KR100921971B1 - 블루밍샐리 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 블루밍샐리(Chamaenerion angustifolium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출되는 블루밍샐리 추출물은 전사인자인 에이피-1(AP-1)을 억제하고, 피부 기질의 분해효소인 타입 I 콜라게나제를 억제하고, 피부의 주 구성 성분인 콜라겐의 생성을 증가 및 콜라겐의 분해를 억제함으로써 주름 개선 및 탄력 개선의 효과가 있으므로 피부 노화 방지 및 개선용 약학적 조성물, 건강식품, 피부외용제 또는 화장품으로 유용하게 이용될 수 있다.
블루밍샐리, 주름, 탄력, 피부노화방지, 피부노화개선

Description

블루밍샐리 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물{A composition comprising Chamaenerion angustifolium extract as an active ingredient}
본 발명은 블루밍샐리(Chamaenerion angustifolium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화 방지 및 개선용 조성물에 관한 것이다.
피부노화를 임상적으로 분류하면, 자연적으로 나이가 들면서 피부가 약해지고 창백해지고 미세한 주름이 생기고 탄력이 없어지는 자연노화와 태양광에 의해 깊고 거친 주름이 생기고, 색소침착, 모세혈관확장증 등이 나타나는 광노화로 나뉘어진다(Gilchrest B. A., J. Am . Acad . Dermatol ., 21: 610, 1989; Ma W., et al., Clin. Exp . Dermatol ., 26: 592, 2001; Jenkins G., Mech . Ageing Develop ., 123: 801, 2002). 피부의 주 구조성분인 콜라겐의 변화 및 감소는 피부의 주름 및 탄력의 감소와 같은 임상적 변화의 주요인이라고 알려져 있으며, 자연노화 및 광노화 모두에서 관찰되고 있다(Lavker R. M., et al., J. Invest . Dermatol ., 90: 325, 1988). 자연노화의 과정 중의 콜라겐 결핍은 그 생성자체가 감소하거나, 그 분해 효소인 타입 I 콜라게나제(Matrix Metalloproteinase-1, MMP-1)의 증가에 의한 분해 촉진으로 일어난다고 알려져 있다. 자외선 조사는 피부에서 타입 I 콜라게나제의 생합성을 유도하고, 이로 인해 증가한 타입 I 콜라게나제는 피부 콜라겐의 분해를 촉진하고 나아가 세포외 기질(Extracellular metrix, ECM)의 분해 또한 촉진시킨다(Millis A. J., et al., Exp . Cell . Res ., 201: 373, 1992; Chung J. H., et al., J. Invest . Dermatol ., 117: 1218, 2001; Fisher G. J., et al., J. Clin . Invest., 106: 663, 2000; Visse R. et al., Circ . Res ., 92: 827, 2003; Vincenti M. P., Crit . Rev . Eukaryot Gene Expr ., 6: 391, 1996; Scharffetter-Kochanek K., et al., Exp . Gerontol ., 35: 307, 2000). 따라서 나이든 인간의 피부에서 콜라겐 결핍을 회복시키는 것이 피부노화를 회복시키는 방법으로 생각되어 피부에서 콜라겐 생합성을 촉진시키거나, MMP-1의 생합성을 감소시키는 방법 등으로 피부의 노화 증상인 피부의 주름 생성 및 탄력감소, 및 늘어짐을 예방하거나 회복시킬 수 있다.
블루밍샐리(Chamaenerion angustifolium)는 러시아 전역의 숲과 덤불에 자라고 있으며, 특히 습지나 불모지, 말라붙은 토탄지, 세로로 긴 길가 제방 등에 서식하는 바늘꽃과(Onagraceae)의 큰 다년생 초본식물이다. 두꺼운 덩굴성 근경과 위쪽으로 가지 친 줄기를 가지며 50 ~ 150cm까지 자란다. 잎은 규칙적인 창모양의 아래로부터 위로해서 연녹색에서 암녹색 색깔을 띄우며, 꽃은 크고 엷은 자색 자주색 때로는 흰색이다. 개화기는 6월 말에서 8월 중순이고, 개화기 때의 지상부, 잎 꽃 부분을 의학적인 목적으로 사용한다. 이 식물의 잎과 뿌리에는 단백질, 탄닌, 유기산, 플라보노이드(flavonoids), 탄수화물, 당류, 오렌지보다 3배 정도 더 많은 비타민 C 등이 함유되어 있으며, 잎에는 피로갈릭(pyrogallic)기를 가진 탄닌이 10%, 알칼로이드가 0.1%, 점액질이 약 15% 정도 함유되어 있다. 뿌리에는 적은양의 점액질이 있으며 탄닌은 함유되어 있지 않다. 블루밍샐리는 항염증작용, 피막형성작용, 진정, 진경, 진통효과를 가지고 있고, 잎의 수용성 파스타(pasta)는 두통, 대사장애, 위궤양에 사용된다. 신선한 짓이긴 잎은 상처회복에 사용된다(러시아 민간요법).
블루밍샐리에 대한 특허는 루마니아에서 발표된 것으로 항바이러스효과에 대한 것(루마니아 공개특허 제 102687호)이 있었고, 항산화활성(Ryzhikov MA, et. al., Vopr Pitan. 75: 22, 2006)에 대한 논문이 1편 발표되어 있었다. 그러나 블루밍샐리 추출물을 이용한 피부의 노화에 대한 연구는 거의 이루어져 있지 않은 상태이다.
이에, 본 발명자들은 블루밍샐리 추출물이 우수한 에이피-1(AP-1) 억제 효능을 보이고, 타입 I 콜라게나제의 생합성을 감소시키며, 콜라겐의 생합성을 증가시키며, 부작용이 거의 없으므로 피부 노화 방지 및 개선용 조성물로 유용하게 이용될 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 블루밍샐리 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부노화 방지 및 주름 개선용 조성물 또는 건강식품을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출된 블루밍샐리 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화 방지 및 주름 개선용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 블루밍샐리 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화 방지 및 주름 개선용 피부외용제를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 블루밍샐리 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화 방지 및 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
아울러, 본 발명은 상기 블루밍샐리 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화 방지 및 주름 개선용 건강식품을 제공한다.
본 발명의 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출되는 블루밍샐리 추출물은 전사인자 에이피-1(AP-1)의 활성을 억제하고, 피부 기질의 분해효소인 타입 I 콜라게나제(MMP-1)를 억제하고, 피부의 주 구성 성분인 콜라겐을 증가시킴 으로써 피부의 주름 개선 및 탄력 개선의 효과가 있으므로 화장품 등의 피부외용제로 사용될 수 있으며, 부작용이 없어 약학적 조성물 또는 건강식품으로도 유용하게 사용할 수 있다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명의 블루밍샐리 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
1) 건조한 블루밍샐리(Chamaenerion angustifolium)를 추출용매를 가하여 추출하는 단계;
2) 단계 1)의 추출물을 식힌 후 여과하는 단계; 및
3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압농축한 후 건조하는 단계,
상기 제조방법에 있어서, 단계 1)의 블루밍샐리는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 상기 블루밍샐리는 지상부 또는 뿌리부를 모두 사용할 수 있으나 지상부를 사용하는 것이 바람직하다.
상기 추출용매는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 알코올로는 C1 내지 C4 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직하며, 저급 알코올로는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하다. 상기 추출용매를 건 조된 블루밍샐리 분량에 5 내지 15배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하며, 10배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하다. 추출온도는 80 ~ 120℃인 것이 바람직하며, 100℃인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 2 ~ 24 시간인 것이 바람직하며, 3 시간이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 아울러, 추출 회수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며, 3회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 제조방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
본 발명은 블루밍샐리 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화 방지 및 주름 개선용 조성물을 제공한다.
상기 블루밍샐리 추출물은 피부 주름 개선 및 탄력 개선에 의한 피부 노화를 방지 및 주름을 개선하는 것을 특징으로 한다.
본 발명자들은 블루밍샐리 추출물이 MMP-1의 주요 전사인자인 에이피-1(AP-1)에 대한 억제 효과를 확인하기 위해, 루시퍼라제(luciferase)가 결합되어 있는 플라스미드(plasmid)를 사용한 수용체 유전자 분석법(reporter gene assay)을 수행하여 AP-1의 억제 정도를 측정하였다. 그 결과, 본 발명의 블루밍샐리 추출물은 농도 의존적으로 AP-1을 억제하는 것을 알 수 있었다. 따라서, 블루밍샐리 추출물은 주름 및 탄력개선 등의 피부 노화 방지 및 개선에 효과가 있음을 알 수 있다.
본 발명자들은 블루밍샐리 추출물이 종양괴사 인자(TNF α, Tumor necrosis factor α) 또는 자외선에 의한 타입 I 콜라게나제(MMP-1)의 생합성을 억제하는지 조사하였다. 인체섬유아세포에 TNF α 또는 자외선 A를 처리한 후 본 발명의 블루밍샐리 추출물을 처리하여 ELISA 방법을 사용하여 타입 I 콜라게나제의 양을 정량하였다. 그 결과, 본 발명의 블루밍샐리 추출물은 농도 의존적으로 타입 I 콜라게나제의 생합성을 억제하는 것을 알 수 있었다. 따라서, 블루밍샐리 추출물은 피부 기질 물질의 감소, 탄력 저하, 주름 형성 등을 예방 및 개선 효과가 있음을 알 수 있다.
본 발명자들은 블루밍샐리 추출물의 콜라겐 생합성을 촉진하고 콜라겐의 분해를 억제하는지 조사하였다. 인체 섬유아세포에 블루밍샐리 추출물을 처리하는 실험 및 상기 인체 섬유아세포에 TNF α를 처리한 후 블루밍샐리 추출물을 처리하는 실험을 각각 수행한 후 ELISA 방법을 사용하여 생성된 프로콜라겐의 양을 정량하였다. 그 결과, 본 발명의 블루밍샐리 추출물은 농도 의존적으로 콜라겐의 생합성을 촉진하고, TNF α에 의한 콜라겐의 분해를 억제하는 것을 알 수 있었다. 따라서, 블루밍샐리 추출물은 피부 주름 및 탄력 개선 효과가 있음을 알 수 있다.
본 발명의 상기 블루밍샐리 추출물을 의약품으로 사용하는 경우, 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
상기 블루밍샐리 추출물은 임상 투여 시에 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다.
즉, 본 발명의 블루밍샐리 추출물은 실제 임상 투여 시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 블루밍샐리 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose) 또는 락토오스(Lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 블루밍샐리 추출물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하며, 일일 투여량은 블루밍샐리 추출물의 양을 기준으로 0.1 내지 100 ㎎/㎏이고, 바람직하게는 30 내지 80 ㎎/㎏이고, 더욱 바람직하게는 50 내지 60 mg/kg이며, 하 루 1 ~ 6 회 투여될 수 있다.
본 발명의 블루밍샐리 추출물은 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명은 상기 블루밍샐리 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화 방지 및 주름 개선용 조성물을 피부외용제의 제형으로 제공할 수 있다.
본 발명의 블루밍샐리 추출물을 피부외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
본 발명은 상기 블루밍샐리 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화 방지 및 주름 개선용 조성물을 화장료의 형태로 제공할 수 있다.
본 발명의 상기 블루밍샐리 추출물을 화장품으로 사용하는 경우, 상기 블루밍샐리 추출물을 유효성분으로 함유하여 제조되는 화장품은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다.
적합한 화장품의 제형으로는 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.
또한, 상기 화장품은 본 발명의 블루밍샐리 추출물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 블루밍샐리 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화 방지 및 주름 개선용 건강식품을 제공한다.
상기 피부 노화 방지 및 개선은 피부 주름 및 탄력을 개선하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 상기 블루밍샐리 추출물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 블루밍샐리 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄 수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.
상기 외에 본 발명의 블루밍샐리 추출물은 여러가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 블루밍샐리 추출물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 본 발명을 실시예, 실험예 및 제제예에 의하여 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예, 실험예 및 제제예는 본 발명을 구체적으로 예시하는 것이며, 본 발명의 내용이 실시예, 실험예 및 제제예에 의해 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1> 블루밍샐리 추출물 제조
<1-1> 블루밍샐리 메탄올 추출물
건조된 블루밍샐리(국제공동연구 중인 러시아 노보시비르스크 주재 유기화학연구소(NIOC, Novosivirsk Institute of Organic Chemistry)에서 구함) 지상부 100 g을 가루로 만들어 추출 자루에 넣고 100% 메탄올 10배에 침지하여 100℃에서 3시 간 동안 3번 환류 추출하고 상온으로 식힌 후 여과지에 여과하였다. 상기 추출액을 용액이 완전히 증발할 때까지 감압 하에 농축기를 사용하여 농축함으로써, 결정체를 수득하였다. 상기 방법을 이용한 결과 건조 블루밍샐리 지상부 100 g에서 추출물 25 g을 제조할 수 있었다.
<1-2> 블루밍샐리 물 추출물
추출용매로 메탄올 대신 물을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 <1-1>의 추출방법과 동일하게 추출하여 추출물 22 g을 제조할 수 있었다.
<1-3> 블루밍샐리 에탄올 추출물
추출용매로 메탄올 대신 100% 에탄올을 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 <1-1>의 추출방법과 동일하게 추출하여 추출물 25 g을 제조할 수 있었다.
< 실험예 1> 에이피 -1( AP -1) 에 대한 억제 효과
상기 <실시예 1>의 블루밍샐리 추출물들의 MMP-1의 주요 전사인자인 에이피-1(AP-1)에 대한 억제 효과를 확인하기 위해 루시퍼라제(luciferase)가 결합되어 있는 플라스미드(plasmid)를 사용한 수용체 유전자 분석법(reporter gene assay)을 수행하였다. 자궁경부암세포주(HeLa cell)(ATCC, CCL-2)를 24웰 플레이트에 접종한 후 10% 우태아혈청과 1% 페니실린/스트렙토마이신을 함유한 DMEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 그 후 전사인자가 활성화되면 이것을 루시퍼라 제(luciferase)로 보고할 수 있도록 제작된 플라스미드(plasmid)인 에이피-1-루시퍼라제 수용체 플라스미드 DNA(AP-1-luciferase reporter plasmid DNA)(Stratagene)를 리포펙타민 트레랜스펙션(Lipofectamin transfection) 시약(Invitrogen사 제품)으로 트랜스펙션(transfection) 하였다. 트랜스펙션(Transfection) 24시간 후에 블루밍샐리 추출물들을 다양한 농도로 배지에 가하고 PMA(Phobol ester, Sigma)로 자극을 주었다. 24시간 후 세포를 라이시스(lysis) 시키고 루시퍼라제(luciferase) 활성을 루미노미터(luminometer)로 측정하여 억제 정도를 확인하였다. AP-1 활성의 억제 정도, 즉 AP-1 결합 부위(binding element)의 전이활성(transactivation)의 억제 정도를 측정하였다. 상기 추출물 처리 없이 PMA만 처리한 대조군을 100으로 하여 비교치를 나타내었다.
블루밍샐리 추출물의 전사인자 AP -1의 억제능
구분 농도 AP-1
실시예<1-1> 10 ug/ml 71 %
1 ug/ml 54 %
0.1 ug/ml 32 %
실시예<1-2> 10 ug/ml 68 %
1 ug/ml 50 %
0.1 ug/ml 31 %
실시예<1-3> 10 ug/ml 70 %
1 ug/ml 52 %
0.1 ug/ml 32 %
대조군 100 %
상기 결과, 표 1에서 보는 바와 같이 본 발명의 블루밍샐리 추출물들은 농도 의존적으로 AP-1을 억제하는 것을 알 수 있었다(표 1 참조).
< 실험예 2> 종양괴사 인자에 의한 타입 I 콜라게나제(MMP-1)의 생합성의 억제 효능
신생아포피에서 직접 분리한 인체섬유아세포를 104개의 농도로 48웰 플레이트에 배양하고, 24시간 후 종양괴사 인자(TNF α, Tumor necrosis factor α)를 20ng/ml 되게 하고, 상기 <실시예 1>의 블루밍샐리 추출물들을 다양한 농도로 포함한 배지로 교체하였다. 배양 2일째 상등액을 수확(harvest)해서 ELISA(AP biotech RPN2610)방법을 사용하여 생성된 타입 I 콜라게나제의 양을 정량하였다. 종양괴사인자만 처리하고, 상기 추출물을 무처리한 대조군을 100으로 하여 비교치를 나타내었다.
블루밍샐리 추출물의 TNF α에 의한 타입 I 콜라게나제 생합성에 대한 효과
구분 농도 MMP-1 생합성(%)
실시예<1-1> 10 ug/ml 20 %
1 ug/ml 41 %
0.1 ug/ml 70 %
실시예<1-2> 10 ug/ml 24 %
1 ug/ml 42 %
0.1 ug/ml 73 %
실시예<1-3> 10 ug/ml 22 %
1 ug/ml 43 %
0.1 ug/ml 70 %
대조군 100 %
상기 결과, 표 2에서 보는 바와 같이 본 발명의 블루밍샐리 추출물들은 종양괴사인자에 의한 타입 1 콜라게나제의 생합성을 농도 의존적으로 감소시키는 것을 알 수 있다(표 2 참조).
< 실험예 3> 자외선에 의한 타입 I 콜라게나제 ( MMP -1) 생합성의 억제 효능
신생아포피에서 직접 분리한 인체섬유아세포를 104개의 농도로 48웰 플레이트에 배양하고, 24시간 후에 자외선 A를 15J/cm2 로 조사한 후, 상기 <실시예 1>의 블루밍샐리 추출물들을 다양한 농도로 포함한 배지로 교체하였다. 배양 2일째 상등액을 수확(harvest)해서 ELISA(AP biotech RPN2610)방법을 사용하여 생성된 타입 I 콜라게나제의 양을 정량하였다. 자외선 A만 조사하고, 상기 추출물을 무처리한 대조군을 100으로 하여 비교치를 나타내었다.
블루밍샐리 추출물의 자외선에 의한 타입 I 콜라게나제 생합성에 대한 효과
구분 농도 MMP-1 생합성(%)
실시예<1-1> 10 ug/ml 30 %
1 ug/ml 52 %
0.1 ug/ml 83 %
실시예<1-2> 10 ug/ml 34 %
1 ug/ml 54 %
0.1 ug/ml 85 %
실시예<1-3> 10 ug/ml 31 %
1 ug/ml 53 %
0.1 ug/ml 85 %
대조군 100 %
상기 결과, 표 3에서 보는 바와 같이 본 발명의 블루밍샐리 추출물들은 자외선 A에 의한 타입 1 콜라게나제의 생합성을 농도 의존적으로 감소시키는 것을 알 수 있다(표 3 참조).
< 실험예 4> 피부세포에서 콜라겐 생합성 촉진 효능
신생아포피에서 직접 분리한 인체 섬유아세포를 104개의 농도로 48 웰 플레이트에 배양하고, 24시간 후, 상기 <실시예 1>의 블루밍샐리 추출물들을 다양한 농도로 포함한 배지로 교체하였다. 배양 2일째 상등액을 수확(harvest)해서 ELISA(Takara MK101) 방법을 사용하여 생성된 프로콜라겐의 양을 정량하였다. 상기 추출물을 무처리한 대조군을 100으로 하여 비교치를 나타내었다.
블루밍샐리 추출물의 콜라겐 생성 촉진 효능
구분 농도 프로콜라겐 생합성(%)
실시예<1-1> 10 ug/ml 190 %
1 ug/ml 158 %
0.1 ug/ml 133 %
실시예<1-2> 10 ug/ml 185 %
1 ug/ml 150 %
0.1 ug/ml 128 %
실시예<1-3> 10 ug/ml 187 %
1 ug/ml 154 %
0.1 ug/ml 133 %
대조군 100 %
상기 결과, 표 4에서 보는 바와 같이 본 발명의 블루밍샐리 추출물들은 콜라겐 생합성을 농도의존적으로 촉진하는 것을 알 수 있었다(표 4 참조).
< 실험예 5> 콜라겐 분해 억제 효능
신생아포피에서 직접 분리한 인체 섬유아세포를 104개의 농도로 48 웰 플레이트에 배양하고, 24시간 후 종양괴사인자(TNF α, Tumor necrosis factor α)를 20ng/ml 되게 하고, 상기 <실시예 1>의 블루밍샐리 추출물들을 다양한 농도로 포함한 배지로 교체하였다. 배양 2일째 상등액을 수확(harvest)해서 ELISA(Takara MK101) 방법을 사용하여 분해되지 않고 남아있는 프로콜라겐의 양을 정량하였다. 종양괴사인자만 처리하고, 상기 추출물 무처리한 대조군을 100으로 하여 비교치를 나타내었다. 또한, 추출물 및 종양괴사인자 중 어떤 것도 처리하지 않은 무처치군을 함께 비교하였다.
블루밍샐리 추출물의 콜라겐 분해 억제 효능
구분 농도 프로콜라겐 생합성(%)
실시예<1-1> 10 ug/ml 189 %
1 ug/ml 175 %
0.1 ug/ml 152 %
실시예<1-2> 10 ug/ml 185 %
1 ug/ml 164 %
0.1 ug/ml 152 %
실시예<1-3> 10 ug/ml 185 %
1 ug/ml 170 %
0.1 ug/ml 148 %
대조군 100 %
무처치군 200 %
상기 결과, 표 5에서 보는 바와 같이 본 발명의 블루밍샐리 추출물들은 TNF α에 의한 콜라겐의 분해를 농도 의존적으로 억제하는 것을 알 수 있다(표 5 참조).
< 실험예 6> 블루밍샐리 추출물의 급성 독성실험
본 발명에 이용된 블루밍샐리 추출물들을 경구 투여하여 안정성을 확인하고자 하기와 같은 방법으로 급성 독성실험을 하였다. 실험동물로 6주령의 특정병원부재(SPF) 마우스를 사용하여 급성 독성실험을 실시하였다. 군당 10마리씩의 동물에 본 발명의 블루밍샐리 추출물들을 0.9% NaCl에 녹여 17 시간 동안 절식시킨 마우스에 2g/㎏, 5g/㎏의 용량으로 단회 경구 투여하였다. 시험물질 투여 후 동물의 폐사 여부, 임상증상, 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 복강장기와 흉강장기의 이상 여부를 관찰하였다.
실험결과, 실험물질을 투여한 모든 동물에서 특이할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다.
이상의 결과 본 발명의 블루밍샐리 추출물들은 마우스에서 5 g/㎏까지 독성변화를 나타내지 않으며, 경구 투여 최소치사량(LD50)은 5g/㎏이상인 안전한 물질로 판단되었다.
하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.
< 제제예 1> 약학적 제제의 제조
1. 산제의 제조
실시예 <1-1>의 추출물 2g
유당 1g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
2. 정제의 제조
실시예 <1-1>의 추출물 100㎎
옥수수전분 100㎎
유 당 100㎎
스테아린산 마그네슘 2㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
3. 캡슐제의 제조
실시예 <1-1>의 추출물 100㎎
옥수수전분 100㎎
유 당 100㎎
스테아린산 마그네슘 2㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
4. 환의 제조
실시예 <1-1>의 추출물 1 g
유당 1.5 g
글리세린 1 g
자일리톨 0.5 g
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1 환 당 4 g이 되도록 제조하였다.
5. 과립의 제조
실시예 <1-1>의 추출물 150 ㎎
대두 추출물 50 ㎎
포도당 200 ㎎
전분 600 ㎎
상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎎을 첨가하여 섭씨 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.
< 제제예 2> 식품의 제조
본 발명의 블루밍샐리 추출물을 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.
1. 밀가루 식품의 제조
본 발명의 실시예 <1-2>의 추출물 0.5 ~ 5.0 중량를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
2. 유제품(dairy products)의 제조
본 발명의 실시예 <1-2>의 추출물 5 ~ 10 중량%를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
3. 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다. 검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다. 본 발명의 실시예 <1-2>의 추출물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.
상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 실시예 <1-2>의 추출물의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.
곡물류(현미 30중량%, 율무 15중량%, 보리 20중량%),
종실류(들깨 7중량%, 검정콩 8중량%, 검정깨 7중량%),
실시예 <1-2>의 추출물의 건조분말(3 중량%),
영지(0.5중량%),
지황(0.5중량%)
< 제제예 3> 음료의 제조
1. 건강음료의 제조
실시예 <1-2>의 추출물 1000 ㎎
구연산 1000 ㎎
올리고당 100 g
매실농축액 2 g
타우린 1 g
정제수를 가하여 전체 900 ㎖
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호 음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
2. 야채쥬스의 제조
본 발명의 실시예 <1-2>의 추출물 5g을 토마토 또는 당근 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 야채쥬스를 제조하였다.
3. 과일쥬스의 제조
본 발명의 실시예 <1-2>의 추출물 1g을 사과 또는 포도 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 과일쥬스를 제조하였다.
< 제제예 4>: 화장품의 제조
본 발명의 블루밍샐리 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선, 피부 탄력 개선 또는 피부 노화 방지 및 개선용 화장품을 제조할 수 있다. 본 발명자들은 상기 화장품으로 영양화장수, 크림, 에센스 등의 유화 제형의 화장품 및 유연화장수 등의 가용화 제형의 화장품을 제조하였다.
<1-1> 유화 제형의 화장품 제조
표 2에 기재된 조성으로 유화제형의 화장품을 제조하였다. 제조 방법은 하기와 같다.
1) 1 내지 9의 원료를 혼합한 혼합물을 65∼70℃로 가열하였다.
2) 10의 원료를 상기 단계 1)의 혼합물에 투입하였다.
3) 11 내지 13의 원료의 혼합물을 65∼70℃로 가열하여 완전히 용해시켰다.
4) 상기 단계 3)을 거치면서, 상기 2)의 혼합물을 서서히 첨가하여 8,000 rpm에서 2∼3분간 유화시켰다.
5) 14의 원료를 소량의 물에 용해시킨 후 상기 단계 4)의 혼합물에 첨가하고 2분간 더 유화시켰다.
6) 15 내지 17의 원료를 각각 평량한 후 상기 단계 5)의 혼합물에 넣고 30초간 더 유화시켰다.
7) 상기 단계 6)의 혼합물을 유화 후 탈기과정을 거쳐 25∼35℃로 냉각시킴으로써 유화제형의 화장품을 제조하였다.
유화 제형 1, 2, 3의 조성
조성 유화제형 1 유화제형 2 유화제형 3
1 스테아린 산 0.3 0.3 0.3
2 스테알리 알콜 0.2 0.2 0.2
3 글리세릴 모노스테아레이트 1.2 1.2 1.2
4 밀납 0.4 0.4 0.4
5 폴리옥시에틸렌솔비탄 모노라우린산 에스테르 2.2 2.2 2.2
6 파라옥시안식향산 메틸 0.1 0.1 0.1
7 파라옥시안식향산 프로필 0.05 0.05 0.05
8 세틸에틸헥사노에이트 5 5 5
9 트리글리세라이드 2 2 2
10 사이클로메티콘 3 3 3
11 증류수 ~ 100 ~ 100 ~ 100
12 농글리세린 5 5 5
13 트리에탄올아민 0.15 0.15 0.15
14 폴리아크릴산 중합체 0.12 0.12 0.12
15 색소 0.0001 0.0001 0.0001
16 향 0.10 0.10 0.10
17 실시예 <1-1>의 추출물 0.0001 1 10
<1-2> 가용화 제형의 화장품 제조
표 2에 기재된 조성으로 가용화 제형의 화장품을 제조하였다. 제조 방법은 하기와 같다.
1) 2 내지 6의 원료를 1의 원료(정제수)에 넣고 아직믹서를 이용하여 용해시켰다.
2) 8 내지 11의 원료를 7의 원료(알코올)에 넣고 완전용해시켰다.
3) 상기 단계 2)의 혼합물을 상기 단계 1)의 혼합물에 서서히 첨가하면서 가용화시켰다.
가용화 제형 1, 2, 3의 조성
조성 가용화 제형 1 가용화 제형 2 가용화 제형 3
1 정제수 ~ 100 ~ 100 ~ 100
2 농글리세린 3 3 3
3 1,3-부틸렌글리콜 2 2 2
4 EDTA-2Na 0.01 0.01 0.01
5 색소 0.0001 0.0002 0.0002
6 실시예 <1-1>의 추출물 0.1 5 5
7 알코올(95%) 8 8 8
8 파라옥시안식향산 메틸 0.1 0.1 0.1
9 폴리옥시에틸렌 하이드로제네이디트에스테르 0.3 0.3 0.3
10 향 0.15 0.15 0.15
11 사이클로메티콘 - - 0.2
도 1은 블루밍샐리 메탄올 추출물의 전사인자 AP-1에 대한 억제 효과를 나타내는 그래프이고,
도 2는 블루밍샐리 메탄올 추출물의 종양괴사인자 알파(TNF α)에 의한 MMP-1 생합성에 대한 억제 효과를 나타낸 그래프이고,
도 3은 블루밍샐리 메탄올 추출물의 자외선에 의한 MMP-1 생합성에 대한 억제 효과를 나타낸 그래프이고,
도 4는 블루밍샐리 메탄올 추출물의 콜라겐 생합성 촉진에 대한 효과를 나타내는 그래프이고,
도 5는 블루밍샐리 메탄올 추출물의 종양괴사인자 알파(TNF α)에 의한 콜라겐 분해 억제 효과를 나타내는 그래프이다.

Claims (13)

100% 메탄올 또는 100% 에탄올을 용매로 하여 추출된 블루밍샐리(Chamaenerion angustifolium) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화 방지 및 주름 개선용 약학적 조성물.
삭제
삭제
제 1항에 있어서, 라디칼을 소거하는 것을 특징으로 하는 피부 노화 방지 및 주름 개선용 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 에이피-1(activator protein-1, AP-1) 전사인자의 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는 피부 노화 방지 및 주름 개선용 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 타입 I 콜라게나제(matrix metalloproteinase-1, MMP-1)의 생합성을 억제하는 것을 특징으로 하는 피부 노화 방지 및 주름 개선용 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 콜라겐의 생합성을 촉진하는 것을 특징으로 하는 피부 노화 방지 및 주름 개선용 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 콜라겐의 분해를 억제하는 것을 특징으로 하는 피부 노화 방지 및 주름 개선용 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 염증을 억제하는 것을 특징으로 하는 피부 노화 방지 및 주름 개선용 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 피부 탄력을 개선하는 것을 특징으로 하는 피부 노화 방지 및 주름 개선용 약학적 조성물.
100% 메탄올 또는 100% 에탄올을 용매로 하여 추출된 블루밍샐리 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화 방지 및 주름 개선용 피부 외용제.
100% 메탄올 또는 100% 에탄올을 용매로 하여 추출된 블루밍샐리 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화 방지 및 주름 개선용 화장료 조성물.
100% 메탄올 또는 100% 에탄올을 용매로 하여 추출된 블루밍샐리 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화 방지 및 주름 개선용 건강식품.
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