KR102065934B1 - 쥐눈이콩 및 황칠나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 갱년기 질환 예방 및 치료용 조성물 - Google Patents

쥐눈이콩 및 황칠나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 갱년기 질환 예방 및 치료용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 쥐눈이콩 및 황칠나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 갱년기 질환예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 여성 갱년기 증상의 개선 기능을 갖도록 하는 기능성 식품을 제공하며, 폐경기 이후의 여성들에게 건강상의 문제를 유발할 수 있는 각종 질환의 예방 및 치료에 사용될 수 있는 쥐눈이콩 및 황칠나무 추출물의 제조 방법에 관한 것이다.

Description

쥐눈이콩 및 황칠나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 갱년기 질환 예방 및 치료용 조성물{Composition for prevention and treatment of climacteric disorder comprising extracts of Dendropanax morbifera and Rhynchosia Nulubilis}
본 발명은 쥐눈이콩 및 황칠나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 갱년기 질환예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 여성 갱년기 증상의 개선기능을 갖도록 하는 기능성 식품을 제공하며, 폐경기 이후의 여성들에게 건강상의 문제를 유발할 수 있는 각종 질환의 예방 및 치료에 사용될 수 있는 쥐눈이콩 및 황칠나무 추출물의 제조 방법에 관한 것이다.
과학과 문명의 발달로 산업화된 현대를 살아가는데 있어서 인간은 그 수명이 점차 연장됨과 동시에 각종 스트레스, 공해 및 자연발생적인 노화 현상 등으로 인하여 면역력이 저하되고 노화가 진행되게 된다. 특히 여성의 경우 40대 이후 서서히 시작되는 갱년기 증상으로 인해 신체적 및 정신적 어려움을 겪고 있다.
한편, 갱년기란 내분비 증후군의 일종으로 난소기능의 전반적이고 점진적인 노화로 인한 여성호르몬, 즉 에스트로겐의 감소로 인해 생리적 기능 및 성기능이 감소 내지 소실되는 과도기를 말한다. 이러한 갱년기의 증상으로는 안면홍조, 빈맥, 발한 또는 두통과 같은 혈관성 변화에 의한 증상이 있고, 근육통, 관절통 및 요통과 같은 근골격계 변화에 의한 증상이 있으며, 빈뇨 또는 요실금과 같은 비뇨생식기 변화에 의한 증상이 있고, 기억력 감퇴, 우울증, 집중력 감퇴 및 현기증과 같은 뇌신경계 변화에 의한 증상이 있으며, 이 외에도 시력감퇴 및 피부와 모발이 변화되는 증상들이 발생되며, 호르몬 변화로 인한 골다공증이나 심혈관계 질환 등 여성의 건강에 치명적인 질환이 발생되기도 한다.
따라서 중년 여성들의 신체적, 정신적 건강 및 삶의 질을 개선하기 위하여 갱년기 증상을 개선할 수 있는 치료제의 개발이 요구되었으며, 이러한 갱년기 증상의 개선을 위해 호르몬 대체요법 및 비스테로이드계 제제 등의 약물들이 개발된 바 있다. 그러나 이들 약물의 경우 대부분이 두통 및 체중증가 등의 부작용이 있는 것으로 알려져 있으며, 특히, 에스트로겐 대체요법의 경우에도 인위적으로 체내에 호르몬을 투여하는 것이기 때문에 이에 대한 거부반응과 함께 자궁출혈, 뇌졸중, 심장발작, 유방암 및 자궁암의 발생 위험이 증가될 수 있는 것으로 알려져 있다(Swaran L., et. al., Obstetrics & Gynecology, 91, 678-684, 1998).
따라서 이와 같은 문제점들 때문에 식품이나 첨가물의 형태로 섭취하는 자연적인 방법으로 에스트로겐 요법을 대체하고자 하는 관심이 높아지고 있으며, 부작용이 없으면서도 갱년기의 증상을 완화시키는 효과가 우수한 새로운 갱년기 치료제의 개발이 요구되고 있는 실정이다.
황칠나무(Dendropanaxmorbifera LEV.)는 두릅나무에 속하는 상록 활엽교목으로 우리나라의 제주도와 완도, 보길도, 해남 등 남ㆍ서해안 일대에 자생하고 있는 우리나라 특산 수종이다. 황칠나무에 함유된 정향성분은 소량의 터펜(Terpene)류와 다량의 세스퀴터펜(Sesquiterpene)류가 포함되어 있다. 한편, 황칠나무는 술 해독, 안질 및 황달치료, 화상치료, 나병에 효과가 있으며 인체에 무해하다는 기록이 전해지고 있고, 진정작용과 강장작용을 나타낸다고 알려져 왔다. 또한, 잎 추출물 분획은 항암작용과 α-토코페롤보다 다소 약한 항산화작용이 있음이 밝혀져 있다고 알려져 있다(특허 공개 제 2000-0004499호, 박호근 등, 1998).
한편, 쥐눈이콩(wild soybean, Rhynchosia Nulubilis)은 노화를 방지하고, 뼈를 튼튼하게 하며, 암을 예방하는 효과 또한 있다. 쥐눈이콩에 존재하는 폴리포스페이트, 즉 인 중합체가 피부노화를 억제하는 것으로 밝혀졌다. 쥐눈이콩의 인중합체는 산환유발원인인 자외선에 의해 피부세포가 손상되는 것을 억제할 뿐만 아니라 세포들의 돌연변이도 예방하는 작용을 하는 것으로 알려져 있다.
쥐눈이콩에는 또한 여성호르몬 에스트로겐과 같은 효과를 나타내는 이소플라본 성분도 다량 함유되어 있어, 폐경기 여성의 폐경 초기 증상을 완화시키며, 콜레스테롤 수치를 낮추고 심장병 예방에도 좋은 것으로 알려져 있다.
이에 본 발명자들은 인체에 안전한 천연물 유래 여성 갱년기 질환 치료 물질을 개발하기 위해 노력한 결과, 쥐눈이콩 및 황칠나무 추출물이 갱년기 여성에서 에스트로겐 결핍으로 유래된 다양한 증상을 개선시킬 수 있는 호르몬대체요법으로 사용될 수 있음을 밝힘으로써, 본 발명을 완성하였다
한국공개특허 제2016-0090662호 한국공개특허 제2016-0122569호 한국등록특허 제0982044호
본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 본 발명은 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물을 포함하는, 여성 갱년기 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공하는 데 목적이 있다.
본 발명의 다른 목적은 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물을 포함하는, 여성 갱년기 질환 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하기 위하여 본 발명은 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물을 포함하는, 여성 갱년기 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물은 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis) 및 효모균(Saccharomyces cerevisiae)으로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 균으로 발효시킨 것을 특징으로 할 수 있다. 더욱 바람직하게는 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis) 및 효모균(Saccharomyces cerevisiae)일 수 있으며, 보다 바람직하게는 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus)일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다.
또한, 본 발명의 조성물은 추가적으로 어성초 추출물, 함초 추출물, 알로에 추출물, 마 추출물, 회화나무 추출물 및 홍삼 추출물로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
본 발명의 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물은 a) 이산화탄소 초임계 추출로 지용성 물질을 추출하는 단계; b) 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 수용성 물질을 추출하는 단계; 및 c) 단계 a) 및 b)에서 얻은 지용성 추출물 및 수용성 추출물을 혼합하는 단계;로 제조되는 것일 수 있다.
본 발명의 상기 여성 갱년기 질환은 안면홍조, 발한, 피부건조, 질건조증, 질위축, 하부 요도 위축, 질염, 방광염, 배뇨통, 급뇨, 집중장애, 단기 기억장애, 불안 증세, 신경과민, 기억력 감퇴, 근육통, 관절통 및 골다공증으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것일 수 있다.
또 다른 과제를 해결하기 위하여 본 발명은 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물을 포함하는, 여성 갱년기 질환 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.
또 다른 과제를 해결하기 위하여 본 발명은 a) 황칠나무와 쥐눈이콩을 유산균 또는 효모로 발효시키는 단계; b) 발효된 황칠나무와 쥐눈이콩 발효물을 이산화탄소 초임계 추출하여 지용성 물질을 추출하는 단계; c) 초임계 추출 후 남은 황칠나무와 쥐눈이콩을 수집하고, 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 수용성 물질을 추출하는 단계; 및 d) 단계 b) 에서 얻은 지용성 물질과 c)에서 얻은 수용성 물질을 혼합하는 단계를 포함하는 황칠나무 및 쥐눈이콩 발효 추출물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명은 다른 제품보다 갱년기 증상에 대한 예방 및 치료효과가 우수하여 폐경기 이후의 여성들에게 건강상의 문제를 유발할 수 있는 각종 질환의 예방 및 치료에 사용될 수 있다. 또한 본 발명은 여성의 갱년기 또는 폐경기에 나타나는 다양한 증상을 완화 또는 예방할 수 있으며, 인체에 부작용이 극히 적어 종래의 호르몬 대체 요법의 문제점을 방지할 수 있다.
도 1은 각 실시예 및 비교예에 대한 쿠퍼만 지수 감소량을 나타낸 것이고, 도 2는 각 실시예 및 비교예에 대한 종합적 기호도를 나타낸 것이다.
본 발명을 충분히 이해하기 위해서 본 발명의 바람직한 실시예를 참조하여 설명한다. 본 발명의 실시예는 여러 가지 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 아래에서 상세히 설명하는 실시예로 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위하여 제공되는 것이다. 따라서 도면에서의 요소의 형상 등은 보다 명확한 설명을 강조하기 위해서 과장되어 표현될 수 있다. 각 도면에서 동일한 부재는 동일한 참조부호로 도시한 경우가 있음을 유의하여야 한다. 또한, 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 공지 기능 및 구성에 대한 상세한 기술은 생략된다.
쥐눈이콩은 일명 "약 콩"이라고 불리는데, 콩 가운데서도 까맣고 윤기가 나는 것으로 단백질, 지방, 칼슘, 철분, 비타민 등 영양분도 풍부하고 해독제가 함유돼 있어 당뇨, 고혈압, 동맥경호, 심장질환, 관절염, 신장병 등 갖가지 성인병 예방과 치료에 도움이 된다.
옛 약학책인 향약집성방에는 '쥐눈이콩은 맛이 달고 성질이 따뜻해 무독하며 까맣게 볶아 술에 담가놓고 조금씩 마시면 적풍(賊風 외부에서 들어오는 나쁜 기운)과 풍비(風痺 저림증), 산후 냉혈증에 좋다'고 기록되어 있고,
본초강목은 '복창을 내리고 위열을 없애며 마비증을 다스리고 어혈을 풀어버리고 기를 늘리며 심신의 피로와 쇠약을 예방하고 정력을 기른다. 또 신장병을 다스리고 기를 내리어 모든 풍열을 억제하고 혈액을 활발히 하며 모든 독을 풀어준다'고 적혀 있다.
또한, 조선 세종조의 의방유취에는 허약체질이나 노인, 앓고 난 사람에게 뼈와 근육을 튼튼하게 하고 장수하게 하는 처방으로 쥐눈이콩을 이용했다는 기록이 남아 있다.
또한, 쥐눈이콩의 비타민E나 불포화 지방산은 혈관을 확장시켜 말초혈관의 혈액 순환을 원활하게 해주기 때문에 두피에 필요한 영양성분을 공급하여 탈모를 막아주고 발모를 촉진하는 기능을 한다.
상기와 같은 효능이 있는 조성물을 혼합하여 복용자가 복용하기 용이하도록 환의 형태로 제조함으로써 본 발명에 의해 제조된 건강식품을 복용하게 되면 건강에 유익할 뿐 아니라 남성에게는 정력을 보강하고 여성에게는 피부 미용에 도움이 된다.
이하 본 발명에 대하여 상세히 설명한다.
상기 과제를 해결하기 위하여 본 발명은 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물을 포함하는, 여성 갱년기 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 명세서에서 "추출물"이라 함은, 천연물로부터 그 안의 성분을 뽑아냄으로써 얻어진 물질이라면, 뽑아내는 방법이나 성분의 종류와 무관하게 모두 포함한다. 예컨대, 물이나 유기 용매를 이용하여 천연물로부터 용매에 용해되는 성분을 추출해 낸 것, 천연물의 특정 성분만을 추출하여 얻어진 것 등을 모두 포함하는 광의의 개념이다. 본 발명의 일구현예에서, 상기 유기 용매는, 특별히 제한되는 것은 아니며, 메탄올, 에탄올, 이소프로필알코올, n-프로필 알코올, n-부탄올 및 이소부탄올 등의 C1~C5의 저급 알코올, 글리세롤, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸 렌글리콜 등의 다가 알코올, 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, 벤젠, n-헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 클로로포름 등의 탄화수소계 용매, 그리고 석유에테르, 메틸아세테이트, 벤젠, 헥산, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 디메틸에테르, 에틸아세테이트 등의 비극성 유기용매 등 일 수 있다.
일 구현예에서, 추출물은 물을 이용하여 추출한 추출액 일 수 있다. 또 다른 일 구현예에서, 추출물은 C1~C5 알코올을 이용하여 추출한 추출액 일 수 있다. 또 다른 일 구현예에서, 추출물은 에탄올을 이용하여 추출한 추출액 일 수 있으나 이에 제한 되는 것은 아니다.
본 발명의 일측면에서, 상기 C1~C5 알코올 수용액의 농도는 40% 내지 90% (v/v)일수 있다. 일 구현예에서, 상기 C1~C5 알코올 수용액의 농도는 40% 이상, 45% 이상, 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 66% 이상, 67% 이상, 68% 이상, 69% 이상, 70% 이상, 71% 이상, 72% 이상, 73% 이상, 74% 이상, 75% 이상 또는 80% 이상일 수 있다. 또한, 상기 C1~C5 알코올 수용액의 농도는 90% 이하, 85% 이하, 80% 이하, 75% 이하, 74% 이하, 73% 이하, 72% 이하, 71% 이하, 70% 이하, 69% 이하, 68% 이하, 67% 이하, 65% 이하 또는 60% 이하일 수 있다. C1~C5 알코올 수용액의 농도가 상기 범위 내일 때, 여성 갱년기 증상의 개선 또는 여성 갱년기 질환의 치료 혹은 예방 효과가 우수하다.
상기 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물은 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis) 및 효모균(Saccharomyces cerevisiae)으로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 균으로 발효시킨 것을 특징으로 할 수 있다. 더욱 바람직하게는 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 비피도박테리움 락티스(Bifidobacterium lactis) 및 효모균(Saccharomyces cerevisiae)일 수 있으며, 보다 바람직하게는 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus)일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다.
또한, 본 발명의 조성물은 추가적으로 어성초 추출물, 함초 추출물, 알로에 추출물, 마 추출물, 회화나무 추출물 및 홍삼 추출물로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
본 발명의 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물은 a) 이산화탄소 초임계 추출로 지용성 물질을 추출하는 단계; b) 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 수용성 물질을 추출하는 단계; 및 c) 단계 a) 및 b)에서 얻은 지용성 추출물 및 수용성 추출물을 혼합하는 단계;로 제조되는 것일 수 있다.
본 발명의 황칠나무 발효 추출물과 쥐눈이콩 발효 추출물은 1:1.5~3으로 혼합될 수 있으며, 바람직하게는 1:1.5~2의 비율로 혼합되는 것일 수 있다.
본 발명의 상기 여성 갱년기 질환은 안면홍조, 발한, 피부건조, 질건조증, 질위축, 하부 요도 위축, 질염, 방광염, 배뇨통, 급뇨, 집중장애, 단기 기억장애, 불안 증세, 신경과민, 기억력 감퇴, 근육통, 관절통 및 골다공증으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것일 수 있다.
또한, 상기 약학적 조성물은 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
제제화할 경우에는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제 등을 통상 사용한다. 경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함될 수 있다. 이러한 고형 제제에는 상기 유효성분 외에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴을 포함할 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 포함될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 있으며, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액상 파라핀 이외에 여러가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 라우린지, 카카오지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 명세서에 개시된 추출물의 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다를 수 있으며, 당해 기술분야에서 통상적으로 사용되는 범위에서 선택될 수 있다. 일측면에서 유효성분의 1일 투여량은 건조 중량 기준으로 0.0001~0.5g/kg일 수 있고, 일측면에서는 0.001~0.1g/kg 투여될 수 있다.
또 다른 과제를 해결하기 위하여 본 발명은 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물을 포함하는, 여성 갱년기 질환 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 일 측면에서, 상기 여성 갱년기 증상의 개선용 조성물은 건강기능 식품 조성물일 수 있다. 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.
이때, 식품 또는 음료 중에 포함되는 유효성분의 양은 일반적인 식품 조성물의 경우, 전체 식품 중량의 0.001 내지 90 중량%를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 건강식품 조성물인 경우에는 전체 식품 중량의 10 내지 90 중량%를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 일 측면에서 식품조성물로 섭취 시 유효성분의 1일 투여량은 건조 중량 기준으로 0.0001~0.1g/kg 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일실시예에서 상기 조성물은 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유할 수 있다. 예를 들어, 물성 개선을 위하여 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제, 보습제, 점증제, 무기염류, 유화제 및 합성 고분자 물질 등의 첨가제를 더 포함할 수 있다. 그 외에도, 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당 및 해초 엑기스 등의 보조 성분을 더 포함할 수도 있다. 상기 성분들은 제형 또는 사용 목적에 따라서 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 그 첨가량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 선택될 수 있다. 예를 들어, 상기 성분들의 첨가량은, 조성물 전체 중량을 기준으로, 0.01-5 중량%, 보다 구체적으로는 0.01-3 중량% 범위일 수 있다.
본 발명에 따른 조성물의 제형은 용액, 유화물, 점성형 혼합물, 타블렛, 분말, 정제, 칼셉, 액상, 과립, 환, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 젤리, 바 또는 가식성 필듬 등의 다양한 형태일 수 있으며, 이는 단순 음용, 주사 투여, 스프레이 방식 또는 스퀴즈 방식 등의 다양한 방법으로 투여될 수 있다.
또 다른 과제를 해결하기 위하여 본 발명은 a) 황칠나무와 쥐눈이콩을 유산균 또는 효모로 발효시키는 단계; b) 발효된 황칠나무와 쥐눈이콩 발효물을 이산화탄소 초임계 추출하여 지용성 물질을 추출하는 단계; c) 초임계 추출 후 남은 황칠나무와 쥐눈이콩을 수집하고, 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 수용성 물질을 추출하는 단계; 및 d) 단계 b) 에서 얻은 지용성 물질과 c)에서 얻은 수용성 물질을 혼합하는 단계를 포함하는 황칠나무 및 쥐눈이콩 발효 추출물의 제조 방법을 제공한다.
이하 본 발명의 실시예에 따른 쥐눈이콩을 함유한 황칠 제조 방법에 대하여 자세히 설명한다.
<실시예>
하기 표 1과 같이 실시예를 제조하였다.
구분 주성분 추가성분 주성분 발효여부 (기타 정보) 추출법
실시예 1 황칠나무 추출물 30중량%, 쥐눈이콩 추출물 50중량% - Yes (락토바실러스 불가리쿠스) 초임계+에탄올 추출
실시예 2 황칠나무 추출물 50중량%, 쥐눈이콩 추출물 30중량% - Yes (락토바실러스 불가리쿠스) 초임계+에탄올 추출
실시예 3 황칠나무 추출물 30중량%, 쥐눈이콩 추출물 30중량% - Yes (락토바실러스 불가리쿠스) 초임계+에탄올 추출
실시예 4 황칠나무 추출물 30중량%, 쥐눈이콩 추출물 50중량% - Yes (효모균) 초임계+에탄올 추출
실시예 5 황칠나무 추출물 30중량%, 쥐눈이콩 추출물 50중량% - Yes (비피도박테리움 락티스) 초임계+에탄올 추출
실시예 6 황칠나무 추출물 30중량%, 쥐눈이콩 추출물 50중량% - Yes (락토바실러스 애시도필러스) 초임계+에탄올 추출
실시예 7 황칠나무 추출물 30중량%, 쥐눈이콩 추출물 50중량% - Yes (비피도박테리움 롱검) 초임계+에탄올 추출
실시예 8 황칠나무 추출물 30중량%, 쥐눈이콩 추출물 50중량% - Yes (비피도박테리움 비피덤) 초임계+에탄올 추출
실시예 9 황칠나무 추출물 30중량%, 쥐눈이콩 추출물 50중량% 함초 추출물 10중량%, 마 추출물 5중량% Yes (락토바실러스 불가리쿠스) 초임계+에탄올 추출
실시예 10 황칠나무 추출물 30중량%, 쥐눈이콩 추출물 50중량% 함초 추출물 10중량%, 마 추출물 5중량%, 회화나무 추출물 5중량%, 알로에 추출물 5중량%, 홍삼추출물 3% Yes (락토바실러스 불가리쿠스) 초임계+에탄올 추출
실시예 11 황칠나무 추출물 30중량%, 쥐눈이콩 추출물 50중량% 함초 추출물 10중량%, 마 추출물 5중량% Yes (락토바실러스 불가리쿠스) 초임계 추출
실시예 12 황칠나무 추출물 30중량%, 쥐눈이콩 추출물 50중량% 함초 추출물 10중량%, 마 추출물 5중량% Yes (락토바실러스 불가리쿠스) 에탄올 추출
실시예 13 황칠나무 추출물 30중량%, 쥐눈이콩 추출물 50중량% 함초 추출물 10중량%, 마 추출물 5중량% Yes (락토바실러스 불가리쿠스) 열수 추출
실시예 1, 4-10
황칠나무의 잎, 줄기, 뿌리 부분을 채취하여 세척하고, 수분 5% 이하가 되도록 잘 건조시켰다. 그 후, 작은 크기로 분쇄한 다음 300g 분량을 정확히 측정하여 초임계 CO2 추출기(RTI, Korea) 내에 투입 하였다. 쥐눈이콩도 수분을 5%이하가 되도록 잘 건조시키고, 500g 분량을 정확히 측정하여 추출 탱크에 넣었다. 실시예 9 또는 10의 경우, 각각 추가성분(실시예 9: 함초 100g 및 마 50g, 실시예 10: 함초 100g, 마 50g, 회하나무 50g, 알로에 50g, 홍삼 30g)을 추가적으로 초임계 CO2 추출기 (RTI, Korea) 내에 투입하였다. 그 후, 격막식 압축기로 CO2의 압력은 300 bar와 온도는 60 ℃의 조건하에서 초임계 유체 추출물을 수득하였다.
또, 초임계 추출물이 끝나고 남은 찌꺼기들을 모아, 에탄올 1000g을 첨가하여 2시간 추출하였다. 추출한 추출액은 필터를 거쳐 여과하였다. 에탄올 추출물을 수득하였다.
상기 단계에서 얻은 초임계 유체 추출물과 에탄올 추출물을 혼합하고, 상기 추출물을 포함하는 여과액에 균(실시예 1, 9 및 10: 락토바실러스 불가리쿠스, 실시예 4: 효모균, 실시예 5: 비피도박테리움 락티스, 실시예 6: 락토바실러스 애시도필러스, 실시예 7: 비피도박테리움 롱검, 실시예 8: 비피도박테리움 비피덤)을 접종하여 발효시켰다. 균은 MRS 고체 배지에서 37℃ 온도 하에 24시간 배양하여 콜로니를 생성하였고, 단일 콜로니를 MRS 액체 배지에서 37℃ 온도하에 24시간 배양하여 균 배양액을 생성하였다. 그 후, 이렇게 얻은 배양액을 황칠나무 및 쥐눈이콩 추출물을 포함하는 여과액에 5%농도(v/v)가 되도록 접종하였다. 37℃ 온도하에서 30시간 발효한 후 대형 회전 농축기로 감압농축하여 발효 추출물을 얻었다.
실시예 2-3
실시예 2의 경우, 황칠나무 500g 및 쥐눈이콩 300g을 투입하였다는 점, 실시예 3의 경우, 황칠나무 300g 및 쥐눈이콩 300g을 투입하였다는 점이 상이하고, 나머지 제조 방법은 상기 실시예 1의 제조방법과 동일하게 제조하였다.
실시예 11
황칠나무의 잎, 줄기, 뿌리 부분을 채취하여 세척하고, 수분 5% 이하가 되도록 잘 건조시켰다. 그 후, 작은 크기로 분쇄한 다음 300g 분량을 정확히 측정하여 초임계 CO2 추출기 (RTI, Korea) 내에 투입 하였다. 쥐눈이콩도 수분을 5%이하가 되도록 잘 건조시키고, 500g 분량을 정확히 측정하여 추출 탱크에 넣었다. 추가성분으로 함초 100g 및 마 50g을 추가적으로 초임계 CO2 추출기 (RTI, Korea) 내에 투입하였다. 그 후, 격막식 압축기로 CO2의 압력은 300 bar와 온도는 60 ℃의 조건하에서 초임계 유체 추출물을 수득하였다.
상기 단계에서 얻은 초임계 유체 추출물에 락토바실러스 불가리쿠스를 접종하여 발효시켰다. 락토바실러스 불가리쿠스 균은 MRS 고체 배지에서 37℃ 온도 하에 24시간 배양하여 콜로니를 생성하였고, 단일 콜로니를 MRS 액체 배지에서 37℃ 온도하에 24시간 배양하여 균 배양액을 생성하였다. 그 후, 이렇게 얻은 배양액을 황칠나무 및 쥐눈이콩 추출물을 포함하는 여과액에 5%농도(v/v)가 되도록 접종하였다. 37℃ 온도하에서 30시간 발효한 후 대형 회전 농축기로 감압농축하여 발효 추출물을 얻었다.
실시예 12
황칠나무의 잎, 줄기, 뿌리 부분을 채취하여 세척하고, 수분 5% 이하가 되도록 잘 건조시켰다. 그 후, 작은 크기로 분쇄한 다음 300g 분량을 정확히 측정하여 추출 탱크에 넣었다. 쥐눈이콩도 수분을 5%이하가 되도록 잘 건조시키고, 500g 분량을 정확히 측정하여 추출 탱크에 넣었다. 추가성분으로 함초 100g 및 마 50g을 추가적으로 추출 탱크에 넣었다.
그 후, 에탄올 1000g을 첨가하여 2시간 추출하였다. 추출한 추출액은 필터를 거쳐 여과하였다.
상기 추출물을 포함하는 여과액에 락토바실러스 불가리쿠스를 접종하여 발효시켰다. 락토바실러스 불가리쿠스 균은 MRS 고체 배지에서 37℃ 온도 하에 24시간 배양하여 콜로니를 생성하였고, 단일 콜로니를 MRS 액체 배지에서 37℃ 온도하에 24시간 배양하여 균 배양액을 생성하였다. 그 후, 이렇게 얻은 배양액을 황칠나무 및 쥐눈이콩 추출물을 포함하는 여과액에 5%농도(v/v)가 되도록 접종하였다. 37℃ 온도하에서 30시간 발효한 후 대형 회전 농축기로 감압농축하여 발효 추출물을 얻었다.
실시예 13
황칠나무의 잎, 줄기, 뿌리 부분을 채취하여 세척하고, 수분 5% 이하가 되도록 잘 건조시켰다. 그 후, 작은 크기로 분쇄한 다음 300g 분량을 정확히 측정하여 추출 탱크에 넣었다. 쥐눈이콩도 수분을 5%이하가 되도록 잘 건조시키고, 500g 분량을 정확히 측정하여 추출 탱크에 넣었다. 추가성분으로 함초 100g 및 마 50g을 추가적으로 추출 탱크에 넣었다.
그 후, 정제수 1000g을 첨가하여 100℃에서 2시간 추출하였다. 추출한 추출액은 필터를 거쳐 여과하였다.
상기 추출물을 포함하는 여과액에 락토바실러스 불가리쿠스를 접종하여 발효시켰다. 락토바실러스 불가리쿠스 균은 MRS 고체 배지에서 37℃ 온도 하에 24시간 배양하여 콜로니를 생성하였고, 단일 콜로니를 MRS 액체 배지에서 37℃ 온도하에 24시간 배양하여 균 배양액을 생성하였다. 그 후, 이렇게 얻은 배양액을 황칠나무 및 쥐눈이콩 추출물을 포함하는 여과액에 5%농도(v/v)가 되도록 접종하였다. 37℃ 온도하에서 30시간 발효한 후 대형 회전 농축기로 감압농축하여 발효 추출물을 얻었다.
<비교예>
하기 표 2과 같이 비교예를 제조하였다.
구분 주성분 추가성분 주성분 발효여부 (기타 정보) 추출법
비교예 1 황칠나무 추출물 30중량%, 쥐눈이콩 추출물 50중량% - No 초임계+에탄올 추출
비교예 2 황칠나무 추출물 30중량%, 쥐눈이콩 추출물 50중량% - No 초임계 추출
비교예 3 황칠나무 추출물 30중량%, 쥐눈이콩 추출물 50중량% - No 에탄올 추출
비교예 4 황칠나무 추출물 30중량%, 쥐눈이콩 추출물 50중량% - No 열수 추출
비교예 5 황칠나무 추출물 70중량% - Yes (락토바실러스 불가리쿠스) 초임계+에탄올 추출
비교예 6 쥐눈이콩 추출물 70중량% - Yes (락토바실러스 불가리쿠스) 초임계+에탄올 추출
비교예1
황칠나무의 잎, 줄기, 뿌리 부분을 채취하여 세척하고, 수분 5% 이하가 되도록 잘 건조시켰다. 그 후, 작은 크기로 분쇄한 다음 300g 분량을 정확히 측정하여 초임계 CO2 추출기(RTI, Korea) 내에 투입 하였다. 쥐눈이콩도 수분을 5%이하가 되도록 잘 건조시키고, 500g 분량을 정확히 측정하여 추출 탱크에 넣었다. 그 후, 격막식 압축기로 CO2의 압력은 300 bar와 온도는 60 ℃의 조건하에서 초임계 유체 추출물을 수득하였다.
또, 초임계 추출물이 끝나고 남은 찌꺼기들을 모아, 에탄올 1000g을 첨가하여 2시간 추출하였다. 추출한 추출액은 필터를 거쳐 여과하였다. 에탄올 추출물을 수득하였다.
상기 단계에서 얻은 초임계 유체 추출물과 에탄올 추출물을 혼합하여 비교예 1 추출물을 완성하였다
비교예2
황칠나무의 잎, 줄기, 뿌리 부분을 채취하여 세척하고, 수분 5% 이하가 되도록 잘 건조시켰다. 그 후, 작은 크기로 분쇄한 다음 300g 분량을 정확히 측정하여 초임계 CO2 추출기 (RTI, Korea) 내에 투입 하였다. 쥐눈이콩도 수분을 5%이하가 되도록 잘 건조시키고, 500g 분량을 정확히 측정하여 추출 탱크에 넣었다. 그 후, 격막식 압축기로 CO2의 압력은 300 bar와 온도는 60 ℃의 조건하에서 초임계 유체 추출물 비교예 2를 수득하였다.
비교예3
황칠나무의 잎, 줄기, 뿌리 부분을 채취하여 세척하고, 수분 5% 이하가 되도록 잘 건조시켰다. 그 후, 작은 크기로 분쇄한 다음 300g 분량을 정확히 측정하여 추출 탱크에 넣었다. 쥐눈이콩도 수분을 5%이하가 되도록 잘 건조시키고, 500g 분량을 정확히 측정하여 추출 탱크에 넣었다. 그 후, 에탄올 1000g을 첨가하여 2시간 추출하였다. 추출한 추출액은 필터를 거쳐 여과하여 비교예 3을 수득하였다.
비교예4
황칠나무의 잎, 줄기, 뿌리 부분을 채취하여 세척하고, 수분 5% 이하가 되도록 잘 건조시켰다. 그 후, 작은 크기로 분쇄한 다음 300g 분량을 정확히 측정하여 추출 탱크에 넣었다. 쥐눈이콩도 수분을 5%이하가 되도록 잘 건조시키고, 500g 분량을 정확히 측정하여 추출 탱크에 넣었다. 그 후, 정제수 1000g을 첨가하여 100℃에서 2시간 추출하였다. 추출한 추출액은 필터를 거쳐 여과하여 비교예 4를 수득하였다.
비교예5
황칠나무의 잎, 줄기, 뿌리 부분을 채취하여 세척하고, 수분 5% 이하가 되도록 잘 건조시켰다. 그 후, 작은 크기로 분쇄한 다음 700g 분량을 정확히 측정하여 초임계 CO2 추출기(RTI, Korea) 내에 투입 하였다. 그 후, 격막식 압축기로 CO2의 압력은 300 bar와 온도는 60 ℃의 조건하에서 초임계 유체 추출물을 수득하였다.
또, 초임계 추출물이 끝나고 남은 찌꺼기들을 모아, 에탄올 1000g을 첨가하여 2시간 추출하였다. 추출한 추출액은 필터를 거쳐 여과하였다. 에탄올 추출물을 수득하였다.
상기 단계에서 얻은 초임계 유체 추출물과 에탄올 추출물을 혼합하고, 상기 추출물을 포함하는 여과액에 락토바실러스 불가리쿠스균을 접종하여 발효시켰다. 균은 MRS 고체 배지에서 37℃ 온도 하에 24시간 배양하여 콜로니를 생성하였고, 단일 콜로니를 MRS 액체 배지에서 37℃ 온도하에 24시간 배양하여 균 배양액을 생성하였다. 그 후, 이렇게 얻은 배양액을 황칠나무 추출물을 포함하는 여과액에 5%농도(v/v)가 되도록 접종하였다. 37℃ 온도하에서 30시간 발효한 후 대형 회전 농축기로 감압농축하여 발효 추출물을 얻었다.
비교예6
쥐눈이콩도 수분을 5%이하가 되도록 잘 건조시키고, 700g 분량을 정확히 측정하여 추출 탱크에 넣었다. 그 후, 격막식 압축기로 CO2의 압력은 300 bar와 온도는 60 ℃의 조건하에서 초임계 유체 추출물을 수득하였다.
또, 초임계 추출물이 끝나고 남은 찌꺼기들을 모아, 에탄올 1000g을 첨가하여 2시간 추출하였다. 추출한 추출액은 필터를 거쳐 여과하였다. 에탄올 추출물을 수득하였다.
상기 단계에서 얻은 초임계 유체 추출물과 에탄올 추출물을 혼합하고, 상기 추출물을 포함하는 여과액에 락토바실러스 불가리쿠스균을 접종하여 발효시켰다. 균은 MRS 고체 배지에서 37℃ 온도 하에 24시간 배양하여 콜로니를 생성하였고, 단일 콜로니를 MRS 액체 배지에서 37℃ 온도하에 24시간 배양하여 균 배양액을 생성하였다. 그 후, 이렇게 얻은 배양액을 쥐눈이콩 추출물을 포함하는 여과액에 5%농도(v/v)가 되도록 접종하였다. 37℃ 온도하에서 30시간 발효한 후 대형 회전 농축기로 감압농축하여 발효 추출물을 얻었다.
<실험예 1>
세포 독성 실험
본 발명의 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물의 효과를 확인하기에 앞서, 세포에 독성을 나타내지 않으며, 세포 사멸을 유도하지 않으면서 효과를 낼 수 있는 적합한 농도를 결정하기 위해 세포 독성 검사를 수행하였다.
황칠나무 발효 추출물의 세포 독성은 CHO세포주를 대상으로 측정하였다. CHO 세포는 DMEM에 10% FBS 및 1% penicillin/streptomycin을 첨가한 배지에서 37℃, 5% CO2 조건에서 배양한 것을 사용하였다.
CHO 세포를 96-well plate에 1×105cells/㎖ 농도로 넣고 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다. 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물을 1, 3, 10, 30 및 100㎍/㎖농도로 각 well에 처리하고 24시간동안 배양하였다. MTT 용액을 첨가하고 3시간이 지난 후 상층액을 제거하고 DMSO를 well당 100㎕씩 첨가한 후 ELISA reader를 이용하여 540㎚에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 황칠나무 발효 추출물은 처리한 모든 농도에서 CHO 세포에 대해 세포독성을 나타내지 않는 것을 확인할 수 있었다.
<실험예 2>
에스트로겐 활성 실험
상기 실험예 1에서 준비한 CHO세포에서 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물의 에스트로겐 수용체 작용 또는 길항 활성을 확인하기 위하여, ERE-Luciferase를 포함하는 플라스미드(plasmid)를 CHO 세포내에 형질전환(transfection)시켰다. 그 후, 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물(각각 실시예1, 9, 10, 비교예 1)을 처리한 후, 루시페린(luciferin)을 효소 분해하여 생성된 산물의 발광정도를 luminometer를 이용하여 정량적으로 측정함으로써, 전사활성 정도를 측정하였다.
구체적으로, 상기 <실시예 1>에서 배양한 CHO 세포는 24-웰 플레이트(well plate)에 형질전환 하루 전에 접종(105 cells/well)한 다음, ERE-luciferase plasmid DNA(0.25 ㎍/well)를 Lipofectamine 2000 transfection reagent(Invitrogen)을 이용하여 상기 CHO 세포에 형질전환하였다.
그런 다음, 양성 대조군으로 E2(17β-estradiol)(ER agonist, 1 nM)(Sigma) 및 ICI 182,780(Tocris) (Pure ER antagonist, 1 μM)을 사용하였다. 또한, 상기 실시예 1, 9, 10 및 비교예 1에서 제조한 본 발명의 추출물은 50 μg/ml, 100 ㎍/ml 및 200 ㎍/ml의 세가지 농도에서 실험을 진행하였다. 이러한 농도조건은 1 ~ 200 ㎍/ml에서 수행한 예비실험을 통해서 루시페라제 활성이 적절하게 나타나는 농도점으로서 50, 100, 200 ㎍/ml을 지정하게 되었다. 최종 DMSO의 양은 배지 부피의 0.2%가 넘지 않으며, 이러한 DMSO 양은 최종실험결과에 전혀 영향을 미치지 않음을, 독립적인 실험을 통해 확인하였다. 아울러, ER 작용 활성검토를 위해서는 본 발명의 추출물을 단독 처리하는 반면, ER 길항 활성을 확인하기 위해서는 E2 1nM과 본 발명의 황칠나무 추출물을 동시 투여하였다. 한편, 황칠나무 추출물, 및 대조군을 세포에 처리하고, 평균 18~24시간을 더 배양한 후 루시페라제 활성평가(luciferase assay)를 수행하였으며, 상기 루시페라제 활성평가는 배지를 제거한 후 세포를 cold PBS로 2회 세척한 후, 1X passive lysis buffer로 세포수용성물질(lysate)을 추출하였고, 50 ㎕의 lysate에 50 ㎕ luciferase assay reagent (Promega, luciferase의 기질이 되는 luciferin과 효소반응에 적당한 완충액을 포함하는 용액)를 혼합한 후, 발생한 luminescence 세기를 SpectraMax M5e(Molecular Device)를 이용하여 측정하였다.
E2 1 nM이 나타내는 루시페라제 활성도를 100%로 잡았을 때 추출물의 활성도를 %값으로 나타내었다.
그 결과, 하기 표 3에 나타낸 바와 같이, 실시예 1의 분말 농도 100 ㎍/ml에서 E2 대비 50% 이상의 효능이 나타났으며, 200 ㎍/ml 농도에서 E2 대비 80%의 효능을 나타냄을 확인하였다. 따라서, 추출물은 EC50 값이 약 100 ㎍/ml으로, 매우 강력한 ER 작용제(Full agonist)임을 확인하였다.
E2 최대 활성에 대한 % 50ug/ml 100ug/ml 200ug/ml
실시예 1 33% 56% 80%
실시예 9 35% 59% 81%
실시예 10 39% 61% 88%
비교예 1 20% 41% 56%
<실험예 3>
쿠퍼만 지수 평가
본 발명은 여성 갱년기 증상을 예방 또는 개선하는데 효과적인 조성물로서, 상기 실시예 1 내지 13, 비교예 1 내지 6에 대하여 여성 갱년기 증상 완화 효과를 평가하기 위하여 여성 갱년기 증상을 보유한 45세부터 60대까지의 여성 95명을 5명씩 임의로 군을 배정하여 실시예 1 내지 13 또는 비교예 1 내지 6의 조성물 중 어느 하나를 함유하는 음료를 제조하여 매일 50ml 씩 음용하도록 한 다음 12주 후에 여성 갱년기 증상의 완화 정도를 하기 표 4의 설문지로 평가하였다. 섭취 전후의 개선정도를 쿠퍼만 지수(Kupperman index, 하기 표 4)의 총합으로 나타내었다. 섭취전의 수치를 100으로 나타내었을 때, 섭취 후의 상대적인 수치를 하기 표 5에 나타내었다.
본 발명에서 여성 갱년기 증상 완화 효과를 평가하기 위한 지표인 쿠퍼만 지수(KI)는 학계에서 사용되는 갱년기지수로서 갱년기 여성에게서 나타나는 12가지 증상(안면홍조, 발한, 불면증, 신경질, 우울증, 어지럼증, 피로감, 관절통, 두통, 가슴 두근거림, 질 분비물 감소)을 점수화한 것으로 각 항목의 점수에 가중치를 곱해 점수를 내고 이를 모두 더한 점수가 갱년기 점수이다. 점수가 높을수록 심한 갱년기 증상을 가지고 있는 것이다.
구분 증상의 정도
구분 0 1 2 3
1)안면홍조, 발한 없음 하루 2회 이하 하루 3-9회 하루 10회 이상
2)손발저림 없음 가끔 나타남 자주 나타남 심하게 나타남
3)불면 없음 가끔 나타남 자주 나타남 심하게 나타남
4)피로감 없음 가끔 나타남 자주 나타남 심하게 나타남
5)우울함 없음 가끔 나타남 자주 나타남 심하게 나타남
6)어지러움 없음 가끔 나타남 자주 나타남 심하게 나타남
7)두통 없음 가끔 나타남 자주 나타남 심하게 나타남
8)피부간질거림 없음 가끔 나타남 자주 나타남 심하게 나타남
9)짜증, 신경질 없음 가끔 나타남 자주 나타남 심하게 나타남
10)관절 및 근육통 없음 가끔 나타남 자주 나타나지만 활동에 지장 없음 심하게 나타남
11)가슴 두근거림 없음 가끔 나타남 자주 나타나지만 활동에 지장 없음 심하게 나타남
12)질 건조, 질 분비물 감소 없음 약간 느낌 자주 느낌 심하게 나타남
실험 전 쿠퍼만 지수 실험 후 쿠퍼만 지수 변화량
실시예 1 62.7 40.5 22.2
실시예 2 59.1 31.3 27.8
실시예 3 61.2 38.1 23.1
실시예 4 67.7 48.8 18.9
실시예 5 71.7 58.8 12.9
실시예 6 77 66.2 10.8
실시예 7 74 61.6 12.4
실시예 8 74.2 59.9 14.3
실시예 9 71.5 39.8 31.7
실시예 10 71.1 41.5 29.6
실시예 11 64.3 50.2 14.1
실시예 12 81.4 70.8 10.6
실시예 13 79.5 68.7 10.8
비교예 1 62.1 58.2 3.9
비교예 2 94.1 87.7 6.4
비교예 3 89.7 81 8.7
비교예 4 88.2 81.1 7.1
비교예 5 76.4 68 8.4
비교예 6 89 80.5 8.5
상기 표 4에서 총 쿠퍼만 지수는 값이 낮을수록 증상이 개선됨을 의미한다.대체적으로 발효를 하지 않은 음료보다 발효한 음료의 쿠퍼만 지수 감소량이 높은 것으로 나타났다. 또한, 마, 알로에 등 추가 성분을 포함하지 않은 것보다, 포함한 것이 높은 쿠퍼만 지수 감소량을 나타냈다. 아울러, 초임계 추출법과 에탄올 추출법을 병용하여 제조한 음료에서 더욱 높은 쿠퍼만 지수 감소량을 나타냈다.
<실험예 4>
관능성 평가
맛 식감 향 풍미 종합적기호도
실시예 1 9.1 8.8 8.9 9 9.0
실시예 2 8.8 8.6 8.5 7.9 8.5
실시예 3 8.5 9.2 8.6 8.8 8.8
실시예 4 8.8 9 8.9 8.1 8.7
실시예 5 7.9 8.6 8.5 8.6 8.4
실시예 6 7.1 7.8 7.9 7.7 7.6
실시예 7 7 6.9 6.8 7.9 7.2
실시예 8 6.8 7.5 6.9 7.1 7.1
실시예 9 9.6 9.1 8.7 7.9 8.8
실시예 10 9.8 8.8 9.7 8.6 9.2
실시예 11 8.2 7.8 7.7 8.6 8.1
실시예 12 8.1 7.9 8.3 8.5 8.2
실시예 13 8 7.1 7.5 7.3 7.5
비교예 1 7.6 6.3 6.5 6.4 6.7
비교예 2 5.8 6.1 6.6 7.2 6.4
비교예 3 5 6.9 5.5 5.1 5.6
비교예 4 6.7 5.5 6.4 6.3 6.2
비교예 5 3 5.1 4.1 3 3.8
비교예 6 3.2 5.1 5.5 2.1 4.0
상기 관능검사는 20 내지 60세의 성인남녀 패널요원을 무작위로 100명 선정하여 실시예 또는 비교예에 의해 제조된 액기스의 건강보조식품을 맛보게 하고, 맛, 식감, 향, 풍미와 같은 기호도에 대하여 10점 평가법을 사용하여 평가하였다.대체적으로 발효를 하지 않은 액기스보다 발효한 액기의 관능성 평가 점수가 높은 것으로 나타났다. 또한, 마, 알로에 등 추가 성분을 포함하지 않은 것보다, 포함한 것이 높은 종합적 기호도를 나타냈다. 아울러, 초임계 추출법과 에탄올 추출법을 병용하여 제조한 액기스에서 더욱 높은 기호도를 나타냈다.
<제조예1>
약학적 제제의 제조
<1-1> 산제의 제조
본 발명의 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<1-2> 정제의 제조
본 발명의 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물 100 ㎎
미결정셀룰로오스 100 ㎎
유당 100 ㎎
전분글리콘산 나트륨 18 mg
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<1-3> 캡슐제의 제조
본 발명의 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물 100 ㎎
옥수수전분 100 ㎎
유 당 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 2 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<1-4> 환의 제조
본 발명의 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물 1 g
유당 1.5 g
글리세린 1 g
자일리톨 0.5 g
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1 환 당 4 g이 되도록 제조하였다.
<1-5> 과립의 제조
본 발명의 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물 150 ㎎
대두 추출물 50 ㎎
포도당 200 ㎎
전분 600 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.
<제조예 2>
식품의 제조
<2-1> 과자 및 분식의 제조
본 발명의 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물 0.5~5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
<2-2> 유제품의 제조
본 발명의 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물 5~10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
<2-3> 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다. 검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
본 발명의 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물을 진공 농축기에서 감압 농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다. 상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 SBE의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),
종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),
본 발명의 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물(3 중량부),
영지(0.5 중량부), 및 지황(0.5 중량부)
<제조예 3>
음료의 제조
본 발명의 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물 1000 ㎎
구연산 1000 ㎎
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수를 가하여 전체 900 ㎖
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강식품 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims (9)

  1. 여성 갱년기 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물에 있어서,
    락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus) 균에 의해 발효된 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물을 포함하고, 함초 추출물, 알로에 추출물, 마 추출물, 회화나무 추출물 및 홍삼 추출물을 추가적으로 포함하되,
    상기 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물은
    a) 황칠나무와 쥐눈이콩을 이산화탄소 초임계 추출법을 통해 지용성 물질을 추출하는 단계;
    b) 초임계 추출후 남은 황칠나무와 쥐눈이콩을 수집하여, 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 수용성 물질을 추출하는 단계; 및
    c) 단계 a) 및 b)에서 얻은 지용성 추출물 및 수용성 추출물을 혼합하는 단계;를 포함하여 추출되는 것을 특징으로 하는 여성 갱년기 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.


  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 여성 갱년기 질환은 안면홍조, 발한, 피부건조, 질건조증, 질위축, 하부 요도 위축, 질염, 방광염, 배뇨통, 급뇨, 집중장애, 단기 기억장애, 불안 증세, 신경과민, 기억력 감퇴, 근육통, 관절통 및 골다공증으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 여성 갱년기 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  6. 여성 갱년기 질환 예방 및 개선용 건강기능식품에 있어서,
    락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus) 균에 의해 발효된 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물을 포함하고, 함초 추출물, 알로에 추출물, 마 추출물, 회화나무 추출물 및 홍삼 추출물을 추가적으로 포함하되,
    상기 황칠나무 발효 추출물 및 쥐눈이콩 발효 추출물은
    a) 황칠나무와 쥐눈이콩을 이산화탄소 초임계 추출법을 통해 지용성 물질을 추출하는 단계;
    b) 초임계 추출후 남은 황칠나무와 쥐눈이콩을 수집하여, 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 수용성 물질을 추출하는 단계; 및
    c) 단계 a) 및 b)에서 얻은 지용성 추출물 및 수용성 추출물을 혼합하는 단계;를 포함하여 추출되는 것을 특징으로 하는 여성 갱년기 질환 예방 및 개선용 건강기능식품

  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 삭제
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