WO2014014177A1 - 황칠나무 추출물 또는 상기 추출물 유래의 화합물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 조성물 - Google Patents

황칠나무 추출물 또는 상기 추출물 유래의 화합물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 조성물 Download PDF

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extract
acid
octadecadiene
hwangchil
dihydroxy
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최철희
문영숙
한주희
이경인
김현정
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조선대학교 산학협력단
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/28—Asteraceae or Compositae (Aster or Sunflower family), e.g. chamomile, feverfew, yarrow or echinacea
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate

Definitions

  • the present invention relates to a composition for the prevention and treatment of hypertrophy of the prostate, comprising the extract of Hwangchil-tree or a compound derived from the extract as an active ingredient.
  • Benign prostatic hyperplasia is one of the most common diseases in men, and its incidence is increasing rapidly in recent years. BPH affects about 50% of people in their 60s and about 90% when they are over 85 years old, and often develops lower urinary tract symptoms (LUTS) such as nocturia, delayed urination, frequent urination, and urinary incontinence. Surgery should be performed when urinary tract obstruction occurs (Bertaccini, Vassallo et al. 2001; Wei, Calhoun et al. 2005). As such, BPH is not a fatal disease but is emerging as an important medical problem in the aging society in that it degrades the quality of life.
  • LUTS urinary tract symptoms
  • BPH is a histologic disease that is enlarged by an increase in the number of normal cells in the prostate, and when the prostate grows to an abnormal size, it presses on the proximal urethra, causing LUTS (Jacobsen, Girman et. al. 2001; Thorpe and Neal 2003; Liu, Lee et al. 2006).
  • BPH causes significant changes in the stromal cells in the prostatic transition zone and the region surrounding the proximal urethra (Foster 2000; Committee 2003).
  • stromal cells In contrast to BPH, the ratio of stromal cells to epithelial cells is 4.6: 1 (Foster 2000). These stromal cells are regulated by the control of the adrenergic nerve system, and the related ⁇ 1a subtype receptors are known to be the most adrenergic receptors found in the internal prostate stromal tissue (Foster 2000; Thorpe and Neal 2003).
  • EGF epidermal growth factor
  • bFGF basic fibroblast growth factor
  • TGF ⁇ transforming growth factor ⁇
  • TGF ⁇ is also elevated in BPH, probably due to the differentiation of matrix cells into smooth muscle cells (Klingler, Bretland et al. 1999).
  • bFGF is also a potent cell mitosis promoting factor that is also overexpressed in BPH.
  • bFGF is produced in both stromal and epithelial cells and is probably reported to be the most important factor for BPH lesions (Saez, Gonzalez-Baena et al. 1999).
  • DHT 5 ⁇ -dihydroxytestosterone
  • Testosterone and its active form, 5 ⁇ -dihydroxytestosterone (DHT) are also important factors for BPH.
  • DHT is formed from testosterone by 5 ⁇ -reductase type 2, and a large amount of overexpression is found in BPH, and both testosterone and DHT have been reported to stimulate the growth of stromal cells in the prostate gland (Lee, Seong et al. 2001; Thorpe and Neal 2003). Recently, many studies have been conducted to find the cause of BPH in relation to dietary intake, exercise, and metabolic diseases (Parsons 2007).
  • Drugs currently used to treat BPH include adrenergic receptor antagonists ( ⁇ -blockers), 5 ⁇ -reductase inhibitors and phytotherapy. Initially, monotherapy was carried out with the concept of relieving symptoms and delaying the time to surgery, and monotherapy was performed by selecting the appropriate drug for each patient, but simultaneously using ⁇ -blockers and 5 ⁇ -reductase inhibitors. Combination therapy may also be performed.
  • Drug ⁇ -blockers have the benefit of immediate symptoms and immediate effects, while 5 ⁇ reductase inhibitors are difficult to see immediate effects, but have the advantage of slowing the progression of the accompanying disease.
  • Currently used ⁇ -blockers include alfuzosin, doxazosin, tamsulosin, and terazosin. All four have almost equal efficacy, but side effects are reported to be different (Committee 2003).
  • the action of ⁇ -blockers blocks ⁇ 1-adrenergic receptors, which are highly expressed in the prostate and bladder neck.
  • Dutasteride and finasteride which are used as inhibitors of 5 ⁇ -reductase, act differently from ⁇ -blockers. Dutasteride inhibits both 5 ⁇ -reductase type 1 (mainly expressed in skin and liver) and type 2 (mainly expressed in reproductive organs), while finasteride only inhibits type 2.
  • One method of preventing and treating erectile dysfunction is to take advantage of the prostaglandin's blood flow promoting effects (Wolfson B, Pickett S, Scott NE, DeKernion JB, Rajfer J. 1993 Jul; 42 (1): 73-5; Karabulut A, PeL, OzkardeH, AltuU, Erol D. Urol Int. 2001; 67 (2): 160-2).
  • 15-PGDH was induced by testosterone and DHT in LNCaP cells, an androgen-dependent prostate cancer cell line, but was not observed in androgen-independent prostate cancer cell line PC3 cells (Tong M, Tai HH. 2000 Sep 16). 276 (1): 77-81). Therefore, if androgen signaling inhibitors can inhibit the expression or activity of 15-PGDH and increase prostaglandin E2 and increase blood flow in Nanjing, it is likely to reduce the side effects of erectile dysfunction.
  • the present invention confirmed that the extract of Hilchi chinensis has anti-androgen effect in the androgen-dependent prostate cancer cell line LNCaPFGC, and also increased prostaglandin E2 by inhibiting the expression of 15-PGDH, a target gene of the androgen receptor, to increase blood flow in Nanjing.
  • the treatment of BPH with the hexane extract or the compound derived from the extract or the extract derived from the testosterone-induced BPH animal model was completed by confirming that there is a prophylactic effect.
  • compositions for the prevention and treatment of enlarged prostate comprising the extract of Hilchi chinensis as an active ingredient.
  • Another object of the present invention to provide a health functional food for the prevention and improvement of prostatic hyperplasia comprising the extract Hwangchil wood as an active ingredient.
  • Another object of the present invention is 9,16 S- dihydroxy - 10,17 - octadecadiene - 12,14 - diynoic acid, 9,16 R- dihydroxy - 10,17 - octadecadiene - 12 isolated and purified from the Hwangchil wood extract , 14-diynoic acid to provide a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of benign prostatic hyperplasia comprising the compound as an active ingredient-diynoic acid or (Z 9) - 16-hydroxy-9,17-octadecadiene-12,14.
  • an object of the present invention is 9,16 S- dihydroxy - 10,17 - octadecadiene - 12,14 - diynoic acid, 9,16 R- dihydroxy - 10,17 - octadecadiene - 12,14 - diynoic acid or (9 Z) - 16 - hydroxy - 9,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid compound to provide a preventive and therapeutic pharmaceutical composition for cancer comprising as an active ingredient It is.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of enlarged prostate, comprising the extract Hwangchil wood as an active ingredient.
  • the hwangchil wood extract may be a crude extract of the hwangchil wood, polar solvent soluble extract or non-polar solvent soluble extract.
  • the crude extract may be an extract available from a solvent selected from water, methanol, ethanol, butanol or a mixed solvent thereof, including purified water.
  • the non-polar solvent soluble extract may be an extract soluble in hexane, chloroform, dichloromethane or ethyl acetate.
  • the hwangchil wood extract may have a 5 ⁇ -reductase expression inhibitory or androgen receptor (AR) expression inhibitory activity.
  • AR androgen receptor
  • hwangchil tree extract 9,16 S- dihydroxy - 10,17 - octadecadiene - 12,14 - diynoic acid, 9,16 R- dihydroxy - 10,17 - octadecadiene - 12,14 - diynoic acid or (9 Z) - 16 - hydroxy - may contain a 9,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid compound.
  • the present invention 9,16 S- dihydroxy - 10,17 - octadecadiene - 12,14 - diynoic acid, 9,16 R- dihydroxy - 10,17 - octadecadiene - 12,14 - diynoic acid or (9 Z ) - provide 9,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid for prevention and treatment of prostatic hyperplasia a pharmaceutical composition for comprising the compound as an active ingredient - 16 - hydroxy.
  • the compound may be isolated and purified from the hexane extract of the yellow lacquer tree.
  • the compound is PSA (prostate specific antigen) mRNA expression, 15-PGDH mRNA expression, 5 ⁇ R-1 (5 ⁇ -reductase type 1) and 5 ⁇ R-2 (5 ⁇ -reductase type 2) mRNA expression It may have an activity to inhibit and reduce the.
  • PSA prote specific antigen
  • the present invention also provides a health functional food for the prevention and improvement of prostate hyperplasia comprising the extract of Hwangchil as an active ingredient.
  • the extract of Hwangchil - tree is 9,16 S- dihydroxy - 10,17 - octadecadiene - 12,14 - diynoic acid, 9,16 R- dihydroxy - 10,17 - octadecadiene - 12,14 - diynoic acid or (9 Z) - 16 - hydroxy - may contain a 9,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid compound.
  • the food is selected from the group consisting of beverages, meat, chocolate, foods, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, candy, ice cream, alcoholic beverages, vitamin complexes and health supplements Can be.
  • the present invention 9,16 S- dihydroxy - 10,17 - octadecadiene - 12,14 - diynoic acid, 9,16 R- dihydroxy - 10,17 - octadecadiene - provide 9,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid compound for prevention and treatment of prostate cancer, the pharmaceutical composition containing as an active ingredient-12,14-diynoic acid, or (9 Z) - 16 - hydroxy .
  • the present invention relates to a composition for the prevention and treatment of enlarged prostate, comprising hwangchil-tree extract as an active ingredient, and a functional health food for preventing and improving the enlarged prostate.
  • Hwangchil-tree extract according to the present invention has been found to effectively prevent and treat prostatic hyperplasia through a mechanism of inhibiting androgen receptor signaling that causes an enlarged prostate effect, and also has cell safety because it does not cause toxicity to cells. Identified the fact. Therefore, the extract of Hwangchil tree according to the present invention has an effect that can be usefully used in the manufacture of medicines and functional foods that can prevent, treat and improve prostate hyperplasia.
  • Figure 1 is a schematic diagram showing one process for producing a hwangchil wood extract of the present invention.
  • Figure 2 is a graph of evaluation of cytotoxicity of Hilchi chinensis extract in LNCaPFGC cells by MTT assay.
  • Figure 3 is a graph showing the effect on the expression of prostate specific antigen (PSA) mRNA of Hwangchil-tree extract in LNCaPFGC cells.
  • PSA prostate specific antigen
  • Figure 4 is a graph showing the effect on the expression of 5 ⁇ -R 1/2 mRNA of Hwangchil-tree extract in LNCaPFGC cells.
  • Figure 5 is a graph showing the effect of AR, 15-hydroxyprostaglandin dehydrogenase (15-PGDH) and PSA mRNA expression of DMHE and flutamide in LNCaPFGC cells.
  • FIG. 6 is a graph showing DMHE concentration-dependent effects on overexpression of their target genes (15-PGDH and PSA) mRNA induced by AR and DHT in LNCaPFGC cells.
  • FIG. 7 is a graph showing the effect of PSA mRNA inhibition, which is a target gene of AR by DMHE, being restored by high concentration of DHT.
  • FIG. 8 is a photograph showing visual observation of the degree of prostatic hypertrophy of the animal model of prostatic hypertrophy prepared in one embodiment of the present invention.
  • Figure 9 shows the results of measuring the change in the size of the prostate gland according to the treatment of the Hwangchil wood extract of the present invention in a mouse model inducing prostatic hyperplasia.
  • Figure 10 shows the results of the analysis of the transcriptional activity of the androgen receptor according to the treatment of the Hwangchil wood extract of the present invention in LNCaPFGC cells through luciferase assay.
  • Figure 11 shows the results of analysis by measuring the PSA concentration in the mouse blood according to the treatment process of the Hwangchil wood extract of the present invention in a mouse model inducing prostate hyperplasia.
  • FIG. 12 shows a chromatogram of a single compound separated by HPLC chromatographic analysis of Hwangchil hexane extract in one embodiment of the present invention.
  • Figure 13 schematically shows the process of separating and purifying three single compounds having a prostatic hypertrophy effect from the Hwangchil hexane extract of the present invention.
  • Figure 14 shows the results of analyzing the effect on the expression of PSA mRNA in the prostate cancer cell line (LNCaP.FGC) targeting the Hwangchil hexane extract and three single compounds derived from the extract according to the present invention.
  • Figure 15 shows the results of analyzing the effect on the expression of 15-PGDH mRNA in the prostate cancer cell line (LNCaP ⁇ FGC) for the Hwangchil hexane extract and three single compounds derived from the extract according to the present invention.
  • Figure 16 shows the results of analyzing the effect on the expression of 5aR-1 mRNA in the prostate cancer cell line (LNCaP ⁇ FGC) of three single compounds isolated from the yellow and yellow solvent extracts of the present invention.
  • Figure 17 shows the results of analyzing the effect on the expression of 5aR-2 mRNA in the prostate cancer cell line (LNCaP ⁇ FGC) of three single compounds isolated from the yellow and yellow solvent extracts of the present invention.
  • Figure 18 shows the results of analyzing the mRNA expression level of 5 ⁇ R1 according to the treatment of the concentration of Hwangchil hexane extract of the present invention in human hair dermal papilla cells (HFDPC) used for AR signaling research as an androgen receptor-expressing cell line (Min: minoxidil treatment group, DMHE: Hwangchil hexane extract treatment group of the present invention).
  • HFDPC human hair dermal papilla cells
  • Figure 19 shows the results of analyzing the mRNA expression level of 5 ⁇ R2 according to the treatment of the concentration of Hwangchil hexane extract of the present invention in human hair dermal papilla cells (HFDPC) (Min: minoxidil treatment group, DMHE: the present invention) Hwangchil hexane extract treatment group).
  • HFDPC human hair dermal papilla cells
  • Figure 20 shows the results of analyzing the mRNA expression level of the androgen receptor (AR) according to the concentration-specific treatment of the Hwangchil hexane extract of the present invention in human hair dermal papilla cells (HFDPC (Min: minoxidil treatment group, DMHE: Hwangchil hexane extract treatment group of the present invention).
  • HFDPC human hair dermal papilla cells
  • Figure 21 shows the results of analyzing the mRNA expression level of 15-PGDH according to the concentration-specific treatment of the Hwangchil hexane extract of the present invention in human hair dermal papilla cells (HFDPC (Min: minoxidil treatment group, DMHE: Hwangchil hexane extract treatment group of the present invention).
  • HFDPC human hair dermal papilla cells
  • Extract is characterized in that crude extract, polar solvent soluble extract or non-polar solvent soluble extract of yellow lacquer tree.
  • “Crude extract” is a solvent selected from water containing purified water, lower alcohols having 1 to 4 carbon atoms such as methanol, ethanol, butanol, or a mixed solvent thereof, preferably a mixed solvent of water and methanol, more preferably 50 to 100% Extracts soluble in methanol.
  • Poly solvent soluble extract includes extracts soluble in water, methanol, butanol or a mixed solvent thereof, preferably water or methanol, more preferably methanol.
  • Non-polar solvent soluble extract includes extracts soluble in hexane, chloroform, dichloromethane, or ethyl acetate, preferably hexane, dichloromethane or ethyl acetate, more preferably in hexane or ethyl acetate solvent.
  • composition a mixture of the yellow lacquer extract of the present invention with other chemical components such as diluents or carriers.
  • a “carrier” is defined as a compound that facilitates the addition of a compound into a cell or tissue.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • a “carrier” is defined as a compound that facilitates the addition of a compound into a cell or tissue.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • a “carrier” is defined as a compound that facilitates the addition of a compound into a cell or tissue.
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • a "diluent” is defined as a compound that not only stabilizes the biologically active form of a compound of interest, but also is diluted in water to dissolve the compound. Salts dissolved in buffer solutions are used as diluents in the art. A commonly used buffer solution is phosphate buffered saline, because it mimics the salt state of human solutions. Because buffer salts can control the pH of a solution at low concentrations, buffer diluents rarely modify the biological activity of a compound.
  • an "effective amount” is an appropriate amount that affects a beneficial or desirable clinical or biochemical result.
  • An effective amount can be administered once or more.
  • an effective amount is an amount suitable to temporarily alleviate, ameliorate, stabilize, reverse, slow or slow the progression of a disease state.
  • the present invention relates to the use of the Hwangchil-tree extract, and relates to the exercise of the specific physiological activity and function contained in the Hwangchil-tree extract.
  • Hwangchil- tree ( Dendropanox morbifera LEV.) Is an evergreen broad-leaved arborescent tree belonging to the elm tree, and it is a native species of Korea that grows on the south and west coasts of Jeju Island, Wando, Bogildo, and Haenam.
  • Cloves contained in Hwangchil Tree contain small amount of Terpene and Sesquiterpene, which are different depending on the time and place of collection, but germacrene-d, ⁇ -selinene, ⁇ -amorphene , ⁇ -selinene, ⁇ -cadinene, ⁇ -cadinene, T-muurolol, ⁇ -elemene, bicyclo [4,4,0] dec-1 -en-2 -isopropyl-5-methyl-9-methylene, ⁇ -cadinene , germacrene-B, ⁇ -copaene, ⁇ -humulene, ⁇ -cadinene and small amounts of linalool L, ⁇ -terpinene, ⁇ -cubebene, ⁇ -y GmbHe, (+)-calarene, 3,7-guaiadine, (-)- It contains isoledene, ⁇ -cubebene, limonene, aromadendrene
  • the part of the hwangchil wood that can be used in the present invention is not limited to leaves, stems, bark, etc., but preferably leaves can be used.
  • Hwangchil tree extract can be prepared and used by methods known in the art, modified methods thereof or the method according to the invention. As one embodiment, it can manufacture by the following method.
  • Hwangchil-tree extract or crude extract of the present invention is water, methanol, ethanol, butanol and the like containing about 1 to 30-fold volume, preferably 5 to 15-volume (w / v%) of purified water,
  • a solvent selected from a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms or a mixed solvent thereof, preferably a water and ethanol mixed solvent, more preferably 50 to 100% ethanol, is added at a temperature of about 0 to 100 ° C, preferably 10 to room temperature.
  • extraction method such as cold extraction, hot water extraction, ultrasonic extraction, reflux cooling extraction, or heat extraction method, preferably extracted by hot water extraction method, filtered and concentrated under reduced pressure to the yellow lacquer of the present invention Tree crude extract can be obtained.
  • the polar solvent or non-polar solvent soluble extract of the present invention is about 1 to 150 times the weight of the crude extract, preferably 50 to 100% ethanol crude extract, preferably 5 to 100 times the volume (w / v% ), Hexane, ethyl acetate and butanol are sequentially added to a volume of about 1 to 10 times, preferably 1 to 5 times, and fractionated 1 to 5 times, preferably 2 to 4 times.
  • the polar solvent and nonpolar solvent soluble extract of the invention can be obtained.
  • hexane extract can be obtained and used.
  • the concentrate of the extracts can be obtained in powder form through -80 °C freeze drying or 50 °C vacuum decompression.
  • the present invention includes a method for producing the hwangchil wood extract.
  • the preparation method is merely an exemplary method thereof, and may be suitably modified by various methods based on the art.
  • the non-exemplified extraction method according to the present invention may be used. Successful modifications can be made by those skilled in the art.
  • the present invention has been found that the extract of the Hwangchil-tree of the present invention has anti-androgen properties that inhibit protein synthesis of AR, that is, the Hwangchil-tree extract of the present invention was found to be involved in AR signaling inhibition.
  • 5 ⁇ -reductase is an important enzyme that accelerates signaling to AR by converting testosterone to 5 ⁇ dihydroxytestosterone (DHT), and 5 ⁇ -reductase inhibitors have been used as treatments for prostatic hyperplasia.
  • the Hwangchil-tree extract of the present invention inhibits AR signaling by 5 ⁇ -reductase 1, 2 and AR gene expression reduction and AR receptor blockade, in particular, oversynthesized DHT binds to AR in prostate cells Therefore, the prostate hypertrophy, and even prostate cancer, and thus can be prevented and treated prostate hypertrophy through the mechanism of inhibiting AR signaling of the Hwangchil wood extract of the present invention.
  • the present invention confirmed that the extract of Hilchi chinensis has anti-androgen effect in the androgen-dependent prostate cancer cell line LNCaPFGC, and increased prostaglandin E 2 by inhibiting the expression of 15-PGDH, a target gene of the androgen receptor. .
  • Androgen inhibitors that inhibit the androgen signaling pathway have been reported to produce erectile dysfunction as a side effect.
  • Dr. Abdul-Magheed Trici a urologist in Boston Medical University, USA (Traish AM, 2011 Mar; 8 (3) ): 872-84) is a drug used to treat prostatic hypertrophy by blocking the androgen, a testosterone, and Avodart (dutasteride), Proscar, and Propecia (finasteride) can cause erectile dysfunction, and in some patients even if the drug is cut off It could not be recovered.
  • the Hwangchilchi extract according to the present invention can reduce the side effects of erectile dysfunction, which is a problem because it can increase the blood flow of Nanjing by inhibiting the expression of the target gene of the androgen receptor 15-PGDH and increasing prostaglandin E 2 There are features that can be.
  • the Hwangchil-tree extract of the present invention inhibits the expression of 5 ⁇ -reductase gene, inhibits the protein synthesis of androgen receptor (AR), and does not exhibit toxicity in experimental animals. It can be usefully used for prevention and treatment.
  • the present inventors have isolated and purified the active ingredient to identify the prostatic hypertrophy disease effect of the Hwangchil-tree extract, and to identify the pharmacologically active ingredient contained in the extract.
  • 9,16 S -dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid (HS3) and 9,16 R -dihydroxy- which are single compounds from the hexane extract of yellow lacquer 10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid (HS5) and (9 Z ) -16-hydroxy-9,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid (HS7) were isolated and purified, and the compounds were prostate AR signaling, a signaling mechanism associated with hypertrophy and prostate cancer, was found to inhibit PSA mRNA expression, and inhibited both 15-PGDH mRNA expression and 1 5aR-1 / -2 mRNA expression. It was confirmed that there is.
  • 9,16 S -dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid (HS3) and 9,16 R -dihydroxy contained in the extract as well as hwangchil extract according to the present invention -10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid (HS5) and (9 Z ) -16-hydroxy-9,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid (HS7) compounds are also therapeutic agents that can treat prostatic hyperplasia And prostate cancer treatments.
  • the present invention can provide a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of prostate hyperplasia comprising the extract of Hilchi chinensis as an active ingredient, and also 9,16 S -dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid (HS3) and 9,16 R -dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid (HS5) and (9 Z ) -16-hydroxy-9,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid (HS7 It can provide a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of enlarged prostate comprising the compound as an active ingredient.
  • HS3 9,16 S -dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid
  • HS5 9,16 R -dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid
  • HS7 -16-hydroxy-9,17-octadeca
  • the present invention may provide a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of prostate cancer, comprising the Hwangchil-tree extract or the extract-derived isolated and purified compounds as an active ingredient.
  • the compounds according to the invention can be used in the form of salts, preferably pharmaceutically acceptable salts.
  • the salt is preferably an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid, and an organic acid and an inorganic acid may be used as the free acid.
  • the organic acid is not limited thereto, citric acid, acetic acid, lactic acid, tartaric acid, maleic acid, fumaric acid, formic acid, propionic acid, oxalic acid, trifluoroacetic acid, benzoic acid, gluconic acid, metasulfonic acid, glycolic acid, succinic acid, 4-toluenesulfonic acid, Glutamic acid and aspartic acid.
  • the inorganic acid includes, but is not limited to, hydrochloric acid, bromic acid, sulfuric acid and phosphoric acid.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be prepared using a pharmaceutically acceptable and physiologically acceptable adjuvant in addition to the hwangchil wood extract, the HS3, HS5 or HS7 compound, the excipient, Disintegrants, sweeteners, binders, coatings, swelling agents, lubricants, lubricants or flavoring agents and the like can be used.
  • the pharmaceutical composition may be preferably formulated into a pharmaceutical composition including one or more pharmaceutically acceptable carriers in addition to the above-described active ingredient for administration.
  • Formulation forms of the pharmaceutical composition may be granules, powders, tablets, coated tablets, capsules, suppositories, solutions, syrups, juices, suspensions, emulsions, drops, injectable solutions, etc. It can also be prepared in intraurethral creams, rectal suppository or percutaneous formulations.
  • the active ingredient may be combined with an oral, nontoxic, pharmaceutically acceptable inert carrier such as ethanol, glycerol, water and the like.
  • suitable binders, lubricants, disintegrants and coloring agents may also be included in the mixture.
  • Suitable binders include but are not limited to natural and synthetic gums such as starch, gelatin, glucose or beta-lactose, corn sweeteners, acacia, trackercance or sodium oleate, sodium stearate, magnesium stearate, sodium Benzoate, sodium acetate, sodium chloride and the like.
  • Disintegrants include, but are not limited to, starch, methyl cellulose, agar, bentonite, xanthan gum, and the like.
  • Acceptable pharmaceutical carriers in compositions formulated in liquid solutions are sterile and physiologically compatible, including saline, sterile water, Ringer's solution, buffered saline, albumin injectable solutions, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol and One or more of these components may be mixed and used, and other conventional additives such as antioxidants, buffers and bacteriostatic agents may be added as necessary. Diluents, dispersants, surfactants, binders and lubricants may also be added in addition to formulate into injectable formulations, pills, capsules, granules or tablets such as aqueous solutions, suspensions, emulsions and the like. Furthermore, the method disclosed in Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA can be formulated according to each disease or component, as appropriate in the art.
  • the hwangchil wood extract of the present invention may be included in 0.00001 to 30% by weight relative to the total weight of the composition.
  • composition of the present invention can also be used as a functional food composition that can prevent and improve prostate hyperplasia and prostate cancer, and these food compositions contain various extracts, such as conventional food compositions, in addition to the extract of Hilchi chinensis as an active ingredient. Flavoring agents or natural carbohydrates and the like may be included as additional ingredients.
  • Examples of the above-mentioned natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose and the like; And conventional sugars such as polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • the aforementioned flavoring agents can advantageously be used natural flavoring agents (tautin), stevia extracts (for example rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.).
  • the food composition of the present invention may be formulated in the same manner as the pharmaceutical composition, used as a functional food, or added to various foods.
  • Foods to which the composition of the present invention may be added include, for example, beverages, meat, chocolate, foods, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, candy, ice creams, alcoholic beverages, vitamin complexes, and health supplements. There is this.
  • the food composition is a variety of nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), synthetic flavors and natural flavoring agents, colorants and neutralizing agents (cheese, chocolate, etc.), pectic acid and its Salts, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated drinks and the like.
  • the food composition of the present invention may contain a fruit flesh for producing natural fruit juice and fruit juice beverage and vegetable beverage.
  • Hwangchil wood extract as an active ingredient of the present invention is a natural substance with little toxicity and side effects, so can be used with confidence even for long-term use for the purpose of improving and preventing enlarged prostate.
  • the present invention provides a dietary supplement for improving and preventing prostatic hyperplasia and prostate cancer comprising the Hwangchil-tree extract as an active ingredient.
  • the health functional food of the present invention may be prepared and processed in the form of tablets, capsules, powders, granules, liquids, pills and the like for the purpose of improving and preventing prostate hyperplasia and prostate cancer.
  • the health functional food refers to foods manufactured and processed using raw materials or ingredients having functional properties useful for the human body according to Act No. 6767 of the Health Functional Food Act, and control nutrients to the structure and function of the human body. Or ingestion for the purpose of obtaining useful effects in health applications such as physiological effects.
  • the health functional food of the present invention may include a conventional food additive, and the suitability as a food additive, unless otherwise specified, in accordance with the General Regulations of the Food Additives and General Test Methods approved by the Food and Drug Administration, etc. Judging by the standards and standards.
  • Examples of the items loaded on the food additive revolution include, for example, chemical compounds such as ketones, glycine, calcium citrate, nicotinic acid and cinnamon acid; Natural additives such as dark blue pigment, licorice extract, crystalline cellulose, high color pigment and guar gum; And mixed preparations such as sodium L-glutamate, algae additives, preservatives and tar dyes.
  • chemical compounds such as ketones, glycine, calcium citrate, nicotinic acid and cinnamon acid
  • Natural additives such as dark blue pigment, licorice extract, crystalline cellulose, high color pigment and guar gum
  • mixed preparations such as sodium L-glutamate, algae additives, preservatives and tar dyes.
  • the health functional food in the form of a tablet is granulated in a conventional manner by mixing the mixture of excipients, hwangchil wood extract, an active ingredient of the present invention with excipients, binders, disintegrants and other additives, and then compressed with a lubricant and the like Or the mixture can be directly compression molded.
  • the health functional food in the form of tablets may contain a mating agent or the like as necessary.
  • Hard capsules among the health functional foods in the form of capsules may be prepared by filling a mixture of a mixture of additives such as excipients with the sulfur extract of the present invention in a conventional hard capsules, soft capsules are excipients, etc.
  • the mixture mixed with the additive of may be prepared by filling in a capsule base such as gelatin.
  • the soft capsule agent may contain a plasticizer such as glycerin or sorbitol, a colorant, a preservative, and the like, as necessary.
  • the health functional food in the form of a cyclic form may be prepared by molding a mixture of Hwangchil-tree extract, an active ingredient of the present invention, an excipient, a binder, a disintegrant, and the like by a conventionally known method. It may be avoided, or the surface may be coated with materials such as starch, talc.
  • the health functional food in the form of granules can be prepared by granulating a mixture of Hwangchil-tree extract, an active ingredient of the present invention, an excipient, a binder, a disintegrant, and the like by a conventionally known method. And the like.
  • the health functional food may be beverages, meat, chocolate, foods, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gum, candy, ice cream, alcoholic beverages, vitamin complexes and health supplements.
  • the present invention provides a method for preventing or treating enlarged prostate gland, comprising administering to the mammal the Hwangchil wood extract.
  • mammal refers to a mammal that is the subject of treatment, observation or experimentation, preferably human.
  • the term “therapeutically effective amount” means an amount of an active ingredient or pharmaceutical composition that induces a biological or medical response in a tissue system, animal or human, as thought by a researcher, veterinarian, doctor or other clinician, which Amounts that induce alleviation of the symptoms of the disease or disorder being treated. It will be apparent to those skilled in the art that the therapeutically effective dosages and frequency of administrations for the active ingredients of the present invention will vary depending on the desired effect. Therefore, the optimal dosage to be administered can be easily determined by one skilled in the art and includes the type of disease, the severity of the disease, the amount of active ingredients and other ingredients contained in the composition, the type of formulation, and the age, weight, general health of the patient.
  • the dose of 1 mg / kg to 250 mg / kg when the Hwangchil-tree extract of the present invention or the compound of the present invention derived from the extract is administered once to several times a day. It is preferable to administer.
  • the composition comprising the Hwangchil-tree extract of the present invention or the compound of the present invention derived from the extract as an active ingredient is oral, rectal, intravenous, intraarterial, intraperitoneal, intramuscular, intrasternal, transdermal, It may be administered in a conventional manner via the topical, intraocular or intradermal route, and also in the form of pharmaceuticals made in intraurethral creams, rectal suppository or percutaneous formulations. It is possible.
  • Hwangchil-tree (Dendropanax morbifera) at Gokwoo Farm located in Seongam-ri, Muan-gun, South Korea, the leaves were dried in a shady place at room temperature.
  • the dried leaves were extracted three times with methanol at room temperature.
  • the methanol extract was filtered using Whatman No. 1 filter paper and the combined methanol extract was concentrated in vacuo with a rotary evaporator.
  • the methanol extract was suspended in water and then fractionated respectively by polarity with hexane, diethyl ether, ethyl acetate, n-butanol and water. Each extract was concentrated with a rotary vacuum evaporator and this process is shown in FIG.
  • the present inventors performed the following experiment to determine whether the leaf extract of the Hwangchil-tree of the present invention has cell stability and anti-androgen activity against cells.
  • LNCaPFGC androgen-dependent prostate cancer cells were cultured in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C. in RPMI medium for cytotoxicity experiments, and the medium was incubated with 10% heat inactivated FBS and 100 ⁇ g / m L penicillin. The supplement was used.
  • Cell viability evaluation was performed by MTT assay (Mosmann, 1983), seeding LNCaPFGC cells (4 ⁇ 10 4 / mL) per 90 ⁇ L of DMEM medium in 96 well plates.
  • Hwangchil-tree extract was treated for 72 hours and incubated for 4 hours with 10 ⁇ L of MTT (5 mg / mL stock solution). Then, the medium was removed and formazan was dissolved by adding 150 ⁇ L of DMSO. Absorbance was measured at 540 nm using an ELISA microplate reader (PerkinElmer, Calif ornia, USA). The results are shown in Table 2 and FIG. 2.
  • PSA prostate s pecific antigen
  • the IC 50 of the hexane, ethyl acetate, methanol and water extracts of the yellow lacquer tree appeared from 88 ⁇ g / mL to> 800 ⁇ g / mL in LNCaPFGC cells, As the Hwangchil-tree extract of the present invention confirmed that it does not show a deadly harmful effect on cell viability, it was found that it does not have cytotoxicity.
  • the extract of the present invention inhibited DHT-induced expression of PSA mRNA and the degree of inhibition was n- Hex, EA, n-But and H 2 O extracts were shown in turn (see FIG. 3), and non-flutamide DMHE also reduced PAS and 15-PGDH expression by reducing 5 ⁇ RI / 2 enzyme in DHT synthesis.
  • Target genes were reduced in a concentration dependent manner (see FIGS. 4 and 5). This was inhibited by the addition of large amounts of DHT, which suggests that the anti-androgen effect of DMHE stems from a competitive mechanism with DHT on AR (see FIG. 7).
  • DMHE downregulated gene expression of AR was also observed in flutamide-treated cells (see FIG. 5).
  • HFDPC Primary Human Follicle Dermal Papilla Cells
  • PromoCell the cells used in the study, was purchased from PromoCell (Heidelberg, Germany) and used for alkaline phosphatase. Are stained by reaction.
  • the primary HFDPC used in this experiment was all 34 passages, and was cultured in a 37 ° C incubator with 5% CO 2, using Follicle Dermal Papilla Cell growth medium (C-26501, PromoCell, Germany).
  • Jongbun to the culture HFDPC (5 x 10 5/6 well) after the cells are attached to DMHE of the present invention was administered 24 hours. Subsequently, the effects on the mRNA expression of 5 ⁇ R-1 and 5 ⁇ R-2 and AR involved in amplifying sensitivity to AR were examined by converting intracellular AR target genes, 15-PGDH and testosterone, into DHT. As a result, the hwangchil extract of the present invention was shown to inhibit the expression of 5 ⁇ R-1, 5 ⁇ -R2, AR and 15-PGDH (Figs. 18-21).
  • the present inventors know that the Hwangchil-tree extract of the present invention can be used for the treatment of prostatic hyperplasia as a substance having an excellent effect of suppressing the pathogenesis of prostatic hyperplasia caused by hyperactivation of AR signaling.
  • the present inventors know that the Hwangchil-tree extract of the present invention can be used for the treatment of prostatic hyperplasia as a substance having an excellent effect of suppressing the pathogenesis of prostatic hyperplasia caused by hyperactivation of AR signaling.
  • the present inventors confirmed in vitro prostatic hypertrophy treatment effect of Hwangchil-tree extract, and furthermore, after producing an animal model in which prostatic hypertrophy was induced, the following experiments were carried out to treat the prostate hypertrophy of Hwangchil-tree extract. It was confirmed through.
  • the first animal used in this experiment was an 11-week-old male Sprague Dawley rat. It was purchased from (Daejeon, Korea). Solid feed and water were supplied at all times and used in the experiment after being acclimated to the laboratory environment for 1 week.This animal test was approved by the Chonnam National University Animal Research Ethics Committee (IRB) (CNU IACUC-YB-R-2012- 9) was carried out.
  • IRB Chonnam National University Animal Research Ethics Committee
  • the male Sprague Dawley rats were divided into the following groups: vehicle control group (V-CTL), testosterone-only group (TP-CTL), and testosterone with finasteride as a positive control group.
  • V-CTL vehicle control group
  • TP-CTL testosterone-only group
  • n 4 for each group, the overall experimental process is shown in Table 3.
  • the testosterone was injected into the subcutaneous injection for 2 weeks to induce prostate enlargement, and after 2 weeks, after confirming that the prostate enlargement was sufficiently induced, the testosterone was continuously injected to maintain the prostate hypertrophy situation, and the extract of the present day Oral administration to determine whether the progression of prostatic hypertrophy is inhibited.
  • finasteride (2 mg / kg / day) was used as a positive control group, and in the case of Hwangchil extract, the drug was divided into two groups (0.5 and 2 mg / kg). Three weeks after drug administration, the rats were sacrificed to observe the results.
  • V vehicle administration group
  • CTL control
  • TP testosterone-propionate administration group
  • FS finasteride administration group
  • DMHE Dendropanax morbifera hexane extracts administration group
  • CMC carboxymethylcellulose administration group.
  • TP was administered daily by subcutaneous injection for 2 weeks to induce prostate enlargement. After 2 weeks, vehicle control and TP control were dissected to confirm that prostate hypertrophy was properly induced. As a result, as shown in FIG. 8, The size of the prostate gland was confirmed to be 189% larger than the control group.
  • the body weight was measured the day after the last dose in the experimental schedule described above, and then sacrificed for blood collection and prostate extraction.
  • the extracted prostate was weighed after removing the surrounding fat and foreign substances, and the weight ratio of prostate per weight was calculated using the following equation, and the results are shown in Table 4.
  • V vehicle administration group
  • CTL control
  • TP testosterone-propionate administration group
  • FS finasteride administration group
  • DMHE Dendropanax morbifera hexane extracts group. P ⁇ 0.05.
  • TP-CTL compared to V-CTL increased prostate size to 249% by administration of TP for 5 weeks.
  • This increased prostate weight loss was significantly different between FS-treated group (3 mg / kg / day) and Hwangchil-tree extract treated group (2 mg / kg) compared with TP-CTL. ( P ⁇ 0.05).
  • FS group showed a small effect of 74.3% in comparison with TP-CTL, and 90.7% in 0.5 mg / Kg and 2 mg / Kg groups, respectively. And 81.6%, respectively (see FIG. 9).
  • Plasma in blood was isolated from the sacrificial mice used in the above example and the PSA content was measured. PSA measurement was performed according to the manufacturer's experimental method using ELISA (MyBiosource, Arizona, USA) and expressed in pg / mL content.
  • TP testosterone propionate
  • FS finasteride
  • DMHE D.morbiafera hexane extract. P ⁇ 0.05.
  • a reporter gene assay was performed to determine whether hwangchil extract directly affects the transcriptional activity of androgen receptor (AR).
  • AR receptor reporter gene assay was performed using the Cignal TM Reporter assay kit (Qiagen, CA, USA). The complex containing the GFP construct was used to prepare transfection conditions using a polyplus transfection reagent (Polyplus, New York, USA) on LNCaPFGC, an androgen-dependent cell, and then confirmed that the reporter gene was normally activated. It was.
  • the present inventors have found that the Hwangchil hexane extract has an effect of treating prostatic hyperplasia through the above examples, and thus the following experiments were carried out to identify the active ingredient that can treat prostate hypertrophy from the Hwangchil hexane extract. It was.
  • Example 6 In order to investigate the effect of the three compounds isolated and identified in Example 6 on AR signaling to determine whether they have a prostatic hypertrophy treatment effect, when the compounds were treated, the effect on PSA mRNA expression, 15-PGDH mRNA The effect on expression and the effect on 5aR-1 / -2 mRNA expression were investigated, respectively.
  • 15-PGDH mRNA expression level results, AR Special reolning target gene 15-PGDH mRNA expression also was shown to be inhibited by both separation in the present invention and the identification of the 3 compounds, in particular (9 Z) -16 -hydroxy-9,17-octadecadiene-12,14-diynoicacid (HS7) was shown to most effectively inhibit 15-PGDH mRNA expression (see Figure 15).
  • the inventors of the present invention showed that the hexane extract of hwangchil hexane and the single compound derived from the extract 9,16 S- dihydroxy-10,17-octadeca- diene-12,14-diynoic acid (HS3), 9,16 R- dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid (HS5) and (9 Z ) -16-hydroxy-9,17-octadecadiene-12,14-diynoicacid (HS7) in in vitro And in vivo Through experiments, it can be seen that it can be used as a prophylactic and therapeutic agent for prostatic hypertrophy.
  • HS3 9,16 S- dihydroxy-10,17-octadeca- diene-12,14-diynoic acid
  • HS5 9,16 R- dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid
  • (9 Z ) -16-hydroxy-9,17-
  • Tablets containing Hwangchil-tree extract of the present invention obtained in the above Example as an active ingredient were prepared by the following method.
  • Lactose, starch and pregelatinized corn starch were mixed with the extract of Hilchi chile, and then a suitable volume of purified water was added and granulated into powder. The granules were dried and then mixed with magnesium stearate and compressed to obtain tablets.
  • the components of the tablet are as follows.
  • Capsules containing the hwangchil wood extract of the present invention as an active ingredient were prepared by the following method.
  • the hwangchil wood extract of the present invention was mixed with a certain amount of excipient and magnesium stearate. The resulting mixture was filled into gelatin capsules to obtain capsules.
  • the components of the capsule are as follows.
  • Injection solution containing the hwangchil wood extract of the present invention as an active ingredient was prepared by the following method.
  • the plant extract was dissolved in an appropriate volume of sodium chloride BP for injection, and the pH of the resulting solution was adjusted to pH 3.5 with dilute hydrochloric acid BP, then the volume was adjusted with sodium chloride BP for injection and thoroughly mixed.
  • the solution was filled into a 5 ml Type I ampoule made of transparent glass, and the glass was dissolved and enclosed under an upper grid of air, followed by autoclaving at 120 ° C. for at least 15 minutes to obtain an injection solution.
  • the components of the injection solution are as follows.

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Abstract

본 발명은 전립선 비대증의 예방 및 치료제로서 황칠나무 추출물의 용도에 관한 것으로서, 보다 상세하게 본 발명은 황칠나무 추출물 및 상기 추출물로부터 분리 및 정제한 화합물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 조성물과 전립선 비대증의 예방 및 개선용 기능성 건강식품에 관한 것이다. 본 발명에 따른 황칠나무 추출물 및 상기 추출물로부터 분리한 화합물은 전립선 비대 효과를 유발시키는 안드로젠 수용체 시그럴닝을 억제하는 기전을 통해 전립선 비대증을 효과적으로 예방 및 치료할 수 있음을 규명하였다. 따라서 본 발명에 따른 황칠나무 추출물 및 상기 추출물로부터 분리된 화합물은 전립선 비대증 및 전립선암을 예방, 치료 및 개선할 수 있는 의약품 및 기능성 식품의 제조에 유용하게 사용할 수 있는 효과가 있다.

Description

황칠나무 추출물 또는 상기 추출물 유래의 화합물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 조성물
본 발명은 황칠나무 추출물 또는 상기 추출물 유래의 화합물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.
전립선비대증(BPH, Benign Prostatic Hyperplasia)은 남성에게 가장 흔한 질병중의 하나로, 최근 그 발병이 급속히 늘어나고 있다. BPH는 60대에서는 약 50%, 85세 이상이 되면 약 90%가 겪게되며 흔히 야간뇨, 지연뇨, 빈뇨, 뇨실금 등 하단부 요로장애(LUTS, lower urinary tract symptoms)가 발생하게 되고 반복적인 요로감염, 요로폐색 등이 오면 수술을 해야 된다(Bertaccini, Vassallo et al. 2001; Wei, Calhoun et al. 2005). 이처럼 BPH는 치명적인 질환은 아니나 삶의 질을 저하시킨다는 점에서 고령화 되어가는 현 사회의 중요한 의료문제로 대두되고 있다.
일반적으로 성인의 전립선의 크기는 ~ 20 g(± 6 g) 이나 비정상적인 상태가 되면 40 ~ 400 g까지 커질 수 있다(Foster 2000; Thorpe and Neal 2003). BPH는 전립선내에 정상세포의 수가 증가하여 비대해진 조직학적 질환(histologic disease)으로, 전립선이 비 정상적인 크기로 커지게 되면 가까이 있는 요로(proximal urethra)를 누르게 되어 LUTS를 초래하게 된다(Jacobsen, Girman et al. 2001; Thorpe and Neal 2003; Liu, Lee et al. 2006). 특히 BPH는 전립선 전이지역(prostatic transition zone), 근위 요도(proximal urethra)를 둘러싼 지역에 있는 간질세포(stromal cell)에 큰 변화가 생기게 되는데(Foster 2000; Committee 2003), 정상인 경우 2.7 : 1 의 비율인 반면 BPH 증상을 보이는 경우 간질세포와 상피세포의 비율은 4.6 : 1 이다 (Foster 2000). 이들 간질세포는 아드레날린 신경계(adrenergic nerve system)의 조절을 받아 성장이 조절되는데, 이와 관련한 α1a subtype receptor는 전립선 내부 간질조직(stromal tissue)에서 가장 많이 발견되는 adrenergic receptor로 알려져 있다(Foster 2000; Thorpe and Neal 2003).
한편, BPH가 발병하는 원인에 대하여 명확하게 밝혀지지는 않았으나, 노화에 따른 남성호르몬 변화로 인한 것으로 알려져 있다(Isaacs and Coffey 1989). 정상적인 전립선의 경우 상피세포(epithelial cell)와 간질세포(stromal cell)가 밀접하게 상호작용을 하여, 전립선의 성장(growth)과 퇴화(regression)가 유기적으로 조절되나, BPH의 경우 세포사멸이 더 적어 전립선의 부피가 커지게 된다. 특히 epidermal growth factor (EGF), basic fibroblast growth factor (bFGF) 및transforming growth factor β(TGFβ) 등이 관련되어 있다는 보고가 있다. EGF나 TGF-β는 강력한 유사분열 촉진인자이며, 전립선조직이나 전립선 액에는 다량의 EGF가 포함되어 있어 남성호르몬(androgen)에 의한 전립선 비대는 EGF에 의해 매개된다고 여겨진다(Lee 1996). TGFβ도 BPH에 있어 증가되어 있는데 아마도 교질세포(matrix cell)가 평활근 세포(smooth muscle cell)로 분화하는데 관여하는 것으로 여겨진다(Klingler, Bretland et al. 1999). bFGF는 강력한 세포 유사분열 촉진 인자로 역시 BPH에 과발현되어 있다. bFGF는 간질세포와 상피세포 모두에서 생성되며, 아마도 BPH 병변의 가장 중요한 인자일 것이라고 보고되고 있다(Saez, Gonzalez-Baena et al. 1999).
테스토스테론과 이의 활성 형태인 5α-dihydroxytestosterone (DHT) 역시 BPH 에 중요한 요인으로 작용한다. DHT는 5α-reductase type 2에 의해 테스토스테론으로부터 형성되어, BPH에서 과발현되어 있는 많은 양이 발견이 되며, 테스토스테론과 DHT 모두 전립선내의 간질세포의 성장을 자극하는 것으로 보고되고 있다(Lee, Seong et al. 2001; Thorpe and Neal 2003). 이외에 최근에는 식이섭취, 운동, 대사성질환 등과 관련하여 BPH의 원인을 찾고자 연구가 많이 진행되고 있다(Parsons 2007).
이러한 BPH를 치료하기 위한 방법으로 임상적 치료방법은 초기에는 거의 수술을 수행하였는데, 80년대 후반부터는 약물 투여방법으로 급속도로 변화하고 있다(Milroy 1990). 현재 BPH 치료에 사용되는 약물에는 아드레날린성 알파수용체억제제(α-adrenergic receptor antagonists, α-blockers), 5α-리덕타제 (reductase) 억제제 및 피토테라피(phytotherapy)가 있다. 초기에는 증상을 완화하여 수술까지의 시간을 늦춘다는 개념으로 약물투여를 실시하여 각각 환자에 맞춰 적합한 약물을 선택하여 투여하는 모노테라피(monotherapy)를 수행하였으나, α-blockers 와 5α-reductase 억제제를 동시에 투여하는 병용 치료를 수행하기도 한다. 약물 α-blockers는 주로 증상 완화효과를 보이며 즉각적인 효과를 보이는 장점이 있고, 5α 리덕타제 억제제들은 즉각 효과를 보기는 어려우나 수반되는 질병진행을 장기간 늦추어주는 장점이 있다. 현재 사용되는 α-blockers로는 alfuzosin, doxazosin, tamsulosin, 및 terazosin이 있다. 4가지 모두 효능이 거의 같으나 부작용은 각각 다른 것으로 보고 되어있다(Committee 2003). α-blockers의 작용은 전립선과 방광경부에 많이 발현되는 α1-adrenergic receptor를 차단하는 역할을 한다. α1-adrenergic receptor를 차단하면 전립선 근육을 이완시켜, 배뇨와 다른 LUTS 증상을 완화시켜 BPH로 인한 방광의 기능장애를 없애주는 역할을 한다(Wykretowicz, Guzik et al. 2008). 이 약물의 가장 흔한 부작용으로는 어지러움증, 무기력증, 코 충혈 및 기립성 저혈압 등이 있다(Committee 2003). 5α-reductase 억제제로 사용하는 dutasteride와 finasteride는 α-blockers 와는 다른 기전으로 작용한다. Dutasteride 는 5 α-reductase type 1 (주로 피부와 간에서 발현)과 type 2(생식기관에서 주로 발현) 모두에 억제작용을 하며, 반면 finasteride 는 type 2만 억제시킨다. 이러한 약물의 작용기전은 5 α-reductase 와 경쟁적으로 작용하여 DHT 형성을 억제하는 작용을 한다. 전립선의 비정상인 성장은 DHT의 양에 의존하므로 DHT의 양을 줄이면 점차 전립선의 크기는 줄어들게 되어 BPH 관련된 질환을 예방할 수 있게 된다(McConnell, Roehrborn et al. 2003). 그러나 이 약물을 이용하여 전립선의 크기를 줄여, 수반되는 질환이 호전되기까지는 적어도 2개월 에서 1년 정도 치료가 필요하다는 문제점이 있다(Gormley, Stoner et al. 1992; Kirby, Bryan et al. 1992; Roehrborn, Boyle et al. 2002). 또한 부작용으로 발기부전, 성욕감퇴 , 사정장애 및 남자의 유방 이상비대 등이 있게 되며, 복용중단 후 3개월이 지나면 치료 전 수준으로 돌아가게 된다. 현재 많이 복용되는 finasteride 사용시 전립선의 크기가 > 40 g 일 때 훨씬 효과가 있다는 보고들이 있어서 이 약물의 처방시에는 전립선 암의 screening factor 로 사용하는 PSA (prostate specific antigen) 를 사전에 test 하여 처방한다. 그리고 전립선의 크기가 >40 g 이상이며 PSA 가 > 4 ng/mL 인 경우 병용 치료를 하면 훨씬 효과적이라고 한다(Committee 2003).
이외에 BPH 치료에 식물유래 대체의약품들의 사용이 많이 시도되고 있는데 대표적인 것으로 쏘팔메토(saw palmetto), 호박 씨앗(pumpkin seeds), 쐐기풀 뿌리(nettle root) 등이 있다.
이처럼 전립선비대증의 중요성 만큼이나 많은 치료 약물들이 있으나 그 효능에 한계점이 있고, 안드로젠 시그날링을 억제할 경우 발기부전 등의 부작용이 문제가 될 수 있으므로 부작용이 적고 근본적인 치료효과를 보이는 새로운 치료제의 개발이 시급하다.
발기부전의 예방 및 치료방법중의 하나가 프로스타그란딘의 혈류증진효과를 이용하는 것이다 (Wolfson B, Pickett S, Scott NE, DeKernion JB, Rajfer J. 1993 Jul;42(1):73-5; Karabulut A, PeL, OzkardeH, AltuU, Erol D. Urol Int. 2001;67(2):160-2). 15-PGDH는 안드로젠 의존성 전립선암세포주인 LNCaP세포에서 테스토스테론과 DHT에 의해 시간 및 농도 의존적으로 유도되었으나, 안드로젠 비의존성 전림선암세포주 PC3 cells에서는 이러한 결과가 관찰되지 않았다(Tong M, Tai HH. 2000 Sep 16;276(1):77-81). 그러므로 안드로젠 시그날링을 억제하는 물질이 15-PGDH의 발현이나 활성을 억제하여 프로스타글란딘 E2을 증가시켜 남경의 혈류를 증가시킬 수 있다면 발기부전의 부작용을 줄여줄 가능성이 높을 것이다.
이에 본 발명에서는 황칠나무 추출물이 안드로젠 의존성 전립선 암 세포주인 LNCaPFGC에서 항 안드로젠 효과가 있음을 확인하였고, 또한 안드로젠 수용체의 타겟 유전자인 15-PGDH의 발현을 억제함으로써 프로스타글란딘 E2를 증가시켜 남경의 혈류를 증가시킬 수 있는 장점으로 발기부전의 부작용을 줄여줄 가능성이 높다고 착안하여, 최종적으로 테스토스테론으로 유도된 BPH 동물모델에서 황칠의 헥산 추출물 또는 상기 추출물 유래의 화합물을 또는 상기 추출물 유래의 화합물에 의한 BPH 치료 및 예방 효과가 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
그러므로 본 발명의 목적은 황칠나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 조성물을 제공하는 것이다.
또한 본 발명의 다른 목적은 황칠나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
또한 본 발명의 다른 목적은 상기 황칠나무 추출물로부터 분리 및 정제한 9,16S-dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid, 9,16R-dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid 또는 (9Z)-16-hydroxy-9,17- octadecadiene-12,14-diynoic acid 화합물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 목적은 황칠나무 추출물, 상기 황칠나무 추출물로부터 분리 및 정제한 9,16S-dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid, 9,16R- dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid 또는 (9Z)-16-hydroxy- 9,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid 화합물을 유효성분으로 포함하는 전립선암의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 황칠나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 황칠나무 추출물은 황칠나무의 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조추출물은 정제수를 포함한 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매로부터 가용한 추출물일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 비극성용매 가용 추출물은 헥산, 클로로 포름, 디클로로메탄 또는 에틸아세테이트에 가용한 추출물일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 황칠나무 추출물은 5α-리덕타아제 발현 억제 또는 안드로겐 수용체(AR) 발현 억제 활성을 갖는 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 황칠나무 추출물은 9,16S-dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid, 9,16R- dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid 또는 (9Z)-16-hydroxy- 9,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid 화합물을 함유할 수 있다.
또한, 본 발명은, 9,16S-dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid, 9,16R- dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid 또는 (9Z)-16-hydroxy- 9,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid 화합물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 화합물은 황칠나무의 헥산 추출물로부터 분리 및 정제된 것일 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 화합물은 PSA (prostate specific antigen) mRNA 발현, 15-PGDH mRNA 발현, 5αR-1 (5α-reductase type 1) 및 5αR-2 (5α-reductase type 2) mRNA 발현을 억제 및 감소시키는 활성을 갖는 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 황칠나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 황칠나무 추출물은 9,16S-dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid, 9,16R- dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid 또는 (9Z)-16-hydroxy- 9,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid 화합물을 함유할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 식품은 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
나아가 본 발명은, 황칠나무 추출물, 상기 황칠나무 추출물로부터 분리 및 정제한 9,16S-dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid, 9,16R- dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid 또는 (9Z)-16-hydroxy- 9,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid 화합물을 유효성분으로 포함하는 전립선암의 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 황칠나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 조성물과 전립선 비대증의 예방 및 개선용 기능성 건강 식품에 관한 것이다. 본 발명에 따른 황칠나무 추출물은 전립선 비대 효과를 유발시키는 안드로젠 수용체 시그럴닝을 억제하는 기전을 통해 전립선 비대증을 효과적으로 예방 및 치료할 수 있음을 규명하였고, 더불어 세포에 대해 독성을 유발하지 않아 세포 안전성을 갖는다는 사실을 규명하였다. 따라서 본 발명에 따른 황칠나무 추출물은 전립선 비대증을 예방, 치료 및 개선할 수 있는 의약품 및 기능성 식품의 제조에 유용하게 사용할 수 있는 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 황칠나무 추출물을 제조하는 일 공정을 나타내는 모식도이다.
도 2는 MTT 분석에 의한 LNCaPFGC 세포에서의 황칠나무 추출물의 세포 독성 평가 그래프이다.
도 3은 LNCaPFGC 세포에서 황칠나무 추출물의 PSA (prostate specific antigen) mRNA 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 4는 LNCaPFGC 세포에서 황칠나무 추출물의 5α-R 1/2 mRNA 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 5는 LNCaPFGC 세포에서 DMHE 및 플루타미드의 AR, 15-hydroxyprostaglandin dehydrogenase (15-PGDH) 및 PSA mRNA 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 6은 LNCaPFGC 세포에서 AR 및 DHT에 의해 유도되는 이들의 타겟 유전자 (15-PGDH 및 PSA) mRNA의 과발현에 미치는 DMHE 농도-의존적 영향을 나타낸 그래프이다.
도 7은 DMHE에 의한 AR의 타겟 유전자인 PSA mRNA 억제 효과가 고농도의 DHT에 의하여 회복되는 효과를 보여준 그래프로 AR 에 대하여 DHT 와 경쟁적으로 억제함을 보여준 그래프이다.
도 8은 본 발명의 일실시예에서 제작한 전립선 비대증 동물모델의 전립성 비대 정도를 육안으로 관찰한 사진을 나타낸 것이다.
도 9는 전립선 비대증이 유발된 마우스 모델을 대상으로 본 발명의 황칠나무 추출물 처리에 따른 전립선의 크기 변화를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 10은 LNCaPFGC 세포를 대상으로 본 발명의 황칠나무 추출물 처리에 따른 안드로겐 수용체의 전사 활성도를 루시퍼라제 어세이를 통해 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 11은 전립선 비대증이 유발된 마우스 모델을 대상으로 본 발명의 황칠나무 추출물 처리에 따른 상기 마우스 혈액 내의 PSA 농도를 측정하여 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 12는 본 발명의 일실시예에서 황칠 헥산 추출물을 대상으로 HPLC 크로마토그래프 분석을 통해 단일 화합물을 분리한 크로마토그램을 나타낸 것이다.
도 13은 본 발명의 황칠 헥산 추출물로부터 전립선 비대증 치료 효과를 갖는 3가지 단일 화합물을 분리 및 정제하는 과정을 모식도로 나타낸 것이다.
도 14는 본 발명에 따른 황칠 헥산 추출물과 상기 추출물 유래의 3가지 단일 화합물을 대상으로 전립선 암 세포주(LNCaP·FGC)에서의 PSA mRNA 발현에 미치는 영향을 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 15는 본 발명에 따른 황칠 헥산 추출물과 상기 추출물 유래의 3가지 단일 화합물을 대상으로 전립선 암 세포주(LNCaP·FGC)에서의 15-PGDH mRNA 발현에 미치는 영향을 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 16은 본 발명의 황칠 용매 추출물과 황칠 헥산 추출물로부터 분리한 3가지 단일 화합물을 대상으로 전립선 암 세포주(LNCaP·FGC)에서의 5aR-1 mRNA 발현에 미치는 영향을 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 17은 본 발명의 황칠 용매 추출물과 황칠 헥산 추출물로부터 분리한 3가지 단일 화합물을 대상으로 전립선 암 세포주(LNCaP·FGC)에서의 5aR-2 mRNA 발현에 미치는 영향을 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 18은 안드로젠 리셉터 발현 세포주로 AR 시그럴닝연구에 사용하는 HFDPC (human hair dermal papilla cell)를 대상으로 본 발명의 황칠나무 헥산 추출물의 농도별 처리에 따른 5αR1의 mRNA 발현정도를 분석한 결과를 나타낸 것이다(Min: 미녹시딜 처리 군, DMHE: 본 발명의 황칠나무 헥산 추출물 처리군).
도 19은 HFDPC (human hair dermal papilla cell)를 대상으로 본 발명의 황칠나무 헥산 추출물의 농도별 처리에 따른 5αR2의 mRNA 발현정도를 분석한 결과를 나타낸 것이다(Min: 미녹시딜 처리 군, DMHE: 본 발명의 황칠나무 헥산 추출물 처리군).
도 20은 HFDPC (human hair dermal papilla cell)를 대상으로 본 발명의 황칠나무 헥산 추출물의 농도별 처리에 따른 안드로젠 수용체(AR)의 mRNA 발현정도를 분석한 결과를 나타낸 것이다(Min: 미녹시딜 처리 군, DMHE: 본 발명의 황칠나무 헥산 추출물 처리군).
도 21은 HFDPC (human hair dermal papilla cell)를 대상으로 본 발명의 황칠나무 헥산 추출물의 농도별 처리에 따른 15-PGDH의 mRNA 발현정도를 분석한 결과를 나타낸 것이다(Min: 미녹시딜 처리 군, DMHE: 본 발명의 황칠나무 헥산 추출물 처리군).
본 발명에서 사용되는 용어에 대한 정의는 이하와 같다.
"추출물"은 황칠나무의 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물임을 특징으로 한다.
"조추출물"은 정제수를 포함한 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매, 바람직하게는 물 및 메탄올 혼합용매, 보다 바람직하게는 50~100% 메탄올에 가용한 추출물을 포함한다.
"극성용매 가용 추출물"은 물, 메탄올, 부탄올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택되어진 용매, 바람직하게는 물 또는 메탄올, 보다 바람직하게는 메탄올에 가용한 추출물을 포함한다.
"비극성용매 가용 추출물"은 헥산, 클로로포름, 디클로로메탄, 또는 에틸아세테이트, 바람직하게는 헥산, 디클로로메탄 또는 에틸아세테이트, 보다 바람직하게는, 헥산 또는 에틸아세테이트 용매에 가용한 추출물을 포함한다.
"약학적 조성물(pharmaceutical composition)"은 본 발명의 황칠나무 추출물과 희석제 또는 담체와 같은 다른 화학 성분들의 혼합물을 의미한다.
"담체(carrier)"는 세포 또는 조직 내로의 화합물의 부가를 용이하게 하는 화합물로 정의된다. 예를 들어, 디메틸술폭사이드(DMSO)는 생물체의 세포 또는 조직 내로의 많은 유기 화합물들의 투입을 용이하게 하는 통상 사용되는 담체이다.
"희석제(diluent)"는 대상 화합물의 생물학적 활성 형태를 안정화시킬 뿐만 아니라, 화합물을 용해시키게 되는 물에서 희석되는 화합물로 정의된다. 버퍼 용액에 용해되어 있는 염은 당해 분야에서 희석제로 사용된다. 통상 사용되는 버퍼 용액은 포스페이트 버퍼 식염수이며, 이는 인간 용액의 염 상태를 모방하고 있기 때문이다. 버퍼 염은 낮은 농도에서 용액의 pH를 제어할 수 있기 때문에, 버퍼 희석제가 화합물의 생물학적 활성을 변형하는 일은 드물다.
"유효량"은, 이롭거나 바람직한 임상적 또는 생화학적 결과에 영향을 주는 적절한 양이다. 유효량은 한번 또는 그 이상 투여될 수 있다. 본 발명의 목적을 위하여, 유효량은 질병 상태의 진행을 일시적으로 완화, 개선, 안정화, 되돌림, 속도를 늦춤 또는 지연시키는데 적절한 양이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 또한 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다. 본 명세서에 참고문헌으로 기재되는 모든 간행물의 내용은 본 발명에 도입된다.
본 발명은 황칠나무 추출물의 용도에 관한 것으로, 황칠나무 추출물이 내포하고 있는 특정 생리활성 및 기능의 발휘에 관한 것이다.
황칠나무(Dendropanox morbifera LEV.)는 두릅나무에 속하는 상록 활엽교목으로 우리나라의 제주도와 완도, 보길도, 해남 등 남ㆍ서해안 일대에 자생하고 있는 우리나라 특산 수종이다. 황칠나무에 함유된 정향성분은 소량의 터펜(Terpene)류와 다량의 세스퀴터펜(Sesquiterpene)류가 포함되어 있는데, 채취시기나 장소에 따라서 차이가 있지만 germacrene-d, β-selinene,α-amorphene, α-selinene, δ-cadinene,γ-cadinene, T-muurolol, β-elemene, bicyclo [4,4,0] dec- 1 -en - 2 - isopropyl - 5 - methyl - 9-methylene, β-cadinene, germacrene-B, α-copaene, α-humulene, α-cadinene과 소량의 linalool L, α-terpinene, α-cubebene, α-ylangene,(+)-calarene, 3,7-guaiadine, (-)-isoledene, β-cubebene, limonene, aromadendrene, cadina-1,4-diene 등이 함유되어 있다(Jeollanam do, 1996).
본 발명에서 사용할 수 있는 황칠나무의 부위는 잎, 줄기, 수피 등 제한이 없으나, 바람직하게는 잎을 사용할 수 있다.
황칠나무 추출물은 당업계에 알려진 방법, 이의 변형된 방법 또는 본 발명에 의한 방법으로 제조하여 사용할 수 있다. 일 구체예로서, 이하와 같은 방법으로 제조할 수 있다.
본 발명의 황칠나무 추출물 또는 조추출물은 황칠나무 중량의 약 1 내지 30배 부피량, 바람직하게는 5 내지 15배 부피량 (w/v%)의 정제수를 포함한 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매, 바람직하게는 물 및 에탄올 혼합용매, 보다 바람직하게는 50~100% 에탄올을 가하여, 약 0 내지 100℃, 바람직하게는 실온에서 10 내지 60 시간, 바람직하게는 30 내지 50 시간 동안 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출, 또는 가열추출법 등의 추출방법으로, 바람직하게는 열수추출법으로 추출한 후 여과하고 감압 농축하여 본 발명의 황칠나무 조추출물을 얻을 수 있다.
또한, 본 발명의 극성용매 또는 비극성용매 가용 추출물은 상기에서 얻은 조추출물, 바람직하게는 50~100% 에탄올 조추출물 중량의 약 1 내지 150배, 바람직하게는 5 내지 100배 부피(w/v%)의 물을 분산시킨 후, 헥산, 에틸아세테이트 및 부탄올을 순차적으로 물의 약 1 내지 10배, 바람직하게는 1 내지 5배의 부피를 가하여 1 내지 5회, 바람직하게는 2 내지 4회 분획하여 본 발명의 극성 용매 및 비극성용매 가용 추출물을 수득할 수 있다. 바람직하게는 헥산 추출물을 수득하여 사용할 수 있다.
상기 추출물들의 농축액을 -80℃ 동결건조 혹은 50℃ 진공감압을 통하여 분말상태로도 얻을 수 있다.
본 발명은 상기 황칠나무 추출물을 제조하는 방법을 포함한다. 상기 제조방법은 그것의 예시적인 방법에 지나지 않으며, 당해 분야의 기술에 근간한 다양한 방법들에 의해 적절히 변형시켜 사용할 수 있다.예를 들면, 본 발명에 따른 비-예시된 추출방법은 당분야의 숙련가에게 명백한 변형에 의해 성공적으로 수행될 수 있다.
본 발명이 속하는 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면, 본 발명에 따른 황칠나무 추출물의 제조를 위한 구체적인 반응조건 등을 추후 설명하는 실시예들을 통해 확인할 수 있으므로, 그에 대한 자세한 설명은 생략한다.
한편, 발명은 본 발명의 황칠나무 추출물이 AR의 단백질 합성을 억제하는 항 안드로겐 특성을 가지고 있음을 규명하였는데, 즉 본 발명의 황칠나무 추출물은 AR 시그널링 억제에 관여하고 있는 것으로 확인되었다. 5α-리덕타제는 테스토스테론을 5α디하이드록시테스토스테론(DHT)로 전환시켜 AR 에 대한 시그널링을 가속화시키는 중요한 효소이며, 5α-리덕타제 억제제는 전립선 비대증 치료제로 사용되고 있다.
이러한 점에서 볼 때, 본 발명의 황칠나무 추출물은 5α-리덕타제 1, 2 와 AR 유전자 발현감소 및 AR 수용체 차단에 의한 AR 시그널링을 억제시키며, 특히 과다 합성된 DHT는 전립선 세포에 있는 AR에 결합하여 전립선 비대, 더 나아가 전립선 암을 유발하기도 하므로 따라서 본 발명의 황칠나무 추출물은 AR 시그널링을 억제시키는 기작을 통해 전립성 비대증을 예방 및 치료할 수 있다.
또한, 본 발명에서는 황칠나무 추출물이 안드로젠 의존성 전립선 암 세포주인 LNCaPFGC에서 항 안드로젠 효과가 있음을 확인하였고, 안드로젠 수용체의 타겟 유전자인 15-PGDH의 발현을 억제함으로써 프로스타글란딘 E2를 증가시킨다는 사실을 확인하였다.
안드로젠 신호 경로를 억제하는 안드로젠 억제제의 경우, 그 부작용으로 발기부전이 발생한다는 보고가 발표되고 있는데, 최근에 미국 보스턴 의과대학 비뇨기과전문의 압둘마게드 트라이시박사(Traish AM, 2011 Mar; 8(3):872-84)는 남성 호르몬인 안드로젠을 차단하여 전립선비대증을 치료할 수 있는 치료제인 Avodart (dutasteride)와 Proscar, Propecia(finasteride)가 발기부전을 유발할 수 있으며 일부 환자의 경우 약을 끊어도 발기부전이 회복되지 않을 수 있다고 하였다.
한편, 본 발명에 따른 황칠나무 추출물은 안드로젠 수용체의 타겟유전자인 15-PGDH의 발현을 억제하고 프로스타글란딘 E2를 증가시켜 남경의 혈류를 증가시킬 수 있으므로 종래 문제시 되고 있는 발기부전의 부작용을 줄여줄 수 있는 특징이 있다.
또한, 본 발명의 황칠나무 추출물은 5α-리덕타제 유전자 발현을 억제하고, 안드로겐 수용체(AR)의 단백질 합성을 억제하며, 실험동물에서 독성을 나타내지 않으므로, 이러한 분자적 메커니즘을 기반으로 전립성 비대증 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
나아가 본 발명자들은 황칠나무 추출물이 갖는 전립성 비대증 질환 효과를 확인하고, 상기 추출물에 함유된 약리학적 활성 성분을 규명하기 위해 활성 성분을 분리 및 정제하였다.
그 결과, 본 발명의 일실시예에 의하면, 황칠의 헥산 추출물로부터 단일 화합물인 9,16S-dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid (HS3)와 9,16R-dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid (HS5) 및 (9Z)-16-hydroxy-9,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid (HS7)을 분리 및 정제하였고, 상기 화합물들이 전립선 비대증 및 전립선 암과 관련된 신호전달 기작인 AR 시그널링에서 PSA mRNA의 발현을 억제하는 활성이 있음을 확인하였고, 15-PGDH mRNA의 발현 뿐만 아니라 1 5aR-1/-2 mRNA 발현 역시 모두 억제하는 활성이 있음을 확인하였다.
따라서 이러한 결과를 통해 본 발명자들은 본 발명에 따른 황칠 추출물 뿐만 아니라 상기 추출물에 함유된 9,16S-dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid (HS3)와 9,16R-dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid (HS5) 및 (9Z)-16-hydroxy-9,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid (HS7) 화합물 역시 전립선 비대증을 치료할 수 있는 치료제 및 전립선 암 치료제로 사용할 수 있다는 것을 알 수 있었다.
그러므로 본 발명은 황칠나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 약제학적 조성물을 제공할 수 있으며, 또한, 9,16S-dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid (HS3)와 9,16R-dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid (HS5) 및 (9Z)-16-hydroxy-9,17-octadecadiene-12,14-diynoic acid (HS7) 화합물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 약제학적 조성물을 제공할 수 있다.
뿐만 아니라 본 발명은 상기 황칠나무 추출물 또는 상기 추출물 유래 분리 및 정제된 상기 화합물을 유효성분으로 포함하는 전립선 암의 예방 및 치료를 위한 약제학적 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명에 따른 상기 화합물은 염, 바람직하게는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있다. 상기 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의하여 형성된 산 부가염이 바람직하며, 상기 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있다. 상기 유기산은 이에 제한되는 것은 아니나, 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 말레인산, 푸마르산, 포름산, 프로피온산, 옥살산, 트리플로오로아세트산, 벤조산, 글루콘산, 메타술폰산, 글리콜산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 글루탐산 및 아스파르트산을 포함한다. 또한 상기 무기산은 이에 제한되는 것은 아니나, 염산, 브롬산, 황산 및 인산을 포함한다.
또한, 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 유효성분인 황칠나무 추출물, 상기 HS3, HS5 또는 HS7 화합물 이외에 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.
상기 약제학적 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약제학적 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.
상기 약제학적 조성물의 제제 형태는 과립제, 산제, 정제, 피복정, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제, 주사 가능한 액제 등이 될 수 있으며, 또한, 요도내 크림(intraurethral cream), 직장용 좌약(rectal suppository)이나 경피용(percutaneous)제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약제학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄 검 등을 포함한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화 할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 있어서, 본 발명의 황칠나무 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.00001 ~ 30 중량%로 포함될 수 있다.
본 발명의 조성물은 또한 전립선 비대증 및 전립선 암을 예방 및 개선할 수 있는 기능성 식품 조성물로도 사용할 수 있는데, 이러한 식품 조성물은 유효성분인 황칠나무 추출물을 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 향미제는 천연 향미제 (타우마틴), 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 상기 약제학적 조성물과 동일한 방식으로 제제화되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등이 있다.
또한 상기 식품 조성물은 유효성분인 황칠나무 추출물 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
본 발명의 유효성분인 황칠나무 추출물은 천연물질로서 독성 및 부작용은 거의 없으므로 전립선 비대증을 개선 및 예방하기 위한 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있다.
그러므로 본 발명은 황칠나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증 및 전립선 암을 개선 및 예방하기 위한 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 건강기능식품은 전립선 비대증 및 전립선 암을 개선 및 예방하기 위한 목적으로, 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공할 수 있다.
본 발명에서 건강기능식품이라 함은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 말하며, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
본 발명의 건강기능식품은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전청에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.
상기 식품 첨가물 공전에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류 등을 들 수 있다.
예를 들어, 정제 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분인 황칠나무 추출물을 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와 혼합한 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형할 수 있다. 또한 상기 정제 형태의 건강기능식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수도 있다.
캅셀 형태의 건강기능식품 중 경질 캅셀제는 통상의 경질 캅셀에 본 발명의 유효성분인 황칠나무 추출물을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질 캅셀제는 황칠나무 추출물을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 젤라틴과 같은 캅셀기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다.
환 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분인 황칠나무 추출물과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 제피제로 제피할 수 있으며, 또는 전분, 탈크와 같은 물질로 표면을 코팅할 수도 있다.
과립 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분인 황칠나무 추출물과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.
상기 건강기능식품은 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등일 수 있다.
또한 본 발명은 포유동물에게 황칠나무 추출물을 투여하는 것을 포함하는 전립선 비대증 예방 또는 치료방법을 제공한다.
여기에서 사용된 용어 "포유동물"은 치료, 관찰 또는 실험의 대상인 포유동물을 말하며, 바람직하게는 인간을 말한다.
여기에서 사용된 용어 "치료상 유효량"은 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상에 의해 생각되는 조직계, 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 유효 성분 또는 약학적 조성물의 양을 의미하는 것으로, 이는 치료되는 질환 또는 장애의 증상의 완화를 유도하는 양을 포함한다. 본 발명의 유효 성분에 대한 치료상 유효 투여량 및 투여횟수는 원하는 효과에 따라 변화될 것임은 당업자에게 자명하다. 그러므로 투여될 최적의 투여량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있으며, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 함량, 제형의 종류, 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 본 발명의 치료방법에 있어서, 성인의 경우, 본 발명의 황칠나무 추출물, 또는 상기 추출물 유래의 본 발명의 화합물을 1일 1회 내지 수회 투여시, 1㎎/kg~250㎎/kg의 용량으로 투여하는 것이 바람직하다.
본 발명의 치료방법에서 본 발명의 황칠나무 추출물 또는 상기 추출물 유래의 본 발명의 화합물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 경구, 직장, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 흉골내, 경피, 국소, 안구내 또는 피내 경로를 통해 통상적인 방식으로 투여할 수 있으며, 또한, 요도내 크림(intraurethral cream), 직장용 좌약(rectal suppository)이나 경피용(percutaneous)제형으로 제조된 약제 형태로도 사용 가능하다.
실시예
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다. 또한, 각 실험들은 3번 이상 수행하였고, 각 데이터들을 평균 ± SE로 표시하였다. 통계적 유의성은 Student's t test에 의해 결정하였다. P < 0.05는 통계학적으로 유의한 것으로 간주하였다.
실시예 1 : 황칠나무잎 추출물 제조
(1) 추출물 제조
한국 무안군(읍) 성암리에 위치한 곡우 농원에서 황칠 나무(Dendropanax morbifera)의 잎을 수득한 후 잎을 상온의 그늘진 곳에서 건조시켰다.
건조된 잎들을 상온에서 메탄올로 3회 추출하였다. 상기 메탄올 추출물을 와트만 넘버 1 여과지를 이용하여 여과하고, 상기 결합된 메탄올 추출물을 회전식 증발농축기로 진공에서 농축시켰다. 메탄올 추출물을 수 중 현탁시키고 이어서 헥산, 디에틸 에테르, 에틸 아세테이트, n-부탄올 및 물로 극성에 따라 각각 분획하였다. 각 추출물들을 회전식 진공 증발농축기로 농축하였으며, 이러한 공정을 도 1에 도시하였다.
(2) 분획화 및 분리 공정
그래디언트 용매 시스템 [CHCl3 (0.1% HCOOH) 100% through CHCl3 (0.1% HCOOH) -MeOH (0.1% HCOOH)/55:45 for 120 min]을 이용하여 Isolera Flash Purification system (BIOTAGE, Sweden)으로 헥산 추출물의 활성 유도 분획법(Activity-guided fractionation)을 254 및 280 nm 하에 수행하여 10 분획을 수득하였고(DEE01-DEE10), 각 분획을 그래디언트 MeCN-H2O (0.1% HCOOH) 용매 시스템에서 HPLC을 이용하여 모니터링하고 각 화합물을 검출하였다.
또한, UV광(254 nm)하에서 얇은 층 크로마토그래피에 의해 스팟들을 검출하거나 바닐린-H2SO4 으로 스프레이한 후 110℃로 가열하였다.
0.1% 포름산(30:70 → 100% MeCN)을 함유하는 MeCN/H2O의 그래디언트 용매 시스템으로 SunFire™ Prep C18 (10 x 250 mm 및 19 x 150 mm, 5 μm) 컬럼을 이용하여 반복적인 semi-preparative HPLC 실험을 40분 동안 수행하고, 이러한 분획으로부터 주요한 성분들로서 화합물들을 최종적으로 분리하였다.
(3) 결과
추출 용매에 따른 황칠나무 추출물의 수율은 하기 표 1에 기재하였다.
표 1 추출 용매에 따른 황칠나무 추출물의 수율
용매 최종산물(g) 수율(%)
메탄올 230.1 13.6
n-헥산 34.6 2.1
에틸아세테이트 31.0 1.9
n-부탄올 46.6 2.8
물 98.4 5.8
추출 결과, 수율은 메탄올 추출물이 가장 높게 나타난 반면, 에틸 아세테이트를 이용한 수율은 다소 낮게 나타났다.
실시예 2 : 황칠나무잎 추출물의 세포 독성 및 항안드로젠 활성 분석
본 발명자들은 본 발명의 황칠나무의 잎 추출물이 세포에 대해 세포 안정성을 가지고 있는지와 항안드로겐 활성을 가지는지 알아보기 위해 다음과 같은 실험을 수행하였다. 먼저 세포 독성 실험을 위해 LNCaPFGC (androgen-dependent prostate cancer) 세포를, RPMI 배지로 37 ℃ 하 습한 5% CO2 배양기에서 배양하였고, 배지들은 10% 가열 불활성화된 FBS 및 100 μg/m L 페니실린으로 보충되어 있는 것을 사용하였다. 세포 생존능 평가는 MTT 분석(Mosmann, 1983)에 의해 수행하였는데, 96 웰 플레이트에 DMEM 배지 90 μL 당 LNCaPFGC 세포 (4 x 104/mL)들을 씨딩하였다. 밤새 배양 후 , 황칠나무 추출물을 72시간 동안 처리하고, MTT (5 mg/mL stock solution) 10 μL로 4시간 배양하였다. 그 후, 배지를 제거하고 DMSO 150 μL를 첨가하여 포마잔을 용해시켰다. ELISA microplate reader (PerkinElmer, Calif ornia, USA)을 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 결과는 하기 표 2 및 도 2에 나타내었다.
항안드로젠 활성 분석을 위해서는 LNCaPFGC 세포, 안드로겐-의존성 전립선 암세포주를 사용하였고, 전립선암에서 AR 표적 유전자 중 하나인 PSA(Prostate s pecific antigen)의 mRNA 수준을 측정하였다.
표 2 황칠나무 추출용매에 따른 LNCaPFGC 세포독성검사
용매 LNCaPFGC 세포에 대한 IC50 (ug/mL)
메탄올 152
n-헥산 169
에틸아세테이트 88.3
n-부탄올 562
물 >800
그 결과, 도 2 및 상기 표 2에 나타낸 바와 같이, 황칠나무의 헥산, 에틸아세테이트, 메탄올 및 물 추출물의 IC50 는 LNCaPFGC 세포에서 88 μg/mL ~ > 800 μg/mL로 나타났으며, 이는 본 발명의 황칠나무 추출물이 세포 생존능에는 치명적인 유해작용을 보이지 않는 정도임을 확인함에 따라 세포 독성을 가지지 않는다는 것을 알 수 있었다.
실시예 3 : 안드로젠 수용체 시그럴닝 억제 효과
또한, 안드로젠(androgen)-의존성 세포인 LNCaPFGC 전립선암 세포주를 통하여 항안드로젠 활성에 미치는 영향을 분석한 결과, 본 발명의 황칠나무 추출물은 PSA mRNA의 DHT-유도된 발현을 저해하였고 저해 정도는 n-Hex, EA, n-But 및 H2O 추출물 순으로 나타났고(도 3 참조), 플루타미드가 아닌 DMHE는 또한 DHT 합성에서 5αRI/2 효소를 감소시킴으로써, PSA 및 15-PGDH 발현을 포함하는 표적 유전자를 농도 의존적으로 감소시켰다(도 4 및 도 5 참조). 이는 다량의 DHT 첨가에 의해 억제되었고, 이러한 결과는 DMHE의 항안드로겐 효과가 AR상에서 DHT와 경쟁적인 기작으로부터 비롯됨을 시사한다(도 7 참조). 또한, AR의 DMHE 하향 조절된 유전자 발현 또한 플루타미드-처리된 세포에서 관찰되었다(도 5 참조).
안드로젠(androgen)-의존성 세포인 LNCaPFGC 전립선암 세포주를 통하여 확인된 황칠 추출물의 항안드로젠 효과를 다음과 같은 실험을 통해 다시 한번 확인하였는데, 즉, 안드로젠 리셉터(androgen receptor, AR)를 지니고 있어서 AR 시그럴닝 연구에 사용되는 세포인 Primary Human Follicle Dermal Papilla Cells (HFDPC) (Cat. No. C-12071, PromoCell)을 PromoCell (Heidelberg, Germany)에서 구입하여 사용하였고, 이것은 알칼라인 포스파타아제(alkaline phosphatase)에 양성반응으로 염색된다. 본 실험에 사용된 primary HFDPC은 모두 34 passage를 거친 것이며, Follicle Dermal Papilla Cell 성장 배지(C-26501, PromoCell, Germany)를 이용하여 5% CO2, 수분 공급된 37˚C 배양기에서 배양하였다. 배양된 HFDPC (5 x 10 5/ 6 well)을 종분하여 세포가 부착한 뒤 본 발명의 DMHE을 24 시간 투여하였다. 그 후 세포내 AR 타겟 유전자인 15-PGDH 및 테스토스테론을 DHT 로 전환하여 AR 에 대한 민감도 증폭에 관여하는 5αR-1 및 5αR-2 및 AR 의 mRNA 발현에 미치는 영향을 살펴보았다. 그 결과, 본 발명의 황칠 추출물은 5αR-1, 5α-R2, AR 및 15-PGDH 의 발현 억제하는 것으로 나타났다(도 18 - 도 21).
이러한 결과를 통해 본 발명자들은 본 발명의 황칠나무 추출물이 AR 시그럴닝의 과활성화로 발생하는 전립선 비대증의 발병 기전을 억제할 수 있는 우수한 효능을 지닌 물질로서 전립선 비대증의 치료에 쓰일 수 있다는 사실을 알 수 있었다.
실시예 4 : In vivo 실험을 통한 황칠나무 추출물의 전립선 비대증 치료 효과 분석
본 발명자들은 앞서 수행한 황칠나무 추출물의 전립선 비대증 치료 효과를 in vitro에서 확인하였고, 나아가 전립선 비대증이 유발된 동물 모델을 제작 후, 이를 대상으로 황칠나무 추출물의 전립선 비대증 치료 효과를 다음과 같은 실험을 통해 확인하였다.
먼저 실험에 사용한 동물은 11주령의 수컷 Sprague Dawley 계 쥐로 Damul Science Co. (대전, 한국)로부터 구입하였다. 고형사료와 물은 상시 공급하고 1주 동안의 실험실 환경에 적응 기간을 거친 후 실험에 사용하였으며, 본 동물실험은 전남대학교 동물실험 윤리위원회(IRB)의 승인(CNU IACUC-YB-R-2012-9)을 얻어 수행하였다.
<4-1> 전립선 비대증 마우스 동물모델 준비
수컷 Sprague Dawley 계 쥐를 대상으로, 다음과 같이 각 군을 나누었는데, 실험군인 vehicle control 군 (V-CTL), 테스토스테론만 투여한 군(TP-CTL)과, 테스토스테론에 양성대조군으로 finasteride를 투여한 군(TP + FS) 과 황칠을 투여한 군(TP + DMH)으로 나누어 실험을 수행하였고, 각 그룹당 n = 4 로 하였으며, 전체적인 실험수행 과정은 표 3과 같다. 2주일동안 테스토스테론을 피하주사로 투입하여 전립선 비대를 유발하였고 2주일 후 적출을 통하여 전립선 비대가 충분히 유발되었음을 확인한 후, 계속적인 테스토스테론을 주입하여 전립선 비대 상황을 유지하면서, 매일 본 발명의 황칠나무 추출물을 경구 투여하여 전립선 비대 진행이 억제되는지 확인하였다. 이때 양성대조군으로 finasteride (2 mg/kg/day)를 사용하였고, 황칠추출물의 경우 2 그룹으로 (0.5와 2 mg/kg) 나누어 약물을 투여하였다. 약물 투여 3주일이 지난 후 쥐를 희생하여 그 결과를 관찰하였다.
표 3 전립선 비대증 동물모델의 전반적인 실험 스케줄
Group 0 day 14 day 35 day
V-CTL Corn oil (s.c.)/day Corn oil (s.c.)/ day + CMC (p.o.)/day
TP-CTL (3 mg/kg) TP(s.c.)/ day TP (s.c.)/ /day + CMC (p.o.)/day
TP +FS (2 mg/kg) TP(s.c.)/ day TP (s.c.)/ day + Fina (p.o., 2 g/kg)/day
TP + DMHE (0.5 mg/kg) TP(s.c.)/ day TP (s.c.)/ day + DMH (p.o., 0.5 mg/kg)/day
TP + DMHE (2 mg/kg) TP(s.c.)/ day TP (s.c.)/ day + DMH (p.o., 2 mg/kg)/day
V, vehicle 투여군; CTL, 대조군(control); TP, testosterone-propionate 투여군; FS, finasteride 투여군; DMHE, Dendropanax morbifera hexane extracts 투여군; CMC,carboxymethylcellulose 투여군.
2주 동안 TP를 피하주사로 매일 투여하여 전립선이 비대해 지도록 유도하였고, 2주 지난 후 vehicle 대조군과 TP 대조군을 해부하여 전립선 비대가 제대로 유도되었는지 확인하였는데, 그 결과, 도 8에 나타낸 바와 같이, 전립선의 크기는 대조군에 비하여 189%의 크기로 비대해져 있는 것으로 확인되었다.
<4-2> 전립선 크기, 체중당 전립선 비율의 변화 분석
앞서 기술한 실험 스케줄에서 마지막 투여가 끝난 다음 날 체중 측정을 한 후, 희생을 하여 채혈 및 전립선을 적출하였다. 적출된 전립선은 주변의 지방 및 이물질을 깨끗이 제거한 후 무게를 측정하였고, 체중당 전립선의 무게 비율은 다음 식을 이용하여 계산하였고, 결과를 표 4에 나타내었다.
Prostate weight (g) /body weight (g) x 100
표 4 전립선 유발 모델에서 약물의 투여가 전립선에 미치는 영향
그룹 전립선 무게 %전립선/체중(w/w) %V-CTL 비율 %TP-CTL 비율
V-CTL 0.55 ±0.04 0.12 ±0.008 100.0 ±6.2
TP-CTL 1.22±0.12 0.30 ±0.019 249.9 ±19.4 100.0 ±7.8
TP+ FS (2 mg/kg) 0.95 ±0.12 *0.22 ±0.018 185.7 ±15.1 74.3 ±3.2
TP + DMHE(0.5 mg/kg) 1.14 ±0.06 0.27 ±0.021 226.6 ±17.6 90.7 ±7.0
TP + DMHE(2 mg/kg) 1.03±0.07 *0.24 ±0.019 203.9±15.9 81.6±6.3
V, vehicle 투여군; CTL, 대조군(control); TP, testosterone-propionate 투여군; FS, finasteride 투여군; DMHE, Dendropanax morbifera hexane extracts 투여군. P < 0.05.
분석 결과, 실험이 끝난 지점인 TP 5주간 투여에 의해 V-CTL 대비 TP-CTL의 경우, 전립선의 크기는 249 % 로 증가하였다. 이렇게 커진 전립선의 약물에 의한 무게 감소는, FS 처치군(3 mg/kg/day)과 황칠나무 추출물 처치군 (2 mg/kg)에서 TP-CTL와 비교할 때, 통계학적으로 유의한 차이를 보였다(P < 0.05). 체중을 고려한 무게 비의 경우 TP-CTL에 대비하였을 때, FS 그룹이 74.3% 크기로 작아지는 효과를 보였으며, 황칠나무 추출물을 0.5 mg/Kg과 2 mg/Kg을 투여한 군에서는 각각 90.7%와 81.6%로 각각 작아지는 것으로 나타났다(도 9 참조).
<4-3> 혈액 중 PSA (prostate specific antigen)의 함량 분석
상기 실시 예에서 사용한 희생 쥐로부터 혈액 중 혈장을 분리하고 PSA 함량을 측정하였다. PSA 측정은 ELISA(MyBiosource, Arizona, USA)를 이용하여 제조자의 실험방법대로 수행하였으며 pg/mL 함량으로 표시하여 나타내었다.
표 5 전립선 비대를 유도한 쥐의 혈액 내 PSA 농도에 미치는 DMHE 의 효과
샘플 PSA (pg/mL) % Vehicle control % T P control
TP (3 mg/kg) 931.3 ± 166.6 54.2 ± 9.8 100
TP + FS (2 mg/kg) *323.0 ± 85.0 18.7 ± 5.0 34.6
TP + DMHE (0.5 mg/kg) 818.0 ± 220.0 47.7 ± 12.8 87.9
TP + DMHE (2 mg/kg) *404.3 ± 353.3 23.5 ± 20.6 43.4
TP:testosterone propionate, FS: finasteride, DMHE: D.morbiafera hexane extract. P < 0.05.
그 결과, 상기 표 5 및 도 11에 나타낸 바와 같이, TP만 투여한 군(3 mg/kg)에 비하여 황칠 헥산추출물(DMHE)을 처치한 군에서 PSA 농도는 DMHE (0.5 mg/kg)이 87.9%, DMHE (2 mg/kg) 군에서는 43.4%로 각각 나타났으며, 이러한 결과는 양성대조군으로 전립선비대치료제로 쓰이는 FS (finasteride) (2 mg/kg)가 34.6% 의 PSA 농도를 나타내 보인 것과 비교할 때 치료 효과가 매우 큰 것으로 나타났다.
실시예 5 : 안드로젠 수용체 전사 활성에 미치는 황칠추출물의 영향 분석
안드로젠 수용체(AR)의 전사 활성에 황칠추출물이 직접적으로 영향을 미치는지 알아보기 위해 리포터 유전자 어세이를 수행하였다. AR 수용체 리포터 유전자 어세이는 Cignal TMReporter assay kit (Qiagen, CA, USA)를 이용하였다. GFP 구조물을 함유한 복합물을 이용하여 안드로젠 의존성 세포인 LNCaPFGC에 Polyplus transfection reagent (Polyplus, New York, USA)를 사용하여 트랜스팩션 조건을 잡은 다음, 정상적으로 리포터 유전자가 활성화 되는 것을 확인한 후, 이후 실험을 수행하였다. LNCaPFGC 세포를 25x104/12well에 분주한 후 AR 리포터(100 ng), 음성 대조군(100 ng)를 각각 트랜스팩션한 후, 16 hr 때에 배지를 어세이 배지(Opti-MEM + 1% FBS + 0.1 mM NEAA)로 바꾸고, 트랜스팩션 후 24 시간 되는 때에 효능(agonistic) 활성도를 측정하기 위해 DHT를 처치하였다. 또한 황칠 추출물에 의한 길항(antagonistic) 활성 측정을 위하여, DHT 와 동시에 여러 가지 농도의 DMHE를 처치하여 18 hr 동안 배양 후 세포를 수득하였다. 수득한 세포들은 PBS (pH 7.4) buffer 로 3회 씻은 후 passive lysis buffer (Promega, Madison, WI, USA)를 이용하여 용해하였다. Cell lysates는 96 well plate luminometer(Berthold Detection system, Pforzheim, Germany)를 사용하여 바로 분석하였다. Firefly luciferase 와 Renilla luciferase 의 양은 Dual-luciferse 리포터 어세이 시스템 키트(Promega, Madison, WI, USA)를 이용하여 분석하였다. 각 실험군의 루시퍼라제 값은 Renilla 루시퍼라제 활성으로 정상화 하여 상대적인 전사 활성인 fold 값으로 나타내었다.
그 결과, 도 10에 나타낸 바와 같이, DHT에 의하여 활성화된 AR 수용체 리포터 유전자는 DMHE 농도 의존적으로 전사 활성이 억제됨을 알 수 있었다. 따라서 황칠추출물에 의한 LNCaPFGC 세포의 타겟 유전자인 PSA의 mRNA 감소가, AR 유전자의 길항효과에 의한 억제임을 다시 한번 확인할 수 있었다.
실시예 6 : 황칠 헥산 추출물로부터 전립선 비대증 치료 효과를 갖는 화합물의 분리 및 동정
본 발명자들은 상기 실시예들을 통해 황칠 헥산 추출물이 전립선 비대증을 치료할 수 있는 효과가 있음을 알 수 있었고, 이에 상기 황칠 헥산 추출물로부터 전립선 비대증을 치료할 수 있는 유효성분을 동정하기 위해 다음과 같은 실험을 진행하였다.
즉, 상기 항안드로젠 활성을 갖는 황칠 헥산 추출물을 HPLC를 이용하여 MeCN-H2O (0.1% HCOOH) 기울기 용매 시스템[MeCN-H2O(0.1% HCOOH), 30:70 → 100:0 (40 min), 100% MeCN (10 min), PDA 검출기] 조건에서 주요성분의 화학구조에 대한 예비조사를 한 결과, 폴리아세틸렌계(polyacetylene) 물질이 주를 이루고 있는 것으로 나타났다(도 12 참조). 이에 상기 황칠 헥산 추출물 일부(4.79 g)를 역상 중압크로마토그래피[Isolera Flash Purification system (BIOTAGE, Sweden)]에서 기울기 용매 조건 [MeCN-H2O(0.1% HCOOH), 30:70 (5 min), 30:70 → 67:33 (80 min), 67:33 → 100% MeCN (5 min), 100% MeCN (30 min)]을 이용하여 헥산 추출물의 분획 11 종을 수득하였고, 그 중 분획 3 (112.3 mg), 5 (117.4 mg) 및 7(120.2 mg)에 대하여 HPLC를 이용한 분리 및 정제를 수행하여 각각 단일물질 HS3 (2.9 mg), HS5 (8.4 mg) 및 HS7 (30.0 mg)을 MeCN-H2O (0.1%HCOOH)기울기 용매 시스템에서 모니터링하고 검출 및 분리하였다.
이 후 각 단일물질에 대한 NMR, UV 및 MS 분석을 통해 그 화학구조를 분석한 결과, 3종 모두 diacetylene계 물질로서, 9,16S-dihydroxy-10,17- octadeca- diene-12,14-diynoic acid (HS3), 9,16R-dihydroxy-10,17-octadecadiene- 12,14-diynoic acid (HS5) 및 (9Z)-16-hydroxy-9,17-octadecadiene-12,14- diynoicacid (HS7)인 것으로 확인되었다.
상기 본 발명의 방법으로 분리 및 정제한 상기 3개의 화합물의 정제 과정 및 각 화합물의 구조식은 도 13에 나타내었다.
실시예 7 : 황칠 헥산 추출물로부터 분리한 화합물의 전립선 비대증 치료 효과 규명
상기 실시예 6에서 분리 및 동정한 3개의 화합물이 전립선 비대증 치료 효과가 있는지 규명하기 위해 AR 시그널링에 미치는 영향을 조사하기 위해, 상기 화합물을 처리하였을 경우, PSA mRNA 발현에 미치는 영향, 15-PGDH mRNA 발현에 미치는 영향, 5aR-1/-2 mRNA 발현에 미치는 영향을 각각 조사하였다.
이들 분석은 LNCaP˙FGC 세포에 본 발명의 황칠 용매 추출물, 상기 추출물로부터 분리 및 동정된 3개의 단일 화합물 및 양성대조군으로서 flutamide (40 μM)를 각각 48시간 처리한 뒤, 각각 상기 유전자들의 mRNA 발현양을 측정하였다.
<7-1> PSA mRNA 발현수준 분석 결과
PSA mRNA 발현수준 분석 결과, 도 14에 나타낸 바와 같이, 9,16S-dihydroxy-10,17- octadeca- diene-12,14-diynoic acid (HS3), 9,16R-dihydroxy-10,17-octadecadiene- 12,14-diynoic acid (HS5) 및 (9Z)-16-hydroxy-9,17-octadecadiene-12,14- diynoicacid (HS7)은 모두가 AR 의 타겟 유전자인 PSA mRNA 발현을 억제하는 것으로 나타났으며, 특히 (9Z)-16- hydroxy-9,17- octadecadiene-12,14-diynoic acid(HS7)이 가장 효과적으로 PSA mRNA 발현을 억제하는 것으로 나타났다.
<7-2> 15-PGDH mRNA 발현수준 분석 결과
15-PGDH mRNA 발현수준 분석 결과, AR 시그럴닝의 타겟 유전자인 15-PGDH mRNA 발현 역시 본 발명에서 분리 및 동정한 상기 3개의 화합물 모두에 의해 억제되는 것으로 나타났으며, 특히 (9Z)-16-hydroxy-9,17-octadecadiene-12,14- diynoicacid (HS7)가 가장 효과적으로 15-PGDH mRNA 발현을 억제하는 것으로 나타났다(도 15 참조).
<7-3> 5aR-1/-2 mRNA 발현수준 분석 결과
나아가 5aR-1/-2 mRNA 발현수준 분석 결과, 본 발명에 따른 황칠 추출물 및 상기 3개의 화합물 모두 5aR-1/-2 mRNA의 발현수준을 억제하는 것으로 나타났다(도 16 및 도 17 참조).
따라서 이러한 결과를 통해 본 발명자들은 본 발명의 황칠 헥산 추출물 및 상기 추출물 유래의 단일 화합물인 9,16S-dihydroxy-10,17- octadeca- diene-12,14-diynoic acid (HS3), 9,16R-dihydroxy-10,17-octadecadiene- 12,14-diynoic acid (HS5) 및 (9Z)-16-hydroxy-9,17-octadecadiene-12,14- diynoicacid (HS7) 모두가 in vitro 및 in vivo 실험을 통해 전립선비대의 예방 및 치료제로 사용될 수 있음을 알 수 있었다.
<제제예 1> 약학적 제제의 제조
1. 정제의 제조
상기 실시예에서 수득한 본 발명의 황칠나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 정제는 하기와 같은 방법으로 제조하였다.
락토오스, 전분 및 전젤라틴화 옥수수 전분을 황칠나무 추출물과 혼합한 후, 적합한 용적의 정제수를 첨가하고 분말로 과립화 시켰다. 과립을 건조시킨 후 스테아르산 마그네슘과 혼합하고 압착하여 정제를 얻었다.
상기 정제의 구성성분은 하기와 같다.
황칠나무 추출물 5.0 ㎎
락토오스 BP 150.0 ㎎
전분 BP 30.0 ㎎
전젤라틴화 옥수수 전분 BP 15.0 ㎎
스테아르산 마그네슘 1.0 ㎎
2. 캡슐제의 제조
본 발명의 황칠나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 캡슐제는 하기와 같은 방법으로 제조하였다.
상기 본 발명의 황칠나무 추출물을 일정량의 부형제 및 스테아르산 마그네슘과 혼합하였다. 얻어진 혼합물을 젤라틴 캡슐 중에 충전하여 캡슐을 수득하였다.
상기 캡슐제의 구성성분은 하기와 같다.
황칠나무 추출물 5.0 ㎎
전분 1500 100.0 ㎎
스테아르산마그네슘 BP 1.0 ㎎
3. 주사액제의 제조
본 발명의 황칠나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 주사액제는 하기와 같은 방법으로 제조하였다.
적당한 용적의 주사용 염화나트륨 BP 중에 상기 식물 추출물을 용해시키고, 생성된 용액의 pH를 묽은 염산 BP를 사용하여 pH 3.5로 조절하고, 이어서 주사용 염화나트륨 BP를 사용하여 용적을 조절하고 충분히 혼합하였다. 용액을 투명 유리로 된 5 ㎖ 타입 I 앰플 중에 충전시키고, 유리를 용해시킴으로써 공기의 상부 격자하에 봉입시키고, 이어서 120 ℃로 15분 이상 오토클래이브시켜 살균하여 주사액제를 얻었다.
상기 주사액제의 구성성분은 하기와 같다.
황칠나무 추출물 100 ㎍/㎖
묽은 염산 BP pH 3.5로 될 때까지
주사용 염화나트륨 BP 최대 1 ㎖
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (13)

  1. 황칠나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 황칠나무 추출물은 황칠나무의 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물임을 특징으로 하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 조추출물은 정제수를 포함한 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매로부터 가용한 추출물인 것을 특징으로 하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  4. 제2항에 있어서,
    상기 비극성용매 가용 추출물은 헥산, 클로로 포름, 디클로로메탄 또는 에틸아세테이트에 가용한 추출물인 것을 특징으로 하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 황칠나무 추출물은 5α-리덕타아제 발현 억제 또는 안드로젠 수용체(AR) 발현 억제 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    황칠나무 추출물은 9,16S-디히드록시-10,17-옥타데카디엔-12,14- 디노익산(9,16S-dihydroxy-10,17-ctadecadiene-2,14-diynoic acid); 9,16R-히드록시-10,17- 옥타데카디엔-12,14-디노익산( 9,16R- dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14 -diynoic acid); 또는 (9Z)-16- 히드록시 -9,17-옥타데카디엔 -12,14 -디노익산( (9Z)-16-hydroxy- 9,17- octadecadiene-12,14-diynoic acid) 화합물을 함유하는 것을 특징으로 하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  7. 9,16S-디히드록시-10,17-옥타데카디엔-12,14- 디노익산(9,16S-dihydroxy-10,17-ctadecadiene-2,14-diynoic acid); 9,16R-히드록시-10,17- 옥타데카디엔-12,14-디노익산( 9,16R- dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14 -diynoic acid); 또는 (9Z)-16- 히드록시 -9,17-옥타데카디엔 -12,14 -디노익산( (9Z)-16-hydroxy- 9,17- octadecadiene-12,14-diynoic acid) 화합물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 화합물은 황칠나무의 헥산 추출물로부터 분리 및 정제된 것을 특징으로 하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  9. 제7항에 있어서,
    상기 화합물은 PSA (prostate specific antigen) mRNA 발현, 15-PGDH mRNA 발현, 5αR-1(5α-reductase type 1) 및 5αR-2(5α-reductase type 2) mRNA 발현을 억제 및 감소시키는 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 전립선 비대증의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  10. 황칠나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 전립선 비대증의 예방 및 개선용 건강기능식품.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 황칠나무 추출물은 9,16S-디히드록시-10,17-옥타데카디엔-12,14- 디노익산(9,16S-dihydroxy-10,17-ctadecadiene-2,14-diynoic acid); 9,16R-히드록시-10,17- 옥타데카디엔-12,14-디노익산(9,16R- dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14 -diynoic acid); 또는 (9Z)-16- 히드록시 -9,17-옥타데카디엔 -12,14 -디노익산( (9Z)-16-hydroxy- 9,17- octadecadiene-12,14-diynoic acid) 화합물을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 전립선 비대증의 예방 및 개선용 건강기능식품.
  12. 제10항에 있어서,
    상기 식품은 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 건강기능식품.
  13. 황칠나무 추출물; 상기 황칠나무 추출물 유래의 9,16S-디히드록시-10,17-옥타데카디엔-12,14- 디노익산(9,16S-dihydroxy-10,17-ctadecadiene-2,14-diynoic acid); 9,16R-히드록시-10,17- 옥타데카디엔-12,14-디노익산( 9,16R- dihydroxy-10,17-octadecadiene-12,14 -diynoic acid); 또는 (9Z)-16- 히드록시 -9,17-옥타데카디엔 -12,14 -디노익산( (9Z)-16-hydroxy- 9,17- octadecadiene-12,14-diynoic acid) 화합물을 유효성분으로 포함하는 전립선암의 예방 및 치료용 조성물.
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015189650A1 (en) 2014-06-13 2015-12-17 Skillpharm Kft. Clopidogrel for use in the treatment of benign prostatic hyperplasia
CN115058387A (zh) * 2022-06-11 2022-09-16 重庆医科大学 一种人胚胎干细胞与前列腺癌细胞共培养制备抗前列腺癌药物的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100318019B1 (ko) * 1998-06-30 2002-07-03 박호군 항암활성을가지는황칠나무추출물
KR20040107853A (ko) * 2003-06-14 2004-12-23 정세영 에탄올 유발 간손상을 억제하는 황칠 추출물
KR20060131360A (ko) * 2005-06-16 2006-12-20 제주대학교 산학협력단 생리활성이 뛰어난 황칠나무의 종실추출물

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100318019B1 (ko) * 1998-06-30 2002-07-03 박호군 항암활성을가지는황칠나무추출물
KR20040107853A (ko) * 2003-06-14 2004-12-23 정세영 에탄올 유발 간손상을 억제하는 황칠 추출물
KR20060131360A (ko) * 2005-06-16 2006-12-20 제주대학교 산학협력단 생리활성이 뛰어난 황칠나무의 종실추출물

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHOE, YONG HWAN: "Studies on the Isolation and Analysis of Korean Golden Varnish (Hwangchil) Exudates of Dendropanax morbifera lev", HANBAT UNIVERSITY MASTERS'S THESIS, 2003 *
PARK, B. -Y. ET AL.: "Isolation and anticomplement activity of compounds from Dendropanax morbifera", JOURNAL OF ETHNOPHARMACOLOGY, vol. 90, 2004, pages 403 - 408 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015189650A1 (en) 2014-06-13 2015-12-17 Skillpharm Kft. Clopidogrel for use in the treatment of benign prostatic hyperplasia
CN115058387A (zh) * 2022-06-11 2022-09-16 重庆医科大学 一种人胚胎干细胞与前列腺癌细胞共培养制备抗前列腺癌药物的方法
CN115058387B (zh) * 2022-06-11 2023-12-01 重庆医科大学 一种人胚胎干细胞与前列腺癌细胞共培养制备抗前列腺癌药物的方法

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