WO2017116045A1 - 황칠나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 갱년기 질환 예방 및 치료용 조성물 - Google Patents

황칠나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 갱년기 질환 예방 및 치료용 조성물 Download PDF

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WO2017116045A1
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hwangchil
extract
preventing
tree
menopausal
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PCT/KR2016/014652
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박영준
장민선
오성문
김성환
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아주대학교 산학협력단
제삼바이오잠(주)
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/25—Araliaceae (Ginseng family), e.g. ivy, aralia, schefflera or tetrapanax
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/24—Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones

Definitions

  • the present invention is a Hwangchil wood ( Dendropanax Morbifera LEV.)
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing and treating menopausal diseases, and a health food for preventing and improving the diseases.
  • menopausal is a type of endocrine syndrome refers to a transition period in which the physiological function and sexual function is reduced or lost due to a decrease in female hormone, ie, estrogen, due to the gradual aging of ovarian function.
  • Symptoms of menopausal symptoms include vascular changes such as hot flashes, tachycardia, sweating or headaches, symptoms of musculoskeletal changes such as myalgia, arthralgia and back pain, and symptoms of urogenital changes such as urinary or urinary incontinence.
  • there are symptoms caused by changes in the brain's nervous system such as memory loss, depression, concentration decline, and dizziness.
  • symptoms such as decreased vision and changes in skin and hair occur, and women such as osteoporosis or cardiovascular diseases caused by hormonal changes. It can also cause fatal diseases.
  • Estrogens have a variety of biological functions, including increased cell numbers and differentiation.
  • the biological actions of estrogens are exerted through two estrogen receptor alpha (ER- ⁇ ) and estrogen receptor beta (ER- ⁇ ) belonging to the nuclear receptor superfamily (Nilsson et al. , 2001, Physiol. Rev., 81 (4): 1535-1565.).
  • the mechanism of action of the estrogen receptor (ER) is a combination of estrogen and intracellular estrogen receptors to form dimers of the receptors, which are located in specific estrogen response promoters located in the promoters of the target genes. elements, EREs) to regulate expression of target genes.
  • Yellow Chilli ( Dendropanax) morbifera LEV.) is an evergreen broad-leaved arborescent tree belonging to the elm tree, which is native to Korea and grows along the south and west coasts of Jeju, Wando, Bogildo, and Haenam.
  • Cloves contained in Hwangchil Tree contain small amount of Terpene and Sesquiterpene, which are different depending on the time and place of collection, but germacrene-d, ⁇ -selinene, ⁇ -amorphene , ⁇ -selinene, ⁇ -cadinene, ⁇ -cadinene, T-muurolol, ⁇ -elemene, bicyclo [4,4,0] dec-1-en-2-isopropyl-5-methyl-9-methylene, ⁇ -cadinene , germacrene-B, ⁇ -copaene, ⁇ -humulene, ⁇ -cadinene and small amounts of linalool L, ⁇ -terpinene, ⁇ -cubebene, ⁇ -y GmbHe, (+)-calarene, 3,7-guaiadine, (-)- It contains isoledene, ⁇ -cubebene, limonene, aromadendrene, ca
  • Hwangchil-tree has been reported to be effective in detoxifying alcohol, treating jaundice and jaundice, treating burns and leprosy, and is harmless to humans (Lee Si-jin, Herbal Medicine, Chinese Moonlight Book, 1590), and is known to show sedative and tonic effects (Research on Unique Global Agricultural Products Globalized Products (Hwang Chil-pyeon), Jeollanam-do, 1996).
  • the leaf extract fraction has been found to have a slightly weaker antioxidant activity than the anti-cancer action and ⁇ -tocopherol (Patent Publication No. 2000-0004499, Park Ho-geun, et al., 1998), but the effect on female menopausal is not known at all. .
  • the present inventors have made efforts to develop a safe substance for treating human menopausal diseases derived from natural products, and as a result, the extract of Hwangchil-tree showed significant ER agonist activity in the cell, and the EC 50 value was about 100 ⁇ g / ml.
  • the present invention has been completed by revealing that it can be used as an alternative therapy.
  • An object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing and treating female menopausal diseases, and a health food for preventing and improving the disease, comprising an extract of Hwangchil ( Dendropanax morbifera LEV.) As an active ingredient.
  • Hwangchil Dendropanax morbifera LEV.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing and treating female menopausal diseases containing the extract of Hwangchil wood ( Dendropanax morbifera LEV.) As an active ingredient.
  • the present invention provides a health food for preventing and improving women's menopausal disease containing the extract of Hwangchil wood as an active ingredient.
  • the present invention also provides a method for preventing or ameliorating female menopausal disease, comprising administering a pharmaceutically effective amount of the extract of Hwangchil tree to a subject.
  • the present invention also provides a method for treating female menopausal disease, comprising administering a pharmaceutically effective amount of Hwangchil-tree extract to a subject.
  • the present invention also provides the use of the Hwangchil-tree extract for use as a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of female menopausal diseases.
  • the present invention provides a use of the Hwangchil wood extract for use as a health food for preventing and improving women's menopausal disease.
  • Hwangchil wood of the present invention Dendropanax morbifera LEV.
  • Hwangchil-tree extract which contains high amounts of plant metabolites, can be used as a hormone replacement therapy to improve various symptoms caused by estrogen deficiency in menopausal women.
  • FIG. 1 is a diagram showing an overview of ER-ERE luciferase activity assay (luciferase assay).
  • Figure 2 is a diagram confirming the degree of uterine growth by extracting the uterus after administration of Hwangchil-tree extract or E2 to the rat ovary to remove the estrogen.
  • the present invention is a Hwangchil wood ( Dendropanax Provided is a pharmaceutical composition for preventing and treating female menopausal diseases containing morbifera LEV.) extract as an active ingredient.
  • Hwangchil wood extract is an active ingredient of the present invention is preferably prepared by a method comprising the following steps, but is not limited thereto:
  • the hwangchil wood of step 1) can be used without limitation those grown or commercially available.
  • the extraction solvent of step 1) is preferably water, alcohol or a mixture thereof.
  • the alcohol C 1 to C 2 lower alcohols are preferably used, and as lower alcohols, ethanol or methanol is preferably used.
  • the extraction method it is preferable to use shaking extraction, Soxhelt extraction or reflux extraction, but is not limited thereto.
  • the extraction solvent is washed and preferably dried by adding 1 to 15 times the amount of the dried sapling leaves, stems, roots or the collected sap, and more preferably by adding 2 to 10 times.
  • the extraction temperature is preferably 20 ° C to 110 ° C, most preferably 30 ° C to 105 ° C, but is not limited thereto.
  • the extraction time is preferably 1 to 72 hours, more preferably 2 to 48 hours, most preferably 2 to 5 hours, but is not limited thereto.
  • the number of extraction is preferably 1 to 5 times, more preferably 3 to 4 repetitions, and most preferably 3 times, but is not limited thereto.
  • the reduced pressure concentration of step 3) is preferably a vacuum reduced pressure concentrator or a vacuum rotary evaporator, but is not limited thereto.
  • the drying is preferably reduced pressure drying, vacuum drying, boiling drying, spray drying or freeze drying, but is not limited thereto.
  • sap obtained from sapwood is sap, it is preferable to extract with water or a low-cost alcohol, but may be mixed with the powdered excipient in sap.
  • the female menopausal disease is a general term for symptoms and diseases that appear in women before and after menopause as estrogen secretion decreases due to aging of the ovary, hot flashes, sweating, dry skin, vaginal dryness, vaginal atrophy, and lower urethral atrophy.
  • Vaginitis, cystitis, urination pain, urination, concentration disorders, short-term memory disorders, anxiety, nervousness, memory loss, muscle pain, joint pain or osteoporosis is preferably, but not limited to.
  • the composition exhibits estrogen receptor agonist activity, thus having a therapeutic effect on female menopausal disease.
  • the present inventors after preparing the Hwangchil-tree extract, to determine the ER agonist or antagonist activity of the Hwangchil-tree extract, a plasmid comprising ERE-Luciferase After transfection into cells, after treatment with the Hilchi chinensis extract, the degree of luminescence of the product produced by enzymatic digestion of luciferin was quantitatively measured using a luminometer. Efficacy of more than 50% was shown compared to E2 at a concentration of 100 ⁇ g / ml, and 80% of E2 was shown at a concentration of 200 ⁇ g / ml. Thus, the yellow lacquer extract was found to be a very powerful ER agonist (full agonist) with an EC 50 value of about 100 ⁇ g / ml (see Table 1).
  • the present inventors confirmed the antagonistic activity of the extract of Hwangchil-tree, it was confirmed that the Hwangchil-tree extract does not affect the activity of the ER agonist E2 at three test concentrations (50, 100, 200 ⁇ g / ml) ( See Table 2).
  • Hwangchil-tree extract alone or E2 and Hwangchil-tree extract in the menopausal disease animal model rats from which the ovaries were removed to remove physiologically produced estrogen.
  • Uterine proliferation was shown in the group administered alone, and uterine proliferation was higher in the group treated with E2 and Hwangchil-tree extracts. Therefore, Hwangchil-tree extract had estrogen activity and did not affect the activity of the ER agonist in E2. (See Table 3 and FIG. 2).
  • the extract of Hilchi chinensis of the present invention exhibits significant ER agonist activity in cells and in vivo, and has an EC 50 value of about 100 ⁇ g / ml, resulting in a very strong ER agonist activity.
  • Hwangchil-tree extract which contains high amounts of similar plant metabolites, may be usefully used as an active ingredient of pharmaceutical compositions that can prevent or treat various symptoms caused by estrogen deficiency in menopausal women.
  • compositions of the present invention may be oral or parenteral (eg, applied or intravenous, subcutaneous, intraperitoneal), but oral administration is preferred.
  • parenteral administration include powders, granules, tablets, capsules, sterile aqueous solutions, solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, syrups, suppositories, aerosols, etc. It may be used in the form of a formulation, and preferably, an external skin pharmaceutical composition of a cream, a gel, a patch, a spray, an ointment, a warning, a lotion, a linen, a pasta, or a cataplasm may be prepared and used. However, it is not limited thereto.
  • compositions of topical administration may be anhydrous or aqueous, depending on the clinical prescription.
  • non-aqueous solvent and suspending agent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate and the like can be used.
  • base of the suppository witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
  • Solid form preparations for oral administration include powders, granules, tablets, capsules, soft capsules, pills and the like.
  • Oral liquid preparations include suspensions, solvents, emulsions, syrups, and aerosols.
  • various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives may be included.
  • the composition may be prepared by including one or more pharmaceutically acceptable carriers in addition to the extract of Hilchi chinensis for administration.
  • Pharmaceutically acceptable carriers may be used in combination with saline, sterile water, Ringer's solution, buffered saline, dextrose, maltodextrin, glycerol, ethanol and one or more of these components, as necessary, including antioxidants, buffers and bacteriostatic agents. And other conventional additives may be added.
  • diluents, dispersants, surfactants, binders and lubricants may be additionally added to formulate injectable formulations such as aqueous solutions, suspensions, emulsions and the like.
  • the pharmaceutically acceptable additive according to the present invention is preferably included 0.1 to 90 parts by weight based on the composition.
  • Preferred dosages of the compositions of the present invention vary depending on the degree of absorption of the active ingredient in the body, the age, sex and obesity of the patient, but may be appropriately selected by those skilled in the art. For the desired effect, however, in the case of oral administration, it is generally advisable to administer the composition of the present invention to an adult at 0.0001 to 100 mg / kg, preferably 0.001 to 100 mg / kg per day, per kilogram of body weight per day. good. Administration may be administered once a day or may be divided several times. The dosage does not limit the scope of the invention in any aspect.
  • composition of the present invention may further contain at least one active ingredient exhibiting the same or similar function in addition to the hwangchil wood extract.
  • the present invention provides a health food for preventing and improving women's menopausal disease containing the extract of Hwangchil wood as an active ingredient.
  • Hwangchil-tree extract of the present invention exhibits significant ER agonist activity in cells and in vivo, and has an EC 50 value of about 100 ⁇ g / ml, resulting in a very potent ER agonist activity, resulting in high estrogen-like plant metabolites.
  • Hwangchil tree extract containing the content can be useful as an active ingredient of health foods that can prevent or improve the various symptoms caused by estrogen deficiency in menopausal women.
  • Hwangchil wood extract of the present invention may be provided as a food composition by mixing with a food-acceptable carrier.
  • the Hwangchil-tree extract of the present invention When using the Hwangchil-tree extract of the present invention as a food or beverage additive, the Hwangchil-tree extract may be added as it is or used together with other food or food ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method.
  • the mixed amount of the hwangchil tree extract may be appropriately determined according to the purpose of use (prevention, health or therapeutic treatment). In the case of long-term intake for health and hygiene or for health control, the hwangchil tree extract can be taken for a long time because there is no problem in terms of safety. There is no particular limitation on the kind of food.
  • Examples of the food to which the substance can be added include meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, dairy products including other noodles, gum, ice cream, various soups, drinks, tea, and drinks. Alcoholic beverages and vitamin complexes.
  • the liquid component added in addition to the Hwangchil tree extract when formulated into a beverage is not limited to the above, but may contain various flavors or natural carbohydrates, etc. as additional ingredients, as in conventional beverages.
  • Examples of the aforementioned natural carbohydrates include monosaccharides (e.g. glucose, fructose, etc.), disaccharides (e.g. maltose, sucrose, etc.) and polysaccharides (e.g.
  • natural carbohydrates is generally about 1-20 g, preferably about 5-12 g per 100 ml of the composition of the present invention.
  • natural flavoring agents taumarin, stevia extract (e.g., Rebaudioside A, glycyrzin, etc.)
  • synthetic flavoring agents e.g., saccharin, aspartame, etc.
  • the food composition of the present invention is a nutrient, colorant and enhancer (cheese, chocolate, etc.), pectic acid and salts thereof, organic acids of various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), synthetic flavors and natural flavors, etc. , Protective colloid thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated drinks, and the like.
  • the food composition of the present invention may also contain pulp for the production of fruit and vegetable drinks. These components may be used alone or in combination, and the proportion of such additives is generally selected in the range of 0.001 to 50 parts by weight per total weight of the composition.
  • the present invention also provides a method for preventing or ameliorating female menopausal disease, comprising administering a pharmaceutically effective amount of the extract of Hwangchil tree to a subject.
  • the hwangchil wood extract is preferably extracted with water, C 1 to C 2 lower alcohol or a mixed solvent thereof, the lower alcohol is preferably ethanol or methanol.
  • sap obtained from sapwood is sap, it is preferable to extract with water or a low-cost alcohol, but may be mixed with the powdered excipient in sap.
  • the female menopausal disease is a general term for symptoms and diseases that appear in women before and after menopause as estrogen secretion decreases due to aging of the ovary, hot flashes, sweating, dry skin, vaginal dryness, vaginal atrophy, and lower urethral atrophy.
  • Vaginitis, cystitis, urination pain, urination, concentration disorders, short-term memory disorders, anxiety, nervousness, memory loss, muscle pain, joint pain or osteoporosis is preferably, but not limited to.
  • the extract of Hwangchil-tree exhibits estrogen receptor agonist activity, and has a therapeutic effect on female menopausal disease.
  • Hwangchil-tree extract of the present invention exhibits significant ER agonist activity in cells and in vivo, and has an EC 50 value of about 100 ⁇ g / ml, resulting in a very potent ER agonist activity, resulting in high estrogen-like plant metabolites.
  • Hwangchil tree extract, which is included in the content, can be useful for preventing or ameliorating various symptoms caused by estrogen deficiency in menopausal women.
  • the present invention also provides a method for treating female menopausal disease, comprising administering a pharmaceutically effective amount of Hwangchil-tree extract to a subject.
  • Hwangchil-tree extract of the present invention exhibits significant ER agonist activity in cells and in vivo, and has an EC 50 value of about 100 ⁇ g / ml, resulting in a very potent ER agonist activity, resulting in high estrogen-like plant metabolites.
  • Hwangchil tree extract, which is included in the content, can be useful for treating various symptoms caused by estrogen deficiency in menopausal women.
  • the present invention also provides the use of the Hwangchil-tree extract for use as a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of female menopausal diseases.
  • the hwangchil wood extract is preferably extracted with water, C 1 to C 2 lower alcohol or a mixed solvent thereof, the lower alcohol is preferably ethanol or methanol.
  • sap obtained from sapwood is sap, it is preferable to extract with water or a low-cost alcohol, but may be mixed with the powdered excipient in sap.
  • the female menopausal disease is a general term for symptoms and diseases that appear in women before and after menopause as estrogen secretion decreases due to aging of the ovary, hot flashes, sweating, dry skin, vaginal dryness, vaginal atrophy, and lower urethral atrophy.
  • Vaginitis, cystitis, urination pain, urination, concentration disorders, short-term memory disorders, anxiety, nervousness, memory loss, muscle pain, joint pain or osteoporosis is preferably, but not limited to.
  • the extract of Hwangchil-tree exhibits estrogen receptor agonist activity, and has a therapeutic effect on female menopausal disease.
  • Hwangchil-tree extract of the present invention exhibits significant ER agonist activity in cells and in vivo, and has an EC 50 value of about 100 ⁇ g / ml, resulting in a very potent ER agonist activity, resulting in high estrogen-like plant metabolites.
  • Hwangchil tree extract containing the content can be usefully used as an active ingredient of the composition for preventing and treating various symptoms caused by estrogen deficiency in menopausal women.
  • the present invention provides a use of the Hwangchil wood extract for use as a health food for preventing and improving women's menopausal disease.
  • Hwangchil-tree extract of the present invention exhibits significant ER agonist activity in cells and in vivo, and has an EC 50 value of about 100 ⁇ g / ml, resulting in a very potent ER agonist activity, resulting in high estrogen-like plant metabolites.
  • Hwangchil tree extract containing the content can be useful as an active ingredient of health food for preventing and improving various symptoms caused by estrogen deficiency in menopausal women.
  • the leaves, stems, and roots of Hwangchil-tree were collected, washed, dried well and pulverized to a poultry size. Then, 125 g of the amount was accurately weighed and placed in an extraction tank, and 875 g of purified water was added and extracted at 100 ° C. for 12 hours. The extracted extract was passed through a 100 um filter, and then transferred to a concentration tank, and concentrated to 60% at 60 ° C. under a reduced pressure of 600 mmhg. The concentrate was lyophilized to powder the extract.
  • the leaves, stems, and roots of Hwangchil-tree were collected, washed, dried well and pulverized to a poultry size. Then, 125 g of the amount was accurately weighed and placed in an extraction tank, and 875 g of purified water was added and extracted at 100 ° C. for 12 hours. The extracted extract was passed through a 100 um filter, and then transferred to a concentration tank, and concentrated to 60% at 60 ° C. under a reduced pressure of 600 mmhg. 50% concentrate and maltodextrin 50% was added to prepare a dried yellow lacquer extract.
  • the leaves, stems, and roots of Hwangchil-tree were collected, washed, dried well, and crushed to a poultry size. After precisely weighing 125 g, the extract was placed in an extraction tank and extracted with 600 g of 30% ethanol aqueous solution for 6 hours at 50 ° C. . The extraction process was repeated two more times. The extracted extract was passed through a 100 um filter, and then transferred to a concentration tank, and concentrated to 60% at 60 ° C. under a reduced pressure of 600 mmhg. The concentrate was lyophilized to powder the extract.
  • the sap of Hwangchil-tree was collected, 100 g of the amount was accurately measured, placed in an extraction tank, and 100 g of purified water was added and extracted at 20 ° C. for 4 hours.
  • the extracted extract was passed through a 100 um filter, and then transferred to a concentration tank, and concentrated to 60% at 60 ° C. under a reduced pressure of 600 mmhg. 50% concentrate and maltodextrin 50% was added to prepare a dried yellow lacquer extract.
  • the sap of Hwangchil-tree was taken to accurately measure 100 g, and 50% of extract and maltodextrin were added to prepare dried Hwangchil extract.
  • the Hilchi chile extract prepared in ⁇ 1-1> was prepared using 100 mg / ⁇ l stock solution using DMSO as a solvent. After adding DMSO, the sample was dissolved by vortexing, and a small amount of insoluble powder was removed by centrifugation at 13,000 rpm for 10 minutes.
  • the estrogen receptor-positive breast cancer cell line MCF-7 purchased from the American Type Culture Collection (ATCC), contains non-essential amino acids, antibiotics / antimycotics, and sodium pyruvate in RPMI 1680 media. (Sodium pyruvate) and 10% fetal bovine serum (fetal bovine serum) solution was added to the culture medium as a base medium. Subcultures were made once a week on average. 48 to 60 hours (2-3 days) before cell seeding, the serum was treated with stripped serum three times with dextran-charcoal, and phenol-red Cells were cultured using media prepared with no RPMI 1680. This medium was used until the end of the luciferase assay. The reason for using the medium is the result of the estrogen receptor interactions due to the estrogen properties of phenol-red itself and the hormones and growth factors contained in the serum in large amounts. To exclude.
  • plasmid containing ERE-Luciferase was transfected into the cells, and after treatment with the H. chinensis extract, luciferin was enzymatically digested. The degree of luminescence of the generated product was measured quantitatively by using a luminometer to measure the degree of transcriptional activity (FIG. 1).
  • breast cancer cells is a 24-well plate inoculated (10 5 cells / well) before transfection day (well plate) and then, ERE-luciferase plasmid DNA (0.25 ⁇ g / well) cultured in The breast cancer cells were transformed using Lipofectamine 2000 transfection reagent (Invitrogen).
  • E2 (17 ⁇ -estradiol) (ER agonist, 1 nM) (Sigma) and ICI 182,780 (Tocris) (Pure ER antagonist, 1 ⁇ M) were used as positive controls.
  • the hwangchil wood extract of the present invention prepared in Example 1 was conducted at three concentrations of 50 ⁇ g / ml, 100 ⁇ g / ml and 200 ⁇ g / ml. These concentration conditions were assigned to 50, 100, 200 ⁇ g / ml as a concentration point that luciferase activity is properly shown through preliminary experiments performed at 1 ⁇ 200 ⁇ g / ml.
  • the amount of final DMSO did not exceed 0.2% of the volume of the medium, and it was confirmed through independent experiments that the amount of DMSO did not affect the final experimental results at all.
  • to examine the ER action activity while treating the hwangchil wood extract of the present invention alone, to confirm the ER antagonistic activity was administered E2 1nM and the hwangchil wood extract of the present invention at the same time.
  • the luciferase activity assay was a cell after removing the medium After washing twice with cold PBS, lysate was extracted with 1X passive lysis buffer, and 50 ⁇ l lysate was used to prepare 50 ⁇ l luciferase assay reagent (luciferin, a substrate of promega and luciferase, and a suitable buffer for enzyme reaction). After mixing), the generated luminescence intensity was measured using SpectraMax M5e (Molecular Device).
  • Luciferase activity (no units) of solvent DMSO used as the vehicle control was 57.8 (2.0% of E2 1 nM), E2 1 nM; 2859 (100%), E2 + ICI (1 ⁇ M) 47.8 (1.7% of E2 1 nM value), all control values of the present invention fall within the empirical experimental range, and the luciferase activity of each drug is a characteristic of the drug. It was confirmed that it was derived appropriately.
  • the activity of the Hwangchil-tree extract was expressed as a% value.
  • Hwangchil Tree Extract 50 ⁇ g / ml 33% Hwangchil Tree Extract is 100 ⁇ g / ml 56% Hwangchil Tree Extract is 200 ⁇ g / ml 80%
  • Luciferase activity obtained after treatment of the Hilchi chinensis extract with E2 1 nM was recorded, and the activity of the experimental group was expressed in% when the E2 1 nM was set to 100%.
  • the Hilchi chinensis extract has no activity as ER antagonist.
  • sham rats (Sham group) were produced through the procedure of cutting the abdomen of the rat and then sewing the incision again with the ovaries intact.
  • a phytoestrogen-limited feed (Harlan 2020X Teklad Global Soy Protein-free Extruded Rodent Diet) was provided.
  • the progress of rats used in the experiment was reviewed and approved by the Animal Testing Committee (Animal Testing Organization Approval Number: SMWU-IACUC-1602-030).
  • the degree of uterine proliferation was measured after administration of the Hwangchil-tree extract to the menopausal disease rats of Experimental Example ⁇ 2-1>.
  • rats undergoing a recovery period in Experimental Example ⁇ 2-1> were classified into seven groups as follows: Sham group to which corn oil was administered, OVX group to which corn oil was administered (OVX control group), and high concentration E2.
  • OVX group (OVX E2 (H) group) administered OVX group (OVX DM250 group) administered low concentrations of yellow lacquer extract (DM), OVX group (OVX DM500 group) administered high concentrations of yellow lacquer extract, low concentration E2
  • One OVX group (OVX E2 (L) group), OVX group (OVX E2 (L) + DM500 group) to which low concentration E2 and high concentration Hilchi tree extract were administered.
  • E2 doses high and low doses were used to reflect the low blood estrogen concentrations before and after menopause, and the combination of E2 and Hilchi chinensis extract was used to determine the antagonism of E2 agonist activity.
  • groups 7 1 ml / kg of corn oil in Sham and OVX control groups, 5 ⁇ g / kg of E2 in corn oil in OVX E2 (H) group, and PBS in PBS in OVX DM250 group.
  • Extract 250 mg / kg, OVX DM500 group contains 500 mg / kg of Hwangchil tree extract in PBS, OVX E2 (L) group contains 0.5 ⁇ g / kg E2 dissolved in corn oil and corn oil in OVX E2 (L) + DM500 group.
  • 0.5 ⁇ g / kg of dissolved E2 and 500 mg / kg of Hwangchil-tree extract dissolved in PBS were administered by subcutaneous injection, respectively. At this time, the weight of the rat was measured daily so that the quantitative components could be administered. After 3 days of subcutaneous injection, fasted for 24 hours and euthanized in a CO 2 chamber.
  • the OVX D2 (H) group had an increased uterus about 2.3-fold compared to the OVX control group, and about 1.85 and OVX DM250 and OVX DM500 groups compared to the OVX control group. 2.1 times the uterus was confirmed to increase.
  • the OVX E2 (L) + DM500 group which was co-administered with E2 and Hwangchil-tree extract, confirmed that the uterus increased about 2.6 times compared to the OVX control group, so that the Hwangchil-tree extract did not antagonize with E2, It was confirmed to show an additional effect on uterine proliferation (Table 3 and Figure 2).
  • the results of the Hwangchil-tree extract in vivo has estrogen activity and E2 agonist in conjunction with E2, so the Hwangchil-tree extract can be used in female hormone replacement therapy for the prevention and treatment of menopausal disease .
  • Hwangchil-tree extract of the present invention 2 g
  • tablets were prepared by tableting according to a conventional method for producing tablets.
  • the capsule was prepared by filling in gelatin capsules according to the conventional method for producing a capsule.
  • Hwangchil-tree extract of the present invention was added to wheat flour, and bread, cake, cookies, crackers and noodles were prepared using the mixture to prepare foods for health promotion.
  • Brown rice, barley, glutinous rice, and yulmu were alphad by a known method, and then dried and roasted to prepare a powder having a particle size of 60 mesh.
  • Black beans, black sesame seeds, and perilla were also steamed and dried by a known method, and then ground to a powder having a particle size of 60 mesh.
  • the yellow chilli extract of the present invention was concentrated under reduced pressure in a vacuum concentrator, and the dried product obtained by drying with a sprayer and a hot air dryer was pulverized with a particle size of 60 mesh to obtain a dry powder.
  • the grains, seeds and dry powders of SBE prepared above were combined and prepared in the following ratio.
  • Cereals (30 parts by weight brown rice, 15 parts by weight brittle, 20 parts by weight of barley),
  • Seeds (7 parts by weight perilla, 8 parts by weight black beans, 7 parts by weight black sesame seeds),
  • Hwangchil-tree extract of the present invention 1000 mg
  • the resulting solution is filtered and obtained in a sterilized 2 L container, sealed sterilization and then refrigerated and stored Used in the manufacture of the health food of the invention.
  • composition ratio is a composition suitable for a preferred beverage in a preferred embodiment
  • the composition ratio may be arbitrarily modified according to regional and ethnic preferences such as demand hierarchy, demand country, and intended use.
  • the present invention is a Hwangchil wood ( Dendropanax Morbifera LEV.) relates to a pharmaceutical composition for preventing and treating female menopausal diseases containing the extract as an active ingredient, and a health food for preventing and improving the diseases, the extract of the present invention is derived from estrogen deficiency in menopausal women It can be useful as a hormone replacement therapy that can improve various symptoms.
  • Hwangchil wood Dendropanax Morbifera LEV.

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Abstract

본 발명은 황칠나무(Dendropanax morbifera LEV.) 추출물을 유효성분으로 함유하는 갱년기 질환 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 황칠나무 추출물은 세포내에서 유의적으로 ER 작용제 활성을 나타내고, EC50 값이 약 100 μg/ml로, 매우 강력한 ER 작용제(Full agonist) 활성을 내므로, 에스트로겐과 유사한 식물 대사물질(plant metabolites)을 고함량으로 포함하고 있는 황칠나무 추출물은 갱년기 여성에서 에스트로겐 결핍으로 유래된 다양한 증상을 개선시킬 수 있는 호르몬대체요법으로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

황칠나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 갱년기 질환 예방 및 치료용 조성물
본 발명은 황칠나무(Dendropanax morbifera LEV.) 추출물을 유효성분으로 함유하는 여성 갱년기 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물, 및 상기 질환 예방 및 개선용 건강식품에 관한 것이다.
과학과 문명의 발달로 산업화된 현대를 살아가는데 있어서 인간은 그 수명이 점차 연장됨과 동시에 각종 스트레스, 공해 및 자연발생적인 노화 현상 등으로 인하여 면역력이 저하되고 노화가 진행되게 된다. 특히 여성의 경우 40대 이후 서서히 시작되는 갱년기 증상으로 인해 신체적 및 정신적 어려움을 겪고 있다.
한편, 갱년기란 내분비 증후군의 일종으로 난소기능의 전반적이고 점진적인 노화로 인한 여성호르몬, 즉 에스트로겐의 감소로 인해 생리적 기능 및 성기능이 감소 내지 소실되는 과도기를 말한다. 이러한 갱년기의 증상으로는 안면홍조, 빈맥, 발한 또는 두통과 같은 혈관성 변화에 의한 증상이 있고, 근육통, 관절통 및 요통과 같은 근골격계 변화에 의한 증상이 있으며, 빈뇨 또는 요실금과 같은 비뇨생식기 변화에 의한 증상이 있고, 기억력 감퇴, 우울증, 집중력 감퇴 및 현기증과 같은 뇌신경계 변화에 의한 증상이 있으며, 이 외에도 시력감퇴 및 피부와 모발이 변화되는 증상들이 발생되며, 호르몬 변화로 인한 골다공증이나 심혈관계 질환 등 여성의 건강에 치명적인 질환이 발생되기도 한다.
따라서 중년 여성들의 신체적, 정신적 건강 및 삶의 질을 개선하기 위하여 갱년기 증상을 개선할 수 있는 치료제의 개발이 요구되었으며, 이러한 갱년기 증상의 개선을 위해 호르몬 대체요법 및 비스테로이드계 제제 등의 약물들이 개발된 바 있다. 그러나 이들 약물의 경우 대부분이 두통 및 체중증가 등의 부작용이 있는 것으로 알려져 있으며, 특히, 에스트로겐 대체요법의 경우에도 인위적으로 체내에 호르몬을 투여하는 것이기 때문에 이에 대한 거부반응과 함께 자궁출혈, 뇌졸중, 심장발작, 유방암 및 자궁암의 발생 위험이 증가될 수 있는 것으로 알려져 있다(Swaran L., et. al., Obstetrics & Gynecology, 91, 678-684, 1998).
따라서 이와 같은 문제점들 때문에 식품이나 첨가물의 형태로 섭취하는 자연적인 방법으로 에스트로겐 요법을 대체하고자 하는 관심이 높아지고 있으며, 부작용이 없으면서도 갱년기의 증상을 완화시키는 효과가 우수한 새로운 갱년기 치료제의 개발이 요구되고 있는 실정이다.
한편, 에스트로겐(estrogen)은 세포 수의 증가와 분화를 포함하는 다양한 생물학적 작용을 한다. 에스트로겐의 생물학적 작용들은 핵 수용체 슈퍼 패밀리(family)에 속하는 두 개의 에스트로겐 수용체 알파(ER-α; estrogen receptor-α)와 에스트로겐 수용체 베타(ER-β)를 통하여 그 활성을 발휘한다(Nilsson et al., 2001, Physiol. Rev., 81(4):1535-1565.). 에스트로겐 수용체(ER)의 작용메커니즘은 에스트로겐과 세포 내 에스트로겐 수용체들과의 결합으로 수용체들의 이합체(dimer)를 형성하고 이들이 표적 유전자(target gene)의 프로모터(promoters)에 위치한 특정한 에스트로겐 반응서열(estrogen response elements, EREs)와 결합함으로써 표적 유전자의 발현을 조절한다. 두 개의 에스트로겐 수용체는 서로 다른 조직분포 패턴, 리간드 결합력을 가지므로 이러한 차이는 다른 조직에서 에스트로겐 수용체의 작용제(agonists)와 길항제(antagonists)의 서로 다른 선택적 역할을 가능하게 한다(Kuiper et al., 1997, Endocrinology, 138(3):863-870.). 아울러, 에스트로겐 수용체에 작용하는 물질들은 폐경기여성의 호르몬대체요법과 생식기암의 화학요법제 개발을 위한 표적으로 활용되고 있다. 따라서, 인체에 부적용이 없는 천연물을 대상으로 에스트로겐 수용체를 활성화시키는 천연물을 발굴한다면, 여성 갱년기 질환 치료 및 예방에 유용하게 사용될 수 있으므로, 관련 연구가 꾸준히 진행되고 있는 실정이다.
황칠나무(Dendropanax morbifera LEV.)는 두릅나무에 속하는 상록 활엽교목으로 우리나라의 제주도와 완도, 보길도, 해남 등 남ㆍ서해안 일대에 자생하고 있는 우리나라 특산 수종이다. 황칠나무에 함유된 정향성분은 소량의 터펜(Terpene)류와 다량의 세스퀴터펜(Sesquiterpene)류가 포함되어 있는데, 채취시기나 장소에 따라서 차이가 있지만 germacrene-d, β-selinene,α-amorphene, α-selinene, δ-cadinene, γ-cadinene, T-muurolol, β-elemene, bicyclo[4,4,0]dec-1-en-2-isopropyl-5-methyl-9-methylene, β-cadinene, germacrene-B, α-copaene, α-humulene, α-cadinene과 소량의 linalool L, α-terpinene, α-cubebene, α-ylangene,(+)-calarene, 3,7-guaiadine, (-)-isoledene, β-cubebene, limonene, aromadendrene, cadina-1,4-diene 등이 함유되어 있다(Jeollanam do, 1996). 한편, 황칠나무는 술 해독, 안질 및 황달치료, 화상치료, 나병에 효과가 있으며 인체에 무해하다는 기록이 전해지고 있고(이시진, 본초강목, 중국문광도서, 1590), 진정작용과 강장작용을 나타낸다고 알려져 왔다(고유농수산품목 세계화 대상품목의 연구조사(황칠편), 전라남도, 1996). 또한, 잎 추출물 분획은 항암작용과 α-토코페롤보다 다소 약한 항산화작용이 있음이 밝혀져 있다고 알려져 있으나(특허 공개 제 2000-0004499호, 박호근 등, 1998), 여성갱년기에 대한 효과에 대해서는 전혀 알려진 바 없다.
이에 본 발명자들은 인체에 안전한 천연물 유래 여성 갱년기 질환 치료 물질을 개발하기 위해 노력한 결과, 황칠나무 추출물이 세포내에서 유의적으로 ER 작용제 활성을 나타내고, EC50 값이 약 100 μg/ml로, 매우 강력한 ER 작용제(Full agonist) 활성을 나타냄을 확인함으로써, 에스트로겐과 유사한 식물 대사물질(plant metabolites)을 고함량으로 포함하고 있는 황칠나무 추출물을 갱년기 여성에서 에스트로겐 결핍으로 유래된 다양한 증상을 개선시킬 수 있는 호르몬대체요법으로 사용될 수 있음을 밝힘으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 목적은 황칠나무(Dendropanax morbifera LEV.) 추출물을 유효성분으로 함유하는 여성 갱년기 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물, 및 상기 질환 예방 및 개선용 건강식품을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 황칠나무(Dendropanax morbifera LEV.) 추출물을 유효성분으로 함유하는 여성 갱년기 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 황칠나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 여성 갱년기 질환 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.
또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 황칠나무 추출물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 여성 갱년기 질환 예방 또는 개선방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 황칠나무 추출물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 여성 갱년기 질환 치료방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 여성 갱년기 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물로 사용하기 위한 황칠나무 추출물의 용도를 제공한다.
아울러, 본 발명은 여성 갱년기 질환 예방 및 개선용 건강식품으로 사용하기 위한 황칠나무 추출물의 용도를 제공한다.
본 발명의 황칠나무(Dendropanax morbifera LEV.) 추출물은 세포내 및 생체내에서 유의적으로 ER 작용제 활성을 나타내고, EC50 값이 약 100 μg/ml로, 매우 강력한 ER 작용제(Full agonist) 활성을 내므로, 에스트로겐과 유사한 식물 대사물질(plant metabolites)을 고함량으로 포함하고 있는 황칠나무 추출물은 갱년기 여성에서 에스트로겐 결핍으로 유래된 다양한 증상을 개선시킬 수 있는 호르몬대체요법으로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 ER-ERE 루시페라제 활성평가(luciferase assay) 개요를 나타낸 도이다.
도 2는 에스트로겐을 제거하기 위하여 난소를 적출한 랫드에 황칠나무 추출물 또는 E2를 투여한 후 자궁을 적출하여 자궁증식 정도를 확인한 도이다.
이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
본 발명은 황칠나무(Dendropanax morbifera LEV.) 추출물을 유효성분으로 함유하는 여성 갱년기 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 유효성분인 황칠나무 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다:
1) 황칠나무 잎, 줄기, 뿌리 및 수액으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;
2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계;
3) 단계 2)의 여과물을 감압 농축하는 단계; 및
4) 단계 3)의 농축물을 건조하는 단계.
본 발명의 제조방법에 있어서, 단계 1)의 황칠나무는 재배한 것 또는 시판되는 것을 제한 없이 사용할 수 있다.
본 발명의 제조방법에 있어서, 상기 단계 1)의 추출용매는 물, 알코올 또는 이의 혼합물을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 알코올로는 C1 내지 C2의 저급 알코올 이용하는 것이 바람직하며, 저급 알코올로는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하다. 추출방법으로는 진탕추출, Soxhelt 추출 또는 환류 추출을 이용하는 것이 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 상기 추출용매를 세척하고 잘 건조된 황칠나무 잎, 줄기, 뿌리 또는 채취한 수액 분량의 1 내지 15배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하며, 2 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하다. 추출 온도는 20℃ 내지 110℃인 것이 바람직하며, 30℃ 내지 105℃인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 1 내지 72시간이 바람직하며, 2 내지 48시간이 더욱 바람직하고, 2 내지 5시간이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 아울러 추출 횟수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 3 내지 4회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하고, 3회인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 제조방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공 감압 농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
황칠나무에서 얻어진 것이 수액인 경우에는 물 또는 저가 알콜로 추출하여 사용하는 것이 바람직하나, 수액에 분말화 부형제와 혼합하여 사용할 수도 있다.
상기 여성 갱년기 질환이란, 난소의 노화로 인하여 에스트로겐의 분비가 감소됨에 따라 폐경을 전후로 걸쳐 여성에게 나타나는 증상 및 질환을 총칭하는 것으로, 안면홍조, 발한, 피부건조, 질건조증, 질위축, 하부 요도 위축, 질염, 방광염, 배뇨통, 급뇨, 집중장애, 단기 기억장애, 불안, 신경과민, 기억력 감퇴, 근육통, 관절통 또는 골다공증인 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 조성물은 에스트로겐 수용체(estrogen receptor) 작용제(agonist)활성을 나타내어, 여성 갱년기 질환 치료 효과를 갖는다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 황칠나무 추출물을 제조한 후, 황칠나무 추출물의 ER 작용(agonist) 또는 길항(antagonist) 활성을 확인하기 위하여, ERE-Luciferase를 포함하는 플라스미드(plasmid)를 세포내에 형질전환(transfection) 시킨 후, 황칠나무 추출물을 처리한 후, 루시페린(luciferin)을 효소 분해하여 생성된 산물의 발광정도를 luminometer를 이용하여 정량적으로 측정한 결과, 본 발명의 황칠나무 추출물 분말 농도 100 μg/ml에서 E2 대비 50% 이상의 효능이 나타났으며, 200 μg/ml 농도에서 E2 대비 80%의 효능을 나타냄을 확인하였다. 따라서, 황칠나무 추출물은 EC50 값이 약 100 μg/ml으로, 매우 강력한 ER 작용제(Full agonist)임을 확인하였다(표 1 참조).
또한, 본 발명자들은 황칠나무 추출물의 길항 활성을 확인한 결과, 황칠나무 추출물은 세가지 시험농도(50, 100, 200 μg/ml)에서 E2가 가지고 있는 ER작용제의 활성에 영향을 미치지 않음을 확인하였다(표 2 참조).
또한, 본 발명자들은 난소를 적출하여 생리적으로 생산되는 에스트로겐을 제거한 갱년기 질환 동물모델 랫드에 황칠나무 추출물 단독 또는 E2와 황칠나무 추출물 병용으로 피하주사하여 투여한 결과, 난소를 제거한 대조군에 비해 황칠나무 추출물 단독 투여군에서 자궁증식이 나타나고, E2 및 황칠나무 추출물 병용 투여군에서 자궁증식이 보다 높게 나타나므로, 생체 내에서도 황칠나무 추출물이 에스트로겐 활성이 있으며, E2가 가지고 있는 ER작용제의 활성에 영향을 미치지 않음을 확인하였다(표 3 및 도 2 참조).
따라서, 본 발명의 황칠나무 추출물은 세포내 및 생체내에서 유의적으로 ER 작용제 활성을 나타내고, EC50 값이 약 100 μg/ml로, 매우 강력한 ER 작용제(Full agonist) 활성을 내므로, 에스트로겐과 유사한 식물 대사물질(plant metabolites)을 고함량으로 포함하고 있는 황칠나무 추출물은 갱년기 여성에서 에스트로겐 결핍으로 유래된 다양한 증상을 예방 또는 치료할 수 있는 약학적 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구 투여(예를 들어, 도포 또는 정맥 내, 피하, 복강 내 주사)할 수 있으나 경구 투여가 바람직하다. 비경구 투여를 위한 제제로는 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 멸균된 수용액, 액제, 비수성용제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 좌제, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사제제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플 라스마제의 피부 외용 약학적 조성물을 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다. 국소 투여의 조성물은 임상적 처방에 따라 무수형 또는 수성형일 수 있다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 경구 투여를 위한 고형제제에는 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 연질캅셀제, 환 등이 포함된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 에어로졸 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
상기 조성물은 투여를 위해서 황칠나무 추출물 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈, 말토 덱스트린, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형 등으로 제제화할 수 있다.
본 발명에 따른 약제학적으로 허용가능한 첨가제는 상기 조성물에 대해 0.1~90 중량부 포함되는 것이 바람직하다.
본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 환자의 연령, 성별 및 비만의 정도에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 경구 투여제의 경우 일반적으로 성인에게 1일에 체중 1㎏당 본 발명의 조성물을 1일 0.0001 내지 100 ㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 100 ㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 황칠나무 추출물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
또한, 본 발명은 황칠나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 여성 갱년기 질환 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.
본 발명의 황칠나무 추출물은 세포내 및 생체내에서 유의적으로 ER 작용제 활성을 나타내고, EC50 값이 약 100 μg/ml로, 매우 강력한 ER 작용제 활성을 내므로, 에스트로겐과 유사한 식물 대사물질을 고함량으로 포함하고 있는 황칠나무 추출물은 갱년기 여성에서 에스트로겐 결핍으로 유래된 다양한 증상을 예방 또는 개선할 수 있는 건강식품의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 황칠나무 추출물은 식품학적으로 허용된 담체와 혼합하여 식품 조성물로서 제공될 수 있다.
본 발명의 황칠나무 추출물을 식품 또는 음료 첨가물로 사용할 경우, 상기 황칠나무 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 상기 황칠나무 추출물의 혼합양은 그의 사용목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우, 상기 황칠나무 추출물은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에, 장기간 복용이 가능하다. 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 초콜릿류, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있다. 음료수로 제형화할 경우에 황칠나무 추출물 이외에 첨가되는 액체 성분으로는 이제 한정되지는 않으나, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드(예, 포도당, 과당 등), 디사카라이드(예, 말토오스, 수크로오스 등) 및 폴리사카라이드(예, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당), 및 자일리톨, 소르비톨, 에리스리톨 등의 당 알코올이다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖ 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제[타우마린, 스테비아 추출물(예, 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등)] 및 합성 향미제(예, 사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.
다른 양태로서, 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 또한 본 발명의 식품 조성물은 과일 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 단독으로 또는 조합으로 사용될 수 있으며, 이러한 첨가제의 비율은 조성물 전체 중량당 0.001 내지 50 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 황칠나무 추출물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 여성 갱년기 질환 예방 또는 개선방법을 제공한다.
상기 황칠나무 추출물은 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하는 것이 바람직하고, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것이 바람직하다.
황칠나무에서 얻어진 것이 수액인 경우에는 물 또는 저가 알콜로 추출하여 사용하는 것이 바람직하나, 수액에 분말화 부형제와 혼합하여 사용할 수도 있다.
상기 여성 갱년기 질환이란, 난소의 노화로 인하여 에스트로겐의 분비가 감소됨에 따라 폐경을 전후로 걸쳐 여성에게 나타나는 증상 및 질환을 총칭하는 것으로, 안면홍조, 발한, 피부건조, 질건조증, 질위축, 하부 요도 위축, 질염, 방광염, 배뇨통, 급뇨, 집중장애, 단기 기억장애, 불안, 신경과민, 기억력 감퇴, 근육통, 관절통 또는 골다공증인 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 황칠나무 추출물은 에스트로겐 수용체(estrogen receptor) 작용제(agonist)활성을 나타내어, 여성 갱년기 질환 치료 효과를 갖는다.
본 발명의 황칠나무 추출물은 세포내 및 생체내에서 유의적으로 ER 작용제 활성을 나타내고, EC50 값이 약 100 μg/ml로, 매우 강력한 ER 작용제 활성을 내므로, 에스트로겐과 유사한 식물 대사물질을 고함량으로 포함하고 있는 황칠나무 추출물은 갱년기 여성에서 에스트로겐 결핍으로 유래된 다양한 증상을 예방 또는 개선하는 데 유용하게 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 황칠나무 추출물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 여성 갱년기 질환 치료방법을 제공한다.
본 발명의 황칠나무 추출물은 세포내 및 생체내에서 유의적으로 ER 작용제 활성을 나타내고, EC50 값이 약 100 μg/ml로, 매우 강력한 ER 작용제 활성을 내므로, 에스트로겐과 유사한 식물 대사물질을 고함량으로 포함하고 있는 황칠나무 추출물은 갱년기 여성에서 에스트로겐 결핍으로 유래된 다양한 증상을 치료하는 데 유용하게 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 여성 갱년기 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물로 사용하기 위한 황칠나무 추출물의 용도를 제공한다.
상기 황칠나무 추출물은 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출하는 것이 바람직하고, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것이 바람직하다.
황칠나무에서 얻어진 것이 수액인 경우에는 물 또는 저가 알콜로 추출하여 사용하는 것이 바람직하나, 수액에 분말화 부형제와 혼합하여 사용할 수도 있다.
상기 여성 갱년기 질환이란, 난소의 노화로 인하여 에스트로겐의 분비가 감소됨에 따라 폐경을 전후로 걸쳐 여성에게 나타나는 증상 및 질환을 총칭하는 것으로, 안면홍조, 발한, 피부건조, 질건조증, 질위축, 하부 요도 위축, 질염, 방광염, 배뇨통, 급뇨, 집중장애, 단기 기억장애, 불안, 신경과민, 기억력 감퇴, 근육통, 관절통 또는 골다공증인 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 황칠나무 추출물은 에스트로겐 수용체(estrogen receptor) 작용제(agonist)활성을 나타내어, 여성 갱년기 질환 치료 효과를 갖는다.
본 발명의 황칠나무 추출물은 세포내 및 생체내에서 유의적으로 ER 작용제 활성을 나타내고, EC50 값이 약 100 μg/ml로, 매우 강력한 ER 작용제 활성을 내므로, 에스트로겐과 유사한 식물 대사물질을 고함량으로 포함하고 있는 황칠나무 추출물은 갱년기 여성에서 에스트로겐 결핍으로 유래된 다양한 증상을 예방 및 치료하기 위한 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
아울러, 본 발명은 여성 갱년기 질환 예방 및 개선용 건강식품으로 사용하기 위한 황칠나무 추출물의 용도를 제공한다.
본 발명의 황칠나무 추출물은 세포내 및 생체내에서 유의적으로 ER 작용제 활성을 나타내고, EC50 값이 약 100 μg/ml로, 매우 강력한 ER 작용제 활성을 내므로, 에스트로겐과 유사한 식물 대사물질을 고함량으로 포함하고 있는 황칠나무 추출물은 갱년기 여성에서 에스트로겐 결핍으로 유래된 다양한 증상을 예방 및 개선하기 위한 건강식품의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
이하 본 발명을 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예, 실험예 및 제조예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 황칠나무( Dendropanax morbifera LEV.) 추출물의 제조
<1-1> 황칠나무 열수 추출물의 제조
황칠나무의 잎, 줄기, 뿌리부분을 채취하여 세척하고 잘 건조하고 조말 크기로 분쇄한 다음 125 g 분량을 정확히 측량하여 추출탱크에 넣고 정제수 875 g을 첨가하여 100℃에서 12시간 추출하였다. 추출한 추출액을 100 um 필터를 거쳐 여가한 후 농축탱크에 이송하여 600 mmhg의 감압하에 60℃에서 25% 고형분이 될 때까지 농축하였다. 농축액을 동결건조하여 추출물을 분말화하였다.
<1-2> 황칠나무 열수 추출물 및 말토덱스트린 혼합물의 제조
황칠나무의 잎, 줄기, 뿌리부분을 채취하여 세척하고 잘 건조하고 조말 크기로 분쇄한 다음 125 g 분량을 정확히 측량하여 추출탱크에 넣고 정제수 875 g을 첨가하여 100℃에서 12시간 추출하였다. 추출한 추출액을 100 um 필터를 거쳐 여가한 후 농축탱크에 이송하여 600 mmhg의 감압하에 60℃에서 25% 고형분이 될 때까지 농축하였다. 농축액 50%와 말토덱스트린 50%를 넣어 건조된 황칠 추출물을 제조하였다.
<1-3> 황칠나무 30% 에탄올 추출물의 제조
황칠나무의 잎, 줄기, 뿌리부분을 채취하여 세척하고 잘 건조하고 조말 크기로 분쇄한 다음 125 g 분량을 정확히 측량하여 추출탱크에 넣고 30% 에탄올 수용액 600 g을 첨가하여 50℃에서 6시간 추출하였다. 위의 추출과정을 2회 더 반복하였다. 추출한 추출액을 100 um 필터를 거쳐 여가한 후 농축탱크에 이송하여 600 mmhg의 감압하에 60℃에서 25% 고형분이 될 때까지 농축하였다. 농축액을 동결건조하여 추출물을 분말화하였다.
<1-4> 황칠나무 수액 열수 추출물의 제조
황칠나무의 수액을 채취하여 100 g 분량을 정확히 측량하여 추출탱크에 넣고 정제수 100 g을 첨가하여 20℃에서 4시간 추출하였다. 추출한 추출액을 100 um 필터를 거쳐 여가한 후 농축탱크에 이송하여 600 mmhg의 감압하에 60℃에서 25% 고형분이 될 때까지 농축하였다. 농축액 50%와 말토덱스트린 50%를 넣어 건조된 황칠 추출물을 제조하였다.
<1-5> 황칠나무 수액 열수 추출물 및 말토덱스트린 혼합물의 제조
황칠나무의 수액을 채취하여 100 g 분량을 정확히 측량하고, 추출액 50%와 말토덱스트린 50%를 넣어 건조된 황칠 추출물을 제조하였다.
하기 실험을 위하여, 상기 제조한 <1-1>에서 제조한 황칠나무 추출물은 DMSO를 용매로 하여 100 mg/㎕ 저장(stock) 용액을 제조하였다. DMSO를 가한 후 교반(vortexing)을 통해서 시료를 용해시켰으며, 13,000 rpm, 10분간 원심분리하여 녹지 않을 수 있는 미량의 분말은 제거하였다.
<실시예 2> 세포배양
American Type Culture Collection (ATCC)에서 구입한 에스트로겐 수용체-양성 유방암 세포주 MCF-7는 RPMI 1680 배지(media)에 비-필수 아미노산(non-essential amino acids), 항생제/항진균제(antibiotics/antimycotics), 피루브산나트륨(sodium pyruvate) 및 10% 소태아혈청(fetal bovine serum)을 첨가한 용액을 기본배지로 하여 세포를 배양하였다. 평균 일주일에 1회 계대배양(subculture)하였다. 세포 접종(Cell seeding)을 하기 48~60 시간(2-3일) 전 혈청을 덱스트론-차콜(dextran-charcoal)로 3회 처리한 stripped serum을 함유하고, 페놀-레드(phenol-red)가 없는 RPMI 1680으로 제조된 배지를 이용하여 세포를 배양하였다. 이 배지는 루시페라제 활성평가(luciferase assay)가 끝나는 시점까지 계속 사용하였다. 상기 배지를 사용하는 이유는 페놀-레드 자체의 에스트로겐 특성(estrogenic property)과 혈청에 다량 포함되어 있는 호르몬(hormone) 및 성장인자(growth factor) 등에 의한 에스트로겐 수용체(estrogen receptor) 상호작용에 의한 결과를 배제하기 위함이다.
<실험예 1> 황칠나무 추출물의 ER 작용(agonist) 또는 길항(antagonist) 활성 확인
황칠나무 추출물의 ER 작용 또는 길항 활성을 확인하기 위하여, ERE-Luciferase를 포함하는 플라스미드(plasmid)를 세포내에 형질전환(transfection)시킨 후, 황칠나무 추출물을 처리한 후, 루시페린(luciferin)을 효소 분해하여 생성된 산물의 발광정도를 luminometer를 이용하여 정량적으로 측정함으로써, 전사활성 정도를 측정하였다(도 1).
구체적으로, 상기 <실시예 2>에서 배양한 유방암 세포는 24-웰 플레이트(well plate)에 형질전환 하루 전에 접종(105 cells/well)한 다음, ERE-luciferase plasmid DNA(0.25 ㎍/well)를 Lipofectamine 2000 transfection reagent(Invitrogen)을 이용하여 상기 유방암 세포에 형질전환하였다.
그런 다음, 양성 대조군으로 E2(17β-estradiol)(ER agonist, 1 nM)(Sigma) 및 ICI 182,780(Tocris) (Pure ER antagonist, 1 μM)을 사용하였다. 또한, 상기 <실시예 1>에서 제조한 본 발명의 황칠나무 추출물은 50 μg/ml, 100 μg/ml 및 200 μg/ml의 세가지 농도에서 실험을 진행하였다. 이러한 농도조건은 1 ~ 200 μg/ml에서 수행한 예비실험을 통해서 루시페라제 활성이 적절하게 나타나는 농도점으로서 50, 100, 200 μg/ml을 지정하게 되었다. 최종 DMSO의 양은 배지 부피의 0.2%가 넘지 않으며, 이러한 DMSO 양은 최종실험결과에 전혀 영향을 미치지 않음을, 독립적인 실험을 통해 확인하였다. 아울러, ER 작용 활성검토를 위해서는 본 발명의 황칠나무 추출물을 단독 처리하는 반면, ER 길항 활성을 확인하기 위해서는 E2 1nM과 본 발명의 황칠나무 추출물을 동시 투여하였다. 한편, 황칠나무 추출물, 및 대조군을 세포에 처리하고, 평균 18~24시간을 더 배양한 후 루시페라제 활성평가(luciferase assay)를 수행하였으며, 상기 루시페라제 활성평가는 배지를 제거한 후 세포를 cold PBS로 2회 세척한 후, 1X passive lysis buffer로 세포수용성물질(lysate)을 추출하였고, 50 μl의 lysate에 50 μl luciferase assay reagent (Promega, luciferase의 기질이 되는 luciferin과 효소반응에 적당한 완충액을 포함하는 용액)를 혼합한 후, 발생한 luminescence 세기를 SpectraMax M5e(Molecular Device)를 이용하여 측정하였다.
<1-1> 대조군 약물 처리에 의한 ER-ERE 루시페라제 활성평가법의 밸리데이션
Vehicle 대조군으로 사용된 용매 DMSO의 루시페라제 활성(unit 없음)은 57.8 (E2 1 nM값의 2.0%), E2 1 nM; 2859 (100%), E2+ICI (1 μM) 47.8 (E2 1 nM값의 1.7%)로서, 본 발명의 모든 대조군 값은 경험적인 실험값 범위 내에 속하며, 각 약물의 루시페라제 활성은 약물의 특성에 적합하게 도출되었음을 확인하였다.
<1-2> 황칠나무 추출물의 ER 작용 활성 확인
E2 1 nM이 나타내는 루시페라제 활성도를 100%로 잡았을 때 황칠나무 추출물의 활성도를 %값으로 나타내었다.
그 결과, 하기 [표 1]에 나타낸 바와 같이, 황칠나무 추출물 분말 농도 100 μg/ml에서 E2 대비 50% 이상의 효능이 나타났으며, 200 μg/ml 농도에서 E2 대비 80%의 효능을 나타냄을 확인하였다. 따라서, 황칠나무 추출물은 EC50 값이 약 100 μg/ml으로, 매우 강력한 ER 작용제(Full agonist)임을 확인하였다(표 1).
시료 E2 최대 활성에 대한 %(단독처리)
황칠나무 추출물 50 μg/ml 33%
황칠나무 추출물은 100 μg/ml 56%
황칠나무 추출물은 200 μg/ml 80%
<1-3> 황칠나무 추출물의 ER 길항 활성 확인
황칠나무 추출물을 E2 1 nM과 동시에 처리한 후 얻어진 루시페라제 활성도를 기록하였으며, 상기 실험예 <1-1> 동일하게 E2 1 nM 100%로 잡았을 때 실험군의 활성도를 %값으로 나타내었다.
그 결과, 하기 [표 2]에 나타낸 바와 같이, 황칠나무 추출물은 세가지 시험농도(50, 100, 200 μg/ml)에서 E2가 가지고 있는 ER작용제의 활성에 영향을 미치지 않음을 확인하였다(표 2).
따라서, 황칠나무 추출물은 ER 길항제로서의 활성이 없음을 확인하였다.
시료 E2 최대 활성에 대한 %(단독처리)
DMSO 3%
E2 100%
E2 + ICI 2%
E2 및 황칠나무 추출물 100 μg/ml 116%
< 실험예 2> 갱년기 질환 동물모델에서 황칠나무 추출물의 에스트로겐 활성 확인
<2-1> 갱년기 질환 동물모델 제작
황칠나무 추출물이 갱년기 질환에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 생체내에서 생리적으로 생산되는 에스트로겐이 제거된 갱년기 질환 동물모델을 제작하였다.
구체적으로, 8주령 SD 암컷 랫드(오리엔트바이오, 한국)를 구입하여 12시간 밝은 조명, 12시간 어두운 조명 일주기 하에서 1주일간 적응기간을 두었다. 그 다음, 생리적으로 생산되는 에스트로겐을 제거하기 위하여 상기 랫드의 난소를 외과수술을 통하여 제거(Ovariectomy; ovarietomized OVX)하였다. 구체적으로, 상기 랫드를 아이소플루레인(isoflurane)으로 마취하고, 마취상태에서 복부를 절개하여 난소를 적출하였다. 난소 적출 후 진통제인 케토프로펜(ketoproten) 5 mg/kg을 투여하였다. 난소 적출 수술이 끝난 랫드는 3마리씩 케이지에 넣어 2주 동안 회복기 및 혈중 에스트로겐 제거(wash-out)를 거치도록 함으로써, 갱년기 질환 동물모델 랫드(OVX 군)를 제작하였다. 또한, 랫드의 복부를 절개한 후 난소를 그대로 두고 다시 절개부를 꿰매는 절차를 통해 sham 랫드(Sham 군)를 제작하였다. 실험 결과에 영향을 주지 않도록 피토에스트로겐(phytoestrogen)이 제한된 사료(Harlan 2020X Teklad Global Soy Protein-free Extruded Rodent Diet)를 제공하였다. 또한 실험에 사용된 랫드 관련 진행과정은 동물시험 관련 위원회(동물시험기관승인번호: SMWU-IACUC-1602-030)로부터 검토되고 승인받았다.
<2-2> 갱년기 질환 랫드에서 황칠나무 추출물의 에스트로겐 활성 확인
생체내에서 황칠나무 추출물의 에스트로겐 활성을 확인하기 위하여, 상기 실험예 <2-1>의 갱년기 질환 랫드에 황칠나무 추출물을 투여한 후 자궁 증식 정도를 측정하였다.
구체적으로, 상기 실험예 <2-1>에서 회복기를 거친 랫드를 다음과 같이 7군으로 분류하였다: 옥수수오일을 투여한 Sham 군, 옥수수오일을 투여한 OVX 군(OVX control 군), 고농도 E2를 투여한 OVX군(OVX E2(H) 군), 저농도 황칠나무 추출물(DM)을 투여한 OVX 군(OVX DM250 군), 고농도 황칠나무 추출물을 투여한 OVX 군(OVX DM500 군), 저농도 E2를 투여한 OVX 군(OVX E2(L) 군), 저농도 E2 및 고농도 황칠나무 추출물을 투여한 OVX 군(OVX E2(L)+DM500 군). 또한, 군당 6 내지 7마리가 되도록 나누었다. E2 투여량의 경우 고농도 및 저농도로 투여하여 폐경기 전후 시기의 낮은 혈중 에스트로겐 농도를 반영하였고, E2와 황칠나무 추출물의 복합 투여를 통해 E2가 가지고 있는 E2 작용제 활성에 대한 길항 작용 여부를 확인하고자 하였다. 7군으로 분류한 후, 3일 동안 Sham 군 및 OVX control 군에는 옥수수오일 1 ㎖/kg, OVX E2(H) 군에는 옥수수오일에 녹인 E2 5 ㎍/kg, OVX DM250 군에는 PBS에 녹인 황칠나무 추출물 250 mg/kg, OVX DM500 군에는 PBS에 녹인 황칠나무 추출물 500 mg/kg, OVX E2(L) 군에는 옥수수오일에 녹인 E2 0.5 ㎍/kg, OVX E2(L)+DM500 군에는 옥수수오일에 녹인 E2 0.5 ㎍/kg 및 PBS에 녹인 황칠나무 추출물 500 mg/kg을 각각 피하주사하여 투여하였다. 이때, 랫드의 체중을 매일 측정하여 정량의 성분이 투여될 수 있도록 하였다. 3일간의 피하주사가 끝난 후 24시간 동안 금식을 시키고, CO2 챔버에서 안락사하였다. 안락사한 랫드의 복부를 절개하고 자궁을 적출한 후 가능한 한 최대의 지방을 제거하고 자궁의 무게를 측정하였다. 자궁증식 정도는 자궁무게(mg)을 몸무게(kg)로 나눈 값을 사용하였다.
Group 자궁무게(mg)/몸무게(kg) SE
Sham 2.20 0.320
OVX control 0.54 0.198
OVX E2(H) 1.22 0.319
OVX DM250 0.99 0.392
OVX DM500 1.13 0.357
OVX E2(L) 0.81 0.150
OVX E2(L)+DM500 1.22 0.273
그 결과, 표 3 및 도 2에 나타낸 바와 같이, OVX D2(H) 군은 OVX control 군에 비하여 약 2.3배 자궁이 증가하였고, OVX DM250 군 및 OVX DM500 군의 경우 OVX control 군에 비하여 약 1.85 및 2.1배 자궁이 증가하는 것을 확인하였다. 또한, E2와 황칠나무 추출물을 병용투여한 OVX E2(L)+DM500 군의 경우 OVX control 군에 비하여 약 2.6배 자궁이 증가하는 것을 확인함으로써, 황칠나무 추출물이 E2와 길항 작용하지 않고, E2에 의한 자궁증식에 추가적인 효과를 보여줌을 확인하였다(표 3 및 도 2).
따라서 상기 결과를 통해 생체 내에서 황칠나무 추출물이 에스트로겐 활성을 가지며, E2와 함께 E2 작용제로 작용함을 확인하였으므로, 상기 황칠나무 추출물이 갱년기 질환 예방 및 치료를 위한 여성호르몬대체요법에 이용될 수 있다.
<제조예 1> 약학적 제제의 제조
<1-1> 산제의 제조
본 발명의 황칠나무 추출물 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<1-2> 정제의 제조
본 발명의 황칠나무 추출물 100 ㎎
미결정셀룰로오스 100 ㎎
유당 100 ㎎
전분글리콘산 나트륨 18 mg
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<1-3> 캡슐제의 제조
본 발명의 황칠나무 추출물 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유 당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<1-4> 환의 제조
본 발명의 황칠나무 추출물 1 g
유당 1.5 g
글리세린 1 g
자일리톨 0.5 g
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1 환 당 4 g이 되도록 제조하였다.
<1-5> 과립의 제조
본 발명의 황칠나무 추출물 150 ㎎
대두 추출물 50 ㎎
포도당 200 ㎎
전분 600 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.
<제조예 2> 식품의 제조
<2-1> 과자 및 분식의 제조
본 발명의 황칠나무 추출물 0.5~5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
<2-2> 유제품의 제조
본 발명의 황칠나무 추출물 5~10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
<2-3> 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다. 검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
본 발명의 황칠나무 추출물을 진공 농축기에서 감압 농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다. 상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 SBE의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),
종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),
본 발명의 황칠나무 추출물 건조분말(3 중량부),
영지(0.5 중량부), 및 지황(0.5 중량부)
<제조예 3> 음료의 제조
본 발명의 황칠나무 추출물 1000 ㎎
구연산 1000 ㎎
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수를 가하여 전체 900 ㎖
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강식품 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
본 발명은 황칠나무(Dendropanax morbifera LEV.) 추출물을 유효성분으로 함유하는 여성 갱년기 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물, 및 상기 질환 예방 및 개선용 건강식품에 관한 것으로, 본 발명의 황칠나무 추출물은 갱년기 여성에서 에스트로겐 결핍으로 유래된 다양한 증상을 개선시킬 수 있는 호르몬대체요법으로 유용하게 사용될 수 있다.

Claims (12)

  1. 황칠나무(Dendropanax morbifera LEV.) 추출물을 유효성분으로 함유하는 여성 갱년기 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 황칠나무 추출물은 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것을 특징으로 하는 여성 갱년기 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  3. 제 2항에 있어서, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것을 특징으로 하는 여성 갱년기 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 여성 갱년기 질환은 안면홍조, 발한, 피부건조, 질건조증, 질위축, 하부 요도 위축, 질염, 방광염, 배뇨통, 급뇨, 집중장애, 단기 기억장애, 불안, 신경과민, 기억력 감퇴, 근육통, 관절통 및 골다공증으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 여성 갱년기 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 에스트로겐 수용체(estrogen receptor) 작용제(agonist)인 것을 특징으로 하는 여성 갱년기 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  6. 황칠나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 여성 갱년기 질환 예방 및 개선용 건강식품.
  7. 제 6항에 있어서, 상기 여성 갱년기 질환은 안면홍조, 발한, 피부건조, 질건조증, 질위축, 하부 요도 위축, 질염, 방광염, 배뇨통, 급뇨, 집중장애, 단기 기억장애, 불안, 신경과민, 기억력 감퇴, 근육통, 관절통 및 골다공증으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 여성 갱년기 질환 예방 및 개선용 건강식품.
  8. 제 6항에 있어서, 상기 건강식품은 에스트로겐 수용체 작용제인 것을 특징으로 하는 여성 갱년기 질환 예방 및 개선용 건강식품.
  9. 약학적으로 유효한 양의 황칠나무 추출물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 여성 갱년기 질환 예방 또는 개선방법.
  10. 약학적으로 유효한 양의 황칠나무 추출물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 여성 갱년기 질환 치료방법.
  11. 여성 갱년기 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물로 사용하기 위한 황칠나무 추출물의 용도.
  12. 여성 갱년기 질환 예방 및 개선용 건강식품으로 사용하기 위한 황칠나무 추출물의 용도.
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