WO2018106002A1 - 플라보노이드 유도체 및 이리도이드 유도체로 구성된 화합물 조합을 유효성분으로 함유하는 남성 불임증 예방 및 치료용 조성물 및 이의 용도 - Google Patents

플라보노이드 유도체 및 이리도이드 유도체로 구성된 화합물 조합을 유효성분으로 함유하는 남성 불임증 예방 및 치료용 조성물 및 이의 용도 Download PDF

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박종관
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전북대학교 산학협력단
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Definitions

  • the present invention relates to a composition for the prevention and treatment of male infertility and the use thereof containing a compound combination consisting of a flavonoid derivative and an iridoid derivative as an active ingredient.
  • the present invention relates to a composition for the prevention and treatment of male infertility and the use thereof containing a compound combination consisting of a flavonoid derivative and an iridoid derivative as an active ingredient.
  • Varicocele 19%-41% of primary infertility males and secondary male infertility males, characterized by pampiniform plexus expansion of the spermatic cord It appears in more than 80% of patients and is a major factor leading to male infertility (Agarwal A, Deepinder F, Cocuzza M, Agarwal R, Short RA, Sabanegh E , et al. (2007) Efficacy of varicocelectomy in improving semen parameters: new meta-analytical approach Urology 70, 532-538 ;.. Agarwal A, Sharma RK, Desai NR, Prabakaran S, Tavares A & Sabanegh E.
  • Surgical therapies for treating male infertility with the most commonly performed varicose veins include centuries of nonmicrosurgical approaches, laparoscopic or microsurgical varicose vein ligation in the male infertility area.
  • Varicocelectomy has been performed (Mehta A & Goldstein M. (2012) Microsurgical varicocelectomy: a review.Asian J Androl 15, 56-60.).
  • Varicocelectomy has been performed (Mehta A & Goldstein M. (2012) Microsurgical varicocelectomy: a review.Asian J Androl 15, 56-60.).
  • Despite a dramatic improvement in semen parameters in 50-80% of infertile men who underwent varicocelectomy pregnancy rates: pregnancy rates, 31-74%) (Cheng D, Zheng XM, Li SW, Yang ZW & Hu LQ.
  • ROS is a byproduct of oxygen metabolism and energy production that acts as a regulator of essential physiological intracellular processes. Small amounts of ROS play an important role in regulating sperm function in the male reproductive tract. Under abnormal conditions, oxidative stress is followed when an increase in ROS levels or a decrease in antioxidant capacity occurs. Specifically, oxidative stress results in alteration of protein expression levels in sperm, eventually leading to molecular and genetic defects (Sharma R, Agarwal A, Mohanty G, Hamada AJ, Gopalan B, Willard B , et al. (2013) Proteomic analysis of human spermatozoa proteins with oxidative stress.Reprod Biol Endocrinol 11, 48.).
  • Pregnancy in normal couples ranges from 20-25% in the first month after normal sex, 75% in 6 months, and 85-90% in 1 year. Infertility is considered to be infertility in one year despite the normal marital relationship. Infertility patients account for 13-20% of married couples, and there are an estimated 1.4 million pairs of infertile couples in Korea. . Among them, infertility causes 35-50% of men, and 30% of them are caused by decreased sperm motility, and male infertility is an important disease occupying 4% of urological outpatient male patients.
  • the inventors of the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of male infertility containing a herbal extract consisting of pageokcheon, earth and sand and onion (Korean Patent Registration No. 10-1481569 and PCT / WO2015 / 174636 A1); Veterinary composition for the prevention and treatment of infertility of mammals, fish or poultry containing a herbal extract consisting of pageukcheon, earth and sand and onion (Korean Patent Registration No. 10-1544783); There was a patent application for confirming the treatment effect on the male infertility of the earth and sand extract, in particular, the crude earth and sand extract extracted with ethanol (Korean Patent No. 10-2014-0102848).
  • the present inventors conducted an in vitro sperm motility test to evaluate the effects of compound combinations on sperm count and motility changes in human and swine sperm as part of a follow-up study to develop an effective treatment for male infertility.
  • the samples of the present invention confirmed that the sperm motility in human and porcine sperm increased and completed the present invention.
  • An object of the present invention is to develop a new fertility overcoming technology to improve fertilization rate by improving sperm movement, and ultimately through the present invention to improve sperm movement and recovery of fertility rate.
  • the present invention is directed to (a) monotropein, (b) deacetyl asperulosidic acid, (c) kaempferol 3-glucoside, (d) Prevention and treatment of male infertility comprising as an active ingredient a combination of two or more compounds selected from the group consisting of quercetin 4'-glucoside (Spiraeoside) and (e) quercetin It provides a pharmaceutical composition.
  • Preferred combinations of the compound combinations defined herein include (a) Monotropein, (b) Deacetyl asperulosidic acid (c) Kaempferol 3-glucoside ( glucoside, (d) a quercetin 4'-glucoside (Spiraeoside), and (e) a quercetin, or (a) monotropein, ( c) kaempferol 3-glucoside; And (d) Quercetin 4'-glucoside (Spiraeoside),
  • the present invention also relates to (a) monotropein, (b) deacetyl asperulosidic acid (c) kaempferol 3-glucoside, (d) Prevention and improvement of male infertility containing as an active ingredient a combination of two or more compounds selected from the group consisting of quercetin 4'-glucoside (Spiraeoside) and (e) quercetin Provide dietary supplements for health.
  • Male infertility as defined herein includes infertility caused by side effects of anticancer drugs such as cisplatin, vinblastin, bleomycin, spermatosis (if sperm is not present in sperm), spermosis (number of sperm) All sterility related to sperm, such as less than 20 million / ml), spermosis (less than 40% of sperm motility), malformed sperm (typically less than 40%).
  • anticancer drugs such as cisplatin, vinblastin, bleomycin, spermatosis (if sperm is not present in sperm), spermosis (number of sperm) All sterility related to sperm, such as less than 20 million / ml), spermosis (less than 40% of sperm motility), malformed sperm (typically less than 40%).
  • the compounds of the present invention can be prepared with pharmaceutically acceptable salts and solvates according to methods conventional in the art.
  • Acid addition salts formed by free acid are useful.
  • Acid addition salts are prepared by conventional methods, for example by dissolving a compound in an excess of aqueous acid solution and precipitating the salt using a water miscible organic solvent such as methanol, ethanol, acetone or acetonitrile. Equal molar amounts of the compound and acid or alcohol (eg, glycol monomethylether) in water can be heated and the mixture can then be evaporated to dryness or the precipitated salts can be suction filtered.
  • acid or alcohol eg, glycol monomethylether
  • organic acids and inorganic acids may be used as the free acid, hydrochloric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, nitric acid, tartaric acid, etc. may be used as the inorganic acid, and methanesulfonic acid, p -toluenesulfonic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, etc.
  • Citric acid maleic acid, succinic acid, oxalic acid, benzoic acid, tartaric acid, fumaric acid, manderic acid, propionic acid, citric acid, lactic acid, glycolic acid, gluconic acid (gluconic acid), galacturonic acid, glutamic acid, glutaric acid (glutaric acid), glucuronic acid (glucuronic acid), aspartic acid, ascorbic acid, carbonic acid, vanic acid and hydroiodic acid may be used.
  • Bases can also be used to make pharmaceutically acceptable metal salts.
  • An alkali metal or alkaline earth metal salt is obtained by, for example, dissolving a compound in an excess alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the non-soluble compound salt, and then evaporating and drying the filtrate.
  • the metal salt it is particularly suitable to prepare sodium, potassium or calcium salt, and the corresponding silver salt is obtained by reacting an alkali metal or alkaline earth metal salt with a suitable silver salt (for example, silver nitrate).
  • Pharmaceutically acceptable salts of the compounds of the invention include salts of acidic or basic groups which may be present in the compounds of the invention, unless otherwise indicated.
  • pharmaceutically acceptable salts include sodium, calcium and potassium salts of the hydroxy group
  • other pharmaceutically acceptable salts of the amino group include hydrobromide, sulfate, hydrogen sulphate, phosphate, hydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, acetate, succinate, citrate, tartrate, lactate, mandelate rate, methane sulfonate (mesylate) and p - toluene sulfonate (tosylate) and a salt, the salt manufacturing method or manufacturing process known in the art It can be prepared through.
  • the compounds of the present invention are commercially available or can be isolated and obtained by the following preparation methods.
  • the compounds of the present invention can be prepared as follows. After washing and rinsing the herbal extract consisting of dried rupture cloth, earth and sand and / or onion, water, including purified water, a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms such as methanol, ethanol and butanol, or a solvent selected from a mixed solvent thereof, preferably water And an ultrasonic extraction method for 30 minutes to 48 hours, preferably 1 hour to 12 hours at a temperature of 30 ° C. to 150 ° C., preferably 50 ° C. to 100 ° C., after mixing the methanol mixed solvent, more preferably methanol several times.
  • the crude extract of the present invention can be obtained by filtration, concentration under reduced pressure, and drying of the extract obtained by performing hot water extraction, room temperature extraction or reflux extraction, preferably ultrasonic extraction, about 1 to 20 times, preferably 2 to 10 times. have.
  • the polar or non-polar solvent soluble extract of the present invention is about 0.0005 to 0.005 times the weight of the crude extract, preferably 10 to 90% ethanol crude extract, preferably 0.05 to 0.5 times the volume (v / w% Non-polar solvent soluble extract fractions which were added to non-polar solvents such as n-hexane, methylene chloride, ethyl acetate, etc. by performing normal fractionation process with ethyl acetate and butanol after addition of water; And polar solvent soluble extract fractions soluble in polar solvents such as butanol, water and the like.
  • Flash the non-polar solvent soluble extract fractions preferably ethyl acetate soluble fractions, which are used in non-polar solvents such as n-hexane, methylene chloride, ethyl acetate, and the like, by increasing the polarity of the mixed solvent of hexane and methylene chloride.
  • Purification using chromatography such as column chromatography, RP C18 column chromatography or silica gel open column chromatography, and Diaion HP-20 column chromatography, may be performed several times selectively to obtain and purify the compounds of the present invention, respectively. Can be.
  • the inventors have in vitro (In vitro) to investigate the in vitro (In vitro) sperm motility promoting efficacy evaluation experiment to determine the effect on sperm count and motility changes in the human and pig sperm targeting said compound in combination sperm motility
  • the samples of the present invention increase the sperm motility in human and porcine sperm through the enhanced efficacy evaluation method, it was confirmed that the composition is useful as a pharmaceutical composition for preventing and treating male infertility, dietary supplements and health supplements.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition and health functional food for the prevention and treatment of male infertility, containing the above-described preparation method and the compound combination obtained by the manufacturing process as an active ingredient.
  • composition of the present invention comprises 0.01 to 99% by weight of the compound combination based on the total weight of the composition.
  • composition as described above is not necessarily limited thereto, and may vary according to the condition of the patient and the type and extent of the disease.
  • compositions comprising a compound combination of the present invention may further comprise suitable carriers, excipients and diluents commonly used in the manufacture of pharmaceutical compositions.
  • compositions comprising the compounds according to the invention are, but are not limited to, oral formulations such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, external preparations, suppositories, and sterilization, respectively, according to conventional methods.
  • Carriers, excipients, and diluents that may be formulated in the form of injectable solutions may include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, Gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, magnesium stearate and mineral oil.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and such solid preparations include at least one or more excipients in the compound, at least cotton, starch, calcium carbonate, sucrose. Or lactose, gelatin or the like is mixed.
  • lubricants such as magnesium styrate talc are also used.
  • Oral liquid preparations include suspending agents, liquid solutions, emulsions, and syrups, and may include various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin.
  • Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories.
  • the non-aqueous solvent and suspending agent propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like can be used.
  • As the base of the suppository witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
  • Preferred dosages of the compounds of the present invention depend on the condition and weight of the patient, the extent of the disease, the form of the drug, the route of administration and the duration, but may be appropriately selected by those skilled in the art.
  • the compound is preferably administered at 0.01 mg / kg to 10 g / kg per day, preferably at 1 mg / kg to 1 g / kg. Administration may be administered once a day or may be divided several times. Therefore, the above dosage does not limit the scope of the present invention in any aspect.
  • composition of the present invention can be administered to mammals such as rats, mice, livestock, humans, etc. by various routes. All modes of administration can be anticipated, for example, by oral and rectal or intravenous methods.
  • the present invention also provides a sperm motility enhancer containing the compound as an active ingredient, the sperm motility enhancer is to improve the fertilization rate in vitro fertilization.
  • the present invention also provides female vaginal and vaginal cleansing agents and vaginal intercalating agents for treating male infertility of sperm motility enhancement comprising the compound.
  • the present invention also provides an in vitro fertilization (IVF) additive for in vitro fertilization comprising the compound to improve fertilization rate in vitro fertilization.
  • IVF in vitro fertilization
  • the present invention also relates to (a) monotropein, (b) deacetyl asperulosidic acid (c) kaempferol 3-glucoside, (d) Administering to a male infertility patient a combination of two or more compounds selected from the group consisting of quercetin 4'-glucoside (Spiraeoside), and (e) quercetin.
  • a treatment method for treating male infertility patients a treatment method for treating male infertility patients.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition for treating male infertility disease (a) monotropein, (b) deacetyl asperulosidic acid (c) kaempferol 3 Of a combination of two or more compounds selected from the group consisting of -glucoside, (d) Quercetin 4'-glucoside (Spiraeoside), and (e) quercetin Serves the purpose.
  • the present invention also relates to (a) monotropein, (b) deacetyl asperulosidic acid (c) kaempferol 3-glucoside, (d) Prevention and prevention of male infertility containing as an active ingredient a combination of two or more compounds selected from the group consisting of quercetin 4'-glucoside (Spiraeoside) and (e) quercetin Provide dietary supplements for improvement.
  • health functional food refers to physical or mental functionality by adding a compound of the present invention to a conventional specimen for preventing or ameliorating a target disease in a human body or a mammal according to Korean Health Functional Food Act No. 6723. It includes a functional food to improve the functionality such as.
  • the dietary supplement for the prevention and improvement of male infertility of the present invention comprises the compound in an amount of 0.01 to 95%, preferably 1 to 80% by weight, based on the total weight of the composition.
  • composition of the present invention can be used as a major component or additive and adjuvant in the manufacture of various dietary supplements and supplements for the purpose of preventing or treating male infertility or enhancing testicular function.
  • a pharmaceutical dosage form such as powders, granules, tablets, capsules, pills, suspensions, emulsions, syrups, or health functional foods in the form of tea bags, leach teas, and health drinks. And processing is possible.
  • the present invention also relates to (a) monotropein, (b) deacetyl asperulosidic acid, (c) kaempferol 3-glucoside, (d Prevention of male infertility containing as a main component a combination of two or more compounds selected from the group consisting of Quercetin 4'-glucoside (Spiraeoside) and (e) quercetin Provide improved dietary supplements.
  • the "main ingredient” is about 30 to 99 (w / w%), preferably 50 to 99 (w / w%), more preferably 70 to 99 (compound) of the compound of the present invention based on the total weight of the dietary supplement. w / w%)).
  • the health functional beverage composition of the present invention is not particularly limited to other ingredients except for containing the compound combination as essential ingredients in the indicated ratios, and may contain various flavors or natural carbohydrates as additional ingredients, such as ordinary drinks.
  • natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose and the like; Disaccharides such as maltose, sucrose and the like; And conventional sugars such as polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol.
  • natural flavoring agents such as, tauumatin, stevia extract (e.g., Rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be advantageously used.
  • the proportion of the natural carbohydrate is generally about 1-20 g, preferably about 5-12 g per 100 ml of the composition of the present invention.
  • the compound combination When the compound combination according to the present invention is used as a food additive, the compound combination may be added as it is or used with other food or food ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method.
  • the food to which the substance can be added include dairy products including meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, ice cream, various soups, drinks, tea, drinks, Alcoholic beverages and vitamin complexes, etc., includes all of the health food in the conventional sense.
  • the composition of the present invention includes various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavors such as synthetic flavors and natural flavors, coloring and neutralizing agents (such as cheese, chocolate), pectic acid and salts thereof, alginic acid and its Salts, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated beverages, and the like.
  • the compositions of the present invention may also contain pulp for the production of natural fruit juices and fruit juice beverages and vegetable beverages. These components can be used independently or in combination. The proportion of such additives is not so critical but is generally selected from the range of 0 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.
  • the compound combinations of the present invention may be added to foods or beverages for the purpose of preventing male infertility.
  • the amount of the compound in the food or beverage may be added at 0.01 to 15% by weight of the total food weight
  • the health beverage composition is added in a ratio of 0.02 to 5 g, preferably 0.3 to 1 g based on 100 ml Can be.
  • Samples of the present invention were tested in human and pig sperm through an in vitro sperm motility test to evaluate the effects of sperm count and motility changes of human and pig sperm on the compound combinations of the present invention. As sperm motility is increased, the composition was found to be useful as a pharmaceutical composition, health functional food and health supplement food for the prevention and treatment of male infertility.
  • Figure 1 shows the effect on the sperm count and motility changes of human and pig sperm of the compound combination of the present invention.
  • CC3 (a) Monotropein + (c) kaempferol-3-glucoside + (d) Quercetin-4'-glucoside (Spiraeoside)
  • Onion Extract Wash onions (Changnyeong, Korea: Allium cepa, Changyeong, Sounth Korea) well, dry them, and add 3 liters of the outer skin, including 4 ethanol, to 217g, extract 3 hours at 70 °C, filter, and concentrate under reduced pressure. It was. The concentrated filtrate was lyophilized with a freeze dryer (ScanVac, Labogene) under reduced pressure to obtain 37.79 g (17.41%) of extract powder (hereinafter referred to as ONI) and stored at 4 ° C.
  • ONI extract powder
  • CINTM1 mixed herbal extract
  • CJC ONI (10: 1: 10, w / w) Morinda officinalis root Monotropein, Deacetyl asperulosidic acid Cuscuta chinensis seed kaempferol-3-glucoside Allium cepa bulb Quercetin- 4'-glucoside (Spiraeoside), Quercetin
  • Quercetin 4'-glucoside (Spiraeoside: Sigma-Aldrich, 91802), kaempferol 3-glucoside (Sigma-Aldrich, catalog No. 68437-5MG), kaempferol 3-galactoside Sigma-Aldrich, SMB00192); Quercetin (Sigma-Aldrich, Q-0125), Monotropein (Monotropein; Sigma-Aldrich, SMB00471), and diacetyl asperulosidic acid (Deacetyl asperulosidic acid, Chemfaces, CFN92358) were purchased respectively Used as a sample.
  • Controls include 3H buffer Hams F-10 (N6635, Sigma Chemical Co., USA) + 0.4% HAS (A1653, Sigma Chemical Co., USA) + 12 mM HEPES (H4034, Sigma Chemical Co., USA) [3H, pH 7.4], and the samples were also dissolved in 3H buffer, the pH was adjusted to 7.4, and then centrifuged (13,000 rpm, 2 min, 4 ° C.) using a centrifuge (A32010 (1), LABOGENE). Supernatant was obtained and used.
  • the percentage of motile spermatozoa (A; mean number of motile spermatozoa / B: total number of spermatozoa) ⁇ 100%
  • the sperm motility increase rate after 3 hours was calculated according to the following equation (2).
  • the percentage of motile spermatozoa 3 hours after incubation (sperm mobility 3 hours after incubation on control group-sperm mobility 3 hours after incubation in test group / sperm mobility 3 hours after incubation in control group) ⁇ 100%
  • the above ingredients are mixed and filled in an airtight cloth to prepare a powder.
  • tablets are prepared by tableting according to a conventional method for preparing tablets.
  • the above ingredients are mixed and filled into gelatin capsules to prepare capsules.
  • the active ingredient is dissolved in accordance with a conventional method for preparing an injection, and all ingredients are prepared in the above-described ingredient content per ampoule (2 ml).
  • each component is added to the purified water to dissolve it, the lemon flavor is added appropriately, the above components are mixed, purified water is added, the whole is adjusted to 100 ml by the addition of purified water, and then filled in a brown bottle.
  • the solution is prepared by sterilization.
  • Vitamin A Acetate 70 mg
  • Vitamin E 1.0 mg
  • Vitamin B1 0.13 mg
  • Vitamin B2 0.15 mg
  • Vitamin B6 0.5 mg
  • Vitamin B12 0.2 mg
  • Vitamin C 10 mg
  • Nicotinamide 1.7 mg
  • composition ratio of the said vitamin and mineral mixture was mixed and comprised in the preferable embodiment the component suitable for a healthy food, you may change arbitrarily the compounding ratio considered that it does not deviate from the mind and range of this invention.
  • Citric Acid 1000 mg
  • Plum concentrate 2 g
  • the sperm count and motility changes in the in vitro (sperm) in vitro test to evaluate the effect on the sperm count and motility changes of human and porcine sperm in the compound combination of the present invention
  • In vitro sperm motility efficacy test method to determine the effect of the sample of the present invention to confirm that the sperm motility increases in vitro experiments of human and porcine sperm
  • the composition of the prevention of male infertility can be usefully used in therapeutic pharmaceutical compositions, dietary supplements and dietary supplements.

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Abstract

본 발명은 화합물 조합을 유효성분으로 함유하는 남성 불임증 예방 및 치료용 조성물에 대한 것이다. 본 발명의 화합물 조합을 대상으로 사람과 돼지정액의 정자수와 운동성 변화에 미치는 영향을 알아보기 위한 시험관내 (In vitro) 정자 운동 증진 효능 평가법을 통하여 본 발명의 시료들이 사람과 돼지정액의 in vitro 실험에서 정자 운동성이 증가함을 확인함으로서, 상기 조성물을 남성불임증의 예방 및 치료용 약학조성물, 건강기능식품 및 건강보조식품에 유용하게 이용될 수 있다.

Description

[규칙 제26조에 의한 보정 15.12.2017]　플라보노이드 유도체 및 이리도이드 유도체로 구성된 화합물 조합을 유효성분으로 함유하는 남성 불임증 예방 및 치료용 조성물 및 이의 용도
본 발명은 플라보노이드 유도체 및 이리도이드 유도체로 구성된 화합물 조합을 유효성분으로 함유하는 남성 불임증 예방 및 치료용 조성물 및 이의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 플라보노이드 유도체 및 이리도이드 유도체로 구성된 화합물 조합을 유효성분으로 함유하는 남성 불임증 예방 및 치료용 조성물 및 이의 용도에 관한 것이다.
정삭(spermatic cord)의 망상정맥총 (pampiniform plexus) 확장현상을 특징으로 하는 정계정맥류 (Varicocele), 1차 불임증 (primary infertility) 남성 환자의 19% - 41% 및 2차 남성 불임증 (secondary male infertility) 남성 환자의 80% 이상에서 나타나고, 남성 불임증을 초래하는 주요 인자이다 (Agarwal A, Deepinder F, Cocuzza M, Agarwal R, Short RA, Sabanegh E, et al.(2007) Efficacy of varicocelectomy in improving semen parameters: new meta-analytical approach. Urology 70, 532-538; Agarwal A, Sharma RK, Desai NR, Prabakaran S, Tavares A & Sabanegh E. (2009) Role of Oxidative Stress in Pathogenesis of Varicocele and Infertility. Urology 73, 461-469.). 가장 흔하게 수행되는 정계정맥류에 의한 남성 불임증 치료를 위한 수술요법은 남성 불임증 영역에서 수세기 동안 비미세 수술적 (nonmicrosurgical) 접근법, 복강경 (laparoscopic) 또는 미세수술적 (microsurgical) 정계정맥류 결찰술 (varicocelectomy)을 포함한 정계정맥류 결찰술 (varicocelectomy)이 수행되어 왔다 (Mehta A & Goldstein M. (2012) Microsurgical varicocelectomy: a review. Asian J Androl 15, 56-60.). 정계정맥류 결찰술 (varicocelectomy)을 받은 불임증 남성의 환자의 50-80%에서 정자 매개변수(semen parameters) 상의 급격한 개선효과를 나타냄에도 불구하고, (임신율: pregnancy rates, 31-74%) (Cheng D, Zheng XM, Li SW, Yang ZW & Hu LQ. (2006) Effects of epidermal growth factor on sperm content and motility of rats with surgically induced varicoceles. Asian J Androl 8, 713-717. Ding H, Tian JQ, Du W, Zhang LY, Wang HZ & Wang ZP. (2012) Open non-microsurgical, laparoscopic or open microsurgical varicocelectomy for male infertility: a meta-analysis of randomized controlled trials. BJU Int 110, 1536-1542; Fisch H & Hyun G. (2012) Varicocele repair for low testosterone. Curr Opin Urol 22, 495-498; Fretz PC & Sandlow JI. (2002) Varicocele: current concepts in pathophysiology, diagnosis, and treatment. Urol Clin North Am 29, 921-937; Mehta A & Goldstein M. (2013) Microsurgical varicocelectomy: a review. Asian J Androl 15, 56-60; Tanriverdi O, Miroglu C, Horasanli K, Altay B, Caliskan KC & Gumus E. (2006) Testicular blood flow measurements and mean resistive index values after microsurgical and high ligation varicocelectomy. Urology 67, 1262-1265.), 상당부분의 수술후 임신 (fertile postoperation) 실패율과 이 수술법이 가진 장점의 부정을 주장하는 다른 보고들이 있어 왔다 (Evers JL & Collins JA. (2003) Assessment of efficacy of varicocele repair for male subfertility: a systematic review. The Lancet 361, 1849-1852; Ficarra V, Cerruto MA, Liguori G, Mazzoni G, Minucci S, Tracia A, et al. (2006) Treatment of varicocele in subfertile men: the Cochrane reviewa contrary opinion. Eur Urol 49, 258-263.). 정계정맥류 (Varicocele) 유도 불임증의 정확한 기전은 아직 명확하지 않다. 고환내 혈류 변화 (blood flow alterations in the testis), 음낭 온도 상승 (scrotal temperature elevations), 비정상적 남성호르몬수치 (abnormal hormone values), 과도한 반응성 산소종 (excessive reactive oxygen species, ROS)을 포함한 정계정맥류-관련 고환 기능부전 (varicocelerelated testicular dysfunction)을 연구하기 위하여 몇몇 가정된 기전이 제시된 바가 있다 (Agarwal A, Sharma RK, Desai NR, Prabakaran S, Tavares A & Sabanegh E. (2009) Role of Oxidative Stress in Pathogenesis of Varicocele and Infertility. Urology 73, 461-469; Fretz PC & Sandlow JI. (2002) Varicocele: current concepts in pathophysiology, diagnosis, and treatment. Urol Clin North Am 29, 921-937.).
ROS는 필수적 생리학적 세포간 경로 (vital physiological intracellular processes) 조절자로서 작용하는 산소 대사과정 (oxygen metabolism) 및 에너지 생성 (energy production)의 부산물이다. 소량의 ROS는 남성 생식 기관 (male reproductive tract)에서의 정자 기능을 조절하는데 중요한 역할을 수행한다. 비정상적 조건하에서, ROS 수준 증가 또는 항산화능 상의 감소현상이 발생시에 산화적 스트레스 (oxidative stress)가 뒤따른다. 구체적으로, 산화적 스트레스는 정자에서의 단백질 발현 수준의 변형을 초래하고, 결국, 분자 및 유전자 결함을 유발한다 (Sharma R, Agarwal A, Mohanty G, Hamada AJ, Gopalan B, Willard B, et al. (2013) Proteomic analysis of human spermatozoa proteins with oxidative stress. Reprod Biol Endocrinol 11, 48.).
정상부부에서 임신 가능성은 정상적인 성생활 후 첫 달에 20-25%, 6개월에 75%, 1년에 85-90%에 이른다. 정상적인 부부관계에도 불구하고 1년 내에 임신이 안 되는 경우를 불임이라고 볼 때 임상적으로 불임 환자는 기혼부부의 13-20%정도를 차지하고 있으며, 대한민국에서는 140만 쌍의 불임부부가 있을 것으로 추정된다. 그 중 불임 원인이 남성에게 있는 경우가 35-50%를 차지하고, 이 중 30%정도가 정자의 운동성 감소로 인해 발생하며, 남성불임증은 비뇨기과 외래 남성 환자의 4%를 점유하는 중요한 질환이다.
최근 생식 생물학과 보조생식기술의 발달로 in vitro fertilization (IVF), micromanipulation 등 assisted reproductive technique (ART) 기술이 매우 진전하였으나 그 성공률이 20-40% 정도이며, 과도한 비용이 들며, 여성에게 매우 힘들고, 합병증이 발생할 수 있는 문제점이 있다. 체외 수정은 유전자의 문제를 초래할 수 있어 최대한 자연 임신을 목표로 하고 있다.
현재까지 불임의 치료에 많은 발전이 있었지만 정자의 운동성을 향상시키는 남성불임치료제는 부재 상태이며, 임신을 향상시킬 수 있는 약물의 개발도 매우 저조한 편이다. 또한 내과적, 외과적 치료에도 불구하고 원인을 알 수 없이 정액의 질이 나쁜 남성에서 정액의 질을 향상시킬 수 있는 약물로 현재 L-carnitine이 사용되고 있으나 뚜렷한 효능을 보이지 못하고 있다. (Mark sigman, Stacy Glass, Janice Campagnone, John L. Reyor, Carnitine for the treatment of idiopathic asthenospermia: a randomized, double-blind, placebo-controlled trial, Fertility and Sterility Vol 85, No 5, 2006)
본원 발명자들은 파극천, 토사자 및 양파로 구성된 생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 남성 불임증의 예방 및 치료용 약학 조성물 (한국특허등록 제 10-1481569호 및 PCT/WO2015/174636 A1); 파극천, 토사자 및 양파로 구성된 생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 포유동물, 어류 또는 가금류의 불임증의 예방 및 치료용 수의학적 조성물 (한국특허등록 제 10-1544783호); 토사자 추출물, 특히 에탄올로 추출한 토사자 조추출물의 남성 불임증에 대한 치료효과를 확인하여 특허출원한 바가 있다 (한국 공개특허 제 10-2014-0102848호).
그러나, 상기 문헌의 어디에도 파극천, 토사자 및/또는 양파로 구성된 생약 추출물로부터 분리된 화합물 조합의 남성 불임증의 치료효과에 대하여 개시되거나 교시된 바가 없다.
이에 본 발명자들은 남성 불임증에 효과적인 치료제를 개발하기 위한 후속 연구의 일환으로 화합물 조합이 사람과 돼지정액의 정자수와 운동성 변화에 미치는 영향을 알아보기 위한 시험관내 (In vitro) 정자 운동 증진 효능 평가법 실험을 통하여 본 발명의 시료들이 사람과 돼지정액에서 정자 운동성이 증가함을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 과제는 정자운동 증진에 의한 수정률 향상의 새로운 불임 극복기술개발로, 본 발명을 통해 종국적으로 정자운동 증진 및 출산율 회복을 위한 것이다.
따라서 본 발명은 (a) 모노트로페인 (Monotropein), (b) 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid) (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside), (d)퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside), 및 (e) 퀘르세틴(quercetin)으로 구성된 군으로부터 선택된 2개 이상의 화합물 조합을 유효성분으로 함유하는 남성 불임증 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본원에서 정의되는 화합물 조합 중 바람직한 조합은 (a) 모노트로페인 (Monotropein), (b) 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid) (c)카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside), (d)퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside), 및 (e) 퀘르세틴(quercetin)으로 구성된 조합 또는 (a) 모노트로페인 (Monotropein), (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside); 및 (d)퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside)로 구성된 조합이 바람직하며,
구체적으로 바람직하기로는, (a) 모노트로페인 (Monotropein), (b) 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid) (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside), (d)퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside), 및 (e) 퀘르세틴(quercetin)으로 구성된 조합인 경우; 및 (a) 모노트로페인 (Monotropein), (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside),; 및 (d)퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside)로 구성된 조합인 경우에 개개 화합물의 상대적인 배합 중량비가
보다 바람직하게는, (a) 모노트로페인 (Monotropein) 10 내지 20 중량부, (b) 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid) 1 내지 30 중량부, (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside), 1 중량부, (d) 퀘르세틴(Quercetin)-4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside) 1 내지 15 중량부, 및 (e) 퀘르세틴(quercetin) 1 내지 6 중량부의 화합물 조합; 또는 (a) 모노트로페인 (Monotropein) 10 내지 20 중량부, (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside),1 중량부, 및 (d) 퀘르세틴(Quercetin)-4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside) 1 내지 15 중량부의 화합물 조합;
보다 더 바람직하게는, (a) 모노트로페인 (Monotropein) 12 내지 18 중량부, (b) 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid) 18 내지 25 중량부, (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside), 1 중량부, (d) 퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside) 1 내지 10 중량부, 및 (e) 퀘르세틴(quercetin) 1 내지 4 중량부의 화합물 조합; 또는 (a) 모노트로페인 (Monotropein) 12 내지 18 중량부, (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside), 1 중량부, 및 (d) 퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside) 1 내지 10 중량부인 조합,
가장 바람직하게는, (a) 모노트로페인 (Monotropein) 13 내지 17 중량부, (b) 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid) 20 내지 24 중량부, (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside), 1 중량부, (d) 퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside) 3 내지 9 중량부, 및 (e) 퀘르세틴(quercetin) 1 내지 3 중량부의 화합물 조합; 또는 (a) 모노트로페인 (Monotropein) 13 내지 17 중량부 (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside),1 중량부 및 (d) 퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside) 3 내지 9 중량부의 화합물 조합임을 특징으로 한다.
또한 본 발명은 (a) 모노트로페인 (Monotropein), (b) 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid) (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside), (d)퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside), 및 (e) 퀘르세틴(quercetin)으로 구성된 군으로부터 선택된 2개 이상의 화합물 조합을 유효성분으로 함유하는 남성 불임증 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.
본원에서 정의되는 남성불임증은 씨스플라틴 (cisplatin), 빈블라스틴 (vinblastin), 블레오마이신 (bleomycin) 등의 항암제 부작용에 의한 불임증, 무정자증 (정액에 정자가 없는 경우), 감정자증 (정자의 수가 2000만마리/ml 이하인 경우), 약정자증(정자의 운동성이 있는 비율이 40%이하), 기형정자 (정상 정자의 형태가 40% 이하) 등의 정자와 관련된 모든 불임증을 포함한다.
본 발명의 화합물은 당해 기술분야에서 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용 가능한 염 및 용매화물로 제조될 수 있다.
약학적으로 허용 가능한 염으로는 유리산(free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 산부가염은 통상의 방법, 예를 들면 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴과 같은 수혼화성 유기 용매를 사용하여 침전시켜서 제조한다. 동일한 몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올(예, 글리콜 모노메틸에테르)을 가열하고 이어서 상기 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시킬 수 있다.
이 때, 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 인산, 황산, 질산, 주석산 등을 사용할 수 있고 유기산으로는 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 아세트산, 트리플루오로아 세트산, 시트르산, 말레인산(maleic acid), 숙신산, 옥살산, 벤조산, 타르타르산, 푸마르산, 만데르산, 프로피온산(propionic acid), 구연산(citric acid), 젖산(lactic acid), 글리콜산(glycollic acid), 글루콘산(gluconic acid), 갈락투론산, 글루탐산, 글루타르산(glutaric acid), 글루쿠론산(glucuronic acid), 아스파르트산, 아스코르빈산, 카본산, 바닐릭산 및 히드로 아이오딕산 등을 사용할 수 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염은, 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리토 금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비 용해 화합물염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로서는 특히 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하며, 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리토 금속염을 적당한 은염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
본 발명의 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염은, 달리 지시되지 않는 한, 본 발명의 화합물에 존재할 수 있는 산성 또는 염기성기의 염을 포함한다. 예를 들면, 약학적으로 허용 가능한 염으로는 히드록시기의 나트륨, 칼슘 및 칼륨염이 포함되며, 아미노기의 기타 약학적으로 허용 가능한 염으로는 하이드로브로마이드, 황산염, 수소 황산염, 인산염, 수소 인산염, 이수소 인산염, 아세테이트, 숙시네이트, 시트레이트, 타르트레이트, 락테이트, 만델레이트, 메탄설포 네이트(메실레이트) 및 p-톨루엔설포네이트(토실레이트) 염이 있으며, 당업계에서 알려진 염의 제조 방법이나 제조과정을 통하여 제조될 수 있다.
이하, 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.
본 발명의 화합물들은 시중 구입가능하거나 또는 하기와 같은 제조방법으로 분리 및 수득될 수 있다.
예를 들어, 이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명의 화합물들은 하기와 같이 제조될 수 있다. 건조된 파극천, 토사자 및/또는 양파로 구성된 생약 추출물을 세척 및 세절 후 정제수를 포함한 물, 메탄올, 에탄올, 부탄올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매, 바람직하게는 물 및 메탄올 혼합용매, 보다 바람직하게는 메탄올을 수회 섞은 다음에 30℃ 내지 150℃, 바람직하게는 50℃ 내지 100℃의 온도에서 30분 내지 48시간, 바람직하게는 1시간 내지 12시간 동안 초음파 추출법, 열수 추출법, 상온 추출법 또는 환류추출법, 바람직하게는 초음파 추출법을 약 1 내지 20회, 바람직하게는 2 내지 10회 반복 수행하여 얻은 추출액을 여과, 감압 농축, 및 건조하여 본 발명의 조추출물을 얻을 수 있다.
또한, 본 발명의 극성용매 또는 비극성용매 가용 추출물은 상기에서 얻은 조추출물, 바람직하게는 10 내지 90% 에탄올 조추출물 중량의 약 0.0005 내지 0.005배, 바람직하게는 0.05 내지 0.5배 부피 (v/w%)의 물을 가한 후, 에틸 아세테이트 및 부탄올을 이용한 통상적인 분획과정을 수행하여 n-헥산, 메틸렌 클로라이드, 에틸 아세테이트 등의 비극성 용매에 가용한 비극성 용매 가용 추출 분획물; 및 부탄올, 물 등의 극성용매에 가용한 극성용매 가용 추출 분획물을 수득할 수 있다.
상기에서 수득한 n-헥산, 메틸렌 클로라이드, 에틸 아세테이트 등의 비극성 용매에 가용한 비극성 용매 가용 추출 분획물, 바람직하게는 에틸 아세테이트 가용분획물을 헥산 및 메틸렌클로라이드 혼합용매를 극성을 증가시키는 방법을 이용하여 플래쉬 컬럼크로마토그래피, RP C18 컬럼크로마토그래피 또는 실리카겔 오픈 컬럼크로마토그래피, Diaion HP-20 컬럼크로마토그래피등의 크로마토그래피를 이용한 정제방법을 선택적으로 수회 반복 수행하여 본 발명의 화합물들을 각각 정제 및 분리하여 수득할 수 있다.
본 발명자들은 상기 화합물 조합을 대상으로 사람과 돼지정액의 정자수와 운동성 변화에 미치는 영향을 알아보기 위한 시험관내 (In vitro) 정자 운동 증진 효능 평가법 실험을 알아보기 위하여 시험관내 (In vitro) 정자 운동 증진 효능 평가법을 통하여 본 발명의 시료들이 사람과 돼지정액에서 정자 운동성이 증가함을 확인함으로서, 상기 조성물을 남성불임증의 예방 및 치료용 약학조성물, 건강기능식품 및 건강보조제로 유용함을 확인하였다.
따라서, 본 발명은 상기의 제조방법 및 상기 제조공정으로 얻어진 화합물 조합을 유효성분으로 함유하는 남성 불임증의 예방 및 치료를 위한 약학 조성물 및 건강기능식품을 제공한다.
본 발명의 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 화합물 조합을 0.01 내지 99% 중량으로 포함한다.
그러나 상기와 같은 조성은 반드시 이에 한정되는 것은 아니고, 환자의 상태 및 질환의 종류 및 진행 정도에 따라 변할 수 있다.
본 발명의 화합물 조합을 포함하는 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 화합물을 포함하는 조성물은, 이에 제한되지는 않으나, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 이에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리이케트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 적어도 면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스 (sucrose) 또는 락토오스 (lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 화합물은 1일 0.01 mg/kg 내지 10 g/kg으로, 바람직하게는 1 mg/kg 내지 1 g/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다. 그러므로 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 및 직장, 또는 정맥 등의 방법을 통하여 투여할 수 있다.
본 발명은 또한 상기 화합물을 유효성분으로 함유하는 정자 운동 증진제를 제공하며, 이러한 정자 운동 증진제는 체외수정시 수정율을 향상시키기 위한 것이다. 본 발명은 또한 상기 화합물을 포함하는 정자 운동 증진의 남성 불임 치료제로서 여성용 질정 및 질세정제, 그리고 질삽입제를 제공한다. 본 발명은 또한 체외수정시 수정율을 향상시키기 위하여 상기 화합물을 포함하는 체외수정용 정자보관용(IVF: in vitro fertilization) 첨가제를 제공한다.
또한 본 발명은 (a) 모노트로페인 (Monotropein), (b) 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid) (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside), (d)퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside), 및 (e) 퀘르세틴(quercetin)으로 구성된 군으로부터 선택된 2개 이상의 화합물 조합을 남성 불임증 환자에게 투여함을 포함하는, 남성 불임증 환자를 치료하기 위한 치료방법을 제공한다.
또한 본 발명은 남성 불임증 질환 치료용 약제를 제조하기 위한 (a) 모노트로페인 (Monotropein), (b) 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid) (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside), (d)퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside), 및 (e) 퀘르세틴(quercetin)으로 구성된 군으로부터 선택된 2개 이상의 화합물 조합의 용도를 제공한다.
또한 본 발명은 (a) 모노트로페인 (Monotropein), (b) 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid) (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside),(d)퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside), 및 (e) 퀘르세틴(quercetin)으로 구성된 군으로부터 선택된 2개 이상의 화합물 조합을 유효성분으로 함유하는 남성 불임증의 예방 및 개선을 위한 건강기능식품을 제공한다.
본원에서 정의되는 "건강기능식품"은 대한민국 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체 또는 포유동물에서 목적질환을 예방 또는 개선하기 위한 종래 시품에 본 발명의 화합물을 첨가함으로서 물리학적 또는 정신적 기능성과 같은 기능성을 향상시키는 기능성 식품을 포함한다.
본 발명의 남성 불임증의 예방 및 개선을 위한 건강기능식품은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 화합물을 0.01 내지 95%, 바람직하게는 1 내지 80% 중량백분율로 포함한다.
더욱이, 본 발명의 조성물은 남성 불임증의 예방 또는 치료 또는 고환 기능증진을 목적으로 한 디양한 건강기능식품 및 건강보조식품 제조에 있어서 주요 구성요소 또는 첨가제 및 보조제로서 사용가능하다.
또한, 남성 불임증의 예방 및 개선을 위한 목적으로 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 약학 투여형태 또는 티백제, 침출차, 건강 음료 등의 형태인 건강기능식품으로 제조 및 가공이 가능하다.
또한, 본 발명은 (a) 모노트로페인 (Monotropein), (b) 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid) (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside), (d)퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside), 및 (e) 퀘르세틴(quercetin)으로 구성된 군으로부터 선택된 2개 이상의 화합물 조합을 주성분으로 함유하는 남성 불임증의 예방 및 개선용 건강보조식품을 제공한다.
상기한 “주성분”은 건강보조식품 전체 조성물 중량 대비 본 발명의 화합물을 약 30 내지 99(w/w%), 바람직하게는 50 내지 99(w/w%), 보다 바람직하게는 70 내지 99(w/w%)을 포함함을 의미한다.
본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물 조합을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제 (타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등)) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖ 당 일반적으로 약 1~20 g, 바람직하게는 약 5~12 g이다.
본 발명에 따른 화합물 조합을 식품첨가물로 사용할 경우, 상기 화합물 조합을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명의 화합물 조합은 남성 불임증 예방 효과를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 화합물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖을 기준으로 0.02 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.
본 발명의 화합물 조합을 대상으로, 사람과 돼지 정액의 정자 수와 운동성 변화에 미치는 영향을 알아보기 위한 시험관 내 (In vitro) 정자 운동 증진 효능 평가법 실험을 통하여 본 발명의 시료들이 사람과 돼지 정액에서 정자 운동성이 증가함으로서, 상기 조성물을 남성불임증의 예방 및 치료용 약학조성물, 건강기능식품 및 건강보조식품으로 유용함을 확인하였다.
도 1은 본 발명의 화합물조합의 사람과 돼지정액의 정자수와 운동성 변화에 미치는 영향을 나타낸 것이다. (CC3: (a) Monotropein+(c) kaempferol-3-glucoside + (d) Quercetin-4'-glucoside( Spiraeoside) 및 CC5: (a) Monotropein+(b) Deacetyl asperulosidic acid+ (c) kaempferol-3-glucoside + (d) Quercetin 4'-glucoside)(Spiraeoside)+(e) 퀘르세틴(quercetin), CIN4=CINTM1을 의미함)
당업자라면 다양한 변형 및 변이가 본 발명의 정신 또는 범위를 이탈하지 않는 범위에서 본 발명의 조성물, 용도 및 제조에 사용 가능함이 자명할 것이다.
본 발명의 하기 실시예에 의해 보다 상세히 설명하나, 본 발명의 어떠한 방법으로도 하기 실시예로 제한하고자 하지 않는 것으로 이해되어야 한다.
단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명의 범위를 제한하지 않는 범위에서 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.
참고예 1. 단일생약 추출물의 제조예
(1) 파극천 추출물의 제조
- 건조된 파극천 (덕현당, 대한민국: Morinda officinalis, Deok Hyeon Dang, Sounth Korea) 2.4 kg에 95% 에탄올 6ℓ를 넣고 90분씩 2회 열탕 추출 후, 여과하고 감압 조건하에서 농축하였다. 농축된 여과물은 감압 조건하에서 냉동 건조기 (ScanVac, Labogene)로 동결 건조하여 248.03g (10.3 %)의 파극천 에탄올 추출물 분말(이하, MOE라 함)을 얻어 4℃에서 보관하였다.
(2)토사자 추출물의 제조
건조된 토사자 (백장생, 대한민국: Cuscuta chinensis, Baek Jang Sang, Sounth Korea) 20.4Kg에 95% 에탄올 5ℓ를 넣고 90분씩 2회 초음파 추출한 후, 여과하고 감압 조건하에서 농축하였다. 농축된 여과물은 감압 조건하에서 냉동 건조기 (ScanVac, Labogene)로 동결 건조하여 264.3g (1.32%)의 토사자 에탄올 추출물 분말(이하, CJC라 함)을 얻어 4℃에서 보관하였다. 실험에 사용하기 전, 건조된 추출물을 생리식염수에 녹이고 실온에서 2분간 격렬하게 섞었다.
(3) 양파추출물의 제조
양파 추출물: 양파 (창녕, 대한민국: Allium cepa, Changyeong, Sounth Korea) 를 잘 씻고 건조한 후 겉껍질을 포함한 3겹 부위를 217g에 에탄올 4ℓ를 넣고 70℃ 에서 3시간 추출한 후, 여과하고 감압 조건하에서 농축하였다. 농축된 여과물은 감압 조건하에서 냉동 건조기 (ScanVac, Labogene)로 동결 건조하여 37.79g (17.41%)의 추출물 분말(이하, ONI라 함)을 얻어 4℃에서 보관하였다.
참고예 2. 혼합생약 추출물의 제조예 (파극천: 토사자: 양파=10: 1: 10, 중량비)
- 상기 참고 예 1에서 얻은 건조 상태의 파극천 추출물 100mg, 토사자 추출물 10mg 및 양파추출물 100mg을 각각 칭량하여 혼합기(Vortex genie-2, scientific industries, USA)로 혼합하여 혼합생약 추출물 210mg을 얻어 이를 하기 실험예의 시료로 사용하였다.
실시예 1. 활성 화합물의 분석
1-1. 혼합추출물의 제조
- 상기 참고 예 1에서 얻은 건조 상태의 파극천 추출물 100mg, 토사자 추출물 10mg 및 양파추출물 100mg을 각각 칭량하여 혼합기(Vortex genie-2, scientific industries, USA)로 혼합하여 혼합생약 추출물 210mg을 얻어(이하, “CINTM1” 라고 함), 이를 하기 실험예의 시료로 사용하였다.
1-2. 혼합물의 함량 분석
비교예 1에서 얻은 혼합 추출물 20mg을 물과 메탄올 (1:1, v/v)의 혼합용매에 녹여 지표성분인 모노트로페인 (Monotropein) 및 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid), 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside), 퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside)와 퀘르세틴(quercetin)을 사용하여 분석하였다.
각 추출물의 지표성분은 하기 표 1과 같다.
각 추출물의 지표성분
combination MOE:CJC:ONI (10:1:10, w/w)
Morinda officinalis root Monotropein,Deacetyl asperulosidic acid
Cuscuta chinensis seed kaempferol-3-glucoside
Allium cepa bulb Quercetin- 4'-glucoside(Spiraeoside), Quercetin
HPLC condition
reference
UV Detector 254nm
column Shiseido UG18 (4.6 x 250 mm, 5um)
mobile phase (A) acetonitrile and(B) water with 0.1% trifluoroactic acid, 0 min - 10min (100% B),10 min - 40 min (100%-70% B),40 min 50 min (70%-50% B)
flow rate 1 mL/min
혼합추출물을 분석한 결과, 각 표준품에 대한 표준 정량 곡선(standard calibration curve)을 구하였고, 각 화합물의 함량은 하기 표 3과 같다.
각 화합물의 함량
content (mg/g) combination ratio (MOE:CJC:ONI =10:1:10, w/w))
Monotropein (a) 6.69 ±0.19
Deacetyl ascerulosidic acid (b) 8.76 ±0.23
Kaempferol 3-O-glucoside (c) 0.41 ±0.02
Quercetin 4'-O-glucoside (d) 3.61 ±0.08
Quercetin (e) 0.70 ±0.02
따라서 활성을 나타내는 추출물의 조합 (파극천:토사자:양파=10:1:10, 중량비) 에서 각 성분의 함량을 파악하여 각 화합물의 활성 조합을 확인하였다.
실시예 2. 활성 화합물의 준비
회사로부터 퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside: Sigma-Aldrich, 91802), 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside)(Sigma-Aldrich, catalog No. 68437-5MG), 카엠페롤 (kaempferol) 3-갈락토시드(galatoside) Sigma-Aldrich, SMB00192); 퀘르세틴(quercetin: Sigma-Aldrich, Q-0125), 모노트로페인 (Monotropein; Sigma-Aldrich, SMB00471), 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid, Chemfaces, CFN92358) 을 각각 구입하여 하기 실험예 시료로 사용하였다.
실시예 3. 화합물 조합의 준비
상기 실시예에서 얻은 (a) 모노트로페인 (Monotropein), (b) 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid) (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside); (d)퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside), 및 (e) 퀘르세틴(quercetin)을 교반기를 이용하여 하기 표 4과 같은 조합 중량비로 완전 배합하여 하기 실험예에 사용하였다.
Compound combination
compound combination (CC 5) combination (CC 3)
content(mg/g) relative weight part** content(mg/g) relative weight part
(a) 6.69 16.32 6.69 16.32
(b) 8.76 21.36 0 0
(c) 0.41 1 0.41 1
(d) 3.61 8.8 3.61 8.8.
(e) 0.70 1.7 0 0
sum 20.17 - 10.71 -
*(a) Monotropein, (b) kaempferol-3-glucoside, (c) Deacetyl asperulosidic acid, (d) Quercetin-4'-glucoside (Spiraeoside), (e) quercetin**: set the content of (c) to 1 to calculate each relative weight part.
실험예 1. In vitro 정자 운동 증진 효능 평가
상기 실시예의 시료들의 사람정액의 정자수와 운동성 변화에 미치는 영향을 알아보기 위하여 문헌에 기재된 시험관내 (In vitro) 정자 운동 증진 효능 평가법을 이용하여 하기와 같이 실험을 수행하였다 (Martin Blomberg Jensen, Poul J.Bjerrum, Torben E.Jessen, John E. Nielsen, Ulla N.Joensen, et al. (2011) Vitamin D is positively associated with sperm motility and increases intracellular calcium in human spermatozoa. Human Reproduction, Vol.26, No.6 pp. 1307-1317).
1-1. 실험 과정
불임으로 내원한 환자 지원자(전북대학병원 비뇨기과, 20~50대, 약 85명)로부터 얻은 정액에서 정자의 수, 운동성을 측정하고 한 시간 동안 37oC의 인큐베이터에 넣은 후, 정액이 충분히 액화되면 200μl의 정액에 20μl의 시료 추출물을 넣어 최종 농도를 2mg/ml 되게 한 후에 3시간 후의 정자의 운동성을 챔버 (MAKLER counting chamber; MAKLER counting chamber; self-Medical Instruments, Haifa, Israel)를 사용하여 현미경(Axiovert25, ZEISS, USA)으로 측정하였다.
대조군으로는 3H 완충액 Hams F-10(N6635,Sigma Chemical Co., USA) + 0.4% HAS(A1653,Sigma Chemical Co., USA) + 12mM HEPES (H4034,Sigma Chemical Co., USA) [3H, pH 7.4]을 사용하였으며, 시료들도 3H 완충액을 사용하여 녹인 후에 pH를 7.4로 맞춘 후, 원심분리기(centrifuge; A32010(1), LABOGENE)를 사용하여 원심분리 (13,000rpm, 2min, 4℃)하여 상등액을 수득하여 사용하였다.
정자 운동성은 하기 수학식 1, 2에 따라 계산되었다.
[수학식 1]
The percentage of motile spermatozoa = (A; mean number of motile spermatozoa/ B: total number of spermatozoa) ×100%
3시간 후의 정자 운동성증가 비율은 하기 수학식 2에 따라 계산되었다.
[수학식 2]
The percentage of motile spermatozoa 3 hours after incubation = (sperm mobility 3 hours after incubation on control group - sperm mobility 3 hours after incubation in test group/ sperm mobility 3 hours after incubation in control group ) ×100%
1-2. 실험 결과
- 상기에서 불임으로 내원한 환자로부터 얻은 정액에서 정자의 수, 운동성을 측정한 결과, 본 발명의 조합예 1 (CC 5) 및 조합예 2 (CC 3)에서는 10μM 농도에서 평균(n=3) 74.7%, 및 73.0%로 정자 운동성 증가가 가장 높게 나타남을 확인하였다. (표 5 및 표 6)
treatment 3H*(pH 7.4) CC3*(10μ M) CIN4*(0.05mg/ml)
n=1 zero Total count (x106/ml) 64 62 61
Motility (%) 71.8 71 73.7
3hrs Total count (x106/ml) 63 55 52
Motility (%) 72.5 78.3 79
n=2 zero Total count (x106/ml) 71 75 73
Motility (%) 50 49.3 50.8
3hrs Total count (x106/ml) 63 52 54
Motility (%) 50.7 54.4 57
n=3 zero Total count (x106/ml) 74 70 75
Motility (%) 38.8 35.4 38.2
3hrs Total count (x106/ml) 63 55 59
Motility (%) 38.5 44.7 46
*: 3H: Hams F-10(Sigma-Aldrich, N6635,) + 0.4% HAS (Sigma-Aldrich, A1653) + 12mM HEPES(Sigma-Aldrich, H4034), CC3*=(a) Monotropein + (c) Deacetyl asperulosidic acid + (d) Quercetin-4'-glucoside (Spiraeoside), CIN4= CINTM1
treatment 3H*(pH 7.4) CC3*(10μ M) CC5*(10μ M) CIN4*(0.05mg/ml)
n=1 zero Total count (x106/ml) 54 55 54 55
Motility (%) 35.2 35 36 35.7
3hrs Total count (x106/ml) 40 35 39 39
Motility (%) 25 37.9 46 48
*: 3H: Hams F-10(Sigma-Aldrich, N6635,) + 0.4% HAS (Sigma-Aldrich, A1653) + 12mM HEPES(Sigma-Aldrich, H4034), CC3*=(a) Monotropein + (c) Deacetyl asperulosidic acid + (d) Quercetin-4'-glucoside (Spiraeoside), CC5*=(a) Monotropein + (b) kaempferol-3-glucoside, + (c) Deacetyl asperulosidic acid + (d) Quercetin-4'-glucoside (Spiraeoside) + (e) quercetin, CIN4= CINTM1
1-3. 실험 결과
- 상기에서 불임으로 내원한 환자로부터 얻은 정액에서 정자의 수, 운동성을 측정한 뒤 3시간 후의 정자 운동성증가 비율을 측정한 결과, 본 발명의 조합예 1 (CC 5) 및 조합예 2 (CC 3) 에서는 10μM 농도에서 51.60% 및 84.00%로 3시간후의 대조군 정자 운동성에 비해 증가가 됐음을 확인하였다. (도 1)
하기에 본 발명의 제형화 방법 및 담체의 종류를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 대표적인 제제예를 하기에 설명하고자 함이다.
제제예 1. 산제의 제조
화합물 (CC3) : 20 mg
유당 : 100 mg
탈크 : 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
제제예 2. 정제의 제조
화합물 (CC5) : 10 mg
옥수수전분 : 100 mg
유당 : 100 mg
스테아린산 마그네슘 : 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
제제예 3. 캅셀제의 제조
화합물 (CC3) : 10 mg
결정성 셀룰로오스 : 3 mg
락토오스 : 14.8 mg
마그네슘 스테아레이트 : 0.2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
제제예 4. 주사제의 제조
화합물 (CC5) : 10 mg
만니톨 : 180 mg
주사용 멸균 증류수 : 2974 mg
Na2HPO4,12H2O : 26 mg
통상의 주사제의 제조방법에 따라 활성성분을 용해시키고, 모든 성분을 1 앰플당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
제제예 5. 액제의 제조
화합물 (CC3) : 20 mg
이성화당 : 10 g
만니톨 : 5 g
정제수 : 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ㎖으로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
제제예 6. 건강 식품의 제조
화합물 (CC5) : 1000 ㎎
비타민 혼합물 : 적량
비타민 A 아세테이트 : 70 mg
비타민 E : 1.0 ㎎
비타민 B1 : 0.13 ㎎
비타민 B2 : 0.15 ㎎
비타민 B6 : 0.5 ㎎
비타민 B12 : 0.2 mg
비타민 C : 10 ㎎
비오틴 : 10 mg
니코틴산아미드 : 1.7 ㎎
엽산 : 50 mg
판토텐산 칼슘 : 0.5 ㎎
무기질 혼합물 : 적량
황산제1철 : 1.75 ㎎
산화아연 : 0.82 ㎎
탄산마그네슘 : 25.3 ㎎
제1인산칼륨 : 15 ㎎
제2인산칼슘 : 55 ㎎
구연산칼륨 : 90 ㎎
탄산칼슘 : 100 ㎎
염화마그네슘 : 24.8 ㎎
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 본 발명의 정신 및 범위를 벗어나지 않는다고 간주되는 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
제제예 7. 건강 음료의 제조
화합물 (CC3) : 1000㎎
구연산 : 1000 ㎎
올리고당 : 100 g
매실농축액 : 2 g
타우린 : 1 g
정제수를 가하여 : 전체 900 ㎖
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상술한 바와 같이, 다양한 방법으로 본 발명은 변형가능하고, 이러한 변형은 본 발명의 정신 및 범위를 벗어나지 않는 것으로 간주되며, 이러한 모든 변형은 당업자에게는 하기한 본 발명의 청구범위 이내 포함되는 의도임이 자명할 것이다.
상술한 바와 같이, 본 발명의 화합물 조합을 대상으로 사람과 돼지정액의 정자수와 운동성 변화에 미치는 영향을 알아보기 위한 시험관내 (In vitro) 정자 운동 증진 효능 평가법 실험 에서의 정자수와 운동성 변화에 미치는 영향을 알아보기 위하여 시험관내 (In vitro) 정자 운동 증진 효능 평가법을 통하여 본 발명의 시료들이 사람과 돼지정액의 in vitro 실험에서 정자 운동성이 증가함을 확인함으로서, 상기 조성물을 남성불임증의 예방 및 치료용 약학조성물, 건강기능식품 및 건강보조식품에 유용하게 이용될 수 있다.

Claims (9)

  1. (a) 모노트로페인 (Monotropein), (b) 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid) (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside), (d)퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside), 및 (e) 퀘르세틴(quercetin)으로부터 선택된 2개 이상의 화합물 조합을 유효성분으로 함유하는 남성 불임증 예방 및 치료용 약학 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 화합물 조합은 (a) 모노트로페인 (Monotropein), (b) 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid) (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside), (d)퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside), 및 (e) 퀘르세틴(quercetin)으로 구성된 조합 또는 (a) 모노트로페인 (Monotropein), (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside); 및 (d)퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside)로 구성된 조합임을 특징으로 하는 약학조성물.
  3. 제 2항에 있어서, 상기 화합물 조합은 (a) 모노트로페인 (Monotropein) 10 내지 20 중량부, (b) 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid) 1 내지 30 중량부, (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside), 1 중량부, (d) 퀘르세틴(Quercetin)-4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside) 1 내지 15 중량부, 및 (e) 퀘르세틴(quercetin) 1 내지 6 중량부의 화합물 조합; 또는 (a) 모노트로페인 (Monotropein) 10 내지 20 중량부, (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside), 1 중량부, 및 (d) 퀘르세틴(Quercetin)-4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside) 1 내지 15 중량부의 화합물 조합임을 특징으로 하는 약학조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 남성 불임증은 항암제 부작용에 의한 불임증, 무정자증, 감정자증, 약정자증, 또는 기형정자임을 특징으로 하는 약학 조성물.
  5. (a) 모노트로페인 (Monotropein), (b) 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid) (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside), (d)퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside), 및 (e) 퀘르세틴(quercetin)으로부터 선택된 2개 이상의 화합물 조합을 유효성분으로 함유하는 남성 불임증 예방 및 개선용 건강기능식품.
  6. 제 5항에 있어서, 상기 건강기능식품은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 현탁액, 에멀젼, 시럽제, 티백제, 침출차, 또는 건강 음료 형태인 건강기능식품.
  7. (a) 모노트로페인 (Monotropein), (b) 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid) (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside), (d)퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside), 및 (e) 퀘르세틴(quercetin)으로부터 선택된 2개 이상의 화합물 조합을 유효성분으로 함유하는 남성 불임증 예방 및 개선용 건강보조식품.
  8. (a) 모노트로페인 (Monotropein), (b) 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid) (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside), (d)퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside), 및 (e) 퀘르세틴(quercetin)으로부터 선택된 2개 이상의 화합물 조합을 남성 불임증 환자에게 투여함을 포함하는, 남성 불임증 환자를 치료하기 위한 치료방법.
  9. 남성 불임증 질환 치료용 약제를 제조하기 위한, (a) 모노트로페인 (Monotropein), (b) 디아세틸아스페룰로시딕 산 (Deacetyl asperulosidic acid) (c) 카엠페롤 (kaempferol) 3-글루코시드(glucoside), (d)퀘르세틴(Quercetin) 4'-글루코시드(glucoside)(스피라에오시드: Spiraeoside), 및 (e) 퀘르세틴(quercetin)으로부터 선택된 2개 이상의 화합물 조합의 용도.
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