KR20150037208A - 여성 폐경기 증후군 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 하이퍼포린을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 개선, 치료 또는 예방용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 하이퍼포린은 인간 유방조직 유래 세포주인 MCF-7 세포에서 에스트로겐 반응 부위(Estrogen Responsive Element; ERE), 구체적으로 에스트로겐 수용체(Estrogen Receptor; ER)의 발현을 촉진하고, 상기 MCF-7의 생장을 촉진하므로, 에스트로겐 활성과 갖는 효과를 가질 뿐만 아니라, 세포독성이 없어 안정성이 인정되고, 오랜 기간 음용 또는 식용되던 식물로부터 유래된 것이므로 부작용의 문제도 없으므로, 본 발명의 조성물의 유효성분인 하이퍼포린은 여성 폐경기 증후군 치료, 개선 또는 예방의 용도로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

여성 폐경기 증후군 치료용 조성물{COMPOSITION FOR TREATING POSTMENOPAUSAL SYNDROME}

본 발명은 여성 폐경기 증후군 치료, 개선 또는 예방용 조성물, 구체적으로 천연물 유래 성분을 유효성분으로 하는 여성 폐경기 증후군 치료, 개선 또는 예방용 조성물에 관한 것이다.

여성은 나이가 들면서 성적으로 성숙하게 되는 일련의 과정을 거치게 되는데 이 시기를 사춘기(puberty)라고 한다. 이는 한 개인의 신체적 구조와 정서가 그 본래의 기능을 다할 수 있는 상태에 이르는 과정을 말한다. 사춘기 이후 여성은 여성호르몬인 에스트로겐(estrogen)과 프로게스테론(progesterone)을 분비하게 된다. 구체적으로, 뇌하수체에서 분비되는 성선자극호르몬(gonadotropin)이 신호를 전달하면 월경주기를 조절하고, 임신을 가능하게 하는 호르몬인 난포자극호르몬(Folliocle Stimulating Hormone; FSH)과 황체형성호르몬 (Lutenizing Hormone; LH)이 분비되며, 상기 난포자극호르몬과 황체형성호르몬은 다시 난소에 작용하여 에스트로겐과 프로게스테론을 분비하게 된다.

상기 에스트로겐은 난소 내의 난포에서 분비되는 호르몬으로서, 생식기를 발육시키고 그 기능을 나타내도록 하여 제2차 성징을 발달시키며 자궁 발육, 내막 증식, 젖샘 발육, 규칙적 월경 등을 촉진한다. 상기 에스트로겐은 난소 이외에도 태반을 비롯하여 부신피질이나 정소로부터 소량 분비되는데, 에스트론, 에스트라디올 및 인체에서 볼 수 있는 에스트리올 등 3 종류의 스테로이드가 알려져 있다.

상기 에스트로겐 중 폐경기 이전의 여성에게 가장 많으면서 강력한 에스트로겐인 17 베타-에스트라디올(E2)은 난포를 만들어내면서 합성되고, 혈액으로 분비되어 부분적으로 성 호르몬 결합 글로불린과 결합하여 몸 전체의 세포로 흐르게 된다. 상기 에스트라디올 대사의 주요 경로는 상기 에스트라디올이 약한 에스트로겐인 에스트론(E1)으로 가역 산화된 후 에스트리올(E3)로 변하는 것이다.

상기 에스트로겐은 자궁 내막, 자궁 근육, 질 및 요도 상피의 성장을 자극하고, 생식기의 혈관 흐름을 원활히 하며, 자궁선 분비를 증가시키고, 프로게스테론과 황체형성 호르몬 수용체의 발현을 유도한다. 또한, 상기 에스트로겐은 여성 생식 기관의 발달과 제2차 성징 발현 외에도, 골격 성장과 발달, 여성의 지방 분배, 지질 대사 등에 영향을 주며, 피부와 콜라겐 조직, 뉴런, 심혈관계 등에도 작용한다.

여성의 경우, 나이가 들면서 난소의 기능이 저하되고, 이로 인해 에스트로겐 분비가 크게 감소하게 된다. 상기 에스트로겐의 분비 감소로 인해, 난포자극호르몬 및 황체형성호르몬에 대한 반응이 감소하고, 초기 난포기가 단축되어 월경주기가 더욱 단축되며, 배란기가 더욱 단축되고, 프로게스테론 생성이 감소된다. 결국, 난포가 반응하지 못하게 되어 에스트로겐을 생성하지 못하게 된다.

이처럼 난소기능의 전반적이고 점진적인 감소가 일어나 생리적 기능 및 성기능이 감소 내지 소실되는 과도기를 갱년기(climacteric)라 하고, 갱년기의 한 과정으로 난소기능의 정지 후에 배란이 중단되어 월경이 사라지는 것 즉, 생리의 영구적인 정지를 폐경(menopause)이라 한다. 한편, 세계보건기구(WHO)는 갱년기를 난소의 기능이 상실되어 에스트로겐의 분비가 없어지고 더 이상 임신할 수 없는 시기이며, 성년기가 끝나고 노년기로 가는 과도기로 정의하였다.

상기한 바와 같이, 여성은 난소기능이 점차 감소하는 갱년기가 40세 이후부터 서서히 시작되며 여성의 평균수명이 점차 연장됨에 따라 호르몬 결핍기간은 수명의 약 1/3 내지 1/2을 차지하게 되었다. 따라서, 폐경기 이후 여성의 건강한 삶에 대한 특별한 관심의 필요성이 증가하고 있다.

일 예로, 우리나라의 경우 2005년 65세 이상 노인인구의 구성비가 9.1%에 달하고, 2019년에는 인구 전체의 14%가 넘는 고령사회가 될 것으로 전망되고 있으며, 여성의 평균수명은 남성의 평균수명 보다 높아 2002년의 경우 80.4세로, 매년 여성의 평균수명은 증가하고 있으므로, 우리나라 여성의 경우 폐경 후 약 40년 이상 동안의 삶을 살아야 하며, 이러한 점에서 폐경기 이후 여성의 건강에 대한 관심이 증대되고 있다.

상기 폐경 또는 그 이전을 포함하여 갱년기 동안 호르몬의 변화, 구체적으로 에스트로겐 생성의 감소, 난포자극호르몬 및 황체화호르몬의 상승으로 인해 나타나는 신체변화에 따른 급만성 증상을 폐경기 증상 또는 갱년기 증상이라 한다.

특히, 에스트로겐의 감소는 여성의 비뇨기, 생식기 뿐만 아니라 신체의 다른 부위에서 영향을 미치므로 에스트로겐의 분비 감소는 신체전반에 걸쳐 큰 영향을 미치게 된다.

일 예로, 갱년기 여성의 대부분은 안면홍조(Hot Flush), 빈맥, 발한, 불안 이나 수면장애 등의 여성호르몬 급성결핍증상을 경험하고 있으며, 일부 여성에서는 만성적인 여성호르몬 결핍으로 인하여 심혈관질환, 골다공증 등의 만성 질환으로 인해 곤란을 겪고 있다.

구체적으로, 상기 폐경기 증상으로는 열성홍조(hot flush), 야간 발한(night sweat), 빈맥 또는 두통 등의 혈관성 변화에 의한 증상이 있고, 근육통, 관절통 및 요통과 같은 근골격계의 변화에 의한 증상이 있으며, 기억력 감퇴, 우울증, 집중력 감퇴, 불안증세 및 현기증과 같은 뇌신경계 변화에 의한 증상이 있다.

또한, 에스트로겐의 감소로 피의 공급이 원활하게 이루어 지지 않아 피부와 질 점막의 탄력과 수분을 잃게 된다. 일 예로 눈, 코 또는 입의 점막이 마르는 경우, 눈이 불편하거나, 목이 타는 느낌을 받기도 한다.

또한, 폐경 수년 내에 나타나는 질 건조증, 요로감염, 빈뇨 또는 요실금과 같은 비뇨생식기의 변화에 의한 증상 및 표피증상이 있고, 폐경 수년 후에 나타나는 골다공증, 아테롬성 심장질환과 같은 심혈관 질환 또는 뇌혈관 질환 등이 있다. 특히, 폐경기 이후의 여성에게 심장질환은 가장 큰 사망원인 중 하나이며, 폐경 후의 에스트로겐 감소로 인한 급속한 골 손실로 인해 다수의 여성이 골다공증으로 겪고 있다.

상기와 같이 폐경기 여성에 대한 치료의 필요성이 점차 부각되면서, 이러한 폐경기 여성의 증상 즉, 여성 폐경기 증후군의 치료를 위해 여러 방법이 검토되어 왔으며, 이 중 상기 폐경기 증후군의 치료를 위해 폐경기 여성에게 인위적으로 에스트로겐을 투여하는 호르몬 대체 요법(Hormone Replacement Therapy : HRT)이 널리 이용되고 있다.

에스트로겐은 천연에스트로겐과 합성에스트로겐의 두 가지 유형이 있다. 합성에스트로겐 호르몬제제의 투여는 경구투여법이 가장 널리 사용되는 방법이며, 비경구투여법으로는 경피패취, 경피 크림, 또는 젤, 질크림 등을 사용하는 방법이 있다.

그러나, 이러한 인위적인 합성에스트로겐의 경우, 갱년기 증상 개선에는 효과적이나 장기간 사용시 암 유발 유전자의 활성을 증가시켜 자궁암이나 유방암 등의 발병 위험이 있고, 정맥혈전증이나 담낭질환을 유발할 가능성이 높다는 주장이 제기되면서 논란이 가열되고 있다.

따라서, 상기와 같은 호르몬 대체요법에 사용되는 합성에스트로겐의 대체물로서 합성에스트로겐과 비슷한 활성은 가지면서, 부작용이 적은 천연물 유래 에스트로겐을 찾고자 하는 연구가 활발히 진행되어 왔다.

천연물 유래 에스트로겐으로, 동물성 천연 제품인 말의 오줌으로부터 제조된 프레마린은 임상적 실험에서 에스트라디올과 에스트론 농도를 월경기 정도로 높여주는 것으로 나타났다. 그러나, WHI(Women's Health Initiative) 임상결과, 실험대상 여성 중 유방암이 26%, 심장마비가 29% 및 졸도가 44% 증가하였고, 혈액응고가 2배 증가하는 등의 심각한 부작용이 보고되어, 임삼시험 자체가 5년 만에 종료되었으며, 미국 식품의약안정청(FDA)은 2003년 이 호르몬 의약품에 대해 경고 문구를 넣도록 조치하기에 이르렀다.

이러한 합성에스트로겐 및 동물성 에스트로겐 제품과 같은 기존 호르몬 대체제의 복용을 통해 전반적인 폐경기 증상에 대한 대처가 가능하지만, 심각한 부작용으로 인해 그 사용이 제한된다는 문제점이 있다.

따라서, 상기와 같은 호르몬 대체요법에 사용되는 합성에스트로겐의 대체물로서 합성에스트로겐과 비슷한 활성은 가지면서, 부작용이 적은 식물 유래의 천연에스트로겐을 찾고자 하는 연구가 활발히 진행되고 있는 추세이다.

특히, 식물 유래의 천연에스트로겐을 흔히 식물성 에스트로겐(phytoestrogen)이라고 칭한다.

상기 식물성에스트로겐이란 일반적으로 여성호르몬 에스트로겐과 기능 및 구조가 유사한 식물로부터 유래한 비스테로이드성 화합물을 지칭하며, 식물의 줄기, 뿌리, 꽃이나 종자에서 발견된다.

상기 식물성 에스트로겐의 예로는 크게 콩과 칡에서 유래한 이소플라본(isoflavone), 클로버에서 유래한 쿠메스탄(coumestan), 아마종자에서 유래한 리그난(lignan) 등이 있다. 그 외, 플라바논(flavanones), 플라본(flavones), 디하이드로칼콘(dihydrocalchones) 등이 있다.

일 예로, 이소플라본은 식물 내에서는 바이오카닌 A(biochanin A)와 포르모노네틴(formononetin)의 비활성형 배당체로 존재하나, 체내로 흡수되어 장내 박테리아의 글루코시다제(glucosidase)에 의해 각각 에스트로겐과 유사한 구조를 갖는 제니스테인(genistein)과 다이드제인(daidzein)으로 변환되어 에스트로겐과 같은 활성을 나타내게 된다.

상기 식물성 에스트로겐의 대표적인 예인 제니스테인은 세포의 단백질 타이로신 인산화효소(protein tyrosine kinase)를 억제하여 암세포의 성장을 억제하는 항암효과도 가지는 것으로 보고된바 있다. 그러나, 효과가 없거나 자궁암 및 유방암의 유전적 소인을 가지고 있는 사람들에게 있어서는 오히려 암을 유발할 수 있다는 것도 보도된 바 있다.

따라서, 제니스테인의 부작용과 같은 부작용이 일어나지 않으면서도, 우수한 에스트로겐 활성을 갖는 새로운 식물성에스트로겐을 개발하는 것이 요구된다. 이러한 필요성으로 인해, 오랫동안 식품으로 사용되어 그 안전성이 입증된 천연자원들을 객관적으로 검증하여 여성 폐경기 증후군에 대한 치료, 개선 또는 예방효과를 갖는 천연물질을 개발하는 것이 시급히 요구된다.

KR 10-1067028 B KR 10-1075554 B KR 10-2006-0012316 A KR 10-2004-0111519 A

상기 종래의 문제점을 해결하기 위하여, 본 발명의 목적은 여성 폐경기 증후군 치료, 예방 또는 개선에 효과가 있는 천연물 유래 성분을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 치료, 개선 또는 예방용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 조성물을 제공한다. 상기 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 조성물은 약학조성물 또는 의약조성물 일 수 있다.

보다 구체적으로, 본 발명은 하이퍼포린(hyperforin)을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 약학조성물을 제공한다.

상기 하이퍼포린은 요한초(Hypericum perforatum) 추출물, 구체적으로 요한초의 꽃 및 잎 혼합물의 추출물로부터 분리된 것일 수 있다. 상기 요한초 추출물은 용매추출법에 의해 제조된 용매추출물, 구체적으로 물, 탄소수 1 내지 5의 알코올 또는 이들의 혼합물로 추출한 용매추출물일 수 있다.

상기 여성 폐경기 증후군은 안면홍조, 골다공증 및 정맥혈전증으로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다.

또한, 본 발명은 하이퍼포린(hyperforin)을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방용 식품조성물을 제공한다.

상기 하이퍼포린은 요한초(Hypericum perforatum) 추출물, 구체적으로 요한초의 꽃 및 잎 혼합물의 추출물로부터 분리된 것일 수 있다. 상기 요한초 추출물은 용매추출법에 의해 제조된 용매추출물, 구체적으로 물, 탄소수 1 내지 5의 알코올 또는 이들의 혼합물로 추출한 용매추출물일 수 있다.

상기 여성 폐경기 증후군은 안면홍조, 골다공증 및 정맥혈전증으로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다.

상기 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방용 식품조성물은 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방용 건강기능성식품일 수 있다.

본 발명의 발명자들은 우수한 에스트로겐 활성을 나타내면서도, 기존 호르몬 대체제에 사용되는 합성에스트로겐이나 동물성 에스트로겐과 같이 부작용과 같은 부작용이 일어나지 않고, 독성도 문제되지 아니한 식물성에스트로겐을 개발하기 위하여, 오랫동안 식품으로 사용되어 그 안전성이 입증된 천연자원을 대상으로 연구 하던 중, 요한초 추출물, 구체적으로 요한초의 꽃과 잎만을 분리하여 추출한 추출물이 인간 유방조직 유래 세포주인 MCF-7 세포에서 에스트로겐 반응 부위(Estrogen Responsive Element; ERE), 구체적으로 에스트로겐 수용체(Estrogen Receptor; ER)의 발현을 촉진하고, 상기 MCF-7의 생장을 촉진하므로, 에스트로겐 활성과 갖는 효과를 가진다는 것을 확인하였고, 상기 요한초 추출물의 에스트로겐 활성을 나타내는 성분에 대해 연구하던 중, 상기 요한초 추출물 및 상기 요한초 추출물의 분획물 중에서 에스트로겐 활성이 우수한 추출물 및 분획물에 포함된 약리성분에 대해 분석하던 중, 하이퍼포린(hyperforin) 및 하이퍼포린(hyperforin)이 확인되었으며, 상기 요한초 추출물로부터 분리된 하이퍼포린 및 하이퍼포린이 우수한 에스트로겐 활성을 갖는다는 것을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 유효성분이란 조성물, 구체적으로 약학조성물 또는 식품조성물에 있어서 여성 폐경기 증후군의 치료, 개선 또는 예방 효과, 구체적으로 에스트로겐과 같은 활성 또는 에스트로겐 유사 활성을 제공하는 성분을 의미한다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 하이퍼포린은 후로로글루신(floroglucin) 유도체로, 요한초를 포함한 하이퍼리쿰 속(Hypericum sp.) 식물 특히, 요한초 꽃상부의 친유성 분획물(lipophilic fraction)의 주요성분 중 하나로, 항우울제(anti-depressant)로서 중요한 역할이 확인되어, 이에 대해 다양한 연구가 진행되어 있고, 알츠하이머와 같은 뇌신경질환의 치료 효과에 대해서도 입증된 바 있다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 유도체란 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 일반적으로 인식되는 변형으로 변형될 수 있는 화합물을 의미하며, 일 예로, 산의 에스테르, 산의 아미드, 알코올 또는 티올에 대한 벤질기와 같은 보호기 등을 포함한다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 추출물이란 식물에 추출용매를 처리하여 얻은 추출 결과물 또는 추출물 제조방법에 의해 제조된 결과물을 의미하며, 식물 자체를 동물에게 투여할 수 있도록 제형화(예컨대, 분말화) 결과물을 포함하는 개념이다.

상기 추출물은 조추출물(crude extract)로 통용되는 의미를 갖지만, 광의적으로는 추출물을 추가적으로 분획(fractionation)한 분획물도 포함한다. 구체적으로, 상기 추출물은 추출용매를 이용하여 추출한 것뿐만 아니라, 여기에 정제과정을 추가적으로 적용하여 얻은 것도 포함한다. 일 예로, 상기 추출물에는 상기 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 얻은 분획, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획을 포함한다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 약제학적 유효량은 약리학적 효능을 발휘하는 데 충분한 양을 의미한다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 에스트로겐(estrogen)은 주로 동물의 난소 안에 있는 여포와 황체에서 주로 분비되며, 태반에서도 분비되어　생식주기에 영향을 주는 여성호르몬을 의미한다. 상기 에스트로겐은 벤젠 고리를 가지고 있는 스테로이드 호르몬으로 화학적으로 매우 안정되어 있으며, 일반적으로 에스트론(E1), 에스트라디올(E2) 및 에스트리올(E3)의 세 종류가 잘 알려져 있다. 상기 에스트로겐은 생식주기에 직접적인 영향을 주기 때문에 월경에 이상이 왔을 때의 치료법으로 사용되거나, 피임약에도 사용되기도 하며, 여성이 폐경에 이르게 되면 나타나는 갱년기 장애 또는 폐경기 증후군의 주된 원인이 에스트로겐 부족이기 때문에 갱년기 장애 또는 폐경기 증후군의 치료 개선 또는 예방을 위한 호르몬 요법에 사용되기도 한다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 폐경기 증후군 또는 갱년기 증상은 폐경기 여성에게서 호르몬 생산의 감소로 인하여 발생하는 증상을 의미하고, 일반적으로, 안면홍조, 발한, 수면 중 발한, 피부 건조, 질 건조증, 질 위축, 하부 요도 위축, 성교 통, 질염, 방광염, 배뇨통, 급뇨, 집중장애, 단기 기억장애, 불안, 신경과민, 기억력 감소, 성욕 감퇴, 근육통, 관절통 또는 골다공증 등을 포함하는 개념이다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 치료 또는 개선은 본 발명의 조성물의 투여로 여성 폐경기 증후군 증상이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 예방은 본 발명의 조성물의 투여로 여성 폐경기 증후군 증상을 억제시키는 모든 행위를 의미한다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 투여는 임의의 적절한 방법으로 개체에 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 개체는 본 발명의 조성물을 투여하여 여성 폐경기 증후군에 걸린 인간, 원숭이, 개, 염소, 돼지 또는 쥐 등을 포함한 모든 동물, 구체적으로 포유류에 속하는 동물을 의미한다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 약학적으로 유효한 양은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜 또는 위험 비율로 여성 폐경기 증후군을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 이는 개체의 여성 폐경기 증후군의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.

본 발명은 하이퍼포린(hyperforin)을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 약학조성물에 관한 것이다. 상기 하이퍼포린은 요한초 추출물로부터 분리된 것일 수 있다.

상기 요한초(Hypericum perforatum, St. John? wort)는 유럽과 서아시아 등이 원산지인 허브의 하나로, 햇빛이 잘 비추는 곳은 물론 반그늘에서도 잘 자랄 정도로 생명력이 강해서 집에서 키우기가 쉬우며, 꺾꽂이와 씨뿌리기로 번식한다. 상기 요한초는 예로부터 우울증 치료, 불면증 치료, 스트레스 해소 등을 목적으로 허브차로 만들어 먹어 왔으며, 상기 요한초 꽃을 기름에 담궜다가 외용하면 수렴작용, 항균작용 또는 항염작용 등의 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

상기 요한초 추출물은 바람직하게는 요한초의 꽃과 잎 부위, 구체적으로 요한초의 꽃 및 잎으로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상, 일 예로 요한초의 꽃 및 잎의 혼합물을 추출용매로 추출한 것일 수 있다. 상기 추출용매는 물, 탄소수 1 내지 5의 알코올, 상기 알코올의 희석수 및 이들의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.

상기 추출물은 추출용매로 추출하거나 추출용매로 추출하여 제조한 추출물에 분획용매를 가하여 분획하여 제조한 분획물일 수 있다. 상기 분획물은 추출용매로 추출한 추출물을 헥산, 메틸렌클로라이드, 아세톤, 에틸아세테이트, 에틸에테르, 클로로포름, 물 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 용매, 바람직하게는 헥산, 메틸렌클로라이드 및 에틸아세테이트로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 용매, 더욱 바람직하게는 에틸아세테이트로 분획과정을 더욱 실시한 것 일 수 있다.

상기 요한초 추출물은 본 발명의 실시예에서 확인된 바에 의하면, pERα-RL-SV40 재조합벡터(pERα-RL-SV40 plasmid) 및 pERβ-RL-SV40 재조합벡터(pERβ-RL-SV40 plasmid)를 이용하여 형질감염(transfection)된 MCF-7 세포주(인간 유방암 세포주)에서 루시퍼레이즈 활성을 측정하여 에스트로겐수용체(Estrogen Receptor; ER) 활성화 정도를 확인한 결과, 우수한 루시퍼레이즈 활성이 확인되었고, 상기 MCF-7 세포주의 생장 촉진여부를 확인한 결과, 상기 MCF-7 세포주 생장 촉진 여부가 확인되어, 상기 하이퍼포린이 폐경기 증후군을 치료, 개선 또는 예방할 수 있는 것으로 확인되었다(도 3 및 도 4 참조). 특히, 상기 요한초 80% 에탄올 수용액 추출물의 분획물 중, 에틸아세테이트 분획물은 상기 MCF-7 세포주의 생장 촉진여부를 확인한 결과, MCF-7 세포주 생장을 다른 분획용매에 의해 분획된 분획물과 비교하여 가장 우수한 정도로 촉진하는 것으로 확인되었으며, 상기 분획물의 유효성분을 반복하여 확인한 결과, 상기 분획물의 유효성분이 하이퍼포린인 것으로 확인되었다.

또한, 상기 하이퍼포린은 천연식물인 요한초로부터 분리된 것이므로, 식품의 식재료 또는 차와 같은 음료의 재료로 오랫동안 사용되어 온 천연물인 요한초를 가공하여 제조된 가공물과 같은 것으로서, 안정성이 문제되지 않으며, 실험결과 세포독성도 문제되지 아니한 것으로 확인되었다.

이러한 측면에서, 상기 하이퍼포린은 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방을 위해 사용될 수 있다. 이러한 관점에서, 상기 하이퍼포린은 추출물의 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 약학조성물의 유효성분으로 사용될 수 있다.

상기 하이퍼포린을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 조성물은 인간을 포함한 동물에 직접 적용될 수 있다.

상기 여성 폐경기 증후군(postenopausal syndrome)은 폐경기뿐만 아니라 전폐경기(perimenopausal) 및 후폐경기(postmenopausal) 시기에 발생되는 에스트로겐의 감소에 의해 유발되는 모든 증상을 의미한다.

상기 전폐경기는 실제적인 폐경이 시작되기 전의 시기로, 상기 전폐경 시기에는 에스트로겐의 생성이 불규칙하게 되며, 여성의 가임능력이 크게 감소된다. 상기 전폐경기는 몇 개월 또는 몇 년 동안 지속될 수 있으며, 상기 전폐경기에도 갱년기(climacteric) 증상이 나타날 수 있다.

상기 폐경기 증후군은 성교통증, 질건조증(vaginal dryness), 수면 장애(sleep disorder), 집중력 이상(mental awareness problem), 관절통, 근골격 질환, 소화불량, 요실금, 피로, 혈관 운동 난조로 인한 신열, 안면홍조, 야간의 발한, 심계항진(palpitations), 우울증, 불안증(anxiety) 및 과민성(irritability) 등의 갱년기(climacteric) 증상을 포함하며, 더 나아가서 에스트로겐 부족에 의해 발생되는 심각한 질환이나 현상들, 일 예로 골다공증, 비뇨생식기계 질환, 심혈관계 질환, 치매, 치아손실 또는 피부 콜라겐 손실 등을 포함할 수 있다.

상기 여성 폐경기 증후군은 바람직하게는 안면홍조, 골다공증 및 정맥혈전증으로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다.

상기 하이퍼포린을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 하이퍼포린을 0.00001 중량% 내지 50 중량%로 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 하이퍼포린을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 조성물은 약제의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

본 발명의 조성물을 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있있다.

본 발명의 조성물의 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 조성물의 유효성분에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 상기 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물의 경구투여를 위한 액상 제제에는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 포함되며, 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

본 발명의 조성물의 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함될 수 있다. 상기 비경구 투여를 위한 제제에는 비수성용제, 프로필렌글리콜(propylene glycol)과 같은 현탁제, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

상기 하이퍼포린을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 조성물은 상기 하이퍼포린을 유효성분으로 단독으로 포함하거나 상기 하이퍼포린에 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방 효과가 있는 물질을 유효성분으로 더욱 포함할 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 하이퍼포린을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 조성물은, 상기 유효성분 이외에 공지의 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방 효과를 갖는 화합물 또는 천연물에 대한 추출물을 더욱 포함할 수 있다.

보다 구체적으로, 상기 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 약학조성물은 하이퍼포린에 추가로 에스트로겐(Estrogen)을 더 포함한 것일 수 있다. 상기 에스트로겐은 에스트라디올(Estradiol)일 수 있다.

호르몬이 결핍된 배양조건에서 인체 유방암 유래 세포주인 MCF-7 세포의 생장은 억제되며, 이러한 조건에서 에스트로겐 성분을 추가시 이에 의해 MCF-7 세포의 생장이 활발히 증가되므로, 이런 호르몬이 결핍된 배양조건에서 특정 성분 처리 후 MCF-7 세포의 생장을 관찰하게 되면 특정 성분의 에스트로겐 효능을 간접적으로 확인할 수 있었다.

상기 하이퍼포린을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 조성물은 상기 유효성분 외에 제형, 사용방법 및 사용목적에 따라 추가성분 즉, 약제학적으로 허용되거나 영양학적으로 허용되는 담체, 부형제, 희석제 또는 부성분을 추가로 포함할 수 있다.

보다 상세하게는 상기 하이퍼포린을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 조성물은 상기 유효성분 외에 추가로 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 중진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 추가로 함유할 수 있다. 또한, 상기 담체, 부형제 또는 희석제는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자이리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아키시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀루로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이드, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀, 생리식염수로 이루어진 군에서 선택된 1이상 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용가능하다. 상기 성분들은 상기 유효성분 즉, 하이퍼포린에 독립적으로 또는 조합하여 추가될 수 있다.

상기 하이퍼포린을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 조성물은 상기 조성물 총 중량에 대하여 상기 유효성분, 구체적으로 상기 하이퍼포린을 0.000001 중량% 내지 50 중량%, 바람직하게는 0.00001 중량% 내지 30 중량%, 더욱 바람직하게는 0.0001 중량% 내지 20 중량% 포함할 수 있다.

또한, 상기 하이퍼포린을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 조성물을 약제화하는 경우, 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 계면활성제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 더욱 포함할 수 있으며, 경구 또는 비경구 모두 사용 할 수 있다.

상기 하이퍼포린을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 조성물의 제형은 사용방법에 따라 바람직한 형태일 수 있으며, 특히 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 채택하여 제형화할 수 있다. 구체적인 제형의 예로는 과립제, 산제, 시럽제, 액제, 현탁제, 정제, 주사제, 주정제, 카타플라스마제(cataplasma), 캅셀제, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀 등이 있다.

더 나아가 상기 하이퍼포린을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 조성물은 당해 기술 분야의 공지된 적절한 방법을 사용하여 또는 레밍턴의 문헌(Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 바람직하게 제형화 될 수 있다.

본 발명에 따른 하이퍼포린을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 조성물의 투여량은, 제제화 방법, 투여방법, 복용자의 연령, 성별 및 체중, 질환의 중증도, 음식, 투여시간, 투여경로, 배설 속도 및 반응 감응성 등을 고려하여 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 일 예로, 본 발명의 하이퍼포린을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 조성물은 상기 유효성분을 기준으로 할 때, 1일 0.000001 mg/kg 내지 1000 mg/kg으로 또는 0.0001 mg/kg 내지 100 mg/kg 또는 0.003 mg/kg 내지 50 mg/kg으로 투여될 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 다른 일 실시예에 따른 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방용 조성물은 하이퍼포린을 유효성분으로 포함한다. 상기 하이퍼포린은 에스트로겐 활성이 우수한 것이 실험적으로 확인되었을 뿐만 아니라, 식품의 식재료로 오랫동안 사용되어 온 것으로 안정성이 문제되지 않으며, 실험결과 세포독성도 문제되지 아니한 것으로 확인된 요한초 유래의 것으로, 상기 요한초 추출물로부터 분리된 상기 하이퍼포린은 상기 요한초 추출물의 에스트로겐 활성을 나타내는 성분으로 확인되었으므로, 상기 하이퍼포린은 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방을 위해 사용될 수 있다. 이러한 관점에서, 상기 하이퍼포린은 추출물의 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방용 식품조성물의 유효성분으로 사용될 수 있다.

상기 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방용 조성물은 하이퍼포린(hyperforin)을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방용 식품조성물에 관한 것이다.

상기한 바와 같이, pERα-RL-SV40 재조합벡터(pERα-RL-SV40 plasmid) 및 pERβ-RL-SV40 재조합벡터(pERβ-RL-SV40 plasmid)를 이용하여 형질감염(transfection)된 MCF-7 세포주(인간 유방암 세포주)에서 루시퍼레이즈 활성을 측정하여 에스트로겐수용체(Estrogen Receptor; ER) 활성화 정도를 확인한 결과, 요한초 꽃 및 잎의 혼합물의 추출물이 농도 의존적으로 현저히 루시퍼레이즈 활성을 증가시켜, 상기 요한초 꽃 및 잎의 혼합물의 추출물이 폐경기 증후군 치료 활성이 우수한 것으로 확인되었다(도 3 및 도 4 참조). 특히, 상기 요한초 80% 에탄올 수용액 추출물의 분획물 중, 에틸아세테이트 분획물은 상기 MCF-7 세포주의 생장 촉진여부를 확인한 결과, MCF-7 세포주 생장을 다른 분획용매에 의해 분획된 분획물과 비교하여 가장 우수한 정도로 촉진하는 것으로 확인되었으며, 상기 분획물의 유효성분을 반복하여 확인한 결과, 상기 분획물의 유효성분이 하이퍼포린인 것으로 확인되었다. 이러한 관점에서, 상기 하이퍼포린은 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방 효과가 우수한 것으로 평가될 수 있다.

상기 폐경기 증후군은 성교통증, 질건조증(vaginal dryness), 수면 장애(sleep disorder), 집중력 이상(mental awareness problem), 관절통, 근골격 질환, 소화불량, 요실금, 피로, 혈관 운동 난조로 인한 신열, 안면홍조, 야간의 발한, 심계항진(palpitations), 우울증, 불안증(anxiety) 및 과민성(irritability) 등의 갱년기(climacteric) 증상을 포함하며, 더 나아가서 에스트로겐 부족에 의해 발생되는 심각한 질환이나 현상들, 일 예로 골다공증, 비뇨생식기계 질환, 심혈관계 질환, 치매, 치아손실 또는 피부 콜라겐 손실 등을 포함할 수 있다.

상기 여성 폐경기 증후군은 바람직하게는 안면홍조, 골다공증 및 정맥혈전증으로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다.

상기 하이퍼포린을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방용 조성물은 상기 하이퍼포린을 유효성분으로 단독으로 포함하거나 상기 하이퍼포린에 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방 효과가 있는 물질, 구체적으로 상기 하이퍼포린 이외에 공지의 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방 효과를 갖는 화합물 또는 천연물에 대한 추출물을 더욱 포함할 수 있다.

보다 구체적으로, 상기 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방용 식품조성물은 하이퍼포린에 추가로 에스트로겐(Estrogen)을 더 포함한 것일 수 있다. 상기 에스트로겐은 에스트라디올(Estradiol)일 수 있다.

또한, 상기 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방용 식품조성물은 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방용 건강기능성식품일 수 있다.

상기 식품이란 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 건강기능식품, 음료, 식품 첨가제 및 음료 첨가제 등을 모두 포함하는 의도이다.

상기 식품은 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강기능식품 등이 있다. 추가로, 본 발명에서 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영, 유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 조미료(예, 라면스프 등)을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 건강기능식품, 음료, 식품 첨가제 및 음료 첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.

상기 건강기능식품이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체중조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다.

상기 건강기능식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 건강기능식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.

상기 음료란 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며 건강기능음료를 포함하는 의도이다. 상기 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 하이퍼포린을 유효성분으로 포함하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

상기의 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어 포도당, 과당 등 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 수크로스 등 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 식품조성물 100㎖ 당 일반적으로 약 1 내지 20g, 또는 5 내지 12g일 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일 주스, 과일 쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육을 추가로 함유할 수 있다.

상기 외에 본 발명의 식품조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분을 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하지 않지만, 본 발명의 하이퍼포린 100 중량부 당 0 내지 200,000 중량부 범위에서 선택될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 건강기능음료란 음료에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 음료의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 음료 군이나 음료 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 음료를 의미한다.

상기 건강기능음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 본 발명의 하이퍼포린을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

상기 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어 포도당, 과당 등 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 수크로스 등 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖ 당 일반적으로 약 1 g 내지 20 g, 바람직하게는 5 g 내지 12 g이다.

또한, 하이퍼포린을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방용 식품조성물에 있어서, 상기 유효성분은 전체 식품 중량의 0.0000001 중량% 내지 10 중량%로 포함될 수 있으며, 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.00000002 g 내지 5 g의 비율로 포함될 수 있다.

본 발명의 하이퍼포린은 요한초 추출물로부터 분리된 것으로, 실험결과에서 상기 요한초 추출물은 에스트로겐 활성이 확인되었고, 상기 요한초 추출물 및 분획물에 대해 실험을 더욱 수행한 결과, 상기 하이퍼포린인 상기 요한초 추출물의 에스트로겐 활성을 나타내는 성분으로 확인되었으므로, 상기 하이퍼포린은 폐경기 여성에서 에스트로겐 결핍에 의해 발생하는 안면홍조증, 골다공증, 정맥혈전증 등과 같은 폐경기 증후군을 예방, 완화 또는 치료하기 위해 시행하는 호르몬 대체 요법(Hormone replacement therapy; HRT)에 유용하게 이용될 수 있으며, 종래의 여성 폐경기 증후군에 대한 치료제와 달리 세포 독성도 없을 뿐만 아니라 상기 하이퍼포린은 예로부터 차 또는 식품으로 식용되었던 요한초로 유래된 것이므로, 부작용이 발생될 가능성이 적은 안전한 물질로 추측되므로, 종래 여성 폐경기 증후군에 대한 치료제에 비하여 뛰어난 효과를 갖는다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 요한초 추출물 및 분획물을 제조하는 과정을 그린 도면이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 요한초 꽃 및 잎의 혼합물의 추출물의 세포독성을 확인한 그래프로, 상기 그래프에서 가로축의 CNT는 용매인 DMSO를 처리한 대조군을 나타내고, 가로축의 숫자는 각 추출물의 투여량이며, 세로축은 대조군을 기준으로 측정된 세포 수의 상대적 수치를 나타낸 것이다.
도 3 및 도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 요한초 꽃 및 잎의 혼합물의 추출물의 에스트로겐 활성을 확인한 그래프로, 도 2는 ERα를 MCF-7에 형질주입한 후, 루시퍼레이즈 활성을 측정한 결과이고, 도 3은 ERβ를 MCF-7에 형질주입한 후, 루시퍼레이즈 활성을 측정한 결과이며, 각 그래프에서 가로축의 CNT는 용매인 DMSO를 처리한 음성대조군을 나타내고, positive는 17β-estradiol을 처리한 양성대조군을 나타내며, 가로축의 숫자는 추출물의 투여량이며, 세로축은 음성대조군을 기준으로 측정된 형광정도 즉, 루시퍼레이즈 활성을 나타낸 것이다.

이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.

< 실시예1 . 요한초 추출물 및 분획물의 제조>

요한초의 경우 중국에서 수입한 건조 요한초를 사용하였으며, 이들을 세척하고 다시 건조한 후 사용하였다. 요한초는 지상부위 중 잎과 꽃만 분리한 것(꽃 및 잎의 혼합물)을 사용하였다. 요한초 추출물은 각각의 부위를 세절한 후, 상기 요한초 각 부위 10 g 및 에탄올 70% 수용액 200 ml를 추출용기에 넣고 50℃에서 추출을 수행하였다. 상기 열수추출을 수행한 후, 여과 및 농축과정을 수행하고, - 20℃에서 건조하여 추출물을 제조하였다.

또한, 도 1에 나타낸 바와 같이, 상기 제조법으로 제조된 동결건조한 추출물에 순차적으로 유기용매를 처리하면서 분획을 수행하여, 분획물을 제조하였다. 구체적으로, 상기 동결건조한 요한초 추출물을 용매로 녹인 후, 동량의 헥산(Hexane)을 넣고 좌우로 흔들어 준 뒤 층이 분리되도록 방치하였다. 헥산 층(Hexane layer)과 물 층(Water layer)으로 분리되면, 헥산 분획을 수기에 옮겨 담고 남아 있는 물 층에 동량의 클로로포름(Chloroform)을 첨가하였다. 두 용액이 잘 반응하도록 좌우로 흔들어 준 뒤 층이 분리되도록 방치하였다. 상기 클로로포름 층(Chloroform layer)과 물 층으로 분리되면, 클로로포름 분획은 수기에 옮겨 담고 남아있는 물 층에 동량의 에틸아세테이트(Ethyl acetate)를 첨가하였다. 두 용액이 잘 반응하도록 좌우로 흔들어 준 뒤 층이 분리되도록 방치하였다. 에틸아세테이트 층(Ethyl acetate layer)과 물 층을 분리하여 에틸아세테이트 분획물은 수기에 옮겨 담고 남아 있는 물 층에 동량의 부탄올을 첨가하였다. 두 용액이 잘 반응하도록 좌우로 흔들어 준 뒤 층이 분리 되도록 방치하였다. 부탄올 층(Buthanol layer)과 물 층을 분리하여 부탄올 분획물은 수기에 옮겨 담고 남아 있는 수층도 수기에 옮겨 담았다. 수기에 모아둔 각각의 분획물에서 분획용매인 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물을 증발시킨 뒤, - 20℃에서 건조하여 분획물을 제조하였다.

상기 제조된 추출물 및 분획물은 냉동조건에서 보관한 후, 필요한 경우 DMSO로 녹여 사용하였다.

< 실시예2 . 요한초 추출물의 에스트로겐 활성 측정>

상기 제조된 요한초 추출물의 에스트로겐 활성을 측정하기 위하여, 우선 시료를 제조하였다. 17β-estradiol(E8875-1G, Sigma, USA)은 에탄올을 이용하여, 3 mM (0.81714 g/ml) 농도로 제조한 후, 이에 용매를 첨가하는 방법으로 희석하여 사용하였다. 요한초 추출물은 상기 실시예 1에서 제조된 요한초 꽃 및 잎의 혼합물의 추출물을 20 mg/ml의 농도로 DMSO에 녹인 후, 희석하면서 사용하였다.

실시예 2-1. 독성 평가

ATCC(American Type of Cell Culture)에서 분양받은 인간유방 유래 암세포주인 MCF-7 세포를 배양배지 (DMEM/F12(11330-032, GIBCO, USA) + 10% FBS(26140-111, GIBCO, USA) + 1% Penicillin Streptomycin(15140-122, GIBCO, USA) + 1% Bovine insulin(Cellapplications, USA))에 계대배양하였다. 상기 배양 후, 96 well plate에 2 × 10⁴ cell / 100 μl의 함량으로 각 well에 분주(seeding)한 후, 37 ℃에서 5% CO₂ incubator 배양기를 이용하여 24시간 동안 배양하고, 상기 각각의 추출물을 처리한 후, 다시 24시간 경과 후에, CCK-8(ck04-13, Woongbee, 대한민국)을 10 μl씩 처리하고, 450 nm에서 흡광도를 측정하여, 세포독성을 확인하였다. 상기 흡광도를 측정한 결과는 시료 대신 동량의 DMSO만을 처리한 대조군(CNT)을 기준으로 표시하여, 도 2에 나타내었다.

상기 도 2에 나타낸 바와 같이, 요한초 꽃 및 잎 혼합물의 추출물은 모든 농도에서 세포독성이 문제되지 않는 것으로 확인되었다.

실시예 2-2. 형질감염된 MCF -7 세포주를 이용한 에스트로겐 활성 평가

상기 실시예 2-1과 같이 배지에서 계대배양한 MCF-7 세포주를 96 well plate에 한 well 당 2 × 10⁴ cell / 100 μl로 각 well에 분주(seeding)한 후, 37 ℃에서 5% CO₂ incubator 배양기를 이용하여 24시간 동안 배양하였다.

5.2 ㎕의 전체 반응용액에 pRL-SV40 vector에 ER α(28230, addgene Co., USA) 또는 ER β(35562, addgene Co., USA)를 주입시켜 제조된 형질감염용 DNA 0.11 μg 및 FuGENE HD(E2311, Promega, USA) 0.33 μl를 첨가한 후, 실온에서 10분간 반응시켜 제조된 반응액 5 μl를 각각의 well 당 첨가한 후, 24시간 동안 반응시켜 MCF-7 세포주를 각각의 에스트로겐 수용체(ER)로 형질감염(transfection)시켰다.

상기 형질감염시킨 세포를 PBS로 세척한 후, 상기 추출물 및 분획물이 특정 함량으로 포함된 배지 100 μl를 가한 후, 48시간 동안 배양하였다. 상기 배양 후, Luciferase Assay(E1501, Promega, USA)를 진행하는 well에는 1 × Passive Lysis Buffer 20 μl를 첨가하고, Renilla Luciferase Assay(E2820, Promega, USA)를 진행하는 well에는 1 × Renilla Luciferase Lysis Buffer 20 μl를 첨가한 후, 15분 동안 교반하였다. 상기 각각의 Lysis Buffer에 의해 용해된 Lysate를 20 μl씩 white plate(136101, nunc, USA)에 옮긴 후, Luminometer를 이용하여 형광정도를 측정하였다. 이 때, 음성대조군(CNT)의 경우, DMSO만을 동량으로 처리하였고, 양성대조군(positive)의 경우, 17β-estradiol을 10 nM 처리하였다. 상기 각각의 결과를 도 3 및 도 4에 나타내었다.

상기 도 3에 나타낸 바와 같이, ERα의 경우, 요한초 꽃 및 잎의 혼합물 추출물의 경우 농도의존적으로 형광활성이 증가되었고, 구체적으로 DMSO에 요한초 꽃 및 잎의 혼합물 추출물을 60 ppm으로 처리한 경우, 양성대조군(positive)인 에스트로겐을 10 nM 처리한 것과 유사한 활성을 나타내었고, 최고 농도인 100 ppm을 사용한 경우 음성대조군에 비하여 약 250%에 해당된 형광활성을 나타내었다. 또한, 도 3에 나타낸 바와 같이, ERβ의 경우에도, 요한초 꽃 및 잎의 혼합물의 추출물에서 형광활성이 나타났으며, 구체적으로 DMSO에 요한초 꽃 및 잎의 혼합물 추출물을 20 ppm으로 처리한 경우, 음성대조군은 물론 양성대조군(positive) 모두에 대해서 약 300% 내지 500%의 현저하게 우수한 형광활성이 나타나는 것으로 확인되었다.

상기 결과로부터, 요한초 꽃 및 잎의 추출물은 우수한 에스트로겐 활성을 가지는 것으로 확인되었다.

Claims (7)

1. 하이퍼포린(hyperforin)을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 약학조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 하이퍼포린(hyperforin)은 요한초(Hypericum perforatum)의 꽃 및 잎 혼합물의 용매추출물로부터 분리된 것인 여성 폐경기 증후군 예방 및 치료용 조성물.
3. 제1항에 있어서,
   상기 여성 폐경기 증후군은 안면홍조, 골다공증 및 정맥혈전증으로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 약학조성물.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 약학조성물은 에스트로겐(Estrogen)을 더 포함한 것인 여성 폐경기 증후군 치료 또는 예방용 약학조성물.
5. 하이퍼포린(hyperforin)을 유효성분으로 포함하는 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방용 식품조성물.
6. 제5항에 있어서,
   상기 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방용 식품조성물은 에스트로겐(Estrogen)을 더 포함한 것인 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방용 식품조성물.
7. 제6항에 있어서,
   상기 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방용 식품조성물은 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방용 건강기능성식품인 여성 폐경기 증후군 개선 또는 예방용 식품조성물.

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