させ、そのあと85%に戻す条件を表す。
　以下に実施例を合成フロー（反応式）として記載する。
［実施例１－１］
（ビス（Boc-イミノビオチン）化合物24の合成）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000055
　135 mg (0.13 mmol) のビス（Boc-イミノビオチン）22に1 mLの脱水ジメチルホルムアミドを加え、さらに22 mg（1.05当量）のカルボニルジイミダゾールを加えた。40 ℃で1時間撹拌し、0.7 mLの脱水クロロホルムに溶解させた36 mg (1当量)のアミン 23（Shigma-Aldrich、CAS No; 1255942-06-3)　を加え、室温で5時間撹拌した。反応終了後、減圧濃縮し10 mLのクロロホルムを加え、0.1 N塩酸でpH 5に調整した。沈殿物が生じ、水とクロロホルムを除去した。沈殿物をメタノールに溶解し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して残渣を得た。シリカゲルカラム (クロロホルム／メタノール = 20/1から5/1）で精製し、128 mgのアミド24 を得た。（収率75%）
（目的反応生成物の分析値）
　1H-NMR (DMSO-d6)：8.2 (1H, br.t), 8.0 (1H, s), 7.95 (1H, s), 7.75 (2H, t), 7.3-7.7 (12H, m), 5.05 (1H, d), 4.55-4.65 (2H, m), 4.3-4.4 (3H, m), 4.1 (1H, m), 3.64 (1H, d), 3.4-3.5 (4H, m), 3.2-3.3 (2H, m), 3.16 (4H, d), 2.95-3.1 (4H, br.t), 2.8-2.9 (4H, m), 2.5-2.6 (1H, m), 2.2-2.35 (4H, t), 2.0-2.1 (4H, t), 1.8-2.0 (1H, m), 1.2-1.7 (24H, m), 1.4 (18H, s)
　HPLC保持時間（分析条件A）；14.7分（0.1％トリフルオロ酢酸水溶液／アセトニトリル = 85/15（18分）5/95）
［実施例１－２］
（ビスイミノビオチン化合物26の合成）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000056
　実施例１－１で合成した15 mg (11.6 μmol) のアミド 25 に0.5 mLのトリフルオロ酢酸を加え、室温で1時間撹拌した。反応液を60 ℃で減圧濃縮することで、13.3 mgのビスイミノビオチン 26 のトリフルオロ酢酸塩を得た。（収率95%）
（目的反応生成物の分析値）
　1H-NMR (DMSO-d6)：10.0 (2H, s), 8.2 (1H, br.t), 8.0 (1H, s), 7.95 (1H, s), 7.75 (2H, t), 7.72-7.3 (15H, m), 5.05 (1H, d), 4.61-4.55 (2H, m), 4.47-4.40 (3H, m), 4.19 (1H, m), 3.60 (1H, d), 3.53-3.43 (4H, m), 3.34-3.22 (2H, m), 3.16 (4H, d), 3.11-2.89 (4H, br.t), 2.82-2.75 (4H, m), 2.61-2.57 (1H, m), 2.30 (4H, t), 2.05 (4H, t), 1.98-1.90 (1H, m), 1.72-1.27 (24H, m)
　HPLC保持時間（分析条件A）；10.3分（0.1％トリフルオロ酢酸水溶液／アセトニトリル = 85/15（18分）5/95）
［実施例１－３］
（ビスイミノビオチン-フルオロセイン化合物28の合成）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000057
　実施例１－２で合成した13 mg（12 μmol）のビスイミノビオチン26のトリフルオロ酢酸塩を1mLの脱水ジメチルホルムアミドに溶解し、0.72 mLのクロロホルム溶液を加えた。さらに、 11 mg（2当量）の6-カルボキシフルオロセインアジド27のクロロホルム溶液を加えた。室温で1夜撹拌した後、反応液を60 ℃で減圧濃縮した。残渣を2 mLの 1 規定塩酸水溶液で二回洗浄した後、減圧乾燥してアモルファス状の25 mgのビスイミノビオチン-フルオロセイン28を得た。
1H-NMR (DMSO-d6)：10.4 (1H, br.s), 10.0 (2H, s), 8.3 (3H, m), 8.1 (1H, d), 8.0 (1H, s), 7.95 (1H, s), 7.75 (2H, t), 7.72-7.3 (15H, m), 7.53 (1H, d), 7.00 (1H, d), 6.46 (1H, d), 6.22 (3H, m), 6.11 (1H, d), 5.05 (2H, m), 4.61-4.55 (2H, m), 4.47-4.40 (3H, m), 4.19 (1H, m), 3.60 (1H, d), 3.53-3.43 (6H, m), 3.34-3.22 (2H, m), 3.16 (4H, d), 3.11-2.89 (4H, br.t), 2.82-2.75 (4H, m), 2.62-2.57 (3H, m), 2.30 (4H, t), 2.05 (4H, t), 1.98-1.90 (1H, m), 1.72-1.27 (24H, m)
　HPLC保持時間（分析条件A）；12.6分（0.1％トリフルオロ酢酸水溶液/アセトニトリル = 85/15（18分）5/95）
［実施例２－１］
（ビス（Boc-イミノビオチン)化合物 30の合成）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000058
　実施例１－１において、135 mg のビス（Boc-イミノビオチン）22と36 mgのアミン 23を使用する代わりに、500 mg（0.49 mmol）のビス（Boc-イミノビオチン）22と36 mg（1.27等量）のアミン29を用い、実施例１－１記載の合成法に従って反応を行い、128 mgのビス（Boc-イミノビオチン) 30 を得た。（収率49%）
（目的反応生成物の分析値）
　1H-NMR (DMSO-d6)：9.97 (2H, s), 8.4 (1H, br.t), 8.0 (1H, s), 7.95 (1H, s), 7.74 (2H, t), 7.65 (3H, d), 4.6-4.5 (2H, m), 4.35-4.25 (2H, m), 4.16 (2H, d), 4.1 (1H, m), 3.56 (2H, t), 3.45-3.35 (3H, m), 3.25-3.15 (1H, m), 2.95-3.1 (4H, br.q), 2.9-2.75 (4H, m), 2.45-2.2 (4H, t), 2.1-2.0 (4H, t), 1.2-1.7 (24H, m), 1.4 (18H, s)
　HPLC保持時間（分析条件A）；11.3分（0.1％トリフルオロ酢酸水溶液／アセトニトリル = 85/15（12分）5/95）
［実施例２－２］
（ビスイミノビオチン化合物31の合成）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000059
　実施例１－２において、15 mg (11.6 μmol) のアミド 25を使用する代わりに、実施例２－１で合成した15 mg（13.5 μmol）のビス（Boc-イミノビオチン）-アセチレン30を用い、実施例１－２記載の合成法に従って反応を行い、13.8 mgのビスイミノビオチン 31 のトリフルオロ酢酸塩を得た。（収率100%）
（目的反応生成物の分析値）
　1H-NMR (DMSO-d6)：9.99 (2H, s), 8.40 (1H, t), 8.35 (2H, s), 8.09 (1H, s), 7.79 (2H, t), 7.70 (4H, br.s), 7.66 (2H, s), 4.65-4.61 (2H, m), 4.47-4.42 (2H, m), 4.16 (2H, d), 3.56 (2H, t), 3.45-3.38 (3H, m), 3.27-3.20 (2H, m), 3.06 (4H, q), 2.94-2.73 (4H, m), 2.31 (4H, t), 2.06 (4H, t), 1.71-1.24 (24H, m)
HPLC保持時間（分析条件A）；9.68分（0.1％トリフルオロ酢酸水溶液／アセトニトリル = 85/15（12分）5/95）
［実施例３－１］
（ビス（Boc-イミノビオチン)化合物33の合成）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000060
　実施例１－１において、135 mg のビス（Boc-イミノビオチン）22と36 mgのアミン 23を使用する代わりに、355mg（355 μmol）のビス（Boc-イミノビオチン) 32と55.2 μL（1.5当量）のアミン29 を用い、実施例１－１記載の合成法に従って反応を行い、55.6 mgの目的反応生成物としてのビス（Boc-イミノビオチン) 33を得た。（収率15%）
（目的反応生成物の分析値）
　1H-NMR (DMSO-d6)：9.99 (2H, s), 8.39 (1H, br.t), 8.07 (1H, s), 7.93 (2H, s), 7.77 (2H, t), 7.65 (4H, br.s), 4.53-4.84 (2H, m), 4.27-4.23 (2H, m), 4.17 (2H, d), 3.56 (2H, t), 3.44-3.38 (3H, m), 3.21-3.14 (2H, m), 3.09-3.01 (4H, br.q), 2.83-2.80 (4H, m), 2.31 (4H, t), 2.05 (4H, t), 1.62-1.42 (20H, m), 1.36 (18H, s)
　HPLC保持時間（分析条件B）；4.99分（0.1％トリフルオロ酢酸水溶液／アセトニトリル = 85/15（7分）5/95）
［実施例３－２］
（ビスイミノビオチン化合物34の合成）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000061
　実施例１－２において、15 mg (11.6 μmol) のアミド 25を使用する代わりに、実施例３－１で合成した5.1 mg（4.7 μmol）のビス（Boc-イミノビオチン）33を用い、実施例１－２記載の合成法に従って反応を行い、 5.2 mgのビスイミノビオチン34のトリフルオロ酢酸塩を得た。（収率100%）
（目的反応生成物の分析値）
　1H-NMR (DMSO-d6)：10.00 (2H, s), 8.40 (1H, t), 8.35 (2H, s), 8.07 (1H, s), 7.79 (2H, t), 7.70 (4H, br.s), 7.66 (2H, s), 4.66-4.61 (2H, m), 4.47-4.42 (2H, m), 4.16 (2H, d), 3.56 (2H, t), 3.45-3.39 (3H, m), 3.27-3.20 (2H, m), 3.05 (4H, q), 2.94-2.73 (4H, m), 2.31 (4H, t), 2.06 (4H, t), 1.71-1.24 (20H, m)
　HPLC保持時間（分析条件B）；3.76分（0.1％トリフルオロ酢酸水溶液／アセトニトリル = 85/15（7分）5/95）
［実施例４－１］
（ビス（Boc-イミノビオチン) -アジド化合物36の合成）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000062
　実施例１－１において、135 mg のビス（Boc-イミノビオチン）22と36 mgのアミン 23を使用する代わりに、50 mg（50 μmol）のビス（Boc-イミノビオチン)  32と15.0 μL（1.5当量）のアミン35 を用い、実施例１－１記載の合成法に従って反応を行い、16.0 mgのビス（Boc-イミノビオチン) -アジド　36を得た。（収率27%）
（目的反応生成物の分析値）
　1H-NMR (DMSO-d6)：10.0 (2H, s), 8.35 (1H, t), 8.05 (1H, s), 7.93 (2H, s), 7.77 (2H, t), 7.66 (4H, m), 4.55 (2H, m), 4.27 (2H, m), 3.54-3.51 (12H, m), 3.39-3.37 (2H, m), 3.18-3.16 (2H, m), 3.06-3.04 (4H, m), 2.83-2.75 (4H, m), 2.30 (4H, t), 2.05 (4H, t), 1.70-1.41 (22H, m), 1.35 (18H, s)
　HPLC保持時間（分析条件B）；5.64分（0.1％トリフルオロ酢酸水溶液／アセトニトリル = 85/15（7分）20/80）
［実施例４－２］
（ビスイミノビオチン-アジド化合物37の合成）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000063
　実施例１－２において、15 mg (11.6 μmol) のアミド 25を使用する代わりに、実施例４－１で合成した16 mg（13 μmol) のビス（Boc-イミノビオチン）-アジド36を用い、実施例１－２記載の合成法に従って反応を行い、14.5 mgのビスイミノビオチン-アジド37 のトリフルオロ酢酸塩を得た。（収率100%）
（目的反応生成物の分析値）
　1H-NMR (DMSO-d6)：10.00 (2H, s), 8.47-8.44 (1H, m), 8.35 (1H, m), 8.21 (2H, m), 8.05 (1H, m), 7.81-7.76 (5H, m), 7.67 (2H, d), 4.66-4.61 (2H, m), 4.47-4.42 (2H, m), 3.60-3.50 (12H, m), 3.57 (2H, m), 3.25 (2H, m), 3.05 (4H, q), 2.94-2.75 (4H, m), 2.31 (4H, t), 2.06 (4H, t), 1.71-1.24 (22H, m)
　HPLC保持時間（分析条件B）；4.34分（0.1％トリフルオロ酢酸水溶液／アセトニトリル = 85/15（7分）20/80）
 

Claims (13)

  1. 　ストレプトアビジンで標識化された物質への薬物送達用基材であって、下記一般式９で表されるビスイミノビオチン化合物を含むことを特徴とする薬物送達用基材：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     （式中、Ａ、Ｄ、Ｅは２つのビシクロ環を結合するスペーサーであり、Ｅは分岐をとることのできる構造を表し、それぞれ置換基を有してもよく、環構造を形成してもよい。Ｊはクリック反応を行うための官能基を表し、ＧはＥとＪを結合するスペーサーを表し、Ｒは、水素、アセチル基、ベンジル基、トリフルオロアセチル基またはＢｏｃ基を表す。）
    　但し、以下の化合物１０－２４及び化合物１０－２５： 
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     を除く。
  2. 　一般式９において、
    ＲはＨであり、
    Ａ及びＤは、以下の表の４つの構造のうちの一つであり、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
     Ｅは、以下の３つの構造（但し、（Ａ）はＡへの結合を表し、（Ｄ）はＤへの結合を表し、（Ｇ）はＧへの結合を表す）の何れか一つであり、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
     　Ｇは、以下の表の６つの構造の何れか一つであり、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
     　Ｊは以下の３つの構造（（Ｇ）はＧへの結合を表す）の何れか一つである、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
     請求項１に記載の薬物送達用基材。
  3. 　Ｅが以下の構造（但し、（Ａ）はＡへの結合を表し、（Ｄ）はＤへの結合を表し、（Ｇ）はＧへの結合を表す）である、請求項２記載の薬物送達用基材。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
  4. 　ビスイミノビオチン化合物が以下の化合物１３－１～１３－２３から選択される１つである、請求項２に記載の薬物送達用基材。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
  5. 　ビスイミノビオチン化合物が、以下の何れか一つの化合物である、請求項４記載の薬物送達用基材。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
  6. 　ストレプトアビジンで標識化された物質への薬物送達用の薬物送達剤であって、一般式１４
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
     （式中、
    　Ａ、Ｄ、Ｅは２つのビシクロ環を結合するスペーサーであり、ＧはＥとＫを結合するスペーサーを表し、
    　Ａ及びＤは、以下の表の４つの構造のうちの一つであり、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-T000016
     　Ｅは、以下の３つの構造（但し、（Ａ）はＡへの結合を表し、（Ｄ）はＤへの結合を表し、（Ｇ）はＧへの結合を表す）の何れか一つであり、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
     　Ｇは、以下の表の６つの構造の何れか一つであり、
    Figure JPOXMLDOC01-appb-T000018
     　ＲはＨであり、
    　Ｋは薬物を表す。）
    で表される、薬物結合ビスイミノビオチン化合物を含むことを特徴とする薬物送達剤。
  7. 　請求項１乃至５のいずれか１項に記載のビスイミノビオチン化合物の、ストレプトアビジンで標識化された物質への薬物送達用基材としての使用。
  8. 　請求項６に記載の薬物結合ビスイミノビオチン化合物の、ストレプトアビジンで標識化された物質への薬物送達用の薬物送達剤としての使用。
  9. 　ストレプトアビジンで標識化された物質への薬物送達方法であって、薬物送達用基材に薬物を結合させること、該薬物が結合した薬物送達用基材を前記ストレプトアビジンで標識化された物質に結合させて、該薬物送達用基材を介して前記ストレプトアビジンで標識化された物質に該薬物を結合すること、を含み、
    　前記薬物送達用基材が、請求項１乃至５のいずれか１項に記載のビスイミノビオチン化合物である、ことを特徴とする薬物送達方法。
  10. 　ストレプトアビジンで標識化された物質への薬物送達用の薬物送達剤の製造方法であって、請求項１乃至５のいずれか１項に記載のビスイミノビオチン化合物に官能基Ｊを利用して薬物を結合させること、を含むことを特徴とする、薬物送達剤の製造方法。
  11. 　前記薬物が、生物活性物質又は蛍光化合物である、請求項１０に記載の薬物送達用の化合物の製造方法。
  12. 　ストレプトアビジンで標識化された物質への薬物送達用の薬物送達剤の製造方法における、請求項１乃至５のいずれか１項に記載のビスイミノビオチン化合物の使用。
  13. 　前記薬物が、生物活性物質又は蛍光化合物である、請求項１２に記載の使用。
     
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